WO2023229050A1 - 診断用マーカー - Google Patents

Abstract

本発明は、診断用マーカーに関する。本発明の診断用マーカーは、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：（ｉ）末梢神経障害を有しない；（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である、を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別することが可能であり、抗ＣＤ３２０抗体を含む。

Description

診断用マーカー

　本発明は、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち特定の群を識別するための、診断用マーカー、診断用組成物、キットまたは方法等に関する。本発明はまた、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち特定の群を処置するための医薬組成物または方法等に関する。

　「結節性多発動脈炎」は、全身に分布する血管のうち、小動脈や中動脈（筋壁を有する動脈のうち各臓器に向かうものやその分枝レベルのもの）を主体として、血管壁に炎症や壊死を生じる疾患である。「結節性多発動脈炎」は、発熱、腎臓障害、筋肉痛などの種々の症状を呈し、２５~６０％程度において、皮下結節、リベド症状、潰瘍、壊疽などの皮膚症状を伴う。多くの症例では原因が不明で、効果的な治療方法は未確立である。「皮膚型結節性多発動脈炎」は、「結節性多発動脈炎」の皮膚に限局したものと捉えられてきた。しかしながら、Ｃｈａｐｅｌ　Ｈｉｌｌ　Ｃｒｉｔｅｒｉａ　２０１２以降は、「皮膚動脈炎」と呼称されるようになっており、結節性多発動脈炎の部分症状に限定されるのか、あるいは、独立した疾患なのかは、明確に区別されていない。

　現在、皮膚型結節性多発動脈炎の治療には副腎皮質ステロイド剤や免疫抑制剤が用いられているが、治療への反応性は症例によってまちまちである（非特許文献１）。特に末梢神経障害を合併する重症例では、強力な治療が必要となり入院加療を行う場合もある（非特許文献２）。よって、皮膚型結節性多発動脈炎の診断、特に、皮膚型結節性多発動脈炎の重症度について正確に診断できることが望ましい。

　しかし、皮膚型結節性多発動脈炎には特異的な血清診断マーカーがなく、その診断は皮膚生検に頼らざるを得なない。しかし生検した箇所によっては十分な所見が得られず、繰り返し皮膚生検を行う必要に迫られることもあり、患者と医療者の双方に非常に大きな負担であった。皮膚型結節性多発動脈炎を適切に診断するためのマーカーが希求されていた。

Ｋ．Ｍ．Ｍａｔｓｕｄａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｖｏｌ．４８，ｎｏ．７，ｐｐ．１０２１−１０２６，２０２１ Ｔ．Ｋａｗａｋａｍｉ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｖｏｌ．４０，ｎｏ．１２，ｐｐ．９５５−９６１，２０１３ Ｅ．Ｆｕｋｕｄａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ　Ｃｅｌｌｓ．，ｖｏｌ．２６，ｎｏ．３，ｐｐ．１８０−１８９，２０２１ Ｃ．Ｍｕｋｈｔｙａｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｎｎ　Ｒｈｅｕｍ　Ｄｉｓ．，ｖｏｌ．６８，ｎｏ．３，ｐｐ．３１０−３１７，２００９ Ｅ．Ｖ．Ｑｕａｄｒｏｓ　ｅｔ　ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．，ｖｏｌ．１１３，ｎｏ．１，，ｐｐ．１８６−１９２，２００９

　本発明者らは、上記問題解決のため鋭意研究に努めた結果、一部の皮膚型結節性多発動脈炎の患者において、ＣＤ３２０（「トランスコバラミン受容体」と呼称される場合もある）に対する自己抗体が検出されること、かつ、ＣＤ３２０に対する自己抗体が検出される皮膚型結節性多発動脈炎の患者は、皮膚型結節性多発動脈炎が軽症（低重症度）であること、または、末梢神経障害を有しないことを発見し、抗ＣＤ３２０抗体が、皮膚型結節性多発動脈炎の低重症度の指標になりうると考えて本発明を想到した。

　本発明においてさらに、低重症度の皮膚型結節性多発動脈炎に対し、ＣＤ３２０のリガンドを投与することにより、皮膚型結節性多発動脈炎の症状が抑制されることを発見し、皮膚型結節性多発動脈炎を処置するための医薬組成物を想到した。

　限定されるわけではないが、本発明は、以下の態様を含む。
［態様１］
　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用マーカーであって、
　抗ＣＤ３２０抗体を含む、前記診断用マーカー。
［態様２］
　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である、態様１に記載のマーカー。
［態様３］
　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を接触させ、そして、
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する、と判断する、
ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのマーカーとして抗ＣＤ３２０抗体を使用する方法。
［態様４］
　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用組成物であって、
　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む、前記診断用組成物。
［態様５］
　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である、態様４に記載の診断用組成物。
［態様６］
　前記抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質が、ＣＤ３２０または可溶型ＣＤ３２０である、態様４または５に記載の診断用組成物。
［態様７］
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群に属すると識別される、態様４−６のいずれか１項に記載の診断用組成物。
［態様８］
　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのキットであって、
　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む、前記キット。
［態様９］
　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である、態様８に記載のキット。
［態様１０］
　前記抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質が、ＣＤ３２０または可溶型ＣＤ３２０である、態様８または９に記載のキット。
［態様１１］
　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む組成物を接触させ、そして、
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する、と判断する、
ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための方法。
［態様１２］
　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが、６以下の場合である、態様１１に記載の方法。
［態様１３］
　前記抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質が、ＣＤ３２０または可溶型ＣＤ３２０である、態様１１または１２に記載の方法。
［態様１４］
　前記生体試料が、血清または血漿である、態様１１−１３のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５］
　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別して処置するための医薬組成物であって、
　ＣＤ３２０リガンドを含む、前記医薬組成物。
［態様１６］
　前記ＣＤ３２０リガンドが、ビタミンＢ１２である、態様１５の医薬組成物。
［態様１７］
　前記ビタミンＢ１２が、メチルコバラミン、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミンまたはアデノシルコバラミンである、態様１６に記載の医薬組成物。

　本発明は、従来不可能であった皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち特定の群の識別を可能にする、診断用マーカー、診断用組成物、キットまたは方法等を提供する。本発明により、採血という比較的軽微な侵襲だけで、軽度の皮膚型結節性多発動脈炎患者の群の識別のための検査が可能となる。抗ＣＤ３２０抗体陽性群というこれまで知られていなかった患者集団を同定することにより、皮膚動脈炎の重症度予測が可能となり、適切な治療選択と治療関連有害事象の低減に資することが可能である。

図１は、皮膚動脈炎患者に特徴的な自己抗体を検出する方法の一態様の概略図である。ＳＴＥＰ１：全プロテオミクススケールヒトタンパク質合成；ＳＴＥＰ２：プールした患者血清由来の包括的抗体スクリーニング；ＳＴＥＰ３：個々の患者の由来の血清を用いた抗体濃度測定。 図２は、皮膚動脈炎（ＣＡ）患者群（２８名）、ＩｇＡ血管炎患者群（５名）、ＡＮＣＡ関連血管炎患者群（３１名）、対照群（健常者）群（２０名）の各群における抗ＣＤ３２０抗体の血清中濃度を示す。 図３は、ヒト血清中の抗ｓＣＤ３２０抗体のイムノブロット法による検出の具体的な工程および結果を示す。具体的な工程は図３の左側に説明した通りである。図３の右側は、イムノブロットの結果を示す。図３右のｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌは、ウサギ抗ｓＣＤ３２０抗体の結果を示す。「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０　ＡＢ（＋）ＣＡ」の３レーンは、抗ＣＤ３２０抗体陽性の皮膚動脈炎患者３名から採取した各患者の血清を用いた結果を示す。「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０　ＡＢ（−）ＣＡ」の３レーンは、抗ＣＤ３２０抗体陰性の皮膚動脈炎患者３名から採取した各患者の血清を用いた結果を示す。 図４は、抗ＣＤ３２０抗体の有無（イムノブロット法）、末梢神経障害の有無等を調べ、ＣＡ患者の臨床像と抗ＣＤ３２０抗体の有無の関連を明らかにしてまとめたものである。ＢＶＡＳ、末梢神経傷害の有無については、実施例２に詳述した。潰瘍の有無については、皮膚科医による視診によって調べた。図４において、Ｐ値連続変数については、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ’ｓ　ｒａｎｋ−ｓｕｍ　ｔｅｓｔ、非連続変数については、Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ　ｅｘａｃｔ　ｔｅｓｔで算出した。ＷＢＣ：血液中の白血球数；ＣＲＰ：血清中のＣ反応性タンパク質濃度；ＥＳＲ：赤血球沈降速度 図５は、ヒト皮膚におけるＣＤ３２０の発現を免疫組織化学法により染色した顕微鏡写真である（倍率×２００）。左から順に皮下組織（病変部）、皮下組織（非病変部）、真皮である。上段のａｎｔｉ−ＣＤ３２０は、ウサギ抗ｓＣＤ３２０抗体の結果を、下段のＩｓｏｔｙｐｅ　ｃｏｎｔｒｏｌは、コントロールＩｇＧの結果を示す。 図６は、ヒト皮膚におけるＣＤ３２０およびＣＤ３１の発現の蛍光免疫染色した顕微鏡写真図である。倍率×２００、Ｈ＆Ｅ：ヘマトキシリン・エオジン染色；ＣＤ３１：ＣＤ３１のみ染色；ＣＤ３２０：ＣＤ３２０のみ染色；ＤＡＰＩ：ＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェァニルインドール）で細胞核を染色；Ｍｅｒｇｅ：ＣＤ３２０とＣＤ３１とＤＡＰＩの結果を重ね合わせた図。 図７は、抗ＣＤ３２０抗体をマウスへの単回投与した結果を示したものである。図７の「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」はマウス抗ＣＤ３２０抗体を投与した側の、「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」はコントロールＩｇＧを投与した側の結果を示す。図７の左図は、Ｅｖａｎｓ　ｂｌｕｅおよび抗体を投与した後、マウスを腹臥位にして撮影した写真である。図７の中図は、倍率×１００の、右図は、倍率×２００の顕微鏡写真図である。 図８は、抗ＣＤ３２０抗体をマウスへの単回投与した場合の、皮膚重量、真皮および皮下組織の厚さ、採取した皮膚片から溶出したエバンスブルーの濃度（染色濃度）を示したものである。図９の「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」はマウス抗ＣＤ３２０抗体を、「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」はコントロールＩｇＧを投与した個体の結果を示す。「ＭｅｔＣｂｌ−」はメチルコバラミンを投与しなかった場合、「ＭｅｔＣｂｌ＋」はメチルコバラミンを投与した場合の結果を示す。ＮＳ　Ｐ＞０．０５、Ｐ＜０．０５　Ｗｉｌｃｏｘｏｎ’ｓ　ｓｉｇｎｅｄ　ｒａｎｋ　ｔｅｓｔによる。 図９は、抗ＣＤ３２０抗体をマウスへの単回投与した場合の、各炎症性サイトカイン、接着因子の遺伝子の発現量（内在コントロールＧａｐｄｈの発現量に対する比）を調べたものである。「ＭｅｔＣｂｌ−」はメチルコバラミンを投与しなかった場合、「ＭｅｔＣｂｌ＋」はメチルコバラミンを投与した場合の結果を示す。ＮＳ　Ｐ＞０．０５、Ｐ＜０．０５　Ｗｉｌｃｏｘｏｎ’ｓ　ｓｉｇｎｅｄ　ｒａｎｋ　ｔｅｓｔによる。 図１０は、ヒト血管内皮細胞の培養細胞におけるＣＤ３２０の細胞表面発現をフローサイトメトリーにより評価したものである。「Ｃｔｒｌ」はフルオレセイン結合コントロールＩｇＧにより標識を行った検体、「ＭｅｔＣｂｌ−」はフルオレセイン結合抗ＣＤ３２０抗体により標識を行った検体、「ＭｅｔＣｂｌ＋」はメチルコバラミン投与後にフルオレセイン結合抗ＣＤ３２０抗体により標識を行った検体の結果を示す。図１０の左図は、代表的な検体におけるフルオレセイン蛍光強度のヒストグラムである。図１０の右図は、各検体において観測されたフルオレセイン平均蛍光強度の平均値と標準誤差を表したものである。ＮＳ　Ｐ＞０．０５、Ｐ＜０．０５　Ｗｉｌｃｏｘｏｎ’ｓ　ｒａｎｋ−ｓｕｍ　ｔｅｓｔによる。 図１１は、抗ＣＤ３２０抗体をマウスへの複数回投与した結果を示したものである。「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」はマウス抗ＣＤ３２０抗体を、「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」はコントロールＩｇＧ（特定の抗原とは反応しない抗体）を投与した個体の写真である。 図１２は、抗ＣＤ３２０抗体をマウスへの複数回投与した場合の、各炎症性サイトカイン、接着因子の遺伝子の発現量（内在コントロールＧａｐｄｈの発現量に対する比）を調べたものである。「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」はマウス抗ＣＤ３２０抗体を、「Ｃｔｒｌ」はコントロールＩｇＧを投与した個体の結果を示す。 図１３は、抗ＣＤ３２０抗体をヒト血管内皮細胞の培養細胞へ添加した場合の、各細胞間接着因子、凝固活性因子、炎症性サイトカインの発現量（内在コントロールＧａｐｄｈの発現量に対する比）を調べたものである。「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」はマウス抗ＣＤ３２０抗体を、「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」はコントロールＩｇＧを投与した個体の結果を示す。ＮＳ　Ｐ＞０．０５、Ｐ＜０．０５　Ｗｉｌｃｏｘｏｎ’ｓ　ｒａｎｋ−ｓｕｍ　ｔｅｓｔによる。

　非限定的に本発明は、以下の態様を含む。本明細書において他に断りがない限り、本明細書で使用される技術および科学用語は、当業者が通常理解している意味と同じ意味を有する。本明細書に開示された物質、材料および例は単なる例示であり、制限することを意図していない。本明細書において「一態様において」と言及する場合は、その態様に限定されない、即ち、非限定的であることを意味する。

　１．診断用マーカー
　一態様において、本発明は診断用マーカーに関する。
　前記診断用マーカーは、
　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用マーカーであって、
　抗ＣＤ３２０抗体を含む。

　「結節性多発動脈炎」は、全身に分布する血管のうち、小動脈や中動脈（筋壁を有する動脈のうち各臓器に向かうものやその分枝レベルのもの）を主体として、血管壁に炎症や壊死を生じる疾患である。「結節性多発動脈炎」は、発熱、腎臓障害、筋肉痛などの種々の症状を呈し、２５~６０％程度において、皮下結節、リベド症状、潰瘍、壊疽などの皮膚症状を伴う。多くの症例では原因が不明で、効果的な治療方法は未確立である。また、特異性の高い診断マーカーは存在していない。

　「皮膚型結節性多発動脈炎」は、「結節性多発動脈炎」の皮膚に限局したものと捉えられてきた。しかしながら、Ｃｈａｐｅｌ　Ｈｉｌｌ　Ｃｒｉｔｅｒｉａ　２０１２以降は、「皮膚動脈炎」と呼称されるようになっており、結節性多発動脈炎の部分症状に限定されるのか、あるいは、独立した疾患なのかは、明確に区別されていない。本明細書において、「皮膚型結節性多発動脈炎」は広義の血管炎を意味し、特に明記しない限りは、皮膚に現況された「結節性多発動脈炎」も、独立した疾患としての狭義の「皮膚動脈炎」も含む意味で使用する。また、本明細書中において「皮膚動脈炎」、「ＣＡ」と呼称した場合は、特に明記しない限り、前記マーカーの診断の対象である「皮膚型結節性多発動脈炎」と同義で使用している。

　末梢神経とは、中枢神経（脳と脊髄）以外の神経を指す。身体中の至るところに張り巡らされており、筋肉を動かす、感覚を受容する、などの役割を担っている。「末梢神経障害」は、末梢神経の障害により、手足の動かしづらさ、自律神経障害などを起こす状態の総称である。運動神経に障害が起こると手足の動かしづらさが生じうる。感覚神経に障害が起こるとしびれが起きたり感覚が鈍くなったりしうる。自律神経が障害されると、排尿障害や排便障害などが生じうる。

　一態様において、前記マーカーによって診断される「皮膚型結節性多発動脈炎」は、末梢神経障害を有しない。末梢神経障害の有無は公知の方法によって確認することは可能である。例えば、神経内科医による神経学的診察、あるいは、神経伝導速度検査によって、判断されうる。

　一態様において、前記マーカーによって診断される「皮膚型結節性多発動脈炎」は低重症度である。非限定的に、「低重症度である」とは、「皮膚型結節性多発動脈炎」患者の重症度を順に並べた場合、重症度が軽い方から１／２の範囲、好ましくは軽い方から１／３の範囲、軽い方から１／５の範囲に含まれることを意味する。

　一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコア（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ　Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｓｃｏｒｅ：ＢＶＡＳ）が６以下の場合である。一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが５以下の場合である。

　「バーミンガム血管炎活動スコア」とは、以下の表１に記載の血管炎による９系統の臓器の様々な症状について、それぞれ点数を振ったものである。合計スコアが高い状態ほど血管炎の活動性が高く、予後も悪いとされている。全ての症状が消失した場合のスコアは０となる。例えば、Ｍｕｋｈｔｙａｒ　Ｃ　ｅｔ　ａｌ．　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ　Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｓｃｏｒｅ　（ｖｅｒｓｉｏｎ　３）．　Ａｎｎ　Ｒｈｅｕｍ　Ｄｉｓ．　２００９　６８（１２）：１８２７−３２（非特許文献４）に詳細が記載されている。

　バーミンガム血管炎活動スコアでは、９．神経病変の末梢神経障害に６点が与えられている。バーミンガム血管炎活動スコアが６以下であることは、末梢神経障害を有しないこととも整合性がとれている。
　前記診断用マーカーによって識別されるのは、皮膚型結節性多発動脈炎のうち、
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
のいずれかを具備する群である。

　本発明者らは、一部の皮膚型結節性多発動脈炎の患者において、ＣＤ３２０に対する自己抗体が検出されること、かつ、ＣＤ３２０に対する自己抗体が検出される皮膚型結節性多発動脈炎の患者は、膚型結節性多発動脈炎が軽症（低重症度）であること、または、末梢神経障害を有しないことを発見し、抗ＣＤ３２０抗体が、皮膚型結節性多発動脈炎の低重症度の指標になりうると考えて本発明を想到した。

　よって、前記診断用マーカーは、抗ＣＤ３２０抗体を含む。ＣＤ３２０は、ＬＤＬ受容体ファミリーに属する膜タンパク質であり、トランスコバラミン−コバラミン複合体を細胞内に取り込む機能を有する。ＣＤ３２０には、細胞外ドメインだけからなる可溶体ＣＤ３２０（ｓＣＤ３２０）が存在することが知られている（非特許文献５　Ｅ．Ｖ．Ｑｕａｄｒｏｓ　ｅｔ　ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．，ｖｏｌ．１１３，ｎｏ．１，，ｐｐ．１８６−１９２，２００９）。非特許文献５に記載されている可溶体ＣＤ３２０は、ヒトＣＤ３２０のアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸Ｓｅｒ^３６−Ｔｙｒ^２２９からなるものである。

　抗ＣＤ３２０抗体は、ＣＤ３２０の全部または一部を認識できる抗体であれば特に限定されない。モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であってもよい。

　前記診断用マーカーは、
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別する。一態様において、好ましくは、「（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である」群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別する。

　本発明は、一態様において、
　抗ＣＤ３２０抗体の、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用マーカーとしての使用を含む。

　本発明は一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用マーカーとして使用される、抗ＣＤ３２０抗体に関する。

　本発明は、皮膚型結節性多発動脈炎の一定の群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのマーカーとして抗ＣＤ３２０抗体を使用する方法に関する。一態様において、本発明は、
　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を接触させ、そして、
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する、と判断する、
ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのマーカーとして抗ＣＤ３２０抗体を使用する方法、に関する。

　皮膚型結節性多発動脈炎の一定の群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するため方法、各用語については、別の項で詳述する。

　２．診断用組成物
　一態様において、本発明は診断用組成物に関する。
　前記診断用組成物は、
　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用組成物であって、
　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む。
　「皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別する」の各用語については、「１．診断用マーカー」において説明した通りである。

　一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である。一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが５以下の場合である。「バーミンガム血管炎活動スコア」については、「１．診断用マーカー」において説明した通りである。

　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質は、抗ＣＤ３２０抗体を直接的または間接的に同定することが可能な物質であれば、特に限定されない。一態様において、抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質とは、抗ＣＤ３２０抗体に直接的または間接的に結合可能な物質である。一態様において、抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質は、ＣＤ３２０または可溶型ＣＤ３２０である。可溶型ＣＤ３２０は、抗ＣＤ３２０抗体によって結合可能な、ＣＤ３２０の可溶型の部分である。例えば、ヒトＣＤ３２０のアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸Ｌｅｕ^３１−Ｔｙｒ^２２９を含む部分、より好ましくは、アミノ酸Ｓｅｒ^３６−Ｔｙｒ^２２９を含む部分を意味する。

　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群に属すると識別される。

　非限定的に、生体試料は、血清または血漿である。

　非限定的に、生体試料における抗ＣＤ３２０抗体の有無（同定）を決定する方法は、公知の方法を用いることができ、特に限定されない。非限定的に、ＥＬＩＳＡやプロテインアレイなどを用いることができる。生体試料への抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質の接触は、好ましくは、インビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で、または、エクスビボで行う。

　前記診断用組成物は、非限定的に、抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質の他に、ブロキング剤（例えば、スキムミルク、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等）を含んでもよい。

　本発明は、一態様において、
　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質の、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用組成物としての使用を含む。

　本発明は一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用組成物として使用される、抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質に関する。

　本発明は、皮膚型結節性多発動脈炎の一定の群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用組成物として抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を使用する方法に関する。

　一態様において、本発明は、
　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む組成物を接触させ、そして、
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する、と判断する、
ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用組成物として、抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を使用する方法、に関する。

　３．キット
　一態様において、本発明はキットに関する。
　前記キットは、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのキットであって、
　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む。

　「皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別する」
の各用語については、「１．診断用マーカー」において説明した通りである。

　一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である。一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが５以下の場合である。「バーミンガム血管炎活動スコア」については、「１．診断用マーカー」において説明した通りである。

　「抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質」は、「２．診断用組成物」に説明した通りである。

　前記キットは、非限定的に、抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質および／またはその他の成分を装填する容器、ブロキング剤（例えば、スキムミルク、ＢＳＡ等）、抗ＣＤ３２０抗体を含む陽性コントロール、あるいは、抗ＣＤ３２０抗体を含まない陰性コントロール等を含んでもよい。

　本発明は、一態様において、
　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質の、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのキットとしての使用を含む。

　本発明は一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのキットとして使用される、抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質に関する。

　本発明は、皮膚型結節性多発動脈炎の一定の群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのキットとして抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を使用する方法に関する。

　一態様において、前記方法は、
　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含むキットを接触させ、そして、
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する、と判断する、
ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのキットとして抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を使用する方法、に関する。

　４．識別方法および診断方法
　一態様において、本発明は、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち一定の群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための方法に関する。

　一態様において、本発明は、
　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む組成物を接触させ、そして、
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する、と判断する、
ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための方法、に関する。

　一態様において、本発明は、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち一定の群を診断する方法に関する。

　一態様において、本発明は、
　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む組成物を接触させ、そして、
　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する、と判断する、
ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別して、診断する方法に関する。

　「皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別する」
の各用語については、「１．診断用マーカー」において説明した通りである。

　一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である。一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが５以下の場合である。「バーミンガム血管炎活動スコア」については、「１．診断用マーカー」において説明した通りである。

　「抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質」は、「２．診断用組成物」に説明した通りである。

　非限定的に、生体試料は、血清または血漿である。

　非限定的に、生体試料における抗ＣＤ３２０抗体の有無（同定）を決定する方法は、特に限定されない。生体試料への抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を接触は、好ましくは、インビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で、または、エクスビボで行う。

　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち一定の群を識別するための方法は、医療従事者（医師等）のみならず、例えば、検査会社、研究機関などにおいて非医療従事者によって行うことも可能である。一態様において、前記識別方法は、非医療従事者によって行われる。前記識別方法は、非医療従事者によって行われた場合も、例えば、その結果を医療従事者に知らせることにより、医療従事者の診断、処置における判断の一助となりうる。

　５．医薬組成物
　本明細書の実施例において、マウス個体やヒト培養細胞を用いた検討で、ビタミンＢ１２が抗ＣＤ３２０抗体の病原性を抑制することが示された。

　ＣＤ３２０は、ＬＤＬ受容体ファミリーに属する膜タンパク質であり、ビタミンＢ１２を細胞内に取り込むための受容体として機能する。本明細書の実施例６において、例えば、血管内皮細胞の表面においてビタミンＢ１２がＣＤ３２０と結合すると、ビタミンＢ１２とＣＤ３２０の複合体が細胞内に取り込まれ、血管内皮細胞におけるＣＤ３２０の細胞表面発現が減弱することが明らかにされた。ＣＤ３２０のリガンドであるビタミン１２により、細胞表面のＣＤ３２０が減り、抗ＣＤ３２０抗体によって認識されなくなる。このことは、ビタミンＢ１２は、ＣＤ３２０の細胞内取り込みを誘導し、間接的にも抗ＣＤ３２０抗体とＣＤ３２０の結合を阻害しうることを意味する。ＣＤ３２０のリガンドであるビタミンＢ１２は、抗ＣＤ３２０抗体の直接的または間接的な阻害剤として機能しうる。

　よって、ビタミンＢ１２を含む、ＣＤ３２０リガンドは、軽度の皮膚型結節性多発動脈炎患者を処置するための、医薬組成物として有効である。

　一態様において、本発明は、医薬組成物に関する。

　前記医薬組成物は、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別して処置するための医薬組成物であって、
　ＣＤ３２０リガンドを含む。

　本明細書の実施例において、健常なマウス個体に抗ＣＤ３２０抗体を投与することにより、皮下組織における浮腫の発生、動脈周囲への好中球の浸潤、ならびに、各種の炎症性サイトカインおよび接着分子の発現、という皮膚型結節性多発動脈炎、特に軽度の皮膚型結節性多発動脈炎、と同様の症状が生じた。当該マウス個体に、ビタミンＢ１２の一種であるメチルコバラミンを投与することにより、皮膚型結節性多発動脈炎は明らかに抑制された。

　「ＣＤ３２０リガンド」は、ＣＤ３２０に結合し、好ましくは抗ＣＤ３２０抗体に競合しうるものであれば特に限定されない。非限定的に、抗ＣＤ３２０抗体の競合阻害剤は、ビタミンＢ１２、及び可溶性ＣＤ３２０からなる群から選択される。非限定的に、ＣＤ３２０リガンドは、ビタミンＢ１２である。

　一態様において、ビタミンＢ１２が、メチルコバラミン、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミンまたはアデノシルコバラミンである。

　本明細書におけるビタミンＢ１２は、「コバラミン」とも総称される、共通する骨格構造を有する一群の生理活性物質である。シアノコバラミンは、ヒドロキソコバラミンとともに、ビタミンＢ１２の代表的な例であり、水溶性ビタミンに分類される。アミノ酸や脂肪酸の代謝等に用いられるが、これ自体に補酵素活性はなく、生体内で補酵素型であるメチルコバラミンまたはアデノシルコバラミンに変換される。メチルコバラミンは、ビタミンＢ１２の一形態であり、シアニドがメチル基に置換されている点において、シアノコバラミンと相違する。末梢神経障害、糖尿病神経障害等の初期治療に用いられている。

　ヒドロキソコバラミンは、ビタミンＢ１２の天然の形で、他のビタミンＢ１２と同様に鮮やかな赤色を呈する。ヒドロキソコバラミンは、人体では見つかっていないが、人体内で容易に有用なビタミンＢ１２補酵素に変換されうる。アデノシルコバラミンは、コバマミド、ジベンコザイドとも呼称されており、活性型ビタミンＢ１２の一種である。

　一態様において、ビタミンＢ１２はメチルコバラミンである。

　本明細書において、医薬組成物の投与形態は特に限定されず、経口的投与でも非経口的投与でもよい。非経口投与としては、例えば、筋肉内注射、静脈内注射、皮下注射等の注射投与、経皮投与、経粘膜投与（経鼻、経口腔、経眼、経肺、経膣、経直腸）等が挙げられる。一態様において、前記医薬組成物の投与は、皮下注射によって行われる。

　前記医薬組成物は、有効成分をそのまま用いてもよいし、薬学的に許容できる担体、賦形剤、添加剤等を加えて製剤化してもよい。剤形としては、例えば、液剤（例えば注射剤）、分散剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末剤、坐剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤等が挙げられる。製剤化は、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、溶解補助剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜使用し、常法により行うことができる。

　製剤化に用いられる成分の例としては、精製水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等薬学的に許容される有機溶剤、動植物油、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ソルビトール、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、コーンスターチ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、トラガント、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、高級アルコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、等が挙げられるがこれらに限定されない。

　前記医薬組成物が丸剤または錠剤の場合、糖衣、胃溶性、腸溶性物質で被覆してもよい。

　前記医薬組成物が注射剤の場合、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、アルコール類等を含んでもよい。さらに、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解剤、溶解補助剤、防腐剤等を加えもよい。

　また、前記医薬組成物は、ヒトだけではなく、非ヒト哺乳動物または鳥類を対象としていてもよい。非ヒト哺乳動物の例は、ヒト以外の霊長類（サル、チンパンジー、ゴリラ等）、家畜動物（ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジなど）、あるいは、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモット、ウサギ等が含まれる。

　特にヒトに投与する場合の投与量は、症状、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与間隔、有効成分の種類、製剤の種類によって異なる。非限定的に、例えば、１日１００μｇ~５００００μｇを１回または複数回（例えば２回~６回）に分けて投与することができる。非限定的に、例えば、１日１５００μｇを３回に分けて投与することができる。注射投与の場合、１日１回５００μｇを週３回、筋肉内または静脈内に投与できる。

　本発明は、一態様において、ＣＤ３２０リガンドの、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別して処置するための医薬組成物としての使用を含む。

　本発明は、一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別して処置するための医薬組成物として使用される、ＣＤ３２０リガンドに関する。
　本発明はまた、一態様において、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群に、ＣＤ３２０リガンドを投与することを含む、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を処置する方法に関する。

　本発明の処置方法は、ＣＤ３２０リガンドを投与する前に、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別する、工程を含んでも良い。

　以下、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。当業者は本明細書の記載に基づいて容易に本発明に修飾・変更を加えることができ、それらは本発明の技術的範囲に含まれる。

　実施例１　皮膚動脈炎患者に特徴的な自己抗体の検出
　本実施例では、皮膚動脈炎患者の血清中の自己抗体を検出した。具体的には、非特許文献３に記載のプロテインアレイ（ｈｕｍａｎ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｗｅｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｒｒａｙ；ＣＷＰＡ）の手法を参考とし、図１に概略を示したＳＴＥＰ−１~ＳＴＥＰ３の工程にそって、抗体を検出した。ＣＷＰＡは、ヒトのタンパク質を網羅的かつ生理的状態に近い形で合成し、アレイ用基板に搭載して解析を可能したものである。

　まず１２，９４６種のヒトタンパク質を小麦胚芽無細胞発現系で発現させた（ＳＴＥＰ１）。発現した各ヒトタンパク質のＮ末端に付加したＧＳＴ−ｔａｇと、アレイ用基板に修飾したグルタチオンの親和性を利用し、ヒトタンパク質を基板表面に結合したＣＷＰＡを作製した（ＳＴＥＰ１）。

　続いて皮膚動脈炎患者血清を７名分ずつ混合したプール血清を２グループ調製した。それぞれ抗体希釈液を用いて希釈しＣＷＰＡに添加して、室温で１時間反応させた。反応後の液を捨てＣＷＰＡを洗浄した後に、抗体希釈液で希釈した二次抗体（Ｇｏａｔ　ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ　ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）　Ａｌｅｘａ　Ｆｌｏｕｒ（登録商標）６４７　ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，＃Ａ−２１４４５）をＣＷＰＡに添加し、室温で１時間反応させた（ＳＴＥＰ２）。反応後の液を捨てＣＷＰＡを洗浄し風乾させた後、蛍光イメージャで蛍光画像を取得した。蛍光画像から、二次抗体が結合したタンパク質を解析し、血清中に含まれる抗体の抗原を同定した（ＳＴＥＰ２）。

　ＣＷＰＡを用いた実験で、患者血清中で見られる自己抗体の抗原群が絞り込まれたので、それらの抗原をのせたフォーカスプロテインアレイを調製した（ＳＴＥＰ３）。皮膚動脈炎（ＣＡ）患者２８名に加え、類縁疾患としてＩｇＡ血管炎患者５名、ＡＮＣＡ関連血管炎患者３１名、対照群（健常者）２０名の血清を抗体希釈液で希釈し、それぞれ個別にフォーカスアレイに添加した（ＳＴＥＰ３）。ＩｇＡ血管炎は、触れることのできる皮膚の紫斑が観察され、関節炎や腹痛・下血などの消化管症状、腎障害などを合併することがある漸新世の小型血管炎である。ＩｇＡ血管炎は免疫複合体血管炎に分類され、ＩｇＡ抗体を含む免疫複合体が小血管に沈着することにより炎症が生じる。ＡＮＣＡ関連血管炎は、自己抗体が原因で全身の血管（細小動脈、毛細血管）に炎症を生じる症候群である。ＩｇＡ血管炎、ＡＮＣＡ関連血管炎のいずれも、ＣＡの類縁疾患ではあるが、区別して診断されるべき異なる疾患である。

　室温で１時間反応後に液を捨て、洗浄後に抗体希釈液で希釈した二次抗体（Ｇｏａｔ　ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ　ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）　Ａｌｅｘａ　Ｆｌｏｕｒ（登録商標）６４７　ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，＃Ａ−２１４４５）をフォーカスアレイに添加、室温で１時間反応させた。反応後の液を捨てフォーカスアレイを洗浄し風乾させた後、蛍光イメージャで蛍光画像を取得した。蛍光画像から、二次抗体が結合したタンパク質を解析し、血清中に含まれる抗体の抗原を同定した（ＳＴＥＰ３）。

　その結果、皮膚動脈炎患者で特異的に陽性となる自己抗体の抗原の１つとしてＣＤ３２０が同定された（図２）。閾値は、対照群の平均（Ｍｅａｎ）に対照群の標準偏差（ＳＤ）を３倍した値を足した値、すなわちＭｅａｎ＋３ＳＤと設定した。図２に示されるように、ＣＤ患者のうち一部の患者の血清中にＣＤ３２０に対する自己抗体が検出された。非限定的にＣＤ患者の血清中の抗ＣＤ３２０抗体は、ポリクローナル抗体である可能性が高いと推定される。

　実施例２　ヒト血清中の抗ｓＣＤ３２０抗体のイムノブロット法による検出
　ヒト血清中の抗ｓＣＤ３２０抗体をイムノブロット法により検出した。

　まずｓＣＤ３２０組換えタンパク質（Ａｖｉｓｃｅｒａ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎｔａ　Ｃｌａｒａ，ＣＡ，ＵＳＡ，＃Ｓ００２０９−０１−１００）１μｇ／５μＬを６ｘＳＤＳ−ＰＡＧＥ　Ｓａｍｐｌｅ　Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｏｋｙｏ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ，＃Ｂ６１０５）１．４μＬおよびβメルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＺ　ＵＳＡ，＃５１６７３２）０．６μＬと混和し、ＮｕＰＡＧＥ　４−１２％，Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、１．０−１．５ｍｍ、Ｍｉｎｉ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇｅｌｓ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ　Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ，ＮＰ０３２１Ｂｏｘ）にロードして電気泳動による分離を行った。本実施例で使用したｓＣＤ３２０組換えタンパク質は、ＣＤ３２０細胞外領域に相当する４０−５０ｋＤａの組換えタンパク質である。

　Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ　ｍｅｍｂｒａｎｅ，ＰＶＤＦ，０．４５μｍ（Ｍｅｒｃｋ　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ，＃ＩＰＶＨ０００１０）に転写後、５％スキムミルク（Ｗａｋｏ　Ｐｕｒｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ，＃１９０−１２８６５）と１％仔牛血清アルブミン（Ｉｗａｉ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ，＃Ａ００１）を含むＴｗｅｅｎ−２０を含むトリス緩衝生理食塩水（Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ，ＵＳＡ，＃９９９７Ｓ）でブロッキングを行い、２５０倍希釈した患者血清もしくは１０００倍希釈したウサギ抗ｓＣＤ３２０抗体（Ａｖｉｓｃｅｒａ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，＃Ａ００２０９−０１−１００）と４℃で終夜反応させた。続いて１００倍希釈したホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｃａｐｐｅｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ，　Ｃｏｃｈｒａｎｖｉｌｌｅ，ＰＡ，ＵＳＡ，＃５５２２６）もしくは２０００倍希釈したＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，＃７０７４Ｓ）と室温で１時間反応させた。Ｃｈｅｍｉ−Ｌｕｍｉ　Ｏｎｅ　Ｕｌｔｒａ（Ｎａｃａｌａｉ　Ｔｅｓｑｕｅ，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ，＃１１６４４）を用いて、シグナルを検出した。

　結果を図３に示す。図３より、皮膚動脈炎（ＣＡ）患者中の血清中の抗ＣＤ３２０抗体は、ｓＣＤ３２０、即ち、ＣＤ３２０の細胞外領域を認識することが明らかになった。

　２６名の皮膚動脈炎（ＣＡ）患者の血清について、抗ＣＤ３２０抗体の有無（イムノブロット法）、末梢神経障害の有無等を調べ、ＣＡ患者の臨床像と抗ＣＤ３２０抗体の有無の関連を明らかにした。結果をまとめたものを図４に示す。２６名のＣＡ患者のうち、抗ＣＤ３２０抗体の陽性が７名、陰性が１９名であった。Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌと同じ分子量の位置にバンドが検出された場合に陽性、検出されなかった場合に陰性である、と判断した。その結果、抗ＣＤ３２０抗体陽性のＣＡ患者はバーミンガム血管炎活動スコア（ＢＶＡＳ）の平均値が４．１に対し、抗ＣＤ３２０抗体陰性のＣＡ患者はＢＶＡＳの平均値が８．６であり、抗ＣＤ３２０抗体陽性のＣＡ患者は、陰性のＣＡ患者と比較して、ＢＶＡＳが低いことが明らかとなった。

　また、全ての患者について神経学的診察もしくは神経伝導速度検査により末梢神経障害の有無を調べた。抗ＣＤ３２０抗体陽性のＣＡ患者７名はいずれも末梢神経障害を有しなかったのに対し、陰性のＣＡ患者は１９名中１０名が末梢神経障害を有した。ＷＢＣ、ＥＳＲについては、抗ＣＤ３２０抗体の陽性と陰性で差異はなかった。　ＢＶＡＳが低いこと、末梢神経障害を有しないことは患者の皮膚動脈炎が軽症であることを意味する。本実施例の結果は、ＣＡ患者血清中の抗ＣＤ３２０抗体の有無が、患者のＣＡ重症度と関連していること、抗ＣＤ３２０抗体陽性はＣＡが軽症であることを裏付けるものである。

　実施例３　ヒト皮膚におけるＣＤ３２０の発現の免疫組織化学法による評価
　本実施例では、ヒト皮膚におけるＣＤ３２０の発現を免疫組織化学法により評価した。

　ＣＡ患者皮膚検体として、皮下組織（病変部）、皮下組織（非病変部）および真皮を用いた。ホルマリン固定・パラフィン包埋された、ＣＡ患者皮膚検体を薄切してスライドガラス上に置き、脱パラフィン処理を行った。その後、Ａｎｔｉｇｅｎ　Ｕｎｍａｓｋｉｎｇ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇｄｙｎｉａ，Ｐｏｌａｎｄ，＃Ｈ−３３００）で９５℃１０分間の抗原賦活化を行った。

　２０倍希釈ヤギ血清でブロッキング後、２００倍希釈したウサギ抗ｓＣＤ３２０抗体（Ａｖｉｓｃｅｒａ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，　＃Ａ００２０９−０１−１００）もしくはコントロールＩｇＧ（Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（特定の抗原とは反応しない抗体）と４℃で終夜反応させた。

　過酸化水素（Ｗａｋｏ　Ｐｕｒｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ，＃０８６−０７４４５）によるクエンチング処理後、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ　ＡＢＣ　Ｋｉｔ（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，＃ＰＫ−４００１）を用いてシグナルを検出した。マイヤーヘマトキシリンによる核の対比染色を行い、脱水および透徹処置を行った後、標本をマリノール液で封入してから観察を行った。

　結果を図５に示す。図５の顕微鏡写真図で、皮下組織（病変部）、皮下組織（非病変部）の上段が強く染色されていることから、真皮の脈管より皮下組織の小動脈の方がＣＤ３２０を強く発現していることがわかる。皮下組織は、病変部だけでなく非病変部もＣＤ３２０が強く発現していた。

　実施例４　ヒト皮膚におけるＣＤ３２０およびＣＤ３１の発現を蛍光免疫染色法
　本実施例では、ヒト皮膚におけるＣＤ３２０およびＣＤ３１の発現を蛍光免疫染色法により評価した。ＣＤ３１（血小板内皮細胞接着分子−１）は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）に属する細胞表面受容体である。本実施例では、血管内皮のマーカーとして、ＣＤ３２０とともに蛍光免疫染色した。

　ホルマリン固定・パラフィン包埋された患者皮膚検体（皮下組織（病変部））を薄切してスライドガラス上に置いた。脱パラフィン処理を行ったのち、Ａｎｔｉｇｅｎ　Ｕｎｍａｓｋｉｎｇ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ　（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，＃Ｈ−３３００）で９５℃１０分間の抗原賦活化を行った。

　２０倍希釈ヤギ血清でブロッキング後、２００倍希釈したウサギ抗ｓＣＤ３２０抗体（Ａｖｉｓｃｅｒａ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，＃Ａ００２０９−０１−１００）および２０００倍希釈したマウス抗ＣＤ３１抗体（Ａｂｃａｍ，　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ，＃ＡＢ９４９８）と４℃で終夜反応させた。続いて１０００倍希釈したＡｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　５９４標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，　＃Ａ−１１０３７）およびＡｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　４８８標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，　＃Ａ−１１００１）と反応させた。

　最後にＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ　Ｍｏｕｎｔｉｎｇ　Ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ＤＡＰＩ　（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，　＃Ｈ−１２００）で包埋し、Ｂｉｏ　Ｚｅｒｏ　ＢＺ−Ｘ８００　（Ｋｅｙｅｎｃｅ，　Ｏｓａｋａ，　Ｊａｐａｎ）で画像を撮影した。結果を図６に示す。図６のうちＭｅｒｇｅは、ＣＤ３２０とＣＤ３１の蛍光免疫染色の結果を重ね合わせてものである。ＣＤ３２０は血管内皮マーカー（ＣＤ３１）と局在化していることはわかる。

　実施例５　抗ＣＤ３２０抗体のマウスへの単回投与実験
　本実施例では、抗ＣＤ３２０抗体をマウスへの単回投与し、その結果を調べた。

　メスの野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＪａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、６週齢の時点で背部の毛を剃った。マウス抗ＣＤ３２０抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，　＃ＳＡＢ１４０９４０８）もしくはコントロールＩｇＧ（Ｂｉｏ　Ｘ　Ｃｅｌｌ，Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ，ＵＳＡ，＃ＢＥ００８５）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で２ｍｇ／ｍＬに調整したものを３０μＬずつ、２９ゲージ針を用い、マウス単体の左右いずれかの背部皮下に投与した。同時に、ＰＢＳで５００ｍｇ／ｍＬの濃度に調整したエバンスブルー（Ｓｉｇｍａ　Ａｌｄｒｉｃｈ，＃Ｅ２１２９）に３ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解したもの、もしくは溶解しなかったものを２００μＬ静脈内投与した。メチルコバラミンは、ビタミンＢ１２の一形態であり、シアニドがメチル基に置換されている点において、シアノコバラミンと相違する。

　６時間後にマウスを殺処分し、皮下投与部位の皮膚を４ｍｍパンチで採取した。ホルマリン固定・パラフィン包埋後の皮膚検体をヘマトキシリン・エオジン染色もしくはトルイジンブルー染色することにより、組織学的検討を行った。結果を図７及び図８に示す。図７及び図８の「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」はマウス抗ＣＤ３２０抗体を、「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」はコントロールＩｇＧを投与した部位の結果を示す。図７の中図は、倍率×１００の、右図は、倍率×２００の光学顕微鏡写真図である。図７の右図から、抗ＣＤ３２０抗体を投与した場合、動脈周囲の紫色の強い染色が観察されることから、動脈周辺へ好中球浸潤が誘導されていることがわかる。

　図８の「皮膚重量」は、６ｍｍパンチで採取した皮膚片を電子天秤に載せることにより測定し、同じ個体においてコントロールＩｇＧを投与した部位「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」を１．０とした場合の相対重量を示す。「真皮」、「皮下組織」の厚さは、ホルマリン固定・パラフィン包埋後の皮膚検体をヘマトキシリン・エオジン染色した標本を顕微鏡で観察することにより測定し、同じ個体においてコントロールＩｇＧを投与した部位「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」を１．０とした場合の相対的な厚さを示す。図８の「皮膚重量」の結果は、抗ＣＤ３２０抗体投与により、皮膚重量が増加すること（約１．５倍）、そして、「真皮」、「皮下組織」の結果は、抗ＣＤ３２０抗体投与により、皮下組織が分厚くなること（約１．８倍）、即ち、浮腫が生じることを示す。そして、皮膚重量の増加も浮腫も、メチルコバラミンの投与により抑制されることが示された。

　エバンスブルーは青色の色素であり、６２０ｎｍの波長に吸光度のピークを有する。血中ではアルブミンと強く結合する。従って、静脈内投与した個体の皮膚片をホルムアミドに漬けて溶出したエバンスブルーの濃度を、吸光度計を用いて計測することによって、血管透過性を評価することができる。図８の「エバンスブルー」の結果は、抗ＣＤ３２０抗体投与により、血管透過性が亢進すること（約１．９倍）、そして、メチルコバラミンの投与により血管透過性の亢進が起きなくなることを示す。

　図７及び図８の結果は、抗ＣＤ３２０抗体の投与は、マウス皮下組織に浮腫と動脈周囲への好中球浸潤を誘導すること、そして、これらの現象はビタミン１２の一種あるメチルコバラミンの投与により抑制されることを示す。

　組織学的検討とは別に、遺伝子発現量も調べた。具体的には、ＲＮＡ　ｌａｔｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃ＡＭ７０２１）で保存した皮膚検体（皮下組織）からＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，　Ｃｒａｗｌｅｙ，ＵＫ，＃７４１０６）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ｔｏｙｏｂｏ，＃ＦＳＱ−２０１）により逆転写しｃＤＮＡを得た。リアルタイムＰＣＲはＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｒｅａｌｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ｔｏｙｏｂｏ，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ，＃ＱＰＫ−２０１）を用いてＡＢＩ　Ｐｒｉｓｍ　７０００　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）により実施した。遺伝子発現量はＧａｐｄｈを内在コントロールとして△△Ｃ_Ｔ法により評価した。

　図９に結果を示す。
　ＩＬ６：インターロイキン６
　Ｔｎｆａ：腫瘍壊死因子−α
　ＩＬ１ｂ：インターロイキン１β
　Ｉｃａｍ１：細胞間接着因子１
　Ｉｃａｍ２：細胞間接着因子２
　Ｖｃａｍ１：血管細胞接着因子１

　Ｉｌ６、ＴｎｆａおよびＩｌ１ｂは、炎症性サイトカインである。抗ＣＤ３２０抗体の単回投与により、これらの炎症性サイトカイン、および各種接着細胞因子の各遺伝子の発現量はいずれも１．５倍以上に増加した。これらの遺伝子発現量は、メチルコバラミンの投与により抑制された。

　図７−図９は、野生型マウスへの抗ＣＤ３２０抗体の投与により、軽度の皮膚型結節性多発動脈炎、と同様の症状を人為的に生じさせることができること、そして、これらの軽度の皮膚型結節性多発動脈炎の症状は、ビタミン１２の一種であるメチルコバラミンの投与により抑制されることを意味する。

　実施例６　ヒト皮膚血管内皮細胞の培養細胞におけるＣＤ３２０の細胞表面発現に対するメチルコバラミンの効果
　ヒト皮膚血管内皮細胞（ＨＤＢＥＣ）を購入し（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ，＃Ｃ−１２２２５）、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，＃Ｃ−２２１１０）を用いて３７度ＣＯ_２インキュベーター内で培養した。細胞密度が７０−８０％に達してから、２４時間の飢餓処理を行ったのち、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂａｓａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，＃Ｃ−２２２１０）で１００ｎｇ／ｍＬの濃度に調整したメチルコバラミンで６時間刺激した。もしくはメチルコバラミンを含まないＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂａｓａｌ　Ｍｅｄｉｕｍで６時間培養した。

　続いてセルスクレイパーで細胞を剥離し、ＦＡＣＳチューブに移した。ＰＢＳで１回リンスした後、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　Ｋｉｔ−ＮＨ２（Ｄｏｊｉｎｄｏ，Ｋｕｍａｍｏｔｏ，Ｊａｐａｎ，＃３４７−９０９１１）を用いてフルオレセインと結合させたウサギ抗ｓＣＤ３２０抗体（Ａｖｉｓｃｅｒａ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，＃Ａ００２０９−０１−１００）もしくはコントロールＩｇＧ（Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と混和し、室温で３０分間静置した。ＰＢＳで１回リンスした後、ＢＤ　Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（商標）　Ｆｉｘａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ　Ｌａｋｅｓ，Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ，　＃５５４７２２）に細胞を懸濁し、室温で１５分間静置してから、ＦＡＣＳＶｅｒｓｅ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でフルオレセインの蛍光強度を測定した。解析はＫａｌｕｚａ　（Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて行った。

　結果を図１０に示す。メチルコバラミン投与により、ヒト皮膚血管内皮細胞の培養細胞におけるＣＤ３２０の細胞表面発現が減少することが明らかになった。

　実施例７　抗ＣＤ３２０抗体のマウスへの複数回投与実験
　本実施例では、抗ＣＤ３２０抗体をマウスへの複数回投与し、その結果を調べた。

　メスの野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＪａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、６週齢の時点で背部の毛を剃った。マウス抗ＣＤ３２０抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，＃ＳＡＢ１４０９４０８）もしくはコントロールＩｇＧ（Ｂｉｏ　Ｘ　Ｃｅｌｌ，＃ＢＥ００８５）をＰＢＳで２ｍｇ／ｍＬに調整したものを３０μＬずつ、２９ゲージ針を用いて背部皮下に連日投与した。７日後、ＰＢＳで５００ｍｇ／ｍＬの濃度に調整したエバンスブルー（Ｓｉｇｍａ　Ａｌｄｒｉｃｈ，＃Ｅ２１２９）を静脈内投与し、３０分後にマウスを殺処分して皮下投与部位の皮膚を６ｍｍパンチで採取した。組織学的検討は、ホルマリン固定・パラフィン包埋後の皮膚検体をヘマトキシリン・エオジン染色により行った。

　結果を図１１に示す。図１１の「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」はマウス抗ＣＤ３２０抗体を、「Ｃｔｒｌ　ＩｇＧ」はコントロールＩｇＧ（特定の抗原とは反応しない抗体）を、そして、「ＰＢＳ」は生理食塩水のみを投与した個体の写真である。「Ａｎｔｉ−ＣＤ３２０」において、血管炎が生じ血管の透過性が亢進してエバンスブルーが漏出していることが観察される。

　組織学的検討とは別に、遺伝子発現量も調べた。実施例６と同様に、ＲＮＡ　ｌａｔｅｒ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃ＡＭ７０２１）で保存した皮膚検体（皮下組織）からＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ　（Ｑｉａｇｅｎ，＃７４１０６）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ｔｏｙｏｂｏ，　＃ＦＳＱ−２０１）により逆転写しｃＤＮＡを得た。リアルタイムＰＣＲはＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｒｅａｌｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　（Ｔｏｙｏｂｏ，　＃ＱＰＫ−２０１）を用いてＡＢＩ　Ｐｒｉｓｍ　７０００　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により実施した。遺伝子発現量はＧａｐｄｈを内在コントロールとして△△Ｃ_Ｔ法により評価した。

　結果を図１２に示す。抗ＣＤ３２０抗体の複数回投与により、Ｉｌ６、ＴｎｆａおよびＩｌ１ｂの炎症性サイトカイン、ならびに、各種接着細胞因子の各遺伝子の発現量はいずれも２倍以上に増加した。

　図１１、図１２は、野生型マウスへの抗ＣＤ３２０抗体の投与により、軽度の皮膚型結節性多発動脈炎、と同様の症状を人為的に生じさせることができることを示す。

　実施例８　血管内皮細胞の抗ＣＤ３２０抗体による刺激
　本実施例では、血管内皮細胞の培養細胞に抗ＣＤ３２０抗体を添加し、各種遺伝子の発現量に与える影響を調べた。

　具体的には、ヒト皮膚血管内皮細胞（ＨＤＢＥＣ）の培養細胞を購入し（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，　Ｇｅｒｍａｎｙ，＃Ｃ−１２２２５）、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，＃Ｃ−２２１１０）を用いて３７℃、ＣＯ_２インキュベーター内で培養した。細胞密度が７０−８０％に達してから、２４時間の飢餓処理を行ったのち、抗ＣＤ３２０抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，　＃ＳＡＢ１４０９４０８）もしくはコントロールＩｇＧ（Ｂｉｏ　Ｘ　Ｃｅｌｌ，　＃ＢＥ００８５）を、Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂａｓａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ，＃Ｃ−２２２１０）中の最終濃度が１μｇ／ｍＬになるように調整して添加し、６時間刺激した。

　ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ　（Ｑｉａｇｅｎ，＃７４１０６）を用いてトータルＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒＴｒａ　Ａｃｅ　ｑＰＣＲ　ＲＴ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　（Ｔｏｙｏｂｏ，　＃ＦＳＱ−２０１）により逆転写しｃＤＮＡを得た。リアルタイムＰＣＲはＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｒｅａｌｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ｔｏｙｏｂｏ，　＃ＱＰＫ−２０１）を用いてＡＢＩ　Ｐｒｉｓｍ　７０００　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により実施した。遺伝子発現量はＧＡＰＤＨを内在コントロールとして△△Ｃ_Ｔ法により評価した。

　結果を図１３に示す。
　Ｉｃａｍ２：細胞間接着因子２
　ＰＡＩ１：プラスミノーゲン活性化抑制因子１
　ＩＬ６：インターロイキン６
　ＩＬ８：インターロイキン８

　ＰＡＩ１は、凝固活性因子である。抗ＣＤ３２０抗体のインビトロ投与により、これらの細胞間接着因子、凝固活性因子、炎症性サイトカインの各遺伝子の発現量はいずれも１．４倍以上に増加した。血管内皮細胞を抗ＣＤ３２０抗体で刺激すると、細胞間接着因子、凝固活性因子、炎症性サイトカインの発現が亢進することが明らかになった。

　図１３は、血管内皮細胞の培養細胞に抗ＣＤ３２０抗体による刺激により、軽度の皮膚型結節性多発動脈炎、と同様の症状を人為的に生じさせることができることを示す。

　本発明により、血清中に抗ＣＤ３２０抗体が検出される皮膚動脈炎患者は、末梢神経障害を合併せず、比較的軽症と分かった。本発明の臨床医学における意義は、血液検査という低侵襲かつ再現性の高い方法によって、血管炎患者の中から、これまで知られていなかった特異な亜集団（低重症度の、または／および、末梢神経障害を有しない、皮膚型結節性多発動脈炎の群）を抽出できることにある。本発明を利用すれば、採血という比較的軽微な侵襲だけで検査が可能となる。また全身を循環する血液を測定対象とするため、高い再現性がある。

　本発明は抗ＣＤ３２０抗体陽性群というこれまで知らなかった患者集団を同定することにより、皮膚動脈炎の重症度予測が可能となり、適切な治療選択と治療関連有害事象の低減に資する。理論に縛られるわけではないが、本発明によりはじめて選択が可能となった患者集団は、他の血管炎とは異なり、末梢血中の抗ＣＤ３２０抗体が病態に直接寄与している可能性がある。実際、マウス個体やヒト培養細胞を用いた検討では、ＣＤ３２０のリガンドであるビタミンＢ１２が抗ＣＤ３２０抗体の病原性を抑制することが示された。本発明の、ＣＤ３２０リガンドを含む医薬組成物は、病態特異的で副作用の少ない治療を提供するものである。
［配列表］

Claims (17)

1. 　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
   　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
   　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
   　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
   を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用マーカーであって、
   　抗ＣＤ３２０抗体を含む、前記診断用マーカー。
2. 　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である、請求項１に記載のマーカー。
3. 　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を接触させ、そして、
   　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
   　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
   　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
   　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
   を具備する、と判断する、
   ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのマーカーとして抗ＣＤ３２０抗体を使用する方法。
4. 　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
   　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
   　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
   　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
   を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための診断用組成物であって、
   　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む、前記診断用組成物。
5. 　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である、請求項４に記載の診断用組成物。
6. 　前記抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質が、ＣＤ３２０または可溶型ＣＤ３２０である、請求項４または５に記載の診断用組成物。
7. 　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、以下のいずれかの要件：
   　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
   　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
   　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
   を具備する群に属すると識別される、請求項４−６のいずれか１項に記載の診断用組成物。
8. 　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
   　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
   　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
   　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
   を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するためのキットであって、
   　抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む、前記キット。
9. 　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが６以下の場合である、請求項８に記載のキット。
10. 　前記抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質が、ＣＤ３２０または可溶型ＣＤ３２０である、請求項８または９に記載のキット。
11. 　皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料に抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質を含む組成物を接触させ、そして、
    　前記皮膚型結節性多発動脈炎患者由来の生体試料中に抗ＣＤ３２０抗体が同定される場合に、前記皮膚型結節性多発動脈炎患者が、以下のいずれか：
    　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
    　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
    　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
    を具備する、と判断する、
    ことを含む、皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれかを具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別するための方法。
12. 　前記皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度であるとは、バーミンガム血管炎活動スコアが、６以下の場合である、請求項１１に記載の方法。
13. 　前記抗ＣＤ３２０抗体を同定する物質が、ＣＤ３２０または可溶型ＣＤ３２０である、請求項１１または１２に記載の方法。
14. 　前記生体試料が、血清または血漿である、請求項１１−１３のいずれか１項に記載の方法。
15. 　皮膚型結節性多発動脈炎患者のうち、以下のいずれかの要件：
    　（ｉ）末梢神経障害を有しない；
    　（ｉｉ）皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である；あるいは、
    　（ｉｉｉ）末梢神経障害を有せず、そして、皮膚型結節性多発動脈炎が低重症度である
    を具備する群を、前記（ｉ）−（ｉｉｉ）のいずれの要件も具備しない群から識別して処置するための医薬組成物であって、
    　ＣＤ３２０リガンドを含む、前記医薬組成物。
16. 　前記ＣＤ３２０リガンドが、ビタミンＢ１２である、請求項１５の医薬組成物。
17. 　前記ビタミンＢ１２が、メチルコバラミン、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミンまたはアデノシルコバラミンである、請求項１６に記載の医薬組成物。