WO2022154044A1 - 医薬組成物 - Google Patents

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WO2022154044A1
WO2022154044A1 PCT/JP2022/000890 JP2022000890W WO2022154044A1 WO 2022154044 A1 WO2022154044 A1 WO 2022154044A1 JP 2022000890 W JP2022000890 W JP 2022000890W WO 2022154044 A1 WO2022154044 A1 WO 2022154044A1
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pancreatic cancer
cells
fgfr4
growth factor
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俊行 石渡
紀彦 佐々木
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地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター
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    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition. According to the present invention, pancreatic cancer can be effectively treated.
  • Pancreatic cancer is increasing rapidly, especially in the elderly, and at the time of discovery, the cancer has already infiltrated and metastasized, and in many cases it is not possible to undergo surgery, and less than 10% of patients can survive after 5 years. It is continuing. Therefore, it is required to develop an early diagnosis method for pancreatic cancer and a new treatment method as soon as possible.
  • signal transduction via fibroblast growth factor receptor 4 (FGFR4) which is a specific receptor for fibroblast growth factor 19 (FGF19), is associated with the development and progression of pancreatic cancer.
  • FGFR4 fibroblast growth factor receptor 4
  • FGF19 fibroblast growth factor 19
  • an object of the present invention is to provide an effective therapeutic pharmaceutical composition for pancreatic cancer.
  • the present inventor surprisingly uses a fibroblast proliferative factor receptor 4 inhibitor and an aging cell death inducer as active ingredients.
  • a pharmaceutical composition showing an excellent therapeutic effect on pancreatic cancer can be obtained.
  • the present invention is based on these findings. Therefore, the present invention
  • the pharmaceutical composition according to [1], wherein the fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor is lobritinib, BLU-554 or BLU9931.
  • the pharmaceutical composition according to [1] or [2], wherein the aging cell death inducer is quercetin.
  • [4] The pharmaceutical composition according to any one of [1] to [3], which is used for treating pancreatic cancer.
  • a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer which comprises a fibroblast growth factor receptor 4 immune complex in which an anticancer agent or a photosensitizer is bound to an antibody specific for fibroblast growth factor receptor 4.
  • the pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer according to [5] wherein the photosensitizer is phthalocyanine.
  • a method for determining the therapeutic effect of a pharmaceutical composition for cancer treatment Regarding.
  • a method for treating pancreatic cancer which comprises administering a therapeutically effective amount of a fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor to a pancreatic cancer patient.
  • a therapeutically effective amount of an aging cell death-inducing agent is further administered to a pancreatic cancer patient.
  • Fibroblast Growth Factor Receptor 4 Inhibitor for Use in Therapeutic Methods of Pancreatic Cancer [12] Fibroblast Growth Factor Receptor 4 Inhibitor and Aging Cell Death Inducing Agent for Use in Treatment of Pancreatic Cancer, [13] Use of fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor in the production of pharmaceutical compositions for treating pancreatic cancer, and [14] pancreas of fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor and aging cell death inducer Use in the manufacture of pharmaceutical compositions for the treatment of cancer, To disclose.
  • pancreatic cancer patients can be effectively treated.
  • composition of the present invention contains a fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor and an aging cell death inducer as active ingredients.
  • FGFR1 Fibroblast Growth Factor Receptor 4
  • FGFR2 fibroblast growth factor receptors
  • FGFR3 FGFR4
  • D1-3 extracellular immunoglobulin-like domains
  • FGFR4 is hardly expressed in normal human pancreatic tissue, it is highly expressed in cancer cells of patients with advanced pancreatic cancer as shown in Examples described later.
  • a specific ligand for FGFR4 is fibroblast growth factor 19 (hereinafter, may be referred to as FGF19).
  • pancreatic cancer More than 90% of pancreatic cancers are pancreatic duct cancers formed in the cells of the pancreatic duct, and pancreatic cancer usually refers to this pancreatic duct cancer. Cancers of the pancreas include neuroendocrine tumors and intraductal papillary mucinous tumors. Risk factors for pancreatic cancer include chronic pancreatitis, diabetes, obesity, and smoking.
  • the pancreatic cancer targeted by the pharmaceutical composition of the present invention is pancreatic cancer expressing FGFR4. Pancreatic cancer expressing FGFR4 may have a large tumor diameter and advanced stages, but not limited to.
  • the degree of progression of pancreatic cancer includes the degree of local pancreatic progression indicated by T1 to T4, T1 (tumor diameter of 2 cm or less and localized in the pancreas), T2 (tumor diameter of more than 2 cm and localized in the pancreas). ), T3 (cancer infiltration extends to the intrapancreatic bile duct, duodenum, or peripancreatic tissue), and T4 (cancer infiltration extends to adjacent large vessels, extrapancreatic plexus, or other organs) It is classified into (things).
  • N0 lymph node metastasis (-)
  • N1 metalastasis to group 1 lymph node only (+)
  • N2 metalastasis to group 2 lymph node (+)
  • N3 N3
  • M0 no distant metastasis is recognized
  • M1 decognized distant metastasis
  • the fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor (hereinafter, may be referred to as FGFR4 inhibitor) contained in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it can suppress the function of FGFR4. , BLU9931, BLU-554, or Roblitinib. Fibroblast growth factor receptor 4 inhibitors accelerate the aging of FGFR4-expressing pancreatic cancer cells, but not limited to. For example, it may promote the expression of SA- ⁇ -Gal expressed in senescent cells. It may also damage the DNA of FGFR4 expressing cells and accelerate cell aging. The fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor alone can inhibit the infiltration of pancreatic cancer cells in vivo and suppress the progression of pancreatic cancer.
  • the BLU9931 has the following formula (1): It is a compound represented by. It does not inhibit FGFR1 to 3, but selectively inhibits FGFR4. In FGFR1 to 3, the amino acid at the 552nd hinge-1 is tyrosine (Y), whereas in FGFR4, the amino acid at the 552nd hinge-1 is cysteine (C). It is considered that BLU9931 binds to this cysteine and selectively inhibits FGFR4.
  • the lobritinib has the following formula (2): It is a compound represented by.
  • the aging cell death-inducing agent contained in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it can induce aging pancreatic cancer cell death, but is not limited to curcumin, dasatinib, fisetin, and luteolin.
  • curcumin Curcumin, Curcumin Analog EF24, Navitoclax (ABT263), A1331852, A1155463, Geldanamycin, Tanespimycin, Alvespimycin, Piperlongmin (Piperlongumine), FOXO4-related peptide (FOXO4-related peptide), nutlin3a (Nutlin3a), anxious sugars (Cardiac glycosides: Ouabain, Proscillaridin A, Digoxin, etc.), but curcumin is preferable.
  • pancreatic cancer cells whose aging has been induced by an FGFR4 inhibitor are induced to die by an aging cell death inducer. Therefore, the aging cell death inducer can be used with any aging cell death inducer as long as the cells are induced to age.
  • the quercetin has the following formula (3): It is a compound represented by.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not limited to this, but can contain the active ingredient in an amount of 0.01 to 99% by weight, preferably 0.1 to 80% by weight.
  • the dose should be appropriately determined according to, for example, the type of active ingredient used, the type of disease, the age, sex, body weight, degree of symptoms, administration method, etc. of the patient. Can be administered orally or parenterally. It is desirable that the method of administration, dose, administration period, administration interval, etc. of the pharmaceutical composition to humans be determined by a controlled clinical trial.
  • the administration form is not limited to pharmaceutical products, and various forms, for example, functional foods, health foods (including beverages), or foods and drinks as feed can be given.
  • the solid composition for oral administration tablets, powders, granules and the like are used.
  • one or more active ingredients may be combined with at least one inert excipient such as lactose, mannitol, glucose, hydroxypropyl cellulose, microcrystalline cellulose, starch, polyvinylpyrrolidone. , And / or mixed with magnesium aluminometasilicate and the like.
  • the composition may contain inert additives such as lubricants such as magnesium stearate, disintegrants such as sodium carboxymethyl starch, stabilizers and solubilizers according to conventional methods. ..
  • Liquid compositions for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups or elixirs and the like, and are commonly used inert diluents such as purified water. Or contains ethanol.
  • the liquid composition may contain an auxiliary agent such as a solubilizer, a wetting agent, a suspending agent, a sweetening agent, a flavoring agent, a fragrance agent, and a preservative in addition to the inert diluent.
  • Injections for parenteral administration contain sterile aqueous or non-aqueous solutions, suspensions or emulsions.
  • Aqueous solvents include, for example, distilled water for injection or physiological saline.
  • non-aqueous solvent include vegetable oils such as propylene glycol, polyethylene glycol or olive oil, alcohols such as ethanol, polysorbate 80 (Japanese Pharmacopoeia) and the like.
  • Such compositions may further include tonicity agents, preservatives, wetting agents, emulsifiers, dispersants, stabilizers, or solubilizers. These are sterilized, for example, by filtration through a bacterial retention filter, formulation of fungicides or irradiation. In addition, these can also be used by producing a sterile solid composition and dissolving or suspending it in sterile water or a sterile injectable solvent before use.
  • the pharmaceutical composition can be used as a method for treating pancreatic cancer. That is, the present specification discloses a method for treating pancreatic cancer, which comprises administering an effective amount of a fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor and an aging cell death inducer to a pancreatic cancer patient. ..
  • Fibroblast growth factor receptor 4 inhibitors and aging cell death inducers can be used in methods of treating pancreatic cancer. That is, the present specification discloses a fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor and an aging cell death inducer for use in a method for treating pancreatic cancer.
  • the fibroblast growth factor receptor 4 inhibitor and the aging cell death inducer can be used for producing a pharmaceutical composition for treating pancreatic cancer. That is, the present specification discloses the use of fibroblast growth factor receptor 4 inhibitors and aging cell death inducers in the production of pharmaceutical compositions for the treatment of pancreatic cancer.
  • pancreatic cancer ⁇ Action ⁇
  • Normal pancreatic cells rarely express fibroblast growth factor receptor 4 (FGFR4).
  • FGFR4 fibroblast growth factor receptor 4
  • FIG. 1 some pancreatic cancer cells express FGFR4.
  • Pancreatic cancer cells expressing FGFR4 undergo DNA damage due to FGFR4 inhibitors such as BLU9931, and aging is induced.
  • FGF19 which is a ligand, binds to FGFR4 and signals FGF19 / FGFR4.
  • the FGFR4 inhibitor inhibits the downstream ERK, AKT, STAT3 pathways, and the like, and proliferates. It is presumed that reduction, inhibition of invasion, and induction of cellular senescence occur. Some pancreatic cancer cells whose cell aging is induced in this way are fatal. However, it is considered that the aging cell death inducer can further induce cell death and efficiently eliminate pancreatic cancer cells.
  • composition by photoimmunotherapy contains an FGFR4 immune complex in which an anticancer agent or a photosensitive substance is bound to an antibody specific for FGFR4. Cancer cells can be destroyed by, for example, binding an immune complex containing a photosensitizer to FGFR4-positive pancreatic cancer cells in vivo and irradiating them with non-thermal red light.
  • the immune complex contained in the pharmaceutical composition of the present invention is a complex in which an anticancer agent or a photosensitive substance is bound to an antibody specific for FGFR4.
  • antibody The antibody that can be used in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it is an antibody that specifically binds to FGFR4 or an antibody fragment having an antigen-binding site thereof, but is not limited to a mouse monoclonal antibody. Alternatively, a chimeric antibody thereof, a humanized antibody (CDR grafted antibody), or a human antibody thereof is preferable.
  • DNA encoding a heavy chain variable region domain and a light chain variable region domain of a mouse is ligated with a DNA encoding a polypeptide of a constant region of a human antibody, and this is incorporated into an expression vector and introduced into a host. It can be obtained by producing it.
  • the origin of the heavy chain variable region domain, the light chain variable region domain, and the constant region polypeptide used in the chimerized antibody is not particularly limited as long as it is a human antibody, for example, the heavy chain variable region of mouse IgG.
  • Chimeric antibodies can be obtained from domains and light chain variable region domains with human IgM or IgG constant region polypeptides.
  • the humanized antibody (CDR grafted antibody) is obtained by replacing, for example, the complementarity determining region (CDR) of a mouse antibody with, for example, the complementarity determining region of a human antibody and transplanting it.
  • CDR complementarity determining region
  • several oligos prepared so as to have an overlapping portion at the end of a DNA sequence designed to link the CDR of a mouse antibody and the framework region (FR; framework region) of a human antibody. It is synthesized from nucleotides by the PCR method. It can be obtained by ligating the obtained DNA with a DNA encoding the human antibody C region, then incorporating it into an expression vector, introducing it into a host and producing it.
  • the origins of the complementarity determining regions, framework regions and constant regions of the polypeptides used for humanized antibodies are not particularly limited as long as they are human antibodies, for example, the complementarity determining regions of mouse IgG and humans.
  • Humanized antibodies can be obtained from IgM or IgG framework and constant region polypeptides.
  • mouse complementarity determining regions and human IgM or IgG framework regions can be used to obtain antigen-binding fragments of humanized antibodies.
  • the human antibody is an antibody obtained from a transgenic animal into which a human antibody gene has been introduced, or a monoclonal antibody that can be obtained by fusing human antibody-producing cells with myeloma cells.
  • a human antibody library is used to obtain a human antibody by panning.
  • the technology is also known.
  • a phage that binds to an antigen can be selected by expressing the variable region of a human antibody as a single-chain antibody (scFv) on the surface of the phage by the phage display method.
  • the DNA sequence encoding the variable region of the human antibody that binds to the antigen can be determined. Once the DNA sequence of scFv that binds to the antigen is clarified, an appropriate expression vector can be prepared for the sequence to obtain a human antibody.
  • the anticancer agent used for the immune complex is not particularly limited as long as it is effective against pancreatic cancer, but for example, Tegafur, gimeracil, oteracil potassium, gemcitabine (gemzar), fluorouracil [ 5-FU], levofolinate calcium, irinotecan, oxaliplatin, nabpaclitaxel (Abraxane), or erlotinib (Tarceva). It is also possible to bind a radioisotope to an antibody and use it as an immune complex.
  • the photosensitizer examples include a porphyrin-based compound (for example, 5-aminolevulinic acid), a proline-based compound (for example, proline), a bacterioproline-based compound, and a phthalocyanine-based compound (for example, phthalocyanine).
  • a porphyrin-based compound for example, 5-aminolevulinic acid
  • a proline-based compound for example, proline
  • a bacterioproline-based compound a phthalocyanine-based compound
  • phthalocyanine-based compound for example, phthalocyanine
  • phthalocyanine undergoes a chemical change due to near infrared rays (non-thermal red light) of 700 nm. That is, it absorbs light energy and generates heat, causing damage (expansion, destruction, necrosis) to cancer cells. Irradiation of near-infrared rays can also be performed by guiding an optical fiber near the pancreatic cancer. Furthermore, it can be designed to be activated by near-infrared rays only when the immune complex (combination of antibody and phthalocyanine) is bound to the target molecule (FGFR4).
  • FGFR4 target molecule
  • the cancer-specific protein released from the destroyed cancer cells by the pharmaceutical composition of the present invention becomes an antigen that sensitizes and proliferates cytotoxic T cells against cancer, and is cytotoxic to attack cancer. Increases T cells.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also efficiently treat pancreatic cancer by such a mechanism.
  • the dosage form of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and is, for example, a powder, a fine granule, a granule, a tablet, a capsule, a suspension, an emulsion, a syrup, an extract, or a pill.
  • Oral preparations such as, injection preparations, and the like, but injection preparations are preferable.
  • a water-soluble solvent such as physiological saline or Ringer's solution
  • a water-insoluble solvent such as vegetable oil or fatty acid ester
  • an isotonic agent such as glucose or sodium chloride, etc.
  • Dissolving aids, stabilizers, preservatives, suspending agents, emulsifiers and the like can be optionally used.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not limited to this, but can contain the active ingredient in an amount of 0.01 to 99% by weight, preferably 0.1 to 80% by weight.
  • the dose is, for example, the type of active ingredient (anticancer agent or photosensitive substance) used, the type or stage of pancreatic cancer, the age of the patient, and the like. It can be appropriately determined according to the sex, body weight, degree of symptoms, administration method, etc., and can be administered orally or parenterally.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used in a method for treating pancreatic cancer, which comprises administering a therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition to a pancreatic cancer patient.
  • Example 1 the expression of FGFR4 in 136 human pancreatic cancer tissues was examined. Pancreatic cancer tissue was immunostained using anti-FGFR4 antibody. In the control normal pancreas, slightly positive cells were found in endocrine and exocrine tissues. Table 2 shows low expression (Low: ⁇ 2) and high expression (Low: ⁇ 2) and high expression (Low: ⁇ 2) for each pancreatic local extension (T1-4), lymph node metastasis (N0, N1), and stage classification (stages I, II, III, IV). The ratio of High: 2 to 3) is summarized. Grade 1 is well-differentiated and exhibits a morphology similar to that of a normal pancreatic duct. Grade 3 is poorly differentiated and exhibits a morphology significantly different from normal cells. Grade 2 shows an intermediate morphology between Grade 1 and Grade 3.
  • the tumor diameter was large in pancreatic cancer tissue, and the positive rate increased as the stage progressed.
  • Example 2 the action of the FGFR4 inhibitor BLU9931 on FGFR4-positive (highly expressed) pancreatic cancer cell line PK-1 cells and FGFR4 low-expressing pancreatic cancer cell line PK-45P cells was examined. 3x10 3 cells / well cells were seeded on 96-well plates and BLU9931 was added at 250 nM, 500 nM, 1 ⁇ M, or 2 ⁇ M. After culturing for 72 hours, the effect on cell proliferation was confirmed by ATP assay. As shown in FIG. 3A, in PK-1 cells with high FGFR4 expression, cell proliferation was suppressed in a volume-dependent manner of BLU9931.
  • PK-45P cells with low FGFR4 expression had no effect on cell proliferation.
  • 2 ⁇ M BLU9931 shows cytotoxicity was examined by FACS using Annexin V and PI, but apoptosis, necrosis, or cell damage was observed in 2% or less of the cells, and the significant effect was There was no (Fig. 3B).
  • the effect of BLU9931 on the cell cycle was examined by FACS. As shown in FIG. 3C, the addition of BLU9931 increased G0 / G1 cells from 60.7% to 70.1% and decreased S-phase cells from 20.7% to 13.5%. Was. From this result, it was considered that the transition from the G1 period to the S period was delayed due to BLU9931.
  • Example 3 the effect of BLU9931 on cell infiltration of pancreatic cancer cells was examined using a Corning Matrigel invasion chamber (pore size 8 ⁇ m). 1x10 5 cells / 500 ⁇ L PK-1 cells were seeded on top of the insert. 2 ⁇ M BLU9931 was added and 16 hours later the cells infiltrating the lower part of the membrane were stained with the Diff-Quik staining kit. As shown in FIG. 5, the addition of BLU9931 suppressed cell infiltration.
  • Example 4 cell aging due to BLU9931 was confirmed.
  • BLU9931 (2 ⁇ M) was added and PK-1 cells were cultured for 1 week, the cells became larger and flattened as compared to the control (FIG. 6A).
  • This morphological change was thought to be cell aging.
  • SA- ⁇ -Gal aging-related ⁇ -galactosidase
  • FIG. 6A SA- ⁇ -Gal positive cells increased as compared to the control.
  • DNA damage caused by BLU9931 is treated as DNA damage marker H2A. It was examined by phosphorylation of X. Cells treated with BLU9931 were subjected to anti- ⁇ HA2. Incubated with X mouse monoclonal antibody. It was treated with an Alexa-Fluor labeled secondary antibody and subjected to nuclear staining with DAPI. As shown in FIG. 7, the DNA damage of the cells progressed as the culture became longer after 3 days and 7 days.
  • Example 6 the survival rate of pancreatic cancer cells by FGFR4 inhibitor and aging cell death inducer was examined.
  • BLU9931 2. ⁇ M
  • 3.0x10 3 cells / well of SP-1 cells were cultured for 1 week.
  • Quercetin (12.5 ⁇ M or 25 ⁇ M) or dasatinib (62.5 nM) which is an aging cell death inducer, was added thereto, and the cells were cultured for 4 days.
  • the growth rate was measured by the ATP assay.
  • the FGFR4 inhibitor and the aging cell death inducer reduced the cell viability.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used for the treatment of pancreatic cancer patients.

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Abstract

本発明の目的は、膵臓がんに対する効果的な治療用医薬組成物を提供することである。　前記課題は、本発明の線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬を有効成分として含む、医薬組成物によって解決することができる。

Description

医薬組成物
　本発明は、医薬組成物に関する。本発明によれば、効果的に膵臓がんを治療することができる。
　膵臓がんは高齢者を中心に急速に増加しており、発見時にはすでに癌が浸潤、転移し手術を受けられない事が多く、５年後に生存できる患者さんは１０％に満たない深刻な状況が続いている。このため、一刻も早い膵臓がんの早期診断法と、新たな治療法の開発が求められている。
　ここで、線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９）の特異的受容体である線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）を介したシグナル伝達は、膵臓がんの発生及び進行と関係していることが報告されている（非特許文献１）。
「インターナショナル・ジャーナル・オブ・オンコロジー(International Journal of Oncology）」（ギリシャ）２０１１年、第３８巻、ｐ．１３３－１４３
　しかしながら、膵臓がんを対象とする治療についての研究は進んでいなかった。従って、本発明の目的は、膵臓がんに対する効果的な治療用医薬組成物を提供することである。
　本発明者は、膵臓がんに対する効果的な治療用医薬組成物について、鋭意研究した結果、驚くべきことに、線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬を有効成分として用いることにより、膵臓がんに対して優れた治療効果を示す医薬組成物が得られることを見出した。
　本発明は、こうした知見に基づくものである。
　従って、本発明は、
［１］線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬を有効成分として含む、医薬組成物、
［２］前記線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤が、ロブリチニブ、ＢＬＵ－５５４又はＢＬＵ９９３１である、［１］に記載の医薬組成物、
［３］前記老化細胞死誘導薬が、ケルセチンである、［１］又は［２］に記載の医薬組成物、
［４］膵臓がん治療用である、［１］～［３］のいずれかに記載の医薬組成物、
［５］線維芽細胞増殖因子受容体４に特異的な抗体に抗がん剤若しくは光感受性物質を結合させた線維芽細胞増殖因子受容体４免疫複合体を含む膵臓がん治療用医薬組成物、
［６］前記光感受性物質がフタロシアニンである、［５］に記載の膵臓がん治療用医薬組成物、
［７］前記抗体が、ヒト化抗体である、［５］又は［６］に記載の膵臓がん治療用医薬組成物、及び
［８］［５］～［７］のいずれかに記載の膵臓がん治療用医薬組成物の治療効果を判定する方法、
に関する。
　本願明細書は、
［９］線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤の治療有効量を、膵がん患者に投与することを特徴とする、膵臓がんの治療方法、
［１０］老化細胞死誘導薬の治療有効量を、更に膵臓がん患者に投与することを特徴とする、［９］に記載の、膵臓がんの治療方法、
［１１］膵臓がんの治療方法における使用のための線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤、
［１２］膵臓がんの治療方法における使用のための線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬、
［１３］線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤の膵臓がん治療用医薬組成物の製造への使用、及び
［１４］線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬の膵臓がん治療用医薬組成物の製造への使用、
を開示する。
　本発明の医薬組成物によれば、効果的に膵臓がん患者を治療することができる。
本発明の医薬組成物の治療メカニズムを模式的に示した図である。 ＦＧＦＲ４陽性膵臓がん細胞におけるＦＧＦＲ４阻害剤の作用を示した模式図である。 ＦＧＦＲ４高発現のＰＫ－１細胞、及びＦＧＦＲ４低発現のＰＫ－４５Ｐ細胞に対するＢＬＵ９９３１の細胞増殖の抑制（Ａ）、並びに細胞毒性（Ｂ）及び細胞周期（Ｃ）に与える影響を示した図である。 ＢＬＵ９９３１の、ＦＧＦ１９／ＦＧＦＲ４シグナルの下流のＥＲＫ、ＡＫＴ、及びＳＴＡＴ３の発現抑制することを示したイムノブロットの写真及びグラフである。 ＢＬＵ９９３１が細胞浸潤を抑制することを示した写真及びグラフ図である。 ＢＬＵ９９３１による膵臓がん細胞の老化を示した写真（Ａ）及びグラフ（Ｂ）である。 ＢＬＵ９９３１による３日培養、及び７日培養後のＤＮＡ損傷を示した顕微鏡写真及びグラフである。 ＦＧＦＲ４阻害剤（ＢＬＵ９９３１）及び老化細胞死誘導薬（ケルセチン（Ａ）又はダサニチブ（Ｂ））による、膵臓がん細胞の生存率を示したグラフである。
［１］医薬組成物
　本発明の医薬組成物は、線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬を有効成分として含む。
《線維芽細胞増殖因子受容体４》
　線維芽細胞増殖因子受容体（fibroblast growth factor receptor：以下、ＦＧＦＲと称することがある）には、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及びＦＧＦＲ４の４種類が知られている。ＦＧＦＲは、３つの細胞外免疫グロブリン様ドメイン（Ｄ１～３）、膜貫通型ドメイン、及びチロシンキナーゼ活性を示す分子内ドメインで構成されている。前記４つのＦＧＦＲ１～４のうち、本発明の医薬組成物の標的はＦＧＦＲ４である。ＦＧＦＲ４は、正常のヒト膵臓組織ではほとんど発現していないが、後述の実施例に示すようにステージが進行した膵臓がん患者の癌細胞に多く発現している。
　ＦＧＦＲ４の特異的なリガンドは、線維芽細胞増殖因子１９（fibroblast growth factor 19：以下、ＦＧＦ１９と称することがある）である。
《膵臓がん》
　膵臓がんの９０％以上は、膵管の細胞にできた膵管がんであり、膵臓がんとは、通常この膵管がんのことをいう。膵臓のがんとしては、神経内分泌腫瘍、膵管内乳頭粘液性腫瘍などがある。膵臓がんのリスク因子としては、慢性膵炎、糖尿病、肥満、及び喫煙などが挙げられる。
　本発明の医薬組成物が対象とする膵がんはＦＧＦＲ４を発現している膵臓がんである。ＦＧＦＲ４を発現している膵臓がんは、限定されるものではないが、腫瘍径が大きく、ステージが進んでいることがある。
　膵臓がんの進行度としては、Ｔ１～Ｔ４で示される膵局所進展度があり、Ｔ１（腫瘍径が2cm以下で膵内に限局したもの）、Ｔ２（腫瘍径が2cmを超え膵内に限局したもの）、Ｔ３（がんの浸潤が膵内胆管、十二指腸、膵周囲組織のいずれかに及ぶもの）、及びＴ４（がんの浸潤が隣接する大血管、膵外神経叢、他臓器のいずれかに及ぶもの）に分類される。
　また、リンパ節転移による分類として、Ｎ０（リンパ節転移(-)）、Ｎ１（1群リンパ節のみに転移(+)）、Ｎ２（2群リンパ節まで転移(+)）、及びＮ３（3群リンパ節まで転移(+)）に分類される。
　更に、遠隔転移による分類として、Ｍ０（遠隔転移を認めない）、及びＭ１（遠隔転移を認める）に分類される。
　これらの分類を組み合わせて、下記の表１のように、stage 0、IA、IB、IIA、IIB、III、及びIVのステージ分類がなされている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
《線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤》
　本発明の医薬組成物に含まれる線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤（以下、ＦＧＦＲ４阻害剤と称することがある）は、ＦＧＦＲ４の機能を抑制できる限りにおいて、特に限定されるものではないが、ＢＬＵ９９３１、ＢＬＵ－５５４、又はロブリチニブ（Ｒｏｂｌｉｔｉｎｉｂ）が挙げられる。
　線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤は、限定されるものではないが、ＦＧＦＲ４の発現した膵臓がん細胞の老化を促進させる。例えば、老化細胞に発現されるＳＡ－β－Ｇａｌの発現を促進させることがある。また、ＦＧＦＲ４の発現細胞のＤＮＡを損傷させて、細胞の老化を促進させることがある。
　なお、線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤は、単独でも、生体内において膵臓がん細胞の浸潤を阻害し、膵臓がんの進行を抑制することができる。
　前記ＢＬＵ９９３１は、下記式（１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
 で表される化合物である。ＦＧＦＲ１～３は阻害しないが、ＦＧＦＲ４を選択的に阻害する。ＦＧＦＲ１～３では５５２番目のヒンジー１のアミノ酸がチロシン（Ｙ）であるのに対して、ＦＧＦＲ４では５５２番目のヒンジー１のアミノ酸がシステイン（Ｃ）である。ＢＬＵ９９３１は、このシステインと結合して、ＦＧＦＲ４を選択的に阻害しているものと考えられる。
　前記ロブリチニブは、下記式（２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
 で表される化合物である。
《老化細胞死誘導薬》
本発明の医薬組成物に含まれる老化細胞死誘導薬は、老化膵臓がん細胞死を誘導できる限りにおいて、特に限定されるものではないが、ケルセチン、ダサチニブ、フィセチン（Fisetin）、ルテオリン（Luteolin）、クルクミン（Curcumin）、クルクミンアナログＦ２４（Curcumin Analog EF24）、ナビオクラックス（Navitoclax (ABT263)）、A1331852、A1155463、ゲルダナマイシン（Geldanamycin）、タネスピマイシン（Tanespimycin）、アルベスピマイシン（Alvespimycin）、ピペルロングミン（Piperlongumine）、ＦＯＸＯ４関連ペプチド（FOXO4-related peptide）、ヌトリン３ａ（Nutlin3a）、心配糖体（Cardiac glycosides：Ouabain, Proscillaridin A, Digoxinなど）が挙げられるが、ケルセチンが好ましい。しかしながら、本発明においては、ＦＧＦＲ４阻害剤によって老化が誘導された膵臓がん細胞を、老化細胞死誘導薬によって細胞死を誘導する。従って、老化細胞死誘導薬は、細胞に老化が誘導されていれば、どの老化細胞死誘導薬でも使用することができる。
　前記ケルセチンは、下記式（３）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 で表される化合物である。
　本発明の医薬組成物は、これに限定されるものではないが、０．０１～９９重量％、好ましくは０．１～８０重量％の量で、有効成分を含有することができる。本発明の医薬組成物を用いる場合の投与量は、例えば、使用する有効成分の種類、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などに応じて適宜決定することができ、経口的に又は非経口的に投与することが可能である。ヒトへの医薬組成物の投与方法、投与量、投与期間、及び投与間隔等は、管理された臨床治験によって決定されることが望ましい。また、投与形態も医薬品に限定されるものではなく、種々の形態、例えば、機能性食品や健康食品（飲料を含む）、又は飼料として飲食物の形で与えることも可能である。
　経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、１種又は２種以上の有効成分を、少なくとも１種の不活性な賦形剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、及び／又はメタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えばステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤やカルボキシメチルスターチナトリウム等のような崩壊剤、安定化剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
　経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤又はエリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水又はエタノールを含む。当該液体組成物は不活性な希釈剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
　非経口投与のための注射剤は、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤又は乳濁剤を含有する。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水又は生理食塩液が含まれる。非水性の溶剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール又はオリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、又はポリソルベート８０（局方名）等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、又は溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解又は懸濁して使用することもできる。
《膵臓がんの治療方法》
　前記医薬組成物を、膵臓がんの治療方法に用いることができる。すなわち、本明細書は、線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬の有効量を、膵臓がん患者に投与することを特徴とする、膵臓がんの治療方法を開示する。
《膵臓がんの治療方法に使用する線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬》
　線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬は、膵臓がんの治療方法に使用することができる。すなわち、本明細書は、膵臓がんの治療方法における使用のための、線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬を開示する。
《線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬の製造への使用》
　前記線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬は、膵臓がんの治療用医薬組成物の製造へ使用することができる。すなわち、本明細書は、線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬の、膵臓がんの治療用医薬組成物の製造への使用を開示する。
《作用》
　本発明の医薬組成物が、膵臓がんを治療できる機構は、詳細に解明されたわけではないが、以下のように推定することができる。しかしながら、本発明は以下の推定によって限定されるものではない。
　通常の膵臓細胞は、線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）を、ほとんど発現していない。図１に示すように、膵臓がん細胞には、ＦＧＦＲ４を発現しているものがある。ＦＧＦＲ４を発現した膵臓がん細胞は、ＢＬＵ９９３１などのＦＧＦＲ４阻害剤により、ＤＮＡ障害が発生し、老化が誘導される。また、通常はＦＧＦＲ４にリガンドであるＦＧＦ１９が結合して、ＦＧＦ１９／ＦＧＦＲ４シグナル伝達されるが、図２に示すように、ＦＧＦＲ４阻害剤により、下流のＥＲＫ、ＡＫＴ、及びＳＴＡＴ３経路などが阻害され増殖低下、浸潤阻害、及び細胞老化の誘導が起きると推定される。このように細胞老化が誘導された膵臓がん細胞は、死に至るものもある。しかし、更に老化細胞死誘導薬により、細胞死を誘導し、効率的に膵臓がん細胞を排除することができると考えられる。
［２］光免疫療法による医薬組成物
　本発明の医薬組成物は、ＦＧＦＲ４に特異的な抗体に抗がん剤若しくは光感受性物質を結合させたＦＧＦＲ４免疫複合体を含む。
　生体内のＦＧＦＲ４陽性の膵臓がん細胞に、例えば光感受性物質を含む免疫複合体を結合させ、非熱性赤色光を照射することによって、がん細胞を破壊することができる。
（免疫複合体）
　本発明の医薬組成物に含まれる免疫複合体は、ＦＧＦＲ４に特異的な抗体に抗がん剤若しくは光感受性物質を結合している複合体である。
（抗体）
本発明の医薬組成物に用いることのできる抗体は、ＦＧＦＲ４に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合部位を有する抗体フラグメントである限り、特に限定されるものではないが、マウスのモノクローナル抗体、又はそのキメラ抗体、ヒト化抗体（ＣＤＲグラフト化抗体）、若しくはヒト型抗体が好ましい。
　キメラ抗体は、例えばマウスの重鎖可変領域ドメイン及び軽鎖可変領域ドメインをコードするＤＮＡを、ヒト抗体の定常領域のポリペプチドをコードするＤＮＡと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得ることができる。キメラ化抗体に用いる重鎖可変領域ドメイン及び軽鎖可変領域ドメイン、並びに定常領域のポリペプチドの由来は、ヒトの抗体であれば特に限定されるものではなく、例えばマウスのＩｇＧの重鎖可変領域ドメイン及び軽鎖可変領域ドメインとヒトのＩｇＭ、又はＩｇＧの定常領域のポリペプチドとにより、キメラ抗体を得ることができる。
　ヒト化抗体（ＣＤＲグラフト化抗体）は、例えばマウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を、例えばヒト抗体の相補性決定領域と入れ替え、移植したものである。具体的には、マウス抗体のＣＤＲとヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ；ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　ｒｅｇｉｏｎ）を連結するように設計したＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する。得られたＤＮＡを、ヒト抗体Ｃ領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得ることができる。ヒト化抗体に用いる相補性決定領域、並びにフレームワーク領域及び定常領域のポリペプチドの由来は、ヒトの抗体であれば特に限定されるものではなく、例えばマウスのＩｇＧの相補性決定領域とヒトのＩｇＭ、又はＩｇＧのフレームワーク領域及び定常領域のポリペプチドとにより、ヒト化抗体を得ることができる。また、マウスの相補性決定領域とヒトのＩｇＭ、又はＩｇＧフレームワーク領域とにより、ヒト化抗体の抗原結合性断片を得ることができる。
　ヒト型抗体は、ヒト抗体遺伝子を導入したトランスジェニック動物から得られる抗体、又はヒトの抗体産生細胞をミエローマ細胞と細胞融合させて得ることのできるモノクローナル抗体である。更に、ヒト型抗体の取得方法としては前記のトランスジェニック動物から得る方法、ヒトの抗体産生細胞を細胞融合させて得る方法のほか、ヒト抗体ライブラリーを用いて、パンニングによりヒト型抗体を取得する技術も知られている。例えば、ヒト抗体の可変領域を一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージディスプレイ法によりファージの表面に発現させ、抗原に結合するファージを選択することもできる。選択されたファージの遺伝子を解析すれば、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。抗原に結合するｓｃＦｖのＤＮＡ配列が明らかになれば、前記配列を適当な発現ベクターを作製し、ヒト抗体を取得することができる。
（抗がん剤）
　前記免疫複合体に使用される抗がん剤は、膵臓がんに効果がある限りにおいて、特に限定されるものではないが、例えば、テガフール、ギメラシル、オテラシルカリウム、ゲムシタビン（ジェムザール）、フルオロウラシル［5-FU］、レボホリナートカルシウム、イリノテカン、オキサリプラチン、ナブパクリタキセル（アブラキサン）、又はエルロチニブ（タルセバ）が挙げられる。また、抗体に放射性同位元素を結合して、免疫複合体として用いることもできる。
（光感受性物質）
　前記光感受性物質としては、ポルフィリン系化合物（例えば、５－アミノレブリン酸）、プロリン系化合物（例えば、プロリン）、バクテリオプロリン系化合物、又はフタロシアニン系化合物（例えば、フタロシアニン）が挙げられる。更に、フォトフリン、レザフィリン、アミノレブリン酸（ＡＬＡ）、シリコンフタロシアニンＰｃ４、ｍ－テトラヒドロキシフェニルクロリン（ｍＴＨＰＣ）、クロリンｅ６（Ｃｅ６）、アルメラ、レブラン、フォスカン、メトビックス、ヘクスビックス、フォトクロール、フォトセンス、フォトレックス、ルマカン、ビソナック、アムフィネックス、ベルテポルフィン、プルリチン、ＡＴＭＰｎ、アエンフタロシアニン（ＺｎＰｃ）、プロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）、ピロフェオフォルバイドａ（ＰＰａ）又はフェオフォルバイド（ＰｈＡ）などを用いることもできる。
　例えば、フタロシアニン（ＩＲ７００）は、７００ｎｍの近赤外線（非熱性赤色光）により、化学変化を起こす。すなわち、光エネルギーを吸収し、発熱することによって、がん細胞にダメージ（膨張、破壊、壊死）を与える。近赤外線の照射は、膵臓がんの近くに光ファイバーを誘導し、実施することもできる。更に、免疫複合体（抗体とフタロシアニンの結合体）が標的分子（ＦＧＦＲ４）に結合している場合のみに近赤外線により活性化するように設計することもできる。
　本発明の医薬組成物によって、破壊されたがん細胞から放出されるがん特異的タンパク質は、がんに対する細胞障害性Ｔ細胞を感作及び増殖させる抗原となり、がんを攻撃する細胞障害性Ｔ細胞を増加させる。本発明の医薬組成物は、このような機構によっても、膵臓がんを効率的に治療することができる。
　本発明の医薬組成物の投与剤型としては、特に限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、などを挙げることができるが、注射剤が好ましい。例えば、注射剤の調製においては、有効成分の他に、例えば、生理食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤などを任意に用いることができる。
　本発明の医薬組成物は、これに限定されるものではないが、０．０１～９９重量％、好ましくは０．１～８０重量％の量で、有効成分を含有することができる。本発明の医薬組成物を用いる場合の投与量（治療有効量）は、例えば、使用する有効成分の種類（抗がん剤又は光感受性物質）、膵臓がんの種類又はステージ、患者の年齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などに応じて適宜決定することができ、経口的に又は非経口的に投与することが可能である。
　本発明の医薬組成物は、膵臓がん患者に対して、治療有効量の医薬組成物を投与することを特徴とする、膵臓がんの治療方法に用いることができる。
　以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
《実施例１》
　本実施例では、１３６例のヒト膵臓がん組織におけるＦＧＦＲ４の発現を検討した。抗ＦＧＦＲ４抗体を用いて、膵臓がん組織の免疫染色を行った。コントロールの正常膵臓では、内分泌組織、外分泌組織にわずかに陽性細胞が見られた。表２に、膵局所進展度（Ｔ１～４）、リンパ節転移（Ｎ０、Ｎ１）、ステージ分類（ステージI、II、III、IV）ごとに、低発現（Ｌｏｗ：＜２）及び高発現（Ｈｉｇｈ：２～３）の比率を纏めた。Ｇｒａｄｅ１は高分化型で、正常の膵管に似た形態を示す。Ｇｒａｄｅ　３は低分化型で正常細胞とは大きく異なった形態を示す。Ｇｒａｄｅ　２はＧｒａｄｅ　１とＧｒａｄｅ　３の中間程度の形態を示すものである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
 　膵臓がん組織では腫瘍径が大きく、ステージが進むにつれて、陽性率が高くなった。
《実施例２》
　本実施例では、ＦＧＦＲ４陽性（高発現）の膵臓がん細胞株ＰＫ－１細胞、及びＦＧＦＲ４低発現の膵臓がん細胞株ＰＫ－４５Ｐ細胞に対するＦＧＦＲ４阻害剤ＢＬＵ９９３１の作用を検討した。
　９６ウエルプレートに、３ｘ１０３細胞／ウエルの細胞を播種し、ＢＬＵ９９３１を２５０ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、又は２μＭ添加した。７２時間培養後にＡＴＰアッセイによって細胞増殖への影響を確認した。図３Ａに示すように、ＦＧＦＲ４の発現の高いＰＫ－１細胞では、ＢＬＵ９９３１の容量依存的に細胞の増殖が抑制された。一方、ＦＧＦＲ４の発現の低いＰＫ－４５Ｐ細胞では、細胞増殖への影響はなかった。
　また、２μＭのＢＬＵ９９３１が細胞毒性を示すかを、アネキシンＶ及びＰＩを用いたＦＡＣＳによって検討したが、２％以下の細胞でアポトーシス、ネクローシス、又は細胞の障害が見られた程度で、大きな影響はなかった（図３Ｂ）。更に、ＢＬＵ９９３１が細胞周期に与える影響を、ＦＡＣＳで検討した。図３Ｃに示すように、ＢＬＵ９９３１の添加により、Ｇ０／Ｇ１期の細胞が、６０．７％から７０．１％に増加し、Ｓ期の細胞が、２０．７％から１３．５％に減少していた。この結果は、ＢＬＵ９９３１により、Ｇ１期からＳ期への移行が遅くなっているものと考えられた。
　また、ＦＧＦ１９／ＦＧＦＲ４シグナルの下流のＥＲＫ、ＡＫＴ、及びＳＴＡＴ３の発現が、ＢＬＵ９９３１の添加により影響を受けるかを、イムノブロットによって検討した。図４に示すように、ＰＫ－１細胞においては、ＢＬＵ９９３１（２μＭ）の添加により、ＥＲＫ、ＡＫＴ、及びＳＴＡＴ３の発現が低下していた。一方、ＰＫ－４５Ｐ細胞では、ＥＲＫ、ＡＫＴ、及びＳＴＡＴ３の発現の低下は見られなかった。
《実施例３》
　本実施例では、ＢＬＵ９９３１による膵臓がん細胞の細胞浸潤への影響を、コーニング・マトリゲル・インベイジョン・チャンバー（ポアサイズ８μｍ）を用いて検討した。
　１ｘ１０５細胞／５００μＬのＰＫ－１細胞をインサートの上部に播種した。２μＭのＢＬＵ９９３１を添加し、１６時間後に膜の下部に浸潤した細胞をＤｉｆｆ－Ｑｕｉｃｋ染色キットによって染色した。図５に示すように、ＢＬＵ９９３１の添加によって、細胞浸潤が抑制された。
《実施例４》
　本実施例では、ＢＬＵ９９３１による細胞の老化を確認した。ＢＬＵ９９３１（２μＭ）を添加し、ＰＫ－１細胞を１週間培養すると、コントロールと比較して、細胞が大きくなり、そして平坦化した（図６Ａ）。この形態の変化は、細胞の老化であると考えられた。本発明者らは、細胞の老化のマーカーである、老化関連β－ガラクトシダーゼ（ＳＡ－β－Ｇａｌ）活性を測定した。
　ＢＬＵ９９３１（２μＭ）で処理した細胞を洗浄し、固定用液で１０分間処理し、染色用液で一晩インキュベートした。染色後、ＤＡＰＩで核染色を行った。図６Ａに示すように、コントロールと比較して、ＳＡ－β－Ｇａｌ陽性細胞が増加した。
《実施例５》
　本実施例では、ＢＬＵ９９３１によるＤＮＡ損傷を、ＤＮＡの損傷マーカーであるＨ２Ａ．Ｘのリン酸化によって検討した。
　ＢＬＵ９９３１で処理した細胞を、４℃一晩、抗γＨＡ２．Ｘマウスモノクローナル抗体でインキュベートした。Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ標識の２次抗体で処理し、ＤＡＰＩで核染色を行った。
　図７に示すように、３日後そして７日後と培養が長くなるにつれて、細胞のＤＮＡ損傷が進行していた。
《実施例６》
　本実施例では、ＦＧＦＲ４阻害剤及び老化細胞死誘導薬による、膵臓がん細胞の生存率を検討した。
　ＢＬＵ９９３１（２μＭ）存在下で、３．０ｘ１０３細胞／ウエルのＳＰ－１細胞を１週間培養した。これに、老化細胞死誘導薬であるケルセチン（１２．５μＭ、又は２５μＭ）、又はダサニチブ（６２．５ｎＭ）を添加し、４日間培養した。ＡＴＰアッセイにより、増殖率を測定した。図８に示すように、ＦＧＦＲ４阻害剤及び老化細胞死誘導薬によって、細胞の生存率が低下した。
　本発明の医薬組成物は、膵臓がん患者の治療に用いることができる。

Claims (8)

  1. 　線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤及び老化細胞死誘導薬を有効成分として含む、医薬組成物。
  2. 　前記線維芽細胞増殖因子受容体４阻害剤が、ロブリチニブ、ＢＬＵ－５５４又はＢＬＵ９９３１である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 　前記老化細胞死誘導薬が、ケルセチンである、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
  4. 　膵臓がん治療用である、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. 　線維芽細胞増殖因子受容体４に特異的な抗体に抗がん剤若しくは光感受性物質を結合させた線維芽細胞増殖因子受容体４免疫複合体を含む膵臓がん治療用医薬組成物。
  6. 　前記光感受性物質がフタロシアニンである、請求項５に記載の膵臓がん治療用医薬組成物。
  7. 　前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項５又は６に記載の膵臓がん治療用医薬組成物。
  8. 　請求項５～７のいずれか一項に記載の膵臓がん治療用医薬組成物の治療効果を判定する方法。
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