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Publication number: BE634903A
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Description


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  "Procédé de préparation d'un vaccin pour   chiens*.   



   Le présent certificat d'addition a pour objet un vaccin combiné pour immuniser des chiens ou des renards simultanément contre la maladie de Carré, l'hépatite contagieuse du chien et les leptospiroses (maladie de Stuttgart et maladie de   Weil),   ainsi qu'un procédé de préparation de ce vaccin selon lequel on inactive de manière connue un produit contenant le virus de l'hépatite infectieuse du chien, obtenu par   *:

  rtrc -   

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 tion de foies ou de rates de chiens ou de cultures de tissus* au moyen du formaldéhyde, puis on lie le   formaldéhyde   libre par addition d'une solution contenant 1,5 à 2 fois la quantité   stoechiométrique   de sels acides de l'acide sulfureux, en par* ticulier de bisulfite de sodium, on mélange le produit avec une suspension obtenue à partir d'une culture de tissu$ selon le brevet allemand N  1.138.888. et contenant un virus de la maladie de Carré médité par au moins 50 passages en série, avec une suspension de culture de Leptospira canicola tuée par refroidissement à très basse température et avec une suspension de Culture de Leptospira icterohaemorrhagiae, et on lyophilise ce mélange. Il n'est pas absolument nécessaire d'effectuer la lyophilisation.

   On peut utiliser la suspension obtenue telle quelle pour la vaccination. 



  Mais la lyophilisation offre l'avantage que le vaccin obtenu est stable et   conservable.   



   Il y a intérét à maintenir sensiblement égalée dans le mélange la portion agissant   coûtée   le virus de la maladie de Carré, qui est constituée par environ 25 % d'un produit obtenu à partir de culture de tissu contenant le Virus modifia de la maladie de Carré, 60 % de bouillon de boeuf ayant un pH de 7,6 et   15 %   d'une solution de glucose à 50 %, et la portion agissant contre l'hépatite contagieuse du chien, qui comprend environ 90 % d'un extrait contenant le virus inactivé, de l'hépatite contagieuse du chien et   10 %   d'une solution   d'hydre     xyde   d'aluminim  m à 2 %.

   A   20   parties en volumes de ce mélangé on ajoute 1 partie en volume d'une suspension de culture de Leptospira   canicola,   réglée à une densité de 100.106 germes par ml à 1'ultra-microscope et tuée par refroidissement à très basse température, et   1   partie en volume d'une suspention de culture de   Leptospira     ioterohaemorrhagiae   réglée à une densité de   100.106   germes par   ml à   l'ultra-microscope et 

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 détruite par refroidissement a des températures basses. 



   On peut préparer la suspension contenant le virus   inactivé   de l'hépatite contagieuse du chien par exemple selon 
 EMI3.1 
 le brevet allemand Nô 1.076.892, La suspension contenant le virus modifia de la maladie de Carré peut être préparée selon le brevet allemand 1T  ,,1&.88 cité plus haut. 



  ,ea.....;4J;>L,t; ,n refroidissent à la glace, on mélange 1000 ml d'une suspension ob :3nu sortir d'une culture de tissus de cellules rénales de chien et contenant le virus modifié de la maladie de Carré avec 1000 ml d'une suspension du virus de l'hépatite contagieuse du chien, inactivé au formaldéhyde et traitée par 
 EMI3.2 
 le bif1ul.f'itl' de soUum, contenant 0,2 >; d'bydroxyde d'aluminium. 



  On ajoute 100 ml d'une suspension de culture de Leptospira conicola zé,lée a une densité de lUC,.106 germes par ml à l'ultricr06CQpe et tuée par refroidissement a très basse température ot luu ml d'une suspension de culture de Leptospira icterohaQIDorr4aîae réglée de lt même manière a une densité de   10.10   germes par ml et tuée par refroidissement à basse température. On met 2 ml de ce mélange dans des flacons, on congèle 
 EMI3.3 
 une température de -4000 et on lyophilise, 
La substance lyophilisée contenue dans les flacons à vide constitue un vaccin contre la maladie de Carré, l'hépatite contagieuse du chien et les leptospiroses (maladie de   Stuttgart   
 EMI3.4 
 et maladie de igeil), sous une forme stable et pouvant être ounEvt3.

   Détermination de ci tolérance et de 1'efficacité du vaccin préparé selon le présent procédé. 



  A)   -essai   sur le chien Immunisation   On   place 8 chiens   âgés   de 8 semaines provenant de la même portée sensibles au virus de la   mal&die   de Carré, à celui de l'hépatite contagieuse du chien et aux leptospiroses 

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 dans une enceinte isolée. Un vaccine par voit sous-cutanée 4 chiens chacun avec une dose de 2 ml du vaccin préparé selon 
 EMI4.1 
 le présent procédé* Le vaccin a un titre en virus de la mal,  die de Carré étai a lU4a?SIa. L'abréviation TOID signifie 50 de la "LSOU Culture Intectivitl Dose- (dose d'infection des cultures de tissus). On la détermine selon la méthode do Reed et uench Cfrm. J.

   Hyg. >493 (1<8). 4 chiens sont utili" des   # sés   comme témoins   non.traités.   On utilise 2/chiens pour l'in- fection d'épreuve avec l'agent virulent de la maladie de Carré 
 EMI4.2 
 et 2 pour l'infection d'épAve avec l'agent virulent de l'he,4. tite. contagieuse du chien. 



   Tolérance : 
Les   b   chiens se portent bien pendant une durée d'observation de 10 semaines. Ce n'est que le quatrième ou le des cinquième jour après la vaccination que, pour 4/chiens   vaccinés   
 EMI4.3 
 on observe une élévation de température légère et passa6èreg mais ces chiens ne présentent pas d'autres symptômes   cliniques.   L'hydroxyde d'aluminium contenu dons le vaccin provoque la 
 EMI4.4 
 formation d'un dép.-at de vaccin au point d'injection. Ce dépôt peut prendre les dimensions d'un haricot;} il est   résorbé   dans un délai de 1 à 3 semaines. 



  Activité a) Détermination des anticorps   agissant   -contre la maladie de Carre, l'hépatite contagieuse du chien et les leptospiroses. 



   Avant l'examen et 4 semaines apres la vaccination 
 EMI4.5 
 on effectue sur tuus lee chiens des prélèvements de sang sur lesquels on effectue les épreuves de la neutralisation du virus an culture de ti.ou pour déterminer ei le sanu contient ou non des anticorps contre lu maladie de carré et l'hépatite contagieuse du chien, et de la réaction dlalut1nation-lye. pour déterminer si le 8n& contient des anticorps (alutinines) contre les leptospiroses (Leptospira canicola et Leptoapira ictero,ue:not,rbaiasj. Le tableau 1 montre l'effet de la vaccination. 

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 EMI5.1 
 



  TABLEAU I   Etude de la tolérance et de l'efficacité du vaccin préparé selon le procédé de la présente invention chez le chier   
 EMI5.2 
 Chien N8 Etat immunobiologique avant Etat i-nunoDiolo6ique Infections d'epnuvs la vaccination centre 4 semaines après la vac- avec le erme cim tion contre patnoaène maladie hépatite a-blutinines maladie hépatite ailutinines virus de virus de de contagieuse contre de contagieuse contre la mala# l'népa# Carre du chien L.can. L.ict. Carré du chien L.can. L.ieû. di3 de tite 
 EMI5.3 
 
<tb> Carré <SEP> contagieuse
<tb> 
 
 EMI5.4 
 DNV DNY ONT DNV du chien 1 vaccin. 2 semaines - - - - 994.698 '749.26 1:200 1:800 sain sain 
 EMI5.5 
 
<tb> de <SEP> après
<tb> 
 
 EMI5.6 
 2 chaque vacc. avec - - - - 9g.6 8 999.192 1:400 1:800 sain sain chien vacc. anti L. 



  3 avec chaque chien - - - - 994.698 . 215.291 l;400 1:803 sain sain 
 EMI5.7 
 
<tb> 1 <SEP> dose <SEP> 2 <SEP> ml <SEP> en <SEP> sous-
<tb> 4 <SEP> de <SEP> 2ml <SEP> cutanée <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 2.140.360 <SEP> 999.192 <SEP> 1:200 <SEP> 1:800 <SEP> sain <SEP> sain
<tb> en <SEP> sous-cutanée
<tb> 
 
 EMI5.8 
 5 témoins pour l'infec- - - - - - - - ¯ malade + - 
 EMI5.9 
 
<tb> tion- <SEP> d'épreuve <SEP> avec
<tb> 
 
 EMI5.10 
 6 la maladie de Carré - - - - - - - - malade + - 
 EMI5.11 
 
<tb> 7 <SEP> témoins <SEP> pour <SEP> l'enfec- <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> --- <SEP> malade <SEP> +
<tb> tion <SEP> d'épreuve <SEP> avec
<tb> 8 <SEP> l'hépatite <SEP> contagieuse <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> malade <SEP> 
<tb> duchien
<tb> DNV <SEP> - <SEP> doses <SEP> neutralisant <SEP> le <SEP> 

  virus
<tb> + <SEP> = <SEP> atteint <SEP> de <SEP> la <SEP> maladie <SEP> de <SEP> Carre, <SEP> virus <SEP> décelé <SEP> par <SEP> la <SEP> réaction <SEP> de <SEP> dérivation <SEP> du <SEP> complément
<tb> 
 
 EMI5.12 
 ++ = atteint de l'hépatite contagieuse du chien, virus déc-- 14 par la réaction de déviation du complément 

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Avant la   vaccination,   aucun des chiens ne possède d'anticorps contre la maladie de Carré et   l'hépatite   contagieux se du chien, ni d'aglutinines contre Leptospira   canioola   et Leptospira icterohaemorrhagiae.

     Quatre   semaines après la vaccination, tous   le    chiens possèdent Une quantité considéra** ble et égale d'anticorps neutralisant les virus de la maladie de Carré et de l'hépatite contagieuse du chien, ainsi que d'ag- glutinines centre   Leptoapira   canicola et Leptospira ictérohaemorrhagiae. 



   On détermine les   doses   neutralisant le virus selon la méthode de Recd et Münch mentionnée ci-dessus. Elles résultent du nombre de ID 50 de virus   utilisées   dans l'épreuve de   neutra-   lisation du virus   multiplié   par l'inverse du point final neutralisant à 50 % du sérum examinât Elles sont rapportées à 1 ml du   s@rum   non-dilué (voir Dräger,   Acher@@nn,     Parth  : Medizin und   Ohemie,   tome VI 532   1958).   



   Infection d'épreuve avec le virus pathogène de la maladie de Carré et de l'hépatite contagieuse du chien
6 semaines après vaccination, on inocule aux chiens vaccinés,ainsi qu'aux 2 chiens témoins, la maladie de Carré par voie sous-cutanée avec une souche de virus de la maladie de
Carré pathogène pour le chien* Chez des chiens sensibles à la maladie de Carré, la souche de virus utilisée conduit à ce qu'on appelle le stade viral de la maladie de Carré, stade qui est caractérisé par courbe fébrile à deux commets* Au moment de la deuxième poussée fébrile, on peut déceler le virus de la maladie de Carré, dans les organes des chiens malades, par la réaction de déviation du complément.

   Après l'infection d'épreuve, tous les chiens vaccinés restent en bon état général et apyrétiques, tandis que les deux chiens témoins non traitée présentent les symp- tomes typiques d'une infection par la maladie de Carré. 

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   On met en évidence la   présence   du virus par la réaction de déviation du complément. 



   Deux semaines après l'infection par le virus de la maladie de Carré,on infecta tous les chiens vaccinés ainsi que les deux chiens témoins atteints d'hépatite contagieuse par une souche de virus de l'hépatite contagieuse du chien virulent pour le chien. Tous les chiens vaccinés restent bien portants et ne montrent aucun symptôme d'hépatite contagieuse, tandis que les animaux témoins non traités sont atteints de la fièvre de l'hépatite contagieuse du chien et une partie y succombe. On met en évidence la présence du virus de l'hépatite contagieuse du chien par l'autopsie des animaux et par la réaction de déviation du complément. 



  B) Examen des   animaux   de laboratoire. 



   En plus de l'essai sur le chien, on examine le vaccin préparé selon le procédé de la présente invention sur la souris blanche, le cobaye et le hamster doré, au point de vue tolérance et innocuité. Pour étudier l'activité du vaccin contre les leptospiroses (maladie de Stuttgart et maladie de Weil) on utilise aussi le cobaye et le hamster doré. Pour l'étude de la tolé-   rance et   de l'innocuité, on vaccine les souris blanches par voie intracérébrale et les   cobaye*   et les hamsters par voix souscutanée avec le vaccin   redissous.   On   observe   les animaux pendant 10 jours, il ne doivent as tomber malades.

   Pour l'examen d'efficacité du vaccin contre   Leptoapira     canicola   et Leptospira ictéorhaemorrhagiae, on vaccine à un intervalle d'une semaine des cobayes avec chacun 0,5 ml et des hamsters dorées avec 0,3 ml chacun du vaccin redissous. Deux semaines après vaccination, on fait une prise de sang aux animaux et on examine le sérum obtenu au point de vue de sa teneur en agglutinines (anticorps) contre Leptospira   canicola   et Leptospira ictérohaemorrhagiae.

   Il est également possible d'étudier   che@   le cobaye la formation   d'anti-   

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 corps   conta?*   l'hépatite contagieuse du   onien   par l'examen   de    sérums par l'épreuve de neutralisation du virus en culture de tissus Le tableau II présente   l'étude   de   dosée   du vaccin préparé selon la présente invention*
Au lieu des examens sérologiques pour déterminer   le    anticorps contre les leptospires, l'efficacité du vaccin peut être étudiée par une infection d'épave avec des cultures de leptospires pathogènes. Le test représenté dans le tableau III est effectué de la même manière que celui du tableau II.

   Au lieu de la   sainée,   on infecte des hamstern dorés, par voie intra. péritonéale, avec des cultures de Leptospira canicula   pathogène.   



  Les animaux vaccinés   restnt   en bon état tandis que les animaux témoins non traités tombent malades ou meurent de leptospiroses. 



  Le diagnostic est confirma par le résultat de l'autopsie. 

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    TABLEAU II   
 EMI9.1 
 
<tb> Epreuves <SEP> de <SEP> tolérance <SEP> et <SEP> d'efficacité <SEP> du <SEP> vaccin <SEP> préparé <SEP> selon <SEP> le <SEP> procédé <SEP> de <SEP> la <SEP> présente <SEP> invention <SEP> chez <SEP> le <SEP> cobaye
<tb> et <SEP> le <SEP> hamster <SEP> doré
<tb> cobaye <SEP> 1. <SEP> vaccination <SEP> 2. <SEP> vaccination <SEP> tolérance <SEP> résultat <SEP> de <SEP> la <SEP> réaction <SEP> résultat <SEP> de <SEP> l'épreuve <SEP> pour <SEP> les <SEP> an-
<tb> 
 
 EMI9.2 
 Iv  avec le vaccin avec le vaccin a*<->g6lutinption. lyse ticorps neutralisant le virus de 
 EMI9.3 
 
<tb> du <SEP> présent <SEP> du <SEP> présent <SEP> contre <SEP> )[ <SEP> l'hépatite <SEP> contagieuse <SEP> du <SEP> chien
<tb> 
 
 EMI9.4 
 procédé procédé après L.icteroh.

   L.canicola 
 EMI9.5 
 
<tb> 1 <SEP> semaine
<tb> 989 <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> en <SEP> s.c. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> en <SEP> a. <SEP> c. <SEP> - <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 80 <SEP> + <SEP> 1 <SEP> : <SEP> 80 <SEP> + <SEP> 45-254 <SEP> doses <SEP> neutralisant <SEP> le <SEP> virus
<tb> 
 
 EMI9.6 
 990 " .. - 1:80+1:40+ 61.721 doses neutralisant le virus 991"" .. - 1 : 40 + l : 40 + 100.259 doses neutralisant le virus 992 * " - 1 s 80 + 1 :160 + IOC.;-59 doses neutralisant le virus 93 " " - 3 s !3Q + 1 : ? .t 42.170 doses neutralisant le virus 994 " .. - 1 40 + 1 40 + 68.130 doses neutralisant le virus 
 EMI9.7 
 
<tb> hamster <SEP> doré
<tb> N 
<tb> 
 
 EMI9.8 
 234 0,3 ml en s.c. 0,3 ml en s.c. - 1 s + 1 : 80 + ]lE animaux saignés 2 semtines après 
 EMI9.9 
 
<tb> 235" <SEP> la <SEP> deuxième <SEP> vaccination
<tb> 
 
 EMI9.10 
 236 " " 1 t 20 + 1 : 1C t 237 " . - l 1 40 + 1 :

   20 + 241 " - I s 8 + 1 s 8 + 239 * " - 1 : + 1 z 4'Q + 

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 EMI10.1 
 
<tb> hamster <SEP> doré.
<tb> 
 



    TABLEAU III   
 EMI10.2 
 
<tb> .Etude <SEP> de <SEP> la <SEP> tolérance <SEP> de <SEP> l'efficacité <SEP> du <SEP> vaccin <SEP> préparé <SEP> selon <SEP> le <SEP> procédé <SEP> de <SEP> la <SEP> présente <SEP> invention <SEP> chez <SEP> le <SEP> 
<tb> hamster <SEP> 1. <SEP> vaccination <SEP> 2. <SEP> vaccination <SEP> tolérance <SEP> résultat <SEP> de <SEP> l'examen <SEP> d'essai <SEP> avec <SEP> des <SEP> cultures
<tb> doré <SEP> avec <SEP> le <SEP> vaccin <SEP> avec <SEP> le <SEP> vaccin <SEP> pathogènes <SEP> de <SEP> leptospira <SEP> canicola <SEP> - <SEP> intrapéri#
<tb> N  <SEP> du <SEP> présent <SEP> du <SEP> présent <SEP> tonale
<tb> procédé <SEP> procédé <SEP> après
<tb> 1 <SEP> semaine
<tb> 240 <SEP> 0,3 <SEP> ml <SEP> en <SEP> s.c. <SEP> 0,3 <SEP> ml <SEP> en <SEP> s.c.

   <SEP> RAS <SEP> RAS
<tb> 241 <SEP> " <SEP> " <SEP> BAS' <SEP> BAS
<tb> 242 <SEP> " <SEP> " <SEP> RAS <SEP> BAS
<tb> 243 <SEP> " <SEP> * <SEP> BAS <SEP> BAS
<tb> 244 <SEP> " <SEP> BAS <SEP> RAS
<tb> 245 <SEP> " <SEP> " <SEP> BAS <SEP> RAS
<tb> 258 <SEP> animaux <SEP> témoins <SEP> non-traités <SEP> - <SEP> succombe <SEP> 7 <SEP> jours <SEP> après <SEP> l'infection
<tb> 259 <SEP> " <SEP> " <SEP> " <SEP> 9 <SEP> " <SEP> " <SEP> " <SEP> +
<tb> 260 <SEP> " <SEP> - <SEP> " <SEP> 6 <SEP> " <SEP> " <SEP> " <SEP> +
<tb> 261 <SEP> - <SEP> tombe <SEP> malade <SEP> mais <SEP> ne <SEP> meurt <SEP> pas
<tb> + <SEP> autopsie <SEP> typique <SEP> de <SEP> la <SEP> leptospirose <SEP> (taches <SEP> pétéchiales).
<tb> 
 

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   Ainsi qu'il ressort des exemple., l'application du vaccin prépara selon le procédé du présent brevet donne une protection contre la maladie de Carré, l'hépatite   contagieu-   se du chien et les   leptospiroses   (Leptospira canicola et Lepto-   spira     icterohaamorrhagiae)   qui se caractérise par une bonne qualité et une bonne uniformité.

Claims

RESUME Le présent certificat d'addition comprend notamment t 1 ) Un procédé de préparation d'un vaccin destiné à l'immunisation des chiens et des renards simultanément contre la maladie de Carré, l'hépatite contagieuse du chien et les leptospiroses, (maladie de tuttart et maladie de Mail), pro- cédé selon lequel on inactive au moyen de formaldéhyde un produit contenant le virus de l'hépatite contagieuse du chien, obtenu par extraction de foies ou de rates de chiens, ou à partir de cultures de tissus, puis on lie le formaldéhyde libre par addi- tion d'une solution contenant 1,5 à 2 fois la quantité stoechio- métrique de sels acides de l'acide sulfureux,

en particulier de bisulfite de podium, on mélange le produit ainsi obtenu avec une suspension obtenue à partir d'une culture de tissu et contenant un virus de la maladie de Carré modifié par au moins 50 passa- ges en série et avec une suspension de culture de Leptospira ca- nicola tuée par refroidissement a basse température et avec une suspension de culture de Leptospira icterohaemorrhagiae tuée par refroidissement a basse température, après quoi on lyophili- se le mélange* 2 ) Un mode d'exécution du procédé spécifié sous 1 ),

selon lequel on maintient sensiulement égales dans le mélange la partie qui contient le virus de la maladie de Carré et qui -.est constituée par environ 25 % d'un produit de culture de tissu contenant le virus, modifia de la maladie de uarré, 60 % de bouillon de boeuf ayant un pH de 7,6 et 15 % d'une solution <Desc/Clms Page number 12> de glucose à 50 % et la partie active contre l'hépatite conta- gieuee du chien laquelle comprend environ 90 % d'un extrait con- tenant le virus de l'hépatite contagieuse du chien inuctivé et 10 % d'une solution d'hydroxyde d'aluminium à 2 , et on ajoute à 20 parties en volume de ce mélange,

1 partie en volume d'une suspension de culture de Leptospira canicola, dont la concentration est réglée à 100.106 germes par ml à l'ultra-microscope, et tuée par refroidissement à basse température et 1 partie en volume d'une suspension de culture de Leptospira icterohae- à 6 morrhagiae, dont la concentration est réglée/100.106 germes par ml à l'ultra microscope et tuée par refroidissement à basse température.