WO2023085397A1 - ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法、ハンナ型間質性膀胱炎診断キット、及びハンナ型間質性膀胱炎治療剤 - Google Patents

ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法、ハンナ型間質性膀胱炎診断キット、及びハンナ型間質性膀胱炎治療剤 Download PDF

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昭 古田
隆博 政木
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Definitions

  • the present invention relates to a method for detecting diagnostic markers for Hanna's type interstitial cystitis, a diagnostic kit for Hanna's type interstitial cystitis, and a therapeutic agent for Hanna's type interstitial cystitis.
  • HIC Hanna's interstitial cystitis
  • the present invention provides a method for detecting a diagnostic marker for Hanna's interstitial cystitis, a kit for diagnosing Hanna's interstitial cystitis, and a Hanna's interstitial bladder, which can specifically detect Hanna's interstitial cystitis.
  • An object of the present invention is to provide a therapeutic agent for inflammation.
  • a method for detecting a diagnostic marker for Hanna-type interstitial cystitis comprising: Presence of at least one microorganism selected from the group consisting of bacteria of the genus Trabulsiella, bacteria of the genus Peptoniphilus, bacteria of the genus Anaerococcus, and bacteria of the genus Anaerobacillus in the urine derived from the subject A detection method for detecting quantity.
  • the detection method according to [1] wherein the 16S ribosomal DNA or 16S ribosomal RNA of the microorganism is detected.
  • Hanna's interstitial cystitis can be specifically detected.
  • the method for detecting a marker for diagnosis of Hanna-type interstitial cystitis of the present invention is performed by extracting Trabulsiella bacteria, Peptoniphilus bacteria, Anaerococcus bacteria, and Anaerobacillus bacteria from urine derived from a subject.
  • the present inventors performed 16S rRNA flora analysis using the urine of patients with Hannah-type interstitial cystitis, Trabulsiella bacteria, Peptoniphilus bacteria, Anaerococcus (Anaerococcus) bacteria and Anaerobacillus (Anaerobacillus) genus bacteria found that abundance is significantly different compared to healthy subjects.
  • Methods for detecting these bacteria are not particularly limited, and include methods using specific antibodies, methods of analyzing gene sequences specific to bacteria, and the like.
  • Methods for analyzing bacterium-specific gene sequences include methods for analyzing 16S ribosomal RNA or 16S ribosomal DNA.
  • primers may be used to amplify fragments of 16S ribosomal DNA or 16S ribosomal RNA by PCR, and the amplified products may be analyzed to determine whether they are complementary to the bacterium-specific 16S ribosomal DNA or 16S ribosomal RNA gene sequences. It may be analyzed by a method using hybridization using a suitable probe.
  • NGS next-generation sequencer
  • RT-PCR real-time PCR
  • the analyzed DNA fragments are called reads, and the output data is the product of the number of reads and the number of bases determined per read (read length).
  • the region within the 16S ribosomal DNA of bacteria of the genus Trabulsiella, Peptoniphilus, Anaerococcus, and Anaerobacillus is analyzed by singleplex PCR or multiplex PCR. It is preferable to quantify by amplifying, analyzing the nucleotide sequence of the amplified product with a next-generation sequencer (NGS), and counting the number of reads in the region.
  • NGS next-generation sequencer
  • Multiplex PCR is a method of simultaneously amplifying multiple gene regions by simultaneously using multiple primer pairs in one PCR reaction system. At least some of the combinations of primers that anneal to the bacterial genes described above may be used in one PCR reaction system.
  • the amount of amplified product produced can be monitored by detecting fluorescence intensity using the intercalator method, probe method, cycling probe method, etc.
  • singleplex or multiplex real-time PCR is performed on the region within the 16S ribosomal DNA of Trabulsiella bacteria, Peptoniphilus bacteria, Anaerococcus bacteria, and Anaerobacillus bacteria. It is preferable to quantify by a method.
  • multiplex PCR at least part of the combination of various primers that anneal to the bacterial gene described above may be used in one PCR reaction system.
  • Quantitative methods include an absolute quantification method for determining the actual copy number of the target and a comparative quantification method for determining relative values between samples, which are used depending on the quality of the data to be obtained.
  • Trabulsiella bacteria/(Peptoniphilus bacteria + Anaerococcus bacteria + Anaerobacillus bacteria) is preferably used for diagnosis of Hannah-type interstitial cystitis.
  • the urine from the subject is female.
  • the patient age group it is widely recognized in all age groups, but it is particularly common in postmenopausal women.
  • the abundance of the relevant bacteria differs between before and after menopause, it is preferable to use urine samples separately for diagnosis before and after menopause.
  • CXCL is an inflammatory chemokine and a non-specific inflammatory marker.
  • a urinary CXCL10 level of 30 or higher supports Hanna's interstitial cystitis.
  • Bladder pain scores include severity criteria prepared by the Japanese Interstitial Cystitis Study Group. Bladder pain is indicated by NRS (Numerical Rating Scale) indicated in 11 steps from 0 to 10. According to the severity criteria prepared by the Japanese Interstitial Cystitis Study Group, a bladder pain score of 4 or higher on a scale of 11 from 0 to 10 supports Hanna's type interstitial cystitis.
  • the diagnostic kit for Hanna-type interstitial cystitis of the present invention is selected from the group consisting of Trabulsiella bacteria, Peptoniphilus bacteria, Anaerococcus bacteria, and Anaerobacillus bacteria. and/or a probe that binds to the 16S ribosomal DNA or 16S ribosomal RNA or amplification product thereof.
  • the diagnostic kit of the present invention is suitably used for the above ⁇ method for detecting a diagnostic marker for Hanna's interstitial cystitis>> and includes the configuration described in ⁇ method for detecting a diagnostic marker for Hanna's interstitial cystitis>>. .
  • a kit for extracting DNA or RNA from urine may be provided.
  • the therapeutic agent for Hanna-type interstitial cystitis of the present invention is selected from the group consisting of Trabulsiella bacteria, Peptoniphilus bacteria, Anaerococcus bacteria, and Anaerobacillus bacteria. contains as an active ingredient an antibacterial agent against at least one microorganism
  • Antibacterial agents include nitroimidazole, carbapenem, macrolide, new quinolone, cephem, penicillin, quinolone, and new quinolone antibacterial agents.
  • Specific antibacterial agents include metronidazole, doripenem, azithromycin, sitafloxacin hydrate, cefoperazone, prulifloxacin, piperacillin, galenoxacin, fosfomycin, pazufloxacin and the like.
  • the therapeutic agent for Hanna's interstitial cystitis of the present invention can be administered orally in the form of, for example, tablets, coated tablets, pills, powders, granules, capsules, liquids, suspensions, emulsions, or by injection. It can be administered parenterally in the form of preparations, suppositories, skin preparations for external use, and the like.
  • binders such as gelatin, corn starch, tragacanth gum, and gum arabic
  • excipients such as starch and crystalline cellulose
  • swelling agents such as alginic acid
  • solvents for injections such as water, ethanol, and glycerin
  • Adhesives such as rubber-based adhesives and silicone-based adhesives are included.
  • Pharmaceutically acceptable carriers can be used singly or in combination of two or more.
  • the therapeutic agent for Hanna's interstitial cystitis of the present invention may further contain additives.
  • Additives include lubricants such as calcium stearate and magnesium stearate; sweeteners such as sucrose, lactose, saccharin, and maltitol; flavoring agents such as peppermint and red oil; stabilizers such as benzyl alcohol and phenol; buffers such as salts and sodium acetate; solubilizers such as benzyl benzoate and benzyl alcohol; antioxidants; preservatives and the like. Additives can be used singly or in combination of two or more.
  • the administration method of the therapeutic agent for Hanna's interstitial cystitis of the present invention is not particularly limited, and may be appropriately determined according to the patient's symptoms, body weight, age, sex and the like. For example, tablets, coated tablets, pills, powders, granules, capsules, liquids, suspensions, emulsions and the like are orally administered. Injections are administered intravenously alone or in combination with usual replacement fluids such as glucose and amino acids, and if necessary, intraarterially, intramuscularly, intracutaneously, subcutaneously or intraperitoneally. Alternatively, it is administered locally to the bladder. Intravesical administration includes two types: intravesical instillation therapy and intravesical instillation therapy. The latter is a method of transurethrally injecting a drug using a special needle with an endoscope. Suppositories are administered rectally. The external preparation for skin is applied, stuck or sprayed on the affected area.
  • the dosage of the therapeutic agent for Hanna's interstitial cystitis of the present invention varies depending on the patient's symptoms, body weight, age, sex, etc., and cannot be generally determined. 10 g, eg 0.01 to 2000 mg of active ingredient per day may be administered. In the case of an injection, for example, 0.1 ⁇ g to 1 g per day, for example, 0.001 to 200 mg per day of the active ingredient may be administered. In the case of suppositories, for example, 1 ⁇ g to 10 g per day, for example 0.01 to 2000 mg per day of the active ingredient may be administered.
  • the therapeutic method for Hanna's interstitial cystitis of the present invention includes local treatment by transurethral Hanna's lesion electrocautery and treatment other than Hanna's marginal area by administration of the therapeutic agent for Hanna's interstitial cystitis. Since local treatment by electrocautery alone does not cure the disease, administration of a therapeutic agent for Hanna's interstitial cystitis provides a more efficient therapeutic effect.
  • Urine was collected from 20 healthy premenopausal subjects and 10 premenopausal HIC patients and 20 postmenopausal healthy subjects and 20 postmenopausal HIC patients. Urine aliquots were pelleted by centrifugation and total DNA was isolated from the pellet using the DNeasy Blood & Tissue kit (QIAGEN). The isolated DNA was sequenced using a next generation sequencer after amplification of the 16S rDNA sequence using primer sets specific to the V1-V2 hypervariable regions. Data analysis was performed using statistical analysis software (Prism, GraphPad Software, San Diego, CA, USA).
  • microbes at the phylum level were compared, microbes with low relative abundance ( ⁇ 0.1%) at the genus level were filtered, and the remaining top 50 microbes were analyzed.
  • the results are shown in FIG.
  • premenopausal HIC patients had higher abundance of Peptoniphilus and Anaerococcus than premenopausal healthy subjects.
  • Postmenopausal HIC patients had higher abundance of Anaerobacillus than normal postmenopausal subjects.
  • Postmenopausal HIC patients had lower abundance of Trabulsiella than healthy postmenopausal subjects.
  • Hanna's interstitial cystitis can be specifically detected.

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Abstract

ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法であって、被験者由来の尿から、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物の存在量を検出する、検出方法。

Description

ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法、ハンナ型間質性膀胱炎診断キット、及びハンナ型間質性膀胱炎治療剤
　本発明は、ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法、ハンナ型間質性膀胱炎診断キット、及びハンナ型間質性膀胱炎治療剤に関する。
　ハンナ型間質性膀胱炎（ＨＩＣ）は、膀胱に原因不明の炎症が起こり、尿が近い、膀胱や尿道に違和感や痛みが起こる等のつらい症状が出る難病（指定難病２２６）である。ＨＩＣの病理学的所見としては、間質にリンパ球浸潤が見られ、間質の炎症に伴う、膀胱上皮の剥離が生じる。
　しかしながら、係る所見は、通常の膀胱炎でも見られる非特異的な炎症反応である。ハンナ病変のみの局所的治療では根治しないため、早期発見・早期治療が必要となっている。
　このような要望に対して、ＣＸＣＬ１０を含む遺伝子マーカーを用いた潰瘍型（ハンナ型）間質性膀胱炎の検出を補助する方法が提案されている（特許文献１参照。）。
特許第５７５８１２２号公報
　しかしながら、ＣＸＣＬ１０は、ハンナ型間質性膀胱炎以外の間質性膀胱炎においても発現上昇が認められるため、よりハンナ型間質性膀胱炎特異的に増減する診断マーカーが求められている。
　そこで、本発明は、ハンナ型間質性膀胱炎を特異的に検出できる、ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法、ハンナ型間質性膀胱炎診断キット、及びハンナ型間質性膀胱炎治療剤を提供することを目的とする。
　本発明は、以下の態様を含む。
［１］ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法であって、
被験者由来の尿から、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物の存在量を検出する、検出方法。
［２］前記微生物の１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡを検出する、［１］に記載の検出方法。
［３］更に、ＣＸＣＬ１０を検出する、［１］又は［２］に記載の検出方法。
［４］膀胱痛スコアを用いる、［１］～［３］のいずれか一つに記載の検出方法。
［５］前記尿は、女性由来である、［１］～［４］のいずれか一つに記載の検出方法。［６］Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物の１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡを増幅するためのプライマーセット、及び／或いは１６ＳリボゾームＤＮＡ若しくは１６ＳリボゾームＲＮＡ又はその増幅産物に結合するプローブを含む、ハンナ型間質性膀胱炎診断キット。
［７］Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物に対する抗菌剤を有効成分として含有する、ハンナ型間質性膀胱炎治療剤。
　本発明によれば、ハンナ型間質性膀胱炎を特異的に検出できる。
実施例における菌叢解析の結果である。 （上段）ＨＩＣ患者におけるＰｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌それぞれの存在量とＴｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ（ラクトバシラス）属細菌それぞれの存在量との相関係数を算出した表である。（下段）ＨＩＣ患者におけるＴｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌／（Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌＋Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌＋Ａｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌）の値に基づくＲＯＣ曲線である。
≪ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法≫
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法は、被験者由来の尿から、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物の存在量を検出する方法である。
　実施例において後述するように、本発明者は、ハンナ型間質性膀胱炎患者の尿を用いて１６Ｓ ｒＲＮＡ菌叢解析を行い、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌の存在量が、健常者と比較して大きく異なることを見出した。
　これら細菌の検出方法としては、特に限定されず、特定的抗体を用いる方法、細菌特異的な遺伝子配列を解析する方法等挙げられる。
　細菌特異的な遺伝子配列を解析する方法としては、１６ＳリボゾームＲＮＡ又は１６ＳリボゾームＤＮＡを解析する方法が挙げられる。詳細には、プライマーを用いてＰＣＲにより１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡの断片を増幅し、その増幅産物を解析してもよく、細菌に特異的な１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡ遺伝子配列に相補的なプローブを用いて、ハイブリダイゼーションを用いた方法により、解析してもよい。
　定量性の観点から、ＰＣＲにより１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡの断片を増幅し、その増幅産物を解析することが好ましい。具体的な定量方法としては、次世代シークエンサー（ＮＧＳ）法やリアルタイムＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法が挙げられる。
　次世代シークエンサーでは、解析されたＤＮＡ断片をリードと呼び、リード数と１リード当たりに決定される塩基数（リード長）の積が出力データとなる。本実施形態において、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌の１６ＳリボゾームＤＮＡ内の領域をｓｉｎｇｌｅｐｌｅｘ　ＰＣＲまたはｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲで増幅し、次世代シークエンサー（ＮＧＳ）でその増幅産物の塩基配列を解析し、当該領域のリード数を計数することにより定量することが好ましい。ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲは、一つのＰＣＲ反応系に複数のプライマー対を同時に使用することで、複数の遺伝子領域を同時に増幅する方法である。上述した細菌の遺伝子にアニールするプライマーの組み合わせの少なくとも一部を、一つのＰＣＲ反応系で使用してもよい。
　リアルタイムＰＣＲでは、インターカレータ－法、プローブ法、サイクリングプローブ法等を用いて、蛍光強度を検出することにより、増幅産物の生成量をモニターすることができる。本実施形態において、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌の１６ＳリボゾームＤＮＡ内の領域をｓｉｎｇｌｅｐｌｅｘまたはｍｕｌｔｉｐｌｅｘのリアルタイムＰＣＲ法により定量することが好ましい。ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲにおいては、上述した細菌の遺伝子にアニールする様々なプライマーの組み合わせの少なくとも一部を、一つのＰＣＲ反応系で使用してもよい。
　また、リアルタイムＰＣＲにおいては、細菌に特異的な１６ＳリボゾームＤＮＡ遺伝子配列に相補的な蛍光色素標識プローブを用いることが好ましい。
　定量方法としては、ターゲットの実際のコピー数を決定する絶対定量法とサンプル間の相対値を決定する比較定量法が挙げられ、取得したいデータの質に応じて使い分けられる。
　実施例で後述するように、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌それぞれの存在量とＴｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌の存在量との間に強い相関が認められたことから、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌／（Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌＋Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌＋Ａｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌）の値をハンナ型間質性膀胱炎の診断に用いることが好ましい。
　ハンナ型間質性膀胱炎の患者は、女性に多いことから、被験者由来の尿は女性由来であることが好ましい。患者の年齢層としては、すべての年齢層に幅広く認められるが、閉経後の女性に特に多く認められる。また、実施例で後述するように、閉経前後で該当細菌の存在量が異なることから、尿サンプルは、閉経前後で分けて診断に用いることが好ましい。
　本発明の検出方法において、更に、ＣＸＣＬ１０を検出することが好ましい。ＣＸＣＬは、炎症性ケモカインであり、非特異的炎症マーカーである。ＣＸＣＬ１０の尿中存在レベルにおいて、３０以上であれば、ハンナ型間質性膀胱炎であることをサポートする。
　本発明の検出方法において、更に、膀胱痛スコアを用いることが好ましい。膀胱痛スコアとしては、日本間質性膀胱炎研究会作成の重症度基準が挙げられる。膀胱痛は、０～１０の１１段階で表記したＮＲＳ（Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｒａｔｉｎｇ Ｓｃａｌｅ）で表記される。日本間質性膀胱炎研究会作成の重症度基準においては、膀胱痛スコアが０～１０の１１段階の内、４以上であれば、ハンナ型間質性膀胱炎であることをサポートする。
≪診断キット≫
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎診断キットは、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物の１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡを増幅するためのプライマーセット、及び／或いは１６ＳリボゾームＤＮＡ若しくは１６ＳリボゾームＲＮＡ又はその増幅産物に結合するプローブを含む。本発明の診断キットは、上述した≪ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法≫に好適に用いられ、≪ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法≫に記載された構成を含む。
　更に、上記プライマーセット、及び／又はプローブに加えて、尿からＤＮＡ又はＲＮＡを抽出するためのキットを備えていてもよい。
　≪ハンナ型間質性膀胱炎治療剤≫
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎治療剤は、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物に対する抗菌剤を有効成分として含有する。
　抗菌剤としては、ニトロイミダゾール系、カルバペネム系、マクロライド系、ニューキノロン系、セフェム系、ペニシリン系、キノロン系、ニューキノロン系抗菌剤が挙げられる。具体的な抗菌剤としては、メトロニダゾール、ドリペネム、アジスロマイシン、シタフロキサシン水和物、セフォペラゾン、プルリフロキサシン、ピペラシリン、ガレノキサシン、ホスホマイシン、パズフロキサシン等が挙げられる。
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎治療剤は、例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の形態で経口的に、又は、注射剤、坐剤、皮膚外用剤等の形態で非経口的に投与することができる。
　薬学的に許容される担体としては、通常の製剤に用いられるものを特に制限なく用いることができる。より具体的には、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴム等の結合剤；デンプン、結晶性セルロース等の賦形剤；アルギン酸等の膨化剤；水、エタノール、グリセリン等の注射剤用溶剤；ゴム系粘着剤、シリコーン系粘着剤等の粘着剤等が挙げられる。薬学的に許容される担体は、１種を単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎治療剤は、更に添加剤を含んでいてもよい。添加剤としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；ショ糖、乳糖、サッカリン、マルチトール等の甘味剤；ペパーミント、アカモノ油等の香味剤；ベンジルアルコール、フェノール等の安定剤；リン酸塩、酢酸ナトリウム等の緩衝剤；安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の溶解補助剤；酸化防止剤；防腐剤等が挙げられる。
　添加剤は、１種を単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
（投与方法）
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎治療剤の投与方法は特に限定されず、患者の症状、体重、年齢、性別等に応じて適宜決定すればよい。例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等は経口投与される。また、注射剤は、単独で、又はブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与され、更に必要に応じて、動脈内、筋肉内、皮内、皮下又は腹腔内投与される。または、膀胱へ局所投与される。膀胱内投与には、膀胱内注入療法と膀胱壁内注入療法の２つが挙げられる。後者は、内視鏡にて経尿道的に特殊な針を用いて薬剤を注入する方法である。坐剤は直腸内投与される。皮膚外用剤は、患部に塗布、貼付又はスプレーされる。
（投与量）
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎治療剤の投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり、一概には決定できないが、経口投与の場合には、例えば１日あたり１μｇ～１０ｇ、例えば１日あたり０．０１～２０００ｍｇの有効成分を投与すればよい。また、注射剤の場合には、例えば１日あたり０．１μｇ～１ｇ、例えば１日あたり０．００１～２００ｍｇの有効成分を投与すればよい。また、坐剤の場合には、例えば１日あたり１μｇ～１０ｇ、例えば１日あたり０．０１～２０００ｍｇの有効成分を投与すればよい。
（治療方法）
　本発明のハンナ型間質性膀胱炎治療方法は、経尿道的ハンナ病変電気焼灼術による局所治療と、上記ハンナ型間質性膀胱炎治療剤の投与によるハンナ病辺部以外の治療を含む。電気焼灼術による局所治療だけでは、根治しないため、ハンナ型間質性膀胱炎治療剤の投与により、より効率的な治療効果が得られる。
　以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
　閉経前の健常者２０人、及び閉経前のＨＩＣ患者１０人、並びに、閉経後の健常者２０人、及び閉経後のＨＩＣ患者２０人の尿を採取した。尿アリコートを遠心分離によってペレット化し、ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅキット（ＱＩＡＧＥＮ社製）を使用して沈殿物から全ＤＮＡを単離した。
　単離したＤＮＡについて、Ｖ１－Ｖ２超可変領域に固有のプライマーセットを使用して１６Ｓ ｒＤＮＡ配列を増幅した後、次世代シーケンサーを用いてシーケンス行った。統計分析ソフトウェア（Ｐｒｉｓｍ、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータ分析を実行した。門レベルのすべての微生物を比較し、相対存在量が低い（＜０．１％）属レベルの微生物をフィルターにかけ、残りの上位５０種類の微生物を分析した。結果を図１に示す。
　図１に示す様に、閉経前のＨＩＣ患者は、閉経前の健常者よりもＰｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ及びＡｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓの存在量が多かった。閉経後のＨＩＣ患者は、閉経後の健常者よりもＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓの存在量が多かった。閉経後のＨＩＣ患者は、閉経後の健常者よりもＴｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａの存在量が少なかった。
　図１の結果に基づき、ＨＩＣ患者におけるＰｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓそれぞれの存在量とＴｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓそれぞれの存在量との相関係数を算出した。結果を図２上段に示す。Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ、及びＡｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓそれぞれの存在量とＴｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａの存在量との間に強い相関が認められた。
　図１の結果に基づき、ＨＩＣ患者におけるＴｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ／（Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ＋Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ＋Ａｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の値を求め、ＲＯＣ曲線を作成した。結果を図２下段に示す。ＡＵＣは、０．７７であった。
　本発明によれば、ハンナ型間質性膀胱炎を特異的に検出できる。

Claims (7)

  1. 　ハンナ型間質性膀胱炎診断マーカーの検出方法であって、
    　被験者由来の尿から、Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物の存在量を検出する、検出方法。
  2. 　前記微生物の１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡを検出する、請求項１に記載の検出方法。
  3. 　更に、ＣＸＣＬ１０を検出する、請求項１に記載の検出方法。
  4. 　膀胱痛スコアを用いる、請求項１に記載の検出方法。
  5. 　前記尿は、女性由来である、請求項１に記載の検出方法。
  6. 　Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物の１６ＳリボゾームＤＮＡ又は１６ＳリボゾームＲＮＡを増幅するためのプライマーセット、及び／或いは１６ＳリボゾームＤＮＡ若しくは１６ＳリボゾームＲＮＡ又はその増幅産物に結合するプローブを含む、ハンナ型間質性膀胱炎診断キット。
  7. 　Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ（トラブルシエラ）属細菌、Ｐｅｐｔｏｎｉｐｈｉｌｕｓ（ペプトニフィラス）属細菌、Ａｎａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（アナエロコッカス）属細菌、及びＡｎａｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ（アナエロバシラス）属細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物に対する抗菌剤を有効成分として含有する、ハンナ型間質性膀胱炎治療剤。
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