BE876563A

BE876563A - FATTY ACID AND ITS DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OR PROPHYLAXIS OF THROMBOEMBOLIC CONDITIONS

Info

Publication number: BE876563A
Application number: BE0/195406A
Authority: BE
Inventors: H Bang; J Dyerberg
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1978-05-26
Filing date: 1979-05-25
Publication date: 1979-11-26
Also published as: MY8500280A; JPS6257605B2; MY8500281A; JPS54154533A; ZA784083B

Description

       

  Acide gras et ses dérivés pour le traitement ou la prophylaxie

  
des états thrombo-emboli ques.

  
La présente invention concerne le traitement ou la

  
prophylaxie des états thrombo-emboliques-

  
On sait que de nombreuses substances peuvent influencer l'agrégation des thrombocytes, mais à partir de la

  
connaissance des effets d'une substance particulière sur l'agrégation des thrombocytes in vitro, il est impossible de prévoir

  
si cette substance aura ou non un effet inhibiteur ou. stimulateur (ou bien neutre) sur la formation du thrombus in vivo.

  
Il en est ainsi pour beaucoup parce qu'on ne sait pas ce qui amorce la formation du thrombus ou de l'embole lors, par exemple, d'une apoplexie ou d'un infarctus du myocarde. Un exemple de ce caractère imprévisible est donné par l'acide acétylsalicylique qui est un bon inhibiteur de l'agrégation des thrombocytes in vitro et in vivo mais qui n'est pas un agent

  
, anti-thrombotique et qui en particulier n'est pas à même de

  
disperser un thrombus déjà formé.

  
M.J.Silver, J.B. Smith et al., (Prostaglandins décembre 1973, volume 4, n[deg.]6, pages 863 à 875) ont montré que de nombreux composés peuvent influencer in vitro les effets d'agrégation des thrombocytes exercés par l'acide arachidonique qui est un acide gras essentiel de l'alimentation

  
 <EMI ID=1.1> 

  
est appelé aussi acide C20:4 ou acide n-6, parce qu'il est

  
un acid.e gras de 20 atomes de carbone comprenant 4 doubles liaisons carbone-carbone en cis, celle occupant la position du numéro supérieur se trouvant à une distance de 6 liaisons de l'extrémité de la molécule la plus éloignée du radical carboxyle, n étant le nombre des atomes de carbone dans

  
la chaîne droite). Ces essais in vitro sur du plasma humain citraté riche en thrombocytes ne permettent pas d'établir une relation exempte d'ambiguïté avec l'effet in vivo chez un mammifère, y compris l'homme, tendant à former un thrombus.

  
M.J.Silver et al. ont observé lors de leurs expériences que l'agrégation des thrombocytes induite par l'acide arachidonique, sous forme d'arachidonate de sodium, peut être inhibée par de nombreuses substances notamment l'adénosine; le 

  
 <EMI ID=2.1>   <EMI ID=3.1> 

  
que. Ils ont observé aussi que l'agrégation des thrombocytes induite par le collagène et une seconde onde d'agrégation des thrombocytes induite par l'adénosine diphosphate pourrait être inhibée par le &#65533;-naphtol, l'acide acétylsalicylique,

  
 <EMI ID=4.1> 

  
sapentaénoïque et l'albumine humaine. Silver et al. ont en outre établi que différents acides gras n'induisent pas. par eux-mêmes l'agrégation des thrombocytes. Les acides qu'ils

  
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énoïque, l'acide 5,8,11,14-eicosatétraénoique, l'acide 4,7,10,
13,16,19-docosahexaénoique, l'acide linolénique, l'acide linoléique, l'acide oléique, l'acide arachidique, l'acide stéa-

  
 <EMI ID=6.1> 

  
Il convient de noter que beaucoup des composés

  
 <EMI ID=7.1> 

  
ne se prêtent pas à une application thérapeutique. Par exemple, l'adénosine est absorbée rapidement par les cellules

  
et ne subsisterait pas assez longtemps dans l'organisme pour être intéressante. Le (3-naphtol est toxique parce qu'il est

  
un composé phénolique. L'albumine ne convient pas parce qu'elle induirait une charge indésirable sur les reins dont elle endommagerait les glomérules. Du.fait que les agents anti-inflammatoires non stéroïdes provoquent fréquemment des lésions gastriques, il est préférable de les éviter dans tout traitement prophylactique exigeant une administration par voie orale

  
à long terme telle qu'elle est fréquemment désirable en thérapeutique cardiovasculaire.

  
Silver et al. suggèrent la conclusion que l'acide arachidonique joue un rôle important dans l'hémostase et la  <EMI ID=8.1> 

  
différents composés et en particulier par l'albumine. Ils suggèrent que l'albumine pourrait être un facteur important dans la régulation de l'hémostase et que la capacité de l'albumine de combiner l'acide arachidonique dans le sang

  
en circulation pourrait être le mécanisme par lequel elle inhibe les effets de l'acide arachidonique. Ils suggèrent de plus que la capacité exacte de l'albumine de c.ombiner l'acide arachidonique peut dépendre, par exemple, de l'accessibilité des sites de fixation et d'une compétition entre l'acide arachidonique, d'autres acides gras et des substances d'autres natures pour ces sites. Il est dès lors à présumer qu'à mesure que les agents compétitifs et en particulier . d'autres acides gras deviennent plus abondants, le taux d'acide arachidonique libre augmente, tout comme la probabilité d'agrégation des thrombocytes et par conséquent, si ces phénomènes sont en relation, également la probabilité de formation d'un thrombus. Cette observation suggère que les autres acides gras devraient être supprimés de l'alimentation.

  
Différentes expériences visant à déterminer chez l'homme les effets exercés par divers acides gras sur des affections impliquant une formation de thrombus n'ont pas permis de dégager des conclusions claires.

Par exemple, le programme de recherche appelé

  
 <EMI ID=9.1> 

  
avant les travaux de Silver. et al. et a été publié par

  
 <EMI ID=10.1> 

  
Lab. Invest. 22, Suppl. 105, 1-20, (1968). CettE étude compare les effets exercés sur les taux de mortalité humaine

  
dus à différentes affections cardiaques coronaires, notamment l'infarctus du myocarde,par deux alimentations dont l'une comprend de l'huile de tournesol (environ 63% d'acide linoléique)  <EMI ID=11.1> 

  
de linolénique), la consommation étant de 10 ml d'huile par  jour. Il en ressort que le risque est plus grand chez les participants consommant l'acide linolénique qui est plus hau-  tement non saturé que chez ceux consommant l'acide linoléique. 

  
On sait que l'acide linoléïque et, chez le rat, l'acide eicosapenta&#65533;noique et l'acide docosahexaénoïque font baisser le taux de cholestérol dans le plasma, dont on suppose qu'il est en relation avec l'athérosclérose. L'athérosclérose est observée fréquemment chez les patients qui ont souffert d'un infarctus du myocarde. Toutefois, il ne semble pas exister

  
de relation causale du fait que Robertson [lancet, (1959), i,
44] a observé qu'à la Jamaïque, l'athérosclérose étendue,bien que constatée régulièrement dans la population locale lors 

  
de l'autopsie,est rarement associée à des thrombus secondaires ou un infarctus du myocarde. De plus, l'infarctus du myocarde peut se manifester en l'absence d'athérosclérose importante. 

  
 <EMI ID=12.1> 

  
 <EMI ID=13.1> 

  
à inhiber la thrombose est l'acide dihomo-Y-linolénique. Cet

  
 <EMI ID=14.1> 

  
laquelle est un inhibiteur puissant de la fonction thromboci&#65533; taire, et a été jugé intéressant comme agent antithrombotique.  En conformité avec leurs prévisions, ces auteurs ont observé

  
 <EMI ID=15.1> 

  
 <EMI ID=16.1> 

  
chez six des huits volontaires une augmentation (en moyenne de 33%) de la production de la prostaglandine E2 indésirable.  De plus, ces résultats ne présentent pas de relation claire  avec les doses administrées. Ces auteurs ont observé aussi une baisse de l'activité de neutralisation de l'héparine ma-nifestée par le plasma et que cette activité est élevée dans

  
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quelle mesure l'activité de neutralisation de l'héparine traduit un mécanisme pathologique fondamental, de sorte que sa relation avec la thrombose n'est pas élucidée

  
Les auteurs de l'article font l'hypothèse que peut-

  
 <EMI ID=18.1> 

  
être aussi ou plus efficaces que des interventions diététiques  majeures pour prévenir et traiter ces états, en l'occurrence  l'athérosclérose et l'atteinte des artères coronaires. Néanmoins, l'auteur d'un éditorial dans la même édition de ce 

  
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qu'on puisse indiquer si les résultats atteints par McNïcol 

  
et ses collègues ont une application clinique quelconque. 

  
Les raisons de cette prudence tiennent dans l'ignorance des  mécanismes impliqués dans les situations thrombotiques in vivo  lorsque les investigations ont été exécutées uniquement avec  du sang prélevé. 

  
Ce travail au moins partiellement intéressant sur

  
 <EMI ID=20.1> 

  
nion fréquente que les acides gras non saturés de l'alimentation sont plus favorables que les acides gras analogues davantage saturés, surtout du fait que l'acide linoléique et l'acide linolénique qui sont encore moins saturés peuvent être

  
 <EMI ID=21.1> 

  
forcé par le fait que l'acide arachidonique qui est indési-.

  
 <EMI ID=22.1> 

  
sons carbone-carbone en cis). 

  
La Demanderesse a découvert à présent avec surprise que parmi les nombreux acides gras, l'acide (tout Z)-5,8,11,

  
 <EMI ID=23.1> 

  
après simplement thrombose. Des exemples de situations dans lesquelles la découverte de la Demanderesse peut être utile sont le traitement ou la prophylaxie des affections cardiovasculaires accompagnées d'une formation d'un ou plusieurs thrombus, comme l'infarctus du myocarde, de l'apoplexie ou de la thrombose veineuse profonde pendant les interventions

  
 <EMI ID=24.1> 

  
acide eicosapentaénoïque) injecté par voie intraveineuse à des lapins augmente leur temps de saignement, démontrant ainsi une diminution de la tendance du sang à former un thrombus ou à adhérer aux tissus endommagés, ce qui permet dès lors de modifier et/ou maîtriser la cicatrisation. En perfusion dans le poumon de lapin, l'acide eicosapentaénolque suscite l'apparition d'une substance qui est un inhibiteur puissant de l'agrégation des thrombocytes.

  
 <EMI ID=25.1> 

  
inhabituelle et importante de disperser ou désagréger les thrombus et caillots de thrombocytes déjà formés. Par exemple, on. laisse tomber goutte à goutte du sang prélevé chez

  
un lapin anesthésié sur une bande de collagène qu'on soumet

  
à la pesée continue et qu'on a prélevé sur le tendon d'Achille d'un autre lapin. A mesure que le sang coule à la surface

  
de la bande de collagène, les thrombocytes et autres cellules adhèrent au collagène en y formant un thrombus jusqu'à fin d'augmentation de poids. Le sang retourne au premier lapin par gravité- L'acide eicosapentaénoique ajouté par perfusion au sang s'écoulant sur la bande de collagène chargée du thrombus induit une baisse de poids, ce qui démontre qu'au moins une partie des thrombocytes et autres cellules

  
se dégagent de l'agrégat formé sur la bande de collagène.

  
La capacité de l'acide eicosapentanoîque de disperser ou désagréger un thrombus est importante pour le traitement de la thrombose de même que pour sa prophylaxie. Un thrombus en formation dans une artère ou veine réduit le flux sanguin
(qui .serait complètement arrêté en cas d'occlusion complète du vaisseau) . La baisse du flux sanguin provoque une ischémie qui est douloureuse. Le flux sanguin réduit est cependant encore à même d'amener des agents thérapeutiques à l'en-

  
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résiduel et le flux sanguin éventuel de la circulation collatérale peut amener l'acide eicosapentaénoique au site de for-

  
 <EMI ID=27.1> 

  
bolites peuvent désagréger le thrombus et rétablir le flux sanguin normal. L'invention procure donc un procédé pour rétablir par administration d'acide eicosapentaénoïque le flux sanguin normal dans un vaisseau sanguin partiellement occlus. L'administration peut aussi être prophylactique pour le maintien des vaisseaux sanguins en état de non-occlusion.

  
La Demanderesse a découvert également que les thrombocytes humains, après une incubation préalable avec de l'acide eicosapentaénoique puis incubation avec de l'acide arachidonique et enfin stimulation par l'adénosine diphosphate,s'agrègent moins aisément que lorsque l'incubation préalable est effectuée avec de l'acide arachidonique. Ce résultat suggère à la Demanderesse que si les thrombocytes humains pouvaient

  
 <EMI ID=28.1> 

  
moins susceptibles de stimulation par l'adénosine diphosphate et donc moins susceptibles de former des thrombus.

  
Bien que la validité de l'invention ne soit pas li&#65533;e à celle de l'hypothèse, la Demanderesse est portée

  
à croire qu'in vivo, non seulement l'acide eicosapentaénoïque, au contraire de l'acide arachidonique, est un inhibiteur de l'agrégation des thrombocytes, mais de plus. ses métabolites, qui sont probablement des prostaglandines de la série A-17, ont aussi un effet d'inhibition sur l'agrégation des thrombocytes ou au pire un effet d'agrégation réversible tandis que beaucoup des métabolites de l'acide arachidonique,

  
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d'agrégation irréversible sur les thrombocytes. A la connaissance de la Demanderesse, ce profil anti-thrombotique net de l'acide eicosapentaénoïque est la cause de ses pro-

  
 <EMI ID=30.1> 

  
des fins thérapeutiques ou prophylactiques varie avec le mode d'administration et la nature de l'affection traitée, mais est généralement d'au moins 1 g et de préférence de 1,5

  
 <EMI ID=31.1> 

  
par jour. Cette dose convient pour l'homme d'un poids moyen de 70 kg et est généralement adaptée en fonction du poids pour l'homme d'un autre poids ou pour les animaux, c'est-àdire qu'elle est d'environ 20 à 100 mg/kg.

  
L'acide eicosapentaénoique peut être ajouté au sang en circulation extracorporelle pour empêcher de manière sensible ou complète l'agrégation des thrombocytes induite par le contact avec l'appareil ou d'autres matières qui ne sont pas les tissus de l'organisme.

  
Comme on le sait, on trouve l'acide eicosapentaénoïque dans les huîtres et autres organismes marins, dans l'huile de foie de morue et dans d'autres huiles, comme l'huile de menhaden,d'où on peut l'extraire suivant différents procédés connus et décrits. L'acide eicosapentaénoique peut

  
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thèse en chimie organique. Le mode d'acquisition choisi dépend des ressources en matière première et des prix relatifs des différents moyens permettant d'obtenir de l'acide eicosapentaénoique de la qualité qui convient pour la médecine humaine ou vétérinaire. Lors de l'extraction ou de la préparation, il faut éviter ou maintenir faible l'isomérisation des doubles liaisons en cis en doubles liaisons en trains.

  
Les quantités d'acide eicosapentaénoïque dans les produits naturels ou susceptibles d'une extraction aisée, comme l'huile de foie de morue ou l'huile de menhaden,sont telles qu'il ne serait pas possible d'administrer directe-

  
 <EMI ID=33.1> 

  
administrer aussi trop de calories alimentaires sous forme d'autres acides gras. De plus, du fait que l'huile de foie

  
de morue (comme les autres huiles de poissons) est riche

  
en vitamine A (au moins 850 unités internationales par gramme) et en vitamine D (au moins 85 unités internationales par- gramme), une quantité d'huile de foie de morue apportant la quantité nécessaire d'acide eicosapentaénoïque entraînerait l'administration de quantités de ces vitamines excédant de beaucoup

  
la dose quotidienne recommandée pour l'homme et induirait l 'hyper-vitaminose- En effet, la dose quotidienne recommandée est de 5.000 unités internationales de vitamine A et

  
 <EMI ID=34.1> 

  
Etats-Unis d'Amérique, les services compétants (Food and Drugs Administration) ont précisé que la consommation quotidienne ne devrait pas excéder 10.000 unités internationales pour

  
 <EMI ID=35.1>  

  
La prescription médicale est requise pour les doses plus élevées.

  
Par conséquent, pour éviter des complications qui pourraient résulter d'une consommation de vitamines par le patient tant par décision personnelle que pour d'autres raisons médicales, la Demanderesse préfère une composition qui

  
 <EMI ID=36.1> 

  
esters ou amides pharmaceutiquement acceptables et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, mais qui est sensiblement exempte de vitamines.

  
En raison des effets complexes et jusqu'à un certain point incertains des acides plus saturés que l'acide eicosapentaénoique, la Demanderesse préfère une composition qui

  
 <EMI ID=37.1> 

  
esters ou amidespharmaceutiquement acceptables et un véhicule pharmaceutiquement acceptable,mais qui est sensiblement exempte d'autres acides plus saturés ou de leurs sels, esters ou amides. L'acide eicosapentaénoique d'origine naturelle, par exemple provenant d'huiles de poissons,contient une certaine proportion d'acide (tout Z) 7,10,13,16,19-docosapentaénoique (appelé ci-après acide docosapentaénoîque) et/ou

  
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ci-après acide docosahexaénoïque) (soit tels quels, soit sous forme de dérivés comme leurs esters, sels ou amides). Il n'est pas nécessaire d'essayer d'éliminer ces acides également ou plus non saturés (ou leurs dérivés), parce qu'ils

  
 <EMI ID=39.1> 

  
mais sont moins actifs.

  
La consommation. calorique exagérée indiquée cidessus au cas où, par exemple, l'huile de foie de morue

  
ou l'huile de menhaden serait la source de l'acide eicosapentaénoïque, peut être sensiblement évitée, bien qu'une cer- <EMI ID=40.1> 

  
te de l'alimentation puisse rester nécessaire, par administra-

  
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ment acceptables et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, les acides gras de la composition étant formés pour

  
 <EMI ID=43.1> 

  
taénoïque doit être administré sans modification du régime du. patient, l'acide (de même que l'acide docosapentaénoïque

  
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des acides gras de la dose administrée.

  
Les acides gras ne contiennent de préférence pas

  
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au maximum. Par exemple, une qualité préférée d'acide eico-

  
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d'acide arachidonique et 2% d'acide dihomo-Y-linolénique

  
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docosapentaénoique, de l'acide palmitique ou de l'acide oléïque, outre d'autres acides gras pharmaceutiquement acceptables. Au cas où des vitamines sont présentes, comme elles peuvent l'être, leur. quantité: n'est de préférence pas telle que la consommation quotidienne qui en est recommandée soit excédée.

  
Les compositions utilisées suivant l'invention devraient aussi. être exemptes d'acides gras saturés et de leurs sels, esters ou amides. De préférence, les compositions sont exemptes d'agents non saponifiables.

  
 <EMI ID=48.1> 

  
d'un titre d'au moins 50% et de préférence d'au moins 90% sur la base des acides gras, il devrait être possible d'évi-ter '.1:!le modification sensible de l'alimentation du patient, 

  
i sauf peut-être une faible réduction de la valeur calorique  des aliments pour compenser un supplément de calories apporté'

  
par l'acide eicosapentaénoïque (et les autres acides gras). Toutefois, si la chose est préférée, il serait possible d'administre:.'! l'acide eicosapentaénoique en remplaçant,par exem-  ple, le beurre et/ou la margarine ordinaire par une margarine  spéciale, par exemple du type en émulsion,composée de façon

  
que par sa consommation normale, le patient prenne la quantité requise d'acide eicosapentaénoique. Des huiles et graisses de cuisine peuvent de même-être composées de manière à conte-

  
 <EMI ID=49.1> 

  
L'acide eicosapentaénoïque (et les autres acides) ne doivent pas être utilisés sous la forme de l'acide luimême,mais peuvent l'être sous la forme de ses sels, esters  ou amides pharmaceutiquement acceptables (dont la quantité doit apporter la quantité équivalente d'acide). Les esters ou amides qui peuvent être convertis in vivo en acide et autres produits pharmaceutiquement acceptables conviennent,  l'ester préféré étant le triglycéride ou l'ester éthylique, bien que l'ester méthylique puisse probablement convenir aussi. L'alcool utilisé pour l'estérification de l'acide est de préférence non polymère et ne compte de préférence pas plus de. trois radicaux hydroxyle par molécule.

   En outre, l'ester utilisé n'est de préférence pas un ester de cholestérol parce qu'il pourrait en résulter le dégagement d'une certaine quantité de cholestérol qui pourrait augmenter le taux de cholestérol dans le sérum. Pour la même raison, les compositions de l'invention sont de préférence exemptes de cholestérol, soit tel quel soit sous forme de dérivé qui peut être converti en cholestérol dans l'organisme du patient. Les sels préférés sont les sels de sodium et de potassium ou  <EMI ID=50.1> 

  
ment non saturé, il est, tout comme ses dérivés, aisément oxydé et les compositions en contenant contiennent de préférence aussi des antioxydants comme de l'hydroxytoluène butylé, de l'hydroxyanisole butylé, du gallate de propyle,

  
 <EMI ID=51.1> 

  
Certains antioxydants peuvent aussi contribuer à l'effet anti-thrombo-embolique .

  
Bien qu'il soit préférable d'administrer l'acide

  
 <EMI ID=52.1> 

  
actif) pax voie orale en. raison de la commodité de ce 'mode d'administration, le composé actif peut être administré par toute voie permettant son absorption avec succès, par exemple

  
 <EMI ID=53.1> 

  
laire ou intraveineuse), par voie rectale ou aussi par voie vaginale chez la femme.

  
Il est possible d'administrer le composé actif

  
tel quel sous forme de composé chimique ou sous forme de mélange simple de composants,mais il est préférable d'en former des compositions pharmaceutiques. Les compositions pharmaceutiques de l'invention qui sont utilisées en médecine humaine et vétérinaire comprennent le composé actif tel que défini ci-dessus avec un ou plusieurs véhicules acceptables et éventuellement d'autres agents thérapeutiques. Le ou les véhicules doivent être'acceptables" dans le sens qu'ils doivent être compatibles avec les autres constituants de la composition et ne peuvent nuire au patient. Les compositions qui contiennent de l'acide eicosapentaénoique tel quel sont de  <EMI ID=54.1> 

  
primés ou capsules, de la composition contiennent en général 0,25

  
 <EMI ID=55.1> 

  
Des compositions qui conviennent sont notamment celles se prêtant à l'administration par voie orale, rectale, vaginale ou parentérale (notamment sous-cutanée, intramusculaire et intraveineuse).

  
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dit est un liquide et n'est pas agréable au goût, il est préférable de l'administrer par. voie orale dans une capsule par exemple de gélatine molle,afin que le goût de l'acide eicosapentaénoïque ne soit pas percept ible. De manière générale, la capsule doit avoir une dimension permettant d'administrer la dose voulue d'acide eicosapentaénoïque au moyen de une, deux ou trois capsules à chaque ingestion de sorte qu'une capsule a généralement une capacité d'environ 0,5 ml. Une autre façon de dissimuler le goût de l'acide consiste

  
à le mettre en composition à l'état d'émulsion s'administrant par voie orale. L'acide pourrait être aussi mis en composition de manière à être spontanément émulsionnable lors de

  
la prise par voie orale ou lors de la dilution avant l'admi-

  
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par exemple l'acide pourrait être converti en une émulsion huile-dans-eau, avec un agent tensio-actif pharmaceutiqu.ement acceptable et cette émulsion pourrait être mise en émulsion dans une autre huile, comme l'huile d'arachide. En variante, l'acide peut être de même mis en composition sous forme d'émulsion eau-dans-huile, cette dernière émulsion étant elle-même émulsionnée dans de l'eau. Les émulsions des différents types pourraient être présentées sous forme de gel à usage oral ou d'émulsion ferme, comme une margarine en émulsion. D'autres façons de dissimuler le goût de l'acide sont d'absorber celuici sur un ou plusieurs supports comme le kaolin, la craie,

  
le phosphate de calcium, le sulfate de calcium, l'amidon,

  
la cellulose microcristalline, la méthylcellulose ou une autre cellulose modifiée. La poudre résultante peut être vendue telle quelle ou aromatisée et éventuellement présentée sous forme de comprimés ou capsules, chaque comprimé ou capsule contenant, par exemple, environ 0, 5 g d'acide eicosapentaénoique tel quel ou sous forme d'un dérivé solide. Les.comprimés pourraient être enrobés de sucre ou d'une pellicule.

  
les sels, par exemple les sels de sodium et de potassium, tendent aussi à être désagréables au goût et les comprimés en contenant en quantité apportant,par exemple, 0, 5 g d'acide sont de préférence enrobés d'une pellicule ou de sucre. D'autres modes d'administration par voie orale, par exemple sous forme de cachets ou de pastilles à sucer,peuvent convenir parfois aussi. Les esters ou amides peuvent être mis en composition comme l'acide ou les sels, suivant le

  
fait qu'ils sont liquides ou solides respectivement.

  
Si la chose est désirée, une composition à usage

  
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gement lent, par exemple sous forme de perles ou de microcapsules dans une capsule.

  
Une composition destinée à l'administration intramusculaire peut être présentée sous forme d'émulsion: Une composition destinée à l'injection intraveineuse peut être présentée sous forme d'un mélange qui s'émulsionne spontanément lors de l'injection.

  
En vue de l'administration par voie rectale, l'acide ou son dérivé peut être présenté sous forme d'un suppositoire dans une base pour suppositoire qui est un triglycéride comme le beurre de cacao ou le produit vendu sous le nom de Witepsol  <EMI ID=59.1> 

  
tine molle.

  
Les compositions peuvent être présentées avec avantage sous forme de dose unitaire et préparées suivant les différents procédés connus en pharmacie. Tous ces procédés consistent à associer le composé actif au véhicule, lequel consiste en un ou plusieurs constituants accessoires. En règle générale, les compositions sont préparées par association intime et uniforme du composé actif avec des véhicules liquides et/ou avec des véhicules solides finement divisés, puis, si nécessaire,par façonnage du produit à la forme voulue. Aux fins de l'invention, par "véhicule", il convient d'entendre aussi un véhicule se prêtant à l'administration à un patient et enveloppant sensiblement le composé actif, par exemple le corps d'une capsule ou l'enrobage d'un comprimé enrobé.

  
Pour une amélioration de l'efficacité de l'acide eicosapentaénoïque, la composition peut aussi comprendre un inhibiteur de la phosphodiestérase,comme la théophylline

  
ou le dipyridamole.

  
L'invention a donc pour objet: <EMI ID=60.1>  de ses sels, esters ou amides pharmaceutiquement acceptables administré pour le traitement ou la prophylaxie d'un état thrombo-embolique; <EMI ID=61.1>  pharmaceutiquement acceptables,outre un véhicule pharmaceu-

  
 <EMI ID=62.1> 

  
 <EMI ID=63.1> 

  
sapentaénoique (c'est-à-dire tel quel ou sous forme de dérivé); 

  
 <EMI ID=64.1> 

  
pharmaceutiquement acceptables et un véhicule pharmaceutiquement acceptable,.la composition étant sensiblement exempte de vitamines ;
(d) une composition comprenant de l'acide (tout Z)-5,8,11,1&#65533;,
17-eicosapentaénoique ou un de ses sels, esters ou amides pharmaceutiquement acceptables et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, la composition étant sensiblement exempte d'autres acides davantage saturés (c'est-à-dire tels quels ou sous forme de dérivés);
(e) un procédé de préparation d'une composition pharmaceutique telle que spécifiée sous (b), (c) ou (d);
(f) une margarine, un beurre ou une huile ou graisse de cui- <EMI ID=65.1> 

  
taénoique ou un de ses sels, esters ou amides en quantité apportant au moins 3% en poids d'acide eicosapentaénoique
(c'est-à-dire tel quel ou sous forme de dérivé);

  
(g) un procédé de traitement ou de prophylaxie d'un état thromboembolique chez un mammifère,y compris l'homme,suivant lequel

  
on administre en quantité thérapeutique ou prophylactique

  
 <EMI ID=66.1> 

  
sapentaénoique ou un de ses sels, esters ou amides pharmaceutiquement acceptables;

  
 <EMI ID=67.1> 

  
d'une composition telle que spécifiée sous (b), (c) ou (d);
(i) un procédé pour augmenter le temps de saignement d'un mammifère, y compris l'homme, suivant lequel on administre

  
 <EMI ID=68.1> 

  
pentaénoïque ou d'un de ses sels, esters ou amides;

  
(j) un procédé pour disperser ou désagréger un thrombus ou caillot de thrombocytesdéjà formé chez un mammifère, y compris l'homme, suivant lequel on administre une quantité effi-

  
 <EMI ID=69.1> 

  
d'un de ses sels, esters ou amid.es;.

  
(k) un procédé pour modifier et/ou maîtriser l'adhérence des thrombocytes à un tissu endommagé chez un mammifère,

  
y compris l'homme, suivant lequel on administre une quantité

  
 <EMI ID=70.1> 

  
ou d'un de ses sels, esters ou amides;

  
(1) un procédé pour rendre les thrombocytes chez un mammi-

  
 <EMI ID=71.1> 

  
et/ou plus faciles à se séparer les uns des autres., suivant lequel on administre une quantité efficace d'acide (tout Z)-

  
 <EMI ID=72.1> 

  
ou amides;

  
(m) un procédé tel que spécifié sous (i) à (1), exécuté au moyen d'une composition telle que spécifiée sous (b), (c) ou
(d) ;

  
(n) un procédé pour entretenir la circulation extracorporelle du sang d'un mammifère, y compris l'homme, en dérivant

  
le sang de l'organisme et en l'y renvoyant, suivant lequel

  
on administre dans le sang, à l'intérieur ou à l'extérieur

  
du corps, une quantité efficace pour empêcher sensiblement

  
ou complètement l'agrégation des thrombocytes , diacide

  
 <EMI ID=73.1> 

  
esters ou amides et

  
(o) un procédé pour rétablir ou entretenir le flux sanguin normal dans un vaisseau sanguin partiellement occlus chez un mammifère,y compris l'homme, suivant lequel on administre

  
 <EMI ID=74.1> 

  
de ses sels, esters ou amides.

  
L'invention est illustrée par les exemples suivants. 

  
 <EMI ID=75.1> 

  
On collecte ,dans 1 partie de citrate de sodium 0,11M,9 parties de sang humain prélevé à la veine anté-cubitale chez des volontaires n'ayant pas consommé ,d'acide acétylsalicylique pendant les deux semaines précédentes. On sépare le plasma du sang par centrifugation pendant 5 minutes à 160 g pour obtenir un plasma riche en thrombocytes.

  
On effectue des études sur les thrombocytes en uti-

  
 <EMI ID=76.1> 

  
 <EMI ID=77.1> 

  
 <EMI ID=78.1> 

  
ou de la thrombine dans un appareil de coagulation,par exemple celui vendu sous le nom de "Fibromate" (Bie. & Bernsted Copenhagen, Danemark).

  
On enregistre l'agrégation des thrombocytes par turbidimétrie et néphélométrie dans une cuvette cylindrique contenant 300/ulitres de plasma riche en thrombocytes à 37[deg.]C qu'on agite à 800 tours par minute au moyen d'un agitateur magnétique ou en variante, on utilise un agrégomètre à deux

  
 <EMI ID=79.1> 

  
main riche en thrombocytes en concentrations 1,33" 2,66 et

  
 <EMI ID=80.1> 

  
à la concentration en acide arachidonique, à savoir 0,33, 0,66 et 1,3 mM. Aux concentrations inférieures de l'intervalle de 0,01 à 0,5 mM, l'acide eicosapentaénoïque inhibe quelque peu l'agrégation des thrombocytes induite par l'adénosine

  
 <EMI ID=81.1> 

  
L'effet inhibiteur exercé sur l'agrégation par l'acide eicosapentaénoïque 0,065 mM n'est cependant pas dû à sa conversion par la cyclo-oxygénase des thrombocytes, du fait que cette inhibition se manifeste sur des thrombocytes

  
 <EMI ID=82.1> 

  
à l'égard de l'acide arachidonique 0,065 mM,mais sont agrégés par la thrombine en quantité de 0,04 à 0,4 U/ml et que l'effet inhibiteur se manifeste aussi à la première phase de l'agrégation induite par l'adénosine diphosphate 2 à ?/uN sur des thrombocytes traités au moyen d'acide acétylsalicylique.

  
 <EMI ID=83.1> 

  
On prélève sur des rats fraîchement sacrifiés du tissu vasculaire (aorte thoracique et abdominale). On hache

  
à peu près 100 mg de tissu qu'on lave avec du tampon au tris-
(hydroxyméthyl)aminométhane glacé (0,05 M,d'un pH de 7,5). Après avoir vérifié que le tissu haché est capable d'inhiber l'agrégation des thrombocytes induite par la thrombine lorsqu'il est introduit dans la cuvette contenant les thrombocytes, on lave le tissu à quelques reprises avec 10 ml de tampon au tris (hydroxyméthyl) aminométhane glacé pour éliminer le sang et les thrombocytes adhérents. On congèle ensuite rapidement le tissu à -60[deg.]C, on le broie en une poudre grossière et on le remet en suspension dans cinq volumes de tampon

  
au tris (hydroxyméthyl) aminométhane. On conserve cette suspension de tissu vasculaire sur de la glace pendant -les expériences et on l'utilise pour les études par incubation. On prélève du sang humain à la veine anté-cubitale chez des volontaires ayant consommé de l'acide acétylsalicylique à raison de 1,5 g par jour pendant les 3 jours précédant le prélèvement. On sépare les thrombocytes lavés du sang comme décrit par Vargaftig B.B., Tranier Y. et Chignard M., (Prostaglandins, 1974, 8, 133). On exécute les essais d'agrégation comme dans l'exemple 1.

  
Pour apprécier si la suspension de tissu vasculaire  <EMI ID=84.1> 

  
 <EMI ID=85.1> 

  
taglandines qui pourraient être utilisés par le tissu vasculaire pour produire un inhibiteur de l'agrégation. De plus, on prend des thrombocytes lavés pour éviter toute possibilité que le tissu vasculaire utilise de l'acide arachidonique contenu dans le plasma. Dans ces conditions, l'inhibition de l'agrégation pourrait être induite par le tissu vasculaire uniquement à partir de précurseurs endogènes ou de précurseurs exogènes ajoutés.

  
La première suspension de tissu vasculaire (10 à
50/ulitres) décrite ci-dessus inhibe l'agrégation induite

  
 <EMI ID=86.1> 

  
cet effet inhibiteur en lavant le tissu à plusieurs reprises
(5 à 20 fois) par centrifugation (30 secondes à la centrifugeuse Eppendorff), rejet du liquide surnageant et remise en suspension dans 0,5 ml de tampon frais. Le niveau général d'activité inhibitrice contre la phase primaire d'agrégation induite par l'adénosine diphosphate (2 à 5/uM) ou l'agréga-

  
 <EMI ID=87.1> 

  
peut être rétabli par addition de tissu vasculaire lavé et

  
 <EMI ID=88.1> 

  
chez des volontaires ayant consommé de l'acide acétylsalicylique. En traitant au préalable au moyen d'indométhacine 

  
 <EMI ID=89.1> 

  
empêche l'activité contre l'agrégation d'apparaître. Par conséquent, la cyclo-oxygénase dans la paroi des vaisseaux

  
 <EMI ID=90.1> 

  
tivité contre l'agrégation. 

  
 <EMI ID=91.1>  avec du tissu vasculaire lavé ne fait apparaître aucun agent propre à inhiber l'agrégation et on peut en conclure que l'acide dihomo-y-linolénique ne déplace pas l'acide arachidonique.

  
EXEMPLE 3 -

  
Effet de l'acide eicosapentaénoïque sur le temps de saignement du.lapin

  
On anesthésie au moyen de pentobarbitone sodique

  
en doses de 40 mg/kg quatre lapins mâles blancs de Nouvelle Zélande (Ranch) d'un poids de 2,0 à 2,5 kg. On. insère une canule dans la veine marginale de l'oreille pour effectuer une perfusion d'acide eicosapentaénoique de 0,1 ml par minute.

  
 <EMI ID=92.1> 

  
 <EMI ID=93.1> 

  
 <EMI ID=94.1> 

  
 <EMI ID=95.1> 

  
servé sur glace et à l'abri de la lumière. On effectue des perfusions du tampon ou de l'acide eicosapentaénoique 5 minutes avant et de manière continue pendant la mesure du temps de saignement.

  
On rase soigneusement la surface intérieure de l'oreille exempte de canule. On observe l'oreille en transillumination pour que les vaisseaux sanguins soient bien visibles. Au moyen d'une lame de scalpel neuve, on effectue des coupures d'une longueur d'environ 0,4 cm et d'une profondeur suffisante pour provoquer un saignement dans les 15 secondes,dans une région exempte de vaisseau sanguin visible et parallèlement au vaisseau, sanguin le plus proche. On essore prudemment la coupure de 15 en 15 secondes avec du papier-

  
 <EMI ID=96.1> 

  
 <EMI ID=97.1> 

  
à partir du moment de l'incision jusqu'au moment où aucune tache de sang n'est plus visible sur le papier-filtre. Au cas où la coupure laisse exsuder du plasma, on considère que le saignement est arrêté au moment où l'exsudat n'a plus

  
de coloration rougeâtre. Lorsque le temps de saignement est de plus de 10 minutes, on essore la coupure toutes les
30 secondes. Le temps de saignement mentionné pour chaque dose est une moyenne de trois estimations.

  
On administre à deux lapins de l'acide acétylsalicylique en dose de 100 mg/kg par injection intraveineuse

  
 <EMI ID=98.1> 

  
servant de témoins 0,5 ml de tampon au tris(hydroxyméthyl)-

  
 <EMI ID=99.1> 

  
que salée. Les résultats sont rassemblés aux tableaux I et II.

TABLEAU I

  

 <EMI ID=100.1> 
 

TABLEAU II

  
Lapins ayant reçu en injection intraveineuse de l'acide acétyl-

  
 <EMI ID=101.1> 

  

 <EMI ID=102.1> 


  
* Moyenne de trois estimations

  
** Débit de perfusion de 0,2 ml par minute.

  
Par conséquent, lorsqu'ils ont reçu de l'acide acétylsalicylique, les lapins n'accusent pas ou guère d'augmentation du temps de saignement.

  
Un lapin auquel on administre de l'acide eicosapen-

  
 <EMI ID=103.1> 

  
compte tenu du titre plus faible de l'acide. EXEMPLE 4 -

  
 <EMI ID=104.1> 

  
chez le chien

  
la perfusion intraveineuse d'acide eicosapentaénoïque en dose de 0,2 à 2 mg par kg et par minute provoque une hypotension systémique et pulmonaire chez le chien anesthésié au chloralose. On sait que des bandes de tissu d'artère coronaire de boeuf et d'artère coeliaque de lapin isolées et baignées dans du sang sont mises en état de relaxation par

  
 <EMI ID=105.1> 

  
gation (concentration de 5 à 10 ng/ml). Lors d'un traitement au moyen d'antagonistes des catécholamines et de l'angiotensine II, ces tissus préparés pour les essais biologiques et baignés dans du sang artériel atteignent l'état de relaxation

  
 <EMI ID=106.1>  0,6 à 2 mg par kg et par minute chez deux chiens, dans une mesure qui, aux doses supérieures, est équivalente à celle atteinte

  
 <EMI ID=107.1> 

  
Chez l'un des chiens auxquels de L'indométhacine a été administrée en dose de 5 mg par kg, une perfusion ultérieure d'acide eicosapentaénoîque en dose de 2 mg par kg et par minute pendant 10 minutes provoque encore de 1'hypotension,mais ne fait se dégager aucun agent actif décelable dans les tissus préparés pour les essais biologiques.

  
 <EMI ID=108.1> 

  
On anesthésie des lapi.ns de 2 à 3 kg au moyen de pentobarbitone sodique en dose de 30 mg par kg et on leur ad-

  
 <EMI ID=109.1> 

  
dissèque une artère carotide et on amène du sang à l'extérieur de l'organisme pour le débiter à l'aide d'une pompe péristaltique pour arroser un ruban de collagène prélevé au tendon d'A.chille d'un autre lapin. L'écoulement du sang sur le ruban de tendon fait augmenter le poids du ruban en 35 minutes jusqu'à un maximum de 180 à 200 mg. Toute diminution ultérieure de poids est due à une désagrégation des thrombocytes.

  
On administre de l'acide eicosapentaénoïque en

  
 <EMI ID=110.1> 

  
traveineuse à cinq lapins chez lesquels l'acide induit -un léger effet désagrégateur (environ 20 mg) . Cet effet de

  
 <EMI ID=111.1> 

  
tion préalable d'acide acétylsalicylique aux lapins en doses de 150 mg par kg.

  
EXEMPLE 6 -

  
On stérilise une capsule de gélatine molle d'une capacité d'environ 0,5 ml et on la remplit d'une composi-

  
 <EMI ID=112.1>  d'acide arachidonique, environ 2% d'acide dihomo-y-linclénique et pour le reste de l'acide palmitique et de l'acide oléique. On ferme ensuite la capsule.

  
.La capsule peut être transparente ou colorée et au lieu d'être molle peut être faite de gélatine dure ou

  
de poly(méthacrylate de méthyle) par exemple.

  
EXEMPLE 7 -

  
On prépaie des comprimés de la composition suivante:

  

 <EMI ID=113.1> 


  
On enrobe les comprimés de sucre,mais d'autres agents d'enrobage conviennent aussi.

  
EXEMPLE 8 -

  
La composition de l'exemple 7 présentée sous forme de poudre non comprimée convient pour remplir des capsules de gélatine dure contenant 600 mg de composition.

  
EXEMPLE 9 -

  
On mélange intimement environ 250 g d'une margarine molle classique avec 8 g d'acide eicosapentaénoïque jusqu'à consistance uniforme.

  
EXEMPLE 10 -

  
On administre de l'acide acétylsalicylique en dose de 10 ou de 100 mg par kg par voie intraveineuse à des lapins mâles de Nouvelle Zélande de 2 à 2,5 kg. Aux animaux d'un groupe témoin, on n'administre que le véhicule liquide servant à la dissolution de l'acide acétylsalicylique. On anes-

  
 <EMI ID=114.1>   <EMI ID=115.1>  celui utilisé dans l'exemple 3) à différentes doses, à savoir

  
 <EMI ID=116.1> 

  
effectue les mesures en double ou en triple pour chaque situation. Les résultats obtenus sont rassemblés au tableau III. L'acide acétylsalicylique en dose de 10 mg par kg fait augmenter un peu mais significativement (p < 0,0001) le temps

  
de saignement, la moyenne des mesures effectuées en triple

  
 <EMI ID=117.1> 

  
 <EMI ID=118.1> 

  
condes. La valeur de 288 &#65533; 11 secondes observée chez les animaux recevant une grande dose d'acide acétylsalicylique,à sa-

  
 <EMI ID=119.1> 

  
que chez le témoin.

  
Chez les animaux ne recevant pas d'acide acétylsa-

  
 <EMI ID=120.1> 

  
 <EMI ID=121.1> 

  
ment (p < 0,00001). On observe une nouvelle augmentation

  
du temps de saignement aux doses de perfusion plus élevées, la course se terminant par un plateau à environ 1.000 secondes

  
 <EMI ID=122.1> 

  
Chez les animaux ayant reçu l'acide acétylsalicylique en dose de 10 ou de 100 mg par kg, l'acide eicôsapentaénoique ne permet pas de modifier de manière significative le temps de saignement. 

  
 <EMI ID=123.1> 

  
 <EMI ID=124.1> 

  

 <EMI ID=125.1> 


  
Les temps de saignement moyens sont exprimés en secondes avec indication de l'écart type.

  
 <EMI ID=126.1> 

  
En opérant comme dans l'exemple 3, on observe les effets de différents acides gras sur l'agrégation, induite

  
 <EMI ID=127.1> 

  
que (composé analogue à la prostaglandine EU) de la Société Upjohn, des thrombocytes traités au moyen d'acide acétylsalicylique dans du plasma humain riche en thrombocytes.

  
Pour chaque essai, on met l'acide gras à incuber avec les thrombocytes pendant environ 6 minutes avant d'ajouter les composés analogues de la prostaglandine IL), la concentration en acide gras étant environ 1,5 mM. Les inhibitions observées six minutes après l'addition du composé analogue à la prostaglandine % sont précisées au tableau IV.

TABLEAU IV

  

 <EMI ID=128.1> 
 

  
 <EMI ID=129.1> 

  
 <EMI ID=130.1> 

  
IL convient de noter l'acide (tout -Z)-9,12.15-

  
 <EMI ID=131.1> 

  
 <EMI ID=132.1> 

  
comme inhibiteurs de l'agrégation par comparaison avec l'acide eicosapentaénoïque. 

REVENDICATIONS. 

  
1 - Composition, caractérisée en ce qu'elle comprend

  
 <EMI ID=133.1> 

  
dérivé.



  Fatty acid and its derivatives for treatment or prophylaxis

  
thromboembolic conditions.

  
The present invention relates to the treatment or

  
prophylaxis of thromboembolic conditions

  
It is known that many substances can influence the aggregation of thrombocytes, but from the

  
knowledge of the effects of a particular substance on thrombocyte aggregation in vitro, it is impossible to predict

  
whether or not this substance will have an inhibitory effect or. stimulator (or else neutral) on thrombus formation in vivo.

  
This is largely the case because we do not know what initiates the formation of the thrombus or embolus during, for example, a stroke or a myocardial infarction. An example of this unpredictable nature is given by acetylsalicylic acid which is a good inhibitor of thrombocyte aggregation in vitro and in vivo but which is not an agent.

  
, anti-thrombotic and which in particular is not able to

  
disperse an already formed thrombus.

  
MJSilver, JB Smith et al. (Prostaglandins December 1973, volume 4, n [deg.] 6, pages 863 to 875) have shown that many compounds can influence in vitro the aggregation effects of thrombocytes exerted by the arachidonic acid which is an essential fatty acid in the diet

  
 <EMI ID = 1.1>

  
is also called C20: 4 acid or n-6 acid, because it is

  
a fatty acid of 20 carbon atoms comprising 4 carbon-carbon double bonds in cis, the one occupying the position of the upper number being at a distance of 6 bonds from the end of the molecule furthest from the carboxyl radical, n being the number of carbon atoms in

  
the right chain). These in vitro tests on citrated human plasma rich in thrombocytes do not make it possible to establish an unambiguous relationship with the effect in vivo in a mammal, including man, tending to form a thrombus.

  
M.J. Silver et al. observed during their experiments that the aggregation of thrombocytes induced by arachidonic acid, in the form of sodium arachidonate, can be inhibited by numerous substances, in particular adenosine; the

  
 <EMI ID = 2.1> <EMI ID = 3.1>

  
than. They also observed that the aggregation of thrombocytes induced by collagen and a second wave of aggregation of thrombocytes induced by adenosine diphosphate could be inhibited by &#65533; -naphthol, acetylsalicylic acid,

  
 <EMI ID = 4.1>

  
sapentaenoic and human albumin. Silver et al. further established that different fatty acids do not induce. by themselves the aggregation of thrombocytes. The acids they

  
 <EMI ID = 5.1>

  
enoic acid, 5,8,11,14-eicosatetraenoic acid, 4,7,10 acid,
13,16,19-docosahexaenoic, linolenic acid, linoleic acid, oleic acid, arachidic acid, stearic acid

  
 <EMI ID = 6.1>

  
It should be noted that many of the compounds

  
 <EMI ID = 7.1>

  
do not lend themselves to therapeutic application. For example, adenosine is absorbed quickly by cells

  
and would not last long enough in the body to be interesting. (3-Naphthol is toxic because it is

  
a phenolic compound. Albumin is not suitable because it would induce an unwanted load on the kidneys and damage the glomeruli. Because nonsteroidal anti-inflammatory agents frequently cause gastric injury, it is best to avoid them in any prophylactic treatment requiring oral administration.

  
long term as it is frequently desirable in cardiovascular therapy.

  
Silver et al. suggest the conclusion that arachidonic acid plays an important role in hemostasis and <EMI ID = 8.1>

  
different compounds and in particular by albumin. They suggest that albumin could be an important factor in the regulation of hemostasis and that the ability of albumin to combine arachidonic acid in the blood

  
outstanding could be the mechanism by which it inhibits the effects of arachidonic acid. They further suggest that the exact ability of albumin to combine arachidonic acid may depend, for example, on the accessibility of binding sites and on competition between arachidonic acid and other fatty acids. and substances of other kinds for these sites. It is therefore to be assumed that as competitive agents and in particular. other fatty acids become more abundant, the level of free arachidonic acid increases, as does the probability of thrombocyte aggregation and therefore, if these phenomena are related, also the probability of thrombus formation. This observation suggests that other fatty acids should be removed from the diet.

  
Different experiments aimed at determining in humans the effects exerted by various fatty acids on conditions involving thrombus formation have not made it possible to draw clear conclusions.

For example, the research program called

  
 <EMI ID = 9.1>

  
before Silver's work. et al. and was published by

  
 <EMI ID = 10.1>

  
Lab. Invest. 22, Suppl. 105, 1-20, (1968). This study compares the effects on human mortality rates

  
due to various coronary heart conditions, in particular myocardial infarction, by two diets, one of which includes sunflower oil (approximately 63% linoleic acid) <EMI ID = 11.1>

  
linolenic), the consumption being 10 ml of oil per day. It appears that the risk is greater in participants consuming linolenic acid which is more highly unsaturated than in those consuming linoleic acid.

  
Linoleic acid and, in rats, eicosapenta & noic acid and docosahexaenoic acid are known to lower plasma cholesterol levels, which are believed to be related to atherosclerosis. Atherosclerosis is seen frequently in patients who have suffered from a myocardial infarction. However, it does not seem to exist

  
causal relationship due to the fact that Robertson [lancet, (1959), i,
44] observed that in Jamaica, extensive atherosclerosis, although observed regularly in the local population during

  
autopsy, is rarely associated with secondary thrombi or myocardial infarction. In addition, myocardial infarction can manifest itself in the absence of significant atherosclerosis.

  
 <EMI ID = 12.1>

  
 <EMI ID = 13.1>

  
to inhibit thrombosis is dihomo-Y-linolenic acid. This

  
 <EMI ID = 14.1>

  
which is a potent inhibitor of thrombocytic function &#65533; silent, and has been found to be of interest as an antithrombotic agent. In accordance with their predictions, these authors observed

  
 <EMI ID = 15.1>

  
 <EMI ID = 16.1>

  
in six of the eight volunteers an increase (on average 33%) in the production of the unwanted prostaglandin E2. In addition, these results do not show a clear relationship with the doses administered. These authors also observed a decrease in the neutralization activity of heparin manifested by the plasma and that this activity is high in

  
 <EMI ID = 17.1>

  
what extent of heparin neutralizing activity reflects a fundamental pathological mechanism, so that its relationship to thrombosis is not elucidated

  
The authors of the article hypothesize that perhaps

  
 <EMI ID = 18.1>

  
be as or more effective than major dietary interventions in preventing and treating these conditions, in this case atherosclerosis and damage to the coronary arteries. Nevertheless, the author of an editorial in the same edition of this

  
 <EMI ID = 19.1>

  
that we can indicate whether the results achieved by McNïcol

  
and his colleagues have some clinical application.

  
The reasons for this caution lie in the ignorance of the mechanisms involved in thrombotic situations in vivo when the investigations have been carried out only with collected blood.

  
This at least partially interesting work on

  
 <EMI ID = 20.1>

  
It is often said that the unsaturated fatty acids in the diet are more favorable than the more saturated analogous fatty acids, especially since linoleic acid and linolenic acid which are even less saturated can be

  
 <EMI ID = 21.1>

  
forced by the fact that arachidonic acid which is unwanted.

  
 <EMI ID = 22.1>

  
carbon-carbon sounds in cis).

  
We have now surprisingly discovered that among the many fatty acids, the acid (all Z) -5,8,11,

  
 <EMI ID = 23.1>

  
after simply thrombosis. Examples of situations in which the Applicant's discovery may be useful are the treatment or prophylaxis of cardiovascular conditions accompanied by the formation of one or more thrombi, such as myocardial infarction, apoplexy or thrombosis. deep vein during procedures

  
 <EMI ID = 24.1>

  
eicosapentaenoic acid) injected intravenously into rabbits increases their bleeding time, thus demonstrating a decrease in the tendency of the blood to form a thrombus or to adhere to damaged tissues, which therefore makes it possible to modify and / or control wound healing. When perfused into the rabbit lung, eicosapentaenoic acid elicits the appearance of a substance which is a potent inhibitor of thrombocyte aggregation.

  
 <EMI ID = 25.1>

  
unusual and important to disperse or break up thrombi and clots of thrombocytes already formed. For example, on. drops blood collected from

  
a rabbit anesthetized on a collagen strip that is subjected

  
by continuous weighing and taken from the Achilles tendon of another rabbit. As the blood flows to the surface

  
of the collagen band, thrombocytes and other cells adhere to the collagen forming a thrombus therein until the weight increases. Blood returns to the first rabbit by gravity - Eicosapentaenoic acid added by infusion to the blood flowing over the collagen band loaded with the thrombus induces a drop in weight, demonstrating that at least some of the thrombocytes and other cells

  
are released from the aggregate formed on the collagen band.

  
The ability of eicosapentanoic acid to disperse or disaggregate a thrombus is important for the treatment of thrombosis as well as for its prophylaxis. A thrombus forming in an artery or vein reduces blood flow
(which would be completely stopped in the event of complete occlusion of the vessel). The decrease in blood flow causes ischemia which is painful. The reduced blood flow is, however, still able to induce therapeutic agents to the end.

  
 <EMI ID = 26.1>

  
residual and eventual blood flow from the collateral circulation can bring eicosapentaenoic acid to the site of formation.

  
 <EMI ID = 27.1>

  
bolites can break up the thrombus and restore normal blood flow. The invention therefore provides a method for restoring normal blood flow in a partially occluded blood vessel by administration of eicosapentaenoic acid. Administration can also be prophylactic for maintaining the blood vessels in a state of non-occlusion.

  
The Applicant has also discovered that human thrombocytes, after a prior incubation with eicosapentaenoic acid then incubation with arachidonic acid and finally stimulation with adenosine diphosphate, aggregate less easily than when the prior incubation is carried out. with arachidonic acid. This result suggests to the Applicant that if human thrombocytes could

  
 <EMI ID = 28.1>

  
less susceptible to adenosine diphosphate stimulation and therefore less likely to form thrombi.

  
Although the validity of the invention is not linked to that of the hypothesis, the Applicant is brought

  
to believe that in vivo, not only eicosapentaenoic acid, unlike arachidonic acid, is an inhibitor of thrombocyte aggregation, but also. its metabolites, which are probably prostaglandins of the A-17 series, also have an inhibitory effect on thrombocyte aggregation or at worst a reversible aggregation effect while many of the metabolites of arachidonic acid,

  
 <EMI ID = 29.1>

  
irreversible aggregation on thrombocytes. To the knowledge of the Applicant, this clear anti-thrombotic profile of eicosapentaenoic acid is the cause of its problems.

  
 <EMI ID = 30.1>

  
for therapeutic or prophylactic purposes varies with the mode of administration and the nature of the condition being treated, but is generally at least 1 g and preferably 1.5

  
 <EMI ID = 31.1>

  
per day. This dose is suitable for humans with an average weight of 70 kg and is generally adapted according to the weight for humans of another weight or for animals, i.e. it is approximately 20 at 100 mg / kg.

  
Eicosapentaenoic acid can be added to circulating extracorporeal blood to substantially or completely prevent thrombocyte aggregation induced by contact with the device or other material which is not body tissue.

  
As is known, eicosapentaenoic acid is found in oysters and other marine organisms, in cod liver oil and in other oils, such as menhaden oil, from which it can be extracted following various known and described methods. Eicosapentaenoic acid can

  
 <EMI ID = 32.1>

  
thesis in organic chemistry. The method of acquisition chosen depends on the raw material resources and the relative prices of the various means making it possible to obtain eicosapentaenoic acid of the quality suitable for human or veterinary medicine. During the extraction or preparation, the isomerization of the cis double bonds to double bonds in trains should be avoided or kept low.

  
The quantities of eicosapentaenoic acid in natural products or those capable of easy extraction, such as cod liver oil or menhaden oil, are such that it would not be possible to administer directly.

  
 <EMI ID = 33.1>

  
also administering too many food calories in the form of other fatty acids. In addition, because the liver oil

  
cod (like other fish oils) is rich

  
in vitamin A (at least 850 international units per gram) and in vitamin D (at least 85 international units per gram), a quantity of cod liver oil providing the necessary quantity of eicosapentaenoic acid would lead to the administration of quantities of these vitamins greatly exceeding

  
the recommended daily dose for humans and induce hyper-vitaminosis - Indeed, the recommended daily dose is 5,000 international units of vitamin A and

  
 <EMI ID = 34.1>

  
United States of America, the competent services (Food and Drugs Administration) specified that daily consumption should not exceed 10,000 international units for

  
 <EMI ID = 35.1>

  
Medical prescription is required for higher doses.

  
Therefore, to avoid complications that could result from consumption of vitamins by the patient both by personal decision and for other medical reasons, the Applicant prefers a composition which

  
 <EMI ID = 36.1>

  
pharmaceutically acceptable esters or amides and a pharmaceutically acceptable carrier, but which is substantially free of vitamins.

  
Due to the complex and to a certain extent uncertain effects of acids more saturated than eicosapentaenoic acid, the Applicant prefers a composition which

  
 <EMI ID = 37.1>

  
pharmaceutically acceptable esters or amides and a pharmaceutically acceptable carrier, but which is substantially free from other more saturated acids or their salts, esters or amides. Eicosapentaenoic acid of natural origin, for example from fish oils, contains a certain proportion of (all Z) 7,10,13,16,19-docosapentaenoic acid (hereinafter referred to as docosapentaenoic acid) and / or

  
 <EMI ID = 38.1>

  
hereinafter docosahexaenoic acid) (either as such or in the form of derivatives such as their esters, salts or amides). It is not necessary to try to eliminate these equally or more unsaturated acids (or their derivatives), because they

  
 <EMI ID = 39.1>

  
but are less active.

  
The consumption. exaggerated caloric value indicated above in case, for example, cod liver oil

  
or menhaden oil would be the source of eicosapentaenoic acid, can be substantially avoided, although some- <EMI ID = 40.1>

  
of food may remain necessary, by administra-

  
 <EMI ID = 41.1>

  
 <EMI ID = 42.1>

  
acceptable and a pharmaceutically acceptable vehicle, the fatty acids of the composition being formed to

  
 <EMI ID = 43.1>

  
taenoic acid should be administered without modification of the regimen. patient, the acid (as well as docosapentaenoic acid

  
 <EMI ID = 44.1>

  
fatty acids of the administered dose.

  
The fatty acids preferably do not contain

  
 <EMI ID = 45.1>

  
to the maximum. For example, a preferred grade of eico- acid

  
 <EMI ID = 46.1>

  
arachidonic acid and 2% dihomo-Y-linolenic acid

  
 <EMI ID = 47.1>

  
docosapentaenoic, palmitic acid or oleic acid, in addition to other pharmaceutically acceptable fatty acids. In case vitamins are present, as they can be, their. amount: is preferably not such that the recommended daily consumption is exceeded.

  
The compositions used according to the invention should also. be free from saturated fatty acids and their salts, esters or amides. Preferably, the compositions are free from unsaponifiable agents.

  
 <EMI ID = 48.1>

  
with a titre of at least 50% and preferably at least 90% based on fatty acids, it should be possible to avoid '.1:! the significant modification of the patient's diet,

  
i except perhaps a small reduction in the caloric value of food to compensate for an additional calorie intake '

  
by eicosapentaenoic acid (and other fatty acids). However, if the thing is preferred, it would be possible to administer :. '! eicosapentaenoic acid by replacing, for example, butter and / or ordinary margarine by a special margarine, for example of the emulsion type, composed in such a way

  
that by normal consumption the patient takes the required amount of eicosapentaenoic acid. Cooking oils and fats can likewise be composed so as to contain

  
 <EMI ID = 49.1>

  
Eicosapentaenoic acid (and other acids) should not be used in the form of the acid itself, but can be used in the form of its pharmaceutically acceptable salts, esters or amides (the amount of which must provide the equivalent amount acid). Esters or amides which can be converted in vivo to acid and other pharmaceutically acceptable materials are suitable, the preferred ester being the triglyceride or the ethyl ester, although the methyl ester may also probably be suitable. The alcohol used for the esterification of the acid is preferably non-polymeric and preferably has no more than. three hydroxyl radicals per molecule.

   Further, the ester used is preferably not a cholesterol ester because it could result in the release of a certain amount of cholesterol which could increase the level of cholesterol in the serum. For the same reason, the compositions of the invention are preferably free from cholesterol, either as such or in the form of a derivative which can be converted into cholesterol in the body of the patient. Preferred salts are sodium and potassium salts or <EMI ID = 50.1>

  
mentally unsaturated, it is, like its derivatives, easily oxidized and the compositions containing it preferably also contain antioxidants such as butylated hydroxytoluene, butylated hydroxyanisole, propyl gallate,

  
 <EMI ID = 51.1>

  
Certain antioxidants can also contribute to the anti-thromboembolic effect.

  
Although it is preferable to administer the acid

  
 <EMI ID = 52.1>

  
active) pax oral in. Due to the convenience of this mode of administration, the active compound can be administered by any route which allows its successful absorption, for example.

  
 <EMI ID = 53.1>

  
milk or intravenous), rectally or also vaginally in women.

  
It is possible to administer the active compound

  
as such as a chemical compound or as a simple mixture of components, but it is preferable to form pharmaceutical compositions thereof. The pharmaceutical compositions of the invention which are used in human and veterinary medicine comprise the active compound as defined above with one or more acceptable vehicles and optionally other therapeutic agents. The vehicle (s) must be "acceptable" in the sense that they must be compatible with the other constituents of the composition and cannot harm the patient. Compositions which contain eicosapentaenoic acid as such are <EMI ID = 54.1 >

  
award-winning capsules or capsules, of the composition generally contain 0.25

  
 <EMI ID = 55.1>

  
Compositions which are suitable are in particular those suitable for oral, rectal, vaginal or parenteral administration (in particular subcutaneous, intramuscular and intravenous).

  
 <EMI ID = 56.1>

  
dit is a liquid and is not palatable, it is best to administer it by. orally in a capsule, for example of soft gelatin, so that the taste of eicosapentaenoic acid is not perceptible. Generally, the capsule should be of a size to deliver the desired dose of eicosapentaenoic acid by one, two or three capsules on each ingestion so that one capsule generally has a capacity of about 0.5 ml. . Another way to disguise the taste of acid is

  
in putting it in the form of an emulsion for oral administration. The acid could also be put into a composition so as to be spontaneously emulsifiable during

  
take orally or when diluted before administration

  
 <EMI ID = 57.1>

  
for example the acid could be converted to an oil-in-water emulsion, with a pharmaceutically acceptable surfactant and this emulsion could be emulsified in another oil, such as peanut oil. As a variant, the acid can likewise be put into a composition in the form of a water-in-oil emulsion, the latter emulsion itself being emulsified in water. Emulsions of the different types could be presented as a gel for oral use or a firm emulsion, such as an emulsion margarine. Other ways to hide the taste of acid are to absorb it on one or more media such as kaolin, chalk,

  
calcium phosphate, calcium sulfate, starch,

  
microcrystalline cellulose, methyl cellulose or other modified cellulose. The resulting powder can be sold as such or flavored and optionally presented in the form of tablets or capsules, each tablet or capsule containing, for example, about 0.5 g of eicosapentaenoic acid as such or as a solid derivative. The tablets may be coated with sugar or a film.

  
salts, for example sodium and potassium salts, also tend to be unpalatable and tablets containing them in an amount providing, for example, 0.5 g of acid are preferably coated with a film or sugar . Other methods of oral administration, for example in the form of tablets or lozenges to be sucked, may also sometimes be suitable. The esters or amides can be put in composition like the acid or the salts, according to the

  
fact that they are liquid or solid respectively.

  
If the thing is desired, a composition for

  
 <EMI ID = 58.1>

  
slow development, for example in the form of beads or microcapsules in a capsule.

  
A composition intended for intramuscular administration can be presented in emulsion form: A composition intended for intravenous injection can be presented in the form of a mixture which emulsifies spontaneously upon injection.

  
For rectal administration, the acid or its derivative may be presented as a suppository in a suppository base which is a triglyceride such as cocoa butter or the product sold under the name Witepsol <EMI ID = 59.1>

  
soft tine.

  
The compositions can advantageously be presented in unit dose form and prepared according to the various methods known in pharmacy. All of these methods involve combining the active compound with the vehicle, which consists of one or more accessory components. Generally, compositions are prepared by intimate and uniform association of the active compound with liquid vehicles and / or with finely divided solid vehicles, then, if necessary, shaping the product to the desired shape. For the purposes of the invention, by "vehicle" should also be understood a vehicle suitable for administration to a patient and substantially enveloping the active compound, for example the body of a capsule or the coating of. a coated tablet.

  
For improvement of the efficacy of eicosapentaenoic acid, the composition may also include a phosphodiesterase inhibitor, such as theophylline

  
or dipyridamole.

  
The subject of the invention is therefore: <EMI ID = 60.1> of its pharmaceutically acceptable salts, esters or amides administered for the treatment or prophylaxis of a thromboembolic state; <EMI ID = 61.1> pharmaceutically acceptable, in addition to a pharmaceu-

  
 <EMI ID = 62.1>

  
 <EMI ID = 63.1>

  
sapentaenoic (i.e. as such or as a derivative);

  
 <EMI ID = 64.1>

  
pharmaceutically acceptable and a pharmaceutically acceptable carrier, .the composition being substantially free of vitamins;
(d) a composition comprising acid (any Z) -5,8,11,1 &#65533;,
17-eicosapentaenoic or a pharmaceutically acceptable salt, ester or amide thereof and a pharmaceutically acceptable carrier, the composition being substantially free of other more saturated acids (i.e. as such or as derivatives);
(e) a process for preparing a pharmaceutical composition as specified under (b), (c) or (d);
(f) margarine, butter or cooking oil or fat- <EMI ID = 65.1>

  
taenoic or one of its salts, esters or amides in an amount providing at least 3% by weight of eicosapentaenoic acid
(i.e. as is or as a derivative);

  
(g) a method of treatment or prophylaxis of a thromboembolic condition in a mammal, including man, wherein

  
administered in a therapeutic or prophylactic amount

  
 <EMI ID = 66.1>

  
sapentaenoic or a pharmaceutically acceptable salt, ester or amide thereof;

  
 <EMI ID = 67.1>

  
of a composition as specified under (b), (c) or (d);
(i) a method for increasing the bleeding time of a mammal, including man, whereby is administered

  
 <EMI ID = 68.1>

  
pentaenoic or one of its salts, esters or amides;

  
(j) a method for dispersing or disaggregating a thrombus or thrombocyte clot already formed in a mammal, including man, wherein an effective amount is administered.

  
 <EMI ID = 69.1>

  
one of its salts, esters or amides ;.

  
(k) a method for modifying and / or controlling the adhesion of thrombocytes to damaged tissue in a mammal,

  
including the man, according to which one administers a quantity

  
 <EMI ID = 70.1>

  
or one of its salts, esters or amides;

  
(1) a method for making thrombocytes in a mammary-

  
 <EMI ID = 71.1>

  
and / or easier to separate from each other., whereby an effective amount of acid (all Z) is administered -

  
 <EMI ID = 72.1>

  
or amides;

  
(m) a process as specified in (i) to (1), carried out by means of a composition as specified in (b), (c) or
(d);

  
(n) a method for maintaining the extracorporeal circulation of blood from a mammal, including man, by deriving

  
the blood of the body and returning it, whereby

  
it is administered into the blood, inside or outside

  
of the body, an amount effective to substantially prevent

  
or completely aggregation of thrombocytes, diacid

  
 <EMI ID = 73.1>

  
esters or amides and

  
(o) a method for restoring or maintaining normal blood flow in a partially occluded blood vessel in a mammal, including man, which is administered

  
 <EMI ID = 74.1>

  
of its salts, esters or amides.

  
The invention is illustrated by the following examples.

  
 <EMI ID = 75.1>

  
In 1 part of 0.11M sodium citrate, 9 parts of human blood collected from the ante-cubital vein in volunteers who have not consumed acetylsalicylic acid during the previous two weeks are collected. The plasma is separated from the blood by centrifugation for 5 minutes at 160 g to obtain a plasma rich in thrombocytes.

  
Thrombocyte studies are performed using

  
 <EMI ID = 76.1>

  
 <EMI ID = 77.1>

  
 <EMI ID = 78.1>

  
or thrombin in a coagulation apparatus, for example that sold under the name "Fibromate" (Bie. & Bernsted Copenhagen, Denmark).

  
The aggregation of thrombocytes is recorded by turbidimetry and nephelometry in a cylindrical cuvette containing 300 µl of plasma rich in thrombocytes at 37 [deg.] C which is stirred at 800 revolutions per minute by means of a magnetic stirrer or alternatively. , we use an aggregometer with two

  
 <EMI ID = 79.1>

  
hand rich in thrombocytes in concentrations 1.33 "2.66 and

  
 <EMI ID = 80.1>

  
at the concentration of arachidonic acid, namely 0.33, 0.66 and 1.3 mM. At concentrations lower in the range 0.01 to 0.5 mM, eicosapentaenoic acid somewhat inhibits adenosine-induced thrombocyte aggregation

  
 <EMI ID = 81.1>

  
The inhibitory effect exerted on aggregation by 0.065 mM eicosapentaenoic acid is not, however, due to its conversion by thrombocyte cyclo-oxygenase, since this inhibition is manifested on thrombocytes

  
 <EMI ID = 82.1>

  
with respect to arachidonic acid 0.065 mM, but are aggregated by thrombin in an amount of 0.04 to 0.4 U / ml and that the inhibitory effect is also manifested in the first phase of aggregation induced by µ / uN adenosine diphosphate 2 in thrombocytes treated with acetylsalicylic acid.

  
 <EMI ID = 83.1>

  
Vascular tissue (thoracic and abdominal aorta) is taken from freshly sacrificed rats. We chop

  
approximately 100 mg of tissue which is washed with tris-
Ice-cold (hydroxymethyl) aminomethane (0.05 M, pH 7.5). After verifying that the minced tissue is capable of inhibiting the thrombocyte aggregation induced by thrombin when introduced into the cuvette containing the thrombocytes, the tissue is washed a few times with 10 ml of tris (hydroxymethyl) buffer. ice-cold aminomethane to remove blood and adherent thrombocytes. The tissue is then quickly frozen to -60 [deg.] C, ground to a coarse powder and resuspended in five volumes of buffer.

  
with tris (hydroxymethyl) aminomethane. This suspension of vascular tissue is kept on ice during the experiments and used for the incubation studies. Human blood is taken from the ante-ulnar vein from volunteers who have consumed acetylsalicylic acid at a rate of 1.5 g per day during the 3 days preceding the collection. The washed thrombocytes are separated from the blood as described by Vargaftig B.B., Tranier Y. and Chignard M., (Prostaglandins, 1974, 8, 133). The aggregation tests are carried out as in Example 1.

  
To assess whether the vascular tissue suspension <EMI ID = 84.1>

  
 <EMI ID = 85.1>

  
taglandins that could be used by vascular tissue to produce an aggregation inhibitor. In addition, washed thrombocytes are taken to avoid any possibility that the vascular tissue is using arachidonic acid from the plasma. Under these conditions, inhibition of aggregation could be induced by vascular tissue only from endogenous precursors or added exogenous precursors.

  
The first suspension of vascular tissue (10 to
50 / ul) described above inhibits induced aggregation

  
 <EMI ID = 86.1>

  
this inhibitory effect by washing the fabric repeatedly
(5 to 20 times) by centrifugation (30 seconds on the Eppendorff centrifuge), discarding the supernatant and resuspending in 0.5 ml of fresh buffer. The general level of inhibitory activity against the primary phase of aggregation induced by adenosine diphosphate (2 to 5 µM) or aggregation

  
 <EMI ID = 87.1>

  
can be restored by adding washed vascular tissue and

  
 <EMI ID = 88.1>

  
in volunteers who consumed acetylsalicylic acid. By pre-treating with indomethacin

  
 <EMI ID = 89.1>

  
prevents activity against aggregation from appearing. Therefore, the cyclooxygenase in the wall of the vessels

  
 <EMI ID = 90.1>

  
activity against aggregation.

  
 <EMI ID = 91.1> with washed vascular tissue does not show any agent capable of inhibiting aggregation and it can be concluded that dihomo-y-linolenic acid does not displace arachidonic acid.

  
EXAMPLE 3 -

  
Effect of eicosapentaenoic acid on rabbit bleeding time

  
Anesthetized with sodium pentobarbitone

  
in doses of 40 mg / kg four New Zealand white male rabbits (Ranch) weighing 2.0-2.5 kg. We. inserts a cannula into the marginal ear vein to infuse eicosapentaenoic acid at 0.1 ml per minute.

  
 <EMI ID = 92.1>

  
 <EMI ID = 93.1>

  
 <EMI ID = 94.1>

  
 <EMI ID = 95.1>

  
served over ice and protected from light. Infusions of buffer or eicosapentaenoic acid are made 5 minutes before and continuously during the measurement of bleeding time.

  
The inner surface of the cannula-free ear is carefully shaved. The ear is observed in transillumination so that the blood vessels are clearly visible. Using a new scalpel blade, cuts are made about 0.4 cm long and deep enough to cause bleeding within 15 seconds, in an area free of visible blood vessels and at the same time. to the nearest blood vessel. We carefully wring out the cut for 15 seconds in 15 seconds with paper.

  
 <EMI ID = 96.1>

  
 <EMI ID = 97.1>

  
from the moment of the incision until no blood stain is visible on the filter paper. If the cut exudes plasma, the bleeding is considered to have stopped when the exudate is no longer

  
reddish in color. When the bleeding time is more than 10 minutes, the cut is wrung out every
30 seconds. The bleeding time reported for each dose is an average of three estimates.

  
Two rabbits were given acetylsalicylic acid at a dose of 100 mg / kg by intravenous injection

  
 <EMI ID = 98.1>

  
serving as controls 0.5 ml of tris (hydroxymethyl) buffer -

  
 <EMI ID = 99.1>

  
that salty. The results are collated in Tables I and II.

TABLE I

  

 <EMI ID = 100.1>
 

TABLE II

  
Rabbits injected intravenously with acetyl-

  
 <EMI ID = 101.1>

  

 <EMI ID = 102.1>


  
* Average of three estimates

  
** Infusion rate of 0.2 ml per minute.

  
Therefore, when given acetylsalicylic acid, the rabbits showed little or no increase in bleeding time.

  
A rabbit given eicosapen-

  
 <EMI ID = 103.1>

  
taking into account the lower titer of the acid. EXAMPLE 4 -

  
 <EMI ID = 104.1>

  
in dogs

  
intravenous infusion of eicosapentaenoic acid at a dose of 0.2 to 2 mg per kg per minute causes systemic and pulmonary hypotension in the dog anesthetized with chloralosis. It is known that isolated bands of bovine coronary artery and rabbit celiac artery tissue bathed in blood are relaxed by

  
 <EMI ID = 105.1>

  
gation (concentration of 5 to 10 ng / ml). When treated with catecholamine antagonists and angiotensin II, these tissues prepared for bioassay and bathed in arterial blood reach a state of relaxation

  
 <EMI ID = 106.1> 0.6 to 2 mg per kg per minute in two dogs to an extent which, at higher doses, is equivalent to that achieved

  
 <EMI ID = 107.1>

  
In one of the dogs to which Indomethacin was administered at a dose of 5 mg per kg, a subsequent infusion of eicosapentaenoic acid at a dose of 2 mg per kg per minute for 10 minutes still causes hypotension, but does not give off any detectable active agent in tissue prepared for bioassay.

  
 <EMI ID = 108.1>

  
Lapi.ns of 2 to 3 kg are anesthetized with sodium pentobarbitone in a dose of 30 mg per kg and administered to them.

  
 <EMI ID = 109.1>

  
dissects a carotid artery and blood is pumped outside the body to be pumped using a peristaltic pump to spray a ribbon of collagen taken from the A..chilles tendon of another rabbit. The flow of blood over the tendon tape increases the weight of the tape over 35 minutes to a maximum of 180-200 mg. Any subsequent decrease in weight is due to disaggregation of the thrombocytes.

  
Eicosapentaenoic acid is administered in

  
 <EMI ID = 110.1>

  
travenous in five rabbits in which the acid induces a slight disintegrating effect (about 20 mg). This effect of

  
 <EMI ID = 111.1>

  
tion of acetylsalicylic acid to rabbits in doses of 150 mg per kg.

  
EXAMPLE 6 -

  
A soft gelatin capsule with a capacity of about 0.5 ml is sterilized and filled with a composition.

  
 <EMI ID = 112.1> of arachidonic acid, about 2% dihomo-y-linclenic acid and the balance of palmitic acid and oleic acid. The capsule is then closed.

  
.The capsule can be transparent or colored and instead of being soft can be made of hard gelatin or

  
poly (methyl methacrylate) for example.

  
EXAMPLE 7 -

  
Tablets of the following composition are prepaid:

  

 <EMI ID = 113.1>


  
The tablets are coated with sugar, but other coating agents are also suitable.

  
EXAMPLE 8 -

  
The composition of Example 7 presented in the form of an uncompressed powder is suitable for filling hard gelatin capsules containing 600 mg of composition.

  
EXAMPLE 9 -

  
About 250 g of a conventional soft margarine is thoroughly mixed with 8 g of eicosapentaenoic acid until a uniform consistency.

  
EXAMPLE 10 -

  
Acetylsalicylic acid in a dose of 10 or 100 mg per kg is administered intravenously to male New Zealand rabbits weighing 2 to 2.5 kg. For animals in a control group, only the liquid vehicle for the dissolution of acetylsalicylic acid is administered. We donate

  
 <EMI ID = 114.1> <EMI ID = 115.1> that used in Example 3) at different doses, namely

  
 <EMI ID = 116.1>

  
perform measurements in duplicate or triplicate for each situation. The results obtained are collated in Table III. Acetylsalicylic acid in a dose of 10 mg per kg increases the time a little but significantly (p <0.0001)

  
bleeding, the average of the measurements taken in triplicate

  
 <EMI ID = 117.1>

  
 <EMI ID = 118.1>

  
counts. The value of 288 &#65533; 11 seconds observed in animals receiving a large dose of acetylsalicylic acid, at its

  
 <EMI ID = 119.1>

  
than at the witness.

  
In animals not receiving acetylsa-

  
 <EMI ID = 120.1>

  
 <EMI ID = 121.1>

  
ment (p <0.00001). There is a further increase

  
bleeding time at higher infusion doses, with the stroke ending in a plateau at around 1,000 seconds

  
 <EMI ID = 122.1>

  
In animals having received acetylsalicylic acid in a dose of 10 or 100 mg per kg, eicosapentaenoic acid does not make it possible to significantly modify the bleeding time.

  
 <EMI ID = 123.1>

  
 <EMI ID = 124.1>

  

 <EMI ID = 125.1>


  
Average bleeding times are expressed in seconds with an indication of the standard deviation.

  
 <EMI ID = 126.1>

  
By operating as in Example 3, the effects of different fatty acids on the aggregation, induced

  
 <EMI ID = 127.1>

  
that (compound similar to prostaglandin EU) from Upjohn, thrombocytes treated with acetylsalicylic acid in human plasma rich in thrombocytes.

  
For each test, the fatty acid is incubated with the thrombocytes for approximately 6 minutes before adding the analogous compounds of prostaglandin (IL), the fatty acid concentration being approximately 1.5 mM. The inhibitions observed six minutes after the addition of the prostaglandin-like compound% are specified in Table IV.

TABLE IV

  

 <EMI ID = 128.1>
 

  
 <EMI ID = 129.1>

  
 <EMI ID = 130.1>

  
Note the acid (all -Z) -9,12.15-

  
 <EMI ID = 131.1>

  
 <EMI ID = 132.1>

  
as aggregation inhibitors compared to eicosapentaenoic acid.

CLAIMS.

  
1 - Composition, characterized in that it comprises

  
 <EMI ID = 133.1>

  
derivative.

Claims

2 - Composition according to claim 1, charac- <EMI ID = 134.1>

3 - Composition according to claim 1 or 2, characterized in that it comprises in its fatty acids en-

linolenic acid and for the remainder, which is pharmaceutically acceptable, docosahexaenoic acid, docosapentaenoic acid, palmitic acid, oleic acid or other fatty acids or one of their derivatives.

� - Composition, characterized in that it comprises

its pharmaceutically acceptable salts, esters or amides and a pharmaceutically acceptable vehicle, the composition being substantially free of other more saturated acids or of their derivatives.

5 - Composition according to claim 1 or 2, characterized in that it is substantially free from other more saturated acids or their derivatives.

6 - Composition, characterized in that it comprises

<EMI ID = 138.1> being substantially vitamin-free.

dications 1 to 5, characterized in that it is substantially free of vitamins.

8 - Composition according to any one of the preceding claims, characterized in that the eicosapentaenoic acid is present in the form of its sodium or potassium salt.

9 - Composition according to any one of claims 1 to 7, characterized in that the eicosapentaenoic acid is present in the form of its triglyceride or of its ethyl ester.

10 - Composition according to any one of claims 1 to 7, characterized in that it comprises eicosapentaenoic acid itself.

11 - Composition according to any one of the preceding claims, characterized in that it comprises an antioxidant.

12 - Composition according to any one of the preceding claims, characterized in that it comprises

a flavoring agent.

13 - Composition according to any one of the preceding claims, characterized in that the vehicle consists entirely or in part of a capsule enveloping the remainder of the composition.

dications 1 to 12, characterized in that the acid eicosapen-taeno � that or its salt, ester or amide forms a phase dispersed in the vehicle which is a liquid.

acterized in that it is contained in a capsule.

<EMI ID = 142.1> dications 1 to 12, characterized in that it is presented in the form of a tablet in which the vehicle is a solid

17 - Composition according to any one of the preceding claims, characterized in that it is presented in unit dose form.

18 - Composition according to claim 17, characterized in that it contains 0.25 to 1.0 g of eicosapentaenoic acid as such or in the form of a salt, ester or amide.

19 - Composition according to any one of the preceding claims, characterized in that it is substantially free of saturated fatty acids or their salts, esters or amides.

20 - Tablet, characterized in that it comprises a

noique.

21 - Process for preparing a composition according to any one of the preceding claims, characterized in that the constituents of the composition are effectively combined.

22 - Margarine, butter or cooking oil or fat,

17-eicosapentaenoic or one of its salts, esters or amides in an amount providing at least 3% by weight of eicosapentaenoic acid in the form of the acid proper or of its derivative.

23 - Margarine according to claim 22, characterized in that it is presented in the form of margarine in emulsion.

24 - Method for maintaining the extracorporeal circulation of blood from a mammal, including man, in. taking blood and returning it to the body, characterized in that it is administered into the blood, inside or

outside the body, an amount such as to prevent sensl-ably or completely the aggregation of thrombocytes, acids

that or a pharmaceutically acceptable salt, ester or amide thereof as an active agent for the treatment of a thromboembolic disorder or condition in a mammal.

26 - A composition according to any one of claims 1 to 23 as an active agent for the treatment of a thromboembolic disorder or condition in a mammal.

27 - Capsule, characterized in that it contains

riveted with this acid, in substance as described above with reference to Example 6 or 8.

28 - Margarine according to claim 22, substantially as described with reference to Example 9.

29 - Tablet according to claim 16, substantially as described above with reference to Example 7-

30 - Process for the treatment or prophylaxis of a thranboembolic state in a mammal, characterized in that an anti- therapeutic or prophylactic amount is administered.

taenoic or one of its pharmaceutically acceptable salts, esters or amides.

31 - Method for increasing the bleeding time of a mammary gland, including man, characterized in that

32 - Process for dispersing or disaggregating a thrombus or clot of thrombocytes already formed in a mammal, including man, characterized in that an effective amount of acid (all-Z) -5,8 is administered , 11,14,17-eicosapen: --- taenoic or one of its salts, esters or amides.

33 - A process for modifying and / or controlling the adhesion of thrombocytes to damaged tissue in a mammal, including man, characterized in that a quantity of

that or one of its salts, esters or amides.

34 - Method for making the thrombocytes of a mammal, including man, less easy to aggregate and / or easier to separate from each other, characterized

in that an effective amount of acid (all Z) is administered -

or amides.

35 - A method of restoring or maintaining normal blood flow in a partially occluded blood vessel in a mammal, including man, characterized in that an effective amount of acid (any 17-eicosapentaenoic acid or a salt, ester or amide thereof.