WO2024167385A1 - 신규 화합물 및 이의 용도 - Google Patents

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WO2024167385A1
WO2024167385A1 PCT/KR2024/095093 KR2024095093W WO2024167385A1 WO 2024167385 A1 WO2024167385 A1 WO 2024167385A1 KR 2024095093 W KR2024095093 W KR 2024095093W WO 2024167385 A1 WO2024167385 A1 WO 2024167385A1
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WO
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cancer
compound
chemical formula
present
hydrogen
Prior art date
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Ceased
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PCT/KR2024/095093
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English (en)
French (fr)
Inventor
이경률
백세연
안신병
전상민
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Scl Therapeutics Co Ltd
Ajou University Industry Academic Cooperation Foundation
Original Assignee
Scl Therapeutics Co Ltd
Ajou University Industry Academic Cooperation Foundation
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/567—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in position 17 alpha, e.g. mestranol, norethandrolone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J3/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by one carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms

Definitions

  • the present invention relates to novel mifepristone derivative compounds and various uses thereof.
  • Cancer is one of the most common causes of death worldwide. Approximately 10 million new cases occur each year, accounting for about 12% of all deaths, making it the third leading cause of death.
  • cancer growth refers to the infinite proliferation characteristic of cancer cells. Normal cells stop dividing when they have completed the number of divisions programmed in their genes or when there is not enough space for new cells to occupy. However, cancer cells fail to control their division, and when they run out of space to expand themselves, they secrete matrix metalloproteases that decompose the cell matrix to remove the surrounding space and expand the space for themselves.
  • cancer metastasis refers to the characteristic of cancer cells separating from the primary site and moving to another location.
  • cancer cells In order to do this, 1 cancer cells must be removed from the primary site (cancer tissue), 2 invade and pass through the tissue walls that make up blood vessels or lymphatic vessels, and 3 attach and fuse with the matrix of the moved tissue to settle in a new location. Therefore, an approach based on a different mechanism from cancer growth is required.
  • the present invention has been devised to solve the above problems, and relates to a novel compound capable of simultaneously inhibiting the proliferation and metastasis of cancer, and a pharmaceutical use thereof.
  • One purpose of the present invention is to provide a novel compound capable of preventing, improving or treating cancer.
  • Another object of the present invention is to provide a composition comprising the above compound capable of preventing, improving or treating cancer.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing, improving or treating cancer using the above compound.
  • cancer means a disease characterized by uncontrolled cell growth, and a tumor is formed as a result of this abnormal cell growth, which infiltrates surrounding tissues and, in severe cases, metastasizes to other organs of the body. It is also academically called a neoplasm. Cancer is an incurable chronic disease that, in many cases, cannot be fundamentally cured even with surgery, radiation, and chemotherapy, causing pain to the patient and ultimately leading to death. There are various causes of cancer, but they are divided into internal and external factors. It has not been precisely identified how normal cells are transformed into cancer cells, but it is known that a significant number of cancers are caused by external factors such as environmental factors. Internal factors include genetic factors and immunological factors, and external factors include chemicals, radiation, and viruses.
  • the cancer may preferably be breast cancer, uterine cancer, esophageal cancer, stomach cancer, brain cancer, rectal cancer, colon cancer, lung cancer, skin cancer, ovarian cancer, cervical cancer, kidney cancer, blood cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, testicular cancer, laryngeal cancer, oral cancer, head and neck cancer, thyroid cancer, liver cancer, bladder cancer, osteosarcoma, lymphoma, leukemia, etc., and is not limited thereto as long as it is a type of cancer in which the progression of the cancer, such as tumor differentiation and/or proliferation, is dependent on the cancer cells and/or cancer stem cells described in the present invention.
  • the cancer stem cell refers to a comprehensive cancer cell that has the unique ability of stem cells, such as self-renewal ability or differentiation ability, and it is estimated that cancer stem cells exist in between 0.1% and 5% in cancer tissues.
  • the cancer stem cell has the characteristic of proliferating slowly, unlike general cancer cells, under normal tumor growth conditions (the "normal tumor growth conditions” above refer to a state in which nutrients (glucose) necessary for cell growth are sufficient and the tumor microenvironment is abundant and there is no cell stress).
  • the expression of transcriptional regulators such as PGC-1 ⁇ is controlled, so that the function of major metabolic regulators is different from that of general cancer cells.
  • “virtual screening” refers to one of the numerous procedures that are taken during the process of developing a new drug, and more specifically, it refers to the procedure of discovering effective substances and leading substances through screening compounds selected from basic research and confirming candidate substances. This can reduce the time and cost required for developing a new drug, and after a target disease is selected, it is possible to discover effective new drug substances targeting it, and it is also possible to selectively find substances expected to have a drug effect by computer using 3D-reconstructed gene protein information.
  • the virtual screening technology can be utilized not only for library production, but also for active screening of an actually existing library and a specific action point. However, it is not limited to this if it is a general and universal screening technology.
  • 'halogen' used herein means fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • 'C1 ⁇ C6 alkyl' as used herein, unless otherwise stated, means a straight-chain or branched hydrocarbon residue having 1 to 6 carbon atoms. Examples thereof include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, n-hexyl, and the like.
  • aryl' refers to a mono- or poly-cyclic carbocyclic ring system of n carbon atoms having one or more aromatic rings which are fused or non-fused, examples of aryl include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, tetrahydronaphthyl, indenyl, and andracenyl.
  • a compound of the following chemical formula A was derived as an anticancer candidate substance through the virtual screening described above, and a derivative thereof was synthesized.
  • the derivative of the above chemical formula A may be a compound represented by the following chemical formula B.
  • R 1 and R 6 are each independently hydrogen or alkyl
  • R 2 is hydrogen or halogen
  • R 3 is hydrogen
  • R 4 , R 5 are different from each other and are each independently -C(O)-alkyl optionally substituted with halogen, alkyne, or -OR 7 , wherein R 7 can be hydrogen or -C(O)-alkyl optionally substituted with halogen.
  • the derivative of the chemical formula A may be a novel compound synthesized in the present invention and represented by the following chemical formulas 1 to 6.
  • the above chemical formula 1 is a step of synthesizing (a) Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)] according to the reaction scheme 1 described in the present invention; (b) a step of synthesizing Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4'-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)]; And (c) a step of synthesizing Pregna-1,4-diene-3,20-dione,9-fluoro-11-beta-(4'-chloro)-benzoxy,17-alpha,21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl; produced by a production method including the step of synthesizing Pregna-1,4-diene-3,20-dione,9-fluoro
  • the above chemical formula 2 is a step of synthesizing (a) Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)] according to the reaction scheme 2 described in the present invention; (b) a step of synthesizing Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)]; And (c) a step of synthesizing Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl; Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 21-chloro-9-fluoro-11-beta benzoxy, 17-hydroxy-10,13,16-beta-trimethyl, which is
  • the above chemical formula 3 is a step of synthesizing (a) Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)] according to the reaction scheme 3 described in the present invention; (b) a step of synthesizing Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4'-isopropyl)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)]; And (c) a step of synthesizing Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta-(4'-isopropyl)-benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl; It can be named as Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro
  • the above chemical formula 4 is a step of synthesizing (a) Pregn-4-ene-3,20-dione, 10,13-dimethyl-17,21-[(1-methoxypropylidene)bis(oxy)] according to the reaction scheme 4 described in the present invention; And (b) a step of synthesizing Pregn-4-ene-3,20-dione-10,13-dimethyl-21-chloro-17-hydroxy-17-propionate; and may be named Pregn-1,4-diene-3,20-dionee-10,13-dimethyl-21-chloro-17-hydroxy-17-propionate.
  • the above chemical formula 5 is synthesized from mifepristone according to the reaction scheme 5 described in the present invention, and may be named as 11beta-[4’-(N,N’-dimethylamino)phenyl]-17alpha-(prop-1-ynyl)-delta4,9-estradiene-3-one-17beta-hydroxy-(2’-chloro)acetate.
  • the above chemical formula 6 is a step of synthesizing (a) Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)] according to the reaction scheme 6 described in the present invention; (b) a step of synthesizing Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4'-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)]; (c) a step of synthesizing Pregna-1,4-diene-3,20-dione,9-fluoro-11-beta-(4'-chloro)-benzoxy,17-alpha,21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl; And (d) a step of synthesizing Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-flu
  • the present invention provides the novel compound described above, and a process for preparing the same (synthetic process), and also provides a pharmaceutically acceptable salt of the compound.
  • the pharmaceutically acceptable salt is a salt generally considered by those skilled in the art to be suitable for medical applications (for example, because such a salt is not harmful to a subject to be treated with the salt), or a salt which causes acceptable side effects in the respective treatment.
  • the pharmaceutically acceptable salt is a salt considered acceptable by a regulatory authority such as the US Food and Drug Administration (FDA), the European Medicines Agency (EMA), or the Pharmaceuticals and Medical Devices Agency (PMDA) of the Ministry of Health, Labour and Welfare of Japan.
  • the present invention also includes salts of the compound according to the present invention which are not pharmaceutically acceptable per se, for example, as intermediates in the preparation of the compound according to the present invention or a physiologically functional derivative thereof, or as intermediates in the preparation of the pharmaceutically acceptable salt of the compound according to the present invention or a physiologically functional derivative thereof.
  • the salt includes a water-insoluble salt, and in particular, a water-soluble salt.
  • a particular compound according to the invention or a physiologically functional derivative thereof is capable of forming a salt, i.e. whether said compound according to the invention or a physiologically functional derivative thereof has a group capable of carrying a charge, such as, for example, an amino group, a carboxylic acid group, etc.
  • Exemplary salts of the compounds of the present invention are acid addition salts or salts with bases, especially pharmaceutically acceptable inorganic and organic acid addition salts and salts with bases commonly used in pharmacy, which are water-insoluble or especially water-soluble acid addition salts.
  • salts with bases may also be suitable.
  • Acid addition salts can be formed, for example, by mixing a solution of a compound of the present invention with a solution of a pharmaceutically acceptable acid, such as hydrochloric acid, sulfuric acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, acetic acid, benzoic acid, citric acid, tartaric acid, carbonic acid or phosphoric acid.
  • pharmaceutically acceptable base addition salts include alkali metal salts (e.g., sodium or potassium salts); alkaline earth metal salts (e.g., calcium or magnesium salts); and salts formed with suitable organic ligands (e.g., ammonium, quaternary ammonium and amine cations formed using counter anions such as halides, hydroxides, carboxylates, sulfates, phosphates, nitrates, alkyl sulfonates and aryl sulfonates).
  • suitable organic ligands e.g., ammonium, quaternary ammonium and amine cations formed using counter anions such as halides, hydroxides, carboxylates, sulfates, phosphates, nitrates, alkyl sulfonates and aryl sulfonates.
  • Illustrative examples of pharmaceutically acceptable salts include acetate, adipate, alginate, arginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzoate, bicarbonate, bisulfate, bitartrate, borate, bromide, butyrate, calcium edetate, camphorate, camphorsulfonate, camsylate, carbonate, chloride, citrate, digluconate, dihydrochloride, dodecylsulfate, edetate, edisylate, ethanesulfonate, formate, fumarate, galactate, galacturonate, gluconate, glutamate, glycerophosphate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hexylresorcinate, hydrobromide, hydrochloride, hydroiodide, Included, but not limited to, 2-hydroxyethanesulfonate, hydroxy
  • Salts which are not pharmaceutically acceptable and which can be obtained, for example, as process products during the production of the compounds according to the invention on an industrial scale, are also encompassed by the present invention and, if desired, can be converted into pharmaceutically acceptable salts by methods known to the skilled person.
  • the compounds according to the present invention may have an asymmetric carbon center and therefore may exist as R or S isomers or racemic compounds, and all of these optical isomers and mixtures may be included in the scope of the present invention.
  • the compounds of the present invention as well as their salts may contain various amounts of solvent. Therefore, solvates, in particular hydrates, of the compounds of the present invention as well as solvates, in particular hydrates, of salts of the compounds of the present invention may be included within the scope of the present invention. More particularly, the present invention may include hydrates of the compounds, salts and/or physiologically functional derivatives according to the present invention, which comprise 1, 2 or 1/2 water molecules with respect to the stoichiometry.
  • the compound of the present invention refers to the compound described above.
  • a compound selected from the compounds of the present invention, pharmaceutically acceptable salts, crystal forms, co-crystals, optical isomers, derivatives, hydrates, and solvates thereof can be used for the prevention, improvement, or treatment of a desired disease.
  • the target disease may be a skeletal disease, joint disease, vascular disease, blood disease, skin disease, kidney disease, cardiovascular disease, brain nerve disease, ophthalmic disease, digestive disease, urinary disease, gynecological disease, respiratory disease, infectious disease, allergic disease, rheumatic disease, autoimmune disease, disease caused by transplantation or transplant side effects, or proliferative disease (tumor).
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as an active ingredient, a compound selected from the compounds of the present invention, pharmaceutically acceptable salts, crystal forms, co-crystals, optical isomers, derivatives, hydrates, and solvates thereof.
  • the pharmaceutical composition can prevent, improve or treat cancer.
  • prevention, improvement or treatment comprehensively includes activities of inhibiting the generation or growth of cancer, or improving symptoms of cancer invasion, metastasis or recurrence.
  • the cancer that is intended to be improved or treated with a pharmaceutical composition containing the compound of the present invention as an effective ingredient may be at least one selected from the group consisting of liver cancer, biliary tract cancer, gallbladder cancer, esophageal cancer, stomach cancer, ovarian cancer, breast cancer, uterine cancer, colon cancer, rectal cancer, cervical cancer, prostate cancer, skin cancer, pancreatic cancer, leukemia, lymphoma, Hodgkin's disease, lung cancer, bronchial cancer, multiple myeloma, leukemia, lymphoma, squamous cell carcinoma, kidney cancer, urethral cancer, bladder cancer, head and neck cancer, brain cancer, and central nervous system cancer, preferably lung cancer, and more preferably non-small cell lung cancer.
  • the pharmaceutical composition may be characterized as being in the form of a capsule, tablet, granule, injection, ointment, powder or beverage, and the pharmaceutical composition may be characterized as being intended for humans.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not limited thereto, but may be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, capsules, tablets, and aqueous suspensions, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may include binders, lubricants, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents, pigments, fragrances, etc. for oral administration, and may include buffers, preservatives, analgesics, solubilizers, isotonic agents, stabilizers, and the like for injections.
  • compositions of the present invention may be prepared in various ways by mixing with the pharmaceutically acceptable carriers described above.
  • pharmaceutically acceptable carriers for oral administration, it can be manufactured in the form of tablets, troches, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, etc., and for injections, it can be manufactured in the form of unit dose ampoules or multiple doses.
  • it can be formulated in the form of solutions, suspensions, tablets, capsules, sustained-release preparations, etc.
  • examples of carriers, excipients and diluents suitable for formulation include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methyl hydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil.
  • fillers, anticoagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers and preservatives may be additionally included.
  • the routes of administration of the pharmaceutical composition according to the present invention include, but are not limited to, oral, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intrathecal, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, enteral, topical, sublingual, or rectal. Oral or parenteral administration is preferred.
  • the parenteral administration includes subcutaneous, intradermal, intravenous, intramuscular, intraarticular, intrasynovial, intrasternal, intrathecal, intralesional, and intracranial injection or infusion techniques.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may also be administered in the form of a suppository for rectal administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on various factors including the activity of the specific compound used, age, body weight, general health, sex, diet, administration time, administration route, excretion rate, drug combination, and the severity of the specific disease to be prevented or treated, and the dosage of the pharmaceutical composition may vary depending on the patient's condition, body weight, degree of disease, drug form, administration route, and period, but may be appropriately selected by those skilled in the art, and may be administered at 0.0001 to 50 mg/kg or 0.001 to 50 mg/kg per day. Administration may be once a day or divided into several times. The dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated as a pill, a dragee, a capsule, a liquid, a gel, a syrup, a slurry, or a suspension.
  • composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiotherapy, hormone therapy, chemotherapy, and biological response modifiers.
  • the present invention also provides a method for preventing, improving or treating cancer, comprising administering to a subject in need of administration (e.g., a human) a pharmaceutical composition comprising a compound selected from the compound of the present invention, a pharmaceutically acceptable salt, crystalline form, co-crystal, optical isomer, derivative, hydrate, and solvate thereof as an active ingredient in a pharmaceutically effective amount.
  • a pharmaceutical composition comprising a compound selected from the compound of the present invention, a pharmaceutically acceptable salt, crystalline form, co-crystal, optical isomer, derivative, hydrate, and solvate thereof as an active ingredient in a pharmaceutically effective amount.
  • the “administration” means providing a predetermined compound of the present invention to the subject by any appropriate method.
  • the "subject" requiring the administration in the present invention may include both mammals and non-mammals.
  • mammals may include, but are not limited to, humans, non-human primates such as chimpanzees, and other apes and monkey species; livestock animals such as cattle, horses, sheep, goats, and pigs; domesticated animals such as rabbits, dogs, and cats; and experimental animals such as rodents such as rats, mice, and guinea pigs.
  • examples of non-mammals in the present invention may include, but are not limited to, birds and fish.
  • the term "pharmaceutically effective amount” refers to a sufficient amount of an agent to provide a desired biological result. That result may be a reduction and/or alleviation of the signs, symptoms or causes of a disease, or any other desirable alteration in a biological system.
  • an "effective amount” for therapeutic uses is the amount of a compound disclosed herein required to provide a clinically significant reduction in a disease.
  • An appropriate “effective” amount in any individual case can be determined by those skilled in the art using routine experimentation. Accordingly, the expression “effective amount” generally refers to an amount of an active agent that has a therapeutic effect.
  • the present invention also provides a food composition for preventing or improving cancer, comprising a compound selected from the compounds of the present invention, food acceptable salts, crystal forms, co-crystals, optical isomers, derivatives, hydrates, and solvates thereof.
  • the food composition herein is used in various ways for the indication aimed at in the present invention, that is, for the prevention or improvement of cancer, and the food composition including the compound of the present invention can be manufactured in the form of various foods, for example, beverages, gum, tea, vitamin complexes, powders, granules, tablets, capsules, confectionery, rice cakes, bread, etc.
  • the amount can be added at a ratio of 0.1 to 100% of the total weight.
  • the food composition is manufactured in the form of a beverage, there is no special limitation other than containing the food composition at the indicated ratio, and various flavoring agents or natural carbohydrates, etc. can be contained as additional ingredients like conventional beverages.
  • natural carbohydrates can include monosaccharides such as glucose, disaccharides such as fructose, sucrose, and polysaccharides, dextrin, cyclodextrin, and conventional sugars, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agent thaumatin, stevia extract (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agent (saccharin, aspartame, etc.) can be mentioned.
  • the food composition of the present invention may contain various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agent such as synthetic flavoring agent and natural flavoring agent, coloring agent, pectic acid and its salt, alginic acid and its salt, organic acid, protective colloid thickener, pH regulator, stabilizer, preservative, glycerin, alcohol, carbonating agent used in carbonated beverage, etc.
  • flavoring agent such as synthetic flavoring agent and natural flavoring agent
  • coloring agent such as synthetic flavoring agent and natural flavoring agent
  • pectic acid and its salt such as synthetic flavoring agent and natural flavoring agent
  • coloring agent such as synthetic flavoring agent and natural flavoring agent
  • pectic acid and its salt such as synthetic flavoring agent
  • alginic acid and its salt such as organic acid
  • protective colloid thickener such as sodium bicarbonate
  • pH regulator such as sodium bicarbonate
  • stabilizer such as sodium bicarbonate
  • preservative such as sodium bicarbonate
  • glycerin such as sodium bicarbonate
  • alcohol such as
  • the compound provided in the present invention can simultaneously inhibit the proliferation and metastasis of cancer, it is expected to be actively utilized in the medical and health fields.
  • Figure 1 shows the cancer cell survival inhibition effect of a novel compound synthesized in the present invention according to one specific example of the present invention.
  • Figure 2 shows the cancer cell tumor formation inhibitory effect of a novel compound synthesized in the present invention according to one specific example of the present invention.
  • Figure 3 shows the cancer cell invasion inhibition effect of a novel compound synthesized in the present invention according to one specific example of the present invention.
  • the inventors of the present invention conducted a virtual screening of various candidate substances to discover a cancer cell and/or cancer stem cell treatment substance having an anticancer effect, and as a result, derived a compound of the following chemical formula A as an anticancer candidate substance and synthesized a derivative thereof.
  • the cancer cell invasion inhibition effect was confirmed through a soft agar assay. As a result, all the compounds tested had a significant cancer cell invasion inhibition effect.
  • the inventors of the present invention conducted a virtual screening of various candidate substances to discover a cancer cell and/or cancer stem cell treatment substance having an anticancer effect, and as a result, derived a compound of the following chemical formula A as an anticancer candidate substance and synthesized a derivative thereof.
  • the TLC plate used was TLC Silica Gel 60 GF254 from a Chinese manufacturer, and the HPLC test method referred to the USP test conditions for clobetasol propionate using a 4.6 mm X 15 cm column and C18 packing (pore size 5 um).
  • betamethasone Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl
  • betamethasone Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl
  • betamethasone Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl
  • cortexolone Pregna-4-ene-3-one-10,13-dimethyl-17alpha,21-dihydroxy
  • tetrahydrofuran 20 ml of 2 mol/L hydrochloric acid was added to the reaction solution.
  • betamethasone Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl
  • A549 cells a non-small-cell lung carcinoma (NSCLC) cell line
  • NSCLC non-small-cell lung carcinoma
  • FBS fetal bovine serum
  • penicillin-streptomycin 1% penicillin-streptomycin
  • HEPES 1% HEPES at 5% CO 2 and 37°C.
  • DMSO Dimethyl sulfoxide
  • RU486 mifepristone
  • ⁇ 10 4 cells were seeded in a 96-well plate and cultured for 24 hours with DMEM medium containing 1 ⁇ M, 10 ⁇ M, 25 ⁇ M, or 50 ⁇ M of each compound. After removing the supernatant and washing with PBS, the cells were additionally cultured for 4 hours with serum-free DMEM medium containing MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide), the medium was removed, and 100 ⁇ L of DMSO was added and stirred for 1 minute to dissolve the purple foam. This was measured at 595 nm. The results are shown in Fig. 1.
  • S001 to S006 had a cancer cell survival inhibition effect in proportion to the concentration.
  • S005 showed an excellent cancer cell survival inhibition effect at a low concentration of 1 ⁇ M or less
  • S001 to S003 showed an excellent cancer cell survival inhibition effect compared to the positive control group, RU486, at a concentration of 25 ⁇ M or higher.
  • the cancer cell survival inhibition effect of S002 and S003 was very remarkable.
  • Tumors are a general term for all abnormally formed masses, and cancer cells have the characteristic of forming a lump (colony) by infinitely dividing and proliferating beyond normal division control.
  • cells were seeded at a very low concentration (3 ⁇ 10 3 ) in a 12-well plate and then cultured in DMEM medium containing 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1 ⁇ M, 10 ⁇ M, 25 ⁇ M, or 50 ⁇ M of each compound for 2 weeks. After that, the degree of colony formation was observed using the crystal violet staining method to confirm the anticancer effect.
  • the supernatant was removed, washed with PBS, and the remaining cells were stained with a crystal violet solution (20% methanol and 0.5% crystal violet) for 10 minutes at room temperature. After washing three times and culturing in a 1% SDS solution for solubilization, the absorbance at a wavelength of 570 nm was measured. The results are shown in Fig. 2.
  • S001 to S005 showed excellent tumor formation inhibition effects starting from a concentration of 1 ⁇ M.
  • S005 showed a tumor formation inhibition effect of more than 50% compared to the negative control DMSO at a concentration of 100 nM, showing that the effect was significant at low concentrations, similar to the cancer cell survival inhibition effect of Example 2-1.
  • the positive controls, RU486 and S006, showed significant tumor formation inhibition effects at concentrations of 25 ⁇ M or higher.
  • the cancer cell invasion inhibition effect was confirmed through a soft agar assay. Specifically, 50 ⁇ l of DMEM medium containing 0.7% agar was added to a 12-well plate and solidified (bottom agar), and 300 ⁇ l of DMEM medium containing 3 ⁇ 10 3 cells and 0.35% agar was added on top of the solidified agar and solidified (top agar). After complete solidification, 250 ⁇ l of DMEM medium containing 1 ⁇ l or 10 ⁇ l of each compound was added and cultured in a CO 2 incubator for about 2 weeks, and the number of colonies formed in the 0.7% agar portion (bottom agar) was determined. The results are shown in Fig. 3.
  • the compound provided in the present invention can simultaneously inhibit the proliferation and metastasis of cancer, it is expected to be actively utilized in the medical and health fields.

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Abstract

본 발명은 신규한 미페프리스톤 유도체 화합물, 및 이의 다양한 용도에 관한 것이다. 효과적인 암 치료제의 개발을 위해서는 암세포의 성장과 전이를 동시에 억제할 수 있어야 한다. 일반적으로 암 성장은 암세포의 무한 증식하는 특성을 의미하고, 암 전이는 암세포가 원발 부위로부터 분리되어 다른 곳으로 이동하는 특성을 의미한다. 따라서 암 성장과 암 전이는 다른 기전에서의 접근이 필요하다. 본 발명에서 제공하는 화합물은 암의 증식 및 전이를 동시에 억제 가능하므로, 의료 및 보건 분야에서 활발하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

신규 화합물 및 이의 용도
본 발명은 신규한 미페프리스톤 유도체 화합물, 및 이의 다양한 용도에 관한 것이다.
암은 전세계적으로 가장 보편적인 사망 원인 중의 하나이다. 약 천만 건의 새로운 케이스가 매년 발생하며, 전체 사망원인의 약 12%를 차지하여 세 번째로 많은 사망의 원인이 되고 있다.
효과적인 암 치료제의 개발을 위해서는 암세포의 성장과 전이를 동시에 억제할 수 있어야 한다. 일반적으로 암 성장은 암세포의 무한 증식하는 특성을 의미한다. 정상적인 세포는 미리 유전자에 프로그래밍된 만큼의 분열을 마치거나, 또는 새로운 세포가 차지할 공간이 부족한 경우 분열을 멈춘다. 그러나 암세포는 분열을 통제하는 기능 조절에 실패된 상태로서, 스스로를 확장할 공간이 부족해지면 세포의 기질을 분해하는 단백질가수분해효소(matrix metalloprotease)를 분비해 주변 공간을 제거하며 스스로를 위한 공간을 확장한다. 반면, 암 전이는 암세포가 원발 부위로부터 분리되어 다른 곳으로 이동하는 특성을 의미한다. 이를 위해서는 ① 암세포가 원발 부위(암 조직)로부터 탈락되어야 하고, ② 혈관 또는 림프관을 구성하는 조직벽을 침습하여 통과하여야 하며, ③ 새로운 곳에서 정착하기 위해 이동된 조직의 기질에 부착 및 융합되어야 하므로, 암 성장과는 다른 기전에서의 접근이 필요하다.
따라서 본 발명은 상기와 같은 문제의 해결을 위해 안출된 것으로, 암의 증식 및 전이를 동시에 억제 가능한 신규 화합물, 및 이의 약학적 용도에 관한 것이다.
본 발명의 일 목적은 암을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 신규 화합물을 제공하고자 한다.
본 발명의 다른 목적은 상기한 화합물을 포함하여 암을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기한 화합물을 사용하여 암을 예방, 개선 또는 치료하는 방법을 제공하고자 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이하, 본원에 기재된 다양한 구체예가 도면을 참조로 기재된다. 하기 설명에서, 본 발명의 완전한 이해를 위해서, 다양한 특이적 상세 사항, 예컨대, 특이적 형태, 조성물 및 공정 등이 기재되어 있다. 그러나, 특정의 구체예는 이들 특이적 상세 사항 중 하나 이상 없이, 또는 다른 공지된 방법 및 형태와 함께 실행될 수 있다. 다른 예에서, 공지된 공정 및 제조 기술은 본 발명을 불필요하게 모호하게 하지 않게 하기 위해서, 특정의 상세사항으로 기재되지 않는다. "한 가지 구체예" 또는 "구체예"에 대한 본 명세서 전체를 통한 참조는 구체예와 결부되어 기재된 특별한 특징, 형태, 조성 또는 특성이 본 발명의 하나 이상의 구체예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸친 다양한 위치에서 표현된 "한 가지 구체예에서" 또는 "구체예"의 상황은 반드시 본 발명의 동일한 구체예를 나타내지는 않는다. 추가로, 특별한 특징, 형태, 조성, 또는 특성은 하나 이상의 구체예에서 어떠한 적합한 방법으로 조합될 수 있다.
명세서에서 특별한 정의가 없으면 본 명세서에 사용된 모든 과학적 및 기술적인 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 당업자에 의하여 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다.
본 발명에 있어서 “암”이란, 제어되지 않은 세포성장으로 특징지어지며, 이러한 비정상적인 세포성장에 의해 종양이라고 불리는 세포 덩어리가 형성되어 주위의 조직으로 침투하고 심한 경우에는 신체의 다른 기관으로 전이되기도 하는 것을 의미한다. 학문적으로는 신생물이라고 명명되기도 한다. 암은 수술, 방사선 및 화학요법으로 치료를 하더라도 많은 경우에 근본적인 치유가 되지 못하고 환자에게 고통을 주며 궁극적으로는 죽음에 이르게 하는 난치성 만성질환으로, 암의 발생요인으로는 여러 가지가 있으나, 내적 요인과 외적 요인으로 구분한다. 정상세포가 어떠한 기전을 거처 암세포로 형질전환이 되는지에 대해서는 정확하게 규명되지 않았으나, 상당수의 암이 환경요인 등 외적인자에 의해 영향을 받아 발생하는 것으로 알려져 있다. 내적 요인으로는 유전 인자, 면역학적 요인 등이 있으며, 외적 요인으로는 화학물질, 방사선, 바이러스 등이 있다. 암의 발생에 관련되는 유전자에는 종양형성유전자 (oncogenes)와 종양억제유전자 (tumor suppressor genes)가 있는데, 이들 사이의 균형이 위에서 설명한 내적 혹은 외적 용인들에 의해 무너질 때 암이 발생하게 된다. 상기 암은 바람직하게는 유방암, 자궁암, 식도암, 위암, 뇌암, 직장암, 대장암, 폐암, 피부암, 난소암, 자궁경부암, 신장암, 혈액암, 췌장암, 전립선암, 고환암, 후두암, 구강암, 두경부암, 갑상선암, 간암, 방광암, 골육종, 림프종, 백혈병 등 일 수 있으며, 종양의 분화 및/또는 증식 등 암의 진행이 본 발명에서 기술하는 암세포 및/또는 암 줄기세포에 의존적인 암의 종류라면 이에 제한되지 않는다. 이 때 상기의 암 줄기세포(cancer stem cell; CSC)란 줄기세포 특유의 능력인 자가재생능력이나 분화능력을 가지고 있는 포괄적인 의미의 암세포를 의미하며, 암 조직에서 암 줄기세포는 0.1 내지 5% 사이로 존재하는 것으로 추정된다. 상기 암 줄기세포는 정상적인 종양의 생장 조건(상기 "정상적인 종양의 생장 조건"이란 세포 성장에 필요한 영양분(포도당)이 충분하고 종양미세환경의 생장 여건이 풍족하여 세포 스트레스가 없는 상태를 지칭한다.)에서 일반적인 암세포와 상이하게 천천히 증식하는 특징을 가진다. 또한 휴지기(dormant state) 상태를 유지하여 항암제에 대한 저항성을 가지고 있을 수 있으며, 정상적인 종양 세포와 달리 PGC-1α 등의 전사조절인자의 발현이 통제되어 주요 대사조절물질의 기능이 일반 암세포와 비교하여 상이한 특징이 있다. 이러한 상이한 대사 조절 및 이와 연계된 세포신호전달계의 조절을 통해 영양 결핍 상태에서 세포 사멸(apoptosis)에 대한 저항성을 획득하여 침윤 및/또는 전이능이 있는 세포를 포괄적으로 지칭한다. 그러나 일반적인 암 세포로 분화할 수 있는 세포라면 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서 “가상 스크리닝”이란, 신약 개발 과정 중에 거치게 되는 수많은 절차들 중의 하나로, 보다 구체적으로는 기초 연구로부터 선정된 화합물 스크리닝을 통해 유효 물질 및 선도 물질을 발굴하여 후보물질을 확정하는 절차를 말한다. 이는 신약 개발에 소요되는 시간과 비용을 줄여줄 수 있으며, 대상 질병이 선정된 후 이를 표적으로 하는 신약 유효 물질을 발굴할 수 있으며, 3차원으로 재구성한 유전자 단백질 정보를 이용하여 컴퓨터로 약효가 예상되는 물질을 선택적으로 찾는 것 또한 가능하다. 가상 스크리닝 기술은 라이브러리 제작뿐만 아니라 실제 존재하는 라이브러리와 특정 작용점에 대한 활성 스크리닝으로도 활용될 수 있다. 그러나 일반적이고 보편적인 스크리닝 기술이라면 이에 제한되지 않는다.
이하 본 명세서에서 기술되는 화합물에 있어서, 본 명세서에 사용되는 용어 '할로겐'은 다른 언급이 없으면, 플루오르, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 용어 'C1~C6의 알킬'은 다른 언급이 없으면, 탄소수 1 내지 6개의 직쇄형 또는 분지형의 탄화수소 잔기를 의미한다. 이의 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, sec-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실 등을 들 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 용어 '아릴'은 다른 언급이 없으면, 융합 또는 비-융합된 하나 이상의 방향족 고리를 갖는, 탄소수 n개의 모노- 또는 폴리-시클릭 카르보시클릭 고리 시스템을 지칭하고, 아릴의 예로는 페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 인데닐 및 안드라세닐 등을 들 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서는 상기와 같은 가상스크리닝을 통해 항암용 후보 물질로서 하기 화학식 A의 화합물을 도출하고 이의 유도체를 합성하였다.
[화학식 A]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000001
상기 화학식 A의 유도체는 하기 화학식 B로 표시되는 화합물인 것일 수 있다.
[화학식 B]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000002
상기 식에서, ---는 선택적인 이중 결합이고, R1, R6은 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R2는 수소 또는 할로겐이고, R3는 수소,
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000003
(여기서 X는 수소, 할로겐, 또는 알킬임) 또는
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000004
이고, R4, R5는 서로 상이하며, 각각 독립적으로, 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-알킬, 알킨, 또는 -OR7이고, 여기서 R7은 수소, 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-알킬일 수 있다.
그러나 바람직한 구현예로, 상기 화학식 A의 유도체는 본 발명에서 합성된 신규화합물로서 하기 화학식 1 내지 화학식 6으로 표현되는 것일 수 있다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000005
[화학식 2]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000006
[화학식 3]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000007
[화학식 4]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000008
[화학식 5]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000009
[화학식 6]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000010
상기 화학식 1은 본 발명에 기재된 반응식 1에 따라 (a) 프레그나-1,4-디엔-3-온, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])를 합성하는 단계; (b) 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-(4'-클로로)-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])를 합성하는 단계; 및 (c) 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,9-플루오로-11-베타-(4'-클로로)-벤족시,17-알파,21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,9-fluoro-11-beta-(4’-chloro)-benzoxy,17-alpha,21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)를 합성하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것으로, 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타(4'-클로로)-벤족시-16-베타-메틸-17-히드록시(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta(4’-chloro)-benzoxy-16-beta-methyl-17-hydroxy)로 명명될 수 있다.
상기 화학식 2는 본 발명에 기재된 반응식 2에 따라 (a) 프레그나-1,4-디엔-3-온, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])를 합성하는 단계; (b) 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])를 합성하는 단계; 및 (c) 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온, 9-플루오로-11-베타 벤족시, 17-알파, 21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)를 합성하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것으로, 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타 벤족시,17-히드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta benzoxy,17-hydroxy-10,13, 16-beta-trimethyl)로 명명될 수 있다.
상기 화학식 3은 본 발명에 기재된 반응식 3에 따라 (a) 프레그나-1,4-디엔-3-온, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])를 합성하는 단계; (b) 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-(4'-이소프로필)-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-isopropyl)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])를 합성하는 단계; 및 (c) 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온, 9-플루오로-11-베타-(4'-이소프로필)-벤족시, 17-알파, 21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta-(4’-isopropyl)-benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)를 합성하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것으로, 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타-(4'-이소프로필)-벤족시,17-히드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta-(4’-isoproyl)-benzoxy,17-hydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)로 명명될 수 있다.
상기 화학식 4는 본 발명에 기재된 반응식 4에 따라 (a) 프레그-4-엔-3,20-디온,10,13-디메틸-17,21-[(1-메톡시프로필리덴)비스(옥시)](Pregn-4-ene-3,20-dione,10,13-dimethyl-17,21-[(1-methoxypropylidene)bis(oxy)])를 합성하는 단계; 및 (b) 프레그-4-엔-3,20-디온-10,13-디메틸-21-클로로-17-하이드록시-17-프로피오네이트(Pregn-4-ene-3,20-dione-10,13-dimethyl-21-chloro-17-hydroxy-17-propionate)를 합성하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것으로, 프레그-1,4-디엔-3,20-디오네-10,13-디메틸-21-클로로-17-히드록시-17-프로피오네이트(Pregn-1,4-diene-3,20-dionee-10,13-dimethyl-21-chloro-17-hydroxy-17-propionate)로 명명될 수 있다.
상기 화학식 5는 본 발명에 기재된 반응식 5에 따라 미페프리스톤으로부터 합성되는 것으로, 11베타-[4'-(N,N'-디메틸아미노)페닐]-17알파-(프로프-1-이닐)-델타4,9-에스트라디엔-3-온-17베타-하이드록시-(2'-클로로)아세테이트(11beta-[4’-(N,N’-dimethylamino)phenyl]-17alpha-(prop-1-ynyl)-delta4,9-estradiene-3-one-17beta-hydroxy-(2’-chloro)acetate)로 명명될 수 있다.
상기 화학식 6은 본 발명에 기재된 반응식 6에 따라 (a) 프레그나-1,4-디엔-3-원, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])를 합성하는 단계; (b) 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-(4'-클로로)-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])를 합성하는 단계; (c) 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,9-플루오로-11-베타-(4'-클로로)-벤족시,17-알파,21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,9-fluoro-11-beta-(4’-chloro)-benzoxy,17-alpha,21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)를 합성하는 단계; 및 (d) 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타(4'-클로로)-벤족시-16-베타-메틸-17-히드록시(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta(4’-chloro)-benzoxy-16-beta-methyl-17-hydroxy)를 합성하는 단계;를 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것으로, 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타(4'-클로로-벤족시)-16-베타-메틸-17-하이드록시 프로피오네이트(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta(4’-chloro-benzoxy)-16-beta-methyl-17-hydroxy propionate)로 명명될 수 있다.
본 발명은 상기 기재한 신규화합물, 및 이의 제조방법(합성방법)을 제공하고, 또한 상기 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 상기 약학적으로 허용되는 염은, 의학적 적용에 적합한 것으로 당업자에 의해 일반적으로 간주되는 염(예를 들어 이러한 염이 상기 염으로 치료될 수 있는 대상체에게 유해하지 않기 때문임), 또는 각각의 치료 내에서 허용 가능한 부작용을 야기하는 염이다. 일반적으로, 상기 약학적으로 허용되는 염은 미국 식품 의약국(FDA), 유럽 의약청(EMA), 또는 일본 후생성의 의약품의료기기종합기구(PMDA)와 같은 규제 당국에 의해 허용되는 것으로 간주되는 염이다. 그러나, 본 발명은 원칙적으로, 예를 들어 본 발명에 따른 화합물 또는 그의 생리학적으로 작용성인 유도체의 제조에서의 중간체, 또는 본 발명에 따른 화합물의 약학적으로 허용되는 염 또는 그의 생리학적으로 작용성인 유도체의 제조에서의 중간체로서, 그 자체로는 약학적으로 허용되지 않는 본 발명에 따른 화합물의 염을 또한 포함한다. 상기 염은 수불용성 염을 포함하고, 특히, 수용성 염을 포함한다.
각각의 경우에, 당업자는 본 발명에 따른 특정 화합물 또는 그의 생리학적으로 작용성인 유도체가 염을 형성할 수 있는지 여부, 즉, 상기 본 발명에 따른 화합물 또는 그의 생리학적으로 작용성인 유도체가, 예를 들어 아미노기, 카르복실산기 등과 같은 전하를 띨 수 있는 기를 가지는지 여부를 쉽게 결정할 수 있다.
본 발명의 화합물의 예시적인 염은 산 부가 염 또는 염기와의 염, 특히 약학적으로 허용되는 무기산 및 유기산 부가 염 및 약학에서 통상적으로 사용되는 염기와의 염이며, 이는 수불용성 또는 특히 수용성 산 부가 염이다. 본 발명의 화합물의 치환기에 따라 염기와의 염이 또한 적합할 수 있다. 산 부가 염은, 예를 들어, 본 발명의 화합물의 용액을 염산, 황산, 푸마르산, 말레산, 석신산, 아세트산, 벤조산, 시트르산, 타르타르산, 탄산 또는 인산과 같은 약학적으로 허용되는 산의 용액과 혼합함으로써 형성될 수 있다. 마찬가지로, 약학적으로 허용되는 염기 부가 염은 알칼리 금속염(예를 들어, 나트륨 또는 칼륨 염); 알칼리 토금속 염(예를 들어, 칼슘 또는 마그네슘 염); 및 적합한 유기 리간드로 형성된 염(예를 들어, 할라이드, 하이드록사이드, 카복실레이트, 설페이트, 포스페이트, 니트레이트, 알킬 설포네이트 및 아릴 설포네이트와 같은 반대 음이온을 사용하여 형성된 암모늄, 4차 암모늄 및 아민 양이온)을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 염의 예시적인 예로는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아르기네이트, 아스코르베이트, 아스파테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 바이카르보네이트, 바이설페이트, 바이타르트레이트, 보레이트, 브로마이드, 부티레이트, 칼슘 에데테이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 캄실레이트, 카르보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 디글루코네이트, 디하이드로클로라이드, 도데실설페이트, 에데테이트, 에디실레이트, 에탄설포네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 갈락테이트, 갈락투로네이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 헥실레소르시네이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 하이드록시나프토에이트, 요오다이드, 이소부티레이트, 이소티오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트), 메틸설페이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 판토테네이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트/디포스페이트, 프탈레이트, 피크레이트, 피발레이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 설페이트, 수베레이트, 석시네이트, 탄네이트, 타르트레이트, 토실레이트, 운데카노에이트, 발레레이트 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
약학적으로 허용되지 않으며, 예를 들어, 산업적 규모로 본 발명에 따른 화합물을 제조하는 동안 공정 생성물로서 수득될 수 있는 염이 또한 본 발명에 포함되고, 요망되는 경우, 이는 당업자에게 알려진 방법에 의해 약학적으로 허용되는 염으로 전환될 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 화합물들은 비대칭 탄소 중심을 가질 수 있으므로 R 또는 S 이성질체 또는 라세믹 화합물로서 존재할 수 있으며 이들 모든 광학이성질체 및 혼합물은 본 발명의 범위에 포함될 수 있다.
그 외에도, 본 발명의 화합물뿐만 아니라 그의 염은, 예를 들어 결정질 형태로 분리될 때, 다양한 양의 용매를 함유할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물의 용매화물, 특히 수화물뿐만 아니라 본 발명의 화합물의 염의 용매화물, 특히 수화물이 본 발명의 범위에 포함될 수 있다. 더욱 특히, 본 발명은, 화학량론에 대하여 1개, 2개 또는 1/2개의 물 분자를 포함하는, 본 발명에 따른 화합물, 염 및/또는 생리학적으로 작용성인 유도체의 수화물을 포함할 수 있다.
이하 본 발명의 화합물이란 상기 기재된 화합물을 의미한다.
본 발명의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물은 목적하는 질병의 예방, 개선 또는 치료를 위해 이용될 수 있다.
이 때 상기 목적하는 질병은 골격 질환, 관절 질환, 혈관 질환, 혈액 질환, 피부 질환, 신장 질환, 심혈관 질환, 뇌신경 질환, 안과 질환, 소화기 질환, 비뇨기 질환, 부인과 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 알레르기 질환, 류머티즘성 질환, 자기면역성 질환, 이식 또는 이식 부작용에 의한 질환, 또는 증식성 질환(종양)일 수 있다.
본 발명은 본 발명의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물을 유효 성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 약학적 조성물은 암을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다. 여기서의 예방, 개선 또는 치료는 암의 생성 또는 성장을 억제하거나, 암의 침윤 및 전이, 재발의 증상을 개선시키는 활동을 포괄적으로 포함한다.
본 발명에서 상기 본 발명의 화합물이 유효성분으로 포함되는 약학적 조성물로 개선 또는 치료를 목적하는 대상으로서의 암은 간암, 담도암, 담낭암, 식도암, 위암, 난소암, 유방암, 자궁암, 결장암, 직장암, 자궁경부암, 전립선암, 피부암, 췌장암, 백혈병, 림프종, 호지킨병, 폐암, 기관지암, 다발성 골수종, 백혈병, 림프종, 편평세포암, 신장암, 요도암, 방광암, 두경부암, 뇌암 및 중추신경계 암으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 폐암일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 비소세포성 폐암일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학적 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 약제적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형할 수 있다.
한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥 내, 근육 내, 동맥 내, 골수 내, 경막 내, 심장 내, 경피, 피하, 복강 내, 비강 내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다. 상기 비경구 투여는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여시간, 투여경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학적 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 의약 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한 본 발명은 투여가 필요한 대상체 (예를 들어, 인간)에게 본 발명의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방, 개선 또는 치료 방법을 제공한다. 이 때, 상기 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 대상체에 소정의 본 발명의 화합물을 제공하는 것을 의미한다.
상기 암의 예방, 개선, 또는 치료 방법에서의 암, 약학적 조성물, 및 투여 경로에 관한 구체적 사항은 상기 “본 발명의 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물을 유효 성분으로 포함하는 약학적 조성물”에서 기재한 바와 중복되어, 명세서의 과도한 복잡성을 방지하기 위하여 생략한다.
본 발명에서 상기 투여가 필요한 "대상체"는 포유동물 및 비-포유동물을 모두 포함할 수 있다. 여기서, 상기 포유동물의 예로는 인간, 비-인간 영장류, 예컨대 침팬지, 및 다른 유인원 및 원숭이 종; 축산 동물, 예컨대 소, 말, 양, 염소, 돼지; 사육 동물, 예컨대 토끼, 개 및 고양이; 실험 동물, 예를 들어 설치류, 예컨대 래트, 마우스 및 기니아 피그 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에서 상기 비-포유동물의 예로는 조류 및 어류 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서, 상기 “약학적으로 유효한 양"은 바람직한 생물학적 결과를 제공하기 위한 작용제의 충분한 양을 지칭한다. 상기 결과는 질환의 징후, 증상 또는 원인의 감소 및/또는 완화, 또는 생물계의 임의의 다른 바람직한 변화일 수 있다. 예를 들어, 치료 용도를 위한 "유효량"은 질환에서 임상적으로 유의한 감소를 제공하는데 요구되는, 본 발명에 개시된 화합물의 양이다. 임의의 개별적인 경우에서 적절한 "효과적인" 양은 일상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 따라서, 표현 "유효량"은 일반적으로 활성 물질이 치료 효과를 갖는 양을 지칭한다.
본 발명은 또한 본 발명의 본 발명의 화합물, 이의 식품적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물을 포함하는 암 예방 또는 개선용 식품조성물을 제공한다.
여기서의 식품조성물은 본 발명에서 목적으로 하는 적응증, 즉 암의 예방 또는 개선을 위해 다양하게 이용되는 것으로서, 본 발명의 화합물을 포함하는 식품조성물은 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 과자, 떡, 빵 등의 형태로 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물이 식품조성물에 포함될 때 그 양은 전체 중량의 0.1 내지 100%의 비율로 첨가할 수 있다. 여기서, 상기 식품조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 상기 식품조성물을 함유하는 것 외에 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 즉, 천연탄수화물로서 포도당 등의 모노사카라이드, 과당 등의 디사카라이드, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜 등을 포함할 수 있다. 상기 향미제로서는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등) 등을 들 수 있다. 그 외 본 발명의 식품조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성풍미제 및 천연풍미제 등의 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 통상적으로 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 100 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하 본 발명을 실시예에 입각하여 구체적으로 서술한다.
본 발명에서 제공하는 화합물은 암의 증식 및 전이를 동시에 억제 가능하므로, 의료 및 보건 분야에서 활발하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일 구체예에 따른, 본 발명에서 합성한 신규화합물의 암세포 생존 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 구체예에 따른, 본 발명에서 합성한 신규화합물의 암세포 종양 형성 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 구체예에 따른, 본 발명에서 합성한 신규화합물의 암세포 침윤 억제 효과를 나타낸 것이다.
본 발명의 발명자들은 항암 작용을 하는 암세포 및/또는 암 줄기세포 치료 물질을 발굴하기 위해서 다양한 후보 물질을 가상 스크리닝한 결과, 항암용 후보 물질로서 하기 화학식 A의 화합물을 도출하고 이의 유도체를 합성하였다.
[화학식 A]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000011
본 발명의 신규화합물의 암 전이 억제 효과를 확인하기 위해 소프트 아가 분석(soft agar assay)를 통해 암세포의 침윤 억제 효과를 확인하였다. 그 결과, 시험된 모든 화합물이 유의미한 암세포 침윤 억제 효과가 있었다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 신규한 항암용 화합물 제조
본 발명의 발명자들은 항암 작용을 하는 암세포 및/또는 암 줄기세포 치료 물질을 발굴하기 위해서 다양한 후보 물질을 가상 스크리닝한 결과, 항암용 후보 물질로서 하기 화학식 A의 화합물을 도출하고 이의 유도체를 합성하였다.
[화학식 A]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000012
이하 제조예에서 TLC 플레이트는 중국 제조사의 TLC Silica Gel 60 GF254를 사용하였고, HPLC 시험방법은 4.6mm X 15cm 컬럼과 C18 패킹(기공크기 5um)을 이용한 클로베타솔 프로피오네이트의 USP 시험조건을 참고하였다.
제조예 1(S001)
하기의 반응식 1에 따라 합성을 진행하였다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000013
1. 프레그나-1,4-디엔-3-온, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])의 합성.
10g의 베타메타손(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl)을 디클로로메탄 100ml에 용해시켰다. 200 ml의 7 mol/L 염산과 20 g의 파라포름알데히드를 첨가하고, 24시간 동안 교반하고, TLC(용리액 n-Hex:EA = 1:1 Rf= 0.4)로 반응을 확인하였다. 반응이 완료되면 유기층을 증발시켰다. 그 후 메탄올로 재결정하여 6.7g의 생성물을 얻었다.
2. 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-(4'-클로로)-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])의 합성.
1의 생성물(Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20, 21-bis[methylenebis(oxy)]) 6.7g을 테트라히드로푸란에 용해시켰다. 이를 0℃에서 냉각시키고, 수소나트륨(60%) 1.2g을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후 벤질 브로마이드 2g을 반응 용액에 떨어뜨리고 24시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 9:1에서 5:1로)로 정제하여 생성물 3.1g을 얻었다.
3. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,9-플루오로-11-베타-(4'-클로로)-벤족시,17-알파,21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,9-fluoro-11-beta-(4’-chloro)-benzoxy,17-alpha,21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)의 합성.
2의 생성물(Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)]) 3.1g을 20ml 테트라히드로푸란에 용해시키고, 0℃에서 냉각시키고, 20ml 불화수소산을 첨가하여 14시간 동안 교반하였다. 유기층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기용매를 증발시켜 생성물 2.6g을 얻었다.
4. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타(4'-클로로)-벤족시-16-베타-메틸-17-히드록시(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta(4’-chloro)-benzoxy-16-beta-methyl-17-hydroxy)의 합성.
3의 생성물(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta-(4’-chloro)-benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl) 2.6g을 5ml 피디딘에 용해시키고, 0℃에서 냉각시킨 후, 메탄설포닐 클로라이드 700mg을 가하고 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 2:1 Rf=0.35)로 확인하였다. 잔류물에 에틸 아세테이트를 첨가하고 물로 세척한 후, 유기 용매를 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 부타논에 직접 용해시키고, 무수 염화리튬 2g을 첨가하고, 24시간 동안 교반하였다. 유기층을 증발시키고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 5:1)로 정제하여 생성물 1.9g을 얻었다. 이를 이하 S001 화합물, 또는 화학식 1의 화합물로 명명한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000014
상기 S001 화합물(화학식 1)의 NMR 분석 결과는 다음과 같다:
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.343(d, 2H, J=10.5Hz), 7.265(d, 2H, J=10.5Hz), 6.82(d, 1H, J=12.5Hz), 6.297(dd, 1H, J1=12.5Hz, J2=3Hz), 6.094 (s,1H),4.717(d,1H, J=13.5Hz), 4.487 (AB, 2H, J1=54.0Hz, J2=20.5Hz), 4.274(d,1H, J=13.5Hz),4.03 (dm, 1H, J=11.0Hz), 1.389(s,3H),1.171(s,3H), 1.148 (d, 3H, J=7.5Hz),
LC-MS (ESI) m/z: 535.0 [M+H]+
HPLC purity: 98.29%, Waters e2695, Xbridge C18, 210nm, acetonitrile:water=50:50
제조예 2(S002)
하기의 반응식 2에 따라 합성을 진행하였다.
[반응식 2]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000015
1. 프레그나-1,4-디엔-3-온, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])의 합성.
10g의 베타메타손(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl)을 디클로로메탄 100ml에 용해시켰다. 200 ml의 7 mol/L 염산과 20 g의 파라포름알데히드를 첨가하고, 24시간 동안 교반하고, TLC(용리액 n-Hex:EA = 1:1 Rf= 0.4)로 반응을 확인하였다. 반응이 완료되면 유기층을 증발시켰다. 그 후 메탄올로 재결정하여 6.7g의 생성물을 얻었다.
2. 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])의 합성.
1의 생성물(Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20, 21-bis[methylenebis(oxy)]) 6.7g을 테트라히드로푸란에 용해시켰다. 이를 0℃에서 냉각시키고, 수소나트륨(60%) 1.2g을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후 벤질 브로마이드 2g을 반응 용액에 떨어뜨리고 밤새도록 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 9:1에서 5:1로)로 정제하여 생성물 1.1g을 얻었다.
3. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온, 9-플루오로-11-베타 벤족시, 17-알파, 21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)의 합성.
2의 생성물(Pregna-1, 4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl enebis(oxy)]) 1.1g을 20ml 테트라히드로푸란에 용해시키고, 0℃에서 냉각시키고, 20ml 불화수소산을 첨가하여 24시간 동안 교반하였다. 유기층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기용매를 증발시켜 생성물 890mg을 얻었다.
4. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타 벤족시,17-히드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta benzoxy,17-hydroxy-10,13, 16-beta-trimethyl)의 합성.
3의 생성물(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl) 890mg을 5ml 피디딘에 용해시키고, 0℃에서 냉각시킨 후, 메탄설포닐 클로라이드 250mg을 가하고 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 2:1, Rf=0.31)로 확인하였다. 잔류물에 에틸 아세테이트를 첨가하고 물로 세척한 후, 유기 용매를 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 부타논에 직접 용해시키고, 무수 염화리튬 2g을 첨가하고, 상온에서 밤새도록 교반하였다. 유기층을 증발시키고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 5:1)로 정제하여 생성물 120mg을 얻었다. 이를 이하 S002 화합물, 또는 화학식 2의 화합물로 명명한다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000016
상기 S002 화합물(화학식 2)의 NMR 분석 결과는 다음과 같다:
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.344 (m, 5H), 6.792(d, 1H,J=13Hz), 6.258 (dd, 1H, J1=12.5Hz, J2=2Hz,), 6.079 (s, 1H), 4.743 (d, 1H, J=13.5Hz,), 4.500 (AB, 2H, J1=57.5Hz, J2=20Hz),4.313 (d, 1H, J=13.5Hz), 4.03 (dm,1H, J=11.5Hz), 1.406 (s, 3H), 1.184 (s, 3H), 1.148 (d, 2H, J=9Hz),
LC-MS (ESI) m/z: 501.0 [M+H]+
HPLC purity: 98.09%, Waters e2695, Xbridge C18, 210nm, acetonitrile:water=50:50
제조예 3(S003)
하기의 반응식 3에 따라 합성을 진행하였다.
[반응식 3]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000017
1. 프레그나-1,4-디엔-3-온, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])의 합성.
10g의 베타메타손(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl)을 디클로로메탄 100ml에 용해시켰다. 200 ml의 7 mol/L 염산과 20 g의 파라포름알데히드를 첨가하고, 24시간 동안 교반하고, TLC(용리액 n-Hex:EA = 1:1 Rf= 0.4)로 반응을 확인하였다. 반응이 완료되면 유기층을 증발시켰다. 그 후 메탄올로 재결정하여 6.7g의 생성물을 얻었다.
2. 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-(4'-이소프로필)-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-isopropyl)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])의 합성.
1의 생성물(Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20, 21-bis[methylenebis(oxy)]) 6.7g을 테트라히드로푸란에 용해시켰다. 이를 0℃에서 냉각시키고, 수소나트륨(60%) 1.2g을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후 (4'-이소프로필)-벤질 브로마이드 2g을 반응 용액에 떨어뜨리고 밤새도록 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 9:1에서 5:1로)로 정제하여 생성물 0.95g을 얻었다.
3. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온, 9-플루오로-11-베타-(4'-이소프로필)-벤족시, 17-알파, 21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta-(4’-isopropyl)-benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)의 합성.
2의 생성물(Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-isopropyl)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)]) 0.95g을 20ml 테트라히드로푸란에 용해시키고, 0℃에서 냉각시키고, 20ml 불화수소산을 첨가하여 24시간 동안 교반하였다. 유기층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기용매를 증발시켜 생성물 560mg을 얻었다.
4. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타-(4'-이소프로필)-벤족시,17-히드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta-(4’-isoproyl)-benzoxy,17-hydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)의 합성.
3의 생성물(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta-(4’-isopropyl)-benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl) 560mg을 5ml 피디딘에 용해시키고, 0℃에서 냉각시킨 후, 메탄설포닐 클로라이드 250mg을 가하고 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 2:1, Rf=0.31)로 확인하였다. 잔류물에 에틸 아세테이트를 첨가하고 물로 세척한 후, 유기 용매를 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 부타논에 직접 용해시키고, 무수 염화리튬 2g을 첨가하고, 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 유기층을 증발시키고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 5:1)로 정제하여 생성물 125mg을 얻었다. 이를 이하 S003 화합물, 또는 화학식 3의 화합물로 명명한다.
[화학식 3]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000018
상기 S003 화합물(화학식 3)의 NMR 분석 결과는 다음과 같다:
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.18 (d, 1H, J=10Hz), 7.07(m, 4H), 6.38 (d, 1H, J=10.2Hz), 4.43 (AB, 2H, J1=68Hz, J2=16Hz), 4.38 (m, 1H), 3.82 (AB, 2H, J1=52Hz, J2=15Hz), 2.84 (m, 2H), 1.56(s,3H),1.21 (d,6H, J=17Hz), 1.165 (s, 3H), 1.15 (d, 3H, J=7.5Hz),
LC-MS (ESI) m/z: 543.0 [M+H]+
HPLC purity: 97.13%, Waters e2695, Xbridge C18, 210nm, acetonitrile:water=50:50
제조예 4(S004)
하기의 반응식 4에 따라 합성을 진행하였다.
[반응식 4]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000019
1. 프레그-4-엔-3,20-디온,10,13-디메틸-17,21-[(1-메톡시프로필리덴)비스(옥시)](Pregn-4-ene-3,20-dione,10,13-dimethyl-17,21-[(1-methoxypropylidene)bis(oxy)])의 합성.
2g의 코르텍솔론(Pregna-4-ene-3-one-10,13-dimethyl-17alpha,21-dihydroxy)을 테트라히드로푸란에 용해시켰다. 이를 0℃에서 냉각시키고, 20 ml의 2 mol/L 염산을 반응액에 첨가하였다. 이를 15시간 동안 교반하고, 반응을 물로 켄칭하고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 0.4)로 정제하여 생성물 0.45mg을 얻었다.
2. 프레그-4-엔-3,20-디온-10,13-디메틸-21-클로로-17-하이드록시-17-프로피오네이트(Pregn-4-ene-3,20-dione-10,13-dimethyl-21-chloro-17-hydroxy-17-propionate)의 합성.
1의 생성물(Pregn-4-ene-3,20-dione-10,13-dimethyl-17, 21-dihydroxy-17-propionate) 450mg을 5ml의 피리딘에 용해시켰다. 이를 0℃에서 냉각시키고, 메탄술포닐 클로라이드 250 mg을 첨가한 후, 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 2:1, Rf= 0.43)로 확인하였다.
에틸 아세테이트를 첨가하고 물로 세척한 후, 유기 용매를 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 부타논에 직접 용해시키고, 무수 염화리튬 2g을 첨가하고, 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 유기층을 증발시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 5:1)로 정제하여 생성물 189mg을 얻었다.
3. 프레그-1,4-디엔-3,20-디오네-10,13-디메틸-21-클로로-17-히드록시-17-프로피오네이트(Pregn-1,4-diene-3,20-dionee-10,13-dimethyl-21-chloro-17-hydroxy-17-propionate)의 합성.
2의 생성물(Pregn-4-ene-3,20-dionee-10,13-dimethyl-21-chloro-17-hydroxy-17-propionate) 189mg을 5ml의 1,4-디옥산에 용해시키고, 120mg의 DDQ를 첨가한 후, 열을 가하고, 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 2:1, Rf=0.35)로 확인하였다. 유기용매를 증발시키고, 미정제 생성물을 SFC(CO2:MeOH=98:2)로 정제하여 생성물 68mg을 얻었다. 이를 이하 S004 화합물, 또는 화학식 4의 화합물로 명명한다.
[화학식 4]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000020
상기 S004 화합물(화학식 4)의 NMR 분석 결과는 다음과 같다:
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.05 (d, 1H, J=10.0Hz), 6.25(dd, 1H, J1=10.0Hz, J2=1.5Hz), 6.093 (s, 1H), 4.132 (AB, 2H, J1=70.0Hz, J2=15Hz),2.91 (m, 1H), 2.495 (td,1H, J1=13.5Hz, J2=5.5Hz), 2.33-2.41(m,3H),1.24 (s, 3H), 1.143 (t, 3H), 0.757 (3, 3H),
LC-MS (ESI) m/z: 419.0 [M+H]+
HPLC purity: 99.68%, Waters e2695, Xbridge C18, 210nm, acetonitrile:water=60:40
제조예 5(S005)
하기의 반응식 5에 따라 합성을 진행하였다.
[반응식 5]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000021
11베타-[4'-(N,N'-디메틸아미노)페닐]-17알파-(프로프-1-이닐)-델타4,9-에스트라디엔-3-온-17베타-하이드록시-(2'-클로로)아세테이트(11beta-[4’-(N,N’-dimethylamino)phenyl]-17alpha-(prop-1-ynyl)-delta4,9-estradiene-3-one-17beta-hydroxy-(2’-chloro)acetate)의 합성.
2g의 미페프리스톤(11beta-[4’-(N,N’-dimethylamino)phenyl]-17alpha-(prop-1-ynyl)-delta 4,9-estradiene-3-one-17beta-hydroxy)을 디클로로메탄 20ml에 용해시키고, 2g의 클로로아세틸 클로라이드를 첨가하였다. 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 1:1, Rf= 0.52)로 확인하였다. 유기용매를 증발시키고, 생성물을 고성능 액상(pre-HPLC 아세토니트릴:물=50:50)에서 정제하여 생성물 120 mg을 얻었다. 이를 이하 S005 화합물, 또는 화학식 5의 화합물로 명명한다.
[화학식 5]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000022
상기 S005 화합물(화학식 5)의 NMR 분석 결과는 다음과 같다:
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.03(d, 2H, J=10.5Hz), 6.68(dm, 2H, J=9.0Hz), 6.81(d, 1H), 5.76(s, 1H) , 4.36(d, 1H, J=9.0Hz),3.997 (s, 2H), 2.93 (s, 6H), 191(s,3H),0.566 (s, 3H),
LC-MS (ESI) m/z: 430.0 [M+H]+
HPLC purity: 98.19%, Waters e2695, Xbridge C18, 210nm, acetonitrile:water=50:50
제조예 6(S006)
하기의 반응식 6에 따라 합성을 진행하였다.
[반응식 6]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000023
1. 프레그나-1,4-디엔-3-원, 9-플루오로-11베타-히드록시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸-엔비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methyl-enebis(oxy)])의 합성.
10g의 베타메타손(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11beta,17alpha,21-trihydroxy-16beta-methyl)을 디클로로메탄 100ml에 용해시켰다. 200 ml의 7 mol/L 염산과 20 g의 파라포름알데히드를 첨가하고, 24시간 동안 교반하고, TLC(용리액 n-Hex:EA = 1:1 Rf= 0.4)로 반응을 확인하였다. 반응이 완료되면 유기층을 증발시켰다. 그 후 메탄올로 재결정하여 6.7g의 생성물을 얻었다.
2. 프레그나-1,4-디엔-3-온,9-플루오로-11베타-(4'-클로로)-벤족시-16베타-메틸-17,20:20,21-비스[메틸렌비스(옥시)](Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)])의 합성.
1의 생성물(Pregna-1,4-dien-3-one, 9-fluoro-11beta-hydroxy-16beta-methyl-17,20:20, 21-bis[methylenebis(oxy)]) 6.7g을 테트라히드로푸란에 용해시켰다. 이를 0℃에서 냉각시키고, 수소나트륨(60%) 1.2g을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후 벤질 브로마이드 2g을 반응 용액에 떨어뜨리고 24시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭하고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 9:1에서 5:1로)로 정제하여 생성물 3.1g을 얻었다.
3. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,9-플루오로-11-베타-(4'-클로로)-벤족시,17-알파,21-디하이드록시-10,13,16-베타-트리메틸(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,9-fluoro-11-beta-(4’-chloro)-benzoxy,17-alpha,21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl)의 합성.
2의 생성물(Pregna-1,4-dien-3-one,9-fluoro-11beta-(4’-chloro)-benzoxy-16beta-methyl-17,20:20,21-bis[methylenebis(oxy)]) 3.1g을 20ml 테트라히드로푸란에 용해시키고, 0℃에서 냉각시키고, 20ml 불화수소산을 첨가하여 14시간 동안 교반하였다. 유기층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기용매를 증발시켜 생성물 2.6g을 얻었다.
4. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타(4'-클로로)-벤족시-16-베타-메틸-17-히드록시(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta(4’-chloro)-benzoxy-16-beta-methyl-17-hydroxy)의 합성.
3의 생성물(Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 9-fluoro-11-beta-(4’-chloro)-benzoxy, 17-alpha, 21-dihydroxy-10,13,16-beta-trimethyl) 2.6g을 5ml 피디딘에 용해시키고, 0℃에서 냉각시킨 후, 메탄설포닐 클로라이드 700mg을 가하고 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 2:1 Rf=0.35)로 확인하였다. 잔류물에 에틸 아세테이트를 첨가하고 물로 세척한 후, 유기 용매를 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 이를 부타논에 직접 용해시키고, 무수 염화리튬 2g을 첨가하고, 24시간 동안 교반하였다. 유기층을 증발시키고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 5:1)로 정제하여 생성물 1.9g을 얻었다.
5. 프레그나-1,4-디엔-3,20-디온,21-클로로-9-플루오로-11-베타(4'-클로로-벤족시)-16-베타-메틸-17-하이드록시 프로피오네이트(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta(4’-chloro-benzoxy)-16-beta-methyl-17-hydroxy propionate)의 합성.
4의 생성물(Pregna-1,4-diene-3,20-dione,21-chloro-9-fluoro-11-beta(4’-chloro)-benzoxy-16-beta-methyl-17-hydroxy) 1.9g에 5ml의 트리플루오로아세트산과 5ml의 무수프로피온산을 혼합하고, p-톨루엔술폰산 50mg을 가한 후, 50°C의 열을 가하면서 반응이 완료될 때까지 TLC(용리액 n-Hex:EA = 2:1 Rf=0.47)로 확인하였다. 미정제 생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 n-Hex:EA = 4:1)로 정제하여 생성물 130mg을 얻었다. 이를 이하 S006 화합물, 또는 화학식 6의 화합물로 명명한다.
[화학식 6]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000024
상기 S006 화합물(화학식 6)의 NMR 분석 결과는 다음과 같다:
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.34(d, 2H, J=8.5Hz), 7.25(d, 2H, J=8.5Hz), 6.8 1(d, 1H, J=10.5Hz), 6.32(dd, 1H, J1=10.5Hz, J2=2Hz), 6.12(s, 1H),4.69 (d, 1H, J=11Hz), 4.32 (d, 1H, J=11Hz), 4.09 (m, 1H), 4.069 (d, 1H, J=13.5Hz),3.904(d, 1H, J=14.0Hz),2.39(q, 2H, J=8.0Hz), 1.41(s,3H),1.38(d,3H, J=7.5Hz), 1.16 (t, 3H, J=7.5Hz), 1.000 (s, 3H),
LC-MS (ESI) m/z: 591.0 [M+H]+
HPLC purity: 99.39%, Waters e2695, Xbridge C18, 210nm, acetonitrile:water=50:50
실시예 2: 신규 화합물의 항암 효과 확인
준비예
실험에 사용하기 위하여, 비소세포성 폐암 세포주(non-small-cell lung carcinoma, NSCLC)인 A549 세포를 한국세포주은행에서 구입하고, 10%의 소태아혈청(FBS, Invitrogen), 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% HEPES가 보충된 DMEM 배양액(HyClone Laboratories, USA)에서 5% CO2, 37℃ 조건으로 배양하였다. 본 발명의 실시예 1에서 제조된 화합물 이외에 음성대조군으로서 DMSO(Dimethyl sulfoxide), 및 양성대조군으로서 미페프리스톤(RU486)은 Sigma-Aldrich(St.Louis, USA)에서 구입하여 이용하였다.
[RU486]
Figure PCTKR2024095093-appb-img-000025
실시예 2-1. 신규화합물의 암세포 생존 억제 효과 확인
신규화합물의 암세포 생존 억제 효과를 확인하기 위해 96웰 플레이트에 1×104의 세포를 시딩한 후, 각 화합물 1μM, 10μM, 25μM, 또는 50μM을 포함한 DMEM 배지로 24시간 배양하였다. 이후 상층액을 제거하고 PBS 세척 후 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 포함된 무혈청 DMEM 배지로 4시간을 추가 배양하고, 배지를 제거하고, 100㎕의 DMSO를 넣고 1분간 교반하여 보라빛 포말잔을 용해하였다. 이를 595nm에서 측정하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.
실험 결과, 신규화합물 S001 내지 S006은 농도에 비례하여 암세포의 생존 억제 효과가 있는 것으로 확인되었다. 특히 S005는 1μM 이하의 저농도에서 암세포 생존 억제 효과가 우수하였고, S001 내지 S003은 25μM 이상 농도에서 양성대조군인 RU486과 비교하여서도 암세포 생존 억제 효과가 우수한 것으로 나타났다. 50μM 이상 농도에서는 S002와 S003의 암세포 생존 억제 효과가 매우 현저하였다.
실시예 2-2. 신규화합물의 암세포 종양 형성 억제 효과 확인
신규화합물의 암세포 종양 형성 억제 효과를 확인하기 위해 콜로니 형성 실험을 수행하였다. 종양은 비정상적으로 생성된 모든 종괴를 총칭하는 것으로, 암세포는 정상적인 분열 통제를 벗어나 무한히 분열 및 증식하여 덩어리(colony)를 형성하는 특징이 있다. 이를 위해 12웰 플레이트에 세포를 매우 낮은 농도(3×103)로 시딩한 후 2주간 각 화합물 1nM, 10nM, 100nM, 1μM, 10μM, 25μM, 또는 50μM을 포함한 DMEM 배지로 배양하였다. 이후 크리스탈 바이올렛 염색 방법으로 콜로니 형성 정도를 관찰하여 항암효과를 확인하였다. 구체적으로, 상층액을 제거하고 PBS 세척 후, 남은 세포를 크리스탈 바이올렛 용액(20% 메탄올 및 0.5% 크리스탈 바이올렛)으로 10분 간 상온에서 염색하였다. 이를 3번 세척하고 1% SDS 용액에서 가용화를 위해 배양된 후 570 nm 파장에서의 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
실험 결과, S001 내지 S005는 1μM 농도를 기점으로 우수한 암세포 종양 형성 억제 효과가 있었다. 특히 S005는 100nM 농도에서 이미 음성대조군인 DMSO 대비 50% 이상의 종양 형성 억제 효과가 나타나, 실시예 2-1의 암세포 생존 억제 효과와 마찬가지로 저농도에서 효과가 현저함을 알 수 있었다. 양성대조군인 RU486과 S006은 25μM 이상 농도에서 유의미한 종양 형성 억제 효과가 있는 것으로 나타났다.
실시예 2-3. 신규화합물의 암세포 침윤 억제 효과 확인
신규화합물의 암 전이 억제 효과를 확인하기 위해 소프트 아가 분석(soft agar assay)를 통해 암세포의 침윤 억제 효과를 확인하였다. 구체적으로, 12 웰 플레이트에 0.7% 아가를 함유한 DMEM 배지 50 ㎕를 넣고 굳힌 후(bottom agar), 3×103 세포와 0.35% 아가를 함유한 DMEM 배지 300 ㎕를 굳힌 아가 배지 위에 넣고 굳혔다(top agar). 다 굳은 후에, 각 화합물 1μM, 또는 10μM을 포함한 DMEM 배지 250 ㎕를 넣고 CO2 배양기에서 2주 정도 배양 후, 0.7% 아가 부분(bottom agar)에서 형성된 콜로니(colony)의 수를 파악하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
실험 결과, S002, S004, 및 S006 화합물은 1nM 농도에서도 훌륭한 암세포 침윤 억제 효과가 있었다. S003은 10nM 농도에서 유의미한 침윤 억제 효과를 보였으며, S001과 S005는 양성대조군인 RU486과 비슷한 수준의 침윤 억제 효과를 나타내었다. 그러나 시험된 모든 화합물이 음성대조군인 DMSO에 비해서는 유의미한 암세포 침윤 억제 효과가 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명에서 제공하는 화합물은 암의 증식 및 전이를 동시에 억제 가능하므로, 의료 및 보건 분야에서 활발하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

Claims (5)

  1. 하기 화학식 A로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물:
    [화학식 A]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000026
    .
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 화합물은 하기 화학식 B로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물인 것인, 화합물:
    [화학식 B]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000027
    상기 식에서, ---는 선택적인 이중 결합이고,
    R1, R6은 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고,
    R2는 수소 또는 할로겐이고,
    R3는 수소,
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000028
    (여기서 X는 수소, 할로겐, 또는 알킬임) 또는
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000029
    이고,
    R4, R5는 서로 상이하며, 각각 독립적으로, 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-알킬, 알킨, 또는 -OR7이고, 여기서 R7은 수소, 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-알킬이다.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 화합물은 R1, R6은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이고,
    R2는 수소 또는 할로겐이고,
    R3는 수소,
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000030
    (여기서 X는 수소, 할로겐, 또는 C1-C6 알킬임) 또는
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000031
    이고,
    R4는 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-(C1-C6)알킬이고,
    R5는 -OR7이고, 여기서 R7은 수소, 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-(C1-C6)알킬인 것인, 화합물.
  4. 제 2항에 있어서,
    상기 화합물은 R1, R6은 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고,
    R2는 수소 또는 플루오로이고,
    R3는 수소,
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000032
    (여기서 X는 수소, 할로겐, 또는 이소프로필임) 또는
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000033
    이고,
    R4는 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-메틸, 또는 프로핀이고,
    R5는 -OR7이고, 여기서 R7은 수소, 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 -C(O)-메틸, 또는 -C(O)-에틸인 것인, 화합물.
  5. 제 2항에 있어서,
    상기 화합물은 하기 화학식 1 내지 6 중 어느 하나로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 결정형, 공결정, 광학이성질체, 유도체, 수화물, 및 용매화물로부터 선택되는 화합물인 것인, 화합물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000034
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000035
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000036
    [화학식 4]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000037
    [화학식 5]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000038
    [화학식 6]
    Figure PCTKR2024095093-appb-img-000039
    .
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