BR102014014999B1

BR102014014999B1 - combinação para proteção da pele contra danos causados pela radiação infravermelha, composição e uso da combinação

Info

Publication number: BR102014014999B1
Application number: BR102014014999-6A
Authority: BR
Inventors: Liliana Bechelli De Oliveira Torloni; Andréia Feital Da Costa Pereira
Original assignee: Hypera S.A.
Priority date: 2014-06-18
Filing date: 2014-06-18
Publication date: 2020-12-01
Also published as: BR102014014999A2; FR3022460A1; JP2016006048A; US20150366777A1

Abstract

COMBINAÇÃO PARA PROTEÇÃO DA PELE CONTRA DANOS CAUSADOS PELA RADIAÇÃO INFRAVERMELHA E USO DA COMBINAÇÃO. A presente invenção concerne uma combinação de ao menos um ativador peptídico de SIRT1 e ao menos um alarmônio derivado de guanosina, voltada principalmente à utilização na área dermatológica cosmética, que propicia proteção contra danos causados pela radiação infravermelha.

Description

[001] A presente invenção concerne uma combinação de compostos químicos, voltados principalmente à utilização na área dermatológica cosmética, que propicia proteção contra os danos causados pela radiação infravermelha. Mais particularmente a invenção refere-se a uma combinação que compreende um ativador peptídico de SIRT1 e um alarmônio derivado de guanosina.

Antecedentes da invenção

[002] No texto que segue, “IV” significa radiação infravermelha, de comprimento de onda entre 700 e 1500 nm, “UVA” significa radiação ultravioleta-A, entre 320 e 400 nm e “UVB” significa radiação ultravioleta-B, entre 290 e 320 nm.

[003] Exposição excessiva à radiação solar traz efeitos adversos à saúde, desde envelhecimento precoce da pele, que se torna precocemente manchada, menos flexível e enrugada, até o aparecimento de alguns tipos de câncer de pele.

[004] Enquanto que a necessidade de proteção da pele humana contra UVA e UVB tem recebido atenção há pelo menos 30 anos, menos atenção tem sido dada aos efeitos de IV, que até pouco tempo era mencionada apenas como gerador da sensação de calor, causando sobre a pele apenas eritemas ab igne (e.g. queimadura de sol). Acreditava-se até recentemente que, sendo radiação de baixa energia, sua inabilidade em iniciar reações fotoquímicas resultaria em baixa contribuição para carcinogênese cutânea. Entretanto, vêm se acumulando evidências que o IV não só contribui para o envelhecimento precoce da pele como promove câncer, amplificando os efeitos deletérios do UV, alterando a vasculatura (telangiectasias), produzindo radicais livres, modificando as propriedades de ligação histona e prejudicando os processos de reparação do DNA.

[005] Para proteção contra UVA e UVB, a tecnologia atual dos produtos de proteção solar vem se aprimorando, incluindo ingredientes em formulações tópicas que refletem ou absorvem tais radiações. Tais ingredientes são ou químicos (e.g. avobenzona e benzofenona) ou físicos (e.g. óxidos metálicos como de zinco e titânio). Alguns deles propiciam proteção tanto contra UVA quanto UVB. Entretanto, a grande maioria desses ingredientes não propiciam proteção contra IV, que penetram mais profundamente na pele que UVA ou UVB e, conforme são absorvidos, propagam calor por condução e convecção.

[006] São detectadas no estado da técnica algumas poucas propostas de composições que propiciam proteção IV:

[007] US5876699 - propõe que dióxido de titânio propicia absorção e espalhamento (“scattering”) da radiação IV, mas a quantidade passível de utilização em uma composição tem que ser menor que 4% para não causar efeito de branqueamento;

[008] US4822600 propõe que sílica pirogênica, em teores entre 1 e 10 % de uma composição, preferencialmente em mistura com bloqueadores de UV propiciaria proteção IV.

[009] US5427771 propõe uma composição cosmética compreendendo flocos de dióxido de titânio de tamanho de partícula entre 1,5 e 25 p.m e um adjuvante escolhido entre água, álcoois monoídricos inferiores e C1-C6 polióis.

[010] JP2006151917 - propõe uma composição cosmética compreendendo uma mistura de dióxido de titânio com tamanho de partícula entre 0,5 e 5 p.m e pó de nitreto de boro.

[011] A proteção da pele contra IV é uma área de conhecimento em desenvolvimento, em busca contínua de alternativas que propiciem eficiência e compatibilidade com composições tópicas atualmente utilizadas e que já propiciam proteção UVA e UVB. Descrição das figuras anexas Figura 1 - Efeito da combinação da invenção sobre a viabilidade de fibroblastos humanos dérmicos após 48h, avaliados por teste MTT - gráfico de análise de variância unidirecional de ordenamento Kruskal-Walis - método Dunnett - média ± erro padrão, *p<0,05 vs não tratado. Figura 2 - Efeito da combinação da invenção sobre a expressão de MMP1 induzido por IV-A em fibroblastos dérmicos humanos - gráfico de análise de variância unidirecional de ordenamento Kruskal-Walis - método Student- Newman-Keuls; *p<0,05 vs não tratado (0% combinação da invenção, sem IV-A); +p<0,05 vs IV-A isolado; #p<0,05 vs tratamento indicado.

Descrição resumida da invenção

[012] A presente invenção concerne uma combinação de ativos, voltada à utilização na área cosmética dermatológica, que propicia proteção contra os danos causados pela radiação infravermelha (IV).

[013] Mais particularmente a invenção refere-se a uma combinação para proteção da pele contra danos causados pela radiação infravermelha caracterizada pelo fato de compreender um ativador peptídico de SIRT1 (ingrediente A) e um alarmônio derivado de guanosina (ingrediente B). Ingrediente A

[014] Enzimas sirtuinas (SIRT) são uma família de proteínas deacetilase altamente conservativas que dependem de NAD+ (“nicotinamide adenine dinucleotide” ou dinucleotídeo adenina nicotinamida) para sua atividade, com importante participação na deacetilação de histonas. São conhecidas 7 sirtuinas nos mamíferos, e tais proteínas tem sido vinculadas à restrição calórica e ao envelhecimento via modulação do metabolismo de energia, estabilidade genômica e resistência ao estresse.

[015] As diferentes sirtuinas dos mamíferos têm diferentes localizações subcelulares, sendo que SIRT1 é geralmente mostrada como tendo uma localização nuclear, apesar de haver menções a SIRT1 citoplasmático, associado a apoptose, diferenciação e transformação oncogênica.

[016] Há indicações no estado da técnica que as proteínas SIRT, em particular SIRT1, são expressas em células da pele e tal expressão se relaciona a diferentes estresses que sofrem as células cutâneas. A indução da expressão de tais proteínas permitiria, assim, melhor proteção das células e auxílio na reação contra agressões do meio ambiente e do envelhecimento.

[017] Sabe-se que peptídeos são ativadores de SIRT1. Conforme sentido aqui empregado, entre os compostos de natureza peptídica, capazes de ativar SIRT1, estão fragmentos de proteínas, fragmentos peptídicos e polipeptídicos, peptídeos, e todas as sequências de dois ou mais aminoácidos ligados por ligações peptídicas. São adequados fragmentos peptídicos obtidos de extratos de arroz hidrolisado, por exemplo, conforme mencionados na patente norte-americana US8.703.161, em particular o fragmento mencionado como SEQ ID no. 8, comercialmente disponível sob a denominação Orsirtine® GL, da empresa ISP Vincience (grupo Ashland): G-L-Y-D-N-L-E Gly-Leu-Tyr-Asp-Asn-Leu-Glu Ingrediente B

[018] Alarmônios são moléculas de sinal intracelular hormonal produzidas em reação a condições ambientais adversas, por exemplo estresse oxidativo. Em alguns contextos, são associados a proteção e reparação do DNA mitocondrial.

[019] São adequados à presente invenção os alarmônios derivados de guanosina, mais particularmente escolhidos entre monofosfato de guanosina (RN: 85-32-5), difosfato de guanosina (RN:146-91-8), trifosfato de guanosina (RN: 86-01-1), 5’-difosfato-3’-monofosfato de guanosina (RN: 5890276-4) tetrafosfato de guanosina (RN: 33503-72-9), tetrafosfato de diguanosina (RN: 4130-19-2) e pentafosfato de guanosina (RN: 38918-96-6). De maneira particular utiliza-se o tetrafosfato de diguanosina, por exemplo, com o fornecido comercialmente pela empresa ISP Vincience (grupo Ashland), com a denominação GP4G® (extrato de Artemia salina).

[020] De maneira adequada, sem excluir qualquer outra, a combinação da invenção, de proteção aos danos causados por radiação IV, compreende um ingrediente A - qual seja, ao menos um ativador peptídico de SIRT1 e um ingrediente B - ao menos um alarmônio derivado de guanosina.

[021] A combinação da invenção pode ser utilizada em qualquer produto tópico dermatológico, cosmético ou farmacêutico, por exemplo, um protetor solar, um creme facial, um creme corporal, ou qualquer outro que se beneficie do aspecto de proteção contra os danos causados por radiação IV. De forma adequada, sem excluir qualquer outra, o teor da combinação, em relação ao peso total de uma composição que o contém, varia entre 0,01% e 2%.

[022] Quando o ingrediente A é o produto Orsirtine® e o ingrediente B é o produto GP4G®, as proporções adequadas em relação ao peso total da composição da qual fazem parte, sem excluir qualquer outra, variam entre 1:4 e 4:1, particularmente entre 1,5:1 e 1:1,5.

[023] De forma, a combinação da invenção, sem excluir qualquer outra alternativa, compreende proporções entre os ingredientes A e B entre 1:10 e 10:1.

[024] A combinação da invenção pode ser formulada com todos os tipos de veículos, por exemplo, emulsões óleo-em-água, água-em-óleo, silicone-em-água, água-em-silicone, água-em-óleo-em-água, óleo-em-água-em- óleo, etc., creme, loção, solução, bases anidras (batons, pós), gel, pasta, pomada, leite, líquido, aerossol, geleia, sólido, etc.

[025] A combinação da invenção pode ser formulada com ingredientes cosmética e farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, fragrâncias, corantes, pigmentos, adsorventes, emulsificantes, estabilizantes, lubrificantes, solventes, emolientes, umectantes, formadores de filmes, agentes de oclusão, absorvedores de UV físicos ou químicos, óleos essenciais, vitaminas, traços de metais, anti-irritantes, extratos botânicos, agentes antimicrobianos, antioxidantes, quelantes, preservativos, ajustadores de pH, absorventes, esfoliantes, condicionadores de pele, espessantes, agentes contendo silicone, ingredientes farmacêuticos, e quaisquer outros substratos cosmética e farmaceuticamente aceitáveis.

[026] Dentro de outro aspecto, a invenção refere-se ao uso da combinação retro descrita na prevenção e reparação de danos causados à pele por radiação IV.

[027] Dentro de outro aspecto, a invenção refere-se ao uso da combinação retro descrita na preparação de formulações e composições úteis na prevenção de danos causados à pele por radiação IV.

Exemplos

[028] São dados a seguir exemplos de realizações particulares, sem impor qualquer limitação ao escopo da invenção além daqueles contidos nas reivindicações expostas mais adiante. Exemplo 1 - efeito da combinação da invenção sobre expressão genética induzida por IV-A em fibroblastos dérmicos humanos.

[029] Para avaliar se a combinação de um extrato de Artemia salina com um extrato de Oriza sativa, incluindo glicerol, é capaz de prevenir dano induzido por radiação infravermelha a fibroblastos dérmicos humanos, tais células foram pré-incubadas por 24 h e pós-incubadas por 24 h em presença ou ausência da combinação da invenção. Como objetivo, a expressão de enzimas MMP-1 (“matrix metalloproteinase-1”) induzida por IV foi avaliada.

Cultura de células

[030] Fibroblastos dérmicos humanos preparados a partir de prepúcio de neonatal, foram cultivados em EMEM (meio mínimo essencial de Eagle, ou “Eagle’s minimal essential medium”, fornecido por PAA Laboratories GmbH, Alemanha) suplementado com 5% de FCS (soro fetal de novilho, fornecido por Invitrogen, Alemanha), 1 % de L-glutamina, 1 % de aminoácidos não essenciais (fornecido por Invitrogen, Alemanha), 1 % estreptomicina/anfoterina B (fornecido por Invitrogen, Alemanha) em atmosfera umidificada contendo 5 % CO2 durante 4 dias até atingir confluência, tal como descrito em J Invest Dermatol 128: 2491-2497, 2008. Somente fibroblastos com menos de 12 passagens foram utilizados, para evitar mudanças em seus fenótipos originais durante a subcultura. As células foram mantidas em placas de 6 poços para cultura e irradiação.

Viabilidade celular / toxicidade dos compostos

[031] A citotoxicidade dos compostos foi avaliada com a avaliação colorimétrica com MTT, conforme J Immunol Methods 65: 55-63, 1983, anteriormente descrito em J Biol Chem 278: 47498-47507, 2003.

[032] MTT (brometo de 3-(4, 5-dimetill-2-tiazolil)-2, 5-difenil-2H- tetrazólio) torna-se azul brilhante e pode formar um precipitado insolúvel quando reduzido em uma célula, seja enzimaticamente ou por reação direta com NADH (nicotinamida adenina dinucleotídeo) ou NADPH (nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato-oxidase). Ou seja, a perda de cor indica diminuição de metabolismo celular e aumento de toxicidade.

[033] Fibroblastos dérmicos humanos foram semeados em placas de 96 poços, com 15.000 células/200 p.l em cada poço. No dia seguinte, as células foram tratadas com a substância de interesse por 16 h. Após 16 h, o meio foi trocado, 25 p.l de MTT (2 mg/ml de PBS, salina tamponada com fosfato) foram adicionados e a mistura for incubada por mais 3 horas. Finalmente, removidas as soluções, cristais de formazana foram dissolvidos em 200 p.l de Me2SO, e a absorção foi medida utilizando um leitor de microplaca em 540 nm, em um monocromador Infinite 200, fornecido por Tecan Deutschland GmbH, Alemanha. A viabilidade foi calculada como porcentagem das células de controle. Tais células foram expostas somente ao meio de cultura, e adotadas como 100% (conforme Carcinogenesis 23: 1111-1120, 2002).

Irradiação in-vitro

[034] Fibroblastos dérmicos humanos primários foram expostos a uma dose de 360 J/cm2de radiação infravermelha A, previamente determinada como ótima para induzir expressão de gene sem afetar viabilidade desse tipo de célula (conforme J Invest Dermatol 128: 2491-2497, 2008). Em resumo, o meio foi trocado por PBS, as tampas foram removidas, e as células expostas a radiação infravermelha A (IV-A) utilizando um equipamento Hydrosun 500H IRA, fornecido por Hydrosun Medizintechnik GmbH, Alemanha. O dispositivo de IV-A é filtrado com água, equipado um filtro negro e emite comprimentos de onda entre 760 e 1400nm gerando uma irradiância de 360 mW/cm2 a uma distância de 20 cm medida por meio de um equipamento medidor de irradiância Hydrosun HBM1, fornecido por Hydrosun Medizintechnik GmbH, Alemanha. Os discos de cultura foram colocados em uma placa resfriada conectada a um banho termostatizado, fornecido por Thermo Haake GmbH, Alemanha, para manter as temperaturas abaixo de 37°C durante a irradiação. Células de controle foram mantidas em uma placa termostatizada a 37°C, sob condições similares, sem irradiação.

Aplicação dos compostos

[035] As células foram mantidas em inanição por 24 h antes da irradiação (0 % FCS) e a combinação da invenção a avaliar foi adicionada durante 24h. Antes do período de inanição, antes da irradiação e antes da colheita, as células foram lavadas uma vez com PBS. Durante a irradiação, a combinação da invenção não estava presente (incubação PBS). Após a irradiação, a combinação da invenção foi adicionada novamente a meio fresco contendo 2% FCS e permaneceu presente até a colheita das células 24 h pós tratamento IV-A.

[036] Os componentes da combinação da invenção foram: - GP4G SP: extrato aquoso de Artemia salina - Orsirtina GL: extrato de Oriza sativa, glicerol e água.

[037] Os dados de viabilidade foram primeiramente obtidos para escolher uma faixa de concentração apropriada, na qual a viabilidade das células ainda não fica comprometida, mas os efeitos podem ser observados. A viabilidade foi testada para cada concentração como 8 duplicatas. Cada condição de estimulação foi testada em triplicada para avaliação de expressão de gene.

Isolamento de RNA e PCR

[038] RNA total foi conduzido como em Exp Dermatol 17: 771779, 2008. Para isolamento de RNA total foram utilizados kits RNeasy Total RNA, fornecidos por Qiagen, Alemanha. A concentração de RNA foi determinada por medida fotométrica em 260/280nm, com um biofotômetro fornecido por Eppendorf, Alemanha. O sistema Superscript®III First-Strand synthesis, fornecido por Invitrogen, Alemanha, alíquotas de RNA total (100 ng) foi aplicado para síntese de cDNA, um sistema para transcrição reversa com primers aleatórios fornecidos por Invitrogen, Alemanha). Para cada gene, um par de primer específico foi desenhado pelo software Primer Express® 2.0 fornecido por Applied Bio Systems, Alemanha, baseado na sequência de cDNA publicada como indicado na tabela abaixo. Três experimentos independentes foram realizados com 3 determinações cada e o valor médio delas foi calculado. As reações de PCR foram conduzidas em um equipamento Option 1 fornecido por MJ Research, EUA, utilizando reagentes SYBR Green® PCR Master Mix, fornecido por Applied Bio Systems, Alemanha. Cada amostra foi analisada em duplicata empregando protocolo universal durante 46 ciclos. Em mais detalhe: ativação: polimerase de iniciação a quente por 10 minutos a 94oC; penetração: 20 segundos a 95oC; anelamento: 20 segundos a 55oC; extensão: 30 segundos a 72oC. Para a comparação de expressão por PCR em tempo real, de células de controle e células tratadas, o método 2 (delta delta (C(T)) foi utilizado, conforme descrito em Methods 25: 402-408, 2006. Marcadores de primers para PCR em tempo real: - 18S rRNA - Referência: Biochem J 232: 725-733, 1985 - MMP-1 - Referência: J Biol Chem 261: 6600-6605, 1986 Estatística

[039] Análise de variância unidirecional de ordenamento foi utilizada como teste não paramétrico para comparação de diferenças entre médias; valores de p menores que 0,05 foram considerados estatisticamente significativos (software SigmaPlot 11.0, da empresa americana Systat Software Inc).

Resultados

[040] Foi avaliado, conforme a figura 1, o efeito da combinação da invenção sobre a viabilidade de fibroblastos dérmicos humanos. Para determinar uma faixa de dosagem apropriada em que a viabilidade dos fibroblastos dérmicos humanos não é comprometida durante o período de 48h de incubação, avaliou-se uma vasta gama de percentuais em volume (vol%) de 0,1% a 50%. Como a combinação da invenção é solúvel em água não foram necessários controles para solvente.

[041] Como se vê na fig. 1, concentrações abaixo de 6% não afetaram a viabilidade das células durante o período de 48h de incubação. Com tais resultados, 3 concentrações abaixo de 6 vol% foram escolhidas para a continuidade do teste. Para evitar empregar dosagem abaixo da efetiva, concentrações de 1vol%, 2vol% e 4vol% foram utilizadas para testar a propensão de inibir à supraregulação de MMP-1 (matriz metaloproteinase-1 = colagenase de fibroblasto) induzida por IVA em fibroblastos dérmicos humanos. A expressão de MMP-1 foi determinada por PCR em tempo real. Foi utilizado o método 2 (delta delta C(T)) para comparação da expressão de gene relativa com PCR em tempo real, células de controle e células tratadas. Para essa finalidade a expressão dede MMP-1/18S rRNA em células não tratadas foi atribuído valor 1 e então calculadas as razões correspondentes para outros tratamentos.

[042] A média para fibroblastos dérmicos não tratados foi constatada como sendo 0.97 ± 0.03. Doses crescentes da combinação da invenção tiveram pouco efeito sobre a expressão basal de MMP-1 (Figura 2). A irradiação com infravermelho A resultou em significativa supra regulação na expressão de MMP-1 de 2,1 vezes ± 0.12 EP (erro padrão). Doses crescentes da combinação da invenção foram capazes de inibir de maneira significativa essa expressão de MMP-1 induzida por IVA - em detalhe: 1 vol% da combinação da invenção diminuiu a expressão de MMP-1 induzida por IVA de 2,1 vezes a 1,6 vezes ± 0.03 EP, de 2 vol% a 1,5 vezes ± 0.06 EP, e de 4vol% a 1,3 vezes ± 0.06 EP. Todas as 3 concentrações da combinação da invenção avaliadas significativamente diminuiram a expressão de MMP-1 induzida por IVA em 45%, 55% e 73%. Uma dosagem de 4 vol% protegeu mais da supra regulação de MMP-1 induzida por IVA que 1 vol% ou 2 vol%, respectivamente.

[043] Como se pode ver na figura 2, todas as doses avaliadas entre 1 e 4 vol% da combinação da invenção inibiram parcialmente a supra regulação de MMP-1 induzida por IV-A em fibroblastos dérmicos humanos. Verificou-se efeito dose-dependente na faixa de 45 a 73% de inibição. Tabela 2: inibição da resposta IVA em %.

+ significativamente diferente ao efeito de IVA isolado, a, b significativamente diferente entre os dois tratamentos (Análise Kruskall-Wallis de variância unidirecional de ordenamento). Exemplo 2 - uma formulação típica de protetor solar contendo a combinação da invenção.

Modo de fabricação: Fase 1 (Aquosa): 1. No reator principal, dispersar os polímeros da fase aquosa. 2. Após total dispersão do item 1, acrescentar os demais itens da fase aquosa um a um e homogeneizar. Iniciar o aquecimento a uma temperatura de 80-87 oC. Fase 2 (Oleosa): Adicionar ao reator auxiliar os componentes da fase oleosa e fundir a uma temperatura de 80-87 oC. Preparo da emulsão: quando ambas as fases atingirem a temperatura de 80-87 oC , adicionar a fase oleosa sobre a aquosa e homogeneizar. 3. Resfriar a emulsão para 35-40 oC e adicionar os demais componentes da fórmula. Ajustar o pH se necessário. Completar o lote com água purificada se necessário. Homegeneizar.

[044] As informações aqui contidas permitem a um técnico no assunto efetuar realizações particulares não expressamente descritas, mas para desempenhar funções e atingir resultados da mesma natureza das descritas, portanto permanecendo dentro do escopo de proteção das reivindicações anexas.

Claims

1. COMBINAÇÃO PARA PROTEÇÃO DA PELE CONTRA DANOS CAUSADOS PELA RADIAÇÃO INFRAVERMELHA, caracterizadapor compreender um ingrediente A que é ativador peptídico de SIRT1 e um ingrediente B que é um alarmônio derivado de guanosina.

2. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que o dito ingrediente A é escolhido entre fragmentos de proteínas, fragmentos peptídicos, polipeptídicos e peptídeos e qualquer sequência de dois ou mais aminoácidos ligados por ligações peptídicas.

3. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que o dito ingrediente A são fragmentos peptídicos obtidos de extratos de arroz hidrolisado.

4. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que o dito ingrediente A é G-L-Y-D-N-L-E Gly-Leu-Tyr-Asp-Asn-Leu-Glu.

5. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que o dito ingrediente B é um ou mais dentre monofosfato de guanosina (RN: 85-32-5), difosfato de guanosina (RN:146-91-8), trifosfato de guanosina (RN: 86-01-1), 5’-difosfato-3’-monofosfato de guanosina (RN: 58902-76-4) tetrafosfato de guanosina (RN: 33503-72-9), tetrafosfato de diguanosina (RN: 4130-19-2) e pentafosfato de guanosina (RN: 38918-96-6).

6. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que o dito ingrediente B é tetrafosfato de diguanosina (RN: 4130-19-2).

7. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que o teor da combinação de ingredientes A e B, em relação ao peso total de uma composição que o contém, varia entre 0,01% e 2%.

8. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que a proporção entre ingrediente A e ingrediente B varia entre 1:10 e 10:1.

9. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que o ingrediente A está contido no produto Orsirtine® e o ingrediente B está contido no produto GP4G®.

10. COMBINAÇÃO de acordo com a reivindicação 9 caracterizada pelo fato de que as proporções entre Orsirtine® e GP4G® variam entre 1:4 e 4:1, particularmente entre 1,5:1 e 1:1,5.

11. COMPOSIÇÃO caracterizadapor compreender a combinação descrita nas reivindicações 1 a 10 e ser formulada como emulsão, escolhida entre emulsão óleo-em-água, água-em-óleo, silicone-em-água, água-em- silicone, água-em-óleo-em-água, óleo-em-água-em-óleo; creme, loção, solução, bases anidras como batons ou pós, gel, pasta, pomada, leite, líquido, aerossol, geleia ou sólido.

12. USO DA COMBINAÇÃO de acordo com as reivindicações 1 a 10 caracterizadop or ser na prevenção e reparação de danos causados à pele por radiação infravermelha.

13. USO DA COMBINAÇÃO de acordo com as reivindicações 1 a 10 caracterizado por ser na preparação de formulações e composições úteis na prevenção de danos causados à pele por radiação infravermelha.