WO2024096091A1

WO2024096091A1 - イヌの腸内細菌叢改善用剤

Info

Publication number: WO2024096091A1
Application number: PCT/JP2023/039545
Authority: WO
Inventors: めぐみ田中; 経丸田中; 透木村
Original assignee: ミライラボバイオサイエンス株式会社; 国立大学法人山口大学
Priority date: 2022-11-04
Filing date: 2023-11-02
Publication date: 2024-05-10

Abstract

【課題】長期間にわたって摂取しても安全であり、イヌの腸内細菌叢の改善を図ることができる製剤を提供する。【解決手段】ニコチンアミドモノヌクレオチドを有効成分として含有する、イヌの腸内細菌叢改善用剤であって、前記腸内細菌叢改善は、イヌの腸内細菌叢中の悪玉菌の存在割合を減少させる。

Description

イヌの腸内細菌叢改善用剤

　本発明は、ニコチンアミドモノヌクレオチドを有効成分として含有する、イヌの腸内細菌叢改善用剤に関する。

　ヒトの腸管には、約１０００種類、１００～１０００兆個の腸内細菌が小腸から大腸にかけて生息しており、それらの腸内細菌は、宿主であるヒトの栄養代謝、防御機構、免疫機構などに深く関与していることが知られている。近年、次世代シークエンサーなどによる遺伝子解析技術が進み、腸内細菌の遺伝子及びその代謝産物の網羅的解析が可能となったため、腸内細菌叢の全体像及びその機能が明らかになりつつある。その結果、腸内細菌叢が肥満、糖尿病、大腸がん、動脈硬化症、炎症性腸疾患などの疾患と密接な関係があり、これらの患者の腸内細菌叢は健常者と比べて著しく変化していることが明らかになってきており、ヒトの健康維持における腸内細菌叢の重要性が従来にも増して認識されるようになっている。

　一方、イヌの腸内細菌叢については、研究の歴史が浅く、あまり知見は多くないのが現状であるが、イヌの消化管内の細菌密度はヒトよりも高く、健康なイヌであっても、医学領域での小腸内細菌過剰増殖の診断基準となる細菌数（小腸内容液の菌数が＞１０^５ｃｆｕ／ｍＬ）を超える菌数を保有していることが報告されている。この点を踏まえると、イヌにおいても、腸内細菌叢の変化がさまざまな疾患と密接な関係があることが予測される。また、イヌにおいて、腸内細菌叢の変化は、下痢、嘔吐、便秘、食欲の変化、皮膚の問題、問題行動、気だるさ等の原因になると言われている。

　そのため、腸内細菌のうち、いわゆる悪玉菌が優勢にならないよう、腸内細菌叢を人工的に管理し、腸内環境を制御することで、イヌにおける各種疾患の予防・治療を図ることが重要視されるようになってきている。イヌの腸内細菌のうち、悪玉菌は、食餌、不規則な生活、ストレス、便秘など、種々の原因で腸内に増えてくると考えられている。

　このように腸内細菌叢は、イヌの健康や病気と密接な関係があり、ひいては寿命にまで影響を及ぼす。そのため、腸内細菌叢を健康な宿主がもつ良好なバランスに是正して、恒常性を保つ状態にすることが、疾患の予防や治療に繋がり、宿主であるイヌが健康で長く生きるうえで非常に重要であるといえる。

　イヌの腸内細菌叢を改善するための従来技術の一例を挙げると、Ｎ－アセチルグルコサミンを有効成分とし、１．５年齢以上のイヌに投与するものであって、腸内の善玉菌を相対的に増加させる作用を有する腸内細菌叢改善剤が報告されている（特許文献１）。

特開２０１６－１６９１７５号公報

　以上によれば、イヌの健康を守るためには、腸内細菌叢の構成を健康な状態にすることが重要であると考えられる。しかしながら、イヌの腸内細菌叢の異常の原因は前述したように様々であり、それに対する有効な対策方法は未だ確定していない。

　よって、本発明は、イヌの腸内細菌叢の改善に有効であって、かつ、長期間にわたって摂取しても安全である製剤を提供することを課題とする。

　本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究した結果、補酵素ＮＡＤ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）の生合成に関与する中間代謝物であるニコチンアミドモノヌクレオチドが、イヌの腸内細菌叢の改善に有効であるとともに、安全性に優れることを示す知見を得ることにより、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。

　本発明は、以下に示すものである。
［１］ニコチンアミドモノヌクレオチドを有効成分として含有する、イヌの腸内細菌叢改善用剤であって、前記腸内細菌叢改善が、イヌの腸内細菌叢中の悪玉菌の存在割合を減少させることである、イヌの腸内細菌叢改善用剤。
［２］前記悪玉菌が、アナエロビオスピリラム属菌である、前記［１］に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
［３］前記悪玉菌が、ルミノコッカス属菌である、前記［１］に記載のイヌの腸内細菌改善用剤。
［４］前記ルミノコッカス属菌が、ルミノコッカス・グナバスである、前記［３］に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
［５］前記悪玉菌が、ヘリコバクター属菌である、前記［１］に記載のイヌの腸
内細菌叢改善用剤。
［６］成犬１日当たりに適用されるニコチンアミドモノヌクレオチドの量が、　
０．１ｍｇ～１５００ｍｇである、前記［１］に記載のイヌの腸内細菌叢
改善用剤。
［７］食品である、前記［１］～［６］のいずれかに記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
［８］医薬品である、前記［１］～［６］のいずれかに記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
［９］前記［１］～［６］のいずれかに記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤をイヌに摂取させる、イヌの腸内細菌叢の改善方法。

　本発明は、イヌの腸内細菌叢を改善するうえで有効であり、また、生体内ＮＡＤ^＋の生合成に関与する中間代謝物であるニコチンアミドモノヌクレオチドを有効成分とするものであるため安全であり、長期間にわたって摂取することができる。

ナイアシン（ニコチンアミドとニコチン酸の総称）に関与する代謝経路を示す説明図である。試験群の体重の変化を示すグラフである。対照群の体重の変化を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＷＢＣを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＲＢＣを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＨｇｂを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＨｃｔを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＭＣＶを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＭＣＨを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＭＣＨＣを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＲＤＷを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＰＬＴを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＭＰＶを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＰＣＴを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＰＤＷを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＴＰを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＡＬＢを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＡ／Ｇ比を測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＢＵＮを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＣＲＥを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＵＡを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＧＬＵを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＴＢＩＬを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＴＣＨＯを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＴＧを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＡＬＰを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＣＨＥを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＧＯＴを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＧＰＴを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＧＧＴを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＬＤＨを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＬＡＰを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＡＭＹＬを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＣＰＫを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＬＩＰを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＮａを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＫを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＣｌを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＣａを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＩＰを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、血液中のＭｇを測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、腸内細菌叢中のヘリコバクター属菌の存在割合を測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、腸内細菌叢中のルミノコッカス・グナバスの存在割合を測定した結果を示すグラフである。試験群と対照群に対し、腸内細菌叢中のアナエロビオスピリラム属菌の存在割合を測定した結果を示すグラフである。

　本発明に係るイヌの腸内細菌叢改善用剤（以下、単に「腸内細菌叢改善用剤」と記すことがある。）は、有効成分であるニコチンアミドモノヌクレオチド、及び適宜その他の成分を含有するものである。ニコチンアミドモノヌクレオチドを有効成分とすることによって、イヌの腸内細菌叢の改善がもたらされる詳細な理由については、後述する実施例における投与群と対照群の間でＮＡＤ^＋の測定値、及びSirt1の発現量に特段の差は認められなかったことから、未知の作用機序によるものと考えられ、今後の検討を待つ必要がある。以下、本発明について詳細に説明する。

　ニコチンアミドモノヌクレオチド（化学式：Ｃ_１１Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ_８Ｐ）は、ヒトを含む多くの生物の体内で作られる、下記の構造式［化１］で表される化合物である。一般にＮＭＮ（Nicotinamide mononucleotide）と呼ばれており、補酵素ＮＡＤ^＋の生合成に関与する中間代謝物として知られている。

　前記腸内細菌叢改善用剤の有効成分であるニコチンアミドモノヌクレオチドは、生体内では、肝臓組織によるＮＡＤ代謝経路、すなわち、キヌレニン経路を経てキノリン酸からニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）の合成に関与する経路において産生されている。この点について、図１を参照して具体的に説明する。図１はビタミンＢ_３として知られるナイアシン（ニコチンアミドとニコチン酸の総称）に関与する代謝経路を示す説明図である。食事から摂取したニコチン酸は肝臓に取り込まれ、ニコチンアミドに変換され、ニコチンアミドは血流を介して全身に供給される。各細胞は血液中からニコチンアミドを取り込み、ＮＡＤ、ＮＡＤＰに変換して利用する。ニコチンアミドはトリプトファンからも生合成される。

　図１に示すように、生体内においては、トリプトファンを出発物質とした場合、トリプトファンはトリプトファン代謝経路であるキヌレニン経路を経てキノリン酸（ＱＡ）に変換され、さらにニコチン酸モノヌクレオチド（ＮａＭＮ）となる。他方、ニコチン酸（Ｎａ）を出発物質とした場合、ニコチン酸は直接ＮａＭＮに変換される。ＮａＭＮはその後、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド（ＮａＡＤ）を経て、ＮＡＤサイクルによってＮＡＤ、ニコチンアミド（ＮａＭ）、ニコチンアミドモノヌクレオチドと相互に変換される。ニコチンアミド（ＮａＭ）は、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）によってニコチンアミドモノヌクレオチドに変換され、次いでニコチンアミドモノヌクレオチドがニコチンアミドモノヌクレオチドアデニルトランスフェラーゼ（ＮＭＮＡＴ）により変換されてＮＡＤが生成される。なお、ＮＡＤ中間代謝産物であるニコチンアミドリボシド（ＮＲ）からもニコチンアミドモノヌクレオチドが産生される。

　ニコチンアミドモノヌクレオチドには光学異性体としてα体、β体の２種類が存在しているが、本発明ではβ体が使用される。また、その薬理学的に許容される塩も使用しうる。ニコチンアミドモノヌクレオチドは、例えば、ニコチンアミドとリボースからニコチンアミドリボシドを合成し（Bioorg. Med. Chem. Lett., 12, 1135-1137 (2002) 参照）、次いで、リボース部分の５位水酸基をリン酸化する（Chem. Comm., 1999, 729-730参照）ことにより得ることができる。具体的には、例えば、まず、ニコチンアミドとＬ－リボーステトラアセテートとを、無水アセトニトリルに溶解し、窒素気流下、トリメチルシリルトリフルオロスルホン酸を過剰量添加後、室温にて撹拌し、メタノールを添加して反応を停止させた上記反応液を、活性炭を充填したカラムに付し、蒸留水で洗浄後、メタノールで溶出して生成物を回収する。次いで、この生成物のＬ－リボース部分の５位水酸基のリン酸化反応を行うために、上記生成物をトリメトキシリン酸に溶解し、氷冷下、オキシ塩化リンを滴下し、窒素気流下で撹拌し、水酸化ナトリウム水溶液を添加して中和させ、反応を停止させた上記反応液に、冷アセトニトリル－エーテル溶液を添加する。その後、下層（水相）を陰イオン交換樹脂に通して反応物を回収し、さらに陽イオン交換樹脂で精製することにより、純度の高いニコチンアミドモノヌクレオチドを回収することができる。また、ニコチンアミドモノヌクレオチドは市販されており、それらの市販品を購入して使用することができる。

　前記ニコチンアミドモノヌクレオチドは不純物の含有量が少ない精製物、特にはその純度は９０％以上が好ましく、９５％以上がさらに好ましい。前記純度が９０％未満であると、異臭が発生したり、あるいは、ニコチンアミドモノヌクレオチドの作用が減弱されて本発明の効果が十分に得られなくなる恐れがある。

　本発明に係る腸内細菌叢改善用剤は、ニコチンアミドモノヌクレオチドを単独で使用するか、又は他の成分を混合することにより容易に製造される。該腸内細菌叢改善用剤が本発明の効果を奏する限り、他の成分は特に限定されない。他の成分の例としては、フラクトオリゴ糖、ラクチュロース、ラクトスクロース、テアンデロース、ガラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖、トレハロース、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖、マルチトール、ラクチトール、還元イソマルツロース、ソルビトール、キシリトールが挙げられる。

　本発明に係る腸内細菌叢改善用剤は、イヌの腸内細菌叢の改善用に使用することができる。本発明において、「腸内細菌叢の改善」とは、健康な腸内細菌叢と対比した場合に、健常なときの腸内細菌叢の腸内細菌の多様性やバランスに戻す又は近づけること、特には、イヌの腸内細菌叢中の悪玉菌の存在割合を減少させることである。

　前記悪玉菌としては、アナエロビオスピリラム属（Anaerobiospirillum）、ルミノコッカス属（Ruminococcus）、ヘリコバクター属（Helicobacter）、エシェリヒア属（Escherichia）、スタフィロコッカス属（Staphylococcus）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、クロストリジウム属（Clostridium）、カンピロバクター属（Campylobacter）、サルモネラ属（Salmonella）の菌が例示される。これらの細菌が異常増殖し、腸内細菌叢のバランスが破綻した場合に、様々な疾病が発生する。

　前記イヌの品種としては、具体的には、愛玩犬（チワワ、チン、パグ、プードル、シー・ズー、マルチーズ、ボストン・テリア、ボロニース、ラサ・アプソ、ローシェン、チベタン・テリア、チベタン・スパニエル、フレンチ・ブルドッグ、ペキニーズ、ハバニーズ、パピヨン、ビション・フリーゼ、コトン・ド・テュレアール、プチ・ブラバンソン、キャバリア・キング・チャールズ・スパニエル、キング・チャールズ・スパニエル、チャイニーズ・クレステッド・ドッグ）、使役犬（ドーベルマン、ブルドッグ、ボクサー、セント・バーナード、土佐、ラブラドール・レトリバー、シャー・ペイ、スタンダード・シュナウザー、ジャーマン・ピンシャー、ダルメシアン、コーカシアン・シェパード、アーフェンピンシャー、イタリアン・コルソ・ドッグ、エストレラ・マウンテン・ドッグ、グレート・デーン、グレート・ピレニーズ、グレート・スイス・マウンテン・ドッグ）、牧羊犬・牧畜犬（ボーダー・コリー、ラフ・コリー、ウェルシュ・コーギー・カーディガン、ウェルシュ・コーギー・ペンブローク、オーストラリアン・キャトル・ドッグ、オーストラリアン・ケルピー、オーストラリアン・シェパード、オールド・イングリッシュ・シープドッグ、クーバース、クロアチアン・シープドッグ、コモンドール、サールロース・ウルフドッグ、ジャーマン・シェパード・ドッグ、スキッパーキ、スムース・コリー、チェコスロバキアン・ウルフドッグ、ビアデッド・コリー、ブービエ・デ・フランダース、プーミー、プーリー、ブリアード、ボースロン、ムーディー、ピレニアン・シープドッグ）、テリア（ヨークシャー・テリア、日本テリア、スコティッシュ・テリア、スカイ・テリア、ジャーマン・ハンティング・テリア、ジャック・ラッセル・テリア、オーストラリアン・シルキー・テリア、オーストラリアン・テリア、ケアーン・テリア、ケリー・ブルー・テリア、シーリハム・テリア、ワイアー・フォックス・テリア、ボーダー・テリア、ブル・テリア、ノーリッチ・テリア、ノーフォーク・テリア、ベドリントン・テリア、アイリッシュ・テリア、ウエルシュ・テリア、エアデール・テリア、アメリカン・スタッフォードシャー・テリア）、原始的犬・スピッツ（秋田犬、柴犬、ジャパニーズ・スピッツ、ポメラニアン、チャウ・チャウ、甲斐犬、紀州犬、四国犬、北海道犬、ジャーマン・スピッツ、タイワン・ドッグ、シベリアン・ハスキー、グリーンランド・ドッグ、コリア・ジンドー・ドッグ）、嗅覚ハウンド（ビーグル、アメリカン・フォックスハウンド、ダルメシアン、バセット・ハウンド、ハリア、ポルスレーヌ）、ポインター・セター（アイリッシュ・セター、イタリアン・スピノーネ、イングリッシュ・セター、イングリッシュ・ポインター、ゴードン・セター、ブリタニー・スパニエル）、その他の鳥猟犬（ゴールデン・レトリバー、クランバー・スパニエル）、ダックスフンド、及び雑種が例示される。

　本発明に係る腸内細菌叢改善用剤の製造方法は特に限定されず、その形態に応じてそれを製造するのに用いられる一般的な製造方法を適宜選択して行えばよい。例えば、形態が内用固形製剤であれば、製造するのに十分な剪断力や混練力を有する設備を用いて、ニコチンアミドモノヌクレオチド、他の薬効成分、研磨剤、発泡剤、発泡助剤、界面活性剤、増量剤、甘味剤、保存料、ｐＨ調整剤、粘着剤、顔料、色素、香料等の成分を適宜配合して均一に分散・混練して製造することができる。なお、有効成分であるニコチンアミドモノヌクレオチドは市場に流通しており、商業的に入手することができる。特に、ニコチンアミドモノヌクレオチドについては、近年、ニコチンアミドモノヌクレオチドの品質管理体制及び量産体制が確立され、食品組成物原料としての供給が可能となっており、さらには食品組成物としての安定性について確認されている。

　本発明に係る腸内細菌叢改善用剤において、ニコチンアミドモノヌクレオチドの配合量は、以下で述べる１日当たりの摂取量を参考にして１日当たりの摂取回数等を考慮して適宜決定すればよい。

　本発明に係る腸内細菌叢改善用剤は、食品や医薬品として用いることができる。食品の形態で日常的に摂取すると、本発明の効果が連続的に発揮されるため、腸内細菌叢のバランスや多様性を改善するうえで特に有効である。本発明の対象となる食品の種類については特に限定されず、一般の食品のほか、ドッグフード、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、食品添加物、飼料、介護食、食事療法食、治療食、ダイエット食等が対象となる。

　前記食品の摂取量については、食品の種類、摂取するイヌの品種、年齢、性別、体重、期待される効果等により異なるが、食品に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの成犬１日当たりの摂取量は、通常０．１ｍｇ～１５００ｍｇ、好ましくは３ｍｇ～８００ｍｇ、より好ましくは１００ｍｇ～４００ｍｇを挙げることができる。０．１ｍｇよりも少ないと、本発明の効果が得られなくなる恐れがあり、一方、１５００ｍｇより多くしても得られる効果は特に変わらず、経済的に不利になる。なお、前記食品中のニコチンアミドモノヌクレオチドの配合割合は食品総重量に対し、１００％以下の範囲内で適宜設定することができる。

　前記食品は、安全で副作用も特に認められないことから、長期間にわたって摂取することができる。また、成犬だけでなく子犬にも安心して適用することができる。

　本発明に係る腸内細菌叢改善用剤は、医薬品分野において、イヌの腸内細菌叢改善用の医薬品（医薬部外品を含む）として使用することができ、経口的あるいは非経口的に適用することができる。経口的に適用する場合、前記腸内細菌叢改善用剤の剤形は特に制限されるものではないが、例えば、散剤、錠剤、持続性錠剤、チュアブル錠、発泡錠、トローチ剤、バッカル錠、舌下錠、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤、丸剤、ドライシロップ、液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げられる。これらのうち、服用の容易性や有効成分の安定性等を考慮すると、散剤、錠剤、カプセル剤等の経口投与製剤が好ましい。

　特に好ましいのは、小腸から大腸で溶けてカプセル内容物を露出させるように構成されたカプセル製剤である。小腸又は大腸に到達するまでは有効成分は胃酸により失活せず、カプセル内容物の機能が維持され、小腸又は大腸において、その機能を発揮することができる。なお、腸溶性カプセル剤の種類は、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセルのいずれであってもよい。

　前記腸溶性カプセル剤の態様は、大別すると、腸溶性ポリマーによりコーティングされたカプセル内容物（腸溶性顆粒）がカプセルに封入された腸溶性カプセル剤、及び、腸溶性ポリマーによりコーティングされた腸溶性カプセル、すなわち小腸又は大腸で溶けるカプセルにカプセル内容物が封入された腸溶性カプセル剤である。なお、腸溶性ポリマーによりコーティングされた腸溶性カプセルに腸溶性顆粒を封入した腸溶性カプセル剤も含まれる。

　前記前者の腸溶性カプセル剤においては、腸溶性ポリマーとしては、腸内環境を想定した中性～アルカリ性のｐＨ値をもつ水溶液溶媒に対して良好な溶解性を示すもの、具体的には、ｐＨが約５～１２．０の範囲内で溶解するメタクリル酸系ポリマー（メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマーＬＤ、メタクリル酸コポリマーＳ等）、セルロース系ポリマー（カルボキシメチルエチルセルロース、ヒプロメロースフタル酸エステル、ヒプロメロース酢酸エステルコハク酸エステル等）、ビニル系ポリマー等（ポリビニルアセテートフタレート、ポリビニルブチレートフタレート等）が例示される。

　前記後者の腸溶性カプセル剤には、腸溶性カプセルとして、カプセルの表面上を腸溶性ポリマーで耐酸性コーティングしたもの、及びカプセルの表面自体が耐酸性であるため腸溶性ポリマーで耐酸性コーティングする必要のないものの両方が含まれる。

　腸溶性ポリマーによりコーティングされたカプセル内容物（腸溶性顆粒）がカプセルに封入された前記前者の腸溶性カプセル剤は、例えば以下の方法により製造される。まず、カプセル内容物を腸溶性ポリマーでコーティングして、腸溶性顆粒を得る方法としては、汎用されている微粒子コーティングの方法である流動層造粒法、微粒子コーティング法等を用いることができる。例えば微粒子コーティング法では、流動層造粒機に投入された原料粉粒体に腸溶性ポリマー等を含むコーティング液を噴霧・乾燥してコーティングすることで腸溶性顆粒を得ることができる。コーティング量は、原料粉粒体が小腸又は大腸ではじめて放出されるという機能を果たすよう、適宜設定すればよい。そして、この腸溶性顆粒をゼラチンカプセル、セルロース誘導体やデンプン等からなる通常のカプセル又は腸溶性カプセルに、必要に応じて添加剤などと共に封入することで前記腸溶性カプセル剤が製造される。

　腸溶性カプセルにカプセル内容物が封入された前記後者の腸溶性カプセル剤は、例えば以下の方法により製造される。腸溶性でないゼラチンカプセル、セルロース誘導体等を使用した通常のカプセルに、前記腸溶性ポリマーを流動層タイプのコーティング装置、パン回転型コーティング装置等を用いてコーティングすることで腸溶性カプセルが得られる。コーティング量は、カプセル内容物が小腸又は大腸ではじめて放出されるという機能を果たすよう、適宜設定すればよい。そして、カプセル内容物をこの腸溶性カプセルに封入することで前記腸溶性カプセル剤が製造される。なお、カプセル内容物が小腸又は大腸ではじめて放出されるという機能を果たすものであれば、腸溶性カプセルとして市販されているものを用いることもできる。

　他方、本発明に係る腸内細菌叢改善用剤を非経口的に適用する場合、その剤形は外用剤、注射剤、輸液等が例示されるが、有効成分を口腔内に直接的に適用できることから外用剤が好ましい。外用剤は、具体的には歯磨剤（ペースト状の「練」、流動性のある低粘性の「液状」、水とほぼ同じ粘性の「液体」、湿り気のある粉状の「潤製」、粉体状の「粉」のいずれも含む。）、マウスウォッシュ、マウススプレー、軟膏剤、クリーム剤等とすることができる。

　前記医薬品には、物理化学的性質、生物学的性質等を考慮して、その剤形に適切な薬学的に許容される公知の製剤用添加剤を適宜配合させることができる。そのような製剤用添加剤としては、例えば、賦形剤（乳糖、デンプン、結晶セルロース、リン酸ナトリウム等）、溶剤（水、大豆油、食塩水、注射用非水性溶剤等）、結合剤（デンプン、ゼラチン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルメロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム等）、滑沢剤（タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、マクロゴール、ショ糖脂肪酸エステル等）、コーティング剤（白糖、ＨＰＣ、セラック、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、セルロースアセテートフタレート等）、安定剤（亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン等）、保存剤（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、ベンジルアルコール、フェノール、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、チメロサール等）、粘稠剤（メチルセルロース、カルメロースナトリウム、コンドロイチン硫酸、アルギン酸ナトリウム等）、懸濁化剤（各種非イオン性界面活性剤、メチルセルロース、カルメロースナトリウム等）、乳化剤（アラビアゴム、コレステロール、セスキオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート８０、ラウリル硫酸ナトリウム等）、緩衝剤（クエン酸、酢酸、リン酸ナトリウム、ホウ酸）、界面活性剤（水素添加ヒマシ油、ポリソルベート８０等）、着色剤（水溶性食用色素、レーキ色素等）、矯味剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール等）、矯臭剤（芳香性精油類等）、可塑剤（フタル酸エステル類、植物油、ポリエチレングリコール等）等が例示される。

　前記医薬品の投与量については、食品の種類、摂取するイヌの品種、年齢、性別、体重、期待される効果等により異なるが、食品に含まれるニコチンアミドモノヌクレオチドの成犬１日当たりの摂取量は、通常０．１ｍｇ～１５００ｍｇ、好ましくは３ｍｇ～８００ｍｇ、より好ましくは１００ｍｇ～４００ｍｇを挙げることができる。０．１ｍｇよりも少ないと、本発明の効果が得られなくなる恐れがあり、一方、１５００ｍｇより多くしても得られる効果は特に変わらず、経済的に不利になる。なお、前記医薬品中のニコチンアミドモノヌクレオチドの配合割合については、該医薬品の剤形や投与量等に応じて適宜設定することができる。

前記医薬品の投与回数については、イヌの品種、年齢、体重、症状、該医薬品の１回当たりの投与量等に応じて適宜設定できる。該医薬品の１日当たりの投与回数の一例として、１～３回を挙げることができる。

　本発明は、さらに、前記腸内細菌叢改善用剤をイヌに摂取させる、イヌの腸内細菌叢の改善方法を提供する。前記方法において、前記腸内細菌叢改善用剤の摂取量、１日当たりの摂取回数等については、前記腸内細菌叢改善用剤について説明した通りである。また、前記腸内細菌叢改善用剤は、いついかなる場合にも摂取させることができ、かつ、長期間にわたってイヌに摂取させることができる。

　以下、実施例・比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。

［実施例・比較例］
　清浄環境で飼育された実験用ビーグル１２頭（月齢：１１～１２か月。性別：メス）を試験群（ＮＭＮ含有腸溶性カプセル剤（カプセル剤１）摂取群：６頭）と対照群（プラセボ（カプセル剤２）摂取群：６頭）とに分け、プラセボ対照二重盲検比較試験にて、各カプセル剤を３か月間経口摂取させた。試験群にはカプセル剤１を一日１粒、対照群にはカプセル剤２を一日１粒、それぞれ摂取させた。カプセル剤は、毎日一回、午前中の早い時間（可能であれば午前１０時）に食後投与した。飼料は、繁殖用ドッグフード（商品名：ＤＳ－Ｅ、オリエンタル酵母社製）を定量供与（２００ｇ）し、飲水は自由摂取とした。試験期間中は一般臨床所見にも留意し、体重測定は週に一度行った。カプセル剤１、カプセル剤２としては、以下の成分を含有する腸溶性カプセル剤を使用した。
カプセル剤１：ＮＭＮ１５０ｍｇ、でんぷん５０ｍｇ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース７０ｍｇ（１粒あたり）
カプセル剤２：でんぷん２００ｍｇ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース７０ｍｇ（１粒あたり）

　上述したＮＭＮの３か月にわたる経口投与がビーグルの健康状態に悪影響を及ぼすか否かについて、以下に述べるように、一般臨床所見、血液学的検査、及び血清生化学的検査を行い、評価した。また、摂取開始時、及び摂取開始４週間目に糞便を採取し、本発明の腸溶性カプセル剤投与によるビーグルの腸内細菌叢の変化を解析した。

（一般臨床所見）
　摂取開始から１２週間にわたり、試験群及び対照群のビーグルの健康状態を観察するとともに、１週間ごとに体重を計測した。１週間ごとに計測した体重の推移を図２（試験群）、図３（対照群）に示す。

（血液学的検査）
　前述した試験群及び対照群のビーグルに対し、上記試験開始前、１か月後、２か月後、３か月後に採血を行い、得られた血液を血液学的検査に供した。血液学的検査において、検査項目は、白血球数（ＷＢＣ）、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘモグロビン濃度（Ｈｇｂ）、ヘマトクリット値（Ｈｃｔ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）、赤血球分布幅（ＲＤＷ）、血小板数（ＰＬＴ）、平均血小板容積（ＭＰＶ）、血小板クリット（ＰＣＴ）、血小板分布幅（ＰＤＷ）であり、これらの項目の検査結果を順に図４～図１５に示す。各数値は平均値±ＳＤとして求めている。また、試験群と対照群のそれぞれにおいて、開始前と比較して危険率５％で有意差が見られたものには * 、危険率１％で有意差が見られたものには ** を図に示した。また、開始前、１か月後、２か月後、３か月後のそれぞれにおいて群間で比較を行い、危険率５％で有意差が見られたものには # を図に示した。

（血清生化学的検査）
　前述した試験群及び対照群のビーグルに対し、上記試験開始前、１か月後、２か月後、３か月後に採血を行い、得られた血液を血清生化学的検査に供した。血清生化学的検査において、検査項目は、総タンパク（ＴＰ）、アルブミン（ＡＬＢ）、アルブミン：グロブリン比（Ａ／Ｇ比）、血清尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（ＣＲＥ）、尿酸（ＵＡ）、血糖（ＧＬＵ）、総ビリルビン（ＴＢＩＬ）、総コレステロール（ＴＣＨＯ）、中性脂肪（ＴＧ）、アルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）、コリンエステラーゼ（ＣＨＥ）、アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）、アラニンアミノ基転移酵素（ＧＰＴ）、γ―グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、ロイシンアミノペプチターゼ（ＬＡＰ）、アミラーゼ（ＡＭＹＬ）、クレアチンキナーゼ（ＣＰＫ）、リパーゼ（ＬＩＰ）、Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、Ｃａ、無機リン（ＩＰ）、Ｍｇであり、これらの項目の検査結果を順に図１６～図４１に示す。各数値は平均値±ＳＤとして求めている。また、試験群と対照群のそれぞれにおいて、開始前と比較して危険率５％で有意差が見られたものには * 、危険率１％で有意差が見られたものには ** を図に示した。また、開始前、１か月後、２か月後、３か月後のそれぞれにおいて群間で比較を行い、危険率５％で有意差が見られたものには # を図に示した。

（結果・考察）
　上記一般臨床所見の結果によると、いずれの群も試験期間中に健康異常は認められず、体重の推移にも異常は見られなかった（図２、３）。また、上記血液学的検査、血清生化学的検査の結果によると、いずれの項目も健常ビーグル犬の参照値範囲内（正常値範囲内）にあることが確認された（図４～４１）。ＡＳＴなどのいくつかの項目で群間に有意差が認められたが、有意差を認めた項目も正常な変動範囲内であった。このように、ＮＭＮをイヌに高用量で長期間にわたって毎日投与しても異常は認められなかった。これらの結果から、ＮＭＮはイヌにおいて極めて安全な物質であることが明らかとなった。

（腸内細菌叢の変化）
　前述した試験群及び対照群のビーグルに対し、上記試験開始前、３か月後に糞便を採材容器に採取し、１６ＳｒＲＮＡ菌叢解析を行い、データ解析に供することにより、ビーグルの腸内細菌叢の変化を解析した。解析する細菌の対象は、悪玉菌として知られる、ヘリコバクター属（Helicobacter）、ルミノコッカス・グナバス（Ruminococcus gnavus）、アナエロビオスピリラム属（Anaerobiospirillum）とし、全体の細菌種に対するそれらの相対存在割合を調べた。結果を表１、図４２～４４に示す。

（結果・考察）
　上記菌叢解析の結果によると、３か月間のＮＭＮ摂取により、試験群では、ヘリコバクター属、アナエロビオスピリラム属及びルミノコッカス・グナバスの有意な減少が確認されたが、対照群では有意な減少は確認されなかった（図４２～４４）。ヘリコバクター属の細菌は、胃潰瘍、胃がん等の原因となる菌として知られている。アナエロビオスピリラム属の細菌は、健常なイヌの腸管あるいは下痢便中に見られる菌であり、咬傷等により、ヒトへ下痢、敗血症、肝硬変などを引き起こすことがある。ルミノコッカス・グナバスは、化膿性関節炎、炎症性腸疾患、クローン病との関連で注目されている細菌である。したがって、ＮＭＮ含有腸溶性カプセル剤の摂取により、悪玉菌である、ヘリコバクター属、アナエロビオスピリラム属、及びルミノコッカス属（ルミノコッカス・グナバス）の細菌に対し、プラセボ対照群に比べて好ましい方向に作用し、腸内細菌叢の改善に効果があることが判明した。また、この効果は、人獣共通感染症（Zoonosis）の予防の面で重要な所見と解された。

Claims

　ニコチンアミドモノヌクレオチドを有効成分として含有する、イヌの腸内細菌叢改善用剤であって、
　前記腸内細菌叢改善が、イヌの腸内細菌叢中の悪玉菌の存在割合を減少させることである、イヌの腸内細菌叢改善用剤。
　前記悪玉菌が、アナエロビオスピリラム属菌である、請求項１に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
　前記悪玉菌が、ルミノコッカス属菌である、請求項１に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
　前記ルミノコッカス属菌が、ルミノコッカス・グナバスである、請求項３に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
　前記悪玉菌が、ヘリコバクター属菌である、請求項１に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
　成犬１日当たりに適用されるニコチンアミドモノヌクレオチドの量が、０．１ｍｇ～１５００ｍｇである、請求項１に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
　食品である、請求項１～６のいずれか１項に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
　医薬品である、請求項１～６のいずれか１項に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤。
　請求項１～６のいずれか１項に記載のイヌの腸内細菌叢改善用剤をイヌに摂取させる、イヌの腸内細菌叢の改善方法。