WO2024085239A1 - おりもの用テストストリップ - Google Patents

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WO2024085239A1
WO2024085239A1 PCT/JP2023/037939 JP2023037939W WO2024085239A1 WO 2024085239 A1 WO2024085239 A1 WO 2024085239A1 JP 2023037939 W JP2023037939 W JP 2023037939W WO 2024085239 A1 WO2024085239 A1 WO 2024085239A1
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WO
WIPO (PCT)
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test strip
vaginal discharge
luteinizing hormone
fiber diameter
average fiber
Prior art date
Application number
PCT/JP2023/037939
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English (en)
French (fr)
Inventor
裕哉 鈴木
貴志 野本
央 橋野
敬太 齋藤
健 鈴木
元 竹下
美里 阿部
育 菅原
里沙子 林
陽子 千葉
Original Assignee
ユニ・チャーム株式会社
Ｃｒａｎｅｂｉｏ株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ユニ・チャーム株式会社, Ｃｒａｎｅｂｉｏ株式会社 filed Critical ユニ・チャーム株式会社
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals

Definitions

  • the present invention relates to a vaginal discharge test strip.
  • Patent Document 1 a lateral flow assay for detecting the presence of an analyte in a liquid sample is known.
  • the present invention aims to provide a test strip that can be used as a new tool for predicting the day of ovulation.
  • the object of the present invention can be achieved by the present invention, which comprises the following aspects: ⁇ Aspect 1> A test strip using an immunochromatographic method for detecting luteinizing hormone in vaginal discharge, Detects 0.05mIU/mL to 2.5mIU/mL of luteinizing hormone as positive; Test strips. ⁇ Aspect 2> The test strip has a width of 5 mm or less. 2. The test strip of embodiment 1. ⁇ Aspect 3> The test strip has a width of 3 mm or less. 2. The test strip of embodiment 1.
  • the test strip comprises:
  • the device comprises a first member that contacts vaginal discharge, a second member that contains a labeled antibody that recognizes luteinizing hormone in vaginal discharge, and a third member that has an indicator that contains a capture antibody, the capture antibody is capable of capturing a complex formed by the binding of the labeled antibody with luteinizing hormone;
  • the luteinizing hormone in the vaginal discharge is configured to move from the first member through the second member to the display portion of the third member, and
  • the indicator of the third component is configured to change color when the capture antibody captures the complex.
  • the first member is made of fibers having an average fiber diameter of 0.5 to 5 ⁇ m
  • the second member is made of fibers having an average fiber diameter of 10 to 40 ⁇ m
  • the average fiber diameter of the fibers of the first member is smaller than the average fiber diameter of the fibers of the second member.
  • the labeled antibody has a colorant having a particle size of 10 nm to 500 nm.
  • the labeled antibody has a colorant having a particle size of 250 nm to 500 nm.
  • a surfactant is applied to the first member which is a sample pad.
  • the first member, which is a sample pad, contains a boron compound and a lectin.
  • the present invention provides a test strip that can be used as a new tool for predicting the day of ovulation.
  • FIG. 1 is a photograph showing the results of a sensitivity test of the test strip according to the present invention.
  • FIG. 2 is a photograph showing the results of a luminescence intensity test of the test strip according to the present invention.
  • FIG. 3-1 is a schematic diagram showing a specific configuration of a test strip according to the present invention.
  • FIG. 3-2 is a conceptual diagram showing a specific configuration of the test strip according to the present invention.
  • FIG. 4 is a graph plotting urinary LH concentration and vaginal discharge LH concentration against the number of days for the urinary LH surge.
  • FIG. 5 is a graph plotting urinary LH concentration and vaginal discharge LH concentration against the number of days for the urinary LH surge.
  • FIG. 6 is a graph showing LH concentrations during vaginal discharge around the day of the LH surge.
  • FIG. 7 is a graph showing the results of the ROC analysis.
  • this test strip can reliably detect LH in vaginal discharge, it can be used as a new tool for predicting the day of ovulation. Specifically, for example, it can be used as a biomarker to detect the LH surge using vaginal discharge as a sample.
  • vaginal discharge has a relatively high viscosity and low fluidity. Furthermore, the sample volume of vaginal discharge is smaller than that of urine, etc. For this reason, it has not always been easy to detect LH in vaginal discharge using conventional methods, especially when using immunochromatography.
  • the test strip of the present invention which detects 0.05mIU/mL to 2.5mIU/mL of luteinizing hormone as a positive value, can reliably detect luteinizing hormone in vaginal discharge and reliably predict the day of ovulation. Therefore, the test strip of aspect 1 can provide a test strip that can be used as a new tool for predicting the day of ovulation.
  • the test strip preferably detects 0.05mIU/mL to 2.0mIU/mL of luteinizing hormone as a positive.
  • detecting luteinizing hormone (LH) levels of 0.05mIU/mL to 2.5mIU/mL as positive means that the result is positive when the LH concentration is within that concentration range, and does not mean that the result is positive "only” when the LH concentration is within that concentration range.
  • a test strip that is positive for LH in the concentration range of 0.05mIU/mL to 10.0mIU/mL is positive for LH in the concentration range of 0.05mIU/mL to 2.5mIU/mL and is therefore within the scope of the present invention.
  • test strip is configured to detect LH in the relatively low concentration range of 0.05mIU/mL to 2.5mIU/mL as a positive result.
  • the test strip does not detect positive results in the range of less than 0.001 mIU/mL, and it is particularly preferable that the test strip does not detect positive results in the range of less than 0.005 mIU/mL, less than 0.01 mIU/mL, less than 0.02 mIU/mL, less than 0.03 mIU/mL, less than 0.04 mIU/mL, or even less than 0.05 mIU/mL.
  • the test strip according to the above aspect 1 can detect a positive result by coloring, for example, when the luteinizing hormone is within the above concentration range.
  • coloring can be performed at a level lower than the maximum level of coloring.
  • the level of coloring can be confirmed, for example, by visual inspection.
  • a test strip capable of detecting LH within the above concentration range as a positive result can be produced, for example, by adjusting the sensitivity (e.g., coloring agent) of a substance (e.g., an antibody) that reacts with luteinizing hormone, and in particular, by adjusting the size of the coloring agent attached to the antibody that recognizes luteinizing hormone.
  • a substance e.g., an antibody
  • the test strip comprises: More preferably, 0.05 mIU/mL to 1.0 mIU/mL; More preferably, 0.05 mIU/mL to 0.5 mIU/mL, Even more preferably, between 0.05 mIU/mL and 0.2 mIU/mL of luteinizing hormone is detected as positive.
  • the detection concentration of the test strip can be measured using a casein blocking buffer solution of LH as the standard solution.
  • a solution of LH in casein blocking buffer can be prepared, for example, in the following manner: (a) A blocking buffer is prepared by dissolving a casein blocking agent (1.0% casein, 100 mM borate, pH 8.5) in purified water. (b) A standard LH solution of known concentration is diluted with blocking buffer to prepare an LH standard solution.
  • luteinizing hormone kits using urine samples have a detection sensitivity range of 20mIU/mL to 100mIU/mL as the concentration of luteinizing hormone in urine (Ministry of Health, Labor and Welfare, Yakuhinki-Hatsu 0222-1, February 22, 2016).
  • the following document is a document on urinary and blood hormones, and is related to a study on the levels of reproductive hormones in urine during the menstrual cycle. It describes that the median value of the total LH value was 38.3 (mIU/ml) on the day before ovulation (Table 2): “Monitoring the menstrual cycle: comparison of urinary and serum reproductive hormones referenced true ovulation", The European Journal of Contraception and Reproductive Health Care, 2015; Early Online: 1-13.
  • the following document is a document on urinary and blood hormones, and describes the LH reference range during a woman's ovulation phase as 8 to 100 (mIU/mL): "Kansai Medical University - List of Endocrine Reference Values"
  • the test strip has a width of 5 mm or less.
  • the width of the test strip may be 1 mm to 10 mm, but is preferably 5 mm or less.
  • the upper limit of the width of the test strip may even be 4 mm or less. It is particularly preferable that the width of the test strip is 1 mm or more and less than 5 mm, 1.5 mm to 4.5 mm, or even 2 mm to 4 mm. When the width of the test strip is within these ranges, particularly good visibility of the color reaction, etc. may be obtained.
  • the test strip has a width of 3 mm or less.
  • the width of the test strip is preferably 2 mm or more. It is particularly preferable that the width of the test strip is 2 to 3 mm.
  • the width of the test strip is reduced to 5 mm or less, or even 3 mm or less, so the amount of liquid that needs to be held for detection is relatively reduced. Therefore, with the test strip according to aspect 2 or even aspect 3, LH can be detected satisfactorily even when vaginal discharge, which is small in volume, highly viscous, and has a small amount of LH, is detected.
  • the test strip comprises:
  • the device comprises a first member that contacts vaginal discharge, a second member that contains a labeled antibody that recognizes luteinizing hormone in vaginal discharge, and a third member that has an indicator that contains a capture antibody, the capture antibody is capable of capturing a complex formed by the binding of the labeled antibody with luteinizing hormone;
  • the luteinizing hormone in the vaginal discharge is configured to move from the first member through the second member to the display portion of the third member, and
  • the indicator of the third member is configured to develop a color when the capture antibody captures the complex.
  • test strip described in embodiment 4 allows for easy and rapid detection of luteinizing hormone via a color reaction.
  • the labeled antibody is a colorant-labeled anti-human luteinizing hormone mouse monoclonal antibody
  • the capture antibody is an anti-human luteinizing hormone mouse monoclonal antibody.
  • human luteinizing hormone (hLH) is present in the sample that has come into contact with the first member
  • the labeled antibody reacts with hLH in the second member to form a complex based on an antigen-antibody reaction.
  • This complex migrates to the display section of the third member and is captured by the capture antibody fixedly bound there, and as a result, the display section changes color based on the colorant (pigment).
  • a second display section can be provided downstream of the display section in the direction of antigen movement.
  • a second capture antibody e.g. rabbit anti-mouse immunoglobulin polyclonal antibody
  • This second capture antibody can recognize the labeled antibody.
  • the labeled antibody that does not form a complex with the antigen passes through the display section without being captured, and is captured by the control section, resulting in the control section being colored based on the coloring agent.
  • the display section and the control section will color, and if the result is negative, only the control section will color.
  • test strip configuration Details about the test strip configuration will be described later.
  • the first member, the second member, and the third member are stacked in this order at least partially overlapping each other,
  • the total thickness of the first member, the second member, and the third member in the stacking direction is 1.5 mm or less.
  • vaginal discharge has a relatively high viscosity and low fluidity. Furthermore, the amount of vaginal discharge is small compared to urine, etc. For this reason, it was not always easy to detect LH in vaginal discharge using conventional methods, especially when using immunochromatography.
  • the inventors have found that the amount of LH in vaginal discharge is smaller than that in urine. It is not easy to detect LH in vaginal discharge using conventional test strips.
  • the thickness of the components constituting the test strip is reduced, so the amount of liquid that needs to be held for detection is relatively reduced. Therefore, with the test strip according to aspect 5, even when the target of detection is vaginal discharge that is small in volume, highly viscous, and contains a small amount of LH, it is possible to detect LH satisfactorily.
  • the preferred range for the thickness of each component is 90-230 ⁇ m, more preferably 100-220 ⁇ m.
  • the preferred range for the thickness of each component (membrane thickness) is 160-230 ⁇ m, more preferably 180-220 ⁇ m.
  • test strip according to the present disclosure is the test strip according to embodiment 5, for use in direct contact with the vagina.
  • test strip When the test strip is placed in direct contact with the vagina, it is convenient for the user to check the detection results themselves. However, since it is a part that is difficult to check with the naked eye, there is a risk of damaging the mucous membrane if used by feeling around.
  • the invention of aspect 5 allows LH from excreted vaginal discharge to be collected directly from the vagina, while ensuring accuracy, and has a relatively thin structure, reducing the risk of damaging the mucous membrane.
  • test strip is configured such that the front and back of the test strip can be visually distinguished from each other, thereby allowing the user of the test strip to determine which side of the strip the vaginal discharge should be applied to, thereby preventing misuse and false positives.
  • the first member is made of fibers having an average fiber diameter of 0.5 to 5 ⁇ m (or a fineness of 0.01 to 0.1 dtex)
  • the second member is made of fibers having an average fiber diameter of 10 to 40 ⁇ m (or a fineness of 2 to 6 dtex)
  • the average fiber diameter of the fibers of the first member is smaller than the average fiber diameter of the fibers of the second member.
  • vaginal discharge has a relatively high viscosity and low fluidity. Therefore, it may not be easy to detect LH in vaginal discharge, especially when detecting it using immunochromatography.
  • the present inventors have found that the amount of LH in vaginal discharge is smaller than that in urine.
  • the average fiber diameter of the components constituting the test strip is optimized, so that even small amounts of highly viscous vaginal discharge can be efficiently transported to the detection site (display unit), enabling good detection.
  • the first member is preferably made of fibers having an average fiber diameter of 1 to 4 ⁇ m, and more preferably an average fiber diameter of 1.5 to 3 ⁇ m.
  • the first member is preferably made of fibers having a fineness of 0.02 to 0.08 dtex, more preferably 0.03 to 0.06 dtex.
  • the second member is preferably made of fibers having an average fiber diameter of 15 to 30 ⁇ m, and more preferably an average fiber diameter of 18 to 25 ⁇ m.
  • the second member is preferably made of fibers having a fineness of 2.5 to 5 dtex, more preferably 3 to 5 dtex.
  • the average fiber diameter of the fibers of the first member is smaller than the average fiber diameter of the fibers of the second member.
  • the absorption of vaginal discharge, particularly of relatively viscous vaginal discharge, in the first member can be further improved.
  • an average fiber diameter R1 of the fibers constituting the first member and an average fiber diameter R2 of the fibers constituting the second member satisfy the relationship 5 ⁇ (R2/R1) ⁇ 20.
  • the relative relationship between the average fiber diameters of the first and second members constituting the test strip is optimized, and as a result, even small amounts of highly viscous vaginal discharge can be efficiently moved to the detection site (display unit) and detected satisfactorily.
  • the absorbency of the first member is improved, particularly for highly viscous vaginal discharge.
  • Another effect is that the retention rate of the labeled antibody in the second member is improved.
  • the fineness D1 of the fiber constituting the first member and the fineness D2 of the fiber constituting the second member satisfy the relationship 50 ⁇ (D2/D1) ⁇ 200.
  • the relative relationship between the fineness of the first and second members that make up the test strip is optimized, so that even small amounts of highly viscous vaginal discharge can be efficiently transported to the detection site (display unit) and detected satisfactorily.
  • 60 ⁇ (D2/D1) ⁇ 190 70 ⁇ (D2/D1) ⁇ 180 80 ⁇ (D2/D1) ⁇ 170 90 ⁇ (D2/D1) ⁇ 160 Meet the following.
  • the present disclosure includes a test strip of any of aspects 3-9, wherein the test strip satisfies at least one of the following: (a) the second member has a basis weight of 100 gsm or more; (b) the sum of the thicknesses of the first member, the second member, and the third member is 1.5 mm or less, and the thickness of the second member accounts for 30% or more of the sum of the thicknesses; (b) the second member has a density of 0.05 to 0.80 g/ m3 .
  • the basis weight, thickness, and/or density of the second member is optimized, thereby improving the diffusibility of the labeled antibody. Therefore, even vaginal discharge with a relatively high viscosity can be detected well.
  • the labeled antibody has a colorant having a particle size of 10 nm to 500 nm.
  • the colorant of the labeled antibody that binds to LH has a particle size of 10 nm to 500 nm, sufficient detectability can be ensured.
  • Such colorants include colloidal gold and cellulose nanoparticles.
  • Colloidal gold generally has a particle size of about 40-100 nm.
  • the labeled antibody has a colorant having a particle size of 250 nm to 500 nm (preferably 280 to 450 nm, more preferably 300 nm to 400 nm).
  • colorants include cellulose nanoparticles.
  • the inventors have found that the amount of LH in vaginal discharge is small compared to the amount of LH in urine. In this case, it is not easy to detect LH in vaginal discharge using conventional test strips (particularly those designed for urinary LH).
  • the labeled antibody that binds to LH contains a coloring agent with a relatively large particle size, improving the visibility of detection. Therefore, the test strip according to aspect 12 can detect LH well even when vaginal discharge containing a small amount of LH is the detection target.
  • a surfactant is applied to the first member, which is a sample pad.
  • the effect of providing optimal affinity between the target substance (vaginal discharge) and the sample pad can be obtained.
  • the first member which is a sample pad contains a boron compound and a lectin.
  • test strips ⁇ Specific examples of test strips>
  • the test strip of the present invention will now be described in detail with reference to the drawings, which are not necessarily to scale and are not intended to limit the present invention.
  • the test strip (testing member) 60 in FIG. 3-1 has a display portion (62A and 62B) that can change color based on excrement (vaginal discharge).
  • the test strip 60 has a contact portion (first member, e.g., a sample pad) 64 that comes into contact with the vaginal discharge.
  • the test strip 60 may have a moving portion where components contained in the vaginal discharge (hereinafter, vaginal discharge components) move. In the moving portion, the vaginal discharge components may move by capillary action.
  • the moving portion may have a display moving portion 66A where the vaginal discharge components move from the contact portion 64 to the display portion (62A and 62B), and a terminal moving portion 66B where the vaginal discharge components move in a direction away from the display portion (62A and 62B).
  • the terminal moving portion is the portion where the vaginal discharge components, etc. that have passed through the display portion (62A and 62B) move.
  • the contact portion (first member) 64 that the vaginal discharge comes into contact with may be, for example, a pad (which may be called a sample pad or specimen pad).
  • the vaginal discharge components that come into contact with the contact portion 64 move, for example, through the pad and transfer to a second member (for example, a conjugate pad).
  • the conjugate pad contains a labeled antibody that recognizes the luteinizing hormone in the vaginal discharge.
  • the conjugate pad (second member) is not shown in FIG. 3-1, but may be arranged, for example, so as to overlap the sample pad (first member) in the thickness direction.
  • the vaginal discharge components, the complexes formed by the antigen-antibody reaction with the luteinizing hormone contained in the vaginal discharge components, and the labeled antibodies may move through the moving portion 66A by capillary action.
  • the portion through which these substances move may be, for example, a membrane.
  • the display portion has a portion 62A that contains a capture antibody that captures (binds) the formed complex. This portion changes color when the complex is captured by the capture antibody. This portion 62A of the display portion may be called a test line.
  • the display section may have a section 62B containing a capture antibody different from the section 62A containing the capture antibody that captures the complex.
  • the capture antibody in section 62B may capture a complex different from the complex captured in section 62A, or may capture a labeled antibody.
  • Section 62B changes color when the complex or the labeled antibody is captured.
  • Section 62B that captures the labeled antibody may be called a control line.
  • the vaginal discharge component that has passed through the display section 62 i.e., the component that has not been captured by the capture antibody moves through the terminal movement section 66B.
  • the terminal movement section 66B may be composed of a membrane.
  • the terminal movement section 66B may have an adsorption pad that absorbs the vaginal discharge component that has passed through the display section 62.
  • the vaginal discharge component that has passed through the display section 62 may be absorbed by an absorbent core.
  • test strip (testing member) 60 may be made of any material, such as paper, nonwoven fabric, or woven fabric, as long as it has a material capable of holding or containing substances such as labeled antibodies and capture antibodies.
  • test strip The conceptual diagram of the test strip is shown in attached Figure 3-2.
  • test strip please refer to, for example, the description in WO2021/132724A1.
  • the present disclosure includes a method for detecting luteinizing hormone in vaginal discharge using an immunochromatographic test strip, the method comprising: The method includes the step of depositing vaginal discharge on a test strip, The test strip detects 0.05mIU/mL to 2.5mIU/mL of luteinizing hormone as a positive result.
  • test strip For details about each component of this method, such as the test strip, please refer to the above description of the test strip.
  • vaginal discharge can be attached to the test strip by directly attaching it to the first member (particularly the sample pad).
  • the test strip is brought into direct contact with the vagina (vulva).
  • 0.05mIU/mL to 1.0mIU/mL, or 0.05mIU/mL to 0.5mIU/mL, or even 0.05mIU/mL to 0.2mIU/mL of luteinizing hormone is detected as positive.
  • the urinary luteinizing hormone (LH) test kit Measuring urinary LH is relatively simple, as it can be completed in about 15 minutes by applying urine to the test kit. However, daily measurement is a great burden for the user, and the utilization rate of urinary LH test kits among women who are trying to become pregnant is not high. Therefore, in order to establish a new method of predicting the date of ovulation, we focused on vaginal discharge as a measurement specimen.
  • LH urinary luteinizing hormone
  • vaginal discharge is collected non-invasively, but it does not need to be collected consciously, making it a specimen that can realize a test that places an extremely small burden on the user, "a test that is completed before you know it".
  • vaginal discharge there have been few research examples of vaginal discharge as a measurement specimen, and no reports have been made on the measurement of ovulation prediction biomarkers such as LH. Therefore, we identified LH in vaginal discharge and examined its potential as a biomarker.
  • ⁇ Methods> ⁇ Recruitment of subjects: Women aged 20 years or older and under 40 years old who do not have menstrual-related diseases, and whether they were pregnant or not was not an issue.
  • ⁇ Definition of vaginal discharge surge The LH surge during vaginal discharge is defined as follows. ⁇ If the concentration has increased by more than two-fold compared to the previous day and the LH/total protein in the vaginal discharge exceeds 0.05 mlU/mg ⁇ If multiple peaks are present, the nearest peak is used instead of the top peak, assuming an actual LH test in the vaginal discharge.
  • Figures 4 and 5 are graphs plotting urinary LH concentration and leucorrhea LH concentration against the number of days based on the urinary LH surge. It is known that the urinary LH surge appears several hours later than the blood LH surge, but the leucorrhea LH does not have a fixed relationship with the urinary LH surge, and in addition to a pattern in which the surge is observed on the same day, there is also a pattern in which the surge is observed at a later date.
  • Table 1 shows the date of ovulation estimated from the urinary LH surge and the percentage of observed specimens with an LH surge in the vaginal discharge.
  • the fertile window used the criteria established by Dunson et al. (*2).
  • the date of ovulation was determined based on the urinary LH surge, the percentage of specimens in which an LH surge in the vaginal discharge appeared in the fertile window was 86%.
  • the LH surge in vaginal discharge appears in the fertile window 86% of the time, which shows that the test strip of the present invention can fully function as a biomarker for predicting the day of ovulation.
  • the LH surge in the vaginal discharge appears in the fetile window 86% of the time, so it can function as a biomarker.
  • the LH surge in the vaginal discharge is significantly stronger, and by constructing an appropriate measurement system, it has the ability to distinguish with a sensitivity of 85% and a specificity of 77%.
  • vaginal discharge is collected non-invasively, but it has the advantage of being extremely light on the user, as it does not need to be collected consciously.
  • LH in vaginal discharge has not been thoroughly studied, and it was unclear how much LH is contained in vaginal discharge and whether its behavior is sufficient to predict the day of ovulation.
  • urine and vaginal discharge were collected from 29 subjects for 10 days from 10 to 19 days after the start of menstruation, and LH in the urine and vaginal discharge of the subjects was measured and compared by ELISA.
  • urinary LH and vaginal discharge LH behave in the same way in various aspects such as concentration and surge day, but it is considered that it is fully possible to predict the day of ovulation by measuring LH in the vaginal discharge.
  • Example 1 and “Example 2” were prepared as test strips according to the present invention, and their performance was examined.
  • the LH standard solution was a casein blocking buffer solution of LH.
  • the positive specimen solution was "Lumipulse Presto LH LH Calibrator (250 mIU)" (Fujirebio Inc.: CODE No. 291573), and the dilution solution was 1% casein, 100 mM borate, pH 8.5.
  • the positive specimen solution was diluted with the dilution solution to an arbitrary concentration to prepare a standard solution.
  • Example 1 The test strip of Example 1 is The device comprises a first member that contacts vaginal discharge, a second member that contains a labeled antibody that recognizes luteinizing hormone in vaginal discharge, and a third member that has an indicator that contains a capture antibody,
  • the capture antibody is capable of capturing a complex formed by the binding of the labeled antibody with the luteinizing hormone,
  • the device is configured so that luteinizing hormone in vaginal discharge moves from the first member through the second member to the display portion of the third member; and
  • the indicator of the third member was configured to develop a color when the capture antibody captured the complex.
  • Example 1 (Spec 1)
  • the length of the test strip in Example 1 was 12 mm, and the width was 3 mm.
  • the thickness of the sample pad as the first member was 0.1 mm
  • the thickness of the conjugate pad as the second member was 0.55 mm
  • the thickness of the membrane as the third member was 0.1 mm
  • the total thickness of the first to third members was 0.75 mm.
  • the average fiber diameter of the fibers constituting the first member was about 2 ⁇ m
  • the average fiber diameter of the second member was about 20 ⁇ m.
  • the labeled antibody in the conjugate pad had red nanobeads with a particle size of 335 nm (product name: NanoAct, manufactured by Asahi Kasei Corporation) as a coloring agent.
  • Example 2 (Spec 2)
  • the dimensions of the test strip and the first to third members of Example 2 were similar to those of Example 1.
  • the labeled antibody in the conjugate pad of Example 2 contained blue nanobeads with a particle size of 320 nm (product name: NanoAct, manufactured by Asahi Kasei Corporation) as a coloring agent.
  • LH is a glycoprotein composed of two subunits, ⁇ and ⁇ , and these subunits separate after the LH surge.
  • the antibody used in Example 1 only binds to the combination of ⁇ and ⁇ subunits ( ⁇ - ⁇ ), whereas the antibody used in Example 2 can bind to the combination of ⁇ and ⁇ subunits ( ⁇ - ⁇ ) as well as the ⁇ subunit.
  • Example 2 a blue color that is faint but easy to see was used, and the amount of labeled antibody was doubled, compared to Example 1.
  • Sensitivity test A standard solution containing various concentrations of LH was dropped twice at 24 ⁇ L onto the sample pad of the test strip of the above-mentioned Example 1 and Example 2, and the color change of the display was confirmed after 30 minutes. The difference between Example 1 and Example 2 is that the detection accuracy is improved, but the visibility is also improved, so the probability that the wearer can judge for himself is improved.
  • Example 1 coloring of the display could be confirmed when the LH concentration was 0.5 or 1.0 mIU/mL or higher.
  • Example 1 a proportional relationship was confirmed between LH concentration and color intensity at least in the concentration range of 0.5 to 1 IU/mL.
  • Example 2 coloring of the display could be confirmed when the LH concentration was 0.05 or 0.1 mIU/mL or higher.
  • Example 2 a proportional relationship was confirmed between LH concentration and color intensity at least in the concentration range of 0.05 to 1.0 mIU/mL.
  • test strip of the present invention showed good color intensity over a wide range of LH concentrations.
  • the strip of Example 2 (Example 2) showed better color intensity than the strip of Example 1 (Example 1).
  • Examples 3 to 4>> In Examples 3 and 4, the relationship between the width of the test strip and the visibility of the color was examined.
  • the test strip of Example 3 had a width of 5 mm, and the test strip of Example 4 had a width of 3 mm.
  • the width of the test strip means the length in the direction perpendicular to the longitudinal direction of the test strip (particularly the traveling direction of the vaginal discharge) in the overall plane of the test strip.
  • Example 3 Vaginal discharge collected from three subjects over a period of 10 to 12 days was applied to the sample pad of the test strip of Example 3 or 4, which has the same structure as Example 2 above, and the color change in the display area was observed.
  • test strip of Example 4 which had a width of 3 mm, showed better visibility than the test strip of Example 3, which had a width of 5 mm.
  • test strip of Example 4 the relatively narrow width of the test strip improved the flow of the sample.
  • the visibility was improved as a result of a relatively increased amount of vaginal discharge (and its components) reaching the display area, which is the color-producing area.

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Abstract

排卵日予測のための新たなツールとして用いることができるテストストリップを提供する。 おりもの中の黄体形成ホルモンを検出するためのイムノクロマト法を用いたテストストリップであって、　０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する、 テストストリップ。

Description

おりもの用テストストリップ
　本発明は、おりもの用テストストリップに関する。
　排卵日を事前に把握することは妊娠を希望する女性にとって重要である。従来、排卵日予測法として、尿中の黄体形成ホルモン（ＬＨ）を検査する方法及びそのキットが広く用いられている。
　また、液体試料中の分析物の存在を検出するためのラテラルフローアッセイが知られている（特許文献１）。
特表２００７－５２６４４３号公報
　本発明は、排卵日予測のための新たなツールとして用いることができるテストストリップを提供することを目的とする。
　本発明の目的は、下記の態様を含む本発明によって解決できる：
＜態様１＞
　おりもの中の黄体形成ホルモンを検出するためのイムノクロマト法を用いたテストストリップであって、
　０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する、
テストストリップ。
＜態様２＞
　前記テストストリップが、５ｍｍ以下の幅を有する、
態様１に記載のテストストリップ。
＜態様３＞
　前記テストストリップが、３ｍｍ以下の幅を有する、
態様１に記載のテストストリップ。
＜態様４＞
　前記テストストリップが、
　おりものに接触する第１部材
　おりもの中の黄体形成ホルモンを認識する標識抗体を含有する、第２部材、及び
　捕捉抗体を含有する表示部を有する、第３部材
を有しており、
　前記捕捉抗体は、前記標識抗体と黄体形成ホルモンとの結合により形成される複合体を捕捉することができ、
　前記おりもの中の黄体形成ホルモンが、前記第１部材から、前記第２部材を介して、前記第３部材の前記表示部に移動するように構成されており、かつ、
　前記捕捉抗体が前記複合体を捕捉することによって、前記第３部材の前記表示部が呈色するように構成されている、
態様１～３のいずれか一項に記載のテストストリップ。
＜態様５＞
　前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材が、この順番で、少なくとも部分的に互いに重なり合って積層されており、
　前記積層方向における、前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材の厚みの合計が、１．５ｍｍ以下である、
態様４に記載のテストストリップ。
＜態様６＞
　膣に直接に接触させて用いるための、態様５に記載のテストストリップ。
＜態様７＞
　前記テストストリップの表と裏とを視認によって区別できるように構成されている、態様４～６のいずれか一項に記載のテストストリップ。
＜態様８＞
　前記第１部材が、０．５～５μｍの平均繊維径を有する繊維からできており、
　前記第２部材が、１０～４０μｍの平均繊維径を有する繊維からできており、かつ
　前記第１部材の繊維の平均繊維径が、前記第２部材の繊維の平均繊維径よりも小さい、
態様４～７のいずれか一項に記載のテストストリップ。
＜態様９＞
　前記第１部材を構成する繊維の平均繊維径Ｒ１と、前期第２部材を構成する繊維の平均繊維径Ｒ２とが、５≦（Ｒ２／Ｒ１）≦２０の関係を満たす、態様４～８のいずれか一項に記載のテストストリップ。
＜態様１０＞
　少なくとも下記の１つを満たす、態様４～９のいずれか一項に記載のテストストリップ：
（ａ）前記第２部材が、１００ｇｓｍ以上の目付を有する、
（ｂ）前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材の前記厚みの合計が１．５ｍｍ以下であり、前記第２部材の厚みが、この厚みの合計の３０％以上を占める、
（ｂ）前記第２部材が、０．０５～０．８０ｇ／ｍ３の密度を有する。
＜態様１１＞
　前記標識抗体が、１０ｎｍ～５００ｎｍの粒径を有する着色剤を有する、
態様４～１０のいずれか一項に記載のテストストリップ。
＜態様１２＞
　前記標識抗体が、２５０ｎｍ～５００ｎｍの粒径を有する着色剤を有する、
態様４～１０のいずれか一項に記載のテストストリップ。
＜態様１３＞
　サンプルパッドである前記第１部材に、界面活性剤が塗布されている、
態様４～１２のいずれか一項に記載のテストストリップ。
＜態様１４＞
　サンプルパッドである前記第１部材が、ホウ素化合物及びレクチンを含む、
態様４～１３のいずれか一項に記載のテストストリップ。
　本発明によれば、排卵日予測のための新たなツールとして用いることができるテストストリップを提供できる。
図１は、本発明に係るテストストリップの感度試験の結果を示す写真である。 図２は、本発明に係るテストストリップの発光強度試験の結果を示す写真である。 図３－１は、本発明に係るテストストリップの具体的な構成に関する概略図である。 図３－２は、本発明に係るテストストリップの具体的な構成に関する概念図である。 図４は、尿中ＬＨサージを軸とした日数に対して、尿中ＬＨ濃度及び帯下中ＬＨ濃度をそれぞれプロットしたグラフである。 図５は、尿中ＬＨサージを軸とした日数に対して、尿中ＬＨ濃度及び帯下中ＬＨ濃度をそれぞれプロットしたグラフである。 図６は、帯下中ＬＨサージ日付近のＬＨ濃度を示すグラフである。 図７は、ＲＯＣ解析の結果を示すグラフである。
　本テストストリップは、おりもの中のＬＨを信頼性高く検出することができるので、排卵日予測のための新たなツールとして用いることができる。具体的には例えば、おりものを検体としてＬＨサージを検出するためのバイオマーカーとして用いることができる。
　以下で、本発明の詳細について記載する。
＜態様１＞
　おりもの中の黄体形成ホルモンを検出するためのイムノクロマト法を用いたテストストリップであって、
　０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する、
テストストリップ。
　上述のとおり、従来の排卵日予測法では尿を検出対象とする方法が一般的であった。これに対して、本件発明者は、排卵日予測のための新たなツールの開発のために、膣排出物であるおりものに着目した。
　おりもの中の黄体形成ホルモンについては、これまでに知見がほとんどなかった。また、おりものは粘性が比較的高く流動性が低い。さらに、おりものは、尿などと比較してサンプル量が少ない。そのため、特にイムノクロマト法を用いた検出において、従来の方法では、おりもの中のＬＨを検出することが容易でない場合があった。
　このような背景において本件発明者は、０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する本件ストストリップによれば、おりもの中の黄体形成ホルモンを信頼性高く検出することでき、かつ排卵日を信頼性高く予測できることを見出した。したがって、態様１に係るテストストリップによれば、排卵日予測のための新たなツールとして用いることができるテストストリップを提供することができる。
　前記テストストリップは、好ましくは０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．０ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する。
　当業者には容易に理解されることであるが、「０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモン（ＬＨ）を陽性として検出する」とは、ＬＨ濃度が当該濃度範囲に含まれる場合に陽性を示すことを意味しており、ＬＨ濃度が当該濃度範囲に含まれる場合に「のみ」陽性を示すという意味ではない。すなわち、例えば、０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～１０．０ｍＩＵ／ｍＬの濃度範囲にあるＬＨに対して陽性を示すテストストリップは、０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの濃度範囲に含まれるＬＨに対して陽性を示すので、本発明の範囲に含まれる。
　本発明の重要な点は、従来の尿ＬＨ検出とは異なり、テストストリップが、０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬという比較的低濃度の範囲に含まれるＬＨを陽性として検出するように構成されている点にある。
　なお、検出の信頼性を向上させる観点からは、本テストストリップが、０．００１ｍＩＵ／ｍＬ未満の範囲では陽性を検出しないことが好ましく、特には、０．００５ｍＩＵ／ｍＬ未満、０．０１ｍＩＵ／ｍＬ未満、０．０２ｍＩＵ／ｍＬ未満、０．０３ｍＩＵ／ｍＬ未満、０．０４ｍＩＵ／ｍＬ未満、又はさらには０．０５ｍＩＵ／ｍＬ未満の範囲では陽性を検出しないことが好ましい。
　上記態様１に係るテストストリップは、例えば、黄体形成ホルモンが上記の濃度範囲に含まれる場合に、呈色することによって、陽性検出を行うことができる。
　また、上記態様１に係るテストストリップでは、例えば、黄体形成ホルモンが上記の濃度範囲（例えば０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬ）に含まれる場合に、最大の呈色程度よりも低い程度で呈色できる。呈色の程度は、例えば、目視によって確認できる。
　上記の濃度範囲に含まれるＬＨを陽性として検出できるテストストリップは、例えば、黄体形成ホルモンに反応する物質（例えば抗体）の感度（例えば着色剤）を調節することによって作製でき、特には、黄体形成ホルモンを認識する抗体に付着した着色剤の大きさなどを調節することによって作製できる。
　前記テストストリップは、
より好ましくは０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～１．０ｍＩＵ／ｍＬ、
さらに好ましくは０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～０．５ｍＩＵ／ｍＬ、
さらにより好ましくは０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～０．２ｍＩＵ／ｍＬ
の黄体形成ホルモンを陽性として検出する。
　テストストリップの検出濃度は、ＬＨのカゼインブロッキングバッファー溶液を標準液として用いて測定することができる。
　ＬＨのカゼインブロッキングバッファー溶液は、例えば、下記の方法で調製できる：
（ａ）カゼインブロッキング剤（１．０％Ｃａｓｅｉｎ、１００ｍＭ　Ｂｏｒａｔｅ、ｐＨ８．５）を精製水に溶解させてブロッキングバッファーを作製する。
（ｂ）濃度既知のＬＨ溶液をブロッキングバッファーで希釈して、ＬＨの標準液を作製する。
　カゼインブロッキング剤は、例えば、下記のようにして調製できる：
（１．０％Ｃａｓｅｉｎ、１００ｍＭ　Ｂｏｒａｔｅ、ｐＨ８．５）
（ａ）１０００ｍｌのビーカーに８００ｇの蒸留水を添加する。
（ｂ）２．０ｍｌの２０％ＮａＯＨを添加する。
（ｃ）１０分攪拌する。
（ｄ）１０．０ｇのカゼイン粉末をゆっくり添加する。
（ｅ）３時間攪拌する。
（ｆ）６．１８ｇのホウ酸（＝１００ｍＭを添加する）。
（ｇ）１０分攪拌する。
（ｈ）２．５ｍｌの２０％ＮａＯＨを添加する。
（ｉ）蒸留水で１０００ｍｌまで希釈する。
（ｊ）１０分攪拌する。
（ｋ）ｐＨを測定する。
（ｌ）フィルターユニット（孔径０．４５μｍ）を用いてろ過する
（ｍ）３０℃で２４時間にわたって熱処理する。
（ｎ）保存用に１５ｍｌ又は５０ｍｌの容器に分注する。
（ｏ）－８０℃で保存する。
　なお、従来の尿中ＬＨ検査法は、本発明に係る０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬという濃度範囲よりもはるかに高い濃度範囲を陽性として検出することを想定している。また血液中については採取し、検出することは可能であるが、血を取る際に痛みが伴ったり、採取時に身体を傷つけてしまうため、簡便ではない。
　例えば、従来文献（Ｂｉｏｅｎｇ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，２０１７，２（３）：２３８－２４６）によれば、尿中の自然なＬＨサージ濃度は２０～１００ｍＩＵ／ｍｌである。
　また、従来の尿検体を用いた黄体形成ホルモンキットは、尿中の黄体形成ホルモンの濃度として２０ｍＩＵ／ｍＬ～１００ｍＩＵ／ｍＬを、検出感度の範囲としている（厚生労働省　薬生機発０２２２第１号、平成２８年２月２２日）。
　また、下記の文献は、尿及び血中ホルモンに関する文献であり、月経サイクルにおける尿中の生殖ホルモンのレベルの研究に関するものであり、排卵日の前日に、合計ＬＨ値のメジアン値が３８．３（ｍＩＵ／ｍｌ）であったことを記載している（Ｔａｂｌｅ２）：
「Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｎｓｔｒｕａｌ　ｃｙｃｌｅ：　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｕｒｉｎａｒｙ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｄ　ｔｒｕｅ　ｏｖｕｌａｔｉｏｎ」、Ｔｈｅ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｃａｒｅ，２０１５；Ｅａｒｌｙ　Ｏｎｌｉｎｅ：１－１３。
　また、下記の文献は、尿及び血中ホルモンに関する文献であり、女性の排卵期におけるＬＨ参考基準範囲として、８～１００（ｍＩＵ／ｍＬ）を記載している：
「関西医科大学＿内分泌基準値一覧」
　さらに、下記の文献は、ベースラインＬＨ値として６．６９（±５．２２）（ｍＩＵ／ｍｇ　Ｃｒ）を記載しており、ＬＨピーク値として４１．２（±２０．０）（ｍＩＵ／ｍｇ　Ｃｒ）を記載している：
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｕｒｉｎａｒｙ　ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｓｕｒｇｅ　ｉｎ　ｙｏｕｎｇ　ｏｖｕｌａｔｏｒｙ　ｗｏｍｅｎ」Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．２００７　Ｓｅｐ；８８（３）；６８４―９０
＜態様２＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様（態様２）では、テストストリップが、５ｍｍ以下の幅を有する。
　テストストリップの幅は、１ｍｍ～１０ｍｍであってよいが、好ましくは５ｍｍ以下である。テストストリップの幅の上限は、さらには４ｍｍ以下であってよい。特に好ましくは、テストストリップの幅が、１ｍｍ以上５ｍｍ未満、１．５ｍｍ～４．５ｍｍ、又はさらには２ｍｍ～４ｍｍである。テストストリップの幅がこれらの範囲にある場合には、呈色反応などの特に良好な視認性が得られることがある。
＜態様３＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様では、テストストリップが、３ｍｍ以下の幅を有する。
　テストストリップの幅は、使用者の視認性や加工性の観点からは、好ましくは２ｍｍ以上である。特に好ましくは、テストストリップの幅は、２～３ｍｍである。
　態様２及び態様３に係るテストストリップでは、テストストリップの幅が５ｍｍ以下、又はさらには３ｍｍ以下に低減されているので、検出のために保持される必要のある液量が、比較的低減されている。したがって、態様２又はさらには態様３に係るテストストリップによれば、量が少なく粘性が高くかつＬＨ量が少ないおりものを検出対象とした場合であっても、良好にＬＨの検出を行うことができる。
＜態様４＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様では、テストストリップが、
　おりものに接触する第１部材
　おりもの中の黄体形成ホルモンを認識する標識抗体を含有する、第２部材、及び
　捕捉抗体を含有する表示部を有する、第３部材
を有しており、
　前記捕捉抗体は、前記標識抗体と黄体形成ホルモンとの結合により形成される複合体を捕捉することができ、
　前記おりもの中の黄体形成ホルモンが、前記第１部材から、前記第２部材を介して、前記第３部材の前記表示部に移動するように構成されており、かつ、
　前記捕捉抗体が前記複合体を捕捉することによって、前記第３部材の前記表示部が呈色するように構成されている。
　態様４に記載のテストストリップによれば、呈色反応を介して、簡便かつ迅速に黄体形成ホルモンの検出を行うことができる。
　テストストリップの測定原理を、具体例を用いて説明する。例示的な態様では、例えば、標識抗体が、着色剤標識抗ヒト黄体形成ホルモンマウスモノクローナル抗体であり、捕捉抗体が、抗ヒト黄体形成ホルモンマウスモノクローナル抗体である。第１部材に接触した検体中にヒト黄体形成ホルモン（ｈＬＨ）が存在すると、第２部材中で標識抗体がｈＬＨと反応し、抗原－抗体反応に基づく複合体を形成する。この複合体は、第３部材の表示部にまで移動し、そこに固定的に結合している捕捉抗体に捕捉され、その結果、表示部が、着色剤（色素）に基づいて呈色する。
　なお、抗原の移動方向における表示部の下流側に、第２表示部（コントロール部）を設けることができる。このコントロール部には、上記の捕捉抗体とは別の第２の捕捉抗体（例えばウサギ抗マウス免疫グロブリンポリクローナル抗体）が固定的に結合している。この第２の捕捉抗体は、標識抗体を認識できる。抗原と複合体を作らない標識抗体は、表示部で捕捉されずにこれを通過し、コントロール部で捕捉されるので、その結果、コントロール部が、着色剤に基づいて呈色する。
　この態様では、陽性の場合に、表示部及びコントロール部が呈色し、陰性の場合には、コントロール部のみが呈色する。
　テストストリップの構成の詳細については後述する。
＜態様５＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様では、前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材が、この順番で、少なくとも部分的に互いに重なり合って積層されており、
　前記積層方向における、前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材の厚みの合計が、１．５ｍｍ以下である。
　上述のとおり、おりものは粘性が比較的高く流動性が低い。また、おりものは、尿などと比較して量が少ない。そのため、特にイムノクロマト法を用いた検出において、従来の方法では、おりもの中のＬＨを検出することが容易でない場合があった。
　さらに、本件発明者らは、おりもの中ＬＨは尿中ＬＨと比較して量が少ないことを見出した。従来のテストストリップでは、おりもの中のＬＨを検出することは容易でない。
　これに対して、態様５に係るテストストリップでは、テストストリップを構成する部材の厚みが低減されているので、検出のために保持される必要のある液量が、比較的低減されている。したがって、態様５に係るテストストリップによれば、量が少なく粘性が高くかつＬＨ量が少ないおりものを検出対象とした場合であっても、良好にＬＨの検出を行うことができる。
　各部材の厚み（メンブレン厚）の好適範囲は、９０～２３０μｍ、より好ましくは１００～２２０μｍである。特には、各部材の厚み（メンブレン厚）の好適範囲は、１６０～２３０μｍ、より好ましくは１８０～２２０μｍである　
＜態様６＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様は、膣に直接に接触させて用いるための、態様５に記載のテストストリップである。
　テストストリップを膣に直接に接触させて用いる場合には、使用者が自分で検知結果を確認できる簡便性が得られる。一方で、目視で確認しにくい部位のため、手探りで使用すると粘膜を傷つけるおそれがある。
　これに対して、態様５に係る発明では、排泄されたおりもののＬＨを膣から直接採取でき、かつ精度が確保されるとともに、比較的薄い構成を有しているので、粘膜を傷つけるおそれが低減されている。
＜態様７＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様（態様７）では、テストストリップが、テストストリップの表と裏とを視認によって区別できるように構成されている。これによれば、テストストリップの使用者はおりものが適用されるべきストリップの側を判断できるので、誤使用や誤検出を防ぐことができる。
＜態様８＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様（態様８）では、
　前記第１部材が、０．５～５μｍの平均繊維径（又は０．０１～０．１ｄｔｅｘの繊度）を有する繊維からできており、
　前記第２部材が、１０～４０μｍの平均繊維径（又は２～６ｄｔｅｘの繊度）を有する繊維からできており、
　前記第１部材の繊維の平均繊維径が、前記第２部材の繊維の平均繊維径よりも小さい。
　上述のとおり、おりものは粘性が比較的高く流動性が低い。そのため、特にイムノクロマト法を用いた検出において、おりもの中のＬＨを検出することが容易でない場合があった。また、本件発明者らは、おりもの中ＬＨは尿中ＬＨと比較して量が少ないことを見出した。
　これに対して、態様８に係るテストストリップでは、テストストリップを構成する部材の平均繊維径が最適化されているので、少量かつ粘性の高いおりものであっても、検出部位（表示部）にまで効率的に移動させることができ、良好に検出を行うことができる。
　第１部材は、好ましくは１～４μｍの平均繊維径、より好ましくは１．５～３μｍの平均繊維径、を有する繊維からできている。
　第１部材は、好ましくは０．０２～０．０８ｄｔｅｘの繊度、より好ましくは０．０３～０．０６ｄｔｅｘの繊度、を有する繊維からできている。
　第２部材は、好ましくは１５～３０μｍの平均繊維径、より好ましくは１８～２５μｍの平均繊維径、を有する繊維からできている。
　第２部材は、好ましくは２．５～５ｄｔｅｘの繊度、より好ましくは３～５ｄｔｅｘの繊度、を有する繊維からできている。
　好ましくは、第１部材の繊維の平均繊維径が、第２部材の繊維の平均繊維径よりも小さい。この場合には、特に比較的粘性の高いおりものに対して、第１部材における吸収をさらに向上できる。
　第１部材及び第２部材を構成する繊維の平均繊維径は、走査型電子顕微鏡によって計測でき、Ｎ＝３０以上の繊維で計測した繊維径の平均値を平均繊維径とすることができる。なお、断面で計測する場合にはカットの際に繊維形状が変化している可能性があるので注意する。また、平面方向で測定する場合には溶着している場合もあるので、溶着部など形状が変化している部分は避けて測定を行う。
＜態様９＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様では、前記第１部材を構成する繊維の平均繊維径Ｒ１と、前期第２部材を構成する繊維の平均繊維径Ｒ２とが、５≦（Ｒ２／Ｒ１）≦２０の関係を満たす。　
　この態様によれば、テストストリップを構成する第１部材と第２部材の平均繊維径の相対的な関係が最適化されているので、その結果として、少量かつ粘性の高いおりものであっても、検出部位（表示部）にまで効率的に移動させることができ、良好に検出を行うことができる。すなわち、特には粘性の高いおりものに対して、第１部材における吸収性が向上する。また、第２部材において、標識抗体の担持率が向上するという効果も得られる。
　より好ましい態様では、
６≦（Ｒ２／Ｒ１）≦１８
７≦（Ｒ２／Ｒ１）≦１６
８≦（Ｒ２／Ｒ１）≦１４
９≦（Ｒ２／Ｒ１）≦１２
を満たす。
＜態様９－２＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様では、前記第１部材を構成する繊維の繊度Ｄ１と、前期第２部材を構成する繊維の繊度Ｄ２とが、５０≦（Ｄ２／Ｄ１）≦２００の関係を満たす。
　この態様によれば、テストストリップを構成する第１部材と第２部材の繊度の相対的な関係が最適化されているので、その結果として、少量かつ粘性の高いおりものであっても、検出部位（表示部）にまで効率的に移動させることができ、良好に検出を行うことができる。
　より好ましい態様では、
６０≦（Ｄ２／Ｄ１）≦１９０
７０≦（Ｄ２／Ｄ１）≦１８０
８０≦（Ｄ２／Ｄ１）≦１７０
９０≦（Ｄ２／Ｄ１）≦１６０
を満たす。
＜態様１０＞
　本開示は、少なくとも下記の１つを満たす、態様３～９のいずれかのテストストリップを含む：
（ａ）前記第２部材が、１００ｇｓｍ以上の目付を有する、
（ｂ）前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材の前記厚みの合計が１．５ｍｍ以下であり、前記第２部材の厚みが、この厚みの合計の３０％以上を占める、
（ｂ）前記第２部材が、０．０５～０．８０ｇ／ｍ３の密度を有する。
　態様１０に記載の発明によれば、第２部材（コンジュゲートパッド）の目付、厚み、及び／又は密度が最適化されており、それによって標識抗体の拡散性などが向上している。したがって、粘度が比較的高いおりものであっても、良好に検出ができるようになっている。
＜態様１１＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様（態様１１）では、前記標識抗体が、１０ｎｍ～５００ｎｍの粒径を有する着色剤を有する。
　ＬＨに結合する標識抗体の着色剤が１０ｎｍ～５００ｎｍの粒径を有する場合には、十分な検出性を確保できる。
　このような着色剤としては、金コロイド、及びセルロースナノ粒子が挙げられる。金コロイドは、一般的に、約４０～１００ｎｍの粒径を有する。
＜態様１２＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様（態様１２）では、前記標識抗体が、２５０ｎｍ～５００ｎｍ（好ましくは２８０～４５０ｎｍ、更に好ましくは３００ｎｍ～４００ｎｍ）の粒径を有する着色剤を有する。このような着色剤としては、セルロースナノ粒子が挙げられる。
　上述のとおり、本件発明者らは、おりもの中ＬＨは尿中ＬＨと比較して量が少ないことを見出した。この場合、従来の（特に尿中ＬＨを対象とする）テストストリップでは、おりもの中のＬＨを検出することは容易でない。
　これに対して、態様１２に係るテストストリップでは、ＬＨに結合する標識抗体が比較的大きい粒径を有する着色剤を有しているので、検出の視認性が向上している。したがって、態様１２に係るテストストリップによれば、ＬＨ量が少ないおりものを検出対象とした場合であっても、良好にＬＨの検出を行うことができる。
＜態様１３＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様（態様１３）では、サンプルパッドである前記第１部材に、界面活性剤が塗布されている。
　サンプルパッドである第１部材に界面活性剤が塗布されている場合には、対象物（おりもの）とサンプルパッドとの間の最適な親和性を提供できるという効果が得られる。
＜態様１４＞
　本開示に係るテストストリップの１つの態様（態様１４）では、サンプルパッドである前記第１部材が、ホウ素化合物及びレクチンを含む。
　態様１４によれば、ムチンの抗原抗体反応の阻害抑制が可能になる。
＜テストストリップの具体例＞
　本発明のテストストリップについて、図面を参照して具体的に説明する。なお図面は必ずしも縮尺どおりではなく、本発明を限定するものではない。
　図３－１のテストストリップ（検査部材）６０は、排泄物（おりもの）に基づいて呈色しうる表示部（６２Ａ及び６２Ｂ）を有する。テストストリップ６０は、おりものを接触させる接触部（第１部材、例えばサンプルパッド）６４を有する。テストストリップ６０は、おりものに含まれる成分（以下、おりもの成分）が移動する移動部を有してよい。移動部では、おりもの成分が毛細管現象により移動してよい。移動部は、おりもの成分が接触部６４から表示部（６２Ａ及び６２Ｂ）まで移動する表示移動部６６Ａと、おりもの成分が表示部（６２Ａ及び６２Ｂ）から離れる方向へ移動する終端移動部６６Ｂとを有してよい。終端移動部は、表示部（６２Ａ及び６２Ｂ）を通過したおりもの成分等が移動する部分である。
　おりものが接触する接触部（第１部材）６４は、例えばパッド（サンプルパッド又は検体パッドと称されてよい）により構成されてよい。接触部６４に接触したおりもの中のおりもの成分は、例えばパッド中を移動して、第２部材（例えばコンジュゲートパッド）に移行する。コンジュゲートパッドは、おりもの中の黄体形成ホルモンを認識する標識抗体を含有する。コンジュゲートパッド（第２部材）は、図３－１では図示されていないが、例えば、サンプルパッド（第１部材）と厚み方向で重なり合うように配置されてよい。おりもの成分、おりもの成分に含まれる黄体形成ホルモンと抗原抗体反応を起こして形成された複合体、及び、標識抗体が、毛細管現象により、移動部６６Ａを移動してよい。これらの物質が移動する部分は、例えばメンブレンにより構成されてよい。表示部は、形成された複合体を捕捉（結合）する補足抗体を含有する部位６２Ａを有する。この部位は、複合体が捕捉抗体により補足されることで呈色する。表示部のこの部位６２Ａは、テストラインと称されてよい。
　表示部は、複合体を捕捉する捕捉抗体を含有する部位６２Ａとは別の捕捉抗体を含む部位６２Ｂを有してよい。部位６２Ｂの捕捉抗体は、部位６２Ａで捕捉された複合体と別の複合体を捕捉してもよいし、標識抗体を捕捉してよい。部位６２Ｂは、複合体又は標識抗体が捕捉されることで呈色する。標識抗体を捕捉する部位６２Ｂは、コントロールラインと称されてよい。表示部６２を通過したおりもの成分（すなわち、捕捉抗体により補足されなかった成分）は、終端移動部６６Ｂを移動する。終端移動部６６Ｂは、メンブレンにより構成されてよい。また、終端移動部６６Ｂは、表示部６２を通り過ぎたおりもの成分を吸収する吸着パッドを有してよい。吸着パッドの代わりに、表示部６２を通り過ぎたおりもの成分は、吸収コアに吸収されてよい。イムノクロマト法が用いられる場合、表示部６２と接触部６４とは異なる位置に配置されている。従って、この場合、表示部６２と接触部６４とは異なる。
　テストストリップ（検査部材）６０は、標識抗体及び捕捉抗体などの物質を保持又は含有できる部材を有していればよく、例えば、紙、不織布、織布などのいずれかの材料により構成されてよい。
　テストストリップの概念図を、添付の図３―２に示す。テストストリップのその他の構成については、例えば、ＷＯ２０２１／１３２７２４Ａ１の記載を参照できる。
＜おりものから黄体形成ホルモンを検出する方法＞
　本開示は、イムノクロマト法を用いたテストストリップを用いておりものから黄体形成ホルモンを検出する方法を含み、この方法は、
　テストストリップにおりものを付着させる工程を含み、
　テストストリップにおいて、０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する。
　この方法におけるテストストリップ等の各構成要素の詳細については、テストストリップに関する上記の記載を参照できる。
　テストストリップにおりものを付着させる方法については特に限定されず、テストストリップに関する上記の記載を参照できる。例えば、上記態様４のテストストリップにおいて、第１部材（特にはサンプルパッド）におりものを直接付着させることによって、おりものをテストストリップに付着させることができる。好ましくは、テストストリップを膣（外陰部）に直接接触させる。
　上記方法の１つの実施態様では、０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～１．０ｍＩＵ／ｍＬ、又は０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～０．５ｍＩＵ／ｍＬ、又はさらには０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～０．２ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する。
　以下で、実施例を参照して、本発明を具体的に説明する。本発明はこれらの実施例によって限定されない。
＜実験例＞
　＜＜帯下中黄体形成ホルモン（ＬＨ）の排卵日予測バイオマーカーとしての可能性＞＞
　排卵日予測バイオマーカーとして帯下黄体形成ホルモン（ＬＨ）を用いることに関する試験を行った。
　排卵日を事前に把握することは妊娠を希望する女性（妊活女性）にとって重要である。利便性などの観点から現在最も広く用いられているのは尿中黄体形成ホルモン（ＬＨ）の検査キットである。尿中ＬＨの測定は検査キットに尿をかけて１５分程度で完了する比較的簡便なものである。しかし、毎日の測定は利用者に対して負担が大きく、妊活女性の尿中ＬＨ検査キット利用率は決して高くはない。そこで、新たな排卵日予測の手段を確立するために、測定検体として帯下に着目した。帯下は非侵襲的に採取可能というだけではなく、意識的に採取する必要のない点で、利用者の負担がきわめて小さい「気づいたら測定が終わっている検査」を実現し得る検体である。一方で、帯下は測定検体としての研究例が少なく、ＬＨをはじめとする排卵予測バイオマーカーの測定は報告されていない。そこで、帯下中ＬＨの特定を行い、バイオマーカーとしての可能性を検証した。
　試験の方法及び結果並びに検討及び結論を下記に示す。
＜Ｍｅｔｈｏｄｓ（試験方法）＞
●被験者のリクルーティング
　２０歳以上、４０歳未満の月経関係の疾病を有さない女性であり、未妊、経産は不問とした。
●被験者らの検体の回収
　被験者に尿の検体採取キット及び無香料のパンティライナーを支給し、月経後１０日目から月経後１９日目の尿、及びパンティライナーを回収した。パンティライナーからの液体の蒸発を防ぐため、パンティライナーは着脱後すぐに非透湿性フィルムに梱包した上で－１８℃以下で保管の上、－１５℃以下で輸送し回収した。
●パンティライナーからの帯下成分の抽出
　回収したパンティライナーの中心部を２ｃｍ２に切り取り、５００μｌのＰＢＳに含浸後、３６００ｒｐｍの遠心操作によって抽出液を回収、測定検体とした。
●検体の測定
　尿中及び帯下中のＬＨはＥｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ　Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ法）により測定を行った。また、検体の濃度の外的要因を除外するため、尿は尿中クレアチニン（ＥＬＩＳＡ法）、帯下は総タンパク量（ＢＣＡ　ａｓｓａｙ）により測定し、補正を行った。
●帯下サージの定義
　帯下中ＬＨサージは以下のように規定した。
□前日と比較し、２倍以上の濃度上昇を認め、かつ帯下中ＬＨ／総タンパク質が０．０５ｍｌＵ／ｍｇを超えた場合
□複数のピークが存在した場合、実際の帯下中ＬＨ検査を想定し、ピークトップではなく最も手前のピーク。　
●除外規定
　以下の条件のいずれかに合致したものは測定検体として除外した。
□回収期間に尿中ＬＨサージが現れなかった検体
□回収期間に尿中ＬＨサージと考えられる濃度上昇は見られたが、期間内に濃度が下がらなかった検体
□帯下の回収が出来ず、帯下中ＬＨのサージ開始日が判明しない検体
●分析に使用した検体数
□１６人
□２９検体
Ｒｅｓｕｌｔｓ（結果）
（１）図４及び図５は、尿中ＬＨサージを軸とした日数に対して、尿中ＬＨ濃度及び帯下中ＬＨ濃度をそれぞれプロットしたグラフである。尿中ＬＨは血中ＬＨと比較して数時間遅れでサージが現れることが知られているが、帯下中ＬＨは尿中ＬＨと定まった関係性をとらず、同じ日にサージが観測されるパターンの他に前後にサージがずれて観測されるパターンが存在した。
（２）表１は、尿中ＬＨサージから想定される排卵日と帯下中ＬＨサージの観測検体数の割合を示す。Ｆｅｒｔｉｌｅ　ＷｉｎｄｏｗはＤｕｎｓｏｎ（※２）らの報告によって定められた基準を用いた。排卵日を尿中ＬＨサージを基準として定めた場合にＦｅｒｔｉｌｅ　Ｗｉｎｄｏｗに帯下中ＬＨサージが現れる割合は８６％であった。
（＊２）Ｄ．Ｂ．Ｄｕｎｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．Ｄａｙ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙｅｓ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｐｒｅｇｎａｎｃｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｗｏ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｗｉｔｈ　ｉｍｐｅｒｆｅｃｔ　ｍｅａｓｕｒｅｓ　ｏｆ　ｏｖｕｌａｔｉｏｎ、Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ、１９９９；１４（７）：１８３５－１８３９
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　図４～図７で見られるとおり、おりもの中ＬＨサージは、Ｆｅｒｔｉｌｅ　Ｗｉｎｄｏｗに８６％の割合で現れるので、本発明に係るテストストリップは、排卵日予測のためのバイオマーカーとして十分に機能し得ることがわかる。
（３）サージ日とその前日とを比較し、サージの強さを測定した。その結果、帯下中ＬＨは０．１５ｍＩＵ／ｍｇの閾値において感度８５％特異度７７％であった。また、ＲＯＣ解析の結果、ＡＵＣは０．７９であった。図６は、帯下中ＬＨサージ日付近のＬＨ濃度を示すグラフである。図７は、ＲＯＣ解析の結果を示すグラフである。
　Ｄｉｓｕｃｕｓｓｉｏｎ＆Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ（検討及び結論）
　帯下中ＬＨサージはＦｅｔｉｌｅ　Ｗｉｎｄｏｗに８６％の割合で現れることから、バイオマーカーとして十分機能しうる。また、帯下中ＬＨサージは有意に強いものであり、適切な測定系の構築により、感度８５％、特異度７７％にて鑑別する性能を有していた。
　本研究は、ウェアラブル型の帯下中ＬＨ測定系の可能性のうち、生物学的な面での可能性を示すものであり、検査デバイスの開発により、妊活女性がより負担なく妊娠する可能性が高まると考えられる。
＜結果のまとめ＞
　排卵日を事前に把握することは妊娠を希望する女性にとって重要である。現状の排卵日予測は超音波を用いた直接的な観測法から、基礎体温や羊歯状結晶観測など様々な手法が存在するが、利便性などの観点から尿中黄体形成ホルモン（ＬＨ）の検査が最も広く使われている。尿中ＬＨの測定は検査キットに尿をかけて１５分程度で完了する比較的簡便なものではあるが、それでも毎日の測定は利用者に対して負担が大きく、妊活女性の尿中ＬＨ検査キット利用率は決して高くはない。そこで、当研究グループでは検体として帯下に着目した。帯下は非侵襲的に採取可能なだけでなく、意識的に採取する必要のない点で、利用者の負担が極めて小さいというメリットが挙げられる。しかし、帯下中のＬＨについては十分に研究がされておらず、帯下中にＬＨがどれくらいの量含まれており、その挙動は排卵日の予測に十分なものなのかは明らかになっていなかった。本試験では、上記のとおり、２９人の被験者について、月経開始１０日後から１９日後まで１０日間の尿および帯下を回収し、ＥＬＩＳＡ法によって被験者の尿中および帯下中ＬＨを測定、比較を行った。結果、帯下中のＬＨにも尿中と同様のサージが観測され、尿中ＬＨ検査キットの尿中ＬＨサージが排卵日の１日前と仮定した場合、妊娠確率の高い「排卵５日前から０日前」に帯下中ＬＨサージが現れた割合は８６％であった（上記表１）。また、帯下中ＬＨは尿中ＬＨと比較して量が少なく、検出には市販の尿中ＬＨ検査キットより高感度の検出系が必要であることも判明した。本試験の結果により、尿中ＬＨと帯下中ＬＨは濃度やサージ日など様々な点において同じ挙動を示したとは言えないものの、帯下中ＬＨを測定することによる排卵日予測は十分に可能であると考えられる。
＜＜実施例１～２＞＞
　実施例１～２では、本発明に係るテストストリップとして、「実施例１」及び「実施例２」を作製し、性能を調べた。
（標準液Ａ）
　ＬＨ標準溶液は、ＬＨのカゼインブロッキングバッファー溶液を用いた。具体的には、陽性検体溶液として「ルミパルスプレストＬＨ　ＬＨキャリブレータ（２５０ｍＩＵ）」（富士レビオ株式会社：ＣＯＤＥ　Ｎｏ．２９１５７３）を用い、希釈溶液として１％ｃａｓｅｉｎ、１００ｍＭ　Ｂｏｒａｔｅ、ｐＨ８．５を用い、陽性検体溶液を希釈溶液で任意の濃度に希釈して標準溶液とした。
（実施例１）
　実施例１のテストストリップは、
　おりものに接触する第１部材
　おりもの中の黄体形成ホルモンを認識する標識抗体を含有する第２部材、及び
　捕捉抗体を含有する表示部を有する第３部材
を有しており、
　捕捉抗体は、標識抗体と黄体形成ホルモンとの結合により形成される複合体を捕捉することができ、
　おりもの中の黄体形成ホルモンが、第１部材から、第２部材を介して、第３部材の表示部に移動するように構成されており、かつ、
　捕捉抗体が複合体を捕捉することによって、第３部材の前記表示部が呈色するように構成されていた。
（実施例１（スペック１））
　実施例１のテストストリップの長さは１２ｍｍであり、幅は３ｍｍであった。第１部材としてのサンプルパッドの厚みは０．１ｍｍであり、第２部材としてのコンジュゲートパッドの厚みは０．５５ｍｍであり、及び第３部材としてのメンブレンの厚みは０．１ｍｍであり、第１～第３部材の厚みの合計は０．７５ｍｍであった。第１部材を構成する繊維の平均繊維径は約２μｍであり、第２部材の平均繊維径は約２０μｍであった。コンジュゲートパッド中の標識抗体は、着色剤として、赤色の粒径３３５ｎｍのナノビーズ（製品名：ＮａｎｏＡｃｔ、旭化成社製）を有していた。
　第１部材及び第２部材を構成する繊維の平均繊維径は、所定の大きさにカットしたサンプルを走査型電子顕微鏡（日立ハイテック社製ＦｌｅｘＳＥＭ１０００）にセットして繊維径を測定し、Ｎ＝３０以上の繊維径の計測値を平均することによって得た。
（実施例２（スペック２））
　実施例２のテストストリップの寸法及び第１～第３部材の寸法は、上記実施例１と同様であった。実施例２のコンジュゲートパッド中の標識抗体は、着色剤として、青色の粒径３２０ｎｍのナノビーズ（製品名：ＮａｎｏＡｃｔ、旭化成社製）を有していた。
　さらに、実施例１及び実施例２で用いた標識抗体は、ＬＨの認識様式の点で異なっていた。ＬＨは、αとβの２つのサブユニットで構成される糖タンパクであり、ＬＨサージを超えるとこれらのサブユニットが分離する。実施例１で用いた抗体はαサブユニット及びβサブユニットが結合されたもの（α－β）のみに結合するのに対して、実施例２で用いた抗体は、αサブユニット及びβサブユニットが結合されたもの（α－β）にできるとともに、βサブユニットにも結合できる。
　また、実施例２は、実施例１と比較して、薄くても見やすい青色を採用しているとともに、標識抗体の量を２倍にしていた。
（感度試験）
　上記実施例１及び実施例２のテストストリップのサンプルパッド上に、種々の濃度のＬＨを含有する標準液を２４μＬ×２回、滴下し、３０分後に、表示部の呈色を確認した。実施例１と２の違いとしては検出精度も向上しているが、視認性も向上しているため着用者が自分で判断できる確率が向上している。
　結果を図１に示す。
　図１からもわかるとおり、実施例１は、ＬＨ濃度が０．５又は１．０ｍＩＵ／ｍＬ以上であった場合に、表示部における呈色を確認することができた。
　実施例１については、少なくとも０．５～１ＩＵ／ｍＬの濃度範囲において、ＬＨ濃度と呈色強度との間で比例関係を確認することができた。
　また、図１からもわかるとおり、実施例２は、ＬＨ濃度が０．０５又は０．１ｍＩＵ／ｍＬ以上であった場合に、表示部における呈色を確認することができた。
　実施例２については、少なくとも０．０５～１．０ｍＩＵ／ｍＬの濃度範囲において、ＬＨ濃度と呈色強度との間で比例関係を確認することができた。
＜比較＞
　実施例１及び実施例２のテストストリップについて、発色強度の比較を行った。
　結果を図２に示す。図２からわかるとおり、本発明に係るテストストリップは、広いＬＨ濃度範囲にわたって良好な発色強度を示した。実施例２のストリップ（実施例２）は、実施例１のストリップ（実施例１）よりも良好な発色強度を示した。
＜＜実施例３～４＞＞　
　実施例３～４では、テストストリップの幅と呈色の視認性との関係を調べた。実施例３のテストストリップは５ｍｍの幅を有しており、実施例４のテストストリップは３ｍｍの幅を有していた。なお、テストストリップの幅とは、テストストリップの全体的な平面において、テストストリップの長さ方向（特にはおりものの進行方向）に直交する方向での長さを意味する。
　３名の被験者からそれぞれ１０～１２日間にわたって採取したおりものを、上記実施例２と同様の構成を有する実施例３又は４のテストストリップのサンプルパッド上に付着させ、表示部における呈色を観察した。実施した検査の総数は、実施例３についてｎ＝２５、実施例４についてｎ＝２８であった。
　表示部における呈色について、コントロールラインがはっきり視認できた場合（〇）、コントロールラインは視認できるものの視認性がやや劣る場合（△）、の割合を算出した。結果を下記の表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　表２で見られるとおり、幅が３ｍｍであった実施例４に係るテストストリップは、幅が５ｍｍであった実施例３に係るテストストリップと比較して、より優れた視認性を示した。
　理論によって限定する意図はないが、テストストリップの幅が比較的狭いことによって、サンプルのフロー性が向上したと考えられる。すなわち、実施例４のテストストリップでは、呈色部位である表示部に到達するおりもの（及びその成分）成分が比較的増加した結果として、視認性が向上したと考えられる。

Claims (14)

  1. 　おりもの中の黄体形成ホルモンを検出するためのイムノクロマト法を用いたテストストリップであって、
    　０．０５ｍＩＵ／ｍＬ～２．５ｍＩＵ／ｍＬの黄体形成ホルモンを陽性として検出する、
    テストストリップ。
  2. 　前記テストストリップが、５ｍｍ以下の幅を有する、
    請求項１に記載のテストストリップ。
  3. 　前記テストストリップが、３ｍｍ以下の幅を有する、
    請求項１に記載のテストストリップ。
  4. 　前記テストストリップが、
    　おりものに接触する第１部材
    　おりもの中の黄体形成ホルモンを認識する標識抗体を含有する、第２部材、及び
    　捕捉抗体を含有する表示部を有する、第３部材
    を有しており、
    　前記捕捉抗体は、前記標識抗体と黄体形成ホルモンとの結合により形成される複合体を捕捉することができ、
    　前記おりもの中の黄体形成ホルモンが、前記第１部材から、前記第２部材を介して、前記第３部材の前記表示部に移動するように構成されており、かつ、
    　前記捕捉抗体が前記複合体を捕捉することによって、前記第３部材の前記表示部が呈色するように構成されている、
    請求項１又は２に記載のテストストリップ。
  5. 　前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材が、この順番で、少なくとも部分的に互いに重なり合って積層されており、
    　前記積層方向における、前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材の厚みの合計が、１．５ｍｍ以下である、
    請求項４に記載のテストストリップ。
  6. 　膣に直接に接触させて用いるための、請求項５に記載のテストストリップ。
  7. 　前記テストストリップの表と裏とを視認によって区別できるように構成されている、請求項４に記載のテストストリップ。
  8. 　前記第１部材が、０．５～５μｍの平均繊維径を有する繊維からできており、
    　前記第２部材が、１０～４０μｍの平均繊維径を有する繊維からできており、
    　かつ前記第１部材の繊維の平均繊維径が、前記第２部材の繊維の平均繊維径よりも小さい、
    請求項４に記載のテストストリップ。
  9. 　前記第１部材を構成する繊維の平均繊維径Ｒ１と、前期第２部材を構成する繊維の平均繊維径Ｒ２とが、５≦（Ｒ２／Ｒ１）≦２０の関係を満たす、請求項４に記載のテストストリップ。
  10. 　少なくとも下記の１つを満たす、請求項４に記載のテストストリップ：
    （ａ）前記第２部材が、１００ｇｓｍ以上の目付を有する、
    （ｂ）前記第１部材、前記第２部材、及び前記第３部材の厚みの合計が１．５ｍｍ以下であり、前記第２部材の厚みが、この厚みの合計の３０％以上を占める、
    （ｂ）前記第２部材が、０．０５～０．８０ｇ／ｍ３の密度を有する。
  11. 　前記標識抗体が、１０ｎｍ～５００ｎｍの粒径を有する着色剤を有する、
    請求項４に記載のテストストリップ。
  12. 　前記標識抗体が、２５０ｎｍ～５００ｎｍの粒径を有する着色剤を有する、
    請求項４に記載のテストストリップ。
  13. 　サンプルパッドである前記第１部材に、界面活性剤が塗布されている、
    請求項４に記載のテストストリップ。
  14. 　サンプルパッドである前記第１部材が、ホウ素化合物及びレクチンを含む、
    請求項４に記載のテストストリップ。
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