AT516484A2 - Kombinationspräparat enthaltend Ademetionin, Vitamin B12 und Huperzin zur Prävention der Prodromalstadien und Behandlung der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) durch Neuroprotektion - Google Patents

Abstract

Die vorliegende Erfindung ist zur Prävention der Prodromalstadien einer Demenz vom Typ der AlzheimerKrankheit vom späten Beginn {LOAD), auch als Mild Cognitive Impairment {MCI) bezeichnet und zur Behandlung von Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn {LOAD), durch Neuroprotektion bestimmt. Diese kommt auf zweifache Weise zustande, einerseits aus einem epigenetisch vermittelten Gehirnzellschutz durch Ademetionin, das im Zellstoffwechsel des C-lZyklus durch aktiven Methylgruppen-Transfer teilnimmt und den Genabschnitt für die MaoB Expression durch Gen-Silencing anspricht. Vitamin B12 sichert die disponible Bereitstellung von L-Methionin, das die Vorstufe seiner aktivierten Form dem Ademetionin ist und andererseits, die Dreierkombination von Ademetionin und Vitamin B12 mit Huperzin ergibt eine bessere Überlebensfähigkeit der Zellen durch Schutz vor oxydativem Stress. In einem humanen Zelllinien-Modell konnte gezeigt werden, dass die Dreierkombination aus S-Adenosyl-LMethionin, Vitamin B12 und Huperzin A die Zellen vor oxydativem Stress schützt.

Description

BESCHREIBUNG

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Kombinationspräparat enthaltend Ademetionin, Vitamin B12 und Huperzin zur Prävention der Prodromalstadien mit ersten Symptomen, in Form von neuropsychologischen Defiziten, die als Vorstufen einer Demenz vom Typ der Alzheimer-Krankheit vom spätem Beginn (LOAD) gelten, auch als Mild Cognitive Impairment (MCI) bezeichnet und zur Behandlung von Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD ) einem klinisch manifesten Stadium der Erkrankung, wo der Gedächtnisverlust das vorherrschende Symptom ist.

Die Verwendung von Huperzin in Kombination mit Ademetionin und Vitamin B12 mit ihren Synergien in der Prävention der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) und bei der Therapie der manifesten Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD), bestehend aus epigenetisch vermittelten Gehirnzellschutz durch Ademetionin und Vitamin B12 und aus der Kombination von Ademetionin und Vitamin B12 mit Huperzin A, die eine bessere Überlebensfähigkeit der Zellen durch Schutz vor oxydativem Stress durch Neuroprotektion ergibt.

Die Kriterien für die Diagnose Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) sind in der ICD-10-GM-2015 unter F00.1 (Internationale statistische Klassifikation der Krankheiten und verwandter Gesundheitsprobleme) beschrieben.

Die vorliegende Erfindung richtet sich insbesondere auf die Prävention der Vorstadien und Behandlung der Demenz bei Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD). Sie überwiegt nach dem 65. Lebensjahr, mit einem steilen Anstieg ab dem 75. Lebensjahr und beginnt immer mit Gedächtnisproblemen, die sich an einem Defizit im episodischen Gedächtnistest (amnestisches Syndrom vom Hippocampal-Typ), dem Nachweis Alzheimer spezifischer Biomarker und mit dem Nachweis einer

Atrophie des medialen Temporallappens zeigen lassen. Sie wird als eine langsame in Stufen fortschreitende neurodegenerative Erkrankung aus präklinischen Stadien ohne Symptome, aber mit Alzheimer- spezifischen Biomarker- Nachweis, einem Prodromalstadium mit ersten Symptomen, in Form von neuropsychologischen Defiziten, auch als Mild Cognitive Impairment (MCI) bezeichnet und einem klinisch manifesten Stadium der Erkrankung, wo der Gedächtnisverlust das vorherrschende Symptom ist, wobei der amnestische Single-Domain-Subtyp als auch der amnestische Multiple-Domain-Subtyp als Vorstufen einer Demenz vom Typ der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) gelten [Dubois & Albert, 2004; Panza et al., 2006], beschrieben.

Die Wirksamkeit der Zusammensetzung des Kombinationspräparates ergibt sich aus der Synergie, die sich durch die Kombination ihrer Komponenten auf Prävention der Vorstadien und Behandlung der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) ergibt.

Diese Aufgabe wird durch die erfindungsgemäße Zusammensetzung gelöst, die als ihre charakterisierenden Komponenten umfasst: (a) inneres Salz von S-Adenosyl Methionin oder eines seiner pharmakologisch annehmbaren Salze (b) inneres Salz von Cobalamin oder eines seiner pharmakologisch annehmbaren Salze (c) einem Huperzin oder eines seiner pharmakologisch annehmbaren Salze

Das Huperzin, ein in der Natur vorkommendes Squiterpenalkaloid, ist vorzugsweise aus der Gruppe, umfassend Huperzin A und Huperzin B oder einem Gemische davon, ausgewählt. Ein Extrakt von Huperzia serrata kann als Gemisch der Huperzine eingesetzt werden.

Huperzin A ist ein starker, die Acetylcholinesterase hemmender Wirkstoff, der in Bärlappgewächsen (Huperzia selago, Huperzia serrata) und anderen Huperzia-Spezien, wie H. elmeri, H. carinat und H. aqualupian vorkommt. Es gehört zu den Lycopodiumalkaloiden.

Die Verwendung dieser Pflanze, die ursprünglich aus China kommt, war bereits in der chinesischen Volksmedizin zur Behandlung von Kontusionen und Muskelschmerzen und zur Behandlung der Schizophrenie bekannt, allerdings ist die Beschreibung der Strukturen der zwei Hauptalkaloide, die darin Vorkommen, d.h. Huperzin A und Huperzin B, relativ neu (Lin J. S., Can. J. Chem. 64: 837, 1986). Unmittelbar danach beschreibt Wang (Wang Y. E., Acta Pharmacol. Sinica, 7: 110, 1986) ihre wirksame Anticholinesterase-Wirkung, die den Weg für die pharmakologischen Studien an diesen Alkaloiden ebnete.

Die potente, reversible und selektive Anticholinesterase-Aktivität von Huperzin A und Huperzin B veranlasste unverzüglich Forschungen über diese Alkaloide mit therapeutischen Überlegungen in Bezug auf die Alzheimer Krankheit.

In jüngerer Zeit haben sich Forschungen über die Pathogenese der Alzheimer Krankheit tatsächlich in erster Linie auf Studien über Anticholinesterasen konzentriert, die sich durch selektive Aktivität an den cholinergen Strukturen der Hippocampi zeigten und festgestellt wurde, dass es in erster Linie die cholinergen Strukturen beider Hippocampi es sind, die den höchsten Grad, sowohl organischer als auch funktioneller Beeinträchtigung bei der Alzheimer Krankheit vom spätem Beginn (LOAD) verursachen.

Substanzen, die fähig sind, die zentrale cholinerge Aktivität zu blockieren, sind in der Tat fähig, ein Krankheitsbild ähnlich dem einer senilen Demenz zu erzeugen. Cholinerge Antagonisten wie Acetylcholinesterase-Inhibitoren sind dagegen in der Lage, die geriatrischen Symptome, die mit der Merkfähigkeit in Beziehung stehen, zu verbessern. [Kelley & Knopman, Neurologist 2008, 14:299-306; Little et al., Expert Opin Investig Drugs 2008, 17:209-215].

Huperzin A passiert besser die Blut-Hirn-Schranke, hat eine bessere orale Bioverfügbarkeit und eine längere Wirkung als Acetylcholinesterase-Hemmstoff im Vergleich zu Tacrin, Galantamin, Donepezil und Rivastigmin, die in der Therapie der Alzheimer-Krankheit in den Vereinigten Staaten und in Europa zugelassen sind. [Little et al., Expert Opin Investig Drugs 2008, 17:209-215; Lallement et al., Neurotoxicology 2002, 23:1-5; White et al., Epilepsia 2005, 46(Suppl. 8):220; Schächter et al., Epilepsia 2006, 47(Suppl. 4):319-320; Xu et al., Zhongguo Yao Li Xue Bao 1999, 20:486-49; Zhang et al., Zhonghua Yi Xue Za Zhi 2002, 82:941-944; Wang et al., J Neural Transm 2009, 116: 457-465],

Zur Dosierung und Verträglichkeit der Huperzine:

Die Ergebnisse zeigten, dass Huperzin A gut verträglich und vorteilhaft bei der Behandlung der Alzheimer Krankheit ist, wenn die Tagesdosis bei 300-500 pg lag. [Wang et al., J Neural Transm 2009, 116: 457-465; Little et al., Expert Opin Investig Drugs 2008, 17:209-215; Li et al., Cochrane Database Syst Rev 2008, (2): CD005592, Xi Can Tang & Yi Fan Han; CNS Drug Reviews, Vol5, Nr3, 281-300: "The incidence of adverse events such as dizziness, nausea and diarrhea with HupA 0,2mg was comparable to that observed with placebo control"].

In den U.S.A., ist Huperzine A als Nahrungsergänzungsmittel in einer geringen Dosis (bis zu 50 pg) bei Gedächtnisproblemen auf dem Markt [Jiang et al., Curr Med Chem 2003, 10:2231-2252].

Es wurde auch beobachtet, dass Huperzin A zusätzlich zu seiner Wirkung auf die Acetylcholinesterase, die Acetylcholin zu Acetat und Cholin mit einer sehr hohen Wechselzahl (25 000 s-1) hydrolisiert, fähig ist, auch als Antagonist auf NMDA (N-Methyl-D-aspartat)-Rezeptoren der Gehirnzellen zu wirken. Eine Überstimulation von Glutamat-Rezeptoren, gilt als einer der Ursachen für den neurodegenerative Prozess bei Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD), und kann durch die Verabreichung von Huperzin A inhibiert werden.

Eine neuroprotektive Wirkung zeigt Huperzin A auch indem es fähig ist, Gehirnzellen gegenüber Wasserstoffperoxid, ß -Amyloid -Protein, Glutamat, Ischämie- und Staurosporin -induzierter Cytotoxizität und Apoptose zu schützen. Diese protektiven Wirkungen sind mit der Fähigkeit verbunden, oxidativen Stress zu vermindern, indem die Expression von apoptotischen Proteinen, wie Bel -2, Bax, P53 und Caspase -3 reguliert wird und Mitochondrien der Gehirnzellen durch Blockade von oligomerem Aßl-42 schützen. [Cholinesterases—Advances in Research and Application: 2013 Edition und Yang L et al. Decreased accumulation of sub cellular amyloid-ß with improved mitochondrial function mediates the neuroprotective effect of huperzine A. J Alzheimers Dis. 2012,-31(1) :131-42.] .

Es liegen nur begrenzte Daten über die Pharmakokinetik von Huperzin A beim Menschen vor. Es wurde berichtet, dass bei oraler Verabreichung von 0,99 mg an sechs gesunden Freiwilligen, Huperzin A schnell resorbiert, im Körper ausreichend verteilt und nur langsam eliminiert wird.

Die maximale Serumkonzentration wurde nach ca. 1 Stunde erreicht, die Halbwertszeit lag zwischen 6 bis 12 Stunden und die Bioverfügbarkeit bei 99%. [Qian et al., Zhongguo Yao Li Xue Bao 1995, 16:396-398; Yuan et al., Chinese Pharmaceutical Journal 2008, 43:1889-1892; Li et al., Eur J Drug Metab Pharmacokinet 2007, 32:183-187].

Li, Zhang & Jiang haben gefunden, dass nach einer Dosis von 0,4 mg in einer einfachen, nicht überzogenen Tablette, bereits 5-10 Minuten nach der Gabe es im Plasma nachgewiesen werden konnte. Die Spitzenkonzentration wurde nach 58 +/-4 Minuten gemessen. Das spricht für eine Resorption in den oberen Bereichen des GI-Trakts und weist auf keine Beeinträchtigung durch die Magensäure hin.

Die Erfindung schließt die Verwendung von Isomeren, Tautomeren, Polymorphe, Solvate und Hydrate von Huperzin, sowie die Verwendung der pharmazeutisch annehmbaren Salze der Verbindungen ein. Beispielsweise kann das Salz ein Säureadditionssalz sein. Als Beispiel für ein Säureadditionssalz wäre ein Hydrochloridsalz zu nennen.

Es gibt eine Reihe von synthetischen Huperzin A - Analoga. Huprine X ist ein Kombinationspräparat aus Huperzin A und Tacrin. Ein weiteres synthetisches Analogon ist ZT-1, das als Prodrug nach und nach zu Huperzin A im Körper hydrolysiert wird, [Li et al, Biomed Chromatogr 2008. 22: 354-360].

Die pharmakologischen und die klinischen Effekte scheinen bei natürlichem und synthetischem Huperzin A vergleichbar zu sein.

Die Verwendung von Huperzin in Kombination mit Ademetionin und Vitamin B12 mit ihrer Synergie in der Prävention der Vorstadien der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) und bei der Therapie der manifesten Alzheimer-Krankheit mit spätem

Beginn (LOAD), bestehend aus epigenetisch vermitteltem Gehirnzellschutz durch Ademetionin und VitaminBi2 und die Kombination aus Ademetionin und VitaminBi2 mit Huperzin A, ergibt zusätzlich eine bessere Überlebensfähigkeit der Zellen durch Schutz vor oxydativem Stress. Die Neuroprotektion durch die Kombination von Ademetionin, Vitamin B12 und Huperzin A wird durch diese Erfindung hier erstmals beschrieben.

Ademetionin wird auch als Ademetionina; Ademetionine; Ademetioninum; (S)-Adenosyl-L-methionin;(S)-5'-[3-Amino-3-carboxylatopropyl); methylsulfonio]-5'-desoxyadenosin; (±)-5'~ [(R*)-[(R*)-3-Amino-3-carboxypropyl] methylsulfonio]-5'-desoxyadenosin hydroxide, inner salt; (S)-2-Amino-3-[5'-(desoxyadenosin-5yl) methylsulfonio] butyrate und als Ademetionin-tosilat-bis(sulfat) bezeichnet. Weiter Bezeichnungen, Synonyme und Firmennamen finden sich in der Summary of Data for Chemical Selection, S-Adenosylmethionine, 29908-03-0, p.l.

Abgesehen von Wasser, ist Ademetionin nach dem Adenosintriphosphat das zweithäufig vorkommende

Stoffwechselmolekül im menschlichen Körper. Ademetionin ist daher ein ubiquitär im Organismus vorkommender physiologischer Wirkstoff, der an verschiedensten Stoffwechselprozessen wie der Transsulfurierung und der Aminopropylierung und in der Biosynthese von Hormonen und Neurotransmittern (Serotonin, Noradrenalin und Dopamin) beteiligt ist und am aktiven Methylgruppen-Transfer im Cl-Zyklus teilnimmt.

So ist Ademetionin ein wichtiger Methyl-Gruppen-Donor im Cl-Metabolismus. Ademetionin wird mittels der R-Methyltransferase zu (S)-Adenosylhomocystein, welches dann schnell zu Homocystein metabolisiert wird. (S)- Adenosylhomocystein ist ein leistungsfähiger kompetitiver Inhibitor der meisten Methylierungsreaktionen und das Verhältnis von Ademetionin zu (S)-Adenosylhomocystein regelt die Aktivität der R-Methyltransferase [Bottiglieri et al., 1994]. (S)- Adenosylhomocystein spaltet

Adenosin ab und wird über L-Homocystein und L-Methionin wieder zu S-Adenosyl-L-Methionin regeneriert. Der Abbau von Homocystein zu Methionin wird durch das Enzym Methioninsynthase (5-Methyltetrahydrofolat-Homocystein-Cystein-Transferase) und dessen Kofaktor Methylcobalamin katalysiert und wird so zur disponiblen Ademetionin Produktion gebraucht.

Die Ademetionin Biosynthese scheint mit zunehmendem Alter geringer zu werden und die verminderte Ademetionin-Produktion wird u. a. mit vorzeitigem Altern, der Demenzentwicklung und der Depression in Zusammenhang gebracht [Mischoulon D. et al., (2002). Am J Clin Nutr,76 (suppl):1158S-61S.].

Zahlreiche Studien haben von einem beschleunigten Anstieg der Mao-B-Gen-Aktivität innerhalb der Plättchen und in den Hippocampi von Patienten bei Alzheimer-Krankheit berichtet [Adolfsson r. et al. , (1980). Life Sei, 22;27(12):1029-34.], [Grunblatt E. et al.,(2005). Neurobiol Aging, 26 (4):429-38.], (Robinson D.S. et al.,(1971). Arch Gen Psychiatry, 24(6):536-9] und [Jossan S.S. et al.,(1991). Neuroscience, 45(1):1-12.].

Erhöhte Mao-B Expression ist ein Risikofaktor für das Prodromalstadium und für die Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) und führt zu einer erhöhten ß-Amyloidbeladung der Gehirne [Carter S.F.et al., (2012). J Nucl Med, 53(1):37-46.]. Die in den Astrozyten reichlich vorhandene Mao-B ist bei Alzheimer-Krankheit vom spätem Beginn (LOAD) zur Anzahl an aktivierten Astrozyten verstärkt exprimiert [Gulyas B. et al., (2011). Neurochem Int, 58(1):60-8.]. MAO-B metabolisiert den chemischen Botenstoff Dopamin und dieser ist selbst für die Gehirnzellen ein endogenes Neurotoxin [Hastings TG., (2009). J Bioenerg Biomembr, 41:469-472.].

Die durch Mao-B verursachte oxidative Desaminierung von Dopamin führt zur Freisetzung von Ammoniak, Aldehyden und Wasserstoffperoxid im Zytoplasma. Wasserstoffperoxid wird in das äußerst aggressive Hydroxyl-Radikal gespalten (Fenton Reaktion). Hydroxyl-Radikale verursachen Strangbrüche und Basenmodifikationen und ROS (reactive oxygen species), die die Zerstörung von Makromolekülen, wie Lipide, Nukleinsäuren, Proteine und Kohlenhydrate in den Gehirnzellen verursachen.

Die morphologischen Folgen der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) sind Zytoskeletts-Veränderungen (neuritische Plaques, Neurofibrillendegeneration) mit Bildung doppelhelixartiger Filamente aus abnorm hyperphosphorylierten, Mikrotubulus-assoziierten Tau-Protein-Triplets und der Nachweis von ß-Amyloid-Ablagerung (Aß) außerhalb der Nervenzellen in Form seniler Plaques und in den Blutgefäßen.

Ebenso sind die Presenilinl- und APP- Gene, die für die Produktion von Beta-Amyloid (Aß)-Fragmenten der Alzheimer-Krankheit vom spätem Beginn (LOAD) verantwortlich sind, durch Promotoren-Methylierung reguliert [Fuso A. et al., (2011). Neurobiol Aging, 32(7):1192-5.), [Wang S.0.,(2008). PLoS One;3(7):e2698.].

Eine Supplementierung von Ademetionin wirkt im Zellkulturmedium dem amyloidogenen Stoffwechselweg durch Hypermethylierung der Promotoren von Presenilin 1 und BACE 1 (ß-site amyloid precursor protein- Gen), durch Abnahme ihrer Expression und ihrer amyloidogenen Aktivitäten entgegen [Fuso A. et al., (2012). Neurobiol Aging, 4.], [Fuso A. et al.,(2005). Mol Cell Neurosci, 28(1):195-204.].

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Kombination von Ademetionin, gegebenenfalls in Form seiner Salze und Vitamin B12, gegebenenfalls in Form seiner

Salze, zur Inaktivierung der Gen-Expression für Mao-B, als Genprogrammierung ohne Gensequenzveränderung, durch biologische DNA-Methylierung, da die kombinierte Gabe von Ademetionin und Vitamin-Bi2 durch vermehrte Bereitstellung von Methylgruppen zur transkriptioneilen Hemmung von CpG Inseln am Promoter der Mao-B führt. S-adenosyl-L-methionin disulfat Tosylat, das S-Adenosyl-L-methionin disulfat p-toluen-sulfonat und das Butan disulfanat Salz und das Tri-p-toluolsulfonsäure Salz von (S)-Adenosyl-L-methionin gelten als stabile Salze bei Ademetionin-Supplementation und sind in den US3954726 und US4057686 beschrieben [Cowley &

Underwood,1999; Czap, 1999].

Ademetionin disulfat Tosylat besteht aus Disulfat-Tosylat- Salz gemischt mit den Diastereoisomeren des Ademetionin-Ions. Es enthält nicht weniger als 95,0 Gew.-% und nicht mehr als 105,0 Gew.-% von Ademetionin als Anhydrid [Revision Bulletin, Official March 1,2010. The United States Pharmacopeial Convention],

Die meisten Ademetionin-Salze sind hygroskopisch und zerfallen schnell bei Feuchtigkeit. Ademetionin ist bei Raumtemperatur instabil [Summary of Data for Chemical Selection, S-Adenosylmethionine, 29908-03-0]. Die Salze des US3893999 sind stabil bis 25° Celsius und jene der Patente US3954726 und US4057686 bis 45° Celsius.

Vitamin B12 wird auch als Cyanocobalamin oder Cobalamin bezeichnet. Weitere Synonyme sind: Antiperniciosa- Faktor, Cianocobalamina, Cyanocobalamine, Cyanocobalaminum, Cycobernium, Zyanokobalamin und Alpha-(5, 6-Dimethylbenzimidazolyl) cobamidcyanid.

Zu den Vitamin-Bi2-Derivaten gehören insbesondere Cobalamine, in denen die Cyanogruppe des Cyanocobalamins durch andere Koordinationspartner des Cobalts ersetzt ist. Hierzu zählen vor allem Hydroxocobalamin, Aquocobalamin, Nitrosocobalamin, Methylcobalamin und das Adenosylcobalamin (Koenzym B12) .

Zu den physiologisch akzeptablen Salzen von Vitamin Bi2 bzw. Vitamin- Bi2-Derivaten gehören insbesondere Säureadditionssalze mit anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure oder organische Säuren, wie Carbonsäuren zum Beispiel Essigsäure, Weinsäure, Milchsäure, Zitronensäure, Apfelsäure, Mandelsäure, Ascorbinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Gluconsäure oder Sulfonsäuren, wie zum Beispiel Methansulfonsäure, Benzolsulfonsäure und Toluolsulfonsäure, und dergleichen. Insbesondere ist das Acetat des Hydoxocobalamins zu nennen.

Die Plasmakonzentration gibt Auskunft über den Vitamin-Bi2-Status. Die Halbwertszeit im Plasma, wo es zum größten Teil an Transcobalamin II, einem ß-Globulin, gebunden ist, beträgt 5 Tage. Die täglich empfohlene Zufuhr von 3,0 pg Vitamin-Bi2/Tag ist für einen optimalen Vitamin-Bi2- Spiegel unzureichend. Darüber hinaus ist die Vitamin-Bi2-Resorption im Dünndarm bei älteren Menschen mit atropher Magenschleimhaut durch eine herabgesetzte Intrinsic-Faktor (Castle factor, ein Glykoprotein)-Bildung vermindert. Vitamin Bi2 Mangel findet sich insbesonders bei Personen mit chronischer Magenschleimhautentzündung, nach Teil- oder Totalresektion des Magens, bei nutritivem Mangel wie bei veganer Ernährung und bei schweren entzündlichen Veränderungen im unteren Dünndarm, wo die Absorption des Vitamin Bi2-Intrinsic Factor-Komplexes verhindern ist.

Das Vorhandensein des Vitamin Bi2-Intrinsic Factor-Komplexes (IF kann 1,5-3 mcg Cobalamin anlagern) und die Freisetzung von Vitamin Bi2 aus der Bindung an R-Binder (Haptocorine) sind die limitierenden Faktor für die Vitamin Bi2-Resorption im Dünndarm und infolge für den Vitamin Bi2 Plasma-Spiegel. Wenn die Bindungs- und Speicherkapazitäten durch hochdosierte Vitamin Bi2- Zufuhr überschritten werden, wird der nicht retinierte Anteil von Vitamin Βχ2 im Urin ausgeschieden. Ebenso geht der Retentionseffekt bei Langzeittherapie verloren.

Die Aufnahme von Vitamin B12 wird durch folgende Arzneimittel behindert: Colestyramin, Neomycin, p-Axninosalicylsäure (PAS), Biguanide, Kaliumchlorid, orale Kontrazeptive und Antikonvulsiva. Zumischungen von Oxidationsmitteln führen zu Wirkverlust des Vitamins B12 [Solov'eva M.E. et al., (2007)], [Arzneistoff-Profile. Basisinformation über arzneiliche Wirkstoffe, Cy/Es. Govi-Verlag GmbH Pharmazeutischer Verlag, Frankfurt am Main].

Es wurde eine Korrelation zwischen Plasma Bi2-Spiegel und Thrombozyten-MaoB-Gen Aktivität bei Patienten bei Alzheimer-Krankheit vom spätem Beginn (LOAD) beobachtet, wobei je niedriger die Vitamin Βχ2 -Spiegel waren, umso höhere MaoB-Protein Aktivitäten gemessen werden konnten. Nachfolgende Bi2-Gabe reduzierte die Thrombozyten-MaoB-Gen-Aktivität bei diesen Patienten signifikant, fast zu Normalwerte [Regland B. et al., (1991). Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci,240(4-5):288-91.].

Ademetionin und Vitamin Βχ2 sind hinlänglich bekannt und können bezogen oder in an sich bekannter Weise zur Verfügung gestellt werden.

Es beziehen sich angegebene Mengenverhältnisse auf Gewichtsmengen der Wirkstoffe Vitamin Βχ2 und Ademetionin, so dass für Salze erforderlichenfalls eine entsprechende Umrechnung zu erfolgen ist.

Neben den Ademetionin-, Vitamin B12- und Huperzin- Komponenten können die erfindungsgemäßen Mittel weitere Wirkstoffe mit einbeziehen. Bei diesen Wirkstoffen kann es sich insbesondere um solche handeln, deren Wirkung der Vitamin B12- vermittelten Wirkung ähnlich ist oder diese unterstützt und ergänzt und die insbesondere den erfindungsgemäßen Verwendungszwecken entspricht.

So kann es von Vorteil sein, zusätzlich zur erfindungsgemäßen Kombination von Ademetionin, Huperzin und Vitamin Bi2, Metabolite aus dem Folat-Zyklus zu verabreichen. Hierzu zählen die Folsäure selbst (Pterolylglutaminsäure), 7,8-Dihydrofolat, 5,6,7,8-Tetra-hydrofolat (Koenzym und die eigentlich vitaminwirksame Form) und das 5-Methyltetrahydrofolat. Folate nehmen im menschlichen Organismus als Koenzyme und Methyl-Gruppen-Donatoren eine zentrale Rolle im Metabolismus von Aminosäuren, Purinen und Thymidin ein. Sie sind so von besonderer Bedeutung im Aminosäure- und Purin-Stoffwechsel.

Die Gene, die für die Produktion von Beta-Amyloid (Aß)-Fragmenten bei Alzheimer-Krankheit vom spätem Beginn (LOAD) verantwortlich sind, sind über Promotor-Methylierung reguliert.

Die epigenetische Regulation der jeweiligen Gene hängt von der zellulären Verfügbarkeit von Folsäure und Vitamin Bi2 ab [Chouliaras L. et al., (2010). Prog Neurobiol, 90(4):498-510] und Fuso A. et al.,(2011). Neurobiol Aging, 32(7):1192-5].

Es wurde nun experimenteller Weise festgestellt, dass eine Zusammensetzung, die als ihre charakterisierenden Komponenten eine Kombination aus: (a) inneres Salz von S-Adenosyl-L-Methionin oder eines seiner pharmakologisch annehmbaren Salze; (b) inneres Salz von Cobalamin oder eines seiner pharmakologisch annehmbaren Salze und (c) einem Huperzin vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Huperzin A, Huperzin B und Gemischen oder Prodrug und / oder ein Derivat davon in einer Form eines pharmazeutisch verträglichen Salzes sind.

Vorzugsweise, als Beispiel, ist das Gewichts-Gewichts-Verhältnis der Komponenten (a) zu (b) zu (c) im Bereich von 400 : 0,025 : 0,05.

Die erwünschten Dosierungsbereiche für Ademetionin, Vitamin Bi2 und Huperzin Ά sind:

Die Erfindung betrifft die Herstellung von Mitteln. Zu den Mitteln gehören insbesondere pharmazeutische Mittel und Lebensmittel, wobei das Lebensmittel ein Nahrungsergänzungsmittel (dietary supplement), ein funktionelles Lebensmittel (functional food, medical food), ein diätetisches Lebensmittel für besondere medizinische Zwecke oder ein neuartiges Lebensmittel (novel food) sein kann. Die erfindungsgemäßen Lebensmittel besitzen neben einer vorwiegend nährwertbezogenen Funktion zusätzlich eine wirkstoffbezogene Funktion, welche.die erfindungsgemäße Wirkstoffkombination betrifft. Sie werden daher als funktionale oder diätetische Lebens- oder Nahrungsmittel bezeichnet. Nahrungsergänzungsmittel dienen zur Ergänzung der täglichen Ernährung mit der erfindungsgemäßen Wirkstoffkombination, wobei die nährwertbezogene Funktion des Nahrungsergänzungsmittels für sich genommen in den Hintergrund tritt.

Die Zusammensetzung, die Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist, kann entweder als Gesundheitsnahrungsmittel oder als Nahrungsergänzungsmittel mit hauptsächlich epigenetischer und zellprotektiver/neuroprotektiver Wirkung und als Arzneimittel in der Prävention bei den Prodromen der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD), als Mild Cognitive Impairment (MCI) bezeichnet, und/oder Behandlung von Alzheimer-Krankheit mit spätem

Beginn (LOAD ) infolge der synergistischen Wirkung, die durch die Komponenten des Kombinationspräparates ausgeübt wird, und damit den präventiven und therapeutischen Effekt verbessert, verwendet werden.

Der Anteil der Wirkstoffkombination an der Formulierung ist größer als ein gegebenenfalls in natürlichen Quellen, insbesondere Lebensmitteln vorhandener Anteil. In diesem Sinne sind die erfindungsgemäßen Mittel im Hinblick auf die Wirkstoffkombination angereichert.

Physiologisch akzeptabel sind die im Bereich der Pharmazie, der Lebensmitteltechnologie und angrenzenden Gebieten bekanntermaßen verwendbaren Hilfsstoffe, insbesondere die in einschlägigen Arzneibüchern (z.B. Ph. Eur., ÖAB, DAB, BP, USP/NF, JP), als Qualitätsstandards (Monographien) für Wirkstoffe und Hilfsstoffe gelisteten und auch andere Hilfsstoffe, deren Eigenschaften einer physiologischen Anwendung nicht entgegenstehen. Hilfsstoffe im erfindungsgemäßen Sinne können auch einen Nährwert besitzen und deshalb allgemein als

Nahrungskomponente verwendet werden. Auch Nährstoffe, insbesondere essentielle Nährstoffe, können dazu gehören.

Geeignete Hilfsstoffe können sein: Netz- und Dispergiermittel, Eumulgatoren, Waschrohstoffe und Solubilisatoren, die grenzflächenaktive Verbindungen sind. Konservierungsmittel, wie u.a. Phenole, quartäre

Ammoniumverbindungen, Carbonsäuren, die Wahl richtet sich nach den Wirk- und Hilfsstoffen und nach der Herstellungsart und Zubereitungsform. Antioxidantien, die in niedrigen Konzentrationen Oxidationsprozesse verhindern, die Autoxidation hemmen oder unterbrechen, wie L-(+)-Ascorbinsäure, L-(+)- Ascorbylpalmitat, Butylhydroxyanisol, Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), Natriumascorbat, Natriummetabisulfat, Propylgallat und DL-Alpha-Tocopherol. Lösemittel und Lösungsvermittler dienen zur

Herstellung homogener Lösungen, die physiologisch unbedenklich sind, wie Cyclodextrine, Ethanol, Ethyloleat, Glycerol, Isopropylalkohol, Isoropylmyristat, Oleyloleat, Propylenglykol und Wasser. Tabletten-Hilfsstoffe, wie Bindemittel zur Verklebung der Pulverpartikel, um zum Granulat übergeführt, fließfähiger und verpressbarer zu sein. Bindemittel können natürliche Polymere (Acaciae Gummi als Suspensionsstabilisatoren, Gelatine, Kollagen aus Rinderknochen, Häuten und von Fisch und Geflügel, Natriumalginat als Gelbildner, Stärke, verkleisterte Stärke, Tragant als Gelbildner), halbsythetische Polymere (Dextrine, Hydroxyethylcellulose als Gelbildner, Hydroxypropylcellulose und Hydroxypropylmethylcellulose als Filmbildner, Methylcellulose, Na-Carboxymethylcellulose), synthetische Polymere (Polyethylenglykole) Macrogol, Carbowax®, als Binde- und Füllstoffe oder Schmiermittel und z.B. als Polyethylenglykol 6000 zur Tablettenbeschichtung verwendet, als Polyvinylalkohol als Gelbildner, Polyvinylpyrrolidon, Polymere mit verzögerter Wirkstofffreisetzung (Ethylcellulose, Polyacrylat/-methacrylate oder Polyvinylacetat als Filmbildner) und sonstige Bindemittel mit verzögernder Wirkstofffreisetzung (Fette und Wachse, Fettalkohole, Stearinsäure, hydriertes Ricinusöl) in Lösungsmittel, vornehmlich Wasser, sein. Füll- und Bindemittel für Tablettierung, um die Tablette auf das geforderte Gewicht zu bringen, sind löslichen Füll-und Bindemittel, wie Glucose,

Lactose, Mannit, Saccharose, Sorbit und unlösliche Füll-und Bindemittel wie Calciumcarbonat, Calciumsulfat, mikrokristalline Cellulose, Dicalciumphosphat, teilabgebaute Stärke, Tricalciumphosphat und pyrogenes Siliciumdioxid. Gleitmittel, zur internen Schmierung der Tablettenmasse, können wasserunlösliche Gleitmittel (Calciumarachinat, Glycerolpalmitostearat, Magnesiumstearat, Natriumstearylfumarat, hydriertes Ricinusöl, Stearinsäure, Talkum, Triglyceride) und als wasserlösliche Gleitmittel (Fumarsäure, Natriumbenzoat und Polyethylenglykol) sein. Die wichtigsten Sprengmittel, die den raschen Zerfall der

Tablette in das Granulat bzw. die Primärpartikel bewirken, sind Alginsäure, Bentonit, Calciumcarboxymethylcellulose, quervernetzte Carboxymethylcellulose, mikrokristalline Cellulose, Guar Gummi, niedrigsubstituierte und quervernetzte Hydroxypropylcellulose, Ionenaustauscher, Natriumcarboxymethylstärke, quervernetztes Polyvinylpyrrolidon, Stärke und teilabgebaute Stärke. Säuren und Salze, wie Bernsteinsäure, Zitronensäure, Kaliumcitrat,

Milchsäure, Natriumchlorid, Natriumcitrat, Natriumhydrogencarbonat und Weinsäure kommen zur Anwendung. Lebensmittel- Farbpigmente werden häufig als Färbemittel (Eisenoxide) und Opakisierungsmittel (Titandioxid) eingesetzt und werden vor allem aus der Liste A (I) und (II) bezüglich ihrer toxikologischen Eigenschaften ausgewählt. Weichmacher, die zur Rückhaltung von Feuchtigkeit z.B. bei Weichgelatinekapseln, wie Glycerol, Propylenglycol und Sorbit und auch zur Erhöhung der Elastizität von Polymerfilmen in der Filmdragierung dienen, wie acetylierte Fettsäureglyceride, Acetyltributylcitrat, Acetyltriethylcitrat, Dibutylphthalat, Dibutylsebacat, Diethylphthalat, Diethylsebacat,

Glyceroltriacetat, Tributylcitrat und Triethylcitrat. Natives Albumin mit Polymeren mit verzögertem Freisetzungsprofil.

Beispiele von Polymeren, die gegebenenfalls in den Trägern zusätzlich zu nativem Albumin enthalten sein können, umfassen, ohne Einschränkung, Polymere, wie Cellulosederivate (zum Beispiel Ethylcellulose, Methylcellulose , Hydroxypropylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Hydroxyethylcellulose, Hydroxyethylmethylcellulose, Carboxymethylcellulose); Polyacrylamide; (Meth) acrylsäure- (Meth) acrylat-Copolymere, wie Poly (methacrylsäure-co-methylmethacrylat) und Poly (methacrylsäure-co-ethylacrylat) (zum Beispiel Eudragit® L-Copolymere); Poly (ethylenoxid) und Copolymeren davon, wie Poloxamere (Poly (ethylenoxid-co-propylenoxid)); Polysaccharide (z.B. Alginat, Arabinogalactan, Chitosan); und Proteine (d.h. andere als natives Albumin). Süßungsmittel und

Zuckeraustauschstoffe. Zur Herstellung von Pseudolatices befinden sich im Handel sowohl gebrauchsfertige wässrige Latexdispersionen z. B. die Polyacrylatdispersion Eudragit® NE 30 D oder die Polyvinylacetatdispersion Kollicoat® SR 30 D als auch wässrige Pseudolatexdispersionen z. B. die Ethylzellulosedispersionen Aquacoat® ECD und Surelease®, die

Zelluloseacetatphthalatdispersion Aquateric® oder die Polyacrylatdispersionen Eudragit® R 30 D und Eudragit® RS 30 D.

Als Porenbildner wird eine weite Palette von Hilfsstoffen verwendet. Häufig eingesetzt werden hydrophile Polymere z. B. Hydroxypropylmethylzellulose (HPMC), Polyethylenglycol (PEG), Polyvinylpyrrolidon (PVP) [Bodmeier et al., 1989; Elchidana et al., 1999; Verma et al., 2003]. Aber auch niedermolekulare Zucker und Zuckeralkohole (zum Beispiel Mannitol, Saccharose, Laktose und Sorbitol) finden Verwendung [Shivanand et al., 1998; Bodmeier et al., 1990; Muhammad et al., 1991]. Auch pH-abhängig leicht lösliche Salze (zum Beispiel Natriumchlorid, Kalziumcarbonat, Kalziumsulfat) und oberflächenaktive Substanzen (zum Beispiel Natriumlaurylsulfat und Nonoxynol 100) werden eingesetzt [Lin et al., 2001; Elchidana et al., 1999]. Durch die Kombination von Pektin und Eudragit® RS bzw. Eudragit® RL / Eudragit® NE wurden Filmüberzüge gewonnen, aus denen Pektin verstärkt durch spezifische pektinolytische Enzyme herausgelöst werden [Semde et al., 1998; 2000]. Ziel solcher Formulierungen ist die zielgenaue Wirkstofffreisetzung im Kolon. Auch kann durch pH-abhängig lösliche Polymere, die als Porenbildner eingesetzt werden, eine gezielte pH-abhängige Permeabilität der Polymermembran erreicht werden [Lecomte et al., 2003]. Antiklebemittel sind Talkum, Glycerolmonostearat und Magnesiumstearat.

Filmbildner werden zum Überziehen von Tabletten, Granulaten, Pellets, Kristallen und Pulver verwendet. Chemisch sind alle Filmbildner Polymere natürlichen, halbsynthetischen oder synthetischen Ursprungs. Als magensaftresistente Überzugsmaterialien können unter anderen Celluloseacetatphthalat, Hypromellose Acetat Succinat, Hypromellosephthalat,

Methacrylsäure-Ethylacrylat-Copolymer, Methacrylsäure-Methacrylat-Copolymer, Poly (Methylacrylat-co-Methyl-methacrylat-co-Methacrylsäure) oder Polyvinylacetatphthalat verwendet werden. 30%-iges Methacrylsäure-Ethylacrylat Copolymer (1:1), EUDRAGIT® L 30 D-55, wird zur magensaftresistenten Befilmung und zur Targetierung, einer zielgerichteten pH Wert-gesteuerten Freisetzung der Wirkstoffe, verwendet. Dimitrov et al. (1999) konnten die Wirkstofffreisetzung aus Polyethylenmatrices in künstlichem Darmsaft durch die Inkorporation von magensaftunlöslichen Polymeren (Eudragit® L; Eudispers hv und Carbopol® 934) erhöhen. Eine Senkung des Mikro-pH-Wertes in HPMC Matrix- Tabletten wurde nach dem Zusatz des magensaftresistenten Polymers Eudragit® L 100-55 gemessen. Diese Senkung des Mikro-pH-Wertes bewirkte eine Beschleunigung der Arzneistofffreisetzung bei pH 6,8 [Tatavartiet al., 2004]. Takka et al. (2001) untersuchten den Einfluss verschiedener anionischer Polymere (Eudragit® L 100-55, Eudragit® S und Natriumcarboxymethylzellulose) auf die Wirkstofffreisetzung aus

Hydroxypropylmethylzellulose (HPMC)-Matrixtabletten. Eine pH-unabhängige Wirkstofffreisetzung des pH-abhängig löslichen Wirkstoffs wurde durch Zusatz von Eudragit® L 100 55 zu HPMC-Matrixtabletten erreichten. Eine pH-unabhängige Arzneistofffreisetzung wurde aus hydrophilen HPMC / Natriumalginat-Matrixtabletten erzielt. Bei niedrigen pH Werten bildet sich aus dem protonierten Alginat ein Gel, was die Erosion der Matrix verlangsamt. Bei höheren pH-Werten löst sich das Natriumalginat und erleichtert damit die Erosion [Timmins et al., 1997]. Durch Mischungen aus wasserunlöslicher Ethylzellulose (EC) und magensaftresistenten Polymeren (Hydroxypropylmethylzelluloseacetatsuccinat (HPMCAS) bzw. Methacrylsäureethylacrylat-Copolymer (Eudragit® L)), wurden verschiedenste Freisetzungsprofile bei unterschiedlichen pH-Werten erzielt [Lecomte et al., 2003; 2004a].

Beispiele geeigneter pharmazeutischer Formulierungen sind feste Arzneiformen, wie Pulver, magensaftresistente Pellets/Granulate und Pellets/Granulate in Retardarzneiform (ER-Formulierungen), Tabletten, insbesondere magensaftresistente Filmtabletten, Pastillen, Sachets, Stickpacks, Dragees, Kapseln, wie Hart- und Weichgelatinekapseln, Plantcaps, Kapseln aus Fischgelatine, magensaftresistente DRcaps und DuoCap Kapseln und transdermal therapeutische Matrixpflaster.

Orale multipartikuläre (multiple unit) Arzneiformen finden als diskrete Untereinheiten Granulate, Minitabletten,

Mikropartikel und besonders Pellets, die in Kapseln oder Sachets oder Stickpacks abgefüllt oder zu Tabletten gepresst werden können, Verwendung [Vergote et al., 2002].

Die Formulierungen werden vorzugsweise auf oralem, sie können aber auch insbesondere im Bereich der Arzneimittel auf rektalem, transdermalem, subkutanem, intravenösem, intramuskulärem, über die Mundschleimhaut oder über den Nasalschleimhaut Weg verabreicht werden.

Bei der Herstellung der Zusammensetzungen werden die Wirkstoffe gewöhnlich mit einem geeigneten Hilfsstoff, in diesem Fall auch als Exzipient bezeichnet, vermischt oder verdünnt. Exzipienten können feste, halbfeste oder flüssige Materialien sein, die als Vehikel, Träger oder Medium für den Wirkstoff dienen. Die Zumischung weiterer Hilfsstoffe erfolgt erforderlichenfalls in an sich bekannter Weise. Es können Formgebungsschritte, gegebenenfalls in Verbindung mit Mischvorgängen, durchgeführt werden, z.B. eine Granulierung, Pelletierung, Komprimierung und ähnliches.

Insbesondere können die Wirkstoffkomponenten gemeinsam formuliert werden. Sie können aber auch zunächst getrennt verarbeitet und anschließend in einer kompartimentierten z.B. mehrschichtigen Arzneiform zusammengeführt werden. Dadurch kann möglichen Wirkstoffinkompatibilitäten und unterschiedlichen Wirkstoffeigenschaften, wie Bioverfügbarkeit, Stabilität, Löslichkeit und ähnlichem, Rechnung getragen werden.

Die vorliegende Erfindung wird anhand der nachfolgenden Beispiele näher erläutert, ohne darauf beschränkt zu sein.

Die zusammengesetzte Arzneiform besteht aus: - Vitamin B12 in Pulverform (Methylcobalamin, Hydroxocobalamin-, Cyanocobalamin-, Aquocobalamin-Salze als Hydrat, Acetat oder Sulfat), - Ademetionin (in Pulverform als Ademetionintosylatdisulfat (= S-Adenosyl-L-Methionin-disulfat-tosylat) oder S-Adenosyl-L-Methionin 1,4-Butanedisulfonat) in DRcaps, Tabletten,

Sachets, Stickpacks, als Pellets mit magensaftfestem Coating und Coating für eine Retardarzneiform (ER-Formulierungen) oder als Transdermal Therapeutisches System und - Huperzin in Pulverform bestehend aus Huperzin A, Huperzin B und Gemischen davon.

Beispiele: 770 mg S-Adenosyl-L- Methionin 1,4-Butanedisulfonat entsprechend 400 mg Ademetionin

Hydroxocobalaminacetat entsprechend 25 pg Hydroxocobalamin

50 pg Huperzin A L) Beispiel für Ademetionin + Huperzin A in DRcaps Kapseln S-ADENOSYL-METHIONIN (Ademetionin) USP 400 mg HUPERZIN A 50 mcg SILICIUMDIOXID 5 mg MAGNESIUMSTEARAT EP, FCC 5 mg in magensäureresistenten DRcaps Kapseln 75 mg 2) Beispiel für Vitamin B12 in HPMC Kapseln METHYLCOBALAMIN Hydrat (98% aktives Vit. B12) 0,026 mg MAISSTÄRKE (Maydis amylum) 123 mg MALTODEXTRIN 123 mg in HPMC Kapsel 75 mg

3) Herstellungsverfahren am Beispiel für Ademetioninpellets in Kombination mit Vitamin Βχ2 und Huperzin A

Das Produkt wird gemäß Good Manufacturing Practice für pharmazeutische Produkte (GMP) hergestellt.

Herstellung der Ademetioninpellets: 1) Zuckerkügelchen werden unter Verwendung eines Wirbelschichtgranulators mit einer Lösung von

Ademetionindisulfattosylat und geeigneten Hilfsstoffen besprüht.

Danach werden die Pellets in einem Wirbelschichtgranulator getrocknet. 2) Beschichtung der Pellets im Wirbelschichtgranulator als Coating für eine der Retardformen (sustained release (SR), extended release (ER, XR))

Als retardierende und magensaftresistente Überzugsmaterialien für Pellets können unter anderen verwendet werden:

Aquacoat ECD (Ethylcellulose) retardierend

Aquacoat CPD (Celluloseacetatphthalat) magensäureresistent

Surelease (Ethylcellulose) versch.

Typen

Methocel (Celluloseether) versch.

Typen

Sureteric (Polyvinylacetat-phthalat) versch.

Typen

Acryl-Eze II (enthält auch Eudragit L100-55) magensäureresistent & retardierend

Eudragit L100-55 magensäureresistent & retardierend Eudragit RS 100 magensäureresistent & retardierend

Abhijit Sonje et al.: COMPREHENSIVE REVIEW ON EUDRAGIT POLYMERS. Int. Res. J. Pharm. 2013, 4 (5)

Es können auch Mischungen verschiedener Überzugsmaterialien eingesetzt werden.

Danach werden die Pellets in einem Wirbelschichtgranulator getrocknet. 3) Beschichtung der Pellets als Coating zum Schutz vor der Einwirkung der Magensäure:

Eine Suspension aus einem geeignet Überzugsmaterial wird auf die Pellets unter Verwendung eines Wirbelschichtgranulators aufgesprüht.

Als Überzugsmaterial für magensaftresistente Pellets können unter anderen verwendet werden:

Celluloseacetatphthalat, Hypromellose Acetat Succinat, Hypromellosephthalat, Methacrylsäure-Ethylacrylat-Copolymer, Methacrylsäure-Methacrylat-Copolymer, Poly (Methylacrylat-co-Methyl-methacrylat-co-Methacrylsäure) oder Polyvinylacetatphthalat verwendet werden. 30%-iges Methacrylsäure-Ethylacrylat Copolymer (1:1), EUDRAGIT® L 30 D-55

Nach Bestimmung des Ademetioningehalts der Pellets wird das Gewicht der einzuwägenden Pellets pro Dosiseinheit bestimmt.

Vitamin B12

Eine Pulvermischung aus dem Vitamin B12 - Salz und geeigneten Hilfsstoffen wird vorbereitet.

Huperzin A

Eine Pulvermischung aus dem Huperzin A - Salz und geeigneten Hilfsstoffen wird vorbereitet.

Herstellung des Endprodukts:

Die Menge an Ademetionin-haltigen Pellets und die Mengen an Vitamin B12 -haltigen und Huperzin A- haltigen Pulvermischungen berechnet pro Dosiereinheit, wird dann nach Zusatz geeigneter Hilfsstoffe in a) Stickpacks oder Sachets abgefüllt oder b) in geeignete Kapseln unter Verwendung einer Kapselfüllmaschine gefüllt und verschlossen oder c) zu Tabletten verpresst.

Als Hilfsstoffe können unter anderem verwendet werden: Füllmittel und Bindemittel : z.B. Laktose, Mannit, Cellulose, Povidone, Polyvinylakohol, Carbopole, hochdisperses Siliciumdioxid, Maisstärke

Umhüllungsmaterialien : z.B. Methylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Hydroxypropylcellulose, Carbomymethylcellulose, Ethylcellulose

Sowie Hilfsstoffe zur Fließregulierung, Sprengmittel, Porenbildner, Gleitmittel z.B. Magnesiumstearat

Verpackung

Die Verpackung muss Schutz vor Feuchtigkeit gewährleisten.

Dies wird durch das Abfüllen der Pellet/Pulvermischung in Einzeldosissachets und Stickpacks, Befüllen luftdichter Blister mit Tabletten oder Kapseln oder durch das Zupacken von Trocknungsmittel zu nicht einzeln und luftdicht verpackten Kapseln, Tabletten oder Dragees in Behältern erreicht.

AUSFÜHRUNGSBEISPIEL

Der synergistische Effekt, der mit einer Kombination aus Ademetionin, Vitamin B12 und Huperzin A erreicht wird, wurde in einem Zelllinien- Modell, das nachstehend beschrieben ist, bewiesen, wobei dieses so gewählt wurde, dass es für die praktische Verwendung der vorliegenden Zusammensetzung als Lebensmittel (Nahrungsergänzungsmittel oder diätetische Lebensmittel für besondere medizinische Zwecke) und als Medikament stark voraussagend ist.

Experiment mit der humanen Neuroblastoma Zelllinie SH-SY5Y 25 000 SH-SY5Y Zellen wurden in normalem DMEM/10% FCS Medium in 96-well Mikrotiterplatten ausgesät. Nach 24 Stunden wurden die Zellen für 44 Stunden mit verschiedenen Kombinationen von Huperzin A, Vitamin Bi2 und S-Adenosylmethionin (SAM) vorbehandelt, siehe Tabelle. Während dieser Zeit wurde das Medium nach 24 und 40 Stunden gewechselt. Danach wurden die Zellen für 23 Stunden mit 450 μΜ H202 oxydativ gestresst. Zuletzt wurde ein MTT Lebensfähigkeitstest durchgeführt. Zu 100 μΐ Medium wurden 10 μΐ MTT (5 mg/ml) zugegeben und 2 Stunden im C02 Inkubator bei 37°C inkubiert. Nach Entfernung des Überstandes wurden 100 μΐ DMSO zugegeben und die Absorption wurde bei 540 nm und 690 nm gemessen. Eine Subtraktion (Absorptionswert(540 nm) - Absorptionswert(69 nm)) ergab den Wert der Lebensfähigkeit der adhärenten Zellen (je niedriger der Wert, desto weniger lebende Zellen). In der Tabelle sind prozentuelle Relativwerte zu einer unbehandelten Kontrolle (Positivkontrolle) angegeben.

Ergebnis:

Eine Vorbehandlung mit 2 Dreier-Kombination-Varianten (10 oder 20 μΜ Huperzin A/150 μΜ SAM (S-Adenosyl-L-Methionin, Ademetionin)/15 μΜ Vitamin BX2) schützt die adhärenten humanen Neuroblastoma-Zellen vor oxydativem Stress, da keine Abnahme in ihrer Lebensfähigkeit festgestellt wurde. Sehr wohl wurde aber eine Abnahme der Lebensfähigkeit von Zellen festgestellt, die nur mit H202 behandelt wurden (59%).

RESULTATE normal medium: DMEM/iO%iCS pins folate, plus Vitamin Bl2 ; depleted medium; DMEK/10% PCS mifehoai folate; vitamin Bl2 pretreaemens wv.tr; hupsrzise a/titm&in Bl2/ SAM; medium change at 0 hours, 2ih, 40h

Claims (18)

1. ANSPRÜCHE 1. Kombinationspräparat enthaltend Ademetionin, Vitamin B12 und Huperzin zur Prävention der Prodromalstadien und Behandlung der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD) durch Neuroprotektion, dadurch gekennzeichnet, dass es (a) inneres Salz von Ademetionin oder ein pharmakologisch annehmbares Salz davon; (b) inneres Salz von Vitamin B12 oder ein pharmakologisch annehmbares Salz davon und (c) ein Huperzin enthält.
2. 2. Kombinationspräparat nach Anspruch 1, wobei Huperzin aus der Gruppe, bestehend aus Huperzin A, Huperzin B und Gemischen davon, ausgewählt ist.
3. 3. Kombinationspräparat nach Anspruch 1 und Anspruch 2, wobei das Huperzin in Form eine's Extraktes von Huperzia serrata vorliegt.
4. 4. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1 bis 3, wobei die erwünschten Dosierungsbereiche für Ademetionin, Vitamin Bi2 und Huperzin A so gewählt sind:
5. 5. Kombinationspräparat, dadurch gekennzeichnet, dass die Salze des Ademetionins das Ademetionindisulfattosylat oder das S-Adenosyl-L-Methionin 1,4-Butanedisulfonat sind.
6. 6. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1 -5, dadurch gekennzeichnet, dass es ferner Bindemittel, Lösemittel und Lösungsvermittler, Füllstoffe, Gleitmittel, Sprengmittel, Netz- und Dispergiermittel, Eumulgatoren, Waschrohstoffe, Solubilisatoren, Konservierungsmittel, Antioxidantien, wässrige Latexdispersionen, Weichmacher, Porenbildner, Pigmente, Antiklebemittel, magensaftresistente Polymere, organische Säuren und Gemische aus magensaftresistentem Polymer mit retardierendem unlöslichen Polymer enthält.
7. 7. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-6, dadurch gekennzeichnet, dass es eine orale Darreichungsform, bevorzugt als Gel in Tube, Pulver, Granulat, und / oder eine Suspension des Granulats in Wasser oder einem nichtwässrigen Medium, Pellet, Pille, TTS (Transdermal Therapeutisches System)-Matrixpflaster, Tablette, Filmtablette, Dragee, Kapsel, Stickpack oder Sachet ist.
8. 8. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-7, dadurch gekennzeichnet, dass es bei oraler Darreichung eine uni-oder multi-partikuläre Arzneiform ist, wobei Ademetionin als magensaftresistente und zugleich als Retardarzneiform in Pelletformulierung vorliegen kann.
9. 9. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-8 dadurch gekennzeichnet, dass Ademetionin, gegebenenfalls in Form seiner Salze, in einer Menge von 200 mg - 1200 mg enthalten ist.
10. 10. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-9, dadurch gekennzeichnet, dass Vitamin B12, bevorzugt als Hydroxocobalamin, gegebenenfalls in Form seiner Salze, in einer Menge von 25 meg - 1 mg enthalten ist.
11. 11. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-10, dadurch gekennzeichnet, dass Folsäure, gegebenenfalls in Form seiner Salze, in einer Menge von 0,4 - 5 mg enthalten ist.
12. 12. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-11 in der Verwendung zur Prävention des Prodromalstadiums einer Demenz vom Typ der Alzheimer-Krankheit mit spätem Beginn (LOAD), wobei der amnestische Single-Domain-Subtyp als auch der amnestische Multiple-Domain-Subtyp als Vorstufen gelten, die als Mild Cognitive Impairment (MCI) bezeichnet sind.
13. 13. Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-12 bewirkt einen epigenetisch vermittelten Gehirnzellschutz durch Ademetionin. Bei Kombination von Ademetionin, Vitamin B12 mit Huperzin A ergibt sich darüber hinaus durch Neuroprotektion eine bessere Überlebensfähigkeit der Zellen durch Schutz der Zellen vor oxydativem Stress.
14. 14. ) Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-13 zur Verwendung in der Behandlung der Alzheimer Krankheit mit spätem Beginn (LOAD).
15. 15., Kombinationspräparat nach den Ansprüchen 1-14, dadurch gekennzeichnet, dass Ademetionin, Vitamin-Bi2, Folsäure und Huperzin A in einer Tagesdosierung (siehe Tabelle) enthalten sind.
16. 16. Kombinationspräparat nach einem der vorangehenden Ansprüche, die in Form einer Nahrungsergänzung oral verabreichbar ist, wobei das Lebensmittel ein Nahrungsergänzungsmittel (dietary supplement), ein funktionelles Lebensmittel (functional food, medical food), ein diätetisches Lebensmittel für besondere medizinische Zwecke oder ein neuartiges Lebensmittel (novel food) sein kann.
17. 17. Kombinationspräparat nach einem der vorangehenden Ansprüche, die in Form eines Medikaments oral, parenteral oder transdermal verabreichbar ist.
18. 18. Entsprechend einigen Ausführungsformen der Erfindung, wenn die beschriebene Formulierung in Form einer Formulierung mit verzögerter Freisetzung ist, wird die Formulierung einmal pro Tag verabreicht.