WO2025005258A1 - 急性膵炎における膵炎マーカーの迅速測定法 - Google Patents

急性膵炎における膵炎マーカーの迅速測定法 Download PDF

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WO2025005258A1
WO2025005258A1 PCT/JP2024/023533 JP2024023533W WO2025005258A1 WO 2025005258 A1 WO2025005258 A1 WO 2025005258A1 JP 2024023533 W JP2024023533 W JP 2024023533W WO 2025005258 A1 WO2025005258 A1 WO 2025005258A1
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acute pancreatitis
trypsin
concentration
antibody
reagent
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雅之 北野
崇 田村
謙亮 古島
康律 坂井
哲也 屋鋪
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Sumitomo Bakelite Co Ltd
Wakayama Medical University
Original Assignee
Sumitomo Bakelite Co Ltd
Wakayama Medical University
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Definitions

  • the present invention relates to a method for rapidly measuring acute pancreatitis.
  • Acute pancreatitis is an acute inflammation of the pancreas that can sometimes affect other adjacent organs.
  • the most common symptom of acute pancreatitis is upper abdominal pain, but the pain can also spread to the back, and it can also be accompanied by symptoms such as vomiting and fever. In rare cases, the condition can become severe, which can lead to multiple organ failure, including respiratory, circulatory, and renal failure, or infection.
  • the two main causes of acute pancreatitis are alcohol and gallstones, but it is also known to occur in patients who have undergone endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP).
  • ERCP endoscopic retrograde cholangiopancreatography
  • a diagnosis of acute pancreatitis is made when two or more of the following conditions are met, and other pancreatic diseases and acute abdominal conditions are excluded: 1. There is acute abdominal pain and tenderness in the upper abdomen. 2. There is an increase in pancreatic enzymes in the blood or urine. 3. There is abnormality in the pancreas on ultrasound, CT, or MRI that is associated with acute pancreatitis. Furthermore, it is recommended that amylase and lipase be measured as pancreatic enzymes (Non-Patent Document 1).
  • the object of the present invention is to provide a method that can predict the onset of acute pancreatitis early and enable early and appropriate therapeutic intervention.
  • the present inventors have found that trypsin concentration can be used as an early predictor of acute pancreatitis (pancreatitis marker), and have completed the present invention. That is, the present invention includes the following aspects.
  • a method for providing data necessary for treating acute pancreatitis comprising: (1) measuring the trypsin concentration in a specimen from a subject suspected of having acute pancreatitis; (2) providing data necessary for diagnosing acute pancreatitis based on the measured value and recommending treatment for acute pancreatitis when the trypsin concentration is equal to or higher than a certain value; A method comprising: [2] The method according to item 1, wherein treatment of acute pancreatitis is recommended if the trypsin concentration is 570 ng/mL or higher. [3] The method according to item 2, wherein, when the amylase concentration of the sample is measured simultaneously with the measurement of the trypsin concentration of the sample, the amylase concentration is 125 U/L or less.
  • the method according to any one of Items 1 to 5, comprising: [7] The method according to any one of items 1 to 6, wherein the subject has undergone an endoscopic examination, an endoscopic surgery, or an incisional surgery. [8] The method according to any one of Items 1 to 7, wherein the trypsin concentration is measured using an immunoassay reagent or an immunoassay system. [9] The method according to item 8, wherein the immunoassay reagent or immunoassay system is a reagent or assay system for using a latex agglutination method, an ELISA, an RIA or a chemiluminescence immunoassay.
  • the present invention makes it possible to predict the onset or onset of acute pancreatitis at an early stage, enabling early and appropriate therapeutic intervention.
  • Figure 1 shows the results of a comparison of the trypsin, lipase, and amylase measurements in a group of patients who were diagnosed with acute pancreatitis the day after undergoing endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) examination (patient group) and a group of patients who were diagnosed without acute pancreatitis (no pancreatitis group) in terms of the ratio to the upper limit of normal (trypsin 570 ng/mL, lipase 55 U/L, amylase 125 U/L).
  • ERCP endoscopic retrograde cholangiopancreatography
  • the non-group was set as negative and the pancreatitis patient group as positive, and an ROC curve was created for each marker (trypsin, lipase, amylase) immediately after the test, and the AUC was calculated.
  • the results are shown in FIG.
  • the non-group was set as negative and the pancreatitis patient group as positive, and an ROC curve was created for each marker (trypsin, lipase, amylase) 2 hours after the test, and the AUC was calculated.
  • the results are shown in FIG.
  • acute pancreatitis refers to any of the following: (1) Acute abdominal pain and tenderness in the upper abdomen. (2) Elevated blood or urinary pancreatic enzyme levels; (3) Diagnostic imaging (ultrasound, CT, MRI) reveals abnormal findings in the pancreas associated with acute pancreatitis. It satisfies two or more of the above items.
  • the causes of acute pancreatitis are not particularly limited, but examples include alcohol, gallstones, and endoscopic retrograde cholangiopancreatography.
  • treat or “treatment” means treating a disease condition in a subject (patient), including inhibiting (e.g., inhibiting or slowing the progression), alleviating, ameliorating, curing, etc., the disease condition.
  • treating acute pancreatitis or “treatment of acute pancreatitis” in this specification includes fluid administration, drug administration, surgical removal, and the like.
  • infusion fluid includes physiological saline, Ringer's solution, and the like.
  • surgical removal includes surgical nexectomy and the like.
  • diagnosis means to determine (judge) the current or future state of a disease in a subject (patient), including predicting or determining whether or not a subject will be affected by a disease, predicting or determining whether or not a disease state will progress to a more severe state, determining whether or not a subject is affected by a disease, determining the degree or progression of a disease state, determining the effectiveness of treatment for a disease, and determining whether or not there is a risk of recurrence of a disease after treatment.
  • severe includes mild, moderate, severe, etc.
  • aggravation includes progression from mild to moderate or severe, and from moderate to severe.
  • onset refers to the appearance of symptoms of a disease.
  • the term "subject” refers to a living organism that is the subject of testing, particularly an animal (e.g., a mammal such as a human, mouse, rat, hamster, guinea pig, monkey, cow, pig, horse, rabbit, sheep, goat, cat or dog), and particularly a human (in this case also referred to as a "test subject").
  • an animal e.g., a mammal such as a human, mouse, rat, hamster, guinea pig, monkey, cow, pig, horse, rabbit, sheep, goat, cat or dog
  • a human in this case also referred to as a "test subject”
  • the term "subject"("testsubject” in the case of a human) in this specification includes subjects (patients) suffering from a disease, subjects (subjects) suspected of suffering from a disease, subjects (subjects) at risk of suffering from a disease, and subjects (healthy individuals) not suffering from a disease, and particularly includes subjects who have undergone an endoscopic examination (e.g., an ERCP examination), endoscopic surgery, or open surgery.
  • an endoscopic examination e.g., an ERCP examination
  • endoscopic surgery e.g., endoscopic surgery, or open surgery.
  • sample in this specification is not particularly limited as long as it is a sample that can contain the above-mentioned trypsin, and examples include blood samples prepared from blood collected from human subjects.
  • a "blood sample” refers to a sample that contains at least a portion of blood components, and may be any of whole blood, serum, and plasma, or any of these diluted forms.
  • the blood sample is preferably serum or plasma.
  • the blood sample can be prepared by known methods.
  • trypsin refers to trypsin or its precursor (trypsinogen) that may exist in vivo alone or in a state bound to a corresponding binding molecule, such as, but not limited to, ⁇ 1 - antitrypsin or ⁇ 2- macroglobulin.
  • trypsin or its precursor and "a complex bound to a corresponding binding molecule” will be collectively referred to as “trypsin”.
  • the "antibody or antigen-binding fragment thereof against a complex bound to trypsin or its corresponding binding molecule” is not particularly limited as long as it has a specific binding ability to the above-mentioned complex bound to trypsin or its corresponding binding molecule.
  • examples of an antibody or an antigen-binding fragment thereof that has a specific binding ability to "trypsin” include an antibody or a fragment thereof that is capable of recognizing and binding to a part of trypsin as an epitope.
  • the above-mentioned "antibody” may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
  • the antibody may be a commercially available product or may be produced by using trypsin or a part thereof as an antigen according to known methods such as cell fusion technology, gene recombination technology, phage display, etc.
  • the above-mentioned "antigen-binding fragment of an antibody” refers to a fragment of the above-mentioned antibody that has the ability to bind to trypsin, and examples thereof include a Fab fragment obtained by partially digesting the above-mentioned antibody with papain or the like, an F(ab')2 fragment obtained by partially digesting the above-mentioned antibody with pepsin or the like, and an Fab' fragment obtained by reducing the F(ab')2 fragment.
  • the antibody is a monoclonal antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • antibodies or antigen-binding fragments thereof will be collectively referred to as "antibodies”.
  • the present invention provides a method for providing data necessary for treating acute pancreatitis, comprising the steps of: (1) measuring the trypsin concentration in a specimen from a subject suspected of having acute pancreatitis; (2) providing data necessary for diagnosing acute pancreatitis based on the measured value and recommending treatment for acute pancreatitis when the trypsin concentration is equal to or higher than a certain value;
  • the present invention provides a method comprising:
  • the above step (1) is a step of measuring the trypsin concentration in a sample from a subject suspected of having acute pancreatitis.
  • the trypsin concentration in step (1) may be measured by any method, but is preferably measured using an immunological assay reagent or an immunological assay system.
  • the immunoassay reagent or immunoassay system is not particularly limited, but examples thereof include those using an antibody or an antigen-binding fragment thereof against a complex bound to trypsin or its corresponding binding molecule, and specific examples thereof include reagents or assay systems for enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), fluorescent enzyme immunoassay, chemiluminescent enzyme immunoassay, chemiluminescent immunoassay, electrochemiluminescent immunoassay, fluorescent antibody assay, radioimmunoassay (RIA), Western blot, immunoblot, latex agglutination, immunochromatography, nephelometry, etc.
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • chemiluminescent enzyme immunoassay chemiluminescent enzyme immunoassay
  • chemiluminescent immunoassay chemiluminescent immunoassay
  • electrochemiluminescent immunoassay fluorescent antibody assay
  • reagents or assay systems for latex agglutination, ELISA, RIA, or chemiluminescent immunoassay are used.
  • These reagents or measurement systems are not particularly limited in terms of various configurations, shapes, states, etc., and may be those prepared according to known methods or those commercially available.
  • the above-mentioned antibody or antigen-binding fragment may be one type or two or more types.
  • two or more types of antibodies or antigen-binding fragments may be, for example, two or more types of antibodies or antigen-binding fragments that bind to different epitopes, or two or more types of antibodies or antigen-binding fragments that bind to the same epitope.
  • trypsin can exist in a sample both in a free form and in a complex
  • at least one of the two or more types of antibodies may be an antibody or antigen-binding fragment against the complex.
  • examples include a combination of two or more antibodies or antigen-binding fragments thereof that can recognize and bind to different portions of trypsin as an epitope; a combination of at least one antibody that can recognize and bind to a portion of trypsin as an epitope and an antigen-binding fragment of at least one antibody that can recognize and bind to an epitope different from the epitope of the antibody; a combination of at least one antibody or antigen-binding fragment thereof that can recognize and bind to a portion of trypsin as an epitope and at least one antibody or antigen-binding fragment thereof that can recognize and bind to a portion of a complex as part or all of an epitope; and at least one antibody or antigen-binding fragment thereof that can recognize and bind to a portion of trypsin as an epitope and an antibody or antigen-binding fragment thereof that can recognize and bind to a portion of a binding molecule as part or all of an epitope.
  • the above antibody may be immobilized on a support.
  • the support can be appropriately selected depending on the method using the reagent. Examples of the support include well plates (e.g., 96-well microplates, etc.), membranes (e.g., nitrocellulose membranes, polyvinylidene fluoride membranes, etc.), slide glasses, magnetic beads, latex particles, etc.
  • the antibody can be immobilized on the support by a known method selected depending on the material of the support.
  • both the first and second antibodies may be antibodies, one may be an antibody and the other an antigen-binding fragment, or both may be antigen-binding fragments.
  • the antibody may be labeled.
  • labeling substance there are no particular limitations on the labeling substance used, and any known substance may be used.
  • labeling substances include enzyme labels such as peroxidase and alkaline phosphatase; fluorescent labels such as fluorescein isothiocyanate (FITC); radioisotope labels such as iodine-125; electrochemiluminescence labels such as ruthenium complexes; biotin; and metal nanoparticles.
  • the antibody can be labeled by a known method selected according to the type of labeling substance.
  • the above reagent or measurement system may be in the form of a kit.
  • the kit may contain other elements in addition to the above antibody. Examples of the other elements include a detection reagent for the labeled substance, a standard sample of trypsin, a reagent for preparing blood samples, a diluent, buffers, a support, and instructions for use.
  • the above-mentioned reagent or measurement system may contain a surfactant.
  • a surfactant In the reagent or measurement system containing a surfactant, even if trypsin and a binding molecule are present in a sample in a bound state, the surfactant can separate the trypsin and the binding molecule and liberate the trypsin, so that not only the trypsin present in the sample as a free body, but also the trypsin present in the bound state can be detected or measured. Therefore, in the reagent or measurement system containing the surfactant, trypsin, which exists in both free and bound states in a living body and whose abundance ratio may vary depending on the environment in the living body, can be accurately detected and its amount (concentration) can be accurately measured. Examples of such a reagent or measurement system include the following A and B: (A) a surfactant, (B) containing an antibody against the trypsin; Examples include a reagent or a measurement system.
  • surfactant includes, for example, nonionic surfactants, amphoteric surfactants, and the like.
  • nonionic surfactants include polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate (trade name: Tween 20), polyoxyethylene sorbitan monooleate (trade name: Tween 80), polyethylene glycol mono-4-octylphenyl ether (trade name: Triton X-100), and octylphenoxypoly(ethyleneoxy)ethanol (trade name: Nonidet® P40).
  • amphoteric surfactants include 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS).
  • nonionic surfactants and in particular polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate.
  • the amount of surfactant contained in the reagent or measurement system is not particularly limited, but is, for example, 0.02% by weight or more of the entire reagent or measurement system, preferably 0.03 to 3% by weight, and particularly 0.05 to 1% by weight.
  • the above-mentioned reagent or measurement system may contain a buffer.
  • the buffer may be any buffer that does not prevent the antibody from binding to trypsin, and examples of such buffers include MES buffer, HEPES buffer, phosphate buffer, Tris buffer, Good's buffer, glycine buffer, and borate buffer, which have a buffering effect near neutral pH of 5.0 to 10.0, preferably pH 5.5 to 8.5.
  • the concentration of the buffering agent in the buffer is usually selected from the range of 10 to 500 mM, preferably 10 to 300 mM.
  • the above reagents or measurement systems may contain additives known in the art in amounts that do not interfere with the binding of the antibody to trypsin.
  • additives known in the art in amounts that do not interfere with the binding of the antibody to trypsin. Examples include buffers, preservatives (such as sodium azide), proteins (albumin), water-soluble polymers (such as sugars, polyethylene glycol, dextran), salts (sodium chloride, amino acids, etc.), etc.
  • each component such as the above-mentioned antibody, surfactant, buffer solution, additive, etc. may be contained separately in two or more separate reagents.
  • Reagent A1 and Reagent B1 (A1) Reagent A1 containing a surfactant; (B1) Reagent B1 containing an antibody against trypsin Including, When measuring a sample, the sample, the reagent A1, and the reagent B1 are mixed.
  • Examples include a reagent or a measurement system.
  • the sample, Reagent A1, and Reagent B1 are mixed when measuring the sample, but the mixing conditions are not particularly limited as long as they do not interfere with the binding reaction (antigen-antibody reaction) between the trypsin and antibody being measured.
  • the surfactant content in the mixture of the sample, reagent A1, and reagent B1 when measuring the above sample or measurement system is not particularly limited, but is, for example, 0.02% by weight or more, preferably 0.03 to 3% by weight, and particularly 0.05 to 1% by weight.
  • the above-mentioned reagent A1 may be a surfactant itself or a composition containing a surfactant, as long as the surfactant content in the mixture obtained by mixing the sample with reagent B1 during measurement of the sample falls within the above-mentioned specified range.
  • the above-mentioned reagent A1 may contain the above-mentioned buffer solution, additives, etc. in addition to the surfactant.
  • the above-mentioned reagent B1 may contain the above-mentioned buffer solution, additives, etc. in addition to the antibody.
  • the components contained in these reagents A1 and B1 may be appropriately determined taking into consideration the stability, handling, etc. of each reagent.
  • examples of the reagent or measurement system for using the latex agglutination method include a reagent or a measurement system using such a reagent, which includes (i) an antibody-sensitized latex liquid containing latex particles to which at least one type of antibody or an antigen-binding fragment thereof is bound that is capable of recognizing and binding to a part of trypsin as an epitope, and ( ii ) an antibody-sensitized latex liquid containing latex particles to which an antibody or an antigen-binding fragment thereof is bound that is capable of recognizing and binding to a part of a binding molecule (e.g., ⁇ 1-antitrypsin) as a part or the whole of an epitope, or a measurement system using such a reagent.
  • a binding molecule e.g., ⁇ 1-antitrypsin
  • latex reagent When the reagent is a reagent using the latex agglutination method (hereinafter referred to as "latex reagent"), any latex known in the art can be used, such as styrene-based latex such as polystyrene latex, acrylic acid-based latex, various modified latexes (e.g., carboxylic acid-modified latex in which a carboxyl group is introduced into the polystyrene), colored latex, fluorescent latex, and the like.
  • the latex can be produced by a known method, or may be a commercially available latex. Two or more kinds of the latex may be used in combination.
  • the average particle size of the latex particles in the latex reagent is not particularly limited, but may be, for example, a size that allows aggregates formed by an antigen-antibody reaction between an antigenic substance to be measured and an antibody to be detected by the naked eye or optically. Specifically, the average particle size is, for example, 100 to 500 nm.
  • the latex particles may have two or more different average particle sizes.
  • the term "average particle size" refers to a value measured by dynamic light scattering.
  • the latex reagent contains latex particles to which an antibody against trypsin is bound.
  • the method for binding the antibody to latex is not particularly limited, and known methods can be used.
  • the antibody can be bound to the latex by mixing the antibody and latex in a buffer solution having a pH of 5.0 to 10.0, reacting the mixture at 20 to 30° C. for 2 to 3 hours, and then carrying out known post-treatments such as centrifugation, blocking treatment, and heating (aging) treatment.
  • the buffer solution used in this case may be the buffer solution contained in the above-mentioned reagent.
  • the measurement of trypsin concentration using the above-mentioned immunoassay reagent or immunoassay system comprises the following steps: (i) binding trypsin contained in the sample to an antibody contained in the reagent or measurement system; (ii) This can be carried out by a method comprising measuring the amount or concentration of the conjugate between the trypsin and the antibody obtained in the above step (i).
  • the above steps (i) and (ii) are not particularly limited, and can be appropriately carried out according to known protocols related to the reagents or measurement systems used, or the instructions attached to commercially available products.
  • the degree of agglutination caused by the antigen-antibody reaction between trypsin and the antibody bound to the latex particles can be measured, for example, using absorbance, and the concentration of trypsin in the sample can be determined from a calibration curve of a previously obtained standard.
  • the wavelength for measuring absorbance is usually 340 to 1000 nm, preferably 500 to 900 nm.
  • the degree of agglutination is not limited to absorbance, and known methods can be used, such as nephelometry and counting immunoassay.
  • step (2) includes providing data necessary for diagnosing acute pancreatitis based on the measured trypsin concentration obtained in step (1) and recommending treatment for acute pancreatitis when the trypsin concentration is equal to or greater than a certain value.
  • the blood trypsin concentration is significantly increased in the early stage of acute pancreatitis, and can therefore be used as an early predictor of acute pancreatitis (pancreatitis marker). That is, the trypsin concentration can be used as an index for determining (judging) the onset of acute pancreatitis, whether acute pancreatitis will develop, and whether acute pancreatitis will progress to a more severe state. For example, a cutoff value can be determined by statistically processing data obtained from multiple patients, and based on this cutoff value, it is possible to predict whether acute pancreatitis will develop or whether acute pancreatitis will become more severe.
  • the level is equal to or higher than a certain cutoff value, it can be predicted that acute pancreatitis will develop, and if the level is below the cutoff value, it can be predicted that acute pancreatitis will not develop.
  • the level is equal to or above a predetermined cutoff value, it can be predicted that the acute pancreatitis will become more severe, and if the level is below the cutoff value, it can be predicted that the acute pancreatitis will not become more severe. Therefore, the trypsin concentration can be used as data for predicting whether or not acute pancreatitis will develop, or whether or not acute pancreatitis will progress to a more severe state.
  • the severity of acute pancreatitis can be evaluated based on the trypsin concentration.
  • data obtained from multiple patients can be statistically processed to determine a cutoff value (pathological condition identification value), and the severity of acute pancreatitis can be evaluated based on this cutoff value. For example, a score below a first cutoff value can be evaluated as mild, a score between the first cutoff value and a second cutoff value can be evaluated as moderate, and a score above the second cutoff value can be evaluated as severe. Therefore, the trypsin concentration can be used to assess the severity of acute pancreatitis, to aid in such assessment, or as data for making such assessment.
  • the presence or absence, or the level of the risk of developing or becoming severe of acute pancreatitis can be determined based on the blood concentration of trypsin.
  • a cutoff value can be determined by statistically processing data obtained from multiple patients, and the presence or absence, or the level of the risk of developing or becoming severe of acute pancreatitis can be determined based on this cutoff value. For example, if the level is equal to or above a certain cutoff value, it can be determined that the risk of developing acute pancreatitis exists or is high, and conversely, if the level is below the cutoff value, it can be determined that such risk does not exist or is low.
  • the above reagent can be used for evaluating the risk of developing or aggravating acute pancreatitis, assisting in such evaluation, and collecting data for such evaluation.
  • the data required for diagnosing acute pancreatitis therefore includes cutoff values obtained by statistically processing data obtained from multiple patients to determine whether acute pancreatitis will develop, whether it will progress to a severe state, the severity, and the presence or absence or level of risk of developing or becoming severe.
  • step (2) a judgment is made based on the data necessary for diagnosing acute pancreatitis as described above, and treatment for acute pancreatitis is recommended if the trypsin concentration is equal to or higher than a certain value.
  • the recommended trypsin concentration for treating acute pancreatitis is, for example, 570 ng/mL or higher.
  • Treatments for the above-mentioned acute pancreatitis include, but are not limited to, treatments selected from fluid infusion, drug administration, and surgical removal.
  • the treatment can be selected appropriately depending on the above-mentioned trypsin concentration, data on diagnostic indicators other than trypsin concentration, the severity and symptoms of acute pancreatitis, and the age, weight, sex, and medical history of the subject (patient).
  • Data or diagnostic indicators required for diagnosing acute pancreatitis other than trypsin concentration include, for example, (1) the presence or absence of acute abdominal pain attacks and tenderness in the upper abdomen, (2) the presence or absence of elevation of pancreatic enzymes (amylase, lipase, etc.) in blood or urine, (3) the presence or absence of abnormal findings in the pancreas associated with acute pancreatitis in imaging diagnosis (ultrasound, CT, MRI), and (4) possible causes (alcohol, gallstones, endoscopic examination (e.g., ERCP examination), endoscopic surgery, incisional surgery, etc.).
  • concentrations of pancreatic enzymes other than trypsin are included.
  • amylase concentration and lipase concentration is not particularly limited and may be performed using known reagents or measurement systems.
  • the data or diagnostic indicators also include various cutoff values for determining whether acute pancreatitis will develop, whether the condition will progress to a severe state, and the severity, which are obtained by statistically processing data obtained from multiple patients. By taking into consideration such data or indicators in combination with the trypsin concentration, it is possible to more accurately diagnose and determine the severity of acute pancreatitis, enabling the selection of a more appropriate treatment.
  • amylase concentration of a sample is measured at the same time as the trypsin concentration, and the trypsin concentration is 570 ng/mL or higher and the amylase concentration is 125 U/L or lower, a diagnosis of acute pancreatitis can be made and treatment can be started early.
  • the trypsin concentration of the sample is measured at the same time as the lipase concentration of the sample, if the trypsin concentration is 570 ng/mL or higher and the lipase concentration is 55 U/L or higher, it is possible to diagnose acute pancreatitis and begin treatment early.
  • the amylase and lipase concentrations of the sample are measured at the same time as the trypsin concentration of the sample, if the trypsin concentration is 570 ng/mL or higher, the amylase concentration is 125 U/L or lower, and the lipase concentration is 55 U/L or higher, it is possible to diagnose acute pancreatitis and begin treatment early.
  • step (2) after the step (2), (3) assessing the severity of the acute pancreatitis; (4) if the result of the determination in step (3) indicates severe acute pancreatitis, recommending initiation of treatment within 3 hours; may also include
  • the severity of acute pancreatitis in step (3) can be determined based on the data necessary for diagnosing acute pancreatitis as described above. For example, trypsin concentration data obtained from multiple patients can be statistically processed to determine a cutoff value (pathological condition identification value), and the severity of acute pancreatitis can be evaluated based on this cutoff value. Specifically, for example, a value less than the first cutoff value can be evaluated as mild, a value between the first cutoff value and the second cutoff value can be evaluated as moderate, and a value equal to or greater than the second cutoff value can be evaluated as severe.
  • a cutoff value pathological condition identification value
  • the above step (4) is a step of recommending treatment within 3 hours if the result of the judgment in the above step (3) is severe acute pancreatitis.
  • Acute pancreatitis can become severe early, so if it is judged to be severe, it is preferable to start treatment as soon as possible, and it is recommended to start treatment within 3 hours at the latest, preferably within 2 hours, and particularly preferably within 1 hour after the judgment.
  • Antibody A and Antibody B were obtained according to the following procedure.
  • Immunogen 1 mg of purified human trypsin manufactured by SCRIPPS, Cat. No. T0614, purity ⁇ 95%) was dissolved in 5 mL of physiological saline solution containing 1 mM TLCK (Tosyl-L-lysyl-chloromethane hydrochloride, Nakarai, Code 34219-94), heated at 37° C. for 30 minutes, and then dialyzed against physiological saline solution before use.
  • TLCK Tosyl-L-lysyl-chloromethane hydrochloride, Nakarai, Code 34219-94
  • the immunogen was suspended in an adjuvant (Complete Freund's adjuvant: CFA, manufactured by GIBCO), and BALB/c mice (5 weeks old, female) were immunized at 2-week intervals to give 25 ⁇ g trypsin/mouse. Partial blood was collected during the immunization, and the degree of titer increase at the antiserum level was confirmed using the reactivity with the immunogen trypsin as an index. After confirming that the antibody titer had increased sufficiently through multiple immunizations, a saline solution of the immunogen was administered intraperitoneally or intravenously.
  • an adjuvant Complete Freund's adjuvant: CFA, manufactured by GIBCO
  • Antibody-producing cells were collected from the spleen and fused with myeloma (P3X63Ag8.653, ECACC). Cell fusion was performed using the PEG method, and the fused cells were seeded on a culture plate. The cells were then cultured in a carbon dioxide incubator at 37°C. (screening) The culture supernatant of each well into which the fused cells were dispensed was collected, and the antibody titer was confirmed based on the reactivity with trypsin. The antibody-producing clone cells were then subcultured and cloned by limiting dilution. The cells derived from the single colony obtained were used as anti-human trypsin monoclonal antibody-producing hybridomas.
  • Latex liquid latex (manufactured by JSR, product name: IMMUNTEX), average particle size 351 nm, solid content: 10% ⁇ Antibody A solution: 4.9mg/mL Antibody A, 40mM NaCl, 20mM HEPES (pH 7.4) ⁇ Antibody B solution: 4.5mg/mL Antibody B, 40mM NaCl, 20mM HEPES (pH 7.4) ⁇ MES buffer: 1% BSA, 20mM MES (pH 6.0), 0.05% NaN3 ⁇ HEPES buffer: 2% BSA, 20mM HEPES (pH 7.0), 150mM NaCl 0.05% NaN 3 (method) 500 ⁇ L of latex liquid (10% w/vol) and 500 ⁇ L of antibody A solution (4.9 mg/m
  • antibody B solution 4.5 mg/mL was added to a mixed solution prepared in the same manner, and the mixture was stirred by shaking for 90 minutes at 20° C.
  • the resulting mixture was centrifuged at 10,000 rpm for 30 minutes at 10°C using a centrifuge (rotor: R15A (HI antibody ACH)).
  • the supernatant was decanted, and 25 mL of MES buffer was added to the resulting sediment, which was then dispersed by sonication.
  • the mixture was then shaken and stirred at 37°C for 60 minutes.
  • the obtained dispersion was centrifuged at 10,000 rpm for 30 minutes at 10° C. using the same centrifuge.
  • the supernatant was decanted, and 50 mL of HEPES buffer was added to the obtained precipitate, which was then dispersed by sonication to obtain antibody-sensitized latex ⁇ and ⁇ solutions.
  • Reagent A and Reagent B having the following compositions were prepared.
  • Reagent A was prepared by mixing each component to a predetermined amount or concentration.
  • Reagent B was prepared by mixing each antibody-sensitized latex ⁇ and ⁇ solution in equal amounts, and further mixing other components to a predetermined amount or concentration.
  • Reagent A composition 0%, 0.3%, 0.5%, 0.75% or 1.0% Tween 20, 0.5% polyethylene glycol (PEG) (5000-50000), 0.5% bovine serum albumin (BSA), ⁇ 150mM NaCl, ⁇ 0.09% NaN3 , ⁇ 100mM HEPES buffer (pH 7.6)
  • Reagent B composition 0.5% BSA, ⁇ 150mM NaCl, ⁇ 0.09% NaN3 , ⁇ 100mM HEPES buffer (pH 7.0) ⁇ Antibody A sensitized latex ⁇ liquid
  • Example 1 Serum samples were collected from patients (54 cases: 26 men and 28 women) undergoing endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) before the test, immediately after the test, 2 hours after the test, and 24 hours after the test, and the trypsin concentration in the serum was measured using the serum trypsin measurement reagent constructed in Reference Example 1. Similarly, the blood lipase concentration and blood amylase concentration of the same sample group were also measured.
  • ERCP endoscopic retrograde cholangiopancreatography
  • the measurements were compared between the patient group who were diagnosed with acute pancreatitis the day after the test in accordance with the guidelines for diagnosing pancreatitis after ERCP (8 cases in the pancreatitis patient group: 4 men and 4 women) and the patient group who were diagnosed as not having developed the disease (33 cases in the unaffected group: 16 men and 17 women). While there was no significant change in the trypsin measurement in the non-treated group, in the pancreatitis patient group, the trypsin level increased by more than 8 times immediately after the test and 2 hours after the test, and by more than 16 times 24 hours after the test, compared to before the test. Lipase and amylase levels also increased (Table 1).
  • the ROC curves for each marker were created immediately after the test and 2 hours after the test, with the non-patient group being negative and the pancreatitis patient group being positive, and the AUC was calculated.
  • the results were trypsin 0.84, lipase 0.82, and amylase 0.65 immediately after the test ( Figure 2), and trypsin 0.93, lipase 0.89, and amylase 0.79 2 hours after the test ( Figure 3).
  • the cutoffs for each marker were trypsin 1487.1 ng/mL, lipase 115.5 U/L, and amylase 136.6 U/L immediately after the test, and trypsin 1701.3 ng/mL, lipase 165.6 U/L, and amylase 159.6 U/L 2 hours after the test. Trypsin levels rose most quickly in the blood of patients who developed pancreatitis, and demonstrated high accuracy as an aid in diagnosing early pancreatitis.

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Abstract

本発明は、急性膵炎の発症を早期に予測することができ、早期に適切な治療介入を可能にする方法、より詳細には、急性膵炎の治療に必要なデータを提供する方法であって、 （１）急性膵炎が疑われる被験体の検体中のトリプシン濃度を測定すること、 （２）該測定値に基づく急性膵炎の診断に必要なデータを提供し、トリプシン濃度が一定値以上の場合に急性膵炎の治療を推奨すること、 を含む、方法に関する。

Description

急性膵炎における膵炎マーカーの迅速測定法
　本特許出願は、日本国特許出願第２０２３－１０７３７４号について優先権を主張するものであり、ここに参照することによって、その全体が本明細書中へ組み込まれるものとする。
　本発明は、急性膵炎の迅速測定方法に関する。
　急性膵炎は、膵臓の急性炎症であり、ときに隣接する他の臓器にまで影響を及ぼし得るものである。急性膵炎の最も多い症状は、上腹部痛であるが、背部まで痛みが広がることもあり、嘔吐、発熱などの症状を伴うこともある。まれに重症化することがあり、重症化すると、呼吸、循環、腎不全などの多臓器不全や、感染症を併発することがある。また、急性膵炎の２大原因は、アルコールと胆石であるが、内視鏡的逆行性胆管膵管造影（ＥＲＣＰ）などを受けた患者にも発生することが知られている。
　一般に、次の項目：
１．上腹部に急性腹痛発作と圧痛がある
２．血中または尿中に膵酵素の上昇がある
３．超音波、ＣＴまたはＭＲＩで膵に急性膵炎に伴う異常所見がある
の２項目以上を満たし、他の膵疾患および急性腹症を除外したものが急性膵炎と診断されており、さらに、膵酵素としては、アミラーゼ、リパーゼを測定することが望ましいとしている（非特許文献１）。
急性膵炎診療ガイドライン２０２１（第５版）、金原出版株式会社
　本発明の目的は、急性膵炎の発症を早期に予測することができ、早期に適切な治療介入を可能にする方法を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、急性膵炎の早期予測因子（膵炎マーカー）として、トリプシン濃度を用いることができることを見出し、本発明を完成した。
　すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
［１］　急性膵炎の治療に必要なデータを提供する方法であって、
（１）急性膵炎が疑われる被験体の検体中のトリプシン濃度を測定すること、
（２）該測定値に基づく急性膵炎の診断に必要なデータを提供し、トリプシン濃度が一定値以上の場合に急性膵炎の治療を推奨すること、
を含む、方法。
［２］　前記トリプシン濃度が５７０ｎｇ／ｍＬ以上の場合に、急性膵炎の治療を推奨する、項１に記載の方法。
［３］　該検体のトリプシン濃度の測定と同時に該検体のアミラーゼ濃度を測定した場合、該アミラーゼ濃度が１２５Ｕ／Ｌ以下である、項２に記載の方法。
［４］　該検体のトリプシン濃度の測定と同時に該検体のリパーゼ濃度を測定した場合、該リパーゼ濃度が５５Ｕ／Ｌ以上である、項２または３に記載の方法。
［５］　前記急性膵炎の治療が、輸液投与、薬剤投与、または外科的除去から選択される、項１～４のいずれかに記載の方法。
［６］　前記工程（２）の後、さらに、
（３）該急性膵炎の重症度を判定すること、
（４）該工程（３）の結果、重症急性膵炎であると判定された場合、３時間以内に治療を開始することを推奨すること、
を含む、項１～５のいずれかに記載の方法。
［７］　前記被験体が、内視鏡検査、内視鏡手術または切開手術が行われた被験体である、項１～６のいずれかに記載の方法。
［８］　前記トリプシン濃度の測定を、免疫学的測定用試薬または免疫学的測定系を用いて行う、項１～７のいずれかに記載の方法。
［９］　前記免疫学的測定用試薬または免疫学的測定系が、ラテックス凝集法、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡまたは化学発光免疫測定法を用いるための試薬または測定系である、項８に記載の方法。
　本発明によれば、急性膵炎の発症またはその起点を早期に予測することができるので、早期に適切な治療介入を可能にする。
図１は、内視鏡的胆管膵管造影（ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ　ｒｅｔｒｏｇｒａｄｅ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｐａｎｃｒｅａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＥＲＣＰ）検査を受けた翌日に急性膵炎発症と診断された患者群（患者群）と、発症なしと診断された患者群（膵炎無し群）の、トリプシン、リパーゼおよびアミラーゼ測定値を、基準値上限（トリプシン５７０ｎｇ／ｍＬ、リパーゼ５５Ｕ／Ｌ、アミラーゼ１２５Ｕ／Ｌ）との比率で比較した結果を示す。 無群を陰性、膵炎患者群を陽性として検査直後の各マーカー（トリプシン、リパーゼ、アミラーゼ）のＲＯＣ曲線を作成し、ＡＵＣを算出した結果を示す。 無群を陰性、膵炎患者群を陽性として検査後２時間後の各マーカー（トリプシン、リパーゼ、アミラーゼ）のＲＯＣ曲線を作成し、ＡＵＣを算出した結果を示す。
　本明細書における「急性膵炎」は、次の項目：
　(1) 上腹部の急性腹痛発作と圧痛を認める、
　(2) 血中または尿中膵酵素の上昇を認める、
　(3) 画像診断（超音波、ＣＴ、ＭＲＩ）で膵に急性膵炎に伴う異常所見を認める、
のうち、２項目以上を満たすものである。
　また、当該急性膵炎の原因としては、特に限定されないが、例えば、アルコール、胆石、内視鏡的逆行性胆管膵管造影検査などが挙げられる。
　本明細書における「治療する」または「治療」とは、被験体（患者）における疾患状態を処置することを意味し、これには、疾患状態を抑制（例えば進行の抑制、遅延）、軽減、軽快、改善、治癒することなどが含まれる。
　また、本明細書における「急性膵炎を治療する」または「急性膵炎の治療」には、輸液投与、薬剤投与、外科的除去などが挙げられる。
　上記「輸液」には、生理食塩水、リンゲル液などが挙げられる。
　上記「外科的除去」には外科的ネクセクトミーなどが挙げられる。
　本明細書における「診断する」または「診断」とは、被験体（患者）における疾患の現在または未来の状態を判定（判断）することを意味し、これには、疾患に罹患するか否かの予測または判定、疾患状態の重症化が進行するか否かの予測または判定、疾患に罹患しているか否かの判定、疾患状態の度合または進行度の判定、疾患に対する治療効果の判定、治療後に疾患を再発する危険性が存在するか否かの判定などが含まれる。
　本明細書において「重症度」としては、軽症、中等症、重症等が挙げられ、「重症化」としては、軽症から中等症または重症への重症化、中等症から重症への重症化が挙げられる。
　本明細書において「発症」とは、疾患の症状が現れることをいう。
　本明細書において「被験体」とは、検査対象となる生物、特に動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、サル、ウシ、ブタ、ウマ、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ネコまたはイヌ等の哺乳動物）を意味し、特にヒト（この場合、「被験者」とも称する）が挙げられる。
　また、本明細書における「被験体」（ヒトの場合の「被験者」）には、疾患に罹患している被験体（患者）、罹患が疑われる被験体（被験者）、罹患するリスクがある被験者（被験者）、疾患に罹患していない被験体（健常者）などが含まれ、特に、内視鏡検査（例えば、ＥＲＣＰ検査）、内視鏡手術または切開手術が行われた被験体が挙げられる。
　本明細書における「検体」としては、上記トリプシンが含まれ得る検体であれば特に限定されないが、例えば、ヒト被験体から採取された血液から調製した血液検体が挙げられる。本明細書における「血液検体」とは、血液成分の少なくとも一部を含む検体を意味し、全血、血清、および血漿のいずれであってもよく、これらを希釈したものであってもよい。血液検体は、好ましくは血清または血漿である。血液検体の調製は、既知の方法で行うことができる。
　本明細書における「トリプシン」は、そのトリプシンまたはその前駆体（トリプシノーゲン）として生体内に単独で、もしくは対応する結合分子と結合した状態で存在し得る。当該対応する結合分子としては、特に限定されないが、例えば、α１アンチトリプシンまたはα２マクログロブリンが挙げられる。
　以下、特に言及しない限り、「トリプシンまたはその前駆体」および「対応する結合分子と結合した複合体」を、まとめて「トリプシン」と称する。
　本明細書における「トリプシンまたはその対応する結合分子と結合した複合体に対する抗体またはその抗原結合フラグメント」は、上記トリプシンまたはその対応する結合分子と結合した複合体に特異的結合能を有するものであれば特に限定されない。
　ここで、「トリプシン」に特異的結合能を有する抗体またはその抗原結合フラグメントとしては、トリプシンの一部をエピトープとして認識して結合可能である抗体またはそのフラグメントなどが挙げられる。
　また、トリプシンと結合分子との「複合体」に特異的結合能を有する抗体またはその抗原結合フラグメントとしては、複合体の状態で表面に表れているトリプシンの一部をエピトープとして認識して結合可能である抗体またはその抗原結合フラグメント、結合分子の一部をエピトープの一部または全部として認識して結合可能である抗体またはその抗原結合フラグメントなどが挙げられる。
　上記「抗体」は、モノクローナル抗体でも、ポリクローナル抗体でもよい。また、当該抗体は、市販品でもよく、トリプシンまたはその一部分を抗原として用いて細胞融合技術、遺伝子組換え技術、ファージディスプレイ等の既知の方法にしたがって生産したものでもよい。
　また、上記「抗体の抗原結合フラグメント」は、上記抗体のフラグメントであって、トリプシンに結合能を有するフラグメントを意味し、例えば、上記抗体をパパイン等で部分分解して得られるＦａｂフラグメント、ペプシン等で部分分解して得られるＦ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを還元処理して得られるＦａｂ’フラグメント等が挙げられる。
　好ましくは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが挙げられる。
　以下、特に言及しない限り、「抗体またはその抗原結合フラグメント」を、まとめて「抗体」と称する。
　本発明は、一態様として、急性膵炎の治療に必要なデータを提供する方法であって、
（１）急性膵炎が疑われる被験体の検体中のトリプシン濃度を測定すること、
（２）該測定値に基づく急性膵炎の診断に必要なデータを提供し、トリプシン濃度が一定値以上の場合に急性膵炎の治療を推奨すること、
を含む、方法を提供する。
　上記工程（１）は、急性膵炎が疑われる被験体の検体中のトリプシン濃度を測定する工程である。当該工程（１）におけるトリプシン濃度の測定は、如何なる方法を用いてもよいが、免疫学的測定用試薬または免疫学的測定系を用いて行うことが好ましい。
　上記免疫学的測定用試薬または免疫学的測定系としては、特に限定されないが、例えば、トリプシンまたはその対応する結合分子と結合した複合体に対する抗体またはその抗原結合フラグメントを用いるものが挙げられ、具体的には、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光酵素免疫測定法、化学発光酵素免疫測定法、化学発光免疫測定法、電気化学発光測免疫測定法、蛍光抗体法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ウェスタンブロット法、イムノブロット法、ラテックス凝集法、イムノクロマトグラフィー法、ネフェロメトリー法などを用いるための試薬または測定系が挙げられる。好ましくは、ラテックス凝集法、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡまたは化学発光免疫測定法を用いるための試薬または測定系が挙げられる。
　これらの試薬または測定系は、種々の構成、形状、状態などは特に限定されず、既知の方法にしたがって調製したものでもよく、市販されているものでもよい。
　上記試薬または測定系において、上記抗体またはその抗原結合フラグメントは、１種でもよく、２種以上でもよい。２種以上の抗体またはその抗原結合フラグメントを用いる場合、それらは、例えば、異なるエピトープに結合する２種以上の抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよく、同じエピトープに結合する２種以上の抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。また、トリプシンが遊離体としても複合体としても検体中に存在し得る場合、２種以上の抗体のうち、少なくとも１種は、複合体に対する抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。
　例えば、トリプシンの異なる部分をエピトープとして認識して結合可能である２種以上の抗体またはその抗原結合フラグメントの組合せ；トリプシンの一部をエピトープとして認識して結合可能である少なくとも１種の抗体と、その抗体のエピトープとは異なるエピトープを認識して結合可能である少なくとも１種の抗体の抗原結合フラグメントとの組合せ；トリプシンの一部をエピトープとして認識して結合可能である少なくとも１種の抗体またはその抗原結合フラグメントと、複合体の一部をエピトープの一部または全部として認識して結合可能である少なくとも１種の抗体またはその抗原結合フラグメントの組合せ；トリプシンの一部をエピトープとして認識して結合可能である少なくとも１種の抗体またはその抗原結合フラグメントと、結合分子の一部をエピトープの一部または全部として認識して結合可能である抗体またはその抗原結合フラグメントなどが挙げられる。
　上記試薬または測定系において、上記抗体は、支持体に固定化されていてもよい。支持体は、当該試薬を用いる方法に応じて、適宜選択することができる。支持体としては、例えば、ウェルプレート（例、９６ウェルマイクロプレートなど）、メンブレン（例、ニトロセルロース膜、ポリフッ化ビニリデン膜など）、スライドガラス、磁気ビーズ、ラテックス粒子等が挙げられる。抗体の支持体への固定化は、支持体の材質に応じて選択した既知の方法により行うことができる。
　また、上記抗体が支持体に固定されている場合、上記トリプシンの異なるエピトープに結合する第二の抗体を含んでいてもよい。この場合、第一の抗体と第二の抗体の両方が抗体でもよく、一方が抗体であり、他方が抗原結合フラグメントでもよく、両方が抗原結合フラグメントでもよい。
　また、上記抗体は、標識化されたものであってもよい。標識化のための標識物質は、特に限定されず、既知のものを用いればよい。標識物質としては、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなどの酵素標識；フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）などの蛍光標識；ヨウ素１２５などの放射性同位体標識；ルテニウム錯体などの電気化学発光標識；ビオチン；金属ナノ粒子等が挙げられる。当該抗体の標識化は、標識物質の種類に応じて選択した既知の方法により行うことができる。
　上記試薬または測定系は、キットの形態であってもよい。当該キットには、上記抗体に加えて、他の要素を含んでいてもよい。他の要素としては、例えば、標識物質の検出試薬、トリプシンの標準検体、血液検体調製用試薬、希釈液、バッファー類、支持体、使用説明書等が挙げられる。
　上記試薬または測定系は、界面活性剤を含むことができる。界面活性剤を含む試薬または測定系においては、検体中にトリプシンと結合分子との結合体の状態で存在していても、界面活性剤の作用により、トリプシンと結合分子を分離し、トリプシンを遊離させることができるので、検体中に遊離体として存在していたトリプシンばかりでなく、結合体の状態で存在していたトリプシンも検出または測定することができる。したがって、当該界面活性剤を含む試薬または測定系においては、生体内で遊離体と結合体の両方の状態で存在し、生体内の環境によって存在比が異なり得るトリプシンを、精度よく検出することができ、その量（濃度）も精度よく測定することができる。
　このような試薬または測定系の一例として、以下のＡおよびＢ：
　（Ａ）界面活性剤、
　（Ｂ）該トリプシンに対する抗体
を含む、
試薬または測定系などが挙げられる。
　本明細書における「界面活性剤」としては、例えば、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤などが挙げられる。
　非イオン性界面活性剤の具体例としては、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（商品名Ｔｗｅｅｎ　２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（商品名Ｔｗｅｅｎ　８０）、ポリエチレングリコールモノ－４－オクチルフェニルエーテル（商品名Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００）、オクチルフェノキシポリ（エチレンオキシ）エタノール（商品名Ｎｏｎｉｄｅｔ（Ｒ）　Ｐ４０）などが挙げられる。
　両性界面活性剤の具体例としては、３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）などが挙げられる。
　好ましくは非イオン性界面活性剤が挙げられ、特にポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートが挙げられる。
　上記試薬または測定系における界面活性剤の含有量は、特に限定されないが、例えば、試薬または測定系全体の０．０２重量％以上であり、好ましくは０．０３～３重量％、特に０．０５～１重量％である。
　上記試薬または測定系は、緩衝液を含むことができる。緩衝液としては、抗体がトリプシンに結合するのを妨げる性質を有しないものであればよく、例えばｐＨ５．０～１０．０、好ましくはｐＨ５．５～８．５の中性付近に緩衝作用を有する、例えばＭＥＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グッド緩衝液、グリシン緩衝液、ホウ酸緩衝液などが挙げられる。また、緩衝液中の緩衝剤の濃度としては、通常１０～５００ｍＭ、好ましくは１０～３００ｍＭの範囲から適宜選択される。
　上記試薬または測定系は、抗体がトリプシンに結合するのを妨害しない量で、当該分野で既知の添加剤を含むことができる。例えば、緩衝剤、防腐剤（アジ化ナトリウムなど）タンパク質（アルブミン）、水溶性高分子（糖類、ポリエチレングリコール、デキストランなど）、塩類（塩化ナトリウム、アミノ酸など）などを含む。
　上記試薬または測定系において、上記抗体、界面活性剤、緩衝液、添加剤などの各成分は、２個以上の別個の試薬に分かれて含まれていてもよい。その一例として、例えば、以下の試薬Ａ１および試薬Ｂ１：
　（Ａ１）界面活性剤を含む試薬Ａ１、
　（Ｂ１）該トリプシンに対する抗体を含む、試薬Ｂ１
を含み、
検体の測定時に、検体と試薬Ａ１と試薬Ｂ１が混合される、
試薬または測定系などが挙げられる。
　上記試薬または測定系において、検体の測定時に検体と試薬Ａ１と試薬Ｂ１が混合されるが、その際の混合条件は、測定対象のトリプシンと抗体の結合反応（抗原抗体反応）が妨害されない条件であれば、特に限定されない。
　上記検体または測定系の測定時における検体と試薬Ａ１と試薬Ｂ１の混合物中の界面活性剤の含有量は、特に限定されないが、例えば、０．０２重量％以上であり、好ましくは０．０３～３重量％、特に０．０５～１重量％である。
　上記試薬Ａ１は、検体の測定時に、検体と試薬Ｂ１と混合して得られる混合物中の界面活性剤の含有量が、上記所定の範囲内になればよく、界面活性剤そのものであっても、界面活性剤を含む組成物であってもよい。
　上記試薬Ａ１は、界面活性剤に加えて、上記緩衝液、添加剤などを含んでいてもよい。また、上記試薬Ｂ１は、抗体に加えて、上記緩衝液、添加剤などを含んでいてもよい。これらの試薬Ａ１およびＢ１に含まれる成分は、各々の試薬の安定性、取扱性などを考慮して適宜決定すればよい。
　上記試薬または測定系のうち、ラテックス凝集法を用いるための試薬または測定系としては、（ｉ）トリプシンの一部をエピトープとして認識して結合可能である少なくとも１種の抗体またはその抗原結合フラグメントを結合させたラテックス粒子を含む抗体感作ラテックス液と、（ｉｉ）結合分子（例えば、α１アンチトリプシン）の一部をエピトープの一部または全部として認識して結合可能である抗体またはその抗原結合フラグメントを結合させたラテックス粒子を含む抗体感作ラテックス液を含む、試薬など、またはこのような試薬を用いた測定系などが挙げられる。
　上記試薬がラテックス凝集法を用いる試薬（以下、「ラテックス試薬」と称する）である場合、当該分野で既知のラテックスを使用することができる。例えば、ポリスチレンラテックスなどのスチレン系ラテックス、アクリル酸系ラテックス、種々の変性ラテックス（例えば、上記ポリスチレン中にカルボキシル基を導入したカルボン酸変性ラテックス）、着色ラテックス、蛍光ラテックス、などが挙げられる。
　上記ラテックスは、既知の方法で製造することができるが、市販されているものでもよい。また、上記ラテックスは、２種以上を併用してもよい。
　上記ラテックス試薬におけるラテックス粒子の平均粒子径は、特に限定されないが、例えば、測定対象となる抗原物質と抗体との抗原抗体反応により生じた凝集体が肉眼または光学的に検出できる大きさを示すものが挙げられる。具体的には、例えば、１００～５００ｎｍである。
　また、ラテックス粒子の平均粒子径は、２種以上であってもよい。
　本明細書における「平均粒子径」は、動的光散乱法（Ｄｙｎａｍｉｃ　ｌｉｇｈｔ　ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）により測定した数値を意味する。
　上記ラテックス試薬は、トリプシンに対する抗体が結合したラテックス粒子を含む。ラテックスに抗体を結合する方法は、特に限定されず、既知の方法が挙げられる。例えば、抗体とラテックスを、ｐＨ５．０～１０．０の緩衝液中で混合し、２０～３０℃の条件で２～３時間反応させた後、遠心分離、ブロッキング処理、加熱（エイジング）処理などの既知の後処理を行うことにより、ラテックスと抗体を結合させることができる。
　この際の緩衝液としては、上述した試薬に含まれる緩衝液でよい。
　上記免疫学的測定用試薬または免疫学的測定系を用いるトリプシン濃度の測定は、次の工程：
（i）上記試薬または測定系において、上記検体中に含まれるトリプシンと、該試薬または測定系に含まれる抗体とを結合させること、
（ii）上記工程（i）によって得られた該トリプシンと該抗体との結合体の量または濃度を測定すること
を含む方法により行うことができる。
　上記工程（i）および（ii）は、特に限定されず、使用する試薬または測定系に関する既知のプロトコール、市販品の場合の添付文書などにしたがって適宜行うことができる。
　例えば、上記試薬または測定系としてラテックス凝集法を用いる場合、トリプシンとラテックス粒子に結合した抗体との抗原抗体反応により生じる凝集の度合いを例えば吸光度を用いて測定し、予め求めてあった標準品の検量線から、試料中のトリプシンの濃度を求めることができる。なお、吸光度の測定波長は、通常３４０～１０００ｎｍ、好ましくは５００～９００ｎｍが挙げられる。また、凝集の度合いは、吸光度に限定されるものではなく、既知の方法を用いることができ、例えばネフェロメトリー、カウンティングイムノアッセイなどの方法により測定することもできる。
　上記本発明の方法の一態様における工程（２）は、上記工程（１）で得られたトリプシン濃度の測定値に基づく急性膵炎の診断に必要なデータを提供し、トリプシン濃度が一定値以上の場合に急性膵炎の治療を推奨することを含む。
　トリプシンの血中濃度は、急性膵炎の早期に顕著に上昇するので、急性膵炎の早期予測因子（膵炎マーカー）として用いることができる。すなわち、トリプシンの濃度は、急性膵炎の発症の起点、急性膵炎が発症するか否か、急性膵炎の重症化が進行するか否かを判定（判断）するための指標として用いることができる。
　例えば、複数の患者から得られたデータを統計処理してカットオフ値を決定し、このカットオフ値に基づいて急性膵炎が発症するか否か、または急性膵炎の重症化が進行するか否かを予測することができる。
　例えば、所定のカットオフ値以上である場合、急性膵炎が発症すると予測することができ、当該カットオフ値未満である場合、急性膵炎は発症しないと予測することができる。
　同様に、所定のカットオフ値以上である場合、急性膵炎の重症化が進行すると予測することができ、当該カットオフ値未満である場合、急性膵炎の重症化は進行しないと予測することができる。
　したがって、トリプシンの濃度は、急性膵炎が発症するか否か、または急性膵炎の重症化が進行するか否かを予測するためのデータとして用いることができる。
　また、トリプシンの濃度に基づいて、急性膵炎の重症度を評価することができる。例えば、複数の患者から得られたデータを統計処理してカットオフ値（病態識別値）を決定し、このカットオフ値に基づいて急性膵炎の重症度を評価することができる。
　例えば、第一のカットオフ値未満を軽症、第一のカットオフ値以上から第二のカットオフ値未満を中等症、第二のカットオフ値以上を重症と評価することができる。
　したがって、トリプシンの濃度は、急性膵炎の重症度の評価、その評価の補助、その評価を行うためのデータとして用いることができる。
　さらに、トリプシンの血中濃度に基づいて、急性膵炎の発症リスクまたは重症化リスクの有無または高低を判定することができる。例えば、複数の患者から得られたデータを統計処理してカットオフ値を決定し、このカットオフ値に基づいて急性膵炎の発症リスクまたは重症化リスクの有無または高低を判定することができる。
　例えば、所定のカットオフ値以上である場合、急性膵炎の発症リスクが存在するまたは高いと判定することができ、逆に当該カットオフ値未満である場合、そのようなリスクが存在しないまたは低いと判定することができる。
　同様に、所定のカットオフ値以上である場合、急性膵炎の重症化リスクが存在するまたは高いと判定することができ、逆に当該カットオフ値未満である場合、そのようなリスクが存在しないまたは低いと判定することができる。
　したがって、上記試薬は、急性膵炎の発症リスクまたは重症化リスクの評価、その評価の補助、その評価を行うためのデータの収集等に用いることができる。
　したがって、急性膵炎の診断に必要なデータには、複数の患者から得られたデータを統計処理して得られた、急性膵炎が発症するか否か、重症化が進行するか否か、重症度、発症リスクまたは重症化リスクの有無または高低などを決定するためのカットオフ値などが含まれる。
　上記工程（２）において、上記のような急性膵炎の診断に必要なデータに基づいて判断し、トリプシン濃度が一定値以上の場合に急性膵炎の治療を推奨する。
　上記急性膵炎の治療を推奨するトリプシン濃度としては、例えば、５７０ｎｇ／ｍＬ以上が挙げられる。
　上記急性膵炎の治療としては、特に限定されないが、例えば、輸液投与、薬剤投与、または外科的除去から選択される治療が挙げられる。また、治療の選択は、上記トリプシン濃度、トリプシン濃度以外の診断指標のデータ、急性膵炎の重症度、症状、被験体（患者）の年齢、体重、性別、病歴などに応じて適宜選択することができる。
　トリプシン濃度以外の急性膵炎の診断に必要なデータまたは診断指標としては、例えば、(1) 上腹部の急性腹痛発作と圧痛の有無、(2) 血中または尿中膵酵素（アミラーゼ、リパーゼ等）の上昇の有無、(3) 画像診断（超音波、ＣＴ、ＭＲＩ）で膵に急性膵炎に伴う異常所見の有無、(4) 考えられる原因（アルコール、胆石、内視鏡検査（例えば、ＥＲＣＰ検査）、内視鏡手術、切開手術など）などが挙げられる。なかでも、特に、トリプシン以外の膵酵素（アミラーゼ、リパーゼ等）の濃度が挙げられる。アミラーゼ濃度およびリパーゼ濃度の測定は、特に限定されず、既知の試薬または測定系を用いたものでよい。
　また、当該データまたは診断指標には、複数の患者から得られたデータを統計処理して得られた、急性膵炎が発症するか否か、重症化が進行するか否か、重症度などを決定するための各種のカットオフ値などが含まれる。
　このようなデータまたは指標と、トリプシン濃度を合わせて考慮することで、急性膵炎の重症度の診断・判定をより的確にすることができ、より適切な治療を選択することが可能になる。
　例えば、該検体のトリプシン濃度の測定と同時に該検体のアミラーゼ濃度を測定した場合、トリプシン濃度が５７０ｎｇ／ｍＬ以上であり、かつ、アミラーゼ濃度が１２５Ｕ／Ｌ以下である場合、急性膵炎であると診断することができ、早期に治療を開始できる。
　また、例えば、該検体のトリプシン濃度の測定と同時に該検体のリパーゼ濃度を測定した場合、トリプシン濃度が５７０ｎｇ／ｍＬ以上であり、かつ、リパーゼ濃度が５５Ｕ／Ｌ以上である場合、急性膵炎であると診断することができ、早期に治療を開始できる。
　さらに、例えば、該検体のトリプシン濃度の測定と同時に該検体のアミラーゼ濃度およびリパーゼ濃度を測定した場合、トリプシン濃度が５７０ｎｇ／ｍＬ以上であり、アミラーゼ濃度が１２５Ｕ／Ｌ以下であり、かつ、リパーゼ濃度が５５Ｕ／Ｌ以上である場合、急性膵炎であると診断することができ、早期に治療を開始できる。
　上記本発明の方法の一態様は、上記工程（２）の後、
（３）該急性膵炎の重症度を判定すること、
（４）該工程（３）の判定の結果、重症急性膵炎であると判定された場合、３時間以内に治療を開始することを推奨すること、
を含んでいてもよい。
　上記工程（３）における急性膵炎の重症度の判定は、上記のように急性膵炎の診断に必要なデータに基づいて行うことができる。例えば、複数の患者から得られたトリプシンの濃度のデータを統計処理してカットオフ値（病態識別値）を決定し、このカットオフ値に基づいて急性膵炎の重症度を評価することができる。具体的には、例えば、第一のカットオフ値未満を軽症、第一のカットオフ値以上から第二のカットオフ値未満を中等症、第二のカットオフ値以上を重症と評価することができる。
　上記工程（４）は、上記工程（３）の判定の結果、重症急性膵炎であると判定された場合、３時間以内に治療を行うことを推奨する工程である。急性膵炎は、早期に重症化することがあり、重症と判定された場合、できるだけ早く治療を開始することが好ましく、遅くても判定から３時間以内、好ましくは２時間以内、特に好ましくは１時間以内に治療を開始することが推奨される。
　以下、参考例、実施例を参照して本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
［参考例１］
＜モノクローナル抗体の作製＞
　以下の手順にしたがって、抗体Ａ、抗体Ｂを得た。
（免疫原）
　ヒト精製トリプシン（ＳＣＲＩＰＰＳ社製、Ｃａｔ．　Ｎｏ．Ｔ０６１４、精製度≧９５％）１ｍｇを１ｍＭ　ＴＬＣＫ　（Ｔｏｓｙｌ－Ｌ－ｌｙｓｙｌ－ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ナカライ、Ｃｏｄｅ　３４２１９－９４）を含む生理食塩水溶液５ｍＬに溶解し、３７℃にて３０分間加温後、生理食塩水溶液にて透析し使用した。
（免疫方法）
　上記免疫原をアジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ：ＣＦＡ、ＧＩＢＣＯ社製）に懸濁し、２５μｇトリプシン／匹となるようＢＡＬＢ／ｃマウス（５週齢、雌）に２週間間隔で免疫した。途中で部分採血を行い、抗血清レベルでの力価上昇度を免疫原であるトリプシンとの反応性を指標に確認した。複数回の免疫にて抗体力価が十分上昇していることを確認した上で、上記免疫原の生理食塩水溶液を腹腔内もしくは静脈内投与した。脾臓より抗体産生細胞を採取し、ミエローマ（Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＥＣＡＣＣ）と細胞融合した。細胞融合はＰＥＧ法で行い、融合細胞を培養プレートに播種した。その後、３７℃の炭酸ガスインキュベーター内で培養した。
（スクリーニング）
　融合細胞を分注した各ウェルの培養上清を採取し、抗体力価をトリプシンとの反応性を指標に確認した。そして抗体産生クローンの細胞を継代培養し、限界希釈法によりクローニングを行った。得られた単一コロニー由来の細胞を抗ヒトトリプシンモノクローナル抗体産生ハイブリドーマとした。
（モノクローナル抗体調製）
　次に得られたモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを大量培養した。予め腹腔内にプリスタン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を投与し、ＢＡＬＢ／ｃマウスに対し、ハイブリドーマを投与した。１０～２５日間飼育し、腹水の貯留を待った後、腹水を採取し、得られた腹水抗体を硫安塩析、アフィニティー精製を行うことによりマウス抗ヒトトリプシンモノクローナル抗体を取得した。
（モノクローナル抗体の組合せ予備検討）
　上記で得られた複数のモノクローナル抗体について、各抗体をラテックスに感作し、ラテックスの凝集のシグナル強度を指標に、シグナルが大きくエピトープが異なると考えられる２種類の抗体Ａ、抗体Ｂの組合せを得た。
＜抗体感作＞
　以下の材料および方法にしたがって、抗体Ａ感作ラテックスα液、抗体Ｂ感作ラテックスβ液を調製した。
（材料）
・ラテックス液：ラテックス（ＪＳＲ製、商品名：ＩＭＭＵＮＴＥＸ）、平均粒子径３５１　ｎｍ、固形分：１０％
・抗体Ａ溶液：４．９ｍｇ／ｍＬ　抗体Ａ、４０ｍＭ　ＮａＣｌ、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）
・抗体Ｂ溶液：４．５ｍｇ／ｍＬ　抗体Ｂ、４０ｍＭ　ＮａＣｌ、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）
・ＭＥＳ緩衝液：１％ＢＳＡ、２０ｍＭ　ＭＥＳ（ｐＨ６．０）、０．０５％ＮａＮ３
・ＨＥＰＥＳ緩衝液：２％ＢＳＡ、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ　０．０５％ＮａＮ３
（方法）
　ラテックス液（１０％ｗ／ｖｏｌ）５００μＬと抗体Ａ溶液（４．９ｍｇ／ｍＬ）５００μＬを混和し、２０℃で９０分間振とう撹拌した。また、別途、同様に調製した混合液に、抗体Ｂ溶液（４．５ｍｇ／ｍＬ）５５０μＬを追加し、２０℃で９０分間振とう撹拌した。
　得られた混合液を、遠心分離機（ローター：Ｒ１５Ａ（ＨＩ抗体ＡＣＨ））を用いて、１００００ｒｐｍの条件で、１０℃で３０分間遠心分離した。上清をデカンテーションし、得られた沈査にＭＥＳ緩衝液２５ｍＬを添加し、ソニケーションにて分散した。その後、３７℃で６０分間振とう撹拌した。
　得られた分散液を、同遠心分離機を用いて、１００００ｒｐｍの条件で、１０℃で３０分間遠心分離した。上清をデカンテーションし、得られた沈査にＨＥＰＥＳ緩衝液５０ｍＬを添加し、ソニケーションにて分散させ、各抗体感作ラテックスα、β液を得た。
＜測定用試薬＞
　下記の組成を有する試薬Ａおよび試薬Ｂを調製した。試薬Ａは、各構成成分を所定の量または濃度になるように混合することにより調製した。試薬Ｂは、各抗体感作ラテックスα、β液を等量の割合で混合し、さらに他の構成成分を所定の量または濃度になるように混合して調製した。
（１）試薬Ａ
（組成）
・０％、０．３％、０．５％、０．７５％または１．０％Ｔｗｅｅｎ２０、
・０．５％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（５０００～５００００）、
・０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、
・１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、
・０．０９％ＮａＮ３、
・１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）
（２）試薬Ｂ
（組成）
・０．５％ＢＳＡ、
・１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、
・０．０９％ＮａＮ３、
・１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）
・抗体Ａ感作ラテックスα液
・抗体Ｂ感作ラテックスβ液
［実施例１］
　内視鏡的胆管膵管造影（ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ　ｒｅｔｒｏｇｒａｄｅ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｐａｎｃｒｅａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＥＲＣＰ）検査を受ける患者（５４例：男性２６例、女性２８例）から、検査前、検査直後、検査後２時間後、検査後２４時間後に採取した血清を、上記参考例１で構築した血清トリプシン測定試薬を用い、血清中のトリプシン濃度を測定した。また、同様に同検体群の血中リパーゼ濃度、および血中アミラーゼ濃度を測定した。
　測定可能だった検体群（４１例）の内、ＥＲＣＰ後膵炎診断ガイドラインに従い検査を受けた翌日に急性膵炎発症と診断された患者群（膵炎患者群８例：男性４例、女性４例）と、発症なしと診断された患者群（無群３３例：男性１６例、女性１７例）の各測定値を比較した。
　トリプシン測定値は、無群では大きな変化はないものの、膵炎患者群では、検査前と比べ、検査直後および検査２時間後には８倍以上、検査２４時間後には、１６倍以上に上昇した。リパーゼおよびアミラーゼも同様に上昇が見られた（表１）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　トリプシン測定値を、基準値上限（５７０ｎｇ／ｍＬ）との比率で比較したところ、膵炎患者群では検査前と比べ、検査直後に約１１．７倍、検査２時間後には約１１．９倍、検査２４時間後には約２３倍に上昇した。リパーゼおよびアミラーゼも同様に基準値上限（リパーゼ５５Ｕ／Ｌ、アミラーゼ１２５Ｕ／Ｌ）との比率で比較したところ、検査直後のリパーゼとアミラーゼはそれぞれ約８．７倍と約１．６倍で、検査後２時間後のリパーゼとアミラーゼはそれぞれ約１３．６倍と約２．５倍で、検査後２４時間後のリパーゼとアミラーゼはそれぞれ約２９．４倍と約６．６倍であった（図１）。
　無群を陰性、膵炎患者群を陽性として検査直後と検査後２時間後の各マーカーのＲＯＣ曲線を作成しＡＵＣを算出したところ、検査直後でトリプシン０．８４、リパーゼ０．８２、アミラーゼ０．６５となり（図２）、検査後２時間後でトリプシン０．９３、リパーゼ０．８９、アミラーゼ０．７９という結果になった（図３）。それぞれのカットオフは、検査直後でトリプシン１４８７．１ｎｇ／ｍＬ、リパーゼ１１５．５Ｕ／Ｌ、アミラーゼ１３６．６Ｕ／Ｌで、検査後２時間後でトリプシン１７０１．３ｎｇ／ｍＬ、リパーゼ１６５．６Ｕ／Ｌ、アミラーゼ１５９．６Ｕ／Ｌであった。
　トリプシンは膵炎発症患者の血中で最も早く高値になり、早期の膵炎の診断補助として高い精度を示した。

Claims (9)

  1. 　急性膵炎の治療に必要なデータを提供する方法であって、
    （１）急性膵炎が疑われる被験体の検体中のトリプシン濃度を測定すること、
    （２）該測定値に基づく急性膵炎の診断に必要なデータを提供し、トリプシン濃度が一定値以上の場合に急性膵炎の治療を推奨すること、
    を含む、方法。
  2. 　前記トリプシン濃度が５７０ｎｇ／ｍＬ以上の場合に、急性膵炎の治療を推奨する、請求項１に記載の方法。
  3. 　該検体のトリプシン濃度の測定と同時に該検体のアミラーゼ濃度を測定した場合、該アミラーゼ濃度が１２５Ｕ／Ｌ以下である、請求項２に記載の方法。
  4. 　該検体のトリプシン濃度の測定と同時に該検体のリパーゼ濃度を測定した場合、該リパーゼ濃度が５５Ｕ／Ｌ以上である、請求項２または３に記載の方法。
  5. 　前記急性膵炎の治療が、輸液投与、薬剤投与、または外科的除去から選択される、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
  6. 　前記工程（２）の後、さらに、
    （３）該急性膵炎の重症度を判定すること、
    （４）該工程（３）の判定の結果、重症急性膵炎であると判定された場合、３時間以内に治療を開始することを推奨すること、
    を含む、請求項１～５のいずれかに記載の方法。
  7. 　前記被験体が、内視鏡検査、内視鏡手術または切開手術が行われた被験体である、請求項１～６のいずれかに記載の方法。
  8. 　前記トリプシン濃度の測定を、免疫学的測定用試薬または免疫学的測定系を用いて行う、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  9. 　前記免疫学的測定用試薬または免疫学的測定系が、ラテックス凝集法、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡまたは化学発光免疫測定法を用いるための試薬または測定系である、請求項８に記載の方法。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10504902A (ja) * 1994-08-26 1998-05-12 ステンマン，ウルフ−ホーカン 遊離及び複合化トリプシノーゲン−２のアッセイ
DE10157336A1 (de) * 2000-11-24 2002-07-04 Bioserv Ag Verfahren zur Erkennung einer Pankreatitis
JP2006265138A (ja) * 2005-03-23 2006-10-05 Meiji Seika Kaisha Ltd ネコトリプシノーゲン及び／又はネコトリプシンに対するモノクローナル抗体
JP2010081861A (ja) * 2008-09-30 2010-04-15 Mitsubishi Chemical Medience Corp 膵臓の組織傷害あるいは細胞増殖性疾患の検出方法
CN201716317U (zh) * 2010-07-02 2011-01-19 武汉优尔生科技股份有限公司 猪的胰蛋白酶(try)elisa检测试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10504902A (ja) * 1994-08-26 1998-05-12 ステンマン，ウルフ−ホーカン 遊離及び複合化トリプシノーゲン−２のアッセイ
DE10157336A1 (de) * 2000-11-24 2002-07-04 Bioserv Ag Verfahren zur Erkennung einer Pankreatitis
JP2006265138A (ja) * 2005-03-23 2006-10-05 Meiji Seika Kaisha Ltd ネコトリプシノーゲン及び／又はネコトリプシンに対するモノクローナル抗体
JP2010081861A (ja) * 2008-09-30 2010-04-15 Mitsubishi Chemical Medience Corp 膵臓の組織傷害あるいは細胞増殖性疾患の検出方法
CN201716317U (zh) * 2010-07-02 2011-01-19 武汉优尔生科技股份有限公司 猪的胰蛋白酶(try)elisa检测试剂盒

Non-Patent Citations (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Research study on intractable pancreatic diseases. Research report on 2013 generalization and allotment", 1 January 2013, MINISTRY OF HEALTH, LABOUR AND WELFARE SCIENCE RESEARCH GRANTS, JP, article MINE TETSUYA: "The significance of urinary trypsinogen 2 and TAP in severity judgment of post-ERCP pancreatitis.", pages: 119 - 124, XP093253821 *
BORGSTRÖM ANDERS, OHLSSON KJELL: "Immunoreactive Trypsin in Serum and Peritoneal Fluid in Acute Pancreatitis", HOPPE-SEYLER´S ZEITSCHRIFT FÜR PHYSIOLOGISCHE CHEMIE, DE GRUYTER, BERLIN, NEW YORK, vol. 359, no. 1, 1 January 1978 (1978-01-01), Berlin, New York, pages 677 - 682, XP009559670, ISSN: 0018-4888, DOI: 10.1515/bchm.1978.359.1.677 *
GENJI KITAGAWA, TATSUO NARUSE, TETSUO HAYAKAWA: "Diagnosis and initial treatment of acute pancreatitis", CHIRYO- JOURNAL OF THERAPY, NANZANDO, TOKYO, JP, vol. 82, no. 10, 1 October 2000 (2000-10-01), JP , pages 2543 - 2548, XP009559651, ISSN: 0022-5207 *
HADWAN MAHMOUD HUSSEIN, AL-OBAIDY SABA S. M., AL-KAWAZ HAWRAA SAAD, ALMASHHEDY LAMIA A., KADHUM MOHAMMED A., KHUDHAIR DUNIA ABBAS,: "An optimized protocol to assess trypsin activity in biological samples", MONATSHEFTE FÜR CHEMIE - CHEMICAL MONTHLY, SPRINGER VIENNA, VIENNA, vol. 154, no. 2, 1 February 2023 (2023-02-01), Vienna, pages 267 - 277, XP093253872, ISSN: 0026-9247, DOI: 10.1007/s00706-022-03028-1 *
HAYAKAWA, TETSUO: "Protease and its inhibitor as a disease marker. The significance of trypsin and its inhibitor in acute pancreatitis. ", SHINSHU TO MEN'EKI - SURGICAL TRAUMA & IMMUNOLOGICAL RESPONSES, MEJIKARU BYUSHA, TOKYO, JP, vol. 8, no. 3/4, 30 November 1999 (1999-11-30), JP , pages 91 - 94, XP009559654, ISSN: 0917-7175 *
IDEI MAYUMI: "Laboratory Tests in pancreatic diseases", MODERN MEDIA, EIKEN CHEMICAL, JAPAN, vol. 54, no. 6, 10 June 2008 (2008-06-10), Japan , pages 180 - 185, XP093253824, ISSN: 0026-8054 *
IMAI, HIDETO: "W2-4: Clinical analysis of post-ERCP pancreatitis -Focusing on diagnosis and onset factors", SUIZO - JAPAN PANCREAS SOCIETY. JOURNAL, NIHON SUIZO GAKKAI, SENDAI, JP, vol. 20, no. 3, 30 June 2005 (2005-06-30), JP , pages 218, XP009559661, ISSN: 0913-0071 *
NIPRO CORPORATION: "Patients have a wide range of diseases that cause abdominal pain, including acute pancreatitis", NIPRO.COM, NIPRO CORPORATION, JP, 6 May 2021 (2021-05-06), JP, pages 1 - 4, XP093253901, Retrieved from the Internet <URL:https://med.nipro.co.jp/solution_apcheck> *
NOMURA M, KATO M, KAWAI N, FUJII M, KONDO I, SUZUKI H: "Clinical significance of hyperamylasemia", ICU TO CCU - JAPANESE JOURNAL OF INTENSIVE CARE MEDICINE, IGAKU TOSHO SHUPPAN CO. LTD., TOKYO, JP, vol. 19, no. 10, 1 January 1995 (1995-01-01), JP , pages 853 - 860, XP009559653, ISSN: 0389-1194 *
OYA, FUMIE: "Measurement of trypsin-like antigen in the blood of dogs with suspected acute pancreatitis", JUI CHIKUSAN SHINPO - JOURNAL OF THE VETERINARY MEDICINE, BUN'EIDO, TOKYO,, JP, vol. 54, no. 2 no. 955, 1 February 2001 (2001-02-01), JP , pages 101 - 103, XP009559660, ISSN: 0447-0192 *
SEIKI KIRIYAMA, TAKU KUMADA, MAKOTO TANIGAWA: "The Early Prediction of Severity in Patients with Acute Panoreatitis", TAN TO SUI - BILIARY TRACT AND PANCREAS, IGAKU TOSHO SHUPPAN, TOKYO, JP, vol. 25, no. 11, 15 November 2004 (2004-11-15), JP , pages 703 - 707, XP009559663, ISSN: 0388-9408 *
TAKASHI TAMURA, TOMOYA EMORI, MASAHIRO ITONAGA, YUKI KAWAJI, YASUNOBU YAMASHITA, KEIICHI HATAMARU, REIKO ASHIDA, MASAYUKI KITANO: "O14-1: About usefulness of serum trypsin in early diagnosis of post-ERCP pancreatitis", PANCREAS, vol. 38, no. 3, 3 July 2023 (2023-07-03) - 9 September 2023 (2023-09-09), pages A360, XP009559674, ISSN: 1881-2805, DOI: 10.2958/suizo.38.A1 *
TATSUYA NARUSE, OSAMU ITO, MORIO NAKAJIMA, TOKIMUNE SHIBATA: "Acute pancreatitis -Today's Perspective: Epidemiology and diagnosis of acute pancreatitis: Diagnosis of acute pancreatitis by pancreatic enzymes and urinary trypsinogen2.", KAN TAN SUI JAPAN, ARCMEDIUM, JP, vol. 59, no. 2, 28 August 2009 (2009-08-28), JP , pages 187 - 191, XP009559659, ISSN: 0389-4991 *
Y. UENO, N. TAKASHINA, Y. SAITO, Y. UUKA: "Clinical usefulness of a pancreas-α-amylase assay using monoclonal antibodies to salivary amylase", TEIKYO MEDICAL JOURNAL, vol. 15, no. 1, 1 January 1992 (1992-01-01), pages 43 - 52, XP009559671, ISSN: 0387-5547 *
YAMAMOTO, MASAHIRO: "Special issue: Pancreatitis/Cholecystitis Diagnosis of pancreatitis and severe acute pancreatitis. Early severity assessment is critical.", MEBIO, MEJIKARU BYUSHA, TOKYO, JP, vol. 8, no. 12, 1 December 1991 (1991-12-01), JP , pages 46 - 50, XP009559658, ISSN: 0910-0474 *
YASUHIDE OCHI AND OSAMU HASEBE: "ERCP (endoscopic retrograde cholangiopancreatography) and clinical examination.)", MEDICAL TECHNOLOGY - RINSHO KENSAGAKU ZASSHI, ISHIYAKU SHUPPAN, TOKYO, JP, vol. 38, no. 2, 15 February 2010 (2010-02-15), JP , pages 181 - 185, XP009559648, ISSN: 0389-1887 *
松野正紀, 急性膵炎におけるα2‐macroglobulin‐trypsin complex(α2M‐TRY)測定の意義, 胆と膵, November 1991, vol. 12, no. 11, pp. 1389-1395, (Tan to Sui), non-official translation (MATSUNO, Seiki. Importance of measurement of α2-macroglobulin-trypsin complex (α2M-TRY) measurement in acute pancreatitis.) *
田村崇, 血清トリプシンを用いたERCP後膵炎の早期予測における有用性について, 膵臓, 02 July 2024, vol. 39, no. 3, p. A410, (TAMURA, Takashi. Suizo.), non-official translation (About usefulness in early prediction of post-ERCP pancreatitis using serum trypsin) *

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