BE1024387B1 - Verfahren zum herstellen von arbutus-anthocyanin-nanoliposomen - Google Patents

Verfahren zum herstellen von arbutus-anthocyanin-nanoliposomen Download PDF

Info

Publication number
BE1024387B1
BE1024387B1 BE2016/5880A BE201605880A BE1024387B1 BE 1024387 B1 BE1024387 B1 BE 1024387B1 BE 2016/5880 A BE2016/5880 A BE 2016/5880A BE 201605880 A BE201605880 A BE 201605880A BE 1024387 B1 BE1024387 B1 BE 1024387B1
Authority
BE
Belgium
Prior art keywords
arbutus
anthocyanin
solution
liposomes
nanoliposomes
Prior art date
Application number
BE2016/5880A
Other languages
English (en)
Inventor
Rongfa Guan
Haitao Shen
Zihong Ye
Qiaojun Jia
Fei Lv
Yan Wang
Yanbo Wang
Kai Yang
Wei Wang
Mingqi Liu
Tisong Liang
Original Assignee
China Jiliang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Jiliang University filed Critical China Jiliang University
Priority to BE2016/5880A priority Critical patent/BE1024387B1/de
Application granted granted Critical
Publication of BE1024387B1 publication Critical patent/BE1024387B1/de

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/45—Ericaceae or Vacciniaceae (Heath or Blueberry family), e.g. blueberry, cranberry or bilberry
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Biotechnik, insbesondere ein Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen. Das Verfahren umfasst folgende Schritte: Lösen von Soja-Lecithin und Cholesterin in einem organischen Lösungsmittel, um eine Lösung A zu erhalten; Lösen von Arbutus-Anthocyanin in einem Lösungsmittel, um eine Stammlösung vom Arbutus-Anthocyanin herzustellen; Lösen und Verdünnen der Stammlösung von Arbutus-Anthocyanin mit einer Phosphat-Pufferlösung, um eine Lösung B zu erhalten; Mischen der Lösung A und der Lösung B, wobei ein primäres magnetisches Rühren und eine Beschallverarbeitung mittels eines Wasserbadultraschallgeräts und dann eine sekundäre magnetische Rührverarbeitung durchgeführt werden, so dass die Mischungsflüssigkeit zu einer klaren einphasigen Flüssigkeit wird, und wobei die Mischungsflüssigkeit anschließend in einen Rotationsverdampfer gegeben wird, um eine Druckreduzierung und ein Verdampfen durchzuführen, bis eine Lipidfilmschicht ausgebildet wird; Zugeben einer Phosphat-Pufferlösung zu dem Lipidfilm, um den Lipidfilm zu lösen und eine Lösung C zu erhalten; Leiten der Lösung C durch eine Filtermembran, Beschallen und Aufbewahren in einem Kühlschrank bei 4 ℃. Die Arbutus-Anthocyanin-Liposomen der vorliegenden Erfindung erweitern den Einsatzbereich der Liposomen, und die Liposomen werden als Träger zum Einbetten des Arbutus-Anthocyanins verwendet, dabei ist das Herstellungsverfahren einfach und die Anforderung an die Ausrüstung niedrig, was förderlich für die Verbreitung ist, so dass eine industrielle Produktion realisiert werden kann.

Description

(30) Prioritätsangaben :
(73) Inhaber :
CHINA JILIANG UNIVERSITY 310018, HANGZHOU China (72) Erfinder :
GUAN Rongfa 310018 HANGZHOU China
SHEN Haitao 310018 HANGZHOU China
YE Zihong
310018 HANGZHOU
China
JIAQiaojun 310018 HANGZHOU China
LV Fei
310018 HANGZHOU China
WANG Yan 310018 HANGZHOU China
WANG Yanbo 310018 HANGZHOU China
YANG Kai
310018 HANGZHOU
China
WANG Wei 310018 HANGZHOU China
LIU Mingqi
310018 HANGZHOU
China
LIANG Tisong 310018 HANGZHOU China (54) VERFAHREN ZUM HERSTELLEN VON ARBUTUS-ANTHOCYANIN-NANOLIPOSOMEN (57) Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Biotechnik, insbesondere ein Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen. Das Verfahren umfasst folgende Schritte: Lösen von Soja-Lecithin und Cholesterin in einem organischen Lösungsmittel, um eine Lösung A zu erhalten; Lösen von Arbutus-Anthocyanin in einem Lösungsmittel, um eine Stammlösung vom Arbutus-Anthocyanin herzustellen; Lösen und Verdünnen der Stammlösung von Arbutus-Anthocyanin mit einer Phosphat-Pufferlösung, um eine Lösung B zu erhalten; Mischen der Lösung A und der Lösung B, wobei ein primäres magnetisches Rühren und eine Beschallverarbeitung mittels eines Wasserbadultraschallgeräts und dann eine sekundäre magnetische Rührverarbeitung durchgeführt werden, so dass die Mischungsflüssigkeit zu einer klaren einphasigen Flüssigkeit wird, und wobei die Mischungsflüssigkeit anschließend in einen Rotationsverdampfer gegeben wird, um eine Druckreduzierung und ein Verdampfen durchzuführen, bis eine Lipidfilmschicht ausgebildet wird; Zugeben einer Phosphat-Pufferlösung zu dem Lipidfilm, um den Lipidfilm zu lösen und eine Lösung C zu erhalten; Leiten der Lösung C durch eine Filtermembran, Beschallen und Aufbewahren in einem Kühlschrank bei 4 °C. Die ArbutusAnthocyanin-Liposomen der vorliegenden Erfindung erweitern den Einsatzbereich der Liposomen, und die Liposomen werden als Träger zum Einbetten des Arbutus-Anthocyanins verwendet, dabei ist das Herstellungsverfahren einfach und die Anforderung an die Ausrüstung niedrig, was förderlich für die Verbreitung ist, so dass eine industrielle Produktion realisiert werden kann.
Site Distribution by intensity g iö-
Figure BE1024387B1_D0001
ο—
0.1 ίου
S ze ;;ι.ι·γ·;
Becord 15l3;jj'3
Fig. 1
1000:
1000Û
BELGISCHES ERFINDUNGSPATENT
FÖD Wirtschaft, K.M.B., Mittelstand & Nummer der Veröffentlichung : 1024387 Energie Einreichungsnummer : BE2016/5880
Amt für Geistiges Eigentum Internat. Klassifikation : A61K 9/127 A61K 36/45
Datum der Erteilung am : 05/02/2018
Der Minister für Unternehmen,
Aufgrund des Pariser Vertrags vom 20. März 1883 zum Schutz des Gewerbliches Eigentums ;
Aufgrund des Gezetzes vom 28. März 1984 über Erfindungspatente, Artikel 22, für die Anträgen vor dem 22. September 2014 eingeführt;
Aufgrund des Titels I “Erfindungspatente” des Buches XI des Wirtschaftsgesetzbuches, Artikel XI.24, für die Anträgen ab 22. September 2014 eingeführt ;
Aufgrund des königlichen Erlasses vom 2. Dezember 1986 über die Anmeldung, die Erteilung und die Aufrechterhaltung von Erfindungspatenten, Artikel 28;
Aufgrund des Protokolls aufgenommen am 25/11/2016 beim Amt für Geistiges Eigentum.
In Erwägung, dass für Patentanmeldungen, die unter den Anwendungsbereich des Titels 1, Buch XI, des Wirtschaftgesetzbuches fallen, in Übereinstimmung mit Artikel XI.19, § 4, zweiter Absatz, des Wirtschaftsgesetzbuches, wenn die Patentanmeldung Gegenstand eines Recherchenberichts ist, in dem eine mangelnde Einheitlichkeit der Erfindung im Sinne des Paragraphen 1 erwähnt wird, und wenn der Anmelder seine Anmeldung nicht beschränkt und keine Teilanmeldung einreicht in Übereinstimmung des Recherchenberichts, das erteilte Patent beschränkt sein wird auf die Patentansprüche wofür der Recherchenbericht erstellt wurde.
BESCHLIEßT :
Artikel 1. - Es wird ein Erfindungspatent erteilt an :
CHINA JILIANG UNIVERSITY, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018 HANGZHOU China;
vertreten von :
SCHMID Michael, Postfach 2123, 90711 , FUERTH;
für die Dauer von 20 Jahren, vorbehaltlich der Zahlung der Patentjahresgebühren erwähnt in Artikel XI.48, §1 des Wirtschaftsgesetzbuches, für : VERFAHREN ZUM HERSTELLEN VON ARBUTUS-ANTHOCYANINNANOLIPOSOMEN.
ERFINDER :
GUAN Rongfa, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
SHEN Haitao, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
YE Zihong, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
JIAQiaojun, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
LV Fei, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
WANG Yan, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
WANG Yanbo, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
YANG Kai, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
WANG Wei, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
LIU Mingqi, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
LIANG Tisong, Xueyuan Street, Xiasha High Education Area, 310018, HANGZHOU;
PRIORITÄT(EN) :
ABSPALTUNG :
Teilantrag des früheren Antrags : Anmeldetag des früheren Antrags :
Artikel 2. - Dieses Patent wird erteilt ohne jede vorherige Prüfung der Patentfähigkeit der Erfindung, ohne Garantie des Verdienstes der Erfindung oder der Genauigkeit derer Beschreibung und auf eigene Gefahr des Patentanmelders/der Patentanmelder.
Brüssel, den 05/02/2018, In besonderer Vertretung :
BE2016/5880
VERFAHREN ZUM HERSTELLEN VON ARBUTUS-ANTHOCYANIN-NANOLIPOSOMEN
Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Biotechnik, insbesondere ein Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen.
Stand der Technik
Beim Lipid-System handelt es sich um ein Arzneimittel in einer Lipoid-Doppelmolekülschicht einkapselndes und daraus resultierend ausgebildetes sphärisches Ultramikro-Trägerpräparat, das auch als Lipoidpellet oder Flüssigkristallmikrokapsel bezeichnet wird und eine Struktur einer oder mehrerer konzentrischer Lipid-Doppelmolekülschicht aufweist. Die Eigenschaften der Liposomstruktur liegen darin, dass sie sich zum Abbauen in vivo eignet, nicht toxisch ist und keine Immunogenität hat, so dass sie eine stabile langsame Freisetzung des eingekapselten Arzneimittels erreichen kann. Als Arzneimittelträger werden Liposome weit verbreitet eingesetzt. Nanoliposome sind ein gestalteter relativ idealer Liposom-Arzneimittelträger. Als Arzneimittelträger weisen Nanoliposome folgende Vorteile auf: eine gute Biokompatibilität, eine multi-reagierende Ungiftigkeit in einem weiten Bereich für die getragenen Arzneimittel bzw. eine hohe Bioverfügbarkeit, so dass sie somit keine Immunantwort hervorrufen und den vorgesehenen Zweck erzielen.
Arbutus-Anthocyanin ist ein weit verbreitet in Blumen, Früchten und Blättern von Pflanzen existierendes wasserlösliches natürliches Pigment und seine chemische Struktur ist dadurch gebildet, dass ein Anthocyanidin und ein Kohlenhydrat über eine Glycosidbindung kombiniert sind. Gleichzeitig weist das Arbutus-Anthocyanin als eine natürliche Lebensmittelfarbe die Vorteile auf, dass es sicher und nicht toxisch ist und reichlich vorkommt; darüber hinaus weist es eine Antikrebs-, Entzündungshemmungs-, Antioxidations-, Antithrombose- und Diabetes-Präventions-Funktion auf und kann die Regeneration der roten Blutkörperchen fördern, Augenbelastung lindern sowie Leberdysfunktion und eine Vielzahl von biologischen Aktivitäten reduzieren. Zurzeit weisen Arbutus-Anthocyanin-Produkte in der praktischen Anwendung folgende Nachteile auf: Lichtempfindlichkeit, Oxidationsempfindlichkeit, schnelle Freisetzung im Körper, extreme Anfälligkeit für Oxidation unter
BE2016/5880
Sonneneinstrahlung und anderen anspruchsvollen Bedingungen, keine hohe biologische Verfügbarkeit in im nicht geschützten Zustand usw. Hinsichtlich der oben geschilderten Probleme vom Arbutus-Anthocyanin in der praktischen Anwendung besteht eine Notwendigkeit, das Arbutus-Anthocyanin einzukapseln und zu einem Arbutus-Anthocyanin-Liposom zuzubereiten, um es vor Oxidation durch Umweltfaktoren zu schützen sowie die Stabilität und die biologische Verfügbarkeit von Arbutus-Anthocyanin zu verbessern, so dass es förderlich für die Aufbewahrung ist und allgemein in Lebensmitteln, Kosmetika,
Gesundheitspflegeprodukten und Arzneimitteln verwendet werden kann.
Aufgabe der Erfindung
Hinsichtlich der Probleme aus dem Stand der Technik ist es ein Ziel der vorliegenden Erfindung, eine technische Lösung für das Herstellungsverfahren von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen bereitstellen.
Ein Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen ist dadurch gekennzeichnet, dass es folgende Prozessschritte umfasst:
1) Lösen von Soja-Lecithin und Cholesterin mit einem Massenverhältnis von 3-5:1 in einem organischen Lösungsmittel, um eine Lösung A zu erhalten, wobei das Feststoff-Flüssigkeits-Verhältnis (mg / ml) 4-9:1 beträgt;
2) Lösen von Arbutus-Anthocyanin in einem Lösungsmittel, um eine Stammlösung vom Arbutus-Anthocyanin herzustellen, wobei das Feststoff-Flüssigkeits-Verhältnis (mg/ml) 1:10 beträgt;
3) Lösen und Verdünnen der Stammlösung von Arbutus-Anthocyanin mit einer Phosphat-Pufferlösung, um eine Lösung B zu erhalten, wobei das Feststoff-Flüssigkeits-Verhältnis (mg/ml) 1:100-120 beträgt;
4) Mischen der Lösung A und der Lösung B mit einem Volumenverhältnis von 1-2:1, wobei ein primäres magnetisches Rühren und eine Beschallung mittels eines Wasserbadultraschallgeräts und dann eine sekundäre magnetische Rührverarbeitung durchgeführt werden, so dass die Mischungsflüssigkeit zu einer klaren einphasigen Flüssigkeit wird, und wobei die Mischungsflüssigkeit anschließend in einen Rotationsverdampfer gegeben wird, um eine Druckreduzierung und ein Verdampfen durchzuführen, bis eine Lipidfilmschicht ausgebildet wird;
5) Zugeben einer Phosphat-Pufferlösung zu dem Lipidfilm, um den Lipidfilm zu lösen und eine Lösung C zu erhalten;
BE2016/5880
6) Leiten der Lösung C durch eine Filtermembran, Beschallen und Aufbewahren in einem Kühlschrank bei 4 °C, so dass Liposome mit dem eingekapselten Arbutus-Anthocyanin erhalten werden.
Das Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen ist dadurch gekennzeichnet, dass das organische Lösungsmittel in Schritt 1) ein gemischtes Lösungsmittel aus Ether und Chloroform ist, wobei der Ether und das Chloroform ein Volumenverhältnis von 1-2:1 aufweisen.
Das Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen ist dadurch gekennzeichnet, dass das Cholesterin in Schritt 1) eines von Proteincholesterin, Serumcholesterin, Eigelbcholesterin oder Gallenblasencholesterin ist.
Das Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen ist dadurch gekennzeichnet, dass das Lösungsmittel in Schritt 2) mindestens eines aus wasserfreiem Ethanol, wasserfreiem Ether und Chloroform ist.
Das Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen ist dadurch gekennzeichnet, dass die Phosphat-Pufferlösung in Schritt 3) durch Mischen der Na2HPO4-Lösung mit 0,2mol/L und der Na2HPO4-Lösung mit 0,2mol/L mit einem Volumenverhältnis von 0,1-0,3:1 hergestellt wird.
Das Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen ist dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt 4) das primäre magnetische Rühren 40-50 Minuten dauert und das Wasserbadultraschallgerät unter Frequenzbedingungen von 100 Hz ein Beschallen für 5-8 Minuten durchführt, wobei das sekundäre magnetische Rühren 3-8 Minuten dauert, und wobei die Drehzahl 30-40 U/min beträgt.
Das Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen ist dadurch gekennzeichnet, dass der Vakuumgrad beim Druckvermindern und Verdampfen in Schritt 4) 0,06-0,1 Mpa beträgt.
Das Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomsen ist dadurch gekennzeichnet, dass die Filtermembran in Schritt 6) eine Apertur von 450 nm und 220 nm aufweist, wobei das Beschallen 5-10 Minuten dauert.
Mit einem Umkehrphasen-Verdampfungsverfahren werden Arbutus-Anthocyanin-Liposomen hergestellt, und es wird eine Beschallverarbeitung mittels eines Wasserbadultraschallgeräts durchgeführt, bis ein stabiles System erreicht wird. Das Verfahren kann die Stabilität der
BE2016/5880
Arbutus-Anthocyanin-Liposomen erheblich verbessern, das
Arbutus-Anthocyanin wirksam vor einer Oxidation unter anspruchsvollen Bedingungen schützen und die Stabilität vom Arbutus-Anthocyanin verbessern. Mittels Einstellung werden die Bestandteile des Lipids und das Verhältnis der Pufferlösung festgestellt, und nach einem magnetischen Rühren, Beschallen und Rotationsverdampfen und anderen Prozessschritten kann die Teilchengröße der Liposomen wirksam gesteuert werden, um die
Einkapselungsrate zu erhöhen; die Arbutus-Anthocyanin-Liposomen der vorliegenden Erfindung erweitern den Einsatzbereich der Liposomen und verwendet die Liposomen als Träger zum Einbetten des Arbutus-Anthocyanins, wobei das Herstellungsverfahren einfach und die Anforderung an die Ausrüstung gering sind, was förderlich für die Verbreitung ist, so dass eine industrielle Produktion realisiert werden kann.
Kurzbeschreibung der Zeichnungen
Die Figur zeigt ein Verteilungsdiagramm der Teilchengrößen der Nanoliposomen.
Beschreibung der bevorzugten Ausführungsbeispiele
Die vorliegende Erfindung wird im Folgenden anhand von Ausführungsformen näher erläutert.
Ausführungsbeispiel I
110 mg Soja-Lecithin und 36 mg Cholesterin (einem von Proteincholesterin, Serumcholesterin, Eigelbcholesterin oder Gallenblasencholesterin) werden in einer 10 ml Chloroform und 8 ml Ether enthaltenden Mischlösung gelöst, um eine Lösung A zu erhalten, 5 mg Arbutus-Anthocyanin werden in 50 ml Ethanol gelöst, um eine Stammlösung herzustellen, 1 ml Stammlösung wird entnommen und mit einer Phosphat-Pufferlösung auf 10 ml verdünnt, um eine Probenlösung herzustellen, 9 ml Probeniösung werden als Lösung B verwendet, Lösung A und Lösung B werden mit einem Volumenverhältnis von 1:1 gemischt, ein primäres magnetisches Rühren wird für 40 min durchgeführt, woraufhin ein Beschallen unter Frequenzbedingungen des Wasserbadultraschallgeräts von 100 Hz für 10 min durchgeführt wird; anschließend wird ein sekundäres magnetisches Rühren für 5 min durchgeführt, so dass die Mischungsflüssigkeit zu einer klaren
BE2016/5880 einphasigen Flüssigkeit wird; mit einem Wasserbad bei 40 °C und bei einem Vakuumdruck von 0,08 Mpa sowie mit einer Drehzahl von 30 U/min wird ein Rotationsverdampfen für die Mischlösung durchgeführt, bis eine Lipidfilmschicht ausgebildet wird; es werden 30 ml Phosphat-Pufferlösung zu dem Lipidfilm zugegeben, um den Lipidfilm zu lösen und eine Lösung C zu erhalten; die Lösung C jeweils durch eine Filtermembran von 450 nm und 220 nm geleitet, die Filterlösung für 5 min beschallt und in einem Kühlschrank bei 4 °C aufbewahrt, so dass Liposomen mit dem eingekapselten Arbutus-Anthocyanin erhalten werden.
Die Phosphat-Pufferlösung ist wie folgt konfiguriert:
0,2 mol/L Na2HPO4-Lösung: Es werden 71,64 g Dinatriumwasserstoffphospha abgewogen, destilliertes Wasser zum Lösen hinzugegeben und das Volumen auf 1000 ml festgelegt.
0,2 mol/L Na2HPO4-Lösung: Es werden 31,21 g Natriumdiwasserstoffphosphat abgewogen, destilliertes Wasser zum Lösen hinzugegeben und das Volumen auf 1000 ml festgelegt.
Die beiden Lösungen werden jeweils in eine braune Flasche gegeben und in einem Kühlschrank bei 4 °C aufbewahrt; im Gebrauch werden die beiden Lösungen jeweiis mit verschiedenen Verhältnissen gemischt, um eine Pufferlösung mit einem erwünschten pH-Wert zu erhalten.
Die 0,2 mol/L Na2HPC>4-Lösung und die 0,2mol/L Na2HPO4-Lösung werden mit einem Volumenverhältnis von 0,1-0,3:1 gemischt, um eine Phosphat-Pufferlösung mit dem pH-Wert von 7,4 zu erhalten.
Ausführungsbeispiel II
100 mg Soja-Lecithin und 25 mg Cholesterin werden in einer 10 ml Chloroform und 8 ml Ether enthaltenden Mischlösung gelöst, um eine Lösung A zu erhalten, 5 mg Arbutus-Anthocyanin werden in 50 ml Ethanol gelöst, um eine Stammlösung herzustellen, 1 ml Stammiösung wird mit einer
Phosphat-Pufferlösung auf 10 ml verdünnt, um eine Probeniösung herzustellen, 9 ml Probenlösung werden als Lösung B verwendet, die Lösung A und Lösung B werden mit einem Volumenverhältnis von 2:1 gemischt, ein primäres magnetisches Rühren wird für 50 min durchgeführt, woraufhin ein Beschallen in einer Frequenzbedingung des Wasserbadultraschallgeräts von 100 Hz für 10
BE2016/5880 min durchgeführt wird; anschließend wird ein sekundäres magnetisches Rühren für 8 min durchgeführt, so dass die Mischungsflüssigkeit zu einer klaren einphasigen Flüssigkeit wird; mit einem Wasserbad bei 40 °C und bei einem Vakuumdruck von 0,08 Mpa sowie mit einer Drehzahl von 30 U/min wird ein
Rotationsverdampfen für die Mischlösung durchgeführt, bis eine Lipidfilmschicht ausgebildet wird; es werden 30 ml Phosphat-Pufferlösung zu dem Lipidfilm zugegeben, um den Lipidfilm zu lösen und eine Lösung C zu erhalten; die Lösung C wird jeweils durch eine Filtermembran von 450 nm und 220 nm geleitet, die Filterlösung für 5 min beschallt und in einem Kühlschrank bei 4 °C aufbewahrt, so dass Liposomen mit dem eingekapselten Arbutus-Anthocyanin erhalten werden.
Die Konfiguration der Phosphat-Pufferlösung ist gleich wie Ausführungsbeispiel I.
Ausführungsbeispiel III
Die in der ersten Ausführungsform erhaltene das Arbutus-Anthocyanin einkapselnde Liposomen werden geprüft, wobei ihre Einkapselungsrate 58,3 % beträgt.
Physikalische Stabilität
Für die fertig hergestellten Liposomen werden Teilchengrößen und
Verteilungskoeffizienten mit einem Intervall von einem Tag gemessen, um die physikalische Stabilität zu ermitteln; dabei sind die Ergebnisse wie folgt:
1. Variationsbereich der Teiichengröße (wie in der Figur dargestellt): 1-30 nm
2. Variationsbereich des Verteilungskoeffizienten: 0,04-0,1
Die Ergebnisse zeigen, dass die Teilchengröße nicht stark variiert und die
Veränderung des Verteilungskoeffizienten eine kleinere Amplitude hat; dies zeigt, dass die hergestellten Nanoliposomen keine signifikante Sedimentationswirkung aufweisen und nach einer Langzeitlagerung immer noch ihre Nano-Leistung bewahren können.
BE2016/5880

Claims (6)

PATENTANSPRÜCHE
1 ) Lösen von Soja-Lecithin und Cholesterin mit einem Massenverhältnis von 3-5:1 in einem organischen Lösungsmittel, um eine Lösung A zu erhalten, wobei das Feststoff-Flüssigkeits-Verhältnis (mg / ml) 4-9:1 beträgt;
1. Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen, dadurch gekennzeichnet, dass es folgende Schritte umfasst:
2. Verfahren zum Herstellen vonArbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das organische Lösungsmittel in Schritt 1 ) ein gemischtes Lösungsmittel aus Ether und Chloroform ist, wobei der Ether und das Chloroform ein Volumenverhältnis von 1-2:1 aufweisen.
2) Lösen von Arbutus-Anthocyanin in einem Lösungsmittel, um eine Stammlösung vom Arbutus-Anthocyanin herzustellen, wobei das Feststoff-Flüssigkeits-Verhältnis (mg/ml) 1:10 beträgt;
3. Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Cholesterin in Schritt 1 )
B E2016/5880 eines von Proteincholesterin, Serumcholesterin, Eigelbcholesterin oder Gallenblasencholesterin ist.
3) Lösen und Verdünnen der Stammlösung von Arbutus-Anthocyanin mit einer Phosphat-Pufferlösung pH=7,4, um eine Lösung B zu erhalten, wobei das Feststoff-Flüssigkeits-Verhältnis (mg/ml) 1:100-120 beträgt;
4. Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Lösungsmittel in Schritt 2) mindestens eines von wasserfreiem Ethanol, wasserfreiem Ether und Chloroform ist.
4) Mischen der Lösung A und der Lösung B mit einem Volumenverhältnis von 1-2:1, wobei ein primäres magnetisches Rühren und eine Beschallverarbeitung mittels eines Wasserbadultraschallgeräts und dann eine sekundäre magnetische Rührverarbeitung durchgeführt werden, so dass die Mischungsflüssigkeit zu einer klaren einphasigen Flüssigkeit wird, und wobei die Mischungsflüssigkeit anschließend in einen Rotationsverdampfer gegeben wird, um eine Druckreduzierung und ein Verdampfen durchzuführen, bis eine Lipidfilmschicht ausgebildet wird;
5. Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Phosphat-Pufferlösung in Schritt 3) durch ein Mischen der Na2HPO4-Lösung mit 0,2 mol/L und der Na2HPO4-Lösung mit 0,2 mol/L mit einem Volumenverhältnis von 0,1-0,3:1 hergestellt wird.
6. Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt 4) das primäre magnetische Rühren 40-50 Minuten dauert und das Wasserbadultraschallgerät unter Frequenzbedingungen von 100 Hz ein Beschallen für 5-8 Minuten durchführt, wobei das sekundäre magnetische Rühren 3-8 dauert, und wobei die Drehzahl 30-40 U/min beträgt.
7. Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Vakuumgrad beim Druckvermindern und Verdampfen im Schritt 4) 0,06-0,1 Mpa beträgt.
8. Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Filtermembran in Schritt 6) eine Apertur von 450 nm und 220 nm aufweist, wobei das Beschallen 5-10 Minuten dauert.
BE2016/5880 è* vi
SX >»
X3
SX
O
XS ω
Ω ο
ο ο
ο c
5) Zugeben einer Phosphat-Pufferlösung zu dem Lipidfilm, um den Lipidfilm zu lösen und eine Lösung C zu erhalten; und
6) Leiten der Lösung C durch eine Filtermembran, Beschallen und Aufbewahren in einem Kühlschrank bei 4 “C, so dass Liposomen mit dem eingekapselten Arbutus-Anthocyanin erhalten werden.
*6 ίΛ ο
ο ©
££
BE2016/5880
ΛΟ
ZUSAMMENFASSUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Biotechnik, insbesondere ein Verfahren zum Herstellen von Arbutus-Anthocyanin-Nanoliposomen. Das Verfahren umfasst folgende Schritte: Lösen von Soja-Lecithin und Cholesterin in einem organischen Lösungsmittel, um eine Lösung A zu erhalten; Lösen von Arbutus-Anthocyanin in einem Lösungsmittel, um eine Stammlösung vom Arbutus-Anthocyanin herzustellen; Lösen und Verdünnen der Stammlösung von Arbutus-Anthocyanin mit einer Phosphat-Pufferlösung, um eine Lösung B zu erhalten; Mischen der Lösung A und der Lösung B, wobei ein primäres magnetisches Rühren und eine Beschallverarbeitung mittels eines Wasserbadultraschallgeräts und dann eine sekundäre magnetische Rührverarbeitung durchgeführt werden, so dass die Mischungsflüssigkeit zu einer klaren einphasigen Flüssigkeit wird, und wobei die Mischungsflüssigkeit anschließend in einen Rotationsverdampfer gegeben wird, um eine Druckreduzierung und ein Verdampfen durchzuführen, bis eine Lipidfilmschicht ausgebildet wird; Zugeben einer Phosphat-Pufferlösung zu dem Lipidfilm, um den Lipidfilm zu lösen und eine Lösung C zu erhalten; Leiten der Lösung C durch eine Filtermembran, Beschallen und Aufbewahren in einem Kühlschrank bei 4 °C. Die Arbutus-Anthocyanin-Liposomen der vorliegenden Erfindung erweitern den Einsatzbereich der Liposomen, und die Liposomen werden als Träger zum Einbetten des Arbutus-Anthocyanins verwendet, dabei ist das Herstellungsverfahren einfach und die Anforderung an die Ausrüstung niedrig, was förderlich für die Verbreitung ist, so dass eine industrielle Produktion realisiert werden kann.
Europ&ïsifiJjî ft««nt Office öftR« »wföp«'e:ir» liée brevets
REGHERGHENBER1GHT nach Artikel 21 Absätze 1 und 2 des belgischen Gesetzes über Ertindungspetente vom 28. März 1984
Nuiimier der
BBtionateB Anmeldung;
SO 11366 SE 201605880
EINSCHLÄGIGE DOKUMENTE
Kciiecjoris Kennzeichnung des Dokuments mit Angabe, soweit erforden-ch, der mrtßgebiiohen Teile Betriift Anspruch KLASSiFiKATON DEB ANMELDUNG {(PC) X A Ä CN 105 639 654 A (UNIV JÏL1ANG CHINA) 8, Juni 2016 (2016-06-08) * das ganze Dokument * JIN-MING HWANG ET AL: “Inhibitory effect of 1iposome-encapsulated anthocyanin on me 1 anogenesis in human melanocytes, PHARMACEUTICAL BIOLOGY, Bd. 51, Nr. 6, 9. April 2013 (2013-04-09), Seiten 941-947, XPO55392872, NL ISSN: 1388-0209. DOI: 10.3109/1388Θ209.2013,771376 * das ganze Dokument * * insbesondere Zusammenfassung, Absätze unter den Überschriften “Preparation of LCA, Character!zation of liposomes and anthocyanin liposomes, Tabelle 1 * AGATA MARIA PAWLOWSKA ET AL: Phenolics of Arbutus unedo L. (Ericaceae) Fruits: Identification of Anthocyanins and Gallic Arid Oer*i vat i ves *’ JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, Bd. 54, Nr. 26, 1. Dezember 2006 (2006-12-01), Seiten 10234-10238, XP055392876, ISSN: 0021-8561, DOI: 10.1021/jf062230o * Absatz unter der Überschrift Results and discussion Qualitative-Quantitative Anthocyanins Profile” * -z- 1-8 1-8 1-8 1 NV . A61K9/127 A61K36/45 RECHERCHiERTE SACHGEBIETE (IPC) A61K AtiOchiu-SclcÜM'ü: Ks^étc-hs· t*’: 21, Juli 2017 Benbow, Susanne •KATEGORIE OER GENANNTEN DOKUMENTE T etter Erfindung zugrunde Tkewte» outet Otundsätze E ’ &jtere& PatstHdäkutntmi, das jedoch fer&tärn oder X rvüftbfe&üfidfeft»? Be-ctetfiifftg alte»« oauauhlei nach stern Anmextedaiurn veröffentlicht worcten ist V von uesondefer Bedeutung tu Verbindung mît einer i> ‘ in der Anmeldung angeführte* Dokument anderen V^röff^nttböhung derofelfoen Kategcrte L. au* anderen Gründen angeführtes Dokvmont A-: techrtdkbyteoäter Hintergrund. ............................. ........................................................... O ni^hte^htjititche Oftshti&runs & : des -gtetefcen Pöterittamltte. Ofcetfcinsfcirtti'neRttes P : £w<&ohenhter»tur Dokument
Seite 1 von 2
Europ&ïsifïjjî ft««nt Office öftR« »wföp«'e:ir» )$Ri. brevets
REGHERGHENBER1GHT nach Artikel 21 Absätze 1 und 2 des belgischen Gesetzes über Ertindungspetente vom 28. März 1984
Nummer
BBtionaien Anmeldung;
SO 11366 BE 201605880
EINSCHLÄGIGE DOKUMENTE
Kategorie Kennzeichnung des Dokuments mit Angabe, soweit erforden-ch, der mrißgebiiohen Teile •B&triift AnSfXüoh KLASSiFiKATiON DES ANMELDUNG {(PC) A A X1ANAN ZHANG ET AL; Phytochemical Character!zation of Chinese Sayberry (Myrica rubra Sieb, et Zucc.) of 17 Cultivars and Their Antioxidant Propert i es“, INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, Bd. 16, Nr. 6, 2. Juni 2015 (2015-06-02}, Seiten 12467-12481, XP0S5392894, DOI: 10.3390/ijmsl60612467 * Absätze unter der Überschrift 2.4. Identification and Quantification of Individual Phenolics; Tabelle 3 * * Zusammenfassung * SONIA DE PASCUAL-TERESA ET AL; Elavanols and Anthocyanins in Cardiovascular Health: A Review of Current Evidence, INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCI ENGES, Bd. 11, Nr. 4, 13. April 2010 (2010-04-13) . Seiten 1679-1703, XP055392878, 001: 10.3390/ijms11041679 * Teil unter der Überschrift “2.2. Anthocyanins“ * 1-8 1-8 KECBERCHiERTE SACHGEBIETE (IPC) Attach iuOclcdi,«'o: :de< PTOt« 21, Juli 2017 Benbow, Susanne •KATEGORIE OER GENANNTEN DOKUMENTS T ccter Erfindung zugrunde tagfendfe Thronen octet Otum&Mze E ’ Pate nûtoku ment, das jedoch fer&tärn oder X /Vùft kMô&ûrtCiferer Bö-ctetfiiiftg alte»« betiaahtat riach ftom AnmeKfedaturn veröffentlicht worderi ist V von aesondetet' Bedeutung in Verbindung mit einer D ‘ in der Anmeldung angeführte* Dokument anderen V^rdffentEböhung nt&ro&ifonn Kategone l. au« anderen Gründen angeführtes Dokvm^t A.KiechttQfogföoher Hintergrund. ............................. ........................................................... O nichteehnMich® Oftehfc^ung & : ctei -gteiefcen Pöten^«ynEtte. dfcereinsfcirni^FXtes P : Zwt&ohenEfteratui' Dokument
Seite 2 von 2
BE2016/5880A 2016-11-25 2016-11-25 Verfahren zum herstellen von arbutus-anthocyanin-nanoliposomen BE1024387B1 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE2016/5880A BE1024387B1 (de) 2016-11-25 2016-11-25 Verfahren zum herstellen von arbutus-anthocyanin-nanoliposomen

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE2016/5880A BE1024387B1 (de) 2016-11-25 2016-11-25 Verfahren zum herstellen von arbutus-anthocyanin-nanoliposomen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BE1024387B1 true BE1024387B1 (de) 2018-02-05

Family

ID=57538970

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BE2016/5880A BE1024387B1 (de) 2016-11-25 2016-11-25 Verfahren zum herstellen von arbutus-anthocyanin-nanoliposomen

Country Status (1)

Country Link
BE (1) BE1024387B1 (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110495488A (zh) * 2019-09-10 2019-11-26 中国肉类食品综合研究中心 一种纳米脂质体及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105639654A (zh) * 2016-01-27 2016-06-08 中国计量学院 一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105639654A (zh) * 2016-01-27 2016-06-08 中国计量学院 一种杨梅花色苷纳米脂质体的制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AGATA MARIA PAWLOWSKA ET AL: "Phenolics of Arbutus unedo L. (Ericaceae) Fruits: Identification of Anthocyanins and Gallic Acid Derivatives", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 54, no. 26, 1 December 2006 (2006-12-01), pages 10234 - 10238, XP055392876, ISSN: 0021-8561, DOI: 10.1021/jf062230o *
JIN-MING HWANG ET AL: "Inhibitory effect of liposome-encapsulated anthocyanin on melanogenesis in human melanocytes", PHARMACEUTICAL BIOLOGY, vol. 51, no. 8, 9 April 2013 (2013-04-09), NL, pages 941 - 947, XP055392872, ISSN: 1388-0209, DOI: 10.3109/13880209.2013.771376 *
SONIA DE PASCUAL-TERESA ET AL: "Flavanols and Anthocyanins in Cardiovascular Health: A Review of Current Evidence", INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, vol. 11, no. 4, 13 April 2010 (2010-04-13), pages 1679 - 1703, XP055392878, DOI: 10.3390/ijms11041679 *
XIANAN ZHANG ET AL: "Phytochemical Characterization of Chinese Bayberry (Myrica rubra Sieb. et Zucc.) of 17 Cultivars and Their Antioxidant Properties", INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, vol. 16, no. 6, 2 June 2015 (2015-06-02), pages 12467 - 12481, XP055392894, DOI: 10.3390/ijms160612467 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110495488A (zh) * 2019-09-10 2019-11-26 中国肉类食品综合研究中心 一种纳米脂质体及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69530926T2 (de) Mittel zur förderung des haarwachstums
DE2629100C3 (de) Dispersion von Kügelchen und Verfahren zu ihrer Herstellung
CH715456B1 (de) Kosmetisches Produkt zur topischen Anwendung für den Schutz und die Erneuerung von Hautstammzellen, welches sich von dedifferenzierten Pflanzenzellen ableitet.
DE60120284T2 (de) Verwendung von 4&#39;,5,7-Trihydroxyflavylium als Hautfärbemittel
DE19730408B4 (de) Zusammensetzung für äußere Anwendung
EP3843697A1 (de) Milde reinigungszubereitung ii
DE69630557T2 (de) Verwendung von Galactomannanen angereicherten Kassiasamenextrakten in kosmetischen Zusammensetzungen
EP2066310B1 (de) Emulsionen enthaltend gummi arabicum
BE1024387B1 (de) Verfahren zum herstellen von arbutus-anthocyanin-nanoliposomen
EP2090293A1 (de) Wasserdispergierbarer oder wasserlöslicher Polymerfilm als Träger von dermatologischen und kosmetischen Wirkstoffen
DE60130183T2 (de) Anthocyaninfarbmittel und verfahren zu dessen herstellung aus organischem material
DE102009010047A1 (de) Verwendung eines Extraktes der Orchidee Vanda coerulea als feuchtigkeitsspendendes Mittel für die Haut
DE3815473C2 (de)
DE19838809C2 (de) Trockenextrakt aus der Hennapflanze, Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendung
EP1537789B1 (de) Zubereitung für die orale und/oder topische Anwendung (I)
WO2020043337A1 (de) Milde reinigungszubereitung
DE4003783C2 (de) Phospholipidhaltiges Gel, Verfahren zu dessen Herstellung und Verwendung
WO2010012687A2 (de) Zubereitungen aus artemisia annua, ihre umwandlung in mikro- und nanopartikel und ihre verwendung
EP3525754A1 (de) Verfahren zur herstellung von dermatologischen und kosmetischen präparaten
DE10317109A1 (de) Zubereitungen zur oralen Aufnahme
EP1354594B1 (de) Wirkstoffmischungen von Extrakten der Gattung Vaccinium und Carotinverbindungen
WO2004054597A1 (de) Verwendung eines extraktes aus der pflanze argania spinosa
DE60206545T2 (de) Zusammensetzung zum Trinken/Essen enthaltend AGARICUS BLAZEI MURRILL
EP2142015A2 (de) Emulsionsvorkonzentrate sowie micellare formulierungen enthaltend wurzelharz
EP4051217B1 (de) Kosmetische zusammensetzung enthaltend einen extrakt aus opuntia ficus indica

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Effective date: 20180205

MM Lapsed because of non-payment of the annual fee

Effective date: 20211130