BR102017009057A2 - composições farmacêuticas tópicas e uso das mesmas - Google Patents

Abstract

composições farmacêuticas tópicas e uso das mesmas a presente invenção refere-se a composições farmacêuticas tópicas compreendendo os diferentes derivados sintéticos obtidos dos compostos 2,5-difenil-tetrahidrofurano, 2,5-difenil-tiofeno, 2,5-difenil-tetrahidropirrolidina ou licarina (2-metoxi-4-[(2r,3r)-7-metoxi-3-metil-5-[(e)-prop-1-enil]-2,3-dihidro-1-benzofurano-2-il]fenol). em outra modalidade, a presente invenção refere-se ao uso das composições farmacêuticas desenvolvidas como antiparasitário, preferencialmente, para tratamento da leishmaniose. além disso, as composições farmacêuticas desenvolvidas podem compreender associações entre os ativos propostos e dos mesmos com outros tipos de ativos a fim de otimizar os tratamentos objetivados.

Description

(54) Título: COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS TÓPICAS E USO DAS MESMAS (51) Int. Cl.: A61K 31/40; A61K 31/381; A61K 31/341; A61P 33/02.

(71) Depositante(es): LYCHNOFLORA PESQUISA E DESENVOLVIMENTO EM PRODUTOS NATURAIS LTDA - ME; UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - USP.

(72) lnventor(es): NORBERTO PEPORINE LOPES; MARCELO DIAS BARUFFI; MASSUO JORGE KATO; GIULIANO CESAR CLOSOSKI; LEANDRO DE SANTIS FERREIRA; DANIEL ROBERTO CALLEJON; JOSÉ NORBERTO CALLEGARI LOPES; EDUARDO FELIPE ALVES FERNANDES; LUÍS GUILHERME PEREIRA FEITOSA; FABIANO TRAVANCA TOLEDO; MÔNICA FRANCO ZANNINI JUNQUEIRA TOLEDO; THALITA BACHELLI RIUL; DALTON CAPRARI PIRES; ARTUR DE LARA LIMA VAZ.

(57) Resumo: COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS TÓPICAS E USO DAS MESMAS A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas tópicas compreendendo os diferentes derivados sintéticos obtidos dos compostos 2,5-difeniltetrahidrofurano, 2,5-difenil-tiofeno, 2,5-difenil-tetrahidropirrolidina ou licarina (2-metoxi-4-[(2R,3R)-7-metoxi-3-metil-5-[(E)-prop-lenil]-2,3-dihidro-l-benzofurano-2-il]fenol). Em outra modalidade, a presente invenção refere-se ao uso das composições farmacêuticas desenvolvidas como antiparasitário, preferencialmente, para tratamento da leishmaniose. Além disso, as composições farmacêuticas desenvolvidas podem compreender associações entre os ativos propostos e dos mesmos com outros tipos de ativos a fim de otimizar os tratamentos objetivados.

0,05 em relação ao Cl # p< 0,05 em relação Paromomicina Veiculo & p< 0,05 em relação Paromomiclna Gel

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COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS TÓPICAS E USO DAS MESMAS

CAMPO DA INVENÇÃO [001] A presente invenção se insere no campo de aplicação da Química, Farmácia, Medicina Veterinária e, mais especificamente, na área de preparações para finalidades médicas, uma vez que se refere a composições farmacêuticas tópicas compreendendo os diferentes derivados sintéticos obtidos dos compostos 2,5-difeniltetrahidrofurano, 2,5-difenil-tiofeno, 2,5-difeniltetrahidropirrolidina ou licarina (2-metoxi-4-[(2R,3R)-7metoxi-3-metil-5-[(E)-prop-l-enil]-2,3-dihidro-lbenzofurano-2-il]fenol) e uso das mesmas como agente antiparasitário, preferencialmente, para tratamento da leishmaniose.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO [002] Atualmente, os medicamentos utilizados para o tratamento da leishmaniose cutânea possuem vários efeitos colaterais que limitam o uso na clínica. Estes medicamentos são os antimônios pentavalentes (glucantime®) , os quais são os medicamentos de primeira escolha para o tratamento da leishmaniose. Outros medicamentos, como anfotericina B e

pentamidina,	podem	ser utilizados como segunda	es	colha no
caso de parasitas	resistentes e limitação do	uso dos
medicamentos	de	primeira escolha devido	a	efeitos
colaterais.
[003]	Entretanto, estes medicamentos	de	segunda

escolha também possuem significativos efeitos colaterais e um custo mais elevado de tratamento. Outro detalhe importante é que a via de administração destes medicamentos é parenteral, uma via de administração invasiva, dolorosa e

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2/27 desconfortável ao paciente, que ainda necessita de internação, resultando em tratamentos descontínuos e induzindo à resistência dos parasitas.

[004] Desta forma, há uma necessidade de desenvolvimento de novas opções terapêuticas para o tratamento da leishmaniose, constituídas de novas moléculas e formulações que proporcionem um medicamento mais seguro, eficaz e de fácil administração.

[005] Uma das opções viáveis é o tratamento por via tópica, uma vez que a leishmaniose cutânea é caracterizada por promover feridas em regiões como o nariz, orelha, braço e pernas. Um estudo clínico está em andamento para avaliar a formulação de uso tópico compreendendo o antimicrobiano paromomicina e os resultados mostraram que a utilização tópica deste fármaco pode ser eficaz para alguns tipos de leishmaniose, entretanto, este produto ainda não está disponível para comercialização.

[006] Em vista disso, a presente invenção consiste no desenvolvimento de composições farmacêuticas de uso tópico, as quais são utilizadas como agentes antiparasitários, preferencialmente no tratamento da leishmaniose.

ESTADO DA TÉCNICA [007] O estado da técnica descreve apenas derivados isolados obtidos a partir das estruturas bases propostas pela presente invenção e, para alguns destes, seus respectivos usos como leishmanicida. Porém, não prevê composições farmacêuticas de uso tópico compreendendo tais derivados e carreadores específicos (promotores de absorção), como os lipídios fosfatidilcolina e lecitina,

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3/27 para melhorar a penetração e absorção dos compostos pela pele e células, visando uma maior disponibilidade dos ativos proporcionando uma redução da carga parasitária e das lesões e, consequentemente, estabelecendo o processo de cura da leishmaniose.

[008] Por exemplo, os documentos Investigação da atividade antileishmania e citotóxica das neolignanas burchelina, grandisina e licarina A e Neolignan Licarin A presents effect against Leishmania (Leishmania) major associated with immunomodulation in vitro descrevem a atividade leishmanicida desses compostos em L. amazonensis por ensaios in vitro. Entretanto, tais documentos não entram em conflito com a presente invenção, pois não descrevem o desenvolvimento de composições farmacêuticas tópicas compreendendo tais ativos e demais derivados aqui propostos e nem o uso das mesmas como antiparasitário. Além disso, nestes documentos não é realizado qualquer ensaio em modelos de leishmaniose animais para a verificação da eficácia destes compostos e para a validação dos resultados obtidos in vitro.

[009] Os documentos de patente PI9903472-7 e PI 0503951-7 mostram a utilização de lignanas tetrahidrofurânicas (derivados 2,5-difenil-tetrahidro furânico), como a grandisina (2,5-bis(3,4,5 trimetoxifenil)-tetrahidrofurano), para doenças parasitárias como Doenças de Chagas e Esquistossomose. Assim, nestes documentos de patentes não há a indicação do desenvolvimento de formulações ou do uso dos compostos para leishmaniose ou a utilização destes em composições de uso tópico.

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4/27 [010] O documento de patente US 5114961 cita a utilização de compostos 2, 5-difenil-tetrahidrofurânicos como inibidores do fator de ativação plaquetária, em que estes compostos podem ser incorporados em uma composição farmacêutica para o tratamento de doenças musculares e esqueléticas. Na patente não há exemplos das possíveis composições, sendo que as reivindicações contemplam a proteção das moléculas propostas.

[011] Já o documento PI 0501542-1 revela a utilização dos compostos 2,5-difenil-tetrahidrofurânicos semissintéticos e isolados de plantas como antiinflamatórios e analgésicos. Os exemplos demonstram que o tratamento com estes compostos por via intraperitoneal induz um efeito anti-inflamatório e não há a indicação de formulações específicas para o uso tópico ou para o tratamento de doenças parasitárias.

[012] O documento de patente W02009051437 apresenta composições cosméticas utilizando extratos e lignanas semelhantes aos compostos 2,5-difeniltetrahidrofurânicos . Entretanto, as composições apresentamse diferentes das reivindicadas neste pedido e a utilização é em cosméticos e alimentícios, não avaliando se estas formulações podem atuar para o tratamento de doenças parasitárias.

[013] Tratam-se, portanto, de tecnologias diversas da presente invenção, constituintes do estado da técnica, mas que não prejudicam os requisitos de novidade e atividade inventiva.

BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO [014] A presente invenção refere-se a composições

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5/27 farmacêuticas tópicas compreendendo os diferentes derivados sintéticos obtidos dos compostos 2,5-difenil-tetra hidrofurano,

2,5-difenil-tiofeno, 2,5-difenil-tetrahidro pirrolidina ou licarina (2-metoxi-4-[(2R,3R)-7-metoxi-3metil-5-[(E)-prop-l-enil]-2, 3-dihidro-l-benzofurano-2-il] fenol). A Grandisina (2,5-bis(3,4,5 trimetoxifenil)-tetra hidrofurano)foi isolada das folhas de Piper solmsianum e foi a inspiração para a obtenção dos diferentes derivados semissintéticos.

[015]

Em outra modalidade, a presente invenção refere-se ao uso das composições farmacêuticas desenvolvidas como antiparasitário, preferencialmente, para tratamento da leishmaniose. Além disso, as composições farmacêuticas desenvolvidas podem compreender associações entre os ativos propostos e dos mesmos com outros tipos de ativos a fim de otimizar os tratamentos objetivados.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [016]

A Figura 1 representa graficamente avaliação do edema da orelha dos animais tratados com as composições compreendendo grandisina na concentração de

1,25%, 2,5% e 5,0 % (p/p) , em que T0 é o tempo inicial antes do tratamento; NI são os animais não infectados; Cl é o Controle dos animais infectados sem tratamento e Veie é a pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) , carreador fosfatidileolina (Phosal®50PG).

Os resultados estão expressos como média ± desvio padrão. *p < 0,05 em relação ao controle de infecção (Cl).

[017]

A Figura 2 representa graficamente a quantificação da carga parasitária por qPCR das lesões dos animais tratados ou não com as composições tópicas

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6/27 compreendendo grandisina nas diferentes concentrações, em que NI são os animais não infectados e não tratados; Cl é o Controle dos animais infectados sem tratamento e Veie é a pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) , carreador fosfatidileolina (Phosal® 50PG). Os resultados estão

expressos como média ±	desvio	padrão. *p<0,05 em relação ao
Cl.
[018]	A Figura 3	representa	graficamente	a
avaliação	do edema da	orelha	dos animais	tratados com	as

composições compreendendo licarina na concentração de 2,5%, 5% e 10% (p/p) , em que TO é o tempo inicial antes do tratamento, NI é o grupo não infectado e Veie é o Creme não iônico (CrodaBase CR2), lecitina de soja, Tween 20 e ácido láctico. Os resultados estão expressos como média ± desvio padrão. *p< 0,05 em relação ao controle de infecção (Cl).

[019] A Figura 4 representa graficamente a quantificação da carga parasitária das lesões dos animais tratados ou não com formulações tópicas compreendendo licarina nas diferentes formulações, em que NI são os animais não infectados e não tratados; Cl é o Controle dos animais infectados sem tratamento e Veie é o Creme não iônico (CrodaBase CR2), lecitina de soja, Tween 20 e ácido láctico. Os resultados estão expressos como média ± desvio padrão. *p<0,05 em relação ao Cl.

[020] A Figura 5 representa graficamente a avaliação do edema da orelha dos animais tratados com as formulações compreendendo licarina 10%, composto 2,5-bis(2-

metoxifenil)-tiofeno 5%; nos	tempos	21,	30,	35 e 50 dias
após a infecção, em que Cl	é o	Controle	dos animais
infectados sem tratamento;	Veie	é	a	pomada de

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7/27 polietilenoglicol (Carbowax®) , carreador fosfatidilcolina (Phosal®50PG); ANF: anfotericina B - 2mg/Kg/dia intraperitoneal; F1 é a formulação compreendendo licarina 10% (p/p) e F2 é a Formulação compreendendo 2,5-bis(2metoxifenil)-tiofeno 5% (p/p). Os resultados estão expressos como média ± desvio padrão. *p< 0,05 em relação ao controle de infecção (Cl).

[021] A Figura 6 representa graficamente a quantificação da carga parasitária das lesões dos animais tratados ou não com formulações tópicas compreendendo licarina 10% (Fl), 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno 5% (F2), em que NI são os animais não infectados e não tratados; Cl é o Controle dos animais infectados sem tratamento; Veie é a Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) , carreador fosfatidilcolina (Phosal®50PG) , ANF é a anfotericina B 2 mg/kg via intraperitoneal. Os resultados estão expressos como média ± desvio padrão. *p<0,05 em relação ao Cl.

[022] A Figura 7 representa a imagem gerada pela técnica de MALDI-TOF do corte transversal da pele da orelha de porco utilizado na célula de Franz para avaliação da permeação da grandisina. A formulação tópica constituída dos veículos pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) , carreador fosfatidilcolina (Phosal®50PG) compreendendo 5% de grandisina foi aplicada na pele da orelha do porco e foi removida após 1, 3 e 12 horas. A intensidade da grandisina é ilustrada conforme a barra de cores, em que as cores próximas ao azul indicam concentração próxima a zero.

[023] A Figura 8 representa graficamente a quantificação da carga parasitária das lesões dos animais tratados ou não com formulações tópicas compreendendo a

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Ρ,/ΊΊ associação dos compostos obtidos com a paromomicina, em que as associações foram: grandisina 10% associada com paromomicina 10%; licarina 10% associada com paromomicina

10%, 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno 5% associada com paromomicina 10%.

Os controles foram:

NI (animal não infectado e não tratado) e Cl (Controle dos animais infectados sem tratamento), em que o Veiculo uma Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) carreador fosfatidilcolina (Phosal®50PG), a Paromomicina uma Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) e

Veiculo é carreador fosfatidilcolina (Phosal®50PG) contendo Paromomicina 10%; Paromomicina gel na concentração de 10%; e Anfotericina B 2 mg/kg/dia via intraperitoneal. Os resultados estão expressos como média ± desvio padrão. *p< 0,05 em relação ao Cl. # p< 0,05 em relação à Paromomicina Veiculo. & p<

0,05 em relação Paromomicina Gel.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [024] A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas tópicas, conforme a Tabela 1.

Tabela 1: Formulação da composição farmacêutica

Componentes	(%)
Derivados sintéticos obtidos dos compostos 2,5-difenil-tetrahidrofurano, 2,5-difenil-tiofeno, 2,5-difeniltetrahidropirrolidina ou licarina (2metoxi-4-[(2R,3R)-7-metoxi-3-metil-5- [ (E)-prop-l-enil]-2,3-dihidro-l- benzofurano-2-il]fenol)	0,1 -50
Promotor de absorção e permeação	1 - 30%

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Veículo

qsp 100%

[025] Em uma modalidade preferida da presente invenção, a composição farmacêutica desenvolvida compreende entre 0,4 e 10% de ativo (derivado sintético leishmanicida) em relação ao peso total da composição.

[026] A composição farmacêutica da presente invenção é caracterizada por compreender pelo menos um derivado sintético leishmanicida, o qual possui como precursor as seguintes estruturas químicas:

2,5-difeniltetrahidro furano;

2,5-difenil-tiofeno;

2,5-difenil tetrahidro pirrolidina.

A estrutura química dos percursores dos compostos utilizados é a seguinte:

[027]

Estes derivados sintéticos podem possuir diferentes substituintes nos anéis benzênicos, os quais podem ser:

Rl, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10: trimetoxi, cloro, nitro, flúor, bromo, metoxi, benzonitrila, trifluorometil, metil, etil, propril entre outros.

Rll e R12: metil ou H.

X: O, S, Se e N.

[028] O anel heterocíclico descrito contendo o heteroátomo X pode ser oxidado ou reduzido.

[029] A licarina apresenta a seguinte estrutura química:

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[030] A composição farmacêutica da presente invenção também é caracterizada por compreender um agente promotor de absorção de origem lipidica, necessário para aumentar a dissolução dos compostos no veículo e a biodisponibilidade destes compostos para as células.

[031] Preferencialmente, a composição da presente invenção compreende, como carreador, os fosfolipídios fosfatidilcolina e lecitina de soja, entretanto, não sendo estes limitantes do escopo da presente invenção. Outros promotores de absorção de origem lipidica ou não lipidica adequados para a realização da presente invenção são: DMSO, etanol, propilenoglicol, glicerina, polietilenoglicol, ureia, dimetilacetamida, laurilsulfato de sódio, poloxamers, spans, tweens, terpeno, fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol, fosfatidilserina, colesterol, triglicerídeos de cadeia média (TCM) e longa (TCL), óleo de soja, óleo de coco, óleo de rícino, óleo de linhaça e óleo de girassol.

[032] As composições tópicas da presente invenção podem estar na forma farmacêutica de pomada, creme, gel, loção.

[033] Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis compreendidos na composição da presente invenção compreendem, mas não estão limitados a veículos, agentes antioxidantes, conservantes, agentes levigantes,

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11/27 emolientes, umectantes, agentes quelantes e/ou agentes neutralizantes.

[034] Os exemplos de veículos para a forma farmacêutica pomada compreendem, mas não estão limitados a: bases como, vaselina (petrolatum) (até 100%), vaselina branca (White petrolatum), parafina, petrolato hidrofílico; aquafor; lanolina; lanolina modificada, ésteres de sorbitano, monoglicérides, álcoois graxos, ácido esteárico, álcool cetílico, ácido estearílico, ceras, espermacete, álcool cetoestearílico etoxilado, manteigas, monoestearato de glicerila, polietilenoglicóis. Preferencialmente, o veículo utilizado na forma de pomada é a pomada de polietilenoglicol constituída por Polietilenoglicol 4000 (Carbowax® 4000) e polietilenoglicol 400 (Carbowax® 400) e presente na faixa de 90-50% do peso total da composição.

[035] Os exemplos de veículos para a forma farmacêutica creme compreendem, mas não estão limitados a: bases álcool cetearílico, monoestearato de sorbitano etoxilado (Polawax®) ; álcool cetílico, Ceteareth 20, óleo mineral, álcool de lanolina e petrolato (Crodabase CR2®) , álcool cetoestearílico; cetil estearil sulfato de sódio (Lanette ®) ; álcool cetílico, acácia, cetomacrogol, CMC-Na, MC, alginato, gelatina e pectina. Preferencialmente, o veículo utilizado na forma de creme auto emulsionante não iônico compreende álcool cetílico, Ceteareth 20, óleo mineral, álcool de lanolina e petrolato (Crodabase CR2®) e está presente na faixa de 90-50% do peso total da composição.

[036] Os exemplos de veículos para a forma farmacêutica gel compreendem, mas não estão limitados a:

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1Ί/ΊΊ polímeros sintéticos de alto peso molecular e ligações cruzadas do ácido acrílico, tais como carbômero (Carbopol®) , CMC-Na (Carboximetilcelulose sódica), HEC (Hidroxietilcelulose - Natrosol®) . Preferencialmente, o veículo utilizado na forma de creme foi o carbômero (Carbopol®) e está presente na faixa de

90-50% do peso total da composição.

[037]

Os exemplos de agentes antioxidantes compreendem, mas não estão limitados

EDTA dissódico, bissulfito de sódio, BHT,

BHA, palmitato de ascorbila, tocoferol. O agente antioxidante está presente na faixa de

0,01

2% do peso total da composição.

[038]

Os exemplos de agentes conservantes compreendem, mas não estão limitados ácido benzoico, ácido ascórbico, benzoato de sódio, parabenos, fenoxietanóis, cloreto de benzalcônio, cloreto de cetilpiridínio, timerosal, fenilpropanol, bronopol, imidazolidinilúreia, fenoxietanol. O agente conservante está presente na faixa de

0,1-1% do peso total da composição.

[039]

Os exemplos de agentes levigantes compreendem, mas não estão limitados glicerina, propilenoglicol, polietilenoglicol 400, óleo de rícino, óleo de algodão, óleo mineral, polissorbato 80. O agente levigante está presente na faixa de 0,01 - 2% do peso total da composição.

[040] Os exemplos de emolientes compreendem, mas não estão limitados a: óleo mineral, óleos vegetais, triglicérides, ésteres de ácidos graxos, lanolina e polidimetilsiloxanos. O agente emoliente está presente na

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13/27 faixa de 1 - 5% do peso total da composição.

[041] Os exemplos de umectantes compreendem, mas não estão limitados a: glicerina, propilenoglicol, sorbitol. O agente umectante está presente na faixa de 1 20% do peso total da composição.

[042] Os exemplos de agentes quelantes compreendem, mas não estão limitados a: ácido edético, EDTA. O agente quelante está presente na faixa de 0,1 - 5%

do peso total	da	composição.
[043]	Os	exemplos	de	agentes neutralizantes
compreendem,	mas não	estão	limitados	a: NaOH;

trietanolamina; aminometilpropanol; neutrol TE; aminometilpropanol (AMP); trietanolamina; hidróxido de sódio / potássio (NaOH / KOH). O agente neutralizante está presente na faixa de 1 - 10% do peso total da composição.

[044] Além disso, as composições farmacêuticas desenvolvidas compreendem, opcionalmente, associações entre os possíveis compostos citados e destes com outros ativos.

[045] Esta associação é plenamente factível, uma vez que a leishmaniose apresenta um processo infeccioso e inflamatório crônico susceptível a infecções secundárias bacterianas e fúngicas. Assim, os outros ativos são necessários para complementar o tratamento ou para auxiliar na resolução do processo infeccioso e inflamatório e evitar as infecções secundárias, proporcionando um tratamento mais eficaz e rápido.

[046] Dentre estes ativos podemos citar antibióticos, antifúngicos, anti-inflamatórios, vitaminas e extrato vegetais. Especificamente estes ativos podem ser, mas não limitados a: antibióticos (tais como paromomicina,

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14/27 cloranfenicol, tetraciclinas, ampilicina) ; antifúngicos (cetoconazol, miconazol e nistatina); anti-inflamatórios (tais como diclofenaco de dietilamônio, piroxicam, dexametasona, betametasona, clobetasol, hidrocortisona);

vitaminas (tais como A, D e E) ; extratos vegetais (tais como Aloe vera, Achillea; Calendula officinalis, Chamomilla recutita,

Echinacea, Curcuma longa, Ginko biloba, Hypericum perforatum, Rosmarinus officinalis e Própolis).

[047] presente invenção também se refere ao uso das composições farmacêuticas desenvolvidas como agente antiparasitário, preferencialmente para o tratamento da leishmaniose.

[048]

Os exemplos de composições farmacêuticas tópicas compreendendo os compostos leishmanicidas estão descritos a seguir, sendo estes exemplos uma variação preferencial da composição farmacêutica compreendendo os compostos leishmanicidas da presente invenção e não deve ser interpretada como limitação da referida invenção. Neste sentido, deve ser entendido que o escopo da presente invenção abrange outras possíveis variações, sendo limitados tão somente pelo teor das reivindicações, aí incluídos os possíveis equivalentes.

Exemplo de concretização da invenção

Formulações das diferentes composições farmacêuticas compreendendo os derivados sintéticos [049] As formulações desenvolvidas na presente invenção foram realizadas utilizando veículos como pomadas

e cremes	e	com a adição de	adjuvantes	(promotores	de
absorção	e	permeação) para	auxiliar na	penetração	e
absorção	dos	ativos. Os modelos estruturais utilizados

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15/27 foram a grandisina, a licarina e o 2, 5-bis(2-metoxifenil)tiofeno.

[050] Algumas características importantes dos veículos e adjuvantes utilizados são apresentadas abaixo:

[051] Veículos:

- Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) possui características hidrofóbicas que facilitam a incorporação da grandisina, licarina, 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno, uma vez que estes compostos possuem um caráter extremamente hidrofóbico;

— Creme não iônico (exemplo: base auto emulsionante não iônica - Crodabase CR2®) devido às características de formação de lipossomas óleo / água que facilitam a incorporação de ativos apoiares como a grandisina, licarina e 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno;

[052] Agentes promotores de absorção:

— A fosfatidilcolina utilizada nas formulações foi constituída pelo Phosal®50PG, o qual possui o mínimo de 50% de fosfatidilcolina. Este agente promotor de absorção favoreceu a dissolução e incorporação dos compostos grandisina, licarina e 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno nas composições farmacêuticas tópicas. Este agente promotor de absorção proporciona a formação de lipossomas e nanoemulsões que podem facilitar a absorção do ativo pela pele e células. Outra característica importante deste agente é a alta biocompatibilidade, que lhe assegura a eficácia como agente de absorção / penetração de uso tópico e a possibilidade de administrar a formulação por mais de uma via, tópica e oral, como por exemplo, em cápsulas, pomadas, cremes e xaropes;

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- 0 Tween 20 é um surfactante e o seu modo de ação não foi ainda totalmente esclarecido, mas envolve interação tanto com a queratina como com os lipideos intercelulares. Os tensoativos possuem a capacidade de aumentar o poder de permeação e penetração de substâncias pouco solúveis em água, como no caso da grandisina, licarina e 2,5-bis(2metoxifenil) -tiofeno;

- O ácido láctico é conhecido pelo grande poder umectante, por promover uma maior retenção de água na pele. Considerando suas múltiplas funções (hidratação, regulação do pH, umectação, agente bacteriostático) , o ácido láctico é uma substância ideal para formulações farmacêuticas;

- A lecitina de soja hidrogenada e purificada, que possui concentrações do agente promotor de absorção superiores a 70%, atua como emulsionante, solubilizante e emoliente de moléculas com características apoiares como a grandisina, licarina e 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno;

- O polietilenoglicol (PEG) é produzido a partir da polimerização do óxido de etileno e possui características anfifílicas, ou seja, é solúvel em solventes ambos aquosos e orgânicos. Esta característica é importante para solubilizar compostos apoiares como a grandisina, licarina e 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno e auxiliar na incorporação dos ativos nas formulações.

[053] As formulações foram realizadas em várias concentrações, a qual variou conforme o tipo de experimento realizado, tais como estabilidade e eficácia. As concentrações de grandisina, licarina,

2,5-bis(2metoxifenil)-tiofeno variaram de

0,4 a 10% (p/p). No esquema abaixo, são apresentados exemplos de formulações

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17/27 compreendendo grandisina, licarina e 2,5-bis(2metoxifenil)-tiofeno na concentração de 5% (p/p).

[054] As composições desenvolvidas com veículo pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) estão indicadas nas tabelas 2 a 4:

Tabela 2: Formulação 1 - Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) e carreador

0,9g	Grandisina 5% ou Licarina 5% ou 2,5-bis(2- metoxifenil)-tiofeno 5%
0,9g	Phosal® 50PG a 5%
16,2g	Veículo Carbowax® qsp 18g

Tabela 3: Formulação 2 - Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) , carreadores e permeadores

0,9g	Grandisina 5% ou Licarina 5%
0,36g	Lecitina de soja a 2%
0,09g	Tween 20 a 0,5%
0,09g	Ácido Láctico a 0,5%
16,56g	Veículo Carbowax® qsp. 18g

Tabela 4: Formulação 3 - Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®)

0,9g	Grandisina 5% ou Licarina 5%
0,9g	PEG 400 a 5%
16,2g	Veículo Carbowax® qsp. 18g

[055] As composições desenvolvidas com veículo creme não iônico (creme Crodabase CR2®) estão indicadas nas tabelas 5 a 7:

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18/27

Tabela 5: Formulação 4 - Creme não iônico (Crodabase

CR2®) e carreadores

0,9g	Grandisina 5% ou Licarina 5%
0,9g	Phosal® 50PG a 5%
16,2g	Veículo Creme não iônico qsp 18g

Tabela 6: Formulação 5 - Creme não iônico (Crodabase

CR2®) , carreadores e permeadores

0,9g	Grandisina 5% ou Licarina 5%
0,36g	Lecitina de soja a 2%
0,09g	Tween 20 a 0,5%
0,09g	Ácido Láctico a 0,5%
16,56g	Veículo Creme não iônico qsp 18g

Tabela 7: Formulação 6 - Creme não iônico (Crodabase

CR2®) e carreadores

0,9g	Grandisina 5% ou Licarina 5%
0,9g	PEG 400 a 5%
16,2g	Veículo Creme não iônico qsp 18g

[056] Estas formulações foram armazenadas em potes para facilitar a manipulação, principalmente a pesagem do material, durante os experimentos in vivo. Os potes contendo as formulações foram armazenados a 4°C.

[057] Os resultados mostraram que as formulações compreendendo os ativos grandisina ou licarina ou 2,5bis(2-metoxifenil)-tiofeno apresentaram bom aspecto visual e boas características sensoriais; boa aderência; boa incorporação dos ativos sem a presença de precipitação e

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19/27 estabilidade físico-química: não houve alterações do pH da formulação e da concentração da grandisina avaliado por 9 meses em condições de temperatura e umidade controladas (estabilidade de curta duração).

Avaliação do efeito leishmanicida in vivo das composições farmacêuticas tópicas compreendendo grandisina [058] No ensaio foram utilizados os camundongos

Balb/c tendo, como modelo, a infecção na orelha dos animais, a fim de limitar as possíveis infecções secundárias por bactérias que ocorrem quando se utiliza o modelo de infecção na pata. Um ensaio para avaliação da curva dose resposta utilizando formulações compreendendo grandisina com o veículo pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) e carreador fosfatidilcolina (Phosal®50PG) nas concentrações de 5%, 2,5% e 1,25% (p/p) de grandisina foi realizado. O tratamento foi realizado por 40 dias e foi aplicado 50 mg de formulação duas vezes ao dia.

[059] Os resultados da medida do edema foram avaliados no 20° e 40° dia de tratamento e estão representados na Figura 1. O tratamento com a formulação compreendendo 5% de grandisina mostrou uma redução do edema da orelha durante o período de tratamento. Ao contrário, as formulações 2,5% e 1,25% apresentaram uma medida maior do edema. Estes resultados estão em concordância com a análise macroscópica das lesões auriculares, uma vez que os edemas das orelhas dos grupos tratados com as menores doses de grandisina foram visualmente maiores. Já a formulação compreendendo 5% apresentou uma medida menor do edema que o grupo controle infectado sem tratamento (Cl), este fato pode sugerir que o tratamento com a formulação

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20/27 compreendendo 5% de grandisina pode reduzir a progressão da lesão .

[060]

A avaliação da carga parasitária, Figura 2, mostrou que a formulação compreendendo 5% de grandisina induziu uma redução significativa da carga parasitária avaliada pela concentração de DNA do parasita nas lesões, enquanto que redução da carga parasitária com o tratamento com a formulação compreendendo 2,5% e 1,25% não foi significativa em relação ao grupo não tratado (Cl) . Os grupos veículo (Veie) e infectado não tratado (Cl) apresentaram uma carga parasitária semelhante entre si e não apresentaram diferenças estatísticas significativas entre estes grupos.

Avaliação do efeito leishmanicida in vivo das composições farmacêuticas tópicas compreendendo licarina formulações compreendendo licarina foram

[061]	As
realizadas	com o
(Crodabase	CR2®) e
como lecitina de

veículo constituído Creme não iônico a adjuvante promotores de absorção tais soja, Tween 20 e ácido láctico. As concentrações utilizadas nas formulações foram 10%; 5% e

2,5%. O tratamento com formulações tópicas compreendendo licarina foi realizado por um período de 4 0 dias sendo administrada vezes ao dia (50 mg).

[062]

Os resultados mostraram que houve uma variação do efeito na redução do edema com as formulações compreendendo licarina (Figura 3). Na formulação compreendendo 10% de licarina observou-se a presença de edema, mas a lesão apresentou-se menor e com menos úlceras em comparação ao controle de infecção (Cl).

Para a concentração de

5%, verificou-se a presença de um

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21/27 significativo edema e a presença de lesões com ulceração em todos os animais do grupo e o edema maior em comparação ao controle de infecção (Cl) . Para a concentração de 2,5% de licarina, a presença do edema foi menor e com poucas úlceras. A formulação veículo, apesar de apresentar uma lesão com menos úlceras, apresentou edemas maiores em comparação a formulação compreendendo 2,5% de licarina. Portanto, os resultados mostram que a formulação com a menor concentração mostrou uma lesão com aspecto melhor e com um edema menor em relação aos outros tratamentos.

[063] A avaliação da carga parasitária, Figura 4, mostrou que a formulação compreendendo 10% e 2,5% de licarina induziu uma redução significativa da concentração do número de parasitas nas lesões (carga parasitária).

Avaliação do efeito leishmanicida in vivo das composições farmacêuticas tópicas compreendendo derivados

2,5-difenil-tiofeno [064] Neste ensaio foi realizada a avaliação de derivado sintético do 2,5 difenil-tiofeno, sendo o derivado testado 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno. Os animais foram infectados com L. amazonensis e, após 35 dias de infecção, os camundongos Balb/c foram tratados com as seguintes composições F1: Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) com o promotor de absorção fosfatidilcolina (Phosal®50PG) e licarina na concentração de 10% (p/p), e F2: Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) com o promotor de absorção fosfatidilcolina (Phosal® 50PG) e 2,5-bis(2-metoxifenil)tiofeno na concentração de 5% (p/p)· O tratamento foi realizado por 15 dias e foi aplicado 50 mg de formulação duas vezes ao dia.

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ΊΊ/ΊΊ [065] Os resultados da medida do edema foram avaliados no 21°, 30°, 35° e 50° dia após a infecção, sendo que o tratamento foi realizado a partir do 35° e está representado na Figura 5. O tratamento com a formulação compreendendo 10% de licarina (Fl) e 5% 2,5-bis(2metoxifenil)-tiofeno (F2) mostrou uma redução do edema da orelha durante o período de tratamento.

[066] A avaliação da carga parasitária das lesões dos animais tratados e não tratados está ilustrada na Figura 6. Os resultados mostraram que as formulações compreendendo 10% de licarina (Fl) e 5% de 2,5-bis(2metoxifenil)-tiofeno (F2) induziram uma redução significativa da concentração de DNA do parasita nas lesões (carga parasitária). Estes resultados demonstram que as composições farmacêuticas compreendendo os derivados sintéticos descritos nesta patente possuem uma ação leishmanicida e proporcionaram uma redução significativa da carga parasitária, indicando que estas composições podem ser utilizadas no tratamento da leishmaniose, preferencialmente a leishmaniose cutânea.

Avaliação da permeação da grandisina utilizando a célula de difusão de Franz e o imageamento por Maldi-Tof.

[067] Para avaliar a capacidade de distribuição da grandisina incorporada na formulação na pele foi realizado um experimento para verificar a permeação na pele da orelha de porco. Este ensaio foi realizado utilizando a célula de difusão de Franz e a pele de orelha de porco, a qual é recomendada neste tipo de estudo devido à semelhança estrutural e histológica com a pele humana. A formulação tópica constituída do veículo pomada de polietilenoglicol

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23/27 (Carbowax®) e o promotor de absorção fosfatidilcolina (Phosal®50PG) . A concentração de grandisina foi de 10% (p/p) . A célula de difusão de Franz foi montada utilizando a orelha de porco como membrana e preenchida com meio receptor, o qual foi água: etanol (8:2). Após a montagem da célula, 500mg da formulação tópica foi aplicada sobre a pele e o sistema foi submetido à agitação. O tempo de tratamento foi de 1, 3 e 12 horas. Após o período de tratamento, a pele foi lavada com água para retirada do excesso de formulação e congelada. As amostras de pele foram cortadas com o auxílio de criostato. Os cortes foram realizados na orientação transversal da pele na espessura de lOum. Os cortes da pele foram incorporados na matriz constituída da mistura de ácido 2,5-dihidroxibenzoico (2,5DHB) e ácido a-ciano-4-hidroxicinâmico (4-HCCA) na razão de (7:3) solubilizados com o solvente acetonitrila (90 %), ácido trifluoroacético (0,1%) e cloreto de sódio (0,15 mg). As amostras foram incorporadas na placa e secas utilizando a razão de fluxo de 0,05 ml/min, com velocidade de 900 mm/min. As amostras foram analisadas no equipamento RAPIFLEX MALDI (BRUKER) no modo positivo e Reflector. O intervalo de massa analisado foi de 200-600Da.

[068] As imagens geradas mostraram que após 1 hora de tratamento a grandisina encontra-se localizada no extrato córneo e na epiderme da pele. Já após 3 horas de tratamento, a grandisina encontra-se totalmente difundida nas 3 camadas da pele (extrato córneo, epiderme e derme). E, após 12 horas de tratamento, a imagem mostra que a grandisina encontra-se em menor intensidade e localizada na derme.

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24/27 [069] Estes resultados demonstram que as formulações propostas neste documento são capazes de distribuir e realizar a permeação dos derivados sintéticos incorporados nestas formulações tópicas na pele. A permeação e difusão dos ativos na pele são fundamentais para que os derivados sintéticos possam ser absorvidos

pelas células	e,	consequentemente,	possam	atuar	na
eliminação do	parasita intracelular,	como no	caso	da
Leishmania.
Avaliação	do	efeito leishmanicida in	vivo	das

composições farmacêuticas tópicas compreendendo derivados obtidos associados a Paromomicina [070] Neste ensaio, foi realizada a avaliação das formulações tópicas compreendendo a associação dos compostos descritos e a paromomicina. O objetivo deste ensaio é demonstrar que a associação dos compostos descritos na patente com outros ativos, tais como antibióticos (como a paromomicina), podem proporcionar uma maior eficácia e, consequentemente, vantagens, tais como redução de tempo de tratamento e ação contra parasitas resistentes.

[071] Os compostos utilizados na formulação foram o derivado sintético 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno, licarina e grandisina.

[072] As composições desenvolvidas para este ensaio utilizaram como veiculo pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) e o carreador fosfatidilcolina (Phosal®50PG) . A descrição dos componentes das formulações e as respectivas quantidades estão indicadas nas tabelas 7 a 10:

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Tabela 7: Formulação 1 - Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) compreendendo grandisina e paromomicina.

2,lg	Grandisina 10%
2,92g*	Paromomicina 10%
1,05g	Phosal® 50PG a 5%
14,93g	Veículo Carbowax® qsp 21g

★ Corrigido conforme do laudo lote BCBP2190V - Potência 719 ug/mg.

Tabela 8: Formulação 2 - Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) compreendendo licarina e paromomicina.

2,lg	Licarina 10%
2,92g*	Paromomicina 10%
1,05g	Phosal® 50PG a 5%
14,93g	Veículo Carbowax® qsp 21g

★ Corrigido conforme do laudo do lote BCBP2190V - Potência 719 ug/mg.

Tabela 9: Formulação 3 - Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) compreendendo 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno e paromomicina.

1,05g	2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno 5%
2,92g*	Paromomicina 10%
1,05g	Phosal® 50PG a 5%
15,98g	Veículo Carbowax® qsp 21g

★ Corrigido conforme do laudo do lote BCBP2190V - Potência

719 ug/mg.

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Tabela 10: Formulação 4 - Pomada de polietilenoglicol (Carbowax®) compreendendo Paromomicina.

2,92g*	Paromomicina 10%
1,05g	Phosal® 50PG a 5%
17,3g	Veículo Carbowax® qsp 21g

★ Corrigido conforme do laudo do lote BCBP2190V - Potência

719 ug/mg [073] Os animais foram infectados na orelha com L. amazonensis e, após 40 dias de infecção, os camundongos Balb/c foram tratados com as seguintes composições tópicas descritas nas tabelas 7 a 10 compreendendo os diferentes compostos associados a paromomicina. O tratamento foi realizado por 23 dias, sendo aplicado 50 mg de formulação duas vezes ao dia. Os controles de referência controle foram constituídos da anfotericina B intraperitoneal na dose de 2mg/Kg/dia e uma formulação de gel de hidroxietilcelulose (Natrosol) compreendendo 10% de paromomicina (50pL da formulação/2 vezes ao dia) conforme descrito por Aguiar e colaboradores (Aguiar, MG. et. al. , Reductions in Skin and Systemic Parasite Burdens as a Combined Effect of Topical Paromomycin and Oral Miltefosine Treatment of Mice Experimentally Infected with Leishmania (Leishmania) amazonenses. Antimicrobial agents and chemotherapy, Nov. 2010, p. 4699-4704, 2010).

[074] A avaliação da carga parasitária das lesões dos animais tratados com as formulações tópicas associadas à paromomicina e os controles estão ilustrados na Figura 8.

Os resultados mostraram que o tratamento constituído das formulações compreendendo os compostos grandisina (10%),

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27/27 licarina (10%) e de 2,5-bis(2-metoxifenil)-tiofeno (5%) associadas a paromomicina induziram uma redução significativa da concentração de DNA do parasita nas lesões (carga parasitária). Além disso, as formulações compreendendo as associações mostraram um efeito significativo na redução da carga parasitária em relação aos controles constituídos da Paromomicina incorporada no mesmo veículo (Paromomicina Veículo) e da Paromomicina gel utilizado como referência de tratamento.

[075] Estes resultados demonstram que as composições farmacêuticas compreendendo a associação entre os derivados sintéticos descritos nesta invenção e outros ativos, tais como paromomicina, são eficazes na redução da carga parasitária indicando que estas composições podem ser utilizadas no tratamento da leishmaniose, preferencialmente a leishmaniose cutânea.

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Claims (9)

1. Reivindicações

   1. Composições farmacêuticas tópicas CARACTERIZADAS por compreenderem: 0,1 a 50% de derivados sintéticos obtidos dos compostos 2,5-difenil-tetrahidrofurano, 2,5difenil-tiofeno, 2,5-difenil-tetrahidropirrolidina ou 2metoxi-4-[(2R,3R)-7-metoxi-3-metil-5-[(E)-prop-l-enil]-2,3dihidro-l-benzofurano-2-il]fenol; 1 a 30% de promotores de absorção e permeação e qsp 100% de veículo.
2. 2. Composições farmacêuticas tópicas, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADAS por compreenderem, preferencialmente, entre 0,4 e 10% dos derivados sintéticos referente ao peso total da composição.
3. 3. Composições farmacêuticas tópicas, de acordo com as reivindicações 1 ou 2, CARACTERIZADAS por compreenderem pelo menos um derivado sintético leishmanicida, o qual possui como precursor as seguintes estruturas químicas:

   2,5-difenil-tetrahidrofurano; 2,5-difenil-tiofeno; 2,5difenil tetrahidropirrolidina:

   Em que: Rl, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10: trimetoxi cloro, nitro, flúor, bromo, metoxi, benzonitrila

   trifluorometil, metil, etil, propril;

   Rll e R12: Metil ou H;

   X: O, S, Se e N.

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4. 4. Composições farmacêuticas tópicas, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADAS por o anel heterocíclico descrito contendo o heteroátomo X ser oxidado ou reduzido.
5. 5. Composições farmacêuticas tópicas, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADAS por compreenderem um agente promotor de absorção de origem lipídica selecionado do grupo constituído por, preferencialmente: fosfatidilcolina e lecitina de soja.
6. 6. Composições farmacêuticas tópicas, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADAS por compreenderem, preferencialmente, pomada de polietilenoglicol como veículo para a forma farmacêutica pomada; creme não iônico como veículo para a forma farmacêutica creme; e carbômero como veículo para a forma farmacêutica gel.
7. 7. Composições farmacêuticas tópicas, de acordo com as reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADAS por compreenderem, opcionalmente, excipientes farmaceuticamente aceitáveis selecionados de: agentes antioxidantes, conservantes, agentes levigantes, emolientes, umectantes, agentes quelantes e/ou agentes neutralizantes.
8. 8. Composições farmacêuticas tópicas, de acordo com as reivindicações 1 a 7, CARACTERI ZADAS por compreenderem opcionalmente, associações entre os derivados sintéticos ou entre os mesmos e antibióticos, antifúngicos, antiinflamatórios, vitaminas e extrato vegetais.
9. 9. Uso das composições farmacêuticas tópicas, conforme definidas nas reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO por ser como antiparasitário, preferencialmente para o tratamento da leishmaniose.

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