WO2024090489A1

WO2024090489A1 - 放射性医薬組成物の製造方法

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Publication number: WO2024090489A1
Application number: PCT/JP2023/038582
Authority: WO
Inventors: 稔河谷; 侑紀奥村; 英晃竹森; 文章竹中; 浩章市川
Original assignee: 日本メジフィジックス株式会社
Priority date: 2022-10-26
Filing date: 2023-10-25
Publication date: 2024-05-02

Abstract

本発明は、放射性核種で抗体を標識した放射性標識抗体を有効成分とし、１種以上の添加剤を含む液状の放射性医薬組成物の製造方法であって、（工程１）放射性核種で抗体を標識して前記放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程と、（工程２）前記工程１で得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程と、（工程３）前記添加剤を含む溶離液を用いて前記工程２で前記陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、を含む、放射性医薬組成物の製造方法に関する。　本発明の方法により、放射性標識抗体を簡便かつ簡易な手法で精製することにより放射化学的収率及び放射化学的純度に優れる放射性医薬組成物を製造することができる。

Description

放射性医薬組成物の製造方法

　本発明は、放射性医薬組成物の製造方法、及び、放射性標識抗体の精製方法に関する。

　従来、放射性核種は、治療的または生体内診断の用途に使用されている。例えば、ポジトロン放出核種やガンマ線放出核種は腫瘍の診断に用いられ、ベータ線放出核種は腫瘍の治療に用いられている。
　放射性核種を生体内診断および治療に適用するには、放射性核種を標的細胞部位まで運搬することが必要となる。放射性核種を標的細胞部位に運搬する一つの方法として、放射性核種を、生物学的に有用な分子、例えば、抗体に複合化することが挙げられる。

　非特許文献１には、肝癌細胞特異的に発現する分子であるＩｇＳＦ４に特異的に認識する抗ＩＧＳＦ４抗体を^６７Ｃｕで標識したことが開示されている。この^６７Ｃｕ標識抗ＩＧＳＦ４抗体は、^６７Ｃｕを標識した後にアミコンとの商品名で知られる遠心式限外ろ過フィルターを用いて遠心分離により精製されている。
　また、非特許文献２には、リポタイコ酸（ＬＴＡ）に結合する抗体である抗ＬＴＡ抗体を^８９Ｚｒで標識したことが開示されている。この^８９Ｚｒ標識抗ＬＴＡ抗体も、^８９Ｚｒを標識した後に遠心式限外ろ過フィルターを用いた遠心分離により精製されている。

　なお、抗体を精製する方法として、特許文献１では、陽イオン交換カラム(POROS 50 HS, Applied Biosystems)を用いて、チャイニーズハムスター卵巣タンパク質汚染物質を含むリツキシマブ又はベバシズマブを精製することを開示する。

特表２０１１－５０２１６１号公報特開２０１０－２７００６８号公報

Katsumasa Fujiki, et al., Scientific Reports, 2017, 7, 1912. Julie E. Pickett, et al., Bone Research, 2018, 6, 13.

　治療的または生体内診断の用途に使用される放射性核種の特徴として、半減期が短く短期間に減衰し消滅することが挙げられる。このため、放射性医薬組成物の製造は、より短時間で行うことが求められる。
　また、放射性医薬組成物の製造においては、機器に対する放射能汚染や作業者の放射線被曝をできるだけ低減させる方法が求められる。その一方、有効成分となる放射性核種で標識された分子は、治療的または生体内診断の用途を発揮し得る放射能量があればよく物質量としては少量で足りることが通常である。このため、低分子の放射性標識物質の場合、例えば、特許文献２で示すような小型の装置で、合成から精製まで一連して自動化することが行われているが、放射性標識抗体を自動化して製造することには未だ諸々の課題がある。

　非特許文献１、２で示す遠心分離機を用いる精製法は、自動化が困難である。
　特許文献２には、放射性標識抗体の合成および精製を自動化することは開示されていない。
　特許文献１は、チャイニーズハムスター卵巣タンパク質汚染物質の除去を改善することを課題とするものであり、放射性標識抗体の製造に関する課題には着目されていない。

　本発明は、放射性標識抗体を簡便かつ簡易な手法で精製することにより放射化学的収率および放射化学的純度に優れる放射性医薬組成物を製造することを目的とする。

　本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討を行った結果、放射性標識抗体の粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて該放射性標識抗体を陽イオン交換材料に吸着させ、続いて１種以上の添加剤を含む溶離液を用いることで該吸着した放射性標識抗体を溶出させることに成功し、本発明を完成するに至った。

　本発明の一態様は、
　放射性核種で抗体を標識した放射性標識抗体を有効成分とし、１種以上の添加剤（Ａ）を含む液状の放射性医薬組成物の製造方法であって、
（工程１）放射性核種で抗体を標識して前記放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程と、
（工程２）前記工程１で得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程と、
（工程３）前記添加剤（Ａ）を含む溶離液を用いて前記工程２で前記陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、
を含む、
放射性医薬組成物の製造方法である。

　また、本発明の他の態様は、
（工程Ａ）放射性核種で抗体を標識して放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程、
（工程Ｂ）前記工程Ａで得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程、及び
（工程Ｃ）１種以上の添加剤を含む溶離液を用いて前記工程Ｂで陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、
を含む、
放射性標識抗体の精製方法である。

　本発明によれば、陽イオン交換材料で放射性標識抗体を精製するので、簡便に放射性標識抗体を精製することができるとともに、自動合成装置に適用することもできる。また、製剤処方の一部を溶離液に用いるので、処方製法を簡略化し、より短時間で放射性医薬組成物を製造することができる。したがって、本発明によれば、放射化学的収率および放射化学的純度に優れる放射性医薬組成物を製造することが可能になる。

　本明細書で使用する用語は、特に言及しない限り、当該技術分野で通常用いられる意味で用いることができる。

（１）医薬組成物及びその製造方法
　本発明は、放射性核種で標識された抗体（以下、本発明の放射性標識抗体とも称する）を有効成分として含有する液状の医薬組成物（以下、本発明の液状医薬組成物とも称する）を提供する。
　本発明はまた、
（工程１）放射性核種で抗体を標識して放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程、
（工程２）工程１で得られた粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて放射性標識抗体を陽イオン交換材料に吸着させる工程、及び
（工程３）１種以上の添加剤を含む溶離液を用いて工程２で陽イオン交換材料に吸着した放射性標識抗体を溶出する工程と、
を含む、放射性標識抗体を有効成分とし、１種以上の添加剤を含む液状の放射性医薬組成物を製造する方法を提供する。
　本発明の放射性標識抗体において放射性核種と抗体とは複合体を形成する（以下、本発明の放射性核種と抗体との複合体とも称する）。本発明の放射性核種と抗体との複合体では、抗体と放射性核種とが直接連結していてもよい。また、本発明の放射性核種と抗体との複合体では、抗体と放射性核種とがリンカーを介して連結していてもよい。この場合、放射性核種を放射性金属核種とし、この放射性金属核種が、キレート剤とキレート（錯体）を形成していてもよく、抗体とキレート剤とが、リンカーを介して、またはリンカーを介さずに連結していてもよい。ここで、連結は、好ましくは、共有結合による連結であり得る。以下、各工程について説明する。

工程１：放射性核種で抗体を標識して放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程
（１－１）放射性核種
　本発明の放射性標識抗体に含まれる放射性核種は、α粒子、ポジトロン、β線又はγ線を放出する放射性核種や放射性ハロゲン核種であり得る。α粒子を放出する放射性核種として、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈが例示される。また、ポジトロンを放出する放射性核種として、^６４Ｃｕ、^６８Ｇａ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒが例示される。また、β線を放出する放射性核種として、^６４Ｃｕ、^９０Ｙ又は、^１７７Ｌｕが例示される。また、γ線を放出する放射性核種として、^９９ｍＴｃ又は^１１１Ｉｎが例示される。放射性ハロゲン核種として、^１８Ｆ、Ａｌ^１８Ｆ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ又は^２１１Ａｔが例示される。本発明のＲＩ標識抗体、ひいては本発明の液状医薬組成物に含まれる放射性核種は、Ａｌ^１８Ｆ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^１１１Ｉｎ、^１７７Ｌｕ、又は^２２５Ａｃであることが、好ましい。
　これらの放射性核種は、所定の核反応により製造することもできるし、Eckert & Ziegler社、Thermo Fisher Scientific社、Institute of Isotopes社、POLATOM等から市販されている製品を入手することもできる。このようにして製造又は入手した放射性核種をキレート化等の化学処理を加えて抗体との結合に適した化学形とすることで、抗体との複合体形成に使用することができ、かくして抗体が放射性核種で標識される。

（１－２）抗体
　本発明の液状医薬組成物及び本発明の放射性標識抗体に含まれる抗体は、特に限定されず、モノクローナル抗体(完全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体)、及び所望する結合特異性を示す限りそれらの抗体断片を包含する。
　通常、疾病や疾患を患っている哺乳動物へ投与することにより、治療効果が期待できる抗体であり、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ３４のようなＣＤポリペプチド；ＨＥＲレセプターファミリーのメンバー、例えばＥＧＦレセプター(ＨＥＲ１)、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３あるいはＨＥＲ４レセプター；細胞接着分子、例えばＬＦＡ-１、Ｍａｃ１、ｐ１５０、９５、ＶＬＡ-４、ＩＣＡＭ-１、ＶＣＡＭ及びａｖ／ｂ３インテグリンで、そのａ又はｂ何れかのサブユニットを含むもの(例えば、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８あるいは抗ＣＤ１１ｂ抗体)；ＶＥＧＦのような増殖因子；ＩｇＥ；血液型抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３レセプター；肥満(ＯＢ)レセプター；ｍｐｌレセプター；ＣＴＬＡ-４；プロテインＣ等に対する抗体が挙げられる。
　精製される抗体の具体例には、限定されるものではないが、表１に記載の抗体が挙げられる。

　また、抗体は、薬物との複合体であってもよく、幾つかの抗体薬物複合体が承認を受けている。
　好ましくは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、ベバシズマブが挙げられる。
　尚、本明細書では、該抗体が放射標識された場合は、「放射性」と区別して標記する。

（１－３）キレート剤
　本発明の工程１は、放射性核種で抗体を標識して該放射性核種で標識された放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程である。
　抗体を放射性核種で標識する方法は特に限定されないが、好ましくはキレート剤を用いる。キレート剤は、放射性核種が配位する部位を構造中に有するものであれば特に限定されないが、好ましくは、放射性核種が配位する部位であるキレート部と抗体との複合化を可能とするための置換基とを有する。キレート部として、例えば、CB-TE2A（1,4,8,11-Tetraazabicyclo[6.6.2]hexadecane-4,11-diacetic acid）、CDTA（Cyclohexane-trans-1,2-diamine tetra-acetic acid）、CDTPA（4-cyano-4-[[(dodecylthio)thioxomethyl]thio]-Pentanoic acid）、DOTA(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTMA((1R,4R,7R,10R)-α,α’,α”,α’”-tetramethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTAM（1,4,7,10-tetrakis(carbamoylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane）、DOTA-GA(α-(2-Carboxyethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid)、DOTA-GA-NHS、DOTP(((1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrayl)tetrakis(methylene))tetraphosphonic acid)、DOTPA(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrapropionic acid), 1,4,7,10-tetrakis(pyridin-2-ylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane(L^py)、ｐ-SCN-Bn-DOTA（S-2-(4-Isothiocyanatobenzyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane tetraacetic acid）、MeO-DOTA-NCS（1-[(2-methoxy-5-isothiocyanatophenyl)-carboxymethyl]-4,7,10-triscarboxy 5 methyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecane）、EuK-106、DOTMP(1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis(methylenephosphonic acid))、DOTA-4AMP(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis(acetamidomethylenephosphonic acid)、D02P(Tetraazacyclododecane dimethanephosphonic acid)、Deferoxamine (DFO)、DTPA(Glycine, N,N-bis[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl]-)、DTPA-BMA(5,8-Bis(carboxymethyl)-11-[2-(methylamino)-2-oxoethyl]-3-oxo-2,5,8,11-tetraazatridecan-13-oic acid)、EDTA(2,2’,2”,2’”-(ethane-1,2-diylbis(azanetriyl))tetraacetic acid)、NOTA(1,4,7-Triazacyclononane-1,4,7-triacetic acid)、NOTP(1,4,7-Triazacyclononane-1,4,7-triyltris(methylenephosphonic acid)、TETPA(1,4,8,11-tetraazacyclotetradecane-1,4,8,11-tetrapropionic acid)、TETA(1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-N,N’,N”,N’”-tetraacetic acid)、TTHA(3,6,9,12-Tetrakis(carboxymethyl)-3,6,9,12-tetraazatetradecanedioic acid)、HEHA(1,2,7,10,13-hexaazacyclooctadecane-1,4,7,10,13,16-hexaacetic acid)、1,2-HOPO(N,N’,N”,N’”-tetra(1,2-dihydro-1-hydroxy-2-oxopyridine-6-carbonyl)-1,5,10,14-tetraazatetradecane)、PEPA(1,4,7,10,13-pentaazacyclopentadecane-N,N’,N”,N’”,N””-penta-acetic acid)、H4octapa(N,N’-bis(6-carboxy-2-pyridylmethyl)-ethylenediamine-N,N’-diacetic acid)、H2bispa2(6,6’-({9-hydroxy-1,5-bis(methoxycarbonyl)-2,4-di(pyridine-2-yl)-3,7-diazabicyclo[3.3.1]nonane-3,7-diyl}bis(-methylene))dipicolinic acid)、H2dedpa(1,2-[{6-(carboxy)-pyridin-2-yl}-methylamino]ethane)、H2macropa(6-(1,4,10,13-tetraoxa-7,16-diazacyclooctadecan-N,N’-methyl)picolinic acid)、H5decapa(N,N”-bis(6-carboxy-2-pyridylmethyl)-diethylenetriamine-N,N’,N”-triacetic acid)、H6phospa(N,N’-(methylenephosphonate)-N,N’-[6-(methoxycarbonyl)pyridin-2-yl]-methyl-1,2-diaminoethane)、HP-D03A(Hydroxypropyltetraazacyclododecanetriacetic acid)、porphyrin、DO3A（1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7-triacetic acid trisodium salt）、DO3A-NHS（1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid mono-N-hydroxysuccinimide ester）といったものが挙げられるが、下記式（Ａ）で表される化合物に由来する構造を有することが好ましい。

（式（Ａ）中、Ｒ_１１、Ｒ_１３及びＲ_１４は、それぞれ独立して、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｐＣ_５Ｈ_４Ｎ、－（ＣＨ_２）_ｐＰＯ_３Ｈ_２、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＮＨ_２若しくは、－（ＣＨＣＯＯＨ）(ＣＨ_２)_ｐＣＯＯＨからなる基であり、Ｒ_１２又はＲ_１５の一方が、水素原子、カルボキシル基、又は、炭素数２若しくは３のカルボキシアルキル基であり、他方が、前記抗体と複合化するための置換基であり、ｐが０以上３以下の整数であり、Ｒ_１２が前記抗体と複合化するための置換基であるときＲ_１５は水素原子であり、Ｒ_１２が前記抗体と複合化するための置換基でないときＲ_１５は前記抗体と複合化するための置換基である。）

　式（Ａ）で表される具体的な構造としては、以下の式（Ａ－１）～（Ａ－１３）で表される化合物に由来する構造が挙げられる。

　キレート部と、抗体と複合化を可能とするための置換基との連結部位は、アミド結合か、チオウレア結合であることが好ましいが、安定性の観点からはアミド結合がより好ましい。

　アミド結合は、例えば、上記式（Ａ－１０）や（Ａ－１１）のＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）基、上記（Ａ－１２）の２，６－ジオキソテトラヒドロ－２Ｈ－ピラニル基、又は、上記（Ａ－１３）の２，３，５，６－テトラフルオロフェノールエステル基と、第１級アミンとの反応により形成される。また、チオウレア結合は、上記式（Ａ－２）、（Ａ－３）で示す化合物のイソチオシアネート基と、第１級アミンとの反応により形成される。

　本発明の放射性標識抗体において、キレート剤は、抗体１分子に対し、少なくとも1分子以上備えていればよいが、１分子以上８分子以下備えることが好ましい。ただし、抗体そのものの活性（抗原認識作用、中和作用、補体活性化作用及び／又はオプソニン作用）を維持する観点から、抗体のＦｃ領域（定常領域）に部位特異的にキレート剤が導入されることが好ましく、本発明において、キレート剤は、抗体１分子に対して1分子又は２分子備えていることがより好ましい。より好ましくは、キレート剤は、抗体１分子に対して１分子備えている。

　本発明の放射性標識抗体において、キレート剤は、リンカーを介して抗体と接続されていてもよい。リンカーとしては、置換又は無置換のアルキル基、置換又は無置換のヘテロアルキル基、ポリエチレングリコール（PEG）基、ペプチド、糖鎖、ジスルフィド基及びこれらの組み合わせなどが挙げられる。
　好ましくは、キレート剤は、リンカーを介して、抗体を部位特異的に、より好ましくはＦｃ領域に修飾している。この場合、リンカーは、下記式（ｉ）で表される、１３以上１７以下のアミノ酸残基からなるペプチド（以下、「抗体修飾ペプチド」ともいう。）を含み、かつ架橋剤で修飾された抗体修飾ペプチドと抗体との架橋反応によって形成されているものを用いることができる。なお、式（ｉ）において、アミノ酸配列の紙面左側がＮ末端側を示し、アミノ酸配列の紙面右側がＣ末端側を示すものとして説明する。キレート剤がリンカーとして抗体修飾ペプチドを介して抗体と接続される場合、キレート剤と抗体修飾ペプチドが連結する位置は特に限定しないが、例えば抗体修飾ペプチドのN末端又はC末端、好ましくはN末端に直接又は間接的に連結することができる。また、抗体修飾ペプチドのC末端はその安定性の向上等のためにアミド化等の修飾を受けていてもよい。

　(Xa)-Xaa₁-(Xb)-Xaa₂-(Xc)-Xaa₃-(Xd)・・・（ｉ）
　式（ｉ）中、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄは、それぞれ、連続するａ個のＸ、連続するｂ個のＸ、連続するｃ個のＸ、及び連続するｄ個のＸを表し、
Ｘは、側鎖にチオール基及びハロアセチル基のいずれも有しないアミノ酸残基であり、ａ、ｂ、ｃ及びｄはそれぞれ独立に１以上５以下の整数で、かつａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ≦１４を満たし
Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、それぞれ独立に、
側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、又は、
一方が、側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、他方が、側鎖にハロアセチル基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、Ｘａａ_１とＸａａ_３とが連結しており、
Ｘａａ_２は、リシン残基、アルギニン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸であり、架橋剤で修飾されている。

　上記式（ｉ）におけるＸに含まれ得るアミノ酸残基としては、例えば、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、プロリン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、チロシン、メチオニン等のアミノ酸に由来するものが挙げられ、Ｘは、同一の種類のアミノ酸からなるアミノ酸残基であってもよく、それぞれ異なる種類のアミノ酸からなるアミノ酸残基であってもよい。

　式（ｉ）中のａ、ｂ、ｃ及びｄは、上述した範囲の数であれば特に制限はないが、ペプチドと抗体との結合安定性の観点から、ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ≦１４を条件として、ａは好ましくは１以上３以下の整数、ｂは好ましくは１以上３以下の整数、ｃは好ましくは３以上５以下の整数、及びｄは好ましくは１以上３以下の整数である。

　Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であり、該アミノ酸はそれぞれ同一であってもよく、異なっていてもよい。側鎖にチオール基を有するアミノ酸としては、例えばシステイン、ホモシステインが挙げられる。このようなアミノ酸残基は、ジスルフィド結合によって結合しているか、又は以下の式（４）に示すリンカーを介して、スルフィド基が結合されていることが好ましい。式（４）中、波線部分はスルフィド基との結合部分を示す。

　Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、上述した組み合わせに代えて、Ｘａａ_１及びＸａａ_３のうち一方が側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であり、他方が側鎖にハロアセチル基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基であってもよい。これらは、チオエーテル結合を介して結合している。ハロアセチル基は、その末端がヨウ素等のハロゲンで置換されており、他方の側鎖におけるチオール基との反応によってハロゲンが脱離して、チオエーテル結合が形成される。

　式（ｉ）で表される抗体修飾ペプチドの具体的なアミノ酸配列は、例えば国際公開第２０１６／１８６２０６号、国際公開第２０１７／２１７３４７号及び国際公開第２０１８／２３０２５７号に記載のペプチドが挙げられ、これらを用いることもできる。

　これらのうち、抗体修飾ペプチドのアミノ酸配列として、以下の配列（１）～（１４）のいずれか一つを有していることが好ましく、以下の配列（１）、（２）、（１３）又は（１４）を有していることが更に好ましい。以下のアミノ酸配列（１）～（１４）において、（Ｘａａ_２）はリシン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸を示し、（Ｘａａ_１）及び（Ｘａａ_３）はともにホモシステイン残基を示す。また、以下のアミノ酸配列（１）～（１４）中、（Ｘａａ_１）、（Ｘａａ_２）及び（Ｘａａ_３）以外のアミノ酸は一文字略号にて表記する。

　（１）DCAYH(Xaa₂)GELVWCT　（配列番号１）
　（２）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH　（配列番号２）
　（３）RCAYH(Xaa₂)GELVWCS　（配列番号３）
　（４）GPRCAYH(Xaa₂)GELVWCSFH　（配列番号４）
　（５）SPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH　（配列番号５）
　（６）GDDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH　（配列番号６）
　（７）GPSCAYH(Xaa₂)GELVWCTFH　（配列番号７）
　（８）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCSFH　（配列番号８）
　（９）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTHH　（配列番号９）
　（１０）GPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFY　（配列番号１０）
　（１１）SPDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFY　（配列番号１１）
　（１２）SDDCAYH(Xaa₂)GELVWCTFY　（配列番号１２）
　（１３）RGNCAYH(Xaa₂)GQLVWCTYH　（配列番号１３）
　（１４）G(Xaa₁)DCAYH(Xaa₂)GELVWCT(Xaa₃)H　（配列番号１４）

（１－４）放射性標識抗体の製造方法
　本発明の放射性標識抗体の製造方法について説明する。
　本発明の放射性標識抗体において、本発明の放射性核種と抗体との複合体は、例えば、抗体のチロシン残基に放射性核種として放射性ヨウ素（^１２３Ｉ、^１３１Ｉ）を導入して調製する方法があり得る。また、本発明の抗体に放射性ハロゲン核種が安定に結合する置換基を導入し、放射性ハロゲンイオンと反応させ調製する方法があり得る。
　本発明の放射性標識抗体は、キレート剤と抗体とをコンジュゲーションするコンジュゲーション工程と、放射性核種とキレート剤との錯体を形成する錯体形成工程（放射性核種がキレートしたキレート剤の製造工程）との２つの工程から製造することができる。コンジュゲーション工程は、錯体形成工程の前であってもよいし錯体形成工程の後であってもよい。

　コンジュゲーション工程においては、種々の抗体の化学修飾法が用いられる。具体的には、(ａ)～（ｆ）の方法が挙げられる。
（ａ）アミンカップリング法（N-ヒドロキシスクシミジル(NHS)基で活性化されたカルボキシル基をもつキレート剤またはキレートを用いて抗体のリシン残基のアミノ基を修飾する方法）
（ｂ）抗体のヒンジ部位にあるポリペプチド鎖間のジスルフィド結合（SS結合）を部分的に還元することによって生じるスルフヒドリル(SH)基に対して、SH基に反応性を有するマレイミド基を持つキレート剤またはリンカーで修飾する方法
（ｃ）遺伝子工学によるアミノ酸変異によって、抗体に新たに導入されたシステインに対してマレイミド基をもつキレート剤またはリンカーを修飾する方法
（ｄ）遺伝子工学によるアミノ酸変異によって、抗体に新たに導入されたアジド化リシンのアジド基に、クリック反応を利用して、アルキン（例えばDibenzocyclooctyne: DBCO）をもつキレート剤またはリンカーを修飾する方法
（ｅ）トランスグルタミナーゼを利用して、抗体の特定の位置に導入されたグルタミンに、リシンの側鎖を有するキレート剤またはリンカーを修飾する方法
（ｆ）前述した（ｉ）で示す抗体修飾ペプチドを有するキレート剤またはリンカーを、抗体のＦｃ領域を部位特異的に修飾する方法

　錯体形成工程では、キレート剤に放射性核種をキレート（錯体形成）させる。ここで使用する放射性核種は、錯体形成効率を高める観点から、電離可能な態様で用いることが好ましく、イオンの態様で用いることが更に好ましい。錯体形成工程は、放射性核種との錯体形成が可能であれば、キレート剤への放射性核種の添加順序は問わない。例えば、水を主体とする溶媒に、放射性核種イオンが溶解した溶液を放射性核種として用いることができる。
　錯体形成後、ろ過フィルター、メンブランフィルター、種々の充填剤を充填したカラム、クロマトグラフィー等を用いて、得られた錯体を精製してもよい。

　本発明の放射性標識抗体の製造方法は、錯体形成工程の後にコンジュゲーション工程が実行されることが好ましい。
　より好ましい態様において、錯体形成工程（Ａ）では、放射性核種とクリック反応可能な第１の原子団を抗体と複合化を可能とするための置換基として有するキレート剤との間で錯体を形成する。次いで、コンジュゲーション工程（Ｂ）では、前述した（i）で示す抗体修飾ペプチドと、クリック反応可能な第２の原子団とを有する抗体修飾リンカーを用いて、Ｆｃ領域を部位特異的に修飾されたペプチド修飾抗体と、工程（Ａ）で得られた錯体形成されたキレート剤との間でクリック反応を実行し、本発明のキレート複合体を得る。
　以下工程（Ａ）及び（Ｂ）について、詳述する。

　クリック反応可能な第１原子団と第２原子団の組み合わせとしては、クリック反応の種類に応じて適切なものが選択され、例えば、アルキンとアジドとの組み合わせ、１，２，４，５－テトラジンとアルケンとの組み合わせ等が挙げられる。これらの原子団は、第１原子団が上記原子団の組み合わせのうち一つを有し、第２原子団が上記原子団の組み合わせのうち第１原子団と異なる一つとなる原子団を有していればよい。キレート剤及び抗体の安定性と、これらの結合効率の向上とを両立する観点から、キレートリンカーがアルキンであり且つ抗体修飾リンカーがアジドであるか、又はキレートリンカーが１，２，４，５－テトラジンであり且つ抗体修飾リンカーがアルケンであることが好ましい。このような原子団の組み合わせによるクリック反応の具体例として、ヒュスゲン環化付加反応、あるいは逆電子要請型ディールスアルダー反応等が挙げられる。

　クリック反応可能な原子団の組み合わせの具体例としては、以下の式に示すように、第１原子団のアルキンとしてジベンゾシクロオクチン（ＤＢＣＯ）を含む原子団（式（１ａ））と、第２原子団のアジドとしてアジド基を含む原子団（式（２ａ））との組み合わせ、あるいは、第１原子団が１，２，４，５－テトラジンを含む原子団（式（１ｂ））と、第２原子団のアルケンとしてｔｒａｎｓ－シクロオクテン（ＴＣＯ）を含む原子団（式（２ｂ））との組み合わせが挙げられる。好ましくは式（１ａ）と式（２ａ）との組合せである。

（式中、Ｒ_１は、キレート剤との連結部位を示し、Ｒ_２は、抗体における抗体修飾ペプチドとの連結部位を示す。）

（式中、Ｒ_３及びＲ_４のうち一方がキレート剤又は抗体における抗体修飾ペプチドのいずれか一方との連結部位を示し、他方が水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示し、Ｒ_５は、Ｒ_３又はＲ_４に応じてキレート剤又は抗体における抗体修飾ペプチドのいずれか一方との連結部位を示す。）

　第1原子団のアルキンとして、上記式（１ａ）で表されるジベンジルシクロオクチン（ＤＢＣＯ）を含む原子団を用いる場合は、市販されている種々のＤＢＣＯ試薬が挙げられる。具体的には、例えば、DBCO-C6-Acid、Dibenzocyclooctyne-Amine、Dibenzocyclooctyne Maleimide、DBCO-PEG acid、DBCO-PEG-NHS ester、DBCO-PEG-Alcohol、DBCO-PEG-amine、DBCO-PEG-NH-Boc、Carboxyrhodamine-PEG-DBCO、Sulforhodamine-PEG-DBCO、TAMRA-PEG-DBCO、DBCO-PEG-Biotin、DBCO-PEG-DBCO、DBCO-PEG-Maleimide、TCO-PEG-DBCO、DBCO-mPEGなどが選択できるが、好ましくはDibenzocyclooctyne Maleimideを用いる。

　工程（Ａ）では、より好ましくは、以下の式（ｉｉ）で表される構造を有するキレート剤を用いる。
　Ａ－Ｂ－Ｃ　・・・（ｉｉ）
　式（ｉｉ）中、Ａは、以下の式（ｉｉａ）で表されるキレート部である。

　式（ｉｉａ）中、Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、独立して、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｐＣ_５Ｈ_４Ｎ、－（ＣＨ_２）_ｐＰＯ_３Ｈ_２、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＮＨ_２若しくは、－（ＣＨＣＯＯＨ）（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨからなる基であり、ｐは０以上３以下の整数であり、Ｒｄ又はＲｅのいずれか一方が、Ｂとの結合部位（＊）であり、他方が水素原子であるか、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｐＣ_５Ｈ_４Ｎ、－（ＣＨ_２）ｐＰＯ_３Ｈ_２、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＮＨ_２若しくは、－（ＣＨＣＯＯＨ）（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨからなる基であり、ｐは０以上３以下の整数である。
　式（ｉｉ）中、Ｂは以下の式（ｉｉｂ）で表される。

　式（ｉｉｂ）中、Ｌａ及びＬｂは、独立して、少なくともアミド結合又はチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｔは０以上３０以下の整数であり、ｓは０又は１であり、＊はＡとの結合部位であり、＊＊はＣとの結合部位である。
　式（ｉｉ）中、Ｃは、以下の式（ｉｉｃ）で表されるアルキン誘導体又は式（ｉｉｄ）で表されるテトラジン誘導体のいずれかである。

（式（ｉｉｃ）中、ＸはＣＨＲｋ－＊＊又はＮ－＊＊であり、ＹはＣＨＲｋ又はＣ＝Ｏであり、Ｒｋは独立して水素原子であるか、炭素数１以上５以下のアルキル基であって、ＸがＣＨＲｋ－＊＊で、ＹがＣＨＲｋである場合は、Ｒｋ部分が一緒になってシクロアルキル基を形成してもよく、Ｒｆ、Ｒｇ、Ｒｈ及びＲｉは、独立して、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１以上５以下のアルキル基であり、ＲｆとＲｇが一緒になって、若しくはＲｈとＲｉが一緒になって炭化水素環を形成してもよく、＊＊はＢとの結合部位を示し、式（ｉｉｄ）中、＊＊はＢとの結合部位を示し、Ｒｊは水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示す。）

　工程（Ａ）で使用されるキレート剤として、上記式（ｉｉａ）中、Ｒａ乃至Ｒｄが、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨであり、ｐが１であり、ＲｅがＢとの結合部位であるＤＯＴＡ誘導体；又はＲａ乃至Ｒｃが、－（ＣＨ_２）_ｐＣＯＯＨであり、ｐが１であり、ＲｄがＢとの結合部位であり、Ｒｅが水素原子であるＤＯ３Ａ誘導体若しくはＤＯＴＡ－ＧＡ誘導体のいずれかがより好ましい。

　式(ｉｉ)中、Ａが上記ＤＯＴＡ誘導体である場合、Ｂは、Ｌａがチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｓが０又は１であり、ｓが1である場合は、ｔが０以上３０以下の整数であり、Ｌｂがアミド結合若しくはチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、Ｃは、式（ｉｉｃ）で表されるアルキン誘導体であり、式（ｉｉｃ）中、ＸがＮ―＊＊であり、ＹがＣＨＲｋであり、Ｒｋが水素原子であり、ＲｆとＲｇが一緒になってベンゼン環を形成しており、ＲｈとＲｉが一緒になってベンゼン環を形成しており、＊＊はＢとの結合部位である、ＤＯＴＡ－ＰＥＧｔ－ＤＢＣＯ誘導体；又はＢは、Ｌａがチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｓが０又は１であり、ｓが1である場合は、ｔが０以上３０以下の整数であり、Ｌｂがアミド結合若しくはチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、Ｃは、式（ｉｉｄ）で表されるテトラジン誘導体である、ＤＯＴＡ－ＰＥＧｔ－Ｔｚ誘導体が更により好ましい。

　式(ｉｉ)中、Ａが上記ＤＯ３Ａ誘導体である場合、Ｂは、Ｌａがアミド結合若しくはチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｓが０又は１であり、ｓが１である場合は、ｔが０以上３０以下の整数であり、Ｌｂがアミド結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、Ｃは、式（ｉｉｃ）で表されるアルキン誘導体であり、式（ｉｉｃ）中、ＸがＮ―＊＊であり、ＹがＣＨＲｋであり、Ｒｋが水素原子であり、ＲｆとＲｇが一緒になってベンゼン環を形成しており、ＲｈとＲｉが一緒になってベンゼン環を形成しており、＊＊はＢとの結合部位である、ＤＯ３Ａ－ＰＥＧｔ－ＤＢＣＯ誘導体が更により好ましい。

　式(ｉｉ)中、Ａが上記ＤＯＴＡ－ＧＡ誘導体である場合、Ｂは、Ｌａがアミド結合若しくはチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、ｓが０又は１であり、ｓが１である場合は、ｔが０以上３０以下の整数であり、Ｌｂがアミド結合を含む若しくはチオウレア結合を含む炭素数１以上５０以下の結合リンカーであり、Ｃは、式（ｉｉｃ）で表されるアルキン誘導体であり、式（ｉｉｃ）中、ＸがＮ－＊＊であり、ＹがＣＨＲｋであり、Ｒｋが水素原子であり、ＲｆとＲｇが一緒になってベンゼン環を形成しており、ＲｈとＲｉが一緒になってベンゼン環を形成しており、＊＊はＢとの結合部位である、ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＰＥＧｔ－ＤＢＣＯ誘導体が更により好ましい。

　キレート剤と放射性核種とのモル比率は、キレート部／放射性核種として、下限が、１０／１以上が好ましく、１００／１以上がより好ましく、５００／１以上がさらに好ましく、上限が、１００００／１以下が好ましく、８０００／１以下がより好ましく、７０００／１以下がさらに好ましく、例えば、１００／１以上７０００／１以下の範囲が好ましく、より好ましくは５００／１以上７０００／１以下の範囲である。

　錯体形成反応は、溶媒下に行うことが好ましい。溶媒としては、例えば水、生理食塩水、又は酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液（Ｔｒｉｓ緩衝液）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液（ＨＥＰＥＳ緩衝液）、若しくはテトラメチルアンモニウム酢酸緩衝液等の緩衝液等を用いることができる。

　溶媒の液量は特に限定されないが、製造工程における実用性の観点から、工程（Ａ）の開始時において、下限は、０．０１ｍＬ以上、好ましくは０．１ｍＬ以上、より好ましくは１．０ｍＬ以上、さらに好ましくは１０ｍＬ以上、よりさらに好ましくは１００ｍＬ以上であり、上限は、好ましくは１０００ｍＬ以下、より好ましくは１００ｍＬ以下、さらに好ましくは１０ｍＬ以下、よりさらに好ましくは１．０ｍＬ以下であり、例えば、０．０１ｍＬ以上１００ｍＬ以下の範囲である。

　錯体形成反応の反応液中のキレート剤の濃度は、目的とするキレート剤の収率の観点から、それぞれ独立して、工程（Ａ）の開始時において、下限は、好ましくは０．００１μｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは０．０１μｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．１μｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは１μｍｏｌ／Ｌ以上であり、上限は、好ましくは１０００μｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは１００μｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以下であり、例えば、１μｍｏｌ／Ｌ以上１００μｍｏｌ／Ｌ以下の範囲が挙げられる。

　錯体形成反応の温度としては、例えば室温（２５℃）であってもよく、加熱条件下であってもよいが、キレート剤の分解抑制と錯体の形成効率向上とを両立する観点から、下限は、好ましくは２０℃以上、より好ましくは３０℃以上、さらに好ましくは３５℃以上、よりさらに好ましくは３７℃以上、特に好ましくは４５℃以上であり、上限は、好ましくは１５０℃以下、より好ましくは１２０℃以下、さらに好ましくは１００℃以下、よりさらに好ましくは９０℃以下であり、例えば、３０℃以上１００℃以下の範囲が好ましく、より好ましくは３５℃以上９０℃以下の範囲である。

　反応時間は、上述の反応温度であることを条件として、下限は、好ましくは５分以上、より好ましくは１０分以上、さらに好ましくは２０分以上、よりさらに好ましくは３０分以上、特に好ましくは４５分以上であり、上限は、好ましくは１８０分以下、より好ましくは１５０分以下、さらに好ましくは１２０分以下、よりさらに好ましくは９０分以下、特に好ましくは６０分以下であり、例えば、１０分以上１５０分以下の範囲が好ましく、より好ましくは１０分以上６０分以下の範囲である。

　工程（Ｂ）で使用される抗体は、前述した（ｉ）で示す抗体修飾ペプチドと、クリック反応可能な第２の原子団とを有する抗体修飾リンカーを用いて、上記「（１－２）抗体」の項で詳述したヒト化抗体のＦｃ領域（定常領域）が部位特異的に修飾されたペプチド修飾抗体である。

　抗体修飾ペプチドは、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸を問わないアミノ酸を組み合わせて用いて、例えば液相合成法、固相合成法、自動ペプチド合成法、遺伝子組み換え法及びファージディスプレイ法等のペプチド合成法に供することよって製造することができる。ペプチドの合成にあたり、必要に応じて、用いられるアミノ酸の官能基の保護を行ってもよい。これらは、例えば、国際公開第２０１７／２１７３４７号及び国際公開第２０１８／２３０２５７号に記載の方法に準じて行うことができる。

　抗体修飾リンカーは、抗体修飾ペプチドと、以下の式（Ｓ１）で表されるリンカーとが結合したものであってもよい。
　　＊－（（Ｌ_１）_ｍ－Ｚ）_ｋ－Ｌ_２－ＡＧ_２　・・・（Ｓ１）
（式中、＊は、ペプチドのＮ末端又はＣ末端との結合部位を示し、
　Ｌ_１は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカー部であり、
　ｍは、１以上５０以下の整数であり、
　Ｚは、（Ｌ_１）_ｍとＬ_２とを結合する第２リンカー部であり、
　ｋは、０又は１であり、
　Ｌ_２は、第２のＰＥＧリンカー部であり、
　ＡＧ_２は第２原子団である。）

　前記式（Ｓ１）において、Ｚの構造は、（Ｌ_１）_ｍとＬ_２とを互いに結合するリンカー構造であれば特に限定されないが、例えば１以上５以下のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むことができる。この場合、Ｚに含まれるアミノ酸配列は、システイン残基を含むことが好ましく、システイン残基のチオール基とマレイミド基との結合により形成されたチオエーテル基を介してＬ_２と結合していることがより好ましい。

　本発明において、Ｌ_２を構成するＰＥＧリンカー部は、以下の式（Ｐ２）に示す構造を有していることが好ましい。式（Ｐ２）中、ｎは整数であり、好ましくは１以上５０以下、より好ましくは１以上２０以下、さらに好ましくは２以上１０以下、一層好ましくは２以上６以下である。

　ＰＥＧリンカー部の構造の一端は、市販されているＰＥＧ化試薬に由来する構造又はＰＥＧ化する際に通常用いられる試薬に由来する構造によって修飾されていてもよく、特に限定されないが、例えばジグリコール酸又はその誘導体、マレイミド又はその誘導体に由来する構造が例示される。

　抗体修飾リンカーへの前記第２原子団への導入方法は、上述の方法によって所望のアミノ酸配列を有する抗体修飾ペプチドを得た後、該ペプチドを、溶解補助剤及び還元剤、並びに必要に応じて酸を加えた溶液に溶解し、該溶液に第２原子団として、アジド基又はｔｒａｎｓ－シクロオクテン（ＴＣＯ）を含む原子団の有機溶媒溶液を添加し、室温で攪拌することにより導入する方法が挙げられる。

　第２原子団としてアジド基を含む原子団を導入する場合には、市販のアジド基導入試薬を用いて、常法に従い、ペプチドのＮ末端又はＣ末端に直接アジド基を導入するか、又は上述したリンカー構造を介してアジド基を含む原子団を導入することができる。用いられるアジド基導入試薬としては例えば、シリルアジド、リン酸アジド、アルキルアンモニウムアジド、無機アジド、スルホニルアジド、又はＰＥＧアジド等が挙げられる。

　また、第２原子団としてＴＣＯを含む原子団を導入する場合には、ＴＣＯを含む市販のクリックケミストリー用試薬を用いて、常法に従い、ペプチドのＮ末端又はＣ末端に直接ＴＣＯを導入するか、又は上述したリンカー構造を介してＴＣＯを含む原子団を導入することができる。

　抗体修飾ペプチドと抗体とを結合させて、ペプチド修飾抗体を得る方法は、例えば架橋剤を用いて行うことができる。架橋剤とは、抗体修飾ペプチドと、抗体とを共有結合により連結させるための化学物質であり、その例として、ジスクシンイミジルグルタレート（ＤＳＧ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）等のスクシンイミジル基を好ましくは２以上含む架橋剤、アジプイミド酸ジメチル等のイミド酸部分を好ましくは２以上含む化合物又はその塩からなる架橋剤、並びに３，３’－ジチオビスプロピオンイミド酸ジメチル、ジチオビススクシンイミジルプロピオン酸等のジスルフィド結合を有する化合物又はその塩からなるもの等が挙げられる。このような架橋剤を用いることによって、抗体修飾ペプチドにおけるXaa₂のアミノ酸残基と、抗体との間で架橋反応を起こすことができる。抗体における架橋反応は、例えば抗体として本発明のヒト化抗体を用いた場合、Xaa₂のアミノ酸残基と、本発明のヒト化抗体におけるＥｕナンバリングに従うＬｙｓ２５２残基との間に部位特異的に生じる。これらのＬｙｓ残基は、本発明のヒト化抗体におけるＦｃ領域に存在する。

　抗体修飾ペプチドと抗体との結合方法は、例えば、上述した抗体修飾ペプチドと、抗体と、架橋剤と、必要に応じて触媒とを、適切な緩衝液中に１０℃以上３０℃以下の環境下で分散させて行うことができる。反応時間は１０分以上２時間程度以下とすることができる。ペプチドと抗体との反応時におけるモル比率は、抗体／ペプチドとして、下限は、好ましくは１／５以上、より好ましくは１／３以上、さらに好ましくは１／１．５以上であり、上限は、好ましくは２０／１以下、より好ましくは１０／１以下、さらに好ましくは５／１以下、よりさらに好ましくは１／１以下、特に好ましくは１／１．７以下であり、例えば１／５以上２０／１以下の範囲が好ましく、より好ましくは１／１．５以上１／１．７以下である。

　以上の工程を経て得られるペプチド修飾抗体は、抗体１分子に対して抗体修飾ペプチド1分子が結合した抗体（以下、「一価抗体」という）と、抗体1分子に対して抗体修飾ペプチド２分子が結合した抗体（以下、「二価抗体」という）とを任意の割合で含有する混合物であるが、これをそのままで以後の工程に供してもよく、ろ過フィルター、メンブランフィルター、種々の充填剤を充填したカラム、各種クロマトグラフィー等の方法で、未修飾抗体と、一価抗体と、二価抗体とを分離精製したあとでいずれかの価数の抗体のみを以後の工程に供してもよい。精製の結果、未修飾抗体と他の価数の抗体との分離ができない場合には、これらを含有する混合物として以降の工程に供してもよい。
　未修飾抗体と、一価抗体と、二価抗体とを分離精製する場合は、上記のいずれの精製方法で分離精製してもよいが、種々の充填剤を充填したカラムを用いることが好ましく、抗体等のタンパク質の分離精製に適した充填剤を充填したカラムを用いることがより好ましい。

　抗体等のタンパク質の分離精製に適した充填剤の担体の形状としては、ゲル（例えばカラム用ゲル）、粒子、ビーズ、ナノ粒子、微粒子及びマクロビーズなどの形状が挙げられ、担体の材質としては、磁性物質、ラテックス、アガロース、ガラス、セルロース、セファロース、ニトロセルロース、ポリスチレン、その他の高分子材料が挙げられる。具体的には上述の抗体修飾ペプチドを、カラム用ゲルに結合させたＩｇＧ－ＢＰカラムが例示できる（国際公開第２０２１／０８０００８号参照）。

　ＩｇＧ－ＢＰカラムは、ＩｇＧ結合ペプチドを固相化したカラムである。二価抗体は、結合部位がすでにＩｇＧ結合ペプチドで占有されているために当該カラムには結合し得ず、一価抗体のみが当該カラムに対して親和性を示す。このＩｇＧ－ＢＰカラムを用いて、抗体修飾ペプチドに対するそれぞれの相互作用の違いを利用して、未修飾抗体および一価抗体を相対的に多く含む第一の抗体組成物と、二価抗体を相対的に多く含む第二の抗体組成物とをそれぞれ分離精製することができる。ある好ましい態様では、第一の抗体組成物において、未修飾抗体と一価抗体とのモル比が４～４７：５３～９６、好ましくは４～３０：７０～９６、より好ましくは４～２０：８０～９６、さらに好ましくは、４～１０：９０～９６である。

　このようにして、分離精製した第一の抗体組成物又は第二の抗体組成物は、そのまま以降の工程（Ｂ）におけるクリック反応に用いてもよく、含有するペプチド修飾抗体のタンパク質濃度を調節してから工程（Ｂ）におけるクリック反応に用いてもよい。

　工程（Ｂ）におけるクリック反応に用いるペプチド修飾抗体を分離精製する場合を例に、以下説明する。
　ペプチド修飾抗体は、抗体修飾ペプチドを備えるリンカー（抗体修飾リンカー）によって抗体のＦｃ領域を部位特異的に修飾して修飾抗体を得る抗体修飾工程と、上述のイムノグロブリン結合性タンパク質が固定化された担体を用いて修飾抗体を精製する抗体精製工程とを経て、工程（Ｂ）におけるクリック反応に供される。また、抗体精製工程は、担体に保持される修飾抗体を担体に保持させる保持工程と、担体に保持されない修飾抗体を洗浄する洗浄工程、保持工程で担体に保持された修飾抗体を溶出する溶出工程とを更に含む。
　より具体的には、抗体修飾工程において、抗体修飾リンカーが修飾されない未修飾抗体と、一価抗体と、二価抗体と、を含む混合物として修飾抗体を取得し、抗体精製工程において、未修飾抗体、一価抗体および二価抗体のイムノグロブリン結合性タンパク質に対するそれぞれの相互作用の違いを利用して、未修飾抗体および一価抗体を相対的に多く含む第一の抗体組成物と、二価抗体を相対的に多く含む第二の抗体組成物とをそれぞれ溶出する。すなわち、抗体精製工程のうち、保持工程および洗浄工程では、イムノグロブリン結合性タンパク質との相互作用の程度が低いペプチド修飾抗体（二価抗体）を相対的に多く含む第二の抗体組成物が溶出され、抗体精製工程のうち溶出工程では、イムノグロブリン結合性タンパク質との相互作用の程度が高いペプチド修飾抗体（未修飾抗体及び一価抗体）を相対的に多く含む第一の抗体組成物が溶出される。ここで、「未修飾抗体及び一価抗体を相対的に多く含む」とは、第一の抗体組成物に含まれる未修飾抗体及び一価抗体の合計量が、該抗体組成物に含まれる二価抗体よりも多いことを意味し、好ましくは該抗体組成物に含まれる未修飾抗体及び修飾抗体の全量（１００％）に対して、未修飾抗体及び一価抗体の合計量が５５％以上、６３％以上、７０％以上、８０％以上、又は９０％以上であることを意味し、「二価抗体を相対的に多く含む」とは、第二の抗体組成物に含まれる二価抗体の量が該抗体組成物に含まれる一価抗体より多いことを意味し、好ましくは該抗体組成物に含まれる未修飾抗体及び修飾抗体の全量（１００％）に対して、二価抗体の量が５５％以上、６３％以上、７０％以上、８０％以上、又は９０％以上であることを意味する。

　保持工程では、抗体修飾工程で得られた未修飾抗体、一価抗体および二価抗体の混合物を含有する溶液をカラムに添加して、担体に保持される未修飾抗体および一価抗体をカラムに保持させ、担体に保持されない二価抗体を通過させる。ここで、保持工程で通過した溶液は第二の抗体組成物の一部を構成する。未修飾抗体および一価抗体をカラムに保持しやすくするため、また、これらの凝集若しくは変性を防ぐために、ペプチド修飾抗体の混合溶液を適切な希釈溶媒で希釈してカラムに添加することが好ましい。希釈溶媒としては、ペプチド修飾抗体が溶解し、溶媒中で凝集又は変性しにくい溶媒であれば特に限定されず、水、生理食塩水、又は酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール（Ｔｒｉｓ）緩衝液、２－［４－（２－ヒドロキシエチル)－１－ピペラジニル]－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液等の緩衝液等を用いることができ、上述したいずれかの緩衝液を用いることが好ましく、酢酸ナトリウム緩衝液を用いることがより好ましい。希釈溶媒に緩衝液を用いる場合は、緩衝剤の濃度は、下限として１０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは２０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、上限として１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは５００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である。また、二価抗体や抗体修飾ペプチドのカラム担体への非特異的結合の低減の観点から、溶出溶媒は塩化ナトリウム、塩化カリウム等の添加剤を含有してもよい。溶出溶媒が含有する添加剤の濃度は特に限定されないが、例えば０．１５ｍｏｌ／Ｌを用いることができる。

　洗浄工程では、洗浄溶媒を用いてカラム内に残存している修飾抗体をカラムから溶出する。上述の保持工程でカラムを通過した溶液と、洗浄工程でカラムから溶出した溶液は、二価抗体を相対的に多く含むので、これらを合わせて第二の抗体組成物として用いることができる。
　洗浄溶媒としては、ペプチド修飾抗体が溶解し、溶媒中で凝集又は変性しにくく、適切なｐＨ緩衝能を持つ緩衝液であれば特に限定されず、酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール（Ｔｒｉｓ）緩衝液、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］－エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液等の緩衝液等を用いることができ、上述したいずれかの緩衝液を用いることが好ましく、酢酸ナトリウム緩衝液を用いることがより好ましい。洗浄溶媒に用いる緩衝剤の濃度は、下限として、２０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは３０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、上限としては２００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは７０ｍｍｏｌ／Ｌ以下である。また、洗浄溶媒のｐＨは、下限として４．０以上、好ましくは４．５以上、より好ましくは４．８以上、上限として７．４以下、好ましくは６．０以下、より好ましくは５．２以下である。さらに、二価抗体や抗体修飾ペプチドのカラム担体への非特異的結合の低減の観点から、溶出溶媒は塩化ナトリウム、塩化カリウム等の添加剤を含有してもよい。溶出溶媒が含有する添加剤の濃度は特に限定されないが、例えば０．１５ｍｏｌ／Ｌを用いることができる。

　溶出工程では、担体に保持された修飾抗体を溶出溶媒を用いてカラムから溶出する。すなわち未修飾抗体および一価抗体を相対的に多く含む第一の抗体組成物を溶出溶媒を用いてカラムから溶出する。
　溶出溶媒としては、酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝液等を用いることができる。また、抗体修飾リンカー、未修飾抗体及び修飾抗体のカラム担体への非特異的結合の低減の観点から、溶出溶媒は塩化ナトリウム、塩化カリウム等の添加剤を含有してもよい。溶出溶媒が含有する添加剤の濃度は特に限定されないが、例えば０．１５ｍｏｌ／Ｌを用いることができる。
　溶出溶媒が緩衝剤を含む場合は、緩衝剤の濃度は、下限として、２０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは３０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、上限としては２００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは７０ｍｍｏｌ／Ｌ以下である。また、溶出溶媒のｐＨは、未修飾抗体および一価抗体と、イムノグロブリン結合性タンパク質との相互作用を弱めるため、また、抗体の変性および凝集を防ぐ観点から、下限としてｐＨ３．０以上、上限としてｐＨ４．２以下が好ましい。

　抗体精製工程で取得した第一の抗体組成物又は第二の抗体組成物は、そのまま以降の工程（Ｂ）におけるクリック反応に用いてもよく、含有するペプチド修飾抗体のタンパク質濃度を調節してから工程（Ｂ）におけるクリック反応に用いてもよい。

　工程（Ｂ）におけるクリック反応は、キレート剤が有するクリック反応可能な第１原子団と、ペプチド修飾抗体が有するクリック反応可能な第２原子団との間で実行されるものである。かかるクリック反応によりキレート剤と抗体とを連結する結合基（抗体との複合化を可能とする置換基）が形成される。

　ペプチド修飾抗体と工程（Ａ）で得られた錯体とがクリック反応可能であれば、これらの添加順序は問わず、例えば、溶媒を収容した反応容器に、該錯体及び該ペプチド修飾抗体の一方を添加し、次いで他方を添加して反応させてもよく、該キレート剤及び該抗体の一方を溶媒に分散した分散液に他方を添加して反応させてもよい。あるいは、溶媒を収容した反応容器に、これらを同時に添加して反応させてもよい。

　工程（Ｂ）のクリック反応に用いられる溶媒としては、水を含む溶媒を用いることができ、例えば、水、生理食塩水、又は酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、Ｔｒｉｓ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、若しくはテトラメチルアンモニウム酢酸緩衝液等の緩衝液等を用いることができる。緩衝液を用いる場合、錯体及び抗体の安定性と、これらの結合効率とを両立する観点から、２５℃におけるｐＨを好ましくは４．０以上１０．０以下、更に好ましくは５．５以上８．５以下とする。

　反応液量は、特に限定されないが、製造工程における実用性の観点から、工程（Ｂ）の開始時において、下限は、０．００１ｍＬ以上が好ましく、０．０１ｍＬ以上がより好ましく、０．１ｍＬ以上がさらに好ましく、１ｍＬ以上がよりさらに好ましく、上限は、１０００ｍＬ以下が好ましく、１００ｍＬ以下がより好ましく、１０ｍＬ以下がさらに好ましく、１ｍＬ以下がよりさらに好ましく、例えば０．００１ｍＬ以上１０００ｍＬ以下の範囲が好ましく、０．１ｍＬ以上１０ｍＬ以下の範囲がより好ましい。

　また、キレート剤及び抗体の反応液中の濃度は、それぞれ独立して、工程（Ｂ）の開始時において、下限として、０．００１μｍｏｌ／Ｌ以上が好ましく、０．０１μｍｏｌ／Ｌ以上がより好ましく、０．１μｍｏｌ／Ｌ以上がさらに好ましく、１．０μｍｏｌ／Ｌ以上がよりさらに好ましく、上限として、１０００μｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、１００μｍｏｌ／Ｌ以下がより好ましく、例えば、０．１μｍｏｌ／Ｌ以上１０００μｍｏｌ／Ｌ以下の範囲が好ましく、１μｍｏｌ／Ｌ以上１００μｍｏｌ／Ｌ以下の範囲であることが、目的とするキレート複合体の収量の観点からより好ましい。

　抗体の意図しない変性を防ぎつつ、反応効率を高める観点から、工程（Ｂ）におけるクリック反応は、反応温度の上限は、５０℃以下が好ましく、４０℃以下がより好ましい。また、反応温度の下限は、反応が進行する温度であれば特に制限はないが、１５℃以上が好ましい。クリック反応の反応時間は、上述の反応温度であることを条件として、好ましくは５分以上、より好ましくは１０分以上であり、２４時間以下が好ましく、より好ましくは２０時間以下であり、例えば、５分以上２４時間以下の範囲が好ましく、より好ましくは１０分以上２０時間以下の範囲である。

　工程（Ａ）及び（Ｂ）によって製造される放射性標識抗体は、抗原に特異的に結合する抗体の特定の部位（例えば抗体のＦｃ領域のリシン残基）がキレート剤により特異的に修飾されたものである。この放射性標識抗体は、該抗体１分子に対し、前記キレート剤を１分子又は２分子備える。キレート剤は、リンカーを介して、抗体のＦｃ領域を部位特異的に修飾している。該リンカーは、キレート剤に接続するキレートリンカー、該リンカーに接続する第１原子団、第１原子団とクリック反応し得る第２原子団、第２原子団に接続する抗体修飾リンカー（上記式（ｉ）で表される抗体修飾ペプチドを含む）で構成される。従って、該リンカーは、第１原子団と第２原子団とに由来する化学構造を有する。このような化学構造としては、下記式（１０ａ）又は（１０ｂ）で表されるトリアゾール骨格含有構造又は下記式（１０ｃ）で表されるピリダジン骨格含有構造が考えられる。式（１０ａ）と式（１０ｂ）は異性体の関係にあるため任意の割合で含まれていてもよい。

　式（１０ａ）及び式（１０ｂ）中、Ｒ_１Ａはキレートリンカーとの結合部位を示し、Ｒ_２Ａは抗体修飾リンカーとの結合部位を示す。式（１０ｃ）中、Ｒ_３Ａ及びＲ_４Ａのうち一方は水素原子、メチル基、フェニル基又はピリジル基を示し、他方はキレートリンカーとの結合部位を示し、Ｒ_５Ａは抗体修飾リンカーとの結合部位を示す。

　かくして放射性標識抗体の粗生成物の溶液が得られる。

工程２：工程１で得られた粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて放射性標識抗体を陽イオン交換材料に吸着させる工程
（２－１）陽イオン交換材料
　「陽イオン交換材料」とは、負に荷電している固相であって、固相上又は固相中を通過する溶液中の陽イオンと交換される遊離の陽イオンを有する固相を意味する。荷電は、固相に一又は複数の荷電リガンドを例えば共有結合により付着させることにより得られうる。荷電は、固相に固有の性質であってもよい(例、シリカ)。いくつかの実施態様において、陽イオン交換材料は、膜、モノリス、又は樹脂であってもよい。本発明において、好ましい陽イオン交換材料は、樹脂担体に荷電基を備えるものである。荷電基としては、カルボキシル基、スルホ基又はリン酸基であるが、例えば、スルホナート基、カルボキシメチル基、スルホイソブチル基、スルホエチル基、カルボキシル基、スルホプロピル基、スルホニル基、スルホキシエチル基、ベンゼンスルホン酸基又はオルトホスファート基を含んでもよく、スルホプロピル基又はカルボキシメチル基がより好ましい。樹脂担体としては、例えば、カルボキシメチルセルロース又はアガロースが挙げられる。上記のいくつかの実施態様において、陽イオン交換材料は、陽イオン交換クロマトグラフィー材料であり、特に該材料がカラムに充填されてなる陽イオン交換クロマトグラフィーカラムの態様で提供され得る。商業的に入手可能な陽イオン交換材料には、カルボキシメチルセルロース、ＢＡＫＥＲＢＯＮＤ　ＡＢＸ^ＴＭ、アガロースに固定されたスルホプロピル（ＳＰ）（例えば、ＧＥ　ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＳＰ－ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ^ＴＭ、ＳＰ－ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ　ＸＬ^ＴＭ、又はＳＰ－ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ　ＨＩＧＨ　ＰＥＲＦＯＲＭＡＮＣＥ^ＴＭやＣｙｔｉｖａのＨｉＴｒａｐ　ＳＰ　ＦＦ^ＴＭ等）、ＣＡＰＴＯ　Ｓ^ＴＭ（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、ＦＲＡＣＴＯＧＥＬ－ＳＯ３^ＴＭ、ＦＲＡＣＴＯＧＥＬ－ＳＥ　ＨＩＣＡＰ^ＴＭ、及びＦＲＡＣＴＯＰＲＥＰ^ＴＭ（ＥＭＤ　Ｍｅｒｃｋ）、アガロースに固定されたスルホニル（例えば、ＧＥ　ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＳ－ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ　ＦＡＳＴ　ＦＬＯＷ^ＴＭ）、及びＳＵＰＥＲ　ＳＰ^ＴＭ（Ｔｏｓｏｈ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が含まれる。
　陽イオン交換材料は後述の「放射性標識抗体と陽イオン交換材料との接触」の前に洗浄することができ、また、洗浄することが好ましい（いわゆる平衡化）。平衡化液は、放射性標識抗体の粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させる前に、陽イオン交換材料を平衡にするために使用される液である。平衡化液としては、工程３で用いる「溶離液」と同じ組成の溶液を用いることが好ましく、「（２－３）洗浄工程」で後述する洗浄液と同じ組成の液、および、工程３で用いる「溶離液」と同じ組成の溶液の２種を用いることがより好ましい。平衡化液のｐＨは４以上８以下の範囲にあり、好ましくは５以上６以下である。
　また、上記陽イオン交換材料の使用量は抗体１ｍｇあたり０．０１ｍＬ以上であることが好ましく、１ｍＬ以下が好ましい。

（２－２）放射性標識抗体と陽イオン交換材料との接触
　工程２では、工程１で得られた放射性標識抗体の粗生成物の溶液を陽イオン交換材料（上述）と接触させて該放射性標記抗体を該陽イオン交換材料に吸着させる。ここで「接触」または「接触させる」とは、該放射性標識抗体と陽イオン交換材料の荷電基または荷電基群との間のイオン相互作用により、陽イオン交換材料内または材料上に、該放射性標識抗体が可逆的に固定化（即ち吸着）されるように、適切な条件下で、該放射標識抗体を陽イオン交換材料に暴露することを意味する。例えば、陽イオン交換材料がカラムに充填されてなる陽イオン交換クロマトグラフィーカラムの態様である場合、該接触は、放射性標識抗体の粗生成物の溶液を陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに通液することを意味する。
　放射性標識抗体の粗生成物の溶液は、放射性標識抗体が陽イオン交換材料に吸着させることができるように調製されていれば特に限定されない。例えば、放射性標識抗体の粗生成物の溶液のｐＨは、放射性標識抗体の等電点より低くすることができる。また、後述する「正電荷を有する添加剤」（一例として、アルギニン）を放射性標識抗体の粗生成物の溶液に含ませてもよい。この場合、好ましくは、放射性標識抗体の粗生成物の溶液中に含まれる正電荷を有する添加剤（一例として、アルギニン）の濃度を３０ｍｍｏｌ／Ｌ以下とすることができる。
　かくして、放射性標識抗体が陽イオン交換材料に吸着される。
　本発明の一実施態様において、工程２実施後、後述の工程３実施前に、放射性標識抗体が吸着した陽イオン交換材料を洗浄液で洗浄することが好ましい（以下、「洗浄工程」とも称する）。

（２－３）洗浄工程
　本工程で使用する洗浄液は、所望の放射性標識抗体を実質的に溶出させることなく、陽イオン交換材料から１または２以上の夾雑物質を除去する為に用いられる。夾雑物質は、所望される放射標識抗体とは異なる物質であり、例えば放射性標識抗体の粗生成物の溶液中に存在している未反応の放射性核種や抗体、キレート剤等が挙げられる。
　洗浄液は、好ましくは、１種類以上のｐＨ調節剤を含み、該ｐＨ調節剤としては、特に限定されるものではないが、ヒスチジン、２－モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２－［ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１,３－ジオール（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン－１,４－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、３－モルホリノプロパン－１－スルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）および２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）からなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤である。後述の工程３で用いる通常、放射性標識抗体と陽イオン交換材料との接触の際に用いた溶液のｐＨと比較して高いｐＨを有する。洗浄液のｐＨは、４以上が好ましく、より好ましくは５以上であり、７以下が好ましく、６．５以下がより好ましい。
　洗浄工程は１回実施されてもよいし、所望により２～５回実施することもできる。好ましくは、洗浄工程１回あたり陽イオン交換材料容量の３倍以上の液量を用いる。

工程３：１種以上の添加剤を含む溶離液を用いて工程２で陽イオン交換材料に吸着した放射性標識抗体を溶出する工程
（３－１）溶離液
　本発明において「溶離液」とは、放射性標識抗体が吸着した陽イオン交換材料から該抗体を溶出させるために使用される溶液を意味する。ここで、溶離液は、放射性標識抗体が陽イオン交換材料から溶出されるように設定される。溶離液には、本発明の製造方法の最終生成物である放射性医薬組成物の組成に含まれる添加剤（以下、「第１の添加剤」とも称する、添加剤（Ａ）に相当）が添加される。第１の添加剤は、医薬品添加剤であり、かつ、陽イオン交換材料から放射性標識抗体を溶離させるものであれば限定されないが、放射化学的収率を高める観点から、正電荷を有する添加剤（添加剤（ａ１）に相当）とｐＨ調節剤とを含むことが好ましい。
　「正電荷を有する添加剤」とは、水と接触したときに正電荷を帯びる化合物からなるか、またはそれを含む物質を意図している。水と接触したときに正電荷を帯びる化合物は、通常分子内にカチオン性基を有しており、かかるカチオン性基としては、例えば、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基等のアミノ基、４級アンモニウム基、ホスホニウム基等のオニウム塩基、アルギニル基、リシル基、ヒスチジル基、グアニジル基等のアミノ酸残基、イミダゾール基等の複素環基を挙げることができるが、好ましくは、グアニジン骨格を有する化合物である。グアニジン骨格を有する化合物としては、例えば、アルギニン、または、アシル化アルギニンおよびアグマチン等のアルギニン誘導体が挙げられるが、アルギニンが好ましい。この場合、溶離液中のアルギニンの濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ以上が好ましく、より好ましくは３０ｍｍｏｌ／Ｌ以上であり、さらに好ましくは５０ｍｍｏｌ／Ｌ以上であり、５００ｍｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、より好ましくは４００ｍｍｏｌ／Ｌ以下であり、さらに好ましくは３００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である。
　正電荷を有する添加剤は、上記したアルギニン等の水と接触したときに正電荷を帯びる化合物に加えて、伝導率を高めることを意図して塩を含んでいてもよい。利用可能な塩としては、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カリウム等が挙げられ、それらのうちの少なくとも１種を、正電荷を有する添加剤に含めることができる。塩化ナトリウムの場合、好ましくは１００ｍｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは１５０ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは３００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは２００ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度で用いられる。
　「ｐＨ調節剤」としては、溶離液を所望のｐＨに調節するという目的が達成される医薬品添加剤を使用することができるが、具体的には、ヒスチジン緩衝液が好ましく、ヒスチジン緩衝液に加えて、あるいは、ヒスチジン緩衝液に代えて、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液からなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤を使用することができる。
　ｐＨ調節剤としてヒスチジン緩衝液を用いる場合、溶離液中のヒスチジンの濃度は１０ｍｍｏｌ／Ｌ以上が好ましく、より好ましくは２０ｍｍｏｌ／Ｌ以上であり、さらに好ましくは３０ｍｍｏｌ／Ｌ以上であり、３００ｍｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、より好ましくは２５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、２００ｍｍｏｌ／Ｌ以下がさらに好ましい。
　溶離液のｐＨは、６より高いことが好ましく、好ましくは８以下であり、より好ましくは７以下である。
　本発明の溶離液は、放射性医薬組成物の処方組成となり得る。

（３－２）溶出
　陽イオン交換材料からの該材料に吸着した放射性標識抗体の溶出は、例えば陽イオン交換材料が陽イオンクロマトグラフィーカラムの場合、放射性標識抗体が吸着したカラムに上記溶離液を通液することにより実施することができる。通液は１回実施されてもよいし、所望により２～３回実施することもできる。ただし、溶出工程１回あたり陽イオン交換材料容量の３倍以上の液量を用いる。

　本発明において、放射性医薬組成物を製造するにあたって、工程３の実施後に、該放射性標識抗体を含む溶出液に希釈液を添加してもよい。本発明の溶離液が処方組成となり得ることから、溶出液に希釈液を添加することで溶媒交換を行うことなく製剤化が可能となる。希釈液としては、注射用水や生理食塩液が用いられる。
　また、溶出液には、更なる添加剤（以下、「第２の添加剤」とも称する。添加剤（Ｂ）に相当）を添加してもよい。第２の添加剤は、医薬品添加剤であれば限定されないが、安定剤、界面活性剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤などを例示することができる。第２の添加剤は、例えば、希釈液に溶解して添加することができる。

（３－３）液状医薬組成物
　上記工程１～工程３、所望により工程２と工程３の間の洗浄工程や工程３の後の希釈工程を実施することにより、「放射性核種で抗体を標識した放射性標識抗体を有効成分とし、１種以上の添加剤を含む液状の放射性医薬組成物」が得られる。ここで、「液状」とは、通常の条件（例えば、大気中、室温／常温）で液体状又は流体状であることをいい、若干の粘性を有する状態も含まれる。具体的には、溶液、懸濁液、分散液、乳状液等が挙げられるがこれらに限定されない。液状医薬組成物は、例えば上述の方法で製造された本発明のキレート複合体を、水を主体とし、且つ生体と略等張の溶媒に溶解させて製造することができる。この場合、必要に応じて、薬学的に許容される他の成分を含んでいてもよい。

　液状医薬組成物は、その有効量が、経口的に、又は静脈内、皮下、腹腔内若しくは筋肉内等の非経口的に生体に投与され、疾患の治療、疾患の診断、あるいは病巣の検出等に用いられる。
　ここで投与対象としてはヒト、またはマウス、ラット、サル、モルモット、チンパンジー、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシもしくはウマなどの動物であるが、特に限定されるものではない。好ましくはヒトである。

　放射性核種として治療効果を有するもの、具体的にはα粒子放出核種を選択することにより、本発明の液状医薬組成物は、放射性核種内用療法に用いることができる。放射性核種内用療法は、放射性医薬を静注や経口で投与し、がん原発巣や転移巣のような病巣部位にこの放射性薬剤を集積させ、放射性薬剤から放出される放射線により、病巣部位のがん細胞を破壊するというものである。従って、本発明の液状医薬組成物はがんの放射性核種内用療法に好ましく用いることができる。この場合、当該医薬組成物の投与量、用量は、放射性核種の種類、有効成分の有効性、投与の形態・経路、疾患（特にがん）の進行ステージ、患者の体型・体重・年齢、併用する他の疾患の治療薬の種類や量に応じ、適宜選択される。
　また、当該医薬組成物の投与量、用量は、マウスの投与量をヒトに体表面積換算したヒト等価用量（ＨＥＤ；Ｈｕｍａｎ　Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ　ｄｏｓｅ）を用いることができる。ＨＥＤは、下記式によって求められる。
ＨＥＤ＝ａｎｉｍａｌ　ｄｏｓｅ　ｉｎ　ＭＢｑ／ｋｇ　×　（ａｎｉｍａｌ　ｗｅｉｇｈｔ　ｉｎ　ｋｇ／ｈｕｍａｎ　ｗｅｉｇｈｔ　ｉｎ　ｋｇ）^０．３３

　例えば、体重２０ｇのマウスの投与量を用いて、体重６０ｋｇのヒトのＨＥＤを算出すると、放射性核種がヨウ素－１３１である場合は、通常１回あたり１００ＭＢｑ／ｋｇ以下で投与され得る。１回あたり５０ＭＢｑ／ｋｇ以下の用量でも効果を発揮し得る。例えば、放射性核種がイットリウム－９０である場合は、通常１回あたり５０ＭＢｑ／ｋｇ以下で投与され得る。１回あたり３０ＭＢｑ／ｋｇ以下の用量でも効果を発揮し得る。例えば、放射性核種がルテチウム－１７７である場合は、通常１回あたり５０ＭＢｑ／ｋｇ以下で投与され得る。１回あたり４０ＭＢｑ／ｋｇ以下の用量でも効果を発揮し得る。このような投与量は本発明の一実施形態の例示であり、当業者はマウス及びヒトの体重に応じて適宜上記式で換算することができる。
　また、放射性核種がヨウ素－１３１である場合は、非放射性ヨウ素製剤（安定ヨウ素剤）を事前投与することにより、ヨウ素が生理的に集積する甲状腺への毒性を低減させることができる。安定ヨウ素剤としては、ヨウ化カリウム、ヨウ素酸カリウムなどを用いることができる。

　また、本発明の他の態様として、前述した放射性標識抗体において、放射性核種として、β線放出核種からポジトロンやγ線を放出する放射性核種を用いた場合には、得られた放射性医薬組成物は、がんの放射性核種内用療法におけるがんの診断に用いてもよい。本発明のがんの診断用医薬組成物は、がんのＲＩ内用療法を行う前の診断に用いてもよいし、がんの放射性核種内用療法を行った後の診断に用いてもよい。がんの放射性核種内用療法を行う前の診断に用いられることによって、β線を放出する放射性核種を備えた本発明の液状医薬組成物を用いたがんの放射性核種内用療法を実行するかどうかの治療選択の判断に用いることができる。また、がんの放射性核種内用療法を行った後の診断に用いられることによって、β線を放出する放射性核種を備えた本発明の液状医薬組成物を用いたがんの放射性核種内用療法の効果があるかどうかの判定や投与量の増減などの治療計画の適正化に用いることができる。

（２）放射性標識抗体の精製方法
　本発明は、
（工程Ａ）放射性核種で抗体を標識して放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程、
（工程Ｂ）前記工程Ａで得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程、及び
（工程Ｃ）１種以上の添加剤を含む溶離液を用いて前記工程Ｂで陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、
を含む、
放射性標識抗体の精製方法を提供する。
　工程Ａは上記「（１）医薬組成物及びその製造方法」の工程１と同様にして実施することができる。
　工程Ｂは上記「（１）医薬組成物及びその製造方法」の工程２と同様にして実施することができる。
　工程Ｃは上記「（１）医薬組成物及びその製造方法」の工程３と同様にして実施することができる。
　工程Ｃを経て得られる溶出液は、高濃度で放射性標識抗体を含有し、従って高い放射化学的収率が見込まれる。また、高い放射化学的純度を維持することができる。

　本発明の液状医薬組成物は、室温で保管したとき、その液状医薬組成物に含まれる放射性標識抗体を構成する放射性金属核種の半減期を基準として、半減期の１以上５以下の倍数の期間経過時点において、一定の割合以上の放射化学的純度を有する。上記の放射性金属核種がポジトロン放出核種（例えば、Ｚr－８９）であるとき、好ましくは、室温で製造終了から７日間保管した時の複合体の放射化学的純度が９０％以上であり、より好ましくは９５％以上である。また、放射性金属核種がα粒子核種（例えば、Ａｃ－２２５）であるときに、好ましくは、室温で製造終了から１４日間保管した時の複合体の放射化学的純度が９０％以上であり、より好ましくは９５％以上である。ここで本明細書における「室温」とは、好ましくは日本薬局方で定義される「常温」をいい、具体的には１５～２５℃である。また、保管中や医療現場への輸送中には、設定した貯蔵条件の温度から逸脱する可能性があり、温度逸脱が生じた場合でも放射化学的純度の変化が少ないことが、液状医薬組成物としては好ましい。
　ここで、放射化学的純度は、試料を市販の放射線検出器で分析した場合に検出された全放射能（カウント）に対する、複合体に相当するピークの放射能（カウント）の百分率をいう。放射化学的純度の分析には高速液体クロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーを用いることができるが、薄層クロマトグラフィーを用いることが好ましい。より好ましくは後述する実施例に記載の条件を用いた薄層クロマトグラフィーを用いる。

　本発明の上記の実施形態は、以下の技術思想を包含するものである。
　［１］放射性核種で抗体を標識した放射性標識抗体を有効成分とし、１種以上の添加剤（Ａ）を含む液状の放射性医薬組成物の製造方法であって、
　（工程１）放射性核種で抗体を標識して前記放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程と、
　（工程２）前記工程１で得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程と、
　（工程３）前記添加剤（Ａ）を含む溶離液を用いて前記工程２で前記陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、
　を含む、
　放射性医薬組成物の製造方法。
　［２］前記放射性医薬組成物が前記添加剤（Ａ）である第１の添加剤に加えて第２の添加剤（Ｂ）を含み、
　　工程３の実施後に、前記放射性標識抗体を含む溶出液に前記第２の添加剤（Ｂ）を含む希釈液を添加する工程を行う、［１］に記載の方法。
　［３］放射性核種が、放射性金属核種又は放射性ハロゲン核種である、［１］または［２］に記載の方法。
　［４］放射性核種が、Ａｌ^１８Ｆ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^１１１Ｉｎ、^１７７Ｌｕ、又は^２２５Ａｃである、［１］または［２］に記載の方法。
　［５］前記陽イオン交換材料が、荷電基としてスルホプロピル基又はカルボキシメチル基を有する、［１］～［４］のいずれかに記載の方法。
　［６］前記陽イオン交換材料が、カラムに充填されてなる、［１］～［５］のいずれかに記載の方法。
　［７］前記工程３の実施前に、前記放射性標識抗体が吸着した前記陽イオン交換材料に洗浄液を通液して該陽イオン交換材料を洗浄する工程を行う、［１］～［６］のいずれかに記載の方法。
　［８］前記洗浄液が、１種類以上のｐＨ調節剤を含む、［７］記載の方法。
　［９］前記ｐＨ調節剤が、ヒスチジン、２－モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２－［ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、３－モルホリノプロパン－１－スルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）および２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）からなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤である、［８］記載の方法。
　［１０］前記洗浄液のｐＨが４～７である、［７］～［９］のいずれかに記載の方法。
　［１１］前記放射性医薬組成物が、前記添加剤（Ａ）として、正電荷を有する添加剤（ａ１）とｐＨ調節剤とを含み、
　　前記溶離液が、前記放射性医薬組成物に含まれる前記正電荷を有する添加剤（ａ１）と前記ｐＨ調節剤とを含む、［１］～［１０］のいずれかに記載の方法。
　［１２］前記正電荷を有する添加剤（ａ１）が、グアニジン骨格を有する化合物を含む、［１１］記載の方法。
　［１３］前記グアニジン骨格を有する化合物が、アルギニン、アシル化アルギニンおよびアグマチンからなる群から選択される少なくとも１種の化合物である、［１２］に記載の方法。
　［１４］前記正電荷を有する添加剤（ａ１）が、塩化ナトリウム、塩化カリウムおよび酢酸ナトリウムからなる群から選択される少なくとも１種の化合物をさらに含む、［１２］または［１３］に記載の方法。
　［１５］前記ｐＨ調節剤がヒスチジン、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、リン酸及びクエン酸からなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤を含む、［１１］～［１４］のいずれかに記載の方法。
　［１６］前記添加剤（Ａ）を含む前記溶離液が、アルギニンを含有するヒスチジン緩衝液を含む、［１］～［１５］のいずれかに記載の方法。
　［１７］前記溶離液に含まれるアルギニンが１０～５００ｍｍоｌ／Ｌ、ヒスチジンが１０～３００ｍｍоｌ／Ｌである、［１６］に記載の方法。
　［１８］前記溶離液が６＜ｐＨ≦８である、［１］～［１７］のいずれかに記載の方法。
　［１９］（工程Ａ）放射性核種で抗体を標識して放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程、
　（工程Ｂ）前記工程Ａで得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程、及び
　（工程Ｃ）１種以上の添加剤を含む溶離液を用いて前記工程Ｂで陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、
　を含む、
放射性標識抗体の精製方法。
　［２０］前記放射性標識抗体が、放射性核種がキレートしたキレート剤と抗体との複合体であり、該キレート剤が、リンカーを介して、前記抗体のＦｃ領域を部位特異的に修飾している、［１］～［１９］記載の方法。
　［２１］該リンカーが、下記式（ｉ）で表される、１３以上１７以下のアミノ酸残基からなる抗体修飾ペプチドを含む、［２０］に記載の複合体。
　(Xa)-Xaa₁-(Xb)-Xaa₂-(Xc)-Xaa₃-(Xd)・・・（ｉ）
　（式中、Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ及びＸｄは、それぞれ、連続するａ個のＸ、連続するｂ個のＸ、連続するｃ個のＸ、及び連続するｄ個のＸを表し、
　Ｘは、側鎖にチオール基及びハロアセチル基のいずれも有しないアミノ酸残基であり、
　ａ、ｂ、ｃ及びｄはそれぞれ独立に１以上５以下の整数で、かつａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ≦１４を満たし、
　Ｘａａ_１及びＸａａ_３は、それぞれ独立に、
　側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、かつ、ジスルフィド結合を介して結合しているか若しくはスルフィド基がリンカーを介して結合しており、又は、
　一方が、側鎖にチオール基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、他方が、側鎖にハロアセチル基を有するアミノ酸に由来するアミノ酸残基を表し、かつ、チオエーテル結合を介して結合しており、
　Ｘａａ_２は、リシン残基、アルギニン残基、システイン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、２－アミノスベリン酸、又はジアミノプロピオン酸である。）
　［２２］該リンカーが、上記式（１０ａ）又は上記式（１０ｂ）で示す構造を有する、［２０］または［２１］記載の方法。
　［２３］前記抗体がヒト抗体である、［１］～［２２］のいずれかに記載の方法。
　［２４］前記放射性標識抗体において、抗体1分子に対して抗体修飾ペプチド１分子または2分子が結合している、［１］～［２２］のいずれかに記載の方法。

　以下、実施例等により、本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

製造例１：ペプチドリンカーによる部位特異的抗体修飾
（１）抗体修飾工程
　抗体修飾ペプチドを国際公開第２０１７／２１７３４７号に記載の方法で製造して、下記式（Ｐ３）で表される１７個のアミノ酸残基を含むペプチドを得た。このペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１０のＸａａ_２がリシン残基である配列と同一であり、リシン残基の側鎖末端アミノ基がＲ１で示される構造で修飾されていた。また、２つのシステイン残基で互いにジスルフィド結合を形成しており、ペプチドのＮ末端はジグリコール酸及び８つのＰＥＧを有するリンカー構造を介して、第２原子団であるアジド基を含む原子団として、エチルアジドが結合しているものであった。

（式（Ｐ３）中、Ｇｌｙはグリシンを、Ｐｒｏはプロリンを、Ａｓｐはアスパラギン酸を、Ｃｙｓはシステインを、Ａｌａはアラニンを、Ｔｙｒはチロシンを、Ｈｉｓはヒスチジンを、Ｇｌｕはグルタミン酸を、Ｌｅｕはロイシンを、Ｖａｌはバリンを、Ｔｒｐはトリプトファンを、Ｐｈｅはフェニルアラニンを示す。）

　このペプチドと、表２に示す抗体医薬とを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に混合した混合液を、室温で３０分間反応させて、ペプチド修飾抗体を含む溶液を得た。このペプチド修飾抗体は、上記のペプチドによって各抗体のＦｃ領域が部位特異的に修飾されたものである。

（２）ペプチド修飾抗体分離工程
　このペプチド修飾抗体を、２０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）で希釈してから、国際公開第２０２０／０７５６７０号の実施例２に記載された方法に準じて調製したＩｇＧ－ＢＰカラムに通液し、未標識抗体及び一価抗体を相対的に多く含む抗体組成物を得た。未標識抗体及び一価抗体を相対的に多く含む溶液を後述の標識工程に供した。回収したペプチド修飾抗体の純度は疎水カラムクロマトグラフィーで分析し、表３に示す回収量、未修飾抗体：一価抗体：二価抗体比でペプチド修飾抗体を得た。

　なお、疎水カラムクロマトグラフィーの条件は、以下の通りである。
　カラム：ＢｉｏＰｒｏＨＩＣＢＦ（４．６ｍｍ×１０ｃｍ，４．０μｍ）
　検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２８０ｎｍ）
移動相Ａ：１．５ｍｏｌ/Ｌ硫酸アンモニウム含有５０ｍｍｏｌ/Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
移動相Ｂ：５０ｍｍｏｌ/Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
移動相Ｃ：水
移動相の送液：移動相Ａ，移動相Ｂ及び移動相Ｃの混合比を次のように変えて濃度勾配制御する。

実施例１： ^８９Ｚｒ標識リツキシマブを有効成分とする放射性医薬組成物の製造
（１）錯体形成工程
　本実施例に用いられるキレート部（ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯ）の構造を、以下の式（Ｌ１－５）に示す。^８９Ｙターゲットにプロトン照射し、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液に溶解させて調製した^８９Ｚｒイオン含有溶液（放射能濃度４２００ＭＢｑ／ｍＬ、液量０．１００ｍＬ）を加熱条件下で、溶媒留去した。キレート部を、１００ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に分散させて、キレート部を０．３ｍｍｏｌ／Ｌ含む分散液（^８９Ｚｒ用キレート部分散液）とした。この^８９Ｚｒ用分散液０．０７４ｍＬと、１５０ｍｍｏｌ／Ｌゲンチジン酸溶液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解）０．０９９ｍＬとを、溶媒留去した放射性金属源に加え、加熱条件下で反応させて、^８９Ｚｒ錯体溶液を得た。キレート部と放射性金属イオンとのモル比率は、キレート部：^８９Ｚｒイオン＝約７８．１：１であり、反応液の加熱温度は７０℃、加熱時間は６０分間とした。
　ＴＬＣ分析にて^８９Ｚｒ錯体溶液中の^８９Ｚｒ錯体の放射化学的純度を測定し、９６．５％の放射化学的純度で^８９Ｚｒ錯体を得た。ＴＬＣ分析は、薄層クロマトグラフィー（Ａｇｉｌｅｎｔ社製、型番：ＳＧＩ０００１、展開溶媒はアセトニトリル：水（体積比１：１））をラジオγ－ＴＬＣアナライザー（ｒａｙｔｅｓｔ製、ＭＯＤＥＬＧＩＴＡＳｔａｒＰＳ）で測定し、検出された全放射能（カウント）に対する、溶媒先端付近に検出されたピークの放射能（カウント）の百分率を放射化学的純度（％）とした。

（２）標識工程
　上述の工程（１）を経て得られた^８９Ｚｒ錯体の溶液と、製造例１を経て製造したペプチド修飾リツキシマブ（一価抗体）を含む溶液とを混合し、３７℃で２．０時間クリック反応させて、^８９Ｚｒ標識リツキシマブを得た。放射化学的純度は、展開溶媒にアセトニトリル：０．１ｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ溶液（体積比１：１）、検出された全放射能（カウント）に対する、原点付近に検出されたピークの放射能（カウント）の百分率を放射化学的純度（％）としたほかは工程（１）と同様に測定し、６５．８％の放射化学的純度で^８９Ｚｒ標識リツキシマブが得られていることがわかった。

（３）精製工程
　工程（２）で得られた^８９Ｚｒ標識リツキシマブを含む溶液１２０μＬと、上述の工程（１）で得られた^８９Ｚｒ錯体溶液８０μＬと、^８９Ｚｒ塩酸溶液５μＬとを混和し、^８９Ｚｒ標識リツキシマブを２６．５％、遊離^８９Ｚｒ成分を１０．１％含む精製検討用の疑似反応溶液を作成した（ＴＬＣで検出される疑似反応溶液中の全放射能成分の割合を１００％としている）。
　アガロース担体に荷電基としてスルホプロピル基を備える陽イオン交換樹脂を充填したカラム（ＨｉＴｒａｐ^ＴＭ　ＳＰ　ＦＦ　１ｍＬ）を、５ｍＬの２０ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．５）（以下、「Ｈｉｓ５．５」という。）、５ｍＬの１００ｍｍｏｌ／Ｌアルギニン含有５０ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．１）（以下、「ＲＨ６．１」という。）、１０ｍＬのＨｉｓ５．５の順で平衡化した。

　疑似反応溶液１０μＬ（１１．７ＭＢｑ）を平衡化済みの上記カラムに通液し、^８９Ｚｒ標識抗体をカラムに保持させた。その後、５ｍＬのＨｉｓ５．５をカラムに２回通液して洗浄した。次いで、３ｍＬのＲＨ６．１を通液し、溶出液（１．１６ＭＢｑ）を回収した。工程（２）と同様に溶出液の放射化学的純度をＴＬＣによって解析し、それぞれ放射能を測定して目的の^８９Ｚｒ標識リツキシマブの放射化学的収率を計算した。その結果、放射化学的収率が３７．３％、放射化学的純度が７８．４％であった。なお、放射化学的収率とは、溶出液３ｍＬ中に含まれる^８９Ｚｒ標識抗体の放射能をカラムに通液した疑似反応溶液中の^８９Ｚｒ標識抗体の放射能で除し、百分率で表した値である。

比較例１： ^８９Ｚｒ標識リツキシマブを有効成分とする放射性医薬組成物の製造
　陽イオン交換樹脂を、５ｍＬのＨｉｓ５．５、５ｍＬの１６０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ含有１９ｍｍｏｌ／ＬＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．５）（以下、「ＮａＭＥＳ５．５」という。）の順で平衡化し、溶離液として、３ｍＬのＮａＭＥＳ５．５を用いた以外は、実施例１と同様にして、疑似反応溶液から^８９Ｚｒ標識リツキシマブの精製を行った。なお、ＭＥＳ緩衝液は、医薬品の添加剤として用いられた実績がないものである。その結果、放射化学的収率が１３．６％、放射化学的純度が５０．９％であった。

実施例２～５：種々の放射性標識抗体を有効成分とする放射性医薬組成物の製造
（１）錯体形成工程
　実施例１の工程（１）と同様に実施した。

（２）標識工程
　上述の工程（１）を経て得られた^８９Ｚｒ錯体の溶液と、製造例１を経て製造した各ペプチド修飾抗体（一価抗体）を含む溶液とを混合し、３７℃で２．０時間クリック反応させて、^８９Ｚｒ標識抗体を得た。

（３）精製工程
　アガロース担体に荷電基としてスルホプロピル基を備える陽イオン交換樹脂を充填したカラム（ＨｉＴｒａｐ　ＳＰ　ＦＦ　１ｍＬ）を５ｍＬのＨｉｓ５．５、５ｍＬのＲＨ６．１、１０ｍＬのＨｉｓ５．５で平衡化した。上記のカラムに工程（２）で得られた反応液を全量通液し、^８９Ｚｒ標識抗体をカラムに保持させた。上記カラムに１ｍＬのＨｉｓ５．５を５回通液し洗浄した。このカラムに１ｍＬのＲＨ６．１を３回通液し、溶出液を回収した。工程（２）と同様に溶出液の放射化学的純度をＴＬＣによって解析し、それぞれ放射能を測定して目的の^８９Ｚｒ標識抗体の放射化学的収率を計算した。なお、放射化学的収率とは、溶出液３ｍＬ中に含まれる^８９Ｚｒ標識抗体の放射能をカラムに通液した反応溶液中の^８９Ｚｒ標識抗体の放射能で除し、百分率で表した値である。得られた放射性医薬組成物の放射化学的収率と放射化学的純度を表５に示す。

実施例６： ^２２５Ａｃ標識パニツムマブを有効成分とする放射性医薬組成物の製造
（１）錯体形成工程
　実施例１と同様のキレート部（ＤＯＴＡ－ＧＡ－ＤＢＣＯ）を、１５６ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）に分散させて、キレート部を０．３ｍｍｏｌ／Ｌ含む分散液（^２２５Ａｃ用キレート部分散液）とした。この^２２５Ａｃ用分散液１３９．７μＬと、^２２５Ａｃイオン含有溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸に溶解、放射能濃度１９２ＭＢｑ／ｍＬ、１３．４１５ＭＢｑ）６９．９μＬとを、１．５ｍＬエッペンチューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製、Ｐｒｏｔｅｉｎ　ＬｏＢｉｎｄ　Ｔｕｂｅ）に加え、加熱条件下で反応させて、^２２５Ａｃ錯体溶液を得た。キレート部と放射性金属イオンとのモル比率は、キレート部：^２２５Ａｃイオン＝約１５２１：１であり、反応液の加熱温度は７０℃、加熱時間は３０分間とした。
　ＴＬＣ分析にて^２２５Ａｃ錯体溶液中の^２２５Ａｃ錯体の放射化学的純度を測定し、９７．３％の放射化学的純度で^２２５Ａｃ錯体を得た。ＴＬＣ分析は、検出器にラジオγ－ＴＬＣアナライザー（ｒａｙｔｅｓｔ製、ＭＯＤＥＬ：ＧＩＴＡＳｔａｒ）を用いた以外は、実施例１（１）と同様に測定した。

（２）標識工程
　上述の工程（１）を経て得られた^２２５Ａｃ錯体の溶液と、製造例１を経て製造したペプチド修飾パニツムマブ（一価抗体）を含む溶液をＨｉｓ５．５に溶媒置換した溶液７９９μＬとを混合し、３７℃で２．０時間クリック反応させて、^２２５Ａｃ標識パニツムマブを得た。放射化学的純度は、展開溶媒にアセトニトリル：０．１ｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ溶液（体積比１：１）、検出された全放射能（カウント）に対する、原点付近に検出されたピークの放射能（カウント）の百分率を放射化学的純度（％）としたほかは工程（１）と同様に測定し、６０．３％の放射化学的純度で^２２５Ａｃ標識パニツムマブが得られていることがわかった。

（３）精製工程
　精製用カラムの平衡化は実施例１（３）と同様のカラムと手順で実施した。
　工程（２）で得られた^２２５Ａｃ標識パニツムマブを含む溶液９８６．６μＬを、平衡化済みの上記カラムに通液し、^２２５Ａｃ標識パニツムマブをカラムに保持させた。その後、５ｍＬのＨｉｓ５．５をカラムに２回通液して洗浄した。次いで、３ｍＬのＲＨ６．１を通液し、溶離液（６．６７８ＭＢｑ）を回収した。工程（２）と同様に溶離液の放射化学的純度をＴＬＣによって解析し、それぞれ放射能を測定して目的の^２２５Ａｃ標識パニツムマブの放射化学的収率を計算した。その結果、放射化学的収率が４９．７８％、回収率が８２．５５％、放射化学的純度が９９．９％であった。なお、放射化学的収率とは、溶離液３ｍＬ中に含まれる^２２５Ａｃ標識抗体の放射能を、反応に用いた^２２５Ａｃの放射能で除し、百分率で表した値である。また、回収率とは、溶離液３ｍＬ中に含まれる^２２５Ａｃ標識抗体の放射能を、反応に用いた^２２５Ａｃの放射能を標識工程の放射化学的純度で乗した値（^２２５Ａｃ標識抗体の放射能）で除し、百分率で表した値である。

（４）製剤化工程
　工程（３）で得られた溶離液を０．９ｍＬずつ３本に分注し、それぞれｅｎｔｒｙ１～３として以降の手順で製剤化した。
　ｅｎｔｒｙ１は、分注した溶液（放射能濃度２．２３ＭＢｑ／ｍＬ）をそのまま製剤として保管した。ｅｎｔｒｙ２は、分注した溶液にＲＨ６．１を加え、放射能濃度が１．７１ＭＢｑ／ｍＬなるように希釈したものを製剤として保管した。ｅｎｔｒｙ３は、分注した溶液をフィルター（Ｍｅｒｃｋ社製、型番：ＵＦＣ５０５０９６）を用いた限外ろ過により濃縮したのち、ＲＨ６．１を加え、放射能濃度が４．００ＭＢｑ／ｍＬなるように希釈したものを製剤として保管した。

比較例２： ^２２５Ａｃ標識パニツムマブを有効成分とする放射性医薬組成物の製造
（１）錯体形成工程
　実施例６の工程（１）と同様に実施した。反応に用いた^２２５Ａｃイオン含有溶液の放射能は１３．５８４ＭＢｑであった。

（２）標識工程
　実施例６の工程（２）と同様に実施した。放射化学的純度は、展開溶媒にアセトニトリル：０．１ｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ溶液（体積比１：１）、検出された全放射能（カウント）に対する、原点付近に検出されたピークの放射能（カウント）の百分率を放射化学的純度（％）としたほかは工程（１）と同様に測定し、７４．８％の放射化学的純度で^２２５Ａｃ標識パニツムマブが得られていることがわかった。

（３）精製工程
　精製用カラムを、５ｍＬのＨｉｓ５．５、５ｍＬのＮａＭＥＳ５．５、１０ｍＬのＨｉｓ５．５の順で平衡化し、溶離液として、３ｍＬのＮａＭＥＳ５．５を用いた以外は、実施例６と同様にして、^２２５Ａｃ標識パニツムマブの精製を行った。その結果、溶離液（５．１３２ＭＢｑ）を回収した。工程（２）と同様に溶離液の放射化学的純度をＴＬＣによって解析し、それぞれ放射能を測定して目的の^２２５Ａｃ標識パニツムマブの放射化学的収率を計算した。その結果、放射化学的収率が３７．７８％、回収率が５０．５１％、放射化学的純度が９７．２％であった。なお、放射化学的収率とは、溶離液３ｍＬ中に含まれる^２２５Ａｃ標識抗体の放射能を、反応に用いた^２２５Ａｃの放射能で除し、百分率で表した値である。また、回収率とは、溶離液３ｍＬ中に含まれる^２２５Ａｃ標識抗体の放射能を、反応に用いた^２２５Ａｃの放射能を標識工程の放射化学的純度で乗した値（^２２５Ａｃ標識抗体の放射能）で除し、百分率で表した値である。

（４）製剤化工程
　工程（３）で得られた溶離液を０．９ｍＬずつ３本に分注し、それぞれｅｎｔｒｙ４～６として以降の手順で製剤化した。
　ｅｎｔｒｙ４は、分注した溶液をフィルター（Ｍｅｒｃｋ社製、型番：ＵＦＣ５０５０９６）を用いた限外ろ過により濃縮したのち、ＮａＭＥＳ５．５を加え、放射能濃度が２．２３ＭＢｑ／ｍＬなるように希釈したものを製剤として保管した。ｅｎｔｒｙ５は、分注した溶液（放射能濃度１．７１ＭＢｑ／ｍＬ）をそのまま製剤として保管した。ｅｎｔｒｙ６は、分注した溶液をフィルター（Ｍｅｒｃｋ社製、型番：ＵＦＣ５０５０９６）を用いた限外ろ過により濃縮したのち、ＮａＭＥＳ５．５を加え、放射能濃度が４．００ＭＢｑ／ｍＬなるように希釈したものを製剤として保管した。

試験例１：製剤の保管安定性に与える溶離液の組成の影響の評価
　実施例６および比較例２で調製したｅｎｔｒｙ１～６の放射性医薬組成物（放射性製剤）について、製造直後から１４日後までの室温保管における保管安定性を検証した。また、製造１０日後以降は３７℃保管における保管安定性も検証した。その結果を表６に示す。

　表６の結果から、ＲＨ６．１を組成としたｅｎｔｒｙ１～３の方が、ＮａＭＥＳ５．５を組成としたｅｎｔｒｙ４～６と比較して、いずれの放射能濃度においても放射化学的純度の経時的な低下を抑制する効果があることが示された。また、１０日後以降におこなった３７℃下での保管においても、同様の傾向を認め、ｅｎｔｒｙ１～３の方が、ｅｎｔｒｙ４～６と比較して、放射化学的純度の経時的な低下を抑制する効果があった。

　本出願は、日本で出願された特願２０２２－１７１８３３（出願日：２０２２年１０月２６日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

　放射性核種で抗体を標識した放射性標識抗体を有効成分とし、１種以上の添加剤（Ａ）を含む液状の放射性医薬組成物の製造方法であって、
（工程１）放射性核種で抗体を標識して前記放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程と、
（工程２）前記工程１で得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程と、
（工程３）前記添加剤（Ａ）を含む溶離液を用いて前記工程２で前記陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、
を含む、
放射性医薬組成物の製造方法。
　前記放射性医薬組成物が前記添加剤（Ａ）である第１の添加剤に加えて第２の添加剤（Ｂ）を含み、
　工程３の実施後に、前記放射性標識抗体を含む溶出液に前記第２の添加剤（Ｂ）を含む希釈液を添加する工程を行う、請求項１に記載の方法。
　放射性核種が、放射性金属核種又は放射性ハロゲン核種である、請求項１または２に記載の方法。
　放射性核種が、Ａｌ^１８Ｆ、^８９Ｚｒ、^９０Ｙ、^１１１Ｉｎ、^１７７Ｌｕ、又は^２２５Ａｃである、請求項１または２に記載の方法。
　前記陽イオン交換材料が、荷電基としてスルホプロピル基又はカルボキシメチル基を有する、請求項１または２に記載の方法。
　前記陽イオン交換材料が、カラムに充填されてなる、請求項１または２に記載の方法。
　前記工程３の実施前に、前記放射性標識抗体が吸着した前記陽イオン交換材料に洗浄液を通液して該陽イオン交換材料を洗浄する工程を行う、請求項１または２に記載の方法。
　前記洗浄液が、１種類以上のｐＨ調節剤を含む、請求項７に記載の方法。
　前記ｐＨ調節剤が、ヒスチジン、２－モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２－［ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、３－モルホリノプロパン－１－スルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）および２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）からなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤である、請求項８に記載の方法。
　前記洗浄液のｐＨが４～７である、請求項７に記載の方法。
　前記放射性医薬組成物が、前記添加剤（Ａ）として、正電荷を有する添加剤（ａ１）とｐＨ調節剤とを含み、
　前記溶離液が、前記放射性医薬組成物に含まれる前記正電荷を有する添加剤（ａ１）と前記ｐＨ調節剤とを含む、請求項１または２に記載の方法。
　前記正電荷を有する添加剤（ａ１）が、グアニジン骨格を有する化合物を含む、請求項１１に記載の方法。
　前記グアニジン骨格を有する化合物が、アルギニン、アシル化アルギニンおよびアグマチンからなる群から選択される少なくとも１種の化合物である、請求項１２に記載の方法。
　前記正電荷を有する添加剤（ａ１）が、塩化ナトリウム、塩化カリウムおよび酢酸ナトリウムからなる群から選択される少なくとも１種の化合物をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
　前記ｐＨ調節剤がヒスチジン、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、リン酸及びクエン酸からなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤を含む、請求項１１に記載の方法。
　前記添加剤（Ａ）を含む前記溶離液が、アルギニンを含有するヒスチジン緩衝液を含む、請求項１または２に記載の方法。
　前記溶離液に含まれるアルギニンが１０～５００ｍｍоｌ／Ｌ、ヒスチジンが１０～３００ｍｍоｌ／Ｌである、請求項１６に記載の方法。
　前記溶離液が６＜ｐＨ≦８である、請求項１または２に記載の方法。
（工程Ａ）放射性核種で抗体を標識して放射性標識抗体の粗生成物の溶液を得る工程、
（工程Ｂ）前記工程Ａで得られた前記粗生成物の溶液を陽イオン交換材料と接触させて前記放射性標識抗体を前記陽イオン交換材料に吸着させる工程、及び
（工程Ｃ）１種以上の添加剤を含む溶離液を用いて前記工程Ｂで陽イオン交換材料に吸着した前記放射性標識抗体を溶出する工程と、
を含む、
放射性標識抗体の精製方法。