WO2023219136A1

WO2023219136A1 - ペプチド結合加水分解酵素検出用蛍光プローブ

Info

Publication number: WO2023219136A1
Application number: PCT/JP2023/017768
Authority: WO
Inventors: 泰照浦野; 徹小松; 優鏡味; 眞伍坂本; 貴文笠井; 力也渡邉
Original assignee: 国立大学法人東京大学; 国立研究開発法人理化学研究所
Priority date: 2022-05-12
Filing date: 2023-05-11
Publication date: 2023-11-16

Abstract

本発明は、酵素活性検出法に使用することができる蛍光プローブを提供することを目的とする。本発明によれば、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基を少なくとも１つ有する一般式（ＩＩ）で表される化合物又はその塩を含む、加水分解酵素検出用蛍光プローブが提供される。本発明の蛍光プローブはマイクロデバイスを用いた酵素活性検出法において使用できる。

Description

ペプチド結合加水分解酵素検出用蛍光プローブ

関連出願の参照

　本願は、先行する日本国出願である特願２０２２－７９０８２（出願日：２０２２年５月１２日）の優先権の利益を享受するものであり、その開示内容全体は引用することにより本明細書の一部とされる。

　本発明は、ペプチド結合加水分解酵素検出用蛍光プローブに関する。

　マイクロデバイスを用いた単一酵素レベルの酵素活性検出法は、酵素の個々の生化学パラメータを明らかにすることや、これをレポータータンパク質として用いて特定のタンパク質の存在を高感度に検出する目的などに汎用されてきた。

　本発明者らの研究グループは、これまでに、マイクロデバイス適合性の酵素活性検出蛍光プローブ群を用いて、血中の酵素を１分子レベルで検出・活性に基づくプロファイリングをおこない、疾患との新たな関連性を見出してきた。

　一方、マイクロデバイスを用いた単一酵素レベルの酵素活性検出法では、生体サンプルを十分に希釈してマイクロデバイスに添加することで、１ウェルに１分子以下の酵素が存在するような状態を作ることができ、酵素間で反応性の異なる複数色の蛍光プローブを同時に反応させ、それぞれのウェルでの複数波長における蛍光上昇を測定し、その組み合わせから、ウェルに入っている酵素を特定する、所謂、多色解析も理論的には可能である。

　しかしながら、マイクロデバイスを用いた酵素活性検出法に使用できる蛍光プローブとして、赤色の蛍光を発するプローブ（赤色蛍光プローブ）や、緑色の蛍光を発するプローブ（緑色蛍光プローブ）については、実用的に使用できるものは未だ見出されていない。

　本発明は、酵素活性検出法に使用することができる蛍光プローブを提供することを目的とする。

　上記課題を解決するため、本発明者らは、鋭意検討した結果、ローダミン骨格の化合物に特定の水溶性置換基を導入し、更に当該化合物のＬｏｇＰ値を特定の範囲とすることにより、マイクロデバイスを用いた酵素活性検出法においても使用できる蛍光プローブを提供できることを見出し、本発明を完成した。

　即ち、本発明は、
［１］
　－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基を少なくとも１つ有し、以下の一般式（ＩＩ）：

（式中、
環Ａは、フェニル又は５～６員のヘテロアリールである芳香族環であり；
環Ｑ１は、以下の式(i)又は式(ii)の環状構造であり

（式中、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^６及びＲ_０は以下で定義される通りである）；
環Ｑ２は、以下の式(iii)、式(iv)、式(v)又は式(vi)の環状構造であり

（式中、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０及びＲ^１１は以下で定義される通りである）；
Ｘ原子含有環状構造において１で示される結合- - -及び２で示される結合- - -はそれぞれ単結合又は二重結合を表し、但し、両者が同時に二重結合を表すことはなく；
Ｒは、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｌ－ＣＯ_２Ｈ、－Ｌ－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｌ－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択され、ここで、Ｌはリンカーであり；
ｎは、０～５の整数であり；
Ｒ^１は、芳香族環上に任意に存在する一価の置換基を表し、当該一価の置換基が２以上存在する場合は、同一又は異なっていてもよく、
ここで、Ｒ^１は、Ｒ^１が結合する環Ａ上の炭素原子と、環Ａが結合するＸ原子含有環状構造上の炭素原子と、環Ａの一部と一緒になって５～６員の炭素環又は複素環を形成してもよく；
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^４及びＲ^５は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^６及びＲ^７は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルケニル基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルキル基（このアルキル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）、又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルケニル基（このアルケニル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）であり、
ここで、Ｒ^８及びＲ^９は一緒になってＲ^８及びＲ^９が結合している窒素原子を含む４～７員の置換基を有していてもよいヘテロシクリルを形成していてもよく、
Ｒ^８又はＲ^９は、或いは、Ｒ^８及びＲ^９の両方は、夫々、Ｒ^５又はＲ^７と一緒になって、Ｒ^８又はＲ^９が結合している窒素原子を含む５～７員のヘテロシクリル又はヘテロアリールを形成していてもよく、更に該ヘテロシクリル又はヘテロアリールは、炭素数１～６個のアルキル、炭素数２～６個のアルケニル、炭素数２～６個のアルキニル、炭素数６～１０個のアラルキル基及び炭素数６～１０個のアルキル置換アルケニル基からなる群から選択される置換基を有していてもよく、
これらヘテロシクリル及びヘテロアリールには、前記水溶性置換基が直接又は前記置換基を介して結合していてもよく；
Ｒ^１１は、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルケニル基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルキル基（このアルキル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）、又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルケニル基（このアルケニル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｘは、酸素原子、Ｓｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｃ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｐ（＝Ｏ）Ｒ^ｃ、Ｓ（Ｒ^ｄ）_２、Ｇｅ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、テルル原子又はビスマス原子から選択され、
ここで、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、それぞれ独立に、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のアリール基であり、
Ｒ^ｃは、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のフェニル基であり、
Ｒ^ｄは、同一又は異なる、置換又は無置換のアリール基であり、
Ｒ^ａ～Ｒ^ｄの前記アルキル基、前記アリール基、前記フェニル基は、前記水溶性置換基で置換されていてもよく；
Ｒ_０及びＲ^１０は、それぞれ独立に、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、Ｔ－Ｏ－、又は飽和若しくは不飽和の５～６員炭素環式基若しくは複素環式基から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
で表される化合物又はその塩を含む、加水分解酵素検出用蛍光プローブ。
［２］
　Ｑ２が式(iii)の環状構造を表す、上記［１］に記載の蛍光プローブ。
［３］
　Ｑ２が式(iv)、式(v)又は式(vi)の環状構造を表す、上記［１］に記載の蛍光プローブ。
［４］
　ｎが１～３である、上記［１］～［３］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［５］
　Ｒ^２～Ｒ^９、Ｒ^ａ～Ｒ^ｄの少なくとも１つが、前記水溶性置換基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基、前記水溶性置換基を有するアリール基又は前記水溶性置換基を有するフェニル基である、上記［１］～［４］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［６］
　Ｘが、酸素原子又はＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）である、上記［１］～［５］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［７］
　Ｒが、－ＳＯ_３Ｈ又は－Ｌ－ＳＯ_３Ｈである、上記［１］～［６］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［８］
　前記加水分解酵素が、アミノペプチダーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ又はアミダーゼから選択されるペプチド結合加水分解酵素である、上記［１］～［７］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［９］
　前記化合物又はその塩のＭｉＬｏｇＰ値が２．５６以下である、上記［１］～［８］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［１０］
　前記化合物又はその塩の蛍光団母核のＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満である、上記［１］～［８］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［１１］
　前記化合物又はその塩のＭｉＬｏｇＰ値が２．５６以下であり、かつ、前記化合物又はその塩の蛍光団母核のＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満である、上記［１］～［８］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［１２］
　マイクロデバイス用蛍光プローブである、上記［１］～［１１］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［１３］
　前記一般式（ＩＩ）で表される化合物又はその塩が、以下の一般式（Ｉａ）～（Ｉｅ）のいずれかで表される化合物又はその塩である、上記［１］～［１２］のいずれかに記載の蛍光プローブ。

（式（Ｉａ）～（Ｉｅ）において、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ^ａ～Ｒ^ｂ、Ｒ_０は、一般式（ＩＩ）で定義した通りである。）
［１４］
　前記一般式（ＩＩ）で表される化合物又はその塩が、以下の一般式（Ｉｆ）で表される化合物又はその塩である、上記［１］～［１３］のいずれかに記載の蛍光プローブ。

（式（Ｉｆ）において、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ_０は、一般式（ＩＩ）で定義した通りである。）
［１５］
　前記化合物又はその塩が以下から選択される化合物又はその塩である、上記［１］～［１４］のいずれかに記載の蛍光プローブ。

［１６］
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法、または、生体試料が由来する被験者がすい臓がんである可能性を予測する方法。
［１７］
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミン酸などのアミノ酸残基）である、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法、または、生体試料が由来する被験者がすい臓がんである可能性を予測する方法。
［１８］
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出すること、及び
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミンなどのアミノ酸残基を示す）である、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法、または、生体試料が由来する被験者がすい臓がんである可能性を予測する方法。
［１９］前記生体試料が、すい臓がん患者、すい臓がんを有すると疑われる患者又は健常者の生体試料である、上記［１６］～［１８］のいずれかに記載の方法。
［２０］
　以下の（１）～（５）のいずれかの式で表される化合物又はその塩。

（式（１）～（５）において、
Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
［２１］
　以下の式（６）で表される化合物又はその塩。

（式（６）において、
Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
［２２］
　シーリングオイルへの溶解度測定試験（２５℃）において、前記化合物又はその塩のヘキサデカンへの溶解度が０．３μＭ以下である、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［２３］
　マイクロデバイスにおける蛍光強度測定試験において、前記化合物又はその塩の酵素分解物のウェル中心領域の蛍光強度に対するウェル周縁領域の蛍光強度の比率が０．６以下である、上記［１］～［１５］及び［２２］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［２４］
　マイクロデバイス及びキュベットにおける蛍光プローブの酵素分解試験において、キュベットにおける前記化合物又はその塩の酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第２の比）に対する、マイクロデバイスにおける前記酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第１の比）の比率が０．４以上である、上記［１］～［１５］、［２２］及び［２３］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［１０１］
　以下の一般式（ＩＩＩ）：

（式中、環Ａ、環Ｑ２、Ｘ、ｎ、Ｒ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４及びＲ^６は、一般式（ＩＩ）において定義した通りであり、結合- - -は単結合又は二重結合を表す。）
で表される化合物又はその塩の、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の化合物又はその塩の製造のための使用。
［１０２］
　以下の一般式（ＩＶ）：

（式中、環Ａ、Ｘ、ｎ、Ｒ、及びＲ^１～Ｒ^９は、一般式（ＩＩ）において定義した通りである。）
で表される化合物又はその塩の、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の化合物又はその塩の製造のための使用。
［１０３］
　以下の一般式（Ｖ）：

（式中、
環Ａ、Ｒ、Ｒ^８及びＲ^９は、一般式（ＩＩ）において定義した通りであり、
ｎは、１又は２であり、
Ｒ^１は、水素原子、無置換の炭素数１～４個のアルキル基、又は水酸基により置換された炭素数１～４個のアルキル基であり、
Ｒ^２～Ｒ^７は、水素原子であり、
Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～４個の置換又は無置換のアルキル基であり、
Ｘは、酸素原子又はＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）（Ｒ^ａ及びＲ^ｂは式（ＩＩ）において定義した通りである）である。）
で表される化合物又はその塩。
［１０４］
　以下から選択される化合物又はその塩である、上記［１０３］に記載の化合物又はその塩。

［１０５］
　上記［１０３］又は［１０４］に記載の化合物又はその塩の、上記［１］～［１５］のいずれかに記載の化合物又はその塩の製造のための使用。
［２０１］
　蛍光プローブを選択する方法であって、
　上記［１］～［１５］のいずれかに記載の蛍光プローブを準備することと、
（Ａ）シーリングオイルへの溶解度測定試験（２５℃）において前記蛍光プローブおよびその酵素分解物のヘキサデカンへの溶解度が０．３μＭ以下であり、（Ｂ）マイクロデバイスにおける蛍光強度測定試験において蛍光プローブの酵素分解物のウェル中心領域の蛍光強度に対するウェル周縁領域の蛍光強度の比率が、０．６以下であり、かつ、（Ｃ）マイクロデバイス及びキュベットにおける前記蛍光プローブの酵素分解試験において、キュベットにおける酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第２の比）に対する、マイクロデバイスにおける酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第１の比）の比率が０．４以上である蛍光プローブを選択することを含む、方法。
を提供するものである。

　本発明はまた、
［３０１］
　－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基を少なくとも１つ有し、以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩であって、

（式中、

は、フェニル又は５～６員のヘテロアリールである芳香族環であり：
Ｒは、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｌ－ＣＯ_２Ｈ、－Ｌ－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｌ－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択され、
ここで、Ｌはリンカーであり；
ｎは、０～５の整数であり；
Ｒ^１は、芳香族環上に任意に存在する一価の置換基を表し、当該一価の置換基が２以上存在する場合は、同一又は異なっていてもよく；
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^４及びＲ^５は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^６及びＲ^７は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルケニル基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基、又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルケニル基であり、
ここで、Ｒ^８及びＲ^９は一緒になってＲ^８及びＲ^９が結合している窒素原子を含む４～７員の置換基を有していてもよいヘテロシクリルを形成していてもよく、
Ｒ^８又はＲ^９は、或いは、Ｒ^８及びＲ^９の両方は、夫々、Ｒ^５又はＲ^６と一緒になって、
Ｒ^８又はＲ^９が結合している窒素原子を含む５～７員のヘテロシクリル又はヘテロアリールを形成していてもよく、更に該ヘテロシクリル又はヘテロアリールは、炭素数１～６個のアルキル、炭素数２～６個のアルケニル、炭素数２～６個のアルキニル、炭素数６～１０個のアラルキル基及び炭素数６～１０個のアルキル置換アルケニル基からなる群から選択される置換基を有していてもよく、
これらヘテロシクリル及びヘテロアリールには、前記水溶性置換基が直接又は前記置換基を介して結合していてもよく；
Ｘは、酸素原子、Ｓｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｃ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｐ（＝Ｏ）Ｒ^ｃ、Ｓ（Ｒ^ｄ）_２、Ｇｅ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、テルル原子又はビスマス原子から選択され、
ここで、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、それぞれ独立に、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のアリール基であり、
Ｒ^ｃは、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のフェニル基であり、
Ｒ^ｄは、同一又は異なる、置換又は無置換のアリール基であり、
Ｒ^ａ～Ｒ^ｄの前記アルキル基、前記アリール基、前記フェニル基は、前記水溶性置換基で置換されていてもよく；
Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
ＬｏｇＰ値が１．０９以下である当該化合物又はその塩を含む、マイクロデバイス用の加水分解酵素検出用蛍光プローブ。
［３０２］
　ｎが１～３である、上記［３０１］に記載の蛍光プローブ。
［３０３］
　Ｒ^２～Ｒ^９、Ｒ^ａ～Ｒ^ｄの少なくとも１つが、前記水溶性置換基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基、前記水溶性置換基を有するアリール基又は前記水溶性置換基を有するフェニル基である、上記［３０１］又は［３０２］に記載の蛍光プローブ。
［３０４］
　Ｘが、酸素原子又はＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）である、上記［３０１］～［３０３］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［３０５］
　Ｒは、－ＳＯ_３Ｈ又は－Ｌ－ＳＯ_３Ｈである、上記［３０２］に記載の蛍光プローブ。
［３０６］
　前記加水分解酵素が、アミノペプチダーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ又はアミダーゼから選択されるペプチド結合加水分解酵素である、上記［３０１］～［３０５］のいずれかに記載の蛍光プローブ。
［３０７］
　前記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が、以下の一般式（Ｉａ）～（Ｉｅ）のいずれかで表される化合物又はその塩である、上記［３０１］～［３０６］のいずれかに記載の蛍光プローブ。

（式（Ｉａ）～（Ｉｅ）において、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ^ａ～Ｒ^ｂ、Ｒ_０は、一般式（Ｉ）で定
義した通りである。）
［３０８］
　前記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が、以下の一般式（Ｉｆ）で表される化合物又はその塩である、上記［３０１］～［３０７］のいずれかに記載の蛍光プローブ。

（式（Ｉｆ）において、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ_０は、一般式（Ｉ）で定義した通りである。）
［３０９］
　マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）において－ＣＯ－Ｒ_０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、上記［３０１］～［３０８］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法。
［３１０］
　マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）において－ＣＯ－Ｒ_０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミン酸などのアミノ酸残基）である、上記［３０１］～［３０８］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法。
［３１１］
　マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）において－ＣＯ－Ｒ_０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、上記［３０１］～［３０８］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出すること、及び
　マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）において－ＣＯ－Ｒ_０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミンなどのアミノ酸残基を示す）である、上記［３０１］～［３０８］のいずれかに記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法。
［３１２］
　以下の（１）～（５）のいずれかの式で表される化合物又はその塩。

（式（１）～（５）において、
Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
［３１３］
　以下の式（６）で表される化合物又はその塩。

（式（６）において、
Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
を提供するものである。

　本発明により、酵素活性検出法に使用できる赤色蛍光プローブ、及び緑色蛍光プローブを提供することができ、特にマイクロデバイスを用いる酵素活性検出法に使用できる点で有利である。
　本発明の蛍光プローブは、すい臓がん等の検出に有効に使用することが可能である。
　本発明により、例えば、本発明の蛍光プローブを用いることで、血液中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出すること、血液中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出することによって、すい臓がんを診断する方法を提供することができる。

本発明の蛍光プローブが用いられるマイクロデバイスを模式的に示す斜視図である。実施例１～１５で行ったｓＨＭＲＧ、ｓＳｉＲベースのペプチダーゼ・プロテアーゼプローブを用いた測定の蛍光顕微鏡画像を示す。実施例１７における、ＣＤ１３の１分子酵素活性を利用したすい臓疾患（すい臓がん）の診断実験の結果を示す。実施例１８における、ＤＰＰ４の１分子酵素活性を利用したすい臓疾患（すい臓がん）の診断実験の結果を示す。実施例１９において使用した、シーリングオイルへの溶解度を算出するための検量線を示す。横軸は蛍光プローブの濃度（μｍ）であり、縦軸はＬＣのピーク面積である。実施例２０において、被験化合物のウェル壁面への吸着度合を、中心領域（Ｃｅｎｔｅｒ）の蛍光強度及び周縁領域（Ｅｄｇｅ）の蛍光強度（ＡＵ）に基づいて評価した結果を示す。図中央部の中列の画像では蛍光強度を解析した中心領域を示しており、右列の画像では蛍光強度を解析した周縁領域を示している。実施例２１において、キュベットを用いて酵素反応前後の蛍光スペクトルを測定した結果を示す。ＡがＧｌｕ－ｓＳｉＲについての結果であり、ＢがＧＰ－ｓＨＭＲＧについての結果である。実施例２１において、マイクロデバイスを用いて酵素反応前後の蛍光スペクトルを測定した結果を示す。ＡがＧｌｕ－ｓＳｉＲについての結果であり、ＢがＧＰ－ｓＨＭＲＧについての結果である。Ａ及びＢいずれも、左列の画像はアッセイバッファーのみの結果、中列の画像は被験化合物の存在下の結果、右列の画像は被験化合物及び酵素の存在下の結果をそれぞれ示す。

　本明細書中において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子を意味する。

　本明細書中において、「アルキル」は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる脂肪族炭化水素基のいずれであってもよい。アルキル基の炭素数は特に限定されないが、例えば、炭素数１～４個（Ｃ_１～４）、炭素数１～６個（Ｃ_１～６）、炭素数１～１０個（Ｃ_１～１０）、炭素数１～１５個（Ｃ_１～１５）、炭素数１～２０個（Ｃ_１～２０）である。炭素数を指定した場合は、その数の範囲の炭素数を有する「アルキル」を意味する。例えば、Ｃ_１～８アルキルには、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ｎｅｏ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル等が含まれる。本明細書において、アルキル基は任意の置換基を1個以上有していてもよい。そのような置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アルキル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アルキル部分を含む他の置換基（例えばアルコシ基、アリールアルキル基など）のアルキル部分についても同様である。

　本明細書において、ある官能基について「置換されていてもよい」と定義されている場合には、置換基の種類、置換位置、及び置換基の個数は特に限定されず、２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、スルホ基、アミノ基、アルコキシカルボニル基、オキソ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらの置換基にはさらに置換基が存在していてもよい。このような例として、例えば、ハロゲン化アルキル基、ジアルキルアミノ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。

　本明細書中において、「アリール」は単環式又は縮合多環式の芳香族炭化水素基のいずれであってもよく、環構成原子としてヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子、又は硫黄原子など）を１個以上含む芳香族複素環であってもよい。この場合、これを「ヘテロアリール」又は「ヘテロ芳香族」と呼ぶ場合もある。アリールが単環及び縮合環のいずれである場合も、すべての可能な位置で結合しうる。単環式のアリールの非限定的な例としては、フェニル基（Ｐｈ）、チエニル基（２－又は３－チエニル基）、ピリジル基、フリル基、チアゾリル基、オキサゾリル基、ピラゾリル基、２－ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピリダジニル基、３－イソチアゾリル基、３－イソオキサゾリル基、１，２，４－オキサジアゾール－５－イル基又は１，２，４－オキサジアゾール－３－イル基等が挙げられる。縮合多環式のアリールの非限定的な例としては、１－ナフチル基、２－ナフチル基、１－インデニル基、２－インデニル基、２，３－ジヒドロインデン－１－イル基、２，３－ジヒドロインデン－２－イル基、２－アンスリル基、インダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、１，２－ジヒドロイソキノリル基、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、フタラジニル基、キノキサリニル基、ベンゾフラニル基、２，３－ジヒドロベンゾフラン－１－イル基、２，３－ジヒドロベンゾフラン－２－イル基、２，３－ジヒドロベンゾチオフェン－１－イル基、２，３－ジヒドロベンゾチオフェン－２－イル基、ベンゾチアゾリル基、ベンズイミダゾリル基、フルオレニル基又はチオキサンテニル基等が挙げられる。本明細書において、アリール基はその環上に任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アリール基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アリール部分を含む他の置換基（例えばアリールオキシ基やアリールアルキル基など）のアリール部分についても同様である。

　本明細書中において、「アルコキシ基」とは、前記アルキル基が酸素原子に結合した構造であり、例えば直鎖状、分枝状、環状又はそれらの組み合わせである飽和アルコキシ基が挙げられる。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、シクロプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ－ブトキシ基、ｔ－ブトキシ基、シクロブトキシ基、シクロプロピルメトキシ基、ｎ－ペンチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロプロピルエチルオキシ基、シクロブチルメチルオキシ基、ｎ－ヘキシルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロプロピルプロピルオキシ基、シクロブチルエチルオキシ基又はシクロペンチルメチルオキシ基等が好適な例として挙げられる。

　本明細書中において、「アルキレン」とは、直鎖状又は分枝状の飽和炭化水素からなる二価の基であり、例えば、メチレン、１－メチルメチレン、１，１－ジメチルメチレン、エチレン、１－メチルエチレン、１－エチルエチレン、１，１－ジメチルエチレン、１，２－ジメチルエチレン、１，１－ジエチルエチレン、１，２－ジエチルエチレン、１－エチル－２－メチルエチレン、トリメチレン、１－メチルトリメチレン、２－メチルトリメチレン、１，１－ジメチルトリメチレン、１，２－ジメチルトリメチレン、２，２－ジメチルトリメチレン、１－エチルトリメチレン、２－エチルトリメチレン、１，１－ジエチルトリメチレン、１，２－ジエチルトリメチレン、２，２－ジエチルトリメチレン、２－エチル－２－メチルトリメチレン、テトラメチレン、１－メチルテトラメチレン、２－メチルテトラメチレン、１，１－ジメチルテトラメチレン、１，２－ジメチルテトラメチレン、２，２－ジメチルテトラメチレン、２，２－ジ－ｎ－プロピルトリメチレン等が挙げられる。

　本明細書中において用いられる「アミド」とは、ＲＮＲ’ＣＯ－（Ｒ＝アルキルの場合、アルカミノカルボニル－）及びＲＣＯＮＲ’－（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルカルボニルアミノ－）の両方を含む。

　本明細書中において用いられる「エステル」とは、ＲＯＣＯ－（Ｒ＝アルキルの場合、アルコキシカルボニル－）及びＲＣＯＯ－（Ｒ＝アルキルの場合、アルキルカルボニルオキシ－）の両方を含む。

１．本発明の蛍光プローブ
　本発明によれば、以下の一般式（ＩＩ）で表される化合物又はその塩を含む、加水分解酵素検出用蛍光プローブが提供される。

　本発明の１つの態様は、以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩を含む、加水分解酵素検出用蛍光プローブである。

　本明細書において、上記の要件を満たす化合物又はその塩を「本発明の化合物」とも言い、本発明の化合物を含む蛍光プローブを「本発明の蛍光プローブ」とも言う。

　本発明の化合物は、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基を少なくとも１つ有することを特徴とする。

　本発明の化合物は、後述のように、脂溶性の指標であるＭｉＬｏｇＰ値又はＬｏｇＰ値により特定することができる。例えば、本発明の化合物のＭｉＬｏｇＰ値は２．５６以下又は２．４７未満とすることができ、好ましくは２．４０以下、２．３０以下、２．２０以下、２．１０以下、２．００以下、１．９０以下、１．８０以下、１．７０以下又は１．６４以下であり、より好ましくは１．６０以下、１．５０以下、１．４０以下、１．３４以下、１．３０以下、１．２２以下、１．２０以下、１．１０以下又は１．００以下（特に好ましくは０以下）である。本発明の化合物のＭｉＬｏｇＰ値の下限値については特に規定がないが、例えば、－３．１以上程度である。本発明の化合物のうち式（Ｉ）及び（ＩＩ）においてＸが酸素原子である化合物については、ＭｉＬｏｇＰ値を２．４０以下、２．３０以下、２．２０以下、２．１０以下、２．００以下、１．９０以下、１．８０以下又は１．７０以下とすることができ、好ましくは１．６０以下、１．５０以下又は、１．４０以下、１．３０以下、１．２０以下、１．１０以下又は１．００以下（より好ましくは０以下）とすることができ、下限値についてはＭｉＬｏｇＰ値を例えば－３．１以上程度とすることができる。本発明の化合物のうち式（Ｉ）及び（ＩＩ）においてＸがＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）である化合物については、ＭｉＬｏｇＰ値を２．５６以下、２．５０以下、２．４０以下、２．３０以下、２．２０以下、２．１０以下、２．００以下、１．９０以下、１．８０以下、１．７０以下又は１．６４以下とすることができ、好ましくは１．６０以下、１．５０以下、１．４０以下、１．３４以下、１．３０以下、１．２２以下、１．２０以下又は１．１０以下（より好ましくは１．００以下）とすることができ、下限値についてはＭｉＬｏｇＰ値を例えば－３．１以上又は０以上程度とすることができる。本発明の好ましい態様では、本発明の化合物の酵素分解物のＭｉＬｏｇＰ値も上記と同様に特定することができる。本発明の化合物の酵素分解物は、例えば、式（ＩＩＩ）の構造を有し得るものであり、式（ＩＩＩ）の構造は蛍光団母核の構造を含むものである。

　本発明の化合物のＬｏｇＰ値は１．１７未満、１．１６以下、１．１５以下、１．１４以下、１．１３以下、１．１２以下、１．１１以下又は１．１０以下とすることができ、好ましくは１．０９以下、１．０８以下、１．０７以下、１．０６以下、１．０５以下、１．０４以下、１．０３以下又は１．０２以下であり、より好ましくは１．０１以下、１．０以下、０．９以下、０．８以下、０．７以下、０．６以下又は０．５以下（特に好ましくは０．４６以下又は０．４２以下）である。本発明の化合物のＬｏｇＰ値の下限値については特に規定がなく、小さいほど水溶性が高いが、例えば－３以上程度である。本発明の好ましい態様では、本発明の化合物の酵素分解物のＬｏｇＰ値も上記と同様に特定することができる。本発明の化合物の酵素分解物は、例えば、式（ＩＩＩ）の構造を有し得るものであり、式（ＩＩＩ）の構造は蛍光団母核の構造を含むものである。

　本発明の蛍光プローブは、後述のように、好ましくはマイクロデバイス用の蛍光プローブとして使用することができる。

　本発明の化合物においては、カルボキシル基（－ＣＯ_２Ｈ）、リン酸基（－ＰＯ_３Ｈ_２）及びスルホン酸基（－ＳＯ_３Ｈ）からなる群から選択される少なくとも１つの水溶性置換基を必須的に有することが重要である。
　これまでマイクロデバイスで使用する化合物の構造として検討されてきたものは、母核がキサンテン骨格に限られており、それよりも脂溶性の高いローダミン骨格については検討されてこなかった。ローダミン及びＳｉローダミンは、高い脂溶性を有するため、これら化合物を用いた蛍光プローブ（例えば、標的酵素と反応することで蛍光を発するＯＦＦ－ＯＮ型の蛍光プローブ）をマルチウェルチャンバー型等のマイクロデバイスを用いた酵素活性の検出方法に使用すると、デバイスを封入する際に、デバイスのウェル内の水溶液中からデバイス外のシーリング用途で用いられる有機溶媒中へ蛍光プローブの漏出がより起こり易くなり、高い定量性及び感度が求められる計測には適さないと考えられていた。
　また、酵素認識部位に関しては、これまで検討されてきたマイクロデバイス用の蛍光プローブでは酵素認識部位の水溶性が高かった（リン酸エステル等）が、本願発明が目的とするペプチド結合やグリコシド結合などを加水分解する酵素等の検出用蛍光プローブの多くでは酵素認識部位の脂溶性が高い（ペプチド等）ため、有機溶媒中への蛍光プローブの漏出がより問題となる。
　本発明者らは、上記の点について鋭意検討した結果、本発明の蛍光プローブにおいて、ローダミンやＳｉ系等のローダミンの分子骨格に特定の水溶性置換基を導入することにより、上記の問題を解消し得ることを見出した。更に、本発明者らは、上記ローダミンの分子骨格に特定の水溶性置換基を導入すると共に、当該化合物分子としての脂溶性の指標であるＭｉＬｏｇＰ値及び／又はＬｏｇＰ値を特定の範囲とすることにより、マイクロデバイスへの適用性が優れることも見出した。その結果、ローダミン骨格を有する蛍光プローブとしては初めて、マイクロデバイスを用いた酵素活性検出法に用いることができる蛍光プローブを提供することが可能となった。

　本発明の１つの態様によれば、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基を少なくとも１つ有し、一般式（ＩＩ）で表される化合物又はその塩であって、ＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満であり、かつ／又は、ＬｏｇＰ値が１．０９以下である当該化合物又はその塩を含む、マイクロデバイス用である加水分解酵素検出用蛍光プローブが提供される。本発明の１つの態様によればまた、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基を少なくとも１つ有し、一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩であって、ＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満であり、かつ／又は、ＬｏｇＰ値が１．０９以下である当該化合物又はその塩を含む、マイクロデバイス用である加水分解酵素検出用蛍光プローブが提供される。以下、各構成要件について詳述する。

（１）本発明の化合物
　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、環Ａ：

は、フェニル（ベンゼン環）又は５～６員のヘテロアリールである芳香族環である。
　５～６員のヘテロアリールとしては、１～３つの酸素、窒素、硫黄等のヘテロ原子を含む芳香族系複素環であり、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、ピリジン、ピラン、チオピラン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、１，２－ジオキシン、１，４－ジオキシン、１，２－ジチイン、１，４－ジチイン、トリアジン等が挙げられるが、これらに限定されない。
　芳香族環として、好ましくは、フェニル（ベンゼン環）、ピロール、チオフェン、フラン、ピリジンである。

　一般式（ＩＩ）においてＱ２が式(iii)の環状構造を表す場合には、１の結合- - -が単結合を表し、２の結合- - -が二重結合を表し、かつ、Ｑ１が式(i)の環状構造を表す。

　一般式（ＩＩ）においてＱ２が式(iv)、式(v)又は式(vi)の環状構造を表す場合には、
　Ｒ^１が、環Ａが直接結合するＸ原子含有環状構造上の炭素原子と結合してスピロ環を形成し、１の結合- - -及び２の結合- - -が単結合を表し、かつ、Ｑ１が式(i)の環状構造を表すか、或いは、
　１の結合- - -が二重結合を表し、２の結合- - -が単結合を表し、かつ、Ｑ１が式(ii)の環状構造を表す。
　なお、本発明において「Ｘ原子含有環状構造」はＸが酸素原子の場合にはキサンテン環となるが、本発明において「キサンテン骨格」とはＸが酸素原子以外の環状構造をも含む意味で用いられる。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒは、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｌ－ＣＯ_２Ｈ、－Ｌ－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｌ－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される。Ｌは、リンカーを表す。即ち、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表される化合物又はその塩において、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基は、上記芳香族環に直接結合してもよく、リンカーを介して結合してもよい。

　Ｌのリンカーは、炭素数１～１０個（好ましくは、炭素数１～６個）の置換基を有していてもよいアルキル基（但し、アルキル基の１以上の－ＣＨ_２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリール基（ヘテロアリール基を含む）、シクロアルキル基、炭素数１～１０個（好ましくは、炭素数１～６個）のアルケニル基、炭素数１～１０個（好ましくは、炭素数１～６個）のアルコキシ基、アルコキシカルボニル基（－ＣＯ－ＯＲ’）、アルキルアミノ基（－ＮＨＲ’、－ＮＲ’_２）、エステル基（－Ｏ－ＣＯ－Ｒ’）、アミド基（－ＮＨＣＯＲ’、－ＣＯＮＨＲ’、－ＣＯＮＲ’_２）、ポリエチレングリコール鎖、及びこれらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される。ここで、Ｒ’は、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基であり、Ｒ’が２以上ある場合は、各々同一又は異なっていてもよい。
　Ｌのリンカーは、合成の容易さからはアミドを好適に使用することができるが、蛍光プローブの物性の面からは上記のいずれのものも用いることができ、好ましくは、置換基を有していてもよい炭素数１～６個のアルキル基、アミド基（より好ましくは－ＣＯＮＨＲ’若しくは－ＣＯＮＲ’_２）又はフェニル基を用いることができる。

　本発明においては、好ましくは、Ｒは、－ＣＯ_２Ｈ、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｌ－ＣＯ_２Ｈ、又は－Ｌ－ＳＯ_３Ｈであり、より好ましくは、Ｒは、－ＳＯ_３Ｈ又は－Ｌ－ＳＯ_３Ｈである。

　ｎは、０～５の整数である。一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表される化合物又はその塩においては、上記の水溶性置換基は、上記芳香族環に直接又はリンカーを介して導入することができる。また、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表される化合物又はその塩においては、上記水溶性置換基を当該芳香族環には導入せずに（即ち、ｎ＝０）、キサンテン骨格に直接又はリンカーを介して導入することができ、また、キサンテン骨格に直接又はリンカーを介して導入するのに加えて、あるいは、これに代えて、後述するように、キサンテン骨格に結合している窒素原子を介して形成されるシクロヘキシル環又はシクロアリール環に上記水溶性置換基を直接又は他の置換基を介して導入することもできる。

　本発明の１つの好ましい態様においては、ｎは１～５であり、より好ましくは１～３である。

　また、本発明のもう１つの好ましい態様においては、上記の水溶性置換基は、上記芳香族環のみに直接又はリンカーを介して導入され、ｎは１～３又は１～２である。

　ｎが２以上の場合は、Ｒは同じであっても、異なっていてもよい。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ^１は、芳香族環上に任意に存在する一価の置換基を表す。当該一価の置換基が２以上存在する場合は、同一又は異なっていてもよい。ここで、Ｒ^１が芳香族環上に任意に存在するとは、Ｒ^１が芳香族環上に存在する場合も、Ｒ^１が芳香族環上に存在しない場合のいずれも含むことを意味する。

　Ｒ^１が示す一価の置換基の種類は特に限定されないが、例えば、炭素数１～６個のアルキル基、炭素数１～６個のアルケニル基、炭素数１～６個のアルキニル基、炭素数１～６個のアルコキシ基、水酸基、アルコキシカルボニル基、ハロゲン原子、又はアミノ基からなる群から選ばれることが好ましい。
　これらの一価の置換基は更に任意の置換基を１個又は２個以上有していてもよい。例えば、Ｒ^１が示すアルキル基にはハロゲン原子、水酸基、アミノ基、アルコキシ基などが１個又は２個以上存在していてもよく、例えばＲ^１が示すアルキル基はハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、又はアミノアルキル基などであってもよい。
　ここで、Ｒ^１が示す一価の置換基は、上述したＲ（－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｌ－ＣＯ_２Ｈ、－Ｌ－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｌ－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される）とは別に芳香族環に導入され、ｎが０の場合に、Ｒ^１は存在しても、存在しなくてもよく、ｎが１以上の場合に、Ｒ^１は存在しても、存在しなくてもよい。
　例えば、芳香族環がフェニル基（ベンゼン環）の場合に、ｎが１の場合は、一価の置換基は１～４個ベンゼン環上に存在することができ、ｎが２の場合は、一価の置換基は１～３個ベンゼン環上に存在することができる。

　Ｒ^１はまた、Ｒ^１が結合する環Ａ上の炭素原子と、環Ａが結合するＸ原子含有環状構造上の炭素原子（スピロ原子）と、環Ａの一部と一緒になって５～６員の炭素環又は複素環（スピロ環）を形成してもよい。

　本発明の１つの好ましい態様においては、Ｒ^１は、存在しないか、又は、炭素数１～６個のアルキル基（好ましくは、メチル基、エチル基）である。

　また、本発明のもう１つの好ましい態様においては、Ｒ^１として１つの炭素数１～６個のアルキル基（好ましくは、メチル基）が芳香族環上に存在する。
　この場合、炭素数１～６個のアルキル基（好ましくは、メチル基）は、キサンテン環と結合する位置に対して芳香族環の２位（芳香族環がベンゼン環である場合はパラ位）に結合することが好ましい。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基を示す。
　Ｒ^２又はＲ^３がアルキル基を示す場合には、該アルキル基にはハロゲン原子、水酸基、アミノ基、アルコキシ基などが１個又は２個以上存在していてもよく、例えばＲ^２又はＲ^３が示すアルキル基はハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基などであってもよい。
　また、Ｒ^２及びＲ^３の少なくとも１つは、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＳＯ_３Ｈから選択される水溶性置換基、当該水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であってもよい。

　本発明の１つの側面においては、Ｒ^２及びＲ^３はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子であり、より好ましくは、Ｒ^２及びＲ^３がともに水素原子である。

　また、本発明のもう１つの側面においては、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立に、水素原子、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２又は－ＳＯ_３Ｈから選択される水溶性置換基、又は当該水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基である。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ^４及びＲ^５は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基を示し、その詳細についてはＲ^２及びＲ^３について説明したものと同様である。

　本発明の１つの側面においては、Ｒ^４及びＲ^５はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子であり、より好ましくは、Ｒ^４及びＲ^５がともに水素原子である。

　また、本発明のもう１つの側面においては、Ｒ^４及びＲ^５は、それぞれ独立に、水素原子、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２又は－ＳＯ_３Ｈから選択される水溶性置換基、又は当該水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基である。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ^６及びＲ^７は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり、その詳細についてはＲ^２及びＲ^３について説明したものと同様である。

　本発明の１つの側面においては、Ｒ^６及びＲ^７はそれぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子であり、より好ましくは、Ｒ^４及びＲ^５がともに水素原子である。

　また、本発明のもう１つの側面においては、Ｒ^６及びＲ^７は、それぞれ独立に、水素原子、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２又は－ＳＯ_３Ｈから選択される水溶性置換基、又は当該水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基である。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルケニル基、又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルキル基（このアルキル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルケニル基（このアルケニル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）である。
　Ｒ^８及びＲ^９は一緒になってＲ^８及びＲ^９が結合している窒素原子を含む４～７員のヘテロシクリルを形成していてもよい。
　Ｒ^８又はＲ^９は、或いは、Ｒ^８及びＲ^９の両方は、夫々、Ｒ^５又はＲ^７と一緒になって、Ｒ^８又はＲ^９が結合している窒素原子を含む５～７員のヘテロシクリル又はヘテロアリールを形成していてもよく、更に該ヘテロシクリル又はヘテロアリールは、炭素数１～６個のアルキル、炭素数２～６個のアルケニル、又は炭素数２～６個のアルキニル、炭素数６～１０個のアラルキル基、及び炭素数６～１０個のアルキル置換アルケニル基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
　ヘテロシクリル、ヘテロアリールの環構成員として酸素原子、窒素原子及び硫黄原子からなる群から選択される１～３個の更なるヘテロ原子を含有していてもよい。
　これらヘテロシクリル及びヘテロアリールには、前記水溶性置換基が直接又は前記置換基を介して結合していてもよい。

　本発明の１つの好ましい態様においては、Ｒ^８及びＲ^９はともに水素原子である。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ^１１は、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルケニル基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルキル基（このアルキル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）、又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルケニル基（このアルケニル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）である。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｘは、酸素原子、Ｓｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｃ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｐ（＝Ｏ）Ｒ^ｃ、Ｓ（Ｒ^ｄ）_２、Ｇｅ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、テルル原子又はビスマス原子から選択される。

　ここで、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、それぞれ独立に、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のアリール基である。
　Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、それぞれ独立に、炭素数１～３個のアルキル基であることが好ましく、Ｒ^ａ及びＲ^ｂがともにメチル基であることがより好ましい。
　Ｒ^ａ及びＲ^ｂが示すアルキル基にはハロゲン原子、水酸基、アミノ基、アルコキシ基などが１個又は２個以上存在していてもよく、例えば当該アルキル基はハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基などであってもよい。Ｒ^ａ及び／又はＲ^ｂがアリール基である場合には、アリール基は単環の芳香族基又は縮合芳香族基のいずれであってもよく、アリール環は１個又は２個以上の環構成ヘテロ原子（例えば窒素原子、酸素原子、又は硫黄原子など）を含んでいてもよい。アリール基としてはフェニル基が好ましい。アリール環上には１個又は２個以上の置換基が存在していてもよい。置換基としては、例えばハロゲン原子、水酸基、アミノ基、アルコキシ基などが１個又は２個以上存在していてもよい。
　また、Ｒ^ａ～Ｒ^ｂとして規定される前記アルキル基、前記アリール基は、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２又は－ＳＯ_３Ｈから選択される水溶性置換基で置換されていてもよい。

　Ｒ^ｃは、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のフェニル基である。
　Ｒ^ｃとして規定される上記アルキル基、フェニル基は、前記水溶性置換基で置換されていてもよい。

　Ｒ^ｄは、同一又は異なる、置換又は無置換のアリール基である。
　Ｒ^ｄとして規定される上記アリール基は、前記水溶性置換基で置換されていてもよい。

　本発明の１つの好ましい態様においては、Ｘは、酸素原子又はＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）である。

　一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ_０及びＲ^１０は、それぞれ独立に、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、Ｔ－Ｏ－又は飽和若しくは不飽和の５～６員炭素環式基若しくは複素環式基から選択される。
　ここで、アミノ酸の部分構造とは、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成していることを意味する。
　Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。
　また、飽和若しくは不飽和の５～６員炭素環式基若しくは複素環式基としては、アリール基、又は１～２個の異種原子を環員原子として含む５～６員飽和複素環式基が挙げられる。ここで、異種原子は、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択することができ、２個の場合には同一又は異なっていてもよい。飽和複素環の非制限的な例としては、モルホリン環が挙げられる。

　本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基の両方を有する化合物であれば任意の化合物を用いることができ、天然及び非天然のものを含む。中性アミノ酸、塩基性アミノ酸、又は酸性アミノ酸のいずれであってもよく、それ自体が神経伝達物質などの伝達物質として機能するアミノ酸のほか、生理活性ペプチド（ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドのほか、オリゴペプチドを含む）やタンパク質などのポリペプチド化合物の構成成分であるアミノ酸を用いることができ、例えばαアミノ酸、βアミノ酸、γアミノ酸などであってもよい。アミノ酸としては、光学活性アミノ酸を用いることが好ましい。例えば、αアミノ酸についてはＤ－又はＬ－アミノ酸のいずれを用いてもよいが、生体において機能する光学活性アミノ酸を選択することが好ましい場合がある。

　本明細書において、「アミノ酸残基」とは、アミノ酸のカルボキシル基からヒドロキシル基を除去した残りの部分構造に対応する構造をいう。
　アミノ酸残基には、αアミノ酸の残基、βアミノ酸の残基、γアミノ酸の残基が含まれる。

　本明細書において、「ペプチド」とは、２個以上のアミノ酸がペプチド結合でつながった構造をいう。

　Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸の一部を構成している場合としては、例えば、上記したγ－グルタミル基のように、アミノ酸の側鎖のカルボキシル基が－ＮＨ_２と結合してカルボニル基となりアミノ酸の一部となっている構造が挙げられる。

　本発明の１つの態様において、Ｒ_０及びＲ^１０のアミノ酸の部分構造は、以下の式（Ａ）で表される。

　式（Ａ）において、Ｒ^１ａは、天然アミノ酸（グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、システイン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、チロシン、プロリン）の側鎖を構成する基、非天然アミノ酸（シトルリン、ノルバリンなど）の側鎖を構成する基、置換又は無置換のアルキル基からなる群から選択される。

　式（Ａ）において、Ｒ^２ａは、水素原子、又は、Ｎ末端の保護基、例えば、アセチル基（－ＣＯＣＨ_３）、コハク酸アミド（－ＣＯ－Ｃ_２Ｈ_４－ＣＯＯＨ）である。

　＊は、Ｃ＝Ｏと結合する部位を表す。

　Ｒ_０又はＲ^１０が式（Ａ）で表される場合は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸残基を構成する。
　Ｒが式（Ａ）で表される場合は、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表される化合物又はその塩は、アミノペプチダーゼの活性検出用蛍光プローブとして用いることができる。

　本発明の１つの態様において、Ｒ_０及びＲ^１０のアミノ酸の部分構造は、以下の式（Ｂ）で表される。

　式（Ｂ）において、Ｒ^３ａは、天然アミノ酸（グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、システイン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、チロシン、プロリン）の側鎖を構成する基、非天然アミノ酸（シトルリン、ノルバリンなど）の側鎖を構成する基、置換又は無置換のアルキル基からなる群から選択される。

　式（Ｂ）において、Ｒ^４ａは、水素、メチル基等の、天然アミノ酸（グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、システイン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、チロシン、プロリン）の側鎖を構成する基を表す。Ｒ^４ａには、非天然アミノ酸（シトルリン、ノルバリンなど）の側鎖を構成する基も含まれる。また、Ｒ^４ａには、天然アミノ酸や非天然アミノ酸の側鎖を構成する基以外の基、例えば、種々の置換基を有するアルキル基なども含まれる。

　式（Ｂ）において、

は、アミノ基、Ｎアセチル化等されたアミノ基、アミノ基とアミノ酸（Ｎ末端がアセチル化等されていてもよい）が結合した構造、又は、アミノ基と複数のアミノ酸がペプチド結合により連なったペプチド（Ｎ末端がアセチル化等されていてもよい）と結合した構造を表す。

　＊は、Ｃ＝Ｏと結合する部位を表す。

　Ｒ_０又はＲ^１０が式（Ｂ）で表される場合は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、２以上のアミノ酸がペプチド結合により連なったペプチドを構成する。
　Ｒ_０又はＲ^１０が式（Ｂ）で表される場合は、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物又はその塩は、ペプチダーゼ又はプロテアーゼの活性検出用蛍光プローブとして用いることができる。

　本発明の１つの態様において、Ｒ_０及びＲ^１０のアミノ酸の部分構造は、以下の式（Ｃ）で表される。

　＊は、Ｃ＝Ｏと結合する部位を表す。

　Ｒ_０又はＲ^１０が式（Ｃ）で表される場合は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、γグルタミル結合を形成することから、この場合は、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表される化合物又はその塩は、γ-グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）の活性検出用蛍光プローブとして用いることができる。

　本発明の１つの好ましい側面において、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）の三環構造（特にキサンテン環）のベンゼン環に結合する－ＮＨ－ＣＯ－Ｒ_０及び－ＮＨ－ＣＯ－Ｒ^１０の部分は、以下のいずれかで表される。

　上記の式において、＊＊は、ベンゼン環と結合する箇所を表す。

　Ｒ_０又はＲ^１０として規定するカルボン酸の部分構造は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成している。即ち、Ｒ^５ａ－ＣＯＯＨとして表されるカルボン酸のカルボキシル基が、キサンテン骨格に結合しているアミノ基とアミド結合を結合して、Ｒ^５ａ－ＣＯ－ＮＨ－^＊＊＊の複合基を構成する。Ｒ^５ａは、末端にカルボキシル基を有してもよい炭化水素基を表し、＊＊＊は、キサンテン骨格のベンゼン環と結合する箇所を表す。
　ここで、カルボン酸としては、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、又はジカルボン酸が好ましい。

　飽和脂肪酸としては、酢酸（ＣＨ_３ＣＯ_２Ｈ）、酪酸（ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ）、パルミチン酸（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１４ＣＯ_２Ｈなどが好ましい。
　不飽和脂肪酸としては、オレイン酸が好ましい。
　ジカルボン酸としては、やコハク酸（ＨＯ_２Ｃ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＯ_２Ｈ）が好ましい。

　Ｒ_０又はＲ^１０がカルボン酸の部分構造である場合は、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物又はその塩は、アミダーゼの活性検出用蛍光プローブとして用いることができる。

　また、本発明のもう１つの側面においては、Ｒ_０又はＲ^１０として規定するカルボン酸の部分構造に関して、Ｒ^５ａ－ＣＯ－ＮＨ－^＊＊＊の複合基におけるＲ^５ａは、酸化還元酵素によって還元される部位を有する炭化水素基であってもよい（＊＊＊は、キサンテン骨格のベンゼン環と結合する箇所を表す）。
　酸化還元酵素によって還元される部位としては、例えば、キノン部分が挙げられ、キノン部分は酸化還元酵素によって還元されてフェノールになるとアミド部分を攻撃してアミドが切断されて蛍光色素が遊離して酵素活性を検出することができる。このようなＲ_０又はＲ^１０がカルボン酸の部分構造である本発明の化合物の例を以下に示す。

　上記の化合物を含む蛍光プローブは、酸化還元酵素の活性を検出することができる。

　Ｒ_０又はＲ^１０として規定するＴ－Ｏ－において、Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。

　糖類としては、β－Ｄ－グルコース、β－Ｄ－ガラクトース、β－Ｌ－ガラクトース、β－Ｄ－キシロース、α－Ｄ－マンノース、β－Ｄ－フコース、α－Ｌ－フコース、β－Ｌ－フコース、β－Ｄ－アラビノース、β－Ｌ－アラビノース、β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミン、β－Ｄ－Ｎ－アセチルガラクトサミン等が挙げられ、好ましくは、β－Ｄ－ガラクトース、β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミンである。

　自己開裂型のリンカーとは、自発的に切断・分解されるリンカーを意味し、例えば、カルバメート、ウレア、パラアミノベンジルオキシ基、エステル基等が挙げられる。なお、自己開裂型のリンカーは公知であり、本発明に用いることができる。自己開裂型リンカーの非限定的な例としては、糖加水分解酵素プローブ（J. Am. Chem. Soc. 2013, 135(1), 409-414）が挙げられる。

　上記したように、本発明の化合物は、カルボキシル基（－ＣＯ_２Ｈ）、リン酸基（－ＰＯ_３Ｈ_２）及びスルホン酸基（－ＳＯ_３Ｈ）からなる群から選択される少なくとも１つの水溶性置換基を必須的に有する。ここで、水溶性置換基を導入する態様としては、Ａの芳香族環のみに直接又はリンカーを介して導入することができ（態様Ａ）、また、当該芳香族環には導入せずに（即ち、ｎ＝０）、水溶性置換基をキサンテン骨格に直接又はリンカーを介して導入することができる（態様Ｂ）。また、Ａの芳香族環に直接又はリンカーを介して導入すると共に、水溶性置換基をキサンテン骨格に直接又はリンカーを介して導入することができる（態様Ｃ）。
　更に、上記の各々の態様に加えて、キサンテン骨格に結合している窒素原子を介して形成されるシクロヘキシル環又はシクロアリール環に上記水溶性置換基を直接又は他の置換基を介して導入することもでき（態様Ｄ）、また、キサンテン骨格に結合している窒素原子を介して形成されるシクロヘキシル環又はシクロアリール環のみに上記水溶性置換基を直接又は他の置換基を介して導入することもできる（態様Ｅ）。
　上記の態様Ａ～Ｅのいずれの場合においても、本発明の化合物は、脂溶性の指標であるＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満であるか、或いはＬｏｇＰ値が１．０９以下である。ＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満であるか、或いはＬｏｇＰ値が１．０９以下であると、本発明の化合物のマイクロデバイス適用可能性が良好となる。
　ここで、ＬｏｇＰ値は、オクタノール／水の分配係数であり、オクタノールと水の２相間へ溶解した物質の平衡濃度の比を表し、その成分が疎水性（脂溶性）であるか親水性（水溶性）であるかを示す指標である。本発明において、ＬｏｇＰ値は室温（２５℃）で測定した値であり、測定方法の詳細は実施例に記載する。

　ＬｏｇＰ値はまた、化学構造に基づいて推定することもできる。ＬｏｇＰ値を推定するソフトウエア及びプログラムは当業者に利用可能であり、本発明では例えばMolinspiration社から提供されるプログラムを使用してＬｏｇＰ値を推定することができる。このようにして求めたＬｏｇＰ値を本発明ではＭｉＬｏｇＰ値と表記する。

　本発明の蛍光プローブの１つの好ましい態様は、以下の一般式（Ｉａ）～（Ｉｅ）で表される化合物の少なくとも１の化合物又はその塩を含む蛍光プローブである。

　式（Ｉａ）～（Ｉｅ）における、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ^ａ～Ｒ^ｂ、Ｒ_０は、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で定義した通りである。

　本発明の蛍光プローブのもう１つの好ましい態様は、以下の一般式（Ｉｆ）で表される化合物又はその塩を含む蛍光プローブである。

　式（Ｉｆ）において、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ_０は、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で定義した通りである。

　本発明の化合物は、特に断らない限り、その互変異性体、幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）、鏡像異性体等の立体異性体も含まれる。すなわち、本発明の化合物中に、１個又は２個以上の不斉炭素が含まれる場合、不斉炭素の立体化学については、それぞれ独立して（Ｒ）体又は（Ｓ）体のいずれかをとることができ、該誘導体の鏡像異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがある。従って、本発明の蛍光プローブの有効成分としては、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などを用いることが可能であり、いずれも本発明の範囲に包含される。

（２）加水分解酵素検出用蛍光プローブ
　本発明の蛍光プローブは、加水分解酵素の検出用に好適に用いられる。
　加水分解酵素としては、ペプチド結合加水分解酵素、Ｏ－グリコシル化合物加水分解酵素が挙げられる。

　ペプチド結合加水分解酵素には、アミダーゼ、アミノペプチダーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼが含まれる。本発明の蛍光プローブで検出することができるペプチド結合加水分解酵素としては、例えば、アミノペプチダーゼN、γ-グルタミルトランスペプチダーゼ、ジペプチジルペプチダーゼ、エラスターゼ、脂肪酸アミド加水分解酵素、カスパーゼ、アシルアミノ酸放出酵素、フィブロブラストアクティベーションプロテイン、ＳＵＭＯスペシフィックプロテアーゼ等が含まれるが、これらに限定されない。

　本発明の蛍光プローブで検出することができるＯ－グリコシル化合物加水分解酵素としては、例えば、β－ガラクトシダーゼ、β－ＧｌｃＮＡｃａｓｅ等が含まれるが、これらに限定されない。

　なお、反応条件により複数の酵素活性を示す酵素があり、そのような酵素であっても加水分解酵素活性を有する限り、本発明では加水分解酵素として扱う。例えば、γ－グルタミルトランスフェラーゼのような転移酵素は逆反応で加水分解酵素活性を示すことから、加水分解酵素といえる。

　本発明の蛍光プローブの使用方法は特に限定されず、従来公知の蛍光プローブと同様に用いることが可能である。通常は、生理食塩水や緩衝液などの水性媒体、又はエタノール、アセトン、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドなどの水混合性の有機溶媒と水性媒体との混合物などに本発明の化合物又はその塩を溶解し、細胞や組織を含む適切な緩衝液中にこの溶液を添加して、蛍光スペクトルを測定すればよい。本発明の蛍光プローブを適切な添加物と組み合わせて組成物の形態で用いてもよい。例えば、緩衝剤、溶解補助剤、ｐＨ調節剤などの添加物と組み合わせることができる。

（３）マイクロデバイス用の蛍光プローブ
　本発明の蛍光プローブは、マイクロデバイスを用いる酵素活性検出法に好適に使用することができる。従って、本発明の蛍光プローブをマイクロデバイスのウェル内に備えることにより、生体試料中の標的加水分解酵素の酵素活性を検出する方法に用いることができる。
　マイクロデバイスには、マイクロチャンバー型デバイス、リポソーム、ドロップレット等が含まれる。
　以下では、マイクロチャンバー型デバイスを例にしてマイクロデバイスについて説明する。

　マイクロデバイスの材料は特に限定されず、例えばガラス材料、シリコン、樹状ポリマー又はコポリマーを含むプラスチック等が挙げられる。ガラス材料としては、例えば、ソーダ石灰ガラス、パイレックス（登録商標）ガラス、バイコール（登録商標）ガラス、石英ガラス等が挙げられる。樹脂ポリマーとしては、例えば、ポリ（塩化ビニル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（酢酸ビニル－共－無水マレイン酸）、ポリ（ジメチルシロキサン）モノメタクリレート、環状オレフィンポリマー、フルオロカーボンポリマー、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンイミン等が挙げられる。コポリマーとしては、例えば、ポリ（酢酸ビニル－共－無水マレイン酸）、ポリ（スチレン－共－無水マレイン酸）、ポリ（エチレン－共－アクリル酸）又はこれらの誘導体等が挙げられる。

　マイクロデバイスの形状は、例えば、図１に示すように、任意の数のウェル（例えば、マイクロウェル）が配置されたマルチウェルプレート等が挙げられる。ウェルの数としては、プレート１枚当たり、例えば１個以上１０００万個以下、例えば１０個以上５０万個以下、例えば１０万個程度等が挙げられる。

　マイクロデバイスのウェルの孔径は、例えば１０ｎｍ以上１０μｍ以下であればよく、例えば１００ｎｍ以上１０μｍ以下であればよく、例えば１μｍ以上１０μｍ以下であればよい。
　また、マイクロデバイスのウェルの深さは、例えば１０ｎｍ以上１００μｍ以下であればよく、例えば１００ｎｍ以上８０μｍ以下であればよく、例えば２００ｎｍ以上７０μｍ以下であればよい。
　孔径及び深さが上記範囲内であることにより、ウェル内に１分子の標的酵素を捕捉することができ、生体試料中の酵素１分子ずつの酵素活性を検出することができる。

　マイクロデバイスは、１ウェルに１種類の上述の本発明の蛍光プローブを備えていてもよい。
　これにより、生体試料中の標的酵素１分子に対して、１種類の本発明の蛍光プローブの蛍光強度を検出し、標的酵素１分子同士の酵素活性を比較することができる。

　また、マイクロデバイスの１ウェルに含まれる本発明の蛍光プローブの量としては、例えば１００ｎＭ以上１０００μＭ以下であればよく、例えば１μＭ以上１０００μＭ以下であればよく、例えば１０μＭ以上１０００μＭ以下であればよい。
　マイクロデバイスの使用方法としては、まず、生体試料を含む溶液をマイクロデバイスに添加する。次いで、マイクロデバイスのウェル内の生体試料中の標的酵素を封入するために、シーリングオイルを滴下する。
　また、上記の生体試料を含む溶液には、本発明の蛍光プローブを添加してもよい。

２．生体試料中の酵素活性の検出方法
　本発明のもう１つの実施態様は、１種類以上の本発明の化合物を用いて、生体試料中の複数の酵素の活性を検出する方法である（以下「本発明の検出方法１」とも言う）。

　本発明の検出方法１においては、マイクロデバイスを好適に用いることができる。

　本発明の検出方法１に用いるマイクロデバイスは、上述の本発明の化合物を備えるものである。

　本発明の検出方法１において用いることができるマイクロデバイスの材料及び形状は、本発明の蛍光プローブについて詳述した通りである。

　マイクロデバイスは、１ウェルに１種類の本発明の化合物を備えていてもよい。
　これにより、生体試料中の複数の酵素１分子に対して、１種類の本発明の蛍光プローブを検出し、複数の酵素の各々と本発明の化合物について１分子同士の酵素活性を比較することができる。

　また、マイクロデバイスの１ウェルに含まれる本発明の蛍光プローブの量としては、例えば１００ｎＭ以上１０００μＭ以下であればよく、例えば１μＭ以上１０００μＭ以下であればよく、例えば１０μＭ以上１０００μＭ以下であればよい。
　マイクロデバイスの使用方法としては、まず、生体試料を含む溶液をマイクロデバイスに添加する。次いで、マイクロデバイスのウェル内の生体試料中の酵素を封入するために、シーリングオイルを滴下する。また、上記の生体試料を含む溶液には、本発明の蛍光プローブを添加してもよい。

　本発明によれば、生体試料中の複数の酵素の活性を検出する方法であって、生体試料（例えば、被検者から単離された生体試料、生検試料、体液試料、水溶液）と式（Ｉ）の化合物又は式（ＩＩ）の化合物とを接触させることを含む、方法が提供される。ある態様では、生体試料は、血液試料（例えば、血清試料、又は血漿試料）であり得る。この方法は、化合物と水溶液との接触後、化合物の蛍光を測定することをさらに含み得る。化合物が蛍光を発する場合には、その蛍光の有無が、水溶液中の酵素の活性の存在を示し、その蛍光の強度が、水溶液中の酵素の活性の強度を示す。

　本発明の検出方法１の１つの態様は、生体試料中のペプチド結合加水分解酵素活性を検出する方法であって、本発明の化合物と、複数の酵素とを接触させることを含む、方法である。

　本発明の検出方法１の１つの好ましい側面においては、接触が血清存在下で行われる。

　本発明の検出方法１によれば、生体試料中の複数の酵素の酵素活性を検出することができる。
　本発明の検出方法１について、以下に詳細を示す。

［工程１］
　まず、本発明の化合物又は本発明の化合物群（ライブラリー）を備えるマイクロデバイスに、生体試料を含む溶液を添加する。生体試料としては、例えば、被検者から単離された生体試料、生検試料、体液試料、水溶液が挙げられる。また、生体試料は、血液試料（例えば、血清試料、又は血漿試料）であり得る。
　生体試料を含む溶液のｐＨは任意の値を選んでよい。例えば、溶液のｐＨは、生体内に近しい値にすることができ、この場合は、例えば６．０以上８．０以下であればよい。また、特定の酵素群に標的を絞るために、溶液のｐＨを至適ｐＨに当たる酸性にすることもできる。
　また、生体試料を含む溶液と、本発明の蛍光プローブを含む溶液を別々に調製して、生体試料と蛍光プローブの比率を適切に調整して両者を混合して、混合した溶液をマイクロデバイスに添加してもよい。

　生体試料のタンパク質濃度は、「目的とするタンパク質」の濃度としては、通常は、例えば１ｐＭ以上１００ｐＭ以下であればよく、例えば１０ｐＭ以上１００ｐＭ以下であればよい。
　また、試料中の全体のタンパク質濃度としては、例えば上限を１０μＭ程度までにすることもできる。
　生体試料のタンパク質濃度の測定方法は、「目的とするタンパク質」の濃度の測定方法としては、例えば、抗体抗原反応を利用した方法（例えば、ＥＬＩＳＡ法等）を用いることができる。また、試料中の全体のタンパク質濃度の測定方法としては、タンパク質と試薬との反応を利用した比色法（例えば、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法、ブラッドフォード法、ローリー法、ビウレット法等）が挙げられる。
生体試料は上記濃度となるように、各種水性溶媒等を用いて、希釈してもよい。前記水性溶媒としては、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）、トリス緩衝生理食塩水（ＴｒｉｓＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ；ＴＢＳ）、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水等が挙げられ、これらに限定されない。

［工程２］
　次いで、マイクロデバイスのウェル内の生体試料中の酵素を封入するために、シーリングオイルを滴下する。シーリングオイルとしては、通常マイクロデバイスにおいて試料の封入用途で用いられる公知のものであればよく、例えば、フッ素系オイル（ＦＣ－４０等）、脂肪族炭化水素（ヘキサデカン等）等が挙げられる。

［工程３］
　次いで、蛍光スキャナー、蛍光顕微鏡等を用いて、マイクロデバイスのウェル内の蛍光を検出する。検出された蛍光強度から、酵素活性を評価することができる。

　ここで、酵素活性が検出されたマイクロデバイスのウェル内にどのような酵素が含まれているかは、例えば、別途調整した目的タンパク質との酵素活性パターンとの比較等により決定することができる。

　本発明の検出方法１は、さらに蛍光イメージング手段を用いて蛍光応答を観測することを含むことができる。蛍光応答を観測する手段は、広い測定波長を有する蛍光光度計を用いることができるが、前記蛍光応答を２次元画像として表示可能な蛍光イメージング手段を用いて可視化することもできる。蛍光イメージングの手段を用いることによって、蛍光応答を二次元で可視化できるため、標的酵素を瞬時に視認することが可能となる。蛍光イメージング装置としては、当該技術分野において公知の装置を用いることができる。なお、場合によって、紫外可視吸光スペクトルの変化（例えば、特定の吸収波長における吸光度の変化）によって上記測定対象試料と蛍光プローブの反応を検出することも可能である。

　本発明の検出方法１の１つの態様においては、１種類の本発明の蛍光プローブと、生体試料中の複数の酵素とを接触させることにより、生体試料中の複数の酵素１分子に対して、１種類の本発明の蛍光プローブの蛍光強度を検出し、複数の酵素１分子同士の酵素活性を比較することができる。上記工程１において、１分子の酵素と複数の蛍光プローブが含まれるウェル（例えば、複数のウェル）を用意することにより、酵素１分子の酵素活性を測定することが可能となる。

３．バイオマーカーの検出
　本発明の蛍光プローブは、Ｒ_０又はＲ^１０して導入した官能基の種類に応じて、１種以上の加水分解酵素活性の検出用の蛍光プローブとして用いることができるが、更に、本発明の蛍光プローブを、所定の疾患に特異的なバイオマーカーの検出に用いることにより疾患の診断をおこなうことができる。
　即ち、本発明のもう１つの実施態様は、本発明の蛍光プローブを用いて、１分子の加水分解酵素活性を検出することにより病態を診断する方法である（以下「本発明の診断方法」とも言う）。
　本発明の診断方法の非限定的な例を以下に示す。

　即ち、本発明のもう１つの実施態様は、生体試料においてＣＤ１３の活性を検出する方法であって、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、本発明の化合物（以下「本発明の化合物Ａ」とも言う）と生体試料とを水溶液中で接触させることを含み、水溶液における蛍光強度の増加は、ＣＤ１３の活性の存在を示す、前記方法ある。

　本発明のもう１つの実施態様は、マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、本発明の化合物を含む蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法である（以下「本発明の診断方法１」とも言う）。

　また、本発明のもう１つの態様は、（ａ）マイクロデバイスを用いて、被検者から得られた生体試料を、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、本発明の化合物を含む蛍光プローブと接触させる工程、及び（ｂ）前記蛍光プローブと接触させた生体試料の蛍光強度を測定することを含む、すい臓がんを診断する方法、又は、生体試料が由来する被検者がすい臓がんである可能性を予測する方法である（以下「本発明の診断又は予測方法１」とも言う）。

　本発明の診断方法１、本発明の診断又は予測方法１においては、本発明の化合物Ａにより１分子のＣＤ１３の酵素活性を検出することを基本にしている。

　本発明のもう１つの実施態様は、生体試料においてＤＰＰ４の活性を検出する方法であって、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミン酸などのアミノ酸残基を表す）である、本発明の化合物（以下「本発明の化合物Ｂ」とも言う）と生体試料とを水溶液中で接触させることを含み、水溶液における蛍光強度の増加は、ＤＰＰ４の活性の存在を示す、前記方法ある。

　本発明のもう１つの実施態様は、マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミン酸などのアミノ酸残基を表す）である、本発明の化合物を含む蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法である（以下「本発明の診断方法２」とも言う）。

　また、本発明のもう１つの態様は、（ａ）マイクロデバイスを用いて、被検者から得られた生体試料を、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミン酸などのアミノ酸残基を表す）である、本発明の化合物を含む蛍光プローブと接触させる工程、及び（ｂ）前記蛍光プローブと接触させた生体試料の蛍光強度を測定することを含む、すい臓がんを診断する方法、又は、生体試料が由来する被検者がすい臓がんである可能性を予測する方法である（以下「本発明の診断又は予測方法２」とも言う）。

　本発明の診断方法２、本発明の診断又は予測方法２においては、本発明の化合物Ｂにより１分子のＤＰＰ４の酵素活性を検出することを基本にしている。

　本発明のもう１つの態様は、マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、本発明の化合物を含む蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出すること、及び
　マイクロデバイスを用いて、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミン酸などのアミノ酸残基を表す）である、本発明の化合物を含む蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法である。

　本発明の診断方法１（又は２）、本発明の診断又は予測方法１（又は２）においては、生体試料と本発明の化合物Ａ（又はＢ）を含む溶液を調製し、当該溶液をマイクロデバイスへ添加し、添加した溶液を各ウェルへと封入し、溶液を封入したマイクロデバイスをインキュベーションし、その後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定することにより行うことができる。

　本発明の本発明の診断方法１、本発明の診断又は予測方法１は、具体的には、例えば以下のように行われるが、これに限定されるものではない。
　本発明の化合物Ａを、所定の濃度（例えば、１００μＭ）となるようにアッセイバッファーで希釈する。アッセイバッファーの組成は適宜に定めることができるが、例えば、１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭＭｇＣｌ_２、１　ｍＭ　ＣａＣｌ_２、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００であることができる。
　次に、被検者（すい臓がん患者、健常者の何れも含む）から採取した生体試料、好ましくは、血液試料（例えば、血清試料、又は血漿試料）を上記のアッセイバッファーで希釈し（例えば、１０，０００倍程度）、本発明の化合物Ａの希釈液と所定の割合（例えば、等量）で混合する。
　次に、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
　溶液を封入したマイクロデバイスを所定の条件（例えば、３７℃で２時間）インキュベーションし、その後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定する。
　検出された蛍光強度が所定の強度以上（例えば、２５００ＡＵ以上）のウェル、すなわちＣＤ１３が封入されていると考えられるウェルの数を計測する。

　ここで、上記で計測したＣＤ１３が封入されていると考えられるウェルの数から、生体試料が由来する被検者がすい臓がんであると診断、すい臓がんである可能性を予測するには、本発明の化合物Ａを用いてＣＤ１３活性測定を行った結果に基づいて判定を行うＲＯＣ曲線を作成し、かかるＲＯＣ曲線によってすい臓がんの可能性を判定する。

　本発明の診断方法２、本発明の診断又は予測方法２は、具体的には、例えば以下のように行われるが、これに限定されるものではない。
　本発明の化合物Ｂを、所定の濃度（例えば、１００μＭ）となるようにアッセイバッファーで希釈する。アッセイバッファーの組成は適宜に定めることができるが、１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００であることができる。
　次に、被検者（すい臓がん患者、健常者の何れも含む）から採取した生体試料、好ましくは、血液試料（例えば、血清試料、又は血漿試料）を上記のアッセイバッファーで希釈し（例えば、２，５００倍程度）、本発明の化合物Ｂの希釈液と所定の割合（例えば、等量）で混合する。
　次に、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
　溶液を封入したマイクロデバイスを所定の条件（例えば、２５℃で２時間）インキュベーションし、その後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定する。
　各ウェルの蛍光強度に基づいて作成したヒストグラムを２つの正規分布からなる曲線に近似する。近似曲線の極小値よりも蛍光強度の高いウェルを高活性群、蛍光強度の低いウェルを低活性群とし、これらの合計のうち高活性群の占める割合を計測する。

　ここで、上記で計測したＤＰＰ４が封入されていると考えられるウェルの数から、生体試料が由来する被検者がすい臓がんであると診断、すい臓がんである可能性を予測するには、本発明の化合物Ｂを用いてＤＰＰ４活性測定を行った結果に基づいて判定を行うＲＯＣ曲線を作成し、かかるＲＯＣ曲線によってすい臓がんの可能性を判定する。

　本発明の化合物Ａの非限定的な例は、以下の化合物である。

　本発明の化合物Ｂの非限定的な例は、以下の化合物である。

４．本発明の化合物２及び３
　本発明のもう１つの実施態様は、以下の（１）～（５）のいずれかの式で表される化合物又はその塩である（以下「本発明の化合物２」とも言う）。

　式（１）～（５）において、Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択される。
　アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成している。
　カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成している。
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。
　アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、Ｔ－Ｏ－の詳細については、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）について詳述した通りである。

　本発明のもう１つの実施態様は、以下の（６）で表される化合物又はその塩である（以下「本発明の化合物３」とも言う）。

　式（６）において、Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択される。
　アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成している。
　カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成している。
　Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。
　アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、Ｔ－Ｏ－の詳細については、一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）について詳述した通りである。

　本発明の化合物２の具体例について以下に挙げるが、これらに限定されるものではない。

　本発明の化合物３の具体例について以下に挙げるが、これらに限定されるものではない。

　式（１）～（６）で表される化合物は、特に断らない限り、その互変異性体、幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）、鏡像異性体等の立体異性体も含まれる。すなわち、式（１）～（６）で表される化合物中に、１個又は２個以上の不斉炭素が含まれる場合、不斉炭素の立体化学については、それぞれ独立して（Ｒ）体又は（Ｓ）体のいずれかをとることができ、該誘導体の鏡像異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがある。

　式（１）～（６）で表される化合物の製造方法は特に限定されないが、式（１）～（６）に包含される化合物のうち代表的化合物についての合成方法を本明細書の実施例に具体的に示した。当業者は本明細書の実施例及び下記のスキームを参照しつつ、必要に応じて出発原料、反応試薬、反応条件などを適宜改変ないし修飾することにより、式（１）～（６）に包含される化合物を製造することができる。

５．中間体
　一般式（ＩＩＩ）で表される化合物又はその塩は、例えば、本発明の化合物の製造用中間体として有用である。すなわち、本発明によれば一般式（ＩＩＩ）で表される化合物又はその塩の本発明の化合物の製造のための使用が提供される。

　一般式（ＩＶ）で表される化合物又はその塩は、例えば、本発明の化合物の製造用中間体として有用である。すなわち、本発明によれば一般式（ＩＶ）で表される化合物又はその塩の本発明の化合物の製造のための使用が提供される。

　本発明によればまた、一般式（Ｖ）で表される化合物又はその塩が提供される。この化合物は、例えば、本発明の化合物の製造用中間体として有用である。すなわち、本発明によれば一般式（Ｖ）で表される化合物又はその塩の本発明の化合物の製造のための使用が提供される。

　一般式（Ｖ）において、Ａは好ましくはフェニル又はチオフェニルを表す。Ｒは好ましくは－ＣＯＯＨ又は－ＳＯ_３Ｈを表す。Ａがフェニル基である場合には、Ｒは好ましくは－ＳＯ_３Ｈを表す。Ａがチオフェニル基である場合には、Ｒは好ましくは－ＣＯＯＨを表す。

　一般式（Ｖ）においてはまた、ｎは好ましくは１である。Ｒ^８及びＲ^９は好ましくは、水素原子を表す。Ｘは好ましくは、酸素原子又はＳｉ（―ＣＨ_３）_２を表す。

　一般式（Ｖ）で表される化合物又はその塩のより好ましい例としては、Ａがフェニル又はチオフェニルを表し、Ｒが－ＣＯＯＨ又は－ＳＯ_３Ｈを表し、ｎが１であり、Ｒ^８及びＲ^９が水素原子を表し、Ｘが酸素原子又はＳｉ（―ＣＨ_３）_２を表す化合物又はその塩が挙げられる。一般式（Ｖ）で表される化合物又はその塩の特に好ましい例としては、Ａがフェニル又はチオフェニルを表し、Ｒが－ＣＯＯＨ又は－ＳＯ_３Ｈを表し、ｎが１であり、Ｒ^８及びＲ^９が水素原子を表し、Ｘが酸素原子又はＳｉ（―ＣＨ_３）_２を表し、Ａがフェニル基である場合には、Ｒは－ＳＯ_３Ｈを表し、Ａがチオフェニル基である場合には、Ｒは－ＣＯＯＨを表す化合物又はその塩が挙げられる。

６．蛍光プローブの選択方法
　本発明によれば、本発明の蛍光プローブから、使用適性が優れた蛍光プローブを選択する方法が提供される。蛍光プローブの使用適性を評価する指標としては前記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）が挙げられる。すなわち、本発明の選択方法は、本発明の蛍光プローブを１種又は複数種準備すること、並びに（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の条件を満たす蛍光プローブを選択することを少なくとも含むものである。（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）はマイクロデバイスにおける使用適性を評価する指標であることから、本発明の選択方法により選択された蛍光プローブはマイクロデバイス用の蛍光プローブとして特に好ましく使用することができる。

　（Ａ）では、シーリングオイルへの溶解度測定試験（２５℃）を実施し、被験化合物のヘキサデカンへの溶解度が０．４μＭ以下又は０．３μＭ以下（好ましくは０．２μＭ以下）の場合に（Ａ）を満たすと判定できる。シーリングオイルへの溶解度測定試験は、シーリングオイルであるヘキサデカン１００μＬに対して、被験化合物の１０ｍＭのＤＭＳＯ溶液を１μＬ添加し、室温（２５℃）で１分間ソニケーションして懸濁させた場合に、ヘキサデカンへ移行した被験化合物の濃度を測定することにより実施することができる。（Ａ）のシーリングオイルへの溶解度測定試験は、具体的には実施例１９に従って実施することができる。

　（Ｂ）では、マイクロデバイスにおける蛍光強度測定試験を実施し、ウェル中心領域の蛍光強度に対するウェル周縁領域の蛍光強度の比率が０．７以下又は０．６以下（好ましくは０．５以下）の場合に（Ｂ）を満たすと判定できる。マイクロデバイスにおける蛍光強度測定は、マイクロデバイスに被験化合物を添加して化合物が封入されたウェルの像を顕微鏡で撮影し、中心領域の蛍光強度に対する周縁領域の蛍光強度の比率を測定することにより実施することができる。中心領域と周縁領域はウェルの半径を１とした場合に、次の比率で特定することができる。中心領域：中心から半径０．４８～０．６３までの領域（領域１）、好ましくは中心から半径０．５３～０．５８までの領域（領域２）。周縁領域：ウェル全体のうち領域１を除く領域、好ましくはウェル全体のうち領域２を除く領域。（Ｂ）のマイクロデバイスにおける蛍光強度測定試験は、具体的には実施例２０に従って実施することができる。

　（Ｃ）では、マイクロデバイス及びキュベットにおいて被験化合物の酵素分解試験を実施してシグナル／ノイズ比を算出し、キュベットにおける酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第２の比）に対する、マイクロデバイスにおける酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第１の比）の比率が０．２以上、０．３以上又は０．４以上（好ましくは０．５以上）の場合に（Ｃ）を満たすと判定できる。シグナル／ノイズ比の算出は、酵素反応前後の蛍光スペクトルを比較し、蛍光強度が最大となる波長での蛍光強度の比を酵素分解物のシグナル／ノイズ比として算出することができる。（Ｃ）のマイクロデバイス及びキュベットにおけるシグナル／ノイズ比の比率の測定及び算出は、具体的には実施例２１に従って実施することができる。

　なお、本発明においては、本発明の化合物並びに一般式（ＩＩＩ）の化合物及びその塩のうち、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の少なくとも１つ、少なくとも２つ又はすべてを満たすものを好ましくは提供することができる。

　以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
［試料及び測定方法］
　有機合成のための試薬及び溶媒は東京化学工業（ＴＣＩ）、和光純化工業又はアルドリッチケミカル社から供給され、それ以上精製することなく使用した。
　プロトン核磁気共鳴（^１Ｈ　ＮＭＲ）スペクトルをＪＥＯＬ　ＪＭＮ－ＬＡ４００装置で記録した。
　質量スペクトルは、ＪＥＯＬ　ＪＭＳ－Ｔ１００ＬＰ　ＡｃｃｕＴＯＦＴＭ　ＬＣ－ｐｌｕｓ４Ｇで測定した。

［合成実施例１］
ｓＨＭＲＧの合成例

（１）化合物１の合成

　乾燥したフラスコに、濃硫酸２．８８ｍＬ（５４．１ｍｍｏｌ）を入れ、アルゴン雰囲気下、０℃でトリフルオロ酢酸無水物１５．７ｍＬ（１１３．６ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。その後室温に戻して、３時間撹拌した。次いで、溶液が一様になったら、２－ブロモ－ベンズアルデヒド６．２５ｍＬ（５４．１ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ加え、その後室温に戻し、１７時間攪拌した。その後０℃で水を加えた。次いで、減圧下でＴＦＡＡ、水を留去した。次いで、残渣をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製した。溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥して、化合物１（９８２ｍｇ、３．７１ｍｍｏｌ、収率６．８％）を得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ 10.17 (s, 1H), 7.98 (m, 1H), 7.74 (m, 2H).
¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 192.0, 148.9, 134.3, 133.2, 133.1, 127.4, 126.1.
HRMS (ESI^-): Calcd. for [M-H]^-, 262.90137, Found, 262.89719 (-4.17 mmu).

（２）化合物２の合成

　乾燥したフラスコに、オルトギ酸トリイソプロピル２．８　ｍＬ（１２．８ｍｍｏｌ）に溶解させた化合物１　３３８ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で１時間攪拌した。次いで、減圧下で溶媒を留去した。次いで、得られた固体をカラムクロマトグラフィー（シリカ；酢酸エチル／ヘキサン＝０／１００＞２０／８０）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物２を３５７ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ、収率６８％）得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲ及び高分解質量分析（ＨＲ－ＭＳ）計による分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.22 (m, 1H), 7.68 (m, 2H), 4.76 (sep, J = 5.9 Hz, 1H), 3.89 (sep, J = 6.2 Hz, 2H), 1.28 (d, J = 5.9 Hz, 6H), 1.18 (dd, J = 13.0 Hz, 6.2 Hz, 12H)
¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 141.2, 137.0, 133.7, 128.7, 128.5, 128.1, 97.9, 69.3, 23.0, 22.9, 22.5.
HRMS (ESI⁺): Calcd. for [M+Na]⁺, 431.05038, Found, 431.04944 (-0.94 mmu).

（３）化合物３の合成

　乾燥したフラスコに、化合物２を２１３ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）入れて、脱水テトラヒドロフランに溶解させ、アルゴン雰囲気下、－７８℃で３０分間攪拌した。次いで、ここに１．３Ｍセカンダリーブチルリチウム０．４ｍＬ（０．５２ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、アルゴン雰囲気下、－７８℃で３０分間攪拌した。次いで、さらに反応液に、脱水テトラヒドロフランに溶解させた３，６－ビス（ジフェニルメチレンアミノ）キサントン４５ｍｇ（０．０８１ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた後、アルゴン雰囲気下、室温で１．５時間攪拌した。次いで、ＴＦＡと水を反応液に加え、室温で３．５時間攪拌した。次いで、減圧下で溶媒を留去した。次いで、得られた固体をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製し、溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥して、化合物３を９ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ、収率２８％）得た。

（４）化合物４の合成

　乾燥したフラスコに、化合物３を１３０ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）入れて、メタノールに溶解させ、０℃に冷却したのち、水素化ホウ素ナトリウムを９０ｍｇ（２．３８ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、３０分間攪拌した。次いで、減圧下で溶媒を留去したのち、得られた固体をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１Ｍ　ＴＥＡＡ（トリエチルアミン酢酸塩）含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１Ｍ　ＴＥＡＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製したのち、Ｓｅｐ－Ｐａｋ　Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ）で脱塩を行った。次いで、溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥して、化合物４を６８ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ、収率５２％）得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲ及び高分解質量分析（ＨＲ－ＭＳ）計による分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.91 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.39 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 6.29 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 2H), 5.42 (s, 1H), 4.61 (s, 2H)
¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 151.4, 147.5, 142.7, 138.8, 130.5, 129.8, 125.1, 124.7, 121.2, 113.2, 110.9, 102.0, 46.5, 7.9
HRMS (ESI⁺): Calcd. for [M+H]⁺, 399.10147m Found, 399.09779 (-3.68 mmu).

［合成実施例２］
ｓＨＭＲＧベースのペプチダーゼ・プロテアーゼプローブの合成例
　以下の表１に示すｓＨＭＲＧベースのペプチダーゼ・プロテアーゼプローブ（ＰＢ１０１～１１１）については、ｓＨＭＲＧを還元した化合物（化合物４）を用いて以下の手順で合成した。

1. 化合物４（１１μｍｏｌ）、ＤＭＴ－ＭＭ（３μｍｏｌ）、及びＢｏｃ－保護アミノ酸又はＦｍｏｃ－保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチド　（５μｍｏｌ）を１．５ｍＬの試験官中で混合し、３０μＬのＮＭＰに溶解した。
2. 反応混合物を４０℃で攪拌した。
3. クロラニル（２３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を攪拌した。
4. 溶液をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製し、溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥した。
5. 原料がＦｍｏｃ保護であった場合、得られた固体にピぺリジン５０μＬとＮＭＰ　５０μＬを加え、反応混合液を攪拌した。原料がＦｍｏｃ保護でない場合、この工程は経ず、工程６へと進んだ。
6. １０００μＬのＴＦＡを加え、反応混合物を攪拌した。
7. 溶液をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製し、溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥し、目的の化合物を得た。

　上記化合物の機器データは以下の通りである。
HPLC condition: A/B = 100/0 > 0/100 (5 min), A = 0.1% Formic acid H₂O, B = 0.1%
Formic acid CH₃CN (A-sHMRG, M-sHMRG: a mixture of diastereomers)

［合成実施例３］
ｓＳｉＲの合成例１

（１）化合物２の合成

　乾燥したフラスコに、アリルブロマイド７．７ｇ（６３．８ｍｍｏｌ）、３－ブロモアニリン５．０ｇ（２９．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム８．０ｇ（５８．０ｍｍｏｌ）を入れ、アセトニトリル６０ｍＬに溶解し、８０℃でオーバーナイトで攪拌した。次いで、室温に戻して綿で濾過し炭酸カリウムを除いた。次いで、酢酸エチルで洗浄したのち減圧下で溶媒を留去した。次いで、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ヘキサン１００％）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物２を７．５７　ｇ（３０．０ｍｍｏｌ、収率４７％）得た。

（２）化合物３の合成

　乾燥したフラスコに、化合物２を７．５７ｇ（３０．０ｍｍｏｌ）入れて、脱水テトラヒドロフランに溶解させ、アルゴン雰囲気下、－７８℃で３０分間攪拌した。次いで、ここに１．３Ｍセカンダリーブチルリチウム２３．１ｍＬ（３０．０ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、アルゴン雰囲気下、－７８℃で３０分間攪拌した。次いで、さらに反応液に、ジクロリジメチルシラン１７９４μＬ（１５．０２ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた後、アルゴン雰囲気下、室温で１．５時間攪拌した。次いで、２Ｎ　ＨＣｌａｑ．１０ｍＬとＮａＨＣＯ_３ａｑ．を加えて反応液を中和し、ジクロロメタンで抽出、飽和食塩水で洗浄したのち、減圧下で溶媒を留去した。次いで、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ジクロロメタン／ヘキサン）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物３を４．０ｇ（９．９３ｍｍｏｌ、収率６６％）得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.20-7.16 (m, 2H), 6.88-6.84 (m, 4H), 6.71-6.68 (m, 2
H), 5.87-5.78 (m, 4H), 5.17-5.11 (m, 8H), 3.89 (d, J = 5.0 Hz, 8H), 0.48 (s, 6H)
¹³C-NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 148.0, 139.0, 134.3, 128.5, 122.3, 118.2, 116.2, 113.3, 53.0, -2.3

（３）化合物４の合成

　乾燥したフラスコに、化合物３を１．０　ｇ（２．４８ｍｍｏｌ）、４－ホルミルベンゼン－１，３－ジスルホン酸二ナトリウム塩を７６９　ｍｇ（２．４８ｍｍｏｌ）、酢酸を５ｍＬ入れて、アルゴン雰囲気下、１００℃で１時間攪拌した。次いで、ここに尿素１１２ｍｇ（１．８６ｍｍｏｌ）を加え、１８時間攪拌した。次いで、減圧下で酢酸を留去し、メタノール１０ｍＬと水素化ホウ素ナトリウムを９４ｍｇ（２．４８ｍｍｏｌ）加えて０℃で攪拌した。次いで、減圧下で溶媒を留去し、得られた残渣をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９０／１０＞６０／４０、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製し、溶離液をエバポレートした後、得られた残渣にメタノール１０ｍＬ、ジクロロメタン１０ｍＬを加え、クロラニル６１０ｍｇ（２．４８ｍｍｏｌ）を加えて室温で５時間攪拌した。次いで、減圧下で溶媒を留去したのち、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ジクロロメタン／メタノール）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物４を９９０ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ、収率６２％）
得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.62 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 7.8, 1.8 Hz, 1H), 7.26-7.24 (m, 3H), 7.07 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 6.72 (dd, J = 9.6, 2.7 Hz, 2H), 5.96-5.87 (m, 4H), 5.27-5.17 (m, 8H), 4.27 (d, J = 4.6 Hz, 8H), 0.54(s, 3H), 0.52 (s, 3H)
¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 170.5, 153.9, 148.4, 145.7, 144.1, 142.7, 138.1, 131.4, 130.6, 128.7, 126.8, 125.6, 120.9, 116.7, 113.8, 53.2, -2.5, -3.11

（４）化合物５の合成

　乾燥したフラスコに、化合物４を５３ｍｇ（０．０８１ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム３１ｍｇ（０．８１ｍｍｏｌ）を入れて、メタノール１ｍＬに溶解し、室温で混合した。次いで、減圧下で溶媒を留去し、全量の３分の１（０．０２７ｍｍｏｌ相当）を次反応に用いた。得られた残渣に対して、酢酸１００μＬ（１．７５ｍｍｏｌ）、水２ｍＬを加え、アスピレーターで脱気後、パラジウム炭素触媒を加えて再度脱気し、アルゴン雰囲気下、９０℃で１７時間攪拌した。次いで、セライト濾過でパラジウム炭素触媒を除き、減圧下で溶媒を留去した。次いで、得られた残渣をＨＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９０／１０＞５０／５０、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物５を０．２ｍｇ（０．４１μｍｏｌ、収率１．５％）を得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。
¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD/D₂O = 1:1) δ 8.48 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.59 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 2H), 0.53 (s, 3H), 0.52 (s, 3H)

［合成実施例４］
ｓＳｉＲの合成例２

（１）化合物７の合成

　乾燥したフラスコに、濃硫酸１．１ｍＬ（２０．８ｍｍｏｌ）を入れ、アルゴン雰囲気下、０℃でトリフルオロ酢酸無水物６．０ｍＬ（４３．７ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。その後室温に戻して、３．５時間撹拌した。次いで、溶液が一様になったら、２－メチルベンズアルデヒド２．５ｍＬ（２０．８ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ加え、その後室温に戻し、２０時間攪拌した。その後０℃で水を加えた。次いで、減圧下でトリフルオロ酢酸、水を留去した。次いで、残渣をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製した。溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥して、化合物７（２．９ｇ、１４．５　ｍｍｏｌ、収率７０％）を得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CD₃CN) δ 10.27 (s, 1H), 8.22 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H)

（２）化合物８の合成

　乾燥したフラスコに、化合物３　１．７７ｇ（４．３４ｍｍｏｌ）、化合物７　８６８ｍｇ（４．３４　ｍｍｏｌ）、尿素１３０ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）、酢酸２０ｍＬを入れ、アルゴン雰囲気下、９０℃で１７時間攪拌した。次いで、減圧下で溶媒を留去したのち、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ジクロロメタン／メタノール）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物８を１２２０ｍｇ（２．０９　ｍｍｏｌ、収率４８％）得た。

（３）化合物９の合成

　乾燥したフラスコに、化合物８　３５０ｍｇ（０．６１６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルバルビツール酸５７７ｍｇ（３．７０ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン２０ｍＬに溶解したのち、アスピレーターで脱気した。次いで、ここにテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）２８ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）を加え、再度アスピレーターで溶媒を脱気したのち、アルゴン雰囲気下、３５℃で１時間攪拌した。次いで、減圧下で溶媒を留去したのち、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ジクロロメタン／メタノール）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物９を６０ｍｇ（０．１４２ｍｍｏｌ、収率２３％）得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.60 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.59 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 2H), 5.59 (s, 1H), 2.25 (s, 3H), 0.58 (s, 3H), 0.36 (s, 3H)
¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 148.0, 145.3, 143.1, 139.2, 138.7, 134.6, 131.9, 130.8, 129.1, 124.0, 120.4, 118.4, 51.1, 20.3, -0.4, -0.8

（４）化合物１０の合成

　乾燥したフラスコに、化合物９　２１１ｍｇ（０．４９７ｍｍｏｌ）、クロラニル　２４６ｍｇ（１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ４ｍＬ、ジクロロメタン４ｍＬを加え、室温で５分間攪拌した。次いで、反応液をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ジクロロメタン／メタノール）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物１０を１６８ｍｇ　（０．３９８ｍｍｏｌ、収率８０％）得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.88 (dd, J = 8.0, 1.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 9.4 Hz, 2H), 6.53 (dd, J = 9.4, 2.5 Hz, 2H), 2.05 (s, 3H), 0.50 (s, 3H), 0.49 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ 168.8, 157.2, 149.0, 142.6, 142.3, 138.7, 138.1, 130.1, 126.9, 126.1, 123.3, 115.7, 109.5, 18.0, -2.8, -3.1

［合成実施例５］
ｓＳｉＲの合成例３

（１）化合物１１の合成

　乾燥したフラスコに、４－ブロモ－３－メチルベンゼンスルホニルクロライドを１６２０ｍｇ（６ｍｍｏｌ）と４－ジメチルアミノピリジン７３２ｍｇ（６ｍｍｏｌ）、２－プロパノール３０ｍＬ、ピリジン１２ｍＬを入れ、室温で２時間攪拌した。次いで、溶媒を減圧下で留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカ；酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物１１を１００８ｍｇ（３．４４ｍｍｏｌ、収率５７％）得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.75 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 4.71 (sep, J = 5.9 Hz, 1H), 2.47 (s, 3H), 1.28 (d, J = 5.9 Hz, 6H)

（２）化合物１２の合成

　乾燥したフラスコに、化合物１１を６６７ｍｇ（２．２７ｍｍｏｌ）入れて、脱水テトラヒドロフランに溶解させ、アルゴン雰囲気下、－７８℃で３０分間攪拌した。次いで、ここに１．３Ｍセカンダリーブチルリチウム１．７５ｍＬ（２．２７ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、アルゴン雰囲気下、－７８℃で３０分間攪拌した。次いで、さらに反応液に、脱水テトラヒドロフランに溶解させたＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラアリルジアミノ－Ｓｉ－キサンテン２００ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた後、アルゴン雰囲気下、室温で１．５時間攪拌した。次いで、０．１Ｎ　ＨＣｌａｑ．を反応液に加え、室温で攪拌した。次いで、ジクロロメタンで抽出を行い、飽和食塩水で洗浄したのち、硫酸ナトリウムで脱水した。次いで、減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカ；ジクロロメタン／メタノール）で精製し、溶媒をエバポレートした。次いで、得られた残渣をメタノールに溶解させ、０℃に冷却したのち、水素化ホウ素ナトリウムを８．３ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、攪拌した。次いで、ジクロロメタンで抽出を行い、飽和食塩水で洗浄したのち、硫酸ナトリウムで脱水した。その後、減圧下で溶媒を留去した。次いで、得られた残渣に１，３－ジメチルバルビツール酸　７８ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）とテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）２３ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を加え、ジクロロメタン１０ｍＬに溶解したのち、アルゴン雰囲気下３５℃で３時間攪拌した。次いで、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和したのち、ジクロロメタンで抽出、飽和食塩水で洗浄を行った。次いで、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ；酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、溶離液をエバポレートすることで化合物１２を６ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ、収率２．９％）得た。
　得られた化合物の^１Ｈ－ＮＭＲによる分析結果を以下に示す。

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.66 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 2.1 Hz, 2H), 6.72 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.56 (dd, J = 8.2, 2.7 Hz, 2H), 5.62 (s, 1H), 4.75 (sep, J = 6.4 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 0.53 (s, 3H), 0.40 (s, 3H)

［合成実施例６］
ｓＳｉＲベースのペプチダーゼ・プロテアーゼプローブの合成例
　表３に示すｓＳｉＲベースのペプチダーゼ・プロテアーゼプローブ（ＰＢ２０１～２１１）については、ｓＳｉＲを還元した化合物（化合物９又は化合物１２）を用いて以下の手順で合成した。

1. 化合物９又は化合物１２（１１．８μｍｏｌ）、ＣＯＭＵ（４．７μｍｏｌ）、及びＢｏｃ－保護アミノ酸又はＦｍｏｃ－保護アミノ酸又はＮ末端保護ペプチド（４．７μｍｏｌ）を１．５ｍＬの試験官中で混合し、６０μＬのＤＭＦに溶解した。
2. 反応混合物を室温で攪拌した。
3. クロラニル（２３．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を攪拌した。
4. 溶液をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製し、溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥した。
5. 原料がＦｍｏｃ保護であった場合、得られた固体にピぺリジン５０μＬとＮＭＰ　５０μＬを加え、反応混合液を攪拌した。原料がＦｍｏｃ保護でない場合、この工程は経ず、工程６へと進んだ。
6. １０００　μＬのＴＦＡを加え、反応混合物を攪拌した。
7. 溶液をＭＰＬＣ（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ＴＦＡ含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で精製し、溶離液をエバポレートした後、生成物を凍結乾燥し、目的の化合物を得た。

　上記化合物の機器データを以下に示す。
HPLC condition: A/B = 95/5 > 5/95 (5 min), A = 0.1% Formic acid H₂O, B = 0.1% Formic acid CH₃CN.

［合成実施例７］

化合物１３の合成

　こちらの合成方法はTetrahedron, 2005, 61, 12, 3097-3105を参照して行う。
４－スルホフタル酸とレソルシノール、メタンスルホン酸を混合し、１３０℃で加熱して攪拌を行う。反応液に水を加え、析出した固体を水で洗浄し、減圧下で乾燥して目的の化合物を得る。

化合物１４の合成

　化合物１３をジクロロメタンに溶解し、アルゴン置換下で攪拌する。反応液にピリジンを加え、引き続いてトリフルオロメタンスルホン酸無水物を反応液に加える。反応液を２規定塩酸で洗浄したのち、ジクロロメタンで抽出を行う。溶液を硫酸ナトリウムで脱水したのち、エバポレートする。残渣をＭＰＬＣで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を凍結乾燥し、目的の化合物を得る。

化合物１５の合成

　化合物１４とトリイロプロピルオルトホルメートをトルエンに溶解して攪拌し、スルホン酸をトリイソプロピル保護する。反応液をエバポレートしたのち、残渣とＰｄ（ｄｂａ）_３－ＣＨＣｌ_３、キサントホス、ベンゾフェノンイミン、炭酸セシウムをトルエンに溶解し、攪拌する。その後ＴＦＡを添加して攪拌し、脱保護を行う。反応液をエバポレートしたのち、残渣をＭＰＬＣで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を凍結乾燥し、目的の化合物を得る。

化合物１６の合成

　化合物１６の合成はJ. Am. Chem. Soc. 2013, 135, 16, 6002-6005を参照して行う。化合物１５、Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡをＤＭＦに溶解して攪拌し、アミノ酸を縮合する。その後、ピぺリジンを加え、攪拌してＦｍｏｃ基を脱保護したのちに、トリフルオロ酢酸を加え、攪拌し、アミノ酸側鎖を脱保護する。反応溶液をＭＰＬＣで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を凍結乾燥し、目的の化合物を得る。

［合成実施例８］

（上記式中、ＭＯＭＣｌはクロロメチルメチルエーテル（Ｃｌ－ＣＨ_３－Ｏ－ＣＨ_３）を表し、－ＭＯＭはクロロメチルメチルエーテルの残基（－ＣＨ_３－Ｏ－ＣＨ_３）を表す。）

化合物１７の合成

　化合物１７～化合物２１の合成はNat Commun. 2015, 6,6463を参照して行う。化合物１３をＤＭＦに溶解し、炭酸カリウムを反応液に加える。その後、クロロメチルメチルエーテルを反応液に加え、攪拌する。反応液に酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、攪拌する。その後、反応液に水と８５％リン酸を加え、反応液のｐＨを３付近にする。酢酸エチル層を抽出したのち、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水する。反応液をエバポレートしたのち、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を減圧下で乾燥し、目的の化合物を得る。

化合物１８の合成

　化合物１７をＴＨＦに溶解したのち、ＬＡＨを反応液に加える。その後メタノールを反応液に加えて反応を停止し、エバポレートする。残渣をジクロロメタンに溶解し、ロッシェル塩水溶液で洗浄する。有機層を抽出し、硫酸ナトリウムで脱水したのち、エバポレートする。残渣をジクロロメタンに溶解し、クロラニルを添加して攪拌する。反応液を濾過したのち、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水する。溶液をエバポレートして得られた残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を減圧下で乾燥し、目的の化合物を得る。

化合物１９の合成

　化合物１８をジクロロメタンに溶解し、反応液にピリジンを加える。その後ジクロロメタンに溶解したトリフルオロメタンスルホン酸無水物を反応液に添加し、攪拌する。反応液をエバポレートし、得られた残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を減圧下で乾燥し、目的の化合物を得る。

化合物２０の合成

　化合物１９、Ｐｄ_２（ｄｂａ_３）－ＣＨＣｌ_３、キサントホス、炭酸セシウムをトルエンに溶解し、アルゴン置換下で攪拌する。ベンゾフェノンイミンを添加して攪拌したのち、反応液をジクロロメタンに溶解し、セライトで濾過をする。ろ液をエバポレートしたのち、得られた残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を減圧下で乾燥し、目的の化合物を得る。

化合物２１の合成

　化合物２０をジクロロメタンに溶解し、１０％ＴＦＡ／水を加えて攪拌する。その後反応液を１Ｍ　ＮａＯＨ水溶液で塩基性にしたのち、ジクロロメタンで抽出する。溶液を硫酸ナトリウムで脱水したのち、エバポレートする。得られた残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を減圧下で乾燥し、目的の化合物を得る。

化合物２２の合成

　化合物２１、Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡをＤＭＦに溶解して攪拌し、アミノ酸を縮合する。その後、ピぺリジンを加え、攪拌してＦｍｏｃ基を脱保護したのちに、トリフルオロ酢酸を加え、攪拌し、アミノ酸側鎖を脱保護する。反応溶液をＭＰＬＣで精製し、溶離液をエバポレートする。その後、生成物を凍結乾燥し、目的の化合物を得る。

＜ＬｏｇＰ値の測定＞
　次に、上記の合成実施例で得られた蛍光団母核の化合物（化合物４、５、１０）を含む以下の化合物について、脂溶性の指標（ＬｏｇＰ）とマイクロデバイス適合性の関係を調べた。結果を以下の表５に示す。

　ここで、ｌｏｇＰの測定のプロトコルを以下に示す。
（プロトコル）
（１）ＭｉｌｌｉＱ　５００μＬ、１－オクタノール５００μＬに対し、１０ｍＭ　Ｓｔｏｃｋ（ｅ＝９１，０００で計算）を４μＬ添加し、良く混合、その後遠心した。
（２）各層の溶液を５０μＬ回収し、ＭｅＯＨ　５０μＬを混合し、ＬＣ－ＭＳで解析した。
（３）各ピークの面積比から濃度比を算出し、ＬｏｇＰを算出した。
（ピーク面積は、無置換体：＠６００ｎＭ、２置換体：＠６２９ｎｍ、３置換体：＠６３８ｎｍ、４置換体：＠６５５ｎｍ）

　表５において、化合物は脂溶性の指標となるｌｏｇＰ値の実測値の順番に左→右に並べているが、脂溶性が高い化合物（具体的には、ＬｏｇＰ＞１．０１）では、マイクロデバイスへの吸着によるドーナツ状の蛍光像が得られており、マイクロデバイスを用いたアッセイへの適正が悪いことが示唆される。
　また、一番左の化合物については，スルホン酸を２つ有するものの、４つのベンジル基の置換により非常に脂溶性が高く、こちらもドーナツ状の蛍光像を与え、また共焦点顕微鏡を用いた計測ではデバイス外への漏れも観察されるなど、マイクロデバイスへの適用性は低かった。
　上記の結果は、観察可能な蛍光性を示す構造類縁体（蛍光プローブが酵素に代謝された後の構造のもの）である蛍光団母核の化合物を用いて検討を行ったものであるが、キサンテン骨格のアミノ基にアミノ酸の部分構造や、糖類の部分構造などを導入した本発明の化合物（蛍光プローブ）についても構造が類似していることから同様の傾向を示すと考えられる。

＜ＭｉＬｏｇＰ値の算出＞
　ＬｏｇＰ値を実測した化合物（表５）についてMolinspiration社が提供するプログラム：Molinspiration property engine v2022.08（https://www.molinspiration.com/cgi-bin/properties）を用いてＭｉＬｏｇＰ（Molinspiration calculated logP）値を算出した。結果は以下の表６に示す。

　表６に示される通り、本発明の化合物について、ＭｉＬｏｇＰ値は実測したＬｏｇＰ値とほぼ相関していた。すなわち、本発明の化合物はＬｏｇＰ値のみならず、ＭｉＬｏｇＰ値によっても特定できると考えられる。

　次に、マイクロデバイスにおける酵素活性アッセイに使用適性が認められた蛍光プローブ（実施例１～１６）についてＭｉＬｏｇＰ値を算出した、結果は以下の通りであった。
Ａｌａ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０１）：－１．８６
Ｌｅｕ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０２）：－０．５５
Ｍｅｔ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０４）：－１．４１
Ｔｙｒ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０５）：－０．８８
Ｌｙｓ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１１０）：－１．６２
ｇＧｌｕ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０６）：－２．２６
ＧＰ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０９）：－２．５２
Ａｃ－Ａｌａ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０７）：－１．５９
Ｓｕｃ－ＡＡＰＡ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１１１）：－３．０８
Ａｌａ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０１）：０．９５
Ｔｒｐ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０７）：２．５６
Ｇｌｕ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０６）：０．５４
Ａｒｇ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０９）：０．１３
Ａｃ－ＧＰ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０８）：０．６３
Ａｃ－ＬＲＧＧ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０３）：０．２３
ＥＰ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２１１）：０．２８

　上記蛍光プローブはマイクロデバイスにおける酵素活性アッセイに使用適性が認められていることから、ＭｉＬｏｇＰ値は本発明の化合物のマイクロデバイスにおける蛍光プローブとしての使用適性を判断する指標として利用可能であることが示された。

＜アッセイ実施例＞
ｓＨＭＲＧ、ｓＳｉＲベースのペプチダーゼ・プロテアーゼプローブを用いたヒト血液中の活性測定
　以下、ｓＨＭＲＧベースの蛍光プローブ（Ｘが酸素原子）と、ｓＳｉＲベースの蛍光プローブ（ＸがＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ））を用いた酵素活性アッセイを示すが、Ｘが酸素原子及びケイ素原子以外の原子である本発明の化合物についても、酵素反応に応答して蛍光プローブとして機能することは当業者が理解することができる。例えば、Ｘが炭素原子である蛍光プローブの例が国際公開２０１８／１５１２６０号公報に記載され、Ｘがゲルマニウム原子である蛍光プローブの例がCommunications Chemistry volume 2, Article number: 94 (2019)に記載されている。

［実施例１］
Ａｌａ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０１）を用いた酵素活性のアッセイ
以下の構造を有するＡｌａ－ｓＨＭＲＧを用いて酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＡｌａ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、０．１％　ＢＳＡ、１ｍＭ　ＤＴＴ、１ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＡｌａ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが１，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ａｌａ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例２］
Ｌｅｕ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０２）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＬｅｕ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＬｅｕ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで２，５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＬｅｕ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが５，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ｌｅｕ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例３］
Ｍｅｔ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０４）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＭｅｔ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
5. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＭｅｔ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
6. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＭｅｔ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが１，０００倍希釈である。
7. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
8. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ｍｅｔ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例４］
Ｔｙｒ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０５）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＴｙｒ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
9. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＴｙｒ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
10.次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＴｙｒ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが１，０００倍希釈である。
11.次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
12.溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ｔｙｒ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例５］
Ｌｙｓ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１１０）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＬｙｓ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＬｙｓ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで１０，０００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＬｙｓ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが２０，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ｌｙｓ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例６］
ｇＧｌｕ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０６）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するｇＧｌｕ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるｇＧｌｕ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はｇＧｌｕ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが１，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、ｇＧｌｕ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例７］
ＧＰ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０９）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＧＰ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. ペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＧＰ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで２，５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＧＰ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが５，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを２５℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、ＧＰ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例８］
Ａｃ－Ａｌａ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０７）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＡｃ－Ａｌａ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。
アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. ペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＡｃ－Ａｌａ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで２５０倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＡｃ－Ａｌａ－ｓＨＭＲＧが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが５００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ａｃ－Ａｌａ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例９］
Ｓｕｃ－ＡＡＰＡ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１１１）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＳｕｃ－ＡＡＰＡ－ｓＨＭＲＧを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. プロテアーゼ活性検出蛍光プローブであるＳｕｃ－ＡＡＰＡ－ｓＨＭＲＧを、２００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで２５０倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＳｕｃ－ＡＡＰＡ－ｓＨＭＲＧが１００μＭ、ヒト血漿サンプルが５００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ｓｕｃ－ＡＡＰＡ－ｓＨＭＲＧと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例１０］
Ａｌａ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０１）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＡｌａ－ｓＳｉＲを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイ
プロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＡｌａ－ｓＳｉＲを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで１０，０００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＡｌａ－ｓＳｉＲが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが２０，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ａｌａ－ｓＳｉＲと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例１１］
Ｔｒｐ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０７）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＴｒｐ－ｓＳｉＲを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＴｒｐ－ｓＳｉＲを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＴｒｐ－ｓＳｉＲが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが１，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ｔｒｐ－ｓＳｉＲと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例１２］
Ｇｌｕ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０６）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＧｌｕ－ｓＳｉＲを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＧｌｕ－ｓＳｉＲを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３　ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＧｌｕ－ｓＳｉＲが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが１，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ｇｌｕ－ｓＳｉＲと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例１３］
Ａｒｇ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０９）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＡｒｇ－ｓＳｉＲを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. アミノペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＡｒｇ－ｓＳｉＲを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ　７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＡｒｇ－ｓＳｉＲが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが１，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ａｒｇ－ｓＳｉＲと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例１４］
Ａｃ－ＧＰ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０８）を用いた酵素活性のアッセイ
　以下の構造を有するＡｃ－ＧＰ－ｓＳｉＲを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. ペプチダーゼ活性検出蛍光プローブであるＡｃ－ＧＰ－ｓＳｉＲを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで１０，０００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＡｃ－ＧＰ－ｓＳｉＲが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが２０，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ａｃ－ＧＰ－ｓＳｉＲと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例１５］
Ａｃ－ＬＲＧＧ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０３）を用いた酵素活性のアッセイの結果
　以下の構造を有するＡｃ－ＬＲＧＧ－ｓＳｉＲを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1. プロテアーゼ活性検出蛍光プローブであるＡｃ－ＬＲＧＧ－ｓＳｉＲを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2. 次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで１０，０００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＡｃ－ＬＲＧＧ－ｓＳｉＲが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが２０，０００倍希釈である。
3. 次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4. 溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、Ａｃ－ＬＲＧＧ－ｓＳｉＲと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

［実施例１６］
ＥＰ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２１１）を用いた酵素活性のアッセイの結果
　以下の構造を有するＥＰ－ｓＳｉＲを用いた酵素活性のアッセイを行った。アッセイプロトコルを以下に示す。

アッセイプロトコル
1.プロテアーゼ活性検出蛍光プローブであるＥＰ－ｓＳｉＲを、６０μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、０．１ｍＭ　ＤＴＴ、１５０μＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。
2.次いで、ヒト血漿サンプルを上記のアッセイバッファーで２，５００倍希釈し、プローブの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＥＰ－ｓＳｉＲが３０μＭ、ヒト血漿サンプルが５，０００倍希釈である。
3.次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
4.溶液を封入したマイクロデバイスを２５℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。ここで、ＥＰ－ｓＳｉＲと反応する酵素の封入されているウェルにおいて、蛍光強度の上昇がみられた。図２に蛍光顕微鏡画像を示す。

＜すい臓がんバイオマーカー検出の実施例＞
　次に、本発明の蛍光プローブを用いて、すい臓がんバイオマーカー検出の実験を行った。
［実施例１７］
ＣＤ１３の１分子酵素活性を利用したすい臓疾患（すい臓がん）の診断実験
　ＣＤ１３の１分子酵素活性を検出するために、反応点としてＭｅｔを結合させた（一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）において、－ＣＯ－Ｒ_０又は－ＣＯ－Ｒ^１０としてアラニン残基を導入）プローブを用いて、すい臓がんバイオマーカー検出への利用可能性を検証する実験を以下の手順で行った。

１．ＣＤ１３検出プローブであるＡｌａ－ｓＳｉＲを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は、１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００である。
２．次いで、すい臓がん患者３０名及び健常者３０名から採取したヒト血漿サンプルのそれぞれを上記のアッセイバッファーで１０，０００倍希釈し、Ａｌａ－ｓＳｉＲの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＡｌａ－ｓＳｉＲプローブが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが２０，０００倍希釈である。
３．次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
４．溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で２時間インキュベーションしたのち、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。図３に蛍光顕微鏡画像を示す。
５．輝度が２５００ＡＵ以上のウェル、すなわちＣＤ１３が封入されていると考えられるウェルの数について、健常者と比較してすい臓がん患者で有意な増加がみられた。図３にその結果を示す。

　上記のように、すい臓がん患者血漿中で活性が上昇している例があることが検出され，これによりすい臓がん患者を見分けることが可能であることが示された（図３）。
　具体的には、本実施例において、輝度が２５００ＡＵ以上のウェルの割合に基づいて決定したＣＤ１３の酵素活性に基づいて判定を行うＲＯＣ曲線を作成し、シグナルのウェルが３％というところでｔｈｒｅｓｈｏｌｄを引くと、感度２７％、特異度１００％となる（図３の右図）。このようなＲＯＣ曲線によってすい臓がんを判定することが可能である。

［実施例１８］
ＤＰＰ４の１分子酵素活性を利用したすい臓疾患（すい臓がん）の診断実験
　ＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出するために、反応点としてＧｌｙ－Ｐｒｏを結合させたプローブＧＰ－ｓＨＭＲＧを用いて、すい臓がんバイオマーカー検出への利用可能性を検証する実験を以下の手順で行った。

１．ＤＰＰ４検出プローブであるＧＰ－ｓＨＭＲＧを、１００μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈した。アッセイバッファーの組成は、１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１ｍＭ　ＤＴＴ、３ｍＭ　ＴｒｉｔｏｎＸ－１００である。
２．次いで、すい臓がん患者３０名及び健常者３０名から採取したヒト血漿サンプルのそれぞれを上記のアッセイバッファーで２，５００倍希釈し、ＧＰ－ｓＨＭＲＧの希釈液と等量で混合した。この時、両者の終濃度はＧＰ－ｓＨＭＲＧプローブが５０μＭ、ヒト血漿サンプルが５，０００倍希釈である。
３．次いで、両者の混合溶液をマイクロデバイスへと添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで、溶液を各ウェルへと封入した。
４．溶液を封入したマイクロデバイスを２５℃で２時間インキュベーションしたのち、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。図４に蛍光顕微鏡画像を示す。
５．検出された各ウェルの蛍光強度に基づいて作成したヒストグラムを２つの正規分布からなる曲線に近似する。近似曲線の極小値よりも蛍光強度の高いウェルを高活性群、蛍光強度の低いウェルを低活性群とし、これらの合計のうち高活性群の占める割合について、健常者と比較してすい臓がん患者で有意な増加がみられた。図４にその結果を示す。

　反応点として　Ｇｌｙ－Ｐｒｏを結合させたプローブにより、すい臓がん患者血漿中で１分子活性パターンが変化している例があることが検出され，これによりすい臓がん患者を見分けることが可能であることが示された（図４）
　具体的には、本実施例において、高活性群の占める割合に基づいて決定したＤＰＰ４の酵素活性に基づいて判定を行うＲＯＣ曲線を作成し、高活性群の割合が５５％というところでｔｈｒｅｓｈｏｌｄを引くと、感度３７％、特異度９７％となる（図４の右図）。このようなＲＯＣ曲線によってすい臓がんを判定することが可能である。

＜マイクロデバイスへの使用適性の評価＞
［実施例１９］
シーリングオイルへの溶解度の検討
　２種類の化合物Ｇｌｕ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０６／実施例１２）、ＧＰ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０９／実施例７）及び表５の左端の化合物「Tetra-benzyl」について、シーリングオイルへの溶解度を以下のように測定した。すなわち、シーリングオイルであるヘキサデカン１００μＬに対して、被験化合物の１０ｍＭのＤＭＳＯ溶液を１μＬ添加し、室温（２５℃）で１分間ソニケーションして懸濁させた。その後、溶液を３０秒間遠心したのち、５０μＬの上清を採取し、メタノール１００μＬと混合してヘキサデカン中に溶解している化合物を抽出した。その後、化合物を抽出したメタノール溶液をＵＰＬＣ（ウルトラパフォーマンス液体クロマトグラフィー）（溶離液：Ａ／Ｂ＝９５／５＞５／９５、Ａ：０．１％ギ酸含有１００％Ｈ_２Ｏ、Ｂ：０．１％ギ酸含有１００％ＣＨ_３ＣＮ）で分析し、当該ピークの面積から化合物のメタノール溶液中の濃度を算出した。ＵＰＬＣピーク面積を用いた溶液濃度の算出は、各化合物について複数の濃度の溶液を作成し測定した後、検量線を作成し（図５）、これに従って計算を行った。なお、ピーク面積は、Ｇｌｕ－ｓＳｉＲは５００ｎｍにおいて、ＧＰ－ｓＨＭＲＧは４５０ｎｍにおいて、化合物「Tetra-benzyl」は６５０ｎｍにおいてそれぞれ算出した。

　検量線に基づき、各化合物の分析結果から溶解度を以下のように算出した。
Ｇｌｕ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０６）：３回の試験によって、当該ピーク面積は１６３７±５２４（平均値±標準偏差）であったため、ヘキサデカンに対する溶解度は０．３０±０．０９６μＭと算出された。
ＧＰ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０９）：３回の試験によって、当該ピーク面積は７４０±７４（平均値±標準偏差）であったため、ヘキサデカンに対する溶解度は０．２７±０．０２６μＭと算出された。
化合物「Tetra-benzyl」：３回の試験によって、当該ピーク面積は１５２０１５±５４３０（平均値±標準偏差）であったため、ヘキサデカンに対する溶解度は２．７１±０．０９７μＭと算出された。

　Ｇｌｕ－ｓＳｉＲ及びＧＰ－ｓＨＭＲＧは実施例１２及び７においてマイクロデバイスにおける酵素活性アッセイに使用適性が認められていることから、シーリングオイルへの溶解度がマイクロデバイスへの使用適性の指標となりうることが示された。

［実施例２０］
ウェル壁面への吸着度合の評価の検討
　表５の左端の化合物「Tetra-benzyl」と、表５の右端の２つの化合物「Tetra-allyl」及び「2,4-SO₃H」について、ウェル壁面への吸着度を以下のように測定した。すなわち、これらの化合物をそれぞれ１０μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈したのち、マイクロデバイスに添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで溶液を各ウェルへと封入した。２５℃で１時間のインキュベート後、化合物の封入されたウェルの像を顕微鏡で撮影した。アッセイバッファーの組成は、１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、２５０μＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００であった。

　撮影された画像について、ウェルの中心点から半径１．１２μｍ以下の領域（中心領域）と、半径１．１２μｍ超２．０８μｍ以下の領域（周縁領域）の蛍光強度を測定し、その平均値（Tetra-benzyl:ｎ＝１０１５３、2,4-SO₃H:ｎ＝１０１５１、Tetra-allyl:ｎ＝１００７８）を元に、中心領域の蛍光強度に対する周縁領域の蛍光強度の比率（周縁／中心）を算出した。その結果、化合物「Tetra-benzyl」では中心領域の蛍光強度は５５２±６０（平均値±標準偏差）であり、周辺部の蛍光強度は５８１±７１（平均値±標準偏差）であり、その比率（周縁／中心）は１．０５であったのに対し、化合物「2,4-SO₃H」では中心領域の蛍光強度は１８８０±１７８（平均値±標準偏差）であり、周辺部の蛍光強度は１０８７±１０６（平均値±標準偏差）であり、その比率（周縁／中心）は０．５８であり、化合物「Tetra-allyl」では中心領域の蛍光強度は４８３±３３（平均値±標準偏差）であり、周辺部の蛍光強度は３００±２３（平均値±標準偏差）であり、その比率（周縁／中心）は０．６２であった（図６）。

　表５に示されるように、化合物「Tetra-benzyl」はマイクロデバイスへの吸着によるドーナツ状の蛍光像が観察され、化合物「Tetra-allyl」及び「2,4-SO₃H」はそのような蛍光像が観察されなかったことから、マイクロデバイスにおいて被験化合物について観察された蛍光強度のうち、中心領域の蛍光強度に対する周縁領域の蛍光強度の比率は、マイクロデバイスへの使用適性の指標となりうることが示された。

［実施例２１］
シグナル／ノイズ比の検討
　２種類の化合物Ｇｌｕ－ｓＳｉＲ（ＰＢ２０６／実施例１２）及びＧＰ－ｓＨＭＲＧ（ＰＢ１０９／実施例７）について、キュベット中とマイクロデバイス中での酵素反応前後における酵素分解物のシグナル／ノイズ比をそれぞれ以下のように測定した。以下の実験でアッセイバッファーの組成は、１００ｍＭ　ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１ｍＭ　ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ　ＣａＣｌ_２、１００ｍＭ　ＤＴＴ、１５０ｍＭ　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である。

（１）キュベットにおける測定
　Ｇｌｕ－ｓＳｉＲについて、１０μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈したのち、石英製のキュベットに添加し、蛍光光度計によって酵素反応前の蛍光スペクトルを測定した（励起波長は５７０ｎｍ）。その後、アミノペプチダーゼＡを溶液中の濃度が１７０ｎｇ／ｍＬとなるように添加し、２５℃で１１時間インキュベートした後に蛍光スペクトルを測定した。酵素反応前後の蛍光スペクトルを比較し、蛍光強度が最大となる波長での値の比を酵素分解物のシグナル／ノイズ比として計算したところ、３２倍（＠６１６ｎｍ）であった（図７Ａ参照）。

　ＧＰ－ｓＨＭＲＧについて、１０μＭとなるようにアッセイバッファーで希釈したのち、石英製のキュベットに添加し、蛍光光度計によって酵素反応前の蛍光スペクトルを測定した（励起波長は５００ｎｍ）。その後、ジペプチジルペプチダーゼを溶液中の濃度が１７ｎｇ／ｍＬとなるように添加し、２５℃で９時間インキュベートした後に蛍光スペクトルを測定した。酵素反応前後の蛍光スペクトルを比較し、蛍光強度が最大となる波長での値の比を酵素分解物のシグナル／ノイズ比として計算したところ、４８１倍（＠５２７ｎｍ）であった（図７Ｂ参照）。

（２）マイクロデバイスにおける測定
　Ｇｌｕ－ｓＳｉＲについて、(ア)アッセイバッファーのみ、（イ）Ｇｌｕ－ｓＳｉＲが３０μＭ、（ウ）Ｇｌｕ－ｓＳｉＲが３０μＭ、アミノペプチダーゼＡが０．２ｎｇ／ｍＬとなる３種類の溶液を調製し、それぞれマイクロデバイスに添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで溶液を各ウェルへと封入した。溶液を封入したマイクロデバイスを３７℃で４時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。（イ）と（ア）の各ウェルの蛍光強度の平均値の差分をノイズ、（ウ）における酵素の封入されているウェルの蛍光強度の平均値と（ア）の各ウェルの蛍光強度の平均値の差分をシグナルとし、これらの値の比を酵素分解物のシグナル／ノイズ比として計算したところ、８．３倍であった（図８Ａ参照）。

　ＧＰ－ｓＨＭＲＧについて、（エ）アッセイバッファーのみ、（オ）ＧＰ－ｓＨＭＲＧが３０μＭ、（カ）ＧＰ－ｓＨＭＲＧが３０μＭ、ジペプチジルペプチダーゼが０．２ｎｇ／ｍＬとなる３種類の溶液を調製し、それぞれマイクロデバイスに添加し、引き続いてシーリングオイルを添加することで溶液を各ウェルへと封入した。溶液を封入したマイクロデバイスを２５℃で２時間インキュベーションした後、蛍光顕微鏡で各ウェルの蛍光強度を測定した。（オ）と（エ）の各ウェルの蛍光強度の平均値の差分をノイズ、（カ）における酵素の封入されているウェルの蛍光強度の平均値と（エ）の各ウェルの蛍光強度の平均値の差分をシグナルとし、これらの値の比を酵素分解物のシグナル／ノイズ比として計算したところ、２８７倍であった（図８Ｂ参照）。

（３）考察
　上記２つのアッセイ系でのシグナル／ノイズ比を比較したところ、キュベットにおけるシグナル／ノイズ比に対するマイクロデバイスにおけるシグナル／ノイズ比の比率は、Ｇｌｕ－ｓＳｉＲについて０．２６、ＧＰ－ｓＨＭＲＧについて０．５９であった。

　本発明の化合物を蛍光プローブとして使用した場合、マイクロデバイスにおけるシグナル／ノイズ比はキュベットと比較して劣るものの、著しく悪化していなかった。Ｇｌｕ－ｓＳｉＲ及びＧＰ－ｓＨＭＲＧは実施例１２及び７においてマイクロデバイスにおける酵素活性アッセイに使用適性が認められていることから、キュベット及びマイクロデバイスにおけるシグナル／ノイズ比の比率はマイクロデバイスへの使用適性の指標となりうることが示された。

Claims

　－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２及び－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択される水溶性置換基を少なくとも１つ有し、以下の一般式（ＩＩ）：

（式中、
環Ａは、フェニル又は５～６員のヘテロアリールである芳香族環であり；
環Ｑ１は、以下の式(i)又は式(ii)の環状構造であり

（式中、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^６及びＲ_０は以下で定義される通りである）；
環Ｑ２は、以下の式(iii)、式(iv)、式(v)又は式(vi)の環状構造であり

（式中、Ｒ^３、Ｒ^５、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０及びＲ^１１は以下で定義される通りである）；
Ｘ原子含有環状構造において１で示される結合- - -及び２で示される結合- - -はそれぞれ単結合又は二重結合を表し、但し、両者が同時に二重結合を表すことはなく；
Ｒは、－ＣＯ_２Ｈ、－ＰＯ_３Ｈ_２、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｌ－ＣＯ_２Ｈ、－Ｌ－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｌ－ＳＯ_３Ｈからなる群から選択され、ここで、Ｌはリンカーであり；
ｎは、０～５の整数であり；
Ｒ^１は、芳香族環上に任意に存在する一価の置換基を表し、当該一価の置換基が２以上存在する場合は、同一又は異なっていてもよく、
ここで、Ｒ^１は、Ｒ^１が結合する環Ａ上の炭素原子と、環Ａが結合するＸ原子含有環状構造上の炭素原子と、環Ａの一部と一緒になって５～６員の炭素環又は複素環を形成してもよく；
Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^４及びＲ^５は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^６及びＲ^７は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、ハロゲン原子、前記水溶性置換基又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基であり；
Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれ独立に、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルケニル基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルキル基（このアルキル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）、又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルケニル基（このアルケニル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）であり、
ここで、Ｒ^８及びＲ^９は一緒になってＲ^８及びＲ^９が結合している窒素原子を含む４～７員の置換基を有していてもよいヘテロシクリルを形成していてもよく、
Ｒ^８又はＲ^９は、或いは、Ｒ^８及びＲ^９の両方は、夫々、Ｒ^５又はＲ^７と一緒になって、Ｒ^８又はＲ^９が結合している窒素原子を含む５～７員のヘテロシクリル又はヘテロアリールを形成していてもよく、更に該ヘテロシクリル又はヘテロアリールは、炭素数１～６個のアルキル、炭素数２～６個のアルケニル、炭素数２～６個のアルキニル、炭素数６～１０個のアラルキル基及び炭素数６～１０個のアルキル置換アルケニル基からなる群から選択される置換基を有していてもよく、
これらヘテロシクリル及びヘテロアリールには、前記水溶性置換基が直接又は前記置換基を介して結合していてもよく；
Ｒ^１１は、水素原子、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルケニル基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルキル基（このアルキル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）、又は前記水溶性置換基を有する炭素数１～１０個（好ましくは炭素数１～６個）のアルケニル基（このアルケニル基はアリール基により置換されていてもよく、該アリール基は前記水溶性置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｘは、酸素原子、Ｓｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｃ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、Ｐ（＝Ｏ）Ｒ^ｃ、Ｓ（Ｒ^ｄ）_２、Ｇｅ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）、テルル原子又はビスマス原子から選択され、
ここで、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、それぞれ独立に、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のアリール基であり、
Ｒ^ｃは、炭素数１～６個の置換又は無置換のアルキル基、又は置換又は無置換のフェニル基であり、
Ｒ^ｄは、同一又は異なる、置換又は無置換のアリール基であり、
Ｒ^ａ～Ｒ^ｄの前記アルキル基、前記アリール基、前記フェニル基は、前記水溶性置換基で置換されていてもよく；
Ｒ_０及びＲ^１０は、それぞれ独立に、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、Ｔ－Ｏ－、又は飽和若しくは不飽和の５～６員炭素環式基若しくは複素環式基から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０又はＲ^１０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
で表される化合物又はその塩を含む、加水分解酵素検出用蛍光プローブ。
　Ｑ２が式(iii)の環状構造を表す、請求項１に記載の蛍光プローブ。
　Ｑ２が式(iv)、式(v)又は式(vi)の環状構造を表す、請求項１に記載の蛍光プローブ。
　ｎが１～３である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　Ｒ^２～Ｒ^９、Ｒ^ａ～Ｒ^ｄの少なくとも１つが、前記水溶性置換基、前記水溶性置換基を有する炭素数１～６個のアルキル基、前記水溶性置換基を有するアリール基又は前記水溶性置換基を有するフェニル基である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　Ｘが、酸素原子又はＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　Ｒが、－ＳＯ_３Ｈ又は－Ｌ－ＳＯ_３Ｈである、請求項４に記載の蛍光プローブ。
　前記加水分解酵素が、アミノペプチダーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ又はアミダーゼから選択されるペプチド結合加水分解酵素である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　前記化合物又はその塩のＭｉＬｏｇＰ値が２．５６以下である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　前記化合物又はその塩の蛍光団母核のＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　前記化合物又はその塩のＭｉＬｏｇＰ値が２．５６以下であり、かつ、前記化合物又はその塩の蛍光団母核のＭｉＬｏｇＰ値が２．４７未満である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　マイクロデバイス用蛍光プローブである、請求項１又は９に記載の蛍光プローブ。
　前記一般式（ＩＩ）で表される化合物又はその塩が、以下の一般式（Ｉａ）～（Ｉｅ）のいずれかで表される化合物又はその塩である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。

（式（Ｉａ）～（Ｉｅ）において、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ^ａ～Ｒ^ｂ、Ｒ_０は、一般式（ＩＩ）で定義した通りである。）
　前記一般式（ＩＩ）で表される化合物又はその塩が、以下の一般式（Ｉｆ）で表される化合物又はその塩である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。

（式（Ｉｆ）において、Ｒ^４～Ｒ^９、Ｒ_０は、一般式（ＩＩ）で定義した通りである。）
　前記化合物又はその塩が以下から選択される化合物又はその塩である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブ。
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法、または、生体試料が由来する被験者がすい臓がんである可能性を予測する方法。
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミン酸などのアミノ酸残基）である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法、または、生体試料が由来する被験者がすい臓がんである可能性を予測する方法。
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０がアラニン、リジン、アルギニン又はメチオニン残基である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＣＤ１３の１分子酵素活性を検出すること、及び
　マイクロデバイスを用いて、一般式（ＩＩ）において－ＣＯ－Ｒ_０及び場合によっては－ＣＯ－Ｒ^１０が－Ｐｒｏ－Ｘａａ（Ｐｒｏはプロリン残基、Ｘａａはグリシン、セリン、グルタミンなどのアミノ酸残基を示す）である、請求項１又は２に記載の蛍光プローブを用いて、被検者から得られた生体試料中のＤＰＰ４の１分子酵素活性を検出することにより、すい臓がんを診断する方法、または、生体試料が由来する被験者がすい臓がんである可能性を予測する方法。
　前記生体試料が、すい臓がん患者、すい臓がんを有すると疑われる患者又は健常者の生体試料である、請求項１６又は１７に記載の方法。
　以下の（１）～（５）のいずれかの式で表される化合物又はその塩。

（式（１）～（５）において、
Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
　以下の式（６）で表される化合物又はその塩。

（式（６）において、
Ｒ_０は、アミノ酸の部分構造、カルボン酸の部分構造、又はＴ－Ｏ－から選択され、
ここで、アミノ酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、又はアミノ酸の一部を構成しており、
カルボン酸の部分構造は、Ｒ_０が結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、カルボン酸の一部を構成しており、
Ｔは、糖類、糖類の部分構造、又は自己開裂型のリンカーを有する糖類であり、
Ｔの糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。）
　以下の一般式（ＩＩＩ）：

（式中、環Ａ、環Ｑ２、Ｘ、ｎ、Ｒ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４及びＲ^６は、一般式（ＩＩ）において定義した通りであり、結合- - -は単結合又は二重結合を表す。）
で表される化合物又はその塩の、請求項1又は２に記載の化合物又はその塩の製造のための使用。
　以下の一般式（ＩＶ）：

（式中、環Ａ、Ｘ、ｎ、Ｒ、及びＲ^１～Ｒ^９は、一般式（ＩＩ）において定義した通りである。）
で表される化合物又はその塩の、請求項1又は２に記載の化合物又はその塩の製造のための使用。
　以下の一般式（Ｖ）：

（式中、
環Ａ、Ｒ、Ｒ^８及びＲ^９は、一般式（ＩＩ）において定義した通りであり、
ｎは、１又は２であり、
Ｒ^１は、水素原子、無置換の炭素数１～４個のアルキル基、又は水酸基により置換された炭素数１～４個のアルキル基であり、
Ｒ^２～Ｒ^７は、水素原子であり、
Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～４個の置換又は無置換のアルキル基であり、
Ｘは、酸素原子又はＳｉ（Ｒ^ａ）（Ｒ^ｂ）（Ｒ^ａ及びＲ^ｂは式（ＩＩ）において定義した通りである）である。）
で表される化合物又はその塩。
　以下から選択される化合物又はその塩である、請求項２４に記載の化合物又はその塩。
　請求項２４又は２５に記載の化合物又はその塩の、請求項1又は２に記載の化合物又はその塩の製造のための使用。
　蛍光プローブを選択する方法であって、
　請求項１又は２に記載の蛍光プローブを準備することと、
（Ａ）シーリングオイルへの溶解度測定試験（２５℃）において前記蛍光プローブおよびその酵素分解物のヘキサデカンへの溶解度が０．３μＭ以下であり、（Ｂ）マイクロデバイスにおける蛍光強度測定試験において蛍光プローブの酵素分解物のウェル中心領域の蛍光強度に対するウェル周縁領域の蛍光強度の比率が、０．６以下であり、かつ、（Ｃ）マイクロデバイス及びキュベットにおける前記蛍光プローブの酵素分解試験において、キュベットにおける酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第２の比）に対する、マイクロデバイスにおける酵素分解物のシグナル／ノイズ比（第１の比）の比率が０．４以上である蛍光プローブを選択することを含む、方法。