BE557508A - - Google Patents
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Description
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La présente invention se rapporte à un procédé de fabrication d'un vaccin forme par une combinaison du virus . vivant de la maladie du chien, modifie par de l'oeuf, et du virus vivant de l'hépatite' infectieuse du chien modifié par culture sur un tissu.
La maladie du chien et l'hépatite infectieuse sont deux maladies à virus très fréquentes chez le dien. Très souvent, les deux maladies surviennent simultanément chez le même chien, et dans ce cas la mortalité est,beaucoup plus'grande que dans le cas où sévit seule l'une ou l'autre de ces deux maladies..
' '
Ces dernières années, on a utilisé des souches modifiées par l'oeuf du virus de la maladie, en vue de la production de vaccins contenant le virus vivant, capables de protéger les chiens contre la maladie, bien qu'incapables'de
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produire les symptômes usuels de la maladie chez le @@len.Ce virus modifié immunise le chien de manière satisfaisante contre la maladie, mais l'animal reste susceptible à l'hépatite infec- tieuse.
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Fieldsteel et Emery, Proceedings of the Society for Expérimental Biology and Medicine. 1954, vol. 86. SI9'823,, ont décrit récemment un procédé de culture sur tissus en vue du développement'et de la modification du virus de l'hépatite infectieuse du chien. Le virus de l'hépatite infectieuse du chien est modifié après une série de 51 passages ou davantage à travers des cultures sur tissus de rein; de rate, d'utérus ou de testicule du chien. La modification du virus est telle-que si l'on injecte le virus vivant à un chien susceptible, il ne manifeste pas les symptômes usuels de l'hépatite infectieuse,
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mais se trouve! protégé contre elle s'il est exposé par la suite au viras virulent de l'hépatite infectieuse du chien.
Des recherches ont révélé que,?dans des conditions
EMI2.3
appropriCesr le viru's vivant de la maladie du -chien, modifié par l'oeuf, et associé à'la matière de l'oeuf, peut être mélangé avec la matière fluide de la culture sur tissu contenant le virus vivant modifié de l'hépatite infectieuse du chien, en présence d'un agent stabilisant approprié, la matière liquide étant ensuite rapidement congelée à basse température et séchée à l'état congelé, de manière à obtenir une forme sèche stable du mélange des virus.
Ce mélange de virus sec peut ensuite être additionné d'eau distillée ou d'un autre diluant approprié, et la solution peut être utilisée -comme vaccin capable d'immuniser le chien à la fois contre la maladie et contre l'hépatite infectieuse canine.
EMI2.4
Qn voit donc qt-lobtentbn d'une combinaison, eh un seul produit, de ces deux virus vivants modifiés, de manière telle'qu'ils développent tous deux efficacement une immunisation contre la maladie correspondante, présente un grand intérêt par
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rapport à la production des deux vaccins sépares. La m@ise en suspension des deux matières dans les mêmes milieux liquides avant l'opération de séchage par congélation évite l'utilisation de deux fioles distinctes, qui seraient nécessaire si les deux vaccins étaient préparés séparément. De plus, le procédé est très économique étant donné qu'une seule opération,de séchage par. congélation suffit et qu'il ne faut qu'un seul emballage et une seule manipulation. Le vaccin mixte offre de nombreuses commodités d'utilisation.
Une seule injection suffit pour pro- téger le chien des deux maladies..
Pour la mise en oeuvre de l'invention,.on ensemence l'aide de virus vivant modifié de l'hépatite infectieuse, prépara selon le pxocédé de Fieldsteel et Emery, des fioles contenant des préparations tissulaires, et on soumet à l'incubation à une température appropriée pendant environ quatre jours, puis on récolte le fluide. A peu près en même temps qu'on procède à l'ensemencement des préparations tissulaires de l'hépatite @ infectieuse, on inocule des oeufs fécondée au moyen de virus vivant modifié de la maladie du chien.
Après une période d'incubation appropriée allant de cinq à sept jours, on recueille les membranes infectées des oeufs, et on les homogénéise de manière à obtenir une suspension uniforme au sein d'une solu- (ion de glutamage de saccharose, de manière que 2 ml de solutio contienne environ 1 gramme de tissu infecté A chaque fraction de
2 mi de suspension homogène de virus de la maladie, on ajoute
O,2'ml de fluide tissulaire contenant le virus de l'hépatite infectieuse. On répartit la solution mixte en quantités appro- priées dans des fioles stériles.
On congèle alors rapidement le liquide contenu dans les fioles, et on le sèche à l'état congela sous vide, de manière à obtenir un vaccin sec contenant les deux virus.vivants sous une forme stable.
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Préparation du virus vivant modifié de la maladie du chien..'
On utilise des oeufs de poule fécondés après sept à huit jours d'incubation pour cultiver le virus de la maladie.
On procède au mirage des oeufs, et seuls les embryons vivants sont inoculés. On perce un petit trou dans la coquille de l'oeuf, à l'endroit de la poche d'air, et on dépose sur la membrane.0,1 ml d'une dilution 10-2 d'une suspension reconsti- tuée de membrane chorio-allantoïque d'oeufs infectés au moyen de virus de la maladie du chien. On bouche le trou formé dans la coquille de l'oeuf, et on soumet celui-ci à une incubation à 37 C.,pendant environ cinq à sept jours, puis on récolte @ , ,les membranes infectées dans des conditions stériles.
On homogénéise alors les membranes recueillies sous forme d'une suspension uniforme, à l'aide d'une solution stérile de glutamate de saccharose, de manière que chaque fraction de 2 ml contienne environ 1 gramme de tissu infecté. La solution de glutamate de saccharose utilisée présente la composition suivante,,-, saccha- rose, ,.?5 graines, phosphate monopotassique,0,99 gramme, phosphate disodique 2,38 grammes, 1-glutamate mono-potassique monohydraté 0,36 gramme, eau distillée,QS.P. 1000 ml ; pH final 7,2-7,4.
,
Préparation du virus modifié de l'hépatite. infectieuse du chien.
On ensemence une culture trypeinisée de rein de chien au sein d'un milieu nutritif formé de 8 parties de solution de Earle (la solution salée équilibrée de Earle contient 6,8 grain- mes de chlorure de sodium, 0,4 gramme de chlorure de potassium, 0,2 gramme de chlorure de calcium, 0,2 gramme de sulfate de magnésium, 0,125 gramme de phosrhate acide de sodium,,l gramme .de glucose, 2,2 grammesde bicarbonate de sodium et de l'eau pour faire 1 litre' 1 partie d'hydrolysat de lactalbumine à 5 %, et 1 partie de sérum de cheval désactivé, ou une culture
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contenant en suspension des fragments de rein de chien, au moyen de 0,2 ml de fluide non étendu provenant d'une culture trypsinisée antérieure de tissù rénal de chien,
contenant du virus modifié de l'hépatite infectieuse du chien ayant subi une série de 51 passages au moins et mieux de 100 ou plus.
On règle le pH du milieu à 7,6- 7,8, 'et on soumet à l'incuba- tion à 35 Ce Au bout de quatrejours d'incubation, on récolte les matières fluides contenant une forte concentration de virus vivant atténué d'hépatite infectieuse du chien, dans des condi- tions stériles. On peut effectuer des préparations similaires en utilisant des reins de porc au lieu' de reins de chien. On peut également utiliser d'autres solutions pour la culture sur tissu rénal, par exemple le milieu 199.
.
Préparation du vaccin mixte.
A chaque fraction de 2 ml de solution homogénéisée d'embryon d'oeuf infecté de virus de.la maladie du chien, on ajoute 0,2 ml de fluide tissulaire contenant le virus vivant de l'hépatite infectieuse, et on mélange intimement. On introduit des portions de 2 ml du mélange de liquides dans des fioles de verre, dans des conditions stérilesOn congèle rapidement le liquide contenu dans les fioles, à des températures de l'ordre de -50 C, environ, et on sèche à l'état congel sous vide à basse température. Pour procéder à la vaccination des chiens, on reconstitue le vaccin séché à l'état congelé, en ajoutant 2 cc d'eau distilée ou de sérum normal.
Les proportions de virus présents utilisées dans les exemples sont les meilleures, mais on peut cependant utiliser d'autres' proportions, tout en obtenant un vaccin utilisable.
Il est toutefois essentiel que chacun des constituants du virus soit présent en quantité infectante et reste viable. La viabilité du mélange de virus paraît dépendre dans une certaine mesure de la solution tampon à base de glutamate de saccharose utilisée, et
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il est préférable que celle-ci soit présente dans la quantité Spécifiée. On peut toutefois utiliser de manière satisfaisante de plus grandes quantités.
L'étude suivante montre l'efficacité du vaccin combiné préparé selon l'invention,à titre d'agent immunisant pour le, chien.
On injecte par voie hypodermique, à quarante huit chiens 2 ml par animal de vaccin combiné préparé comme décrit ci-avant, et formé de virus modifié de l'hépatite infectieuse du chien et de virus modifié de la maladie du chien. On recueille des échantillons de sérum de ces chiens au moment de la vaccina- tion, et trois semaines plus tard ou davantage'. On effectue.sur ces échantillons de sérum des essais de neutralisation, en utilisant du virus de l'hépatite infectieuse du chien en culture tissulaire et du virus de la maladie en culture sur des oeufs" fécondés.
Indépendamment des essais effectués sur les échantil- lons.de sérum, on traite trente-et-un des chiens-au moyen d'une souche virulente de.la maladie du chien et d'une souche viru- - lente de l'hépatite infectieuse. Dans tous les cas, les échan- tillons de sérum des chiens prélevés au moment de la vaccination sont exempts d'anticorps. Après vaccination, tous les chiens manifestent une réaction significative au virus de l'hépatite infectieuse et au virus de la maladie. De plus, les trente-et- un chiens traités par les virus infectieux y résistent victo- rieusement.
Les détails de mise en oeuvre peuvent être modifiés, dans le domaine des équivalences techniques, sans qu'on s'écarte de l'invention*
Claims (1)
- REVENDICATION . le Procédé de production d'un vaccin 'destiné à l'immu- disation simultanée du chien contre l'hépatite infectieuse et contre la maladie @u chien, consistant à mélanger un tissu d'o@@f infecté à ---'aide de virus modifié de la maladie avec un fluide tissulaire de culture contenant du virus vivant modifie de l'hépatite infectieuse, et à soumettre le mélange liquide à un traitement de séchage par congélatîon, de manière à obtenir un vaccin stable et sec contenant le virus vivant modifié de l'hépatite infectieuse et'le virus vivant modifia de la maladie du chien.2. Procédé selon la revendication 1, selon lequel le tissu d'oeuf est formé par un embryon 'de volaille, et le traitement de séchage par congélation comprend une congélation rapide du mélange liquide et le séchage à l'état congelé.3. Procédé selon la revendication 2, selon lequel on utilise 10 parties de tissu embryonnaire d'oeuf pour 1 partie la fluide tissulaire de @ulture canin. océd@ se. evendication 2 ou 3, dans lequel le tissu embryonnaire ci oeuf est mélangé avec une solution t@@ pon de glutamate de saccharose avant mélange avec le fluido tissulaire de culture.5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel lec proportions des ingrédients sont d'environ 1 partie de tissu embryonnaire d'oeuf, environ 2'parties de glutamate de saccharo- se et environ 0,1 partie de fluide tissulaire de culture.6. Vaccin pour l'immunisation simultanée des chiens contre la maladie du chien et l'hépatite infectieuse, formé par un mélange stable et sec de tissu d'embryon d'oeuf, infecté par le virus modifié de la maladie du chien, une culture de tissu canin contenant le virus modifié de l'hépatite infectieuse du chien, et un résidu de solution tampon de glutamate de saccharose
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| BE (1) | BE557508A (fr) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0023731A2 (fr) * | 1979-07-17 | 1981-02-11 | Gist-Brocades N.V. | Procédé de préparation de vaccins viraux polyvalents dans un système unicellulaire, de tels vaccins polyvalents et leur application |
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- BE BE557508D patent/BE557508A/fr unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0023731A2 (fr) * | 1979-07-17 | 1981-02-11 | Gist-Brocades N.V. | Procédé de préparation de vaccins viraux polyvalents dans un système unicellulaire, de tels vaccins polyvalents et leur application |
| EP0023731A3 (fr) * | 1979-07-17 | 1981-11-11 | Gist-Brocades N.V. | Procédé de préparation de vaccins viraux polyvalents dans un système unicellulaire, de tels vaccins polyvalents et leur application |
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