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PROCEDE P:OUR:LA PREPARATION DE SELS D'ESTERS POLYSULFURIQUES DE COMPOSES
POLYMERES.
On sait que la sulfuration de l'alcool polyvinylique et des po- lysaccharides fournit des esters polysulfuriques de l'alcool polyvinylique ou, respectivement,des polysaccharides possédant des propriétés anti-coagulan- tes du sang (compo E.Chargaff et coll., Journal of B iological Chemistry, vo- lume 115 [1936] page 155 ; P. Karrer et coll., Helvetica Chimica Acta, 'volume 27 [1944], page 1422; volume 26 [1943], page 1296; S. Bergstrôm, Hoppe Seyler's Zeitschrift für physiologische Chemie, volume 238 [1936], pa- ge 163). Les produits que l'on a préparés par le passé ne peuvent être uti- lisés à des fins cliniques, du fait de leur trop grande toxicité.
Or, il a été établi de manière surprenante, que le poids molé- culaire et la distribution des poids moléculaires, ainsi que la teneur en soufre, jouent un rôle décisif pour les propriétés pharmacologiques des esters polysulfuriques de l'alcool polyvinylique, ou respectivement, des po- lysaccharides.
Suivant l'invention présente, an prépare des sels nouveaux d'es- ters polysulfuriques de composés polymères, en soumettant, le cas échéant après dégradation préalable, des hauts polymères filiformes exempts de soufre mais contenant des groupes hydroxy, par ex. de l'alcool polyvinylique ou des polysaccharides filiformes, à un.fractionnement, en convertissant les fractions d'un poids moléculaire situé entre 1000 et'12.000 en les esters sulfuriques acides au moyen d'agents de sulfuration, en neutralisant ces es- ters acides au moyen d'une solution d'hydroxyde d'alcali et, le cas échéant, en purifiant par dialyse ou en passant par les sels. d'alcaloïdes.
On utilise de préférence comme substances de départ des hauts polymères filiformes et contenant des groupes hydroxy, dont le poids molécu- laire est en général supérieur à 15.000. Comme telles.entrent en ligne de compte l'alcool polyvinylique, la cellulose découlant de processus bactériens, l'éther cellulosique de l'acide glycolique, la.carboxyméthyl-cellulose, la
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pectine, les pentosanes telles que l'arabane, la gala?tare, la xylane, les lévanes (polyfructusanes), les dextranes, la chitine, l'acide alginique, etc...
Pour la préparation des nouveaux sels des esters polysulfuriques des composés polymères susmentionnés, les substances de départ qui viennent d'être énumérées sont dégradées, afin d'augmenter la teneur en éléments de poids moléculaire bas. On peut effectuer une telle dégradation par ex. en chauffant en vase clos une solution aqueuse d'alcool polyvinylique technique, tel qu'on le trouve sur le marché, ayant un poids moléculaire haut ou moyen, à une température située entre 170 et 250 C; selon la durée du chauffage, le poids moléculaire est plus ou moins réduit. Quand aux polysaccharides, leur dégradation s'effectue de préférence par hydrolyse, suivant des.méthodes con- nues en soi.
Cette dégradation-est effectuée par ex. par traitement des polysaccharides, en les agitant, le cas échéant à une température légèrement surélevée, avec des acides ou des alcalis de concentrations variées et en contrôlant la marche de la dégradation selon la durée de réaction en mesu- rant la viscosité. Quand un degré de dégradation satisfaisant est atteint, on neutralise et on précipite au moyen d'un liquide orgànique, par ex. l'é- thanol, le méthanol, l'acétone, etc..,. Le produit précipité contient enco- re des sels inorganiques, que l'on peut éliminer en cas de nécessité par pré- cipitation répétée ou, mieux, par dialyse.
Les produits de dégradation ainsi obtenus possèdent une courbe de distribution des poids moléculaires large, dépendant en partie de la na- ture des produits de départ, en partie du procédé de dégradation. Quand un haut polymère, soumis à une dégradation de la manière décrite, contient une proportion importante'd'éléments d'un degré de polymérisation élevé, un tel polymère, introduit dans l'organisme après avoir été transformé en un ester polysulfurique, ne serait excrété de l'organisme qu'imparfaitement ou pas du tout, ce qui conduirait à la longue à des lésions. C'est la raison pour laquelle ces produits sont soumis à un fractionnement méticuleux.
Pour cette opération, on se sert de la solubilité différente des fractions polymères homologues, par ex. en précipitant ces dernières de manière frac- tionnée,
Un tel fractionnement est effectué de manière connue en soi, par ex. en ajoutant de l'acétone, ou le cas échéant de l'éthanol, du métha- nol, etc...,à une température constante, en agitant, à une solution aqueuse concentrée d'alcool polyvinylique ou de polysaccharides. Les éléments de poids moléculaire élevé se séparent d'abord. Quand on ajoute d'autres quan- tités d'acétone,.ce sont de nouveau les éléments de poids moléculaire élevés qui se séparent les premiers, et ainsi de suite. Chacune des fractions est isolée par décantation ou par centrifugation.
Afin d'obtenir une séparation satisfaisante, il.est bon d'opérer selon-un schéma, par ex. en divisant le produit de départ en trois fractions, en séparant chacune de ces trois frac- tions en trois nouvelles sous-fractions et en répétant cette opération une fois encore. Ou bien on peut tout d'abord séparer en trois fractions et di- viser chacune de ces trois fractions par ex. en six ou dix ou même plus au- tres fractions. Le fractionnement peut aussi être effectué par refroidis- sement graduel des solutions, après que ces dernières ont été additionnées d'une certaine quantité d'acétone ou, en partant du produit déjà sulfuré, par précipitation fractionnée de solutions aqueuses de ce dernier au moyen de li- quides organiques solubles dans l'eau.
La sulfuration de l'alcool polyvinylique et des polysaccharides se fait de préférence au moyen de l'acide chlorosulfonique, en présence de pyridine, selon la méthode de E.Gebauer-Fürlnegg (Berichte der Deutschen Che- mischen Gesellschaft, volume 61 (1928), page 2000). D'autres agents de sul- furation peuvent également être employés, comme par ex. l'oleum, l'acide sul- furique concentré, etc..., et'la pyridine peut par ex. être remplacée par d'au- tres bases tertiaires organiques, comme la quinoléine, l'[alpha] -picoline, etc...
On effectue la sulfuration des produits en les mélangeant bien, en chauffant, avec le sel pyridinique de l'acide chlorosulfonique, opération pendant laquel- le on doit secouer ou remuer souvent. Ensuite, le mélange réactionnel est additionné d'un peu d'eau, alcalinisé légèrement au moyen d'alcali concentré,
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précipité au moyen de méthanol ou d'éthanol,,dissous dans 1 ',eau, et, si né- cessaire, dialysé en vue d'éloigner les ions de sulfate. ..Par concentration et précipitation avec'du'méthanol, on obtient des produits presque incolo- res, dont la solution aqueuse est neutre.
En observant'ces conditions de sul- furation, le degré de-polymérisation est en général conservé; le poids molé- culaire croit, selon le degré de sulfuration, jusqu'au double. Comme l'ac- tion coagulatrice du sang des esters polysulfuriques de l'alcool polyvinyli- que ou, respectivement, des polysaccharides diminue quand le degré de polymé- risation s'abaisse, et augmente quand la teneur en soufre s'élève, il est re- commandable de sulfurer f ortement les produits à faible degré de polymérisa- tion et, de sulfurer plus faiblement les produits à haut degré de polymérisa- tion. Ainsi, des produits avec la même action anti-coagulatrice du sang peu- vent être obtenus en principe par deux méthodes.
Par exemple, un ester po- lysulfurique de l'alcool polyvinylique avec un degré de polymérisation de 250 (poids moléculaire 24.500) et une teneur en soufre de 12% est in vivo à peu près aussi actif qu'un ester polysulfurique de l'alcool polyvinylique avec un degré de polymérisation de 100 (poids moléculaire 13'000) et contenant 17% de soufre.
On peut aussi effectuer une purification appropriée de ces esters polysulfuriques hautement polymérisés en précipitant l'ester polysulfurique en milieu aqueux,-après neutralisation, avec le sel d'un acide minéral et d'un alcaloïde, par ex. la narcotine, la brucine, etc..., en filtrant le pré- cipité, en le lavant et en le transformant de nouveau en son sel alcalin, au moyen de carbonate d'alcali. Là-dessus, si nécessaire, on peut fixer le pH à 6-7 au moyen d'acide acétique et précipiter facilement le sel alcalin sous forme pure au moyen d'alcool.
Les sels alcalins de ces esters polysulfuriques sont des poudres incolores, inodores et insipides, facilement solubles dans l'eau, mais diffi- cilement soluble dans l'éther, le méthanol, l'éthanol, l'acétone, etc... Les solutions aqueuses sont visqueuses et en tant que'polyélectrolytes elles ac- cusent une augmentation des valeurs m spec/c quand les valeurs de c dans ce solvant diminuent (c = concentration en G/100 cc). Ces esters polysulfuriques sont capables-de-retarder la coagulation du sang in vitro et in vivo; il est intéressant de constater que cette action est en général plus forte in vivo, Ils sont injectés par voie intraveineuse ou intramusculaire; par os, ils n'ont aucune action.
Exemple 1.
Comme substance de départ, on utilise un alcool polyvinilyque obtenu de la manière suivante, par dégradation, d'un alcool polyvinylique que l'on trouve sur le marché.
Une solution.aqueuse d'alcool polyvinylique à 5% (zm= 0,483 dans l'eau à 20 C) est dégradée dans l'autoclave, à une température de 230 C, pendant environ 3 heures jusqu'au viscosimétrique Zm= 0,270. Le poids mo- léculaire est alors de 13'200. (La détermination viscosimétrique du poids moléculaire des alcools polyvinyliques a été effectué selon les indications de P.J. Flory et F.S. Leutner, Journal of Polymer Science, volume 3 (1948), page 880). La solution est ensuite concentrée sous pression réduite jusqu'à une concentration de 12%
On ajoute goutte à goutte, dans l'espace de 3 heures, à 5 litres de cette solution aqueuse de 12%, 4,85 litres d'acétone. On doit travailler dans le thermostat à une température de 24,5 - 25,5 C et remuer continuelle- ment durant toute l'opération d'addition.
Après un repos d'environ 1/2 heure à une température de 25 C, on décante l'eau-mère du précipité et on centrifu- ge la matière mi-solide. Fraction A, poids moléculaire moyen 18'350..
L'eau-mère de A est additionnée de 900 co d'acétone dans l'es- pace d'une heure à 25 C. Après un repos de 2 heures, on décante du précipi- té. Il ne peut plus être séparé d'eau-mère par centrifugation. Fraction B, poids moléculaire moyen 12'700. On distille de l'eau-mère restante 4,2 li- tres d'acétone. Le résidu contient la fraction C, poids moléculaire moyen 6'200.
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La fraction A est dissoute dans de l'eau et le volume de la solution est f ixé à environ 3 litres. On y ajoute, goutte à goutte, dans . l'espace de 2 heures, 2,55 litres d'acétone. Après 15 minutes, on décante l'eau-mère. Par centrifugation, 500 autres ce d'eau-mère peuvent encore être séparés du précipité gonflé, mi-solide. Fraction A 1, poids moléculai- re moyen 22'300.
700 cc d'acétone sont ajoutés à l'eau-mère de la fraction A 1, dans l'espace de 45 minutes, ce qui provoque une nouvelle' précipitation.
Après 15 minutes, .on décante l'eau-mère et on centrifuge le précipité. De cette façon on en extrait encore 100 cc d'eau-mère. Fraction A 2, poids moléculaire moyen 18'350.'
L'eau-mère de A 2 est évaporée dans le vide à un volume ré- duit, ce qui permet de régénérer 2,2 litres d'acétone. Fraction A 3, poids moléculaire moyen 8'600.
La fraction A 1 est dissoute dans de l'eau et le volume de la solution fixé à 1 litre. On ajoute, goutte à goutte, 1 litre d'acétone, Après 15 minutes, on décante l'eau-mère et on centrifuge le précipité formé.
300 ce d'eau-mère peuvent encore en être séparés. On dissout cette fraction dans un peu d'eau sur le bain-marie et'on l'ajoute, goutte à goutte, à de l'acétone sec remué. De cette manière, on obtient une matière légère et fi- breuse, qui est séchée sous pression réduite, à une température de 70 C. Frac- tion A 1/A, rendement 28 g, poids moléculaire moyen 25'000.
En ajoutant 300 cc d'acétone à l'eau-mère de A 1/A, on obtient d'une manière analogue la fraction A 1/B, rendement 22 g, poids moléculaire moyen 23'900.
De l'eau-mère restante, on isole d'une manière analogue la fraction A 1/C d'un poids moléculaire de 13'500 et d'un rendement de 15 g.
Selon le même procédé, on divise les fractions A 2 et A 3, ainsi que B 1, B 2, B 3 et C 1 et C 2 . La tabelle ci-après donne un aperçu des fractions obtenues.
EMI4.1
<tb>
Fraction <SEP> PMMx) <SEP> DPM) <SEP> rendement <SEP> en <SEP> g
<tb>
<tb> A <SEP> 1/A <SEP> 25'000 <SEP> 568 <SEP> 28
<tb> A <SEP> 1/B <SEP> 23'900 <SEP> 555 <SEP> 22
<tb> A <SEP> 1/C <SEP> 13'600 <SEP> 310 <SEP> 15
<tb>
EMI4.2
.A 2/A 19' 900 452 17
EMI4.3
<tb> A <SEP> 2/B <SEP> 18'800 <SEP> 427 <SEP> 38
<tb> A <SEP> 2/C <SEP> 15'400 <SEP> 350 <SEP> 31
<tb>
<tb> A <SEP> 3/A <SEP> 15'400 <SEP> 350 <SEP> 20
<tb> A <SEP> 3/B <SEP> 12'000 <SEP> 273 <SEP> 27
<tb> A <SEP> 3/C <SEP> 5'800 <SEP> 132 <SEP> 14
<tb>
<tb> B <SEP> 1/A <SEP> 16'500 <SEP> 375 <SEP> 54
<tb> B <SEP> 1/B <SEP> 14'600 <SEP> 355 <SEP> 17
<tb> B <SEP> 1/C <SEP> 6'900 <SEP> 157 <SEP> 6
<tb>
<tb> B <SEP> 2/A <SEP> 16'500 <SEP> 375 <SEP> 62
<tb> B <SEP> 2/B <SEP> 6'600 <SEP> 150 <SEP> 15
<tb> B <SEP> 2/C <SEP> 5'600 <SEP> 127 <SEP> 7
<tb>
<tb> B <SEP> 3/A <SEP> 8'700 <SEP> 198 <SEP> 1
<tb> B <SEP> 3/B
<SEP> 6'700 <SEP> 152 <SEP> 11
<tb> B <SEP> 3/C <SEP> 5'700 <SEP> 130. <SEP> 7
<tb>
<tb> C <SEP> 1/A <SEP> 9:700 <SEP> 210 <SEP> . <SEP> 38
<tb> C <SEP> 1/B <SEP> 8'000 <SEP> 182 <SEP> . <SEP> 32
<tb> C <SEP> : <SEP> 1/C <SEP> 5'300 <SEP> 120 <SEP> 10
<tb>
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EMI5.1
<tb> Fraction <SEP> PMM# <SEP> DPM# <SEP> rendement <SEP> en <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> C <SEP> 2/A <SEP> 10'300 <SEP> 234 <SEP> 16
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> C <SEP> 2/B <SEP> 7'300 <SEP> 166 <SEP> 14
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> C <SEP> 2/C <SEP> 5'500 <SEP> 125 <SEP> 11
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<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> C <SEP> 3 <SEP> 4'600 <SEP> 105 <SEP> 47
<tb>
#) PMM = Poids moléculaire moyen
DPM = Degré de polymérisation moyen La fraction. C 3 n'a pas été divisée en sous-fractions.
On ajoute lentement 3,8 ce d'acide chlorosulfonique à 20 cc de pyridine refroidie au moyen d'un mélange réfrigérant. Le produit ob- tenu est fondu sur le bain-marie, 'additionné de 5 g d'alcool polyvinylique pulvérisé et fractionné (selon fraction C'?/.R), ayant-un degré de polyméri- sation moyen de 166, secoué et chauffé pendant 1 heure sur le bain-marie avec reflux. Il en résulte une dissolution complète. La pyridine en excès se ras- semble sur la.solution visqueuse,et peut-être décantée. Le produit obtenu est dissous dans 100 ce'd'eau et neutralisé au moyen d'hydroxyde de sodium con- centré.
Cette.solution est tout de suite versée dans de l'acétone remué, ce qui provoque la précipitation du sel sodique de 1-'ester sulfurique de l'al- cool polyvinylique. L'acétone de précipitation peut être décanté. ,,Le pro- duit jaunâtre est lavé deux fois avec de l'acétone,-dissous dans env. 300 cc d'eau et dialysé pendant 20 heures contre de l'eau courante. Le produit est alors libre de ions de sulfate. La solution est concentrée sous pression ré- duite à un petit volume, passée à travers un filtre de cellulose et évaporée dans le vide à une température de 50 C. Rendement : 8,5 g, teneur en soufre = 12,6 %, Zm 0,135 dans une solution de N/2 de chlorure de sodium à 20 C.
Exemple 2.
500 g d'alcool polyvinylique (Zm= 0,483 dans l'eau à 20 C) sont dissous dans 3,5 litres'd'eau chaude en remuant, passés à'travers un filtre de cellulose et, après.refroidissement, fixés avec de I'eau à un vo- lume de 5 litres.
On ajoute ensuite, à une température de 22 C, 4,6 litres d'acé- tone, puis on laisse reposer le¯précipité pendant 15 minutes, de manière à pouvoir décanter, Le précipité est centrifugé pour le libérer du reste de l'eau-mère. Fraction A
L'eau-mère de la fraction A est additionnée lentementà la température de 22 C, de 1,2 litres d'acétone. Le précipité est centrifugé, Fraction B. '
L'eau-mère de la fraction B contient la fraction C. Celle-ci est isolée par évaporation, ce qui permet de régénérer 4,1 litres d'acétone.
D'une manière parfaitement analogue, on fractionne encore 3 au- tres charges de 500 g d'alcool polyvinylique (Zù = 0,483 dans l'eau à 20 C) en 3 fractions A, B, et C chacune.: Pour le traitement ultérieur, on n'emploie- ra cependant que les fractions B. A cet effet on réunit les fractions B de la première et de la seconde charge, on les dissout dans de l'eau chaude et, après refroidissement, on ajuste le volume à 5 litres. Par l'addition, goutte à goutte, de 5,3 litres d'acétone en remuant, la fraction aB 1 est précipitée. On laisse reposer pendant la nuit et'le lendemain on décante l'eau- mère.
Par l'adj onction ultérieure de 1.litre d'achétone à l'eau-mère de aB 1 et par centrifugation, on obtient la fraction aB 2.. L'eau-mère res- tante contient la fraction aB 3. On récupère de cette dernière 5,9 litres d'acétone.
On réunit ç présent les fractions B'des charges 3 et 4, on les dissout dans de l'eau'chaude et, âpre? refroidissement,on les ajuste à 4 li- très. On remue à une,température de 25 C et on ajoute, goutte à goutte, 3,3
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litres d'acétone. La fraction bB 1 est ainsi précipitée. on précipite la fraction b B 2 par l'adjonction, goutte à goutte, de 1,3 litres d'acétone, en remuant,à l'eau-mère décantée. Après décantation, il reste l'eau-mère contenant la fraction bB 3. De cette dernière, on récupère par distilla- tion 5,2 litres d'acétone.
On réunit alors les solutions des fractions aB 3 et bB 3 et on les concentre sous pression réduite à un volume de 750 cc. Ensuite, on ajoate@goutte à goutte, à la température de 20 C, tout en remuant, 1 litre d'acétone, provoquant la séparation de la fraction abB 3/1. L'eau-mère peut être distillée. Par adjonction, goutte à goutte, de 370 cc d'acétone, on obtient la fraction abB 3/II. On extrait la fraction abB 3/III de l'eau-mè- re de la façon suivante : Premièrement, on regagne 1,2 litres d'acétone. En- suite, on évapore la solution aqueuse de la fraction dans le vide pour ob- tenir une solution hautement visqueusé, qùe l'on ajoute goutte à goutte à de l'acétone remué; le produit se sépare sous forme d'une poudre légère. Après avoir éloigné l'acétone par succion et pressage, on sèche dans le vide à env.
70 C. Les fractions abB/I et abB/II sont produites d'une manière parfaitement analogue par dissolution dans un peu d'eau, précipitation et séchage. La tabelle ci-après montre la viscosité, le degré de polymérisation moyen.le poids moléculaire moyen et le rendement de ces 3 fractions.
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Fractions <SEP> Zm <SEP> DPM <SEP> PMM <SEP> - <SEP> - <SEP> rendement
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> abB <SEP> 3/I <SEP> 0,270 <SEP> 300 <SEP> ' <SEP> 13'200 <SEP> - <SEP> '23 <SEP> g
<tb>
<tb> abB <SEP> 3/II <SEP> 0,.220 <SEP> 226 <SEP> . <SEP> 10'OQO <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> abB <SEP> 3/111 <SEP> ,0,120 <SEP> , <SEP> 105 <SEP> - <SEP> 4'600 <SEP> - <SEP> -11 <SEP> g <SEP> . <SEP>
<tb>
On mélange 45 cc de pyridine et 9 cc d'acide chlorosulfonique en refroidissant dans de la glace, puis on triture cette préparation dans un mortier avec 10 g d'alcool polyvinylique d'un degré de polymérisation moyen de 226 (selon fraction abB 3/11). La bouillie réactionnelle est chauf- fée avec reflux pendant 2 heures sur le bain-marie ét'laissée une nuit durant à la température ambiante. On dissout ensuite la masse,visqueuse dans envi- ron 100 ce d'eau en chauffant très légèrement et on neutralise avec de l'hy- droxyde de sodium, On précipite ensuite,-comme il est décrit dans l'exemple 1, avec de l'acétone, on dissout dans un peu d'eau et on dialyse. On filtre la solution, fortement concentrée dans le vide, à travers un filtre de cel- lulose, on précipite avec de l'éthanol et on sèche sous pression réduite à la température de 50 C.
Rendement : 15 g, teneur en soufre = 13,4%, Zm= 0,180 dans une solution N/2 de chlorure de sodium à 20 C.
Exemple 3.
5 g d'alcool polyvinylique fractionné d'un degré de polymérisa- tion de 105 (selon exemple 2, fraction abB 3/111), ayant été soigneusement séchés dans le vide, sont ajoutés à un mélange de 4,5 cc d'acide chlorosulfo- nique et de 20 ce de pyridine et chauffés pendant 1 3/4 heures sur le bain- marie. 'Ensuite'on dissout le' produit réactionnel ,dans environ 100 cc d'eau et on neutralise 'au moyen'd'hydroxyde de sodium. Le volume est ajusté à environ 200 cc avec de l'eau et cette solution du sel sodique est précipitée en l'introduisant dans environ 400 cc de méthanol remué. Le précipité est décanté du méthanol, dissous dans 250 cc d'eau et dialysé pendant 24 heures contre de l'eau courante.
Par un procédé analogue à celui décrit dans les exemples 2 et 3, on en extrait 9 g du sel sodique d'un ester polysulfurique d'alcool polyvinylique, contenant 17,2 % de soufre, Zm = 0,085 dans une so- lution N/2 de chlorure de sodium à 20 C.
Exemple 4.
100 g d'alginate de sodium, tel qu'il se trouve sur le marché, sont humectés dans un'mortier avec'de'l'acétone,'puis mélangés en portions avec de l'hydroxyde dé sodium N pur. La gelée épaisse est ensuite ajoutée, en portions,à de l'hydroxyde de sodium'N chauffé préalablement. La solution
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se gonfle encore plus, mais après quelque temps on note un@recul de la visco- sité. La quantité d'hydroxyde de sodium additionné est d'environ 2,5 litres, la température de la dégradation s'élève à 65-67 C. La dégradation duré env. 2 1/2 heures ; pendant ce temps, on remplace.successivement l'eau évapo- rée. La solution alcaline chaude est acidifiée au moyen d'acide chlorhydri- que à un pH de 3.
Quand cette solution acide se refroidit, il s'en sépare un peu de matière difficilement soluble. Sans la filtrer préalablement, on précipite la solution avec de l'alcool, on filtre avec succion, on'lave avec de l'alcool et on sèche à une-température de 55 C sous pression réduite.
Rendement 60 g. La réaction aux ions de chlore-ainsi que la réaction à l'a- cide uronique avec la naphthoresorcine, sont positives.
57 g de cette substance dégradée, contenant encore un peu de chlorure de s'odium, sont suspendus dans'2 litres d'eau.et neutralisés soi- gneusement au moyen d'hydroxyde de sodium., En remuant et en'chauffant lé- gèrement, tout se dissout. Ensuite on procède à la séparation en les frac- tions suivantes, en ajoutant, goutte à goutte, de l'acétone au mélange re- mué à 25 C;
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<tb> Fraction <SEP> quantité <SEP> d' <SEP> durée <SEP> de <SEP> pré- <SEP> rendement <SEP> Zm
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<tb> acétone <SEP> cipitation <SEP> g
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<tb> 6 <SEP> eau-mère <SEP> 5,1 <SEP> 0,
12
<tb>
# cette première fraction ne se dissout que^partiellement dans l'eau. ' 4 g d'alginate de sodium (Zm= 0,12 dans l'eau), selon fraction 6, sont ajoutés à un mélange de 20 cc de pyridine'-et 4 ce d'acide chlo- rosulfonique, ce qui provoque un assez fort dégagement de 'chaleur. Une fois la réaction terminée, on fait chauffer pendant environ 30 minutes sur le bain-marie. On laisse reposer ensuite pèndant 2 heures à la température am- biante et on chauffe ensuite de nouveau pendant 1 heure- sur le bain-marie.
On ajoute 10 g de glace, on passe la solution obtenue à travers un filtre de cellulose et on précipite immédiatement avec de l'alcool., Après neutralisa- tion avec de l'hydroxyde de sodium concentré, on réprécipite encore 3 fois avec de l'alcool. Le produit contient du soufre; Zm= 0,060 dans une solu- tion N/2 de chlorure de sodium: ([alpha]) D = -65,6 + 2 (c = 1,05 dans une solution N/2 de chlorure de sodium).
Exemple 5.
178 g de lévane, préparée sur une solution nutritive selon W.Z.
Hassid et H.A. Barker (Journal of Biological Chemistry, volume 134 (1940), page 165) au moyen du bac. subtilis (S.C. Harrison, H.L.A. Tarr et H. Hibbert.
CanadianJournal of Research, volume 3 (1930), page 449).-et possédant un chiffre viscosimétrique de Zm= 0,26, sont dissous dans de l'eau et ajustés à un volume de-2,1 litres. On ajoute de l'éthanol à cette solution, dans le thermostat à une -température de 25 C, tout en remuant, suivant la tabelle suivante :
<Desc/Clms Page number 8>
EMI8.1
<tb> Fraction <SEP> quantité <SEP> d'é- <SEP> durée <SEP> de <SEP> pré- <SEP> rendement <SEP> Zm
<tb>
<tb> thanol <SEP> cipitation <SEP> g
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb> @
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<tb> 1 <SEP> 1800 <SEP> cc <SEP> 45 <SEP> mino <SEP> 25 <SEP> 0,43
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<tb>
<tb>
<tb> . <SEP> 2 <SEP> 800 <SEP> cc <SEP> 25 <SEP> min. <SEP> 45 <SEP> 0,18
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<tb> 3 <SEP> eau-mère <SEP> 50 <SEP> env.0,1
<tb>
EMI8.2
<tb> La <SEP> seconde <SEP> fraction <SEP> est <SEP> dissoute <SEP> dans <SEP> de <SEP> l'eau, <SEP> ajustée <SEP> à <SEP> un
<tb>
<tb>
<tb> ,volume <SEP> de <SEP> 470 <SEP> cc <SEP> et <SEP> divisée <SEP> comme <SEP> suit <SEP> en <SEP> 3 <SEP> sous-fractions <SEP> :
¯ <SEP>
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<tb> Fraction <SEP> quantité <SEP> d'é- <SEP> durée <SEP> de <SEP> pré- <SEP> rendement <SEP> Zm
<tb>
<tb> thanol <SEP> cipitation
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<tb>
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<tb>
<tb> 2 <SEP> a <SEP> 480 <SEP> cc <SEP> 30 <SEP> min. <SEP> 12 <SEP> 0,37
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 2 <SEP> b <SEP> 120 <SEP> cc <SEP> 15 <SEP> min. <SEP> 12 <SEP> 0,17
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 2 <SEP> c <SEP> eau-mère <SEP> 7,7 <SEP> 0,08
<tb>
12 g de lévane fractionnée ayant un chiffre viscosimétrique de 0,17, selon fraction 2 b, et un poids moléculaire d'environ 10'000 (déterminé .par ultra-centrifugation), sont chauffés avec un mélange de 50 cc de pyridine et 10,5 cc d'acide chlorosulfonique pendant un quart d'heure au bain-marie, puis maintenus 2 heures à la température ambiante.
On reprend dans 20 cc d'eau, on neutralise avec de l'hydroxyde de sodium concentré, on dilue avec un peu d'eau et on précipite le sel sodique ainsi obtenu avec de l'alcool.
Ensuite, on dissout le sel sodique dans 200 cc d'eau et on précipite avec environ 350 cc d'une solution à 10% d'hydrochlorure de narcotine. Après séparation par succion, on lave avec de l'eau jusqu'à ce qu'aucun sulfate ne soit plus trouvé dans le filtrat. Le sel de narcotine est ensuite suspendu dans 200 cc d'eau, ajusté à un pH de 9-10 au moyen d'une solution de carbona- te de sodium à 10% et remué pendant 1/2 heure à une température de 60 C. Le pH ne doit jamais diminuer pendant cette opération, sinon il faut ajouter d'au- tres quantités de solution de carbonate de sodium.
On sépare ensuite la nar- cotine f ormée par succion, on lave avec de l'eau et on ajuste le filtrat, contenant le sel sodique de l'ester polysulfurique de lévane, avec de l'acide acétique à un pH de 5, on concentre sous pression réduite et on précipite avec du méthanol. En répétant la précipitation avec le méthanol, on obtient 11 g de l'ester polysulfurique de lévane. Le'produit contient 16% de soufre.
([gamma]) 18/D = -15,9 (c = 1 dans une solution N/2 de chlorure de sodium) Zm = 0,065 (dans une solut. N/2 de chlorure de sodium). Poids moléculaire environ 12'000, déterminé par ultra-centrifugation.
REVENDICATIONS.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.