WO2022239651A1 - 抗ウイルス組成物およびその用途 - Google Patents

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WO2022239651A1
WO2022239651A1 PCT/JP2022/018999 JP2022018999W WO2022239651A1 WO 2022239651 A1 WO2022239651 A1 WO 2022239651A1 JP 2022018999 W JP2022018999 W JP 2022018999W WO 2022239651 A1 WO2022239651 A1 WO 2022239651A1
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glycerin
composition
ozone
present
virus
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PCT/JP2022/018999
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剛太郎 塩田
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株式会社メディプラス製薬
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses

Definitions

  • the present invention relates to antiviral compositions and uses thereof.
  • Non-Patent Document 1 Infections caused by a wide variety of respiratory infectious viruses such as influenza virus are regarded as a problem, and various antiviral agents are being researched and developed (Non-Patent Document 1).
  • the viral replication cycle is roughly divided into cell infection, replication of the virus inside the infected cell, and release of the amplified virus outside the infected cell. Approaches to these individual steps are then taken.
  • the present invention provides a new antiviral composition.
  • composition contains ozone-treated glycerin.
  • the virus control method of the present invention includes a contact step of contacting an object with an antiviral composition,
  • the antiviral composition is the antiviral composition of the present invention.
  • composition exhibiting antiviral activity can be provided.
  • FIG. 1 is a graph showing the measurement results of ESR of glycerin not treated with ozone in Example 3.
  • FIG. 2 is a graph showing the measurement results of ESR of ozone-treated glycerin in Example 3.
  • FIG. 1 is a graph showing the measurement results of ESR of glycerin not treated with ozone in Example 3.
  • FIG. 2 is a graph showing the measurement results of ESR of ozone-treated glycerin in Example 3.
  • the antiviral composition of the invention comprises ozonated glycerin, as described above.
  • the composition of the present invention is characterized by containing ozone-treated glycerin, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the present inventors found that ozone-treated glycerin exhibits antiviral activity, leading to the establishment of the present invention. According to the present invention, viruses can be controlled. In addition, it has been confirmed that the composition of the present invention has low or no skin irritation when applied to human skin, and does not cause skin disorders. Therefore, the composition of the present invention is, for example, excellent in safety.
  • antiviral refers to, for example, inactivation of viruses; reduction, suppression, or disabling of infectivity of viruses; prevention, prevention, or control of viral infections; treatment of viral infections; Prevention, cessation, suppression, inhibition, or amelioration of symptoms (disease) due to non-occurrence or progression of symptoms; control of viruses;
  • the virus is not particularly limited, and may be, for example, an enveloped virus, that is, an enveloped virus, or a non-enveloped virus, that is, a non-enveloped virus.
  • the virus may be a DNA virus or an RNA virus.
  • the enveloped virus include, for example, human herpesvirus type 1 (HHV-1, herpes simplex virus type 1 (HSV-1)), human herpesvirus type 2 (HHV-2, herpes simplex virus type 2 (HSV -2)), human herpesvirus type 3 (HHV-3, varicella zoster virus (VZV: Varicella Zoster virus)), human herpesvirus type 4 (HHV-4, Epstein-Barr virus (EBV)), human Herpes virus type 5 (HHV-5, human cytomegalovirus (HCMV)), human herpes virus type 6 (HHV-6), human herpes virus type 7 (HHV-7), human herpes virus type 8 (HHV-8, Herpesviridae, such as Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV); Poxviridae, such as Variola virus and Vaccinia virus; Hepadnaviruses, such as Hepatitis B virus Family; Flaviviridae such
  • composition of the present invention can be suitably used, for example, for enveloped viruses, particularly viruses belonging to the family Coronaviridae or Orthomyxoviridae.
  • glycerin may be simple glycerin or glycerin polymer.
  • examples of the glycerin polymer include diglycerin and polyglycerin.
  • glycerin may be a glycerin derivative.
  • the glycerin derivative is, for example, a compound obtained by introducing a modification (group) into glycerin or a glycerin polymer.
  • the ozone-treated glycerin means, for example, a state in which part or all of ozone is in contact with glycerin, that is, a state in which part or all of ozone is mixed with glycerin.
  • part or all of the ozone may be dissolved in glycerin, ie dissolved in said glycerin.
  • ozone not dissolved in glycerin is in contact with glycerin.
  • the composition of the present invention may contain diluent substances.
  • the diluent substance include non-aqueous solvents and aqueous solvents.
  • the non-aqueous solvent include polyethylene glycol (PEG), propylene glycol (PG), butylene glycol (BG), dipropylene glycol (DPG) and the like.
  • the aqueous solvent include water; aqueous solutions such as buffers and physiological saline; and the like.
  • the proportion of glycerin in the composition of the present invention can be exemplified by the following proportions.
  • the proportion of glycerin is, for example, 1-20 (v/v)%, 5-15 (v/v)%.
  • the proportion of glycerin is, for example, 30-70 (v/v)%, 40-60 (v/v)%.
  • the proportion of glycerin is, for example, 5 (v/v)% or more, 8 (v/v)% or more.
  • the oxidizing power of the ozone-treated glycerin is not particularly limited, and can be appropriately set according to, for example, the type of target object or target animal (administration target), the type of virus, the degree of virus infection, and the like. Moreover, as described below, when the composition of the present invention is diluted before use, the oxidizing power of the ozone-treated glycerin may be adjusted to be higher than the oxidizing power during use, for example.
  • the oxidizing power of the ozone-treated glycerin is, for example, 0 to 10000 ppm, 1 to 10000 ppm, 10 ppm to 10000 ppm, 100 ppm to 4000 ppm and 100 to 2000 ppm.
  • the oxidizing power of the ozone-treated glycerin before dilution is, for example, 0 to 10000 ppm, 1 ppm to 10000 ppm, 10 ppm to 10000 ppm, 100 ppm to 4000 ppm, and 100 to 2000 ppm.
  • the oxidizing power of the ozone-treated glycerin can be measured, for example, by a potassium iodide titration method according to Example 1 described later.
  • the composition of the present invention may contain formic acid.
  • formic acid By including formic acid, the composition of the present invention has enhanced antiviral activity, for example.
  • Formic acid may be a formate.
  • the formate includes, for example, a salt of formic acid and a metal, and specific examples thereof include sodium formate, potassium formate, and the like.
  • composition of the present invention comprises formic acid
  • said formic acid may be formic acid inherent in the ozonated glycerin, i.e. produced in the ozonated glycerin, or formic acid added to the ozonated glycerin. or both.
  • the concentration of formic acid in the ozone-treated glycerin is not particularly limited, and can be appropriately set according to, for example, the type of target object or target animal (administration target), the type of virus, the degree of virus infection, and the like.
  • the concentration of formic acid in the ozone treated glycerin is, for example, 0.01 to 100 mg/g, 0.1 to 100 mg/g, 0.1 to 20 mg/g, 0.1 to 10 mg/g, 1 to 10 mg/g. be.
  • the concentration of formic acid in the ozonated glycerin may be, for example, below the concentration at which formic acid exhibits antiviral activity.
  • the concentration of formic acid in the ozone-treated glycerin is, for example, 0.1-20 mg/g, 0.1-10 mg/g, 1-10 mg/g.
  • the amount of formic acid relative to the ozone-treated glycerin may be, for example, the amount of formic acid inherently contained in the ozone-treated glycerin, the concentration of formic acid added to the ozone-treated glycerin, or the total amount of formic acid of both. Although it may be the concentration, it is preferably the total formic acid concentration of both.
  • the concentration of formic acid can be measured, for example, by ion chromatography according to Example 1 described later.
  • the concentration of formic acid in the ozone-treated glycerin may be adjusted, for example, to a higher concentration than when used.
  • the concentration of formic acid in the ozone-treated glycerin before dilution is, for example, 0.01-100 mg/g, 0.1-100 mg/g, 0.1-20 mg/g, 0.1-10 mg/g, 1-10 mg/g.
  • composition of the present invention may contain bivalent iron and/or monovalent copper. Since the composition of the present invention can enhance the oxidizing power of the ozone-treated glycerin by containing the divalent iron and/or monovalent copper, for example, it is presumed that the antiviral activity is further enhanced.
  • the divalent iron means a substance that generates divalent iron ions (Fe 2+ ) in a solvent, particularly an aqueous solvent such as water or an aqueous solution.
  • the divalent iron can also be referred to as a compound or complex containing divalent iron ions.
  • the divalent iron is, for example, iron chloride (II), iron sulfate (II), iron fumarate (II), iron sulfate (II), iron carbonate (II), iron citrate (II), iron butyrate (II) ), divalent iron salts such as iron(II) maleate; combinations of iron(II) ions (Fe 2+ ) with metal-chelating proteins such as hemoglobin, ferritin, and/or transferrin;
  • the concentration of divalent iron in the ozone-treated glycerin is, for example, 0.1 ⁇ mol/l to 100 mmol/l, preferably 0.1 to 10 mmol/l.
  • the monovalent copper means a substance that generates monovalent copper ions (Cu + ) in a solvent, especially an aqueous solvent such as water or an aqueous solution.
  • the monovalent copper can also be referred to as a compound or complex containing monovalent copper ions.
  • the monovalent copper is, for example, a salt of monovalent copper such as copper (I) sulfide, copper (I) chloride, copper (I) oxide, or copper (I) sulfate; a protein that chelates a metal such as metallothionein or ceruloplasmin and a combination of copper (I) ions (Cu + ); and the like.
  • the concentration of monovalent copper in the ozone-treated glycerin is, for example, 0.1 ⁇ mol/l to 100 mmol/l, preferably 0.1 to 10 mmol/l.
  • compositions containing either one or both of the divalent iron and/or monovalent copper may be used.
  • compositions containing divalent iron and/or monovalent copper include blood or fractions thereof such as whole blood, serum and plasma; proteins chelated with metals such as hemoglobin, ferritin and transferrin; .
  • the concentration of divalent iron and/or monovalent copper in the ozone-treated glycerin may be adjusted, for example, to a concentration higher than that during use.
  • the concentration of divalent iron and/or monovalent copper in the ozone-treated glycerin before dilution is, for example, 0.1 ⁇ mol/l to 100 mmol/l, preferably 0.1 ⁇ 10 mmol/l.
  • the antiviral composition of the present invention may contain other antiviral agents.
  • the other antiviral agents include protease inhibitors, helicase inhibitors, antiviral agents that induce antiviral responses in subjects, and specific examples include ribavirin, interferon, nucleside derivatives, and the like.
  • the pH of the composition of the present invention is not particularly limited. is.
  • the pH may be adjusted, for example, with the buffer solution described above, or may be adjusted with a pH adjuster, which will be described later.
  • compositions of the invention may be used, for example, in vivo or in vitro .
  • the description of the subject and administration subject described below can be used.
  • the administration target of the composition of the present invention is not particularly limited.
  • the administration subject includes, for example, humans or non-human animals other than humans. Examples of non-human animals include mice, rats, rabbits, dogs, sheep, horses, cats, goats, monkeys, and guinea pigs.
  • the subject of administration includes, for example, cells, tissues, organs, and the like, and the cells include, for example, cells collected from living organisms, cultured cells, and the like.
  • compositions of the present invention are not particularly limited, and for example, the dosage form, administration period, dosage, etc. can be appropriately set according to the type of administration subject.
  • the dosage of the composition of the present invention is not particularly limited.
  • the composition of the present invention can be appropriately determined depending on, for example, the type, symptoms, age, administration method, etc. of the subject of administration.
  • the total dose of the composition per day is, for example, 0.1 to 100 g, 0.1 to 10 g, 0.5 to 1 g, preferably , 0.5 to 1 g
  • the administration frequency per day is, for example, 1 to 5 times, 1 to 3 times, 1 to 2 times, preferably 1 to 2 times.
  • the dosage form of the composition of the present invention is not particularly limited. When administering the composition of the present invention in vivo , it may be administered orally or parenterally.
  • the parenteral administration includes, for example, intravenous injection (intravenous administration), intramuscular injection (intramuscular administration), transdermal administration, subcutaneous administration, intradermal administration, enteral administration, rectal administration, vaginal administration, nasal administration, Examples include transpulmonary administration, intraperitoneal administration, and local administration.
  • the dosage form of the composition of the present invention is not particularly limited, and can be determined as appropriate, for example, according to the dosage form.
  • Examples of the dosage form include a liquid form and a solid form.
  • Specific examples of the dosage forms include controlled-release preparations (enteric-coated preparations, sustained-release preparations, etc.), capsules, oral liquid preparations (elixirs, suspensions, emulsions, aromatic water preparations, limonade preparations, etc.), and syrups.
  • granules effervescent granules, fine granules, etc.
  • powders tablets (orally disintegrating tablets, chewable tablets, effervescent tablets, dispersible tablets, dissolving agents, coated tablets, etc.), pills, oral jelly Formulations for oral administration, such as oral tablets (gums, sublingual agents, lozenges, drops, buccal tablets, sticky tablets, etc.), oral sprays, oral semisolids, mouthwashes, etc.
  • Preparations for injection administration such as injections (implantation injections, long-acting injections, infusions (formulations for infusion, etc.), freeze-dried injections, powdered injections, pre-filled syringes, cartridges, etc.); dialysis agents Preparations for dialysis such as (peritoneal dialysis agents, hemodialysis agents); Bronchial/pulmonary preparations such as inhalants (inhalation aerosols, inhalation liquids, inhalation powders, etc.); Eye administration such as eye ointments and eye drops formulations for ear administration; formulations for ear administration such as ear drops; formulations for nasal application such as nasal drops (nasal drops, nasal powders, etc.); Vaginal preparations such as vaginal suppositories and vaginal tablets; external liquids (alcohol, liniments, lotions, etc.), creams, gels, external solids (external powders, etc.), sprays (external aerosols
  • the dosage form includes, for example, a formulation for injection administration, a formulation for drip infusion, and the like.
  • examples of the dosage form include external preparations such as patches, ointments, ointments, creams, and lotions.
  • the composition of the present invention may, for example, optionally contain additives.
  • the additive is a pharmaceutically acceptable additive.
  • it preferably contains a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the additives are not particularly limited, and examples include base raw materials, excipients, coloring agents, lubricants, binders, disintegrants, stabilizers, preservatives, pH adjusters, and flavoring agents such as fragrances. etc.
  • the amount of the additive added is not particularly limited as long as it does not interfere with the function of the nitrogen-containing oxide.
  • the excipients include, for example, sugar derivatives such as lactose, sucrose, glucose, mannitol and sorbitol; starch derivatives such as corn starch, potato starch, ⁇ -starch and dextrin; cellulose derivatives such as crystalline cellulose; gum arabic; dextran; silicate derivatives such as light anhydrous silicic acid, synthetic aluminum silicate, calcium silicate and magnesium aluminometasilicate; phosphates such as calcium hydrogen phosphate; carbonates such as calcium carbonate; calcium sulfate inorganic excipients such as sulfates such as Examples of the lubricant include stearic acid, metal stearates such as calcium stearate and magnesium stearate; talc; polyethylene glycol; hydrogenated vegetable oils; Examples of the flavoring agents include cocoa powder, peppermint brain, aromatic powder, peppermint oil, borneol, cinnamon powder, sweeteners, acidulants, and the like.
  • binder examples include hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, macrogol and the like.
  • disintegrant examples include cellulose derivatives such as carboxymethylcellulose and carboxymethylcellulose calcium; chemically modified starches such as carboxymethylstarch, sodium carboxymethylstarch, crosslinked polyvinylpyrrolidone; and chemically modified celluloses.
  • stabilizer examples include paraoxybenzoic acid esters such as methylparaben and propylparaben; alcohols such as chlorobutanol, benzyl alcohol and phenylethyl alcohol; benzalkonium chloride; phenols such as phenol and cresol; ; and sorbic acid.
  • the pH adjuster can be appropriately determined according to, for example, the target pH.
  • the pH adjuster when adjusting to the acidic side, can be an acidic substance such as acetic acid, lactic acid, phosphoric acid, tartaric acid, citric acid, ascorbic acid, hydrochloric acid, gluconic acid, and sulfuric acid.
  • the pH adjuster when adjusting to the basic side, can be, for example, a basic substance such as potassium hydroxide, sodium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine.
  • one type of pH adjuster may be used, or two or more types may be used in combination.
  • the composition of the present invention can be produced, for example, by contacting glycerin and ozone, more specifically, by mixing glycerin and ozone.
  • a method for producing the composition of the present invention an example of contacting ozone and glycerin will be described.
  • the method for producing the composition of the present invention is not limited to the examples below.
  • the ozone-treated glycerin can be produced, for example, by bringing a glycerin solution and an ozone-containing gas into gas-liquid contact.
  • the glycerin solution preferably has a high concentration of glycerin.
  • a high-concentration glycerin solution for example, a glycerin solution having a glycerin concentration of 75% or more can be used.
  • a concentrated glycerin solution with a glycerin concentration of 98% by weight or more is more preferable, and a purified glycerin solution with a concentration of 98.5% by weight or more is even more preferable.
  • the solvent for glycerin is not particularly limited, and is, for example, an aqueous solvent such as water.
  • the ozone-containing gas preferably has a high concentration of ozone.
  • the method for producing the gas having a high ozone concentration is not particularly limited, and for example, an ozone generator that generates ozone by silently discharging oxygen gas can be used.
  • oxygen gas for example, a medical oxygen cylinder may be used, or oxygen gas produced by an oxygen generator may be used.
  • the method of bringing the glycerin solution and the ozone-containing gas into gas-liquid contact is not particularly limited.
  • an ozone-treated glycerin solution with an oxidizing power of about 4000 ppm can be produced.
  • the duration of aeration is not particularly limited, and, for example, a relatively longer duration can produce an ozonated glycerin solution with higher oxidizing power.
  • 0.01 to 100 mg/g of formic acid is generated in the ozone-treated glycerin solution.
  • the method for producing the composition of the present invention may include, for example, a heating step of heating the ozone-treated glycerin after preparing the ozone-treated glycerin.
  • the temperature of the heat treatment is, for example, 70 to 90.degree.
  • the heat treatment time is, for example, 0.5 to 1.5 months.
  • the method for producing the composition of the present invention may include, for example, a storage step of storing ozone-treated glycerin after preparation.
  • the storage period is, for example, 0.5 to 6 months, 1 to 4 months.
  • Storage temperatures are, for example, 30 to 90°C and 40 to 80°C.
  • the storage period is, for example, 0.5 to 6 months, and the storage temperature is 30 to 45°C.
  • the storage period is, for example, 0.5 to 1.5 months, and the storage temperature is, for example, 70 to 90.degree.
  • the divalent iron and/or monovalent copper may be added before, during and/or after the production of the ozone-treated glycerin.
  • the method for producing the composition of the present invention includes, for example, adding the divalent iron and/or monovalent copper to the glycerin solution or ozone-treated glycerin to a predetermined concentration, and mixing. .
  • the ozonated glycerin and other ingredients may be premixed, i.e., as one component, or may be unmixed. It may be a state, ie two or more components. In the latter case, the composition of the invention can also be referred to as, for example, a composition kit.
  • the other components include formic acid, divalent iron, and monovalent copper.
  • the composition kit may, for example, further include an instruction manual and the like.
  • composition of the present invention is not particularly limited, and can be applied, for example, to applications that impart antiviral activity.
  • the composition of the present invention includes, for example, feed compositions; food compositions; external skin compositions such as cosmetics (cosmetics); Articles; animal articles; fiber sheets; and the like.
  • the virus control method of the present invention uses the antiviral composition of the present invention.
  • the control method of the present invention is characterized by using the composition of the present invention, and other steps and conditions are not particularly limited.
  • the composition of the present invention can control viruses. Therefore, the control method of the present invention can effectively control, for example, virus infection.
  • the control method of the present invention can refer to the description of the antiviral composition of the present invention.
  • virus control includes, for example, prevention, suppression, or prevention of contact, attachment, or colonization of a virus to an object, removal, reduction, or prevention of increase of the virus attached to the object, It may mean either suppression or prevention.
  • the target object is not particularly limited, and can be any desired object for virus control.
  • the object is, for example, the administration subject; spaces such as living rooms, living rooms, and chests; fabrics such as curtains; clothing such as suits and sweaters; textile products such as carpets and sofas; Hard surfaces such as pedestals, indoor floors, ceilings, walls;
  • the control method of the present invention includes, for example, a contact step of contacting an object with the composition of the present invention.
  • the contacting step can be carried out, for example, by bringing the composition of the present invention into contact with the object by spraying, coating, or the like.
  • the method of treating viruses of the present invention uses the antiviral composition of the present invention.
  • the treatment method of the present invention is characterized by using the composition of the present invention, and other steps and conditions are not particularly limited.
  • the compositions of the present invention are expected to effectively treat viral infections.
  • the description of the composition and control method of the present invention can be used.
  • the "treatment” means, for example, the ability to inhibit or suppress the development and progression of symptoms (disease) due to infection with the virus. Any of prevention, suspension, suppression, inhibition, improvement, and the like may be used. Therefore, the therapeutic method of the present invention can also be said to be, for example, a method for controlling viral infections.
  • the therapeutic method of the present invention includes, for example, an administration step of administering the composition. More specifically, the therapeutic method of the present invention includes, for example, an administration step of administering the antiviral composition to an administration subject (eg, subject, patient). The therapeutic method of the present invention may use the antiviral composition of the present invention as the composition.
  • the administering step may be performed, for example, in vitro or in vivo .
  • the subjects and conditions for administration of the composition can refer to, for example, the description of subjects and conditions for administration of the composition of the present invention.
  • the present invention is said ozonated glycerin, or use thereof, for use in controlling viruses or for use in viral infections. Also, the present invention is the use of ozonated glycerin for manufacturing an antiviral composition or antiviral agent.
  • the description of the antiviral composition, control method, and treatment method of the present invention can be used.
  • Example 1 The composition of the present invention was produced and confirmed to exhibit anti-porcine epidemic diarrhea virus activity.
  • composition Concentrated glycerin and ozone were brought into gas-liquid contact to produce an ozone-treated glycerin solution (ozone gel) as described below.
  • the concentrated glycerin means glycerin having a concentration of 98% by weight or more of the Japanese Pharmacopoeia product.
  • a Teflon (registered trademark) tank with a capacity of 50 l was used as the contact tank.
  • An air diffuser was installed on the bottom of the tank so that ozone could be supplied into the tank in the form of fine bubbles.
  • a silent discharge ozone generator capable of generating 100 g of ozone per hour was used using a high-concentration oxygen gas containing 90% by volume or more of high-concentration oxygen as a raw material.
  • Example 1 (1) The ozone-treated glycerin obtained in Example 1 (1) was stored under conditions of 40°C for one month. A portion of the ozone-treated glycerin after storage was collected (sample A). Further, the remainder of the ozone-treated glycerin was subjected to a heat treatment at 80° C. for one month to deaerate ozone from the ozone-treated glycerin.
  • the oxidizing power of the composition was measured for the ozone-treated glycerin solution by the potassium iodide titration method. Specifically, 17.90 g of potassium dihydrogen phosphate ( KH2PO4 ) and 17.14 g of disodium hydrogen phosphate ( Na2HPO4.12H2O ) were added to about 400 g of purified water and dissolved. After that, 25.00 g of potassium iodide (KI) was added and dissolved. The resulting solution was diluted with purified water to a total volume of about 500 g to prepare a potassium iodide-absorbing solution.
  • KH2PO4 potassium dihydrogen phosphate
  • Na2HPO4.12H2O disodium hydrogen phosphate
  • KI potassium iodide
  • the oxidizing power of the ozone-treated glycerin solution was 4000 ppm.
  • O (S t ⁇ 24 ⁇ T)/S (A)
  • S t concentration of sodium thiosulfate in sodium thiosulfate solution (mmol/l)
  • T Titration volume of sodium thiosulfate solution (ml)
  • samples A and B the concentration of formic acid was measured by ion chromatography. Specifically, samples A and B were diluted 1000 times with ultrapure water. Next, the formic acid concentrations in the diluted samples were measured under the following measurement conditions, and the formic acid concentrations of samples A and B were calculated based on this. The control was calculated in the same manner as in Example 1(1) except that the concentrated glycerin was used. These results are shown in Table 1 below.
  • Measurement device Dionex ion chromatography system ICS-2100 (Manufactured by Thermo Fisher Scientific) Column: Dionex IonPacAS19 (manufactured by Thermo Fisher Scientific) Eluent: Dionex EGCIII KOH (Thermo Fisher Scientific)
  • Example 1 (4) Measurement of pH
  • the ozone-treated glycerin solution obtained in Example 1 (1) was placed in a container (enlightened acid glass and PP cap (HRPP sheet)). Then, the container was incubated in a constant temperature bath at 40° C., and after a predetermined period of time (0, 6, or 7 days), the ozone-treated glycerin solution was collected.
  • the recovered ozone-treated glycerin solution (O) and purified water (W) were mixed so that the volume ratio (O:W) was 9:1.
  • the resulting mixed solution was stirred for 10 seconds using a vortex mixer, and purified water was dissolved in the ozone-treated glycerin solution to prepare a sample.
  • the pH of the ozone-treated glycerin solution was about 2.2, and did not change significantly even with the heat treatment. Since the virus activity is affected by pH, it was considered that the pH of the ozone-treated glycerin solution contributed to the antiviral activity of the ozone-treated glycerin solution.
  • Example 1(1) Porcine Epidemic Diarrhea (PED) virus (PEDV) belonging to the genus Alphacoronavirus of the family Coronaviridae.
  • PED Porcine Epidemic Diarrhea
  • PEDV Porcine Epidemic Diarrhea virus
  • Example solution ozone-treated glycerin solution having an oxidizing power of 2000 ppm.
  • 0.1 ml of PEDV solution adjusted to 10 7.7 TCID 50 /ml was added to 0.9 ml of the sample solution to prepare a reaction solution, and the resulting reaction solution was allowed to stand at room temperature for 10 or 30 minutes (about 25°C).
  • PEDV was prepared by infecting Vero cells cultured in MEM (Minimum Essential Medium Eagle) medium containing 5% fetal bovine serum with PEDV. After the reaction, 9 ml of a phosphate-buffered saline solution containing 0.05% (w/v) sodium thiosulfate was added to the reaction solution, mixed well, and further 0.05% (w/v) sodium thiosulfate. The action of ozone in the ozonated glycerin solution on PEDV was stopped by diluting it 10-fold with the containing phosphate-buffered saline solution.
  • MEM Minimum Essential Medium Eagle
  • the reaction solution was serially diluted 10-fold from 10 ⁇ 1 to 10 ⁇ 8 . Then, 0.1 ml of each dilution was inoculated into five wells of a 96-well microplate seeded with Vero cells. After the inoculation, the cells were cultured for 5 days under conditions of 37° C. and 5% CO 2 . After the culture, the cytopathic effect (CPE) due to virus growth was observed, and the virus infectivity titer (TCID 50 /ml) was determined.
  • CPE cytopathic effect
  • TCID 50 /ml virus infectivity titer
  • the infectivity titer of PEDV was measured in the same manner except that a glycerin solution was used instead of the ozone-treated glycerin solution.
  • LRV log 10 (T 0 /O 10 )
  • B LRV: logarithmic reduction in virus infectious value
  • T0 control infectious value
  • O10 infectious value of ozone-treated glycerin solution after 10 minutes of reaction
  • Virus reduction rate [1-(0.1) LRV ] x 100
  • C viral infection titer logarithmic reduction value
  • the PEDV infectivity titer was almost the same as the control infectivity titer even after reacting for 10 or 30 minutes.
  • the infectivity titer of PEDV became below the detection limit after 10 minutes of reaction.
  • the PEDV infectivity was below the detection limit even after 30 minutes of reaction.
  • the antiviral composition of the present invention exhibits anti-PEDV virus activity.
  • Example 2 A composition of the present invention was produced and confirmed to exhibit anti-influenza activity.
  • Anti-influenza activity was measured using influenza A virus (Influenza A Virus, H1N1, A/PR/8/34, ATCC (registered trademark) VR-95 (trademark)).
  • influenza A virus was inoculated into the chorioallantoic cavity of embryonated chicken eggs, cultured in an incubator, and the chorioallantoic fluid was collected and purified by density gradient centrifugation (virus fluid).
  • virus solution was thoroughly mixed, and the resulting mixture was stirred for 1 minute. The reaction was allowed to proceed at room temperature.
  • PBS phosphate-buffered saline
  • sample stock solution for virus infectivity titer measurement was serially diluted 10-fold with PBS. Then, 50 ⁇ L of the sample undiluted solution for virus infectivity titer measurement or each dilution and 50 ⁇ L of MDCK cells suspended in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) containing 5% fetal bovine serum (FBS) were added to a 96-well micrometer. Plates were inoculated. After the inoculation, the cells were cultured for 4 days at 37°C and 5% CO2 .
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
  • FBS 5% fetal bovine serum
  • the virus infectivity titer (TCID 50 /ml) was determined.
  • the infection titer of the influenza A virus was measured in the same manner, except that a concentrated glycerin (control gel) solution was used instead of the ozone gel.
  • a control was performed in the same manner, except that the influenza A virus infectivity titer was measured immediately after contacting the control gel with the influenza A virus.
  • the virus infectivity titer (TCID 50 /ml) was calculated using the Reed-Muench method. Based on the infection titer of the control, the viral infection titer log reduction value was calculated using the following formula (D).
  • the influenza A virus infection titer was almost the same as that of the control even after 1 minute of reaction.
  • the LRV was 1.5 log 10 after 1 minute of reaction, and the influenza A virus was inactivated.
  • the antiviral composition of the present invention exhibits anti-influenza A virus activity.
  • both PEDV and influenza virus are enveloped viruses, it was suggested that the antiviral composition of the present invention can be used particularly preferably for enveloped viruses.
  • ESR measurement conditions Device: Electron spin resonator (EMX-nano, manufactured by Bruker) Measurement condition: Microwave output: 8mW Sweep time: 1 minute Sweep width: 335.5 ⁇ 5 mT Magnetic field modulation: 100kHz 0.079mT Gain: x630 Time constant: 0.03 seconds
  • FIG. 1 is a graph showing the ESR measurement results of glycerin that has not been ozone-treated
  • FIG. 2 is a graph showing the ESR measurement results of ozone-treated glycerin. 1 and 2, the horizontal axis indicates the strength of the magnetic field (Field [G]), and the vertical axis indicates the signal intensity (Intensity).
  • the horizontal axis indicates the strength of the magnetic field (Field [G])
  • the vertical axis indicates the signal intensity (Intensity).
  • FIG. 1 no radical generation was observed in the ozone-untreated glycerin.
  • FIG. 2 radical generation was observed in ozone-treated glycerin.
  • Appendix 1 An antiviral composition comprising ozonated glycerin.
  • Appendix 2 A composition according to clause 1, comprising formic acid.
  • Appendix 3 A composition according to Appendix 1 or 2, comprising bivalent iron and/or monovalent copper.
  • Appendix 4 4. The composition according to any one of Appendices 1 to 3, wherein the ozonated glycerin has a pH of 2 or less.
  • Appendix 5 5.
  • Appendix 7 A contact step of contacting the object with the antiviral composition, A method for controlling a virus, wherein the antiviral composition is the antiviral composition according to any one of Appendices 1 to 6.
  • Appendix 8) A composition comprising ozonated glycerin for use in controlling viruses.
  • Appendix 9) A composition comprising ozonated glycerin for use in treating viral infections.
  • viruses can be controlled.
  • ozone coexists with glycerin, so that by applying it to an arbitrary site, it is possible to exhibit an antiviral effect on that site. Therefore, the present invention can be said to be extremely useful in, for example, the fields of medicine, cosmetics, livestock, food, and daily necessities.

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Abstract

抗ウイルス組成物を提供する。　本発明の抗ウイルス組成物は、オゾン処理グリセリンを含む。

Description

抗ウイルス組成物およびその用途
　本発明は、抗ウイルス組成物およびその用途に関する。
　インフルエンザウイルス等の多種多様な呼吸器感染性のウイルスによる感染症が問題視されており、様々な抗ウイルス剤が研究および開発されている（非特許文献１）。ウイルスの増殖サイクルは、大きく、細胞への感染と、感染細胞内でのウイルスの増殖および感染細胞外への増殖ウイルスの放出とに分けられる。そして、これらの個々の工程に対するアプローチが行われている。
Cecile L Tremblay, "Antiviral Agents Against Respiratory Viruses", Clin Microbiol Newsl., 2001. vol.23, No.21, pages 163-170
　そこで、本発明は、新たな抗ウイルス組成物を提供する。
　前記目的を達成するために、本発明の抗ウイルス組成物（以下、「組成物」という）は、オゾン処理グリセリンを含む。
　本発明のウイルスの防除方法は、対象物と、抗ウイルス組成物とを接触させる接触工程を含み、
前記抗ウイルス組成物は、前記本発明の抗ウイルス組成物である。
　本発明によれば、抗ウイルス活性を示す組成物を提供できる。
図１は、実施例３におけるオゾン未処理のグリセリンのＥＳＲの測定結果を示すグラフである。 図２は、実施例３におけるオゾン処理グリセリンのＥＳＲの測定結果を示すグラフである。
＜抗ウイルス組成物＞
　本発明の抗ウイルス組成物は、前述のように、オゾン処理グリセリンを含む。本発明の組成物は、オゾン処理グリセリンを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。
　本発明者らは、鋭意研究の結果、オゾン処理グリセリンが抗ウイルス活性を示すことを見出し、本発明を確立するに至った。本発明によれば、ウイルスを防除することができる。また、本発明の組成物は、例えば、ヒトの皮膚に塗布した際に皮膚に対する刺激性が低いまたはなく、皮膚障害を惹起しないことを確認している。このため、本発明の組成物は、例えば、安全性に優れている。
　本発明において、「抗ウイルス」は、例えば、ウイルスの不活化；ウイルスの感染能の低下、抑制、または不能化；ウイルスの感染の予防、防止、または防除；ウイルスの感染の治療；感染したウイルスによる症状（病害）の未発生または症状の進行の防止、停止、抑制、阻害、もしくは改善；ウイルスの防除；等のいずれの意味で用いてもよい。
　本発明において、前記ウイルスは、特に制限されず、例えば、エンベロープを有するウイルス、すなわち、エンベロープウイルスでもよいし、エンベロープを有さないウイルス、すなわち、ノンエンベロープウイルスでもよい。また、前記ウイルスは、ＤＮＡウイルスでもよいし、ＲＮＡウイルスでもよい。具体例として、前記エンベロープウイルスは、例えば、ヒトヘルペスウイルス１型（HHV-1、単純ヘルペスウイルス１型（HSV-1））、ヒトヘルペスウイルス２型（HHV-2、単純ヘルペスウイルス２型（HSV-2））、ヒトヘルペスウイルス３型（HHV-3、水痘・帯状疱疹ウイルス（VZV：Varicella Zoster virus））、ヒトヘルペスウイルス４型（HHV-4、エプスタイン・バール・ウイルス（EBV））、ヒトヘルペスウイルス５型（HHV-5、ヒトサイトメガロウイルス（HCMV））、ヒトヘルペスウイルス６型（HHV-6）、ヒトヘルペスウイルス７型（HHV-7）、ヒトヘルペスウイルス８型（HHV-8、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV））等のヘルペスウイルス科；天然痘ウイルス（Variola virus）、ワクチニアウイルス（Vaccinia virus）等のポックスウイルス科：Ｂ型肝炎ウイルス（Hepatitis B virus）等のヘパドナウイルス科；デングウイルス、日本脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、ジカウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス等のフラビウイルス科；風疹ウイルス等のトガウイルス科；ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２（ＣＯＶＩＤ－１９）等のコロナウイルス科；インフルエンザウイルス等のオルトミクソウイルス科；麻疹ウイルス、ＲＳウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス等のレトロウイルス科；等に属するウイルスがあげられる。前記ノンエンベロープウイルスは、例えば、アデノウイルス１～５２型（遺伝型）等のアデノウイルス科；ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ヒトライノウイルスＡ～Ｃ、エンテロウイルス等のピコルナウイルス科；ノロウイルス等のカリシウイルス科；ロタウイルス等のレオウイルス科：等に属するウイルスがあげられる。
　本発明の組成物は、例えば、エンベロープウイルス、特に、コロナウイルス科またはオルトミクソウイルス科に属するウイルスに好適に使用できる。
　本発明において、グリセリンは、単体のグリセリンでもよいし、グリセリン重合体でもよい。前記グリセリン重合体は、例えば、ジグリセリン、ポリグリセリン等があげられる。また、本発明において、グリセリンは、グリセリン誘導体でもよい。前記グリセリン誘導体は、例えば、グリセリンおよびグリセリン重合体に、修飾（基）を導入した化合物である。
　本発明の組成物において、前記オゾン処理グリセリンは、例えば、オゾンの一部または全部がグリセリンと接触している状態、すなわち、オゾンの一部または全部がグリセリンと混合された状態を意味する。本発明の組成物において、オゾンの一部または全部がグリセリンに溶存してもよい、すなわち、前記グリセリンに溶解して存在してもよい。オゾンの一部がグリセリンに溶存している場合、グリセリンに溶存していないオゾンは、グリセリンと接触していることが好ましい。
　本発明の組成物は、希釈物質を含んでもよい。前記希釈物質は、例えば、非水性溶媒または水性溶媒があげられる。前記非水性溶媒は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール（ＰＧ）、ブチレングリコール（ＢＧ）、ジプロピレングリコール（ＤＰＧ）等があげられる。前記水性溶媒は、例えば、水；緩衝液、生理的食塩水等の水溶液；等があげられる。本発明の組成物が希釈物質を含む場合、本発明の組成物に占めるグリセリンの割合（（v/v）％）は、例えば、本発明の組成物の用途に応じて適宜設定できる。具体例として、本発明の組成物に占めるグリセリンの割合としては、以下の割合が例示できる。本発明の組成物を点滴用製剤または注射投与用製剤として用いる場合、前記グリセリンの割合は、例えば、１～２０（v/v）％、５～１５（v/v）％である。本発明の組成物を直腸適用製剤として用いる場合、前記グリセリンの割合は、例えば、３０～７０（v/v）％、４０～６０（v/v）％である。本発明の組成物を皮膚適用剤として用いる場合、前記グリセリンの割合は、例えば、５（v/v）％以上、８（v/v）％以上である。
　前記オゾン処理グリセリンの酸化力は、特に制限されず、例えば、対象物または対象動物（投与対象）の種類、ウイルスの種類、ウイルスの感染の程度等に応じて、適宜設定できる。また、後述のように、本発明の組成物を使用時に希釈する場合、前記オゾン処理グリセリンの酸化力は、例えば、使用時の酸化力よりも高く調整してもよい。前記オゾン処理グリセリンの酸化力は、例えば、０～１００００ｐｐｍ、１～１００００ｐｐｍ、１０ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～４０００ｐｐｍ、１００～２０００ｐｐｍである。また、本発明の組成物を使用時に希釈する場合、希釈前のオゾン処理グリセリンの酸化力は、例えば、０～１００００ｐｐｍ、１ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、１０ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～４０００ｐｐｍ、１００～２０００ｐｐｍである。前記オゾン処理グリセリンの酸化力は、例えば、後述の実施例１に準じて、ヨウ化カリウム滴定法により測定できる。
　本発明の組成物は、ギ酸を含んでもよい。本発明の組成物は、ギ酸を含むことにより、例えば、抗ウイルス活性が増強される。ギ酸は、ギ酸塩でもよい。ギ酸塩は、例えば、ギ酸と金属との塩があげられ、具体例として、ギ酸ナトリウム、ギ酸カリウム等があげられる。
　本発明の組成物がギ酸を含む場合、前記ギ酸は、オゾン処理グリセリン中に内在する、すなわち、オゾン処理グリセリンにおいて生成されるギ酸でもよいし、オゾン処理グリセリンに対して、添加されたギ酸でもよいし、両者でもよい。
　前記オゾン処理グリセリンにおけるギ酸の濃度は、特に制限されず、例えば、対象物または対象動物（投与対象）の種類、ウイルスの種類、ウイルスの感染の程度等に応じて、適宜設定できる。前記オゾン処理グリセリンにおけるギ酸の濃度は、例えば、０．０１～１００ｍｇ／ｇ、０．１～１００ｍｇ／ｇ、０．１～２０ｍｇ／ｇ、０．１～１０ｍｇ／ｇ、１～１０ｍｇ／ｇである。前記オゾン処理グリセリンにおけるギ酸の濃度は、例えば、ギ酸が抗ウイルス活性を示す濃度より低い濃度でもよい。具体例として、前記オゾン処理グリセリンにおけるギ酸の濃度は、例えば、０．１～２０ｍｇ／ｇ、０．１～１０ｍｇ／ｇ、１～１０ｍｇ／ｇである。前記オゾン処理グリセリンに対するギ酸の量は、例えば、前記オゾン処理グリセリンが内在的に含有するギ酸の量でもよいし、前記オゾン処理グリセリンに添加されたギ酸の濃度でもよいし、両者の合計のギ酸の濃度でもよいが、好ましくは、両者の合計のギ酸の濃度である。前記ギ酸の濃度は、例えば、後述の実施例１に準じて、イオンクロマトグラフ法により測定できる。
　本発明の組成物を使用時に希釈する場合は、前記オゾン処理グリセリンにおけるギ酸の濃度は、例えば、使用時の濃度よりも高濃度に調整してもよい。本発明の組成物を使用時に希釈する場合、希釈前のオゾン処理グリセリンにおけるギ酸の濃度は、例えば、０．０１～１００ｍｇ／ｇ、０．１～１００ｍｇ／ｇ、０．１～２０ｍｇ／ｇ、０．１～１０ｍｇ／ｇ、１～１０ｍｇ／ｇである。
　本発明の組成物は、二価鉄および／または一価銅を含んでもよい。本発明の組成物は、例えば、前記二価鉄および／または一価銅を含むことにより、前記オゾン処理グリセリンの酸化力を増強できるため、抗ウイルス活性がより増強されると推定される。
　前記二価鉄は、溶媒、特に、水または水溶液等の水性溶媒中において、二価の鉄イオン（Ｆｅ２＋）が生じる物質を意味する。前記二価鉄は、二価の鉄イオンを含む化合物または複合体ということもできる。前記二価鉄は、例えば、塩化鉄（II）、硫酸鉄（II）、フマル酸鉄（II）、硫酸鉄（II）、炭酸鉄（II）、クエン酸鉄（II）、酪酸鉄（II）、マレイン酸鉄（II）等の二価鉄の塩；ヘモグロビン、フェリチン、および／またはトランスフェリン等の金属をキレートするタンパク質と鉄（II）イオン（Ｆｅ２＋）との組合せ；等があげられる。
　前記オゾン処理グリセリンにおける二価鉄の濃度は、例えば、０．１μｍｏｌ／l～１００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは、０．１～１０ｍｍｏｌ／ｌである。
　前記一価銅は、溶媒、特に、水または水溶液等の水性溶媒中において、一価の銅イオン（Ｃｕ＋）が生じる物質を意味する。前記一価銅は、一価の銅イオンを含む化合物または複合体ということもできる。前記一価銅は、例えば、硫化銅（Ｉ）、塩化銅（Ｉ）、酸化銅（Ｉ）、硫酸銅（Ｉ）等の一価銅の塩；メタロチオネイン、セルロプラスミン等の金属をキレートするタンパク質と、銅（Ｉ）イオン（Ｃｕ＋）との組合せ；等があげられる。
　前記オゾン処理グリセリンにおける一価銅の濃度は、例えば、０．１μｍｏｌ／l～１００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは、０．１～１０ｍｍｏｌ／ｌである。
　前記二価鉄および／または一価銅としては、いずれか一方または両方を含む組成物を用いてもよい。前記二価鉄および／または一価銅を含む組成物としては、例えば、全血、血清、血漿等の血液またはその分画；ヘモグロビン、フェリチン、トランスフェリン等の金属をキレートしたタンパク質；等があげられる。
　本発明の組成物を使用時に希釈する場合は、前記オゾン処理グリセリンにおける二価鉄および／または一価銅の濃度は、例えば、使用時の濃度よりも高濃度に調整してもよい。本発明の組成物を使用時に希釈する場合、希釈前のオゾン処理グリセリンにおける二価鉄および／または一価銅の濃度は、例えば、０．１μｍｏｌ／l～１００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは、０．１～１０ｍｍｏｌ／ｌである。
　本発明の抗ウイルス組成物は、他の抗ウイルス剤を含んでもよい。前記他の抗ウイルス剤は、例えば、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、対象において抗ウイルス応答を誘導する抗ウイルス剤等があげられ、具体例として、リバビリン、インターフェロン、ヌクレシド誘導体等があげられる。
　本発明の組成物のｐＨは、特に制限されず、例えば、ｐＨ１～８、ｐＨ１～５、ｐＨ１～４等が例示でき、抗ウイルス活性が増強することから、好ましくは、ｐＨ４以下またはｐＨ１～４である。ｐＨは、例えば、前記緩衝液によって調整してもよいし、後述のｐＨ調整剤により調整してもよい。
　本発明の組成物は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏで使用してもよいし、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで使用してもよい。本発明の組成物の使用する対象は、例えば、後述の対象物および投与対象の説明を援用できる。
　本発明の組成物の投与対象は、特に制限されない。本発明の組成物をｉｎ　ｖｉｖｏで使用する場合、前記投与対象は、例えば、ヒト、またはヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物としては、例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ウマ、ネコ、ヤギ、サル、モルモット等があげられる。前記本発明の組成物をｉｎ　ｖｉｔｒｏで使用する場合、前記投与対象は、例えば、細胞、組織、器官等があげられ、前記細胞は、例えば、生体から採取した細胞、培養細胞等があげられる。
　本発明の組成物の使用条件（投与条件）は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類等に応じて、投与形態、投与時期、投与量等を適宜設定できる。
　本発明の組成物の投与量は、特に制限されない。本発明の組成物をｉｎ　ｖｉｖｏで使用する場合、例えば、投与対象の種類、症状、年齢、投与方法等により適宜決定できる。具体例として、ヒトに経皮投与する場合、１日あたりの組成物の投与量は、合計が、例えば、０．１～１００ｇ、０．１～１０ｇ、０．５～１ｇであり、好ましくは、０．５～１ｇであり、１日あたりの投与回数は、例えば、１～５回、１～３回、１～２回であり、好ましくは１～２回である。
　本発明の組成物の投与形態は、特に制限されない。本発明の組成物をｉｎ　ｖｉｖｏで投与する場合、経口投与でもよいし、非経口投与でもよい。前記非経口投与は、例えば、静脈注射（静脈内投与）、筋肉注射（筋肉内投与）、経皮投与、皮下投与、皮内投与、経腸投与、直腸投与、経膣投与、経鼻投与、経肺投与、腹腔内投与、局所投与等があげられる。
　本発明の組成物の剤型は、特に制限されず、例えば、前記投与形態に応じて適宜決定できる。前記剤型は、例えば、液体状、固体状があげられる。具体例として、前記剤型は、放出調節製剤（腸溶性製剤、徐放性製剤等）、カプセル剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、芳香水剤、リモナーデ剤等）、シロップ剤（シロップ用剤等）、顆粒剤（発泡顆粒剤、細粒等）、散剤、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解剤、被覆錠剤等）、丸剤、経口ゼリー剤等の経口投与用製剤；口腔用錠剤（ガム剤、舌下剤、トローチ剤、ドロップ剤、バッカル錠、付着錠等）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤等の口腔内適用製剤；注射剤（埋め込み注射、持続性注射剤、輸液剤（点滴用製剤等）、凍結乾燥注射剤、粉末注射剤、充填済シリンジ剤、カートリッジ剤等）等の注射投与用製剤；透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）等の透析用製剤；吸入剤（吸入エアゾール剤、吸入液剤、吸入粉末剤等）等の気管支・肺適用製剤；眼軟膏剤、点眼剤等の目投与用製剤；点耳剤等の耳投与製剤；点鼻剤（点鼻液剤、点鼻粉末剤等）等の鼻適用製剤；坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤等の直腸適用製剤；膣用坐剤、膣錠等の膣適用製剤；外用液剤（酒精剤、リニメント剤、ローション剤等）、クリーム剤、ゲル剤、外用固形剤（外用散剤等）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤等）、貼付剤（テープ剤、パップ剤等）、軟膏剤等の皮膚適用剤；等があげられる。本発明の組成物を経口投与する場合、前記剤型は、例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等があげられる。本発明の組成物を非経口投与する場合、前記剤型は、例えば、注射投与用製剤、点滴用製剤等があげられる。本発明の組成物を経皮投与する場合、前記剤型は、例えば、貼付剤、塗布剤、軟膏、クリーム、ローション等の外用薬があげられる。
　本発明の組成物は、例えば、必要に応じて、添加剤を含んでもよく、本発明の組成物を医薬または医薬組成物として使用する場合、前記添加剤は、薬学的に許容可能な添加剤または薬学的に許容可能な担体を含むことが好ましい。前記添加剤は、特に制限されず、例えば、基剤原料、賦形剤、着色剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、保存剤、ｐＨ調整剤、香料等の矯味矯臭剤等があげられる。本発明の組成物において、前記添加剤の配合量は、前記含窒素酸化物の機能を妨げるものでなければ、特に制限されない。
　前記賦形剤は、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、αデンプン、デキストリン等のデンプン誘導体；結晶セルロース等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン等の有機系賦形剤；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等のケイ酸塩誘導体；リン酸水素カルシウム等のリン酸塩；炭酸カルシウム等の炭酸塩；硫酸カルシウム等の硫酸塩等の無機系賦形剤があげられる。前記滑沢剤は、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；タルク；ポリエチレングリコール；硬化植物油等があげられる。前記矯味矯臭剤は、例えば、ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末等の香料、甘味料、酸味料等があげられる。前記結合剤は、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等があげられる。前記崩壊剤は、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾デンプンおよび化学修飾セルロース類等があげられる。前記安定剤は、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾール等のフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；ソルビン酸等があげられる。前記ｐＨ調整剤は、例えば、目的とするｐＨに応じて適宜決定できる。具体例として、酸性側に調整する場合、前記ｐＨ調整剤は、例えば、酢酸、乳酸、リン酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、塩酸、グルコン酸、硫酸等の酸性物質が使用できる。塩基性側に調整する場合、前記ｐＨ調整剤は、例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の塩基性物質が使用できる。前記ｐＨ調整剤は、例えば、１種類でもよいし、２種類以上を併用してもよい。
　本発明の組成物は、例えば、グリセリンとオゾンとを接触させること、より具体的には、グリセリンとオゾンとを混合することにより製造できる。本発明の組成物の製造方法の一例として、オゾンおよびグリセリンを接触させる例について説明する。ただし、本発明の組成物の製造方法は、下記の例に何ら限定されない。
　まず、前記オゾン処理グリセリンは、例えば、グリセリン溶液とオゾンを含む気体とを、気液接触させることで製造できる。
　前記グリセリン溶液は、グリセリンが高濃度であることが好ましい。前記高濃度のグリセリン溶液としては、例えば、グリセリン濃度７５％以上のグリセリン溶液を用いることができ、具体例として、日本薬局方品の８４～８７重量％のグリセリン溶液が好ましく、日本薬局方品のグリセリン濃度９８重量％以上の濃グリセリン溶液がより好ましく、濃度９８．５重量％以上の精製グリセリン溶液がさらに好ましい。前記グリセリン溶液は、例えば、グリセリン濃度が相対的に高い程、オゾンをより高濃度に処理させることができる。前記グリセリン溶液において、グリセリンに対する溶媒は、特に制限されず、例えば、水等の水性溶媒である。
　前記オゾンを含む気体は、オゾンが高濃度であることが好ましい。前記オゾン濃度の高い気体の製造方法は、特に制限されず、例えば、酸素ガスに無声放電することでオゾンを生成するオゾン発生装置が使用できる。酸素ガスを用いる場合、例えば、医療用の酸素ボンベを用いてもよいし、また、酸素発生装置で製造された酸素ガスを用いてもよい。
　前記グリセリン溶液と前記オゾンを含む気体とを気液接触させる方法としては、特に制限されず、例えば、タンクに高濃度（例えば、９８重量％以上）のグリセリン溶液を入れ、散気管を用いて前記タンク内に前記オゾン濃度の高い気体を微細な気泡として放出する方法がある。具体的には、例えば、オゾン濃度約３７０００ｐｐｍの気体を、前記濃グリセリン溶液中に、約７日間曝気することにより、酸化力約４０００ｐｐｍのオゾン処理グリセリン溶液を製造できる。曝気の時間は、特に制限されず、例えば、相対的により長時間行うことにより、酸化力がより高いオゾン処理グリセリン溶液を製造できる。また、前記オゾン処理グリセリン溶液中には、０．０１～１００ｍｇ／ｇのギ酸が生じる。
　本発明者らは、前記オゾン処理グリセリンを調製し、加熱処理すると、ギ酸が生成することを見出した。このため、本発明の組成物の製造方法は、例えば、オゾン処理グリセリンを調製後、前記オゾン処理グリセリンを加熱する加熱工程を含んでもよい。前記加熱処理の温度は、例えば、７０～９０℃である。前記加熱処理の時間は、例えば、０．５～１．５ヶ月である。
　また、本発明者らは、前記オゾン処理グリセリンを調製し、長期間にわたり保存すると、ギ酸が生成することを見出した。このため、本発明の組成物の製造方法は、例えば、オゾン処理グリセリンを調製後、保存する保存工程を含んでもよい。保存期間は、例えば、０．５～６ヶ月、１～４ヶ月である。保存温度は、例えば、３０～９０℃、４０～８０℃である。具体例として、前記保存期間は、例えば、０．５～６ヶ月であり、前記保存温度は、３０～４５℃である。また、前記保存期間は、例えば、０．５～１．５ヶ月であり、前記保存温度は、例えば、７０～９０℃である。
　本発明の組成物の製造方法では、前記オゾン処理グリセリンの製造前、中および／または後に、前記二価鉄および／または一価銅を添加してもよい。この場合、本発明の組成物の製造方法は、例えば、前記グリセリン溶液またはオゾン処理グリセリンに対して、所定の濃度となるように、前記二価鉄および／または一価銅を添加し、混合する。
　本発明の組成物がオゾン処理グリセリンと他の成分とを含む場合、前記オゾン処理グリセリンと他の成分とは、予め混合されてもよい、すなわち、１つの構成部材としてもよいし、未混合の状態、すなわち、２つ以上の構成部材としてもよい。後者の場合、本発明の組成物は、例えば、組成物キットということもできる。前記他の成分は、例えば、ギ酸、二価鉄、一価銅等があげられる。前記組成物キットは、例えば、さらに、取扱説明書等を含んでもよい。
　本発明の組成物は、特に制限されず、例えば、抗ウイルス活性を付与する用途に適用することができる。具体例として、本発明の組成物は、例えば、飼料用組成物；食品用組成物；化粧料（化粧品）等の皮膚外用組成物；口腔洗浄剤、歯磨き粉等の口腔内適用組成物；吸収性物品；動物用物品；繊維シート；等に好適に使用できる。
＜ウイルスの防除方法＞
　本発明のウイルスの防除方法は、前記本発明の抗ウイルス組成物を使用する。本発明の防除方法は、前記本発明の組成物を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の組成物によれば、ウイルスを防除可能である。したがって、本発明の防除方法は、例えば、ウイルスによる感染を効果的に防除できる。本発明の防除方法は、前記本発明の抗ウイルス組成物の説明を援用できる。
　本発明において、前記「ウイルスの防除」は、例えば、対象物へのウイルスの接触、付着、もしくは定着の予防、抑制または防止および対象物に付着しているウイルスの除去、低減、増加の予防、抑制もしくは防止等のいずれの意味でもよい。
　前記対象物は、特に制限されず、ウイルスの防除を行ないたい、所望の物とできる。具体例として、前記対象物は、例えば、前記投与対象；リビング、居間、タンス内等の空間；カーテン等の布地；スーツ、セーター等の衣類；カーペット、ソファー等の繊維製品；食器；ゴミ箱；調理台、室内の床、天井、壁等の硬質表面；等があげられる。
　本発明の防除方法は、例えば、対象物と、前記本発明の組成物とを接触させる接触工程を含む。前記接触工程は、例えば、前記対象物に対して、前記本発明の組成物を噴霧、塗布等により接触させることにより実施できる。
＜ウイルス感染症の治療方法＞
　本発明のウイルスの治療方法は、前記本発明の抗ウイルス組成物を使用する。本発明の治療方法は、前記本発明の組成物を使用することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の組成物は、ウイルスによる感染症を効果的に治療できると期待される。本発明の治療方法は、前記本発明の組成物および防除方法の説明を援用できる。
　本発明において、前記「治療」は、例えば、前記ウイルスの感染による症状（病害）の発生および進行に対する阻害能または抑制能を意味し、具体的に、例えば、症状の未発生または症状の進行の防止、停止、抑制、阻害、および改善等のいずれでもよい。このため、本発明の治療方法は、例えば、ウイルスによる感染症の防除方法ということもできる。
　本発明の治療方法は、例えば、前記組成物を投与する投与工程を含む。より具体的には、本発明の治療方法は、例えば、投与対象（例えば、対象者、患者）に、前記抗ウイルス組成物を投与する投与工程を含む。本発明の治療方法は、前記組成物として、前記本発明の抗ウイルス組成物を使用してもよい。
　本発明の治療方法において、前記投与工程は、例えば、ｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｉｎ　ｖｉｖｏで行なってもよい。前記投与工程において、前記組成物の投与対象および投与条件は、例えば、本発明の組成物における投与対象および投与条件の説明を援用できる。
＜組成物の使用＞
　本発明は、ウイルスの防除に用いるための、またはウイルス感染症に用いるための、前記オゾン処理グリセリン、またはその使用である。また、本発明は、抗ウイルス組成物または抗ウイルス薬を製造するための、オゾン処理グリセリンの使用である。本発明は、例えば、前記本発明の抗ウイルス組成物、防除方法、および治療方法の説明を援用できる。
　つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、以下の実施例により制限されない。市販の試薬は、特に示さない限り、それらのプロトコールに基づいて使用した。
［実施例１］
　本発明の組成物を製造し、抗豚流行性下痢ウイルス活性を示すことを確認した。
（１）組成物の製造
　濃グリセリンとオゾンとを気液接触させ、以下に示すようにして、オゾン処理グリセリン溶液（オゾンジェル）を製造した。ここで、前記濃グリセリンとは、日本薬局方品の９８重量％以上の濃度のグリセリンを意味する。
　接触槽として、容量５０ｌのテフロン（登録商標）製タンクを用いた。前記タンクの底面に散気管を設置し、オゾンを微細な気泡として前記タンク内に供給することができるようにした。９０体積％以上の高濃度酸素を含む高濃度酸素気体を原料として、毎時１００ｇのオゾン発生能力を有する無声放電式オゾン発生装置を使用した。
　前記タンクに２２ｋｇの前記濃グリセリンを入れ、前記オゾン発生装置に毎分２０ｌの前記高濃度酸素気体を送り込み、オゾンを含む気体を発生させ、前記発生した気体を、前記散気管から前記タンク内に７日間以上放出し、４０００ｐｐｍの酸化力を有するオゾン処理グリセリン溶液を得た。なお、酸化力は、後述する実施例１（２）のヨウ化カリウム滴定法により測定した。
　前記実施例１（１）で得られたオゾン処理グリセリンについて、４０℃の条件下で、１ヶ月保存した。保存後のオゾン処理グリセリンの一部を分取した（サンプルＡ）。また、残部のオゾン処理グリセリンについて、８０℃で、１ヶ月加熱処理することにより、オゾン処理グリセリンのオゾンを脱気させ、これをサンプルＢとした。
（２）酸化力の測定
　オゾン処理グリセリン溶液について、ヨウ化カリウム滴定法により、組成物の酸化力を測定した。具体的には、精製水約４００ｇに、リン酸二水素カリウム（KH2PO4）１７．９０ｇおよびリン酸水素二ナトリウム（Na2HPO4・12H2O）１７．１４ｇを添加し、溶解させた後、ヨウ化カリウム（KI）２５．００ｇを添加して溶解した。得られた溶解液を、精製水にて全体を約５００ｇにメスアップし、ヨウ化カリウム吸収液を調製した。つぎに、チオ硫酸ナトリウム（Na2S2O3）約０．３２ｇを、最終重量が約４００ｇとなるように精製水でメスアップ後、精製水に溶解させ、チオ硫酸ナトリウム溶液を調製した。さらに、精製水約２０ｇにデンプン約０．２２ｇを添加後、煮沸して溶解し、デンプン水溶液を調製した。
　つぎに、前記オゾン処理グリセリン溶液　約１ｇ（１．００～１．２０ｇ）に、ヨウ化カリウム吸収液　約５０ｇを添加し、回転数３００ｒｐｍ、温度０℃に設定したスターラー上で１０分間撹拌した。前記撹拌後、デンプン水溶液　約０．２ｍｌを添加した。そして、ロートを用い、チオ硫酸ナトリウム溶液をデンプン水溶液添加後の混合液に、前記混合液の色が無色透明になるまでゆっくりと滴下した。そして、下記式（Ａ）に基づき、サンプル（組成物）の酸化力を算出した。この結果、オゾン処理グリセリン溶液の酸化力は、４０００ｐｐｍであった。
 
　Ｏ＝（Ｓｔ×２４×Ｔ）／Ｓ　　　・・・（Ａ）
　　Ｏ：サンプル（組成物）の酸化力（ｐｐｍ）
　　Ｓｔ：チオ硫酸ナトリウム溶液におけるチオ硫酸ナトリウムの濃度（ｍｍｏｌ／ｌ）
　　Ｓ：サンプル（組成物）量（ｇ）
　　Ｔ：チオ硫酸ナトリウム溶液の滴定量（ｍｌ）
（３）ギ酸濃度の測定
　サンプルＡおよびＢについて、イオンクロマトグラフ法により、ギ酸の濃度を測定した。具体的には、サンプルＡおよびＢについて、超純水で１０００倍希釈した。つぎに、下記の測定条件により、希釈サンプル中のギ酸濃度を測定し、これに基づきサンプルＡおよびＢのギ酸濃度を算出した。コントロールは、前記実施例１（１）の濃グリセリンを用いた以外は、同様にして算出した。これらの結果を下記表１に示す。
（測定条件）
　測定装置：DionexイオンクロマトグラフィーシステムICS-2100
　　　　　　　　　　　　　　　　（Thermo Fisher Scientific社製）
　カラム：Dionex IonPacAS19（Thermo Fisher Scientific社製）
　溶離液：Dionex EGCIII KOH（Thermo Fisher Scientific社製）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　前記表１に示すように、濃グリセリンでは、ギ酸は検出限界以下（０．２ｍｇ／ｇ未満）であり、検出されなかった。これに対して、サンプルＡおよびＢでは、ギ酸が発生していた。また、サンプルＡを加熱処理したサンプルＢでは、ギ酸濃度が２倍以上に増加しており、加熱処理によりオゾン処理グリセリンにおいてギ酸を生成できることがわかった。さらに、サンプルＡおよびＢについて、ギ酸およびオゾン以外の成分について比較を行なったが、大きな差は見られなかった。後述のように、濃グリセリンは、抗ウイルス活性をほとんど示さないのに対して、オゾン処理グリセリン液は、極めて強い抗ウイルス活性を示す。このため、オゾン処理グリセリン液に含まれるギ酸が、オゾン処理グリセリン液の抗ウイルス活性に寄与していると考えられた。
（４）ｐＨの測定
　前記実施例１（１）で得られるオゾン処理グリセリン液について、容器（啓蒙酸ガラスおよびPPキャップ（HRPPシート））に収容した。そして、前記容器について、４０℃の恒温槽内でインキュベートし、所定期間（０、６、または７日）後にオゾン処理グリセリン液を回収した。回収したオゾン処理グリセリン液（Ｏ）と、精製水（Ｗ）とを体積比（Ｏ：Ｗ）が、９：１となるように混合した。得られた混合液について、ボルテックスミキサーを用い、１０秒間撹拌処理し、オゾン処理グリセリン液に精製水を溶解させ、サンプルを調製した。つぎに、ｐＨメータ（HORIBA社製）について、ｐＨ７、ｐＨ４、およびｐＨ９の標準液を用いて、この順序で校正した。そして、前記サンプルについて、校正後のｐＨメータを用いて、ｐＨを測定した。この結果を下記表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　前記表２に示すように、オゾン処理グリセリン液のｐＨは、約２．２であり、加熱処理によっても大きくは変動しなかった。なお、ウイルスの活性は、ｐＨにより影響を受けることから、オゾン処理グリセリン液のｐＨが、オゾン処理グリセリン液の抗ウイルス活性に寄与していると考えられた。
（５）抗ウイルス活性の測定
　抗ウイルス活性は、コロナウイルス科アルファコロナウイルス属の豚流行性下痢（Porcine Epidemic Diarrhea：ＰＥＤ）ウイルス（ＰＥＤＶ）を用いて測定した。前記実施例１（１）で得られたオゾン処理グリセリン液を、濃グリセリンで希釈し、酸化力２０００ｐｐｍのオゾン処理グリセリン液（サンプル液）を調製した。前記サンプル液０．９ｍｌに対して、１０７．７ＴＣＩＤ５０／ｍｌに調整したＰＥＤＶ液０．１ｍｌを添加して反応液を調製し、得られた反応液を、１０または３０分間室温（約２５℃）下で反応させた。なお、ＰＥＤＶは、５％ウシ胎仔血清含有ＭＥＭ（Minimum Essential Medium Eagle）培地を用いて培養しているＶｅｒｏ細胞にＰＥＤＶを感染させることにより、調製した。前記反応後、前記反応液に、０．０５％（ｗ／ｖ）チオ硫酸ナトリウム含有リン酸緩衝食塩液９ｍｌ添加後、十分に混和し、さらに、０．０５％（ｗ／ｖ）チオ硫酸ナトリウム含有リン酸緩衝食塩液で１０倍量に希釈して、ＰＥＤＶに対するオゾン処理グリセリン液中のオゾンの作用を停止させた。
　反応停止後の反応液について、１０－１～１０－８まで１０倍で段階希釈した。そして、各希釈液０．１ｍｌを、Ｖｅｒｏ細胞を播種した９６ウェルマイクロプレートに５ウェルずつ摂取した。前記接種後、３７℃、５％ＣＯ２条件下で５日間培養した。前記培養後、ウイルス増殖による細胞変性効果（ＣＰＥ）を観察し、ウイルス感染価（ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）を求めた。参考例は、前記オゾン処理グリセリン液に代えて、グリセリン液を用いた以外は同様にしてＰＥＤＶの感染価を測定した。また、コントロールは、前記グリセリン液とＰＥＤＶ液とを接触後、すぐにＰＥＤＶの感染価を測定した以外は、同様に実施した。そして、コントロールの感染価を基準としてウイルス感染価対数減少値およびウイルス減少率を下記式（Ｂ）および（Ｃ）を用いて算出した。これらの結果を下記表３に示す。
 
　ＬＲＶ＝ｌｏｇ１０（Ｔ０／Ｏ１０）　　　・・・（Ｂ）
　　ＬＲＶ：ウイルス感染価対数減少値
　　Ｔ０：コントロールの感染価
　　Ｏ１０：１０分反応後のオゾン処理グリセリン液の感染価
 
　ウイルス減少率＝［１－（０．１）ＬＲＶ］×１００　　　・・・（Ｃ）
　　ＬＲＶ：ウイルス感染価対数減少値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　前記表３に示すように、参考例のグリセリン液では、ＰＥＤＶの感染価は、１０または３０分間の反応後も、コントロールの感染価とほぼ同等であった。他方、実施例のオゾン処理グリセリン液では、１０分の反応後において、ＰＥＤＶの感染価は検出限界以下となった。また、実施例のオゾン処理グリセリン液では、３０分の反応後も同様にＰＥＤＶの感染価は検出限界以下となった。また、オゾン処理グリセリン液では、９６．０２％以上であった。
　以上のことから、本発明の抗ウイルス組成物が、抗ＰＥＤＶウイルス活性を示すことがわかった。
［実施例２］
　本発明の組成物を製造し、抗インフルエンザ活性を示すことを確認した。
（１）組成物の製造
　前記実施例１（１）の組成物の製造と同様に製造した。
（２）抗インフルエンザ活性の測定
　抗インフルエンザ活性は、Ａ型インフルエンザウイルス（Influenza A Virus、H1N１、A/PR/8/34、ＡＴＣＣ（登録商標）ＶＲ－９５（商標））を用いて測定した。前記Ａ型インフルエンザウイルスは発育鶏卵の漿尿膜腔に接種し、ふ卵器で培養後、漿尿液を採取し密度勾配遠心法により精製した（ウイルス液）。前記実施例２（１）で得られたオゾン処理グリセリン液（オゾンジェル）０．９ｍｌに対して０．１ｍｌの前記ウイルス液を添加後、十分に混合し、得られた混合液を、１分間室温下で反応させた。前記反応後、前記混合液に、０．０５％（ｗ／ｖ）チオ硫酸ナトリウム含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）９ｍｌを添加し、十分に混和後、さらに、０．０５％（ｗ／ｖ）チオ硫酸ナトリウム含有ＰＢＳで１０倍に希釈して、前記Ａ型インフルエンザウイルスに対するオゾンジェルの作用を停止させた。
　前記反応停止後、得られた反応液（ウイルス感染価測定用試料原液）を、ＰＢＳを用いて１０倍で段階希釈した。そして、前記ウイルス感染価測定用試料原液または各希釈液５０μＬと、５％ウシ胎児血清（Fetal bovine Serum：ＦＢＳ）含有Dulbecco’s Modified Eagle Medium（ＤＭＥＭ）に懸濁したＭＤＣＫ細胞５０μｌとを、９６ウェルマイクロプレートに接種した。前記接種後、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４日間培養した。前記培養後、ウイルス増殖による細胞変性効果を観察し、ウイルス感染価（ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）を求めた。参考例は、前記オゾンジェルに代えて、濃グリセリン（対照ジェル）液を用いた以外は同様にして前記Ａ型インフルエンザウイルスの感染価を測定した。また、コントロールは、前記対照ジェルと前記Ａ型インフルエンザウイルスとを接触後、すぐにＡ型インフルエンザウイルスの感染価を測定したこと以外は、同様に実施した。ウイルス感染価（ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）はＲｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法を用いて算出した。そして、コントロールの感染価を基準としてウイルス感染価対数減少値を下記式（Ｄ）を用いて算出した。これらの結果を下記表４に示す。
 
　ＬＲＶ＝ｌｏｇ１０（Ｔ０／Ｏ１）　　　・・・（Ｄ）
　　ＬＲＶ：ウイルス感染価対数減少値
　　Ｔ０：コントロールの感染価
　　Ｏ１：１分反応後のオゾンジェルの感染価
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　前記表４に示すように、参考例の対照ジェルでは、Ａ型インフルエンザウイルスの感染価は、１分間の反応後も、コントロールの感染価とほぼ同等であった。他方、実施例のオゾンジェルでは、１分の反応後においてＬＲＶは１．５　ｌｏｇ１０となり、Ａ型インフルエンザウイルスが不活化されていた。
　以上のことから、本発明の抗ウイルス組成物が、抗Ａ型インフルエンザウイルス活性を示すことがわかった。また、ＰＥＤＶおよびインフルエンザウイルスは、いずれもエンベロープウイルスであることから、本発明の抗ウイルス組成物は、特に、エンベロープウイルスに好適に使用できると示唆された。
［実施例３］
　本発明のオゾン処理グリセリンにおいて、ＦｅＳＯ４の添加により、ラジカルが発生することを確認した。
　電子スピン共鳴装置（ＥＳＲ）を用いた測定にて、スピントラップ剤であるＤＭＰＯ（5,5-dimethyl-1-pyrroline-N-oxide）を用いて、グリセリンのオゾン処理の有無が、二価鉄によるラジカル発生に影響を与えるか検討した。具体的には、ＤＭＰＯ５μｌ、水１４０μｌ、ＦｅＳＯ４（１ｍｍｏｌ／ｌ）２０μＬ、およびオゾン処理グリセリン２０μｌを順に混合し、混合液を得た。前記オゾン処理グリセリンは、前記実施例１（１）と同様にして調製した。得られた混合液をガラスキャピラリーに導入した後、ＥＳＲを用い、下記条件で測定を行った。得られたスペクトルはデーターベースとの照合を行い、さらに、ラジカルの同定ができたものについてはスピン強度を求めた。これらの結果を図１および図２に示す。
（ＥＳＲの測定条件）
装置:
　　電子スピン共鳴装置（EMX-nano、Bruker社製）
測定条件：
　　マイクロ波出力：８ｍＷ
　　掃引時間：１分
　　掃引幅：３３５．５±５ｍＴ
　　磁場変調：１００ｋＨｚ ０．０７９ｍＴ
　　ゲイン：×６３０
　　時定数：０．０３秒
　図１は、オゾン未処理のグリセリンのＥＳＲの測定結果を示すグラフであり、図２は、オゾン処理のグリセリンのＥＳＲの測定結果を示すグラフである。図１および図２において、横軸は、磁場の強さ（Field [G]）を示し、縦軸は、シグナル強度（Intensity）を示す。図１に示すように、オゾン未処理のグリセリンではラジカル発生は観測されなかった。これに対して、図２に示すように、オゾン処理のグリセリンではラジカル発生が観測された。
　以上のことから、オゾン処理のグリセリンは、二価鉄の存在によりラジカルが発生することが分かった。これは、オゾン処理グリセリン内において、二価鉄によりフェントン反応が生じ、ラジカルが発生したためと推定される。なお、一価銅についても、フェントン反応によりラジカルが発生することから、一価銅の添加によっても、オゾン処理グリセリンは、ラジカルが発生すると推察された。
　以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。
　この出願は、２０２１年５月１０日に出願された日本出願特願２０２１－０７９５８１を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。
＜付記＞
　上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
（付記１）
オゾン処理グリセリンを含む、抗ウイルス組成物。
（付記２）
ギ酸を含む、付記１に記載の組成物。
（付記３）
二価鉄および／または一価銅を含む、付記１または２に記載の組成物。
（付記４）
前記オゾン処理グリセリンのｐＨは、２以下である、付記１から３のいずれかに記載の組成物。
（付記５）
前記ウイルスは、エンベロープウイルスである、付記１から４のいずれかに記載の組成物。
（付記６）
前記ウイルスは、コロナウイルスまたはインフルエンザウイルスである、付記１から５のいずれかに記載の組成物。
（付記７）
対象物と、抗ウイルス組成物とを接触させる接触工程を含み、
前記抗ウイルス組成物は、付記１から６のいずれかに記載の抗ウイルス組成物である、ウイルスの防除方法。
（付記８）
ウイルスの防除に用いるための、オゾン処理グリセリンを含む組成物。
（付記９）
ウイルス感染症の治療に用いるための、オゾン処理グリセリンを含む組成物。
　以上説明したのように、本発明によれば、ウイルスを防除することができる。また、本発明の組成物では、例えば、オゾンはグリセリンと共存しているため、任意の箇所に塗布することにより、当該箇所に対して抗ウイルス作用を発揮することができる。したがって、本発明は、例えば、医薬、化粧品、畜産、食品、日用品等の分野において、極めて有用といえる。

Claims (7)

  1. オゾン処理グリセリンを含む、抗ウイルス組成物。
  2. ギ酸を含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 二価鉄および／または一価銅を含む、請求項１または２に記載の組成物。
  4. 前記オゾン処理グリセリンのｐＨは、５以下である、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 前記ウイルスは、エンベロープウイルスである、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 前記ウイルスは、コロナウイルスまたはインフルエンザウイルスである、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 対象物と、抗ウイルス組成物とを接触させる接触工程を含み、
    前記抗ウイルス組成物は、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗ウイルス組成物である、ウイルスの防除方法。

     
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