WO2023234250A1 - アニオン性長鎖脂質を含む皮膚のバリア機能を減弱化させることに用いるための組成物、およびカチオン性長鎖脂質とアニオン性長鎖脂質と薬物を含む複合体を分散した分散液 - Google Patents

アニオン性長鎖脂質を含む皮膚のバリア機能を減弱化させることに用いるための組成物、およびカチオン性長鎖脂質とアニオン性長鎖脂質と薬物を含む複合体を分散した分散液 Download PDF

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complex
surfactant
composition
acid
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淳大 豊福
雅宏 後藤
桃子 北岡
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国立大学法人九州大学
ＮＯＶＩＧＯ Ｐｈａｒｍａ株式会社
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle

Definitions

  • the present invention relates to a composition containing anionic long-chain lipids (particularly long-chain fatty acids) for use in weakening the skin barrier.
  • the present invention relates to a dispersion in which a solid complex containing a cationic long-chain lipid, an anionic long-chain lipid, and a drug is dispersed.
  • the skin has extremely low permeability to hydrophilic molecules over 800 Da due to the barrier function of the stratum corneum. This barrier function of the stratum corneum limits the development of preparations for transdermal administration (transdermal absorption agents).
  • dispersion preparations in which a solid composite coated with a surfactant is dispersed in an oil phase for hydrophilic drugs exceeding 800 Da (Non-Patent Documents 1 to 4).
  • Non-Patent Documents 1 to 4 Non-Patent Documents 1 to 4
  • Non-Patent Document 5 proposes a new cationic lipid in order to make ionic liquids compatible with living organisms.
  • the present disclosure includes a cation (preferably a cationic surfactant, more preferably a cationic lipid), an anion (preferably an anionic surfactant, more preferably a fatty acid, even more preferably a long chain fatty acid), and a nucleic acid.
  • a cation preferably a cationic surfactant, more preferably a cationic lipid
  • an anion preferably an anionic surfactant, more preferably a fatty acid, even more preferably a long chain fatty acid
  • nucleic acid preferably a cationic surfactant, more preferably a cationic lipid
  • Compositions including the composites (particles) are provided.
  • anionic long-chain lipids weaken the barrier function of the skin.
  • the inventors have thereby discovered that anionic long chain lipids can be used to improve the permeability of drugs through the skin.
  • a solid complex comprising a cation and an anion, in particular a cationic lipid, an anionic lipid and a drug (e.g. a nucleic acid) and an oil phase, said solid complex being dispersed in the oil phase.
  • a composition comprising a cation and an anion, in particular a cationic lipid, an anionic lipid and a drug (e.g. a nucleic acid) and an oil phase, said solid complex being dispersed in the oil phase.
  • a composition for use in forming a complex with a drug component comprising a mixture containing a cation and an anion (preferably, the composition consists of a cation and an anion, or a cation, an anion, and a solvent); ).
  • the cation is a cationic lipid (e.g., EDMPC) and the anion is a fatty acid (e.g., an unsaturated fatty acid, preferably a long-chain unsaturated fatty acid, more preferably linoleic acid and oleic acid).
  • EDMPC cationic lipid
  • anion is a fatty acid (e.g., an unsaturated fatty acid, preferably a long-chain unsaturated fatty acid, more preferably linoleic acid and oleic acid).
  • composition according to (1) or (2) above which does not contain a pharmaceutically active ingredient.
  • composition according to (1) or (2) above further comprising a pharmaceutically active ingredient that is administered transdermally.
  • (5) comprising a population of solid complexes comprising cations, anions, and nucleic acids; containing an oil phase; A composition, preferably a composition for transdermal administration, wherein the population of solid complexes is dispersed in an oil phase.
  • (6) The composition according to (5) above, wherein the population of solid composites includes solid composites of about 5 nm to about 50 nm.
  • composition according to (6) above, wherein the population of solid composites comprises a structure comprising a plurality of agglomerates of solid composites of about 5 nm to about 50 nm.
  • a method for producing the composition according to any one of (5) to (11) above comprising: A method comprising mixing an aqueous solution containing a nucleic acid with a lower alcohol solution containing a mixture containing a cation and an anion to obtain a complex containing the nucleic acid and the cation and anion. (14) The method according to (13) above, further comprising lyophilizing the obtained complex. (15) The method according to (12) or (13) above, which comprises dispersing the freeze-dried complex in an oil phase. (16) The composition according to (12) above, for use in transfecting a nucleic acid from outside a cell into a cell.
  • a composition containing an anionic lipid for use in weakening the skin barrier (or improving skin permeability) of a subject (18) The composition according to (17) above, wherein the anionic lipid is a fatty acid. (19) The composition according to (17) or (18) above, wherein the anionic lipid is a long chain fatty acid. (20) The composition according to any one of (17) to (19) above, wherein the anionic lipid is a long-chain unsaturated fatty acid.
  • the cationic fatty acid and the anionic fatty acid can form an ionic liquid when mixed at a charge ratio of at least 1:1 in a composition consisting only of the cationic fatty acid and the anionic fatty acid (21). ).
  • a composition for use in forming a complex with a drug component comprising a mixture containing a cation and an anion, wherein the cation is a cationic surfactant and the anion is an anionic surfactant.
  • a composition that is an agent. (32) The composition according to (31) above, wherein the cation is a cationic lipid and the anion is a fatty acid. (33) The composition according to (32) above, wherein the anion is a long-chain fatty acid (preferably having 14 to 22 carbon atoms). (34) The composition according to (33) above, wherein the anion is a long-chain unsaturated fatty acid (preferably having 14 to 22 carbon atoms). (35) The composition according to (34) above, wherein the anion is linoleic acid or oleic acid. (36) The composition according to any one of (31) to (35) above, wherein the cation is EDMPC.
  • (41) comprising a population of solid complexes comprising cations, anions, and nucleic acids; containing an oil phase; The population of solid complexes is dispersed in an oil phase;
  • (42) The composition according to (41) above, wherein the anion is a long chain fatty acid (preferably having 14 to 22 carbon atoms).
  • (43) The composition according to (42) above, wherein the anion is a long-chain unsaturated fatty acid (preferably having 14 to 22 carbon atoms).
  • (44) The composition according to (43) above, wherein the anion is linoleic acid or oleic acid.
  • composition according to any one of (41) to (44) above, wherein the cation is EDMPC.
  • the composition according to (41) above, wherein the population of solid composites includes solid composites of about 5 nm to about 50 nm.
  • the composition according to (42) above, wherein the population of solid composites includes solid composites of about 5 nm to about 50 nm.
  • the composition according to (43) above, wherein the population of solid composites includes solid composites of about 5 nm to about 50 nm.
  • the composition according to (44) above, wherein the population of solid composites includes solid composites of about 5 nm to about 50 nm.
  • the composition according to (47) above, wherein the population of solid composites comprises a structure comprising a plurality of agglomerates of solid composites of about 5 nm to about 50 nm (eg, 100 nm to 500 nm in diameter).
  • composition according to (48) above, wherein the population of solid composites comprises a structure comprising a plurality of agglomerates of solid composites of about 5 nm to about 50 nm (eg, 100 nm to 500 nm in diameter).
  • the population of solid composites comprises a structure comprising a plurality of agglomerates of solid composites of about 5 nm to about 50 nm (eg, 100 nm to 500 nm in diameter).
  • composition according to (50) above, wherein the population of solid composites comprises a structure comprising a plurality of agglomerates of solid composites of about 5 nm to about 50 nm (eg, 100 nm to 500 nm in diameter).
  • the cation and anion are contained in an amount with a charge ratio of 1:0.8 to 1:1.25.
  • a cation and an anion can form an ionic liquid when mixed at a charge ratio of at least 1:1 in a composition consisting only of cations and anions.
  • a composition for use in forming a complex with a pharmaceutical ingredient comprising a mixture comprising a cation and an anion, the mixture comprising only cations and anions in a charge ratio of at least 1:1. is capable of forming an ionic liquid, or the composition itself is an ionic liquid, and the composition consists of a cation and an anion, or consists of a cation, an anion, and a solvent.
  • a composition for use in improving skin permeability comprising a mixture containing a cation and an anion, wherein the mixture is an ionic liquid containing only cations and anions in a charge ratio of at least 1:1.
  • compositions itself is an ionic liquid, and the composition consists of a cation and an anion, or a cation, an anion, and a solvent.
  • the composition according to any one of. (63) The composition according to (61) or (62) above, wherein the solvent contains or is a volatile organic solvent.
  • a composition for transdermal administration for use in improving skin permeability comprising a mixture containing a cation and an anion, and a solvent, the solvent comprising a volatile organic solvent or a volatile organic solvent.
  • (65) The composition according to (64) above, wherein the volatile organic solvent is or contains a lower alcohol.
  • a solid complex comprising a surfactant (e.g., a nonionic surfactant (e.g., ER-290), a cationic surfactant, an anionic surfactant) and a drug; and an oil phase;
  • a surfactant e.g., a nonionic surfactant (e.g., ER-290), a cationic surfactant, an anionic surfactant
  • the oil phase comprises an anionic long chain lipid
  • the solid complex is dispersed within the oil phase.
  • the anionic long-chain lipid is a long-chain unsaturated fatty acid.
  • composition according to any one of the above, wherein the cation is a surfactant having an HLB value of 10 or less, preferably about 1 to 4.
  • the anion is a surfactant having an HLB value of 10 or less, preferably about 1 to 4.
  • the cation and anion are each a surfactant having an HLB value of 10 or less, preferably about 1 to 4.
  • oil phase further comprises an anionic surfactant, thereby improving the skin permeability of a drug such as a nucleic acid compared to a composition in which the oil phase does not further comprise an anionic surfactant.
  • anionic surfactant further contains a fatty acid (preferably a long-chain fatty acid, more preferably a long-chain unsaturated fatty acid).
  • FIG. 1 shows a 1 H-NMR spectrum of a composition (forming an ionic liquid) composed of a synthesized cationic surfactant and anionic surfactant.
  • Figure 2 shows the process of forming a cation-anion-nucleic acid complex through an emulsion formation process, and then dispersing it in isopropyl myristate (IPM) after freeze-drying to obtain a dispersion of the solid complex dispersed in oil.
  • IPM isopropyl myristate
  • FIG. 3A shows the appearance of a dispersion in which a solid complex of a mixture of various cationic surfactants and anionic surfactants and a nucleic acid is dispersed.
  • FIG. 1 shows a 1 H-NMR spectrum of a composition (forming an ionic liquid) composed of a synthesized cationic surfactant and anionic surfactant.
  • Figure 2 shows the process of forming a cation-anion-nucleic acid
  • FIG. 3B shows the particle size distribution of the solid composite in the resulting dispersion measured by dynamic light scattering (DLS).
  • Figure 3C shows the time course of the particle size and polydispersity index (PDI) of the solid composites in the resulting dispersion.
  • Figure 4 shows the effect of the concentration of nucleic acid and surfactant on the particle size distribution of the resulting solid composite.
  • FIG. 5 shows the evaluation results of the skin permeability of the obtained composite.
  • FIG. 6 shows the solubility of each lipid or lipid mixture in cyclohexane and the appearance of the dispersion.
  • FIG. 7 shows the results of evaluating the permeability of the obtained complex into the skin of hairless mice.
  • Figure 8 shows the effect of ionic surfactant addition on the skin permeability of dispersions containing ER-290-nucleic acid solid complexes.
  • Figure 9 shows the influence of ionic surfactants on stratum corneum lipids.
  • FIG. 10 shows the results of a molecular simulation of stratum corneum lipid coated with an ionic surfactant.
  • FIG. 11 shows a scheme of a method for preparing a surfactant-drug complex by an ethanol dilution method.
  • Figure 12 shows the influence of the ionicity of the surfactant on the particle size distribution of solid composites obtained by the ethanol dilution method.
  • FIG. 13 shows the particle size distribution of solid composites formed by the emulsion formation method (Pre-method) and the ethanol dilution method (New-method).
  • FIG. 14 shows the skin permeability and permeability of nucleic acid-containing solid complexes formed by the emulsion formation method (Pre-method) and the ethanol dilution method (New-method).
  • Figure 15A shows the stability of appearance of dispersions of solid composites formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 15B shows the stability of the particle size distribution of the solid composite dispersion formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 16 shows the influence of the mixing ratio of nucleic acid and ionic lipid on the particle size distribution of solid complexes formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 17 shows the effect of the mixing ratio of nucleic acid and ionic lipid on the skin permeation and penetration of a solid composite formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 18 shows the influence of the mixing ratio of nucleic acid and ionic lipid on the particle size distribution of solid composites formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 19 shows the influence of the mixing ratio of nucleic acid and ionic lipid on the zeta potential of a solid complex formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 20 shows the relationship between the stirring time and particle formation after mixing the drug solution and ionic lipid by the ethanol dilution method.
  • FIG. 21 shows the relationship between temperature conditions and particle formation in the step of mixing a drug solution and ionic lipid using the ethanol dilution method.
  • FIG. 22 shows the relationship between the ratio of the aqueous solution and ethanol solution mixed in the ethanol dilution method and the particle size distribution.
  • Figure 23 shows the effect of the lipid used on the particle size distribution of solid composites formed by the ethanol dilution method.
  • Figure 24 shows the particle size distribution and zeta potential of a solid composite formed by the ethanol dilution method when the cation is (CH 3 ) 3 N + (CH 2 ) 2 OH (choline) and the anion is oleic acid. shows.
  • FIG. 25 shows the skin penetration and permeability of various solid composites formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 26 shows the particle size distribution and stability of a peptide nucleic acid-containing solid complex formed by the ethanol dilution method.
  • Figure 27 shows the particle size distribution and stability of protein-containing solid complexes formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 28 shows the skin permeability of a solid composite containing an ionic surfactant and protein formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 29 shows a transmission electron microscope image of an ionic lipid-nucleic acid solid complex formed by an emulsion method (cyclohexane method) and an ethanol dilution method.
  • FIG. 30 shows the results of an experiment in which cultured cells were transfected with an ionic surfactant-nucleic acid complex formed by the ethanol dilution method.
  • Figure 31 shows a fluorescence microscopy image of a skin section showing penetration into ionic surfactant-nucleic acid complexes formed by the ethanol dilution method.
  • Figure 32 shows the expression of introduced mRNA in cultured cells after transfection with an aqueous solution containing an ionic surfactant-mRNA complex formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 33 shows the results of evaluating the cytotoxicity of various ionic lipid-nucleic acid solid complexes formed by the ethanol dilution method.
  • FIG. 34 shows the knockdown effect of hybrid particles containing ASO in each tissue.
  • cation means a molecule that has a positive charge under pH 7 conditions.
  • cationic refers to the property of having a positive charge under pH 7 conditions.
  • anion refers to a molecule that has a negative charge under pH 7 conditions.
  • anionic means the property of having a negative charge under pH 7 conditions.
  • a "surfactant” is a molecule that has a relatively hydrophilic portion and a relatively hydrophobic portion in the molecule.
  • Surfactants are broadly classified into ionic surfactants and nonionic surfactants.
  • Ionic surfactants include cationic surfactants and anionic surfactants.
  • an ionic surfactant may have either a cation or an anion and a hydrophobic moiety.
  • Cationic surfactants may include a cationic moiety and a fatty chain (eg, a long fatty chain) such as an alkyl, alkenyl, or alkynyl.
  • Anionic surfactants may include an anionic moiety and a fatty acid such as a long chain fatty acid, an unsaturated fatty acid (eg, monovalent or divalent), or a long chain unsaturated fatty acid (eg, monovalent or divalent).
  • a fatty acid such as a long chain fatty acid, an unsaturated fatty acid (eg, monovalent or divalent), or a long chain unsaturated fatty acid (eg, monovalent or divalent).
  • “Long chain” is a term given to compounds having 14 to 22 carbon atoms.
  • the fatty chain may be a C 8 -C 22 aliphatic chain having 8 to 22 carbon atoms, ie, a C 8 -C 22 aliphatic chain, such as a C 8 -C 22 alkyl, a C 8 -C 22 alkenyl, or a C 8 -C 22 alkynyl.
  • the fatty chain can be a long fatty chain.
  • Saturated means that the fatty chain has no double and triple bonds
  • unsaturated means that the fatty chain has at least one double or triple bond
  • Fatty chains having double bonds include cis and trans types, with the cis type being preferred from the viewpoint of biocompatibility.
  • Lipids are molecules of biological origin that are soluble in non-polar solvents. Lipids can be classified into glycerolipids, glycerophospholipids, sphingolipids, sterol lipids, pronolipids, glycolipids, and polyketides.
  • Glycerolipid is a general term for molecules in which a fatty acid is ester-bonded to the hydroxyl group of glycerol. Glycerol has three hydroxyl groups and up to three fatty acids can be linked through ester bonds. In glycerophospholipids, two fatty acids are ester bonded to two hydroxyl groups of glycerol, and a phosphoric acid group is linked to one hydroxyl group.
  • Sphingolipids can be ceramides, sphingophospholipids, glycosphingolipids.
  • Sterol lipids are a subgroup of terpenoids.
  • a sterol lipid can be a sterol (eg, cholesterol).
  • Prenol lipids are terpenoids other than sterol lipids.
  • Examples of cationic lipids include U.S. Patent Application Publication Nos. 2006/0083780 and 2006/0240554, U.S. Patent Nos. 5,208,036, 5,264,618, 5,279,833, and 5 , 283,185, 5,753,613, and 5,785,992, and PCT Publication No. WO 96/10390, the disclosures of which are incorporated herein in their entirety for all purposes. Incorporated by reference into this book.
  • cationic lipids examples include 1,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane (DLinDMA), 1,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane (DLenDMA), and 2,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane (DLenDMA).
  • DLinDMA 1,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane
  • DLenDMA 1,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane
  • DLenDMA 2,2-dilinoleyloxy-N,N-dimethylaminopropane
  • Dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane (DLin-K-C2-DMA; "XTC2"), 2,2-dilinoleyl-4-(3-dimethylaminopropyl)-[ 1,3]-dioxolane (DLin-K-C3-DMA), 2,2-dilinoleyl-4-(4-dimethylaminobutyl)-[1,3]-dioxolane (DLin-K-C4-DMA), 2 , 2-dilinoleyl-5-dimethylaminomethyl-[1,3]-dioxane (DLin-K6-DMA), 2,2-dilinoleyl-4-N-methylpepiazino-[1,3]-dioxolane (DLin -K-MPZ), 2,2-dilinoleyl-4-dimethylaminomethyl-[1,3]-dioxo
  • the cationic lipid is DLinDMA, DLin-K-C2-DMA ("XTC2"), or a mixture thereof.
  • the cationic lipid includes 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-ethyl-phosphatidylcholine (EDMPC).
  • anionic lipid As a preferable anionic lipid, general formula (1): R-COO - X + ... (1) Examples include anionic lipids represented by
  • R represents a substituted or unsubstituted alkyl group or a substituted or unsubstituted alkenyl group, and at least one ethylene group constituting the alkenyl group may be substituted with a vinylene group.
  • the alkyl group in R may be linear, branched, or cyclic.
  • the alkyl group in R preferably has 8 to 22 carbon atoms, more preferably 12 to 22 carbon atoms, and still more preferably 14 to 22 carbon atoms.
  • linear alkyl groups such as dodecyl group, tridecyl group, tetradecyl group, pentadecyl group, hexadecyl group, heptadecyl group, octadecyl group, nonadecyl group, icosyl group, henicosyl group and docosyl group, Examples include branched alkyl groups and cyclic alkyl groups thereof.
  • substituents that can be substituted on the alkyl group include an amino group, a benzyl group, and a halogen atom (eg, a fluorine atom). These substituents may be further substituted with a substituent.
  • the alkyl group is substituted with a substituent, the total number of carbon atoms in the alkyl group and the number of carbon atoms in the substituent is preferably 8 to 22, more preferably 12 to 22, and 14 to 22. It is even more preferable that there be.
  • the alkenyl group in R may be either linear or branched.
  • the alkenyl group in R preferably has 8 to 22 carbon atoms, more preferably 12 to 22 carbon atoms, and still more preferably 14 to 22 carbon atoms.
  • linear alkenyl groups such as dodecenyl group, tridecenyl group, tetradecenyl group, pentadecenyl group, hexadecenyl group, heptadecenyl group, octadecenyl group, nonadecenyl group, icosenyl group, henicosenyl group, docosenyl group, and the like;
  • Examples include branched alkenyl groups.
  • substituents that can be substituted on the alkenyl group include an amino group, a benzyl group, and a halogen atom (eg, a fluorine atom). These substituents may be further substituted with a substituent.
  • the alkenyl group is substituted with a substituent, the total number of carbon atoms in the alkenyl group and the number of carbon atoms in the substituent is preferably 8 to 22, more preferably 12 to 22, and 14 to 22. It is even more preferable that there be.
  • the alkenyl group in R at least one ethylene group may be substituted with a vinylene group to form a polyene structure.
  • the number of double bonds in the polyene structure is preferably 2 to 6, more preferably 2 to 4.
  • the position of the double bond is not particularly limited, it is preferable that the double bonds are arranged with at least two single bonds in between.
  • the double bond may preferably be in the cis form.
  • R preferably includes one or more double bonds, more preferably two or more, and even more preferably three or more double bonds.
  • R is preferably a group having an unsaturated bond, and more preferably a substituted or unsubstituted alkenyl group or a group having a substituted or unsubstituted polyene structure.
  • the alkyl group, alkenyl group, and group having a polyene structure in R may be substituted with a substituent, but even in that case, it is preferable that R consists only of carbon atoms and hydrogen atoms. That is, when the alkyl group, alkenyl group, and polyene structure are substituted with a substituent, it is preferable that the substituent also consist of only carbon atoms and hydrogen atoms.
  • a carboxylate ion in which a hydrogen ion is dissociated from a carboxy group of a fatty acid or a derivative thereof can be used.
  • the fatty acid that produces carboxylate ions may be a saturated fatty acid or an unsaturated fatty acid, but is preferably an unsaturated fatty acid, more preferably a cis-unsaturated fatty acid, and even more preferably a cis-unsaturated fatty acid. It may be a chain unsaturated fatty acid.
  • saturated fatty acids include myristic acid (C14:0), palmitic acid (C16:0), stearic acid (C18:0) and lauric acid (C12:0), and examples of unsaturated fatty acids include , oleic acid (C18:1), linoleic acid (C18:2), ⁇ -linolenic acid (C18:3), ⁇ -linolenic acid (C18:3), arachidonic acid (C20:4), icosapentaenoic acid (C20: 5), docosahexaenoic acid (C22:6) and erucic acid (C22:1).
  • X + represents a phospholipid having a cationic group.
  • phospholipid means a lipid containing a phosphate ester structure
  • cationic group means a positively charged substituent.
  • X + is preferably a glycerophospholipid having a cationic group, more preferably a derivative of phosphatidylcholine.
  • at least one ethylene group of the alkanoyl group may be replaced with a vinylene group, and the hydrogen atom of the hydroxyl group of the phosphate ester group may be substituted with a substituted or unsubstituted alkyl group.
  • X + is preferably a phospholipid having a structure represented by the following general formula (2), and more preferably a glycerophospholipid having a structure represented by the following general formula (2).
  • R 1 represents an alkyl group substituted with a cationic group
  • R 2 represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted alkyl group.
  • the phospholipid having the structure represented by general formula (2) has a positive charge as a whole, and preferably does not have a negatively charged moiety.
  • the alkyl group in R 1 may be linear, branched, or cyclic.
  • the alkyl group in R 1 preferably has 1 to 20 carbon atoms, more preferably 1 to 10 carbon atoms, and even more preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • examples of the alkyl group in R 1 include a methyl group, ethyl group, n-propyl group, and isopropyl group, and the alkyl group in R 1 is preferably an ethyl group.
  • the cationic group in R 1 is preferably an ammonium group represented by the following general formula (3). -NR 4 R 5 R 6+ ... (3)
  • R 4 , R 5 and R 6 each independently represent a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted alkyl group, and * represents a bonding position to the alkyl group.
  • R 4 , R 5 and R 6 may be the same or different.
  • the number of substituted or unsubstituted alkyl groups among R 4 , R 5 and R 6 is not particularly limited, and all of R 4 , R 5 and R 6 are hydrogen atoms or substituted or unsubstituted alkyl groups. One or two of them may be hydrogen atoms, and the rest may be substituted or unsubstituted alkyl groups.
  • the alkyl group in R 4 , R 5 and R 6 may be linear, branched or cyclic.
  • the alkyl group in R 4 , R 5 and R 6 preferably has 1 to 20 carbon atoms, more preferably 1 to 10 carbon atoms, and still more preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • examples of the alkyl group in R 4 , R 5 and R 6 include methyl group, ethyl group, n-propyl group and isopropyl group, and the alkyl group in R 4 , R 5 and R 6 is methyl It is preferable that it is a group.
  • substituents that can be substituted on the alkyl group include a benzyl group and a halogen atom (eg, a fluorine atom). These substituents may be further substituted with a substituent.
  • R 4 , R 5 and R 6 are methyl groups.
  • the cationic group in R 1 is preferably a quaternary ammonium group, and is preferably a quaternary ammonium group represented by the general formula (5) (an ammonium group in which all R 4 are substituted or unsubstituted alkyl groups). ) is more preferable. Further, the substitution position of the cationic group in the alkyl group is not particularly limited, but it is preferable that the hydrogen atom bonded to the terminal carbon atom of the alkyl group is substituted with a cationic group.
  • R 2 represents a hydrogen atom or a substituted or unsubstituted alkyl group.
  • R 2 is preferably a substituted or unsubstituted alkyl group.
  • the alkyl group in R 2 may be linear, branched, or cyclic.
  • the alkyl group in R 2 preferably has 1 to 20 carbon atoms, more preferably 1 to 10 carbon atoms, and still more preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • examples of the alkyl group in R 2 include a methyl group, ethyl group, n-propyl group, and isopropyl group, and the alkyl group in R 2 is preferably an ethyl group.
  • substituents that can be substituted on the alkyl group include a benzyl group and a halogen atom (eg, a fluorine atom). These substituents may be further substituted with a substituent.
  • R 10 and R 11 each independently represent an aliphatic chain having 8 to 22 carbon atoms, preferably a long aliphatic chain, such as a saturated aliphatic chain or an unsaturated aliphatic chain. It can be a fatty chain. In some embodiments, R 10 and R 11 are each independently a long saturated fatty chain having 12 to 22 carbon atoms. In certain embodiments, R 10 and R 11 can be long saturated fatty chains of 12 to 14 (eg, 13) carbon atoms. In some embodiments, the glycerophospholipid represented by general formula (2) may be EDMPC.
  • the number of alkylcarbonyloxy groups substituted in the alkyl group is preferably 2 to 8, more preferably 2 to 4, and most preferably 2.
  • the substitution position of the alkylcarbonyloxy group in the alkyl group is not particularly limited, but when the alkyl group as the main chain of R 3 is an n-propyl group, the hydrogen atom bonded to the terminal carbon atom and the carbon atom next to it.
  • a phospholipid in which the hydrogen atom bonded to is substituted with an alkylcarbonyloxy group corresponds to a glycerophospholipid, and is a particularly preferred phospholipid.
  • the carboxylate ion can be a long-chain fatty acid, preferably a long-chain unsaturated fatty acid, such as linoleic acid or oleic acid, or a long-chain saturated fatty acid, such as stearic acid;
  • R1 is -NR 4 R 5 R 6 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently methyl or ethyl, preferably all are methyl.
  • R 10 and R 11 are each independently a long chain fatty chain, preferably each independently a long chain fatty chain having 12 to 22 carbon atoms, and more preferably a long chain fatty chain having 12 to 14 carbon atoms. It is a long fatty chain.
  • the carboxylate ion is a long-chain unsaturated fatty acid, such as linoleic acid or oleic acid
  • R1 is -NR 4 R 5 R 6
  • R 4 , R 5 and R 6 are each independently methyl or ethyl, preferably both are methyl
  • R 10 and R 11 are each independently carbon A long fatty chain having 12 to 22 carbon atoms, more preferably a long fatty chain having 12 to 14 carbon atoms.
  • the carboxylate ion is a long-chain unsaturated fatty acid, such as linoleic acid or oleic acid
  • the glycerophospholipid represented by the general formula (2) is R1 is -NR 4 R 5 R 6 , R 4 , R 5 and R 6 are methyl, R 10 and R 11 are each independently a long fatty chain having 12 to 22 carbon atoms, More preferably, it is a long fatty chain having 12 to 14 carbon atoms.
  • R-COO - has the same meaning as R-COO - in general formula (1), and specific examples include linoleic acid, oleic acid, acetic acid, or stearic acid. Each carboxylate ion is mentioned.
  • anionic surfactants include phospholipids and fatty acids.
  • anionic surfactant include phosphatidylglycerol, cardiolipin, diacylphosphatidylserine, diacylphosphatidic acid, N-dodecanoylphosphatidylethanolamine, N-succinylphosphatidylethanolamine, N-glutarylphosphatidylethanolamine, lysylphosphatidylglycerol, These include palmitoyloleoylphosphatidylglycerol (POPG) and other anionic modifying groups attached to neutral lipids.
  • POPG palmitoyloleoylphosphatidylglycerol
  • Phospholipids include phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, phosphatidic acid, palmitoyloleoylphosphatidylcholine, lysophosphatidylcholine, lysophosphatidylethanolamine, dipalmitoylphosphatidylcholine, dioleoylphosphatidylcholine, distearoylphosphatidylcholine, and dilinoleoyl. Examples include phosphatidylcholine.
  • Fatty acids are carbon chains with monovalent carboxylic acids.
  • the fatty acid is cis rather than trans.
  • Fatty acids are represented by the formula CH 3 -R-CO 2 H ⁇ where carbon chain ⁇ , and are expressed based on the number of carbons and double bonds contained in the fatty acid.
  • capric acid has R -(CH 2 ) 8 - and is expressed as 10:0
  • lauric acid has R as -(CH 2 ) 10 - and is expressed as 12:0
  • myristic acid is represented by 14:0 when R is -(CH 2 ) 14 -
  • pentadecyl acid is represented by 15:0 when R is -(CH 2 ) 15 -
  • palmitic acid is represented by 15:0 when R is -(CH 2 ) 15 -.
  • a "solid composite” is a composite composed of solid components.
  • a composite of cryotubes can be maintained dispersed in an oil layer.
  • a solid composite is a composite that includes solid components, although it may contain water.
  • the solid composite may have a low water content, for example a water content of 1% by weight or less, 0.9% by weight or less, 0.8% by weight or less, 0.7% by weight, as determined by known methods. It can be up to 0.6 wt%, up to 0.5 wt%, up to 0.4 wt%, up to 0.3 wt%, up to 0.2 wt%, or up to 0.1 wt%.
  • a transdermal absorption preparation capable of transdermally delivering a target molecule (eg, a nucleic acid) to a living body.
  • the transdermal absorption preparation of the present invention has a concentration of at least about 1.5 times or more, about 2 times or more compared to the target molecule (e.g., nucleic acid) dissolved in a buffer solution (e.g., Tris EDTA (TE) buffer). , about 2.5 times or more, about 3 times or more, about 3.5 times or more, or about 4 times or more can be achieved.
  • TE buffer typically contains 10mM Tris (pH 7.4-8.0) and 1mM EDTA.
  • the transdermal absorption preparation of the present invention is at least about 5 times or more, about 6 More than 7 times more, more than 8 times more, more than 9 times more, more than 10 times more, more than 11 times more, more than 12 times more, more than 13 times more, more than 14 times more, or more than 15 times more skin
  • the amount of penetration can be achieved.
  • the S/O formulations of the present invention increase the amount of target molecules (eg, nucleic acids) that penetrate the skin based on the particle structure, charge state, and/or added components.
  • a molecule of interest is a molecule that can benefit from delivery by the methods of the invention.
  • a composition that includes a solid complex containing a target molecule (for example, a nucleic acid) and a surfactant, and an oil phase.
  • the composition does not include an aqueous phase.
  • the complex is dispersed in the oil phase.
  • a W/O emulsion is formed by mixing an aqueous phase containing a target molecule (e.g., a nucleic acid) and an organic solvent phase containing a surfactant, and the resulting W/O emulsion is freeze-dried to remove water and organic solvent. Upon removal of the fraction, a dry solid composite is obtained.
  • the solid complex includes a molecule of interest (eg, a nucleic acid) and a surfactant, and the molecule of interest (eg, a nucleic acid) is coated with the surfactant.
  • Coating is usually done with a sufficient amount (particularly a saturating amount) of surfactant over the entire surface of the core containing the molecule of interest (eg, nucleic acid).
  • the solid composite is dispersed in an oil phase. It is believed that the surfactant binds the target molecule (eg, a nucleic acid) with its hydrophilic portion and contacts the oil phase with its hydrophobic portion directed out of the complex. In this way, the surfactant is also believed to play an important role in promoting the dispersion of the solid complex containing the hydrophilic target molecule (eg, nucleic acid) into the oil phase.
  • the above composition is obtained by dispersing the obtained solid composite in an oil phase.
  • the complex is presumed to form solid particles or solid complexes.
  • the composition of the present invention can be used for transdermal absorption of a target molecule (eg, a nucleic acid). Therefore, the above composition of the present invention can be formulated as a transdermal absorption agent.
  • the components other than the target molecule e.g., nucleic acid
  • the components other than the target molecule are usually about 50 wt/wt% or more, about 60 wt/wt% or more, about 70 wt/wt% or more, about 80 wt/wt% or more.
  • the complex comprises a molecule of interest (eg, a nucleic acid) and a surfactant (however, the complex may have unavoidable contamination with impurities during the manufacturing process).
  • the composition may be a dermatologically acceptable composition.
  • a composition in some embodiments, includes a complex (preferably a complex particle or solid complex) comprising a molecule of interest (e.g., a nucleic acid) and a surfactant, and an aqueous phase. .
  • the composition does not include an oil phase.
  • the complex is dispersed in the aqueous phase.
  • a dispersion (preferably an aqueous dispersion) in which a surfactant-target molecule (eg, nucleic acid) complex is dispersed in an aqueous phase is obtained. From the examination of zeta potential and DLS, it is considered that in the complex, the target molecule (eg, nucleic acid) is coated with a surfactant.
  • the aqueous dispersion is not cytotoxic.
  • the above aqueous composition can be used to introduce a target molecule (eg, a nucleic acid) into cultured cells.
  • the size of the complex is not particularly limited as long as it can maintain a dispersed state in the oil phase and the complex does not impair skin permeability.
  • the average particle diameter (average particle diameter by DLS) of the composite (composite particles) is, for example, about 1 nm to about 3000 nm, about 1 nm to about 2000 nm, about 1 nm to about 1500 nm, about 1 nm to about 1400 nm, about 1 nm to about about 1300 nm, about 1 nm to about 1200 nm, about 1 nm to about 1100 nm, about 1 nm to about 1000 nm, preferably about 10 nm to about 900 nm, more preferably about 100 nm to about 700 nm, even more preferably about 200 nm to about 500 nm ⁇ Here
  • the average particle size can be about 1 ⁇ m or more, and when the nucleic acid is an antisense oligo or
  • the average particle size of the composite is about 300 nm to about 500 nm.
  • the polydispersity index (PDI) is a measure of the particle size heterogeneity of particles. The smaller the PDI, the more uniform the particle size.
  • the polydispersity index of the formulations of the invention is, for example, about 1 or less, about 0.2 to about 0.8, about 0.3 to about 0.7, about 0.2 to 0.4, or about It may be on the order of 0.4 to about 0.6.
  • Nucleic acids are hydrophilic compounds. For this reason, they usually do not penetrate the skin alone or have low skin penetration.
  • the skin permeability of the nucleic acid is enhanced by complexing the nucleic acid with a surfactant. Hydrophilic compounds and proteins also typically do not penetrate the skin alone or have low skin penetration.
  • hydrophilic physiologically active substances such as hydrophilic compounds and hydrophilic proteins are complexed with a surfactant instead of nucleic acids. has enhanced skin permeability.
  • Nucleic acid may be DNA or RNA. Nucleic acids may be single-stranded or double-stranded. Nucleic acids include mRNA, antisense nucleic acids that target RNA (e.g., antisense oligo), shRNA, microRNA, and siRNA, decoy nucleic acids that bind to transcription factors and suppress transcription steps, and proteins that bind to proteins and function. Examples include aptamers that inhibit Toll-like receptor 9 and CpG oligodeoxynucleotides that activate the immune system by acting on Toll-like receptor 9. The nucleic acid may be mRNA (mRNA vaccine) that causes a predetermined protein to be expressed within cells.
  • mRNA vaccine mRNA vaccine
  • the base length of the nucleic acid is not particularly limited, but is, for example, about 10 to about 80 bases, about 15 to about 50 bases, or about 20 to about 30 bases.
  • the length of siRNA can be, for example, about 20 to about 30 bases, about 20 to about 24 bases, or about 21 to about 23 bases.
  • the nucleic acid may include a modified nucleic acid in its base sequence. That is, the nucleic acid can be a nucleic acid such as DNA, RNA, a hybrid of DNA and RNA, and a nucleic acid including a modified nucleic acid (gapmer and mixer).
  • a gapmer is a single-stranded nucleic acid having a DNA portion and an RNA or modified nucleic acid portion, wherein the RNA or modified nucleic acid portion is located at both ends of the DNA portion.
  • a gapmer can be, for example, a double-stranded nucleic acid.
  • Mixmers are nucleic acids containing antisense containing different types of nucleic acids. Antisense oligos, microRNAs, siRNAs, shRNAs, gapmers, mixmers, etc. can have their sequences and lengths designed to exert a knockdown effect on the targeted RNA.
  • modified nucleic acids include fluorescent dye-modified nucleic acids, biotinylated nucleic acids, and cholesteryl group-introduced nucleic acids.
  • bases may be modified with 2'-O-methyl, 2'-fluoro or 2'-methoxyethyl (MOE).
  • MOE 2'-O-methyl, 2'-fluoro or 2'-methoxyethyl
  • phosphorothioate-type nucleic acids phosphodiester bonds in the nucleic acid backbone may be replaced with phosphorothioate bonds.
  • artificial nucleic acids include nucleic acids in which an oxygen atom at the 2' position and a carbon atom at the 4' position are crosslinked.
  • LNA locked nuclear acid
  • ENA in which the carbon atom at the 4' position is cross-linked through ethylene
  • BNACOC in which the oxygen atom at the 2' position and the carbon atom at the 4' position are cross-linked through -CH 2 OCH 2 -
  • BNA bridged nucleic acid
  • RNA includes artificial RNA for gene silencing such as siRNA and shRNA, non-coding RNA such as microRNA (miRNA), aptamer, and natural RNA such as mRNA. These RNAs can be modified to stabilize them in vivo.
  • proteins encoded by mRNA include components or parts thereof specific to different organisms, such as pathogens, and components or parts thereof specific to cancer cells.
  • Pathogens include pathogenic viruses, pathogenic microorganisms, and pathogenic parasites.
  • Pathogenic viruses include human immunodeficiency virus (HIV), hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, herpesvirus, adenovirus, influenza virus, flavivirus, echovirus, rhinovirus, coxsackievirus, coronavirus (e.g.
  • SARS-CoV severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus
  • MERS Middle East respiratory syndrome-associated coronavirus
  • SARS-CoV-2 respiratory polyhedrovirus
  • mumps virus rotavirus
  • measles virus rubella virus
  • parvovirus vaccinia virus
  • human T-cell leukemia (HTL) virus dengue virus
  • papillomavirus molluscum contagiosum virus
  • poliovirus rabies virus
  • JC John Cunningham
  • arboviral encephalitis virus arboviral encephalitis virus.
  • Viruses such as Pathogenic microorganisms include pathogenic bacteria, such as chlamydia, Rickettsiales, mycobacteria, staphylococci, streptococci, pneumococci, meningococci and gonococci, Klebsiella spp., Proteus spp. Bacteria selected from the group consisting of Serratia, Pseudomonas, Legionella, diphtheria, Salmonella, Bacillus, cholera, tetanus, botulism, anthrax, plague, leptospirosis and Lyme disease bacteria.
  • pathogenic bacteria such as chlamydia, Rickettsiales, mycobacteria, staphylococci, streptococci, pneumococci, meningococci and gonococci, Klebsiella spp., Proteus spp.
  • Bacteria selected from the group consisting of Serratia, Ps
  • Pathogenic microorganisms include pathogenic fungi, and pathogenic fungi include Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), and Mucorales (mucorales, etc.). pathogenic fungi selected from the group consisting of Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis, and Histoplasma capsulatum.
  • Pathogenic parasites include Entamoeba histolytica, Balangium colonic, Naegleria fowleri, Acanthamoeba spp. Giardia lamblia, Cryptosporidium spp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Donovan. - Pathogenic parasites selected from the group consisting of Leishmania, Toxoplasma gondii and Brazilian hookworm. Accordingly, in certain aspects of the invention, the mRNA may encode a component (preferably a surface antigen) of these pathogens or a portion thereof.
  • antigens used by pathogens to infect cells can be preferably encoded by the mRNA of the present invention.
  • Cancers include bladder cancer, breast cancer, uterine cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, colon cancer, head and neck cancer, lung cancer, stomach cancer, germ cell cancer, and bone cancer.
  • cancer squamous cell carcinoma, skin cancer, central nervous system neoplasm, lymphoma, leukemia, sarcoma, virus-associated cancer, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, gastrointestinal cancer, Hodgkin or non-Hodgkin lymphoma, pancreatic Cancer, glioblastoma, glioma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, myeloma, salivary gland cancer, kidney cancer, basal cell cancer, melanoma, prostate cancer, vulva cancer, thyroid cancer, testicular cancer, esophageal cancer, and head and neck cancer.
  • the mRNA may be an antigen specific to these cancers (cancer-specific antigen, preferably cancer-specific surface antigen) or a part thereof.
  • cancer-specific antigen can be, for example, a neoantigen or a part thereof characteristic of a neoantigen.
  • Cancer-specific antigens also include, for example, cancer testis antigens (e.g., MAGE family proteins, NY-ESO-1), differentiation antigens (e.g., melanoma tyrosine kinase, Melan-A/MART-1, prostate cancer PSA), overexpressed cancer antigens (e.g., Her-2/Neu, survivin, telomerase, and WT-1), oncogenic variants of ⁇ -catenin, oncogenic variants of CDK4, MUC-1 , especially MUC-1, which has an altered glycosylation pattern, E6 or E7 of the human papillomavirus.
  • cancer testis antigens e.g., MAGE family proteins, NY-ESO-1
  • differentiation antigens e.g., melanoma tyrosine kinase, Melan-A/MART-1, prostate cancer PSA
  • overexpressed cancer antigens e.g., Her-2/Neu, survivin,
  • mRNA suitable for the present invention depending on the type of infectious disease and cancer that the subject has contracted, and the type of antigen expressed in the cancer. can do.
  • mRNA for natural mutant proteins can also be appropriately designed.
  • the surfactant is not particularly limited as long as it is pharmaceutically acceptable.
  • ionic surfactants such as anionic surfactants and cationic surfactants are preferably used.
  • Anionic (anionic) surfactants and cationic (cationic) surfactants are preferred because they have excellent ability to form complexes with target molecules (eg, nucleic acids).
  • the present disclosure uses a mixture of a cationic surfactant and an anionic surfactant as the surfactant.
  • a lipophilic ionic surfactant having an HLB (Hydrophile-Lipophile Balance) value of 10 or less is preferred because the complex can be easily dispersed in the oil phase.
  • the HLB of the ionic surfactant is preferably 8 or less, more preferably 5 or less, particularly preferably 3 or less.
  • the HLB of the ionic surfactant can be, for example, 1-3, 3-5, or 5-10. In some embodiments, the ionic surfactant can have an HLB of 5-10. In certain embodiments, the HLB of the cationic surfactant can be from 1 to 10, such as from 1 to 3, from 3 to 5, or from 5 to 10. In some embodiments, the cationic surfactant can have an HLB of 5-10.
  • the ratio of the mass of the surfactant to the mass of the target molecule (e.g., nucleic acid) in the complex is, for example, 1 to 200, preferably It can be from 20 to 180, more preferably from 20 to 100. If the nucleic acid is an antisense oligo, the mass ratio may preferably be 30-50, and if the nucleic acid is mRNA, the mass ratio may preferably be 50-100.
  • the content of the complex in the composition or transdermal absorption agent according to the present embodiment is not particularly limited as long as it has a dispersible concentration.
  • the content of the complex in the composition or transdermal absorption agent is, for example, 0.6 w/v% to 60 w/v%.
  • the content of the target molecule (e.g., nucleic acid) in the transdermal absorbent is not particularly limited, and is, for example, 0.1 to 10 mg/mL, 0.2 to 8 mg/mL, 0.3 to 7 mg/mL, or preferably It can be 1-5 mg/mL.
  • the complex may consist only of a target molecule (for example, a nucleic acid) and a surfactant, or may contain other components such as a stabilizer.
  • the stabilizer is, for example, a hydrophilic protein or polysaccharide, and preferably has a molecular weight of 10,000 or more.
  • the stabilizer improves the stability of the complex by being coated with a surfactant together with the target molecule (e.g., a nucleic acid), and prevents the target molecule (e.g., a nucleic acid) from leaving the complex in a composition or transdermal absorption agent. ) can be prevented from leaking.
  • proteins include serum albumin, ovalbumin, casein, lysozyme, and lipase. These proteins may be used alone or in combination of two or more.
  • polysaccharides examples include LM pectin, HM pectin, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, heparin, alginic acid, and carboxymethylcellulose. These polysaccharides may be used alone or in combination of two or more.
  • the ratio of the mass of the stabilizer to the mass of the target molecule (eg, nucleic acid) in the complex is preferably 0.01 to 100, more preferably 0.1 to 10, and even more preferably 0.5 to 5.
  • the oil phase may be liquid or solid with fluidity.
  • the base material for the oil phase is not particularly limited as long as it is an oil base material acceptable for use in pharmaceutical formulations, preferably pharmaceutical formulations for transdermal delivery. Either an oil that is liquid at room temperature (25° C.) or an oil that is solid at room temperature can be used. There are no restrictions on the origin of the raw materials, and for example, both natural and synthetic materials can be used.
  • the oil phase includes soybean oil, cottonseed oil, rapeseed oil, sesame oil, corn oil, peanut oil, safflower oil, sunflower oil, olive oil, rapeseed oil, perilla oil, fennel oil, cacao oil, cinnamon oil, peppermint oil, and bergamot.
  • the oil phase may be of vegetable origin, such as oil, or of animal origin, such as beef tallow, pork oil, or fish oil.
  • the oil phase may also be a neutral lipid such as glyceride, triolein, trilinolein, tripalmitin, tristearin, trimyristin, triarachidonin, or a synthetic lipid.
  • the oil phase may be sterol derivatives such as cholesteryl oleate, cholesteryl linoleate, cholesteryl myristate, cholesteryl palmidate and cholesteryl arachidate, isopropyl myristate (IPM), octyldodecyl myristate. , cetyl myristate, ethyl oleate, ethyl linoleate, isopropyl linoleate, isopropyl palmitate, and butyl stearate.
  • sterol derivatives such as cholesteryl oleate, cholesteryl linoleate, cholesteryl myristate, cholesteryl palmidate and cholesteryl arachidate, isopropyl myristate (IPM), octyldodecyl myristate.
  • the oil phase may also be a carboxylic acid ester such as ethyl lactate, cetyl lactate, triethyl citrate, diisopropyl adipate, diethyl sebacate, diisopropyl sebacate, and cetyl 2-ethylhexanoate, petrolatum, paraffin squalane, etc. and hydrocarbons such as vegetable squalane, or silicones.
  • the oily base materials may be used alone or in combination of two or more.
  • triglyceride or a food oil containing triglyceride as a main component can be used as the oil phase.
  • soybean oil is preferred, and highly purified soybean oil is more preferred.
  • neutral lipids or long chain fatty acid esters can also be suitably used, with long chain fatty acid esters being more preferred and IPM being even more preferred.
  • the content of the oil phase in the composition or transdermal absorption agent according to the present embodiment varies depending on the type of oil component and other components, but is preferably 50 w/v% to 99.5 w/v%, and 60 w/v%. /v% to 90w/v% is more preferable.
  • ultrapure water means water that meets the ASTM D 5196-06 (2016) standard, and the ASTM D 5196-06 (2016) standard specifies that the total amount of inorganic ions (particularly aluminum, ammonia, arsenic, cadmium, , chromium, fluoride ions, cobalt, copper, iron, lead, magnesium, nickel, potassium, sodium, titanium, and zinc, and chloride ions, nitrate ions, phosphate ions, and sulfate ions) at 1 ⁇ g/L or ratio
  • the resistance is 18.2 M ⁇ cm at 25°C
  • the amount of total organic carbon is 20 ppb or less
  • the number of bacterial colonies is 100 cfu/100 mL or less
  • the amount of endotoxin is 0.01 EU/mL or less.
  • Ultrapure water used for solutions containing nucleic acids must contain nucleases below the detection limit.
  • Ultrapure water used for solutions containing proteins must contain proteases below the detection limit.
  • cationic lipids include, for example, a cationic moiety and a fatty chain such as an alkyl, alkenyl, or alkynyl (eg, a long fatty chain).
  • An ionic liquid is a salt that consists of cations and anions and exists as a liquid over a wide temperature range.
  • the ionic liquid is a liquid at ambient temperature (eg, room temperature, eg, 25°C).
  • the anion for example, a carboxylate ion in which a hydrogen ion is dissociated from a carboxy group of a fatty acid or a derivative thereof is preferable.
  • the fatty acids that generate carboxylate ions may be saturated or unsaturated.
  • saturated fatty acids include myristic acid, palmitic acid, stearic acid, and lauric acid
  • unsaturated fatty acids include oleic acid, linoleic acid, ⁇ -linolenic acid, ⁇ -linolenic acid, arachidonic acid
  • examples include icosapentaenoic acid, docosahexaenoic acid and erucic acid.
  • the cation capable of forming an ionic liquid is preferably a cationic lipid, preferably a phospholipid having a cationic group.
  • phospholipid means a lipid containing a phosphate ester structure
  • cationic group means a positively charged substituent.
  • the two hydroxyl groups of the phosphoric acid group are substituted with lower alkyl (for example, ethyl) to eliminate the charge, and the lower alkyl is replaced with an amine (primary amine, secondary amine, or tertiary amine). ) becomes a cationic lipid.
  • the cation capable of forming an ionic liquid is preferably a glycerophospholipid having a cationic group, and more preferably a phosphatidylcholine derivative.
  • the anion capable of forming an ionic liquid is linoleic acid and the cation capable of forming an ionic liquid is 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-ethylphosphocholine. Unsaturated lipids are more likely to form ionic liquids than saturated lipids.
  • the content of the skin permeation enhancer in the composition or transdermal absorption agent according to the present embodiment is determined from the viewpoint of improving the skin permeability of the target molecule (e.g., nucleic acid); %, 2-18% by weight, 3-16% by weight, 4-15% by weight, or 5-10% by weight.
  • the target molecule e.g., nucleic acid
  • the composition or transdermal absorption agent according to the present embodiment can be manufactured by a method including, for example, an emulsion preparation step, a composite preparation step, and a dispersion step.
  • a target molecule for example, a nucleic acid
  • a surfactant for example, a surfactant
  • an organic solvent solution are mixed to prepare a W/O emulsion.
  • the emulsion preparation step is performed under conditions suitable for forming a W/O emulsion.
  • an aqueous solution containing a target molecule for example, a nucleic acid
  • the aqueous solution may further contain a cation
  • an organic solvent solution containing a surfactant are mixed, emulsified and dispersed.
  • the organic solvent solution is preferably a volatile organic solvent solution from the viewpoint of ease of removal in the subsequent drying step.
  • the concentration of target molecules (e.g., nucleic acids) in the aqueous solution is not particularly limited as long as they can be substantially completely dissolved, but for example, about 0.1 mg/mL to about 30 mg/mL, about 0.4 mg/mL to about 30 mg/mL, or about 1 mg/mL to about 30 mg/mL.
  • a stabilizer may be added to the aqueous solution.
  • the organic solvent is not particularly limited as long as it can dissolve the surfactant and can be removed in the subsequent step. Examples of the organic solvent include aliphatic hydrocarbons such as hexane and cyclohexane, and aromatic hydrocarbons such as toluene.
  • the concentration of the surfactant in the organic solvent solution is not particularly limited, but is, for example, 1 mg/mL to 100 mg/mL, 20 mg/mL to 90 mg/mL, or 40 mg/mL to 80 mg/mL.
  • Emulsification and dispersion can be carried out using a stirrer, high-speed rotation shear stirrer, colloid mill, homogenizer, flow jet mixer, ultrasonic emulsifier, vacuum emulsifier, etc.
  • the particle size of the dispersed droplets can be controlled by adjusting the stirring intensity.
  • the W/O emulsion obtained in the emulsion preparation step is dried to prepare a target molecule (eg, nucleic acid)-surfactant complex (solid complex or solid particles).
  • a target molecule eg, nucleic acid
  • the drying method is not particularly limited, and examples include freeze drying and vacuum drying, with freeze drying being preferred. Moisture may cause leakage of target molecules (eg, nucleic acids) within the formulation. Organic solvents may have an adverse effect on living organisms. For this reason, it is preferable to substantially completely remove water and organic solvent in the drying step.
  • the water content is 1% by mass or less, 0.9% by mass or less, 0.8% by mass or less, 0.7% by mass or less, 0.6% by mass or less, 0.5% by mass
  • the amount may be set to 0.4% by mass or less, 0.3% by mass or less, 0.2% by mass or less, or 0.1% by mass or less.
  • the complex containing the target molecule (eg, nucleic acid) and the surfactant thus obtained can be a solid complex or solid particles with a low water content.
  • the organic solvent is volatile, it is naturally removed during the drying process.
  • the target molecule (eg, nucleic acid)-surfactant complex (dispersoid) obtained in the complex preparation step is dispersed in the oil phase (dispersion medium).
  • the target molecule (eg, nucleic acid)-surfactant complex specifically, a method similar to the method exemplified as the emulsification and dispersion method in the emulsion preparation step can be used.
  • the amount of oil phase used in the dispersion step depends on the compatibility between the surfactant and the type of oil phase, but is, for example, 1 mL to 200 mL per 1 g of target molecule (e.g., nucleic acid)-surfactant complex. .
  • Other components such as skin penetration enhancers may be dispersed in the oil phase, if necessary.
  • the composition or transdermal absorption agent according to the present embodiment is obtained as a dispersion preparation or suspension in the dispersion step.
  • the formulation of the invention can also be obtained by the ethanol dilution method.
  • a composition containing a cation and an anion or a composition consisting of a cation and an anion can be used.
  • Cations and anions can be cationic and anionic surfactants, respectively.
  • the principle of the ethanol dilution method is based on the fact that when ethanol (which may be a lower alcohol) containing water-soluble molecules having ethanol solubility is diluted with water, the molecules that are no longer soluble form a complex.
  • cations, anions, and target molecules are mixed by mixing a lower alcohol solution containing cations and anions with an aqueous solution containing a drug such as a target molecule (e.g., a nucleic acid).
  • a complex containing The obtained complex (dispersed in a low concentration ethanol solution) can be used as it is, but it can also be used after being lyophilized and dispersed in an oil phase.
  • the resulting complex (dispersed in a low concentration ethanol solution) can be used, for example, to transfect a target molecule (e.g., a nucleic acid) into a cell by contacting the cell. can.
  • the complex, lyophilized and dispersed in an oil phase can be used for transdermal administration.
  • the lower alcohol is an alcohol having 6 or less carbon atoms, preferably 5 or less, more preferably 4 or less, 3 or less, or 2 or less.
  • Examples of lower alcohols include methanol, ethanol, 1-propanol, isopropanol, 1-butanol, isobutyl alcohol, 2-butanol, and tert-butyl alcohol.
  • ethanol can preferably be used as the lower alcohol.
  • the present invention provides a composition for use in forming a complex with a drug component, which includes a cation and an anion.
  • the composition can be an ionic liquid in some embodiments.
  • the composition may further contain a lower alcohol in addition to the cation and anion.
  • the lower alcohol can be ethanol.
  • the cation and anion those used for forming the above-mentioned solid composite can be used.
  • the cation may preferably be a cationic lipid.
  • the anion may preferably be an anionic lipid. Cations and anions can be cationic and anionic lipids, respectively.
  • Cationic lipids and anionic lipids act as surfactants and are therefore used interchangeably with cationic surfactants and anionic surfactants, respectively.
  • the composition comprises or consists of a cationic surfactant, an anionic surfactant, and a lower alcohol (preferably ethanol).
  • a composition containing or consisting of a cationic surfactant, an anionic surfactant, and a lower alcohol preferably ethanol
  • an aqueous solution containing a target molecule e.g., a nucleic acid
  • the cationic surfactant instantly becomes active.
  • An aqueous lower alcohol solution containing a complex containing the agent, an anionic surfactant, and a target molecule eg, a nucleic acid
  • the resulting composite contains particles with a particle size of about 5 nm to about 20 nm.
  • the resulting composite comprises an agglomerate comprising a plurality of particles with a particle size of about 5 nm to about 20 nm.
  • the agglomerates can have a particle size of, for example, about 100 nm to about 500 nm, or about 100 to about 300 nm.
  • the obtained lower alcohol solution is directly brought into contact with cells to introduce the target molecule (e.g., nucleic acid) into the cells. or can be transfected. Alcohol can also be removed from the resulting solution by treatment such as dialysis.
  • an aqueous solution eg, physiological saline
  • an aqueous solution eg, substantially free of alcohol
  • the obtained lower alcohol solution can also be freeze-dried without going through the emulsion forming step, and then the obtained freeze-dried product can be dispersed in the oil phase.
  • the composition comprises a solid complex comprising a cationic surfactant, an anionic surfactant and a molecule of interest (e.g. a nucleic acid), comprising an oil phase, the complex being dispersed in the oil phase.
  • a complex or a solid complex containing a cationic surfactant, an anionic surfactant, and a target molecule e.g., a nucleic acid
  • the complex is dispersed in an aqueous phase.
  • an organic solvent such as acetone or acetonitrile may be used instead of the lower alcohol.
  • lower alcohols are preferably used in the ethanol dilution method, preferably ethanol.
  • acetone may be used.
  • acetonitrile may be used.
  • the obtained composition can be used as a transdermal absorption agent.
  • the resulting composition can also be used as a composition for transdermal administration.
  • the resulting composition may further contain an anionic surfactant.
  • anionic surfactants particularly fatty acids
  • the resulting composition can be applied to the skin to allow target molecules (eg, nucleic acids) to penetrate the skin.
  • a composition containing the resulting complex and an aqueous phase can be used to introduce or transfect a target molecule (eg, a nucleic acid) into cells.
  • the nucleic acid can be replaced with physiologically active substances such as proteins and low molecular weight compounds. This allows effective transdermal administration of physiologically active substances such as proteins and low-molecular compounds instead of nucleic acids.
  • the cationic surfactant and anionic surfactant are 50 mol% or more of the contained surfactant. , 60 mol% or more, 70 mol% or more, 80 mol% or more, 90 mol% or more, 95 mol% or more, 98 mol% or more, 99 mol% or more, or 100 mol%.
  • the cationic surfactant and the anionic surfactant are preferably 1:0.5 to 1:2, 1:0.6 to 1:1.5, 1:0.8 to 1:1.25, 1:0.9 to 1:1.11, or about 1:1 in the complex.
  • the cationic surfactant and anionic surfactant are electrically neutralized in the complex.
  • composition or transdermal absorption agent The composition or transdermal absorption agent according to this embodiment may be formulated by adding other additive components.
  • Other additive components include, for example, excipients, colorants, lubricants, binders, emulsifiers, thickeners, wetting agents, stabilizers, preservatives, solvents, solubilizing agents, suspending agents, and buffers. agents, pH adjusters, bases, etc., and these can be blended in usual amounts.
  • excipients examples include sugars such as white sugar, starch derivatives such as dextrin, cellulose derivatives such as carmellose sodium, and water-soluble polymers such as xanthan gum.
  • examples of lubricants include stearic acid metal salts such as calcium stearate and magnesium stearate, lauryl sulfate, and starch derivatives in the above-mentioned excipients.
  • examples of the binder include the above-mentioned excipients and macrogol.
  • the humectant is, for example, glycerin.
  • stabilizers include methylparaben, parahydroxybenzoic acid esters, chlorobutanol, alcohols such as benzyl alcohol and phenylethyl alcohol, benzalkonium chloride, phenol, phenols such as cresol, thimerosal, acetic anhydride, and sorbic acid. etc.
  • the solvent include water, ethanol glycerin, and the like.
  • Suspending agents include, for example, carmellose sodium.
  • the base include polyethylene glycol, crotamiton, diethyl sebacate, and petrolatum.
  • the dispersion or suspension obtained by the above production method may be used as is, but if necessary, other additive components may be mixed and prepared into patches, ointments, lotions, aerosols, etc. by a known method. It can be processed into external preparations such as plasters, aqueous poultices, creams, gels, plasters, reservoir-type patches, matrix-type patches, and tapes. In this way, a transdermal absorption preparation can be obtained.
  • the dosage of the composition or transdermal absorption agent according to the present embodiment can be adjusted depending on the patient's age, symptoms, type of applicable disease, etc.
  • the amount of target molecule (e.g., nucleic acid) per administration is usually 1 ⁇ g to 30 mg, preferably 10 ⁇ g to 10 mg, more preferably 30 ⁇ g to 3 mg per adult for several weeks. Can be administered over several months.
  • the composition or transdermal absorption agent according to the present embodiment is preferably applied to vertebrates, and more preferably to mammals.
  • mammals include humans, chimpanzees and other primates, domestic animals such as dogs, cats, rabbits, horses, sheep, goats, cows, pigs, rats, mice, and guinea pigs, pet animals, and laboratory animals. Can be mentioned.
  • humans are particularly preferred.
  • the composition or transdermal absorption agent according to this embodiment may be administered transdermally to a subject or applied to the subject's skin.
  • composition or transdermal absorption agent has a solid target molecule (e.g., nucleic acid)-surfactant complex dispersed in an oil phase, so that as shown in the examples below, Target molecules (eg, nucleic acids) that hardly penetrate the skin can be penetrated into the body through the skin.
  • a solid target molecule e.g., nucleic acid
  • Target molecules e.g, nucleic acids
  • the composition or transdermal absorption agent according to this embodiment can be used for diseases that can be treated with nucleic acids or nucleic acid medicines.
  • the disease is one in which the disease can be treated or prevented, or the progression of the disease can be stopped or suppressed, particularly by targeting RNA.
  • diseases include skin diseases such as skin cancer, rheumatoid arthritis, and atopic dermatitis.
  • the composition or transdermal absorption agent according to this embodiment is also suitable for transdermal DDS of RNA vaccines.
  • treatment of the above-described diseases comprises using the above-described compositions or transdermal agents containing a therapeutically effective amount of a molecule of interest (e.g., a nucleic acid) in a subject in need thereof.
  • a method is provided.
  • the therapeutically effective amount of the target molecule e.g., nucleic acid
  • the dose is set.
  • the above composition or transdermal absorption agent for treating the above disease is provided.
  • a method of improving transdermal absorption of a molecule of interest eg, a nucleic acid
  • a target molecule e.g., nucleic acid
  • a surfactant to form a solid target molecule (e.g., nucleic acid)-surfactant complex
  • the complex is dispersed in an oil phase to form a topical preparation. including doing.
  • it is difficult to use it as a topical preparation due to low transdermal absorption, and it is possible to increase the transdermal absorption of the target molecule (e.g., nucleic acid), which has not been sufficiently effective with topical preparations. I can do it.
  • a drug other than a nucleic acid can be used instead of a nucleic acid.
  • drugs other than nucleic acids include proteins and compounds (preferably hydrophilic proteins and hydrophilic compounds).
  • the protein may be, for example, but not limited to, a protein (preferably a hydrophilic protein, more preferably a cationic hydrophilic protein) having a molecular weight of 5 kDa to 100 kDa.
  • the compound is not particularly limited, but can be, for example, a compound (preferably a hydrophilic compound, more preferably a cationic hydrophilic compound) having a molecular weight of 800 to 10,000.
  • proteins include cytokines (eg, interleukin-1 (IL-1), IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL- 9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, ⁇ -interferon, ⁇ -interferon, ⁇ -interferon, angiostatin, thrombospondin, endostatin, GM- Examples include physiologically active substances such as CSF, G-CSF, M-CSF, tumor necrosis factor).
  • Proteins also include, for example, agalsidase beta, laronidase,reteplase, habinafusp alpha, urokinase, idursulfase, sebelipase alpha, monteplase, asfotase alpha, imiglucerase, velaglucerase, agalsidase alpha, alglucosidase alpha.
  • blood clotting factors e.g., I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, and XII
  • insulin somatropin
  • Proteins include, for example, Cas9 protein, RNA polymerase, transcription factors, ribosomes, cyclin-dependent kinases, growth factors (e.g., epidermal growth factor (EGF), platelet-derived growth factor (PDGF), fibroblast growth factors (FGFs) ), insulin-like growth factors (IGFs), nerve growth factors (NGF), vascular endothelial growth factors (VEGF), hepatocyte growth factors (HGF), transforming growth factors (TGFs), colony stimulating factors (CSFs), erythropoietin (EPO) ), granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF), granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), macrophage colony-stimulating factor (M-CSF), interleukins (some interleukins have growth factor activity ), bone morphogenetic proteins (BMPs), growth differentiation factors (GDF), glial cell lineage-derived neurotrophic factor
  • Nucleic acids include DNA or RNA (eg, mRNA). Proteins encoded by nucleic acids include components or portions thereof specific to foreign organisms, such as pathogens, and components or portions thereof specific to cancer cells. Pathogens include pathogenic viruses, pathogenic microorganisms, and pathogenic parasites. Pathogenic viruses include human immunodeficiency virus (HIV), hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, herpesvirus, adenovirus, influenza virus, flavivirus, echovirus, rhinovirus, coxsackievirus, coronavirus (e.g.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • hepatitis A hepatitis B
  • hepatitis C herpesvirus
  • adenovirus adenovirus
  • influenza virus flavivirus
  • echovirus e.g.
  • SARS-CoV severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus
  • MERS Middle East respiratory syndrome-associated coronavirus
  • SARS-CoV-2 respiratory polyhedrovirus
  • mumps virus rotavirus
  • measles virus rubella virus
  • parvovirus vaccinia virus
  • human T-cell leukemia (HTL) virus dengue virus
  • papillomavirus molluscum contagiosum virus
  • poliovirus rabies virus
  • JC John Cunningham
  • arboviral encephalitis virus arboviral encephalitis virus.
  • Viruses such as Pathogenic microorganisms include pathogenic bacteria, such as chlamydia, Rickettsiales, mycobacteria, staphylococci, streptococci, pneumococci, meningococci and gonococci, Klebsiella spp., Proteus spp. Bacteria selected from the group consisting of Serratia, Pseudomonas, Legionella, diphtheria, Salmonella, Bacillus, cholera, tetanus, botulism, anthrax, plague, leptospirosis and Lyme disease bacteria.
  • pathogenic bacteria such as chlamydia, Rickettsiales, mycobacteria, staphylococci, streptococci, pneumococci, meningococci and gonococci, Klebsiella spp., Proteus spp.
  • Bacteria selected from the group consisting of Serratia, Ps
  • Pathogenic microorganisms include pathogenic fungi, and pathogenic fungi include Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, etc.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, etc.), and Mucorales (mucorales, etc.). pathogenic fungi selected from the group consisting of Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis, and Histoplasma capsulatum.
  • Pathogenic parasites include Entamoeba histolytica, Balangium colonic, Naegleria fowleri, Acanthamoeba spp. Giardia lamblia, Cryptosporidium spp., Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Donovan. - Pathogenic parasites selected from the group consisting of Leishmania, Toxoplasma gondii and Brazilian hookworm. Accordingly, in certain aspects of the invention, the mRNA may encode a component (preferably a surface antigen) of these pathogens or a portion thereof.
  • antigens used by pathogens to infect cells can be preferably encoded by the mRNA of the present invention.
  • Cancers include bladder cancer, breast cancer, uterine cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, colon cancer, head and neck cancer, lung cancer, stomach cancer, germ cell cancer, and bone cancer.
  • cancer squamous cell carcinoma, skin cancer, central nervous system neoplasm, lymphoma, leukemia, sarcoma, virus-associated cancer, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, gastrointestinal cancer, Hodgkin or non-Hodgkin lymphoma, pancreatic Cancer, glioblastoma, glioma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, myeloma, salivary gland cancer, kidney cancer, basal cell cancer, melanoma, prostate cancer, vulva cancer, thyroid cancer, testicular cancer, esophageal cancer, and head and neck cancer.
  • the mRNA may be an antigen specific to these cancers (cancer-specific antigen, preferably cancer-specific surface antigen) or a part thereof.
  • cancer-specific antigen can be, for example, a neoantigen or a part thereof characteristic of a neoantigen.
  • Cancer-specific antigens also include, for example, cancer testis antigens (e.g., MAGE family proteins, NY-ESO-1), differentiation antigens (e.g., melanoma tyrosine kinase, Melan-A/MART-1, prostate cancer PSA), overexpressed cancer antigens (e.g., Her-2/Neu, survivin, telomerase, and WT-1), oncogenic variants of ⁇ -catenin, oncogenic variants of CDK4, MUC-1 , especially MUC-1, which has an altered glycosylation pattern, E6 or E7 of the human papillomavirus.
  • cancer testis antigens e.g., MAGE family proteins, NY-ESO-1
  • differentiation antigens e.g., melanoma tyrosine kinase, Melan-A/MART-1, prostate cancer PSA
  • overexpressed cancer antigens e.g., Her-2/Neu, survivin,
  • Nucleic acids may also encode proteins as exemplified above.
  • mRNA for natural mutant proteins can also be appropriately designed.
  • Nucleic acids also include fomivirsen, pegaptanib, mipomersen, eteplirsen, nusimersen, CpG1018, inotersen, patisiran, voranesorsen, gibosiran, golodirsen, viltlarsen, inclisiran, lumasiran, casimersen, butrisiran, defibrotide, travedersen, and tofersen.
  • Various other nucleic acids such as antisense oligo, siRNA, shRNA, and miRNA can be used as the nucleic acid.
  • target molecules include low-molecular compounds.
  • low-molecular compounds include antioxidants (e.g., ascorbic acid, isoascorbic acid, vitamin E, catechin, dibutylhydroxytoluene, tocopherol, butylhydroxyanisole, polyphenols, resveratrol (resveratrol 3, 5, 4), '-trihydroxy-trans-stilbene), coenzyme Q10, N-acetylcysteine, 2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl (TEMPO), superoxide dismutase (SOD), nicotinamide mononucleotide (NMN) , astaxanthin, ⁇ -carotene, and glutathione.
  • antioxidants e.g., ascorbic acid, isoascorbic acid, vitamin E, catechin, dibutylhydroxytoluene, tocopherol, butylhydroxyanisole, polyphenols, resveratrol (resverat
  • Examples of low molecular weight compounds include antitumor agents.
  • antitumor agents include alkylating agents, anthracyclines, antihormones, aromatase inhibitors, and antitumor agents. androgens, protein kinase inhibitors, lipid kinase inhibitors, antisense oligonucleotides, ribozymes, antimetabolites, topoisomerase inhibitors, cytotoxic or antitumor antibiotics, proteasome inhibitors, antimicrotubule agents, EGFR antagonists, Retinoids, tyrosine kinase inhibitors, histone deacetylase inhibitors, and combinations thereof.
  • Anti-tumor agents include, for example, erlotinib, bortezomib, disulfiram, epigallocatecin gallate, salinosporamide A, carfilzomib, 17-AAG (gel danamycin), radicicol, lactate dehydrogenase A (LDH-A), fulvestrant, sunitib, letrozole, imatinib mesylate, finasnate, oxaliplatin, 5-FU (5-fluorouracil), leucovorin, rapamycin, lapatinib, lonafarnib , sorafenib, gefitinib, AG1478, busulfan, improsulfan, and piposulfan; aziridines such as benzodopa, carbocone, metledopa, and uredopa; ethyleneimine and methylamelamine (altretamine, triethylenemelamine, triethylene acetogenins (
  • Antibiotics such as calicheamicin, particularly calicheamicin ⁇ 1I and calicheamicin ⁇ 1I (Angew Chem. Intl. Edition Engl. 1994 33:183-186); dynemicins (including dynemicin A); bisphosphonates such as clodronate; esperamicin; authramycin, azaserine, bleomycin, cactinomycin, carabicin, carminomycin, cardinophilin, chromomycinis, dactinomycin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucine , doxorubicin, morpholino-doxorubicin, cyanomorpholino-doxorubicin, 2-pyrrolino-doxorubicin, doxorubicin and deoxydoxorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcellomycin
  • a composition that contains an anionic surfactant and is used to weaken the barrier or barrier function of the skin.
  • an anionic surfactant for use in weakening the barrier or barrier function of the skin, or a use thereof.
  • anionic surfactants in the manufacture of compositions for use in attenuating the barrier or barrier function of the skin.
  • the anionic surfactant may preferably be an anionic long chain lipid.
  • Anionic long chain lipids may preferably be fatty acids.
  • the fatty acid may preferably be a long chain fatty acid, more preferably a long chain unsaturated fatty acid.
  • long chain unsaturated fatty acids examples include long chain unsaturated fatty acids containing one or more double bonds.
  • Long chain unsaturated fatty acids containing one or more double bonds are preferably in the cis form.
  • the long chain unsaturated fatty acid containing one or more double bonds can be, for example, the fatty acids exemplified above, such as linoleic acid or oleic acid.
  • compositions for use in attenuating the skin barrier or barrier function that include anionic surfactants may include cations (e.g., cationic lipids) in addition to fatty acids. .
  • compositions containing anionic surfactants for use in attenuating skin barriers or barrier functions contain, in addition to fatty acids, cations (e.g., cationic lipids) and target molecules (e.g., nucleic acids). May contain.
  • the solid composite includes a surfactant and a drug, and an oil phase, the oil phase includes an anionic long chain lipid, and the solid composite is dispersed in the oil phase.
  • a composition is provided.
  • the surfactant preferably has an HLB value of 10 or less.
  • the surfactant may preferably be a nonionic surfactant.
  • the nonionic surfactant include, but are not particularly limited to, polyglycerin condensed ricinoleic acid ester, decaglycerin ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, and polyoxyethylene glycerin fatty acid ester.
  • sorbitan fatty acid ester polyoxyethylene sorbitate fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil/hydrogenated castor oil, sucrose fatty acid ester (sucrose stearate, sucrose palmitate, sucrose myristate, sucrose oleate) , sucrose laurate, sucrose erucate, sucrose mixed fatty acid ester), and the like.
  • sucrose fatty acid ester sucrose stearate, sucrose palmitate, sucrose myristate, sucrose oleate
  • sucrose laurate sucrose erucate
  • sucrose mixed fatty acid ester sucrose mixed fatty acid ester
  • glycerin fatty acid ester polyglycerin fatty acid ester, polyoxyethylene glycerin fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitol fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil, and hydrogenated castor oil.
  • glycerin fatty acid ester polyglycerin fatty acid ester, polyoxyethylene glycerin fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitol fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil, and hydrogenated castor oil.
  • One type or two or more types can be used.
  • the surfactant may preferably be a cationic surfactant.
  • the cationic surfactant for example, the cationic surfactants exemplified above can be used.
  • Example 1 Preparation of an ionic surfactant-nucleic acid complex composed of a cationic surfactant, an anionic surfactant, and a physiologically active substance.
  • a nucleic acid-surfactant solid complex consisting of an agent and a nucleic acid was prepared.
  • a mixture of EDMPC, which is a cationic surfactant, and linoleic acid, which is an anionic surfactant is used as the surfactant mixture ([EDMPC][Lin]). This mixture exhibits properties as an ionic liquid at room temperature.
  • cationic surfactant 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-ethyl-phosphatidylcholine (EDMPC) was used (WO2021/192861, which is incorporated herein in its entirety by reference). Linoleic acid (Lin), oleic acid (Ole), or stearic acid (Ste) was used as the anionic surfactant. Both cationic and anionic surfactants are biocompatible.
  • mRNA As the nucleic acid, either mRNA, antisense oligo, model protein, or model low-molecular compound was used.
  • mRNA an mRNA containing an open reading frame (884mer) encoding green fluorescent protein in a translatable manner and having a 5' cap and polyA was used.
  • Reagents 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine (DMPC), linoleic acid (Lin), oleic acid (Ole), or stearic acid (Ste) were obtained from Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. in 5 mol/L hydrochloric acid. , chloroform (super dehydrated), ammonium formate from Kishida Chemical Co., Ltd., cyclohexane, acetonitrile from Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd., ER-290, L-195 from Mitsubishi Chemical Foods, 4% paraformaldehyde from Muto Chemical Co., Ltd. and Trabedersen were purchased from Eurofin Genomics Co., Ltd., respectively.
  • a cationic surfactant and an anionic surfactant were synthesized according to a previously reported protocol.
  • FIG. 1 shows the 1 H-NMR spectra of three types of ionic surfactant mixtures: [EDMPC][Lin], [EDMPC][Ole], and [EDMPC][Ste].
  • Each of the ionic surfactant mixtures containing a cationic surfactant and an anionic surfactant obtained above is mixed with a nucleic acid to form an emulsion, stored frozen, and then dispersed in an oil phase.
  • a dispersion solution containing a solid composite containing an ionic surfactant mixture as a dispersoid and an oil phase as a dispersion medium was obtained. Specifically, it was as follows. (1) Formation of emulsion: 1 mg of Trabedersen (ssDNA) was dissolved in 1 mL of Milli-Q water. Further, 50 mg of a mixture of three types of ionic surfactants were each dissolved in 2 mL of cyclohexane.
  • aqueous solutions and cyclohexane solutions were stirred at high speed for 2 minutes at 26,000 rpm using a Polytron homogenizer to form an emulsion.
  • Dispersion in oil The above ionic surfactant-nucleic acid solid complex is dispersed in 1 mL of IPM, an oily base that has a high transdermal penetration promoting effect, and the ionic surfactant has a final concentration of 1 mg/mL.
  • a dispersion solution containing a solid nucleic acid complex was obtained.
  • Particle size measurement and long-term stability evaluation were performed by changing the mass ratio of nucleic acid and surfactant to six types: 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, and 1:100. Ta. Note that this study was conducted using only [EDMPC] and [Lin] among the three types of surfactant mixtures. As a result of DLS measurement, a single peak was observed at any mixing ratio, and it became clear that the mixture was suitable for the preparation of an ionic surfactant-nucleic acid solid complex (see FIG. 4).
  • a dispersion containing a conventional surfactant-nucleic acid solid complex was prepared as follows.
  • a solid composite was fabricated.
  • (3) Dispersion in oil The above ER-290-nucleic acid solid complex is dispersed in 1 mL of IPM, an oily base that has a high transdermal penetration promoting effect, resulting in a dispersion solution with a final concentration of 1 mg/mL (conventional type) I got it.
  • a transdermal penetration experiment was conducted.
  • Addition of formulation 200 ⁇ L of sample was added to each donor phase while stirring with a stirrer while maintaining the temperature at 32.5°C.
  • Figure 5 shows the amount of skin penetration of various samples.
  • a mixture containing an anionic surfactant and a cationic surfactant was used as the ionic surfactant mixture.
  • ionic surfactant mixtures containing anions and cations such as [EDMPC] [Cl], where the anion is a Cl - ion, [Cho], [Ole], which are other hydrophilic ionic liquids, and simply DMPC.
  • a dispersion preparation containing an ionic surfactant-nucleic acid solid complex was prepared using DES [DMPC] [Lin] mixed with linoleic acid and linoleic acid.
  • a dispersion formulation containing an ionic surfactant-nucleic acid solid complex containing a cationic surfactant and an anionic surfactant [EDMPC] [Lin]
  • [EDMPC] and [Lin] were found to have an effect of improving the penetration of nucleic acids into the skin, but the improvement effect was limited.
  • DMPC has neutralized charges within the molecule, and it was suggested that removing the negative charges within DMPC to make it cationic is important for increasing skin permeability.
  • a dispersion formulation containing an ionic surfactant-nucleic acid solid complex containing an anionic surfactant and a cationic surfactant was analyzed under a fluorescence microscope.
  • a dispersion formulation containing an ionic surfactant-nucleic acid solid complex was prepared from a fluorescently labeled ionic surfactant and a fluorescently labeled nucleic acid.
  • Disturbance of stratum corneum lipid structure by ionic surfactant mixture YMP skin (back) that had been cryopreserved was thawed at room temperature. It was heated to 60° C. for 2 minutes in an aluminum incubator, and the epidermal layer was peeled off using tweezers. With the stratum corneum side facing upward, the epidermal sheet was floated in a 0.25% Trypsin solution and allowed to stand at room temperature for 24 hours. The living epidermal layer was removed using a cotton swab, and a stratum corneum sheet was obtained by drying for 24 hours or more. This stratum corneum sheet was cut into 0.5 cm squares and stored wrapped in plastic wrap until use.
  • Example 2 Ethanol dilution method An ionic surfactant-nucleic acid solid complex was prepared by a process different from that described above. Reagents 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine (DMPC), linoleic acid, oleic acid, and stearic acid, ethyl trifluoromethanesulfonate, isopropyl myristate, and Span-20 were obtained from Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., 5 mol.
  • DMPC 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine
  • linoleic acid, oleic acid, and stearic acid ethyl trifluoromethanesulfonate
  • isopropyl myristate Span-20 were obtained from Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., 5 mol.
  • mice/cells Mouse skin (Hos: HR-1) used for in vitro skin penetration test was from Hoshino Test Animal Breeding Co., Ltd., B16 melanoma cell was from RIKEN, and human 3D cultured epidermis LabCyte EPI-MODEL was from Co., Ltd. Purchased from Japan Tissue Engineering.
  • Example 1 an ionic surfactant dissolved in a cyclohexane solution is mixed with an aqueous solution containing a nucleic acid to form an emulsion, followed by freeze-drying, and finally the resulting solid complex is dispersed in an oil phase.
  • a dispersion liquid was obtained using this method.
  • an ionic surfactant-nucleic acid complex is formed by an ethanol dilution method, followed by freeze-drying, and finally the obtained solid complex is dispersed in an oil phase (FIG. 11). If the ethanol dilution method did not require an emulsion formation step, damage to the sample could be kept to a minimum. In this example, it was verified whether solid composite particles could be obtained by such a method.
  • ionic surfactant-nucleic acid solid complex 1 mg of Trabedersen (ssDNA) was dissolved in 5 mL of Milli-Q water. Further, 50 mg of the ionic surfactant mixture was dissolved in 1 mL of 99.5% ethanol. These aqueous and ethanol solutions were mixed and gently stirred at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-nucleic acid solid complex.
  • ssDNA Trabedersen
  • 50 mg of the ionic surfactant mixture was dissolved in 1 mL of 99.5% ethanol. These aqueous and ethanol solutions were mixed and gently stirred at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-nucleic acid solid complex.
  • Removal of internal aqueous phase and oil phase The above water/ethanol solution was immersed in liquid nitrogen for 20 minutes to freeze, and then subjected to a freeze dryer overnight to remove the internal aqueous phase and oil phase. An active agent-nucleic acid complex
  • Dispersion in oil Disperse the above ionic surfactant-nucleic acid solid complex in 1 mL of IPM, an oily base that has a high transdermal penetration promoting effect, so that the final concentration of nucleic acid is 1 mg/mL. A residual liquid of the solid composite was obtained.
  • An ionic surfactant-nucleic acid solid complex was obtained by the above procedure.
  • surfactants ER-290 (nonionic surfactant) and a mixture of cationic and anionic surfactants (mixture of EDMPC and linoleic acid) were used.
  • the particle size distribution was as shown in FIG. 12.
  • uncharged ER-290 was used as surfactant, the particle size distribution varied in 10 independent experiments, but when a mixture of EDMPC and linoleic acid was used, the particle size distribution in the resulting dispersion was The solid composite showed a constant particle size distribution.
  • a dispersion containing an ionic surfactant-nucleic acid solid complex prepared as in Example 1 (where the ionic surfactant consists of a mixture of EDMPC and linoleic acid) (Pre-method) was prepared.
  • a dispersion containing an ionic surfactant-nucleic acid solid complex prepared by the above ethanol method (here, the ionic surfactant consists of a mixture of EDMPC and linoleic acid) (New-method) and skin permeability. compared.
  • the particle size distributions of the obtained solid particles were comparable, as shown in FIG. 13.
  • the stability of the dispersion obtained using the New-method for 4 weeks was evaluated. Particle size and PDI were measured by DLS immediately after preparation and after 4 weeks. As shown in FIG. 15A, the appearance did not show any change despite the passage of time between the four species. The particle size distribution did not change over time among the four species, as shown in FIG. 15B.
  • composition ratio of the nucleic acid and ionic surfactant mixture during solid complex formation was changed. Specifically, the mass ratio (N:P ratio when ignoring anions in lipids) is 1:3 (1:1), 1:15 (1:5), and 1:30 (1:10). New ionic surfactant-nucleic acid complexes were formed using the three different composition ratios, and the particle size, PDI, skin permeability, and particle size and zeta potential in water were compared.
  • the hydrodynamic diameter and PDI measured by DLS were as shown in FIG. 16. As shown in FIG. 16, as the amount of surfactant relative to nucleic acid increased, the particle size tended to become smaller. Next, the skin permeability and skin permeability of the obtained ionic surfactant-nucleic acid complex were examined. As shown in Figure 17, the results show that as the amount of surfactant relative to nucleic acid increases, the permeability and permeability into the skin improve, but when the amount of surfactant exceeds a certain value, the permeability into the skin actually decreases. The permeability also decreased.
  • the dispersion prepared by the ethanol method was further analyzed by DLS (FIG. 18) and zeta potential by Zetasizer (FIG. 19). Since the zeta potentials were all positive, it was suggested that they may have a structure in which nucleic acids are encapsulated in a lipid bilayer membrane.
  • a dispersion containing an ionic surfactant-nucleic acid solid complex was prepared by an ethanol dilution method using Trabedersen as a nucleic acid, EDMPC as a cationic surfactant, and linoleic acid as an anionic surfactant.
  • Mix an aqueous solution containing a nucleic acid and an ethanol solution containing an ionic surfactant freeze instantly in liquid nitrogen (0 seconds), stir with a vortex mixer for 10 seconds, and freeze in liquid nitrogen (10 seconds). Stir with a stirrer for minutes or 6 hours, freeze with liquid nitrogen, then freeze-dry and disperse in 1 mL of oily base IPM.
  • the relationship between the mixing temperature of an aqueous solution containing a nucleic acid and an ethanol solution containing an ionic surfactant and the particle size distribution of the resulting ionic surfactant-nucleic acid solid complex was investigated. As shown in FIG. 21, the particle size distribution of the resulting ionic surfactant-nucleic acid solid complex did not change with temperature.
  • the relationship between the particle size distribution of the ionic surfactant-nucleic acid solid complex obtained by mixing the aqueous solution and ethanol solution in the ethanol dilution method at a ratio of 1:5 or 1:10 was investigated. As shown in FIG. 22, the particle size distribution did not change depending on the mixing ratio of the aqueous solution and ethanol.
  • the relationship between the particle size distribution and the ionic surfactant-nucleic acid solid complex obtained by using EDMPC as the cationic surfactant and linoleic acid, oleic acid, or stearic acid as the anionic surfactant was investigated.
  • Ta As shown in FIG. 23, when any anionic surfactant was used, a particle size distribution with almost a single peak was exhibited.
  • the cation to be mixed is choline (choline does not have a long fatty chain), and the anionic surfactant is oleic acid.
  • Particle size distribution and zeta of the ionic surfactant-nucleic acid solid complex obtained I checked the potential. As shown in Figure 24, although the particle size distribution had a single peak, the zeta potential of the particles was negative. This suggests that if a cation with a small number of carbon atoms such as choline is used, the nucleic acid may not be encapsulated within the particles.
  • ionic surfactant-nucleic acid solid complexes were prepared using the ethanol dilution method, and skin permeability and permeability were evaluated. The results were as shown in FIG. As shown in FIG. 25, all of them increased their permeability into the skin. Furthermore, when a cationic surfactant was used as the cation, skin permeability was improved (see FIG. 25).
  • Example 3 A dispersion containing an ionic surfactant-peptide nucleic acid solid complex was obtained by the peptide nucleic acid ethanol dilution method as described above. (1) A PNA aqueous solution (1 mg of nucleic acid/5 mL of Milli-Q water) was added to an ethanol solution (5 mg/1 mL of ethanol) in which [EDMPC][Lin] was dissolved. (2) The mixture was gently stirred with a stirrer at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-nucleic acid complex.
  • the ionic surfactant-PNA complex preparation was prepared by freeze-drying for 24 hours to remove the internal aqueous phase and oil phase, and then redispersing it in isopropyl myristate (IPM) (final concentration 1 mg). /mL).
  • IPM isopropyl myristate
  • Example 4 Ionic surfactant-protein complex Insulin was used as the protein. (1) An aqueous insulin solution (1 mg of insulin/5 mL of water) was added to an ethanol solution (50 mg/1 mL of ethanol) in which [EDMPC][Lin] was dissolved. (2) The mixture was gently stirred with a stirrer at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-protein complex. (3) After that, the mixture was freeze-dried for 24 hours to remove the inner aqueous phase and oil phase, and then redispersed in isopropyl myristate (IPM) to prepare a dispersion containing the ionic surfactant-protein solid complex. (Final concentration 1 mg/mL).
  • IPM isopropyl myristate
  • Ovalbumin was used as the protein.
  • OVA aqueous solution OVA 1 mg/Milli-Q water 5 mL
  • ethanol solution 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg/ethanol 1 mL
  • [EDMPC] [Lin] was dissolved.
  • the mixture was gently stirred with a stirrer at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-protein complex.
  • (3) After that, freeze-dry for 24 hours to remove the internal aqueous phase and oil phase, and then redisperse it in isopropyl myristate (IPM) (0, 5, 10, 25 mg of Span 20 is added as a co-surfactant).
  • IPM isopropyl myristate
  • a dispersion containing the ionic surfactant-protein solid complex was prepared (final concentration 1 mg/mL).
  • the obtained composite did not exhibit a single peak particle size distribution. Therefore, when an ionic surfactant mixture containing Span20 as a cosurfactant is used, a single peak particle size distribution can be obtained when the mass ratio of ovalbumin: ionic surfactant mixture: Span20 is 1:25:25.
  • a complex with . Ovalbumin is a protein of approximately 45 kDa, which is significantly larger than insulin. For complexing large proteins, it is beneficial to use co-surfactants.
  • the skin permeability of the obtained composite was examined. As shown in FIG. 28, the obtained complex significantly improved the permeability of ovalbumin into the skin.
  • Example 5 Structure of ionic surfactant-nucleic acid solid complex obtained by ethanol dilution method (1) Formation of ionic surfactant-nucleic acid complex: Trabedersen (ssDNA) 1 mg was dissolved in 5 mL of Milli-Q water. Further, 50 mg of the ionic surfactant mixture was dissolved in 1 mL of 99.5% ethanol. These aqueous and ethanol solutions were mixed and gently stirred at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-nucleic acid complex.
  • sDNA Trabedersen
  • 50 mg of the ionic surfactant mixture was dissolved in 1 mL of 99.5% ethanol.
  • Example 6 Electron microscopic observation of complex A sample for observation was prepared as follows. Sample 1: Composite by high speed stirring process (in IPM) (1) Formation of emulsion: Dissolve 1 mg of Trabedersen (ssDNA) in 1 mL of Milli-Q water. Further, 50 mg of [EDMPC][Lin] was dissolved in 2 mL of cyclohexane. These aqueous solutions and cyclohexane solutions were stirred at high speed for 2 minutes at 26,000 rpm using a Polytron homogenizer to form an emulsion.
  • Sample 2 Complex by ethanol dilution method (in ethanol aqueous solution) Formation of ionic surfactant-nucleic acid complex: 1 mg of Trabedersen (ssDNA) was dissolved in 5 mL of Milli-Q water. Further, 50 mg of [EDMPC][Lin] was dissolved in 1 mL of 99.5% ethanol. These aqueous and ethanol solutions were mixed and gently stirred at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-nucleic acid complex.
  • Sample 3 Complex by ethanol dilution method (in IPM)
  • ionic surfactant-nucleic acid complex Trabedersen (ssDNA) 1 mg was dissolved in 5 mL of Milli-Q water.
  • [EDMPC] [Lin] 5 mg at 99. % ethanol (1 mL).
  • These aqueous and ethanol solutions were mixed and gently stirred at room temperature for 6 hours to spontaneously form an ionic surfactant-nucleic acid complex.
  • (2) Removal of internal aqueous phase and oil phase The above water/ethanol solution was immersed in liquid nitrogen for 20 minutes to freeze, and then subjected to a freeze dryer overnight to remove the internal aqueous phase and oil phase.
  • An ionic surfactant-nucleic acid solid complex was prepared as follows. Specifically, except for using FAM-labeled Trabedersen as the nucleic acid, a lyophilized product was obtained by the ethanol dilution method as described above in this example, and dispersed in IPM to form an ionic surfactant-nucleic acid solid complex. A dispersion containing the body was obtained. Thereafter, the dispersion liquid was further dispersed in Milli-Q water to obtain a dispersion solution with a nucleic acid concentration of 1 mg/mL.
  • the ionic surfactant-nucleic acid solid complex was efficiently introduced into the cells.
  • This complex is considered to be an S/O/W emulsion considering the creation process.
  • This complex was applied to the skin to confirm its permeability into the skin. After the skin was collected and fixed, sections were prepared and FAM signals were confirmed under a fluorescence microscope. The results are as shown in FIG. 31, and it was confirmed that the ionic surfactant-nucleic acid solid complex was taken up by basal layer cells and dermal cells.
  • Example 8 Introduction of EGFP mRNA into cells and gene expression A complex of cationic surfactant, anionic surfactant, and mRNA was formed, and transfection of mRNA into cells and expression of mRNA were observed. . EGFP was used as the mRNA, and expression was detected using fluorescence from EGFP as an indicator.
  • EGFP green fluorescent protein
  • [EDMPC][Lin] was dissolved in 99.5% ethanol to a concentration of 6 ⁇ g/ ⁇ l. 10 ⁇ L of EGFP mRNA aqueous solution and 1 ⁇ L of [EDMPC][Lin] ethanol solution were mixed and gently vortexed to form a cationic surfactant-anionic surfactant-mRNA complex.
  • B16 melanoma cells were seeded at 1 ⁇ 10 4 /well in a multi-well plate (Matsunami). The next day, when the cells were 70% to 80% confluent, the medium was replaced with serum-free medium, and the cationic surfactant-anionic surfactant-mRNA complex was added to the medium so that the amount of mRNA added was 200 ng/well. added to. The cells were cultured in a 5% CO 2 incubator at 37° C., and 48 hours later, green fluorescence derived from EGFP was observed using a confocal fluorescence microscope (200x magnification).
  • the emulsion formation step can be omitted, and a lipid-nucleic acid complex can be formed simply by mixing an aqueous solution containing a nucleic acid and a lower alcohol solution containing a surfactant, and the resulting complex Since the cells are dispersed in an aqueous solution, they can be added to the culture medium. Complexes that come into contact with cells in the culture medium are taken up into the cells. In this method, lipids having high solubility in alcohol and low solubility in water can be preferably used.
  • Example 9 Skin irritation An in vitro skin irritation test was conducted using a human three-dimensional cultured epidermal model (LabCyte EPI-MODEL trademark).
  • LabCyte EPI-MODEL is a three-dimensional cultured human epidermis model in which normal human epidermal cells are cultured in layers, and was developed as an alternative material for skin irritation tests using experimental animals. Because human cells are used, there are no species differences compared to animal experiments, and there is less variation between wells and between lots, making it possible to obtain highly reproducible test results.
  • MTT assay was then performed.
  • a 5.0 mg/ml 3-(4,5-dimethylthiazole-2-thiazole)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT)/DMEM medium (MTT medium) was prepared and filter sterilized.
  • 500 ⁇ L/well of this MTT medium was added to a new well, and the culture cup was transferred thereto. Thereafter, the mixture was allowed to react in an incubator for 3 hours. Extraction of MTT reaction product (formazan) After the MTT reaction, the human epidermal tissue in the culture cup was taken out with tweezers and immersed in 300 ⁇ L of isopropanol in a cool, dark place overnight (15 hours or more) to extract the pigment.
  • Example 10 Transdermal Nucleic Acid Delivery to Tumors, Skin, and Liver
  • a formulation targeting SNORA23 was prepared. 3 ⁇ 10 6 ES2 ovarian cancer cells were subcutaneously transplanted into mice, and the formation of subcutaneous tumors was confirmed one week later. 50 ⁇ L of hybrid particles containing 250 ⁇ g of ASO targeting SNORA23 were applied or subcutaneously injected onto the top of the tumor (1 cm ⁇ 1 cm) or around the tumor, respectively. For the transdermal administration group, protective tape was wrapped once around the torso including the administration site.
  • the ASO had the following sequence: 5'-GAAacctatgmCAmCa-3' (SEQ ID NO: 2) ⁇ Here, lowercase letters represent DNA bases, uppercase letters represent LNA-modified bases, and mC represents LNA-modified methylcytosine. Additionally, all phosphate groups are phosphorothioate modified. )
  • Two days after administration the skin, subcutaneous tumor, and liver were removed and total RNA was extracted. The amount of target RNA (SNORA23) was quantified, and whether the expression level was suppressed was confirmed by RT-PCR. The results were as shown in FIG. As shown in FIG. 34, a decrease in the expression level of target RNA was induced in both the transdermal administration and subcutaneous administration groups. The knockdown effect in the liver suggests that ASO migrated into the blood regardless of the route of administration.

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Abstract

本発明は、アニオン性長鎖脂質（特に長鎖脂肪酸）を含む、皮膚のバリアを減弱化させることに用いる組成物を提供する。本発明は、カチオン性長鎖脂質とアニオン性長鎖脂質と薬物を含む複合体（例えば、固体複合体）を分散した分散液を提供する。

Description

アニオン性長鎖脂質を含む皮膚のバリア機能を減弱化させることに用いるための組成物、およびカチオン性長鎖脂質とアニオン性長鎖脂質と薬物を含む複合体を分散した分散液
　本発明は、アニオン性長鎖脂質（特に長鎖脂肪酸）を含む、皮膚のバリアを減弱化させることに用いる組成物に関する。本発明は、カチオン性長鎖脂質とアニオン性長鎖脂質と薬物を含む固体複合体を分散した分散液に関する。
　皮膚は、角層によるバリア機能のために８００Ｄａを超える親水性分子の透過性が極端に低い。この角層によるバリア機能は、経皮投与用の製剤（経皮吸収剤）の開発を制限している。これに対して８００Ｄａを超える親水性薬剤について界面活性剤により被覆されてなる固体複合体を油相に分散させた分散製剤の開発が試みられている（非特許文献１～４）。これにより、低分子やタンパク質などの様々な分子を経皮的に固体に投与し、８００Ｄａを超える親水性分子を経皮投与により血中へ移行させることまでが可能となってきた（非特許文献１～４）。
　イオン液体を用いて固体複合体を形成させる技術が開示されている（特許文献５）。非特許文献５では、イオン液体を生体に適合させるために、新規のカチオン性脂質を提案している。
日本国特許第４４２６７４９号 日本国特許第４８４３４９４号 日本国特許第５７５２３４３号 ＷＯ２０２１／０８５４９１Ａ ＷＯ２０２１／１９２８６１Ａ
　本開示は、カチオン（好ましくはカチオン性界面活性剤、より好ましくはカチオン性脂質）とアニオン（好ましくはアニオン性界面活性剤、より好ましくは脂肪酸、さらにより好ましくは長鎖脂肪酸）と核酸とを含む複合体（粒子）を含む組成物を提供する。
　本発明者らは、アニオン性長鎖脂質が、皮膚のバリア機能を減弱化させることを見出した。本発明者らは、これにより、アニオン性長鎖脂質が、皮膚に対する薬物の透過性を向上させることに用い得ることを見出した。本発明者らはまた、カチオンとアニオン、特にカチオン性脂質とアニオン性脂質と薬剤（例えば、核酸）を含む固体複合体と油相を含み、前記固体複合体は油相中に分散している組成物を見出した。
　本発明によれば以下の発明が提供される。
（１）カチオンとアニオンを含む混合物を含む、薬剤成分との複合体を形成させることにおいて用いるための組成物（好ましくは、前記組成物は、カチオンとアニオンとからなるか、カチオンとアニオンと溶媒とからなる）。
（２）カチオンがカチオン性脂質（例えば、ＥＤＭＰＣ）であり、アニオンが脂肪酸（例えば、不飽和脂肪酸、好ましくは、長鎖不飽和脂肪酸、より好ましくは、リノール酸、およびオレイン酸）である、上記（１）に記載の経皮投与用組成物。
（３）医薬有効成分を含まない、上記（１）または（２）に記載の組成物。
（４）経皮投与される医薬有効成分をさらに含む、上記（１）または（２）に記載の組成物。
（５）カチオンと、アニオンと、核酸とを含む固体複合体の集団を含み、
　油相を含み、
　固形複合体の集団は、油相中に分散されている、組成物（好ましくは経皮投与用組成物）。
（６）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体を含む、上記（５）に記載の組成物。
（７）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体の複数の集塊を含む構造体を含む、上記（６）に記載の組成物。
（８）核酸を経皮投与することに用いるための、上記（５）～（７）のいずれかに記載の組成物。
（９）カチオンがカチオン性脂質であり、アニオンがアニオン性脂質である、上記（５）～（８）のいずれかに記載の組成物。
（１０）カチオンとアニオンが、電荷比１：０．８～１：１．２の量で含まれる、上記（５）～（９）のいずれかに記載の組成物。
（１１）カチオンとアニオンが、カチオンとアニオンだけからなる組成物において、少なくとも電荷比１：１で混合したときに、イオン液体を形成することができる、上記（５）～（１０）のいずれかに記載の組成物。
（１２）カチオンとアニオンと核酸とを含む複合体を含む水性組成物であって、
　核酸を細胞外から細胞内にトランスフェクションすることができ、これにより細胞内に当該核酸を含む生存細胞を産生することができる、組成物。
（１３）上記（５）～（１１）のいずれかに記載の組成物を製造する方法であって、
　核酸を含む水性溶液と、カチオンおよびアニオンを含む混合物を含む低級アルコール溶液とを混合させ、核酸と上記カチオンおよびアニオンを含む複合体を得ることを含む、方法。
（１４）前記得られた複合体を凍結乾燥することをさらに含む、上記（１３）に記載の方法。
（１５）凍結乾燥された複合体を、油相に分散させることを含む、上記（１２）または（１３）に記載の方法。
（１６）核酸を細胞外から細胞内にトランスフェクションすることにおいて用いるための、上記（１２）に記載の組成物。
（１７）アニオン性脂質を含む、対象の皮膚のバリアを減弱化させること（または皮膚の浸透性を向上させること）に用いるための組成物。
（１８）アニオン性脂質が、脂肪酸である、上記（１７）に記載の組成物。
（１９）アニオン性脂質が、長鎖脂肪酸である、上記（１７）または（１８）に記載の組成物。
（２０）アニオン性脂質が、長鎖不飽和脂肪酸である、上記（１７）～（１９）のいずれかに記載の組成物。
（２１）カチオン性脂質とアニオン性脂質が、カチオン性脂肪酸およびアニオン性脂肪酸である、上記いずれかに記載の組成物。
（２２）カチオン性脂質とアニオン性脂質が、少なくとも電荷比１：１でカチオン性脂質とアニオン性脂質だけを含む組成物がイオン液体を形成することができる、組成物。
（２３）カチオン性脂肪酸およびアニオン性脂肪酸が、カチオン性脂肪酸およびアニオン性脂肪酸だけからなる組成物において、少なくとも電荷比１：１で混合したときに、イオン液体を形成することができる、上記（２１）に記載の組成物。
（３１）カチオンとアニオンを含む混合物を含む、薬剤成分との複合体を形成させることにおいて用いるための組成物であって、カチオンは、カチオン性界面活性剤であり、アニオンは、アニオン性界面活性剤である、組成物。
（３２）カチオンは、カチオン性脂質であり、アニオンは、脂肪酸である、上記（３１）に記載の組成物。
（３３）アニオンは、長鎖脂肪酸（好ましくは、炭素数１４～２２）である、上記（３２）に記載の組成物。
（３４）アニオンは、長鎖不飽和脂肪酸（好ましくは炭素数１４～２２）である、上記（３３）に記載の組成物。
（３５）アニオンは、リノール酸またはオレイン酸である、上記（３４）に記載の組成物。
（３６）カチオンは、ＥＤＭＰＣである、上記（３１）～（３５）のいずれかに記載の組成物。
（４１）カチオンと、アニオンと、核酸とを含む固体複合体の集団を含み、
　油相を含み、
　固形複合体の集団は、油相中に分散されており、
　カチオンが、カチオン性脂質である、および／または、アニオンが、脂肪酸である、組成物。
（４２）アニオンが、長鎖脂肪酸（好ましくは、炭素数１４～２２）である、上記（４１）に記載の組成物。
（４３）アニオンは、長鎖不飽和脂肪酸（好ましくは炭素数１４～２２）である、上記（４２）に記載の組成物。
（４４）アニオンは、リノール酸またはオレイン酸である、上記（４３）に記載の組成物。
（４５）カチオンは、ＥＤＭＰＣである、上記（４１）～（４４）のいずれかに記載の組成物。
（４６）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体を含む、上記（４１）に記載の組成物。
（４７）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体を含む、上記（４２）に記載の組成物。
（４８）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体を含む、上記（４３）に記載の組成物。
（４９）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体を含む、上記（４４）に記載の組成物。
（５０）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体を含む、上記（４５）に記載の組成物。
（５１）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体の複数の集塊（例えば、直径１００ｎｍ～５００ｎｍ）を含む構造体を含む、上記（４６）に記載の組成物。
（５２）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体の複数の集塊（例えば、直径１００ｎｍ～５００ｎｍ）を含む構造体を含む、上記（４７）に記載の組成物。
（５３）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体の複数の集塊（例えば、直径１００ｎｍ～５００ｎｍ）を含む構造体を含む、上記（４８）に記載の組成物。
（５４）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体の複数の集塊（例えば、直径１００ｎｍ～５００ｎｍ）を含む構造体を含む、上記（４９）に記載の組成物。
（５５）固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体の複数の集塊（例えば、直径１００ｎｍ～５００ｎｍ）を含む構造体を含む、上記（５０）に記載の組成物。
（５６）カチオンとアニオンが、電荷比１：０．８～１：１．２５の量で含まれる、上記いずれかに記載の組成物。
（５７）カチオンとアニオンが、カチオンとアニオンだけからなる組成物において、少なくとも電荷比１：１で混合したときに、イオン液体を形成することができる、上記いずれかに記載の組成物。
（６１）カチオンとアニオンを含む混合物を含む、薬剤成分との複合体を形成させることにおいて用いるための組成物であって、混合物は、少なくとも電荷比１：１でカチオンとアニオンだけを含む組成物がイオン液体を形成することができ、または組成物自体がイオン液体であり、かつ、前記組成物は、カチオンとアニオンとからなるか、またはカチオンとアニオンと溶媒とからなる、組成物。
（６２）カチオンとアニオンを含む混合物を含む、皮膚の浸透性を向上させることに用いるため組成物であって、混合物は、少なくとも電荷比１：１でカチオンとアニオンだけを含む組成物がイオン液体を形成することができ、または組成物自体がイオン液体であり、かつ、前記組成物は、カチオンとアニオンとからなるか、またはカチオンとアニオンと溶媒とからなる、上記（３１）～（３６）のいずれかに記載の組成物。
（６３）前記溶媒は、揮発性有機溶媒を含む、または揮発性有機溶媒である、上記（６１）または（６２）に記載の組成物。
（６４）カチオンとアニオンを含む混合物と溶媒とを含む、皮膚の浸透性を向上させることに用いるための経皮投与用組成物であって、前記溶媒は、揮発性有機溶媒を含む、または揮発性有機溶媒である、上記いずれかに記載の組成物。
（６５）揮発性有機溶媒が、低級アルコールである、または低級アルコールを含む、上記（６４）に記載の組成物。
（６６）低級アルコールが、炭素数１～４のアルコールである、上記（６５）に記載の組成物。
（６７）低級アルコールが、エタノールである、上記（６６）に記載の組成物。
（６８）カチオンが、カチオン性脂質（好ましくは、カチオン性長鎖脂質）である、上記（６１）～（６７）のいずれかに記載の組成物。
（６９）アニオンが、脂肪酸である、上記（６１）～（６８）のいずれかに記載の組成物。
（７０）カチオン性脂質が、ＥＤＭＰＣである、上記（６８）に記載の組成物。
（７１）アニオンが、長鎖脂肪酸（例えば、炭素数１４～２２）である、上記（６１）～（６７０）のいずれかに記載の組成物。
（７２）アニオンが、長鎖不飽和脂肪酸（例えば、炭素数１４～２２）である、上記（７１）に記載の組成物。
（７３）アニオンが、リノール酸、またはオレイン酸である、上記（７２）に記載の組成物。
（８１）界面活性剤（例えば、非イオン性界面活性剤（例えば、ＥＲ－２９０）、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤）と薬剤とを含む固体複合体と、油相を含み、油相は、アニオン性長鎖脂質を含み、前記固体複合体は、油相中に分散している、組成物。（８２）アニオン性長鎖脂質が、長鎖脂肪酸である、上記（８１）に記載の組成物。
（８３）アニオン性長鎖脂質が、長鎖不飽和脂肪酸である、上記（８１）または（８２）に記載の組成物。
（８４）アニオン性長鎖脂質が、リノール酸である、上記（８１）～（８３）のいずれかに記載の組成物。
（８５）経皮投与用の（すなわち、経皮投与することに用いるための）、上記（８１）～（８４）のいずれかに記載の組成物。
（９１）カチオンが、１０以下、好ましくは、１～４程度のＨＬＢ価を有する界面活性剤である、上記いずれかに記載の組成物。
（９２）アニオンが、１０以下、好ましくは、１～４程度のＨＬＢ価を有する界面活性剤である、上記いずれかに記載の組成物。
（９３）カチオンおよびアニオンがそれぞれ、１０以下、好ましくは、１～４程度のＨＬＢ価を有する界面活性剤である、上記いずれかに記載の組成物。
（１０１）油相がアニオン性界面活性剤をさらに含む、上記いずれかに記載の組成物。
（１０２）油相がアニオン性界面活性剤をさらに含み、これにより、油相がアニオン性界面活性剤をさらに含まない組成物と比較して核酸などの薬物の皮膚浸透性を向上させた、上記いずれかに記載の組成物。
（１０３）アニオン性界面活性剤が、脂肪酸（好ましくは、長鎖脂肪酸、より好ましくは、長鎖不飽和脂肪酸）をさらに含む、上記（１０１）または（１０２）に記載の組成物。
図１は、合成したカチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤からなる組成物（イオン液体を形成した）の１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを示す。 図２は、エマルション形成工程を経てカチオン－アニオン－核酸複合体を形成させ、凍結乾燥後に、イソプロピルミリステート（ＩＰＭ）に分散させて、油中に固体複合体が分散した分散液を得る工程を示す。 図３Ａは、各種カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤の混合物と核酸との固体複合体を分散させた分散液の外観を示す。 図３Ｂは、得られた分散液中の固体複合体の動的光散乱（ＤＬＳ）測定による粒径分布を示す。 図３Ｃは、得られた分散液中の固体複合体の粒径および多分散性指数（ＰＤＩ）の経時変化を示す。 図４は、核酸と界面活性剤の濃度の、得られる固体複合体の粒径分布に及ぼす影響を示す。 図５は、得られた複合体の皮膚への浸透性の評価結果を示す。 図６は、各脂質、または脂質混合物のシクロヘキサンへの溶解性および分散液の外観を示す。 図７は、得られた複合体のヘアレスマウス皮膚への浸透性の評価結果を示す。 図８は、ＥＲ－２９０－核酸固体複合体を含む分散液の皮膚浸透性に対するイオン性界面活性剤添加の影響を示す。 図９は、イオン性界面活性剤による角層脂質への影響を示す。 図１０は、イオン性界面活性剤を塗布された角層脂質の分子シミュレーションの結果を示す。 図１１は、エタノール希釈法による界面活性剤－薬剤複合体の調製方法のスキームを示す。 図１２は、エタノール希釈法により得られる固体複合体の粒径分布に対する界面活性剤のイオン性の影響を示す。 図１３は、エマルション形成法（Ｐｒｅ－ｍｅｔｈｏｄ）とエタノール希釈法（Ｎｅｗ－ｍｅｔｈｏｄ）により形成された固体複合体の粒径分布を示す。 図１４は、エマルション形成法（Ｐｒｅ－ｍｅｔｈｏｄ）とエタノール希釈法（Ｎｅｗ－ｍｅｔｈｏｄ）により形成された核酸含有固体複合体の皮膚への浸透性および透過性を示す。 図１５Ａは、エタノール希釈法により形成された固体複合体の分散液の外観の安定性を示す。 図１５Ｂは、エタノール希釈法により形成された固体複合体の分散液の粒径分布の安定性を示す。 図１６は、エタノール希釈法により形成された固体複合体の粒径分布に対する、核酸とイオン性脂質の混合比率の影響を示す。 図１７は、エタノール希釈法により形成された固体複合体の皮膚への浸透性（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ）および透過性（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ）に対する、核酸とイオン性脂質の混合比率の影響を示す。 図１８は、エタノール希釈法により形成された固体複合体の粒径分布に対する、核酸とイオン性脂質の混合比率の影響を示す。 図１９は、エタノール希釈法により形成された固体複合体のゼータ電位に対する、核酸とイオン性脂質の混合比率の影響を示す。 図２０は、エタノール希釈法による薬液とイオン性脂質の混合後の攪拌時間と粒子形成との関係を示す。 図２１は、エタノール希釈法による薬液とイオン性脂質の混合工程の温度条件と粒子形成との関係を示す。 図２２は、エタノール希釈法において混合する水溶液とエタノール溶液の比率と粒径分布との関係を示す。 図２３は、エタノール希釈法により形成される固体複合体の粒径分布に対する、使用する脂質の影響を示す。 図２４は、カチオンが（ＣＨ３）３Ｎ＋（ＣＨ２）２ＯＨ（コリン）であり、アニオンがオレイン酸である場合にエタノール希釈法により形成される固体複合体の粒径分布とゼータ電位を示す。 図２５は、エタノール希釈法により形成される各種固体複合体の皮膚への浸透性および透過性を示す。 図２６は、エタノール希釈法により形成されるペプチド核酸含有固体複合体の粒径分布と安定性を示す。 図２７は、エタノール希釈法により形成されるタンパク質含有固体複合体の粒径分布と安定性を示す。 図２８は、エタノール希釈法により形成されるイオン性界面活性剤とタンパク質を含む固体複合体の皮膚への浸透性を示す。 図２９は、エマルション法（シクロヘキサン法）およびエタノール希釈法により形成されるイオン性脂質－核酸固体複合体の透過電子顕微鏡像を示す。 図３０は、エタノール希釈法により形成されるイオン性界面活性剤－核酸複合体の培養細胞へのトランスフェクション実験の結果を示す。 図３１は、エタノール希釈法により形成されるイオン性界面活性剤－核酸複合体への浸透を示す、皮膚切片の蛍光顕微鏡像を示す。 図３２は、エタノール希釈法により形成されるイオン性界面活性剤－ｍＲＮＡ複合体を含む水溶液による培養細胞へのトランスフェクション後の細胞における導入ｍＲＮＡ発現を示す。 図３３は、エタノール希釈法により形成される各種イオン性脂質－核酸固体複合体の細胞毒性の評価結果を示す。 図３４は、は、ＡＳＯを含むバイブリッド粒子の各組織でのノックダウン効果を示す。
発明の詳細な説明
　本発明に係る実施の形態について図面を参照して説明する。なお、本発明は下記の実施の形態及び図面によって限定されるものではない。なお、下記の実施の形態において、“有する”、“含む”又は“含有する”といった表現は、“からなる”又は“から構成される”という意味も包含する。
　本明細書では、「カチオン」は、ｐＨ７条件下において正電荷を有する分子を意味する。本明細書では、「カチオン性」は、ｐＨ７条件下において正電荷を有する特性を意味する。本明細書では「アニオン」は、ｐＨ７条件下において負電荷を有する分子を意味する。本明細書では「アニオン性」は、ｐＨ７条件下において負電荷を有する性質を意味する。
　本明細書では、「界面活性剤」とは、分子中に、相対的に親水性の部分と相対的に疎水性の部分を有する分子である。界面活性剤は、イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤に大別される。イオン性界面活性剤としては、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤が挙げられる。典型的には、イオン性界面活性剤は、カチオンおよびアニオンのいずれか一方と疎水性部分を有し得る。カチオン性界面活性剤は、カチオン部分とアルキル、アルケニル、またはアルキニルなどの脂肪鎖（例えば、長鎖脂肪鎖）を含んでいてもよい。アニオン性界面活性剤は、アニオン部分と長鎖脂肪酸、不飽和脂肪酸（例えば、一価または二価）または長鎖不飽和脂肪酸（例えば、一価または二価）などの脂肪酸を含んでいてよい。「長鎖」は、炭素数が１４～２２である化合物に付与される言葉である。脂肪鎖は、炭素数８～２２の脂肪鎖、すなわち、Ｃ８～Ｃ２２アルキル、Ｃ８～Ｃ２２アルケニル、またはＣ８～Ｃ２２アルキニルなどのＣ８～Ｃ２２脂肪鎖であり得る。また、脂肪鎖は長鎖脂肪鎖であり得る。飽和とは、脂肪鎖が２重結合および３重結合を有しないことを意味し、不飽和とは、脂肪鎖が２重結合または３重結合を少なくとも１つ有することを意味する。２重結合を有する脂肪鎖としては、シス型とトランス型が挙げられるが、生体適合性の観点からシス型が好ましいとされている。
　脂質は、非極性溶媒に可溶である生体由来の分子である。脂質は、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、ステロール脂質、プロノール脂質、糖脂質、およびポリケチドに分類され得る。グリセロ脂質は、グリセロールの水酸基に脂肪酸がエステル結合した分子の総称である。グリセロールは、３つの水酸基を有し、最大３個までの脂肪酸がエステル結合で連結し得る。グリセロリン脂質では、グリセロールの２つの水酸基に２つの脂肪酸がエステル結合し、１つの水酸基にリン酸基が連結している。スフィンゴ脂質は、セラミド、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質であり得る。ステロール脂質は、テルペノイドのサブグループである。ステロール脂質は、ステロール（例えば、コレステロール）であり得る。プレノール脂質は、ステロール脂質以外のテルペノイドである。
　カチオン性脂質としては、米国特許出願公開第２００６／００８３７８０号および第２００６／０２４０５５４号、米国特許第５，２０８，０３６号、第５，２６４，６１８号、第５，２７９，８３３号、第５，２８３，１８５号、第５，７５３，６１３号、および第５，７８５，９９２号、ならびにＰＣＴ公開番号第ＷＯ９６／１０３９０に記載されており、それらの開示は、全ての目的について全体として本明細書に参照により組入れられる。カチオン性脂質としては、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ；「ＸＴＣ２」）、２，２－ジリノレイル－４－（３－ジメチルアミノプロピル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（４－ジメチルアミノブチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ４－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－５－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキサン（ＤＬｉｎ－Ｋ６－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－Ｎ－メチルペピアジノ（ｍｅｔｈｙｌｐｅｐｉａｚｉｎｏ）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＭＰＺ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルカルバモイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン　（ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ（ｄｉｌｉｎｏｌｅｙｏｘｙ）－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－　ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオ（ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏ）（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、１，２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、３－（Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル）コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、Ｎ－（１，２－ジミリスチルオキシプロパ－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミン－カルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、３－ジメチルアミノ－２－（コレスタ－５－エン－３－β－オキシブタン－４－オキシ）－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９，１２－　オクタデカジエノキシ）プロパン　（ＣＬｉｎＤＭＡ）、２－［５’－（コレスタ－５－エン－３－β－オキシ）－３’－オキサペントキシ）－３－ジメチル－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９’，１－２’－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ）、またはまたはそれらの混合物。ある好ましい態様では、陽イオン性脂質は、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ（「ＸＴＣ２」）、またはそれらの混合物である。カチオン性脂質としては、好ましくは、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチル－ホスファチジルコリン（ＥＤＭＰＣ）が挙げられる。
　また、好ましいアニオン性脂質としては、一般式（１）：
Ｒ－ＣＯＯ－Ｘ＋　・・・　（１）
により表されるアニオン性脂質が挙げられる。
　一般式（１）において、Ｒは置換もしくは無置換のアルキル基、または置換もしくは無置換のアルケニル基を表し、アルケニル基を構成する少なくとも１つのエチレン基はビニレン基で置換されていてもよい。
　Ｒにおけるアルキル基は、直鎖状、分枝状および環状のいずれであってもよい。Ｒにおけるアルキル基の好ましい炭素数は８～２２であり、より好ましくは１２～２２であり、さらに好ましくは１４～２２である。例えば、Ｒにおけるアルキル基として、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、イコシル基、ヘンイコシル基およびドコシル基等の直鎖状アルキル基、それらの分枝状アルキル基、ならびにそれらの環状アルキル基等を例示することができる。アルキル基に置換しうる置換基として、アミノ基、ベンジル基およびハロゲン原子（例えばフッ素原子）等を挙げることができる。これらの置換基は、さらに置換基で置換されていてもよい。アルキル基が置換基で置換されているとき、アルキル基の炭素数と置換基の炭素数の合計は、８～２２であることが好ましく、１２～２２であることがより好ましく、１４～２２であることがさらに好ましい。
　Ｒにおけるアルケニル基は、直鎖状および分枝状のいずれであってもよい。Ｒにおけるアルケニル基の好ましい炭素数は８～２２であり、より好ましくは１２～２２であり、さらに好ましくは１４～２２である。例えば、Ｒにおけるアルケニル基として、ドデセニル基、トリデセニル基、テトラデセニル基、ペンタデセニル基、ヘキサデセニル基、ヘプタデセニル基、オクタデセニル基、ノナデセニル基、イコセニル基、ヘンイコセニル基およびドコセニル基等の直鎖状アルケニル基、ならびにそれらの分枝状アルケニル基等を例示することができる。アルケニル基に置換しうる置換基として、アミノ基、ベンジル基およびハロゲン原子（例えばフッ素原子）等を挙げることができる。これらの置換基は、さらに置換基で置換されていてもよい。アルケニル基が置換基で置換されているとき、アルケニル基の炭素数と置換基の炭素数の合計は、８～２２であることが好ましく、１２～２２であることがより好ましく、１４～２２であることがさらに好ましい。
　また、Ｒにおけるアルケニル基は、その少なくとも１つのエチレン基がビニレン基で置換されてポリエン構造が形成されていてもよい。ポリエン構造の二重結合の数は、好ましくは２～６、より好ましくは２～４である。二重結合の位置は、特に限定されないが、少なくとも２つの単結合を隔てて二重結合同士が配置していることが好ましい。また、二重結合は、好ましくはシス型であり得る。また、二重結合は、好ましくは、Ｒに１つ以上、より好ましくは２つ以上、さらに好ましくは３つ以上含まれ得る。これらの中で、Ｒは不飽和結合を有する基であることが好ましく、置換もしくは無置換のアルケニル基や置換もしくは無置換のポリエン構造を有する基であることがより好ましい。
　また、Ｒにおけるアルキル基、アルケニル基およびポリエン構造を有する基は置換基で置換されていてもよいが、その場合にも、Ｒは炭素原子と水素原子のみからなることが好ましい。すなわち、アルキル基、アルケニル基およびポリエン構造が置換基で置換されている場合、その置換基も炭素原子と水素原子のみからなることが好ましい。
　Ｒ－ＣＯＯ－には、例えば脂肪酸のカルボキシ基から水素イオンが解離したカルボキシラートイオンまたはその誘導体を用いることができる。カルボキシラートイオンを生じる脂肪酸は飽和脂肪酸であっても不飽和脂肪酸であってもよいが、好ましくは、不飽和脂肪酸であり、より好ましくはシス型不飽和脂肪酸であり、さらに好ましくは、シス型長鎖不飽和脂肪酸であってよい。飽和脂肪酸の例として、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）およびラウリン酸（Ｃ１２：０）等を挙げることができ、不飽和脂肪酸の例として、オレイン酸（Ｃ１８：１）、リノール酸（Ｃ１８：２）、α－リノレン酸（Ｃ１８：３）、γ－リノレン酸（Ｃ１８：３）、アラキドン酸（Ｃ２０：４）、イコサペンタエン酸（Ｃ２０：５）、ドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６）およびエルカ酸（Ｃ２２：１）等を挙げることができる。ここで、括弧内の数値は、各脂肪酸の炭素数と二重結合の数である。例えば、リノール酸の（Ｃ１８：２）は、炭素数が１８であり、二重結合の数が２つであることを表す。一般式（１）において、Ｘ＋はカチオン性基を有するリン脂質を表す。ここで、「リン脂質」は、リン酸エステル構造を含む脂質を意味し、「カチオン性基」は、正の電気を帯びた置換基を意味する。Ｘ＋は、カチオン性基を有するグリセロリン脂質であることが好ましく、ホスファチジルコリンの誘導体であることがより好ましい。ここで、ホスファチジルコリンの誘導体とは、グリセロール骨格と、グリセロール骨格の１位および２位にそれぞれ結合した置換もしくは無置換のアルカノイル基と、グリセロール骨格の３位に結合したリン酸エステル基（－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ－）と、このリン酸エステル基に結合したコリン残基を有する化合物のことをいう。このホスファチジルコリン誘導体において、アルカノイル基の少なくとも１つのエチレン基はビニレン基で置き換わっていてもよく、リン酸エステル基の水酸基の水素原子は置換もしくは無置換のアルキル基で置換されていてもよい。
　また、Ｘ＋は下記一般式（２）で表される構造を有するリン脂質であることが好ましく、下記一般式（２）で表される構造を有するグリセロリン脂質であることがより好ましい。
　ＣＨ（－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１０）（－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１１）－ＣＨ２－Ｏ－Ｐ（ＯＲ１）（ＯＲ２）（＝Ｏ）　・・・　（２）
　一般式（２）において、Ｒ１はカチオン性基で置換されたアルキル基を表し、Ｒ２は水素原子または置換もしくは無置換のアルキル基を表す。一般式（２）で表される構造を有するリン脂質は、全体として正電荷を有し、好ましくは負電荷部分を有しない。
　Ｒ１におけるアルキル基は、直鎖状、分枝状および環状のいずれであってもよい。Ｒ１におけるアルキル基の好ましい炭素数は１～２０であり、より好ましくは１～１０であり、さらに好ましくは１～６である。例えば、Ｒ１におけるアルキル基として、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基およびイソプロピル基等を例示することができ、Ｒ１におけるアルキル基は、エチル基であることが好ましい。
　Ｒ１におけるカチオン性基は、下記一般式（３）で表されるアンモニウム基であることが好ましい。
　－ＮＲ４Ｒ５Ｒ６＋　・・・　（３）
　一般式（３）において、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立して、水素原子または置換もしくは無置換のアルキル基を表し、＊はアルキル基への結合位置を表す。Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうち、置換もしくは無置換のアルキル基であるものの数は特に制限されず、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の全てが水素原子または置換もしくは無置換のアルキル基であってもよいし、そのうち１つまたは２つが水素原子であって、残りが置換もしくは無置換のアルキル基であってもよい。
　Ｒ４、Ｒ５およびＲ６におけるアルキル基は、直鎖状、分枝状および環状のいずれであってもよい。Ｒ４、Ｒ５およびＲ６におけるアルキル基の好ましい炭素数は１～２０であり、より好ましくは１～１０であり、さらに好ましくは１～６である。例えば、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６におけるアルキル基として、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基およびイソプロピル基等を例示することができ、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６におけるアルキル基は、メチル基であることが好ましい。アルキル基に置換しうる置換基として、ベンジル基およびハロゲン原子（例えばフッ素原子）等を挙げることができる。これらの置換基は、さらに置換基で置換されていてもよい。ある好ましい態様では、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はメチル基である。
　Ｒ１におけるカチオン性基は、第四級アンモニウム基であることが好ましく、一般式（５）で表される第四級アンモニウム基（Ｒ４の全てが置換もしくは無置換のアルキル基であるアンモニウム基）であることがより好ましい。また、アルキル基におけるカチオン性基の置換位置は特に制限されないが、アルキル基末端の炭素原子に結合する水素原子がカチオン性基で置換されていることが好ましい。
　一般式（２）において、Ｒ２は水素原子または置換もしくは無置換のアルキル基を表す。Ｒ２は置換もしくは無置換のアルキル基であることが好ましい。Ｒ２におけるアルキル基は、直鎖状、分枝状および環状のいずれであってもよい。Ｒ２におけるアルキル基の好ましい炭素数は１～２０であり、より好ましくは１～１０であり、さらに好ましくは１～６である。例えば、Ｒ２におけるアルキル基として、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基およびイソプロピル基等を例示することができ、Ｒ２におけるアルキル基は、エチル基であることが好ましい。アルキル基に置換しうる置換基として、ベンジル基およびハロゲン原子（例えばフッ素原子）等を挙げることができる。これらの置換基は、さらに置換基で置換されていてもよい。
　一般式（２）において、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立して、炭素数８～２２の脂肪鎖であり、好ましくは、長鎖脂肪鎖であり、長鎖飽和脂肪鎖または長鎖不飽和脂肪鎖であり得る。ある態様では、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立して、炭素数１２～２２の長鎖飽和脂肪鎖である。ある態様では、Ｒ１０およびＲ１１は、炭素数１２～１４（例えば、１３）の長鎖飽和脂肪鎖であり得る。ある態様では、一般式（２）により表されるグリセロリン脂質は、ＥＤＭＰＣであり得る。
　アルキル基におけるアルキルカルボニルオキシ基の置換数は、好ましくは２～８個、より好ましくは２～４個であり、最も好ましいのは２個である。アルキル基におけるアルキルカルボニルオキシ基の置換位置は特に制限されないが、Ｒ３の主鎖としてのアルキル基がｎープロピル基である場合、その末端の炭素原子に結合する水素原子と、その隣の炭素原子に結合する水素原子がアルキルカルボニルオキシ基で置換されたものはグリセロリン脂質に相当し、特に好ましいリン脂質である。
　アルキルカルボニルオキシ基におけるアルキル基の説明、好ましい範囲、および具体例については、上記のＲにおけるアルキル基についての説明、好ましい範囲、および具体例を参照することができる。
　以下において、一般式（１）で表される構造を有する化合物の好ましい例を挙げる。ただし、本実施の形態に係るイオン性界面活性剤はこの具体例によって限定的に解釈されるべきものではない。例えば、カルボキシラートイオンは、長鎖脂肪酸であり、好ましくは、長鎖不飽和脂肪酸であり、例えば、リノール酸、もしくはオレイン酸、または長鎖飽和脂肪酸であり、例えば、ステアリン酸であり得、一般式（２）で表されるグリセロリン脂質は、Ｒ１は、－ＮＲ４Ｒ５Ｒ６であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立してメチルまたはエチルであり、好ましくはいずれもメチルであり、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立して長鎖脂肪鎖であり、好ましくはそれぞれ独立して炭素数１２～２２の長鎖脂肪鎖であり、より好ましくは、炭素数１２～１４の長鎖脂肪鎖である。より具体的な例としては、例えば、カルボキシラートイオンは、長鎖不飽和脂肪酸であり、例えば、リノール酸、またはオレイン酸であり、一般式（２）で表されるグリセロリン脂質は、Ｒ１は、－ＮＲ４Ｒ５Ｒ６であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立してメチルまたはエチルであり、好ましくはいずれもメチルであり、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立して炭素数１２～２２の長鎖脂肪鎖であり、より好ましくは、炭素数１２～１４の長鎖脂肪鎖である。さらにより具体的な例としては、例えば、カルボキシラートイオンは、長鎖不飽和脂肪酸であり、例えば、リノール酸、またはオレイン酸であり、、一般式（２）で表されるグリセロリン脂質は、Ｒ１は、－ＮＲ４Ｒ５Ｒ６であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、メチルであり、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立して炭素数１２～２２の長鎖脂肪鎖であり、より好ましくは、炭素数１２～１４の長鎖脂肪鎖である。さらにより具体的な例としては、下記式において、Ｒ－ＣＯＯ－は、一般式（１）におけるＲ－ＣＯＯ－と同義であり、その具体例として、リノール酸、オレイン酸、酢酸またはステアリン酸の各カルボキシラートイオンが挙げられる。
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　上記は、カルボキシラートイオンと、好ましいカチオン性界面活性剤とがイオン結合を形成している様子を示す。これらのカチオン性脂質とアニオン性脂質の混合物は、１：１の電荷比で混合したときに、常温でイオン液体であり得る。
　アニオン性界面活性剤としては、リン脂質および脂肪酸が挙げられる。アニオン性界面活性剤としては、例えば、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ－ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リシルホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、および他の陰イオン性修飾基が中性脂質と結合したものが挙げられる。
　リン脂質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチド酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、およびジリノレオイルホスファチジルコリンが挙げられる。
　脂肪酸は、１価のカルボン酸を有する炭素鎖である。脂肪酸は、トランス型ではなく、シス型であることが好ましい。脂肪酸は、示性式ＣＨ３－Ｒ－ＣＯ２Ｈ｛ここで炭素鎖｝により表され、脂肪酸に含まれる炭素数と２重結合の数に基づいて表される。例えば、カプリン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）８－であり、１０：０で表され、ラウリン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）１０－であり、１２：０で表され、ミリスチン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）１４－であり、１４：０で表され、ペンタデシル酸は、Ｒが－（ＣＨ２）１５－であり、１５：０で表され、パルミチン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）１６－であり、１６：０で表され、パルミトレイン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７－であり、１６：１で表され、ステアリン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）１８－であり、１８：０で表され、オレイン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７－であり、１８：１（ｎ－９）で表され、バクセン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）９－であり、１８：１（ｎ－７）で表され、リノール酸は、Ｒが－（ＣＨ２）３（ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ）２（ＣＨ２）７－であり、１８：２（ｎ－６）で表され、（９，１２，１５）－リノレン酸は、Ｒが－（ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ）３（ＣＨ２）７－であり、１８：３（ｎ－３）で表され、（６，９，１２）－リノレン酸は、Ｒが－（ＣＨ２）３（ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ）３（ＣＨ２）４－であり、１８：３（ｎ－６）で表される。
　本明細書では、「固体複合体」とは、固形分からなる複合体である。例えば、凍結管相互の複合体を油層中に分散して維持されうる。固体複合体は、水を含んでいてもよいが、固形成分を含む複合体である。固体複合体は、低い含水率を有しててもよく、例えば、公知の方法による測定で、含水率が１質量％以下、０．９質量％以下、０．８質量％以下、０．７質量％以下、０．６質量％以下、０．５質量％以下、０．４質量％以下、０．３質量％以下、０．２質量％以下、または０．１質量％以下であり得る。
（実施の形態）
　本発明によれば、目的分子（例えば、核酸）を生体に経皮送達することができる経皮吸収製剤が提供される。本発明の経皮吸収製剤は、緩衝液（例えば、Ｔｒｉｓ　ＥＤＴＡ（ＴＥ）緩衝液）に溶解させた目的分子（例えば、核酸）と比較して、少なくとも約１．５倍以上、約２倍以上、約２．５倍以上、約３倍以上、約３．５倍以上、または約４倍以上の皮膚への浸透量を達成することができる。ＴＥ緩衝液は、一般的に１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４～８．０）および１ｍＭ　ＥＤＴＡを含む。あるいは、本発明の経皮吸収製剤は、緩衝液（例えば、トリスＥＤＴＡ緩衝液（ＴＥ緩衝液））に溶解させた目的分子（例えば、核酸）と比較して、少なくとも約５倍以上、約６倍以上、約７倍以上、約８倍以上、約９倍以上、約１０倍以上、約１１倍以上、約１２倍以上、約１３倍以上、約１４倍以上、または約１５倍以上の皮膚への浸透量を達成することができる。ある態様では、本発明のＳ／Ｏ製剤は、粒子の構造、帯電状態、および添加された成分のいずれかまたは複数に基づいて目的分子（例えば、核酸）の皮膚への浸透量を増加させる。本明細書では、目的分子は、本発明の方法により送達することにより利益を得ることができる分子である。
　本発明によれば、目的分子（例えば、核酸）と界面活性剤とを含む固体複合体と、油相と、を含む組成物が提供される。好ましい態様では、当該組成物は、水相を含まない。上記組成物においては、前記複合体が、前記油相に分散している。目的分子（例えば、核酸）を含む水相と界面活性剤を含む有機溶媒相とを混合することによりＷ／Ｏエマルションを形成させ、得られたＷ／Ｏエマルションを凍結乾燥して水分および有機溶媒分を除去すると、乾燥状態の固体複合体が得られる。Ｗ／Ｏエマルション中では、目的分子（例えば、核酸）を含む水相が界面活性剤で被覆された粒子が有機相に分散していると考えられる。したがって、上記粒子の乾燥により得られる固体複合体中では、目的分子（例えば、核酸）が界面活性剤で被覆されていると考えられる。そのため、ある態様では、固体複合体は、目的分子（例えば、核酸）と界面活性剤を含み、目的分子（例えば、核酸）が界面活性剤で被覆されている。被覆は、通常は、目的分子（例えば、核酸）を含むコアの表面全体において十分量（特に飽和量）の界面活性剤によりなされる。また、本発明の組成物または製剤では、前記固体複合体は油相に分散されている。界面活性剤は、その親水性部分で目的分子（例えば、核酸）と結合し、その疎水性部分を複合体の外に向けて、油相と接触していると考えられる。また、このようにして、界面活性剤は、親水性である目的分子（例えば、核酸）を含む前記固体複合体の油相への分散を促進する上で重要な役割を果たしていると考えられる。得られた固体複合体を油相に分散させることにより、上記組成物が得られる。上記組成物中では、前記複合体は、固体粒子または固体複合体を形成していると推定される。本発明の上記組成物は、目的分子（例えば、核酸）を経皮吸収させることに用いることができる。したがって、本発明の上記組成物は、経皮吸収剤として製剤化されることができる。本発明の上記複合体中では、通常は、目的分子（例えば、核酸）以外の成分のうち約５０重量／重量％以上、約６０重量／重量％以上、約７０重量／重量％以上、約８０重量／重量％以上、約９０重量／重量％以上、約９５重量／重量％以上または約１００重量／重量％が界面活性剤であり得る。ある好ましい態様では、上記複合体中は、目的分子（例えば、核酸）と界面活性剤とからなる｛但し、上記複合体は、製造工程における防げない不純物の混入を有し得る｝。上記組成物は、皮膚科学的に許容可能な組成物であり得る。
　ある態様では、目的分子（例えば、核酸）と界面活性剤とを含む複合体（好ましくは複合体粒子または固体複合体）と、水相と、を含む組成物（水性組成物）が提供される。好ましい態様では、当該組成物は、油相を含まない。上記組成物においては、複合体が、前記水相に分散している。目的分子（例えば、核酸）を含む水相と界面活性剤を含む有機溶媒相（特に低級アルコール）とを混合することにより、界面活性剤－目的分子（例えば、核酸）複合体と水相を有し、界面活性剤－目的分子（例えば、核酸）複合体を水相分散させた分散液（好ましくは水性分散液）が得られる。ゼータ電位とＤＬＳの検討からは、複合体においては目的分子（例えば、核酸）は界面活性剤により被覆されていると考えられる。水性分散液は、細胞毒性を有しないことが好ましい。上記水性組成物は、培養細胞の細胞内への目的分子（例えば、核酸）の導入に用いられ得る。
　前記複合体の大きさは、油相中に分散状態を保つことができ、複合体が皮膚浸透性を損なわない大きさであれば特に限定されない。前記複合体（複合体粒子）の平均粒子径（ＤＬＳによる平均粒子径）は、例えば、約１ｎｍ～約３０００ｎｍ、約１ｎｍ～約２０００ｎｍ、約１ｎｍ～約１５００ｎｍ、約１ｎｍ～約１４００ｎｍ、約１ｎｍ～約１３００ｎｍ、約１ｎｍ～約１２００ｎｍ、約１ｎｍ～約１１００ｎｍ、約１ｎｍ～約１０００ｎｍ、好ましくは約１０ｎｍ～約９００ｎｍ、より好ましくは約１００ｎｍ～約７００ｎｍ、さらに好ましくは約２００ｎｍ～約５００ｎｍである｛ここで、核酸がｍＲＮＡである場合、平均粒子径は約１μｍ以上であり得、核酸がアンチセンスオリゴやｓｉＲＮＡである場合、平均粒径は約１μｍ以下であり得る。｝。ある態様では、前記複合体の平均粒子径は約３００ｎｍ～約５００ｎｍである。多分散性指数（ＰＤＩ）は、粒子の粒径の不均一性の尺度である。ＰＤＩは小さいほど粒径が均一であることを意味する。本発明の製剤の多分散性指数は、例えば、約１以下であり、約０．２～約０．８、約０．３～約０．７、約０．２～０．４、または約０．４～約０．６程度であり得る。
　核酸は親水性化合物である。このため、通常、単独では皮膚に浸透しないか、皮膚への浸透性が低い。本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤では、核酸を界面活性剤と複合体化することで、核酸の皮膚浸透性が高められている。親水性化合物および親水性タンパク質も、通常、単独では皮膚に浸透しないか、皮膚への浸透性が低い。本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤では、核酸に変えて親水性化合物および親水性タンパク質などの親水性生理活性物質を界面活性剤と複合体化することで、親水性生理活性物質の皮膚浸透性が高められている。
　核酸はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよい。核酸は１本鎖でも２本鎖であってもよい。核酸としては、ｍＲＮＡ、ＲＮＡを標的とするアンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴ）、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ、転写因子と結合して転写段階を抑制するデコイ核酸、タンパク質と結合して機能を阻害するアプタマー、及びＴｏｌｌ様受容体９に作用して免疫系を活性化ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド等が挙げられる。核酸は細胞内で所定のタンパク質を発現させるｍＲＮＡ（ｍＲＮＡワクチン）であってもよい。核酸の塩基長は特に限定されないが、例えば約１０～約８０塩基、約１５～約５０塩基又は約２０～約３０塩基である。ｓｉＲＮＡの長さは、例えば、約２０～約３０塩基、約２０～約２４塩基、または約２１～約２３塩基であり得る。核酸はその塩基配列中に修飾された核酸を含んでもよい。すなわち、核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡのハイブリッド等の核酸、および修飾核酸を含む核酸（ギャップマー、およびミクスマー）であり得る。ギャップマーは、ＤＮＡ部分とＲＮＡまたは修飾核酸部分とを有する一本鎖核酸であって、前記ＲＮＡまたは修飾核酸部分が前記ＤＮＡ部分の両端に位置する一本鎖核酸を含む核酸である。ギャップマーは、例えば、二本鎖核酸であり得る。ミックスマーは、異なる種類の核酸を含むアンチセンスを含む核酸である。アンチセンスオリゴ、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ギャップマー、ミクスマーなどは、標的とするＲＮＡのノックダウン効果を奏するように配列およびその長さを設計され得る。
　修飾核酸としては、例えば、蛍光色素修飾された核酸、ビオチン化された核酸、コレステリル基を導入した核酸が挙げられる。ＲＮＡは安定性を高めるために、塩基に対して２’－Ｏ－メチル修飾または、２’－フルオロ修飾若しくは２’－メトキシエチル（ＭＯＥ）修飾をすることがある。また、ホスホロチオエート型核酸のように、核酸バックボーンのホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合に置き換えることもある。人工核酸としては、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子が架橋された核酸が挙げられる。このような人工核酸としては、例えば、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子がメチレンを介して架橋された架橋型ＤＮＡであるｌｏｃｋｅｄ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（ＬＮＡ）、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子がエチレンを介して架橋されたＥＮＡ、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子が－ＣＨ２ＯＣＨ２－を介して架橋されたＢＮＡＣＯＣ、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子が－ＮＲ－ＣＨ２－｛ここで、Ｒは、メチルまたは水素原子である｝を介して架橋されたＢＮＡＮＣなどの架橋型核酸（ＢＮＡ）、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子が－ＣＨ２（ＯＣＨ３）－を介して架橋されたｃＭＯＥ、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子が－ＣＨ２（ＣＨ３）－を介して架橋されたｃＥｔ、２’位と４’位の炭素原子がアミドを介して架橋されたＡｍＮＡ、２’位の酸素原子と４’位の炭素原子がメチレンを介して架橋され、６’位にシクロプロパンが形成されたｓｃｐＢＮＡ、およびデオキシリボースまたはリボースの代わりにＮ－（２－アミノエチル）グリシンがアミド結合したポリマーが主鎖となったペプチド核酸（ＰＮＡ）などが挙げられる。ＲＮＡとしては、ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡなどの遺伝子サイレンシングのための人工的なＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アプタマーなどのノンコーディングＲＮＡ、およびｍＲＮＡなどの天然のＲＮＡが挙げられる。これらのＲＮＡは、生体内で安定化するように修飾されうる。
　ｍＲＮＡにコードされるタンパク質としては、異種の生物、例えば、病原体に特異的な成分またはその一部、およびがん細胞に特異的な成分またはその一部が挙げられる。病原体としては、病原性ウイルス、病原性微生物および病原性寄生虫が挙げられる。病原性ウイルスとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス（例えば、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、呼吸器多核体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ヒトＴ細胞白血病（ＨＴＬ）ウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ジョン・カニンガム（ＪＣ）ウイルスおよびアルボウイルス脳炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスが挙げられる。病原性微生物としては、病原性細菌が挙げられ、病原性細菌としては、クラミジア、リケッチア目細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ属、プロテウス属、セラチア属、シュードモナス属、レジオネラ属、ジフテリア、サルモネラ属、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス症、炭疽菌、ペスト、レプトスピラ症およびライム病細菌からなる群から選択される細菌が挙げられる。病原性微生物としては病原性真菌が挙げられ、病原性真菌としては、カンジダ（アルビカンス、クルーセイ、グラブラータ、トロピカリスなど）、クリプトコックス・ネオフォルマンス、アスペルギルス（フミガーツス、ニガーなど）、ムーコル目（ムコール属、アブシジア属、リゾプス属）、スポロトリックス・シェンキィ、ブラストマイセス・デルマチチジス、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミチスおよびヒストプラズマ・カプスラーツムからなる群から選択される病原性真菌が挙げられる。病原寄生虫としては、赤痢アメーバ、大腸バランジウム、フォーラーネグレリア、アカントアメーバ属、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウム属、ニューモシスチス・カリニ、三日熱マラリア原虫、バベシア・ミクロチ、ブルーストリパノソーマ、クルーズトリパノソーマ、ドノヴァン・リーシュマニア、トキソプラズマ・ゴンディおよびブラジル鉤虫からなる群から選択される病原性寄生虫が挙げられる。従って、本発明のある態様では、ｍＲＮＡはこれらの病原体の構成成分（好ましくは表面抗原）またはその一部をコードしていることができる。特に、病原体の表面抗原のうち、病原体が細胞への感染に利用する抗原、例えば、ベータコロナウイルスのＳタンパク質は、本発明のｍＲＮＡにより、好ましくコードされ得る。がんとしては、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮内膜がん、卵巣がん、結腸直腸がん、結腸がん、頭頸部がん、肺がん、胃がん、胚細胞がん、骨がん、扁平上皮細胞がん、皮膚がん、中枢神経系新生物、リンパ腫、白血病、肉腫、ウイルス関連がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、消化器がん、ホジキンまたは非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、骨髄腫、唾液腺がん、腎臓がん、基底細胞がん、黒色腫、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、精巣がん、食道がんおよび頭頸部がんからなる群から選択されるがんが挙げられる。また、本発明のある態様では、ｍＲＮＡはこれらのがんに特異的な抗原（がん特異的抗原、好ましくはがん特異的表面抗原）またはその一部であり得る。がん特異的抗原は、例えば、ネオアンチゲン（ｎｅｏａｎｔｉｇｅｎ）またはネオアンチゲンに特徴的なその一部であり得る。がん特異的抗原はまた、例えば、がん精巣抗原（例えば、ＭＡＧＥファミリーのタンパク質、ＮＹ－ＥＳＯ－１）、分化抗原（例えば、黒色腫のチロシンキナーゼ、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、前立腺がんのＰＳＡ）、過剰発現がん抗原（例えば、Ｈｅｒ－２／Ｎｅｕ、サバイビン、テロメラーゼ、およびＷＴ－１）、β－カテニンのがん誘発変異体、ＣＤＫ４のがん誘発変異体、ＭＵＣ－１、特に変化したグリコシル化パターンを有するＭＵＣ－１、ヒトパピローマウイルスのＥ６またはＥ７が挙げられる。これらに関しては、対象が罹患した感染症ならびにがんの種類および当該がんに発現している抗原の種類に応じて、当業者であれば適宜抗原を選択して本発明に適したｍＲＮＡを調製することができる。天然の変異型タンパク質に対するｍＲＮＡも適宜設計できる。
　界面活性剤は、医薬において許容される限り、特に限定されない。界面活性剤としては、例えば、アニオン性（陰イオン性）界面活性剤、およびカチオン性（陽イオン性）界面活性剤等のイオン性界面活性剤が好ましく用いられる。目的分子（例えば、核酸）との複合体形成能に優れる点でアニオン性（陰イオン性）界面活性剤、およびカチオン性（陽イオン性）界面活性剤が好ましい。特に、本開示では、界面活性剤として、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤との混合物を用いる。
　界面活性剤としては、複合体を油相に容易に分散できることから、ＨＬＢ（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ－ＬｉｐｏｐｈｉｌｅＢａｌａｎｃｅ）値が１０以下である親油性のイオン性界面活性剤が好ましい。イオン性界面活性剤のＨＬＢは、好ましくは８以下、より好ましくは５以下、特に好ましくは３以下である。イオン性界面活性剤のＨＬＢは、例えば、１～３であり得、３～５であり得、または５～１０であり得る。ある態様では、イオン性界面活性剤のＨＬＢは、５～１０であり得る。ある態様では、カチオン性界面活性剤のＨＬＢは、１～１０であり得、例えば、１～３であり得、３～５であり得、または５～１０であり得る。ある態様では、カチオン性界面活性剤のＨＬＢは、５～１０であり得る。
　複合体における目的分子（例えば、核酸）の質量に対する界面活性剤の質量の比（１質量部の目的分子（例えば、核酸）に対する界面活性剤の質量部）は、例えば、１～２００、好ましくは２０～１８０、より好ましくは２０～１００であり得る。核酸がアンチセンスオリゴである場合には、質量比は、好ましくは３０～５０であり得、核酸がｍＲＮＡの場合は、質量比は、好ましくは、５０～１００であり得る。
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤における複合体の含有量は、分散可能な濃度であれば特に限定されない。組成物または経皮吸収剤中の複合体の含有量は、例えば、０．６ｗ／ｖ％～６０ｗ／ｖ％である。経皮吸収剤における目的分子（例えば、核酸）の含有量は、特に限定されず、例えば０．１～１０ｍｇ／ｍＬ、０．２～８ｍｇ／ｍＬ、０．３～７ｍｇ／ｍＬ、または好ましくは１～５ｍｇ／ｍＬであり得る。
　複合体は、目的分子（例えば、核酸）と界面活性剤のみからなるものであってもよいし、安定化剤等の他の成分を含んでもよい。安定化剤は、例えば親水性のタンパク質及び多糖類であり、分子量が１０，０００以上のものが好ましい。安定化剤は、目的分子（例えば、核酸）とともに界面活性剤により被覆されることによって複合体の安定性を向上させ、組成物または経皮吸収剤中で複合体外への目的分子（例えば、核酸）の漏出等を防止することができる。
　タンパク質としては、例えば、血清アルブミン、オボアルブミン、カゼイン、リゾチーム及びリパーゼ等が挙げられる。これらタンパク質を１種単独で用いてもよく、２種以上組み合わせて用いてもよい。
　多糖類としては、例えば、ＬＭペクチン、ＨＭペクチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヘパリン、アルギン酸及びカルボキシメチルセルロース等が挙げられる。これら多糖類を１種単独で用いてもよく、２種以上組み合わせて用いてもよい。
　複合体における目的分子（例えば、核酸）の質量に対する安定化剤の質量の比は、０．０１～１００が好ましく、０．１～１０がより好ましく、０．５～５がさらに好ましい。
　油相は、液状であってもよく、流動性を有する固形状であってもよい。油相の基材は、医薬製剤での使用が許容される油性基材、好ましくは経皮送達用医薬製剤での使用が許容されるものであれば、特に制限されない。常温（２５℃）で液状の油又は常温で固形状の油のいずれも用いることができる。原料の由来にも制限はなく、例えば、天然物及び合成物のいずれも用いることができる。また、油相は、大豆油、綿実油、菜種油、ゴマ油、コーン油、落花生油、サフラワー油、サンフラワー油、オリーブ油、ナタネ油、シソ油、ウイキョウ油、カカオ油、ケイヒ油、ハッカ油及びベルガモット油等の植物性であってもよく、牛脂、豚油及び魚油等の動物性であってもよい。また、油相は、グリセリド、トリオレイン、トリリノレイン、トリパルミチン、トリステアリン、トリミリスチン、トリアラキドニン等の中性脂質、又は合成脂質であってもよい。
　油相は、コレステリルオレエート、コレステリルリノレート、コレステリルミリステート、コレステリルパルミデート及びコレスレリルアラキデート等のステロール誘導体であってもよく、ミリスチン酸イソプロピル（イソプロピルミリステート；ＩＰＭ）、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸セチル、オレイン酸エチル、リノール酸エチル、リノール酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル及びステアリン酸ブチル等の長鎖脂肪酸エステルであってもよい。また、油相は、乳酸エチル、乳酸セチル、クエン酸トリエチル、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジイソプロピル及び２－エチルヘキサン酸セチル等のカルボン酸エステルであってもよいし、ワセリン、パラフィンスクワラン及び植物性スクワラン等の炭化水素類であってもよく、シリコーン類であってもよい。油性基材は、１種単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。
　油相としては、トリグリセライド又はこれを主成分とする食物油を用いることができ、実用的には、大豆油が好ましく、高純度に精製された大豆油がより好ましい。また、中性脂質又は長鎖脂肪酸エステルも好適に使用でき、長鎖脂肪酸エステルがより好ましく、ＩＰＭがさらに好ましい。
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤における油相の含有量は、油成分の種類や他の構成成分等によって異なるが、５０ｗ／ｖ％～９９．５ｗ／ｖ％が好ましく、６０ｗ／ｖ％～９０ｗ／ｖ％がより好ましい。
　本明細書では、超純水は、ＡＳＴＭ　Ｄ　５１９６－０６（２０１８）規格を満たす水を意味し、ＡＳＴＭ　Ｄ　５１９６－０６（２０１８）規格では、無機イオン総量（特に、アルミニウム、アンモニア、ヒ素、カドミウム、クロム、フッ化物イオン、コバルト、銅、鉄、鉛、マグネシウム、ニッケル、カリウム、ナトリウム、チタン、および亜鉛、並びに塩化物イオン、硝酸イオン、リン酸イオン、および硫酸イオン）が１μｇ／Ｌまたは比抵抗が２５℃で１８．２ＭΩｃｍであり、全有機体炭素量が２０ｐｐｂ以下であり、菌コロニー生成数が１００ｃｆｕ／１００ｍＬ以下であり、かつ、エンドトキシン量が０．０１ＥＵ／ｍＬ以下であるものを超純水と規定する。核酸を含む溶液に用いる超純水に対しては、ヌクレアーゼが検出限界以下であることを要求する。タンパク質を含む溶液に用いる超純水に対してはプロテアーゼが検出限界以下であることを要求する。
　カチオンとしては、様々なカチオンを用いることができるが、例えば、カチオン性脂質を用いることができる。アニオンとしては、様々なアニオンを用いることができるが、例えば、アニオン性脂質を用いることができる。カチオン性脂質およびアニオン性脂質については、上述に説明した通りである。具体的には、カチオン性脂質は、例えば、カチオン部分とアルキル、アルケニル、またはアルキニルなどの脂肪鎖（例えば、長鎖脂肪鎖）を含む。
　イオン液体は、カチオンとアニオンとからなり、幅広い温度範囲で液体として存在する塩である。本発明では、イオン液体は、環境温度（例えば、室温、例えば、２５℃）において液体である。アニオンとしては、例えば脂肪酸のカルボキシ基から水素イオンが解離したカルボキシラートイオン又はその誘導体が好ましい。カルボキシラートイオンを生じる脂肪酸は飽和脂肪酸であっても不飽和脂肪酸であってもよい。飽和脂肪酸の例として、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸及びラウリン酸等を挙げることができ、不飽和脂肪酸の例として、オレイン酸、リノール酸、α－リノレン酸、γ－リノレン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸及びエルカ酸等を挙げることができる。
　イオン液体を形成し得るカチオンとしては、カチオン性脂質、好ましくは、カチオン性基を有するリン脂質が好ましい。ここで、「リン脂質」は、リン酸エステル構造を含む脂質を意味し、「カチオン性基」は、正の電気を帯びた置換基を意味する。リン酸基の２つの水酸基は、低級アルキル（例えば、エチル）により置換されることにより、電荷を消失されたうえで、前記低級アルキルは、アミン（１級アミン、２級アミン、または３級アミン）により置換されることにより、カチオン性脂質となる。さらにイオン液体を形成し得るカチオンは、カチオン性基を有するグリセロリン脂質であることが好ましく、ホスファチジルコリンの誘導体であることがより好ましい。好適には、イオン液体を形成し得るアニオンがリノール酸で、イオン液体を形成し得るカチオンが１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリンである。脂質は、飽和脂質と比較して不飽和脂質は、イオン液体を形成しやすい。
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤における皮膚浸透促進剤の含有量は、目的分子（例えば、核酸）の皮膚浸透性を向上させる観点で決定されるが、例えば、１～２０質量％、２～１８質量％、３～１６質量％、４～１５質量％又は５～１０質量％である。
（エマルション法による製剤の調製）
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤は、例えば、エマルション調製工程、複合体調製工程及び分散工程を含む方法で製造することができる。エマルション調製工程では、目的分子（例えば、核酸）と、界面活性剤と、有機溶媒溶液と、を混合してＷ／Ｏ型エマルションを調製する。エマルション調製工程は、Ｗ／Ｏエマルションの形成に適した条件下で行われる。好ましくは、エマルション調製工程では、目的分子（例えば、核酸）を含む水溶液（前記水溶液はカチオンをさらに含んでいてもよい）と、界面活性剤を含む有機溶媒溶液とを混合し、乳化及び分散させることで、Ｗ／Ｏ型エマルションを調製する。有機溶媒溶液は、後の乾燥工程におけるその除去の容易性の観点では、揮発性の有機溶媒溶液とすることが好ましい。
　目的分子（例えば、核酸）の水溶液における目的分子（例えば、核酸）の濃度は、これらを実質的に完全に溶解できれば特に制限されないが、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬである。必要に応じて、安定化剤を水溶液に添加してもよい。有機溶媒は、界面活性剤を溶解することができ、続く工程で除去できるものであれば特に制限されない。有機溶媒は、例えば、ヘキサン及びシクロヘキサン等の脂肪族炭化水素、並びにトルエン等の芳香族炭化水素等が挙げられる。有機溶媒溶液における界面活性剤の濃度は特に制限されないが、例えば、１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ～９０ｍｇ／ｍＬ又は４０ｍｇ／ｍＬ～８０ｍｇ／ｍＬである。
　乳化及び分散は、撹拌機、高速回転せん断撹拌機、コロイドミル、ホモジナイザー、フロージェットミキサー、超音波乳化機及び真空乳化機等で行うことができる。分散滴の粒径は、撹拌強度を調節することにより、制御することができる。
　複合体調製工程では、エマルション調製工程で得られたＷ／Ｏ型エマルションを乾燥して目的分子（例えば、核酸）－界面活性剤複合体（固体複合体または固体粒子である）を調製する。乾燥方法は特に制限されず、凍結乾燥及び減圧乾燥等が挙げられるが、凍結乾燥が好ましい。水分は製剤内での目的分子（例えば、核酸）漏出の原因となるおそれがある。有機溶媒は、生体に悪影響を及ぼすおそれがある。このため、乾燥工程では、水分と有機溶媒とを実質的に完全に除去することが好ましい。例えば、公知の方法による測定で、含水率が１質量％以下、０．９質量％以下、０．８質量％以下、０．７質量％以下、０．６質量％以下、０．５質量％以下、０．４質量％以下、０．３質量％以下、０．２質量％以下、または０．１質量％以下になる程度にすればよい。このようにして得られる目的分子（例えば、核酸）と界面活性剤を含む複合体は、低い含水率を有する固体複合体または固体粒子であり得る。有機溶媒が揮発性である場合には、乾燥工程において自然に有機溶媒が除去される。
　分散工程では、複合体調製工程で得られた目的分子（例えば、核酸）－界面活性剤複合体（分散質）を油相（分散媒）に分散させる。目的分子（例えば、核酸）－界面活性剤複合体を分散させる方法としては、具体的には、エマルション調製工程において乳化及び分散の手法として例示された方法と同様の方法を用いることができる。分散工程で使用する油相の量は、界面活性剤と油相の種類との相性等にもよるが、例えば、目的分子（例えば、核酸）－界面活性剤複合体１ｇ当たり１ｍＬ～２００ｍＬである。必要に応じて、皮膚浸透促進剤等のその他成分を油相に分散させてもよい。本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤が、分散工程において分散製剤又は懸濁液として得られる。
（エタノール希釈法による製剤の調製）
　本発明の製剤は、エタノール希釈法によっても得ることができる。エタノール希釈法では、カチオンとアニオンとを含む組成物、またはカチオンとアニオンとからなる組成物を用いることができる。カチオンおよびアニオンは、それぞれカチオン性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤であり得る。エタノール希釈法の原理は、エタノール溶解性を有する水溶性分子を含むエタノール（低級アルコールでもよい）を水で希釈すると、溶解できなくなった分子が複合体を形成することに基づく。したがって、エタノール希釈法では、カチオンおよびアニオンを含む低級アルコール溶液と、目的分子（例えば、核酸）などの薬剤を含む水溶液とを混合することにより、カチオンとアニオンと目的分子（例えば、核酸）とを含む複合体を形成させる。得られた複合体（低濃度エタノール溶液中に分散している）は、そのまま用いることもできるが、凍結乾燥して、油相に分散させて用いることもできる。得られた複合体（低濃度エタノール溶液中に分散している）は、例えば、細胞と接触させることにより、目的分子（例えば、核酸）を当該細胞の細胞内へトランスフェクションすることに用いることができる。凍結乾燥して油相に分散した複合体は、経皮投与に用いることができる。
　低級アルコールは、炭素数６以下、好ましくは５以下、より好ましくは４以下、３以下、または２以下のアルコールである。低級アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、イソプロパノール、１－ブタノール、イソブチルアルコール、２－ブタノール、およびｔｅｒｔ－ブチルアルコールが挙げられる。低級アルコールとしては、好ましくはエタノールを用いることができる。
　したがって、本発明では、薬剤成分との複合体を形成させることにおいて用いるための組成物であって、カチオンとアニオンを含む、組成物が提供される。この組成物は、ある態様では、イオン液体であり得る。または、この組成物は、カチオンとアニオンに加えて低級アルコールをさらに含んでいてもよい。ある態様では、低級アルコールはエタノールであり得る。カチオンおよびアニオンは、上記固体複合体の形成に用いるものをそれぞれ用いることができる。カチオンは、好ましくは、カチオン性脂質であり得る。アニオンは、好ましくは、アニオン性脂質であり得る。カチオンおよびアニオンはそれぞれ、カチオン性脂質およびアニオン性脂質であり得る。カチオン性脂質およびアニオン性脂質は、界面活性剤として働くので、それぞれカチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と同じ意味で用いられる。ある態様では、組成物は、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と低級アルコール（好ましくはエタノール）を含む、またはこれらからなる。
　カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と低級アルコール（好ましくはエタノール）を含む、またはこれらからなる組成物と目的分子（例えば、核酸）を含む水溶液とを混合すると、瞬時にカチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と目的分子（例えば、核酸）を含む複合体を含む、低級アルコール水溶液が得られる。得られる複合体は、約５ｎｍ～約２０ｎｍの粒径の粒子を含む。得られる複合体は、約５ｎｍ～約２０ｎｍの粒径の複数の粒子を含む集塊を含む。集塊は、例えば、約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、または約１００～約３００ｎｍの粒径を有し得る。低級アルコールが、例えば、エタノールまたはプロパノールなどの細胞毒性の低いアルコールである場合には、得られた低級アルコール溶液をそのまま細胞に接触させて当該細胞の細胞内に目的分子（例えば、核酸）を導入またはトランスフェクションすることができる。得られた溶液からは、透析などの処理によりアルコールを除去することもできる。透析外液を水溶液（例えば、生理食塩水）にすることにより、上記複合体を含む水溶液（例えば、アルコールを実質的に含まない）が得られるであろう。
　得られた低級アルコール溶液は、エマルション形成工程を経ずに、凍結乾燥し、その後、得られた凍結乾燥物を、油相に分散させることもできる。これにより、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と目的分子（例えば、核酸）を含む固体複合体を含み、油相を含み、複合体は、油相に分散している、組成物が得られる。あるいは、得られた凍結乾燥物を水相に分散させることにより、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と目的分子（例えば、核酸）を含む複合体または固体複合体を含み、水相を含み、複合体は、水相に分散している、組成物が得られる。
　上記において低級アルコールに代えて、アセトンやアセトニトリルなどの有機溶媒を用いてもよい。ある態様では、好ましくは、エタノール希釈法においては、低級アルコールが用いられ、好ましくはエタノールが用いられる。ある態様では、アセトンが用いられ得る。ある態様では、アセトニトリルが用いられ得る。
　得られた組成物は、経皮吸収剤として用いることができる。得られた組成物はまた、経皮投与用組成物として用いることができる。得られた組成物には、アニオン性界面活性剤をさらに含んでいてもよい。後述するようにアニオン性界面活性剤（特に脂肪酸）は、皮膚のバリア機能を減弱化させ得る。したがって、アニオン性界面活性剤のさらなる添加は、組成物の経皮吸収剤としての特性を向上させ得る。得られた組成物は、皮膚に塗布することにより、目的分子（例えば、核酸）を皮膚に浸透させることができる。得られた複合体と水相を含む組成物は、目的分子（例えば、核酸）の細胞内への導入またはトランスフェクションに用いられ得る。
　上記において、核酸は、タンパク質および低分子化合物などの生理活性物質に置き換えることができる。これにより、核酸の代わりに、タンパク質および低分子化合物などの生理活性物質を効果的に経皮投与することができる。
　カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と目的分子（例えば、核酸）を含む複合体において、含有界面活性剤に対して、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤は、５０モル％以上、６０モル％以上、７０モル％以上、８０モル％以上、９０モル％以上、９５モル％以上、９８モル％以上、９９モル％以上、または１００モル％含まれる。カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤は、好ましくは、１：０．５～１：２、１：０．６～１：１．５、１：０．８～１：１．２５、１：０．９～１：１．１１、または約１：約１で複合体中に含まれる。ある態様では、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤とは、複合体中で電気的に中和している。
（組成物または経皮吸収剤）
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤は、他の添加成分を添加して製剤化してもよい。他の添加成分としては、例えば、賦形剤、着色剤、滑沢剤、結合剤、乳化剤、増粘剤、湿潤剤、安定剤、保存剤、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤及び基剤等が挙げられ、これらを通常の配合量で配合できる。
　賦形剤としては、白糖等の糖類、デキストリン等のデンプン誘導体、カルメロースナトリウム等のセルロース誘導体、及びキサンタンガム等の水溶性高分子等が挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩、ラウリル硫酸塩、及び上記の賦形剤におけるデンプン誘導体等が例示される。結合剤としては、例えば、上記の賦形剤及びマクロゴール等が挙げられる。湿潤剤は、例えばグリセリン等である。安定剤は、例えば、メチルパラベン、パラヒドロキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール及びフェニルエチルアルコール等のアルコール類、塩化ベンザルコニウム、フェノール、クレゾール等のフェノール類、チメロサール、無水酢酸、及びソルビン酸等である。溶剤としては、水及びエタノールグリセリン等が挙げられる。懸濁化剤は、例えばカルメロースナトリウム等である。基剤としては、ポリエチレングリコール、クロタミトン、セバシン酸ジエチル及びワセリン等が挙げられる。
　上記製造方法で得られた分散液または懸濁液を、そのまま用いてもよいが、必要に応じて他の添加成分を混合し、公知の方法で、貼付剤、軟膏剤、ローション剤、エアゾール剤、硬膏剤、水性パップ剤、クリーム剤、ゲル剤、プラスター剤、リザーバー型貼付剤、マトリックス型貼付剤、及びテープ剤等の外用剤へと加工することができる。このようにして、経皮吸収製剤を得ることができる。
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤の投与量は、患者の年齢、症状及び適応疾患の種類等に応じて調整することができる。例えば、通常、成人１人あたり、１回の投与につき、目的分子（例えば、核酸）の量が、１μｇ～３０ｍｇ、好ましくは１０μｇ～１０ｍｇ、より好ましくは３０μｇ～３ｍｇとなるように、数週間から数ヶ月にわたって投与することができる。
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤の適用対象としては、脊椎動物が好ましく、哺乳類動物がより好ましい。哺乳類動物としては、例えば、ヒト、チンパンジー及びその他の霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ブタ、ラット、マウス及びモルモット等の家畜動物、愛玩動物及び実験用動物等が挙げられる。哺乳類動物としては、ヒトが特に好ましい。本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤は、対象に経皮投与され得る、または対象の皮膚に適用され得る。
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤は、固体状の目的分子（例えば、核酸）－界面活性剤複合体が油相に分散していることで、下記実施例に示すように、皮膚にほとんど浸透しない目的分子（例えば、核酸）を皮膚から体内に浸透させることができる。
　本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤は、核酸又は核酸医薬で治療が可能な疾患に用いることができる。疾患は、特にはＲＮＡを標的とすることで疾患を治療若しくは予防、又は疾患の進行を停止若しくは抑制できる疾患である。疾患としては、例えば、皮膚癌、関節リウマチ、及びアトピー性皮膚炎等の皮膚疾患等が挙げられる。また、本実施の形態に係る組成物または経皮吸収剤は、ＲＮＡワクチンの経皮ＤＤＳにも適している。
　他の実施の形態では、治療上の有効量の目的分子（例えば、核酸）を含有する上記組成物または経皮吸収剤を、治療を必要とする対象に使用することを含む、上記疾患の治療方法が提供される。なお、治療上の有効量の目的分子（例えば、核酸）とは、上記組成物または経皮吸収剤において、目的分子（例えば、核酸）の投与量として示された量であり、疾患に応じて設定された投与量である。また、別の実施の形態では、上記疾患の治療のための、上記組成物または経皮吸収剤が提供される。
　他の実施の形態では、目的分子（例えば、核酸）の経皮吸収性を向上させる方法が提供される。当該方法は、目的分子（例えば、核酸）を界面活性剤で被覆して固体状の目的分子（例えば、核酸）－界面活性剤複合体とし、油相に分散させた当該複合体を外用剤化することを含む。当該方法によれば、経皮吸収性が低いために外用剤としての利用が困難であり、外用剤では効果が十分に発揮できなかった目的分子（例えば、核酸）の経皮吸収性を高めることができる。
　本明細書では、上記の発明において、核酸の代わりに核酸以外の薬物を用いることができる。核酸以外の薬物としては、例えば、タンパク質および化合物（好ましくは親水性タンパク質および親水性化合物）が挙げられる。タンパク質は、特に限定されないが例えば、５ｋＤａ～１００ｋＤａの分子量を有するタンパク質（好ましくは親水性タンパク質、より好ましくは、カチオン性の親水性タンパク質）であり得る。化合物は、特に限定されないが例えば、８００～１０，０００の分子量を有する化合物（好ましくは親水性化合物、より好ましくは、カチオン性の親水性化合物）とすることができる。
　タンパク質としては、例えば、サイトカイン（例えば、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、α－インターフェロン、β－インターフェロン、γ－インターフェロン、アンジオスタチン、トロンボスポンジン、エンドスタチン、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、腫瘍壊死因子）等の生理活性物質が挙げられる。タンパク質としてはまた、例えば、アガルシダーゼベータ、ラロニダーゼ、アルテプラーゼ、ハビナフスプアルファ、ウロキナーゼ、イデュルスルファーゼ、セベリパーゼアルファ、モンテプラーゼ、アスホターゼアルファ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ、アガルシダーゼアルファ、アルグルコシダーゼアルファ、アバルグルコシダーゼアルファ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、エロスルファーゼアルファ、ラスブリカーゼ、ドルナーゼ、アルファ、アスホターゼアルファ、コラゲナーゼ、セベリパーゼ、コンドリアーゼ、エラペグアデマーゼ、セルリポナーゼ、アルファ、グルカルピダーゼ、ベストロニダーゼアルファ、オリプダーゼアルファ、血液凝固因子（例えば、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、およびＸＩＩ）、インスリン、ソマトロピン、エリスロポエチン、およびケモカインが挙げられる。タンパク質としてはさらに、例えば、Ｃａｓ９タンパク質、ＲＮＡポリメラーゼ、転写因子、リボソーム、サイクリン依存性キナーゼ、成長因子（例えば、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦｓ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦｓ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、変換成長因子（ＴＧＦｓ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦｓ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、インターロイキン（一部のインターロイキンには成長因子活性がある）、骨形成タンパク質（ＢＭＰｓ）、成長分化因子（ＧＤＦ）、グリア細胞系由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、神経節細胞栄養因子（ＣＮＴＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン（ＮＴｓ）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、血小板生成因子（ＴＰＯ））が挙げられる。タンパク質としてはまた、血清アルブミン、オボアルブミン、カゼイン、リゾチーム及びリパーゼ等が挙げられる。これらタンパク質を１種単独で用いてもよく、２種以上組み合わせて用いてもよい。タンパク質としては、タンパク質複合体が挙げられる。
　核酸としては、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）が挙げられる。核酸にコードされるタンパク質としては、異種の生物、例えば、病原体に特異的な成分またはその一部、およびがん細胞に特異的な成分またはその一部が挙げられる。病原体としては、病原性ウイルス、病原性微生物および病原性寄生虫が挙げられる。病原性ウイルスとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス（例えば、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、呼吸器多核体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ヒトＴ細胞白血病（ＨＴＬ）ウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ジョン・カニンガム（ＪＣ）ウイルスおよびアルボウイルス脳炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスが挙げられる。病原性微生物としては、病原性細菌が挙げられ、病原性細菌としては、クラミジア、リケッチア目細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ属、プロテウス属、セラチア属、シュードモナス属、レジオネラ属、ジフテリア、サルモネラ属、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス症、炭疽菌、ペスト、レプトスピラ症およびライム病細菌からなる群から選択される細菌が挙げられる。病原性微生物としては病原性真菌が挙げられ、病原性真菌としては、カンジダ（アルビカンス、クルーセイ、グラブラータ、トロピカリスなど）、クリプトコックス・ネオフォルマンス、アスペルギルス（フミガーツス、ニガーなど）、ムーコル目（ムコール属、アブシジア属、リゾプス属）、スポロトリックス・シェンキィ、ブラストマイセス・デルマチチジス、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミチスおよびヒストプラズマ・カプスラーツムからなる群から選択される病原性真菌が挙げられる。病原寄生虫としては、赤痢アメーバ、大腸バランジウム、フォーラーネグレリア、アカントアメーバ属、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウム属、ニューモシスチス・カリニ、三日熱マラリア原虫、バベシア・ミクロチ、ブルーストリパノソーマ、クルーズトリパノソーマ、ドノヴァン・リーシュマニア、トキソプラズマ・ゴンディおよびブラジル鉤虫からなる群から選択される病原性寄生虫が挙げられる。従って、本発明のある態様では、ｍＲＮＡはこれらの病原体の構成成分（好ましくは表面抗原）またはその一部をコードしていることができる。特に、病原体の表面抗原のうち、病原体が細胞への感染に利用する抗原、例えば、ベータコロナウイルスのＳタンパク質は、本発明のｍＲＮＡにより、好ましくコードされ得る。がんとしては、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮内膜がん、卵巣がん、結腸直腸がん、結腸がん、頭頸部がん、肺がん、胃がん、胚細胞がん、骨がん、扁平上皮細胞がん、皮膚がん、中枢神経系新生物、リンパ腫、白血病、肉腫、ウイルス関連がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、消化器がん、ホジキンまたは非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、骨髄腫、唾液腺がん、腎臓がん、基底細胞がん、黒色腫、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、精巣がん、食道がんおよび頭頸部がんからなる群から選択されるがんが挙げられる。また、本発明のある態様では、ｍＲＮＡはこれらのがんに特異的な抗原（がん特異的抗原、好ましくはがん特異的表面抗原）またはその一部であり得る。がん特異的抗原は、例えば、ネオアンチゲン（ｎｅｏａｎｔｉｇｅｎ）またはネオアンチゲンに特徴的なその一部であり得る。がん特異的抗原はまた、例えば、がん精巣抗原（例えば、ＭＡＧＥファミリーのタンパク質、ＮＹ－ＥＳＯ－１）、分化抗原（例えば、黒色腫のチロシンキナーゼ、Ｍｅｌａｎ－Ａ／ＭＡＲＴ－１、前立腺がんのＰＳＡ）、過剰発現がん抗原（例えば、Ｈｅｒ－２／Ｎｅｕ、サバイビン、テロメラーゼ、およびＷＴ－１）、β－カテニンのがん誘発変異体、ＣＤＫ４のがん誘発変異体、ＭＵＣ－１、特に変化したグリコシル化パターンを有するＭＵＣ－１、ヒトパピローマウイルスのＥ６またはＥ７が挙げられる。これらに関しては、対象が罹患した感染症ならびにがんの種類および当該がんに発現している抗原の種類に応じて、当業者であれば適宜抗原を選択して本発明に適したｍＲＮＡを調製することができる。核酸はまた、上記で例示したタンパク質をコードするものであってもよいであろう。天然の変異型タンパク質に対するｍＲＮＡも適宜設計できる。
　核酸としてはまた、フォミビルセン、ペガプタニブ、ミポメルセン、エテプリルセン、ヌシメルセン、ＣｐＧ１０１８、イノテルセン、パチシラン、ボラネソルセン、ギボシラン、ゴロディルセン、ビルトラルセン、インクリシラン、ルマシラン、カシメルセン、ブトリシラン、デフィブロチド、トラベデルセン、およびトフェルセンが挙げられる。核酸としては、その他アンチセンスオリゴ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどの様々な核酸が用いられ得る。
　目的分子としては例えば低分子化合物が挙げられる。低分子化合物としては、例えば、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、イソアスコルビン酸、ビタミンＥ、カテキン、ジブチルヒドロキシトルエン、トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール、ポリフェノール、レスベラトロール（レスベラトロール３，５，４’－トリヒドロキシ－ｔｒａｎｓ－スチルベン）、コエンザイムＱ１０、Ｎ－アセチルシステイン、２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル（ＴＥＭＰＯ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、アスタキサンチン、βカロテン、およびグルタチオンが挙げられる。低分子化合物としては、例えば、抗腫瘍剤が挙げられる。抗腫瘍剤としては例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、抗代謝薬、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性剤または抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲ拮抗薬、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、及びそれらの組み合わせが挙げられる。抗腫瘍剤としては例えば、エルロチニブ、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、エピガロカテシン没食子酸塩、サリノスポラミドＡ、カルフィルゾミブ、１７－ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラジシコル、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ－Ａ）、フルベストラント、スニチブ、レトロゾール、イマチニブメシラート、フィナスナート、オキサリプラチン、５－ＦＵ（５－フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン、ラパチニブ、ロナファルニブ、ソラフェニブ、ゲフィチニブ、ＡＧ１４７８、ブスルファン、イムプロスルファン、及びピポスルファンなどのアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパなどのアジリジン；エチレンイミン及びメチルアメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドを含む）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブタラシノン）；カンプトテシン（トポテカン及びイリノテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；アドレノコルチコステロイド（プレドニゾン及びプレドニゾロンを含む）；シプロテロン酢酸塩；５α－レダクターゼ（フィナステリド及びズタステリドを含む）；ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタットドラスタチン；アルデスレウキン、タルクデュオカルマイシン（合成類似体を含む、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；エネジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγ１Ｉ及びカリケアミシンω１Ｉ（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．版Ｅｎｇｌ．１９９４  ３３：１８３－１８６）；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；クロドロナートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンン発色団及び関連色素タンパク質エネジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン（ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの抗代謝物；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、及びイマチニブ（２－フェニルアミノピリミジン誘導体）などのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピトスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナル；フロリン酸などの葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルニチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシン及びアンサミトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２トキシン、ベラキュリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキセタキセル；クロランブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ－１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン；イバンドロナート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、及び誘導体が挙げられ得る。低分子化合物としては、生理活性を有するものが挙げられる。
　本発明によれば、アニオン性界面活性剤を含む、皮膚のバリアまたはバリア機能を減弱化させることに用いるための組成物が提供される。本発明によれば、皮膚のバリアまたはバリア機能を減弱化させることに用いるためのアニオン性界面活性剤、または、その使用が提供される。本発明によれば、皮膚のバリアまたはバリア機能を減弱化させることに用いるための組成物の製造における、アニオン性界面活性剤の使用が提供される。上記においてアニオン性界面活性剤は、好ましくは、アニオン性長鎖脂質であり得る。アニオン性長鎖脂質は、好ましくは脂肪酸であり得る。脂肪酸は、好ましくは、長鎖脂肪酸であり得、より好ましくは長鎖不飽和脂肪酸であり得る。長鎖不飽和脂肪酸としては、１以上の二重結合を含む長鎖不飽和脂肪酸が挙げられる。１以上の二重結合を含む長鎖不飽和脂肪酸は、好ましくは、シス型である。１以上の二重結合を含む長鎖不飽和脂肪酸は、例えば、上記で例示した脂肪酸であり得、例えば、リノール酸、またはオレイン酸であり得る。ある態様では、アニオン性界面活性剤を含む、皮膚のバリアまたはバリア機能を減弱化させることに用いるための組成物は、脂肪酸に加えて、カチオン（例えば、カチオン性脂質）を含んでいてもよい。アニオン性界面活性剤を含む、皮膚のバリアまたはバリア機能を減弱化させることに用いるための組成物は、脂肪酸に加えて、カチオン（例えば、カチオン性脂質）と目的分子（例えば、核酸）とを含んでいてもよい。
　本発明によれば、界面活性剤と薬剤とを含む固体複合体と、油相を含み、油相は、アニオン性長鎖脂質を含み、前記固体複合体は、油相中に分散している、組成物が提供される。界面活性剤は、好ましくは１０以下のＨＬＢ価を有する界面活性剤を用い得る。
　上記界面活性剤は、好ましくは、非イオン性界面活性剤であり得る。非イオン性界面活性剤としては、特に限定されないが例えば、非イオン性界面活性剤としては、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル、デカグリセリンエステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油・硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル（ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル、ショ糖ミリスチン酸エステル、ショ糖オレイン酸エステル、ショ糖ラウリン酸エステル、ショ糖エルカ酸エステル、ショ糖混合脂肪酸エステル）等を挙げることができる。これらから１種を選択して用いるか、或いは２種以上の混合物を用いてもよい。非イオン性界面活性剤としては、酸やオレイン酸などの不飽和脂肪酸を原料とするエステル化合物が好適であり、より好ましくは、ショ糖エルカ酸エステル、ショ糖オレイン酸エステル、ショ糖混合脂肪酸エステルが挙げられる。または、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油および硬化ヒマシ油よりなる群から選択される１種または２種以上を用いることができる。
上記において、界面活性剤は、好ましくは、カチオン性界面活性剤であり得る。カチオン性界面活性剤としては、例えば、上記で例示したカチオン性界面活性剤を用いることができる。
　以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
実施例１：カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、および生理活性物質から構成されるイオン性界面活性剤－核酸複合体の調製
　本実施例では、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤と核酸とから構成される核酸－界面活性剤固体複合体を調製した。以下、断りのない限り、界面活性剤混合物としては、カチオン性界面活性剤であるＥＤＭＰＣとアニオン性界面活性剤であるリノール酸の混合物（［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］）を用いている。この混合物は、常温においてイオン液体としての性質を示す。
　カチオン性界面活性剤としては、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチル－ホスファチジルコリン（ＥＤＭＰＣ）を用いた（引用によりその全体が本明細書に組込まれるＷＯ２０２１／１９２８６１）。アニオン性界面活性剤としては、リノール酸（Ｌｉｎ）、オレイン酸（Ｏｌｅ）、またはステアリン酸（Ｓｔｅ）を用いた。これらのカチオン性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤は、いずれも生体適合性である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　核酸としては、ｍＲＮＡ、アンチセンスオリゴ、モデルタンパク質、およびモデル低分子化合物のいずれかを用いた。ｍＲＮＡとしては、緑色蛍光タンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（８８４ｍｅｒ）を翻訳可能に含み、５’キャップとポリＡを有するｍＲＮＡを用いた。
試薬
　１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、リノール酸（Ｌｉｎ）、オレイン酸（Ｏｌｅ）、またはステアリン酸（Ｓｔｅ）は、東京化成工業株式会社より、５ｍｏｌ／Ｌ塩酸、クロロホルム（超脱水）、ギ酸アンモニウムはキシダ化学株式会社より、シクロヘキサン、アセトニトリルは富士フイルム和光純薬株式会社より、ＥＲ－２９０，　Ｌ－１９５は三菱化学フーズより、４％パラホルムアルデヒドは武藤化学より、Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎはユーロフィンジェノミクス株式会社よりそれぞれ購入した。
実験動物
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ皮膚浸透試験に用いるマウス皮膚　（Ｈｏｓ：　ＨＲ－１）　は株式会社星野試験動物飼育所より購入した。
器具・装置
　スライドガラスとカバーガラスは松浪硝子工業株式会社製より、ベースモールドはＦｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃよりそれぞれ購入した。凍結乾燥機　（ＦＤＵ－１１１０，　ＥＹＥＬＡ）、ＮＭＲ　（ＥＣＺ４００Ｓ）、ポリトロンホモジナイザー　（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ）、動的光散乱測定装置　（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ　Ｎａｎｏ　ＺＳ，　Ｍａｌｖｅｒｎ）、蛍光プレートリーダー　（ＬＳ－５５ＫＧ，　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ）、スターラー　（ＲＣＨ－１０００，　ＥＹＥＬＡ）、ホットスターラー　（ＲＳＨ－６ＤＮ，　ＲＥＸＩＭ）、共焦点レーザー蛍光顕微鏡　（ＬＳＭ７００，　Ｃａｒｌ　Ｚｅｉｓｓ）、フランツセル　（株式会社旭製作所）、逆相高速液体クロマトグラフィー装置　（１２６０　ＩｎｆｉｎｉｔｙＩＩ）、クリオスタットミクロトーム　（ＣＭ１５１０，　Ｌｅｉｃａ）を使用した。
　初めに、既報のプロトコルに従い、カチオン性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
（１）ＥＤＭＰＣ－ＳＯ３ＣＦ３の合成：ＤＭＰＣ粉末６７７．９４ｍｇ（１ｍｍｏｌ）とトリフルオロメタンスルホン酸エチル１２９μＬ（１ｍｍｏｌ）をクロロホルム溶媒中で攪拌した。この反応は窒素フロー・５０℃の条件下で１２時間行った。
（２）ＥＤＭＰＣ－Ｃｌの合成：得られたＥＤＭＰＣ－ＳＯ３ＣＦ３塩をクロロホルムに完全に溶解した後、０．２Ｎ塩酸５ｍＬ（１ｍｍｏｌ）を加えて撹拌した。さらにＭｉｌｌｉ－Ｑ水でウォッシュし透明な水相（過剰な塩酸を含んでいる）を除去してから、２４時間凍結乾燥した。
（３）イオン性界面活性剤混合物の合成：得られたＥＤＭＰＣ－Ｃｌ塩を３本のバイアルに１００ｍｇずつ分注し、クロロホルムに溶解させてから、それぞれリノール酸４２μＬ、オレイン酸４２μＬ、ステアリン酸３８ｍｇを加えて攪拌した（モル比１：１）。この反応は遮光・５０℃の条件下で１２時間行った。さらにこの溶液を２４時間凍結乾燥して、３種類のイオン性界面活性剤混合物［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］，［ＥＤＭＰＣ］［Ｏｌｅ］，および［ＥＤＭＰＣ］［Ｓｔｅ］をそれぞれ得た。
（４）イオン性界面活性剤混合物の同定：合成したイオン液体について、クロロホルム－ｄを溶媒として１Ｈ－ＮＭＲ測定を行った。
　３種類のイオン性界面活性剤混合物：［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］，［ＥＤＭＰＣ］［Ｏｌｅ］，および［ＥＤＭＰＣ］［Ｓｔｅ］それぞれの１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図１に示す。ｂのプロトンを基準に積分値を解析した結果、いずれも理論値に一致したことから、３種類のイオン性界面活性剤混合物がカチオン：アニオン＝１：１の比率で合成されたことが確認された。
　上記により得られたカチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤を含むイオン性界面活性剤混合物それぞれを核酸と混合し、エマルションを形成し、凍結保存した後に、油相に分散させて、核酸とイオン性界面活性剤混合物とを含む固体複合体を分散質として含み、油相を分散媒として含む分散溶液を得た。具体的には、以下の通りであった。
　（１）エマルションの形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ（トラベデルセン；ｓｓＤＮＡ）１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水１ｍＬに溶解させた。また、３種類のイオン性界面活性剤混合物５０ｍｇをシクロヘキサン２ｍＬにそれぞれ溶解させた。これらの水溶液及びシクロヘキサン溶液をポリトロンホモジナイザーにより２６，０００ｒｐｍで２分間高速攪拌し、エマルションを形成した。
（２）内水相及び油相の除去：上記のエマルションをただちに液体窒素に２０分間浸し、凍結させた後、一昼夜凍結乾燥機にかけ内水相及び油相を除去することにより、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を作製した。
（３）油中分散：上記のイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を、高い経皮浸透促進効果を有する油状基剤ＩＰＭ１ｍＬに分散させ、最終濃度が１ｍｇ／ｍＬとなるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散溶液を得た。
　調製したイオン性界面活性剤－核酸固体複合体について、目視観察及び動的光散乱（ＤＬＳ）測定により物性評価を行った。ＤＬＳ測定は、サンプルをＩＰＭで１００倍希釈し０．０１ｍｇ／ｍＬの条件で行った。得られた分散溶液はいずれも、透明で均質な光学特性を有した（図３Ａ参照）。ＤＬＳ測定によるといずれも単一のピークを有する、１００ｎｍから２００ｎｍ程度の流体力学流径を有するナノ粒子を含むことが示された（図３Ｂ参照）。分散液では、２８日まで固体複合体は安定であった（図３Ｃ）。
　核酸と界面活性剤の質量比を１：１０，１：２０，１：３０，１：４０，１：５０，および１：１００の６種類に変化させて粒子径測定及び長期安定性評価を行った。なお、この検討は３種類の界面活性剤混合物のうち［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］のみを用いて行った。ＤＬＳ測定の結果、いずれの混合比率においても単一なピークを示し、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体の調製に相応しいことが明らかとなった（図４参照）。
　従来型の界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散液を以下のように作成した。
（１）エマルションの形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ（ｓｓＤＮＡ）１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水１ｍＬに溶解させた。また、ＥＲ－２９０　５０ｍｇをシクロヘキサン２ｍＬに溶解させた。これらの水溶液及びシクロヘキサン溶液をポリトロンホモジナイザーにより２６，０００ｒｐｍで２分間高速攪拌し、エマルションを形成した。
（２）内水相及び油相の除去：上記のエマルションをただちに液体窒素に２０分間浸し凍結させた後、一昼夜凍結乾燥機にかけ内水相及び油相を除去することにより、ＥＲ－２９０－核酸固体複合体を作製した。
（３）油中分散：上記のＥＲ－２９０－核酸固体複合体を、高い経皮浸透促進効果を有する油状基剤ＩＰＭ　１ｍＬに分散させ、最終濃度が１ｍｇ／ｍＬとなる分散液（従来型）を得た。
　経皮浸透実験を実施した。
（１）皮膚片の作製：ヘアレスマウス皮膚を解凍後、約２ｃｍ×２ｃｍの大きさに切り出した。
（２）フランツセルの準備：縦式フランツセル（有効面積０．７８５ｃｍ２）のレシーバー相にＰＢＳを４ｍＬ添加し、マウス皮膚をＳＣ側をドナー相に向けセットした後、フランツセル中の空気を抜くようにさらにＰＢＳを１ｍＬ添加した。
（３）製剤添加：３２．５℃に保ちながらスターラーで攪拌し、各ドナー相にサンプルを２００μＬずつ添加した。
（４）洗浄：６時間経過後にマウス皮膚を取り出し、５００μＬの洗浄液（１×ＴＥ　ｂｕｆｆｅｒ：アセトニトリル＝１：１）で角層側を４回、反対側を１回洗浄した。
（５）抽出：洗浄後の皮膚組織を１６等分に細断したものをチューブに入れ、５００μＬの抽出液（ＰＢＳ）に浸漬させ２４時間振盪した。
（６）定量分析：抽出液をフィルター濾過した後、ＨＰＬＣを用いて定量分析を行った（表１参照）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　各種サンプルの皮膚浸透量を図５に示す。この結果から、従来型分散液と比較して今回得られたイオン性界面活性剤－核酸固体複合体の分散液では、核酸の経皮浸透性が向上したことが示唆された。浸透性向上の理由としては、カチオン性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤の存在により角層の液晶構造が破壊されたことが挙げられる。得られた固体複合体の粒径が従来型の固体複合体よりも小さいことも皮膚浸透性の向上に効いている可能性も考えられた。
　また、３種類の分散液の中でも［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］固体複合体の皮膚浸透量が最も高くなった。これは、アニオン性脂肪酸であるリノール酸がシス型のＣ＝Ｃ結合を二つ持っていて嵩高くなるために、角層脂質を擾乱する能力がオレイン酸およびステアリン酸と比較して高くなったためだと考えられる。
　上記では、イオン性界面活性剤混合物として、アニオン性界面活性剤とカチオン性界面活性剤を含む混合物を用いた。以下では、アニオンとカチオンを含むイオン性界面活性剤混合物について、アニオンをＣｌ－イオンとした［ＥＤＭＰＣ］［Ｃｌ］や、他の親水性イオン液体である［Ｃｈｏ］［Ｏｌｅ］、また単純にＤＭＰＣとリノール酸を混合したＤＥＳ［ＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］を用いて、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散製剤を作成した。その結果、いずれの場合でも安定なイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散製剤を作成できることが明らかとなった（図６参照）。この中では、イオン性界面活性剤混合物のシクロヘキサンへの溶解性の低さから、［Ｃｈｏ］［Ｏｌｅ］を用いて作製したイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散製剤は、相対的に複合体の安定性が低いことが分かった。得られた分散製剤に関して上述のようにフランツセルを用いてヘアレスマウス皮膚への浸透性をｉｎ　ｖｉｔｒｏで評価した。その結果、いずれの場合も、皮膚に対して良好な核酸の浸透性を示した（図７参照）。特に、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤を含むイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散製剤（［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］）で、核酸の皮膚への優れた浸透性が認められた。［ＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］では、皮膚への核酸の浸透の向上効果は認められたが、その向上効果は限られていた。ＤＭＰＣは、分子内で電荷が中和しており、ＤＭＰＣ内の負電荷を除去してカチオン性にすることが皮膚への浸透性を高める上で重要であることが示唆された。また、コリンとＯｌｅでも皮膚への浸透性の向上効果は認められたが、向上効果が限られたことから、カチオンは長鎖脂肪鎖を有していることが好ましいことが示唆された。なお、脂肪酸をプロピオン酸に変更した場合も皮膚への浸透性向上効果が弱かったことから、アニオン性脂質も長鎖脂肪酸を有していることが好ましいことが示唆された。［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］および［ＥＤＭＰＣ］［Ｏｌｅ］などの脂質混合物は、イオン液体の性質を示す。なお、ブタの皮膚に対しても同様の試験を実施すると、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］、［ＥＤＭＰＣ］［Ｏｌｅ］、および［ＥＤＭＰＣ］［Ｓｔｅ］のいずれにおいても、ＥＲ－２９０で作成した固体複合体またはＰＢＳよりも、核酸の皮膚への高い浸透性を示した。
　アニオン性界面活性剤とカチオン性界面活性剤を含むイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散製剤の皮膚への浸透の状態について蛍光顕微鏡下で分析した。その目的で、蛍光標識イオン性界面活性剤と、蛍光標識核酸とからイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散製剤を調製した。
カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤を含むイオン性界面活性剤混合物の皮膚浸透性向上効果
　カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤を含むイオン性界面活性剤混合物の皮膚浸透性向上効果を確認した。
（１）エマルションの形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅ　（ｓｓＤＮＡ）　１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水１ｍＬに溶解させた。また、ＥＲ－２９０　５０ｍｇをシクロヘキサン２ｍＬに溶解させた。これらの水溶液及びシクロヘキサン溶液をポリトロンホモジナイザーにより２６，０００ｒｐｍで２分間高速攪拌し、エマルションを形成した。
（２）内水相及び油相の除去：上記のマルションをただちに液体窒素に２０分間浸し凍結させた後、一昼夜凍結乾燥機にかけ内水相及び油相を除去することにより、ＥＲ－２９０－核酸複合体を作製した。
（３）油中分散：上記のＥＲ－２９０－核酸複合体を、イオン性界面活性剤混合物を含まないＩＰＭとイオン性界面活性剤混合物の１０ｍｇを含むＩＰＭにそれぞれ再分散させ、核酸の最終濃度が１ｍｇ／ｍＬとなる固体複合体を含む分散液を得た。
　その結果、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤を含むイオン性界面活性剤混合物の製剤への添加は、製剤成分の皮膚への浸透度を向上させたことが明らかであった（図８参照）。
イオン性界面活性剤混合物による角層脂質構造の撹乱
　凍結保存していたＹＭＰ皮膚（背部）を常温で解凍した。アルミインキュベータで２分間、６０℃に加熱し、ピンセットを使って表皮層を剥離した。角層側を上向きにし、表皮シートを０．２５％Ｔｒｙｐｓｉｎ溶液に浮かべて常温で２４時間静置した。綿棒を用いて生きた表皮層を取り除き、２４時間以上乾燥させることで角層シートを得た。この角層シートを０．５　ｃｍ角に切り、使用まではラップで包んで保存した。３種類のイオン性界面活性剤混合物［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］，［ＥＤＭＰＣ］［Ｏｌｅ］，および［ＥＤＭＰＣ］［Ｓｔｅ］をそれぞれ角層シートに直接添加し、３２．５℃で１時間静置した後、角層シートを２０％エタノールでよく洗浄し２４時間乾燥させた。この角層シートについてＦＴ－ＩＲ測定を行い、２９２０ｃｍ－１及び２８５０ｃｍ－１付近に出現するＣＨ２対称伸縮振動（ｓｙｍＣＨ２）及びＣＨ２非対称伸縮振動（ａｓｙｍＣＨ２）のピークシフトを観察した。
　その結果、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］をアプライしたときのピークシフトが最大となっており、角層脂質の液晶構造が最も乱されたことが示唆された（図９参照）。アニオンとしてリノール酸を用いたとき最も液晶構造が乱された理由として、シス型のＣ＝Ｃ結合を二つ有しており脂質分子自体が最も嵩高くなっているためだと考えられる。Ａｋｉｎｓｈｉｎａらはリノール酸と細胞間脂質の相互作用を分子シミュレーションによって評価しており、実際にシス型のＣ＝Ｃ結合を有するリノール酸がラメラ構造に入り込むことで規則的な構造が破壊されることを示している（図１０参照）（Ａｎｎａ　Ａｋｉｎｓｈｉｎａ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｐｈｙｓ．　Ｃｈｅｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｐｈｙｓ．，　１８，　１７４４６－１７４６０　（２０１６））。この結果は、３種類のイオン性界面活性剤混合物のうち［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］－Ｓ／Ｏの浸透量が最も高いという結果とも相関がとれている。このことから、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体中のイオン性界面活性剤も皮膚への核酸の浸透性の向上において有利であると考えられる。
実施例２：エタノール希釈法
　イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を上記と異なるプロセスにより調製した。
試薬
　１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），リノール酸、オレイン酸、およびステアリン酸、エチルトリフルオロメタンスルホネート、イソプロピルミリステート、Ｓｐａｎ－２０は東京化成工業株式会社より、５ｍｏｌ／Ｌ　塩酸、クロロホルム（超脱水）、ギ酸アンモニウム、エタノール（９９．５）はキシダ化学株式会社より、シクロヘキサン、アセトニトリルは富士フイルム和光純薬株式会社より、ＥＲ－２９０，Ｌ－１９５は三菱化学フーズより、４％パラホルムアルデヒドは武藤化学より、Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ及びＦＡＭ標識Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎはユーロフィンジェノミクス株式会社より、ＰＮＡは株式会社ファスマックより、３－（４，５－ジメチル－２－値アゾリル）－２，５－ジフェニル－２Ｈ－テトラゾリウム　ブロマイド（ＭＴＴ）培地は和光純薬よりそれぞれ購入した。
実験動物・細胞
　インビトロ皮膚浸透試験に用いるマウス皮膚（Ｈｏｓ：　ＨＲ－１）は株式会社星野試験動物飼育所より、Ｂ１６　ｍｅｌａｎｏｍａ　ｃｅｌｌは理化学研究所より、ヒト３次元培養表皮　ＬａｂＣｙｔｅ　ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬは株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリングより購入した。
器具・装置
　スライドガラスとカバーガラスは松浪硝子工業株式会社製より、ベースモールドはＦｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃよりそれぞれ購入した。凍結乾燥機（ＦＤＵ－１１１０，　ＥＹＥＬＡ）、ポリトロンホモジナイザー（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ）、動的光散乱測定装置（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ　Ｎａｎｏ　ＺＳ，　Ｍａｌｖｅｒｎ）、蛍光プレートリーダー（ＬＳ－５５ＫＧ，　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ）、ホットスターラー（ＲＳＨ－６ＤＮ，　ＲＥＸＩＭ）、共焦点レーザー顕微鏡（ＬＳＭ７００，　Ｃａｒｌ　Ｚｅｉｓｓ）、フランツセル（株式会社旭製作所）、逆相高速液体クロマトグラフィー装置（１２６０　ＩｎｆｉｎｉｔｙＩＩ）、クリオスタットミクロトーム（ＣＭ１５１０，　Ｌｅｉｃａ）、透過電子顕微鏡（ＪＥＭ－２０１０，　日本電子）、小角Ｘ線散乱装置（Ｎａｎｏｖｉｅｗｅｒ，　Ｒｉｇａｋｕ）を使用した。
　実施例１では、シクロヘキサン溶液溶解したイオン性界面活性剤を核酸を含む水溶液と混合し、エマルションを形成させ、その後、凍結乾燥をして、最後に得られた固体複合体を油相に分散させる手法で分散液を取得した。本実施例では、エタノール希釈法によりイオン性界面活性剤－核酸複合体を形成させ、その後、凍結乾燥をして、最後に得られた固体複合体を油相に分散させる（図１１）。エタノール希釈法においてエマルション形成工程が不要であれば、試料に対する損傷を最小限に留めることができるであろう。本実施例では、このような方法により、固体複合体の粒子が得られるのかが検証された。
（１）イオン性界面活性剤－核酸固体複合体の形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ（ｓｓＤＮＡ）　１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水５ｍＬに溶解させた。また、イオン性界面活性剤混合物５０ｍｇを９９．５％エタノール　１ｍＬに溶解させた。これらの水溶液及びエタノール溶液を混合し、室温で穏やかに６時間攪拌することで自発的にイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を形成させた。
（２）内水相及び油相の除去：上記の水／エタノール溶液を液体窒素に２０分間浸し凍結させた後、一昼夜凍結乾燥機にかけ内水相及び油相を除去することにより、イオン性界面活性剤－核酸複合体を作製した。
（３）油中分散：上記のイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を、高い経皮浸透促進効果を有する油状基剤ＩＰＭ　１ｍＬに分散させ、核酸の最終濃度が１ｍｇ／ｍＬとなるように調製して固体複合体の分残液を得た。
　上記手順によりイオン性界面活性剤－核酸固体複合体得た。界面活性剤としては、ＥＲ－２９０（非イオン界面活性剤）、およびカチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤の混合物（ＥＤＭＰＣとリノール酸との混合物）が用いられた。得られた分散液について、ＤＬＳ測定により分析すると、粒径分布は図１２に示される通りであった。電荷を有しないＥＲ－２９０を界面活性剤として用いたときは粒径分布は、１０回の独立した実験で変動するが、ＥＤＭＰＣとリノール酸との混合物を用いたときには、得られた分散液中の固体複合体は、一定の粒径分布を示した。
　実施例１の通りに調製したイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散液（ここでイオン性界面活性剤は、ＥＤＭＰＣとリノール酸との混合物からなる）（Ｐｒｅ－ｍｅｔｈｏｄ）を用意し、上記エタノール法で作成したイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散液（ここでイオン性界面活性剤は、ＥＤＭＰＣとリノール酸との混合物からなる）（Ｎｅｗ－ｍｅｔｈｏｄ）と皮膚浸透性を比較した。まず、得られる固体粒子の粒径分布は、図１３に示される通り、同等であった。
　それぞれの分散液を皮膚に塗布して皮膚への吸収量と皮膚の透過量を調べた。その結果、図１４に示されるように、Ｐｒｅ－ｍｅｔｈｏｄとＮｅｗ－ｍｅｔｈｏｄとで同等の皮膚への吸収量と皮膚の透過量を示した。
　Ｎｅｗ－ｍｅｔｈｏｄで得られた分散液について、４週間の安定性を評価した。調製直後、および４週間後の粒径およびＰＤＩをＤＬＳにより測定した。外観は、図１５Ａに示されるように、４種間の時間経過にも関わらず変化を示さなかった。粒径分布は、図１５Ｂに示されるように、４種間の時間経過にも関わらず変化を示さなかった。
　固体複合体形成時の核酸とイオン性界面活性剤混合物の組成比を変更した。具体的には、質量比（脂質中のアニオンを無視した時のＮ：Ｐ比）を１：３（１：１），１：１５（１：５），１：３０（１：１０）とした３種類の組成比で新たにイオン性界面活性剤－核酸複合体を形成させ、粒子径・ＰＤＩ及び皮膚浸透性、水中での粒子径・ゼータ電位の比較を行った。
　ＤＬＳ測定による流体力学径とＰＤＩは、図１６に示される通りであった。図１６に示されるように核酸に対する界面活性剤量が増加すると粒径が小さくなる傾向が示された。次に、得られたイオン性界面活性剤－核酸複合体の皮膚浸透性および皮膚透過性を調べた。結果は、図１７に示されるように、核酸に対する界面活性剤量が大きくなるにつれて皮膚への浸透性も透過性も向上するが、界面活性剤量が一定値を超えると却って、皮膚への浸透性も透過性が低下した。
　エタノール法で作成した分散液について、さらにＤＬＳによる分析（図１８）およびゼータサイザーによるゼータ電位の分析（図１９）を行った。ゼータ電位がいずれも正であることから脂質二重膜中に核酸が内包された構造を有している可能性が示唆された。
　核酸として、Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ、カチオン性界面活性剤としてＥＤＭＰＣ、アニオン性界面活性剤としてリノール酸を用いて、エタノール希釈法により、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散液を調製した。核酸を含む水溶液とイオン性界面活性剤を含むエタノール溶液とを混合し、瞬時に液体窒素で凍結する（０秒）、１０秒間ボルテックスミキサーで攪拌し、液体窒素で凍結する（１０秒）、１０分間または６時間スターラーで攪拌し、液体窒素で凍結して、その後、凍結乾燥して、油状基材ＩＰＭ　１ｍＬに分散させた。
　粒径分布の解析により（図２０参照）、イオン性界面活性剤は核酸と混合すると瞬間的に、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を形成することが示された。
　エタノール希釈法における、核酸を含む水溶液とイオン性界面活性剤を含むエタノール溶液との混合温度と得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体の粒径分布との関係を調べた。図２１に示されるように、得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体の粒径分布は、温度により変化しなかった。
　エタノール希釈法において混合する、水溶液とエタノール溶液の比率を１：５または１：１０として得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体の粒径分布との関係を調べた。図２２に示されるように、水溶液とエタノールの混合比率により粒径分布は変化しなかった。
　エタノール希釈法において、カチオン性界面活性剤をＥＤＭＰＣとし、アニオン性界面活性剤をリノール酸、オレイン酸またはステアリン酸として得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体の粒径分布との関係を調べた。図２３に示されるように、いずれのアニオン性界面活性剤を用いた場合でもほぼ単一ピークの粒径分布を示した。
　エタノール希釈法において、混合するカチオンをコリン（コリンは長鎖脂肪鎖を有しない）とし、アニオン性界面活性剤をオレイン酸として得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体の粒径分布およびゼータ電位を調べた。図２４に締めさえるように、単一ピークの粒径分布を示したものの、粒子のゼータ電位は負であった。このことから、コリンのような炭素数が小さいカチオンを用いると、核酸が粒子内に内包されない可能性が示唆された。
　エタノール希釈法で、各種イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を作成して、皮膚の透過性および浸透性を評価した。結果は図２５に示される通りであった。図２５に示されるように、いずれも皮膚への浸透性を高めた。また、カチオンとしてカチオン性界面活性剤を用いた場合には、皮膚透過性が向上した（図２５参照）。
実施例３：ペプチド核酸
　エタノール希釈法で、上記の通り、イオン性界面活性剤－ペプチド核酸固体複合体を含む分散液を得た。
（１）ＰＮＡ水溶液（核酸１ｍｇ／Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水５ｍＬ）を、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］を溶解させたエタノール溶液（５ｍｇ／エタノール１ｍＬ）に添加した。
（２）室温で６時間、スターラーで穏やかに撹拌し、自発的にイオン性界面活性剤－核酸複合体を形成させた。
（３）その後２４時間凍結乾燥させ内水相及び油相を除去してから、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）に再分散させることでイオン性界面活性剤－ＰＮＡ複合体製剤を調製した（最終濃度１ｍｇ／ｍＬ）。
　得られた分散液における複合体の粒径分布をＤＬＳにより測定すると、単一ピークの粒径分布を示した（図２６参照）。また、１４日間の保存に対しても安定であった（図２６参照）。
実施例４：イオン性界面活性剤－タンパク質複合体
　タンパク質としてはインスリンを用いた。
（１）インスリン水溶液（インスリン１ｍｇ／水５ｍＬを、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］を溶解させたエタノール溶液（５０ｍｇ／エタノール１ｍＬ）に添加した。
（２）室温で６時間、スターラーで穏やかに撹拌し、自発的にイオン性界面活性剤－タンパク質複合体を形成させた。
（３）その後２４時間凍結乾燥させ内水相及び油相を除去してから、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）に再分散させることでイオン性界面活性剤－タンパク質固体複合体を含む分散液を調製した（最終濃度１ｍｇ／ｍＬ）。
　ＤＬＳ測定により粒径分布を測定すると、得られた複合体は、単一ピークの粒径分布を示した（図２７参照）。得られた複合体は、１４日の保存に対して安定であった（図２７参照）。
　タンパク質としては、オボアルブミンを用いた。
（１）ＯＶＡ水溶液（ＯＶＡ１ｍｇ／Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水５ｍＬ）を、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］を溶解させたエタノール溶液（５ｍｇ，１０ｍｇ，２５ｍｇ，５０ｍｇ／エタノール１ｍＬ）に添加した。
（２）室温で６時間、スターラーで穏やかに撹拌し、自発的にイオン性界面活性剤－タンパク質複合体を形成させた。
（３）その後２４時間凍結乾燥させ内水相及び油相を除去してから、ミリスチン酸イソプロピル（ＩＰＭ）（補助界面活性剤としてＳｐａｎ２０を０，５，１０，２５ｍｇ添加）に再分散させることでイオン性界面活性剤－タンパク質固体複合体を含む分散液を調製した（最終濃度１ｍｇ／ｍＬ）。
　その結果、得られた複合体は、単一ピークの粒径分布を示さなかった。そこでＳｐａｎ２０を補助界面活性剤として含むイオン性界面活性剤混合物を用いると、オボアルブミン：イオン性界面活性剤混合物：Ｓｐａｎ２０の質量比を１：２５：２５としたときに単一ピークの粒径分布を有する複合体が得られた。オボアルブミンは、約４５ｋＤａのタンパク質であり、インスリンよりもかなり大きなタンパク質である。大きなタンパク質を複合体化するには、補助界面活性剤を使用することが有益である。得られた複合体の皮膚への浸透性を検討した。図２８に示されるように、得られた複合体により、オボアルブミンの皮膚への浸透性は有意に向上した。
実施例５：エタノール希釈法により得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体の構造（１）イオン性界面活性剤－核酸複合体の形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ（ｓｓＤＮＡ）
　１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水５ｍＬに溶解させた。また、イオン性界面活性剤混合物５０ｍｇを９９．５％エタノール１ｍＬに溶解させた。これらの水溶液及びエタノール溶液を混合し、室温で穏やかに６時間攪拌することで自発的にイオン性界面活性剤－核酸複合体を形成させた。
（２）内水相及び油相の除去：上記の水／エタノール溶液を液体窒素に２０分間浸し凍結させた後、一昼夜凍結乾燥機にかけ内水相及び油相を除去することにより、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を作製した。　
実施例６：複合体の電子顕微鏡観察
　以下の通り、観察する試料を調製した。
サンプル１：高速攪拌プロセスによる複合体（ＩＰＭ中）
（１）エマルションの形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ（ｓｓＤＮＡ）　１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水１ｍＬに溶解させる。また、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］５０ｍｇをシクロヘキサン２　ｍＬに溶解させた。これらの水溶液及びシクロヘキサン溶液をポリトロンホモジナイザーにより２６，０００ｒｐｍで２分間高速攪拌し、エマルションを形成させた。
（２）内水相及び油相の除去：上記のエマルションをただちに液体窒素に２０分間浸し凍結させた後、一昼夜凍結乾燥機にかけ内水相及び油相を除去することにより、イオン性界面活性剤－核酸複合体を作製した。
（３）油中分散：上記のイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を、ＩＰＭ　１ｍＬに分散させ、最終濃度が１ｍｇ／ｍＬである分散液を得た。
サンプル２：エタノール希釈法による複合体（エタノール水溶液中）
イオン性界面活性剤－核酸複合体の形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ　（ｓｓＤＮＡ）　１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水５　ｍＬに溶解させた。また、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］５０ｍｇを９９．５％エタノール　１ｍＬに溶解させた。これらの水溶液及びエタノール溶液を混合し、室温で穏やかに６時間攪拌することで自発的にイオン性界面活性剤－核酸複合体を形成させた。
サンプル３：エタノール希釈法による複合体（ＩＰＭ中）
（１）イオン性界面活性剤－核酸複合体の形成：Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ（ｓｓＤＮＡ）
　１ｍｇをＭｉｌｌｉ－Ｑ水５ｍＬに溶解させた。また、［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］５　ｍｇを９９．　％エタノール　１ｍＬに溶解させた。これらの水溶液及びエタノール溶液を混合し、室温で穏やかに６時間攪拌することで自発的にイオン性界面活性剤－核酸複合体を形成させた。
（２）内水相及び油相の除去：上記の水／エタノール溶液を液体窒素に２０分間浸し凍結させた後、一昼夜凍結乾燥機にかけ内水相及び油相を除去することにより、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を作製した。
（３）油中分散：上記のイオン性界面活性剤－核酸固体複合体を、ＩＰＭ　１ｍＬに分散させ、最終濃度が１ｍｇ／ｍＬである分散液を得た。
ＴＥＭ観察
　各サンプルを、シクロヘキサンを用いて適宜希釈し、走査型透過電子顕微鏡　（Ｓｃａｎｎｉｎｇ　Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，　ＳＴＥＭ）用カーボンフィルムグリッドにキャストした。これを３時間乾燥させた後、２０００×倍率、加速電圧１２０ｋＶで観察した。
　結果は、図２９に示される通りであった。高速攪拌プロセス（シクロヘキサン法）で得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体は、粒径１０ｎｍ程度の球状粒子が凝集して粒径２００ｎｍ程度の凝集塊を形成しているようすが認められた。エタノール希釈法で得られるエタノール水溶液中のイオン性界面活性剤－核酸複合体は、直径１０ｎｍ程度の円盤状構造体が凝集して６００ｎｍ程度の構造を形成しているようすが認められた（図２９）。エタノール希釈法で得られるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体は、粒径１０ｎｍ程度の円盤状構造体が凝集して粒径２００ｎｍ程度の凝集塊を形成しているようすが認められた（図２９）。
　イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を以下のように調製した。具体的には、核酸としてＦＡＭ標識Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎを用いる以外は、本実施例の上記の通りにエタノール希釈法により凍結乾燥物を得て、ＩＰＭ中に分散させて、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体を含む分散液を得た。その後、当該分散液をＭｉｌｌｉ－Ｑ水にさらに分散させて、核酸濃度１ｍｇ／ｍＬの分散溶液を得た。
　結果は、図３０に示されるように、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体は、細胞内に効率よく導入された。この複合体は、作成プロセスを考慮すると、Ｓ／Ｏ／Ｗエマルションであると考えられる。この複合体を皮膚に塗布して皮膚への浸透性を確認した。皮膚を回収し、固定した後切片を作製して蛍光顕微鏡下でＦＡＭシグナルを確認した。結果は、図３１に示される通りであり、イオン性界面活性剤－核酸固体複合体が基底層細胞および真皮細胞の取り込まれている様子が確認された。
実施例８：ＥＧＦＰのｍＲＮＡの細胞への導入と遺伝子発現
　カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤とｍＲＮＡの複合体を形成させ、ｍＲＮＡの細胞へのトランスフェクションと、ｍＲＮＡの発現を観察した。ｍＲＮＡとしては、ＥＧＦＰを用い、発現をＥＧＦＰからの蛍光を指標として検出した。
　Ｔ７プロモータ配列を含み緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）をコードする直鎖状二本鎖ＤＮＡを鋳型とし、Ｔ７　ｍＳｃｒｉｐｔＴＭ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍＲＮＡ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　（ＣｅｌｌＳｃｒｉｐｔ社）ｋｉｔを用いてＥＧＦＰ　ｍＲＮＡを合成した。得られたＥＧＦＰ　ｍＲＮＡは、２０ｎｇ／μｌとなるようミリＱ水に溶解させた。
　［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］は、６μｇ／μｌとなるよう９９．５％エタノールに溶解させた。ＥＧＦＰ　ｍＲＮＡ水溶液１０μＬと［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］エタノール溶液１μＬを混合し、軽くｖｏｒｔｅｘすることでカチオン性界面活性剤－アニオン性界面活性剤－ｍＲＮＡ複合体を形成させた。
　Ｂ１６メラノーマ細胞を１×１０４／ｗｅｌｌとなるようマルチウェルウェルプレート（Ｍａｔｓｕｎａｍｉ社）に播種した。翌日、細胞が７０％～８０％コンフルエントとなったところで無血清培地に交換後、ｍＲＮＡの添加量が２００ｎｇ／ｗｅｌｌとなるよう、カチオン性界面活性剤－アニオン性界面活性剤－ｍＲＮＡ複合体を培地に添加した。５％ＣＯ２，３７℃のインキュベーターで培養し、４８時間後に共焦点蛍光顕微鏡（２００倍）にてＥＧＦＰ由来の緑色蛍光を観察した。
　結果は、図３２に示される通りであった。図３２に示されるように、ＮｏｎＴｒｅａｔの細胞からは緑色蛍光タンパク質由来の蛍光が観察されなかった。一方、カチオン性界面活性剤とアニオン性界面活性剤を用いた投与系では４８時間後に緑色の蛍光が観察されたことから、ｍＲＮＡが細胞内に導入され、ＥＧＦＰが発現したことが示された。これにより、ｍＲＮＡのような長くて不安定な核酸であっても、細胞内にインタクトの状態で導入できることが分かった。エタノール希釈法によると、エマルション形成工程を省くことができ、核酸を含む水溶液と界面活性剤を含む低級アルコール溶液とを混合するだけで脂質－核酸複合体を形成させることができ、得られた複合体は、水溶液中に分散した状態であるため、培養培地に添加することができる。培養培地中で細胞と接触した複合体は、細胞内に取り込まれる。この方法では、アルコールへの高い溶解性を有し、水への低い溶解性を有する脂質が好ましく用いられ得る。
実施例９：皮膚に対する刺激性
　ヒト３次元培養表皮モデル（ＬａｂＣｙｔｅ　ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ商標）を用い、インビトロにおける皮膚刺激性試験を行った。ＬａｂＣｙｔｅ　ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ（ラボサイト　エピ・モデル）とは、ヒト正常表皮細胞を重層培養したヒト３次元培養表皮モデルであり、実験動物による皮膚刺激性試験の代替材料として開発された。ヒト細胞を用いているため、動物実験と比較して種差がないほか、ウェル間、ロット間のバラツキが少なく、再現性の高い試験結果を得ることができる。ここでは２４ウェルのＬａｂＣｙｔｅ　ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ２４を用いてＰＢＳ（陰性対照）、ＩＰＭ（陰性対照）、ＳＤＳ（陽性対照）、３種類のイオン性界面活性剤混合物及び［Ｃｈｏ］［Ｏｌｅ］を界面活性剤として用いた核酸製剤（エタノール希釈法）、さらに［ＥＤＭＰＣ］［Ｌｉｎ］によるイオン性界面活性剤－核酸固体複合体について、１５分間曝露における皮膚刺激性を評価した。
（１）前培養
　アッセイ培地を恒温槽（３７℃）で温めた後、２４穴プレートに５００μＬ／ｗｅｌｌ添加した。ヒト表皮モデルが入った培養カップを滅菌済みピンセットで取り出し、アッセイ培地の入ったウェルに移した。その際、最初培養カップは寒天培地上にあるので、培養カップと寒天培地の間に空気を入れるようにゆっくりと取り出し、培養カップ外側に寒天培地が付着していた場合は、ピンセットで注意深く取り除いた。また、表皮表面に触れないように、かつ培養カップ底面に気泡が入らないように新しいウェルに移した。その後、インキュベータ内で、一晩（１５－３０時間）前培養を行った。
（２）サンプルの投与・洗浄
　各サンプル１００μＬをヒト表皮モデルの中央部に慎重に添加し、１５分間曝露した（ｎ＝３）。表皮全体にサンプルが行き届かなかった場合は、アッセイプレートにフタをして、プレート横側を軽くタッピングした。次に、表皮モデル上のサンプルを除去し、培養カップをＰＢＳ１００μＬで１５回／ｗｅｌｌ洗浄した（最終洗浄後は滅菌綿棒で培養カップの外側のみをふき取り、ＰＢＳを除去した）。
（３）後培養
　新しいウェルに恒温槽（３７℃）で温めたアッセイ培地１ｍＬ／ｗｅｌｌ添加した後、洗浄後の培養カップを新しいウェルに移した。そしてインキュベータ内で２４時間培養することで後培養を行った。
　次いでＭＴＴアッセイを実施した。
　５．０　ｍｇ／ｍｌの３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－チアゾール）－２，５－ジフェニル－２Ｈ－テトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）／ＤＭＥＭ培地（ＭＴＴ培地）を調製しフィルター滅菌した。新しいウェルにこのＭＴＴ培地を５００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、そこに培養カップを移した。その後、インキュベータ内で３時間反応させた。
ＭＴＴ反応産物（フォルマザン）の抽出
　ＭＴＴ反応後、培養カップ内のヒト表皮組織をピンセットで取り出し、３００μＬのイソプロパノール中に冷暗所で一晩（１５時間以上）浸漬させ、色素を抽出した。
吸光度測定・生細胞数算出
　プレートリーダーを用いて、各抽出液の５７０、６５０ｎｍの吸光度を測定した。そして陰性対照（ＰＢＳ）の細胞生存率を１００％とした際の生細胞率を以下の式から算出した：
　　測定値＝［検体の吸光度（５７０ｎｍ）－検体の吸光度（６５０ｎｍ）］－［ブランクの吸光度（５７０ｎｍ）－ブランクの吸光度（６５０ｎｍ）］
　　生細胞率（％）＝（被験物質の測定値平均）／（陰性対照の測定値平均）×１００
　図３３に示されるように、いずれの成分も、細胞生存率に対して有意な影響を及ぼすものではなく、皮膚に対して非刺激性であると考えられた。
実施例１０：腫瘍、皮膚、および肝臓に対する経皮核酸送達
　ＳＮＯＲＡ２３を標的化した製剤を調製した。ＥＳ２卵巣癌細胞３×１０６をマウス皮下に移植し、１週間後に皮下腫瘍の形成を確認した。腫瘍の上部（１ｃｍ×１ｃｍ）、または、腫瘍の周りに、２５０μｇのＳＮＯＲＡ２３を標的とするＡＳＯを含むハイブリッド粒子５０μＬをそれぞれ塗布、または、皮下注射した。経皮投与群は、投与部位を含む胴部に保護テープを１周巻いた。
　ＡＳＯは以下の配列を有した。
５’－ＧＡＡａｃｃｔａｔｇｍＣＡｍＣａ－３’（配列番号２）
｛ここで、小文字はＤＮＡ塩基を表し、大文字はＬＮＡ修飾塩基を表し、ｍＣはＬＮＡ修飾したメチルシトシンを表す。また、全てのリン酸基はホスホロチオエート修飾されている。）
　投与から２日後に、皮膚、皮下腫瘍、および、肝臓を摘出し、トータルＲＮＡを抽出した。標的となるＲＮＡ（ＳＮＯＲＡ２３）量を定量し、発現量が抑制されたかどうかをＲＴ－ＰＣＲ法により確認した。結果は図３４に示される通りであった。図３４に示されるように、経皮投与および皮下投与群のいずれにおいても、標的ＲＮＡの発現量の低下を誘導した。肝臓におけるノックダウン効果は、ＡＳＯが投与経路によらずに血中に移行したことを示唆する。
 

Claims (20)

  1. 　カチオンとアニオンを含む混合物を含む、薬剤成分との複合体を形成させることにおいて用いるための組成物。
  2. 　カチオンがカチオン性脂質であり、アニオンが脂肪酸である、請求項１に記載の組成物。
  3. 　医薬有効成分を含まない、請求項１または２に記載の組成物。
  4. 　経皮投与される医薬有効成分をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
  5. 　カチオンと、アニオンと、核酸とを含む固体複合体の集団を含み、
    　油相を含み、
    　固形複合体の集団は、油相中に分散されている、組成物。
  6. 　固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体を含む、請求項５に記載の組成物。
  7. 　固体複合体の集団は、約５ｎｍ～約５０ｎｍの固体複合体の複数の集塊を含む構造体を含む、請求項６に記載の組成物。
  8. 　核酸を経皮投与することに用いるための、請求項５～７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 　カチオンがカチオン性界面活性剤であり、アニオンがアニオン性界面活性剤である、請求項５～８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 　カチオンとアニオンが、電荷比１：０．８～１：１．２の量で含まれる、請求項５～９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 　カチオンとアニオンが、カチオンとアニオンだけからなる組成物において、少なくとも電荷比１：１で混合したときに、イオン液体を形成することができる、請求項５～１０のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 　カチオンとアニオンと核酸とを含む複合体を含む水性組成物であって、
    　核酸を細胞外から細胞内にトランスフェクションすることができ、これにより細胞内に当該核酸を含む生存細胞を産生することができる、組成物。
  13. 　請求項５～１１のいずれか一項に記載の組成物を製造する方法であって、
    　核酸を含む水性溶液と、カチオンおよびアニオンを含む混合物を含む低級アルコール溶液とを混合させ、核酸と上記カチオンおよびアニオンを含む複合体を得ることを含む、方法。
  14. 　前記得られた複合体を凍結乾燥することをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 　凍結乾燥された複合体を、油相に分散させることを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
  16. 　核酸を細胞外から細胞内にトランスフェクションすることにおいて用いるための、請求項１２に記載の組成物。
  17. 　アニオン性脂質を含む、対象の皮膚のバリアを減弱化させること（または皮膚の浸透性を向上させること）に用いるための組成物。
  18. 　アニオン性脂質が、脂肪酸である、請求項１７に記載の組成物。
  19. 　アニオン性脂質が、長鎖脂肪酸である、請求項１７または１８に記載の組成物。
  20. 　アニオン性脂質が、長鎖不飽和脂肪酸である、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の組成物。


     
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP2001511440A (ja) * 1997-07-30 2001-08-14 バイオベクター セラピューティクス エス．エー． 層状構造の、中性あるいは陰性グローバル電荷を持つ安定粒状複合体
WO2021192861A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30 国立大学法人九州大学 イオン液体、溶媒、製剤および経皮吸収剤

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001511440A (ja) * 1997-07-30 2001-08-14 バイオベクター セラピューティクス エス．エー． 層状構造の、中性あるいは陰性グローバル電荷を持つ安定粒状複合体
WO2021192861A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30 国立大学法人九州大学 イオン液体、溶媒、製剤および経皮吸収剤

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