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La présente invention est relative à des nouvelles compositions phar- maceutiques présentant un effet anti-virus. Elle concerne ,plus particulièrement, de nouvelles compositions dans lesquelles la substance active est un composé chi- mique dénommé "facteur 19497-C" ou l'un de ses esters. Ces composés actifs et leur préparation sont décrits plus en détail dans ce qui va suivre.
Les nouvelles compositions conformes à l'invention sont préparées par combinaison de la substance active avec un support pharmaceutique inerte, orga- nique ou inorganique. Ainsi, les compositions selon l'invention peuvent être réalisées de manière à renfermer entre environ 0,1 mg et environ 200 mg de la substance active par unité de dosage,, La quantité de la matière de support peut varier dans de larges limites et dépend fortement de la forme d'application re- quise. Les compositions peuvent renfermer, par exemple, entre environ 0,01 et environ 60% du principe actif. Le dosage des compositions administrées peut va- rier suivant les besoins de chaque malade particulier, et le médecin traitant peut déterminer la quantité convenable nécessaire suivant l'état général du ma- lade.
Ainsi, par exemple on peut administrer les compositions active suivant des quantités comprises entre environ 10 mg et environ 200 mg, si nécessaire en doses divisées.
Lors de la préparation de formes d'unité de dosage appropriées,qui soient acceptables pharmaceutiquement, on peut utiliser l'une quelconque d'une grande variété de préparations, telles que des comprimés, des capsules, des solu- tions, etc... En plus de la substance active, on utilise des substances supports additionnelles couramment employées dans l'industrie pharmaceutique pour prépa- rer des compositions d'unité de dosage. Ces substances additionnelles peuvent être constituées par des solvants, par exemple de l'eau, des agents de suspension, des excipients, des liants, des charges , des désintégrants, des agents de con- servation et/ou d'autres ingrédients inertes. D'autres agents ou substances anti- virus renforçant l'activité vis-à-vis des virus, peuvent également être présents.
Un comprimé ou une capsule constitue une forme convenable pour une administration orale. Il va de soi que les comprimés peuvent être striés ou entail- lés pour permettre, si on le désire, des dosages fractionnés. Pour la fabrication de comprimés (ou de capsules) on peut utiliser les liants et les charges inertes usuellement employés pour la préparation dé comprimés ou de capsules par compres- sion. Des exemples de ces substances sont l'amidon de blé ou de froment, le lac- tose, l'acide stéarique, le talc, le stéarate de magnésium, l'acide alginique ou des sels de celui-ci, la gomme adragante, l'acacia , etc... Les quantités de ces substances peuvent varier dans de larges proportions et dépendent grandement du genre, c'est-à-dire de la consistance molle ou dure, et des dimensions du comprimé que l'on désire.
La mise sous forme de capsules peut aussi être effectuée en faisant usage des mêmes excipients que ceux utilisés pour la fabrication des comprimés. Tous colorants compatibles, répondant aux conditions définies par les réglements du "Federal Food, Drug and Cosmetio Law", tels que, par exemple, le jaune FD & C N 5, peuvent être utilisés dans des buts de présentation et/ou en tant que moyens d'identification.
Pour la préparation de solutions ou de suspensions, on peut mettre en oeuvre les procédés usuels pour la fabrication de préparations liquides acceptables en pharmacie.
Les procédés généraux indiqués ci-dessus sont décrits dans les ouvra- ges suivants :Lyman et Sprowls, "American Pharmacy" ,(4ème édition, 1955),pages 200-249 (pour les solutions), pages 404-422 (pour les comprimés) et pages 431-439 (pour les capsules), et dans Remington, "Practice of Pharmacy", (11ème édition, 1956), pages 277-286, 295-320 (pour les solutions) et pages 371-419 (pour les comprimés et les capsules).
Les nouvelles compositions sont actives vis-à-vis des infections dues à des virus. Ceci a été montré, par exemple , dans.., des tests effectués vis-à-vis des virus ectromelia et vaccinia. Des souris qui ont été inoculées avec le virus
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de la syphilis de la souris (un genre de virus teès voisin du virus de la syphi- lis de l'homme) sont protégées par une administration quotidienne des nouvelles compositions. Un autre type du virus de la syphilis (vaccinia) est inhibé, même dans:l'embryon du poussin fortement sensitif, par une seule administration des nouvelles compositions. L'effet est atteint avec des doses qui sont bien tolérées par les animaux traités.
Les nouvelles compositions sont utiles dans le cas d' infections dues à des virus, telles que les infections dermatotropique, viscerotro pique et neurotropique, par exemple la variole, la pneumonite et 1'encéphalomyé- lithe.
Le facteur 19497-0 est constitué uniquement par du carbone, de l'hy- drogène et del'oxygène (C 78,52%, H 10,74 %, 0 Il,1 %). Il ne présente aucune activité optique appréciable dans le dioxane à 23 C et C = 0,649. Son poids molé- culaire est voisin de 450. Lorsqu'on l'hydrogène dans le méthanol à 23*Ce avec un catalyseur au platine, le nouveau facteur prélève un équivalent d'hydrogène. En conséquence, il renferme une double liaison aliphatique.
Des analyses appropriées montrent la présence de deux groupes C-méthyle et de deux atomes d'hydrogène actif Le spectre U.V. dans l'éther montre seulement une absorption résiduelle commençant à 250 mu, laquelle à 200 mu atteint la valeur E 1 = 6 .Dans le spectre infra-
1 rouge dans le nujol on observe des bandes prononcées à 2,91 u, 5,93 u, 6,10 u, 8,15u et 11,39 u et aussi une bande double à 9.63-9,73 u et également des bandes entre 3,0 et 3,9 u indiquant des ponts hydrogène.
La nouvelle substance active se dissout bien dans l'éther, dans le dioxane et le méthyl-cellosolve et aussi, en chauffant, dans les solvants suivants; le méthanol, l'éthanol, le benzène, les hydrocarbures halogénés, tels que le chlo- roforme ou le dichloréthane, et l'acétate d'éthyle; elle est modérément soluble dans le méthanol, l'éthanol, le benzène, les hydrocarbures halogénés, tels que le chloroforme ou le dichloréthane, ou l'acétate d'éthyle froids, mais elle est très faiblement soluble dans]l'hexane et l'eau.
La substance active 19497-C cris- tallise, par exemple, dans du méthanol chaud sous la forme d'aiguilles incolores fondant à 318-320 0
On peut estérifier la nouvelle substance active avec des acides, ainsi qu'avec des alcools pour former les mono-esters correspondants, et elle for- me des sels avec les métaux. En conséquence, elle constitue un mono-hydroxy-mono- acide. Pour la préparation des nouvelles compositions, sont appropriés non seule- ment la substance active libre, mais aussi ses esters avec des acides et des al- cools et ses sels métalliques.
Etant donné que la nouvelle substance active contient des groupes hydroxyles, ainsi qu'un groupe acide, on peut obtenir trois types d'esters qui sont les esters acides, c'est-à-dire les esters dans lesquels le groupe acide est estérifié avec des alcools,des alcool-esters dans lesquels les groupes hydroxyles sont estérifiés, et finalement des polyesters dans lesquels les groupes hydroxyles et acides sont estérifiés de la manière indiquée. Comme esters acides on peut mentionner, par exemple, ceux obtenus avec les alcools aliphatiques, alicycliques, araliphatiques ou hétérocyclyl-aliphatiques.
Comme alcool-esters on peut mention- ner ceux obtenus avec des acides carboxyliques ou des acides sulfoniques organiques aliphatiques, cyclo-aliphatiques, aromatiques, hétérocycliques, araliphatiques ou hétérocyclyl-aliphatiques, en particulier les acides carboxyliques inférieurs aliphatiques ou cyclo-aliphatiques, par exemple les acides gras inférieurs. Les sels sont avant tout ceux obtenus avec les métaux des trois premiers groupes du système périodique, en particulier ceux obtenus avec des métaux alcalins et des métaux alcalino-terreux et l'aluminium.
Les iérivés fonctionnels, tels que les esters et les sels, présentent des avantages considérables par rapport à l'hydroxy-acide libre. L'administration parentérale de l'hydroxy-acide est rendue difficile par la tendance qu'il a à for- mer des gels dans le solvant et dans le corps, alors que les dérivés ne présentent
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pas cette propriété gênante ou ne la présentent qu'à un degré très faible. Les sels en particulier se distinguent par une meilleure solubilité en vue d'une ad- ministration parentérale.
La Demanderesse a trouvé qu'on obtient la nouvelle substance active à partir de plantes de la famille des Rhamnaceae, en particulier du genre Zizyphus Tourn. ex L. ou Alphitonia, en particulier le Zizyphus oenoplia (L.) Mill. ou l'Alphitonia neocaledonica Schltr. D'autres espèces de Zizyphus sont, par exemple, le Zizyphus sativa Gertn., le Z. lotus Lam. ,le Z. jujuba Lam., le Z. spina-Christi Willd., le Z. mucronata Willd., le Z. hevola Sond., le Z. Zeyheri sond le Z. trinervia Roxb., le Z. nummularia W. et Arn., le Z. rugosa Lam., le Z. calophylla Wall, le Z. joazoeiro Mari., le Z. mistol Griseb., le Z. xylo- pyra Lam. Parmi ces espèces le Zizyphus nummularia et le Zizyphus jujuba, le Zizyphus rugosa et le Zizyphis xylopyra sont particulièrement appropriés.
Comme substance de départ on utilise avantageusement des racines, et plus particulièrement des écorces de racines.
L'isolement de la substance active à partir de la plante dépend de ses propriétés physiques et chimiques mentionnées ci-dessus. Le procédé est adap- té à ces propriétés, mais par ailleurs il est du type usuel. La conversion du nouvel hydroxy-acide en ses dérivés fonctionnels, la conversion de ceux-ci en l'un ou l'autre, ou la libération de l'hydroxy-acide à partir de ces dérivés, peuvent être effectuées suivant des méthodes connues en elles-mêmes.
Un procédé avantageux pour l'obtention des nouveaux composés consis- te à extraire la plante, de préférence la racine et, en particulier, l'écorce de la racine, si on le désire après un traitement préalable ou par traitement si- multané avec un agent approprié pour la conversion fonctionnelle des groupes hy- droxyles et/ou acides, avec formation d'un extrait anti-virus actif et à partir de l'extrait obtenu, à préparer, par des méthodes connues en elles-mêmes, la substance active ayant les propriétés mentionnées ci-dessus ou ses dérivés fonc- tionnels.
Si on le désire, on peut extraire la plante après traitement avec un agent estérifiant les groupes hydroxyles, avec un agent alcalin aqueux ou alcooli- que, tel que des solutions alcalines ou alcalino-terreuses aqueuses ou alcooliques, des solutions ammoniacales ou alcooliques d'alcoolates, le sel correspondant de l'hydroxy-acide étant formé. Avantageusement, toutefois, on extrait la plante, si on le désire après traitement avec un agent estérifiant, tel que des anhydri- des d'acides, des halogénures d'acides, des alcools, en présence d'acides ou de diazo-composés et/ou après un traitement dégraissant, par exemple avec de l'hexane ou un solvant d'extraction organique, si on le désire en présence d'eau.
Les solvants d'extraction organiques qui sont particulièrement appropriés sont, par exemple,les alcools aliphatiques inférieurs comme les alcanols, par exemple le méthanol ou l'éthanol, les cétones aliphatiques inférieures, telles que l'acé- tone oula .méthyléthyl-cétone, ou des solvants d'extraction qui sont seulement par- tiellement miscibles à l'eau, par exemple les hydrocarbures aliphatiques infé- rieurs halogénés, comme le tétrachlorure de carbone, le trichloréthane, le tri- chloréthylène, le dichloréthane, le dichloréthylène ou le chloroforme, des hydro- carbures aromatiques ou aliphatiques supérieurs, tels que l'éther de pétrole ou le benzène, le toluène ou des produits de substitution de ceux-ci , comme le chlo- robenzène ou le nitrobenzène, les éthers aliphatiques inférieurs,
comme l'éther diéthylique, ou aussi les esters aliphatiques inférieurs, tels que l'acétate d'é- thyle. Ces deux procédés d'extraction peuvent être aussi combinés, par exemple en produisant d'abord un extrait brut avec le solvant organique d'extraction, puis ensuite en extrayant avec l'agent alcalin.
L'isolement de la substance active ou de ses dérivés est effectué avantageusement par cristallisation, de préférence à partir d'alcools aliphatiques inférieurs, de cétones, d'éthers ou d'esters, en particulier à partir de mélanges de méthanol et d'éther ou de méthanol. Afin d'obtenir sous une forme très pure la
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substance, l'isolement par cristallisation peut être complété par les procédés connus dans la chimie des plantes, tels que : enlèvement des impuretés par ex- traction ou précipitation, chromatographie , chromatographie de répartition, chromatographie sur papier, répartition à contre-courant ou électrophorèse.
On peut, par exemple, purifier la substance active brute par un traitement frac- tionné avec un solvant aqueux, par exemple avec du-méthanol à 70 %, et extraction de la portion insoluble à l'ébullition avec del'éther ou un extrait alcoolique par transfert dans un solvant d'extraction qui est seulement partiellement misci- ble à l'eau.
Une méthode qui est particulièrement appropriée pour l'isolement de la substance active pure et de ses dérivés fonctionnels est celle qui consiste à préparer d'abord un sel de la nouvelle substance active. Ceci peut être réali- sé, par exemple, comme indiqué ci-dessus, en extrayant la plante avec un agent al- calin aqueux ou alcoolique, ou en traitant un extrait brut ou un cristallisât brut obtenu comme décrit ci-dessus et qui contient:la,nouvelle substance active avec un hydroxyde ou alcoolate de métal, par exemple avec un alcali ou un alcoola- te alcoolique et en soumettant ensuite à cristallisation. De cette manière,il est possible d'obtenir par une voie très simple et sous une forme pure les sels alcalins et alcalino-terreux de la substance active.
Par traitement avec des aci- des, de préférence en solution alcoolique, on peut isoler la substance active pu- re. La substance active pure peut aussi être obtenue par l'intermédiaire d'un es- ter, par exemple de son dérivé acétylé, par exemple en acétylant d'abord l'extrait brut contenant la substance active ou un cristallisat brut de la substance active, en purifiant le dérivé acétylé, par exemple par chromatographie, et ensuite en l'hydrolysant à nouveau en la substance active libre.
La conversion de la substance active en ses dérivés fonctionnels, tels que les esters, est effectuée à n'importe quel étage du procédé par des méthodes connues en elles-mêmes. Lorsqu'on doit préparer des esters avec des al- cools, la substance active, si on le désire sous la forme de ses sels, ou la ma- tière première brute correspondante, est traitée de préférence avec un alcool en la présence d'un acide avec des esters d'alcools réactifs, en particulier avec ceux des acides forts inorganiques ou organiques, par exemple les hydraci- des halogénés, les acides sulfuriques ou les acides sulfoniques organiques ou avec des diazo-composés.
Pour la préparation d'esters avec des acides il est avan- tageux d'utiliser des anhydrides d'acides correspondants, par exemple l'anhydride acétique, ou les halogénures d'acides correspondants, avantageusement en présence d'un agent de condensation liant les acides, tel qu'une base forte, par exemple des amines tertiaires comme la pyridine ou la triméthylamine ou la triéthylamine.
Par une autre estérification analogue des alcool-esters, avec des alcools ou des esters-acides avec des acides, on peut préparer les polyesters correspondants.
Les esters du nouvel hydroxy-acide avec les acides peuvent être convertis de la manière usuelle en leurs sels.
Les dérivés fonctionnels de la nouvelle substance active peuvent aus- si être convertis par des méthodes connues, les sels par acidification, les es- ters par hydrolyse complète ou partielle, en l'hydroxy-acide libre ou seulement partiellement converti fonctionnellement.
Il est évident qu'un homme du métier peut effectuer, de diverses manières, la préparation de la nouvelle substance active pure et/ou de ses déri- vés fonctionnels à partir des extraits obtenus sur la base des propriétés ci-des- sus de la nouvelle substance active et de ses réactions.
L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limita- tifs qui suivent.
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EXEMPLE I
Le facteur 19497-C peut être transformé, de la manière usuelle et sous des conditions aseptiques, en une solution injectable de la composition suivante :1,0 mg de facteur 19497-C finement divisé, 0,01 mg d'agent mouillant, eau dist. quantité suffisante jusqu'à 0,5 cm3.
D'une manière analogue des dérivés du facteur 19497-C peuvent être combinés en compositions pharmaceutiques. Le facteur 19497-C et ses dérivés sont obtenus comme suit
Exemple a
On met en pâte, avec trois litres d'un mélange constitué par 90 % de méthanol et 10 % d'eau, 2 kg d'écorce de racine finement broyée de Zizyphus oenoplia (L.), puis on place la pâte dans un percolateur et on la percole avec un total de 22 litres du même mélange. On concentre sous pression réduite jusqu'à entre 1/5 et 1/10 de leur volume initial les solutions d'extrait, concentration pendant laquelle des cristaux se déposent sur les parois du récipient. On laisse reposer le tout pendant une nuit, filtre ensuite en aspirant et l'on obtient ain- si un cristallisat brut brun clair.
Afin de purifier le cristallisat brut, on le triture à plusieurs reprises avec des portions se montant, à 500 cm3 de méthanol aqueux, à 50-70 % et on filtre@chaque fois en aspirant pour enlever les impuretés de la solution .
On obtient 16,5 g d'un cristallisat jaune-brun clair. On extrait ensuite à ébul- lition ce dernier cristallisât à plusieurs reprises avec un grand volume d'éther, et décolore la solution à chaque reprise avec de la norite et évapore à siccité, ce qui fait que l'on obtient environ 8 g d'un cristallisat à peu près incolore fondant à 305-308 00 Par recristallisation répétée dans un mélange d'éther et de méthanol le point de fusion de la substance active 19497-0 ainsi obtenue pas- se à 318-320 0.
Exemple b
On met en pâte, avec 12 litres d'un mélange de 9 parties de méthanol et d'une partie d'eau, 8,960kg d'écorce de racine finement broyée du Zizyphus oenoplia (L.) Mill. et on introduit le mélange dans un extracteur à reflux, puis on extrait pendant 2 heures à reflux avec 15,5 litres de méthanol. On concentre sous pression réduite jusqu'à environ 5 litres la solution d'extrait, une cris- tallisation s'effectuant pendant ce temps sur les parois du ballon et on laisse ensuite reposer le mélange pendant une nuit. On le filtre ensuite en aspirant et 1¯'on obtient 56 g d'un cristallisat (a) brut rouge-brun clair.
On extrait alors à nouveau sous reflux, avec Il,5 litres de méthanol pendant 4 heures le résidu restant dans l'extracteur et on évapore sous vide, jus- qu'à environ 4,5 litres, la solution d'extrait. Après avoir laissé reposer la so- lution pendant 15 heures à 10 0'on sépare par filtration les cristaux qui se sont formés. On obtient ainsi 126 g d'un résidu (b) brun fortement cristallin.
Par une troisième extraction sous reflux pendant 5 heures avec 10 litres de méthanol, suivie d'une concentration de la solution d'extrait, il se sépare seulement un peu d'une substance amorphe brun foncé.
On purifie ,pendant qu'il est encore dans un état légèrement humide, un gramme du cristallisât brut (a) ou (b) finement désintégré, en le traitant '-par. un ','mélange de 10 cm3 de d i'ô x a n e et de 10 cm3 de m é t h y l - cellosolve et cela tout en agitant vigoureusement et en chauffant le mélange à 30-35 C. On ajoute ensuite 0,1 à 0,2 g d'hyflo et on filtre le mélange pour en enlever un résidu floculent brun. On ajoute 10 cm3 d'une solution d'ammoniaque concentrée au filtrat, de sorte qu'il précipite une petite quantité de flocons
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foncés, constitués par les impuretés mélangées à la substance active 19497-C, qui sont ensuite séparés par filtration au moyen de 0,2 à 0,3 g d'hyflo.
On ajoute 15 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium au filtrat renfermant le sel d'ammonium de la substance active 19497-C, puis on laisse reposer le mélange pendant une heure et on le filtre en aspirant. Lorsque le résidu filtré a été amené à siccité par aspiration, on le lave avec 1 à 2 cm3 d' eau.
On dissout le résidu séché dans 10 cm3 de méthanol chaud, on filtre la solution à travers un filtre à plis en papier pour éliminer les flocons bruns non dissouts et on concentre sous pression réduite jusqu'à un faible volume la solution jaune à jaune-vert obtenue. Après addition d'un excès d'éther, il se forme immédiatement un cristallisât faiblement soluble du sel de sodium de la substance active 19497-0 que l'on sépare. Il ne fond pas jusqu'à 360 C. Par concentration de la liqueur mère jusqu'à un faible volume, suivie par une cris- tallisation dans du méthanol, on obtient sous une forme pure la substance active 19497-0 à l'état libre.
Exemple c
On dissout 100 mg de cristallisat 19477-C dans un cm3 de pyridine pu- re tout en chauffant légèrement. On ajoute ensuite 2 cm3 d'anhydride acétique, puis on ferme le flacon et on laisse reposer pendant une nuit à la température am- biante. On ajoute ensuite lentement de l'eau, tout en refroidissant avec de la' glace, jusqu'à ce que le mélange ait un volume de 20 cm3 et alors il se sépare une substance incolore. On extrait à trois reprises Je mélange avec chaque fois 100cm3 d'éther et on lave la solution éthérée, successivement , avec une faible quantité d'acide chlorhydrique binormal, avec de l'eau, avec une solution de bi- carbonate de potassium binormale et avec de l'eau. On sèche la solution avec du sulfate de sodium calciné , on filtre ét évapore à siccité sous vide.
On dissout le résidu amorphe dans du méthanol chaud. En laissant reposer le mélange pendant une nuit, il cristallise 75 mg de l'acétate brut. On recristallise ce dernier dans du méthanol et l'on obtient ainsi 44 mg de lamelles incolores de l'acétate de la substance active 19497-Ce fondant à 293 0.
Exemple d
La substance active brute 19497-c peut être purifiée comme suit : On fait bouillir pendant une demi-heure à reflux, dans 5 cm3 d'anhydride acétique, 0,66 g du cristallisat brut obtenu à partir d'éther (voir exemple I) et on laisse ensuite reposer le mélange pendant une nuit à la température ambiante. On enlève le solvant sous vide, on dissout le résidu dans du.méthanol chaud et on évapore la solution sous vide à siccité. On chromatographie à travers une colonne de 14 g d'oxyde d'aluminium (neutre, activité I) le résiau se montant à 0,76 g. L'élu- tion est effectuée d'abord avec du benzène pur, puis ensuite avec du benzène ren- fermant des quantités de méthanol augmentant progressivement. On élue l'acétate de la substance active 19497-C au moyen d'un mélange de benzène et de 5% de métha- nol.
On hydrolyse 109 mg de la fraction acétate en la lisant bouillir à reflux pendant une heure dans une solution de 8 g de potasse caustique dans 100 cm3 de méthanol et 10 cm3 d'eau.On évapore ensuite sous vide le méthanol et on extrail le mélange qui reste à trois reprises avec chaque fois 75 cm3 d'acétate d'éthyle.
On lave jusqu'à neutralité avec de l'eeau la solution d'extrait, sèche sur du sulfate de sodium calciné, filtre et évapore sous vide à siccité. On dissout le résidu dans du méthanol chaud et on laisse cristalliser la solution pendant une nuit) on obtient ainsi de fines aiguilles de substance active 19497-C (fon- dant à 318-320 c).
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Exemple e
On mouille avec 12 litres de méthanol aqueux à 90 %, 8,96 kg d'écorce de racine séchée à l'air et finement broyée du Zizyphus oenoplia (L.) Mill., on place dans un extracteur à reflux et, après addition supplémentaire de 15,5 li- tres de méthanol pur, on extrait sous reflux pendant deux heures. On concentre ensuite, sous pression réduite jusqu'à un volume de 4,5 litres , la solution d' extrait refrôidie et on laisse reposer pendant une nuit. On filtre le précipité semi-cristallin séparé. On obtient 56 g de cristallisat brut I rouge-brun clair.
On extrait une seconde fois pendant 4 heures sous reflux avec Il,5 litres de métha- nol pur, le résidu restant dans l'extracteur. On concentre sous vide jusqu'à un volume de 4,5 litres de la solution, laisse reposer pendant une nuit et filtre le précipité. On obtient 126 g de cristallisat II brut rouge-brun foncé. Une troisième extraction avec 10 litres de méthanol pur ne fournit que très peu d'un précipité graisseux après concentration de la solution d'extrait. On débarrasse sous vide du solvant les liqueurs mères des cristallisats bruts et l'on obtient 685 g d'une écume rouge-brun foncé.
On pulvérise finement 10 g de l'extrait I brut et on l'extrait sous reflux pendant 5 heures avec 500 cm3 d'éther. On évapore à sicoité sous vide la solution d'extrait. On obtient 4,32 g de l'extrait d'éther (après évaporation).
Une autre extraction pendant 16 heures produit une quantité supplémentaire de 2,6 g d'extrait d'éther (après évaporation).
On dissout 2,16 g de l'extrait d'éther (après évaporation) dans 40 cm3 d'un mélange constitué en parties égales par du méthanol et de l'éther. On peut, si on le désire , dissoudre une petite quantité de flocons non dissouts en ajoutant 10 cm3 d'éther. On ajoute à la solution limpide une quantité suffisan- te d'une solution méthanolique binormale d'hydroxyde de sodium (environ 2 cm3); la solution montre alors une réaction alcaline caractéristique sur du papier à la phénolphtaléine humide. On concentre ensuite sous vide le mélange jusqu'à environ 5 à 10 cm3 et après avoir chauffé pendant un court instant à 60 C il se produit une cristallisation spontanée du sel de sodium de la substance active 19497-C. On filtre en aspirant et pendant qu'il est encore chaud le magma de cristaux visqueux.
On lave le gateau de cristaux d'abord avec'10 cm3 d'un mélange de 3 parties d'éther et d'une partie de méthanol, puis avec environ 20 à 30 cm3 d'un mélange de 7 parties en volume d'éther et d'une partie en volume de méthanol et finalement avec de l'éther pur, puis on sèche. On obtient sous une forme pratiquement incolore 0,6 g de cristaux du sel de sodium de la substance active 19497-C.
'On convertit en l'acide libre le sel de sodium (0,6 g) en le dissol- vant dans une' quantité minimum de méthanol (environ 18 cm3), en enlevant les tra- ces d'un précipité floculentpar filtration avec un peu d'hyflo et en acidifiant la solution limpide avec 0,2 à 0,3 cm3 d'acide chlorhydrique méthanolique à 25% La substance active 19497-C cristallise spontanément et peut être isolée ,après qu'on a laissé reposer pendant plusieurs heures à 0 C, par filtration et lavage avec une petite quantité de méthanol refroidi à la glace. Après suintement préa- lable à 305 C le produit fond à 312-313 C. Par recristallisation dans le méthanol le point de fusion passe à 318-320 C.
Exemple f
Ori dissout dans 40 cm3 d'un mélange de méthanol et d'éther (1:1) 2,16 g de l'extrait d'éther (après évaporation) obtenu comme décrit dans l'exemple e, et on ajoute 20 cm3 d'une solution méthanolique 0,2 -normale d'hydroxyde de baryum. On enlève par filtration le précipité floculent formé , On concentre ensuite sous vide jusqu'à environ 10 cm3 le mélange, le sel de baryum de la substance 19497-C se séparant graduellement par cristallisation. On filtre en aspirant le mélange ,lave le gateau de cristaux comme décrit dans l'exemple e pour le sel de
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sodium et on obtient sous la, .forme d'une poudre de cristaux incolore 0,62 g du sel de baryum de la substance active 19497-C .
Une conversion en l'acide libre s'effectue comme décrit dans l'exemple e.
Exemple g
On extrait dans un extracteur à reflux, pendant 10 heures deux fois avec 300 cm3 d'éther , 60 g de racines séchées à l'air et finement broyées de Zizyphus jujuba Lam. et on évapore jusqu'à siccité sous vide la solution d'extrait On obtient 1,07 g d'extrait d'éther jaune clair (après évaporation).
A partir de ce dernier, on obtient le sel de sodium de la substance active 19497-C comme décrit dansl'exemple e, en dissolvant l'extrait dans environ 10 cm3 d'un mélange d'éther et de méthanol, en ajoutant 1,2 cm3 d'une solution méthanolique binormale d'hydroxyde de sodium, en concentrant le mélange, en chauffant le résidu à 60 C (dans ce cas la cristallisation ne se produit que lentement), en laissant reposer la masse réactionnelle pendant plusi eurs heures, en filtrant en aspirant le magma de cristaux et en lavant. Rendement . 0,15 g du sel de sodium qui peut être converti en substance active 19497-C par acidification, comme décrit dans l'exemple e.
Exemple h
On mouille comme décrit dans l'exemple e, avec 3,4 litres de métha- nol aqueux à 90 %, 2,6 kg de racines séchées à l'air et finement broyées de Zizyphus jujuba Lam. et, après addition supplémentaire de 4,2 litres de méthanol pur, on extrait pendant 2 heures dans un extracteur à reflux. On concentre sous vide jusqu'à un volume d'environ un litre la solution d'extrait et laisse reposer pendant une nuit. On sépare ensuite par filtration le précipité et on obtient 74e2 g de cristallisat I brut. Une seconde extraction effectuée de la même maniè- re avec 3,4 litres de méthanol (5 heures) fournit 3,32 g de cristallisât II brut.
Les liqueurs mères séchées forment 159 g d'écume.
On pulvérise finement 10 g de cristallisat I brut et on extrait pen- dant 8 heures avec 500 cm3 d'éther dans un extracteur à reflux. On évapore à siccité sous vide l'extrait de solution. On obtient 6,0 g d'un extrait d'éther jaune clair (après évaporation). A partir de ce dernier on obtient le sel de sodium de la substance active 19497-C, comme décrit dans l'exemple e, en dissol- vant l'extrait dans 60 cm3 d'un mélange, d'éther et de méthanol,en ajoutant 7,0 cm3 d'une solution méthanolique binormale d'hydroxyde de sodium, en concentrant le mélange , en chauffant le résidu à 60 C (la cristallisation se produit relative- ment lentement) et en laissant reposer pendant plusieurs heures le produit réac- tionnel, puis en filtrant en aspirant le magma de cristaux et en lavant.
Rendement : 0,87 g du sel de sodium à peu près incolore qui peut être converti en substance active 19497-C par acidification, comme décrit dans l'exemple e.
Exemple i
On mouille avec 6 litres de méthanol aqueux à 90%, comme décrit dans l'exemple e, 4,67 kg de racines séchées à l'air et finement broyées de Zizyphus xylopyra Lam. et, après addition supplémentaire de 7,5 litres de méthanol pur, on extrait pendant deux heures dans un extracteur à reflux. On concentre sous vide jusqu'à un volume d'environ 3 litres la solution d'extrait et laisse reposer pendant une nuit. On sépare par filtration le précipité formé et on obtient 77,1 g de cristallisat I brut. Une seconde extraction effectuée de la même maniè- re avec 6 litres de méthanol (5 heures) fournit 13,0 g de cristallisat II brut.
Les liqueurs mères séchées forment 236 g d'écume.
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On pulvérise finement 10 g de cristallisat I brut et on extrait pendant 8 heures avec 500 cm3 dàns un extracteur à reflux. On évapore à siccité sous vide la solution'd'extrait et on obtient 5,8 g d'extrait d'éther jaune clair (après évaporation). A partir de ce dernier on obtient, comme décrit dans l'exem- ple e, le sel de sodium de la substance 19497-C en dissolvant l'extrait dans 50 cm3 d'un mélange d'éther et de méthanol, en ajoutant 6,5 cm3 d'une solution méthanolique binormale d'hydroxyde de sodium, en concentrant le mélange, en chauf- fant le résidu à 60 C (la cristallisation se produit très lentement), en lais- sant reposer le produit réactionnel pendant plusieurs jours, en filtrant le ma- gma de cristaux en aspirant et en lavant.
Rendement : 0,34 g de sel de sodium faiblement coloré de la substance active 19497-C, qui peut être converti en la substance active libre par acidification, comme décrit dans l'exemple e.
Exemple k
On extrait dans un extracteur à reflux (sac en papier), pendant 10 heures , deux fois avec 300 cm3 d'éther, 80 g de racines séchées à l'air et fine- ment broyées de Zizyphus rugosa Lam. et on évapore à siccité sous vide la solu- tion d'extrait. On obtient 1,69 g d'extrait d'éther (après évaporation). A par- tir de ce dernier on obtient le sel de sodium de la substance active 19497-C, comme décrit dans l'exemple e, en dissolvant l'extrait dans 15 cm3 d'un mélange d'éther et'de méthanol, en ajoutant 1,7 cm3 d'une solution méthanolique binor- male d'hydroxyde de sodium, en concentrant le mélange, en chauffant le résidu à 60 C, en filtrant le magma de cristaux en aspirant et en lavant.
Rendement
0,26 g du sel de sodium presque incolore qui peut être converti en substance acti- ve 19497-C par acidification.
Exemple 1
On extrait dans un extracteur à reflux (sac en papier) pendant
13 heures, avec un litre d'éther, 163 g de racines séchées à l'air et finement broyées de Zizyphus nummularia W. & A. et évapore à siccité sous vide la solution d'extrait. On obtient 3,52 g de l'extrait d'éther jaune verdâtre (après évapora- tion). A partir de ce dernier on obtient le sel de sodium de la substance 19497-C, comme décrit dans l'exemple e, en dissolvant l'extrait dans 80 cm3 d'un mélange d'éther et de méthanol, en ajoutant 4,5 cm3 d'une solution méthanolique binormale d'hydroxyde de sodium, en concentrant le mélange, en chauffant le résidu (la cristallisation se produit relativement lentement), et en laissant reposer le produit réactionnel pendant deux jours, en filtrant le magma de cris- taux en aspirant et en lavant.
Rendement : 0,25 g du sel de sodium rougeâtre de la substance active 19497- qui peut être converti en l'hydroxy-acide libre par acidification, comme décrit dans l'exemple e.
Exemple m
On mouille avec 400 cm3 de méthanol aqueux à 90 %, comme décrit dans l'exemple e, 97 g d'écorce de racine séchée à l'air et finement broyée de Alphi- tonia neocaledonica Schltr. et on percole à froid avec une quantité totale de
3,7 litres de méthanol. On concentre sous vide, jusqu'à un volume d'environ
100 cm3, la solution d'extrait et laisse., reposer pendant un nuit . On sépare le précipité formé par filtration et obtient 0,99 g d'un cristallisat brut'brun clair. On fait bouillir ce dernier à reflux à deux reprises avec 60 cm3 d'éther et pendant une heure chaque fois, on élimine par filtration chaque fois l'extrait de solution et évapore à siccité sous vide. On obtient au total 0,7 g de l'extrait d'éther (après évaporation).
A partir de ce dernier on obtient le sel de sodium de la substance active 19497-C, comme décrit dans l'exemple e, en dissolvant l'extrait dans 10 cm3 d'un mélange d'éther et de méthanol, en ajoutant 0,7 cm3 d'une solution méthanolique binormale d'hydroxyde de sodium, en concentrant le
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produit réactionnel,en chauffant le résidu à 60 C, en filtrant le magma de cristaux en aspirant et en lavant. Rendement : 0,16 g du sel de sodium presque incolore qui peut être converti en substance active 19497-C par acidification, comme décrit dans l'exemple e.
Exemple n
On soumet à une répartition à contre-courant 0,5 g du sel de sodium obtenu comme décrit dans l'exemple i. On prépare le système solvant en mélangeant 2 parties en volume de méthanol , 2 parties en volume de chloroforme et une partie en volume d'eau. On obtient une phase supérieure qui est constituée prin- cipalement de méthanol et d'eau et une phase inférieure qui renferme la plus grande partie du chloroforme. On dissout la substance (0,5 g) dans 50 cm3 de chacune des deux phases et on verse dans les deux premiers tubes d'une machine de répartition (type Craig) avec 25 cm3 de chacine des phases inférieure et supé- rieure par tube. La répartition est effectuée sur 11 étages (tube N 0-12), des émulsions se formant de temps en temps dans quelques uns de ces tubes.
On effec- tue une évaluation en enlevant le contenu des tubes, en évaporant sous vide et en pesant. Il en résulte une courbe des poids qui s'élève d'une manière pratiquement uniforme sur les deux côtés et dans laquelle les tubes 8 et 9 forment le sommet.
On combine les deux fractions de sommet et on recristallise dans le méthanol.
Le sel de sodium de'la substance active 19497-C qui en résulte n'est pas décoloré à 360 C et n'est pas fondu. Son spectre ultra-violet montre, tout comme l'acide libre, simplement une faible absorption résiduelle entre 250 et 220 mu . Le spectre infra-rouge dans le nujol diffère de celui de l'acide principalement par un déplacement de la bande depuis 5,93 u jusqu'à 6,49u et la disparition de la bande à 8,15u . Il existe des bandes distinctes à 3,01 u, 6,07 u, 6,39 u et 11,39 p et des doubles bandes à 9.60-9,69 u. Dans le cas du sel de sodium le pouvoir rotatoire spécifique [a] D dans le méthanol est aussi proche de 0.
Exemple o
On dissout dans 20 cm3 de pyridine, 2 g de la substance active 19497-C et on laisse reposer pendant 24 heures à la température ambiante avec 5 cm3 d'anhydride acétique. Après 24 heures à la température ambiante, on ajuste la solution à un pH de 1 avec de la glace et on concentre l'acide chlorhydrique et filtre en aspirant le produit. On le recristallise dans le méthanol et l'acé- tate de la substance active 19497-0 qui en résulte fond à 293 C et présente un pouvoir rotatoire spécifique [a] 22 = + 20,1 (dans le chloroforme).
D
EXEMPLE II
On peut préparer de la manière usuelle des comprimés de la composi- tion suivante :
EMI10.1
<tb> Facteur <SEP> 19497-C <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb> amidon <SEP> 40 <SEP> mg
<tb>
<tb> gélatine <SEP> 2 <SEP> mg <SEP>
<tb>
<tb> talc <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb> stéarate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 5 <SEP> mg <SEP>
<tb>
<tb> lactose <SEP> ,q.s. <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
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EXEMPLE III
On peut préparer de la manière usuelle des capsules renfermant 100 ou 200 mg du facteur 19497-C dans de la parafine liquide ou du polyéthylène-gly- col.
EXEMPLE IV
On prépare de la manière usuelle des suppositoires renfermant 150 mg du facteur 19497-C dans la quantité suffisante de beurre de cacao, jusqu'à 2 g.
REVENDICATIONS.
1. Nouvelles compositions pharmaceutiques présentant une activité anti-virus renfermant un composant sélectionné'parmi ceux faisant partie du grou- pe constitué par le facteur 19497-C , ses esters et sels, et un support pharma- ceutique.
2. Nouvelles compositions pharmaceutiques présentant une activité anti-virus, pour usage oral, renfermant un composant sélectionné parmi ceux faisant partie du groupe constitué par le facteur 19497-C , ses esters et sels, et un support pharmaceutique solide.
3. Nouvelles compositions pharmaceutiques présentant une activité an- ti-virus , pour usage parentéral, renfermant un composant sélectionné parmi ceux faisant partie du groupe constitué par le facteur 19497-Ce ses esters et sels, et un support pharmaceutique approprié pour une injection.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
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The present invention relates to novel pharmaceutical compositions exhibiting an anti-virus effect. It relates more particularly to new compositions in which the active substance is a chemical compound called "factor 19497-C" or one of its esters. These active compounds and their preparation are described in more detail in what follows.
The new compositions in accordance with the invention are prepared by combining the active substance with an inert, organic or inorganic pharmaceutical carrier. Thus, the compositions according to the invention can be produced so as to contain between approximately 0.1 mg and approximately 200 mg of the active substance per dosage unit, The amount of the support material can vary within wide limits and depends on strongly of the required application form. The compositions can contain, for example, between about 0.01 and about 60% of the active principle. The dosage of the compositions administered may vary according to the needs of each particular patient, and the attending physician can determine the proper amount needed depending on the general condition of the patient.
Thus, for example, the active compositions can be administered in amounts ranging from about 10 mg to about 200 mg, if necessary in divided doses.
In preparing suitable dosage unit forms which are pharmaceutically acceptable, any of a wide variety of preparations can be used, such as tablets, capsules, solutions, etc. In addition to the active substance, additional carrier substances commonly employed in the pharmaceutical industry are used to prepare dosage unit compositions. These additional substances can consist of solvents, for example water, suspending agents, excipients, binders, fillers, disintegrants, preservatives and / or other inert ingredients. Other anti-virus agents or substances which enhance virus activity may also be present.
A tablet or capsule is a suitable form for oral administration. It goes without saying that the tablets can be scored or notched to allow, if desired, divided dosages. For the manufacture of tablets (or capsules), it is possible to use the binders and inert fillers usually employed for the preparation of tablets or capsules by compression. Examples of such substances are wheat or wheat starch, lactose, stearic acid, talc, magnesium stearate, alginic acid or salts thereof, gum tragacanth, l 'acacia, etc ... The amounts of these substances can vary widely and depend greatly on the kind, that is to say on the soft or hard consistency, and on the dimensions of the tablet desired.
The forming of capsules can also be carried out by making use of the same excipients as those used for the manufacture of tablets. All compatible dyes, meeting the conditions defined by the regulations of the "Federal Food, Drug and Cosmetio Law", such as, for example, yellow FD & CN 5, can be used for presentation purposes and / or as means. identification.
For the preparation of solutions or suspensions, it is possible to use the usual methods for the manufacture of liquid preparations which are acceptable in pharmacies.
The general methods indicated above are described in the following works: Lyman and Sprowls, "American Pharmacy", (4th edition, 1955), pages 200-249 (for solutions), pages 404-422 (for tablets. ) and pages 431-439 (for capsules), and in Remington, "Practice of Pharmacy", (11th edition, 1956), pages 277-286, 295-320 (for solutions) and pages 371-419 (for tablets and capsules).
The new compositions are active against infections due to viruses. This has been shown, for example, in tests carried out against the ectromelia and vaccinia viruses. Mice that have been inoculated with the virus
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mouse syphilis (a genus of viruses closely related to human syphilis virus) are protected by daily administration of the new compositions. Another type of the syphilis virus (vaccinia) is inhibited, even in: the highly sensitive chick embryo, by a single administration of the new compositions. The effect is achieved with doses which are well tolerated by the treated animals.
The novel compositions are useful in the case of infections due to viruses, such as dermatotropic, viscerotropic and neurotropic infections, for example smallpox, pneumonitis and encephalomylitis.
The factor 19497-0 consists only of carbon, hydrogen and oxygen (C 78.52%, H 10.74%, 0 Il, 1%). It does not show any appreciable optical activity in dioxane at 23 C and C = 0.649. Its molecular weight is around 450. When it is hydrogenated in methanol at 23 ° C with a platinum catalyst, the new factor takes up one equivalent of hydrogen. As a result, it contains an aliphatic double bond.
Appropriate analyzes show the presence of two C-methyl groups and two active hydrogen atoms.The UV spectrum in ether shows only a residual absorption starting at 250 mu, which at 200 mu reaches the value E 1 = 6. the infra- spectrum
1 red in nujol we observe pronounced bands at 2.91 u, 5.93 u, 6.10 u, 8.15u and 11.39 u and also a double band at 9.63-9.73 u and also bands between 3.0 and 3.9 u indicating hydrogen bridges.
The new active substance dissolves well in ether, dioxane and methyl cellosolve and also, on heating, in the following solvents; methanol, ethanol, benzene, halogenated hydrocarbons, such as chloroform or dichloroethane, and ethyl acetate; it is sparingly soluble in methanol, ethanol, benzene, halogenated hydrocarbons, such as chloroform or dichloroethane, or cold ethyl acetate, but it is very sparingly soluble in] hexane and water.
The active substance 19497-C crystallizes, for example, in hot methanol in the form of colorless needles melting at 318-320 0
The new active substance can be esterified with acids, as well as with alcohols to form the corresponding mono-esters, and it forms salts with the metals. Consequently, it constitutes a mono-hydroxy-mono-acid. For the preparation of the new compositions, not only the free active substance, but also its esters with acids and alcohols and its metal salts are suitable.
Since the new active substance contains hydroxyl groups, as well as an acid group, three types of esters can be obtained which are acid esters, that is, esters in which the acid group is esterified with alcohols, alcohol esters in which the hydroxyl groups are esterified, and finally polyesters in which the hydroxyl and acid groups are esterified as indicated. As acid esters there may be mentioned, for example, those obtained with aliphatic, alicyclic, araliphatic or heterocyclyl-aliphatic alcohols.
Mention may be made, as alcohol-esters, of those obtained with carboxylic acids or organic aliphatic, cyclo-aliphatic, aromatic, heterocyclic, araliphatic or heterocyclyl-aliphatic acids, in particular the lower aliphatic or cyclo-aliphatic carboxylic acids, for example. lower fatty acids. The salts are above all those obtained with the metals of the first three groups of the periodic system, in particular those obtained with alkali metals and alkaline earth metals and aluminum.
Functional derivatives, such as esters and salts, have considerable advantages over the free hydroxy acid. Parenteral administration of the hydroxy acid is made difficult by its tendency to form gels in the solvent and in the body, whereas the derivatives do not exhibit
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not this troublesome property or exhibit it only to a very low degree. The salts in particular are distinguished by better solubility for parenteral administration.
The Applicant has found that the new active substance is obtained from plants of the Rhamnaceae family, in particular of the genus Zizyphus Tourn. ex L. or Alphitonia, in particular Zizyphus oenoplia (L.) Mill. or the Alphitonia neocaledonica Schltr. Other species of Zizyphus are, for example, Zizyphus sativa Gertn., Z. lotus Lam. , Z. jujuba Lam., Z. spina-Christi Willd., Z. mucronata Willd., Z. hevola Sond., Z. Zeyheri probes Z. trinervia Roxb., Z. nummularia W. and Arn., Z. rugosa Lam., Z. calophylla Wall, Z. joazoeiro Mari., Z. mistol Griseb., Z. xylopyra Lam. Of these species, Zizyphus nummularia and Zizyphus jujuba, Zizyphus rugosa and Zizyphis xylopyra are particularly suitable.
As starting material, roots are advantageously used, and more particularly root bark.
The isolation of the active substance from the plant depends on its physical and chemical properties mentioned above. The process is suited to these properties, but moreover it is of the usual type. The conversion of the novel hydroxy acid to its functional derivatives, the conversion of these to either, or the release of the hydroxy acid from these derivatives, can be carried out according to methods known in themselves.
An advantageous method for obtaining the new compounds consists in extracting the plant, preferably the root and, in particular, the bark of the root, if desired after a preliminary treatment or by simultaneous treatment with a. agent suitable for the functional conversion of hydroxyl and / or acid groups, with formation of an active anti-virus extract and from the extract obtained, to be prepared, by methods known per se, the active substance having the properties mentioned above or its functional derivatives.
If desired, the plant can be extracted after treatment with an esterifying agent for hydroxyl groups, with an aqueous or alcoholic alkaline agent, such as aqueous or alcoholic alkaline or alkaline-earth solutions, ammoniacal or alcoholic solutions. alcoholates, the corresponding salt of the hydroxy acid being formed. Advantageously, however, the plant is extracted, if desired after treatment with an esterifying agent, such as acid anhydrides, acid halides, alcohols, in the presence of acids or diazo compounds and / or after a degreasing treatment, for example with hexane or an organic extraction solvent, if desired in the presence of water.
Particularly suitable organic extraction solvents are, for example, lower aliphatic alcohols such as alkanols, for example methanol or ethanol, lower aliphatic ketones, such as acetone or methyl ethyl ketone, or extraction solvents which are only partially miscible with water, for example halogenated lower aliphatic hydrocarbons, such as carbon tetrachloride, trichloroethane, trichlorethylene, dichloroethane, dichlorethylene or chloroform , aromatic or higher aliphatic hydrocarbons, such as petroleum ether or benzene, toluene or substitutes thereof, such as chlorobenzene or nitrobenzene, lower aliphatic ethers,
such as diethyl ether, or also lower aliphatic esters, such as ethyl acetate. These two extraction methods can also be combined, for example by first producing a crude extract with the organic extraction solvent, then subsequently by extracting with the alkaline agent.
The isolation of the active substance or its derivatives is advantageously carried out by crystallization, preferably from lower aliphatic alcohols, ketones, ethers or esters, in particular from mixtures of methanol and ether or methanol. In order to obtain in a very pure form the
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substance, isolation by crystallization can be supplemented by methods known in plant chemistry, such as: removal of impurities by extraction or precipitation, chromatography, distribution chromatography, paper chromatography, countercurrent distribution or electrophoresis .
The crude active substance can, for example, be purified by fractional treatment with an aqueous solvent, for example with 70% methanol, and extraction of the boiling insoluble portion with ether or an alcoholic extract. by transfer to an extraction solvent which is only partially miscible with water.
One method which is particularly suitable for the isolation of the pure active substance and its functional derivatives is that of first preparing a salt of the new active substance. This can be done, for example, as indicated above, by extracting the plant with an aqueous or alcoholic alkaline agent, or by treating a crude extract or a crude crystallize obtained as described above and which contains: the new active substance with a metal hydroxide or alcoholate, for example with an alkali or an alcoholic alcoholate and thereafter subjecting to crystallization. In this way, it is possible to obtain in a very simple way and in a pure form the alkali and alkaline earth salts of the active substance.
By treatment with acids, preferably in alcoholic solution, the pure active substance can be isolated. The pure active substance can also be obtained by means of an ester, for example of its acetylated derivative, for example by first acetylating the crude extract containing the active substance or a crude crystallizate of the active substance, by purifying the acetyl derivative, for example by chromatography, and then hydrolyzing it again to the free active substance.
The conversion of the active substance into its functional derivatives, such as esters, is carried out at any stage of the process by methods known per se. When esters are to be prepared with alcohols, the active substance, if desired in the form of its salts, or the corresponding raw material, is preferably treated with an alcohol in the presence of an alcohol. acid with esters of reactive alcohols, in particular with those of strong inorganic or organic acids, for example halogenated hydracides, sulfuric acids or organic sulfonic acids or with diazo compounds.
For the preparation of esters with acids, it is advantageous to use the corresponding acid anhydrides, for example acetic anhydride, or the corresponding acid halides, advantageously in the presence of a condensing agent binding the acids. acids, such as a strong base, for example tertiary amines such as pyridine or trimethylamine or triethylamine.
By a further analogous esterification of alcohol esters, with alcohols or acid esters with acids, the corresponding polyesters can be prepared.
The esters of the new hydroxy acid with the acids can be converted in the usual way into their salts.
The functional derivatives of the new active substance can also be converted by known methods, the salts by acidification, the esters by complete or partial hydrolysis, into the free hydroxy acid or only partially functionally converted.
It is obvious that a person skilled in the art can carry out, in various ways, the preparation of the new pure active substance and / or of its functional derivatives from the extracts obtained on the basis of the above properties of the substance. new active substance and its reactions.
The invention is described in more detail in the non-limiting examples which follow.
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EXAMPLE I
Factor 19497-C can be converted in the usual manner and under aseptic conditions into an injectable solution of the following composition: 1.0 mg finely divided factor 19497-C, 0.01 mg wetting agent, water dist. sufficient quantity up to 0.5 cm3.
Similarly, derivatives of factor 19497-C can be combined into pharmaceutical compositions. The factor 19497-C and its derivatives are obtained as follows
Example a
We put into a paste, with three liters of a mixture consisting of 90% methanol and 10% water, 2 kg of finely ground root bark of Zizyphus oenoplia (L.), then the paste is placed in a percolator. and percolated with a total of 22 liters of the same mixture. The extract solutions are concentrated under reduced pressure to between 1/5 and 1/10 of their initial volume, during which concentration crystals are deposited on the walls of the container. The whole is left to stand overnight, then filtered with suction and a light brown crude crystallizate is thus obtained.
In order to purify the crude crystallize, it is triturated several times with portions amounting to 500 cm3 of 50-70% aqueous methanol and filtered each time with suction to remove impurities from the solution.
16.5 g of a light yellow-brown crystallize is obtained. The latter crystallized out several times with a large volume of ether, and the solution was then decolorized each time with norite and evaporated to dryness, giving about 8 g of an almost colorless crystallizate melting at 305-308 00 On repeated recrystallization from a mixture of ether and methanol the melting point of the active substance 19497-0 thus obtained increases to 318-320 0.
Example b
Is put into a paste, with 12 liters of a mixture of 9 parts of methanol and one part of water, 8.960 kg of finely ground root bark of Zizyphus oenoplia (L.) Mill. and the mixture is introduced into a reflux extractor, then extracted for 2 hours at reflux with 15.5 liters of methanol. The extract solution is concentrated under reduced pressure to about 5 liters, during this time crystallization takes place on the walls of the flask and the mixture is then allowed to stand overnight. It is then filtered with suction and 56 g of a crude light red-brown crystallizate (a) is obtained.
The residue remaining in the extractor is then extracted again under reflux with 11.5 liters of methanol for 4 hours and the extract solution is evaporated in vacuo to about 4.5 liters. After allowing the solution to stand for 15 hours at 100, the crystals which formed were filtered off. 126 g of a strongly crystalline brown residue (b) are thus obtained.
By a third extraction under reflux for 5 hours with 10 liters of methanol, followed by concentration of the extract solution, only a little of a dark brown amorphous substance separated.
One gram of the crude crystallize (a) or (b) finely disintegrated, while still in a slightly moist state, is purified by treatment. a ',' mixture of 10 cm3 of d i'ôxane and 10 cm3 of methyl-cellosolve and this while stirring vigorously and heating the mixture to 30-35 C. Then 0.1 to 0, 2 g of hyflo and the mixture is filtered to remove a brown flocculent residue. Add 10 cm3 of a concentrated ammonia solution to the filtrate, so that it precipitates a small amount of flakes
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dark, consisting of the impurities mixed with the active substance 19497-C, which are then separated by filtration using 0.2 to 0.3 g of hyflo.
15 cm3 of a saturated sodium chloride solution are added to the filtrate containing the ammonium salt of the active substance 19497-C, then the mixture is left to stand for one hour and filtered with suction. When the filtered residue has been taken to dryness by suction, it is washed with 1 to 2 cm3 of water.
The dried residue is dissolved in 10 cm3 of hot methanol, the solution is filtered through a paper pleat filter to remove undissolved brown flakes and the yellow to yellow-green solution is concentrated under reduced pressure to a small volume. obtained. After addition of an excess of ether, a poorly soluble crystallization product immediately forms of the sodium salt of the active substance 19497-0 which is separated. It does not melt up to 360 C. By concentrating the mother liquor to a small volume, followed by crystallization from methanol, the active substance 19497-0 is obtained in a pure form in the free state. .
Example c
100 mg of crystallizate 19477-C is dissolved in 1 cc of pure pyridine with slight heating. Then 2 cm 3 of acetic anhydride are added, then the flask is closed and allowed to stand overnight at room temperature. Water is then added slowly, while cooling with ice, until the mixture has a volume of 20 cm3 and then a colorless substance separates. The mixture is extracted three times with 100 cm3 of ether each time and the ethereal solution is washed successively with a small quantity of binormal hydrochloric acid, with water, with a solution of binormal potassium bicarbonate and with water. The solution is dried with calcined sodium sulfate, filtered and evaporated to dryness in vacuo.
The amorphous residue is dissolved in hot methanol. By allowing the mixture to stand overnight, it crystallizes 75 mg of the crude acetate. The latter is recrystallized from methanol and 44 mg of colorless acetate lamellae of the active substance 19497-Ce, melting at 2930, are thus obtained.
Example d
The crude active substance 19497-c can be purified as follows: 0.66 g of the crude crystallizate obtained from ether is boiled for half an hour at reflux in 5 cm3 of acetic anhydride (see Example I). and the mixture is then allowed to stand overnight at room temperature. The solvent is removed in vacuo, the residue dissolved in hot methanol and the solution evaporated in vacuo to dryness. The residue amounting to 0.76 g is chromatographed through a column of 14 g of aluminum oxide (neutral, activity I). The elution is carried out first with pure benzene and then with benzene containing gradually increasing amounts of methanol. The acetate is eluted from the active substance 19497-C with a mixture of benzene and 5% methanol.
109 mg of the acetate fraction are hydrolyzed by reading it at reflux for one hour in a solution of 8 g of caustic potassium hydroxide in 100 cm3 of methanol and 10 cm3 of water. The methanol is then evaporated under vacuum and the mixture is extracted. which remains three times with each time 75 cm3 of ethyl acetate.
The extract solution is washed until neutrality with water, dried over calcined sodium sulfate, filtered and evaporated in vacuo to dryness. The residue is dissolved in hot methanol and the solution left to crystallize overnight) thus obtaining fine needles of active substance 19497-C (melting point 318-320 c).
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Example e
Wetted with 12 liters of 90% aqueous methanol, 8.96 kg of air-dried and finely ground root bark of Zizyphus oenoplia (L.) Mill., Placed in a reflux extractor and, after addition Additional 15.5 liters of pure methanol, extracted under reflux for two hours. The cooled extract solution is then concentrated under reduced pressure to a volume of 4.5 liters and left to stand overnight. The separated semi-crystalline precipitate is filtered off. 56 g of crude light red-brown crystallizate I are obtained.
Extraction is carried out a second time for 4 hours under reflux with 1.15 liters of pure methanol, the residue remaining in the extractor. Concentrate in vacuo to a volume of 4.5 liters of the solution, leave to stand overnight and filter the precipitate. 126 g of crude dark red-brown crystallizate II are obtained. A third extraction with 10 liters of pure methanol gives very little of a fatty precipitate after concentration of the extract solution. The mother liquors are removed from the solvent under vacuum from the crude crystallizates and 685 g of a dark red-brown foam are obtained.
10 g of crude extract I are finely pulverized and extracted under reflux for 5 hours with 500 cm3 of ether. The extract solution is evaporated to dryness under vacuum. 4.32 g of the ether extract are obtained (after evaporation).
Further extraction for 16 hours produced an additional 2.6 g of ether extract (after evaporation).
2.16 g of the ether extract (after evaporation) are dissolved in 40 cm3 of a mixture consisting in equal parts of methanol and ether. A small amount of undissolved flakes can be dissolved if desired by adding 10 cc of ether. A sufficient quantity of a binormal methanolic solution of sodium hydroxide (about 2 cm3) is added to the clear solution; the solution then shows a characteristic alkaline reaction on wet phenolphthalein paper. The mixture is then concentrated in vacuo to about 5 to 10 cm3 and after heating for a short time at 60 ° C. spontaneous crystallization of the sodium salt of the active substance 19497-C occurs. The magma of viscous crystals is filtered by suction and while it is still hot.
The crystal cake is washed first with 10 cm3 of a mixture of 3 parts of ether and one part of methanol, then with about 20 to 30 cm3 of a mixture of 7 parts by volume of ether. and a part by volume of methanol and finally with pure ether, then dried. 0.6 g of crystals of the sodium salt of the active substance 19497-C are obtained in practically colorless form.
The sodium salt (0.6 g) is converted into the free acid by dissolving it in a minimum amount of methanol (about 18 cm3), removing traces of a flocculent precipitate by filtration with a little hyflo and acidifying the clear solution with 0.2 to 0.3 cm3 of 25% methanolic hydrochloric acid.The active substance 19497-C crystallizes spontaneously and can be isolated, after being allowed to stand for several hours at 0 C, by filtration and washing with a small quantity of ice-cold methanol. After seeping beforehand at 305 C, the product melts at 312-313 C. By recrystallization from methanol, the melting point changes to 318-320 C.
Example f
Ori dissolved in 40 cm3 of a mixture of methanol and ether (1: 1) 2.16 g of the ether extract (after evaporation) obtained as described in example e, and 20 cm3 d 'a 0.2 -normal methanolic solution of barium hydroxide. The flocculent precipitate formed is removed by filtration. The mixture is then concentrated in vacuo to about 10 cm3, the barium salt of substance 19497-C gradually separating out by crystallization. The mixture is filtered by suction, the cake of crystals is washed as described in example e for the salt of
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sodium and 0.62 g of the barium salt of the active substance 19497-C is obtained in the form of a colorless crystal powder.
Conversion to the free acid is carried out as described in Example e.
Example g
Is extracted in a reflux extractor for 10 hours twice with 300 cm3 of ether, 60 g of air-dried and finely ground roots of Zizyphus jujuba Lam. and the extract solution is evaporated to dryness under vacuum. 1.07 g of light yellow ether extract is obtained (after evaporation).
From the latter, the sodium salt of the active substance 19497-C is obtained as described in example e, by dissolving the extract in about 10 cm3 of a mixture of ether and methanol, adding 1, 2 cm3 of a binormal methanolic solution of sodium hydroxide, concentrating the mixture, heating the residue to 60 C (in this case crystallization occurs only slowly), allowing the reaction mass to stand for several hours, by filtering by sucking the magma of crystals and washing. Yield. 0.15 g of the sodium salt which can be converted to the active substance 19497-C by acidification, as described in example e.
Example h
As described in Example e, 2.6 kg of air-dried and finely ground roots of Zizyphus jujuba Lam are wetted with 3.4 liters of 90% aqueous methanol. and, after further addition of 4.2 liters of pure methanol, extraction is carried out for 2 hours in a reflux extractor. The extract solution is concentrated in vacuo to a volume of about one liter and left to stand overnight. The precipitate is then filtered off to give 74.2 g of crude crystallizate I. A second extraction carried out in the same manner with 3.4 liters of methanol (5 hours) yielded 3.32 g of crude crystallize II.
The dried mother liquors form 159 g of foam.
10 g of crude crystallizate I are finely pulverized and extracted for 8 hours with 500 cm3 of ether in a reflux extractor. The solution extract is evaporated to dryness in vacuo. 6.0 g of a light yellow ether extract is obtained (after evaporation). From the latter, the sodium salt of the active substance 19497-C is obtained, as described in example e, by dissolving the extract in 60 cm3 of a mixture of ether and methanol, in adding 7.0 cm3 of a binormal methanolic solution of sodium hydroxide, concentrating the mixture, heating the residue to 60 C (crystallization occurs relatively slowly) and allowing the reacted product to stand for several hours. tional, then filtering by sucking the magma of crystals and washing.
Yield: 0.87 g of the approximately colorless sodium salt which can be converted to the active substance 19497-C by acidification, as described in example e.
Example i
4.67 kg of air-dried and finely ground roots of Zizyphus xylopyra Lam are wetted with 6 liters of 90% aqueous methanol, as described in example e. and, after further addition of 7.5 liters of pure methanol, extraction is carried out for two hours in a reflux extractor. The extract solution is concentrated in vacuo to a volume of about 3 liters and left to stand overnight. The precipitate formed is filtered off and 77.1 g of crude crystallizate I are obtained. A second extraction carried out in the same manner with 6 liters of methanol (5 hours) affords 13.0 g of crude crystallizate II.
The dried mother liquors form 236 g of foam.
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10 g of crude crystallizate I are finely pulverized and extracted for 8 hours with 500 cm3 in a reflux extractor. The extract solution is evaporated to dryness in vacuo and 5.8 g of light yellow ether extract are obtained (after evaporation). From the latter, as described in example e, the sodium salt of substance 19497-C is obtained by dissolving the extract in 50 cm3 of a mixture of ether and methanol, adding 6 , 5 cm3 of a binormal methanolic solution of sodium hydroxide, concentrating the mixture, heating the residue to 60 C (crystallization occurs very slowly), allowing the reaction product to stand for several days, by filtering the magma of crystals by aspirating and washing.
Yield: 0.34 g of weakly colored sodium salt of the active substance 19497-C, which can be converted to the free active substance by acidification, as described in example e.
Example k
80 g of air-dried and finely ground roots of Zizyphus rugosa Lam are extracted in a reflux extractor (paper bag) for 10 hours, twice with 300 cm3 of ether. and the extract solution is evaporated to dryness in vacuo. 1.69 g of ether extract are obtained (after evaporation). From the latter, the sodium salt of the active substance 19497-C is obtained, as described in example e, by dissolving the extract in 15 cm3 of a mixture of ether and methanol, in adding 1.7 cm3 of a binary methanolic solution of sodium hydroxide, concentrating the mixture, heating the residue to 60 ° C., filtering the magma of crystals by aspirating and washing.
Yield
0.26 g of the almost colorless sodium salt which can be converted to the active substance 19497-C by acidification.
Example 1
Extraction is carried out in a reflux extractor (paper bag) for
13 hours, with one liter of ether, 163 g of air-dried and finely ground roots of Zizyphus nummularia W. & A. and evaporate the extract solution to dryness in vacuo. 3.52 g of greenish yellow ether extract are obtained (after evaporation). From the latter one obtains the sodium salt of substance 19497-C, as described in example e, by dissolving the extract in 80 cm3 of a mixture of ether and methanol, adding 4.5 cm3 of a binormal methanolic solution of sodium hydroxide, concentrating the mixture, heating the residue (crystallization occurs relatively slowly), and allowing the reaction product to stand for two days, filtering the magma of crystals by vacuuming and washing.
Yield: 0.25 g of the reddish sodium salt of the active substance 19497- which can be converted to the free hydroxy acid by acidification, as described in example e.
Example m
As described in example e, 97 g of the air-dried and finely ground root bark of Alphitonia neocaledonica Schltr are wetted with 400 cm3 of 90% aqueous methanol. and cold percolate with a total amount of
3.7 liters of methanol. Concentrate under vacuum to a volume of approximately
100 cm3, the extract solution and leave., Stand overnight. The precipitate formed is separated off by filtration to obtain 0.99 g of a crude light brown crystalline material. The latter is boiled at reflux twice with 60 cm 3 of ether and for one hour each time, each time the extract from the solution is removed by filtration and evaporated to dryness in vacuo. A total of 0.7 g of the ether extract is obtained (after evaporation).
From the latter one obtains the sodium salt of the active substance 19497-C, as described in example e, by dissolving the extract in 10 cm3 of a mixture of ether and methanol, adding 0, 7 cm3 of a binormal methanolic solution of sodium hydroxide, concentrating the
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reaction product, heating the residue to 60 C, filtering the magma of crystals by aspirating and washing. Yield: 0.16 g of the almost colorless sodium salt which can be converted to the active substance 19497-C by acidification, as described in example e.
Example n
0.5 g of the sodium salt obtained as described in Example i is subjected to a countercurrent distribution. The solvent system is prepared by mixing 2 parts by volume of methanol, 2 parts by volume of chloroform and one part by volume of water. An upper phase is obtained which consists mainly of methanol and water and a lower phase which contains most of the chloroform. The substance (0.5 g) is dissolved in 50 cm3 of each of the two phases and is poured into the first two tubes of a distribution machine (Craig type) with 25 cm3 of each of the lower and upper phases per tube. . The distribution is carried out over 11 stages (tube N 0-12), emulsions forming from time to time in some of these tubes.
Evaluation is made by removing the contents of the tubes, evaporating in vacuo and weighing. This results in a weight curve which rises almost uniformly on both sides and in which the tubes 8 and 9 form the top.
The two top fractions are combined and recrystallized from methanol.
The resulting sodium salt of active substance 19497-C is not discolored at 360 C and is not melted. Its ultra-violet spectrum shows, like the free acid, simply a low residual absorption between 250 and 220 mu. The infra-red spectrum in nujol differs from that of acid mainly by a displacement of the band from 5.93 u to 6.49 u and the disappearance of the band at 8.15 u. There are separate bands at 3.01u, 6.07u, 6.39u, and 11.39p and dual bands at 9.60-9.69u. In the case of the sodium salt, the specific optical rotation [a] D in methanol is also close to 0.
Example o
2 g of the active substance 19497-C are dissolved in 20 cm3 of pyridine and left to stand for 24 hours at room temperature with 5 cm3 of acetic anhydride. After 24 hours at room temperature, the solution is adjusted to a pH of 1 with ice and the hydrochloric acid is concentrated and filtered by aspirating the product. It is recrystallized from methanol and the acetate of the active substance 19497-0 which results therefrom melts at 293 ° C. and has a specific optical rotation [a] 22 = + 20.1 (in chloroform).
D
EXAMPLE II
Tablets of the following composition can be prepared in the usual manner:
EMI10.1
<tb> Factor <SEP> 19497-C <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb> starch <SEP> 40 <SEP> mg
<tb>
<tb> gelatin <SEP> 2 <SEP> mg <SEP>
<tb>
<tb> talc <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb> magnesium <SEP> stearate <SEP> <SEP> 5 <SEP> mg <SEP>
<tb>
<tb> lactose <SEP>, q.s. <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
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EXAMPLE III
Capsules containing 100 or 200 mg of factor 19497-C in liquid paraffin or polyethylene glycol can be prepared in the usual manner.
EXAMPLE IV
Suppositories containing 150 mg of factor 19497-C in the sufficient quantity of cocoa butter, up to 2 g, are prepared in the usual manner.
CLAIMS.
1. New pharmaceutical compositions exhibiting anti-virus activity comprising a component selected from those belonging to the group consisting of factor 19497-C, its esters and salts, and a pharmaceutical carrier.
2. New pharmaceutical compositions exhibiting anti-virus activity, for oral use, containing a component selected from those belonging to the group consisting of factor 19497-C, its esters and salts, and a solid pharmaceutical carrier.
3. New pharmaceutical compositions exhibiting anti-virus activity, for parenteral use, comprising a component selected from those belonging to the group consisting of factor 19497-C its esters and salts, and a pharmaceutical carrier suitable for injection.
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