BR112012024156B1 - vacina viva para doenças aviárias - Google Patents

Abstract

VACINA VIVA PARA DOENÇAS AVIÁRIAS. A invenção refere-se a um método para a preparação de uma composição de vacina a ser implementada em um tratamento administrado localmente para a doença aviária viral, incluindo, pelo menos, a etapa de: a) misturar extemporaneamente de uma vacina, incluindo pelo menos um vírus vivo selecionado a partir de um vírus pertencente a uma ou mais cepas da referida doença aviária, com um diluente adjuvante (DA), caracterizado pelo fato de que o referido diluente adjuvante é uma emulsão de fase aquosa contínua de óleo-em -água ou microemulsão de óleo-em- água.

Description

A presente invenção refere-se a um método para a preparação de uma composição de vacina, utilizada em um tratamento administrado localmente para doenças virais aviárias e, em particular, bronquite infecciosa aviária.

Bronquite infecciosa aviária é uma doença contagiosa e aguda que afeta aves principalmente através de sintomas respiratórios. O vírus da bronquite infecciosa aviária (ou VBI) é um membro do gênero Coronavirus, família Coronaviridae, da ordem Nidovirales. Este vírus de RNA de fita simples tem forte capacidade de evolução e partículas virais podem sobreviver durante um período de um mês no ambiente externo. 0 VBI afeta aves de todas as idades e não apenas atinge o trato respiratório. De fato, o VBI replica, em primeiro lugar, na traquéia e, subseqüentemente, pode se espalhar pelo corpo das aves afetadas, afetando vários órgãos internos.

Morbidade é alta e a mortalidade pode variar dependendo da fazenda, das condições de cultivo, e também dos locais das superinfecções bacterianas.

Os sinais clínicos são dos seguintes tipos: -Respiratório (tosse, roncos traqueais, inchaço dos seios, conjuntivite, etc.); -Reprodutivo (redução na produção de ovos, produção de ovos com cascas mais finas, deformadas ou coloridas); -Renal: sede intensa, etc.

O VBI é transmitido principalmente pela via respiratória ou por aerossol.Os materiais virulentos são formados pelas secreções e excrementos nasais. A transmissão é horizontal, direta (a partir de aves doentes para aves sensíveis) ou indireta (via equipamentos, água, etc.).

O VBI é sensível à maioria dos desinfetantes, mas a melhor forma de restrição é uma vacina combinada com as etapas de bio-segurança (etapas de descontaminação, desinfecção, etc.).

A vacinação consiste na inoculação das espécies a serem protegidas um número de patógenos mortos (inativados) ou patógeno cuja virulência foi reduzida (vacina viva atenuada) para provocar uma resposta biológica no hospedeiro, protegendo-o durante a ocorrência subsequente da doença.

As vacinas vivas são geralmente eficazes o suficiente para não exigir a utilização de adjuvantes.

Um adjuvante de vacina é um excipiente que amplifica a resposta biológica contra o antígeno com o qual ele está associado. A menção será feita, por exemplo, a hidróxido de alumínio, e os adjuvantes oleosos comercializados sob o nome de Montanide™ por SEPPIC. Estes adjuvantes são de vários tipos. Também podem consistir de lipossomas, de emulsões que compreendem pelo menos uma fase oleosa e pelo menos uma fase aquosa, do adjuvante do tipo conhecido como de Freund, ou, mais comumente de sais minerais insolúveis em água. Entre os sais inorgânicos utilizados como adjuvantes de composição de vacina, pode ser feita menção a, por exemplo, hidróxido de alumínio, nitrato de cério, sulfato de zinco, hidróxido de ferro coloidal ou cloreto de cálcio. O hidróxido de alumínio é o adjuvante mais comumente usado. Estes sais inorgânicos utilizados como adjuvantes de composições de vacina são descritos em particular no artigo de Rajesh K. Gupta et al "Adjuvants, balance between toxicity and adjuvanticity", Vaccines, vol. 11, Issue 3, 1993, páginas 293-306.

As vacinas podem ser administradas por injeção (injeção subcutânea ou intramuscular) ou localmente (vacinação em massa por nebulização, em adição à água potável para contato com o bico e narinas e o complexo oculonasal, por exemplo). A vacinação por injeção, ainda que seja eficaz, apresenta a desvantagem de não ser adequada para o contexto econômico das fazendas de aves (alto custo de mão de obra), e também causa stress em aves tratadas, que, no caso de postura de ovos pode causar perturbações na postura de ovos seguindo o trauma físico gerado pela injeção.

O uso de adjuvantes eficazes em composições de vacina, e em composições de vacina para evitar a ocorrência de bronquite infecciosa, torna possível: •aumentar a intensidade da resposta protetora, tornando possível o fornecimento de um melhor nível de proteção; •estender a duração da proteção conferida por uma dose da vacina, fornecendo proteção mais duradoura dos animais de fazendo durante todo o seu crescimento,. •garantir uma proteção adequada, com um único tratamento, quando dois tratamentos eram necessários na ausência destes amplificadores de resposta imune. O ganho é, portanto, no número de doses a serem administradas (dividido por dois), manipulação de animais (de trabalho) e a tensão gerada durante o manuseamento dos animais (também dividida por dois); •ter a possibilidade de obter, com uma dose mais baixa antigênica, de uma eficácia equivalente àquela que é proporcionada por uma dose utilizada completa sem adjuvante. Assim, uma unidade de produção de vacinas será, com a mesma capacidade de produção, capaz de produzir um maior número de doses de vacina. Da mesma forma, um pacote existente ser oferecido para vacinar um largo número de animais.

Nenhum adjuvante é descrito e utilizado até à data de aplicação das técnicas de vacinação através de administração local utilizando vacinas vivas.

Existe uma necessidade de desenvolver diluentes, que também possuem a função de adjuvante para aumentar a resposta imunológica, como descrito acima. Estas composições são referidas como diluentes adjuvantes (DAs).

A dificuldade principal encontrada no desenvolvimento de um AD é a capacidade do referido diluente adjuvante (DA), de preservar a vacina viva viva, de modo que ele mantém as suas propriedades imunogênicas.

Um elemento importante no desenvolvimento de adjuvantes para vacinas vivas está na especificidade das formulações de adjuvantes em não matar os microrganismos vivos que constituem os antígenos da vacina, quando colocados em contato antes da injeção. ADs existem no mercado (tais como, por exemplo, acetato de tocoferol da companhia Intervet incluído no Diluvac Forte®) e são indicadas para certas vacinas vivas.

Além disso, uma vacina viva é conhecida no pedido de patente francesa FR 2 385 401.

No entanto, esta vacina viva não é preparada com as substâncias adjuvantes. Tem sido até agora assumido que a resposta imune mais elevada pode ser obtida com uma vacina viva, por exemplo, através do aumento da quantidade de vírus, ou pelo uso de uma cepa mais imunogênica.

De acordo com a presente invenção, um método de preparação de uma vacina de vírus vivo foi encontrado, o qual é caracterizado pelo fato da vacina viva ser preparada por meio de um adjuvante do tipo emulsão de fase aquosa contínua, por exemplo, uma emulsão de água em óleo ou microemulsão.

Foi surpreendentemente notado que o uso de uma emulsão óleo-em-água (0/W), como um "diluente" para vacinas vivas tem um efeito positivo sobre a resposta sorológica e imune nos animais vacinados. Nesta emulsão de óleo-em-água, a fase aquosa externa permite que a vacina (normalmente liofilizada) seja facilmente dissolvida.

Outro aspecto da invenção é que a utilização de emulsão de óleo em água como diluente adjuvante para vacinas vivas provoca uma resposta de anticorpos elevada em animais jovens que ainda possuem imunidade maternal. Este efeito surpreendente pode ser causado pela ação protetora da emulsão, no vírus vivo, contra a neutralização através de anticorpos presentes no animal.

Um objeto do presente invento é superar todas ou algumas desvantagens da arte anterior acima mencionada. Para este fim, um sujeito da presente invenção diz respeito a um método de preparação de uma composição de vacina, usado no tratamento por administração local de uma doença virai aviária compreendendo, pelo menos, a etapa de: a) de modo improvisado, misturar uma vacina, compreendendo um vírus vivo selecionado a partir de um vírus pertencente a uma ou mais cepas da referida doença aviária, com um diluente adjuvante (DA), caracterizado pelo fato do referido diluente ser uma emulsão de fase aquosa contínua de óleo-em-água ou uma microemulsão do tipo óleo em água.

O termo "doença virai aviária" tem como intenção significar: -As doenças virais respiratórias, tais como, por exemplo, laringotraqueite infecciosa, bronquite infecciosa aviária, infecção por herpesvirus de pombo, rinotraqueíte de peru. -doenças virais digestivas, tais como, por exemplo, a peste pato, hepatite viral de pato, Hepadnavirus aviário; -doenças virais da pele, tais como, por exemplo, varíola aviária; -doenças virais do sistema nervoso, tais como, a encefalomielite aviária, encefalite de equinos Orientais, febre do Nilo Ocidental, raiva, encefalite Ovina; -Doenças virais sistêmicas, tais como, por exemplo, pseudo-pragas aviárias (doença de Newcastle), doença de Marek, a doença bursal infecciosa (doença de Gumboro), gripe aviária, leucose aviária, anemia infecciosa de galinha, doença do Derszy, doença de "ovos moles".

O termo "Diluente" tem com intenção significar uma substância a ser adicionada a outra para reduzir o seu título, a riqueza, ou a porcentagem da mesma.

Um diluente adjuvante para vacina administrado localmente (DAVAL), a fim de ser relevante, terá que: •manter a vacina viva após reconstituição durante um determinado período; •permitir a preparação de uma fórmula (composição de vacina) facilmente pulverizável e molhar as membranas mucosas (de natureza hidrofílica) para permitir um tratamento rápido e eficaz; •melhorar significativamente a eficácia imunológica do antígeno em comparação com o antígeno utilizado sem adjuvante, e sem causar efeitos colaterais.

Além disso, as modalidades do invento podem incluir uma ou mais das seguintes características: •0 método tal como acima definido, caracterizado pelo referido vírus na referida vacina pertencer a uma ou mais cepas do VBI (Vírus da Bronquite Infecciosa); •método tal como acima definido, caracterizado pelo fato do referido vírus contido na referida vacina ser um vírus da doença de Newcastle; •método, tal como acima definido, caracterizado pelo fato que o referido vírus contido na referida vacina pertencer a uma ou mais cepas do VBI (vírus da bronquite infecciosa), uma doença de vírus de Newcastle, ou uma mistura destes vírus.

A doença de Newcastle, também chamada de "pseudo-praga aviária", "Pneumoencefalite aviária" ou "doença de Ranikhet", é uma zoonose de aves causada por um vírus.

A morbidade e mortalidade variam muito dependendo da virulência da cepa, da imunidade, e da condição do animal e de outros fatores ambientais.

O vírus da doença de Newcastle é um vírus da família Paramyxoviridae, do gênero Rubulavirus.

Ê um vírus de RNA com fita simples (diferente do vírus da influenza que tem oito fitas) , referido como de fita simples. Vírus de RNA mutam facilmente e com frequência, o que pode tornar as estratégias de vacina e farmacêuticas mais complexas e difíceis.

O envelope, que tem um diâmetro de 150 a 300 nm, tem dois tipos de espículos de glicoproteínas. É caracterizo pelo fato de: •A glicoproteína HN, que tem atividade hemaglutinante e de neuramidase, permitindo a ligação do virion a receptores de membrana na superfície da célula e seu liberação; •Um glicoproteína F, que permite a fusão entre o envelope viral com a membrana celular.

O Vírus é facilmente cultivado em ovos embrionários de galinha ou in vitro (em fibroblastos de embrião de galinha ou em células de rim de galinha).

O vírus é altamente resistente à temperatura ambiente, ele permanece infeccioso: •por um longo período (vários meses) na matéria fecal, •por 2 a 3 meses no chão, em um galinheiro, •por 7 a 8 meses em uma casca suja, •por 2 e mais anos em uma carcaça congelada e crua.

Assim como para influenza, as cepas são classificadas de acordo com a sua virulência, pela distinção: •as cepas velogênicas (altamente virulentas, causando uma mortalidade que se aproxima ou chega a 10 0%, com um ataque que é sistêmico, ou pelo menos visceral ou envolvendo o sistema nervoso, possivelmente associado com problemas respiratórios) •cepas mesogênicas (moderadamente virulentas) produzindo uma doença respiratória com perturbações do sistema nervoso, para uma mortalidade de até 50% em aves j ovens, •cepas lentogênicas (fracamente virulentas, não fatais, produzindo algumas doenças respiratórias, e às vezes não induzindo quaisquer sintomas). Essas são, por exemplo, as cepas Hitchner BI e La Sota.

As fontes do vírus estão relacionadas com órgãos alvo pelo vírus, que variam dependendo da cepa do vírus, e a condição e história imunológica da ave afetada, o que irá expressar o vírus em: •secreções brônquicas e matéria fecal, •todas as partes da carcaça.

OS vírus são excretados a partir do período de incubação e durante um período variável durante a convalescença, de poucos dias a duas semanas, em casos mais raros.

Para combater o vírus, existem medidas de precaução e prevenção que podem ser implementadas pelo agricultor, que podem, por exemplo, consistir da quarentena de animais infectados, de eutanásia dos animais infectados, medidas de higiene, e de limpeza e desinfecção regulares das instalações com desinfetantes convencionais.

A vacinação também constitui de uma forma de prevenção.

A invenção também diz respeito a: •Um método como definido acima, caracterizado pelo fato do diluente adjuvante (DA) compreender um adjuvante oleoso, uma fase aquosa, pelo menos um sal inorgânico divalente e pelo menos um agente complexante; •Um método como definido acima, caracterizado pelo fato do vírus contido na referida vacina viva é liofilizado antes da etapa a).

As vacinas vivas são geralmente armazenadas liofilizadas e devem ser ressuspensas extemporaneamente com uma fase aquosa.A vacina assim reconstituída deve ser usada nas horas seguintes à adição de um diluente. •Um método tal como acima definido, caracterizado pelo fato do referido diluente adjuvante ser uma emulsão de óleo-em-água compreendendo, para 100% da sua massa: •de 50% a 97% de água, mais particularmente de 70% a 97% de água, e ainda mais particularmente entre 80% e 97% de água; •de 1% a 45% de adjuvante oleoso, mais preferivelmente de 1% a 30% de adjuvante oleoso, e ainda mais particularmente de 2% a 10% de adjuvante oleoso; •de 0,1% a 10% de pelo menos um sal inorgânico divalente, mais particularmente entre 0,1% e 8%, e ainda mais particularmente de 0,2% a 3%; •de 0,1% a 10% de pelo menos um agente complexante, mais particularmente entre 0,1% e 8%, e ainda mais particularmente entre 0,2% e 3%.

Um método tal como acima definido, caracterizado pelo fato de que o referido diluente adjuvante é uma microemulsão de óleo-em-água que compreende, por 100% da sua massa: •de 50% a 97% de água, mais particularmente de 70% a 97% de água, e ainda mais particularmente entre 80% e 97% de água; •de 1% a 45% de adjuvante oleoso, mais preferivelmente de 1% a 30% de adjuvante oleoso, e ainda mais particularmente de 2% a 10% de adjuvante oleoso; •de 0,1% a 10% de pelo menos um sal inorgânico divalente, mais particularmente entre 0,1% e 8%, e ainda mais particularmente de 0,2% a 3%; •de 0,1% a 10% de pelo menos um agente complexante, e mais particularmente entre 0,1% e 8%, e ainda mais particularmente entre 0,2% e 3%.

Um método tal como acima definido, caracterizado pelo fato de que o referido adjuvante oleoso compreende, por 100% da sua massa: •de 40% a 95% de pelo menos um óleo mineral, mais preferencialmente, entre 50% a 95% de pelo menos um óleo mineral, e ainda mais particularmente entre 50% e 90% de pelo menos um óleo mineral; •de 5% a 60% de pelo menos um agente tensoativo, mais particularmente, de 5% a 50% de pelo menos um tensoativo, e ainda mais particularmente entre 10% e 50% de pelo menos um agente tensoativo. •Um método tal como acima definido, caracterizado pelo fato de que o referido, pelo menos um, sal inorgânico divalente é selecionado a partir de gluconato de manganês, gluconato de cálcio, aspartato de cálcio, gluconato de zinco, gluconato de ferro, e cloreto de cálcio. •Um método tal como acima definido, caracterizado pelo fato de que o referido, pelo menos um, agente complexante é selecionado a partir de ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), gluconato de sódio, gluconato de potássio e poliacrilato de sódio.

Óleos minerais utilizados para a preparação de adjuvantes oleosos são selecionados a partir do grupo que consiste em óleos minerais de hidrocarbonetos obtidos por destilação de óleo e ela implementação de etapas de processamento subsequentes, tais como, por exemplo, etapas de dessulfuração, desasfaltagem, extração de compostos aromáticos e extração de ceras, e outras etapas de processamento de acabamento (menção pode ser feita, por exemplo, aos óleos dos tipos Marcol 52, MARCOL 82, Drakeol 5 e Drakeol 6, etc.).

Os presentes tensoativos nos adjuvantes oleosos são tensoativos emulsionantes, tendo uma natureza hidrofílica caracterizada por um valor de HLB entre 8 e 19, mais particularmente entre 8 e 15.

Tal tensoativo pode consistir de um alquil- poliglicosídeo ou uma mistura de alquilpoliglicosídeos; saponinas; lecitinas; alcanóis polioxietilados, polímeros que compreendem blocos de polioxietileno e polioxipropileno, ou ésteres obtidos por condensação de um ácido graxo, de maneira vantajosa um ácido graxo que é líquido a 20 °C, com um açúcar, sorbitol, manitol ou glicerol. O referido açúcar pode consistir de glicose ou sacarose ou, de preferência, manitol. Para ésteres preferidos, menção pode ser feita a ésteres de ácidos graxos, tais como ácido oleico, ácido esteárico, ácido palmítico, ácido láurico e de sorbitol ou manitol, obtidos por esterificação do ácido graxo com o sorbitol ou manitol, ou outro por esterificação com os produtos obtidos a partir do anidração da cadeia polihidroxilada de sorbitol ou manitol, que cicliza na posição 1-4 ou na posição 2-6, ou outras por esterificação com sorbitol ou manitol, e com os produtos resultantes da anidração de cadeia polihidroxilada de sorbitol ou manitol, que cicliza na posição 1-4 ou posição 2-6. Como ésteres de manitol particularmente preferidos, menção pode ser feita a oleatos de manitol, oleatos de manitano, oleatos de manitol etoxilado compreendendo 5 mol ou 10 mol ou 15 mol ou 20 mol de óxido de etileno, para oleatos de manitano etoxilado compreendendo 5 mol ou 10 mol ou 15 mol ou 2 0 mol de óxido de etileno. Derivados de ésteres de açúcar de polietileno glicerol, sorbitol ou glicol podem também ser usados. Outros tipos de agentes tensoativos preferidos compreendem óleos vegetais etoxilados, tais como o óleo de milho etoxilado tendo entre 3 e 40 mols de mols de óxido de etileno, óleo de colza etoxilado possuindo entre 3 mols e 40 mols de óxido de etileno, óleos de rícino etoxilado possuindo entre 3 mols e 60 mols de óxido de etileno.

EXEMPLOS

Compatibilidade da formulação de adjuvante com a viabilidade de vacinas liofilizadas está relacionada com a composição desta fórmula adjuvante e ao nível na qual é utilizada. Os componentes biocompatíveis combinados em proporções que asseguram a implementação adequada e capacidade de adjuvante foi selecionada e esta seleção foi então avaliada em protocolos de pesquisa quantitativa. A viabilidade das vacinas com adjuvante (e, portanto, a compatibilidade das formulações com vacinas vivas) é necessariamente boa para vacinas que demonstraram uma eficácia superior à uma referência comercial.

Melhoria de eficiência é refletida, para os agricultores, através de melhores níveis de desempenho zootécnico, um menor custo para os tratamentos e tempo economizado. Os tratamentos locais atualmente não usam adjuvantes estimuladores de desempenho. A- Demonstração no caso da Bronquite Infecciosa.

a)Os produtos abrangidos pelo estudo.

Diversos Diluentes Adjuvantes preparados.

Tabela I m O/A: micro-emulsões de O/AO/A: Emulsão de O/A

Diferentes composições de vacina preparadas.

Antígeno usado: vírus da linhagem H-120 do vírus BI extraído de ovos de galinha embrionados livres de patógenos específicos (SPF), com um título de infecciosidade efetivo de 7,0 de Ig EID50/ml.

Cada vacina experimental (de VAI a VA11, compreende, respectivamente, o diluente adjuvante de DAI a DA11) é preparada por adição de: -cerca de 5% do antígeno (correspondente ao material liofilizado do antígeno descrito acima), e -cerca de 95% do diluente adjuvante experimental ( de DAI a DA11).

b)Medidas de eficiência para galinhas Protocolo Experimental

bl) a eficácia de cada composição de vacina (VAI a VA11) foi determinada em grupos de 10 galinhas que recebem um tratamento de 100 pl de vacina em cada narina (administração intranasal de 0,2 cm3 de vacina por animal) .

Assim, as galinhas do grupo i recebem um tratamento que envolve a vacina VAi, com i =1 a 11. Galinhas utilizadas no contexto deste experimento são de uma fazenda, com idade de 22 dias, soronegativa para doença de Bronquite infecciosa, e são da cepa marrom de sexo elevado. Além disso: -Um grupo de 10 galinhas (Grupo 12) , ou grupo de controle positivo recebeu a administração, de acordo com o mesmo modo, de uma vacina comercial contra a Bronquite Infecciosa. Esta vacina comercial contém apenas água como diluente e nenhum adjuvante ou qualquer outro óleo ou tensoativo.

Como uma referência positiva, foi utilizada uma vacina comercial produzida por FGI "ARRIAH": cepa IB H-120 do Lote 211. -Um grupo de 10 frangos (Grupo 13), ou grupo controle negativo, não recebe a vacinação.

Para cada uma das galinhas em cada grupo, as amostras de sangue foram realizadas 7/14/21/28/35/42/49/56 dias após o início da vacinação para a quantificação de concentrações de anticorpos gerados.

b2) Teste de virulência

56 dias após a data da primeira vacinação, a proteção gerada pelas vacinas é avaliada através da realização de um desafio de virulência: para isso, os animais são infectadas com uma carga predeterminada do patógeno (utilizando a cepa patogênica M-41 do vírus IB a uma dose de 6,46 CD50 ou 6,3 Ig EID 50) .

A intensidade da doença causada é avaliada através da medição: 1/ intensidade cumulativa dos pontos de cada animal para os 7 dias após a infecção, com uma escala de avaliação (1 ponto: falta de ar/2 pontos: falta de ar e dificuldade traqueal/3 pontos: dificuldade respiratória, rosto inchado, secreções, sintomas gerais). O grupo mais longo está doente e quanto mais doente o grupo está, maior é a pontuação; 2/ a soma dos dias do grupo durante os quais os sintomas foram observados: esta pontuação quantifica a capacidade dos animais de superarem a doença; 3/ a média dos pontos com o desvio padrão do grupo tornando possível a avaliação da homogeneidade do grupo; 4/ o atraso no início da doença: alguns tratamentos retardam o aparecimento de sintomas, mas à custa da capacidade de superar a doença; 5/ taxa de animais que ficam doentes.

Estas avaliações são realizadas por um veterinário devidamente qualificado e treinado no contexto de um protocolo experimental normalmente implementado com o objetivo de avaliar o desempenho das vacinas contra a IB.

Resultados Experimentais Quantidades de anticorpos:

Os resultados globais estão apresentados na Tabela II.O grupo de animais não vacinados (grupo 13) não produziu anticorpos significativamente (cerca de 1, com um desvio padrão de cerca de 0,2), o que significa que não houve contaminação com o vírus durante o teste, assim, validando os outros resultados.

A vacina comercial (grupo 12) produz quantidades maiores do que 3 após 28 dias, com um desvio padrão de cerca de 0,2 a 14 dias após a vacinação, a qual é estável durante 56 dias.

Grupos 1/3/5/7/9 produzem quantidades de anticorpos superiores a 3 (até 4) começando a partir de 21 dias, e durante o período de duração do teste, com os desvios- padrão de cerca de 0,2.

Estes grupos mostraram resultados que são significantemente melhores em comparação com a vacina comercial (P indicado na tabela).

Outros grupos mostram níveis de resposta semelhantes ou inferiores à da resposta da vacina comercial.

P define o significado dos resultados. Ou seja, a probabilidade de ocorrência que torna possível determinar se as diferenças são significativas. P <0,01: Diferença significativa em comparação com a vacina comercial.

Tabela II: Resultados de títulos de anticorpos dos grupos de 1 a 13 antes do desafio de virulência por 56 dias.

Teste de virulência:

Tabela III: Resultados de comportamento do teste aodesafio de virulência dos grupos de 1 a 13 para as pontuações de resistência ao vírus.

O grupo de controle não tratado (Grupo 13) produz pontuações de intensidade de sintomas muito elevados (cerca de 9 por galinha, para 100% dos animais, com vários dias de doença, e um atraso no início dos sintomas da doença de cerca de 7 dias) .Estes resultados validam o desafio de virulência.

A utilização da vacina comercial (Grupo 12) reduziu significativamente todos estes parâmetros, com, no entanto, 50% dos frangos ainda desenvolvendo a doença, após apenas dois dias de atraso, mas com sintomas moderados (22 pontos cumulativos) durante um período de tempo relativamente curto (apenas 21 dias cumulativos).

Grupos 1/3/5/7/9 mostram pontuações de pontos cumulativos muito baixos (0,2 a 0,5) durante períodos curtos de tempo (2 a 5 dias cumulativos) sem atrasar 5 significativamente os sintomas da doença enquanto protege, pelo menos, 60% da população em cada grupo.

Outros grupos dão pontuações intermediárias entre as vacinas comerciais e grupos 1/3/5/7/9, mas sem induzir uma proteção maior do que de 50% da população.

Claims (7)

1.Método para a preparação de uma composição de vacina usada em um tratamento de administração local para uma doença viral aviária, que compreende, pelo menos, a etapa de: a) misturar extemporaneamente uma vacina que compreende, pelo menos, um vírus vivo selecionado a partir de um vírus pertencente a uma ou mais cepas da referida doença aviária, com um diluente adjuvante (DA), caracterizado pelo fato de que o referido diluente adjuvante é uma emulsão de fase aquosa contínua de óleo em água ou uma microemulsão de óleo em água que compreende, por 100% de seu peso: -de 50% a 97% de água, mais particularmente de 70% a 97% de água, e ainda mais particularmente entre 80% e 97% de água; -de 1% a 45% de adjuvante oleoso, mais particularmente de 1% a 30% de adjuvante oleoso, e ainda mais particularmente de 2% a 10% de adjuvante oleoso; -de 0,1% a 10% de pelo menos um sal inorgânico divalente, mais particularmente de 0,1% a 8%, e ainda mais particularmente de 0,2% a 3%; -de 0,1% a 10% de pelo menos um agente complexante, e mais particularmente entre 0,1% e 8%, e ainda mais particularmente de 0,2% a 3%. em que o dito pelo menos um agente complexante é selecionado a partir de ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), gluconato de sódio, gluconato de potássio e poliacrilato de sódio.

2.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido vírus contido na referida vacina pertence a uma ou mais cepas do VBI (Vírus da Bronquite Infecciosa).

3.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido vírus contido na referida vacina é um vírus da doença de Newcastle.

4.Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido vírus contido na referida vacina pertence a uma ou mais cepas do VBI (vírus da bronquite infecciosa), um vírus da doença de Newcastle, ou uma mistura destes vírus.

5.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o vírus contido na referida vacina viva é liofilizado antes da etapa a).

6.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o referido adjuvante oleoso compreende, por 100% de seu peso: -de 40% a 95% de pelo menos um óleo mineral, mais preferencialmente, de 50% a 95% de pelo menos um óleo mineral, e ainda mais particularmente de 50% a 90% de pelo menos um óleo mineral; -de 5% a 60% de pelo menos um agente tensoativo e mais particularmente de 5% a 50% de pelo menos um agente tensoativo, e ainda mais particularmente de 10% a 50% de pelo menos um agente tensoativo.

7.Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que pelo menos um sal inorgânico divalente é selecionado a partir de gluconato de manganês, gluconato de cálcio, aspartato de cálcio, gluconato de zinco, gluconato de ferro, e cloreto de cálcio.