BG61181B1 - Антикоагулантен препарат - Google Patents
Антикоагулантен препарат Download PDFInfo
- Publication number
- BG61181B1 BG61181B1 BG97199A BG9719992A BG61181B1 BG 61181 B1 BG61181 B1 BG 61181B1 BG 97199 A BG97199 A BG 97199A BG 9719992 A BG9719992 A BG 9719992A BG 61181 B1 BG61181 B1 BG 61181B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- heparin
- epi
- protein
- administration
- administered
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 title description 6
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 title description 6
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 71
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 70
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 70
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 11
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 6
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 claims description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000035602 clotting Effects 0.000 abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 20
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 7
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 6
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 6
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 5
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 5
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000002506 anticoagulant protein Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002001 anti-metastasis Effects 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 2
- 102100030009 Azurocidin Human genes 0.000 description 1
- 101710154607 Azurocidin Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 108090000481 Heparin Cofactor II Proteins 0.000 description 1
- 102100030500 Heparin cofactor 2 Human genes 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 1
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 1
- 101000635804 Homo sapiens Tissue factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004211 Platelet factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000778 Platelet factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002257 antimetastatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 1
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 108091006086 inhibitor proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 108010069264 keratinocyte CD44 Proteins 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Shaping By String And By Release Of Stress In Plastics And The Like (AREA)
- Separation Of Suspended Particles By Flocculating Agents (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Фармацевтичният препарат е предназначен за профилактика или лечение на нарушения в
кръвосъсирването или на рак. Препаратът съдържа един външен инхибитор /ЕР1/ протеин и
хепарин или друг мукополизахарид заедно с приемлив разтворител или вехикул.
Description
ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Изобретението се отнася до препарат за лечение на нарушения в кръвосьсирването или на рак, който препарат включва протеин с антикоагулантна активност и субстанция, действаща синергично с протеина. Изобретението се отнася и до метод за лечение на нарушенията в кръвосьсирването или на рак чрез този препарат.
ДАННИ ЗА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Съсирването на кръвта е сложен процес, включващ много ускоряващи и инактивиращи коагулацията фактори. Антикоагулантните протеини са известни като много важни за регулиране на процеса на съсирване /виж B.Lammle и J.Griffin /Clinics in Heamatology 14 /1985/, 281-342/, а антикоагулантите са също важни при лечението на различни заболявания, като тромбози, миокарден инфаркт, дисеминирано вътресъдово съсирване и други.
Хепаринът се използва за повишаване активността на антитромбин III и хепарин кофактор II. Антитромбин III се използва за инхибиране на фактор Ха и тромбин. Хирудин се използва за потискане на тромбина и протеин С се използва за инхибиране на фактор V и VIII.
Антикоагулантните протеини могат също да бъдат използвани за лечение на рака. Доказано е, че антистатинът има антиметастатични свойства. /J.H.Han и сътр., Gene 75 / 1989/, /47-57/.
Също така е доказано, че хепаринът и варфаринът имат антиметастатични свойства /G.J.Gasic и сътр., Int.Rev.Exp.Pathol.29 /1985/ ,173-209/.
Съсирването може да започне по външния път чрез излагане на тъканния фактор / ТФ/ към циркулиращата кръв /Y.Nemerson/ Blood 71 /1988/ 1-8/. Тъканният фактор е протеин кофактор за FVII/VIIa и свързвайки тъканния фактор, повишава ензимната активност на FVIIa към неговите субстрати FIX и FX. Плацентният антикоагулантен протеин може да инхибира активността на тъканния фактор - вероятно чрез интерференция с TF/FVIIa фосфолипид взаимодействие /S.Kondo и сътр., Thromb.Res. 48 /1987/, 449-459/.
Изолиран е нов анкикоагулант протеин - инхибитор на външния път /ЕР1/ /Вгоге и сътр., Proc. Natl.Acad. Sci 84 /1987/, 18861890/.
Ha моларна основа EPI е много по-силен инхибитор от TF/FVIIa, предизвикващ съсирване, в сравнение с плацентния антикогулантен протеин /R.D.Gramzinski и сътр. Blood 73 /1989/, 983-989/. EPI свързва и потиска FXA и комплексът между EPI и Ха инхибира TF/FVIIa /SI Rapaport, Blood 73 /1989/, 359365/. EPI е атикоагулантен/антиметастатичен агент, като много туморни клетки, които показват TF /ТФ/ активност /T.Sakai и сътр., J.Biol. Chem. 264 /1989/, 9980-9988/ и защото EPI показва анти- Ха активност като антистатин.
DK 4135/88 Broze et акописват получаването на EPI от HepG2 чернодробни клетки. Генът на протеина е разклонен и е доказано, че протеинът се състои от три двойки тип Kunitz от сферата на инхибиторите /Broze DK 3907/ 88/. Протеинът се състои от 276 аминокиселинни остатъка и има в добавка към трите Kunitz типа инхибиторни домена три потенциални гликозидни сайта на позиции Asn 117, Asn 167 и Asn 229. Молекулното тегло отчита, че някои от тези сайтове са гликозидни. Понататък е доказано, че Kunitz 2 свързва FXa, докато първият Kunitz свързва FVIIa/TF / Girard et.al. Nature 338 /1989/, 518-520/. EPI е също изолиран от Hella клетки /DK Ν 6199/ 88/ и е доказано, че Hella клетки EPI свързва хепарина.
СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Изобретението се отнася до възможността за повишаване на антикоагулантната активност и на полуживота на инжектирания EPI в плазмата /т.е. периодът, когато EPI циркулира в кръвоносните съдове/ чрез едновременно прилагане на хепарин.
Изобретението се отнася до фармацевтичен препарат за профилактика или лечение на нарушения в съсирването на кръвта или на рак, който препарат съдържа външен /екстринзик/ инхибитор /ЕР1/ протеин и хепарин или друг мукополизахарид заедно с фармацевтично приемлив дилутор или вехикул.
Изобретението използва откритието че EPI е хепаринсвързващ протеин /DK 6199/ 88/. Изследванията на Sandset et al. / Thromb.Res.50,1988, 803-813/ доказват, че естественото плазмено ниво на EPI се повишава до два пъти, следвайки подкожното приложение на хепарина. Тези открития са довели до предположението, че циркулиращият хепарин предотвратява свързването на EPI с хепаринподобните субстанции /първични мукополизахариди/ върху повърхността на ендотелиалната клетка. Хепаринът също може да действа, като освобождава вече свързвания EPI от ендотелиума. Във всеки случай е необходимо да се знае за антикоагулантната активност на EPI, че той е в по-голямо количество в циркулацията, отколкото свързваният върху ендотелиалната повърхност. Ето защо може да се каже, че хепаринът има синергичен ефект върху активността на EPI, че свързвайки свободния EPI или EPI, освободен от ендотел, той увеличава антикоагулантната активност на EPI и е възможно EPI да циркулира в кръвта. В изследванията in vitro е доказано, че хепаринът увеличава активността на антитромбин III /L.Rosenfeld Biochem. J.237, 1986, 639-646/. Но не се наблюдава увеличаване на полуживота на инжектирания антитромбин III при инжектирането на хепарин и хепаринът не действа синергично с антитромбин III в случай на дисеминирано вътресъдово съсирване /B.Blauhut, Thromb. Res. 39, 1985, 81-89/.
Трябва да бъде отбелязано, че изобретението е свързано както с препарати, в които EPI протеинът е комбиниран с хепарин по такъв начин, че всъщност са свързани преди инжектирането, както и препарати, в които EPI протеинът и хепаринът се държат в отделни контейнери преди употребата им под форма, която е приспособена за субстанциално едновременно или последователно коинжектиране на EPI протеин и хепарин /т.е. със съдържание на EPI протеин, приспособен за съответната употреба на препарата и със съдържание на хепарин, който е достатъчен да свърже субстанциално всичкия EPI протеин, за да бъде инжектиран/. В последния случай EPI протеинът ще бъде свързан с циркулиращ хепарин в кръвоносните съдове при инжектирането на двете субстанции.
Нарушенията в кръвосъсирването, които се лекуват с помощта на препарата съгласно изобретението, са главно нарушения, които изискват лечение с антикоагуланти. Такива нарушения са например конвенционално лекуваните чрез прилагане само на хепарин, например тромбози, емболии, инфаркти, дисеминарно вътресъдово съсирване. Предвидено е препаратът съгласно изобретението също да бъде прилаган за лечение на рака. Това се предполага от антиметастатичните свойства на други антикоагуланти, какъвто е антистатинът. J.H.Han et.al, Gene 75,1985, 47-57/,хепарин и варфарин GJ.Gasic et al, Int.Rev.Exp.Pathol. 29, 1985, 173-209/.
В настоящия контекст терминът “EPI протеин” включва не само нативен или цялостен EPI, но също EPI аналози с афинитет към хепарин. Примери за такива аналози са EPI фрагменти, които включват хепаринсвързващ домен /навярно, за да бъде локализиран в областта на нативната EPI молекула от аминокиселинния остатък в позиция 165 на С-терминални аминоостатък в позиция 276. По-специфично е включването на област, богата на положително натоварени аминокиселинни остатъци от Arg 246 до Lys 265/.
Терминът “друг мукополизахарид” включва хепаринподобни субстанции с възможност да свързват EPI. Примери за такива субстанции са сулфатни глюкозаминогликани, избрани от хепаринсулфат, дерматан сулфат и протамин сулфат. За сега предпочитаният мукополизахарид за настоящата цел е хепарин.
Препаратът на изобретението може да бъде съединен под всяка форма, която е подходяща за парентерално приложение /т.е. за интравенозно или подкожно инжектиране или инфузионно/, например чрез разтваряне или разреждане на EPI протеина и хепарина, поотделно или в смес, както е обяснено по-горе, в стерилна вода или физиологичен разтвор. Необходимото ниво на дозата, постигащо желания ефект, се изчислява на базата на съдържанието на нативния EPI в кръвоносните съдове на здрави хора и количеството хепарин, необходимо да го освободи от ендоделиума. Количеството на EPI в кръвта на здрави хора е 50 ng/ml в плазмата. Инжектирането например на 5000 IU хепарин теоретично може да увеличи освобождаването на EPI от епителни повърхности до концентрация над 500 ng/ml в плазмата. За да се поддържа синификантен антикоагулантен ефект на EPI протеина, е доказано, че подходяща доза EPI /единична доза/ може да бъде около 0,5-40 mg EPI, също зависеща от вида и спешността на условието, поради което е назначено лечението с EPI. Подходящата доза хепарин е тази, която може да свърже това количество хепарин, за да го задържи в циркулацията. Дозата на хепарина може да бъде приложена с EPI протеин в количество около 1000-15 000 IU за единична доза - така, както и 2000-10000 Ш за еднократна доза, най-вече около 5000 Ш за доза.
Изобретението се отнася и до метод на лечение или предотвратяване на нарушенията в кръвосъсирването или на рак, включващ инжектиране на пациента, нуждаещ се от такова лечение, терапевтична или профилактично ефективна доза от EPI и хепарин.
В една от разработките на метода, съгласно изобретението приложението на ΕΡΙπροтеина може да бъде едновременно с приложението на хепарина. Това може да бъде осъществено чрез смесване на ΕΡΙ протеина с хепарин първично, така че приложението на ΕΡΙ протеина да бъде под форма, в която се свързва към хепарина, или ΕΡΙ протеинът и хепаринът могат да бъдат приложени поотделно с помощта на средство, което прави възможно приложението на двете субстанции едновременно. Накрая ΕΡΙ протеинът или хепаринът може да бъде приложен най-напред, а съответно - другият компонент да бъде приложен веднага след първия /’’веднага” означава период от една минута след приложението на първата субстанция/.
В друга от разработките ΕΡΙ протеинът може да бъде приложен преди приложението на хепарин. В този случай се очаква, че ΕΡΙ протеинът ще циркулира само къс период от време /обикновено 10 min/, след който ще бъде свързан с хепариноподобни мукополизахариди върху повърхностите на епителната клетка и така се инактивира. Предполага се същият ефект с другия кръвен протеин/ тромбоцитен фактор 4;G.Celia и сътр. EurJ.Clin. Invest. 17, 1987, стр. 548-554/, като свързаният EPI се освобождава чрез последващо приложение на хепарин и се свързва вместо това с прилагането на циркулиращия хепарин.
В алтернативна разработка EPI протеинът може да бъде приложен след прилагането на хепарин. В този случай EPI протеинът се свързва с циркулиращия хепарин незабавно след приложението. За получаване на желания синергичен ефект на хепарина се предвижда EPI протеинът да бъде приложен от 0 до 24, за предпочитане от 0 до 2 и най-добре от 0 до 0,5 h след приложението на хепарина.
В последните две разработки EPI протеинът и хепаринът се прилагат поотделно от контейнери. Както е отбелязано по-горе, EPI може да бъде приложен в количество от 0,5 до 40 mg EPI, а хепаринът - в количество от 1000-15000 Ш за единична доза, както и в количество от 2000 - 10000 IU за еднократна доза. Нарушенията в кръвосъсирването, за които е индицирано приложението на EPI протеин и хепарин са от описаните по-горе.
В друг аспект изобретението се отнася до използването на EPI протеин и хепарин за приготвяне на медикамент за профилактика или лечение на нарушенията в кръвосъсирването и на рака. Както е описано по-горе, EPI протеинът може да бъде свързан с хепарина преди приложението или EPI протеинът и хепаринът могат да бъдат в отделни контейнери под форма, приспособена за едновременно или последователно приложение на EPI протеина и хепарина.
Следващият метод може да бъде използван, за да покаже EPI активността в плазмата след приложението на препарата съгласно изобретението. Методика за EPI активност: EPI се измерва с хромогенен метод, модифициран след метода на Sandset et.al., / Thromb.Res.47 /1989/, 389-400/. Третираната с топлина плазма се използва като стандарт. Този стандарт отговаря на IU /ml от EPI активност. Стандартите и образците се разреждат в буфер А/0.05 М tris /0.1 MNaCl/0.1 М Na-citrate/0.0.2%NaN3/pH 8.0/, съдържащ 2 ng/ml полибрен и 0.2% говежди серумен албумин. Комбинацията FVIIa/TF/FX/CaCl2 се приготвя в буфер А и съдържа 1.6 ng/ml FVIIa /Novo - Nordisk а/s/, човешки тъканен фактор, разреден 60 пъти /Hjort, Scand, J.Clin, Lab.Invest 9 /1957/, 50 ng/ml FX /Sigma/ и 18 mM СаС12. Процесът се осъществява при 37°С. 50 ul от образците и стандартите се пипетират и 100 ul комбинирани реактиви се добавят към всеки. След 10 min инкубация, 25 ul от FX /3.2ug/ml/ се добавят към всеки и след нови 10 min 25 ul от хромогенния субстрат за
FXa /S2222/ се добавя 10 min след добавянето на субстрата. Реакцията се спира след добавянето на 50 η! 1.0 М лимонена киселина рН 3.0. Микропластината се чете на 405 nm.
МЕТОД ЗА КОАГУЛАЦИЯ
Метод за АРТТ. В метода за активираното частично /парциално/тромбопластиново време, 55р\ от плазма инкубирала микстура се разтваря според производствените инструкции и 1 обем от тромбопластин се смесва с 55/<1 от АРТТ реактив за 300 s на 37°С, преди добавянето на 55ja1 от 0.025 М СаС12 и времето на съсирване се премерва.
Метод на РТ. В метода на протромбиновото време /РТ/, заешки тромбопластин се смесва с два обема от 0.03 М СаС12. В опита 75р1 от инкубираната микстура се смесва със 75у*Ч тробмопластин /СаС12, взаимодействат на 37°С преди да е определено времето на съсирване.
Метод на разреден тъканен фактор / dTF/.dTF е подобен на метода на РТ метода. В този метод е използван човешки тромбопластин, разреден 7000 пъти в коагулационния буфер, докато в РТ метода се използва неразреден заешки тромбопластин.
Примери
Демонстриране на синергичен ефект в кръвосъсирването
Опитите за кръвосъсирване се извършват върху плазмени образци с добавен ЕР1 и/ или LMW хепарин, разреден в коагулационния буфер /0.1% говежди серум албумин, 50 тМ имидазол, 100 тМ NaCl.pH 7.3/. Една шеста от целия обем е rEPI, 1/20 от обема е хепарин. В образци, в които някои от тези реактиви не са добавени, е добавен коагулационен буфер, за да запази постоянна разтворимостта на плазмата. Всички образци са инкубирани за 15 min на стайна температура преди да започне опитът. Всички времена са измерени чрез ACL 300 R коагулационен апарат от Инструменталните лаборатории, Ascoli Picenoq Italy
Резултати
Резултатите са показани на фигури 1-3.
От фигура 1 /АРТТ опит/ може да се види, че добавянето само на lO/^/ml от EPI повишава АРТТ коагулационно време /активирано парциално тромбопластиново време/ на нормалната човешка плазма до 26 s, докато добавянето на LMW хепарин /0.4 FXalU/ ml повишава времето до 57 s. Съвместната инкубация и на двата компонента в стойности, като посочените по-горе резултати с много поголям ефект удължават времето на съсирване до 283 s.
Фигура 2 /РТ опит/ показва, че добавянето само на 4y<g/ml r EPI повишава времето на съсирване на нормална плазма до 4,4 s, докато прибавянето само на LMW хепарин/ 2FXal U/ml, увеличава времето на 10,4 s. Едновременната инкубация на двата компонента в стойности, като посочените по-горе, удължават времето на съсирване на кръвта до 341 s.
Фигура 3 /dTF опит/ показва, че добавянето само на 0.8 ng/ml от ЕР1 повишава времето на съсирване на нормална плазма до 35 s, докато добавянето на LMW хепарин /0.2 FXaIU/ml повишава времето до 105 s. Едновременното инкубиране на двата компонента в стойности, като посочените по-горе удължава времето на съсирване до 341 s.
Във всички три опита резултатите показват синергичен ефект между rEPI и LMW хепарин.
Claims (15)
- Патентни претенции1. Фармацевтичен препарат за профилактика или лечение на нарушения в кръвосъсирването или на рак, характеризиращ се с това, че съдържа един външен инхибитор / ЕР1/ протеин и хепарин или друг мукополизахарид, заедно с приемлив разтворител или вехикул.
- 2. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че съдържа ЕР1 протеин, свързан с хепарин.
- 3. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че съдържа EPI протеин и хепарин в отделни контейнери под форма, адаптирана за едновременно или последователно прилагане на EPI протеин и хепарин.
- 4. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 1-3, характеризиращ се с това, че съдържа EPI протеин в количество от 0,5 до 40 mg.
- 5. Фармацевтичен препарат съгласно претенции 1 -4, характеризиращ се с това, че съдържа хепарин в количество от 1000 до 15000 IU за единична доза, както и от 2000 до 10000 IU за единична доза.
- 6. Метод за профилактика или лечение на нарушения в кръвосъсирването или на рак, 5 характеризиращ се с това, че включва прилагането върху пациент на терапевтична или профилактична ефективна доза от EPI и хепарин.
- 7. Метод съгласно претенция 6, при който прилагането на EPI протеина е едновремен- 10 но с прилагането на хепарина.
- 8. Метод съгласно претенция 6, при който EPI протеинът се прилага преди инжектирането на хепарина.
- 9. Метод съгласно претенция 6, при кой- 15 το EPI протеинът се прилага след инжектирането на хепарина.
- 10. Метод съгласно претенция 9, при който ЕР1 протеинът се прилага от 0 до 24 h, за предпочитане от 0 до 2 h и най-добре 0 до 0,5 h след прилагането на хепарина.
- 11. Метод съгласно претенциите от 6 до10, при който EPI се прилага в количество от 0,5 до 40 mg.
- 12. Метод съгласно претенциите от 6 до11, при който хепаринът се прилага в количество 1000 до 15000 Ш единична доза или в количество от 2000 до 10000 Ш единична доза.
- 13. Използване на EPI протеин и хепарин за получаване на медикамент за профилактика или лечение на нарушения в кръвосъсирването или на рак.
- 14. Използване съгласно претенция 13, при което EPI протеинът е свързан с хепарина.
- 15. Използване съгласно претенция 13, при което EPI протеинът и хепаринът са в отделни контейнери във форма, адаптирана за едновременно или последователно прилагане на ЕР1 протеин и хепарин.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK148890A DK148890D0 (da) | 1990-06-19 | 1990-06-19 | Farmaceutisk praeparat |
| PCT/DK1991/000145 WO1991019514A1 (en) | 1990-06-19 | 1991-05-30 | An anticoagulant preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG97199A BG97199A (bg) | 1993-12-24 |
| BG61181B1 true BG61181B1 (bg) | 1997-02-28 |
Family
ID=8105367
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG97199A BG61181B1 (bg) | 1990-06-19 | 1992-12-18 | Антикоагулантен препарат |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0535129B1 (bg) |
| JP (1) | JP3362038B2 (bg) |
| AT (1) | ATE119781T1 (bg) |
| AU (1) | AU645581B2 (bg) |
| BG (1) | BG61181B1 (bg) |
| CA (1) | CA2085101A1 (bg) |
| DE (1) | DE69108242T2 (bg) |
| DK (2) | DK148890D0 (bg) |
| ES (1) | ES2069894T3 (bg) |
| HU (1) | HU221323B1 (bg) |
| WO (1) | WO1991019514A1 (bg) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5849703A (en) * | 1990-08-27 | 1998-12-15 | G. D. Searle & Co. | Pre-formed anticoagulant heparin/TFPI complexes |
| US6291427B1 (en) | 1990-08-27 | 2001-09-18 | G.D. Searle & Co. | Anticoagulant combination of LACI and sulfated polysaccharides |
| DK261490D0 (da) * | 1990-10-31 | 1990-10-31 | Novo Nordisk As | New pharmaceutical compound |
| US5276015A (en) * | 1992-03-18 | 1994-01-04 | Washington University | Method of inhibiting microvascular thrombosis |
| US6063764A (en) * | 1992-06-01 | 2000-05-16 | Washington University & Chiron Corp. | Method for using lipoprotein associated coagulation inhibitor to treat sepsis |
| US20030171292A1 (en) | 1992-06-01 | 2003-09-11 | Creasey Abla A. | Method for using lipoprotein associated coagulation inhibitor to treat sepsis |
| KR950701820A (ko) * | 1992-06-11 | 1995-05-17 | 로저 에이. 윌리암스 | 패혈증 및 패혈증-연관 옹고장애의 예방 및 치료(prophylaxs and treatment of sepsis and sepsis-associated coagulation disorders) |
| ZA941414B (en) * | 1993-03-02 | 1994-09-28 | Novo Nordisk A G | Non-glycosylated TFPI analogues |
| US5981471A (en) * | 1997-02-06 | 1999-11-09 | Entremed, Inc. | Compositions and methods for inhibiting cellular proliferation |
| HUP0501111A2 (en) | 2001-10-15 | 2007-12-28 | Chiron Corp | Treatment of severe pneumonia by administration of tissue factor pathway inhibitor |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0048898B1 (en) * | 1980-09-30 | 1985-04-17 | Bayer Ag | Method for the production of an antithrombin-heparin complex and pharmaceutical compositions containing the complex |
| US4689323A (en) * | 1983-09-26 | 1987-08-25 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently bound heparin--antithrombin-III complex |
| IL79255A0 (en) * | 1986-06-26 | 1986-09-30 | Hadassah Med Org | Composition for metastasis prevention |
| US4900723A (en) * | 1988-04-29 | 1990-02-13 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Method of preventing or reducing venous thrombosis using a thromboxane A2 receptor antagonist in conjunction with heparin and combination |
| DK408089D0 (da) * | 1989-08-18 | 1989-08-18 | Novo Nordisk As | Proteiner |
-
1990
- 1990-06-19 DK DK148890A patent/DK148890D0/da not_active Application Discontinuation
-
1991
- 1991-05-30 AU AU80604/91A patent/AU645581B2/en not_active Ceased
- 1991-05-30 EP EP91912208A patent/EP0535129B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-05-30 AT AT91912208T patent/ATE119781T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-05-30 HU HU9204036A patent/HU221323B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1991-05-30 ES ES91912208T patent/ES2069894T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-05-30 JP JP51133391A patent/JP3362038B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-05-30 DE DE69108242T patent/DE69108242T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-05-30 DK DK91912208.5T patent/DK0535129T3/da active
- 1991-05-30 WO PCT/DK1991/000145 patent/WO1991019514A1/en active IP Right Grant
- 1991-05-30 CA CA002085101A patent/CA2085101A1/en not_active Abandoned
-
1992
- 1992-12-18 BG BG97199A patent/BG61181B1/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU9204036D0 (en) | 1993-03-29 |
| DE69108242T2 (de) | 1995-07-06 |
| CA2085101A1 (en) | 1991-12-20 |
| DK0535129T3 (da) | 1995-08-07 |
| HU221323B1 (en) | 2002-09-28 |
| ATE119781T1 (de) | 1995-04-15 |
| AU645581B2 (en) | 1994-01-20 |
| BG97199A (bg) | 1993-12-24 |
| JPH05507926A (ja) | 1993-11-11 |
| AU8060491A (en) | 1992-01-07 |
| HUT63578A (en) | 1993-09-28 |
| EP0535129B1 (en) | 1995-03-15 |
| DE69108242D1 (de) | 1995-04-20 |
| ES2069894T3 (es) | 1995-05-16 |
| DK148890D0 (da) | 1990-06-19 |
| WO1991019514A1 (en) | 1991-12-26 |
| JP3362038B2 (ja) | 2003-01-07 |
| EP0535129A1 (en) | 1993-04-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0638088B1 (en) | Hybrid human/porcine factor viii | |
| US6624141B1 (en) | Protamine fragment compositions and methods of use | |
| KR100366982B1 (ko) | 혈전용해활성단백질및항응고제의조합물,및그의용도 | |
| RU2127600C1 (ru) | Фармацевтический препарат, обладающий свойством ускорять процесс коагуляции крови, способ ускорения коагуляции крови in vitro и применение ингибитора epi активности в качестве вещества, обладающего свойством ускорять процесс коагуляции крови | |
| Uchiba et al. | Recombinant human soluble thrombomodulin reduces endotoxin-induced pulmonary vascular injury via protein C activation in rats | |
| US20130064807A1 (en) | Use of thrombin mutants to inhibit the anticoagulation effect of thrombin inhibitors | |
| EP0255206A2 (en) | Peptides that inhibit von Willebrand factor binding | |
| EP0535129B1 (en) | An anticoagulant preparation | |
| JPH07503719A (ja) | ヒルジンおよび合成トロンビン抑制因子のための解毒薬 | |
| Jackson et al. | Antithrombotic effects of hirulog in a rat carotid endarterectomy model | |
| CZ140298A3 (cs) | Hybridní faktor VIII s modifikovanou aktivitou | |
| JPH11507664A (ja) | 第ｖｉｉｉ因子由来の第ｉｘ因子結合ペプチド及び血液凝固のインヒビターとしてのそれらの使用 | |
| US5804181A (en) | Pharmaceutical preparation for the prevention and treatment of blood coagulation disorders | |
| US20090181057A1 (en) | Methods and Compositions for the Inhibition of Thrombus Formation | |
| EP0239644A1 (en) | Novel physiologically active substance having blood coagulation controlling activity | |
| US7977460B2 (en) | Compositions comprising coagulation factors IXA and VIII for the treatment of haemophilia A or B | |
| EP0515550B1 (en) | Heparin neutralization with platelet factor 4 | |
| Marchi et al. | Thrombin structural and functional determinants as therapeutic targets | |
| Ul'yanov et al. | Antidiabetic and anticoagulant properties of heparin–glutamic acid complex | |
| TW202146042A (zh) | 用於治療動脈和靜脈血栓形成的協同且靶向的組成物 | |
| US20200054719A1 (en) | E-we thrombin analog and fibrinolytic combination | |
| EA046721B1 (ru) | Синергетические и обеспечивающие нацеливание композиции для лечения артериальных и венозных тромбозов | |
| McIntosh | Investigations of the thrombin generation test for the measurement of factor VIII | |
| KR20020092469A (ko) | 인자 ＶＩＩａ 및 인자 ＸＩＩＩ를 포함하는 제약학적조성물 |