WO2023277369A1 - 매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 소독제 - Google Patents

매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 소독제 Download PDF

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백인혁
이건숙
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백인혁
이건숙
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Definitions

  • the present invention relates to an antiviral disinfectant containing a plum sugar extract as an active ingredient.
  • Plum is a substance that has been used since ancient times for the purpose of preventing and treating food poisoning and infectious diseases. Even now, many studies are being conducted for the purpose of food preservation, etc., and in particular, since it contains a lot of citric acid, malic acid, etc., its bactericidal power is widely known. Plum extract is known to be effective against all Gram-negative and positive bacteria such as E.
  • Influenza is a type of respiratory disease virus that spreads widely not only to humans but also to livestock such as pigs, chickens, ducks or horses, as well as various animals. Coronavirus is mainly infects children and young animals (Elsevier, 2008, 554 ; Advances in Virus Research, 2006, 66, 193 ⁇ 232), while CCV is mostly mild or asymptomatic. There are many cases, but sometimes it causes serious enteritis.
  • the disinfectant composition containing the sugar extract of the plum as an active ingredient has an inhibitory effect on various viruses, so that hand sanitizers or The present invention was completed by confirming that it can be used as a spray type indoor and outdoor disinfectant.
  • An object of the present invention is to provide an antiviral disinfectant containing a plum sugar extract as an active ingredient.
  • the present invention relates to an antiviral disinfectant characterized in that it contains plum sugar extract, wall paulownia extract, locust extract, butterbur extract, Chinese cabbage extract and asparagus extract.
  • the disinfectant is 10 to 20 parts by weight of Byeokpodong extract, 20 to 30 parts by weight of Akashi extract, 3 to 5 parts by weight of butterbur extract, 20 to 30 parts by weight of Chinese cabbage extract, and 10 to 15 parts by weight of asparagus extract based on 100 parts by weight of plum per extract. may be contained.
  • the disinfectant may be diluted in purified water 100 to 2000 times the weight immediately before use.
  • Citron essential oil may be contained in the antiviral disinfectant.
  • the citron essential oil may be mixed in an amount of 0.0001 to 0.1 parts by weight based on 100 parts by weight of the extract per plum.
  • Each of the extracts may be prepared by preparing each raw material sample, and extracting the raw material sample using water, C1 to C4 alcohol, or a mixed solution thereof as a solvent.
  • the solvent it is best to preferably use water.
  • the disinfectant is characterized in that there is an antibacterial effect.
  • the disinfectant may be a gel-type or spray-type formulation.
  • the plum sugar extract used in the present invention may be a liquid in which solids are removed from osmotic extraction by leaving the mixture of plum and sugars as it is.
  • a mixture of 50 to 200 parts by weight of saccharides based on 100 parts by weight of plums may be left as it is for 3 to 6 months, and the solids may be removed from the osmotic extraction.
  • the extraction temperature of the plum sugar extract is preferably 4 to 37 ° C, preferably 15 to 30 ° C.
  • any sugar having a sweet taste may be used, but at least one selected from the group consisting of sugar, powdered sugar, oligosaccharide, agave syrup, maple syrup, cactus sugar, and honey may be used.
  • sugars are mixed in less than 50 parts by weight based on 100 parts by weight of plum, fermentation is not performed and it is easy to spoil.
  • sugars are mixed in excess of 200 parts by weight based on 100 parts by weight of plums, sugars and juice extracted from plums may not be mixed due to over-adding of sugar components.
  • the extraction period is less than 3 months, it is easy to spoil afterwards, and if the extraction period exceeds 6 months, acetic acid fermentation or alcohol fermentation may proceed, and corruption may proceed depending on the storage place or environment.
  • the wall paulownia used in the present invention may contain at least one selected from branches, fruits, and leaves, and woody parts may be used as acacia.
  • Each solvent extract in the disinfectant may be mixed with the plum sugar extract after freeze-drying, but when the extract is extracted with water, it may be mixed directly with the plum sugar extract.
  • the solvent extract may be a liquid phase after adding 5 to 20 parts by weight of water compared to the raw material sample, followed by extraction by heating at 70 to 90 ° C. for 1 to 10 hours, and then removing the solids.
  • the citron hull essential oil used in the present invention is prepared by steam fumigation in a conventional method using citron rind as a raw material. It may be obtained by condensing the oil component after fumigating it through a distiller. In the present invention, commercially available products may be used.
  • the extract of Brussels sprouts extract, black locust extract, butterbur extract, Chinese cabbage extract, and asparagus extract can be prepared by the following methods.
  • each raw material sample may be prepared, and the raw material sample may be extracted using water, C1 to C4 alcohol, or a mixture thereof as a solvent, and the C1 to C4 alcohol may be methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, and isopropanol. It may be selected from the group consisting of butanol.
  • Extraction conditions of the raw material sample may be 1 minute to 48 hours at 20 ⁇ 100 °C. The above process may be repeated from 1 to 4 times.
  • an extraction device used at this time a conventional extraction device, an ultrasonic crushing extractor, or a fractionator may be used.
  • the solvent extract thus prepared may be subjected to hot air drying, reduced pressure drying or lyophilization to remove the solvent.
  • the solvent extract can be used after being purified using column chromatography.
  • the solvent extract is extracted by an organic solvent (alcohol, ether, acetone, etc.) according to a conventional method, partitioning hexane and water, column chromatography, etc., known methods used for separation and extraction of plant components alone or appropriately It can be used after fractionation or purification using a method that is combined in an appropriate way.
  • the chromatography is silica gel column chromatography, LH-20 column chromatography, ion exchange resin chromatography, medium pressure liquid chromatography chromatography), thin layer chromatography (TLC), silica gel vacuum liquid chromatography, and high performance liquid chromatography.
  • the disinfectant of the present invention can be prepared in a gel formulation or an aerosol spray formulation.
  • the stock solution may be diluted and provided, and various excipients may be included.
  • a component selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, high-molecular peptides, high-molecular polysaccharides, sphingolipids, and seaweed extracts may be further included.
  • ingredients that may be added include fats and oils, humectants, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, bactericides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, fragrances, A blood circulation accelerator, a cooling agent, an antiperspirant, purified water, etc. are mentioned.
  • a propellant such as chlorofluorohydrocarbon, propane/butane or dimethyl ether.
  • the present invention relates to an antiviral disinfectant containing plum sugar extract as an active ingredient.
  • an antiviral disinfectant containing plum sugar extract as an active ingredient.
  • oil By adding oil, it is confirmed that it is harmless to the human body and has an excellent effect of killing various viruses. Therefore, by using the disinfectant as a gel-type hand sanitizer or a spray-type indoor disinfectant, it is possible to provide a natural product-derived antiviral disinfectant.
  • a mixture of equal weights of plum and sugar was left at a cool and shady room temperature of 25 ° C. for 3 months, and when the juice was sufficiently extracted from the plum, the dry matter was removed and the liquid phase was collected to obtain a plum sugar extract.
  • an antiviral disinfectant composition was prepared by mixing as shown in Table 1 below based on 100 g of the plum sugar extract.
  • a comparative composition for an antiviral disinfectant was prepared under the conditions of Table 2. Each raw material and manufacturing method were the same as in Example 1.
  • Some of the disinfectant compositions prepared in Table 1 were diluted in purified water by 100 times the weight and put in a sprayer to prepare an indoor disinfectant, and some of the above each of the above in an alcohol gel containing 70% by weight of ethanol and aloe vera juice as a thickener. It was prepared as a hand sanitizer so that the disinfectant was 1% by weight.
  • Example 1 The same weight of the plum used in the preparation of the plum sugar extract used in Example 1 was taken and pressed to obtain a juice solution. Sugar was added in the same weight as the juice and slightly boiled, and then the sugar was dissolved. While using the plum extract prepared in this way instead of the plum sugar extract in Example 1, it was mixed with other extracts of Example 1.
  • the plum used in the preparation of the plum sugar extract used in Example 1 was taken by the same weight and prepared in the same way as the extract of other raw materials, and the water was evaporated to make it the same volume as the plum sugar extract. While using instead of the plum sugar extract in 1, it was mixed with other extracts of Example 1.
  • the antiviral ability of the sample was measured according to ASTM E1052-20, Human respiratory syncytial virus (RSV, ATCC VR-26), Rotavirus A (RVA, ATCC VR-2018) and Human coronavirus (CoV, ATCC VR-740) After mixing the sample solution with the virus culture medium and contacting it for 20 minutes, the virus activity was confirmed. The activity of the virus was measured by the tissue culture 50% infectious dose assay (log 10 TCID 50 ) after infecting the host cell with the virus. In this experiment, in order to accurately confirm the concentration, each sample in the liquid phase was lyophilized and then quantified after being added to water again. Each sample used in the experiment was used as a standard of 25 ⁇ g/ml.
  • Hep-2 KCLB 10023
  • CV-1 KCLB 10070
  • MRC-5 ATCC CCL-171
  • 10% FBS was added to EMEM
  • 2% FBS was added to EMEM for RSV and CoV
  • 2 ⁇ g/ml Trypsin for RVA was EMEM.
  • Hep-2 cells were infected with RSV
  • CV-1 cells were infected with RVA
  • MRC-5 cells were infected with CoV.
  • each virus had no cytotoxicity up to 10 -3 and no apoptotic toxicity, making it a suitable condition for a titer measurement experiment.
  • compositions of Examples 1 to 7 were found to have very high viral titers against Human respiratory syncytial virus (RSV), Rotavirus A (RVA), and Human coronavirus (CoV), making them suitable for use as hand sanitizers or indoor and outdoor spray disinfectants.
  • RSV Human respiratory syncytial virus
  • RVA Rotavirus A
  • CoV Human coronavirus
  • the antiviral activity was analyzed by preparing an aqueous solution again and treating it in a concentration range of 2 to 10 mg/ml.
  • the MDCK cell line used in the experiment was regularly cultured in Eagle's minimum essential medium (MEM) containing 10% fetal bovine serum (Fetal Bovine Serum (FBS), Hyclone Thermo Scientific) and 1% penicillin-streptomycin solution (Gibco). I have it ready.
  • MEM Eagle's minimum essential medium
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • Hyclone Thermo Scientific Hyclone Thermo Scientific
  • Infected cells were sequentially diluted with virus culture medium containing the compositions of Examples and Comparative Examples (0.3% Bovine serum albumin, 1% Penicillin-Streptomycin solution) and 1 ⁇ g/ml of L-1-tosylamido-2-phenylethyl
  • the MEM culture medium containing trypsin (Trypsin-TPCK) treated with chloromethyl ketone the cells were cultured at 37° C. for 48 hours until viral cytophatic effect (CPE) appeared.
  • the antiviral CPE lowering ability of the compositions was expressed as the 50% value of the effective viral inhibitory concentration (EC 50 ), and the 50% value of the cytotoxic concentration (CC 50 ) was determined based on the morphological transformation of cells.
  • the anti-influenza virus ability of the compositions was expressed as a selectivity index (SI) obtained by dividing the CC 50 value by the EC 50 value.
  • SI selectivity index
  • Table 3 shows the results of comparing the anti-influenza virus activity of the compositions against H1N1 and H3N2 in MDCK cells.
  • Example 1 7534 7523 14.9 46.9 505.6 160.4
  • Example 2 7321 7245 29.3 35.2 249.9 205.8
  • Example 3 7831 7325 53.2 45.2 147.2 162.1
  • Example 4 7190 7821 34.2 45.2 210.2 173.0
  • Example 5 7422 7492 36.2 36.2 205.0 207.0
  • Example 6 7247 7238 24.6 28.5 294.6 254.0
  • Comparative Example 1 7351 7252 234.5 342.3 31.3 21.2
  • Comparative Example 5 7295 7432 129.3 231.1 56.4 32.2
  • Comparative Example 6 7832 7231 78.2 109.2 100.2 66.2 Comparative Example 7 7452
  • Escherichia coli 0-157 a pathogenic bacterium
  • TSB trypticase soy broth
  • 4 ⁇ 10 6 CFU under the same conditions again.
  • colony forming units / ml concentration was cultured for 2 hours and 30 minutes for the second time.
  • a sterilized solution consisting of citrate phosphate buffer (9mM sodium phosphate, 1mM sodium citrate, pH 7.4), 1% (w/v) type I (low electroendosmosis) agarose, and 0.03% (w/v) TSB Cultured bacteria (4 ⁇ 10 6 colony forming units/mL) was added to 10 mL of the gel (underlay gel), mixed, poured into a square plate, and when the gel hardened, the disinfectants of Examples 1-6 and Comparative Examples 1-7 were prepared.
  • a PET film (thickness 0.1 mm) specimen coated with hand disinfection gel was cut into a circular shape with a diameter of 10 mm and spread out. After culturing for 2 days, it was confirmed whether a clear zone was formed, and the size of the clear zone was measured in an outward direction from the circular end of the specimen and was measured and described in Table 6 below.

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Abstract

본 발명은 매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 소독제에 관한 것에 관한 것으로서, 상기 소독제는 벽오동 추출물, 아까시 추출물, 머위 추출물, 배추 추출물 및 아스파라거스 추출물이 더 추가되고 향료로서 천연 물질인 유자 에센셜 오일이 첨가됨으로써 인체에 무해하면서도 각종 바이러스의 사멸 효과가 우수한 것으로 확인된다. 이에 상기 소독제를 겔 형태의 손소독제 또는 분무 형태의 실내용 소독제로 이용함으로써 천연물 유래의 항바이러스용 소독제를 제공할 수 있다.

Description

매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 소독제
본 발명은 매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 소독제에 관한 것이다.
공중보건과 위생 모두의 궁극적인 목표는 질병의 예방이다. 질병은 병원체, 숙주, 환경에 영향을 받는데, 그 중 외부에서 의 요인인 병원체는 소독 등의 방법에 의해서 예방이 가능하다(한국수의공중보건학회, 수의공중보건학교육협의회 편, 수의공중보건학, 문운당, pp.1-2, 1996). 인류는 오래전부터 천연물을 이용하여 병원균 또는 바이러스를 제거해왔다.
매실은 식중독, 전염병 등의 예방 및 치료를 목적으로 예전부터 사용되어 오던 물질이다. 현재도 식품의 보전 등의 목적으로 많이 연구되고 있으며, 특히 구연산, 사과산 등이 많이 함유되어 있어 이를 통한 살균력은 널리 알려져 있다. 매실추출물은 E. coli (O157:H77), Vibrio parahaemolyticus, Salmonella typhimurium 등 그람 음성, 양성 모든균에 효과적인 것으로 알려져 있고(김경숙, 이인환 "Prunus속 식물(종자)의 항균력과 활성물질에 관한 연구, 이화여자대학교 석사논문, 1986), 바이러스에 대한 저해 효능은 아직 연구 중에 있다. 인플루엔자는 호흡기 질환 바이러스의 일종으로 사람뿐만 아니라 돼지, 닭, 오리 또는 말 등의 가축뿐만 아니라 여러 종류의 동물들에 널리 퍼져 있다. 코로나 바이러스는 주로 어린이들이나 어린 동물들에게 감염되기 쉽다(Elsevier, 2008, 554 ; Advances in Virus Research, 2006, 66, 193~232). 한편, CCV는 대부분 그 증세가 약하거나 증상이 전혀 없는 경우가 많지만, 때로 심각한 장염을 일으키기도 한다.
본 발명자들은 매실을 이용하여 근래에 문제가 되고 있는 바이러스 관련 소독제에 관한 다양한 연구를 수행하던 중, 상기 매실의 당 추출물을 유효성분으로 하는 소독제 조성물이 각종 다양한 바이러스에 대한 억제 효과가 있어 손소독제나 분무형 실내외용 소독제로 이용가능함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
대한민국 공개특허 제10-2005-0117975호 (발명의 명칭 : 벽오동 추출물을 함유한 천연 항산화제 조성물 및 이의 제조방법, 출원인 : 김진수, 공개일 : 2005년12월15일)
대한민국 등록특허 제10-0528267호 (발명의 명칭 : 천연물을 이용한 살바이러스 조성물, 출원인 : 알앤엘생명과학주식회사, 등록일 : 2005년11월07일)
대한민국 등록특허 제10-1633432호 (발명의 명칭 : 감마 허피스바이러스 감염의 개선 및 치료에 사용하기 위한 아까시나무 추출물의 용도, 출원인 : 알앤엘생명과학주식회사, 등록일 : 2016년06월20일)
본 발명의 목적은 매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 소독제을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 매실 당 추출물, 벽오동 추출물, 아까시 추출물, 머위 추출물, 배추 추출물 및 아스파라거스 추출물이 함유된 것을 특징으로 하는 항바이러스용 소독제에 관한 것이다.
상기 소독제는 매실 당 추출물 100 중량부 기준으로 벽오동 추출물 10~20 중량부, 아까시 추출물 20~30 중량부, 머위 추출물 3~5 중량부, 배추 추출물 20~30 중량부 및 아스파라거스 추출물 10~15 중량부가 함유된 것일 수 있다. 상기 소독제는 사용 직전 중량 대비 100~2000 배의 정제수에 희석하여 사용할 수 있다.
상기 항바이러스용 소독제에는 유자 에센셜 오일이 함유될 수 있다. 상기 유자 에센셜 오일은 매실 당 추출물 100 중량부 기준으로 0.0001~0.1 중량부가 혼합될 수 있다.
상기 각 추출물은 각 원료 시료를 준비하고, 상기 원료 시료를 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용액을 용매로 하여 추출할 수 있다. 상기 용매로는 바람직하게 물을 사용하는 것이 가장 좋다.
또한, 상기 소독제는 항균 효능이 있는 것을 특징으로 한다.
상기 소독제는 겔형 또는 분무형 제형인 것일 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명에서 사용하는 매실 당 추출물은 매실에 당류를 혼합한 혼합물을 그대로 두어 삼투 추출한 것에서 건더기를 제거한 액상일 수 있다.
매실 100 중량부 기준으로 당류 50~200 중량부를 혼합한 혼합물을 3~6개월 동안 그대로 두어 삼투 추출한 것에서 건더기를 제거한 액상일 수 있다. 상기 매실 당 추출물의 추출 온도는 4~37℃인 것이 좋고, 바람직하게는 15~30℃인 것이 더 좋다. 상기 당류는 단맛을 내는 것은 어떠한 것이라도 사용가능하나 설탕, 슈가파우더, 올리고당, 아가베시럽, 메이플시럽, 선인장설탕 및 꿀로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 것을 사용할 수 있다.
이 때, 매실 100 중량부 기준으로 당류가 50 중량부 미만으로 혼합되면 발효가 되지 않고 부패가 되기 쉽다. 또한, 매실 100 중량부 기준으로 당류가 200 중량부를 초과하여 혼합되면 당류 성분의 과첨가로 인해 당류와 매실로부터 추출되는 즙이 혼합되지 않을 수 있다. 또한, 추출기간이 3개월 미만이면 이후 부패가 되기 쉽고, 추출기간이 6개월을 초과하게 되면, 초산발효나 알코올 발효가 진행될 수도 있으며, 보관장소나 환경에 따라서 부패가 진행될 수도 있다.
본 발명에서 사용하는 벽오동으로는 가지, 열매 및 잎에서 선택되는 1종 이상이 함유될 수 있으며, 아까시(아카시아)로는 목질부가 사용가능하다.
상기 소독제에 각 용매 추출물은 동결건조 후 매실 당 추출물와 혼합될 수 있으나 추출물을 물로 추출하였을 경우, 매실 당 추출물에 바로 혼합해도 무방하다. 바람직하게는 용매 추출물은 원료 시료 대비 5~20 중량부의 물을 첨가한 후 70~90℃에서 1~10시간 동안 가온하여 추출한 후 건더기를 제거하여 낸 액상인 것일 수 있다.
본 발명에서 사용하는 유자피 에센셜 오일은 유자피를 원료로 하여 통상의 방법으로 수증기 훈증법으로 제조한 것이며, 보다 바람직하게는, 원료인 유자피를 냉압착하여 착즙액을 얻고, 상기 착즙액을 박막증류기를 통해 오일 성분을 훈증한 후 이를 응축하여 얻은 것일 수 있다. 본 발명에서는 시중에서 판매하는 제품을 사용할 수도 있다.
본 발명에서 이용하는 용매 추출물로서, 벽오동 추출물, 아까시 추출물, 머위 추출물, 배추 추출물, 아스파라거스 추출물은 다음의 방법으로 제조할 수 있다. 이를 위해 각 원료 시료를 준비하고, 상기 원료 시료를 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용액을 용매로 하여 추출할 수 있으며, 상기 C1~C4 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
상기 원료 시료의 추출조건은 20~100℃에서 1분~48시간일 수 있다. 상기 과정은 1~4번까지 반복할 수 있다. 이 때 사용하는 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다. 이렇게 제조된 용매 추출물은 열풍건조, 감압건조 또는 동결건조하여 용매를 제거할 수 있다. 또한, 상기 용매 추출물은 컬럼크로마토그래피를 이용하여 정제하여 사용할 수 있다. 상기 용매 추출물은 상법에 따라, 유기용매(알코올, 에테르, 아세톤 등)에 의한 추출, 헥산과 물의 분배, 컬럼크로마토그래피에 의한 방법 등, 식물체 성분의 분리 추출에 이용되는 공지의 방법을 단독 또는 적합하게 조합한 방법을 이용하여 분획 또는 정제하여 사용할 수 있다. 상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 엘에이취-20 컬럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 이온교환수지 크로마토그래피(ion exchange resin chromatography), 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography), 박층 크로마토그래피(TLC; thin layer chromatography), 실리카겔 진공 액체 크로마토그래피(silica gel vacuum liquid chromatography) 및 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 중에서 선택될 수 있다.
본 발명의 소독제는 겔 제형 또는 분무형 스프레이 제형 등으로 제조가능하다. 상기 소독제가 손소독제로서 제조될 경우, 원액을 그대로 희석하여 제공될 수도 있으며 다양한 각 부형제가 포함될 수 있다. 이를 위해 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분이 추가로 포함될 수 있다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다. 상기 소독제가 분무제 또는 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명은 매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 소독제에 관한 것에 관한 것으로서, 상기 소독제는 벽오동 추출물, 아까시 추출물, 머위 추출물, 배추 추출물 및 아스파라거스 추출물이 더 추가되고 향료로서 천연 물질인 유자 에센셜 오일이 첨가됨으로써 인체에 무해하면서도 각종 바이러스의 사멸 효과가 우수한 것으로 확인된다. 이에 상기 소독제를 겔 형태의 손소독제 또는 분무 형태의 실내용 소독제로 이용함으로써 천연물 유래의 항바이러스용 소독제를 제공할 수 있다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1 내지 6. 항바이러스용 소독제의 제조>
매실과 설탕을 동일 중량으로 혼합한 혼합물을 3개월 동안 25℃의 서늘하고 그늘진 실온에 그대로 둔 후 매실로부터 즙이 충분히 추출되면, 건더기를 제거하고 액상을 수거하여 매실 당 추출물을 얻었다.
벽오동은 가지, 열매 및 잎을 동일 중량으로 혼합하여 시료를 준비하고, 아까시(아카시아)는 가지와 줄기의 목질부를 준비하였다. 벽오동, 아까시, 머위(열매), 배추, 아스파라거스는 생것 상태로 준비하였다. 유자 에센셜 오일은 시판 중인 것을 구입하였다. 벽오동부터 아스파라거스까지 각 원료는 1kg 당 10kg의 물을 첨가하여 80℃에서 5시간 동안 가열 추출하고 건더기를 제거하여 얻은 액상을 식혀서 그대로 사용하였다.
다음으로는 상기 매실 당 추출물 100g 기준 하기 표 1과 같이 혼합하여 항바이러스용 소독제 조성물을 제조하였다.
　조건 매실
당
추출물
(g)		 벽오동
추출물
(g)		 아까시 추출물
(g)		 머위
추출물
(g)		 배추
추출물
(g)		 아스파
라거스
추출물
(g) 		유자
에센셜
오일
(g)		 총계
(g)
실시예 1 100 15 25 4 25 13 0 182
실시예 2 100 10 29 3 27 13 0 182
실시예 3 100 17 20 5 30 10 0 182
실시예 4 100 20 22 5 20 15 0 182
실시예 5 100 13 30 4 20 15 0 182
실시예 6 100 15 25 4 25 12.99 0.01 182
<비교예 1 내지 5. 비교조건 항바이러스용 소독제의 제조>
표 2의 조건으로 항바이러스용 소독제용 비교 조성물을 제조하였다. 각 원료와 제조방법은 실시예 1에서와 동일하게 하였다.
조건 매실
당
추출물
(g)		 벽오동 추출물
(g)		 아까시 추출물
(g)		 머위 추출물
(g)		 배추 추출물
(g)		 아스파
라거스
추출물
(g) 		유자
에센셜
오일
(g)		 총계
(g)
비교예 1 182 0 0 0 0 0 0 182
비교예 2 0 100 60 10 5 7 0 182
비교예 3 100 50 32 0 0 0 0 182
비교예 4 100 0 0 40 20 22 0 182
비교예 5 0 100 82 0 0 0 0 182
표 1에서 제조된 소독제 조성물은 일부는 100배 중량으로 정제수에 희석하여 분무기에 담아 실내 소독제로 제조하였고, 일부는 에탄올 70 중량%가 함유되고 점증제로서 알로에베라 생즙이 함유된 알코올 겔에 상기 각 소독제가 1 중량%가 되도록 손소독제로 제조하였다.
<비교예 6. 매실 착즙액을 이용한 항바이러스용 소독제의 제조>
실시예 1에서 사용된 매실 당 추출물의 제조에 사용된 매실을 동일 중량으로 취하여 압착하여 착즙액을 얻었다. 착즙액과 동일 중량으로 설탕을 첨가하여 살짝 끓인 후 설탕이 녹게 하였다. 이렇게 제조된 매실액을 실시예 1에서의 매실 당 추출물 대신 사용하면서, 실시예 1의 다른 추출물들과 혼합하였다.
<비교예 7. 매실 추출물을 이용한 항바이러스용 소독제의 제조>
실시예 1에서 사용된 매실 당 추출물의 제조에 사용된 매실을 동일 중량으로 취하여 다른 원료의 추출물을 제조하듯이 동일하게 제조하고, 물을 증발시켜 매실 당 추출액과 같은 부피가 되게 하였고, 이를 실시예 1에서의 매실 당 추출물 대신 사용하면서, 실시예 1의 다른 추출물들과 혼합하였다.
<실험예 1. 항바이러스 효능 확인 i>
ASTM E1052-20에 따라 시료의 항바이러스능을 측정하였는데, Human respiratory syncytial virus (RSV, ATCC VR-26), Rotavirus A (RVA, ATCC VR-2018) 및 Human coronavirus (CoV, ATCC VR-740)를 사용하여 시료 용액을 바이러스 배양액과 혼합하여 20분간 접촉시킨 후 바이러스 활성을 확인하였다. 바이러스의 활성은 숙주세포에 바이러스를 감염시킨 후 50% 조직배양감염량 분석법[tissue culture 50% infectious dose assay (log10TCID50)]으로 측정하였다. 이 때 실험에서는 농도를 정확히 확인하기 위해 액상의 각 시료를 동결건조 하고 다시 물에 탄 후 정량하였다. 실험에 사용한 각 시료는 25㎍/㎖ 기준으로 사용하였다.
숙주세포는 Hep-2(KCLB 10023), CV-1(KCLB 10070), MRC-5(ATCC CCL-171)를 사용하였다. 세포배양배지는 EMEM에 FBS를 10% 추가하였고, 바이러스 배양배지로 사용된 것은 RSV, CoV는 EMEM에 FBS를 2% 추가한 것, RVA는 EMEM에 2㎍/㎖ Trypsin이었다. 바이러스 역가를 확인하기 위해 Hep-2 세포에는 RSV를 감염시켰고, CV-1 세포에는 RVA를 감염시켰으며 MRC-5 세포에는 CoV를 감염시켰다. 또한 각 바이러스는 10-3까지 세포독성이 전혀 없고 아세포독성 또한 없어 역가 측정 실험을 하기에 적합한 조건임을 확인하였다.
조건 log10TCID50
RSV CoV RVA
무처리군 7.5 5.5 6.5
실시예 1 3.5 2.5 2.5
실시예 2 3.5 2.5 2.5
실시예 3 3.0 2.0 2.0
실시예 4 4.5 2.5 2.0
실시예 5 3.5 2.5 3.0
실시예 6 2.5 1.5 1.5
비교예 1 6.5 5.0 4.5
비교예 2 7.0 5.0 4.0
비교예 3 6.5 5.5 5.0
비교예 4 6.5 4.5 4.5
비교예 5 5.5 4.5 4.5
비교예 6 5.0 4.5 4.0
비교예 7 5.0 4.0 4.5
확인 결과, 실시예 1 내지 7의 조성물이 Human respiratory syncytial virus (RSV), Rotavirus A (RVA) 및 Human coronavirus (CoV)에 대한 바이러스 역가가 매우 높은 것으로 나타나 손소독제나 실내외 분무용 소독제로 사용하기에 적합함을 확인할 수 있다.
<실험예 2. 항바이러스 효능 확인 ii>
항바이러스 활성을 추가적으로 확인하기 위해 인플루엔자 바이러스 A형(H1N1) 및 계절 독감 바이러스 A형(H3N2)을 MDCK(Mardin Darby Canine Kidney) 세포주에 감염시킨 후, 상기 실시예 1~6, 비교예 1~7 소독제 조성물을 동결건조 후, 다시 수용액 상태로 제조하되 2~10 mg/ml의 농도 범위로 처리하여 항바이러스 활성을 분석하였다. 실험에 사용된 MDCK 세포주는 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum(FBS), Hyclone Thermo Scientific)과 1% 페니실린-스트렙토마이신 용액(Gibco)이 포함된 Eagle's minimum essential medium (MEM)에서 정기적으로 배양함으로써 준비해 두었다.
1 ml 당 1 × 104 개의 MDCK 세포를 96-웰 플레이트에 분주하여 37℃에서 16시간 동안 5% CO2 배양기를 사용하여 배양하였다. 단일층의 MDCK 세포를 PBS로 두 번 씻어낸 후 인플루엔자 바이러스 A형(H1N1) 및 계절 독감 바이러스 A형 (H3N2)을 100 TCID50로 37℃에서 2시간 동안 감염시킨 후, 감염되지 않은 바이러스들을 세척하였다.
감염된 세포들은 순차적으로 희석된 상기 실시예 및 비교예의 조성물이 포함된 바이러스 배양액(0.3% Bovine serum albumin, 1% Penicillin-Streptomycin solution) 및 1μg/ml 의 L-1-토실아미도-2-페닐에틸 클로로메틸 케톤으로 처리된 트립신(Trypsin-TPCK)이 포함된 MEM 배양액에서 바이러스성 CPE(cytophatic effect)가 나타날 때까지 48시간 37℃에서 배양하였다. 상기 조성물들의 항바이러스성 CPE 저하 능력은 바이러스성 저해 유효농도 50% 값 (EC50)으로 나타내었고, 세포독성 농도의 50% 값(CC50)은 세포의 형태학적 변형을 기초로 결정하였다. 상기 조성물들의 항 인플루엔자 바이러스의 능력은 CC50 값을 EC50 값으로 나눈 선택도 인덱스(SI: selectivity index)로 나타내었다. SI(selectivity index, 선택지수)는 CC50 /EC50 으로서 SI 값이 클수록 바이러스 증식억제 효과가 크다. 표 3은 MDCK 세포에서 상기 조성물들의 H1N1 및 H3N2에 대한 항 인플루엔자 바이러스 활성을 비교한 결과를 보여준다.
조건 CC50(㎍/㎖) EC50(㎍/㎖) SI
H1N1 H3N2 H1N1 H3N2 H1N1 H3N2
실시예 1 7534 7523 14.9 46.9 505.6 160.4
실시예 2 7321 7245 29.3 35.2 249.9 205.8
실시예 3 7831 7325 53.2 45.2 147.2 162.1
실시예 4 7190 7821 34.2 45.2 210.2 173.0
실시예 5 7422 7492 36.2 36.2 205.0 207.0
실시예 6 7247 7238 24.6 28.5 294.6 254.0
비교예 1 7351 7252 234.5 342.3 31.3 21.2
비교예 2 7523 7234 195.2 156.2 38.5 46.3
비교예 3 7240 7562 143.9 234.3 50.3 32.3
비교예 4 7345 7062 95.2 98.5 77.2 71.7
비교예 5 7295 7432 129.3 231.1 56.4 32.2
비교예 6 7832 7231 78.2 109.2 100.2 66.2
비교예 7 7452 7523 76.2 113.5 97.8 66.3
표 4에서 볼 수 있는 바와 같이, 실시예 1 내지 7의 소독제가 SI 값이 크게 나와 비교예 1 내지 7의 소독제에 비교하여 바이러스의 억제 효과가 매우 좋은 것을 확인할 수 있다.
<실험예 3. 관능평가>
실시예 1과 실시예 7의 소독제를 겔 상태로 제조한 것의 손소독제에 대한 관능평가를 수행하였다. 향에 대한 기호도는 5점 : 가장 좋음, 4점 : 좋음, 3점 : 보통, 2점 : 나쁨, 1점 : 매우 나쁨으로 표기하였다. 그 결과 하기 표 5와 같이 유자 에센셜 오일이 포함된 실시예 6의 소독제가 향에 대한 기호도가 좋은 것으로 나타나, 상기 유자 에센셜 오일이 항바이러스 효과를 내면서도 선호도를 좋게 하고, 직접 피부에 닿지만 피부 손상 등은 전혀 영향을 주지 않는 것으로 확인되었다.
겔 제형 소독제 향에 대한 기호도 피부 작열감
실시예 1 3.2 없음
실시예 6 4.4 없음
<실험예 4. 항균 효과 확인>
병원성 세균인 대장균 0-157(Escherichia coli 0-157)를 3 %(w/v) TSB(trypticase soy broth)에서 37℃, 200rpm 조건으로 18시간 배양한 후, 다시 동일한 조건에서 4×106CFU(colony forming units)/㎖ 농도가 되도록 2시간 30분간 2차 배양하였다. 그 후 시트레이트 포스페이트 버퍼(Citrate phosphate buffer; 9mM sodium phosphate, 1mM sodium citrate, pH 7.4)와 1%(w/v) typeⅠ(low electroendosmosis) 아가로스, 0.03%(w/v) TSB로 구성된 멸균된 겔 (underlay gel) 10mL에다 배양된 세균(4×106colony forming units/㎖)을 넣고 혼합해준 뒤 사각플레이트에 붓고, 겔이 굳으면 실시예 1~6과 비교예 1~7의 소독제로 제조한 손소독용 겔을 바른 PET 필름(두께 0.1mm) 시편을 원형의 지름 10mm로 잘라내어 펼쳐놓았다. 이후 2일간 배양 후 클리어 존(CLEAR ZONE)의 형성 여부를 확인하였으며 클리어 존의 크기는 시편의 원형 끝부터 바깥쪽 방향으로 측정하여 다음의 표 6에 측정하여 기재하였다.
겔 제형 소독제 시편 대장균(mm)
실시예 1 26
실시예 2 26
실시예 3 25
실시예 4 25
실시예 5 26
실시예 6 34
비교예 1 15
비교예 2 13
비교예 3 15
비교예 4 16
비교예 5 17
비교예 6 18
비교예 7 15
측정 결과, 각 시편 시료에 에탄올이 기본적으로 포함되어 있어, 비교예 1 내지 7의 시편 자체의 항균 효과가 확인되는데, 상기 비교예 1 내지 7과 비교하여 실시예 1 내지 6의 항균 효과가 현저하게 더 우수한 것으로 나타난다.

Claims (6)

  1. 매실 당 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 항바이러스용 소독제.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 소독제에는 벽오동 추출물, 아까시 추출물, 머위 추출물, 배추 추출물 및 아스파라거스 추출물이 함유된 것을 특징으로 하는 항바이러스용 소독제.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 소독제에는 유자 에센셜 오일이 함유된 것을 특징으로 하는 항바이러스용 소독제.
  4. 제1항에 있어서,
    매실 당 추출물은 매실에 당류를 혼합한 혼합물을 그대로 두어 삼투 추출한 것에서 건더기를 제거한 액상인 것을 특징으로 하는 항바이러스용 소독제.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 소독제는 항균 효능이 있는 것을 특징으로 하는 항바이러스용 소독제.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 소독제는 겔형 또는 분무형 제형인 것을 특징으로 하는 항바이러스용 소독제.
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