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La présente invention concerne, de manière générale, de nouveaux composés stéroides et des procédés pour leur préparation. Plus particulièrement, elle est relati-
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ve à de nouveaux composés 16-méthyl-11-oxygéné-l,i-prégna- diène-17 0( ,21-diol-3,20-diones, et au procédé de préparation de ces composés au départ du composé 16-méthyl-ll-oxy- géné-4-prégnène-17 o(,21-diol-3,20-dione correspondant.
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Ces nouveaux Composés 16-méthyl-11-oxygéné-l,l-prégnadiène-17 0(,21-diol-3,20-diones possèdent une activité anti- inflammatoire extrêmement élevée et conviennent spécialement pour le traitement de l'arthrite et de maladies apparentées, étant donné qu'elles peuvent être administrées pour leur action cortisonale à des doses extrêmement faibles, en réduisant au minimum les effets secondaires indésirables.
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Les nouveaux composés 16-mêthyl-11-oxygéné-1,.prégnadiène-17 ol ,21-diol-3,20-diones, faisant l'objet de la présente invention, peut être chimiquement représenté comme suit :
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dans laquelle X est de l'hydrogène ou du fluor, R désigne
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de 7.rkrydroF-ne ou un radàcr;1 cvmonyl d'liydrocirbure inférieur et7st un substituént ceto ou hydroxy.
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Ces composés l6-méthy'= :...oxCgéné-1,;."Yprégnadiè-. ne-17 0( ,21-diol- (3-d.ozes se p âp;rent par contact du composé 16-wéthyl-li-oxygéné-Q-pà'égiiéne-1? d 21-aiol, 3,20-dione correspondant avec la fonction déshydrogénante de microorganismes de la classe des Schizomycètes,qui comprend les microorganismes appartenant aux typs des
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Actinomycetales et uba et ena les. Les Eubaçteriles préfé- rées comprennent des microorganismes du genre Acetobacter, du genre Aarobacter, et du genre Bacillus; les Actinomycetales préférés comprennent des microorganismes du genre Nocardia et du genre Mycobacteriu.
On préfère particulièrement employer des microorganismes de la classe des Schizomycetes Appartenant aux espèces suivantes, Acetobacter xylinum, Aerobacter aerogenes, Bacillus
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snhaericus, Nocardia erythropolis, Nocardia blackwellii, Nocardia asteroides, Nocardia minima, Nocardia globerula, Nocardia leishmanii, Nocardia formica, Nocardia convoluta,
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Nocardia corallina, et 1!Iycobacterium smegmatis, Mycobacterium phlei, i'ycobacteri.um lacticola, et Mygobacterium tuberculosis.
L'espèce Bacillus sphaericus, telle que dé- finie dans le "Manuel for Determinative Bacteriology,"de Bergey, 6ème Edition, comprend plusieurs variétés, telles que la variété rotans , la variété fusiformis, etc.. et, dans certaines collections, ces variétés sont désignées par les noms d'espèce Bacillus rôtans et Bacillus fusifor- mis. Ces microorganismes de la classe des Schizomycètes peuvent être obtenus à des sources connues, telles que l'American Type Culture Collection, Washington, D.C.; ils peuvent aussi être isolés de sources naturelles, telles que le sol, par des méthodes connues.
Il est à noter que, pour une espèce donnée de Schizomycètes, les souches déshydrogénantes préférées peu- vent être choisies par le test suivant : Un milieu nutritif-
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contenant 1 g. (le ceré10se, 1 ,,:' :damzr¯p, : ,;'; ;1 de liqueur de macéra Mon ds [u.ï8) f.<, >i '.J' ù' o=,tr. 5.1 4x. -.evur et suffisamment d'e:.: 1 stillv1 par *bte>%1 , :îl1 volume de 50 ml, est amené à un pH de bus rilisé inoculé à l'aide d'une culture ae la sou:;:!1.:; ',pier., r'?: ;.Ù3me particulière à tester pour son activité ;3.ésx?varc;ïerL::;,a er l La culture inoculée rësultpnte e,, .:rt.2z;,ée alors à une température de 280 C, en agitant, pendant: bzz. heures, et à la culture résultante on ajoute une S\.Jl1x::içr> contenant 10 mg. dthgdracortisor,e dissous dnnf 0,1 m3 de diféthylforma- mide.
La culture contenant le composé stércde est incubée, en agitant, pendant une période supplémentaire d'environ 10 heures à 28 C. le bouillon de fermentation est extrait, de manière répétée, à l'aide d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate dthyle sont combinés et évaporés jusqu'à siccité sous vide. Une partie de la matière résiduelle est dissoute dans de l'acétone et étalée par taches ou touches sur un chromatogramme de papier, qui est développé en utilisant de la formamide comme phase stationnaire et du chloroforme comme phase mobile. Deux bandes séparées sont ordinairement obtenues, la bande inférieure correspondant à 1'hydrocortisone; la bande supérieure correspond au dérivé -déshydrogéné. Les deux bandes sont découpées et éluées séparément avec du méthanol.
Chacun des éluahts méthanoliques est soumis à une analyse d'absorption d'ultra-violet. L'efficacité de la souche de microorganismes testée pour effectuer la -déshydrogénation est indiquée par les proportions relatives de dérivé #1- déshydrogéné et d'hydrocortisone inchangée, mesurées par cette analyse d'absorption d'ultra-violet.
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Les lb-méthyl-11-oxygéné--prégnène-17 0(,21- diol-3,20-diones utilisées comme matières de départ dans ce procédé sont avantageusement préparées en partant du
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3-acé Late de 1 ":.¯ o ,.,:ß e- o( --r " :¯., :0-dione par le mode opératoire suipe:-fr î<, fait .t :3::lgL du 3-acétrta de 16-prégnène-30( avec de ".:. 9.odtzre de métbyl magnésium en présence de chlorure eu4-vÈ,ux, de fu3nire à former du 3-acétate de 160=, mmétinyl-pragnaîe3o( =7c1-1120-dione, qui est mis en réaction avec th1 l' (' ci..-te chlorhydrique méthanolique aqueux de manière à forcer de 160((-méthyl-prégnane-3o( -0l-11,20-d.oaem.:
e dernier composé, qui est un puissant anesthésique, est mis en réaction avec de l'anhydride acétique en présence diacide p-toluène sulfonique comme catalyseur, de manière à former un mélange d'acétates énoliques contenant du 3,20-diacétate de 16o(-méthyl-
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l?,30-pr-égnène-3d ,20-diol-11-one; ce mélange, après puri- fication chromatographique pour éliminer la matière de départ inchangée éventuelle, est mis en réaction avec de 11-acide perbenzoique et le 3,20-diacétate de 16[alpha] -méthyl-
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170( -P!#t'hy;è'rJ:7' , ,20-époxy-prégnane-3c( ,20-diol-11-one ré- sultant est hydrolysé avec du bicarbonate de potassium mé-
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thanolique, de manière à produire de la 16o(mm6thyl-prégnane-3o( ,1701 -diol-11,20-dione.
Ce dernier composé est mis en réaction avec du brome dans du chloroforme, de manière
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à former de la 21-bromo-16 -méthyl-prégnane-3o( ,170( -diol-' 11,20-dione, qui est mise en réaction avec de l'iodure de sodium dans de l'acétone, de manière à produire de la 21-
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iodo-1601 -wéthyl-pr-égnane-301 lo( -diol-11, 20-dione, qui est convertie sans isolement en 21-acétate de 160( -méthylprégnane-3o( ,170,21-triol-11,20-dione par réaction avec de l'acétate de potassium anhydre;
ce composé est mis en réaction avec du trioxyde de chrome dans de la pyridine, de
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manière à former du 21-acétate de 16o(-méthyl-prégnane- 170(,21-diol-3,11,20-trione. Le 21-acétate de 16o(-méthyl- prégnane-17o(,21-diol-3,11,20-trione est mis en réaction
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avec ciu brome .3ür,:. un mêla:ar ..1 .;dde acét .." glacial et de chloroforma 1# manière .. ,:'.;C t :..!'s di . : ...- 'omo-l6o('" méthyl-prégn&ne-!.7o( 21-cie g 3 , 1 1 'u-'?r-' ie, i; > : : est a' ors mise en réaction avec de éi aesi t:. oazid :, ¯ maniera former de la 3,20-bis-se'itiearo.-e de 2i-ac;#ate 16o( -rn&thyl-4-prégnèn17o( ,21-di 1-3/L1 :2<J,triol':e.
Cette 3,20bis-samicarbazc. est mise el t .:.- . :,.an avec du borohydri-. de de sodium de manière é. for,"f-r as 3 ):W-:Jis-semica.i"bazone, lo( --méthyl.-l-prégnéne-Iï3 , 170( .21-trio: 3,20-dio- ne, qui est hydrolysée dans des conditions acides, da ma-
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nière à former de la 16 o( -mëtnvl.-.-préûnène-l¯ 3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione; ce composé est mis en réaction avec des agents estérifiants, tel que l'anhydride benzoïque ou les anhydrides alcanoiques inférieurs, de manière à former les 21-esters correspondants.
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La 3,20-bis-senicarbazone de 21-acétate de 16 d . mét 'l-4-prégnène-17 0(, fll-diol-3,11,20-tr-ione, est mise en réaction avec du bicarbonate de potassium ou de l'hydroxyde de potassium dans du méthanol aqueux, de manière à former de la 3,20-bis-semicarbazone de 16 c( -méthyl-4-pré-
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gnène-17 ol ,21-diol-3,11,20-tr-ione, qui est alors hydrolysé dans des conditions acides, de manière à produire de la 16 c( -méthyl-4-prégnène-1? d ,21-diol-3,11,20-trione à fonction alcool libre en 21 ; composé est estérifié, en utilisant les agents estérifiants susmentionnés, de manière à produire les 21-esters correspondants.
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La 16 0( -méthyl--J--prëgnène-11 3 , 1? ol , 21- triol-3,20-dione, par réaction avec de l'anhydride acétique dans de la pyridine, produit le 21-acétate correspondant qui est mis en réaction avec du chlorure de méthane sulfo- nyle puis avec de l'acétate de potassium acétate ou de l'oxychlorure de phosphore, de manière à produire du 21-acé
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tate de 16 0( -méthyl-.,9(llj-prégnadiêne-17 q ,21-diol-
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3,20--ilo.ne; ce 5Grnier composa s'.'.', mis en réaction avec de l'acide i!yl6JJid;:.w de man:1..i,; --0 3 p:':Jduire du 21-acétate de 9 o(- bromo-16 0( -é'chyl-4"'praguèna-ll 117 o( , 21triol-3t20-dione, qui est mis en r0ction avjv. de l'acétate de potassium dans de l'éthanol, de manièm à produire du 21-acétate de 16 0( -méthyl 1 â .3 -époxy-1 ,pa-;nène-17 c( , 21-diol-3,20-dione.
Ce 9,11-époxyde est alors mis en réaction avec ôa fluorure dehye-rogùne dans da tétrahydrofurane, de manière à produire du 21-"acétate de 16d-méthyl- 9 o(-fluoro-4"prégr[ène-ll , 17 ci. ,21-tr;.U:,20-dione,; ce composé est mis en réaction avec un agent d'hydrolyse de manière à former de la 16 [alpha] -méthyl-9 [alpha] -fluoro-4-prégnè'
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ne-11 , 17 o( , 21-tr.ol-3,20-dione à fonction alcool li- bre en 21. Cet alcool est mis en réaction avec un agent estérifiént, tel que l'anhydride benzoique, les anhydrides alcanoiques inférieurs et analogues, de manière à former le 21-ester correspondant.
Le 21-acétate de 16 o(-méthyl-9 o(-fluoro-4- prégnène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione est mis en réaction avec du trioxyde de chrome dans de la pyridine, de manière à former du 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-9 0( -fluoro
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4-prégnène-17 c( ,2l-diol-3,ll,20-trione qui, par réaction avec un agent hydrolysant, forme de la 1601 -méthyl-9 d - fluoro-4-prégnène-17 c( , 21-triol-3,11,20-trione à fonctio alcool libre en 21. Cet alcool libre en 21 est mis en réaction avec des agents estériiants, tels que ltanhydri- de benzoique, les anhydrides alcanoiques inférieurs et ana' logues, de manière à former les 21-esters correspondants.
Parmi ces 16-méthyl-ll-oxygéné -4-prégnène- 17 [alpha] ,21-diol-3,20-diones de départ, on peut citer la 16 [alpha]
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méthyl-4-pr-égnène-1? d , 21-àiol-3,11,20-tr-ione et ses 21- esters, et en particulier ses 21-esters carbonylés d'hydro- carbures inférieurs, comme %benzoate le 16 o(-méthyl-4-
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prC-;r.ène-17 G\ ; .:.. -dio...3 ,: , s .rîons 2'..". ; 1,>#5 21-alca;.Gateo i.nférie!z. - d," 16 c - ¯.=p" --arègnère=-li à , 21dioJ.- 3,11,20-trione, te 1 ql6 1 e 21 -.a ré# a te co 1:::' 0( -méthy:t.-J..prégnène-17 d 21.-diol- , l , 2C-r, r ior.e; le 21-propionate de 16 o( -méthyl-4-préjni#>e-1? 0\ , 21-diol-? .,2U-trione; la 16 0( -méthyl-1-prénène-lL ll3 , 1'1 d , 2l-.;
îo'-.3?0-dîorm jsters et ses 21-esters,et on particulier les 2Jlcerbonylés d'hy-
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drocarbures inférieurs, tels que le 21-benzate. de 16 0(méthyl-4-prégnèna-ll /J ' 17 0( , 1-triol , 2u-üione ,'.-; les 21-alcanoates inférieurs de 16 o(-méthyl-4-prégnène- 11 /3 , 170(, 21-triol-3,20-dione, tels que le 21-acétate de l6 0( -méthyl-.-prégnène-li , 17 o( , 21-triol-3,20dione; le 21-propionate de 16 0( -méthyl-4-prégnène-ll jJ , 17 0( , 21-riol-3,20-dione; la 16 c -méthyl--' c( -fluor'o- 4-prégnène-17 d ,21-diol-3>11,20-trione et ses 21-esters,
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et en particulier les 21-esters carbonylés d'hydrocarbures
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inférieurs, tels que le 21-benzoate de 16 o(-méthyl-9 0( -
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fluoro-4-prégnène-17 0(, 21-diol-3,11,20-trione;
les 21-
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alcanoates inférieurs de 16 d -méthyl-9 0( -fluoro-4-prégnène-17 o ,21-diol-3,11,20-trione tels que le 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 o(-fluoro-4-prégnène-17 0( - 21-diol-3 ,11, 20-
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trione; le 21-propionate de 16 c( -méthyl-9 o(-fluoro-4-
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prégàÀàe-17 d , 21-diol-3,11,20-trione; la 16 0( -méthyl- . ;,J;, .
9 0( =luoro-l-prégnène-11 3 , 17 d , 21-triol-3,20-dione
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et ses 21-esters, et en particulier ses 21-esters carbonylés dhydrocarbures inférieurs tels que le 21-benzoate de
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16 0( ,-méthyl-9 0( -fluo-ro-l-prégnène-11 /3 , 17 o( , 21-triol- 3,20-dione; les 21-alcanoates inférieurs de 16 c( -méthyl- 9 0( -fluoro-!-prégnëne.-11 /3 , 17 0( , 21-triol-3 , 20-dione, tels que le 21-acétate de 16 c( -méthyl-9 d-fluoro-y-prégnène-11 , 17 d , 21-triol-3,20-dione; le 21-prmptonate de 16 c( --méthyl-9 -fluaro-x,-pr è;nène-11 , 17 c( , 21-
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triol-3,20-dione et analogues.
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(;u :"'ormément à la présente invention et en utlisant les couchas préféi 4e5: àe microorganismes âchi,z2M7 cétes, le déshydrogénaticn du compose l6-N4thyl-ll-oxygéné-' 4-prégnène-17 21-di o:i3 , :0-dione est effectuée en mettant le composé 3téroide er. contact avec les microorganismes Schizomycètes, eux-mêmes o . si on le préfère, avec les systèmes enzylatiques de microorganismes Schizomycètes. er sorte que l'hydrogène attache aux atomes de carbone C-1 et C-2 est sélectivement enlevé, de manière à produire le #1, stéroïde désiré sensiblement non contaminé par des sous-produits non désirés.
Lorsque le composé 16-méthyl-
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11-c:acygëné-.-prégnène-17 , 21-diol-3,20-dione est soumis à l'activité déshydrogénant-3 des souches déshydrogénantes préférées de microorganismes Schizomycètes, on obtient directement et avec un rendement élevé le composé 16-méthyl-
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11-oxygéné-l,l-prégnadiène-l'7 q , 21-diol-3,20-dione cor- respondant.
Le traitement de déshydrogénation microbiologi= que suivant l'invention est effectué en mettant le composé l6-méthyl-ll-oxygéné-4-prégnène-17 c( , 21-diol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganis- mes Schizomycetes. Ceci peut se faire en ajoutant le com- posé stéroïde, sous forme solide ou sous forme d'une solu- tion dans un solvant, telle qu'une dialcoyl-cétone, comme l'acétone, une dialcoyl-formamide, telle que la diméthylfor--' mamide et analogues, dans des conditions stériles, à une culture du microorganisme dans un milieu nutritif et en agitant le mélange résultant, de manière à faire croître le microorganisme et à déshydrogéner le composé stéroide.
Le stéroide peut être ajouté au moment où le milieu nutritif est inoculé à l'aide de la culture de microorganismes Schizomycètes, ou bien il peut être ajouté à une culture
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t.abl1.e. Au 1 se d'ajcutel < , t -osé stéx<.w s: à la culture établie dans .le milieu r"t;s- les cell'l1.±: obtenues de cette culture établie peuvent:
ire réparées du bouillon par filtration, lavées avec de @@ distillée, puis mises
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en suspension dans une solution qae4F.r '";)mponnée convenant le composé 16-méthyl-11-o"gënéf.-prégzèr.e-.1% , J 21-diol- 3,20-dione, après cuoi le mélange résultant 95i agité de manière à réaliser la déshydro 2;éT\at.ion du '!oi2PQsé stércîde et à former la 16-méthy.-il-oxygéz-' ,.-prégriâiéne-ll d , 21-diol-3,20-dione correspondante.
Ce demie..' composé est plus facilement récupéré de ce milieu que du mélange obtenu lorsque le stéroide est incubé avec le microorganisme dans le milieu nutritif originel. Le composé 16-méthyl-
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ll-oxygéné-4-prégnène-17 0( ?l-diol-3,20-dione pout être aussi mis en contact avec des préparations enzymatiques déshydrogénantes provenant de la croissance de microorganismes Schizomycètes.
Les milieux nutritifs utilisés pour effectuer cette déshydrogénation bactériologique sont ceux ordinairement utilisés pour la propagation de microorganismes Schizomycétes. Les milieux nutritifs usuels comportent une - source de carbone et d'azote, des sels inorganiques et des facteurs de croissance, en cas de besoin. Le carbone peut être fourni par des composés, tels que des acétates, des lactates et analogues.
L'azote peut être fourni par un sel d'ammonium, des amino-acides ou des protéines, telles que les graines de soja, des avoines, de la levure, des extraits de levure, du produit de digestion tr@ptique de caséine, des extraits de viande, de la farine au sang, de la viande protéinique et des fragments d'os, de la farine de saumon, des farines de poisson, des matières solubles de poisson, des solubles de distillateur et analogues. Si on le désire, les microorganismes Schizomycètes peuvent être propagés en utilisant des protéines (ou des amino-acides)
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sans qu'aucun hlP:3e de carbone 1'10i t présent dans le milieu, auquel cas Le protéinefu cu 0mio=acides servent de source de carbone et d#azote requis par les tuicrocrganisC' f' mes.
Bien que, comme on l'a noté plus haut, la déshy-
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drogénation du composé l6-!néthyl"'il"oxygéné"4-prégnène- 17 d ,21-diol-s20--d.one puisse se',.ectuer en utilisant des préparations enzymatiques déshydrogénantes provenant de la croissance de microorganismes Schizomycètes ou en mettant le composé stérode en contact avec une suspension d'une culture établie dans de 1 eau distillée, on préfère
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ordinairement ajouter le composé l6-méthyl-ll-oxygéné-4F prégnène-l7 0{ ,21-diol-3,20-dione à un milieu nutritif contenant une culture de 24 heures de microorganisles
Schizomycètes.
La proportion de composé stéroide, qui peut être ajoutée au milieu, varie en fonction du substrat particulier à déshydrogéner, mais on préfère ordinairement utiliser une concentration d'environ 0,005 % à 0,2 % de
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composé 16-méthyl-11-oxygéné-1-prégnène-17 ,21-diol- 3,20-dione, bien que des concentrations plus élevées ou moins élevées puissent être employées, si on le désire.
La culture contenant le composé stéroide ajouté est alors incubée, de préférence en agitant et en aérant pendant une période additionnelle, qui varie ordinairement entre environ 10 heures et 50 heures, bien que des temps de fermentation plus courts ou plus longs puissent être avantageux pour la déshydrogénation de substrats particuliers.
En raison du fait que des fermentations prolongées peuvent donner lieu à la destruction d'une partie du produit stéroide /\ -déshydrogéné, on préfère ordinairement appliquer un temps de fermentation d'environ 10 heures à 24 heures qui, en fonction du substrat stéroide, donne, ainsi qu'on l'a constaté, des rendements maxima en produit stéroïde
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L.., --déshYd'-', [;v' .'.0 tordue le gr ¯:,.:-..:.:
de dµ==1.>;,r<ià..;±ñation est. terminé, la 13.,mfthyi,-il-ixyàéi:,é-.î,-çi :grs,rïs.ne-17 c.{ , 21-diol-3,20-dione obtenue est <1Vlmta,:.u.' ,,:;l1\.- récupérée du bouillon fermenté par extraction avec un solvant non miscible à l'eau, tel que, p exemple, @ hydrocarbure
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chloré, comme le chlorofor,ne, u,e c4t0h3, Lomme la méthyl- isobutylcétone, un alcanoate d'alcoyle, comme l'acétate d'éthyle, et analogues. L'extrait du produit stéroïde -déshydrogéné et la matière de départ éventuelle qui n'a pas réagi et qui peut être présente est avantageuse-
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ment purifié par chromatographie en utilisant du gel de silice, de l'alumine activée ou analogue ou, si on le désire, à l'aide de chromatogrammes de papier.
Après sépara- ' tion du produit déshydrogéné de la matière de départ n'avait pas réagi, le produit peut être purifié davantage, si on le désire par recristallisation dans un solvant, tel que l'acétate d'éthyle, les mélanges d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, et analogues.
Par ce procédé de déshydrogénation microbiologie que, en utilisant les l6-méthyl-ll-oxygéné-4-prégnène- 17 [alpha], 21-dione-3,20-diones de départ énumérées plus loin,
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on obtient des 16-méthyl-11-oxygéné-1,y-prégnadiéne-1? d , 21-diol-3,20-diones, telles que la 16 d -méthyl-l,4-prégnadiène-17 0( ,21-dial-3,11,20-trione; la 16 -méthyl- 1,.-prégnadiène-11 j3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione; la 16 cl méthyl-9 c( -fluoro-17 c( ,21-diol-3,ll,20-trione et 16 c(méthyl-9 o(-fluoro-ll/3 , 17 d , 21-triol-3,20-dione.
Tant dans le cas où la 16-inéthyl-11-oxygéné-4-
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prégnène-17 o ,21-diol-3,20-dione de départ employée dans cette réaction de déshydrogénation microbiolique est un alcool libre en 21 que dans celui où il s'agit d'un 21-es-
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ter de celui-ci, le produit obtenu est la 16--m;ahyl--11-oxy-
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génél,.pre'.gn.d..èae-17 0( ,2..-d.-3,20-d:one correspondant à fonction alcool lib:'ffJ 2le étant donné que tout groupement 21-est'":.'.-s qui peut ét,1.a présent est hydrolysé pendant la réaction de déshydrogénation microbiologique.
Ces 16-méthyl-11-ocygénél,emprégnadiêne-l' o( ,21-diol-3,20- diones à fonction alcool libre en 21 peuvent être converties en 21-esters correspondants par réaction avec un agent d'acylation, tel qu'un agent de phosphorylation, un agent d'acylation d'acide carboxylique d'hydrocarbure inférieur, tel que l'anhydride benzoique, le chlorure de tert.-butyl acétyle, un anhydride alcanoique inférieur ou un halogénure d'alcanoyle inférieur tel que l'anhydride acétique, l'anhydride propionique, un anhydride d'acide polybasique,
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tel que ltanhydr:idë , -diméthyl-'glutarique, l'anhydride succinique, et analogues.
Suivant ce procédé d'acylation, on obtient des
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21-esters de 16 d -méthyl-1,4-prégnadiéne-17 d ,21-diol- 3,11,20-trione, tels que le 21-phosphate de 16 o(-méthyl- .
EMI12.4
1,y-prégnadiène-17 d ,21-diol-3,11,20-%rione, les 21-ester' d'hydrocarbures inférieurs de 16 o(-méthyl-1,.-prégnadiêne 17 0(,21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-benzoate de 16 ol-méthyl-1,%-prégnadiéne-1? d ,21-diol-3,11,20-trione; le 21-tert.-butyl acétate de 16 d-aéthyl-1,%-prégnadiénel7 d ,21-diol-3,11,20-trione; [Les 21-alcanoates inférieurs de 16 0( -méthyl-16 0( -méthyl-l,l-prégnadiêne-17 ci ,21-diol- 3,11,20-trione, tels que le 21-acétate de 16 c( -méthyl-1,4prégnadiéne-17 d ,21-diol 3,11,20-trione; le 21-propionate de 16 0( -méthyl-1,1-p'égnadiène-17 c( 21-diol-3,11,20-trione; les 21-esters de 16 4 -méthyl-1,.-prégnadiène-11 17 0(,21-triol-3,20-dioney tels que le 21-phosphate de 16 0( -méthyl.-ï,i-prégnadiène-.11,' 17 c( ,1-triol-3,z0-dione;
les 21-esters carbonylés d'hydrocarbures inférieurs de 16 o( méthyl-1,.-prëgnadiène-ll 3 , 17 c( ,21-triol-3,20-dione,
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tels que le 21-.; w =o de 16 <o-it.1:hyl-1,µ-=,1*égnadiéne- 11 , 17 z , 21- : o' - 3 20-' ï , .. le tert......mt.:. acétate de 16 0 -méthpl-1, .--p égnadi èn .=-i . 1 17 ' s -triol-3 , 20dione; les 21-alcpnoates inférée!'-s de 16 0( -.ety.-1,4.prégnadiène-l1 j3 r "s.? o( 21-trßu-" ,20-dione, '.:;els que le acétate de 16 d -méthyl-1,@-prégnadiène-li j3 , 9 17 cl 21-triol-3,20-dione; le 21-propionate di 16 d-méthyl-1,@prégnadiène-11 /3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione;
les 21-esters de 9 0( -fluor-16 0( -méthyl-l,4-prégnadière-l'l 0( ,21-
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diol-3,11,20-trione, tels que, par exemple, le 21-phosphate
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de 9 0( -fluor-16 0( -méthyl-1, t-prégr.adiène-l' c( ,21-diol- /21-
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3,11,20-trione; les esters carbonylés d'hydrocarbures infé-
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rieurs de 9 0( -fluoro-16 r( ..méthyl-l,t-prégnad.ène-1 0( , 21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-Denzoate de 9 c( fluoro-16 cl -méthyl-l,l-prégnadiène-l' d ,21-diol-3,11,20trione; le 21-tert.-butyl acétate de 9 o(-fluoro-16 0{ -méthyl-1,-prégnadiène-l' o ,21-diol-3,11,20-trione; les 21alcanoates inférieurs de 9 0( -fluor-16 d -méthyl-l,4-prégnadiène-17 d ,21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-acétate de 9 0( -fluoro-16 d -méthyl-1,1-prégnadiène..l7 0( ,21-
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diol-3,11,20-trione;
le 21-propionate de 9 0( -fluoro-16 c( -
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méthyl-1,4-prégnadiène-17 d ,21-dial-.3,11,20.-trione; les 21-esters de 9 o(-fluoro-16 d -méthyl-l,4-prégnadiène-17 0(,
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21-diol-3,11,20-trione, tels que, par exemple, le 21-phos-
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phate de 9 0( -fluoro-16 c(-méthyl-l,4-prégnadiène-ll f3 '
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17 o(,21-triol-3,20-dione; les 21-esters carbonylés d'hy-
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drocarbures inférieurs de 9 -fluoro-16 0( -méthyle.prégnadiène-11 , 17 o( ,21-triol-3,20-dione, tels que le 21-benzoate de 9 c( -fluoro-16 0( -méthyl-l,4-prégnadièneIl 6 , 1? 0(, 21-triol-,20-dione; le 21-tert.-butyl-acétate de 9 c( -fluoro-16 0( -aéthyl-1,.-prégnadiène-1Z f3 ' 17 o(, t 21-trio.-3,.20-dione;
les 21-alcanoates inférieurs de ,
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9 oi-fluoro-16 o( -méthyl-l,l-prégnadièna-11 3 , 17 o( , 21- triol-3,20-dione, tels que le 21-acétate de 9 o(-fluoro- 16 o(-méthyl-1,4-prégnadiène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20dione ; le 21-propionate de 9 o(-fluoro-1.6 o(-méthyl-1,4- prégnadiène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione, et analogue.
En variante, au lieu d'être soumis au traitement de déshydrogénation microbiologique susmentionné, le
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composé l6-méthyl-l,4-prégnène-17 o(-0l-3,20-dione ou, si on le préfère, le composé 16 -méthyl-prégnane-17 0(-0l- 3,20-dione saturé correspondant est mis en réaction avec du bioxyde de sélénium, de façon à provoquer une déshydro- génaion du noyau A et à former le composé l6-méthyl-l,4- prégnadiène-17 o(-ol-3,20-dione correspondant.
Ce procédé' de déshydrogénation au bioxyde de sélénium est avantageu-
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sement exécuté en mettant le composé 16-méthyl-I-prégnêne 17 0( -0l-3,20-dione ou le composé 16-méthyl-prégnane-17 0( ol-3,20-dione et le bioxyde de sélénium en contact l'un avec l'autre en présence d'un solvant organique, tel que le dioxane, un alcool solvant, tel que let-butanol, etc.., et en chauffant le mélange à une température élevée. Lorsqu'on utilise du t-butanol comme solvant, on préfère ordinairement exécuter cette réaction au point d'ébullition du solvant. Dans ces conditions, la réaction est ordinairement terminée en environ 15 heures.
Le mélange réactionnel est ordinairement filtré, de manière à séparer le sélé- nium métallique, et la solution filtrée est évaporée jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient le composa
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16-4'éthYl-le4-Prégnadiène-17 0(-0l-3,20-dione désiré. la; Matière brute obtenue de cette manière est avantagauseufn-it purifiée par chromatographie sur bandes de papier, selon le procédé décrit plus haut à propos de la purification des
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composés 16-méthyl-1,1.-pré;radiène-17 0( -0l-3, 2U-diar:t pro-
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duits par dél:Ùyci! ogènatiol1 u c. o.ologiqu.
Les exemples su1.Yant illustrent 4es modes d'eexécution de la présente invention, mais \1 iiho da soi que ces exemples sont donnés à des fins illustratives et non limitatives.
EXEMPLE 1
On prépare 50 ml d'un milieu nutritif de compo-' sition suivante :
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<tb>
<tb> cérêlose <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> édamin <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> de <SEP> mais <SEP> 0,25 <SEP> ml
<tb> eau <SEP> distillée <SEP> q.s. <SEP> ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KORE sté- rilisé et inoculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Bacillus sphaericus (ATCC-245). La culture inoculée est alors incubée à une température de 28 C, en agitant, pend dant 24 heures. A la culture résultante, on ajoute une
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solution contenant 10 mg de 16 o(-méthyl-4-prégnène-17 0(s 21-diol-3,11,20-trione dissous dans 0,2 ml de diméthyl formamide. La culture contenant le composé stéroïde est incubée, en agitant, pendant une période supplémentaire d'environ 24 heures à 28 C.
Le bouillon de fermentation est extrait avec quatre fractions de 50 ml d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle sont combinés et évaporés sous vide jusqu'à un volume d'environ 5 ml. La solution concentrée est alors étalée sur des chromatogrammes de papier, qui sont développés en utilisant de la diméthylformamide comme phase stationnaire et un mélange à 50 % de benzène et à
50 % de chloroforme comme phase mobile. Après 8 heures de
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développement dans un système descendarrtes bandes supé- rieures de chaque chromatogramme, correspondant au dérivé -déshydrogéné, sont découpées et extraites au méthanol
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et la matière oxtraite est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier.
La bande supérieure est à nouveau découpée, séchée à fond et extraite au moyen de méthanol.
L'extrait méthanolique est évaporé jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, en sorte
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qu'on obtient de la 16 d -métlyi-l,t-pràgnadiàna-J.7 c ,21.. diol-3,11,20-trione.
La 16 0( -méthyl-1,4-prégnadiène-17 c( ,21-dio1...
3,11,20-trione est traitée à l'aide d'anhydride acétique et de pyridine, ce qui permet d'obtenir le dérivé 21-acétylé, qui est purifié par recristallisation dans un mëlangd de benzène et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient le
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21-acétate de 16 c( méthyl-1,.-prégnadiéne-1 o( ,21-diol- 3,11,20-trione.
EXEMPLE 2
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On prépare 50 ml d'un milieu 1butritif' de compo- sition suivante :
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<tb>
<tb> cérélose <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> édamine <SEP> 1 <SEP> g. <SEP>
<tb> liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> de <SEP> mais <SEP> , <SEP> 0,25 <SEP> ml
<tb> eau <SEP> distillée <SEP> q.s.ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KOH, stérilisé et inoculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Nocardia asteroides (ATCC 9970). La culture inoculée est alors incubée à une température de 28 C, en agitant, pendant 24 heures. A la culture résultante, on ajoute une
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solution contenant 40 mg de 16 ci -méthyl-4-prégnène-ll jJ . 17 o( , 21¯triol-320-dione dissous dans 0,2 ml de diméthyl- formamide. La culture contenant le composé stéroide est incubée, en agitant) pendant une période supplémentaire d'environ 24¯heures à 28 C.
Le bouillon de fermentation est extrait avec
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quatre fractions .;( 50 ml d ±1.0(Jt<::t.6 d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle 3ont combinés et évaporés sous vide jusque un i+<.l,Luq.e d'environ 5 ml. La solution concend trée est alors étalée sur des r .1.'#natogrammes de papier, qui sont développes en utilisant de la dimathylformamide comme phase stationnaire et un mélange à 30 % de benzène et à 50 % de' chloroforme comme phase mobile. Les bandes
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supérieures de chaque chromatograia<e, correspondant au dérivé 6,l""déshydrcJgéné, sont découpées et extraites au mé- thanol et la matière extraite est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier. La bende supérieure est à nouveau découpée, séchée à fond et extraite au moyen de méthanol.
L'extrait méthanolique est évaporé jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et déther de pétrole,
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en sorte qu'on obtient de 16 ci -méthyl-l,i-prégnadiène- 11 3 , 17 Oi , 21-triol-3,20-dione.
La 16 c -méthyl-1,y-prégnadiéne-11 %3 , 17 c( , 21-triol-3,20-dione est traitée avec de l'anhydride acétique et de la pyridine et le produit acétylé est recristallisé dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 d -méthyl-l,4-pré-
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gnadi ène-11 jJ , 17 d , 21-triol-3,20-dione.
EXEMPLE 3
On prépare 50 ml d'un milieu nutritif de composition suivante :
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<tb>
<tb> cérélose <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> édamine <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> de <SEP> mais <SEP> 0,25 <SEP> ml
<tb> eau <SEP> distillée <SEP> q.s.ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KOH, stérilisé et innculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Mycobacterium smegmatis (NRRL B-1667). La culture inoculée
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est alors incubée à une température de 28 C, en agitant, pendant 24 heures. A la culture résultante, on ajoute une
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solution cftenant 10 mg de 16 o( -méthyl-9 o( R.f'luoro-4-prégnène-11 f3 , 17 o( , 21-triol-3,20-dione dissous dans
0,2 ml de diméthylformamide. La culture contenant le com- posé stéroïde est incubée, en agitant, pendant une période supplémentaire d'environ 24 heures à 28 C.
Le bouillon de fermentation est extrait aveé quatre fractions de 50 ml d'acétate d'éthyle et les ex= traits à l'acétate d'éthyle sont combinés et évaporés sous vide jusqu'à un volume d'environ 5 ml. La solution concen- trée est alors étalée sur des chromatogrammes de papier, qui sont développés en utilisant de la diméthylformamide comme phase-stationnaire et un mélange à 50 % de benzène et à 50 % de chloroforme comme phase mobile.
On obtient deux bandes, dont l'une (correspondant au composant le plus- mobile) révèle le maximum d'adsorption d'ultra-violet ca- ractéristique de la 16 [alpha]-méthyl-9 d -fluoro-4-prégnène-
11 ss,17 [alpha], 21-triol-3,20-dione de départ, et dont l'au- tre (correspondant au composant le moins mobile) révèle un maximum d'adsorption d'ultra-violet à environ 245 mu.
Le chromatogramme sur papier est séché et la bande corres- pondant à l'adsorption de 245 mu est découpée et extraite avec du méthanol. La matière extraite à l'aide de métha- nol est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier, en utilisant du papier qui a été extrait pendant 48 heures avec du méthanol et en employant le système chloroforme- formamide utilisé précédemment. Le chromatogramme résultant ne Présente qu'une bande de trace correspondant à la matière de départ, la bande majeure ayant un maximum d'ad- sorption d'ultra-violet de 245 mu.
Le chromatogramme de papier est séché à fond et la bande correspondant au maxi- mum d'adsorption de 245 mu est découpée et extraite avec du
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àtgtllenol. 1wwait méthJ,1t1::'J.tIc. est évaporé jusqu'à siccité sous vide, en sorte q- ::.."! 0btient de la 16 Ci{ "-méthyl- 9 al...fluoro..1J:,''"pr4gnadiÍàJ1ê''''11 lJ ; 17 G{ b 2¯tr3.ol-a20- dione.
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La 16 d. -méthyl-9 0(... ±luoro-lp4=prégnadiène... il 17 1-tris.-3 s 2d.o est mise en réaction avec un excès d'anh@dride acétique dans de la pyridine, en sorte qu'on obtient le dérivé 21-acétyle, qui est purifié par recristallisation dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole, ce qui permet d'obtenir du 21-acétate de 16 [alpha] -mé
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thyl-9 d -fluo:z-L,l-prëgnad.êne-1,1 , 17 fi. 21-triol-- 3,20-dione.
EXEMPLE 4
Les traitements de fermentation des exemples 1, 2 et 3 sont répétés en,utilisant, au lieu des microor-
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g,ismes et de la 16 c( -mfithyl-11-oxygéné-4-prégnène-17 d, 21-.ol-3n20-dione de départ employée dans cexemples, les souches de microorganismes et les composés stéroïdes de départ indiqués dans le tableau suivant.
Les bouillons de fermentation résultants sont traités selon les procédés d'isolement décrits dans les exemples 1, 2 et 3, de manière à produire, en fonction de la souche de microorganisme particulière et du substrat stéroïde particulier utilisés,
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la 16 c -méthyl-11-oxygéné-1,4-pràgnadiéne-17 d ,21-diol- 3,20-dione indiquée dans le tableau suivant :
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<tb>
<tb> Essai <SEP> Substrat <SEP> Microorga- <SEP> 16-méthyl-11No. <SEP> nismes <SEP> Bacil- <SEP> oxygéné-1,4lus <SEP> Spaericus <SEP> prégnadiène-
<tb>
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17 c( ,21-dio] 21-dioJ:-
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<tb>
<tb> 3,20- <SEP> ione, <SEP>
<tb> produite
<tb>
EMI19.9
1 16 c( -méthyl-4-prégnène- ATcc-705Q l6c( -méthyl- 17 d ,21-diol-3,11,20- , la4 prégnadiè
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<tb>
<tb> trione <SEP> ne-174 <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb>
<Desc/Clms Page number 20>
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2 160( -méthyl-4,-prégnèna.. .é...C-2.5 10;;'( -méthylIl 13 ,17Q{ ,2l-triol- 1,-'-prégnadiè- 3,20-dione . ns.-11 /3 ,170(, 21-tri'ol 3,20-
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<tb>
<tb> dione
<tb> 3 <SEP> 21-acétate <SEP> de <SEP> 16o(-mé- <SEP> ATCC-4525 <SEP> 16[alpha] <SEP> -méthyl-
<tb>
EMI20.3
thyl-J-prégnène-llj3 , . 1,4-prégnadié- 17(,( ,21-triol-3 ,:zef:' :
1I3 ,17 ! dione. :-t101-J,2Uw dione 4 160( -méthyl-4,-prégnène- ATCC-7055 160( -méthyl- 17 ,21-diol-3,11,20- 1,4-prégnadiè-'
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<tb>
<tb> trione <SEP> ne-1701 <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb> 21-acétate <SEP> de
<tb>
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5 16d -méthyl-9d -fluoro- ATCC-7055 I6 -méthyl- .-prgnène-17o( ,21-diol- 90( -fluor- 3,11,20-trione &-!f!!1 1,.-,prégnadïê
EMI20.6
<tb>
<tb> né-17[alpha] <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb> 6 <SEP> 160( <SEP> -méthyl-9o( <SEP> -fluoro- <SEP> ATCC-245 <SEP> 16[alpha]-méthyl-
<tb>
EMI20.7
1-prégnène 11f3 ,170( , 9c( -fluoro- 21-triol-3 , 2C!-diane llfr3égl7c(ièi
EMI20.8
<tb>
<tb> ne:11,6 <SEP> ,17[alpha],
<tb>
EMI20.9
2l-tr'iol-J ,20-
EMI20.10
<tb>
<tb> dione
<tb>
EMI20.11
7 21-acétate de 160( -mé- .
ATCC-7063 16c( -méthylthym-90( -fluoro-4-pré- 901 -fluorognène-113 ,17o( ,21- 1,1-prégnad3ètriol-3;20-dione. ne 11 ,170( ,
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<tb>
<tb> 21-triol-3,20dione
<tb> Microorganismes <SEP> Nocardia
<tb>
EMI20.13
9 160( -ïBséthyl-4-prégnène- eblackwellii 16d -méthyl- 11/3 11170( ,21-triol-3, ATCC-6$,6 1,4-prégnaiè- 20' dione ne-11 ,17c( , zl-triol-3 , zo dione 9 16o(-méthyl-4-prégnène- N.globerula 16 o( -méthyl- 17o ,21-diol-3,11,20- ATCC-9356 1,4-prégnadiè-.
EMI20.14
<tb>
<tb> dione...
<SEP> ne-17c( <SEP> ,21-
<tb>
EMI20.15
dio1-J, 1,20trione 10 160( -m.éthyl-9o( -fluoro- N.leishmanii 16d -méthyl- 4-prégnène-17o( ,21-diol- 9c( -fluoro-
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<tb>
<tb> 3,11,20-trione <SEP> 1,4-prégnadiène-17c( <SEP> 21diol-3,11,20trione
<tb>
<Desc/Clms Page number 21>
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il !6o( -méthvl-9B( -fluor?'- N.formica 1-')rÀ -méthyl- 4-prégnèna.,.118 ,17o( NHRL'"24.70 91 -fluoro-lj,4- 21-triol-J;, '20'::
dione prégnadiène-
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<tb>
<tb> 11/3, <SEP> 17[alpha], <SEP> 21triol-3,20dione
<tb>
EMI21.3
12 l6c --méthyl-4--prêg.uène" llI. phl<3i 160{ -méthylll/5,17c( 2i-triol-3 , àl>o itTôÈ-1.2 , 298 14-prégnadiè...
EMI21.4
<tb>
<tb> dione <SEP> . <SEP> ne-11/3 <SEP> ,17[alpha],
<tb>
EMI21.5
sli.-t iol-3 , 2 dione 13 l60( -méthyl-1.-prégr1ène- M. lacticola 16c( -méthyl- 17 ,21-diol-3 ,11,20- ATCC,12,29'ï 1,4-prégnadiè-
EMI21.6
<tb>
<tb> trione <SEP> ne-17[alpha] <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb>
EMI21.7
14 l6o( -methyl--9o( -fluoro- M. tuber- l6o( -mëthyl- 4-prégnène-17c( 21-diol- culosis 9c( -fluoro- 3,11,20-trione .
ATCC-129296 l,4-prégnadiè-
EMI21.8
<tb>
<tb> ne-17[alpha],21diol-3,11,20triode
<tb>
EXEMPLE 5
A une solution de 110 mg.de 21-acétate de 16 [alpha]- méthyl-4-prégnène-17 [alpha] -21-diol-3,11,20-trione dans 6 ml. de t-butanol, 0,01 ml. d'acide acétique glacial et 0,03 ml d'anhydride acétique, on ajoute 70 mg. d'acide sélénieux (H2SeO3). Le mélange est chauffé à l'ébullition jusqu'au lendemain, après quoi on ajoute encore 50 mg d'acide sélé-. nieux et on poursuit le chauffage pendant 24 heures encore.
La solution est décantée du sélénium métallique et évaporée jusqu'à obtention d'une huile, qui est alors dissoute dans de l'acétate d'éthyle. La solution d'acétate d'éthyle est lavée avec du bicarbonate de sodium aqueux, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité, et séchée. Le solvant est chassé de la solution séchée par évaporation, en sorte qu'on obtient une huile qui est dissoute dans du benzène et adsorbée sur de l'alumine lavée à l'acide. Le produit adsorbé est élué avec un mélange d'éther et d'éther de pétrole, puis avec des mélanges d'éther et de chloroforme de plus en plus riches en chloroforme.
Les éluats éther-chlo- roforme 4 : 6 sont combinés et évaporés jusqu'à siccité.
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la'matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 [alpha]-méthyl-1,4-prégnadiène-17 o( ,21-diol- 3,11,20-trione; P.F. : 208 - 212 C.
EXEMPLE 6
A une solution de 10 mg. de 21-acétate de 16 [alpha]- méthyl-l,4-prégnène-ll ss, 17[alpha] ,21-triol-3,20-dione dans 6 ml. de t-butanol, 0,01 ml. d'acide acétique glacial et 0,03 ml. d'anhydride acétique, on ajoute 70 mg. d'acide sélénieux. Le mélange est chauffé à l'ébullition jusqu'au lendemain, après quoi on ajoute encore 50 mg d'acide sélénieux et on poursuit le chauffgge pendant 24 heures encore.
La solution est décantée du sélénium métallique et évaporée jusqu'à obtention d'une huile, qui est alors dissoute dans de l'acétate d'éthyle. La solution d'acétate d'éthyle est lavée avec du bicarbonate de sodium aqueux, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité, et séchée. Le solvant est chassé de la solution séchée par évaporation, en sorte qu'on obtient une huile qui est dissoute dans du benzène et adsorbée sur de l'alumine lavée à l'acide. Le produit adsorbé est élué avec un mélange d'éther et d'éther de pétrole, puis avec des mélanges d'éther et de chloroforme de plus en plus riches en chloroforme. Les éluats éther-chloroforme 4 : 6 sont combinés et évaporés jusqu'à siccité.
La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21acétate de 16 c( -méthyl-1,4-prégnadiàne-11 ss, 17 [alpha], 21- triol-3,20-dione.
EXEMPLE 7
En opérant par le procédé de déshydrogénation à l'acide sélénieux de l'exemple 6, mais en utilisant du 21-acétate de 9 o(-fluoro-16 [alpha], -méthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione comme matière de départ au lieu du
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21--acétate de 10 d -méthyl-Q-p;"4.gi;é;ie-l i d ,".:W.dil-3llp 20-triona utilisé d<.3 l'exempi& 6, on obtient du 21-acétate de 9 0( -flu7xzx-1 cj - étt>jii-i,;
q prégnadi.éne-17 4 , 21-diol-3,ll,20-trioneÓ
EXEMPLE 8 En. opérant par le procédé de déshydrogénation à l'acide sélénieux de l'exemple 6,mais en utilisant du
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21-acétate de 9 d.. -fluoro-16 ci -méthy.-,prégaéne-11 17 d ,20-trioi-J,20-dione comme matière de départ au lieu du 21-acétate de 16 d -mêthyl-4-prégnène<1'7 c.( ,21-diol- 3,11,20-trione utilisé dans l'exemple 6, on obtient du 21-acétate de 9 d -fluoro-16 .néthyl-1,.-gxrégraad.éneil / , eze d , 2lrtriohi,tdione.
EXEMPLE 9 A une solution de 110 mg. de 21-acétate de 16 [alpha]- méthyl-prégnane-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione dans 6 ml.
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de t-butanol, 0,01 ml. d'acide acétique glacial et 0,03 m.lE d'anhydride acétique, on ajoute 70 mg. d'acide sélénieux.
Le mélange est chauffé à l'ébullition jusqu'au lendemain, après quoi on ajoute encore 50 mg d'acide sélénieux et on poursuit le chauffage pendant 24 heures encore. La solution est décantée du sélénium métallique et évaporée jusqu'à obtention d'une huile, qui est alors dissoute dans de l'acétate d'éthyle. La solution d'acétate d'éthyle est lavée avec du bicarbonate de sodium aqueux, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité, et séchée. Le solvant est chassé de la solution séchée par évaporation, en sorte qu'on obtient une huile qui est dissoute dans du benzène et adsorbée sur de l'alumine lavée à l'acide. Le produit adsorbé est élué avec un mélange d'éther et d'éther de pétrole, puis avec des mélanges d'éther et de chloroforme de plus en plus riches-en-chloroforme.
Les éluats éther-chloroforme
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4 : 6 sont combinas et évaporés jusqu'à siccité. La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acé-
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tate de 16 c( -méthyl-1,4-prêgnadiène-17 c( , 21-diol-3,11, 20-trione.
Le 21-acétate de 16 d-méthyl-prégnane-17 d , 21-d.ol-3,11,20-trïone etiies composés 16-méthyl-11-oxygéné-, 4-prégnène-17 d -diol-3,20-dione utilisés comme matières de départ dans les exemples 1 à 9 sont préparés, en par-
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tant du 3-acétate de 16-prégnùne-3 o(-oI-11,20-dione connu, par le mode opératoire suivant.
Une solution de 10,22 g. d'iodure de méthyle dans 50 ml. d'éther est ajoutée à 1,73 g. de magnésium dans 50 ml. d'éther. A la solution éthérée résultante d'iodure de méthyl magnésium, maintenue sous une atmosphère d'azote, on ajoute 0,045 g. de chlorure cuivreux anhydre. A ce mélange, on ajoute, en l'espace d'environ 1 heure, pendant laquelle le mélange réactionnel est agité vigoureusement et maintenu sensiblement à température ambiante, une solution d'environ 5,6 g de 3-acétate de 16- prégnène-3 d -ol-11,20-dione dans 175 ml d'éther. Pendant cette addition, il se sépare une matière solide granulaire blanche Le mélange résultant est chauffé sous reflux modéré pendant 2 heures,
après quoi le mélange réactionnel est refroidi et 125 ml d'une solution aqueuse saturée de chlorure ammonique puis 250 ml d'éther sont ajoutés. Les couches sont séparées et le couche éthérée est lavée avec trois fractions de 50 ml d'eau. La couche éthérée lavée est séchée et le solvant est évaporé sous vide, en sorte' qu'on obtient une huile visqueuse brune.
Cette huile est chauffée pendant 15 minutes à 60 - 70 C avec un mélange de 25 ml d'anhydride acétique et de 25 ml de pyridine et
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le produit aCEÎty.!.<, .3t purifié !a:r.' chromatograpbie sur de l'alunine lavée à ]>'acide, su:3:f d'u=1 cristallisation dans de l'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient approximativement 1.,5 g de 3-acétate d 1,6 d -métli;r1-prégnène- 3 d -ol-11,20-à.ione> A une solution de 0,6 g. de 3-acétate de 16 d méthyl-prégnane-3 o( -oi-11,2ù-dione dans 40 al. de métha- nol, on ajoute 1,5 ml. de HCl aqueux concentré et la solution résultants est ,agitée jusqu'au lendemain à environ 25 C.
La solution de réaction est évaporée sous vide à 25 C jusqu'à un petit volume et la solution concentrée est versée dans 50 ml d'eau glacée. Le solide blanc, qui précipite, est récupéré par filtration, lavé à l'eau et recristallisé dans de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on
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obtient de la 16 cl -méthyl-prêgnane-3 Ol -ol-11,20-dione.
Une solution-de 22 g- de 21-acétate de 16 c( -mé, thyl-prégnane-3 d-ol-11,20-dione et de 1 g. d'acide k-to- luène-sulfonique dans 250 ml d'anhydride acétique est chauffée sous reflux sous azote pendant environ 3 jours.
2 g. d'acétate de potassium (anhydre) sont ajoutés et les solvants volatils sont séparés par distillation sous vide.
La matière résiduelle est extraite avec du benzène et l'extrait benzénique est filtré pour éliminer la matière insoluble. Les extraits benzéniques sont évaporés jusqu'à un volume de 100 ml et on ajoute de l'éther de pétrole jusqu'à apparition d'un trouble. La solution résultante est adsorbée sur 660 g d'alumine lavée à l'acide; l'alumine est alors lavée avec 2 litres d'éther de pétrole. L'adsorbant est alors élué avec un mélange 85 : 15 d'éther de pétrole et d'éther et les quatre premiers litres d'éluat sont- recueillis et évaporés jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient un mélange d'acétates énoliques contenant du
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3,20-diacétate de 16 c( -méthylo-17(20)-prégnéne-3 d , 2D-
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diol-11-one.
Ce mélange d'énolates, pesant environ 14 g. est dissous dans 50 ml de benzène et traité avec un excès d'acide per@benzoïque en l'espace de 16 heures. Le mélan- ge réactionnel est agité avec une solution aqueuse diluée d'hydroxyde de potassium jusqu'à ce qué la couche benzéni- que soit exempte d'acide per-benzoïque;
la couche benzéni- que est alors lavée avec de l'eau jusqu'à neutralité, sé- chée et débarrassée du solvant par évaporation sous vide, en sorte qu'on obtient une matière cristalline, constituée par du 3,20-diacétate de 16 [alpha]-méthyl-17 [alpha] ,20-époxy-pré- gnane-3 [alpha],20-diol-11-one. Ce dernier composé est dissous sans purification, dans 200 ml de méthanol, 120 ml d'eau et 10 g de bicarbonate de potassium, et la solution résul- tante est chauffée sous reflux sous azote pendant 16 heu- res. Le méthanol est évaporé de la solution d'hydrolyse sous vide et l'huile résiduelle est extrait de la solution aqueuse résultante avec du chloroforme. L'extrait chloro- formique est lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité et sé- ché et le chloroforme est évaporé sous pression réduite.
L'huile résiduelle est triturée avec de l'éther et la ma- tière cristalline ainsi formée est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient de la 16 [alpha]-méthyl-prégnane-3 [alpha], 17 c( -diol- 1,20-dione.
A une solution de 7,0 g de 16 [alpha] -méthyl-prégna- ne-3 0(, 17 [alpha] -diol-11,20-dione dans 50 ml de chloroforme, an ajoute goutte à goutte, en agitant, une solution conte- nant 3,36 g de brome dans 24,2 ml de chloroforme eh l'eapa. ce d'environ 60 minutes. Le mélange réactionnel est dis- sous dans 200 ml d'acétate d'éthyle et la solution résul- tante est lavée avec de l'eau jusqu'à neutralité et séchée après quoi les solvants sont évaporés sous vide. La matière brute résiduelle est dissoute dans une quantité mi-
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nimum d'acétate d'éthyle.
La solution résultante est di-
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luée avec de 1$éth;k et le m61ange est agité jusqu'à forma- tion de cristaux. Le produit oristallin est récupéré par filtration et lavé, par empâtage avec un mélange 50 : 50 d'éther et d'éther de pétrole, en sorte quton obtient envi-
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ron 5 g. de 21-bromo-16 d .-méth.y...prégnane-3 o( , 17 d diol-11,20-dione..>., Ces 5 g. de 21-bromo-l6 o{-méthyl-prégnane-3 o(, 17 o(-dial-11,Z0-dione sont mélangés à 590 g. d'acétate de potassium anhydre, 4,0 g. d'iodure de sodium et 0,03 ml. d'acide acétique glacial, et 100 ml. d'acétone sont ajoutés au mélange résultant.
Ce mélange est alors chauffé sous reflux, en agitant pendant environ 16 heures et le mélange réactionnel est refroidi et filtré et la matière insoluble est lavée avec de l'acétone. La solution filtrée est évaporée sous vide, de manière à chasser les solvants. La matière résiduelle est empâtée avec de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle. L'extrait à l'acétate d'éthyle est lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité et séché, et le solvant est évaporé sous vide jusqu'à obtention d'une huile. Cette huile est cristallisée dans de l'éther et recristallisée dans un mélange acétate d'éthyle-éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 c( -méthyl-prégnane-3 c( , 17 [alpha], 21-triol- 11,20-dione.
Une solution de 400 mg de 21-acétate de 16 [alpha]-
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méthyl-prégnane-3 d -1? o(, 21-triol-11, 20-dione dans 4 ml\ de pyridine est ajoutée au complexe formé par l'addition de 400 mg. de trioxyde de chrome dans 4 ml. de pyridine.
Le mélange est agité jusqu'à ce qu'il soit bien mélangé, puis laissé au repos à température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est versé dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'éther, puis à
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deux reprises avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits combinés à l'éther et à l'acétate d'éthyle sont lavés avec de l'acide sulfurique aqueux dilué à environ 0 C, puis avec de l'eau jusqu'à neutralités La couche de solvant organique est alors séchée, les solvants sont évaporés sous vide et la matière cristalline résiduelle est purifiée par cristallisation de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 c( -méthyl-prégnane-17 d@, 21diol-3,11,20-trione.
A 100 mg de 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-prégnane- 17 o( , 21-diol-3,11,20-trione dissous dans 2 ml. de chloroforme et 2,25 ml d'acide acétique glacial, à une température de -55 C., on ajoute deux gouttes d'une solution 0,001 N de HBr anhydre dans de l'acide acétique glacial.
A environ 0,38 ml de HBr 0,001 N dans de l'acide acétique glacial, à -55 C., on ajoute 0,43 ml. d'une solution contenant 40 mg de brome dans du chloroforme, et la solution résultante est ajoutée, en l'espace d'environ 10 minutes, à la solution du stéroide tout en maintenant le mélange réactionnel à environ -55 C. Le mélange réactionnel est laissé au repos à -55 C pendant environ 1/2 heure; une solution contenant 250 mg d'acétate de sodium dans 3 ml d'eau est ajoutée et le mélange résultant est agité pendant environ 5 minutes. 5 ml d'eau sont alors ajoutés et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle.
L'extrait à l'acétate d'éthyle est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium jusqu'à neutralité, puis avec de l'eau, après quoi l'extrait est séché et le solvant est évaporé sous vide. La matière résiduelle est dissoute dans 2 ml d'acé,tone et à la solution on ajoute 25 mg de bromure de sodium et 1 ml d'eau.
Le mélange résultant est chauffé sous reflux pendant environ 5 heures, le mélange réactionnel est refroidi et l'acétone est éva-
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porée sous vide. @a matière résiduelle est extraite,au
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moyen d'éther eb .L'outrait 0';.h,"r l; f;;:;t, lavé ''e<; de l'eau et séché, après quoi le solvant $si. évaporé jusqu'à un volume d'environ 1 ml ; onajoute de l'éther de.:! pétrole à cette solution et la matière cristalline, qui se sépare, est récupérée et séchée,en sorte qu'on obtient approxima-
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tivement 90 mg de 21-.-,cétate due 4-brosio-l6 o( -méthyl-prêgnane-17 ci ,21-dio.-3,11,20-triore.
Un mélange de 48 mg de semicarbazide, de 48 mg de 21-acétate de 4-bromo-16 [alpha] -méthyl-prégnane-17 [alpha] ,21- diol-3,ll,20-trione et de 0,6 ml d'éthanol est chauffé sous reflux au contact d'une atmosphère d'azote pendant environ 3 jours et la solution réactionnelle est évaporée jusqu'à un petit volume et diluée avec de l'eau, après quoi la matière cristalline est récupérée et purifiée par recristallisation dans du méthanol aqueux, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 3,20-bis-semicarbazone de 16 [alpha]-
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méthyl-4-prégnène-17 c( ,21-diol-3,ll,20-trione.
50 mg de 21-acétate de 3,20-bis-semicarbazone de 16 ol -méthyl-4prégnène-17 0( , 21-diol-3,11,20-trione sont dissous dans un mélange de 1,0 -ce de benzène et de 1,0 cc d'hydroxyde de potassium méthanolique 1,1 N et la solution est laissée au repos à température ambiante pendant environ 10 minutes. La solution est alors acidifiée au moyen d'acide acétique, après quoi le benzène est évaporé sous vide et la matière résiduelle est recristallisée dans de l'acétate d'éthyle en sorte qu'on obtient de la 3,20-bis-semicarbazone de 16 [alpha] -méthyl-4-prégnène-17 [alpha] ,21-diol-3,11,20trione.
Un mélange de 60 mg de 3,20-bis-semicarbazone-
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de 16 o(-méthyl-prégnêne-17 c( , 21-diol-3,11,20-trione, de 0,2 ml. de diméthylformamide, de 0,6 ml. de chlorofor- me, et de 1,5 ml de HCl aqueux 1,0 N est chauffé sous
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reflux pendant environ 3 heures. Le système à .;aux phases résultant est refroidi jusqu'à une température d'environ 15 C et les couches sont séparées. La couche aqueuse est extraite avec du chloroforme et les extraits chloroformiques sont combinés à la solution chloroforme-diméthylforma mide originelle.
La couche organique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et le chloroforme ainsi que le diméthylformamide de la couche organique sont remplacées par de l'acétate d'éthyle par évaporation sous vide. On ajoute de l'éther de pétrole et*on soumet la solution résultante à une chromatographie, en utilisant du méthanol aqueux comme phase stationnaire et un mélange de benzène et de chloroforme comme phase mobile, en sorte qu'on obtient de la 16 [alpha] -méthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol- 3,11,20-trione.
Une solution de 45 mg de 21-acétate de 3,20-
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bis-semicarbazone de 16 d -méthyl-4-prégnène-1? d ,21-diol- 3,11,20-trione, de 17 mg de borohydrure de sodium, de 1 ml de tétrahydrofurane et de 0,3 ml d'eau est maintenue à la température du reflux pendant environ 1 heure. La solution de réaction est refroidie à environ 15 C et le borohydrure de sodium en.excès est décomposé par addition d'une solution de 27 mg d'acide acétique glacial dans 0,2 ml d'eau.
Le tétrahydrofurane est évaporé sous vide et la matière résiduelle est extraite à l'aide d'acétate d'éthyle. Les extraits à l'acétate d'éthyle sont lavés avec une solution saturée de sel, avec de l'eau et avec une solution aqueuse à 5 % de bicarbonate de sodium, puis à nouveau avec de l'eau. Les extraits sont séchés et l'acétate d'éthyle est évaporé sous vide, en sorte qu'on obtient de la 3,20-bis-
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semicarbazone de 16 0( -méthyl-4-prégnène-ll j3 , 17 0( , 21triol-3 , 20-di..one .¯
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f ',,, Un mélange de 60 fit; do 3,20-bisse:aicarbazonn de 16 o( -méthyl---prégnène-1:. ,fj , e 17 0(, 21-triol-3,20dione, de 0,2 ml de dimêthylformamide, de 0,6 ml de chloro- forme et de 1,5 ml de HCl aqueux 1N est chauffé sous reflux pendant environ 3 heures.
Le système à deux phases résultant est refroidi à une température d'environ 15 C et les couches sont séparées. La couche aqueuse est extraite avec du chloroforme et les extraits chloroformiques sont combinés avec la solution chloroforme-diméthylformamide originelle. La couche organique globale est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et le chloroforme ainsi que la diméthylformamide contenue dans la couche organique sont remplacés par de l'acétate d'éthyle par évaporation sous vide. On ajoute de l'éther de pétrole et la solution résultante est soumise à une chromatographie, en utilisant du méthanol aqueux comme phase stationnaire et un mélange benzène-chloroforme comme phase mobile, en
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sorte qu'on obtient de la 16 0( -méthyl-4-prégnène-11 j , 17 c( , 21-diol-3,20-dione.
Cette dernière matière est mise en réaction avec un excès d'anhydride acétique dans de la pyridine à température ambiante pendant environ 15 heures et le produit acétylé brut est recristallisé dans de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de
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16 c( -méthyl-l-prégnène-11 , 17 d , 21-triol-J ,20-dione.
A une'solution refroidie de 600 mg de 21-acétate de 16 ol-méthyl-@-prégnène-11 f , l'7 0( , 21-triol-3,20- dione dans 5,0 ml de pyridine anhydre, on ajoute 0,15 ml d'oxychlorure de phosphore et le mélange est laissé au repos à température ambiante pendant environ 15 heures. La solution réactionnelle est évaporée sous vide à une température d'environ 20 C jusqu'à un volume de 2-3 ml.
17 ml d'eau sont ajoutés lentement à la solution concentrée, en agitant, et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate
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d'étalé. Les extraits combinas à l'acétate d'éthyle sont laves ''successivement avec de l'eau, avec une solution aqueuse diluée d'acide chlorhydrique, avec de l'eau et avec une solution aqueuse diluée de bicarbonate de sodium.
La solution à l'acétate d'éthyle lavée est séchée et le solvant est évaporé sous vide; la matière résiduelle est triturée avec de l'éther et la matière cristalline est recristallisée dans un mélange acétate d'éthyle-éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 d -méthyl-4,9(11) prégnadiène-17 o( , 21-diol-3,20-dione. Une suspension de
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330 mg de 21-acétate de 16 -méthyl-1,9i11-prégnadiène- 17 [alpha] ,21-diol-3,20-dione et de 1,8 g de N-bromo-succinimide dans un mélange de 50 ml de dioxane et de 10 ml d'eau est refroidie à 10 C. Puis en agitant, 10 ml d'acide perchlo- rique aqueux 1,0 N froid sont ajoutés.
La température du mélange réactionnel est admise à s'élever jusqu'à 15 et est maintenue à cette valeur pendant environ 2 1/2 heures, pendant lesquelles la matière solide se dissout lentement.
La solution jaune résultante est traitée avec 1,0 ml d'al- cool allylique pour décharger la couleur et le N-bromo-suc-' cinimide restante, et la solution résultante est évaporée jusqu'à un faible volume sous vide. La solution concentrée est diluée avec de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits à l'acétate d'é- thyle sont lavés, séchés et évaporés jusqu'à siccité, et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acé- tate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acé-
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tate de 9 t( -bromo-16 0( -méthyl-l-prégnène-11 3 , 17 0( 21-triol-3,20-dione.
Une solution de 210 mg de 21-acétate de 9 o(bromo-16 o(-méthyl-4-prégnène 11 ss, 17 o( , 21-triol-3,20dione et de 240 mg d'acétate de potassium dans 10 ml d'étha-
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nol absolu est chauffée sousreflux pendant 2 heures. Le mélange réactionnel est refroidi jusqu'à température am- biante et évaporé sous vide jusqu'à un petit volume. Le mélange aqueux concentré est extrait avec 3 fractions d'acétate d'éthyle et les extraits combinés à l'acétate d'éthyle sont lavés à l'eau, séchés et évaporés jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on pbtient du 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-9,11-époxy-4-prégnène- 17 o( , 21-diol-3,20-dione. une solution de 83 mg de fluorure d'hydrogène anhydre dans 4,7 ml de chlor@lorme exempt d'alcool glacé, on ajoute une solution glacée de 416 mg de 21-acétate de 16 c( -méthyl-9,11-époxy-4-prégnène-17 [alpha] ,21-diol-3,20dione. La solution est bien malaxée et maintenue à 0 C pendant 2 heures, au bout desquelles 13,0 ml d'acétate de sodium aqueux à 20 % glacé sont ajoutés, et le mélange résultant est agité vigoureusement.
Les couches sont séparées et la couche chloroformique est lavée avec de l'eau jusqu'à être exempte d'acide, séchée et débarrassée du chloroforme par évaporation sous vide. La matière résiduelle est cristallisé dans un mélange d'acétone et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 c( - méthyl-9 [alpha]-fluoro-4-prégnàne-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20dione. 50 mg de 21-acétate de 16 [alpha]-méthyl-9 [alpha] -fluoro-4prégnàne-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione sont dissous dans un mélange de 1,0 cc de benzène et de 1,0 cc de KOH méthanolique 1 N., et la solution est laissée au-repos à température ambiante pendant environ 10 minutes.
La solution est évaporée sous Vide et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient de la 16 [alpha] -méthyl-9 [alpha]-fluoro-4-
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pré,,nëne-11 , 17 o( , 21-trxol-, , 20-dione...
Une solution de 46É zi de 21-acétate de 16 d ü méthyl-9 0( -fluoro-l-prégnére-11 t7 c( 21-tr.o1-3,J-- dione dans 4 ml de pyridine est ajoutée au complexe formé par l'addition de 400 mg de trioxyde de chrome à 4 ml de pyridine. Le mélange est agité jusqu'à être bien malaxé, puis laissé au repos à température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est versé dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'éther, puis à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle.
Les extraits combinés sont lavés avec du H2SO4 aqueux dilué à environ 0 C, puis avec de l'eau jusqu'à meutralité. La couche de solvant organique est alors séchée, les solvants sont évaporés sous vide et la matière cristalline résiduelle est purifiée par cristallisation dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de
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16 0( -méthyl-9 c-fluoro-4-prégnéne-1? 0( 21-diol-3,11,20. trione. 5 mg de 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-9 d -fluoro-4prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione sont dissous dans un mélange de 1,0 cc de benzène et de 1,0 cc de KOH méthanolique 1 N., et la solution est laissée au repos à température ambiante pendant environ 10 minutes.
La solution est alors acidifiée à l'aide d'acide acétique, le benzène est'-évaporé sous vide et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient de la 16 o(-méthyl-9 o(-fluoro-4-prégnène-17 0(, 21-diol-3,11,20-trione.
REVENDICATIONS 1. Composés l6-méthyl-l,4-prégnadiène-17 [alpha]-ol- 3,20-dione.
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2. 16o(-méthyl-1.4-prégnadiène-17 o(e2l-diol-3ellp 20-trione.
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3. 21-acétates de 16 0( -é yl-1,.-pa égxaad.iène- 17 0( ,21-diol-3,1E,2itr.ne.
4. 21-phosphate de 16 -méthyl-l,4prégnadiène- 17 0( ,21-diol-3,11,20-trione.
5. 21-acétate de 16 d méthßl-l,t-prégnadiène-17 t( 21-diol-3,11,Otrione.
6. 21--itert.-butyl acétate) de 16 0( -méthyl-1,4.prégnadiène-17 <j( 21-diol-3 ,11, 20-trione .
7. 16 c{ -mëth.yl-l,l-prégnadièn-11 j3 , 17 d , 21triol-3,20-diüe. 8. 21-acylates de 16 [alpha] -méthyl-1,4-prégnadiène-
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11 j3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
9. 21-propionate de 16 oi -méthyl-1,4-prégnàdiéne- 11 f$ , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
10. 21-acétate de 16 oi-méthyl-1,4-prégnadiène- 11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione.
Il. 21-(tert.-butyl acétate) de 16 [alpha] -méthyl-1,4-
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prêgnadiène-11.9 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
12. 21- , -diméthyl hémi-glutarate) de 16 c( -méthyl-1,1-prégnadiène-113 , 17 c( , 21-triol-3,20-dione. 13. 21-phosphate de 16 [alpha] -méthyl-1,4-prégnadiène-
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11 3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
14. 16 0( -méthyl-9 0( -fluoro-l,4-prégnadiène-ll , 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione.
15. 21-acylates de 16 0( -méthyl-9 o(-fluoro-1,4- prégnadiène-11 ss, 17 o( , 21-triol-3,20-dione.
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16. 21-phosphate de 16 0( -méthyl-9 c( ...flUo:ë":'r ,4;.. prégnadiéne-11 /J , 17 0(, 21-triol-3,20-dione.
17. 21-(tert.-butyl acétate) de 16 o(-méthyl-9 o(- fluoro-l,4-prégnadiène-ll , 17 c( , 21-triol-3,20-dione.
18. 21-.acétate de 16 [alpha] -méthyl-9 c( -fluoro-l,4-pré-
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gnadiène-11-3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
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19. 16c( -méthyl--9 0( -fluaxf-l.l-prégnGd:. r.L-l7 0( 21-diol-3,11,20=trione.
20. 21-acylates de 16 0( -raêthyl-9 o( -:"¯soru-1,.prégnadiène-17 0( i,?ldiol-3,11, 20-tr .orsa.
21. 21-phosphate de 16 c{ -méthyl-9 0( -fluoro-1,4prégnadiène-17 0(,21-diol-3,11,20-trione.
22. 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 ci -fluoro-1,%-prégnadiène-17 o(,2l-diul-3,ll,20-trione.
23. Procédé dans lequel on met un composé 16-méthyl- %-prégnène-17 0(-0l-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes de Schizomycètes, de manière à former le composé l6-méthyl-l,4-prégnadiène-17 z- ol-3,20-dione correspondant.
24. Procédé dans lequel on met de la 16 c( -méthyl-
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4-prégnène-17 ol ,21-diol-3,11,20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycùtes, de manière à former de la 16 o(-méthyl-1,1-prégn2diène- 17 ol ,21-diol-3 ,11,20-trione. 25. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha]-méthyl-4-
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prégnène-11 17 ol , 21-triol-3,20-dione en contact avec . l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycè-
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tes, de manière à former de la 16 o(-méthyl-1,4-prégnadiè- ne-11/3, 17 c( , 21-triol-3,20-dione.
26. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha] -méthyl- 9 o(-fluoro-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3 ,11, 20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycètes, de manière à former de la 16 [alpha]-méthyl-9 [alpha]-
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fluoro-l,4-prégnadiène-17 o(,21-diol-3,11,20-trione.
27. Procédé dans lequel on met de la 16 d -méthyl- 9 0( -fluoro-l-prégnène-11 , 17 o( , 21-triol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycètes, de manière à former de la lô o(-méthyl-
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9 c( -flu.cro-1,..prégnadiène-,'i , 17 o( , 2.-t :0l--3,20- dione.
28. Procédé dans lequel on met un 21-acylate de
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16 0( -méthyl-.-prégnènp-11 9 Il 0( , 21-'riol-,3,20-dione en contact avec m'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycètes, de manière à former de la 16 [alpha] -méthyl-
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1,4-prégnadiène-11 , 17 c( , 21-triol-3,20-dicne. 29. Procédé dans lequel on met un composé 16-raéthyl- 4-prégnène-17 [alpha]-ol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes du genre Bacillus sphaericus,
EMI37.4
de manière à former le composé 16.-méthyl.-l,!.-prégnadiêne- 17 [alpha]-ol-3,20-dione correspondant.
30. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha] -méthyl- 4-prégnène-17 [alpha] ,21-diol-3,11,20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes du genre Bacillus sphaericus, de manière à former de la 16 [alpha]-méthyl-1,4- prégnadiène-17 [alpha] ,21-diol-3,11,20-trione.
31. Procédé dans lequel on met de la 16 o(-méthyl'-
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l-prégnène-11 j3 , 17 ol , 21-triol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes du genre Bacillus sphaericus, de manière à former de la 16 [alpha]-mé-
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thyl-1,4.-prégnadiène-11 3 , 17 0( , 21-triol-3,20-diône.
32. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha] -méthyl- 9 o(-fluoro-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes dugenre Bacillus sphaericus, de manière à former de la 16 [alpha]-
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méthyl-9 0( -fluoro-l,4-prégnadiène-17 o( ,21-dioi=3,il,20- trione.
33. Procédé dans lequel on met un 21-acylate de 16
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o( -méthyl-9 0( -fluoro-.-prégnène-11 /j , 17 0( , 21-triol- 3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes du genre Bacillus sphaericus, de manière
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à former de la il -mêthyl-. ''.uoro-1.'. ':nsdiènell,17o(, 21-triol-3t20-d' . .
34.. Procédé dans lequel on. f?'it r;,:.. . composa 16-mthyl--.-prégnène? c( -ol-3C'dione avp-'. <':,1) bioxyde de sélénium, de manière à produ "" '.le -î-tl-lu4thyl-
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1,4-prégnadiène-17 o( -.l-3 fi2:-;ïonW correspondant.
35. Procédé dans lequel )1- fait réagir du 21-acétate de 16 d-méth;1-O-prégnéne-16'î o', p21-d.o.-,:1.,20.-triox avec du bioxyde de sélénium, de manière à produire du 21-acétate de 16 0( ,-méthyl-.l,l-prégnadzène-l' 21-diol- 3,11,20-trione.
36. Procédé dans lequel on fait réagir du 21-acéta-
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te de 16 c( -méthyl-.--prégnène-11 , 17 d , 21-triol-3,20-. dione avec du bioxyde de sélénium, de manière à produire du 21-acétate de 16 0( -méthyî-l,l-crégn,dié:ne-?.. 17 0( 21-triol-3,20-dione.
37. Procédé dans lequel on fait réagir du 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 c(-fluoro-4-prégnène-17 c( ,21-diol-3,11, 20-trione avec du bioxyde de sélénium, de manière à pro-
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duire du 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 0( -fluoro-1,1-pré- gnadiène-17 o(,21-diol-3,11,20-trione.
38. Procédé dans lequel on fait réagir du 21-acétate
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de 16 -méthyl-9 ol-fiupro-4-prégnéne-il fi , 17 o( , 21trioi-3,20-dione avec du bioxyde de sélébium, de manière à produire du 21-acétate de 16 0( -méthyle o( -fluoro-1,4prégnadiêne-11 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
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The present invention relates generally to novel steroid compounds and to processes for their preparation. More particularly, it is relati-
EMI1.1
ve to new compounds 16-methyl-11-oxygenated-l, i-pregnadiene-17 0 (, 21-diol-3,20-diones, and to the process for preparing these compounds starting from the compound 16-methyl -11-oxy-gen-4-pregnene-17 o (, 21-diol-3,20-dione corresponding.
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These new compounds 16-methyl-11-oxygenated-1,1-pregnadiene-17 0 (, 21-diol-3,20-diones possess extremely high anti-inflammatory activity and are especially suitable for the treatment of arthritis and of related diseases, since they can be administered for their cortisone action in extremely low doses, minimizing unwanted side effects.
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The novel compounds 16-methyl-11-oxygenated-1,. Pregnadiene-17 ol, 21-diol-3,20-diones, which are the subject of the present invention, can be chemically represented as follows:
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in which X is hydrogen or fluorine, R denotes
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of 7.rkrydroF-ne or radar; 1 lower hydrocirbide monyl and 7st a keto or hydroxy substituent.
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These compounds 16-methyl '=: ... oxCgene-1,;. "Ypregnadiè-. Ne-17 0 (, 21-diol- (3-d.ozes) are released on contact with the compound 16-ethyl-. li-oxygenated-Q-pà'égiiéne-1? d 21-aiol, 3,20-dione corresponding with the dehydrogenating function of microorganisms of the class Schizomycetes, which includes microorganisms belonging to the types of
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Actinomycetales and uba and ena them. Preferred Eubacteriles include microorganisms of the genus Acetobacter, the genus Aarobacter, and the genus Bacillus; preferred Actinomycetales include microorganisms of the genus Nocardia and the genus Mycobacteriu.
It is particularly preferred to employ microorganisms of the class of Schizomycetes belonging to the following species, Acetobacter xylinum, Aerobacter aerogenes, Bacillus
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snhaericus, Nocardia erythropolis, Nocardia blackwellii, Nocardia asteroides, Nocardia minima, Nocardia globerula, Nocardia leishmanii, Nocardia formica, Nocardia convoluta,
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Nocardia corallina, and Iycobacterium smegmatis, Mycobacterium phlei, Icobacterium lacticola, and Mygobacterium tuberculosis.
The species Bacillus sphaericus, as defined in the "Manual for Determinative Bacteriology," by Bergey, 6th Edition, includes several varieties, such as the variety rotans, the variety fusiformis, etc., and, in some collections, these varieties are designated by the species names Bacillus rotans and Bacillus fusifor- mis. These microorganisms of the Schizomycete class can be obtained from known sources, such as the American Type Culture Collection, Washington, D.C .; they can also be isolated from natural sources, such as soil, by known methods.
It should be noted that, for a given species of Schizomycetes, the preferred dehydrogenating strains can be chosen by the following test: A nutrient medium-
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containing 1 g. (the ceré10se, 1 ,,: ': damzr¯p,:,;';; 1 of maceration liqueur Mon ds [u.ï8) f. <,> i '.J' ù 'o =, tr. 5.1 4x. -.evur and sufficient e:.: 1 stillv1 per * bt>% 1,: ll volume of 50 ml, is brought to a pH of rilized bus inoculated with a penny culture:;: ! 1.:; ', pier., r' ?:; .Ù3me particular to be tested for its activity; 3.ésx? varc; ïerL ::;, a er l The inoculated culture results in ,,.: rt.2z;, then at a temperature of 280 C, with stirring, for: bzz. hours, and to the resulting culture a S \ .Jl1x :: içr> containing 10 mg is added. dthgdracortisor, e dissolved dnnf 0.1 m3 of difethylformamide.
The culture containing the steroid compound is incubated, with shaking, for an additional period of about 10 hours at 28 ° C. the fermentation broth is repeatedly extracted with ethyl acetate and the extracts with ethyl acetate. ethyl acetate are combined and evaporated to dryness in vacuo. Some of the residual material is dissolved in acetone and smeared or smeared on a paper chromatogram, which is developed using formamide as the stationary phase and chloroform as the mobile phase. Two separate bands are usually obtained, the lower band corresponding to hydrocortisone; the upper band corresponds to the -dehydrogenated derivative. The two bands are cut and eluted separately with methanol.
Each of the methanolic eluahts is subjected to ultraviolet absorption analysis. The efficiency of the strain of microorganisms tested for effecting dehydrogenation is indicated by the relative proportions of dehydrogenated derivative # 1- and unchanged hydrocortisone, measured by this ultraviolet absorption analysis.
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The lb-methyl-11-oxygenated - pregnene-17 0 (, 21-diol-3,20-diones used as starting materials in this process are advantageously prepared starting from
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3-acé Late of 1 ": .¯ o,.,: Ss e- o (--r": ¯.,: 0-dione by the procedure suipe: -fr î <, done .t: 3 :: IgL of 16-pregnene-30 3-acetate (with ".:. 9. odtzre of metbyl magnesium in the presence of eu4-vÈ chloride, fu3nire to form 160 = 3-acetate, mmetinyl-pragnaïe3o ( = 7c1-1120-dione, which is reacted with aqueous methanolic hydrochloric acid th1 l '(' ci 3-te to force 160 ((- methyl-pregnan-3o (-0l-11,20-d. oaem .:
The last compound, which is a powerful anesthetic, is reacted with acetic anhydride in the presence of p-toluene sulfonic acid as a catalyst, so as to form a mixture of enolic acetates containing 16o-3,20-diacetate ( -methyl-
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l ?, 30-pregenene-3d, 20-diol-11-one; this mixture, after chromatographic purification to remove any unchanged starting material, is reacted with 11-perbenzoic acid and 16 [alpha] -methyl- 3,20-diacetate.
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170 (-P! # T'hy; è'rJ: 7 ',, 20-epoxy-pregnan-3c (, 20-diol-11-one resulting in hydrolyzed with potassium bicarbonate m-
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thanolic, so as to produce 16o (mm6ethyl-prégnane-3o (, 1701 -diol-11,20-dione.
The latter compound is reacted with bromine in chloroform, so
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forming 21-bromo-16 -methyl-pregnan-3o (, 170 (-diol- '11,20-dione, which is reacted with sodium iodide in acetone, so as to produce 21-
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iodo-1601 -wethyl-pregnan-301 lo (-diol-11, 20-dione, which is converted without isolation to 160 (-methylpregnane-3o (, 170,21-triol-11,20-) 21-acetate dione by reaction with anhydrous potassium acetate;
this compound is reacted with chromium trioxide in pyridine,
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so as to form 16o (-methyl-pregnan-170 (, 21-diol-3,11,20-trione) 21-acetate. 16o (-methyl-pregnan-17o (, 21-diol-3) 21-acetate , 11,20-trione is reacted
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with ciu bromine .3ür,:. a mela: ar ..1.; dde acet .. "glacial and chloroforma 1 # way ..,: '.; C t: ..!' s di.: ...- 'omo-l6o ('" methyl-pregn & ne - !. 7o (21-cie g 3, 1 1 'u -'? r- 'ie, i;>:: is a' ors reacted with de éi aesi t :. oazid:, ¯ maniera forming 2i-ac; #ate 3,20-bis-se'itiearo.-e 16o (-rn & thyl-4-pregnen17o (, 21-di 1-3 / L1: 2 <J, triol ': e.
This 3,20bis-samicarbazc. is put el t.: .-. :,. an with borohydri-. of sodium so. for, "fr as 3): W-: Jis-semica.i" bazone, lo (--methyl.-1-pregnene-Ii3, 170 (.21-trio: 3,20-dio- ne, which is hydrolyzed) under acidic conditions, da ma-
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to form 16 o (-mëtnvl.-.- preunene-l¯ 3, 17 0 (, 21-triol-3,20-dione; this compound is reacted with esterifying agents, such as anhydride benzoic or lower alkanoic anhydrides, so as to form the corresponding 21-esters.
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16d 21-acetate 3,20-bis-senicarbazone. met 'l-4-pregnene-17 0 (, fll-diol-3,11,20-tr-ione, is reacted with potassium bicarbonate or potassium hydroxide in aqueous methanol, so as to forming 16 c (-methyl-4-pre- 3,20-bis-semicarbazone)
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genene-17 ol, 21-diol-3,11,20-tr-ione, which is then hydrolyzed under acidic conditions, so as to produce 16 c (-methyl-4-pregnene-1? d, 21- 21-free alcohol-functional diol-3,11,20-trione; the compound is esterified, using the above-mentioned esterifying agents, to produce the corresponding 21-esters.
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16 0 (-methyl - J - prenene-11 3, 1-ol, 21-triol-3,20-dione, on reaction with acetic anhydride in pyridine, produces the corresponding 21-acetate which is reacted with methanesulfonyl chloride and then with potassium acetate acetate or phosphorus oxychloride, so as to produce 21-acé
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16 0 (-methyl -., 9 (11j-Pregnadien-17q, 21-diol-
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3.20 - ilo.ne; this 5Grnier composa s'. '.', reacted with acid i! yl6JJid;:. w of man: 1..i ,; --0 3 p: ': Reduce 21-acetate of 9 o (- bromo-16 0 (-é'chyl-4 "' praguèna-ll 117 o (, 21triol-3t20-dione, which is reacted with . of potassium acetate in ethanol, to produce 16 0 (-methyl 1 â .3 -epoxy-1, pa-; nene-17 c (, 21-diol-3) acetate , 20-dione.
This 9,11-epoxide is then reacted with ôa fluoride dehye-rogùne in da tetrahydrofuran, so as to produce 21- "acetate of 16d-methyl-9 o (-fluoro-4" prégr [ene-11,17 ci., 21-tr; .U :, 20-dione ,; this compound is reacted with a hydrolysis agent to form 16 [alpha] -methyl-9 [alpha] -fluoro-4- pregnant '
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ne-11, 17 o (, 21-tr.ol-3,20-dione 21-free alcohol function. This alcohol is reacted with an esterifying agent, such as benzoic anhydride, lower alkanoic anhydrides and the like, so as to form the corresponding 21-ester.
16 o (-methyl-9 o (-fluoro-4-pregnene-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione) 21-acetate is reacted with chromium trioxide in pyridine, thereby forming 16 [alpha] -methyl-9 0 (-fluoro 21-acetate
EMI6.3
4-Pregnene-17 c (, 2l-diol-3, 11, 20-trione which, on reaction with a hydrolyzing agent, forms 1601 -methyl-9 d - fluoro-4-pregnene-17 c (, 21- triol-3,11,20-trione having a free 21 alcohol function. This 21 free alcohol is reacted with esterifying agents, such as benzoic tanhydri-, lower alkanoic anhydrides and the like, so as to form the corresponding 21-esters.
Among these starting 16-methyl-ll-oxygenated -4-pregnene-17 [alpha], 21-diol-3,20-diones, there may be mentioned 16 [alpha]
EMI6.4
methyl-4-pr-enene-1? d, 21-aiiol-3,11,20-tr-ione and its 21-esters, and in particular its 21-esters carbonyl lower hydrocarbons, as% benzoate 16 o (-methyl-4-
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prC-; r.ene-17 G \; .: .. -dio ... 3,:, s .rîons 2 '.. ".; 1,> # 5 21-alca; .Gateo i.nférie! z. - d," 16 c - ¯. = p "--arègnère = -li to, 21dioJ.- 3,11,20-trione, te 1 ql6 1 e 21 -.a re # a te co 1 ::: '0 (-méthy: t.-J. .pregnene-17d 21.-diol-, 1,2C-r, r ior.e; 16 o (-methyl-4-prejni #> e-1? 0 \, 21-diol-? ., 2U-trione; 16 O (-methyl-1-prenene-11L113, 1'1d, 2l- .;
esters and its 21-esters, and in particular the 2Jlcerbonyls of hy-
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lower hydrocarbons, such as 21-benzate. of 16 0 (methyl-4-pregnene-11 / J '17 0 (, 1-triol, 2-u-ion,' .-; the lower 21-alkanoates of 16 o (-methyl-4-pregnene-11/3, 170 (, 21-triol-3,20-dione, such as 16 O (-methyl -.- Pregnene-li, 17-o (, 21-triol-3,20-dione; 16-21-propionate) 0 (-methyl-4-pregnene-11 jJ, 17 0 (, 21-riol-3,20-dione; 16 c -methyl-- 'c (-fluoro-4-pregnene-17 d, 21- diol-3> 11,20-trione and its 21-esters,
EMI7.3
and in particular the carbonyl 21-esters of hydrocarbons
EMI7.4
lower, such as 16 o (-methyl-9 0 (-
EMI7.5
fluoro-4-pregnene-170 (, 21-diol-3,11,20-trione;
the 21-
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16 d -methyl-9 0 (-fluoro-4-pregnene-17 o, 21-diol-3,11,20-trione lower alkanoates such as 16 0 (-methyl-9 o (-fluoro -4-Pregnene-17 0 (- 21-diol-3, 11, 20-
EMI7.7
trione; 16c (-methyl-9 o (-fluoro-4-) 21-propionate
EMI7.8
pregààe-17 d, 21-diol-3,11,20-trione; 16 O (-methyl-.;, J ;,.
9 0 (= luoro-1-pregnene-11 3, 17 d, 21-triol-3,20-dione
EMI7.9
and its 21-esters, and in particular its carbonyl 21-esters of lower hydrocarbons such as 21-benzoate of
EMI7.10
16 0 (, -methyl-9 0 (-fluo-ro-1-pregnene-11/3, 17 o (, 21-triol-3,20-dione; the 21-lower alkanoates of 16 c (-methyl-9 0 (-fluoro -! - pregnene.-11/3, 17 0 (, 21-triol-3, 20-dione, such as 16 c (-methyl-9 d-fluoro-y-pregnene-) 11, 17 d, 21-triol-3,20-dione; 16 c (--methyl-9 -fluaro-x, -pr è 21-prmptonate; nene-11, 17 c (, 21-
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triol-3,20-dione and the like.
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(; u: "as a complement to the present invention and using the preferred layers 4e5: to the microorganisms achi, z2M7 cetes, the dehydrogenation of the compound 16-N4thyl-ll-oxygenated- '4-pregnene-17 21-di o: i3 ,: 0-dione is carried out by bringing the 3teroid compound er. In contact with the microorganisms Schizomycetes, themselves o. If preferred, with the enzyme systems of Schizomycetes microorganisms. And so that the hydrogen attaches to the carbon atoms C -1 and C-2 is selectively removed, so as to produce the desired steroid # 1, substantially uncontaminated with unwanted by-products.
When the compound 16-methyl-
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11-c: acygen -.- Pregnene-17, 21-diol-3,20-dione is subjected to the dehydrogenating activity-3 of the preferred dehydrogenating strains of Schizomycetes microorganisms, the compound 16- is obtained directly and in a high yield. methyl-
EMI8.3
The corresponding 11-oxygenated-1,1-pregnadiene-7q, 21-diol-3,20-dione.
The microbiological dehydrogenation treatment according to the invention is carried out by bringing the compound 16-methyl-II-oxygenated-4-pregnene-17 c (, 21-diol-3,20-dione into contact with the dehydrogenating activity of microorganisms Schizomycetes This can be done by adding the steroid compound, either in solid form or as a solution in a solvent, such as a dialkyl ketone, such as acetone, a dialkyl formamide. , such as dimethylformamide and the like, under sterile conditions, culturing the microorganism in a nutrient medium and stirring the resulting mixture, so as to grow the microorganism and dehydrogenate the steroid compound.
The steroid can be added at the time the nutrient medium is inoculated using the culture of Schizomycetes microorganisms, or it can be added to a culture.
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t.abl1.e. To the 1 se of adjcutel <, t -ose stéx <.w s: to the culture established in the medium r "t; s- cells'l1. ±: obtained from this established culture can:
Repaired from the broth by filtration, washed with distilled
EMI9.2
suspended in a solution qae4F.r '";) mponne suitable compound 16-methyl-11-o" genef.-prégzèr.e-.1%, J 21-diol-3,20-dione, after coi the mixture resulting 95i stirred so as to effect the dehydro 2; est \ at.ion of the steroid '! oi2PQsé and to form the 16-methy.-il-oxygéz-', .- prégriaine-ll d, 21-diol-3,20 -dione corresponding.
This half-compound is more easily recovered from this medium than from the mixture obtained when the steroid is incubated with the microorganism in the original nutrient medium. The compound 16-methyl-
EMI9.3
II-oxygenated-4-pregnene-17 0 (? 1-diol-3,20-dione can also be contacted with dehydrogenating enzyme preparations originating from the growth of Schizomycetes microorganisms.
The nutrient media used to effect this bacteriological dehydrogenation are those ordinarily used for the propagation of Schizomycete microorganisms. Usual nutrient media include a source of carbon and nitrogen, inorganic salts and growth factors, if needed. Carbon can be provided by compounds, such as acetates, lactates and the like.
The nitrogen can be supplied by an ammonium salt, amino acids or proteins, such as soybeans, oats, yeast, yeast extracts, the digest of casein, meat extracts, blood meal, protein meat and bone fragments, salmon meal, fish meal, fish soluble, distiller soluble and the like. If desired, Schizomycete microorganisms can be propagated using proteins (or amino acids)
<Desc / Clms Page number 10>
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without any 1'10i carbon hlP: 3e present in the medium, in which case the proteinfu cu 0mio = acids serve as the source of carbon and nitrogen required by the microcrganisC 'f' mes.
Although, as noted above, dehy-
EMI10.2
Drogenation of the compound 16-! Nethyl "" "oxygenated" 4-Pregnene-17 d, 21-diol-s20--d.one can be carried out using dehydrogenating enzyme preparations derived from the growth of Schizomycetes or microorganisms. by bringing the steroid compound into contact with a suspension of an established culture in distilled water, it is preferred
EMI10.3
ordinarily add the compound 16-methyl-11-oxygenated-4F pregnene-17 0 {, 21-diol-3,20-dione to a nutrient medium containing a 24 hour culture of microorganisms
Schizomycetes.
The proportion of steroid compound, which can be added to the medium, will vary depending on the particular substrate to be dehydrogenated, but it is ordinarily preferred to use a concentration of about 0.005% to 0.2% of.
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compound 16-methyl-11-oxygenated-1-pregnene-17, 21-diol-3,20-dione, although higher or lower concentrations can be employed, if desired.
The culture containing the added steroid compound is then incubated, preferably with agitation and aeration for an additional period, which usually varies between about 10 hours and 50 hours, although shorter or longer fermentation times may be advantageous for the fermentation. dehydrogenation of particular substrates.
Due to the fact that prolonged fermentations can lead to destruction of part of the steroid / dehydrogenated product, it is usually preferred to apply a fermentation time of about 10 hours to 24 hours which, depending on the steroid substrate, is usually preferred. gives, as has been found, maximum yields of steroid product
<Desc / Clms Page number 11>
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L .., --déshYd'- ', [; v'. '. 0 twists the gr ¯:,.: - ..:.:
of dµ == 1.> ;, r <i to ..; ± ñation is. completed, the 13., mfthyi, -il-ixyàéi :, é-.î, -ci: grs, rïs.ne-17 c. {, 21-diol-3,20-dione obtained is <1Vlmta,:. u . ' ,,:; ll \ .- recovered from the fermented broth by extraction with a solvent immiscible with water, such as, for example, @ hydrocarbon
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chlorinated, such as chlorofor, ne, u, e c4t0h3, such as methyl isobutyl ketone, an alkyl alkanoate, such as ethyl acetate, and the like. The extract of the dehydrogenated steroid product and any unreacted starting material which may be present is advantageous.
EMI11.3
This is purified by chromatography using silica gel, activated alumina or the like or, if desired, using paper chromatograms.
After separating the dehydrogenated product from the unreacted starting material, the product can be further purified, if desired by recrystallization from a solvent, such as ethyl acetate, acetate mixtures. ethyl and petroleum ether, and the like.
By this microbiological dehydrogenation process that, using the starting 16-methyl-ll-oxygenated-4-pregnene-17 [alpha], 21-dione-3,20-diones listed below,
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is obtained 16-methyl-11-oxygenated-1, y-pregnadiene-1? d, 21-diol-3,20-diones, such as 16 d -methyl-1,4-pregnadiene-17 0 (, 21-dial-3,11,20-trione; 16 -methyl-1 ,. -Pregnadiene-11j3, 17 0 (, 21-triol-3,20-dione; 16 cl methyl-9 c (-fluoro-17 c (, 21-diol-3, 11, 20-trione and 16 c ( methyl-9 o (-fluoro-11/3, 17 d, 21-triol-3,20-dione.
Both in the case where the 16-methyl-11-oxygenated-4-
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Pregnene-17 o, 21-diol-3,20-dione used in this microbiolic dehydrogenation reaction is a free alcohol in 21 than in that where it is a 21-es-
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ter thereof, the product obtained is 16 - m; ahyl - 11-oxy-
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genel, .pre'.gn.d..èae-17 0 (, 2 ..- d.-3,20-d: one corresponding to alcohol function lib: 'ffJ 2le given that any 21-group is' " : .'.- s which may be present is hydrolyzed during the microbiological dehydrogenation reaction.
These 21-free alcohol-functional 16-methyl-11-ocygenel, prregnadien-l 'o (, 21-diol-3,20-diones can be converted to the corresponding 21-esters by reaction with an acylating agent, such as 'a phosphorylating agent, a lower hydrocarbon carboxylic acid acylating agent, such as benzoic anhydride, tert-butyl acetyl chloride, a lower alkanoic anhydride or a lower alkanoyl halide such as 'acetic anhydride, propionic anhydride, a polybasic acid anhydride,
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such as tanhydride: idë, -dimethyl-'glutaric, succinic anhydride, and the like.
According to this acylation process, we obtain
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21-esters of 16 d-methyl-1,4-pregnadiene-17 d, 21-diol-3,11,20-trione, such as 16 o (-methyl- 21-phosphate.
EMI12.4
1, y-Pregnadiene-17 d, 21-diol-3,11,20-% rione, the 21-ester 'of lower hydrocarbons of 16 o (-methyl-1, .- Pregnadiene 17 0 (, 21-diol -3,11,20-trione, such as 16-ol-methyl-1,% 21-benzoate - pregnadiene-1? D, 21-diol-3,11,20-trione; 21-tert.-butyl 16 d-aethyl-1,% acetate - pregnadienel7 d, 21-diol-3,11,20-trione; [16 0 (-methyl-16 0 (-methyl-l, 1-pregnadiene 21-alkanoates -17 Ci, 21-diol-3,11,20-trione, such as 16c-21-acetate (-methyl-1,4-prregnadiene-17 d, 21-diol 3,11,20-trione; 21- 16 0 (-methyl-1,1-p'égnadiene-17 c (21-diol-3,11,20-trione; 16-esters of 16 4-methyl-1, .- pregnadiene-11 17 0) (, 21-triol-3,20-dioney such as 16 O (-methyl.-, i-pregnadiene-.11, '17 c (, 1-triol-3, z0-dione;
the 21-carbonyl esters of 16 o (methyl-1, .- Pregnadiene-11 3, 17 c (, 21-triol-3,20-dione,
<Desc / Clms Page number 13>
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such as 21- .; w = o of 16 <o-it. 1: hyl-1, µ - =, 1 * egnadiene- 11, 17 z, 21-: o '- 3 20-' ï, .. the tert ..... .mt.:. 160 acetate -methpl-1, - p egnadien. = - i. 1,17 's-triol-3,20dione; the 21-alcpnoates inferred! '- s of 16 0 (-.ety.-1,4.pregnadiene-11 j3 r "s.? o (21-trßu-", 20-dione,'.:; such as 16 d-methyl-1, @ - pregnadiene-li j3, 9 17 cl 21-triol-3,20-dione; 16-d-methyl-1, 21-propionate @ pregnadiene-11/3, 17 0 (, 21-triol-3,20-dione;
the 21-esters of 9 0 (-fluor-16 0 (-methyl-1,4-prégnadière-l'l 0 (, 21-
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diol-3,11,20-trione, such as, for example, 21-phosphate
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of 9 0 (-fluor-16 0 (-methyl-1, t-prregr.adiene-1 '' (, 21-diol- / 21-
EMI13.4
3,11,20-trione; carbonyl esters of inferior hydrocarbons
EMI13.5
laughers of 9 0 (-fluoro-16 r (..methyl-1, t-pregnad.ene-1 0 (, 21-diol-3,11,20-trione, such as 21-Denzoate of 9 c (fluoro -16 cl -methyl-l, l-pregnadiene-d, 21-diol-3,11,20trione; 9 o (-fluoro-16 0 {-methyl-1, - 21-tert.-butyl acetate) pregnadiene-l ', 21-diol-3,11,20-trione; the 21-lower alkanoates of 9 0 (-fluor-16 d -methyl-1,4-pregnadiene-17 d, 21-diol-3,11, 20-trione, such as 9 0 (-fluoro-16-d-methyl-1,1-pregnadiene..17 O (, 21-
EMI13.6
diol-3,11,20-trione;
9 0 (-fluoro-16 c (-
EMI13.7
methyl-1,4-pregnadiene-17 d, 21-dial-.3,11,20.-trione; the 21-esters of 9 o (-fluoro-16 d -methyl-1,4-pregnadiene-17 0 (,
EMI13.8
21-diol-3,11,20-trione, such as, for example, 21-phos-
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phate of 9 0 (-fluoro-16 c (-methyl-1,4-pregnadiene-11 f3 '
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17 o (, 21-triol-3,20-dione; the carbonyl 21-esters of hy-
EMI13.11
9 -fluoro-16 0 (-methyl.pregnadiene-11, 17 o (, 21-triol-3,20-dione) lower hydrocarbons, such as 9 c (-fluoro-16 0 (-methyl- 1,4-Pregnadiene 11,6,1? 0 (, 21-triol-, 20-dione; 21-tert.-butyl-acetate 9 c (-fluoro-16 0 (-aethyl-1, .- Pregnadiene-1Z f3 '17 o (, t 21-trio-3, .20-dione;
the lower 21-alkanoates of,
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9 oi-fluoro-16 o (-methyl-1,1-pregnadiena-11 3,17 o (, 21-triol-3,20-dione, such as 9 o (-fluoro- 16 o ( -methyl-1,4-pregnadiene-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20dione; 9 o (-fluoro-1.6 o (-methyl-1,4-pregnadiene-11 ss) , 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione, and the like.
Alternatively, instead of being subjected to the aforementioned microbiological dehydrogenation treatment, the
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compound 16-methyl-1,4-pregnene-17 o (-0l-3,20-dione or, if preferred, the corresponding saturated compound 16-methyl-pregnane-17 0 (-0l-3,20-dione) is reacted with selenium dioxide, so as to cause dehydrogenation of ring A and to form the corresponding compound 16-methyl-1,4-pregnadiene-17 o (-ol-3,20-dione.
This process of dehydrogenation with selenium dioxide is advantageous.
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This is done by bringing the compound 16-methyl-I-pregnene 17 0 (-0l-3,20-dione or the compound 16-methyl-pregnan-17 0 (ol-3,20-dione and selenium dioxide into contact) with each other in the presence of an organic solvent, such as dioxane, an alcohol solvent, such as let-butanol, etc., and heating the mixture to an elevated temperature. Butanol as the solvent, it is ordinarily preferred to carry out this reaction at the boiling point of the solvent Under these conditions, the reaction is usually completed in about 15 hours.
The reaction mixture is usually filtered, so as to separate the metallic selenium, and the filtered solution is evaporated to dryness in vacuo, whereby the compound is obtained.
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The desired crude material obtained in this way is advantageously purified by paper strip chromatography, according to the method described above at 16-4'ethYl-le4-Pregnadiene-17 0 (-0l-3,20-dione). About the purification of
EMI14.5
compounds 16-methyl-1,1.-pre; radiene-17 0 (-0l-3, 2U-diar: t pro-
<Desc / Clms Page number 15>
EMI15.1
duits by del: Ùyci! ogenatiol1 u c. o.ologiqu.
The following examples illustrate 4e embodiments of the present invention, but it is obvious that these examples are given for illustrative and not limiting.
EXAMPLE 1
50 ml of a nutrient medium of the following composition are prepared:
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<tb>
<tb> cerelosis <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> edamin <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> liqueur <SEP> of <SEP> maceration <SEP> of <SEP> but <SEP> 0.25 <SEP> ml
<tb> distilled <SEP> water <SEP> q.s. <SEP> ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
This medium is adjusted to a pH of 6.5 using sterilized KORE and inoculated with about 2.5 to 5 ml of a culture of Bacillus sphaericus (ATCC-245). The inoculated culture is then incubated at a temperature of 28 ° C., with shaking, for 24 hours. To the resulting culture, we add a
EMI15.3
solution containing 10 mg of 16 o (-methyl-4-pregnene-17 0 (s 21-diol-3,11,20-trione dissolved in 0.2 ml of dimethyl formamide. The culture containing the steroid compound is incubated, in stirring, for an additional period of about 24 hours at 28 C.
The fermentation broth is extracted with four 50 ml portions of ethyl acetate and the ethyl acetate extracts are combined and evaporated in vacuo to a volume of about 5 ml. The concentrated solution is then spread on paper chromatograms, which are developed using dimethylformamide as the stationary phase and a 50% mixture of benzene and
50% chloroform as mobile phase. After 8 hours of
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development in a descending system, upper bands of each chromatogram, corresponding to the dehydrogenated derivative, are cut out and extracted with methanol
<Desc / Clms Page number 16>
and the extracted material is again subjected to paper chromatography.
The upper strip is cut again, dried thoroughly and extracted with methanol.
The methanolic extract is evaporated to dryness under vacuum. The residual material is recrystallized from a mixture of ethyl acetate and petroleum ether, so
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16 d -metlyi-l, t-pràgnadiàna-J. 7 c, 21 .. diol-3,11,20-trione are obtained.
16 0 (-methyl-1,4-pregnadiene-17 c (, 21-dio1 ...
3,11,20-trione is treated with acetic anhydride and pyridine, which gives the 21-acetyl derivative, which is purified by recrystallization from a mixture of benzene and petroleum ether, so that we get the
EMI16.2
16c 21-acetate (methyl-1, .- pregnadiene-1 o (, 21-diol-3,11,20-trione.
EXAMPLE 2
EMI16.3
50 ml of a 1butritive medium of the following composition are prepared:
EMI16.4
<tb>
<tb> cerelosis <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> edamine <SEP> 1 <SEP> g. <SEP>
<tb> liqueur <SEP> of <SEP> maceration <SEP> of <SEP> but <SEP>, <SEP> 0.25 <SEP> ml
<tb> distilled <SEP> water <SEP> q.s.ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
This medium is adjusted to a pH of 6.5 using KOH, sterilized and inoculated with about 2.5 to 5 ml of a culture of Nocardia asteroides (ATCC 9970). The inoculated culture is then incubated at a temperature of 28 ° C., with shaking, for 24 hours. To the resulting culture, we add a
EMI16.5
solution containing 40 mg of 16 -methyl-4-pregnene-11 jJ. 17 o (, 21¯triol-320-dione dissolved in 0.2 ml of dimethylformamide. The culture containing the steroid compound is incubated, with shaking) for an additional period of about 24¯hours at 28 ° C.
The fermentation broth is extracted with
<Desc / Clms Page number 17>
EMI17.1
four fractions.; (50 ml d ± 1.0 (Jt <:: t.6 of ethyl and the ethyl acetate extracts 3 are combined and evaporated in vacuo to an i + <. l, Luq.e of approximately 5 ml. The concentrated solution is then spread on r .1. # Natograms of paper, which are developed using dimathylformamide as stationary phase and a mixture of 30% benzene and 50% chloroform as phase. mobile. The bands
EMI17.2
The tops of each chromatography, corresponding to derivative 6, 1 "" dehydrated, are cut and extracted with methanol and the extracted material is again subjected to paper chromatography. The upper bende is cut again, dried thoroughly and extracted with methanol.
The methanolic extract is evaporated to dryness under vacuum. The residual material is recrystallized from a mixture of ethyl acetate and petroleum ether,
EMI17.3
whereby 16 -methyl-1,1-i-pregnadiene-11,3,17 Oi, 21-triol-3,20-dione is obtained.
The 16 c-methyl-1, y-pregnadiene-11% 3, 17 c (, 21-triol-3,20-dione is treated with acetic anhydride and pyridine and the acetylated product is recrystallized from a mixture. of benzene and petroleum ether, so that 16 d-methyl-1,4-pre- 21-acetate is obtained
EMI17.4
gnadiene-11 jJ, 17 d, 21-triol-3,20-dione.
EXAMPLE 3
50 ml of a nutrient medium of the following composition are prepared:
EMI17.5
<tb>
<tb> cerelosis <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> edamine <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> liqueur <SEP> of <SEP> maceration <SEP> of <SEP> but <SEP> 0.25 <SEP> ml
<tb> distilled <SEP> water <SEP> q.s.ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
This medium is adjusted to a pH of 6.5 using KOH, sterilized and innculated with approximately 2.5 to 5 ml of a culture of Mycobacterium smegmatis (NRRL B-1667). Culture inoculated
<Desc / Clms Page number 18>
is then incubated at a temperature of 28 ° C., with stirring, for 24 hours. To the resulting culture, we add a
EMI18.1
solution containing 10 mg of 16 o (-methyl-9 o (R.f'luoro-4-prégnene-11 f3, 17 o (, 21-triol-3,20-dione dissolved in
0.2 ml of dimethylformamide. The culture containing the steroid compound is incubated, with shaking, for an additional period of about 24 hours at 28 ° C.
The fermentation broth is extracted with four 50 ml portions of ethyl acetate and the exs = ethyl acetate are combined and evaporated in vacuo to a volume of about 5 ml. The concentrated solution is then spread on paper chromatograms, which are developed using dimethylformamide as the stationary phase and a mixture of 50% benzene and 50% chloroform as the mobile phase.
Two bands are obtained, one of which (corresponding to the most mobile component) reveals the adsorption maximum of ultra-violet characteristic of 16 [alpha] -methyl-9 d -fluoro-4-pregnene-.
11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione, and the other of which (corresponding to the least mobile component) reveals an adsorption maximum of ultraviolet at about 245 mu .
The paper chromatogram is dried and the band corresponding to the adsorption of 245 μm is cut and extracted with methanol. The material extracted with methanol is again subjected to paper chromatography, using paper which has been extracted for 48 hours with methanol and employing the chloroform-formamide system previously used. The resulting chromatogram shows only a trace band corresponding to the starting material, the major band having an ultraviolet adsorption maximum of 245 mu.
The paper chromatogram is dried thoroughly and the band corresponding to the adsorption maximum of 245 mu is cut and extracted with
<Desc / Clms Page number 19>
EMI19.1
at tgtllenol. 1wwait méthJ, 1t1 :: 'J.tIc. is evaporated to dryness in vacuo so that q- :: .. "! 0 obtains 16 Ci {" -methyl- 9 al ... fluoro..1J:, '' "pr4gnadiÍàJ1ê '' '' 11 lJ ; 17 G {b 2¯tr3.ol-a20-dione.
EMI19.2
The 16 d. -methyl-9 0 (... ± luoro-lp4 = pregnadiene ... il 17 1-tris.-3 s 2d.o is reacted with an excess of acetic anhydride in pyridine, so that the 21-acetyl derivative is obtained, which is purified by recrystallization from a mixture of benzene and petroleum ether, which makes it possible to obtain 16 [alpha] -me 21-acetate
EMI19.3
9-thyl d -fluo: z-L, l-prëgnad.ene-1,1, 17%. 21-triol-- 3,20-dione.
EXAMPLE 4
The fermentation treatments of Examples 1, 2 and 3 are repeated using, instead of the microor-
EMI19.4
g, isms and the starting 16 c (-mfithyl-11-oxygenated-4-pregnene-17 d, 21-.ol-3n20-dione employed in for example the strains of microorganisms and the starting steroid compounds indicated in the following table.
The resulting fermentation broths are treated according to the isolation methods described in Examples 1, 2 and 3, so as to produce, depending on the particular strain of microorganism and the particular steroid substrate used,
EMI19.5
16 c -methyl-11-oxygenated-1,4-pràgnadiene-17 d, 21-diol-3,20-dione indicated in the following table:
EMI19.6
<tb>
<tb> Test <SEP> Substrate <SEP> Microorga- <SEP> 16-methyl-11No. <SEP> nismes <SEP> Bacil- <SEP> oxygenated-1,4lus <SEP> Spaericus <SEP> pregnadiene-
<tb>
EMI19.7
17 c (, 21-dio] 21-dioJ: -
EMI19.8
<tb>
<tb> 3,20- <SEP> ione, <SEP>
<tb> produced
<tb>
EMI19.9
1 16 c (-methyl-4-pregnene- ATcc-705Q l6c (-methyl- 17 d, 21-diol-3,11,20-, la4 pregnadiè
EMI19.10
<tb>
<tb> trione <SEP> ne-174 <SEP>, 21diol-3,11,20trione
<tb>
<Desc / Clms Page number 20>
EMI20.1
2 160 (-methyl-4, -pregnena .. .é ... C-2.5 10 ;; '(-methylIl 13, 17Q {, 2l-triol-1, -'- pregnadiè-3,20-dione. Ns .-11/3, 170 (, 21-tri'ol 3,20-
EMI20.2
<tb>
<tb> dione
<tb> 3 <SEP> 21-acetate <SEP> of <SEP> 16o (-m- <SEP> ATCC-4525 <SEP> 16 [alpha] <SEP> -methyl-
<tb>
EMI20.3
thyl-J-pregnene-llj3,. 1,4-Pregnadiated- 17 (, (, 21-triol-3,: zef: ':
1I3, 17! dione. : -t101-J, 2Uw dione 4 160 (-methyl-4, -pregnene- ATCC-7055 160 (-methyl-17, 21-diol-3,11,20- 1,4-pregnadie- '
EMI20.4
<tb>
<tb> trione <SEP> ne-1701 <SEP>, 21diol-3,11,20trione
<tb> 21-acetate <SEP> of
<tb>
EMI20.5
5 16d -methyl-9d -fluoro- ATCC-7055 I6 -methyl-.-Prgnene-17o (, 21-diol-90 (-fluor- 3,11,20-trione & -! F !! 1 1, .- , prégnadïê
EMI20.6
<tb>
<tb> born-17 [alpha] <SEP>, 21diol-3,11,20trione
<tb> 6 <SEP> 160 (<SEP> -methyl-9o (<SEP> -fluoro- <SEP> ATCC-245 <SEP> 16 [alpha] -methyl-
<tb>
EMI20.7
1-Pregnene 11f3, 170 (, 9c (-fluoro- 21-triol-3, 2C! -Diane llfr3égl7c (ièi
EMI20.8
<tb>
<tb> ne: 11.6 <SEP>, 17 [alpha],
<tb>
EMI20.9
2l-tr'iol-J, 20-
EMI20.10
<tb>
<tb> dione
<tb>
EMI20.11
7 160 (-m-) 21-acetate.
ATCC-7063 16c (-methylthym-90 (-fluoro-4-pre-901 -fluorognene-113, 17o (, 21- 1,1-prégnad3etriol-3; 20-dione. Ne 11, 170 (,
EMI20.12
<tb>
<tb> 21-triol-3,20dione
<tb> Microorganisms <SEP> Nocardia
<tb>
EMI20.13
9,160 (-ibsethyl-4-pregnene- eblackwellii 16d -methyl- 11/3 11170 (, 21-triol-3, ATCC-6 $, 6 1,4-prégnaiè-20 'dione ne-11, 17c (, zl -triol-3, zo dione 9 16o (-methyl-4-pregnene- N. globerula 16o (-methyl-17o, 21-diol-3,11,20-ATCC-9356 1,4-Pregnadie-.
EMI20.14
<tb>
<tb> dione ...
<SEP> ne-17c (<SEP>, 21-
<tb>
EMI20.15
dio1-J, 1,20trione 10 160 (-m.ethyl-9o (-fluoro- N.leishmanii 16d -methyl-4-pregnene-17o (, 21-diol-9c (-fluoro-
EMI20.16
<tb>
<tb> 3,11,20-trione <SEP> 1,4-pregnadiene-17c (<SEP> 21diol-3,11,20trione
<tb>
<Desc / Clms Page number 21>
EMI21.1
il! 6o (-methvl-9B (-fluor? '- N.formica 1 -') rA -methyl- 4-pregnena.,. 118, 17o (NHRL '"24.70 91 -fluoro-lj, 4- 21-triol -J ;, '20' ::
dione pregnadiene-
EMI21.2
<tb>
<tb> 11/3, <SEP> 17 [alpha], <SEP> 21triol-3,20dione
<tb>
EMI21.3
12 l6c --methyl-4 - prêg.uene "llI. Phl <3i 160 {-methylll / 5.17c (2i-triol-3, àl> o itTôÈ-1.2, 298 14-prégnadiè ...
EMI21.4
<tb>
<tb> dione <SEP>. <SEP> ne-11/3 <SEP>, 17 [alpha],
<tb>
EMI21.5
sli.-tiol-3, 2 dione 13 160 (-methyl-1.-pregrene- M. lacticola 16c (-methyl-17, 21-diol-3, 11,20- ATCC, 12.29'II, 4-prégnadiè-
EMI21.6
<tb>
<tb> trione <SEP> ne-17 [alpha] <SEP>, 21diol-3,11,20trione
<tb>
EMI21.7
14,16o (-methyl - 9o (-fluoro- M. tuber- 16o (-methyl-4-pregnene-17c (21-diol-culosis 9c (-fluoro- 3,11,20-trione.
ATCC-129296 l, 4-Pregnadie-
EMI21.8
<tb>
<tb> ne-17 [alpha], 21diol-3,11,20triode
<tb>
EXAMPLE 5
To a solution of 110 mg. Of 16 [alpha] - methyl-4-pregnene-17 [alpha] -21-diol-3,11,20-trione in 6 ml. of t-butanol, 0.01 ml. of glacial acetic acid and 0.03 ml of acetic anhydride, 70 mg are added. selenious acid (H2SeO3). The mixture is heated to boiling overnight, after which a further 50 mg of sel-acid is added. nieux and heating is continued for another 24 hours.
The solution is decanted from the metallic selenium and evaporated until an oil is obtained, which is then dissolved in ethyl acetate. The ethyl acetate solution is washed with aqueous sodium bicarbonate, then with water until neutral, and dried. The solvent is removed from the dried solution by evaporation, whereby an oil is obtained which is dissolved in benzene and adsorbed on acid washed alumina. The adsorbed product is eluted with a mixture of ether and petroleum ether, then with mixtures of ether and chloroform increasingly rich in chloroform.
The 4: 6 ether-chloroform eluates are combined and evaporated to dryness.
<Desc / Clms Page number 22>
the residual material is recrystallized from a mixture of ethyl acetate and ether, so that 16 [alpha] -methyl-1,4-pregnadiene-17 o (, 21- acetate) is obtained. diol- 3,11,20-trione; mp: 208-212C.
EXAMPLE 6
Has a solution of 10 mg. of 16 [alpha] - methyl-1,4-pregnene-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione 21-acetate in 6 ml. of t-butanol, 0.01 ml. glacial acetic acid and 0.03 ml. 70 mg of acetic anhydride are added. selenious acid. The mixture is heated to the boil overnight, after which a further 50 mg of selenious acid is added and the heating is continued for a further 24 hours.
The solution is decanted from the metallic selenium and evaporated until an oil is obtained, which is then dissolved in ethyl acetate. The ethyl acetate solution is washed with aqueous sodium bicarbonate, then with water until neutral, and dried. The solvent is removed from the dried solution by evaporation, whereby an oil is obtained which is dissolved in benzene and adsorbed on acid washed alumina. The adsorbed product is eluted with a mixture of ether and petroleum ether, then with mixtures of ether and chloroform increasingly rich in chloroform. The 4: 6 ether-chloroform eluates are combined and evaporated to dryness.
The residual material is recrystallized from a mixture of ethyl acetate and ether, so that 16 c (-methyl-1,4-pregnadien-11 ss, 17 [alpha], 21- acetate is obtained. triol-3,20-dione.
EXAMPLE 7
By operating by the selenious acid dehydrogenation process of Example 6, but using 9 o (-fluoro-16 [alpha], -methyl-4-pregnene-17 [alpha] 21-acetate, 21 -diol-3,11,20-trione as starting material instead of
<Desc / Clms Page number 23>
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21 - 10 d -methyl-Qp acetate; "4.gi; é; ie-1 id," .: W.dil-3llp 20-triona used in example 3, we obtain 21- 90 acetate (-flu7xzx-1 cj - ett> jii-i ,;
q Pregnadi.ene-17 4, 21-diol-3, ll, 20-trioneÓ
EXAMPLE 8 In. operating by the selenious acid dehydrogenation process of Example 6, but using
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21-acetate of 9 d .. -fluoro-16 ci -methyl .-, prgaene-11 17 d, 20-trioi-J, 20-dione as starting material instead of 21-acetate of 16 d-methyl-4 -Pregnene <1'7 c. (, 21-diol-3,11,20-trione used in Example 6, 9 d -fluoro-16 .nethyl-1, .- gxrégraad 21-acetate is obtained. éneil /, eze d, 2lrtriohi, tdione.
EXAMPLE 9 Has a solution of 110 mg. of 16 [alpha] - methyl-pregnan-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione 21-acetate in 6 ml.
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of t-butanol, 0.01 ml. of glacial acetic acid and 0.03 m.lE of acetic anhydride, 70 mg are added. selenious acid.
The mixture is heated to boiling overnight, after which a further 50 mg of selenious acid is added and heating is continued for a further 24 hours. The solution is decanted from the metallic selenium and evaporated until an oil is obtained, which is then dissolved in ethyl acetate. The ethyl acetate solution is washed with aqueous sodium bicarbonate, then with water until neutral, and dried. The solvent is removed from the dried solution by evaporation, whereby an oil is obtained which is dissolved in benzene and adsorbed on acid washed alumina. The adsorbed product is eluted with a mixture of ether and petroleum ether, then with mixtures of ether and chloroform which are increasingly rich in chloroform.
Ether-chloroform eluates
<Desc / Clms Page number 24>
4: 6 are combined and evaporated to dryness. The residual material is recrystallized from a mixture of ethyl acetate and ether, so that 21-acetate is obtained.
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16 c (-methyl-1,4-prêgnadiene-17 c (, 21-diol-3,11, 20-trione.
The 21-acetate of 16 d-methyl-pregnane-17 d, 21-d.ol-3,11,20-trion and the compounds 16-methyl-11-oxygenated-, 4-pregnene-17 d -diol-3, 20-dione used as starting materials in Examples 1 to 9 are prepared, by
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both of the known 16-pregnan-3 o (-oI-11,20-dione 3-acetate) by the following procedure.
A solution of 10.22 g. of methyl iodide in 50 ml. of ether is added to 1.73 g. of magnesium in 50 ml. ether. To the resulting ethereal solution of methyl magnesium iodide, maintained under a nitrogen atmosphere, was added 0.045 g. of anhydrous cuprous chloride. To this mixture is added, over the course of about 1 hour, during which the reaction mixture is vigorously stirred and maintained at substantially room temperature, a solution of about 5.6 g of 16-pregnene-3-acetate. 3 d -ol-11,20-dione in 175 ml of ether. During this addition, a white granular solid separates. The resulting mixture is heated under moderate reflux for 2 hours,
after which the reaction mixture is cooled and 125 ml of a saturated aqueous solution of ammonium chloride and then 250 ml of ether are added. The layers are separated and the ethereal layer is washed with three 50 ml portions of water. The washed ether layer is dried and the solvent is evaporated in vacuo, so that a brown viscous oil is obtained.
This oil is heated for 15 minutes at 60 - 70 C with a mixture of 25 ml of acetic anhydride and 25 ml of pyridine and
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the product aCEÎty.!. <, .3t purified! a: r. ' chromatography on alunine washed with]> 'acid, su: 3: f of u = 1 crystallization from petroleum ether, so that approximately 1., 5 g of 3-acetate d 1 are obtained , 6 d -metli; r1-pregnene-3 d -ol-11,20-à.ione> To a solution of 0.6 g. of 16 d methyl-pregnane-3-acetate (-oi-11,2ù-dione in 40 al. of methanol, 1.5 ml of concentrated aqueous HCl is added and the resulting solution is stirred until 'overnight at about 25 C.
The reaction solution is evaporated in vacuo at 25 ° C. to a small volume and the concentrated solution is poured into 50 ml of ice-water. The white solid, which precipitates, is recovered by filtration, washed with water and recrystallized from ethyl acetate, so that
EMI25.2
obtains 16 cl -methyl-prengan-3 Ol -ol-11,20-dione.
A solution of 22 g of 16 c 21-acetate (-me, 3-thyl-pregnan-ol-11,20-dione and 1 g of k-toluenesulfonic acid in 250 ml acetic anhydride is heated under reflux under nitrogen for about 3 days.
2 g. Potassium acetate (anhydrous) are added and the volatile solvents are separated by vacuum distillation.
The residual material is extracted with benzene and the benzene extract is filtered to remove insoluble material. The benzene extracts are evaporated to a volume of 100 ml and petroleum ether is added until cloudiness appears. The resulting solution is adsorbed on 660 g of acid washed alumina; the alumina is then washed with 2 liters of petroleum ether. The adsorbent is then eluted with an 85:15 mixture of petroleum ether and ether and the first four liters of eluate are collected and evaporated to dryness in vacuo, resulting in a mixture of 'enolic acetates containing
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16 c (-methylo-17 (20) -pregne-3 d, 2D- 3,20-diacetate
<Desc / Clms Page number 26>
diol-11-one.
This mixture of enolates, weighing about 14 g. is dissolved in 50 ml of benzene and treated with excess perbenzoic acid within 16 hours. The reaction mixture is stirred with a dilute aqueous solution of potassium hydroxide until the benzoic layer is free of per-benzoic acid;
the benzene layer is then washed with water until neutral, dried and freed of the solvent by evaporation in vacuo, so that a crystalline material is obtained, consisting of 3,20-diacetate 16 [alpha] -methyl-17 [alpha], 20-epoxy-prganan-3 [alpha], 20-diol-11-one. The latter compound is dissolved without purification in 200 ml of methanol, 120 ml of water and 10 g of potassium bicarbonate, and the resulting solution is heated under reflux under nitrogen for 16 hours. The methanol is evaporated from the hydrolysis solution in vacuo and the residual oil is extracted from the resulting aqueous solution with chloroform. The chloroform extract is washed with water until neutral and dried and the chloroform is evaporated off under reduced pressure.
The residual oil is triturated with ether and the crystalline material thus formed is recrystallized from a mixture of ethyl acetate and petroleum ether, so that 16 [alpha] - is obtained. methyl-pregnan-3 [alpha], 17 c (-diol-1,20-dione.
To a solution of 7.0 g of 16 [alpha] -methyl-pregnan-30 (, 17 [alpha] -diol-11,20-dione in 50 ml of chloroform, add dropwise, with stirring. , a solution containing 3.36 g of bromine in 24.2 ml of chloroform for about 60 minutes The reaction mixture is dissolved in 200 ml of ethyl acetate and the solution. The resultant is washed with water until neutral and dried after which the solvents are evaporated off in vacuo The residual crude material is dissolved in a medium amount.
<Desc / Clms Page number 27>
minimum of ethyl acetate.
The resulting solution is di-
EMI27.1
luted with 1% ethic and the mixture is stirred until crystals form. The oristalline product is recovered by filtration and washed, by pasting with a 50:50 mixture of ether and petroleum ether, so that approx.
EMI27.2
ron 5 g. of 21-bromo-16 d.-meth.y ... prégnane-3 o (, 17 d diol-11,20-dione ..>., These 5 g. of 21-bromo-16 o {-methyl- Pregnane-3 o (, 17 o (-dial-11, Z0-dione are mixed with 590 g. anhydrous potassium acetate, 4.0 g. sodium iodide and 0.03 ml. acetic acid glacial, and 100 ml of acetone are added to the resulting mixture.
This mixture is then heated under reflux, with stirring for about 16 hours, and the reaction mixture is cooled and filtered and the insoluble material is washed with acetone. The filtered solution is evaporated in vacuo, so as to drive off the solvents. The residual material is impasted with water and the aqueous mixture is extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extract is washed with water until neutral and dried, and the solvent is evaporated in vacuo until an oil is obtained. This oil is crystallized from ether and recrystallized from an ethyl acetate-ether mixture, so that 16 c 21-acetate (-methyl-prégnane-3 c (, 17 [alpha], 21) is obtained. -triol- 11,20-dione.
A solution of 400 mg of 16 [alpha] 21-acetate -
EMI27.3
methyl-pregnan-3 d -1? o (, 21-triol-11, 20-dione in 4 ml of pyridine is added to the complex formed by the addition of 400 mg of chromium trioxide in 4 ml of pyridine.
The mixture is stirred until well mixed, then left to stand at room temperature overnight. The reaction mixture is poured into water and the aqueous mixture is extracted with ether, then with
<Desc / Clms Page number 28>
twice with ethyl acetate. The extracts combined with ether and ethyl acetate are washed with aqueous sulfuric acid diluted at about 0 C, then with water until neutral. The organic solvent layer is then dried, the The solvents are evaporated in vacuo and the residual crystalline material is purified by crystallization of ethyl acetate, so that 16 c 21-acetate (-methyl-pregnane-17 d @, 21diol-3,11) is obtained. , 20-trione.
100 mg of 16 [alpha] -methyl-pregnan-17 o (, 21-diol-3,11,20-trione 21-acetate dissolved in 2 ml. Of chloroform and 2.25 ml of glacial acetic acid, at a temperature of -55 ° C., two drops of a 0.001 N solution of anhydrous HBr in glacial acetic acid are added.
To about 0.38 ml of 0.001 N HBr in glacial acetic acid at -55 ° C., 0.43 ml is added. of a solution containing 40 mg of bromine in chloroform, and the resulting solution is added, over the course of about 10 minutes, to the solution of the steroid while maintaining the reaction mixture at about -55 C. The reaction mixture is left to stand at -55 C for about 1/2 hour; a solution containing 250 mg of sodium acetate in 3 ml of water is added and the resulting mixture is stirred for about 5 minutes. 5 ml of water are then added and the aqueous mixture is extracted with ethyl acetate.
The ethyl acetate extract is washed with an aqueous solution of sodium bicarbonate until neutral, then with water, after which the extract is dried and the solvent is evaporated in vacuo. The residual material is dissolved in 2 ml of ace, tone and to the solution 25 mg of sodium bromide and 1 ml of water are added.
The resulting mixture is heated under reflux for about 5 hours, the reaction mixture is cooled and the acetone is evaporated.
<Desc / Clms Page number 29>
vacuum-packed. @a residual material is extracted, at
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ether medium eb. The extra 0 ';. h, "rl; f ;;:; t, washed' 'e <; with water and dried, after which the solvent $ si. evaporated to a volume of about 1 ml; petroleum ether is added to this solution and the crystalline material, which separates, is collected and dried, so that an approxima-
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tally 90 mg of 21 -.-, 4-brosio-16 o (-methyl-prenan-17, 21-dio.-3,11,20-triore) ketate.
A mixture of 48 mg of semicarbazide, 48 mg of 4-bromo-16 [alpha] -methyl-pregnan-17 [alpha] 21-acetate, 21-diol-3, 11, 20-trione and 0.6 ml of ethanol is heated under reflux in contact with a nitrogen atmosphere for about 3 days and the reaction solution is evaporated to a small volume and diluted with water, after which the crystalline material is collected and purified by recrystallization from aqueous methanol, so that 16 [alpha] - 3,20-bis-semicarbazone 21-acetate is obtained
EMI29.3
methyl-4-pregnene-17 c (, 21-diol-3,11,20-trione.
50 mg of 21-acetate of 3,20-bis-semicarbazone of 16 ol -methyl-4pregnene-17 0 (, 21-diol-3,11,20-trione are dissolved in a mixture of 1.0 -ce of benzene and 1.0 cc of 1.1 N methanolic potassium hydroxide and the solution is left to stand at room temperature for about 10 minutes. The solution is then acidified with acetic acid, after which the benzene is evaporated off under vacuum and the residual material is recrystallized from ethyl acetate so that there is obtained 3,20-bis-semicarbazone 16 [alpha] -methyl-4-pregnene-17 [alpha], 21-diol -3,11,20trione.
A mixture of 60 mg of 3,20-bis-semicarbazone-
EMI29.4
16 o (-methyl-pregnene-17 c (, 21-diol-3,11,20-trione, 0.2 ml. of dimethylformamide, 0.6 ml. of chloroform, and 1.5 ml of 1.0 N aqueous HCl is heated under
<Desc / Clms Page number 30>
reflux for about 3 hours. The resulting phased system is cooled to a temperature of about 15 ° C and the layers are separated. The aqueous layer is extracted with chloroform and the chloroform extracts are combined with the original chloroform-dimethylformamide solution.
The organic layer is washed with an aqueous solution of sodium bicarbonate and the chloroform as well as the dimethylformamide of the organic layer are replaced with ethyl acetate by evaporation in vacuo. Petroleum ether is added and the resulting solution is subjected to chromatography, using aqueous methanol as the stationary phase and a mixture of benzene and chloroform as the mobile phase, so that 16 [alpha ] -methyl-4-pregnene-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione.
A solution of 45 mg of 3,20- 21-acetate
EMI30.1
16 d-methyl-4-pregnene-1 bis-semicarbazone? d, 21-diol-3,11,20-trione, 17 mg of sodium borohydride, 1 ml of tetrahydrofuran and 0.3 ml of water is maintained at reflux temperature for about 1 hour. The reaction solution is cooled to about 15 ° C. and the excess sodium borohydride is decomposed by adding a solution of 27 mg of glacial acetic acid in 0.2 ml of water.
The tetrahydrofuran is evaporated in vacuo and the residual material is extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extracts are washed with a saturated salt solution, with water and with a 5% aqueous solution of sodium bicarbonate, then again with water. The extracts are dried and the ethyl acetate is evaporated in vacuo, so that 3,20-bis- is obtained.
EMI30.2
16 0 (-methyl-4-pregnene-11 j3,17 0 (, 21triol-3, 20-di..one .¯) semicarbazone
<Desc / Clms Page number 31>
EMI31.1
f ',,, A mixture of 60 fit; do 3,20-bisse: aicarbazonn of 16 o (-methyl --- prégnene-1 :., fj, e 17 0 (, 21-triol-3,20dione, of 0.2 ml of dimethylformamide, of 0.6 ml of chloroform and 1.5 ml of 1N aqueous HCl is heated under reflux for about 3 hours.
The resulting two-phase system is cooled to a temperature of about 15 ° C and the layers are separated. The aqueous layer is extracted with chloroform and the chloroform extracts are combined with the original chloroform-dimethylformamide solution. The overall organic layer is washed with an aqueous solution of sodium bicarbonate and the chloroform as well as the dimethylformamide contained in the organic layer are replaced by ethyl acetate by evaporation in vacuo. Petroleum ether is added and the resulting solution is subjected to chromatography, using aqueous methanol as the stationary phase and a benzene-chloroform mixture as the mobile phase, in
EMI31.2
so that 16 0 (-methyl-4-pregnene-11 d, 17 c (, 21-diol-3,20-dione) is obtained.
The latter material is reacted with an excess of acetic anhydride in pyridine at room temperature for about 15 hours and the crude acetylated product is recrystallized from ethyl acetate, whereby 21- is obtained. acetate
EMI31.3
16 c (-methyl-1-pregnene-11, 17 d, 21-triol-J, 20-dione.
To a cooled solution of 600 mg of 16-ol-methyl - @ - pregnene-11 f 21-acetate, 70 (, 21-triol-3,20-dione in 5.0 ml of anhydrous pyridine, is obtained. add 0.15 ml of phosphorus oxychloride and the mixture is left to stand at room temperature for about 15 hours The reaction solution is evaporated in vacuo at a temperature of about 20 C to a volume of 2-3 ml .
17 ml of water are slowly added to the concentrated solution, with stirring, and the aqueous mixture is extracted with acetate
<Desc / Clms Page number 32>
spread out. The combined ethyl acetate extracts are washed successively with water, with dilute aqueous hydrochloric acid solution, with water and with dilute aqueous sodium bicarbonate solution.
The washed ethyl acetate solution is dried and the solvent is evaporated in vacuo; the residual material is triturated with ether and the crystalline material is recrystallized from an ethyl acetate-ether mixture, so that 16-d-methyl-4.9 (11) pregnadiene-21-acetate is obtained. 17 o (, 21-diol-3,20-dione. A suspension of
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330 mg of 16-methyl-1,9i11-pregnadiene-17 [alpha], 21-diol-3,20-dione 21-acetate and 1.8 g of N-bromo-succinimide in a mixture of 50 ml of dioxane and 10 ml of water is cooled to 10 ° C. Then, with stirring, 10 ml of cold 1.0 N aqueous perchloric acid is added.
The temperature of the reaction mixture is allowed to rise to 15 and is maintained at this value for about 2 1/2 hours, during which the solid material slowly dissolves.
The resulting yellow solution is treated with 1.0 ml of allyl alcohol to discharge the color and remaining N-bromo-succ-cinimide, and the resulting solution is evaporated to low volume in vacuo. The concentrated solution is diluted with water and the aqueous mixture is extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate extracts are washed, dried and evaporated to dryness, and the residual material is crystallized from a mixture of ethyl acetate and ether, whereby one obtains from 21-ac-
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9 tate (-bromo-16 0 (-methyl-1-pregnene-11 3, 17 0 (21-triol-3,20-dione.
A solution of 210 mg of 21-acetate 9 o (bromo-16 o (-methyl-4-pregnene 11 ss, 17 o (, 21-triol-3,20dione and 240 mg of potassium acetate in 10 ml of etha-
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nol absolute is heated under reflux for 2 hours. The reaction mixture is cooled to room temperature and evaporated in vacuo to a small volume. The concentrated aqueous mixture is extracted with 3 fractions of ethyl acetate and the combined extracts with ethyl acetate are washed with water, dried and evaporated to dryness in vacuo.
The residual material is crystallized from a mixture of ethyl acetate and ether, so that 16 [alpha] -methyl-9,11-epoxy-4-pregnene-17 o 21-acetate is obtained ( , 21-diol-3,20-dione. A solution of 83 mg of anhydrous hydrogen fluoride in 4.7 ml of ice-cold alcohol-free chlororm, an ice-cold solution of 416 mg of 21-acetate is added. 16 c (-methyl-9,11-epoxy-4-pregnene-17 [alpha], 21-diol-3,20dione. The solution is kneaded well and maintained at 0 C for 2 hours, after which 13.0 ml Ice cold 20% aqueous sodium acetate is added, and the resulting mixture is stirred vigorously.
The layers are separated and the chloroform layer is washed with water until it is free from acid, dried and freed of chloroform by evaporation in vacuo. The residual material is crystallized from a mixture of acetone and petroleum ether, so that 16 c (- methyl-9 [alpha] -fluoro-4-pregnan-11 ss, 21-acetate is obtained. [alpha], 21-triol-3,20dione. 50 mg of 16 [alpha] -methyl-9 [alpha] -fluoro-4pregnane-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3.20 21-acetate -dione are dissolved in a mixture of 1.0 cc of benzene and 1.0 cc of 1N methanolic KOH, and the solution is left to stand at room temperature for about 10 minutes.
The solution is evaporated in vacuo and the residual material is crystallized from a mixture of ethyl acetate and ether, so that 16 [alpha] -methyl-9 [alpha] -fluoro-4- is obtained.
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pre ,, nëne-11, 17 o (, 21-trxol-,, 20-dione ...
A solution of 46E zi of 16 d ü methyl-9 0 (-fluoro-1-pregener-11 t7 c (21-tr.o1-3, J- dione in 4 ml of pyridine) is added to the complex. formed by the addition of 400 mg of chromium trioxide to 4 ml of pyridine. The mixture is stirred until it is well kneaded, then left to stand at room temperature overnight. The reaction mixture is poured into water. water and the aqueous mixture is extracted with ether, then twice with ethyl acetate.
The combined extracts are washed with aqueous H2SO4 diluted to about 0 C, then with water until soft. The organic solvent layer is then dried, the solvents are evaporated in vacuo and the residual crystalline material is purified by crystallization from a mixture of ethyl acetate and ether, so that 21-acetate is obtained.
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16 0 (-methyl-9 c-fluoro-4-pregnne-1? 0 (21-diol-3,11,20. Trione. 5 mg 16 [alpha] -methyl-9 d -fluoro- 21-acetate 4pregnene-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione are dissolved in a mixture of 1.0 cc of benzene and 1.0 cc of 1N methanolic KOH, and the solution is left to stand. at room temperature for about 10 minutes.
The solution is then acidified with acetic acid, the benzene is evaporated off in vacuo and the residual material is crystallized from a mixture of ethyl acetate and ether, so that we obtain 16 o (-methyl-9 o (-fluoro-4-pregnene-17 0 (, 21-diol-3,11,20-trione.
CLAIMS 1. 16-Methyl-1,4-pregnadiene-17 [alpha] -ol-3,20-dione compounds.
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2. 16o (-methyl-1.4-pregnadiene-17 o (e2l-diol-3ellp 20-trione.
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3,16 O (-6 yl-1, .- pa egxaad.iene-17 0 (, 21-diol-3,1E, 2itr.ne.
4.21-16-methyl-1,4-prepregnadiene-17 O (, 21-diol-3,11,20-trione.
5. 16d methβ1-1, t-pregnadiene-17t 21-acetate (21-diol-3,11, Otrione.
6.21 - itert.-butyl acetate) 16 O (-methyl-1,4. Prregnadiene-17 (21-diol-3, 11, 20-trione.
7.16 c {-methyl-1,1-l-pregnadien-11 j3,17 d, 21-triol-3,20-diüe. 8. 16 [alpha] -methyl-1,4-pregnadiene- 21-acylates
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11j3,170 (, 21-triol-3,20-dione.
9. 16-methyl-1,4-pregnadiene-21-propionate, 11,017 (, 21-triol-3,20-dione.
10. 16-methyl-1,4-pregnadiene-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione 21-acetate.
He. 16 [alpha] -methyl-1,4- 21- (tert.-butyl acetate)
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prêgnadiene-11.9,170 (, 21-triol-3,20-dione.
12.21-, -dimethyl hemi-glutarate) 16 c (-methyl-1,1-pregnadiene-113, 17 c (, 21-triol-3,20-dione. 13. 21-phosphate 16 [alpha] -methyl-1,4-pregnadiene-
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11 3, 17 0 (, 21-triol-3,20-dione.
14. 16 0 (-methyl-9 0 (-fluoro-1,4-pregnadiene-11,17 [alpha], 21-triol-3,20-dione.
15. 16 0 (-methyl-9 o (-fluoro-1,4-pregnadiene-11 ss, 17 o (, 21-triol-3,20-dione) 21-acylates.
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16. 16 O (-methyl-9 c (... flUo: ë ": 'r, 4; .. Pregnadiene-11 / J, 17 0 (, 21-triol-3,20-dione.
17. 16 o (-methyl-9 o (-fluoro-1,4-pregnadiene-11,17 c (, 21-triol-3,20-dione) 21- (tert.-butyl acetate).
18. 21-.16 [alpha] -methyl-9 c (-fluoro-1,4-pre- acetate
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gnadiene-11-3,170 (, 21-triol-3,20-dione.
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19. 16c (-methyl-90 (-fluaxf-1.11-pregnGd :. r.L-17.0 (21-diol-3,11,20 = trione.
20. 16 O (-raethyl-9 o (-: "¯soru-1,. Pregnadiene-17 0 (i,? Ldiol-3,11, 20-tr .orsa) 21-acylates.
21. 16 c {-methyl-9 O (-fluoro-1,4-prregnadiene-17 0 (, 21-diol-3,11,20-trione) 21-phosphate.
22. 16 0 (-methyl-9 Ci -fluoro-1,% - pregnadiene-17 o (, 2l-diul-3, 11, 20-trione) 21-acetate.
23. A process in which a compound 16-methyl-% -pregnene-17 0 (-01-3,20-dione is brought into contact with the dehydrogenating activity of microorganisms of Schizomycetes, so as to form the compound 16-methyl-. Corresponding 1,4-pregnadiene-17z-ol-3,20-dione.
24. Process in which 16 c (-methyl-
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4-pregnene-17 ol, 21-diol-3,11,20-trione in contact with the dehydrogenating activity of Schizomycule microorganisms, so as to form 16 o (-methyl-1,1-pregn2diene-17 ol, 21-Diol-3, 11,20-trione 25. Method in which 16 [alpha] -methyl-4- is used
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Pregnene-11 17 ol, 21-triol-3,20-dione in contact with. the dehydrogenating activity of Schizomycè- microorganisms
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tes, so as to form 16 o (-methyl-1,4-pregnadien-11/3, 17 c (, 21-triol-3,20-dione.
26. A process in which 16 [alpha] -methyl-9 o (-fluoro-4-pregnene-17 [alpha], 21-diol-3, 11, 20-trione is contacted with the dehydrogenating activity of microorganisms Schizomycetes, so as to form 16 [alpha] -methyl-9 [alpha] -
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fluoro-1,4-pregnadiene-17 o (, 21-diol-3,11,20-trione.
27. A process in which 16 d -methyl- 9 0 (-fluoro-1-pregnene-11, 17 o (, 21-triol-3,20-dione) is contacted with the dehydrogenating activity of Schizomycetes microorganisms, so as to form lô o (-methyl-
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9 c (-flu.cro-1, .. pregnadiene -, 'i, 17 o (, 2.-t: 0.1 - 3.20-dione.
28. Process in which a 21-acylate of
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16 0 (-methyl -.- Pregnenp-11 9 Il 0 (, 21-'riol-, 3,20-dione in contact with the dehydrogenating activity of microorganisms Schizomycetes, so as to form 16 [alpha] -methyl -
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1,4-Pregnadiene-11, 17 c (, 21-triol-3,20-dicne. 29. A process in which a compound 16-raethyl-4-pregnene-17 [alpha] -ol-3,20- is used. dione in contact with the dehydrogenating activity of organisms of the genus Bacillus sphaericus,
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so as to form the corresponding 16-methyl.-l,!.-pregnadien-17 [alpha] -ol-3,20-dione compound.
30. A process in which 16 [alpha] -methyl-4-pregnene-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione is contacted with the dehydrogenating activity of organisms of the genus Bacillus sphaericus , so as to form 16 [alpha] -methyl-1,4-pregnadiene-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione.
31. Process in which 16 o (-methyl'-
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l-Pregnene-11 j3,17 ol, 21-triol-3,20-dione in contact with the dehydrogenating activity of organisms of the genus Bacillus sphaericus, so as to form 16 [alpha] -me-
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thyl-1,4.-Pregnadiene-11 3,17 0 (, 21-triol-3,20-dione.
32. A process in which 16 [alpha] -methyl-9 o (-fluoro-4-pregnene-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione is contacted with the dehydrogenating activity of d. organisms of the genus Bacillus sphaericus, so as to form 16 [alpha] -
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methyl-9 0 (-fluoro-1,4-pregnadiene-17 o (, 21-dioi = 3,11,20-trione.
33. Process in which a 21-acylate of 16
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o (-methyl-9 0 (-fluoro -.- pregnene-11 / d, 17 0 (, 21-triol-3,20-dione in contact with the dehydrogenating activity of microorganisms of the genus Bacillus sphaericus, so
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to form il-methyl-. '' .uoro-1. '. ': nsdienell, 17o (, 21-triol-3t20-d'.
34 .. Process in which one. f? 'it r;,: ... composed 16-mthyl --.- pregnene? c (-ol-3C'dione avp- '. <' :, 1) selenium dioxide, so as to produce -î-tl-lu4thyl-
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1,4-Pregnadiene-17 o (-.l-3 fi2: -; ïonW corresponding.
35. A process wherein) 1- reacts 16 d-meth 21-acetate; 1-O-pregnne-16'î o ', p21-do - ,: 1., 20.-triox with selenium dioxide , so as to produce 16 O 21-acetate (, -methyl-.l, 1-pregnadzene-l '21-diol-3,11,20-trione.
36. A process in which 21-aceta-
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te of 16 c (-methyl -.-- pregnene-11, 17 d, 21-triol-3,20-. dione with selenium dioxide, so as to produce 16 0-acetate (-methyl-1 , 1-crégn, dié: ne -? .. 17 0 (21-triol-3,20-dione.
37. A process in which 16 0 (-methyl-9 c (-fluoro-4-pregnene-17 c (, 21-diol-3,11, 20-trione) acetate is reacted with selenium dioxide, so as to pro-
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Reduce 16 0 (-methyl-9 0 (-fluoro-1,1-pregnadiene-17 o (, 21-diol-3,11,20-trione) 21-acetate.
38. Process in which 21-acetate is reacted
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of 16-methyl-9 ol-fiupro-4-pregnne-il, 17 o (, 21trioi-3,20-dione with selebium dioxide, so as to produce 16 0 (-methyl o ( -fluoro-1,4-prepregnadiene-11 17 0 (, 21-triol-3,20-dione.