CN114072147A - 使用葫芦巴碱和高蛋白质来预防或治疗骨骼肌病症或障碍的组合物和方法 - Google Patents

使用葫芦巴碱和高蛋白质来预防或治疗骨骼肌病症或障碍的组合物和方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于预防或治疗骨骼肌病症或疾病的组合物和方法。本发明还涉及有助于增加骨骼肌中的NAD+水平的组合物和方法。优选地，本发明涉及使用葫芦巴碱、高蛋白质和/或肌酸和/或色氨酸来预防或治疗骨骼肌病症或疾病的组合物和方法。本发明的组合物或方法的接受者可为例如老年个体或患有肌少症的个体，或在例如运动、肌肉损伤或手术后为了恢复骨骼肌而需要本发明的组合物和方法的个体。

Description

使用葫芦巴碱和高蛋白质来预防或治疗骨骼肌病症或障碍的 组合物和方法
背景技术
与年龄相关的肌肉质量和功能损失在所有个体中都是不可避免的，然而，其进展在很大程度上取决于遗传因素和环境因素，诸如体力活动和营养摄入，特别是蛋白质的充分摄入。肌少症已被定义这样一个点，在该点处与年龄相关的肌肉质量损失和功能丧失使患者变得衰弱并影响生活质量。相比之下，虚弱是与年龄相关身体功能下降的另一种分类，其特性在于低肌肉力量和低肌肉功能而不是肌肉质量。针对处于病理活动状态的个体使用将老年人群分级的截止值，根据低肌肉质量和低肌肉功能对肌少症进行临床定义。肌少症预测未来的残疾和死亡，并且于2016年被指定为官方ICD-10疾病编码(Anker等人，JCachexia Sarcopenia Muscle，2016年12月；7(5)：512-514)。
烟酸(也称为尼克酸)和烟酰胺是维生素B3的两种形式，均是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的前体。真核细胞可经由犬尿氨酸途径由色氨酸从头合成NAD+，并且烟酸补充预防具有色氨酸不良饮食的群体中可能出现的糙皮病。烟酸被磷酸核糖化为烟酸单核苷酸(NaMN)，然后被腺苷酸化以形成烟酸腺嘌呤二核苷酸(NaAD)，继而被酰胺化以形成NAD+。
NAD+是与还原-氧化反应和能量代谢相关的多种酶的功能所必需的酶辅因子。NAD+在氨基酸、脂肪酸和碳水化合物的细胞代谢中用作电子载体。NAD+还用作长寿蛋白(Sirtuins)的激活因子和底物，长寿蛋白是涉及代谢功能和在低级生物体中延长寿命的蛋白质脱乙酰酶家族。NAD+的共酶活性连同其生物合成和生物利用率的严格调控使得其在代谢监测系统中以及在衰老过程中很重要。
葫芦巴碱是烟酸(维生素B3)代谢物，其通过烟酸的氮原子的甲基化形成，并且以哺乳动物的尿液排泄。作为生物活性分子，其已从存在于多种植物和藻类物种中的提取物中分离。
在需要增强NAD+的各种骨骼肌病症和疾病中，本发明提供了用于预防和/或治疗这些骨骼肌病症和疾病的解决方案。
发明内容
本公开提供了基本上由葫芦巴碱组成或基本上由葫芦巴碱和高蛋白质组成的组合物。
在一些实施方案中，提供了基本上由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成的组合物。
在一些实施方案中，提供了基本上由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和/或色氨酸组成的组合物。
在一些实施方案中，葫芦巴碱的至少一部分由组合物中的植物提取物(诸如咖啡提取物、大麻提取物、南瓜籽提取物和/或葫芦巴提取物中的一种或多种，例如富含葫芦巴碱的植物提取物)从植物来源提供。
在一个优选的实施方案中，葫芦巴碱的至少一部分由葫芦巴提取物提供。
在一些实施方案中，葫芦巴碱的至少一部分由藻类来源(例如海带提取物)提供。
在一些实施方案中，高蛋白质由植物来源提供。
在一些实施方案中，蛋白质可包含长度为2至10个氨基酸的肽。
在一些实施方案中，氨基酸是支链氨基酸，诸如亮氨酸、异亮氨酸和/或缬氨酸。
在一个实施方案中，氨基酸是4-羟基异亮氨酸。
在一些实施方案中，在组合物中提供氨基酸色氨酸。
在一些实施方案中，在组合物中提供肌酸。
在一个实施方案中，组合物制剂选自食物产品、饮料产品、食物补充剂、口服营养补充剂(ONS)、医疗食物以及它们的组合。
NAD+生物合成的增加可为个体提供一种或多种有益效果，例如在人(例如经受医学治疗的人)中，在动物诸如狗、猫、牛、马、猪或羊(例如伴侣动物诸如经受医学治疗的狗或猫)中，或在牛、家禽、猪、羊(例如用于农业以产出奶或肉)中。
优选地，NAD+生物合成在哺乳动物的一个或多个细胞中增加，例如作为肌肉骨骼系统的部分的一个或多个细胞，诸如骨骼肌。
在一个实施方案中，经肠胃内施用组合物。
在一个实施方案中，本发明提供了基本上由葫芦巴碱组成或由葫芦巴碱组成的组合物的单位剂型。该单位剂型包含有效量的本发明的组合物以通过增加细胞和组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的水平来改善尤其是骨骼肌中的细胞和组织存活和/或总体细胞和组织健康，由此在有需要或有风险的个体中治疗或预防(例如降低发病率和/或严重程度)与NAD+相关的疾病或病症。
在另一个实施方案中，本发明提供了基本上由葫芦巴碱和高蛋白质组成或由葫芦巴碱和高蛋白质组成的组合物的单位剂型。该单位剂型包含有效量的组合物以通过增加细胞和组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的水平来改善尤其是骨骼肌中的细胞和组织存活和/或总体细胞和组织健康，由此在有需要或有风险的个体中治疗或预防(例如降低发病率和/或严重程度)与NAD+相关的疾病或病症。
在另一个实施方案中，本发明提供了基本上由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成或由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成的组合物的单位剂型。该单位剂型包含有效量的组合物以通过增加细胞和组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的水平来改善尤其是骨骼肌中的细胞和组织存活和/或总体细胞和组织健康，由此在有需要或有风险的个体中治疗或预防(例如降低发病率和/或严重程度)与NAD+相关的疾病或病症。
在另一个实施方案中，本发明提供了基本上由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和/或色氨酸组成或由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和/或色氨酸组成的组合物的单位剂型。该单位剂型包含有效量的组合物以通过增加细胞和组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的水平来改善尤其是骨骼肌中的细胞和组织存活和/或总体细胞和组织健康，由此在有需要或有风险的个体中治疗或预防(例如降低发病率和/或严重程度)与NAD+相关的疾病或病症。
该组合物可选自食物产品、饮料产品、食物补充剂、口服营养补充剂(ONS)、医疗食物以及它们的组合。
由本发明提供的一个或多个实施方案的一个优点是补充随着年龄而下降的NAD+池。
由本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是帮助减慢与衰老相关的代谢的发生。
由本发明提供的一个或多个实施方案的一个优点是增强对氧化代谢的益处并预防DNA损伤。
由本发明提供的一个或多个实施方案的又一个优点是帮助身体代谢脂肪并增加瘦体重。
本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是维持或增强个体的骨骼肌功能。
本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是例如通过增加肌肉干细胞和/或成肌细胞和/或肌管的数量来增强肌肉功能。
本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是维持或增加个体的骨骼肌质量。
本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是预防或减少个体的骨骼肌消耗。
本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是增强剧烈运动后骨骼肌的恢复。
本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是增强损伤后骨骼肌的恢复。
本发明提供的一个或多个实施方案的另一个优点是增强创伤或手术后骨骼肌的恢复。
本发明提供的一个或多个实施方案的又一个优点是如上所述支持疾病和病症后骨骼肌的改善，疾病和病症诸如：恶病质或恶病质前期；肌少症、肌病、营养不良和/或剧烈运动、肌肉损伤或手术后的恢复。具体地讲，恶病质与癌症、慢性心力衰竭、肾衰竭、慢性阻塞性肺疾病、AIDS、自身免疫性障碍、慢性炎性障碍、肝硬化、厌食症、慢性胰腺炎、代谢性酸中毒和/或神经变性疾病相关。
在一个实施方案中，本发明提供用于增加哺乳动物个体中NAD+的方法，该方法包括向需要此类治疗的哺乳动物递送有效量的有效单位剂型形式的根据本发明的组合物以预防和/或治疗骨骼肌疾病或病症。骨骼肌疾病或病症诸如恶病质或恶病质前期；肌少症、肌病、营养不良和/或剧烈运动、肌肉损伤或手术后的恢复。
在另一个实施方案中，本发明提供用于增加哺乳动物个体中的NAD+以预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症的方法，该方法包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱和高蛋白质组成或由葫芦巴碱和高蛋白质组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
在又一个实施方案中，本发明提供用于增加哺乳动物个体中的NAD+以预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症的方法，该方法包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成或由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
在又一个实施方案中，本发明提供用于增加哺乳动物个体中的NAD+以预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症的方法，该方法包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱、支链氨基酸形式的高蛋白质和肌酸组成或由葫芦巴碱、支链氨基酸形式的高蛋白质和肌酸组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
在又一个实施方案中，本发明提供用于增加哺乳动物个体中的NAD+以预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症的方法，该方法包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和/或色氨酸组成或由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和/或色氨酸组成的组合物；以及ii)将所述组合物施用于所述个体。
在一些实施方案中，个体包括人、狗、猫、牛、马、猪或羊。在一些实施方案中，个体优选地为人。
附图说明
图1–用葫芦巴碱治疗后人和斑马鱼中的NAD+浓度的酶定量
图1A示出了用剂量为5μM、50μM、500μM和1mM的葫芦巴碱治疗6小时后人体骨骼肌肌管(HSMM)中的NAD+浓度的酶定量。
图1B示出用剂量为500μM和1mM的葫芦巴碱治疗16小时后斑马鱼幼体(DPF4)中的NAD+浓度的酶定量。
#、*指示与对照物的差异，单因素方差分析，其中分别p<0.1、p<0.05。数据表示为平均值+/-SEM。
图2–用葫芦巴碱治疗后肌管中的质谱NAD+浓度和掺入NAD+中的标记的稳定同位 素
图2A示出了相对于对照物，用500μM剂量的葫芦巴碱治疗6小时后来自2个不同供体的人骨骼肌肌管(HSMM)中的NAD+相对浓度，通过液相色谱-质谱(LC-MS)进行测量。
图2B示出了掺入NAD+(M+1)中的500μM剂量的标记的葫芦巴碱的相对丰度，通过LC-MS进行测量。
**、****指示与相应对照物的差异，未配对t检验，其中分别P<0.01、P<0.0001。数据表示为平均值+/-SEM。
图2C示出了在用葫芦巴碱治疗后掺入NAD+中的标记的稳定同位素。C*表示标记的13C(M+1/天然12C)，而D3表示氘/2H(M+1/天然1H)。
图3–用葫芦巴碱治疗后肝脏和肌肉中的NAD+摄入的酶定量
通过管饲法(图3A、图3C)或腹膜内注射施用(图3B、图3D)接受250mg/kg葫芦巴碱120分钟后小鼠中的NAD+的酶定量。
*指示与对照物的差异，未配对t检验，其中P<0.05。数据表示为平均值+/-SEM。
图4–在化学合成的葫芦巴碱或富含葫芦巴碱的葫芦巴籽粒提取物的治疗后，在人 原代成肌细胞中测量的NAD +
图4A示出了用不同剂量的合成葫芦巴碱一水合物治疗16小时后的人骨骼肌肌管(HSMM)以及NAD+的定量。
图4B示出了用不同剂量的富含葫芦巴碱的葫芦巴籽粒提取物(40.45％葫芦巴碱)治疗16小时后的人骨骼肌管(HSMM)以及NAD+的定量。
*、**、****指示与对照物的差异，单因素方差分析，其中分别p<0.05、p<0.01、p<0.001。数据表示为平均值+/-SD。
图5–在经管饲法施用300mg/kg葫芦巴碱氯化物或等摩尔量的葫芦巴籽粒提取物 后120分钟测得的C57BL/6JRj小鼠的肝脏NAD+水平
*、**、****指示与对照物的差异，单因素方差分析，其中分别p<0.05、p<0.01、p<0.001。数据表示为平均值+/-SD。
图6–用1mM葫芦巴碱氯化物治疗后，在1天龄成年动物和在8天龄蠕虫中测得的秀 丽隐杆线虫(C.elegans)全裂解物NAD+水平与它们年龄匹配对照物的对比
*、**、****指示与对照物的差异，单因素方差分析，其中分别p<0.05、p<0.01、p<0.001。数据表示为平均值+/-SD。
图7–秀丽隐杆线虫存活率、平均速度、距离和移动性
图7A–用1mM葫芦巴碱氯化物治疗的秀丽隐杆线虫的存活率曲线寿命增加21％。
图7B–从成年期第1天开始，在用1mM葫芦巴碱氯化物治疗的蠕虫中进行的自发移动性测定期间测得的平均速度与对照物的比较。
图7C–在高龄阶段的自发移动性测定期间行进的距离。
图7D–针对8天龄和11天龄蠕虫评估的刺激移动性得分指示响应身体刺激的蠕虫的百分比。
*、**指示与对照物的差异，学生检验，其中分别p<0.05、p<0.01。
对于图7A和图7D，数据表示为平均值+/-SD。
对于图7B和图7C，数据表示为平均值+/-SEM。
图8–秀丽隐杆线虫的线粒体与核DNA的比率(mt/nDNA)
图8示出了8天龄蠕虫的线粒体编码的基因(nduo-1)相对于核编码的基因(act-1)的比率。
*指示与对照物的差异，学生检验，其中P<0.05。
数据表示为平均值+/-SD。
具体实施方式
定义
所有百分数均以占组合物总重量的重量计，除非另有表示。类似地，所有比率均按重量计，除非另有表示。提及pH时，其值对应于利用标准设备在25℃处测量的pH。如本文所用，“约”、“大约”和“基本上”应理解为是指某一数值范围内的数字，例如该所提及数字的-10％至+10％的范围内，优选该所提及数字的-5％至+5％，更优选该所提及数字的-1％至+1％，最优选该所提及数字的-0.1％至+0.1％。
此外，本文中的所有数值范围都应理解为包含该范围内的所有整数或分数。另外，这些数值范围应理解为对涉及该范围内任何数字或数字子集的权利要求提供支持。例如，1至10的公开应理解为支持1至8、3至7、1至9、3.6至4.6、3.5至9.9等的范围。
如本文及所附权利要求所用，除非上下文另外明确规定，否则词语的单数形式包括复数。因此，提及“一个”、“一种”和“该”通常包括相应术语的复数形式。例如，提及“成分”或“方法”包括提及多种此类成分或方法。在“X和/或Y”的上下文中采用的术语“和/或”应被解释为“X”或“Y”或“X和Y”。类似地，“X或Y中的至少一者”应被解释为“X”或“Y”或“X和Y两者”。
与此类似，词语“包括/包含/含有(comprise)”、“包括/包含/含有(comprises)”和“包括/包含/含有(comprising)”都用于包含性而非排他性地解释。同样地，术语“包括/包含”和“或”都应当视为包含性的，除非上下文明确禁止这一解释。然而，本公开提供的实施方案可能不含本文未明确公开的任何要素。因此，采用术语“包括/包含/含有”限定的一个实施方案的公开内容，也是“基本上由所公开的组分组成”和“由所公开的组分组成”的多个实施方案的公开内容。“基本上由...组成”意指该实施方案包含超过50重量％的所识别组分，优选至少75重量％的所识别组分，更优选至少85重量％的所识别组分，最优选至少95重量％的所识别组分，例如至少99重量％的所识别组分。
本文采用的术语“示例”(尤其后跟一列术语时)，仅用于举例说明，而不应当被视为排他性的或全面的。本文所公开的任何实施方案可与本文所公开的任何其他实施方案结合，除非另有明确指示。
“动物”包括但不限于哺乳动物，哺乳动物包括但不限于啮齿动物；水栖哺乳动物；家养动物，诸如狗和猫；农场动物，诸如羊、猪、牛和马；以及人类。在采用“动物”、“哺乳动物”或它们的复数形式时，这些术语还适用于能够具有通过段落上下文表现出的或意欲表现出的作用的任何动物，例如能够自噬的动物。如本文所用，术语“个体”或“患者”应被理解为包括接受或意欲接受治疗如本文所定义的治疗的动物，例如哺乳动物，并且优选为人类。虽然本文中常用术语“个体”和“患者”来指人，但本公开并非限制于此。
因此，术语“个体(subject或individual)”和“患者”是指可受益于本文所公开的方法和组合物的任何动物、哺乳动物或人类。实际上，非人类动物经历类似人类病症的长期危重疾病。这些危重动物经历与人类对应物相同的代谢、免疫和内分泌干扰以及器官衰竭和肌肉消耗的发展。此外，动物也经历老龄的效应。
在人类的背景中，术语“老年”是指自出生起的年龄为至少55岁，优选63岁以上，更优选65岁以上，并且最优选70岁以上。在人类的背景中，术语“中老年”或“老龄个体”是指自出生起的年龄为至少45岁，优选50岁以上，更优选55岁以上，并且包括老年个体。
对于其它动物，“中老年”或“老龄个体”是指已超过其特定物种和/或物种内品种的平均寿命的50％。如果动物超过平均预期寿命的66％，则将其视为“老年”，优选超过平均预期寿命的75％，更优选超过平均预期寿命的80％。老龄猫或狗自出生起的年龄为至少约5岁。老年猫或狗自出生起的年龄为至少约7岁。
肌少症
“肌少症”被定义为与年龄相关的肌肉量和功能(包括肌肉力量和步行速度)的损失。肌少症可通过低肌肉质量、低肌肉力量和低体能中的一者或多者来表征。
可基于AWGSOP(老年人肌少症亚洲工作组)的定义来诊断个体的肌少症，例如如2014年Chen等人(J Am Med Dir Assoc，2014年2月；15(2):95-101)所述。低肌肉质量通常可基于归一化为身高平方的低四肢瘦体重(ALM指数)，具体地讲是男性的ALM指数小于7.00kg/m2，并且女性的ALM指数小于5.40kg/m2。低体能表现通常可基于步行速度，具体地讲是步行速度小于0.8m/sec。低肌肉力量通常可基于低握力，具体地讲是男性的握力小于26kg，并且女性的握力小于18kg。
除此之外或另选地，可基于EWGSOP(老年人肌少症欧洲工作组)的定义来诊断个体的肌少症，例如如2019年Crutz-Jentoft等人(Age Ageing，2019年1月1日；48(1):16-31)所述。低肌肉质量通常可基于归一化为身高平方的低四肢瘦体重(ALM指数)，具体地讲是男性的ALM指数小于7.23kg/m2，并且女性的ALM指数小于5.67kg/m2。低体能表现通常可基于步行速度，具体地讲是步行速度小于0.8m/sec。低肌肉力量通常可基于低握力，具体地讲是男性的握力小于30kg，并且女性的握力小于20kg。除此之外或另选地，可基于美国国立卫生研究院基金会(FNIH)的定义来诊断个体的肌少症，例如如2014年Studenski等人(J GerontolA Biol Sci Med Sci.2014年5月；69(5):547-58)所述。低肌肉质量通常可基于归一化为身体质量指数(BMI；Kg/m2)的低四肢瘦体重(ALM)，具体地讲是男性的ALM与BMI比率小于0.789，并且女性的ALM与BMI比率小于0.512。低体能表现通常可基于步行速度，具体地讲是步行速度小于0.8m/sec。低肌肉力量通常可基于低握力，具体地讲是男性的握力小于26kg，并且女性的握力小于16kg。低肌肉力量通常也可基于低握力:体重指数，具体地讲是男性的握力:体重指数小于1.00，并且女性的握力:体重指数小于0.56。
如本文所用，“虚弱”被定义为脆弱性增加的临床可识别状态，该脆弱性增加是由于多个生理系统中与衰老相关联的储备和功能下降所致，使得应对日常或急性压力的能力受到损害。在没有确定的定量标准的情况下，Fried等人在操作上将虚弱定义为满足五个表型标准中的三个，这些标准表明能量受到损害：(1)无力(握力为基线群体的最低20％，根据性别和身体质量指数进行调节)，(2)耐力和精力不佳(自我报告的消耗与
Figure BDA0003456269610000101
最大值相关联)，(3)缓慢(基线群体的最低20％，基于步行15英尺的时间，根据性别和站立高度进行调节)，(4)身体活动量低(基线时每周消耗的千卡加权分数，对每个性别确定的身体活动量的最低五分之一；例如，男性小于383kcal/周，女性小于270kcal/周)和/或非故意的体重减轻(过去一年中减轻10磅)。Fried LP等人，J.Gerontol.Biol.Sci.Med.Sci.56(3):M146–M156(2001)。存在这些标准中的一个标准或两个标准的衰弱前期阶段鉴定出进展到衰弱的高风险。
恶病质和相关疾病
恶病质是与潜在疾病相关的复杂代谢综合征，并且其特征在于伴有损失或不损失脂肪质量的肌肉损失。恶病质的显著临床特征是成人体重减轻(校正过体液滞留)或儿童生长不足(排除内分泌障碍)。
恶病质常常出现在患有诸如癌症、慢性心力衰竭、肾衰竭、慢性阻塞性肺疾病、AIDS、自身免疫性障碍、慢性炎性障碍、肝硬化、厌食症、慢性胰腺炎和/或代谢性酸中毒和神经变性疾病的患者中。
存在某些类型的癌症，其中恶病质特别普遍，例如胰腺癌、食道癌、胃癌、肠癌、肺癌和/或肝癌。
针对恶病质的国际公认的诊断标准是根据当前体重和身高(体重指数[BMI]<20kg/m2)或骨骼肌质量(通过DXA、MRI、CT或生物阻抗测量)，在有限时间例如6个月内大于5％的体重减轻或在已经显示耗尽的个体中大于2％的体重减轻。恶病质可在各个阶段逐渐发展，即恶病质前期发展为恶病质，继而发展为难治性恶病质。严重程度可根据能量储存和身体蛋白质(BMI)的消耗程度组合持续体重减轻的程度来分类。
具体地，癌症恶病质已被定义为在过去6个月内体重减轻>5％(不存在简单饥饿)；或BMI<20并且任何体重减轻程度>2％；或与低肌肉质量一致的四肢瘦体重(男性<7·26kg/m2；女性<5·45kg/m2)和任何体重减轻程度>2％(Fearon等人，2011年)。
恶病质前期可被定义为体重减轻≤5％连同厌食症和代谢变化。目前，没有稳健的生物标志物来识别可能进一步进展的那些恶病质前期患者或他们将进一步进展的速率。难治性恶病质基本上基于患者的临床特征和情况来定义。
肌病和相关病症
肌病是神经肌肉障碍，主要症状是由于肌纤维功能障碍引起的肌无力。肌病的其他症状可包括肌肉痉挛、僵硬和抽搐。肌病可为遗传性的(诸如肌营养不良)或获得性的(诸如常见肌肉痉挛)。
肌病分组如下：(i)先天性肌病：其特征在于运动技能的发育迟缓；骨骼和面部异常在出生时偶有明显；(ii)肌营养不良：其特征在于随意肌逐渐无力；有时在出生时明显；(iii)线粒体肌病：由线粒体(控制能量的细胞结构)的基因异常引起；包括Kearns-Sayre综合征、MELAS和MERRF肌肉糖原贮积病：由控制代谢糖原和葡萄糖(血糖)的酶的基因突变引起；包括Pompe病、Andersen病和Cori病；(iv)肌红蛋白尿症：由肌肉工作所必需的燃料(肌红蛋白)代谢障碍引起；包括McArdle病、Tarui病和DiMauro病；(v)皮肌炎：皮肤和肌肉的炎性肌病；(vi)骨化性肌炎：其特征在于骨在肌肉组织中生长；(vii)家族性周期性麻痹：其特征在于手臂和腿部的无力发作；(viii)多肌炎、包涵体肌炎和相关肌病：骨骼肌炎性肌病；(ix)神经性肌强直：其特征在于颤搐和僵硬的交替发作；以及僵人综合征：其特征在于僵硬和反射性痉挛(常见肌肉痉挛和僵硬)的发作，以及(x)手足抽搐：其特征在于手臂和腿部的抽搐延长。(参考：https://www.ninds.nih.gov/disorders/all-disorders/myopathy-information-page)。
手术和肌肉创伤的肌肉损伤后恢复
肌肉损伤可由擦伤、拉伸或撕裂引起，从而引起肌肉、肌腱或两者发生的急性或慢性软组织损伤。其可由于肌肉疲劳、过度使用或使用不当而发生。其可发生在身体创伤诸如体力活动期间的跌倒、断裂或过度使用之后。肌肉损伤也可发生在外科手术诸如关节置换关节镜手术之后。
术语“治疗(treatment/treating)”包括导致病症或障碍改善，例如减轻、减少、调节或消除病症或障碍的任何效果。该术语不一定表示个体被治疗直至完全恢复。“治疗”病症或障碍的非限制性示例包括：(1)抑制病症或障碍，即阻止病症或障碍或其临床症状的发展，以及(2)缓解病症或障碍，即，使病症或障碍或其临床症状暂时或永久地消退。治疗可为患者相关的或医生相关的。
术语“预防(prevention/preventing)”是指使得所提及的病症或障碍的临床症状不在可能暴露于或易患上该病症或障碍但尚未经历或表现出该病症或障碍的症状的个体中发展。术语“病症”和“障碍”意指任何疾病、病症、症状或适应症。
相对术语“改善”、“增加”、“增强”等是指(本文所公开的)包含葫芦巴碱和高蛋白质的组合的组合物相对于蛋白质较少但在其他方面相同的组合物的效应。同样，是指包含葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸的组合的组合物相对于蛋白质较少但在其他方面相同的组合物的的组合的效应。
术语“食物”、“食物产品”和“食物组合物”意指旨在供个体(诸如，人类)摄入并且向个体提供至少一种营养物质的产品或组合物。本公开(包括本文所述的多个实施方案)的组合物可包含下列要素、由或基本上由下列要素组成：本文所述的基本要素和限制，以及本文所述的或者说可用于饮食中的任何其他或可选的成分、组分或限制。
术语“饮料”、“饮料产品”和“饮料组合物”意指供个体(诸如人类)摄入并且向个体提供至少一种营养物质的产品或组合物。本公开(包括本文所述的多个实施方案)的组合物可包含下列要素、由或基本上由下列要素组成：本文所述的基本要素和限制，以及本文所述的或者说可用于饮食中的任何其他或可选的成分、组分或限制。
如本文所用，“完全营养”包含种类全面、含量充足的常量营养素(蛋白质、脂肪和碳水化合物)和微量营养素，其对于施用该组合物的个体而言足以作为唯一营养来源。从这类完全营养组合物中，个体可得到其100％的营养需求。
术语“经肠胃内施用”涵盖口服施用(包括管饲法施用)以及经直肠施用，但优选口服施用。术语“胃肠外施用”是指经除消化道之外的途径递送给定物质，并且涵盖多种施用途径，诸如静脉内、动脉内、肌内、脑室内、骨内、皮内、鞘内以及腹膜内施用、膀胱内输注和海绵体内注射。
优选的胃肠外施用是静脉内施用。胃肠外施用的具体形式是通过静脉内施用营养物质来递送。当其它途径不提供食物时，胃肠外营养是“完全胃肠外营养”。“胃肠外营养”优选为等渗或高渗水溶液(或待溶解的固体组合物或待稀释的液体浓缩物以获得等渗或高渗溶液)，其包含糖类诸如葡萄糖并且还包含脂质、氨基酸和维生素中的一者或多者。
实施方案
组合物
本发明包括包含葫芦巴碱和高蛋白质(例如，组合物总能量的至少约25％)的组合的组合物，并且施用该组合物以提供有效增加例如骨骼肌中的NAD+的组合的量。该组合物可经胃肠外、经胃肠内或静脉内施用。
本发明包括基本上由葫芦巴碱和高蛋白质(例如，组合物总能量的至少约25％)的组合组成或基本上由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成的组合物。施用本发明的组合物以提供有效增加例如骨骼肌中的NAD+的组合的量。该组合物可经胃肠外、经胃肠内或静脉内施用。
本发明包括基本上由葫芦巴碱和高蛋白质(例如，组合物总能量的至少约25％)的组合组成的组合物，其中高蛋白质包含支链氨基酸诸如亮氨酸、异亮氨酸和/或缬氨酸，或基本上由葫芦巴碱、高蛋白质组成，其中高蛋白质由支链氨基酸诸如亮氨酸、异亮氨酸和/或缬氨酸组成。在一个优选的实施方案中，高蛋白质是4-羟基异亮氨酸。施用本发明的组合物以提供有效增加例如骨骼肌中的NAD+的组合的量。该组合物可经胃肠外、经胃肠内或静脉内施用。
本发明包括基本上由葫芦巴碱和高蛋白质(例如，组合物总能量的至少约25％)的组合组成的组合物，其中高蛋白质包含支链氨基酸诸如亮氨酸、异亮氨酸和/或缬氨酸和肌酸，或基本上由葫芦巴碱、高蛋白质组成，其中高蛋白质由支链氨基酸诸如亮氨酸、异亮氨酸和/或缬氨酸和肌酸组成。施用本发明的组合物以提供有效增加例如骨骼肌中的NAD+的组合的量。该组合物可经胃肠外、经胃肠内或静脉内施用。
在一个优选的实施方案中，组合物基本上由葫芦巴碱和4-羟基异亮氨酸的组合组成。
本发明包括基本上由葫芦巴碱和高蛋白质(例如，组合物总能量的至少约25％)、肌酸和/或色氨酸组成或由葫芦巴碱和高蛋白质、肌酸和/或色氨酸组成的组合物。施用本发明的组合物以提供有效增加例如骨骼肌中的NAD+的组合的量。该组合物可经胃肠外、经胃肠内或静脉内施用。
葫芦巴碱
“葫芦巴碱”在本文中定义为包含1-甲基吡啶-1-
Figure BDA0003456269610000141
-3-羧酸盐的任何化合物，包括例如其任何盐(例如氯化盐或碘化盐)和/或其中的环可能被还原的形式。
在一些实施方案中，葫芦巴碱由式1的结构表示，其能够与阴离子(X-)诸如卤素(例如碘化物或氯化物)形成盐。式1的结构还被称为3-羧基-1-甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000142
、N-甲基烟酸、1-甲基吡啶-3-羧酸、1-甲基吡啶-1-
Figure BDA0003456269610000144
-3-羧酸、吡啶
Figure BDA0003456269610000143
-3-羧基-1-甲基-氢氧化物内盐(8CI)、1-甲基烟酸、吡啶
Figure BDA0003456269610000145
-3-羧基-1-甲基-。
Figure BDA0003456269610000151
在一些实施方案中，葫芦巴碱以其内盐形式由式2的结构表示。式2的结构还被称为Caffearine(咖啡碱)、Gynesine(葫芦巴碱)、烟酸N-甲酯、Trigenolline(葫芦巴碱)、Coffearine(咖啡碱)、Trigonellin(葫芦巴碱)、Coffearin(咖啡碱)、Betain nicotinate(烟酸甜菜碱)、Betaine nicotinate(烟酸甜菜碱)、3-羧酸1-甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000152
烟酸N-甲基甜菜碱、1-甲基吡啶-3-羧酸盐、1-甲基-3-吡啶
Figure BDA0003456269610000153
羧酸盐、N-甲基烟酸、Trigenelline(葫芦巴碱)、Caffearin(咖啡碱)、3-羧基-1-甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000154
氢氧化物内盐、N'-甲基烟酸盐、1-甲基吡啶-1-
Figure BDA0003456269610000155
-3-羧酸盐、3-羧基-1-甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000156
氢氧化物内盐、吡啶
Figure BDA0003456269610000157
3-羧基-1-甲基-氢氧化物内盐、1-甲基吡啶-3-羧酸、1-甲基吡啶-1-
Figure BDA0003456269610000158
-3-羧酸、1-烟酸甲酯、Trigonelline(葫芦巴碱)、N-甲基-烟酸酯、吡啶
Figure BDA0003456269610000159
3-羧基-1-甲基-氢氧化物内盐(8CI)、N'-甲基烟酸、N-甲基烟酸甜菜碱、烟酸N-甲基甜菜碱、1-甲基烟酸阴离子、吡啶
Figure BDA00034562696100001510
3-羧基-1-甲基-内盐、1-甲基-5-(氧杂羰基)吡啶
Figure BDA00034562696100001511
-3-内酯、吡啶
Figure BDA00034562696100001512
3-羧基-1-甲基-内盐、3-羧基-1-甲基-吡啶
Figure BDA00034562696100001513
氢氧化物内盐。
Figure BDA00034562696100001514
在一些实施方案中，任选地，“葫芦巴碱”可包括其代谢物及其热解产物，诸如烟酰胺、烟酰胺核糖核苷、1-甲基烟酰胺、1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺(Me2PY)、1-甲基-4-吡啶酮-5-甲酰胺(Me4PY)和烷基吡啶
Figure BDA0003456269610000161
诸如1-甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000162
(NMP)和1,4-二甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000163
尽管如本文稍后所述，但一些实施方案不包括葫芦巴碱的这些代谢物和热解产物中的一种或多种。
组合物可在药学上合适的载体中包含药理学有效量的葫芦巴碱。在水性液体组合物中，葫芦巴碱浓度优选地在水性液体组合物的约0.05重量％至约4重量％、或约0.5重量％至约2重量％、或约1.0重量％至约1.5重量％的范围内。
在特定实施方案中，该方法是将血浆葫芦巴碱水平增加至例如50nmol/L血浆至6000nmol/L血浆、优选100nmol/L血浆至6000nmol/L血浆范围内的水平的治疗。该方法可包括每天施用在0.05mg/kg体重至1g/kg体重、优选1mg/kg体重至200mg/kg体重、更优选5mg/kg体重至150mg/kg体重、甚至更优选10mg/kg体重至120mg/kg体重、或最优选40mg/kg体重至80mg/kg体重的重量范围内的葫芦巴碱。
通常，将介于50μg至10g之间的每日份量葫芦巴碱分为一份或多份施用给个体。更优选地，将介于100mg至1g之间的每日份量葫芦巴碱分为一份或多份施用给个体。
在一些实施方案中，葫芦巴碱的至少一部分是隔离的。除此之外或另选地，葫芦巴碱的至少一部分可以化学合成。
在一个实施方案中，组合物包含为至少约90％的葫芦巴碱、优选至少约98％的葫芦巴碱的化学合成葫芦巴碱。
在一个优选的实施方案中，葫芦巴碱的至少一部分由植物或藻类提取物提供，例如来自以下物质中的一种或多种的提取物：咖啡豆(例如，生咖啡提取物)、日本萝卜、葫芦巴籽粒、豌豆(garden pea)、大麻籽粒、南瓜籽粒、燕麦、马铃薯、大丽花、水苏属、毒毛旋花属、昆布科属(尤其是海带和海藻)、海棕榈藻、Pseudochorda nagaii、Akkesiphycus或毒鼠子属(Dichapetalum cymosum)。植物提取物优选地富含葫芦巴碱，即，起始植物材料包含除葫芦巴碱以外的一种或多种其他化合物，并且富集植物材料具有的葫芦巴碱相对于一种或多种其他化合物中的至少一种的比率高于起始植物材料中的比率。
因此，组合物的一些实施方案包含在组合物中提供葫芦巴碱的至少一部分的植物来源和/或富集植物来源。
在一个优选的实施方案中，组合物包含在组合物中提供至少约25％至50％的葫芦巴碱的富集葫芦巴提取物。在一个更优选的实施方案中，组合物包含提供至少约28％至40％的葫芦巴碱的富集葫芦巴提取物。
如本文所用，“基本上由葫芦巴碱组成的组合物”包含葫芦巴碱，并且基本上不含或完全不含除葫芦巴碱之外的影响NAD+产生的任何附加化合物。在一个特定非限制性实施方案中，组合物由葫芦巴碱和一种或多种赋形剂组成。
在一些实施方案中，基本上由葫芦巴碱组成的组合物任选地基本上不含或完全不含其他NAD+前体，诸如葫芦巴碱衍生物中的一种或多种；葫芦巴碱的代谢物和热解产物，诸如烟酰胺、烟酰胺核糖核苷、1-甲基烟酰胺、1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺(Me2PY)、1-甲基-4-吡啶酮-5-甲酰胺(Me4PY)和烷基吡啶
Figure BDA0003456269610000171
诸如1-甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000172
和1,4-二甲基吡啶
Figure BDA0003456269610000173
烟酸(“尼克酸”)；或L-色氨酸。
如本文所用，“基本上不含”意指组合物中存在的任何其他化合物相对于葫芦巴碱的量不大于1.0重量％，优选相对于葫芦巴碱的量不大于0.1重量％，更优选相对于葫芦巴碱的量不大于0.01重量％，最优选相对于葫芦巴碱的量不大于0.001重量％。
蛋白质和高蛋白质
如本文所用，术语“蛋白质”包括游离形式的氨基酸、介于2和20个氨基酸之间的分子(本文称为“肽”)，并且还包括更长的氨基酸链。小的肽(即，具有2至10个氨基酸的链)单独或与其它蛋白质组合后适用于该组合物。氨基酸的“游离形式”是氨基酸的单体形式。合适的氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸两者。该组合物可包含一种或多种类型的蛋白质的混合物，例如一种或多种(i)肽、(ii)较长的氨基酸链或(iii)游离形式的氨基酸；并且该混合物经优选配制以实现所需的氨基酸分布/含量。
蛋白质的至少一部分可来自：动物来源或植物来源，例如乳蛋白质，诸如乳蛋白质中的一种或多种，例如乳蛋白质浓缩物或乳蛋白质分离物；酪蛋白酸盐或酪蛋白，例如胶束酪蛋白浓缩物或胶束酪蛋白分离物；或乳清蛋白质，例如乳清蛋白质浓缩物或乳清蛋白质分离物。除此之外或另选地，蛋白质的至少一部分可为植物蛋白质，诸如大豆蛋白质或豌豆蛋白质中的一种或多种。
这些蛋白质的混合物也是合适的，例如其中酪蛋白是蛋白质的大部分但不是全部的混合物，其中乳清蛋白质是蛋白质的大部分但不是全部的混合物，其中豌豆蛋白质是蛋白质的大部分但不是全部的混合物，以及其中大豆蛋白质是蛋白质的大部分但不是全部的混合物。在一个实施方案中，蛋白质的至少10重量％为乳清蛋白质，优选至少20重量％，并且更优选至少30重量％。在一个实施方案中，蛋白质的至少10重量％为酪蛋白，优选至少20重量％，并且更优选至少30重量％。在一个实施方案中，蛋白质的至少10重量％为植物蛋白质，优选至少20重量％，更优选至少30重量％。
乳清蛋白质可以是任何乳清蛋白质，例如选自乳清蛋白质浓缩物、乳清蛋白质分离物、乳清蛋白质胶束、乳清蛋白质水解物、酸乳清、甜乳清、改性甜乳清(其中已去除酪蛋白-糖巨肽的甜乳清)、乳清蛋白质的级分以及它们的任何组合。
酪蛋白可以从任何哺乳动物获得，但优选从牛乳获得，并且优选为胶束酪蛋白。
蛋白质可以是未水解的、部分水解的(即，具有3kDa至10kDa的分子量并且平均分子量小于5kDa的肽)或充分水解的(即，其中90％的肽具有小于3kDa的分子量)，例如在5％至95％水解的范围内。在一些实施方案中，水解蛋白质的肽分布可在不同分子量的范围内。例如，肽中的大多数(>50摩尔百分比或>50重量％)可具有1kDa至5kDa或5kDa至10kDa或10kDa至20kDa内的分子量。
蛋白质的至少一部分选自(i)游离形式的氨基酸、(ii)未水解蛋白质、(iii)部分水解蛋白质、(iv)充分水解蛋白质以及(v)它们的混合物。
蛋白质可包含必需氨基酸和/或条件必需氨基酸，例如可能由于低热量摄入或疾病而递送不足的此类氨基酸。例如，蛋白质可包含选自异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、组氨酸、色氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸和苏氨酸的一种或多种必需氨基酸；并且这些氨基酸(如果存在的话)中的每一种可以约0.0476mg至约47.6mg氨基酸/kg体重的日剂量施用于组合物中。值得注意的是，较低的甲硫氨酸摄入导致较低水平的蛋白质翻译并最终导致较低水平的肌肉合成。
蛋白质可包含一种或多种条件必需氨基酸(例如，在疾病或应激情况下为条件必需的氨基酸)，其选自精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、鸟氨酸、丝氨酸和酪氨酸；并且这些氨基酸(如果存在的话)中的每一种可以约0.0476mg至约47.6mg氨基酸/kg体重的日剂量施用于组合物中。
组合物可包含至少一种形式的一种或多种支链氨基酸(BCAA)，该至少一种形式选自(i)游离形式、(ii)与至少一种另外氨基酸结合的形式以及(iii)它们的混合物。例如，支链氨基酸可包含游离形式和/或结合为肽和/或蛋白质(诸如乳蛋白质、动物蛋白质或植物蛋白质)的亮氨酸、异亮氨酸和/或缬氨酸。支链氨基酸的日剂量可包括下列中的一者或多者：0.35mg/kg体重的亮氨酸至142.85mg/kg体重的亮氨酸，优选0.175mg/kg体重的亮氨酸至71.425mg/kg体重的亮氨酸；0.175mg/kg体重的异亮氨酸或4-羟基异亮氨酸至71.425mg/kg体重的异亮氨酸或4-羟基异亮氨酸；以及0.175mg/kg体重的缬氨酸至71.425mg/kg体重的缬氨酸。一种或多种支链氨基酸的日剂量可由每天一份或多份组合物提供。这样的剂量特别适用于完全营养组合物，但是普通技术人员将容易地认识到如何针对口服营养补充剂(ONS)调整这些剂量。
“高蛋白质”是指为组合物的总热量摄入的至少约25％并且更优选地为本发明的组合物的总热量摄入的至少约36％或更高的蛋白质含量。
以克蛋白质/100kcal计，这意味着组合物具有至少约6g蛋白质/100kcal、优选至少约9g蛋白质/100kcal或更大的蛋白质/能量比。
作为非限制性示例，组合物可以提供大于1.0g蛋白质/kg体重/天、优选大于1.2g蛋白质/kg体重/天的蛋白质的量的日剂量施用；例如最多2.5g蛋白质/kg体重/天(例如，1.0蛋白质/kg体重/天至2.5g蛋白质/kg体重/天；1.2至2.5g蛋白质/kg体重/天；或1.5蛋白质/kg体重/天至2.5g蛋白质/kg体重/天)，优选最多2.0g蛋白质/kg体重/天(例如1.0蛋白质/kg体重/天至2.0g蛋白质/kg体重/天；1.2蛋白质/kg体重/天至2.0g蛋白质/kg体重/天；或1.5蛋白质/kg体重/天至2.0g蛋白质/kg体重/天)，更优选最多1.5g蛋白质/kg体重/天(例如1.0蛋白质/kg体重/天至1.5g蛋白质/kg体重/天或1.2蛋白质/kg体重/天至1.5g蛋白质/kg体重/天)。蛋白质的日剂量可由每天一份或多份组合物提供。
如果组合物为液体形式，则合适的高蛋白质浓度的非限制性示例包括6g蛋白质/100ml至20g蛋白质/100ml，例如6g蛋白质/100ml至11g蛋白质/100ml；7g蛋白质/100ml至14g蛋白质/100ml；7g蛋白质/100ml至12g蛋白质/100ml；8g蛋白质/100ml至11g蛋白质/100ml，例如，8g蛋白质/100ml至20g蛋白质/100ml；9g蛋白质/100ml至20g蛋白质/100ml；以及11g蛋白质/100ml至20g蛋白质/100ml。
组合物制剂
组合物可选自食物产品、饮料产品、食物补充剂、口服营养补充剂(ONS)、医疗食物以及它们的组合，其中“高蛋白质”含量为组合物的总热量摄入的至少约25％，并且更优选地为本发明组合物的总热量摄入的至少约36％或更高。
在一个实施方案中，蛋白质的至少一部分选自(i)来自动物来源的蛋白质、(ii)来自植物来源的蛋白质以及(iii)它们的混合物。
在一个实施方案中，蛋白质的至少一部分选自(i)乳蛋白质、(ii)乳清蛋白质、(iii)酪蛋白酸盐、(iv)胶束酪蛋白、(v)豌豆蛋白质、(vi)大豆蛋白质以及(vii)它们的混合物。
在一个实施方案中，蛋白质具有选自以下的配方组成：(i)蛋白质的至少50重量％为酪蛋白，(ii)蛋白质的至少50重量％为乳清蛋白质，(iii)蛋白质的至少50重量％为豌豆蛋白质，以及(iv)蛋白质的至少50重量％为大豆蛋白质。
在一个实施方案中，蛋白质的至少一部分选自(i)游离形式的氨基酸、(ii)未水解蛋白质、(iii)部分水解蛋白质、(iv)充分水解蛋白质以及(v)它们的混合物。蛋白质可包含选自以下的一种或多种氨基酸：组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、鸟氨酸、丝氨酸、酪氨酸以及它们的混合物。蛋白质可包含长度为2至10个氨基酸的肽。
蛋白质可包含必需氨基酸和/或条件必需氨基酸，例如在疾病或恢复状态中可能递送不足的此类氨基酸。例如，蛋白质可包含选自异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸和苏氨酸的一种或多种必需氨基酸；并且这些氨基酸(如果存在的话)中的每一种可以约0.0476mg至约47.6mg氨基酸/kg体重的日剂量施用于组合物中。值得注意的是，较低的甲硫氨酸摄入导致较低水平的蛋白质翻译并最终导致较低水平的肌肉合成。
在一个优选的实施方案中，一种或多种必需氨基酸选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和/或色氨酸。
在一个优选的实施方案中，一种或多种氨基酸是4-羟基异亮氨酸。
组合物可包含游离形式和/或结合为肽和/或蛋白质(诸如乳蛋白质、动物蛋白质或植物蛋白质)的亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或色氨酸中的一种或多种。组合物的日剂量可包括下列中的一者或多者：0.175mg/kg体重的亮氨酸至142.85mg/kg体重的亮氨酸，优选0.35mg/kg体重的亮氨酸至71.425mg/kg体重的亮氨酸；0.175mg/kg体重的异亮氨酸或4-羟基异亮氨酸至71.425mg/kg体重的异亮氨酸或4-羟基异亮氨酸；24mg/kg体重的缬氨酸至87mg/kg体重的缬氨酸；5mg/kg体重的色氨酸至7mg/kg体重的色氨酸。一种或多种氨基酸的日剂量可由每天一份或多份组合物提供。
在一个实施方案中，组合物包含至少一种形式的支链氨基酸，该至少一种形式选自(i)游离形式、(ii)与至少一种另外氨基酸结合的形式以及(iii)它们的混合物。支链氨基酸可包含有效激活个体中的mTOR的量的亮氨酸。
在一个实施方案中，蛋白质的至少一部分为5％至95％水解的。
在一个实施方案中，蛋白质具有选自以下的配方组成：(i)蛋白质的至少50％具有1kDa至5kDa的分子量，(ii)蛋白质的至少50％具有5kDa至10kDa的分子量，以及(iii)蛋白质的至少50％具有10kDa至20kDa的分子量。
支链氨基酸
存在三种支链氨基酸(BCAA)：亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸，它们是蛋白原氨基酸。这三种蛋白原BCAA属于人类的九种必需氨基酸，占肌肉蛋白质中必需氨基酸的35％。这些氨基酸有助于促进肌肉生长并增强运动或创伤后的恢复。
平均成人应每天消耗最少34mg/kg体重至144mg/kg体重，每天总共消耗最多15g至25g。
色氨酸
色氨酸也称为(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸或2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸。
色氨酸是不能在体内合成并且必须从饮食中获得的必需氨基酸。色氨酸从食物中吸收并转化到体内成为5-HTP(5-羟基色氨酸)，然后转化成血清素、褪黑激素和维生素B6(烟酰胺)。
色氨酸可通过其代谢物血清素显著影响肌肉质量，并且已知缺乏色氨酸的动物显示出低水平的生长激素(GH)和显著的肌肉萎缩，这是降低的GH-IGF1信号传导的下游效应(Dukes,A.等人，Nutrition.2015年7月-8月；31(0)：1018–1024)。
色氨酸补充剂可以L-色氨酸的形式提供，例如250mg至1000mg/天。建议的每日摄入量为成人约5mg/kg体重/天，但该剂量可根据需要进行调整。
肌酸
肌酸在体内由氨基酸甘氨酸和精氨酸内源性地产生，其中另外的甲硫氨酸用于在肝、肾和胰腺中催化胍基乙酸转化成肌酸。肌酸或环肌酸是酶肌酸激酶的底物，其增加磷酸肌酸(PCr)或磷酸环肌酸(PCCr)水平和ATP生成，从而可对骨骼肌施加保护作用。尤其是在高能量需求的条件下，诸如剧烈体力活动、创伤、疾病和病症；补充肌酸可能是必要的，因为它有助于增加肌肉质量和肌肉力量。
肌酸补充剂可以肌酸乙酯、葡糖酸酯、一水合物和硝酸盐形式提供。肌酸可以微粉化、泡腾剂和浆液制剂提供。
对于成人，可根据适应症考虑肌酸的不同单位剂量方案。
对于年龄相关的肌肉损失，优选的剂量是使用短期“负荷剂量”，然后是长期维持剂量。负荷剂量通常为20克/天，持续4至7天。维持剂量通常为每天2克至10克。在一个优选的实施方案中，肌酸补充应与抗性训练结合。
对于运动表现，优选的剂量是短期“负荷剂量”，然后是长期维持剂量。负荷剂量通常为20克/天，持续4至7天。维持剂量通常为每天2克至10克。
用于增加肌肉力量，例如在损伤、创伤或手术后；优选的剂量是短期“负荷剂量”，然后是长期维持剂量。最常见的负荷剂量通常为每天约20克，持续5至7天。还使用了每日1至27克范围内的维持剂量。
对于患有由制造或运输肌酸的问题引起的综合征的儿童，400mg肌酸/kg体重至800mg肌酸/kg体重的剂量每天服用最长8年。另外，每天服用4克至8克肌酸最长25个月。
组合物的施用方法
本发明的组合物可增加肌肉例如骨骼肌中的NAD+。此类肌肉的非限制性示例包括以下中的一者或多者：股外侧肌、腓肠肌、胫骨肌、比目鱼肌、伸肌、趾长肌(EDL)、股二头肌、半腱肌、半膜肌、臀大肌、眼外肌、面肌或隔膜。
有需要的个体可为老龄个体，诸如老龄动物或老龄人类。在一些实施方案中，对本发明的组合物有需要的个体为老年动物或老年人类。
对于非人哺乳动物诸如啮齿动物，一些实施方案包括施用一定量的组合物，该量的组合物提供1.0mg至1.0g葫芦巴碱/kg非人哺乳动物体重，优选10mg至500mg葫芦巴碱/kg非人哺乳动物体重，更优选25mg至400mg葫芦巴碱/kg哺乳动物体重，最优选50mg至300mg葫芦巴碱/kg非人哺乳动物体重。
对于人，一些实施方案包括施用一定量的组合物，该量的组合物提供1.0mg至10.0g葫芦巴碱/kg人体重，优选10mg至5.0g葫芦巴碱/kg人体重，更优选50mg至2.0g葫芦巴碱/kg人体重，最优选100mg至1.0g葫芦巴碱/kg人体重。
在本发明的一些实施方案中，除了葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和/或色氨酸之外，组合物可包含附加组分，诸如碳水化合物或脂肪。
在一个实施方案中，组合物可包含碳水化合物来源。任何合适的碳水化合物均可用于组合物中，包括但不限于淀粉(例如改性淀粉、直链淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉)、蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖浆固体、麦芽糖糊精、木糖醇、山梨糖醇或它们的组合。
碳水化合物来源优选不大于组合物的50能量％，更优选不大于组合物的36能量％，并且最优选不大于组合物的30能量％。组合物可具有高蛋白质:碳水化合物能量比，例如大于0.66，优选大于0.9，并且更优选大于1.2。
在一个实施方案中，组合物可包含脂肪来源。脂肪来源可包括任何合适的脂肪或脂肪混合物。合适的脂肪来源的非限制性示例包括植物脂肪(诸如橄榄油、玉米油、葵花油、高油酸葵花油、油菜籽油、低芥酸菜籽油、榛子油、大豆油、棕榈油、椰子油、黑加仑籽油、琉璃苣油、卵磷脂等)、动物脂肪(诸如乳脂肪)；或它们的组合。
可将本发明组合物以治疗有效剂量施用给个体，诸如人类，例如老龄个体或危重个体。该治疗有效剂量可以由本领域的技术人员确定，并且将取决于本领域的技术人员已知的许多因素，诸如病症的严重程度和个体的体重以及一般状况。
组合物优选每周至少两天、更优选每周至少三天、最优选每周全部七天施用给个体；持续至少一周、至少一个月、至少两个月、至少三个月、至少六个月或甚至更长时间。在一些实施方案中，将组合物连续多天施用给个体，例如至少直到实现治疗效果。在一个实施方案中，可将组合物每天施用给个体持续至少连续30天、60天或90天。
上述施用示例不需要无中断的连续每日施用。相反，在施用中可以存在一些短暂的中断，例如在施用期间中断两至四天。施用组合物的理想持续时间可以由本领域的技术人员确定。
在一个优选的实施方案中，将该组合物以口服方式或经胃肠内(例如管饲)施用给个体。例如，该组合物可以饮料、胶囊、片剂、粉末或混悬剂形式施用给个体。
该组合物可以是适合人类和/或动物食用的任何种类的组合物。例如，所述组合物可选自食物组合物、膳食补充剂、营养组合物、营养药品、在食用前用水或乳重构的粉末状营养产品、食品添加剂、药物、饮品和饮料。在一个实施方案中，所述组合物是口服营养补充剂(ONS)、完全营养配方、医药、医疗产品或食物产品。在一个优选的实施方案中，该组合物以饮料形式施用给个体。所述组合物可以粉末形式储存在小袋中，然后混悬在液体如水中以供采用。
在不能或不建议口服或经胃肠内施用的一些情况下，所述组合物也可以肠胃外方式施用。
在一些实施方案中，该组合物以单一剂型施用给个体，即所有化合物均存在于一种产品中，该产品将与膳食组合提供给个体。在其它实施方案中，组合物以单独的剂型共同施用，例如至少一种组分与组合物的其它组分中的一种或多种分开。
这些方法可基本上由以下组成：施用基本上由葫芦巴碱组成或基本上由葫芦巴碱和高蛋白质组成或基本上由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成或基本上由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和/或色氨酸组成的组合物。如本文所用，“基本上由施用基本上由葫芦巴碱组成或由葫芦巴碱组成的组合物组成的方法”意指在施用葫芦巴碱的一小时内不施用除葫芦巴碱之外的影响NAD+产生的任何附加化合物，优选地不在施用葫芦巴碱后两个小时内施用，更优选地不在施用葫芦巴碱后三个小时内施用，最优选地不在施用葫芦巴碱的同一天内施用。任选地可从方法中排除的化合物的非限制性示例包括上文所公开的关于从组合物自身中排除的那些。
在本文所公开的组合物和方法的每一者中，组合物优选地为食物产品，包括食物添加剂、食物配料、功能性食物、膳食补充剂、医疗食物、营养品、口服营养补充剂(ONS)或食物补充剂。
该组合物可每周施用至少一天，优选地每周至少两天，更优选地每周至少三天或四天(例如，每隔一天)，最优选地至少每周五天、每周六天或每周七天。施用时间段可为至少一周，优选地至少一个月，更优选地至少两个月，最优选地至少三个月，例如至少四个月。在一些实施方案中，投配是至少每天进行的；例如，个体可每天接收一个或多个剂量，在一个实施方案中每天接收多个剂量。在一些实施方案中，施用持续达个体的剩余寿命。在其他实施方案中，施用发生直到没有医学病症的可检测症状保留。在具体的实施方案中，施用发生直到至少一种症状的可检测的改善发生，并且在另外的情况下继续保持改善。
本文所公开的组合物可经胃肠内(例如，口服地)或非肠道地施用给个体。非肠道施用的非限制性示例包括静脉内、肌内、腹膜内、皮下、关节内、滑膜内、眼内、鞘内、局部和吸入。因此，组合物形式的非限制性示例包括天然食物、加工食物、天然果汁、浓缩物和提取物、可注射溶液、微胶囊、纳米胶囊、脂质体、膏剂、吸入形式、鼻喷剂、滴鼻剂、滴眼剂、舌下片剂和缓释制剂。
本文所公开的组合物可使用多种制剂中的任一种制剂来进行治疗性施用。更具体地，药物组合物可包含合适的药学上可接受的载体或稀释剂，并且可以配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂，诸如片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球和气溶胶剂。因此，组合物的施用可以多种方式实现，包括口服、经颊、经直肠、肠胃外、腹膜内、皮内、透皮和气管内施用。活性剂可在施用后为全身性的，或者可通过使用局部施用、壁内施用或使用植入物而局部化，该植入物作用以将活性剂量保持在植入部位处。
在药物剂型中，化合物可作为其药学上可接受的盐施用。它们也可与其他药物活性化合物适当地联合使用。以下方法和赋形剂仅仅是示例性的，而决不是限制性的。
就口服制剂而言，化合物可单独使用或与适当的添加剂组合使用以制备片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂，例如与常规添加剂，诸如乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉或马铃薯淀粉结合使用；与粘合剂，诸如结晶纤维素、纤维素官能衍生物、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶组合使用；与崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠组合使用；与润滑剂，诸如滑石或硬脂酸镁组合使用；并且如果需要的话，与稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂和调味剂组合使用。
可通过以下方式将化合物配制成用于注射的制剂：将这些化合物溶解、悬浮或乳化于水性或非水性溶剂(诸如植物油或其他类似的油、合成脂族酸甘油酯、高级脂族酸的酯或丙二醇)中；并且如果需要的话，将这些化合物与常规添加剂(诸如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂)一起使用。
这些化合物可用于要通过吸入施用的气溶胶制剂中。例如，可将化合物配制成加压的可接受推进剂，诸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等。
此外，这些化合物可通过与多种碱(诸如乳化碱或水溶性碱)混合而制成栓剂。化合物可通过栓剂经直肠施用。栓剂可包含媒介物，诸如可可脂、卡波蜡(carbowax)和聚乙二醇，该媒介物在体温下熔化，但在室温下固化。
可提供用于口服或直肠施用的单位剂型，诸如糖浆剂、酏剂和混悬剂，其中每个剂量单位(例如茶匙、药匙(tablespoonful)、片剂或栓剂)含有预定量的组合物。类似地，用于注射或静脉内施用的单位剂型可包含在作为无菌水、生理盐水或另一种药学上可接受的载体中的溶液的组合物中的化合物，其中每种剂量单位，例如mL或L，含有预定量的含有这些化合物中的一种或多种化合物的组合物。
旨在用于非人动物的组合物包括为动物、动物犒赏物(例如饼干)和/或膳食补充剂提供必要的饮食需求的食物组合物。组合物可以是干组合物(例如粗磨食物)、半湿组合物、湿组合物或它们的任何混合物。在一个实施方案中，组合物为饮食补充剂，诸如肉汁、饮用水、饮料、酸奶、粉末、颗粒、糊剂、悬浮液、咀嚼物、小块、犒赏物、小吃、食丸、丸剂、胶囊、片剂或任何其他合适的递送形式。饮食补充剂可包含高浓度的UFA和NORC，以及B族维生素和抗氧化剂。这允许将补充剂以少量施用给动物，或者在另选方案中可以在施用给动物之前稀释。膳食补充剂可能需要混合，或者可在施用于动物之前与水或其他稀释剂混合。
“宠物食品”或“宠物犒赏物组合物”包含约15％至约50％的粗蛋白。粗蛋白材料可包含植物蛋白，诸如大豆粉、大豆浓缩蛋白、玉米蛋白粉、小麦谷蛋白、棉籽和花生粕，或者动物蛋白，诸如酪蛋白、白蛋白和肉蛋白。可用于本发明的肉蛋白质的示例包括猪肉、羊羔肉、马肉、禽肉、鱼肉以及它们的混合物。组合物还可包含约5％至约40％的脂肪。组合物还可包含碳水化合物源。组合物可包含约15％至约60％的碳水化合物。此类碳水化合物的示例包括谷粒或谷物，诸如水稻、玉米、芦粟、高粱、苜蓿、大麦、大豆、芥花、燕麦、小麦以及它们的混合物。组合物还可任选地包含其他材料，诸如干乳清和其他乳制品副产物。
在一些实施方案中，宠物食物组合物的灰分含量在小于1％至约15％的范围内，并且在一个方面，在约5％至约10％的范围内。
水分含量可根据宠物食物组合物的性质而变化。在一个实施方案中，组合物可以是完全且营养平衡的宠物食品。在该实施方案中，宠物食品可以是“湿食品”、“干燥食品”或中等水分含量的食物。“湿食品”描述的是通常以罐或箔袋形式销售的宠物食品，并且其水分含量通常在约70％至约90％的范围内。“干燥食品”描述了与湿食品组成相似的宠物食品，但其含有的水分含量有限，通常在约5％至约15％或20％的范围内，因此呈现为例如小饼干类粗磨食品。在一个实施方案中，组合物具有约5％至约20％的水分含量。干燥食品包括各种含水量的各种食品，使得它们相对耐贮存并且抗微生物或真菌导致的变质或污染。还包括在内的是作为挤出食物产品的干燥食品组合物，诸如宠物食品，或用于伴侣动物的零食。
组合物的用途
提供了用于通过施用有效量的有效单位剂型的组合物来预防和/或治疗骨骼肌疾病或病症来增加个体中的NAD+的组合物的方法和用途。
在一些实施方案中，提供了用于预防或治疗骨骼肌疾病或病症的组合物的方法和用途。在一些实施方案中，组合物的方法和用途用于骨骼肌疾病或病症，诸如肌少症、恶病质或恶病质前期、肌病、营养不良和/或剧烈运动、肌肉损伤或手术后的恢复。
在一个实施方案中，将本发明的组合物用于预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱和高蛋白质组成或由葫芦巴碱和高蛋白质组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
在一个实施方案中，将本发明的组合物用于预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成或由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
在一个实施方案中，将本发明的组合物用于预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱、高蛋白质组成或由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成的组合物，其中所述蛋白质包含支链氨基酸；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
在一个实施方案中，将本发明的组合物用于预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，包括以下步骤：
i)向个体提供基本上由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和色氨酸组成或由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和色氨酸组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
在一些实施方案中，个体选自人、狗、猫、牛、马、猪或羊。个体优选地为需要预防或治疗影响骨骼肌的疾病或病症的人。
实施例
实施例1-用葫芦巴碱治疗后人和斑马鱼中的NAD+浓度的酶定量
将人原代成肌细胞以每孔3'000个细胞的密度接种于384孔板中的骨骼肌生长培养基(SKM-M，AMSbio)中。一天后，通过使用分化培养基(Gibco编号31330-028)更换培养基来诱导分化4天。用葫芦巴碱(sigma#T5509)治疗细胞6小时。使用生物发光测定(PromegaNAD/NADH-GloTM#G9071)测量NAD。这一情况在图1A中示出。
来自野生型斑马鱼的胚胎在标准实验室条件下于28℃下进行抚育，并且在受精后96小时之时在6孔板中进行抚育(n＝20-25)。用葫芦巴碱(sigma#T5509)治疗幼体16小时。使用比色NAD定量测定法(Biovision NAD/NADH Quantitation Colorimetric Kit#k337-100)测量NAD。这一情况在图1B中示出。
实施例2-通过葫芦巴碱增强的人成肌细胞分化
将来自两种不同供体的人原代成肌细胞以每孔200’000个细胞的密度接种于6孔板中的骨骼肌生长培养基(SKM-M，AMSbio)中。一天后，通过使用分化培养基(Gibco编号31330-028)更换培养基来诱导分化4天。用同位素标记的葫芦巴碱(13C羰基；甲基上的32H)治疗细胞6小时。
在Vanquish UHPLC+聚焦LC系统(Thermo Scientific)上分离细胞提取物，该系统具有尺寸为150mm×2.1mm、5μm的亲水液相色谱(HILIC)iHILIC-Fusion(P)柱(Hilicon)和位于前方的保护柱(iHILIC-Fusion(P)，Hilicon)。代谢物的分离通过以0.25mL/min的流速和35℃的温度在正相中施加线性溶剂梯度来实现。作为流动相，溶剂A为具有10mM乙酸铵和0.04％(v/v)氢氧化铵的水，pH为约9.3，并且溶剂B为乙腈。
洗脱代谢物用Orbitrap Fusion Lumos质谱仪(Thermo Scientific)和加热的电喷雾电离(H-ESI)源以正模式和负模式分析，分辨率为60,000，m/z为200。使用Xcalibur(Thermo Scientific)进行仪器控制和数据分析。
图2A示出了NAD+的增强，其中葫芦巴碱以500μm给予。图2B示出与分化原代成肌细胞中天然存在的NAD+的对照物相比，用标记的500μm剂量葫芦巴碱治疗后标记的NAD+(M+1)的相对丰度增加。
实施例3–口服或腹膜内注射施用葫芦巴碱后的肝脏和肌肉NAD+浓度
向C57BL/6JRj雄性小鼠喂食饮食(Safe 150)10周，然后经管饲法或腹膜内注射接受葫芦巴碱(250mg/kg，n＝5/组)。治疗120分钟后，收获组织并在液氮中快速冷冻。使用比色NAD定量测定法(Biovision NAD/NADH Quantitation Colorimetric Kit#k337-100)在腓肠肌和肝中测量NAD。图3示出了通过管饲法(图3A、图3C)或腹膜内注射施用(图3B、图3D)接受250mg/kg葫芦巴碱120分钟后小鼠中的NAD+的酶定量。
实施例4：在用化学合成的葫芦巴碱或富含葫芦巴碱的葫芦巴籽粒提取物的治疗 后，在人原代成肌细胞中测量的NAD +
将人原代成肌细胞以每孔12'000个细胞的密度接种于96孔板中的骨骼肌生长培养基(SKM-M，AMSbio)中。一天后，通过培养基更换来诱导分化4天。用合成的葫芦巴碱一水合物(图4A)或用富含葫芦巴碱的含有40.45％葫芦巴碱的葫芦巴籽粒提取物(图4B)以不同剂量治疗细胞16小时。使用比色NAD+定量测定法(Biovision NAD+/NADH QuantitationColorimetric Kit#k337-100)测量NAD+。
该实验表明，化学合成的葫芦巴碱和得自葫芦巴籽粒提取物的葫芦巴碱均显示NAD+含量与对照物相比显著提高。对于葫芦巴籽粒提取物，其在较低剂量下比化学合成的葫芦巴碱更有效。
实施例5：在用化学合成的葫芦巴碱或富含葫芦巴碱的葫芦巴籽粒提取物的治疗 后，在小鼠肝脏中测量的NAD +
C57BL/6JRj雄性小鼠通过管饲法接受葫芦巴碱(sigma#T5509)或富含葫芦巴碱的葫芦巴籽粒提取物(40.45％葫芦巴碱)(等摩尔量300mg/kg葫芦巴碱，n＝8/组)10周。治疗120分钟后，收获肝脏并在液氮中快速冷冻。使用酶促方法测量肝脏中的NAD+，该方法改编自Dall,M.等人的方法(Mol Cell Endocrinol，2018，473：第245-256页)。
该实验表明，化学合成的葫芦巴碱和得自葫芦巴籽粒提取物的葫芦巴碱均显示肝脏中的NAD+含量与对照物相比显著提高。
实施例6：秀丽隐杆线虫中的测试，以测量存活率、速度、移动性和刺激移动性
在每种条件下使用约100只动物进行蠕虫寿命试验，并且每隔一天手动评分。在长期暴露方案中，在野生型N2蠕虫成年期第1天开始葫芦巴碱治疗和实验测量，直至实验终止。图7A示出了将对照物与用葫芦巴碱治疗的蠕虫进行比较的蠕虫平均存活率，以天数计。用1mM葫芦巴碱氯化物治疗的秀丽隐杆线虫的存活率曲线寿命增加21％。
使用Movement Tracker软件(Mouchiroud,L.等人，Curr Protoc Neurosci 77，8.37.1-8.37.21(2016))进行秀丽隐杆线虫移动性测试。实验重复至少两次。在长期暴露方案中，在野生型N2蠕虫成年期第1天开始葫芦巴碱治疗和实验测量，直至实验终止。
图7B测量了从成年期第1天开始，在用1mM葫芦巴碱氯化物治疗的蠕虫中进行的自发移动性测定期间测得的平均速度与对照物的比较。与对照物相比，用1mM葫芦巴碱氯化物治疗的秀丽隐杆线虫增加了平均速度。
图7C显示，与对照物相比，在用1mM葫芦巴碱氯化物治疗的秀丽隐杆线虫在高龄阶段的自发移动性测定期间行进的距离显著增加。
每种条件45至60个蠕虫，在戳刺后针对移动性手动评分。不能响应任何重复刺激的蠕虫被评分为死亡。结果代表从至少两个独立实验获得的数据。在长期暴露方案中，在野生型N2蠕虫成年期第1天开始葫芦巴碱治疗和实验测量，直至实验终止。
图7D示出，针对8天龄和11天龄蠕虫评估的刺激移动性得分指示用1mM葫芦巴碱氯化物治疗的秀丽隐杆线虫对物理刺激的响应比对照物更大。
*、**指示与对照物的差异，学生检验，其中分别p<0.05、p<0.01。
实施例7：使用葫芦巴碱治疗改善了肌原纤维和肌球蛋白的结构完整性
通常在肌原纤维和肌球蛋白的高盐ATP酶活性中观察到肌球蛋白结构的年龄相关形态学变化，其中肌原纤维结构随着年龄增加而变得组织化较差。
在第1天(年轻成虫)和第11天(老年动物)收集RW1596(myo-3p::GFP)蠕虫用于肌肉完整性评估。用四咪唑固定蠕虫并通过共聚焦显微镜进行分析，以评估GFP荧光成像所示的肌纤维形态。在长期暴露方案中，在野生型N2蠕虫成年期第1天开始采用1mM葫芦巴碱氯化物的葫芦巴碱治疗和实验测量，直至实验终止。
在使用GFP标记的肌球蛋白的荧光显微镜检查形态学结构时，我们能够看到与年龄匹配的对照物蠕虫相比，经葫芦巴碱治疗的11天龄蠕虫具有改善的更好组织性的肌纤维结构。
实施例8：对照物和用葫芦巴碱治疗的秀丽隐杆线虫的线粒体与核DNA的比率
野生型N2蠕虫的mtDNA拷贝数的绝对定量通过实时PCR进行。比较每个样品内的nduo-1和act-1的相对值，以生成表示每个核基因组的线粒体DNA相对水平的比率。对于每个生物学数据点，使用至少两次技术重复的平均值。对至少十个独立的生物样品(单个蠕虫)执行每个实验。在长期暴露方案中，在野生型N2蠕虫成年期第1天开始采用1mM葫芦巴碱氯化物的葫芦巴碱治疗和实验测量，直至实验终止。
图8示出了8天龄蠕虫的线粒体编码的基因(nduo-1)相对于核编码的基因(act-1)的比率。*指示与对照物的差异，学生检验，其中P<0.05。数据表示为平均值+/-SD。
在用葫芦巴碱治疗的组中，相对于核表达的线粒体表达高于对照物组。

Claims (30)

1.基本上由葫芦巴碱和高蛋白质组成的组合物，所述组合物用于增加骨骼肌中的NAD+水平以用于预防或治疗骨骼肌疾病或病症。
2.根据权利要求1所述的组合物以及另外的肌酸，其用于预防或治疗骨骼肌疾病或病症。
3.根据权利要求1或2所述的组合物以及另外的色氨酸，其用于预防或治疗骨骼肌疾病或病症。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，所述组合物选自食物产品、饮料产品、食物补充剂、口服营养补充剂(ONS)、医疗食物以及它们的组合。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述葫芦巴碱选自咖啡、葫芦巴、大麻或藻类的提取物。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中葫芦巴碱选自含有至少约25％至50％的葫芦巴碱的葫芦巴提取物。
7.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中葫芦巴碱是化学合成的并且其包含至少约90％的葫芦巴碱。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述高蛋白质为所述组合物的总能量的至少25％，并且更优选地为所述组合物的总热量摄入的至少约36％或更高。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述组合物具有至少约6g蛋白质/100kcal、优选至少约9g蛋白质/100kcal或更大的蛋白质/能量比。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述高蛋白质包含选自亮氨酸、异亮氨酸和/或缬氨酸的支链氨基酸。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述高蛋白质是4-羟基异亮氨酸。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述蛋白质选自(i)乳蛋白质、(ii)乳清蛋白质、(iii)酪蛋白酸盐、(iv)胶束酪蛋白、(v)豌豆蛋白质、(vi)大豆蛋白质以及(vii)它们的混合物。
13.根据权利要求2至12中任一项所述的组合物，其中所述肌酸选自肌酸乙酯、肌酸葡糖酸酯、肌酸一水合物和肌酸硝酸形式。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，所述组合物用于维持或增加个体的骨骼肌功能。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中增加的肌肉功能通过肌肉干细胞和/或成肌细胞和/或肌管的数量的增加来测量。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，所述组合物用于维持或增加个体的骨骼肌质量。
17.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，所述组合物用于预防或减少个体的骨骼肌消耗。
18.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，所述组合物用于增强剧烈运动后骨骼肌的恢复。
19.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，所述组合物用于增强损伤、创伤或手术后骨骼肌的恢复。
20.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，所述组合物用于增强骨骼肌疾病和/或病症后骨骼肌的恢复。
21.根据权利要求20所述的组合物，其中骨骼肌疾病和/或病症选自肌少症、恶病质或恶病质前期、肌病、营养不良和/或剧烈运动、肌肉损伤或手术后的恢复。
22.根据权利要求21所述的组合物，其中恶病质与选自以下的疾病相关：癌症、慢性心力衰竭、肾衰竭、慢性阻塞性肺疾病、AIDS、自身免疫性障碍、慢性炎性障碍、肝硬化、厌食症、慢性胰腺炎、代谢性酸中毒和/或神经变性疾病。
23.用于增加哺乳动物个体中的NAD+的方法，所述方法包括向需要此类治疗的所述个体递送有效量的有效单位剂型的根据权利要求1至22中任一项所述的组合物，以预防或治疗骨骼肌疾病或病症。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述骨骼肌疾病或病症选自肌少症、恶病质或恶病质前期、肌病、营养不良和/或剧烈运动、肌肉损伤或手术后的恢复。
25.根据权利要求23或24中任一项所述的方法，所述方法用于预防或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，所述方法包括以下步骤：
i)向所述个体提供基本上由葫芦巴碱和高蛋白质组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
26.根据权利要求23至24中任一项所述的方法，所述方法用于预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，所述方法包括以下步骤：
i)向所述个体提供基本上由葫芦巴碱、高蛋白质和肌酸组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
27.根据权利要求23至24中任一项所述的方法，所述方法用于预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，所述方法包括以下步骤：
i)向所述个体提供基本上由葫芦巴碱、包含支链氨基酸的高蛋白质和肌酸组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
28.根据权利要求23至24中任一项所述的方法，所述方法用于预防和/或治疗有需要的个体的骨骼肌疾病或病症，所述方法包括以下步骤：
i)向所述个体提供基本上由葫芦巴碱、高蛋白质、肌酸和色氨酸组成的组合物；以及
ii)将所述组合物施用于所述个体。
29.根据权利要求23至28中任一项所述的方法，其中所述个体选自人、狗、猫、牛、马、猪或羊。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述个体优选地是人。
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