BG108383A - АГОНИ'' НА АД...НОЗИН А2А Р...-...П'ОР И АН'ИХОЛИН...РГИ-НО 'Р...Д''ВО В КОМБИНА-ИЯ ЗА Л...-...НИ... НА ОБ''Р"К'ИВНИ ЗАБОЛЯВАНИЯ НА ДИХА'...ЛНИ'... ПЪ'И(tm)А - Google Patents

Description

Област на техниката

Изобретението се отнася до комбинация за инхалиране от селективен агонист на аденозин А₂д рецептор и антихолинергично средство, при условие, че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол. Освен това изобретението се отнася до фармацевтични състави, включително устройства за прилагане и до използване на такава комбинация.

Комбинация на селективен аденозин А₂д рецепторен агонист и антихолинергично средство е приложима при лечението на обструктивни заболявания на дихателните пътища и други възпалителни заболявания, поспециално на обструктивни заболявания на дихателните пътища като астма, хронично обструктивно белодробно заболяване (COPD) и други обструктивни заболявания на дихателните пътища, влошаващи се при повишени бронхиални рефлекси, възпаление, бронхиална хипер-реактивност и бронхоспазми. Комбинацията е особено полезна при лечението на COPD.

Примери на конкретни заболявания, които могат да се лекуват с настоящето изобретение, включват дихателните заболявания астма, акутен респираторен дистресов синдром, хронично белодробно възпалително заболяване, бронхит, хроничен бронхит, хронично обструктивно белодробно (на дихателните пътища) заболяване и силикоза и заболявания на имунната система като алергичен ринит и хроничен синузит.

Предшестващо състояние на техниката

Аденозин има широк аспект на физиологични активности, включително имуннии възпалителни реакции, които са рецепторно медиирани и включват взаимодействие с най-малко четири типа плазмени мембранни рецептори. Тези рецептори обикновено се означават като Αι, А_2а: А₂ь и A3. Аденозин и неговите аналози е намерено че притежават широк спектър от противовъзпалителна активност, която включва голямо разнообразие от имунни и възпалителни клетки, включително неутрофили и еозинофили. Активирането на А_2а рецепторите на неутрофилите води до потискане на производството на реактивни оксиданти и други медиатори на възпаление като еластаза от тези клетки, както и до намалено експресиране на Рг-интегрини.

Известно е, че А_2а рецептори съществуват върху лимфоцити, неутрофили, еозинофили, базофили, моноцити/макрофаги, епителни клетки и върху васкуларни ендотелни тъкани, с които те взаимодействат. Аденозиново свързване към А_2а рецептори може да намали възпалението чрез повлияване на активностите на множество от тези клетъчни типове. Например, А_2а рецепторите агонисти съществено инхибират оксидативните видове предизвикани от физиологични стимуланти като неутрофилни хемоатрактанти, цитокини и липидни продукти.

Окупирането на аденозин А_2а рецепторите стимулира неутрофилната аденилил циклаза, което води до увеличаване на интрацелуларния цикличен АМР. От своя страна, увеличен неутрофилен цикличен АМР води до депресия на стимулираната-неутрофилна оксидативна активност. Чрез сродно действие върху различни други възпалителни клетъчни типове, противовъзпалителните свойства на А_2а агонисти се разпростират извън инхибиторните активността върху неутрофили. Аденозинът също намалява ендотоксин-стимулираното моноцитно/макрофагно TNF_a освобождаване и бе наблюдавано, че ендогенен аденозин, както и аденозинови аналози намаляват човешкото моноцитно TNF_a производство чрез свързване към аденозин Ага рецептори.

Ендотоксин-стимулирано освобождаване на интерлевкин-6 (IL-6) и интерлевкин-8 (IL-8) се намаляват чрез аденозинови аналози с порядък на сила, която предполага А_2а аденозинова рецепторна активност. Интерлевкин10 (IL-10) има противовъзпалителна активност в резултат на способността си да намалява ендотоксин-стимулирано TNF_a освобождаване от моноцити, да инхибира оксидативната активност и да намалява експресирането на левкоцитни адхезионни молекули. Аденозинът подобрява стимулирано човешко моноцитно производство на IL-10, следователно, свързването на аденозин към А_2а рецептори подпомага за разнасянето на всяка протичаща и участваща възпалителна реакция.

Активирани еозинофили трансмигрират в тъкани и предизвикват клетъчно увреждане и възпаление при такива¹ болести като алергична и неалергична астма, алергичен ринит и атопичен дерматит. Аденозинови и аналози на аденозин А_2а рецепторни агонисти, чрез свързване към А_2а рецептори върху еозинофили, инхибират стимулираното освобождаване на реактивни кислородни видове, една реакция която е успоредна с инхибиращия ефект на А_2а рецептори върху неутрофили.

Освен това, инхалирани А_2а агонисти инхибират възстановяването на еозинофили в белите дробове на сензибилизирани морски свинчета чрез въздействие върху белите дробове (виж WO-A-99/67263). Това е важно, тъй като А_2а агонисти отпускат кръвоносните съдове и понижават кръвното налягане при животни, и с това противовъзпалителното действие на А_2а агонисти се получава идеално от инхалирано средство, което има висок терапевтичен индекс на активност в белия дроб в сравнение с периферното отделение.

Антихолинергични средства предпазват от ефекти, получаваше се в резултат на преминаването на импулси през парасимпатичните нерви. Това действие е като следствие на тяхната способност да инхибират действието на невротрансмитера ацетилхолин чрез блокиране на неговото свързване към мускаринови холинергични рецептори. Има най-малко три типа мускаринови рецепторни подтипа. Μι рецептори се намират предимно в мозъка и други тъкани на централната нервна система, M2 рецептори се намират в сърцето и и други сърдечносъдови тъкани и Мз рецептори се намират в гладките мускули и в тъканите на жлезите. Мускариновите рецептори са поместени при невроефекторните места върху например гладък мускул, и по-специално Мз мускаринови рецептори са поместени в гладките мускули на дихателните пътища. Следователно, анти-холинергични средства могат също да се определят като мускаринови рецепторни антагонисти.

Парасимпатичната нервна система играе главна роля в регулирането на бронхомоторния тонус и бронхоконструкцията е в голяма степен в резултат на рефлексно повишаване на парасимпатичната активност предизвикана от своя страна от различни комплексни стимули. Антихолинергичните средства имат дълга история на използване при лечението на хронични заболявания на дихателните пътища, характеризиращи се с частично обратимо стесняване на дихателните пътища като при COPD и астма и се използват като бронходилататори преди настъпването на епинефрин. След това те бяха изместени от β-адренергини средства и метилксантини. По-късното обаче, въвеждането на ипратропиев бромид доведе до съживяване използването на анти-холинергично лечение при дихателни заболявания. Има мускаринови рецептори върху периферна органова система като слюнчени жлези и черва и поради това използването на системноактивни мускаринови рецепторни антагонисти е ограничено от странични ефекти като изсушаване на устата и констипация. Така бронходилататорно и други благоприятни въздействия върху мускариновите рецепторни антагонисти се получават много добре чрез инхалирано средство, което има висок лечебен индекс на активност в белия дроб в сравнение с това в периферното отделение.

Антихолинергичните средства също частично антагонизират бронхоконстрикцията предивзикана чрез хистамин, брадикинин или простагландин F_2a, което се смята че рефлектира върху участието на парасимпатични еференти в бронхиалните рефлекси, предизвикани от тези средства.

Изненадващо сега бе намерено, че комбинация от селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство дава съществени предимства при лечението на обструктивни заболявания на дихателните пътища и други възпалителни заболявания в сравнение с прилагането на всяко от средствата по отделно. Предимствата на комбинацията е да осигури оптимален контрол върху размера на дихателния път чрез най-подходящия механизъм по отношение на болестната патология, а именно мускаринов рецепторен антагонизъм, заедно с ефективно потискане на неподходящо възпаление. Чрез комбинирането на антимускариново съединение и А_2а агонист по дихателен път, се реализират предимствата на всеки от класовете, без да се проявяват нежеланите периферни ефекти. Освен това, комбинацията води до неочакван синергизъм, давайки по-голяма ефикасност от максимално поносимите дози на всеки от класовете от средствата използвани самостоятелно.

Поради това, изобретението осигурява комбинация за инхалиране от селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство, при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.

Освен това изобретението осигурява комбинация за инхалиране от селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство за използване като лекарство, при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.

Освен това изобретението осигурява комбинация от селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство за едновременно, последователно или разделено приложение по инхалационен път за лечение на обструктивно заболяване на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.

Освен това изобретението осигурява фармацевтичен състав включващ комбинация от селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство и фармацевтично приемлив пълнител, разредител или носител за приложение по инхалационен път за лечение на обструктивно заболяване на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.

Освен това изобретението осигурява използването на селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство за производство на медикамент за едновременно, последователно или разделено приложение на двете средства по инхалационен път за лечение на обструктивно заболяване на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.

Освен това изобретението осигурява метод за лечение на обструктивно заболяване на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, включващо едновременно, последователно или разделено приложение по инхалационен път на селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство, при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.

Освен това изобретението осигурява устройство за едновременно, последователно или разделено приложение на селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство за лечение на обструктивно заболяване на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.

Селективният аденозин А_2а рецепторен агонист има по-голям афинитет към аденозин Ага рецептора отколкото всички други известни аденозинови рецептори. С предпочитание афинитетът на такъв селективен аденозин А_2а рецепторен агонист е най-малко 100 пъти по-голям към аденозин А_2а рецептора в сравнение с афинитета му към други аденозинови рецептори.

Подходящия аденозин А_2а рецепторни агонисти за използване съгласно изобретението включват съединения, които са общо и конкретно описани във WO-A-OO/23457, WO-A-00/77018, WO-A-Ol/27131, WO-A01/27130, WO-A-01/60835, WO-A- 02/00676 и WO-A-01/94368.

Във WO-A-OO/23457 е описано съединението с формула (I):

(СН₂)ГТ< ^R3 (I) в която:

R¹ означава алкил или циклопропилметил;

R² означава фенил-алкилен или нафтил-алкилен, тази алкиленова верига може да е евентуално по-нататък заместена с фенил или нафтил, всеки фенил или нафтил може евентуално да е заместен с един или повече заместители всеки от тях независимо подбран от алкил, алкокси, халоген или циано група;

η означава 1 или 2;

A e NR^a, NR^aC(O), NR^aC(O)NR^a, NR^aC(O)O, OC(O)NR^a, C(O)NR^a, NR^aSO2, SO2NR^a, O, S или S02;

R^a е H, алкил или бензил евентуално заместени в пръстена с един или повече заместители всеки от тях независимо подбран от алкил, алкокси, халоген и циано;

R³ е група с формула -(CH₂)_P-R^P-B;

р означава 0,1 или 2;

R^p означава връзка, алкилен, циклоалкилен, фенилен или нафтилен, всеки от циклоалкилена, фенилена или нафтилена може евентуално да е заместен с един или повече заместители всеки от тях независимо подбран от алкил, алкокси, халоген и алкоксиалкилен;

В означава (I) Н, -NRhRh, R^bR^bN-anKiuieH,-OR^b, -COOR^b, -OCOR^b, -SO₂R^b, -CN, (II) -SCbNRhR¹’, -NR^bCOR^b, -NR^bSO₂R^b или -CONR^bR^b, в които всеки от R^b е еднакъв или различен и е подбран от Н, алкил, фенил и бензил, при условие че (a) когато В означава -OCOR^b, -SO2R^b, -NR^bCOR^b или -NR^bSO2R^b, тогава крайния R^b не е Н и (b) R^b е връзка, р означава 0 и В е Н само когато А е NR^a, NR^aC(O)NR^a, OC(O)NR^a, C(O)NR^a, SO₂NR^a, O или S;

(II) евентуално заместен, напълно- или частично - наситен или ненаситен, моно- или бициклична, хетероциклична група, която е свързана към R^p чрез пръстенен въглероден атом или (III) N-свързан азетидинил, пиролидинил, пиперидинил, пиперазинил или морфолинил, всеки от тях евентуално заместен с един или повече алкилови заместители, при условие, че -(CH₂)_P-R^P- не е -СН₂- и когато А означава NR^a, C(O)NR^a, OC(O)NR^a или SO₂NR^a, R^a и R³ взети заедно с азотния атом към който са свързани могат да образуват азетидин, пиролидин, пиперидин или пиперазинов пръстен, евентуално заместен с един или повече алкилови заместители;

и тяхни фармацевтично приемливи соли и солвати.

Във втори аспект WO-A-00/23457 описва съединение с формула (I), както е показана по-горе, в която:

R¹ означава См алкил или циклопропилметил;

R означава фенил-(См)-алкилен или нафтил-(См)-алкилен, тази См алкиленова верига може да е евентуално по-нататък заместена с фенил или нафтил, всеки фенил или нафтил може евентуално да е заместен с един или повече заместители всеки от тях независимо подбран от См алкил, См алкокси, халоген или циано група;

η означава 1 или 2;

А е NR^a, NR^aC(O), NR^aC(O)NR^a, NR^aC(O)O, OC(O)NR^a, C(O)NR^a, NR^aSO2, SO2NR^a, O, S или S02;

R^a е H, См алкил или бензил евентуално заместени в пръстена с един или повече заместители всеки от тях независимо подбран от См алкил, См алкокси, халоген и циано;

R³ е група с формула -(CH₂)_P-R^P-B;

р означава 0,1 или 2;

R^p означава връзка, См алкилен, С3.7 циклоалкилен, фенилен или нафтилен, всеки от С3.7 циклоалкилена, фенилена или нафтилена може евентуално да е заместен с един или повече заместители всеки от тях независимо подбран от См алкил, См алкокси, халоген и См алкокси-См алкилен;

В означава (I) Н, -NR^bR^b, RW-CbeanKHneHrOR¹⁵, -COOR^b, -OCOR^b, -SO₂R^b, (II) -CN, -SCbNRhR”, -NR^bCOR^b, -NR^bSO₂R^b или -CONR^bR^b, в които всеки от R^b е еднакъв или различен и е подбран от Н, См алкил, фенил и бензил, при условие че (a) когато В означава -OCOR^b, -SO2R^b, -NR^bCOR^b или -NR^bSO2R^b, тогава крайният R^b не е Н и (b) R^b е връзка, р означава 0 и В е Н само когато А е NR^a, NR^aC(O)NR^a, OC(O)NR^a, C(O)NR^a, SO₂NR^a, O или S;

(I) евентуално заместена, напълно или частично наситена или ненаситена, моно- или бициклична, хетероциклична група, която е свързана към R^p чрез пръстенен въглероден атом или (II) N-свързан азетидинил, пиролидинил, пиперидинил, пиперазинил или морфолинил, всеки от тях евентуално заместен с един или повече алкилови заместители, при условие, че -(CH2)_P-R^P- не е -СНг- и когато А означава NR^a, C(O)NR^a, OC(O)NR^a или SCFNR'¹, R^a и R³ взети заедно с азотния атом към който са свързани могат да образуват азетидин, пиролидин, пиперидин или пиперазинов пръстен, евентуално всеки заместен с един или повече Сьб алкилови заместители;

и тяхни фармацевтично приемливи соли и солвати.

Съгласно трети аспект WO-A-OO/23457 описва съединение с формула (I), както е показана по-горе, в която:

R¹ означава алкил или циклопропилметил;

R означава фенил-алкилен или нафтил-алкилен, където алкиленовата верига може да е заместена с метил, етил, фенил или нафтил;

η означава 1 или 2;

А е NR^a, NR^aC(O), NR^aC(O)NR^a, NR^aC(O)O, OC(O)NR^a, C(O)NR^a, NR^aSO2, SO2NR^a, O, S или SO₂, в които R^a е водород или алкил;

R³ е група с формула -(CH2)_P-R^P-B;

р означава 0,1 или 2;

R^p означава връзка или е алкиден, евентуално алкил-заместен циклоалкилен, фенилен или нафтилен и

В означава

(I) H, -NR”R^b, -0R^b, -COOR^b, -OCOR^b, -SO2R^b, -CN, -SO2NR^bR^b, NR^bCOR^b или -CONR^bR^b, в които всеки от R^b е еднакъв или различен и е подбран от Н или алкил, при условие че (а) когато В означава -SO2R^b или NR^bCOR^b, тогава крайния R^b е различен от Н и (b) R^b е връзка, р означава 0 и В е Н само когато А е NR^a, NR^aC(O)NR^a, C(O)NR^a, SO2NR^a, O или S; или (II) В означава евентуално заместена, напълно или частично наситена или ненаситена моно- или бицикло хетероциклична група, всяка от които е свързана чрез пръстенен въглероден атом;

и тяхни фармацевтично приемливи соли и солвати.

WO-A-00/77018 описва съединение с формула:

НО.

ОН или негови фармацевтично приемливи соли или солвати, в която:

R¹ означава водород или Ci_6 алкил евентуално заместен с 1 или 2 заместители, всеки от които независимо е подбран от фенил и нафтил, този фенил или нафтил може да е евентуално заместен с Ci^ алкил, Сгг, алкокси, халоген или циано група;

R² означава Н или Сцб алкил;

А е С1_6 алкилен;

R³ означава (I) водород, Ci.6 алкил, -COOR⁴, -CN, -CONR⁴R⁴, С3.§ циклоалкил, фенил или нафтил, тези C₃.g циклоалкил, фенил или нафтил могат евентуално да са заместени с Ci_6 алкил, фенил, Ci_6 алкокси-Сьв алкил, R⁴R⁴NCi-6 алкил, халогенС^алкил, флуороС]_₆ алкокси, С₂_5 алканоил, халоген, -OR⁴, циано, -COOR⁴, С3-8 циклоалкил, -S(O)mR⁵, -NR⁴R⁴,-SO2NR⁴R⁴, -CONR⁴R⁴,-NR⁴COR⁵ или -NR⁴SO2R⁵, или (II) когато А е C2-6 алкилен, -NR⁴R⁴, -OR⁴, -OCOR⁵, -SO2R⁵, SO2NR⁴R⁴ или -NR⁴COR⁵, или (III) С-свързан, 4- до 11-членен пръстен, моно или бицикличен хетероцикъл, притежаващ или от 1 до 4 пръстенни азотни атоми или 1 до 2 азота и 1 кислород или 1 сярен пръстенни атоми, като евентуално може да е С-заместен с оксо, С^б алкоксиС].б алкил, R⁶R⁶NCi_6 алкил, халогенС1.б алкил, флуоро-Сьб алкокси, флуоро-С2_5 алканоил, халоген, циано, OR⁶, R⁷, -COR⁶, Q NR⁶R⁶, -COOR⁶, -S(O)mR⁷, -SO2NR⁶R⁶, -CONR⁶R⁶, -NR⁶SO2R⁷ или -NR⁶COR⁷ и евентуално N-заместен c Cj.6 алкоксиС1.б алкил, R⁶R⁶NC₂-6 алкил,

6 7 7 халогенСьб алкил, флуоро-С₂-5 алканоил, R , -COR , -COOR , -SO₂R , SO₂NR⁶R⁶ или -CONR⁶R⁶, или (IV) когато А означава С₂-б алкилен, N-свъран азетидинил, пиролидинил, пиперидинил, пиперазинил, хомопиперазинил или морфолинил, всеки евентуално С-заместен с С].₆ алкил, фенил, Ci_₆ алкоксиСьб алкил, R⁴R⁴NCi_6 алкил, халогенСьб алкил, флуоро-С|_6 алкокси, С2-5 алканоил, халоген, -OR⁴, циано, -COOR⁴, С3.8 циклоалкил, -S(O)mR⁵, NR⁴R⁴, -SO2NR⁴R⁴, -CONR⁴R⁴, -NR⁴COR⁵ или - NR⁴SO2R⁵, и този пиперазиил и хомопиперазинил може да е евентуално Nзаместен с С^ алкил, фенил, Ci_6 алкоксиС₂.б алкил, R⁴R⁴NC2.6 алкил, флуороCi-6 алкил, С2_5 алканоил, -COOR⁵, С3.8 циклоалкил, -SO2R⁵, -SO₂NR⁴R⁴ илиCONR⁴R⁴,

R⁴ означава Н, Cj^ алкил, C3.8 циклоалкил или фенил;

R⁵ означава Сьб алкил, С3.8 циклоалкил или фенил;

R⁶ означава Н, Ci.₆ алкил, С3.8 циклоалкил, фенил, нафтил или het;

R⁷ означава Ci-б алкил, С3.8 циклоалкил, фенил, нафтил или het;

m е 0, 1 или 2 и

- -.....4« “het” използван при определенията за R⁶ и R⁷ означава С-свързан пиролил, имидазолил, триазолил, тиенил, фурил, тиазолил, оксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиримидинил, пиридазинил, пиразинил, индолил, изоиндолил, хинолинил, иЗохинолинил, бензимидазолил, хиназолинил, фталазинил, бензоксазолил или хиноксалинил, всеки от тях може евентуално да бъде заместен с См алкил, С1-6 алкокси, циано или халоген.

WO-A-00/24131 описва съединение с формула:

(I) или негова фармацевтично приемлива сол или солват.

в която:

R¹ означава водород или Сь₆ алкил евентуално заместен с 1 или 2 заместители, всеки от които независимо е подбран от фенил и нафтил, този фенил или нафтил може да е евентуално заместен с Сьб алкил, С]_г, алкокси, халоген или циано група;

А е връзка или Сьз алкилен;

R² означава (I) Н, Ci_6 алкил, С3.7 циклоалкил, фенил или нафтил, тези С3-7 циклоалкил, фенил или нафтил могат евентуално да са заместени с См алкил, фенил, См алкокси-См алкил, R R N-Сьбалкил, флуоро-Смалкил, флуоро-С1_балкокси, С2-5алканоил, халоген, -OR, циано, -COOR , С3-7 циклоалкил, -S(O)mR⁴, -NR³R³, -SO2NR³R³, -CONR³R³, -NR³COR⁴ или q л ο

NR SO₂R , при условие, че R не е водород когато А е връзка или (II) когато А е С₂.з алкилен, -NR⁸R⁹, -OR³, -COOR³, -OCOR⁴, SO2R⁴, -CN, -SO2NR³R³, -NR³COR⁴ или -CONR³R³, или (III) С-свързан, 4 до 11 членен, моно или бицикличен хетероцикъл, притежаващ или от 1 до 4 пръстенни азотни атоми или 1 или 2 азота и 1 кислород или 1 серен пръстенен атоми, евентуално С-заместен с •Λ -J оксо, Сьб алкокси-С 1_б алкил, R R NCj.₆ алкил, флуоро Сьв алкил, флуоро-Сьв алкокси, флуоро-С₂-5 алканоил, халоген, циано, OR⁵, R⁶, -COR⁵, NR⁵R⁵, COOR⁵, -S(O)mR⁶, -SO2NR⁵R⁵, -CONR⁵R⁵, -NR⁵SO₂R⁶ или -NR⁵COR⁶ и

3 евентуално N-заместени c C^ алкоксиС1_б алкил, R R NC₂_6 алкил, флуороСьб алкил, флуоро-С₂_5 алканоил, R⁶, -COR⁵, -S(O)mR⁶, -SO2NR⁵R⁵ или CONR⁵R⁵,

R означава Н, Ci_e алкил, C3.7 циклоалкил или фенил;

R⁴ означава Сьб алкил, С3-7 циклоалкил или фенил;

R⁵ означава Н, Ci-б алкил, С3.7 циклоалкил, фенил, нафтил или het;

R⁶ означава С^ алкил, С3.7 циклоалкил, фенил, нафтил или het;

m е 0,1 или 2 и “het” използван при определенията на R⁵ и R⁶ означава С-свързан пиролил, имидазолил, триазолил, тиенил, фурил, тиазолил, оксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиримидинил, пиридазинил, пиразинил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, хиназолинил, фталазинил, бензоксазолил или хиноксалинил, всеки от тях може евентуално да бъде заместен с Cj.₆ алкил, Срб алкокси, циано или халоген;

R⁷ означава метил, етил или циклопропилметил и или R⁸ и R⁹ взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидинил, пиролидинил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, хомопиперидинил, хомопиперазинил или тетрахидроизохинолинил, всеки от тях може да е евентуално заместен при пръстенен въглероден атом с Сьб алкил, С3.8 циклоалкил, фенил, Сьб алкоксиСьб алкил, R R N-Ci-балкил, флуоро-Сьбалкил, -CONR R , -COOR или С₂.5алканоил и евентуално да са заместени при пръстенен въглероден атом, който не е съседен до пръстенен азотен атом, с флуоро-С ^алкокси, халоген, OR³, циано, -S(O)mR⁴, -NR³R³, -SO2NR³R³, -NR³COR⁴ или NR³SO2R⁴, и тези пиперазин-1-ил и хомопиперазин-1-ил може евентуално да бъдат заместени при пръстенен азотен атом несвързан към A с Cj.6 алкил, фенил, С1.6 алкоксиС2_б алкил, R³R³N-C2.6 алкил, флуоро-С].б алкил, С2_5 алканоил, -COOR⁴, Сз^циклоалкил, -SO2R⁴, -SO₂NR³R³ или -CONR³R³, или R⁸ е Н, Сьб алкил, Сз_8 циклоалкил, фенил или бензил и R⁹ е Н, Ci-б алкил, С3.8 циклоалкил, фенил, бензил, флуоро-Сь6 алкил, -CONR R , COOR⁴, С2_5 алканоил или -SO₂NR³R³.

WO-A-00/27130 описва съединение с формула:

или негова фармацевтично приемлива сол или солват, в която:

R¹ означава водород или 0μ₆ алкил евентуално заместен с 1 или 2 заместители, всеки от които независимо е подбран от фенил и нафтил, този фенил или нафтил може да е евентуално заместен с Сьб алкил, Ci_e алкокси, халоген или циано група;

А е връзка или Сьз алкилен;

R² означава (I) Н, Сьб алкил, С3.7 циклоалкил, фенил или нафтил, тези С3-7 циклоалкил, фенил или нафтил могат евентуално да са заместени с Сьб алкил, фенил, Cj.₆ алкокси-Сь₆алкил, R R N-Сьбалкил, флуоро-С^балкил, флуоро-С1.балкокси, С₂.5алканоил, халоген, -OR³, циано, -COOR³, С3.7 циклоалкил, -S(O)_mR⁴, -NR³R³, -SO2NR³R³, -CONR³R³, -NR³COR⁴ или NR³SO2R⁴, при условие, че R² не е водород когато А е връзка, или (II) когато А е С₂.₃ алкилен, -NR⁷R⁸, -OR³, -COOR³, -OCOR⁴, SO2R⁴, -CN, -SO2NR³R³, -NR³COR⁴ или -CONR³R³, или (III) С-свързан, 4 до 11 членен, моно или бицикличен хетероцикъл, притежаващ или от 1 до 4 пръстенови азотни атоми или 1 или 2 азота и 1 кислород или 1 серен пръстенов атоми, евентуално С-заместен с оксо, Сьб алкокси-Сьб алкил, R R NCi.₆ алкил, флуоро-Срб алкил, флуоро-С^ алкокси, флуоро-С₂.5алканоил, халоген, циано, OR⁵, R⁶, -COR⁵, NR⁵R⁵, COOR⁵, -S(O)mR⁶, -SO2NR⁵R⁵, -CONR⁵R⁵, -NR⁵SO2R⁶ или -NR⁵COR⁶ и евентуално N-заместени c Сьб алкокси-Сьб алкил, R R NC2_6 алкил, флуороCi-6 алкил, флуоро-С₂.5 алканоил, R⁶, -COR⁵, -S(O)mR⁶, -SO2NR⁵R⁵ или CONR⁵R⁵, ο

R означава H, Сьб алкил, С₃.7 циклоалкил или фенил;

R⁴ означава Ci_6 алкил, С₃.7 циклоалкил или фенил;

R⁵ означава Н, Cj.e алкил, С3_7 циклоалкил, фенил, нафтил или het; R⁶ означава Ci-e алкил, С3.7 циклоалкил, фенил, нафтил или het;

или R⁷ и R⁸ взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидинил, пиролидинил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, хомопиперидинил, хомопиперазинил или тетрахидроизохинолинил, всеки от тях може да е евентуално заместен при пръстенен въглероден атом с Сьб алкил, С₃.8 циклоалкил, фенил, СьбалкоксиСьб алкил, R³R³N-Ci_6anKHn, флуоро-Сьвалкил, -CONR³R³, -COOR³ или С₂.₅ алканоил и евентуално да са заместени при пръстенен въглероден атом, който не е съседен до пръстенен азотен атом, с флуоро-С^балкокси, халоген, OR³, циано, -S(O)mR⁴, -NR³R³, -SO2NR³R³, -NR³COR⁴ или - NR³SO₂R⁴, и тези пиперазин-1-ил и хомопиперазин-1-ил може евентуално да бъдат заместени при пръстенен азотен атом несвързан към A с Ci_e алкил, фенил, Ci.₆ алкокси-С₂-б алкил, R³R³N-C2_6 алкил, флуоро-С1_б алкил, С2.5 алканоил, COOR⁴, Сз^циклоалкил, -SO2R⁴, -SO₂NR³R³ или -CONR³R³,

8 или R е Н, С1_6 алкил, С₃.₈ циклоалкил, фенил или бензил и R е Н,

3

С1.6 алкил, Сз_8 циклоалкил, фенил, бензил, флуоро-С]_₆ алкил, -CONR R , COOR⁴, С₂_5 алканоил или -SO₂NR³R³;

m е 0, 1 или 2 и “het” използван при определенията на R⁵ и R⁶ означава С-свързан пиролил, имидазолил, триазолил, тиенил, фурил, тиазолил, оксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиримидинил, пиридазинил, пиразинил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, хиназолинил, фталазинил, бензоксазолил или хиноксалинил, всеки от тях може евентуално да бъде заместен с Ci_6 алкил, Ci.₆ алкокси, циано или халоген.

WO-A-01/60835 описва съединение с формула:

(I) или негова фармацевтично приемлива сол или солват, в която:

R¹ означава водород, Ci_e алкил или С3.7 циклоалкил, всеки от тях евентуално заместен с 1 или 2 заместители, всеки от които независимо е подбран от хидроксил, флуоренил, фенил и нафтил и този фенил или нафтил може да е евентуално заместен е Ci-б алкил, Ci^ алкокси, халоген или циано група;

А е връзка или Сьб алкилен;

R² означава (I) водород, C« алкил, C3-7 циклоалкил, фенил или нафтил, тези С3.7 циклоалкил, фенил или нафтил могат евентуално да са заместени с См алкил, фенил, Cj.6 алкокси-Смалкия, амино-См алкил, флуоро-Смалкил, флуоро-Смалкокси, С2-5алканоил, халоген, -OR³, циано, COOR³, С3.7 циклоалкил, -S(O)mR⁴, -NR³R³, -SO2NR³R³, -CONR³R³, -NR³COR⁴ или - NR³SO2R⁴, при условие, че R² не е водород когато А е връзка, или (II) когато А е С₂.₆ алкилен, -NR³R³, -OR³, -COOR³, -OCOR⁴, SO2R⁴, -CN, -SO2NR³R³, - NR³SO₂R⁴, -NR³COR⁴ или -CONR³R³, или (III) С-свързан, 4 до 11 членен, моно или бицикличен хетероцикъл, притежаващ или от 1 до 4 пръстенови азотни атоми или 1 или 2 азота и 1 кислород или 1 серен пръстенен атоми, евентуално С-заместен с оксо, См алкокси-См алкил, амино-См алкил, флуоро-См алкил, флуороСм алкокси, флуоро-Смалканоил, халоген, циано, OR⁵, R⁶, -COR⁵, NR⁵R⁵, COOR⁵, -S(O)raR⁶, -SO2NR⁵R⁵, -CONR⁵R⁵, -NR⁵SO2R⁶ или -NR⁵COR⁶ и евентуално N-заместени c См алкоксиСм алкил, амино-См алкил, флуороСм алкил, флуоро-С2.5 алканоил, R⁶, -COR⁵, -COOR⁶, -S(O)mR⁶, -SO2NR⁵R⁵ или -CONR⁵R⁵, или (IV) когато А е С₂.р алкилен, N-свързан азетидинил, пиролидинил, морфолинил, тетрахидроизохинолинил, пиперидинил или пиперазинил, всеки от тях може евентуално да е С-заместен с См алкил, фенил, См алкоксиСм алкил, амино-См алкил, флуоро-См алкил, флуоро-См алкокси, С₂.5 алканоил, халоген, -OR³, циано, -COOR³, С3.7 циклоалкил, -S(O)mR⁴, NR³R³, -SO2NR³R³, -CONR³R³, -NR³COR⁴ или -NR³SO2R⁴ и този пиперазинил може евентуално да е N- заместен с См алкил, фенил, См алкокси-См алкил, амино-См алкил, флуоро-См алкил, С2.5 алканоил, COOR⁴, С3.7 циклоалкил, - SO2R⁴, -SO2NR³R³ или -CONR³R³, всеки R³ е независимо подбран от Н, См алкил, фенил или пиридинил;

R⁴ означава См алкил или фенил;

R⁵ означава H, Сьб алкил, С3.7 циклоалкил, фенил, нафтил или het;

R⁶ означава Ci-б алкил, С3.7 циклоалкил, фенил, нафтил или het;

m е 0, 1 или 2;

R⁷ означава водород, Сьб алкил, С3.7 циклоалкил, фенил, нафтил, азетидин-3-ил, пиролидин-3-ил, пиперидин-3-ил, пиперидин-4-ил или het, като тези азетидин-3-ил, пиролидин-3-ил, пиперидин-3-ил и пиперидин-4-ил могат да са евентуално заместени с Сьб алкил,

R⁸ означава водород или Сьб алкил и “het” използван при определенията на R , R и R означава С-свързан пиролил, имидазолил, триазолил, тиенил, фурил, тиазолил, оксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиримидинил, пиридазинил, пиразинил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, хинаозолинил, фталазинил, бензоксазолил или хиноксалинил, всеки от тях може евентуално да бъде заместен с Ci_e алкил, С1_б алкокси, циано или халоген.

WO-A-02/00676 описва съединение с формула:

или негова фармацевтично приемлива сол или солват, в която:

R¹ означава (I) водород, (II) Сьб алкил евентуално заместен с 1 или 2 заместители, всеки от които независимо е подбран от фенил, нафтил и флуоренил, този фенил, нафтил и флуоренил може да е евентуално заместен с С1-6 алкил, Сьб алкокси, халоген или циано група или (III) флуоренил;

R² означава Н или Ci-β алкил;

или R³ и R⁴ взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидинил, пиролидинил, пиперидинил, пиперазинил, хомопиперидинил или хомопиперазинил, всеки от тях може да еевентуално заместен при пръстенен азотен или въглероден атом с Сьб алкил или С_?_₈ циклоалкил и евентуално при пръстенен въглероден атом, който не е съседен на пръстенен азотен атом, с -NR R или - OR , или R³ означава Н, Сьб алкил, С₃.₈ циклоалкил или бензил и този Сьб алкил може евентуално да е заместен с С₃_₈ циклоалкил и

R⁴ означава (a) С]-б алкил, С₃.₈ циклоалкил или R¹⁵, този Ci^ алкил може да е евентуално заместен с R¹⁵, или (b) ”С2-5алкилен-И⁸ или (c) Ci-б алкилен- R¹³,

R⁵ означава СН₂ОН или -CONR¹⁴R¹⁴,

R и R са или независимо всеки от тях Н или алкил, или взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидинил, пиролидинил или пиперидинил, и тези азетидинил, пиролидинил или пиперидинил могат евентуално да са заместени Сьвалкил;

R⁸ е (I) азетидин-1-ил, пиролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, морфолин-1ил, пиперазин-1-ил, хомопиперидин-1-ил, хомопиперазин-1-ил или тетрахидроизохинолин-1-ил, всеки от тях може евентуално да бъде заместен при пръстенен въглероден атом с Сьб алкил, С3.8 циклоалкил, фенил, Cj.6 алкокси-С].б алкил, R⁹R⁹N-Ci_6 алкил, флуоро-Сьб алкил, CONR⁹R⁹, -COOR⁹ или С2-5алканоил и евентуално заместени при пръстенен въглероден атом, който не е съседен до пръстенен азотен атом с флуоро-Сцб алкокси, халоген, -OR⁹, циано, -S(O)mR¹⁰, -NR⁹R⁹, -SO2NR⁹R⁹, - NR⁹COR¹⁰ или -NR⁹SO2R¹⁰ и този пиперазин-1-ил и хомопиперазин-1-ил може евентуално да са заместени при пръстенен азотен атом, който не е свързан към С2-б алкиленова група, с С1_б алкил, фенил, алкокси-Сг-б алкил, R⁹R⁹N-C2-6 алкил, флуоро-Сцб алкил, С₂-5 алканоил, -COOR¹⁰, С3.8 циклоалкил, - SO2R¹⁰, -SO2NR⁹R⁹ или CONR⁹R⁹, или (II)-NR^HR¹²;

R⁹ означава Н, См алкил, С₃_₈ циклоалкил или фенил;

R¹⁰ означава См алкил, С₃.₈ циклоалкил или фенил;

R¹¹ означава См алкил, С₃.₈ циклоалкил или бензил;

0

R означава См алкил, С₃.₈ циклоалкил, фенил, бензил, флуоро-С]_б алкил, -CONR⁹R⁹, -COOR¹⁰, -COR¹⁰, - SO2R¹⁰ или -SO2NR⁹R⁹, този См алкил може евентуално да е заместен с фенил;

R означава фенил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил или пиридин-4-ил, всеки от тях може евентуално да е заместен с Смалкил, Смалкокси, халоген или циано група;

R¹⁴ означава Н или См алкил евентуално заместен с циклопропил;

R¹⁵ е азетидин-3-ил, пиролидин-3-ил, пиперидин-3-ил, хомопиперидин-3-ил или хомопиперидин-4-ил всеки от тях евентуално заместен с R¹³, См алкил, С₃.₈ циклоалкил или бензил;

m е 0, 1 или 2;

X означава -СН₂- или -СН₂СН₂- и

Y е CO, CS, SO₂ или C=N(CN).

WO-A-01/94368 описва съединение с формула:

или негова фармацевтично приемлива сол или солват, в която:

R¹ означава водород, С].б алкил или флуоренил, където С1_б алкила може да е евентуално заместен с 1 или 2 заместители, всеки от които независимо е подбран от фенил и нафтил, този фенил или нафтил може да е евентуално заместен с Ci_6 алкил, С i_r, алкокси, халоген или циано група;

(A) R означава водород или Сьб алкил, R означава водород или Ci_6 алкил и X е или (I) неразклонен С₂.₃ алкилен евентуално заместен с Сьб алкил или Сз_8 циклоалкил или (II) група с формулата:

-(CH₂)_n - W - (СН₂)_Рв която W е С5-7 циклоалкилен евентуално заместен с Cj.6 алкил, η е 0 или 1 и р е 0 или 1 или (B) R означава водород или Сьб алкил и R и X взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидин-3-ил, пиролидин-3-ил, пиперидин-3-ил, пиперидин-4-ил, хомопиперидин-3-ил или хомопиперидин-4-ил, всеки от тях може евентуално да е заместен с Cj.₆ алкил или (C) R означава водород или С]_б алкил и R и X взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидин-3-ил, пиролидин-3-ил, пиперидин-3-ил, пиперидин-4-ил, хомопиперидин-3-ил или хомопиперидин-4-ил, всеки от тях може евентуално да е заместен с Сьб алкил;

или R³ и R⁴ взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидинил, пиролидинил, пиперидинил, пиперазинил, хомопиперидинил или хомопиперазинил, всеки от тях може евентуално да е заместен при пръстенен азотен или въглероден атом с алкил или C₃.g циклоалкил и евентуално да е заместен при пръстенен въглероден атом, който не е съседен до пръстенен азотен атом, с -NR R , или R³ е Ci-6 алкил, С₃.₈ циклоалкил или бензил и R⁴ означава (а) азетидин-3-ил, пиролидин-3-ил, пиперидин-3-ил, пиперидин-4-ил, хомопиперидин-3-ил или хомопиперидин-4-ил, всеки от тях може евентуално да е заместен с См алкил, С₃.8 циклоалкил, фенил, бензил или het или

Q (b) -(С2-балкилен)-И ;

(c) -(Смалкилен)-К¹³ или (d) - См алкил или С₃_8 циклоалкил,

R⁵ е СН₂ОН или -CONR¹⁴R¹⁴,

R⁶ и R⁷ са или всеки от тях независимо Н или См алкил или взети заедно с азотния атом към който са свързани представляват азетидинил, пиролидинил или пиперидинил и тези азетидинил, пиролидинил или пиперидинил могат евентуално да бъдат заместени с См алкил;

Q

R е (I) азетидиц-1-ил, пиролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, морфолин-4ил, пиперазин-1-ил, хомопиперидин-1-ил, хомопиперазин-1-ил или тетрахидроизохинолин-1-ил, всеки от тях може евентуално да е заместен при пръстенен въглероден атом с См алкил, С₃_8 циклоалкил, фенил, СмалкоксиСм алкил, R⁹R⁹N-Ci_6 алкил, флуоро-См алкил, -CONR⁹R⁹, -COOR⁹ или С₂_5 алканоил, и евентуално заместени при пръстенен въглероден атом, който не е съседен до пръстенен азотен атом с флуоро-См алкокси, халоген, -OR⁹, циано, -S(O)mR¹⁰, -NR⁹R⁹, -SO2NR⁹R⁹, - NR⁹COR¹⁰ или -NR⁹SO₂R¹⁰ и този пиперазин-1-ил и хомопиперазин-1-ил може евентуално да е заместен при пръстенен азотен атом, който не е свързан към С2.6 алкиленова група, с См алкил, фенил, См алкокси-С2-б алкил, R⁹R⁹N-C2.₆ алкил, флуоро-С]._б алкил, С₂_5 алканоил, -COOR¹⁰, С3.8 циклоалкил, - SO2R¹⁰, -SO2NR⁹R⁹ или -CONR⁹R⁹, или (II) - NRⁿR¹²;

R⁹ означава Н, См алкил, С₃.8 циклоалкил или фенил;

R¹⁰ означава См алкил, С₃.8 циклоалкил или фенил;

R¹¹ означава Н, См алкил, С₃_8 циклоалкил или бензил;

R¹² означава Н, См алкил, C3.s циклоалкил, фенил, бензил, флуороСм алкил, -CONR⁹R⁹, -COOR¹⁰, С2_5 алканоил или -SO₂NR⁹R⁹;

R означава (а) фенил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил или пиридин-4ил, всеки от тях може евентуално да е заместен с Сьбалкил, С].₍,алкокси, -(Ci. залкилен)-(Сьбалкокси), халоген, циано, -(С]_₃алкилен)-СМ, СООН, -(Ci. ₃алкилен)-СООН, -СО₂(С1^алкил), (С1.₃алкилен)-СО₂(С].балкил), -(Сьз алкилен)- NR¹⁴R¹⁴, CONR¹⁴R¹⁴ или -(С1.3алкилен)-СОША¹⁴, или (b) азетидин-2-ил, азетидин-3-ил, пиролидин-2-ил, пиролидин-3-ил, пиперидин2-ил, пиперидин-3-ил, пиперидин-4-ил, хомопиперидин-2-ил, хомопиперидин-3-ил или хомопиперидин-4-ил, всеки от тях може евентуално да бъде заместен с алкил, С3_8 циклоалкил, фенил, бензил или het;

R¹⁴ означава Н или Ci.6 алкил евентуално заместен с циклопропил;

m е 0,1 или 2; Ye CO, CS, SO₂ или C=N(CN) и “het” използван при определенията на R⁴ и R¹³ означава С-свързан, 4до 6-членен пръстен, хетероцикъл притежаващ или от 1 до 4 пръстенни азотни хетероатоми или 1 или 2 азотни пръстенни хетероатоми и 1 кислороден или 1 серен пръстенен хетероатом, евентуално заместени с Сьв алкил, С₃.8 циклоалкил, Ci-β алкокси, С₃.₈ циклоалкокси, хидрокси, оксо или халоген.

Техническа същност на изобретението

Предпочитани селективни аденозин А_2а -рецепторни агонисти за използване в изобретението включват:

N-({9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4^HXHflpoKCH-5-(MeTOKCHMeTHn)TeipaxHflpo-2фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9Н-пурин-2-ил}метил)-2-метил-1пропансулфонамид (пример 15 на WO-A-00/23457);

циc-(2R,ЗR,4S,5R)-2-(6-[(2,2-диφeнилeτил)aминo]-2-{[(4изопропилциклохексил)амино]метил}-9Н-пурин-9-ил)-5(метоксиметил)тетрахидро-3,4-фурандиол и TpaHC-(2R,3R,4S,5R)-2-(6-[(2,2дифенилетил)амино]-2-{ [(4-изопропилциклохексил)амино]метил} -9Н25 пурин-9-ил)-5-(метоксиметил)тетрахидро-3,4-фурандиол (пример 17 на WOА-00/23457);

N-( {9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-дихидрокси-5-(хидроксиметил)тетрахидро2-фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9Н-пурин-2-ил} метил)-2-метил-1 пропансулфонамид (пример 1 на WO-A-01/27130);

(28,ЗБ,4К,5К)-5-(6-[(2,2-дифенилетил)амино]-2{[(изопропилсулфонил)амино]метил}-9Н-пурин-9-ил)-М-етил-3,4дихидрокситетрахидро-2-фуранкарбоксамид (пример 3 на WO-A-01/27131);

9-[(2К,ЗН,48,5К)-3,4-Дихидрокси-5-(хидроксиметил)тетрахидро-2фуранил] -6- [(2,2-дифенил етил)ам hho]-N-[2-( 1 -пиперидинил)етил] -9Н-пурин2-карбоксамид (пример 1 на WO-A-00/77018);

6-[(2,2-диφeнилeτил)aминo]-9-{(2R,ЗR,4S,5S)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидроксите1рахидро-2-фуранил} -N- [2-( 1 пиперидинил)етил]-9Н-пурин-2-карбоксамид (пример 1 на WO-A-01/6083 5);

N-( {9- [(2R,3 R,4 S, 5R)-3,4-дихидрокси-5 -(хидро ксиметил)тетрахидро2-фуранил ] -6 - [(2,2 - дифенил етил)амино] -9Н-пурин-2 -ил} м ети л )-N ’-[2(диизопропиламино)етил]уреа (пример 1 на WO-A-02/00676); и

6-[(2,2-диφeнилeτил)aминo]-9-{(2R,ЗR,4S,5S)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2-фуранил} -N- {2-[( {[ 1 -(2пиридинил)-4-пиперидинил]амино}карбонил)амино]етил}-9Н-пурин-2карбоксамид (примери 8 и 35 на WO-A-01/94368);

и тяхни фармацевтично приемливи соли и солвати.

Особено предпочитани селективни аденозин А_2а -рецепторни агонисти за използване в изобретението включват:

9-[(2К,ЗК,48,5К-)-3,4-Д^их^иДРОкси-5-(хидроксиметил)тстрахидро-2фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-М-[2-(1-пиперидинил)етил]-9Н-пурин2-карбоксамид и 6-[(2,2-Дифенилетил)амино]-9-{(2И,31<48,58)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2-фуранил} -Ν- {2-[({ [1 -(226

пиридинил)-4-пиперидинил]амино}карбонил)амино]етил}-9Н-пурин-2карбоксамид и тяхни фармацевтично приемливи соли и солвати.

Най-предпочитано е съединението 6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9{(2К,31<,48,58)-5-[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2фуранил }-N-{2-[({ [ 1 -(2-пиридинил)-4-пиперидинил]амино}карбонил)амино] етил }-9Н-пурин-2-карбоксамид и негови фармацевтично приемливи соли и солвати.

Подходящи антихолинергични средства за използване съгласно изобретението включват ипратропиева и окситропиева соли и тяхни солвати.

Тиотропиева сол (виж ЕР 418716 В1) има структурата с формула (1.1):

Н£

СН₃

n:

1:1 в която X' е физиологично приемлив анион.

Ипатропиева сол (виж ЕР 309464 В1) има структурата с формула (1:2)

в която X' е физиологично приемлив анион.

Окситропиева сол (виж ЕР 579615 В1) има структурата с формула (1-3)

в която Х‘ е физиологично приемлив анион.

Примери на подходящи солеви форми на ипратропий и окситропий са флуорид F*; хлорид СГ; бромид Вг'; йодид Г ; метаносулфонат CH₃S(=O)₂O·; етансулфонат CH3CH₂S(=O)₂O’; метилсулфат CH₃OS(=O)2O'; бензен сулфонат СбН₅8(=О)₂О’; и р-толуенсулфонат 4-CH3-C₆H4S(=O)₂O'.

Предпочитана е бромната сол.

Предпочитани конкретни комбинации на селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично съединение съгласно изобретението включват:

9-[(2И,ЗК,48,5К)-3,4-дихидрокси-5-(хидроксиметил)тетрахидро-2фуранил] -6- [(2,2-дифенилетил)амино] -N-[2-( 1 -пиперидинил)етил] -9Н-пурин2-карбоксамид или негови фармацевтично приемливи сол или солват и ипратропиева сол или нейн солват;

6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9-{(2К,ЗЯ,48,58)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2-фуранил}-М-{2-[({[1-(2пиридинил)-4 -пиперидинил]амино} карбонил)амино] етил} -9Н-пурин-2карбоксамид или негови фармацевтично приемлива соли или солват и ипратропиева сол или нейн солват;

9[(2К,31<,48,5К.)-3,4-дихидрокси-5-(хидроксиметил)тетрахидро-2фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-К-[2-(1-пиперидинил)етил]-9Н-пурин2-карбоксамид или негови фармацевтично приемлива соли или солват и окситропиева сол или нейн солват;

6- [(2,2-дифенилетил)амино]-9- {(2R,3 R,4 S,5 S)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2-фуранил}-М-{2-[({[1-(2пиридинил)-4-пиперидинил]амино}карбонил)амино]етил}-9Н-пурин-2карбоксамид или негови фармацевтично приемлива соли или солват и окситропиева сол или нейн солват.

Селективният аденозин А_2а рецепторен агонист или антихолинергичното средство, използвани съгласно изобретението, могат евентуално да се употребят под формата на фармацевтично приемлива сол или солват. Такава сол може да бъде киселинна присъединителна сол или базова сол.

Подходящи присъединителни с киселина соли се образуват от киселини, които образуват нетоксични соли и примери са хидрохлорид, хидробромид, хидройодид, сулфат, бисулфат, нитрат, фосфат, хидроген фосфат, ацетат, малеат, фумарат, лактат, тартарат, цитрат, глюконат, сукцинат, захарат, бензоат, метансулфонат, етансулфонат, бензенсулфонат, р-толуенсулфонат и памоатни соли.

Подходящи базови соли се образуват от бази, които образуват нетоксични соли и примери са натриева, калиева, алуминиева, калциева, магнезиева, цинкова и диетаноламинна соли.

За преглед на подходящи соли виж Berge et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19, 1977.

Фармацевтично приемливите солвати на селективните аденозин Л_2а рецепторни агонисти и антихолинергични средства, използвани съгласно изобретението или тяхните соли, включват тяхните хидрати.

Селективните аденозин А_2а рецепторни агонисти и антихолинергичните средства от изобретението могат да съществуват в една или повече полиморфни форми.

Селективните аденозин А_2а рецепторни агонисти и антихолинергичните средства от изобретението могат да съдържат един или повече асиметрични въглеродни атоми и поради това да съществуват в две или повече стереоизомерни форми. Когато такова съединение съдържа алкенилова или алкениленова група се появява също цис/транс (или Z/E) изомеризъм. Настоящето изобретение включва тези индивидуални стереоизомери на съединенията от изобретението и когато е подходящо, тяхни индивидуални тавтомерни форми заедно с тяхни смеси.

Разделянето на диастереомерите или на цис и транс изомерите може да се постигне по обичайни техники, например чрез фракционна кристализация, хроматография или ВЕТХ на стереоизомерна смес на съединение от изобретението или на негови подходяща сол или производно.

Отделен енантиомер на съединение от настоящето изобретение може също да се получи от съответното оптичночисто междинно съединение или чрез разделяне като например чрез ВЕТХ на съответния рацемат при използване на подходящ хирален носител или чрез фракционно кристализиране на диастереоизомерните соли, образувани при взаимодействието на съответния рацемат с подходяща оптичноактивна киселина или база, според целесъобразността.

Настоящето изобретение също включва всички подходящи изотопни варианти на съединение от изобретението или на негова фармацевтично приемлива сол. Изотопен вариант на съединение от изобретението или на негова фармацевтично приемлива сол се определя като такъв, при който наймалко един атом е заменен с атом притежаващ същия атомен номер, но различна атомна маса от атомната маса срещаща се обикновено в природата. Пример на изотопи, който могат да бъдат включени в съединенията от изобретението и тяхните фармацевтично приемливи соли, включват изотопи на водород, въглерод, азот, кислород, фосфор, сяра, флуор и хлор като Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵N, ¹⁷О, ¹⁸О, ³¹Р, ³²Р, ³⁵S, ¹⁸F и съответно ³⁶С1. Някои изотопни варианти на съединенията от изобретението и тяхни фармацевтични приемливи соли, например, тези при които радиоактивен изотоп като ³Н и ¹⁴С е включен, са полезни за проучване на лекарството и разпределението му в субстратни тъкани. Тритиирани, т.е. ³Н и въглерод-14, т.е. ¹⁴С изотопи са особено предпочитани поради леснината на получаването им и за проследяемостта им. Заместването с изотопи като деутерий, т.е. Н, може да даде известни лечебни предимства в резултат на по-голяма метаболитна стабилност, например, увеличен in vivo полуживот или изискване на помалка доза и поради това могат да са предпочитани при известни обстоятелства.

Видовете заболявания, които могат да бъдат лекувани при използването на комбинациите от настоящето изобретение включват, без да се ограничава до тях, астма, хронични и акутни бронхоспазми, хроничен бронхит, малки обструкции на дихателните пътища, емфизем, хронично обструктивно белодробно заболяване (COPD), COPD, което има хроничен бронхит, свързани с него белодробен емфизем или диспнея и COPD, което се характеризира с необратима, прогресивна обструкция на дихателните пътища.

Астма

Едно от най-важните дихателни заболявания, което може да се лекува с комбинациите от лекарствени средства от настоящето изобретения е астма, едно хронично, все по-широко разпространяващо се по света и характеризиращо се с интермитентни обратими обструкции на дихателните пътища, свръхчувствителност на дихателните пътища и възпаление заболяване. Причината за астмата все още не е установена, но най- честото патологично проявяване на астма е възпаление на дихателните пътища, което може да е съществено дори в дихателните пътища на пациенти с лека астма. Това възпалние предизвиква рефлексни прояви в дихателните пътища, което води до плазмена протеинова екстравазация, диспнея и свиване на бронхите. На базата на изследвания на бронхиална биопсия и промиване ясно бе показано, че астмата включва инфилриране на мастоцити, еозинофили и Т-лимфоцити в дихателните пътища на пациента. Бронхоалвеоларно промиване (BAL) при атопични астматици показва активиране на интерлевкин (IL)-3, IL-4, IL-5 и гранулоцит/макрофагно колониален стимлиращ фактор (GM-CSF), което подсказва присъствието на T-helper 2 (ТЬ-2)-подобна Т-клетъчна популация.

Комбинациите от лекарствени средства от настоящето изобретение са полезни при лечението на атопична и не-атопична астма. Терминът “атопична” се отнася до генетично предразположение по отношение на развиването на тип I (непосредствена, пряка) хиперчувствителна реакция спрямо обичайните антигени на околната среда. Най-простата клинична проява е алергичен ринит, докато бронхиалната астма, атопичен дерматит и хранителна алергия се появяват по-редко. В съответствие с това, изразът “атопична астма”, използван тук, е предвиден като синонимен с “алергична астма”, т.е. бронхиална астма, която е алергична проява на сензибилизирания човек. Терминът “не-атопична астма” използван тук, се има предвид да се отнася до всички други астми, това е особено съществено за “истинска” астма, която се провокира от различни фактори включващи енергични упражнения, дразнещи частички, психологичен стрес и т.н.

Хронично обструктивно белодробно заболяване (COPD)

Комбинациите от лекарствени средства от настоящето изобретение са полезни при лечението на COPD или COAD включително хроничен бронхит, белодробен емфизем или диспнея свързана с тях. COPD се характеризира със слабо обратима, прогресивна обструкция на дихателните пътища. Хроничният бронхит е свързан с хиперплазия и хипертрофия на секретиращите слуз жлези на субмукозата в голямите хрущални пътища. Хиперплазия на Goblet клетки, инфилтриране на мукозни и субмукозни възпалителни клетки, едем, фиброза, мукозни тампони и увеличени гладки мускули, всички те се намират в терминалните и дихателните бронхиоли. Известно е, че малките дихателни пътища са главно място за обструкции на дихателните пътища. Емфиземата се характеризира чрез деструкция на алвеоларната стена и загуба на еластичност на белите дробове. Множество рискови фактори са идентифицирани, които са свързани като причина за COPD. Връзката между тютюнопушенето и COPD е добре установена. Други рискови фактори включват излагането на въглищен прах и различни генетични фактори. Виж Sandford et al., “Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease”, Eur. Respir. J. 10, 1380 - 1391, 1997. Случайте на поява на COPD се увеличават и това представлява съществена икономическа тежаст за обществото в индустриализираните страни. COPD се проявява клинично с голямо разнообрази от прояви, от прост хроничен бронхит, който не предизвиква съществено неразположение у пациентите, до сериозно нетрудоспособно състояние с хронични дихателни недостатъци.

COPD се характеризира с възпаление на дихателните пътища, както в случая с астма, но възпалителните клетки, които са били намерени в бронхоалвеоларната промивна течност и храчките на пациенти, са по-скоро неутрофили и макрофаги отколкото еозинофили. Повишени нива на възпалителни медиатори са намерени също в пациенти с COPD, включително IL-8, LTB4 TNF-α, и повърхностния епителий и е намерено че субепителия на бронхите на такива пациенти са инфилтрирани с Тлимфоцити и макрофаги. Симптоматично облекчение при COPD пациенти може да се осигури чрез използването на β-агонист и антихолинергични бронходилататори, но напредвайте на болестта не се повлиява. COPD е лекувано при използването на теофилин, но без особен успех, дължащо се на тенденцията му да предизвиква нежелани ефекти. Стероидите също не се оказаха достатъчно обещаващи като задоволителни лечебни средства при COPD, тъй като те са относително неефктивни като противовъзпалителни

средства.

Следователно, използването на комбинации от терапевтични средства от настоящето изобретение за лечение на COPD и на сродните му включени обструктивни заболявания, представлява съществен принос в областта. Настоящето изобретение не е ограничено до някакво конкретно изпълнение на действие или до някаква хипотеза за начина по който са постигнати желаните терапевтични цели чрез използването на комбинациите от лечебни средства на настоящето изобретение.

Бронхит и бронхиектазия

В съответствие с конкретните и различни инхибиторни активности описани по-горе, които се притежават от комбинациите на лечебни средства от настоящето изобретение, те са използваеми при лечението на бронхит от какъвто и да е тип, етиология или патогенеза, включително например акутен бронхит, който има кратко, но тежко развитие и се причинява от излагане на студ, дишане на дразнещи вещества или остра инфекция; катерален бронхит, който е форма на акутен бронхит с изобилно слузногнойно отделяне; хроничен бронхит, който е дълго продължаваща форма на бронхит с повече или по-малко проявена тенденция за отново появяване след етапи на затишие, дължащо се на повтарящи се атаки от акутен бронхит или хронични общи заболявания, характеризиращи се с пристъпи на кашлица, чрез обилно или оскъдно отхрачване, и с вторични промени в белодробните тъкани; сух бронхит, който се характеризира с оскъдно секретиране на жилави храчки; инфекциозен астматичен бронхит със синдром белязан от развиването на симптоми на бронхоспазми последващи инфекции на дихателния път при хора с астма; продуктивен бронхит (бронхит с експекторация), който е бронхит свързан с продуктивна кашлица.

Използването на комбинациите от лечебни средства съгласно настоящето изобретение за лечение на атопична астма или неатопична астма, COPD или други хронични възпалителни заболявания на дихателните пътища може да се установи и демонстрира чрез използване на множество различни модели, известни в областта, за инхибиране на рефлексни прояви в дихателния път, включващи плазмена екстравазация и бронхоспазмолитичния модел описани по долу.

Бронходилататорна активност - сАМР участват не само в гладкомускулното релаксиране, но също така проявява общо инхибиращо влияние върху пролиферацията на гладките мускули на дихателните пътища, и двата ефекта може да са в резултат на активирането на А2а рецепторите от съставка на изобретението. Хипертрофията и хиперплазията на гладките мускули на дихателните пътища могат да се модулират от сАМР и тези състояния са общи морфологични характеристики на хроничната астма.

Примери за изпълнение на изобретението

Бронхоспазмолитична активност in vitro - Способността на комбинациите от лечебни средства на настоящето изобретение да предизвиква релаксиране на трахеалните гладки мускули на морско свинче се демонстрира в следния опитен метод. Морски свинчета (350 - 500 г) се убиват с натриев пентотал (100 мг/кг интраперитонеално). Трахеята се отделя и се изважда отрязък с дължина 2 - 3 см. Трахеята се нарязва в напречна плоскост на редуващи се хрущални плаки, така че да се получат пръстени от тъкан в дълбочина 3 - 5 мм. Най-отдалечените и най-близките пръстени се изхвърлят. Отделните пръстени се окачват вертикално на подложки от неръждаема стомана, един от които е фиксиран в основата на огранна баня докато другия се прикрепя към изометричен трансдуктор. Пръстените се мият в разтвор на Krebs (състав в мкМ: NaHCO₃ 25; NaCl 113; КС1 4.7; MgSO₄.7H₂O 1.2; KH₂PO₄1.2; СаС1₂ 2.5; глюкоза 11.7) при 37° С и се обгазяват с О₂/СО₂ (95:5 о/о). По този начин приготвените пръстени се свиват чрез стимулиране на полето. За осигуряване на спазмолитичната активност, изпитваните опитни комбинации на лечебните средства от настоящето изобретение се разтварят във физиологичен разтвор и се прибавят в увеличаващо се количество в органната баня на 5 мин интервали за да се осигури крива на кумулативна концентрация - ефект.

При горните опитни модели, комбинациите от лечебни средства от настоящето изобретение инхибират стимулираните от полето контракции на препаратите от трахеалните пръстени на морско свинче в границите от 0.001 до 1.0 мкМ.

Релаксиране на човешки бронхи - Проби от човешки бял дроб, извадени при операция на рак, се получават 3 дни след отстраняването.

Малките бронхи (вътрешен диаметър « 2 до 5 мм) се изваждат, нарязват се на сегменти и се поставят в 2 мл течен азот в ампули запълнени с зародишен телешки серум (FCS), съдържащ 1.8 М диметилсулфоксид (DMSO) и 0.1 М захароза като криозащитни средства. Ампулите се поставят в полистиролова кутия (11 х 11 х 22 см) и бавно се замразяват със средна скорост на охлаждане около 0.6° С/мин във фризер в който се поддържа -70° С. След 3 15 часа ампулите се пренасят в течен азот (-196° С), където се съхраняват до използването им. Преди употреба, тъканите се излагат за 30 - 60 мин на -70° С преди да се размразят за 2.5 мин чрез поставянето на ампулите във водна баня с 37° С. След това бронхиалните сегменти се промиват чрез поставянето им в блюдо съдържащо разтвор на Krebs - Henseleit (състав в мкМ: NaCl 118; КС1 4.7; MgSO₄ 1.2; СаС1₂ 1.2; КН₂РО₄ 1.2; NaHCO₃ 25; глюкоза 11; EDTA 0.03) при 37° С, нарязват се на пръстени и се суспендират отново в 10 мл органна баня за изометрично напрежение отчитайки при предварително натоварване от около 1 г. По-нататъшно увеличаване на напражението се индуцира чрез прилагане на стимулация на полето, което е известно че предизвиква активиране на нервите на пробата от дихателните пътища и генерира напрежение чрез освобождаване на ацетилхолин и други неврално получени медиатори. Получават се криви на концентраия - реакция чрез кумулативно прибавяне, всяка концентрация се прибавя след постигането на максимален ефект от предишната концентрация. В края на кривата концентрация - реакция се прибавя папаверин (300 мкМ) за да се предизвика цялостна релаксация на бронхиалните пръстени. Този ефект се приема като 100 % релаксация.

При горния опитен модел, комбинацийте от лечебни средства от настоящето изобретение дават зависими от концентрацията релаксации на човешките бронхиални пръстенни препарати в концентрации в границите от 0.001 до 1.0 мкМ при предпочитано проява на активност при концентрации в границите от 5.0 нМ до 500 нМ.

Потискане на предизвикана от капсаицин бронхоконстрикция Мъжки Dunkin - Hartley морски свинчета (400 - 800 г), имащи свободен достъп до вода и храна преди експеримента, се анестезират с натриев фенобарбитал (100 мг/кг интраперитонеално). Животните, поддържани при

37° С с нагрята подложка, контролирани с ректален термометър, се вентилират с трахеална канюла (около 8 мл/кг, 1 Hz) със смес от въздух и кислород (45 : 55 о/о). Вентилирането се проследява в трахеата с пневматограф, свързан с диференциален трасдуктор на налягането успоредно с дихателната помпа. Промени в налягането в торакса се отчитат директно чрез интраторакална канюла при използване на диференциален трансдуктор на налягането, така че може да се измери и отчете разлика в налягането между трахеата и торакса. От тези измервания на въздушен поток и транспулмонарното налягане, се изчисляват резистентността на дихателния път (Rj смН₂О/л/сек) и съгласуваността (СсЦуп) с дигитален електронен респираторен анализатор за всеки респираторен цикъл. Кръвното налягане и скоростта на сърцето се отчитат от каротидната артерия като се използва трансдуктор на налягането.

Когато стойностите за базална резитентност и съгласуваност са стабилни, се предизвиква акутен епизод на бронхоконстикция чрез интравенозен болус от капсаицин. Капсаицинът се разтваря в 100 % етанол и се разрежда с фосфатно буфериран физиологичен разтвор. Опитните комбинации от лечебните средства от настящето изобретение се прилагат когато реакцията към капсаицина е стабилна, което се смята да е след 2-3 такива приложения в интервали от по 10 мин. Преминаването на бронхоконстрикцията се оценява в продължение на 1 - 8 часа след интратрахеалното или интрадуоденалното поставяне или венозното инжектиране на болуса. Бронхоспазмолитичната активност се изразява като % инхибиране на началната, максимална резистентност (Rd) след инфузията от капсаицин. ED50 стойностите представляват дозата, която причинява 50 % намаляване на увеличаването на резистентността, предизвикана от капсаицин. Продължителността на действие се дефинира като времето в минути, в което бронхоконстрикцията се намалява с 50 % или повече. Ефектите върху кръвното налягане (ВР) и скоростта на сърцето (HR) се характеризират чрез ED50 стойностите; т.е. дозите, които намаляват ВР или

HR с 20 %, измерено 5 минути след приложението.

При горния опитен модел комбинациите от лечебни средства на настоящето изобретение проявяват бронходилататорна активност в дози в границите от 0.001 до 0.1 мг/кг i.t. (интра трахеално). Освен това, поставената интратрахеално комбинация проявява най-малко адитивен инхибиторен ефект върху бронхоспозмите, като всяка съставка самостоятелно е способна да инхибира повече от 50 % от наблюдаваната контролна реакция.

LPS-индуцирана белодробна неутрофилия - Възстановяване на и активиране на неутрофили в белите дробове се смята за важна патологична характеристика при COPD и при тежка астма. Следователно, инхибирането на единия или и на двата показателя при животни осигурява доказателство подкрепящо полезността от настоящето изобретение.

Мъжки Wistar-Albino плъхове (150 - 250 г) или мъжки Dunkin-Hartley морски свинчета (400 - 600 г) се третират предварително с опитните вещества самостоятелно или в комбинация чрез инхалиране или чрез интратрахеално (i.t.) приложение под кратка обща анестезия. 1-24 часа след приложението на съединението, животните са предизвикани чрез инхалиране на аерозол от бактериален лиополизахарид (LPS), достатъчен за да предизвика изразена белодробна неутрофилия в следващите 1 - 24 часа. Неутрофилията се оценява чрез преброяване на клетките в бронхиалните промивки или чрез определяне на неутрофилните продукти в белодробните промивки или в тъканта. При тази опитна система, лечебните средства от настоящето изобретение проявяват противовъзпалителна активност в дози в границите от 0.0001 до 0.1 мг/кг интратрахеално. Неочаквано, комбинацията приложена интратрахеално, проявява най-малко сумарен ефект при възпаление, въпреки факта, че една от съставките сама по себе си не проявява съществен противовъзпалителен ефект. Освен това, равностойни противовъзпалителни ефекти получени при високи дози на една от съставките могат да се наблюдават при по-ниски дози, когато се използва в комбинация, както е в изобретението, и с това да се сведат до минимум системни нежелани ефекти.

Алергично изпитание при морски свинчета- това е изпитание за оценяване на лечебното въздействие на комбинациите от лечебни средства от настоящето изобретение върху симптом на диспнея и бронхоспазъм, т.е. трудно и тежко дишане и увеличена белодробна резистентност и върху симптома на възпаление, т.е. белодробна неутрофилия и еозинофилия, като се използват Dunkin-Hartley морски свинчета (400 - 600 г телесно тегло).

Използваните при теста яйчев албумин (ЕА), качество V, кристализиран и лиофилизиран, алуминиев хидроксид и мепирамин малеат са търговски достъпни. Предизвикването и последващо респираторно отчитане се провеждат в прозразна пластмасова купия с вътрешни размери 10x6x4 инча. Секциите глава и тяло на кутията могат да се разделят. При използването двете са плътно прикрепени една към друга чрез скоби и между двете части има гумено уплътнение, които ги прави въздухонепроницаеми. През центъра на края на главата е поместен небулизатор чрез херметичен затвор и на всеки край на кутията има изход. В единия край на кутията се помества пневмоторакс, който е свързан с волуметричен трансдуктер на налягането, който след това е свързан към динограф през подходящи съединители. Докато се аерозолира антигена, изходите са отворени и пневмотахографа е изолиран от камерата. След това изходите се затварят и пневмотахографа и камерите се свързват през време на отчитането на респираторните характеристики. За предизвикателство във всеки небулизатор се поставя 2 мл от 3 % разтвор на антигена във физиологичен разтвор и се получава аерозол с въздух от малка диафрагмена помпа, работеща при 10 фунта/инч и скорост на протичане 8 л/мин.

Морски свинчета се сензибилизират чрез подкожно и интраперитонеално инжектиране на 1 мл суспензия, съдържаща 1 мг ЕА и 200 мг алуминиев хидроксид във физиологичен разтвор. Те се използват между 12-ия и 24-ия ден след сензибилизирането. С оглед да се елиминира хистаминовата съставка на реакцията, 30 минути преди аерозолното предизвикателство морските свинчета се третират предварително интраперитонеално с 2 мг/кг мепиармин. След това морските свинчета се излагат на аерозол от 3 % ЕА във физиологичен разтвор точно за 1 мин, след това се отчитат респираторните профили за допълнителни 30 мин. След това, пост мортем се определя възпалението на белия дроб за период от 1 до 48 часа. Продължителността на непрекъснатата диспнея се измерва от респираторните отчитания.

Опитните комбинации от лечебните средства на настоящето изобретение обикновено се прилагат интратрахеално или чрез аерозол 0.5-4 часа преди предизвикателството. Комбинациите от съединенията са или разтворени във физиологичен разтвор или в биосъвместими разтворители. Активността на съединенията се определя на базата на тяхната способност да намаляват силата и продължителността на симптомите на диспнея и бронхоспозми и/или силата на белодробното възпалние в сравнение с група контролни животни, които са третирани само с носител. Изпитанията на комбинациите от лечебни средства съгласно настоящето изобретение се оценяват за серия от различни дози и се получава ED50, която се дефинира като дозата (мг/кг), която би инхибирала продължителността на симптомите с 50 %.

Противовъзпалителна активност - Противовъзпалителната активност на комбинациите от лечебни средства от настоящето изобретение се демонстрира чрез инхибиране на еозинофилно и неутрофилно активиране.

При това изпитание кръвни проби (50 мл) се събират от не-атопични доброволци с еозинофилен брой в границите между 0.06 и 0.47 х 10⁹ л'¹.

Венозната кръв се събира в центрофугални епруветки, съдържащи 5 мл тринатриев цитрат (3.8 % , pH 7.4).

Антикоагулираната кръв се разрежда (1:1 о/о) с фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS, несъдържащ калций нито магнезий) и се наслоява върху 15 мл изотоничен Percoll (плътност 1.082 - 1.085 г/мл, pH 7.4), в 50 мл центрофугална епруветка. След центрофугиране (30 минути, 1000 х г, 20° С), мононуклеарни клетки на междинната повърхност плазма/ Percoll се аспирират внимателно и изхвърлят.

Пелета от неутрофил/еозинофил/еритроцити (около 5 мл по обем)

внимателно се суспендира отново в 35 мл изотоничен амониев хлориден разтвор (NH4CI, 155 мМ; КНСО₃, 10 мМ; EDTA, 0.1 мМ; 0-4° С). След 15 мин клетките се промиват два пъти (10 мин, 400 х г, 4° С) в PBS, съдържащ зародишен говежди серум (2 %, FCS).

Магнитна клетъчна сепарираща система се използва за разделяне на еозинофилите и неутрофилите. Тази система е способна да разделя клетки в суспензия съгласно повърхностни маркери и включва постоянен магнит, в който е поставена колона, която включава намагнетизираща се стоманена матрица. Преди употреба колоната се еквибилрира с PBS/ FCS за 1 час и след това се промива с леденостуден PBS/ FCS на ретроградна база чрез 20 мл-ова спринцовка. 21G калибър хиподермична игла се прикрепя към основата на колоната и 1 - 2 мл леденоохладен буфер се оставя да премине през иглата.

След центрофугиране на гранулоцитите, супернатантата се аспирира и клетките внимателно се суспендират отново с 100 мкл магнитни частички (анти-CD 16 моноклонално антитело, свързано към супермагнитни частички). Сместа от еозинофил/неутрофил/анти-CD 16 магнитни частички се инкубира върху лед 40 минути и след това се разрежда до 5 мл с леденоохладен PBS/ FCS. Клетъчната суспензия бавно се въвежда в горната част на колоната и затвора се отваря за да се позволи на клетките бавно да се предвижат в стоманената матрица. След това колоната се промива с PBS/ FCS (35 мл), който внимателно се прибавя в горната част на колоната така че да се смутят магнитно белязаните неутрофили, които вече са проникнали в стоманената матрица. Небелязаните еозинофили се събират в 50 мл-ова центрофугална епруветка и се промиват (10 минути, 400 х г, 4° С). Полученият пелет се суспендира отново в 5 мл Hank’s балансиран солев разтвор (HBSS), така че клетъчният брой и чистота могат да бъдат оценени преди да бъдат използвани. Разделителната колона се отстранява от магнита и неутрофилната фракция се елуира. Колоната след това се промива с PBS (50 мл) и етанол (абсолютен) и се съхранява при 4° С.

Общия брой на клетките се преброяват с микроклетъчен брояч. Към пробата се прибавя една капка лизогенен разтвор, която след 30 сек отново се преброява за да се оцени замръсяването с еритроцити. Цитозинови натривки се получават върху Shandon Cytospin 2 цитоспинер (100 мкл проби, 3 минути, 500 об/мин). Тези препарати се оцветяват и диференциалните клетъчни бройки се определят чрез светлинна микроскопия като се изследват най-малко 500 клетки. Клетъчната жизненост се оценява чрез изключване с трипаново синьо.

Еозинофили или неутрофили се разреждат в HBSS и се пипетират в β кладенчева микротитърна плака (МТР) в количество 1 - 10 х 10 клетки/кладенче. Всяко кладенче съдържа проба от 200 мкл включваща: 100 мкл клетъчна суспензия, 50 мкл HBSS; 10 мкл луцигенин, 20 мкл активиращ стимул и 20 мкл опитно съединение.

Пробите се инкубират с опитното съединение или с носител в продължение на 10 мин преди прибавянето на активиращ стимул fMLP (1 10 мкМ) или С5а (1 - 100 нМ), разтворен в диметилсулфоксид и след това разреден с буфер, така че най-високата използвана концентрация от разтворител е 1 % (при 100 мкМ опитно съединение). MTPs се разклащат за да се улесни смесването на клетките и средата и МТР се поставя в луминометър. В продължение на 20 минути се измерва общата хемилуминисценция и темпоралния профил на всяко кладенче едновременно и резултатите се изразяват в произволни единици или като процент от fMLPиндуцирана хемилуминисценция в отсъствието на опитно съединение. Резултатите се нагласят към уравнението на Hill и автоматично се изчисляват IC50 стойностите.

Комбинациите от лечебни средства от настоящето изобретение са активни при горния изпитателен метод в концентрации в границите от 0.0001 мкМ до 0.5 мкМ, като при предпочитани изпълнения активните концентрации са в границите от0.1 нМ до 100 нМ.

Противовъзпалителната активност на комбинациите от лечебни средства на настоящето изобретение допълнително се демонстрира чрез инхибиране на плазмено екстравазиране в дихателния път на плъх. При това изпитание трахеална тъкан се взима и се определя степента на плазмено пропускане. Това изпитание важи в равна степен и за други възпалителни заболявания на дихателния път включително, без да се ограничава до COPD и съответно не е резюмирано в този раздел.

Wistar-Albino плъхове (150 - 200 г) или Dunkin-Hartley морски свинчета (450 - 600 г) се анестезират с натриев пентобарбитон и се поставят венозна и артериална канюли. Венозно (30 мг/кг) се поставя Evans синьо багрило за да свърже плазмените протеини. След 10 минути се прилагат опитните средства интратрахеално и 10 минути по-късно се прилага венозно капсаицин (3 мкг/кг). След 30 минути се отстранява трахеална тъкан, екстрахира се една нощ в формамид и се отчита абсорбирането при 620 нм. При някои експерименти реда на дозирането се обръща така че съединенията се прилагат преди Evans синьо и възпалителния стимулус.

При горното моделно изпитание комбинациите от лечебни средства на настоящето изобретение проявяват противовъзпалителна активност при дозировки в границите от 0.001 до 0.1 мг/кг интратрахеално.

От горното може да се види, че комбинацията от лечебни средства на настоящето изобретение са полезни при лечението на възпалително или обструктивно заболяване на дихателния път или при други състояния, включващи обструкция на дихателния път. По-специално те са приложими за лечението на бронхиална астма.

С оглед на противовъзпалителната си активност и влиянието им при хиперреактивност на дихателните пътища, комбинациите от лечебните средства на настоящето изобретение са полезни при лечението, особено за профилактично третиране на обструктивни или възпалителни заболявания на дихателните пътища. Така, при непрекъснато и редовно приложение за продължителни периоди от време, комбинациите от съединенията съгласно настоящето изобретение са полезни в осигуряване на защита срещу отново появяване на бронхоконстрикция или друга симптоматична атака в резултат на обструктивно или възпалително заболяване на дихателните пътища. Комбинациите от съединения от настоящето изобретение са също приложими за контролиране, облекчаване или обратно развитие на базалния статус на такива заболявания.

С оглед на тяхната броходилататорна активност, комбинациите от лечебни средства от настоящето изобретение са приложими като бронходилататори, например при лечението на хронична или акутна бронхоконстрикция и за симптоматично лечение на обструктивни или възпалителни заболявания на дихателните пътища.

Обструктивни или възпалителни заболявания на дихателните пътища, към които настоящето изобретение може да се прилага, включват: астма, пневмокониоза, хронична еозинофилна пневмония, хронично обструктивно заболяване на дихателния път или белодробно заболяване (COAD или COPD); респираторен дистресов синдром при възрастни (ARDS) както и рязко влошаване на хиперреактивността на дихателния път в резултат на друга лекарствена терапия, например аспирин или лечение с β-агонист.

Селективните аденозин А_2а рецепторни агонисти и антихолинергични съединения от настоящето изобретение могат да се прилагат самостоятелно или в комбинация, но общо взето ще се прилагат в смес с подходящи фармацевтични пълнители, разредители или носители.

Селективните аденозин А_2а рецепторни агонисти и антихолинергични съединения от настоящето изобретение с предпочитание се прилагат чрез инхалация и са удобни за прилагане под формата на сух прах (било самостоятелно или като смес, примерно в смес с лактоза) от инхалатор за сух прах или аерозолен спрей от контейнер в който са под налягане, помпа, спрей, атомизатор (за предпочитане атомизатор при използване на електрохидродинамика за да се получи фина мъгла) или небулизатор, с или без използванто на подходящ пропелант, например дихлородифлуорометан, трихлорофлуорометан, дихлоротетрафлуороетан, хидрофлуороалкан като

1,1,1,2-тетрафлуороетан (HFA 134А [търговска марка]) или 1,1,1,2,3,3,3хептафлуоропропан (HFA 227ЕА [търговска марка]), въглероден диоксид, друг перфлуориниран въглеводород като перфлуброн (търговска марка) или друг подходящ газ. В случай на аерозол под налягане, дозиращата единица може да се определи чрез поставяне на клапа за отдаване на премерено количество. Контейнерът под налягане, помпата, спреят, атомизаторът или небулизаторът могат да съдържат разтвор или суспензия от активното съединение, например при използване на смес от етанол (евентуално воден етанол) или подходящо средство за диспергиране, солюбилизиране или забавяне на освобождаването и пропелант като разтворител, който може да съдържа допълнително смазващо вещество, например сорбитан триолеат. Капсули, блистери и патронажи (направени примерно от желатин или НРМС) за използване в инхалатор или инсуфлатор, могат да се формулират да съдържат прахова смес от съединението от изобретението, подходяща прахова база като лактоза или нишесте и модификатор като 1-леуцин, манитол или магнезиев стеарат.

Преди да се използва в суха прахова формулировка или суспензионна формулировка за инхалиране, съединението от изобретението трябва да се микронизира до размер подходящ за отдаване чрез инхалиране (обикновено това се смята за по-малко от 5 микрона). Микронизирането трябва да се постигне по редица методи, например спирално струйно смилане, струйно смилане в кипящ слой или използване на суперкритично течно кристализиране.

Подходяща формулировка на разтвор за използване в атомизатор при изполване на електрохидродинамика за получаване на фина мъгла може да съдържа от 1 мкг до 10 мкг от съединението от изобретението на впръскване и обемът на едно впръскване може да варира от 1 до 100 мкл. Типична формулировка може да включва съединение от изобретението, пропиленгликол, стерилна вода, етанол и натриев хлорид. Алтернативни разтворители могат да се използват вместо пропиленгликол, например глицерол или полиетиленгликол.

Аерозол и сухи прахови формулировки с предпочитание са така нагласени, че всека премерена доза или “впръскване” съдържа от 1 до 4000 мкг от съединение от изобретението за отдаване на пациент. Средната дневна доза от аерозол ще е в границите от 1 мкг до 20 мг, която може да се приложи в една доза или най-често на разделени дози през деня.

Предпочитаното използвано съотношение, тегловно (т/т) от селективен аденозин А_2а рецепторен агонист : антихолинергично средство ще зависи от конкретната комбинация, която се изследва. Това се дължи на разликите в активността на отделните съединения. Лекарят във всеки случай ще определи актуалната доза за всяко от съединенията, която ще е найподходяща за конкретния пациент и тя ще варира в зависимост от възрастта и реакцията на конкретния пациент.

Трябва да се подразбира, че при всички тук случай на лечение се включват лечебно, палиантивно и профилактично лечение.

Claims (16)

1. Патентни претенции

   1. Комбинация за инхалиране, характеризираща се с това, че е селективен аденозин А_2а рецепторен агонист : антихолинергично средство при условие че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.
2. 2. Комбинация съгласно претенция 1, характеризираща се с това, че селективния аденозин А_2а рецепторен агонист е съединение общо или конкретно описано във WO-A-OO/234557, WO-A-00/77018, WO-A-01/27131, WO-A-01/27130, WO-A-01/60835, WO-A-02/00676 или WO-A-01/94368.
3. 3. Комбинация съгласно претенция 1, характеризираща се с това, че селективния аденозин А_2а рецепторен агонист е:

   П-({9-[(2К,ЗК,48,5Н)-3,4-дихидрокси-5-(метоксиметил)тетрахидро-2фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9Н-пурин-2-ил}метил)-2-метил-1пропансулфонамид (пример 15 на WO-A-00/23457);

   циc-(2R,ЗR,4S,5R)-2-(6-[(2,2-диφeнилeτил)aминo]-2-{[(4изопропилциклохексил)амино]метил} -9Н-пурин-9-ил)-5(метоксиметил)тетрахидро-3,4-фурандиол и TpaHC-(2R,3R,4S,5R)-2-(6-[(2,2дифенилетил)амино]-2- {[(4-изопропилциклохексил)амино]метил} -9Нпурин-9-ил)-5-(метоксиметил)тетрахидро-3,4-фурандиол (пример 17 на WOА-00/23457);

   М-({9-[(2И,ЗИ,48,5К)-3,4-дихидрокси-5-(хидроксиметил)тетрахидро2-фуранил ] -6- [(2,2-дифенилетил)амино] -9Н-пурин-2-ил} метил)-2-метил-1 пропансулфонамид (пример 1 на WO-A-01/27130);

   (28,38^^)-5-(6-[(2,2-дифенилетил)амино]-2{[(изопропилсулфонил)амино]метил}-9Н-пурин-9-ил)-Л-етил-3,4дихидрокситетрахидро-2-фуранкарбоксамид (пример 3 на WO-A-01/27131);

   9-[(2К,ЗК,48,5К)-3,4-дихидрокси-5>(хидроксиметил)тетрахидро-2фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-Ь1-[2-(1-пипсридинил)етил]-9Н-пурин2-карбоксамид (пример 1 на WO-A-00/77018);

   6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9-{(2К,ЗК,48,58)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2-фуранил} -N-[2-(l пиперидинил)етил]-9Н-пурин-2-карбоксамид (пример 1 на WO-A-01/60835);

   Н-({9-[(2К,ЗК,48,5К)-3,4-дихидрокси-5-(хидроксиметил)тетрахидро2-фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9Н-пурин-2-ил}метил)-№-[2(диизопропиламино)етил]уреа (пример 1 на WO-A-02/00676) или

   6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9-{(2И,ЗК,48,58)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2-фуранил} -N- {2-[({ [ 1 -(2пиридинил)-4-пиперидинил]амино}карбонил)амино]етил}-9Н-пурин-2карбоксамид (пример 8 на WO-A-01/94368);

   или тяхна фармацевтично приемлива сол или солват.
4. 4. Комбинация съгласно претенция 3, характеризираща се с това, че селективния аденозин А_2а рецепторен агонист е:

   9- [(2R,3 R,4 S ,5R)-3,4-дихидрокси-5 -(хидроксиметил)тетрахидро-2фуранил]-6-[(2,2-дифенилетил)амино]-Н-[2-(1-пиперидинил)етил]-9Н-пурин2-карбоксамид или 6-[(2,2-дифенилетил)амино]-9-((2К,ЗК,48,58)-5[(етиламино)карбонил]-3,4-дихидрокситетрахидро-2-фуранил} -N- {2-[({[1 -(2пиридинил)-4-пиперидинил]амино}карбонил)амино]етил}-9Н-пурин-2карбоксамид или тяхна фармацевтично приемлива сол или солват.
5. 5. Комбинация съгласно всяка от предходните претенции, характеризираща се с това, че антихолинергичното средство е ипратропиева или окситропиева сол или тяхен солват.
6. 6. Комбинация съгласно претенция 1, характеризираща се с това, че селективния аденозин Ага рецепторен агонист е 9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4дихидрокси-5-(хидроксиметил)тетрахидро-2-фуранил]-6-[(2,2дифенилетил)амино]-М-[2-(1-пиперидинил)етил]-9Н-пурин-2-карбоксамид или негова фармацевтично приемлива сол или солват и антихолинергичното средство е ипатропиева сол или нейн солват;

   селективния аденозин Аг_а рецепторен агонист е 6-((2,2дифенилетил)амино]-9-{(2К,ЗК,48,58)-5-[(етиламино)карбонил]-3,4дихидрокситетрахидро-2-фуранил} -N- {2-[( {[ 1 -(2-пиридинил)-4пиперидинил] амино} карбонил)амино]етил} -9Н-пурин-2-карбоксамид или негова фармацевтично приемлива сол или солват и антихолинергичното средство е ипатропиева сол или нейн солват;

   селективния аденозин Аг_а рецепторен агонист е 9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4дихидрокси-5 -(хидроксиметил)тетрахидро-2-фуранил] -6- [(2,2дифенилетил)амино]-М-[2-(1-пиперидинил)етил]-9Н-пурин-2-карбоксамид или негова фармацевтично приемлива сол или солват и антихолинергичното средство е окситропиева сол или нейн солват или селективния аденозин Ага рецепторен агонист е 6-[(2,2дифенилетил)амино]-9-{(2И,ЗК,45,55)-5-[(етиламино)карбонил]-3,4дихидрокситетрахидро-2-фуранил} -N-{ 2-[({ [1 -(2-пиридинил)-4пиперидинил]амино}карбонил)амино]етил}-9Н-пурин-2-карбоксамид или негова фармацевтично приемлива сол или солват и антихолинергичното средство е окситропиева сол или нейн солват.
7. 7. Комбинация съгласно всяка от предходните притенции, характеризираща се с това, че се използва като лекарствено средство.
8. 8. Комбинация съгласно всяка от претенциите от 1 до 6, характеризираща се с това, че се прилага едновременно, последователно или разделно при лечението на обструктивно заболяване на дихателните пътища или друго възпалително заболяване.
9. 9. Фармацевтичен състав, характеризиращ се с това, че включва селективен аденозин Л_2а рецепторен агонист, антихолинергично средство, фармацевтично приемлив пълнител, разредител или носител, за прилагане чрез инхалиране при лечението на обструктивни заболявания на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, при условие, че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.
10. 10. Фармацевтичен състав съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че селективният аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергичното средство са съгласно определенията във всяка от претенциите от 2 до 6.
11. 11. Използване на селективен аденозин А_2а рецепторен агонист или антихолинергично средство при производство на медикамент за едновременно, последователно или разделно прилагане на двете средства чрез инхалиране за лечение на обструктивни заболявания на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, при условие, че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.
12. 12. Използване съгласно претенция 11, при което селективният аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергичното средство са съгласно определенията в претенции 2 до 6.
13. 13. Използване на комбинация съгласно претенция 1 като лекарствено средство за лечение на обструктивни заболявания на дихателните пътища или друго възпалително заболяване включващо едновременно, •I- .:

    51 последователно или разделно прилагане чрез инхалиране към бозайник, нуждаещ се от такова лечение на ефективно количество от селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство при условие, че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.
14. 14. Използване съгласно претенция 13, при което селективният аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство са определени във всяка от претинциите от 2 до 6.
15. 15. Устройство за инхалиране, характеризиращо се с това, че е за едновременно, последователно или разделено прилагане на селективен аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство при лечението на обструктивни заболявания на дихателните пътища или друго възпалително заболяване, при условие, че антихолинергичното средство не е тиотропиева сол.
16. 16. Устройство съгласно претенция 15, характеризиращо се с това, че селективният аденозин А_2а рецепторен агонист и антихолинергично средство са определени във всяка от претинциите от 2 до 6.