WO2022092326A1 - 眼組織線維化の阻害に使用するためのｇｄｆ１５調節物質 - Google Patents

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嶋澤 雅光
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Definitions

  • the main object of the present invention is to provide a new inhibitor of ocular tissue fibrosis.
  • the GDF15 regulator reduces or inhibits GDF15 activity.
  • the GDF15 regulator is an anti-GDF15 antibody, eg, a humanized or human antibody.
  • the anti-GDF15 antibody is: (I) of the CDR H1 sequence of SEQ ID NO: 1, the CD H2 sequence of SEQ ID NO: 7, the CDR H3 sequence of SEQ ID NO: 13, and the CDR L1 sequence of SEQ ID NO: 16, the CDR L2 sequence of SEQ ID NO: 18, and SEQ ID NO: 22.
  • the invention provides a GDF15 regulator for use in treating ocular fibrosis disorders in subjects in need of treatment for ocular fibrosis disorders.
  • the disorder is age-related macular degeneration (eg, wet age-related macular degeneration), refractory retinal vitreous disease (eg, proliferative vitreous retinopathy or diabetic retinopathy), diabetic macular degeneration (DME). , Retinal hemorrhage, retinal detachment, old eye, choroidal angiogenesis, subfoveal or parafoveal neovascularization, macular degeneration, and crystalline macular degeneration.
  • age-related macular degeneration eg, wet age-related macular degeneration
  • refractory retinal vitreous disease eg, proliferative vitreous retinopathy or diabetic retinopathy
  • DME diabetic macular degeneration
  • Retinal hemorrhage retinal detachment, old eye, choroidal
  • the present invention provides an ocular tissue fibrosis inhibitor containing a substance that inhibits the action of GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) as an active ingredient.
  • GDF15 Crowth Differentiation Factor 15
  • the ocular tissue may be retinal pigment epithelial cells.
  • a to D show the result of Example 1.
  • a to D show the results of Example 2.
  • a to B show the results of Example 3.
  • a to F show the results of Example 4.
  • a to C show the results of Example 5.
  • a to C show the results of Example 6.
  • the ocular tissue fibrosis inhibitor according to the present invention is characterized in that it contains a substance that inhibits the action of GDF15 (Growth Difference Factor 15) as an active ingredient.
  • GDF15 Crowth Difference Factor 15
  • Epithelial-mesenchymal transition is the process by which epithelial cells transform into mesenchymal-like cells. The process transforms epithelial cells into myofibroblast-like cells, leading to fibrous scar formation. Since it has been known that the expression of EMT-related factors is regulated by growth factors and cytokines, the inventors of the present application thought that elucidation of EMT-related factors would lead to elucidation of pathological conditions.
  • GDF15 As a result of diligent experimental studies, the inventors of the present application focused on the above-mentioned GDF15, and as shown in Examples described later, the expression of GDF15 increased under the pathological condition of fibrotic scar, so that GDF15 was interepithelial. By inducing leaf conversion, it was found to be involved in the progression of fibrotic pathology. Therefore, it was revealed that a substance that inhibits the action of GDF15 can suppress fibrotic scar formation in the eye.
  • the "GDF15 regulator” or “substance that inhibits the action of GDF15” refers to the expression level, biological activity and biological function of GDF15 and / or the biological pathway of GDF15.
  • the substance that inhibits the action of GDF15 is not particularly limited, and for example, an antagonist of GDF15, an anti-GDF15 antibody, an antagonist of GDF15-specific receptor, an anti-GDF15-specific receptor antibody, and inhibition of downstream signals of GDF15-specific receptor.
  • GDF15 expression inhibitors GDF15-specific receptor expression inhibitors
  • soluble GDF15 mimetics or analogs that prevent GDF15 from binding to its cognate-binding partner, GDF15 to bind to its cognate-binding partner.
  • a soluble GDF15 receptor mimetic or analog that blocks, a small molecule inhibitor of GDF15 or GDF15 receptor, an interfering nucleic acid (eg, an interfering RNA or antisense nucleic acid that interferes with the expression of an endogenous GDF15 or cognate receptor (eg, anti).
  • Sense DNA or RNA Sense DNA or RNA
  • these substances may be used alone or in combination of two or more thereof. Further, these substances can be obtained by purification by a known method, or are commercially available products. It can also be obtained as.
  • An exemplary anti-GDF15 antibody useful in the methods and compositions of the invention is, for example, one of the four sets of CDR L1 , CDR L2 , and CDR L3 region sequences defined in Table 2 below. It may include a light chain variable region containing.
  • an exemplary anti-GDF15 antibody is (I) CDR H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, CDR H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, CDR H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, CDR L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18 CDR L2 containing the amino acid sequence of, and CDR L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22.
  • the anti-GDF15 antibody comprises CDR H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, CDR H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, CDR H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16.
  • CDR L1 including, CDR L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, and CDR L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22.
  • anti-GDF-15 antibodies useful in the practice of the present invention are described in US Patent Application Publication No. 2014/01/93427 (this disclosure is incorporated herein by reference in its entirety). Includes 01G06, 03G05, 04F08, 06C11, 08G01, 14F11, 17B11, and their human or humanized forms.
  • Exemplary anti-GDF15 antibodies useful in the methods and compositions of the invention may include, for example, a light chain variable region comprising the sequences of the CDR L1 , CDR L2 , and CDR L3 regions defined in Table 5 below.
  • Exemplary anti-GDF15 antibodies useful in the methods and compositions of the invention are defined, for example, in (i) the sequences of the CDR H1 , CDR H2 , and CDR H3 regions set forth in Table 8 and (ii) Table 9. It may include sequences of CDR L1 , CDR L2 , and CDR L3 regions.
  • exemplary anti-GDF15 antibodies include CDR H1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111, CDR H2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112, CDR H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114. It may include CDR L1 including, CDR L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115, and CDR L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116.
  • An exemplary anti-GDF15 receptor antibody is an anti-GFRAL antibody.
  • GFLAL is a GDF15 receptor (Mullican et al. (2017) Nature Medicine, 23: 11501-157, Emmerson et al. (2017) Nature Medicine, 23: 1215-1219, Hu et al. (2017) Nature, 550: 255-259, and Yang et al. (2017) Nature Medicine, 23: 1158-1166, these disclosures are incorporated herein by reference in their entirety).
  • An exemplary anti-GFRAL antibody useful in the methods and compositions of the invention is, for example, one of the six sets of CDR H1 , CDR H2 , and CDR H3 region sequences defined in Table 12 below. It may include a heavy chain variable region containing.
  • An exemplary anti-GFRAL antibody useful in the methods and compositions of the invention may include, for example, any one of the two sets of heavy chain variable region and light chain variable region sequences defined in Table 14. ..
  • the substance that inhibits the action of GDF15 is preferably an anti-GDF15 antibody containing the above-mentioned GDF15-binding fragment or the like, or an antagonist of a GDF-specific receptor, and is an anti-GDF15 antibody. Is more preferable.
  • the antibody may be a neutralizing antibody that reduces GDF15 activity.
  • the antibody is measured for GDF15 activity in an in vivo assay (see, eg, Johanne et al., 2007, Nature Medicine 13: 1333-1340) in the same assay, in the absence of the antibody.
  • the activity may be reduced by at least 10%, preferably 20%, 30% or 40%, more preferably at least about 50%, 60%, 80% or 90% of GDF15 as compared to GDF15 activity.
  • the antibody may selectively and / or significantly reduce or inhibit the binding of GDF15 to its endogenous receptor.
  • the term "significantly reduces or inhibits binding" between GDF15 and its receptor means that the antibody inhibits GDF15 binding and its efficacy or percent inhibition is in the absence of said antibody.
  • the binding is performed, for example, by Tsai et al. , 2013, PLOS One, 8: e55174, can be measured using the direct method or sandwich method of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
  • the engineered gene When expressed in a host eukaryotic cell, eg, a CHO cell, it is first inserted into an expression vector containing a suitable eukaryotic promoter, secretory signal, poly A sequence, and stop codon.
  • the vector or gene construct may include enhancers and introns.
  • the expression vector optionally comprises a sequence encoding all or part of the constant region, allowing all or part of the heavy or light chain to be expressed.
  • the gene construct can be introduced into the host eukaryotic cell using prior art.
  • each humanized antibody has the same or substantially the same affinity for the antigen as the non-humanized mouse antibody from which it is derived.
  • One method of humanization is to produce a chimeric protein in which the mouse immunoglobulin constant region is replaced with the human immunoglobulin constant region.
  • Morrison et al. 1984, Proc. Nat. Acad. Sci. 81: 6851-6855, Neuberger et al. , 1984, Nature 312: 604-608, US Pat. Nos. 6,893,625 (Robinson), 5,500,362 (Robinson), and 4,816,567 (Cabilly).
  • compositions and methods disclosed herein can be used to treat various forms of eye disorders in a subject.
  • the present invention provides methods for reducing ocular fibrosis and / or treating ocular fibrosis disorders in a subject.
  • the method is to administer an effective amount of a GDF15 regulator, eg, an anti-GDF15 antibody, to the subject alone or in combination with another therapeutic agent to reduce or treat such disorders in the subject. include.
  • treat refers to the treatment of a disease in a subject, eg, in a human. This includes (a) inhibiting the disease, i.e. stopping its onset, and (b) alleviating the disease, i.e., resulting in regression of the disease state.
  • subject and “patient” refer to an organism to be treated by the methods and compositions described herein. Such organisms preferably include, but are not limited to, mammals (eg, mice, monkeys, horses, cows, pigs, dogs, cats, etc.) and more preferably humans.
  • the GDF15 regulator is administered in combination with an anti-angiogenic agent.
  • the antiangiogenic agents are afribercept, anti-VEGF antibodies (eg, bevacizumab and ranibizumab), sunitinib, pazopanib, sorafenib, regorafenib, bandetanib, cabozantinib, axitinib, tubozantinib, linifanib, tibozanib, linifanib.
  • compositions containing GDF15 regulators can be formulated into dosage forms or units of dosage using standard pharmaceutical techniques. However, the pharmaceutical composition should be formulated to fit its intended route of administration.
  • the ocular tissue fibrosis inhibitor according to the present invention can be formulated by adding a pharmaceutically acceptable additive as necessary and using a technique widely used as a single preparation or a combination preparation.
  • compositions described herein can be administered to a subject by any route, including intravenously (eg, by infusion pump), intraperitoneal, intraocular, intraarterial, intrapulmonary, oral. , Inhalation, Intravesical, Intramuscular, Intratracheal, Subcutaneous, Intraocular, Intrathecal, Percutaneous, Transthoracic, Intraarterial, Local, Inhalation (eg, as a spray), Mucosa (nasal mucosa, etc.), Subcutaneous, transdermal, gastrointestinal, intra-arterial, intratubal, intraventricular, rectal (ie, by suppository), vagina (ie, by pessary), intracranial, intraurethral, intrahepatic, and intratumoral.
  • intravenously eg, by infusion pump
  • intraperitoneal intraocular, intraarterial, intrapulmonary, oral.
  • Inhalation Intravesical, Intramuscular, Intratracheal
  • Injections are, for example, bacteriostatic water for injection, physiological saline, oil, diluents such as polyethylene glycol, glycerin, propylene glycol; antibacterial agents such as benzyl alcohol and methylparaben; antioxidants such as ascorbic acid and sodium chloride; A chelating agent such as EDTA; a buffer solution such as acetate, citrate, and phosphoric acid; an isotonic agent such as sodium chloride and dextrose can be appropriately selected and used for formulation.
  • physiological saline such as polyethylene glycol, glycerin, propylene glycol
  • antibacterial agents such as benzyl alcohol and methylparaben
  • antioxidants such as ascorbic acid and sodium chloride
  • a chelating agent such as EDTA
  • a buffer solution such as acetate, citrate, and phosphoric acid
  • an isotonic agent such as sodium chloride and dextrose can be appropriately selected and used for formulation.
  • Human doses can be optimized, for example, in conventional Phase I dose escalation studies designed to be performed at 0.5 mg / kg to 20 mg / kg.
  • the frequency of administration may vary depending on factors such as route of administration, dose, serum half-life of the composition (eg, antibody), and the disease to be treated.
  • the exemplary dosing frequency is once daily, once weekly and once every two weeks.
  • the amount of GDF15 regulator administered to the subject is, for example, from about 10 ⁇ g to about 50 ⁇ g, from about 50 ⁇ g to about 100 ⁇ g, from about 100 ⁇ g to about 200 ⁇ g, from about 200 ⁇ g to about 300 ⁇ g, from about 300 ⁇ g to.
  • the GDF15 regulator is about 0.025 mg to about 4 mg, about 0.035 mg to about 2 mg, about 0.05 mg to about 2 mg, about 0.1 mg to about 2 mg of the administrable GDF15 regulator. It is administered at a dose of about 0.2 mg to about 1 mg, or about 0.2 mg to about 0.8 mg. In one embodiment, 0.5 mg of GDF15 regulator is administered topically. In other specific embodiments, about 0.05 mg to about 2 mg, about 0.2 mg to about 2 mg, about 0.05 mg to about 1.5 mg, about 0.15 mg to about 1.5 mg, about 0.4 mg to about. 1 mg, or about 0.5 mg to about 0.8 mg of GDF15 regulator, is administered topically.
  • the GDF15 regulator composition may be administered once daily, or the total daily dose may be administered in divided doses of twice, three or four times daily.
  • the composition is also less frequently than once a day, eg, 6 times a week, 5 times a week, 4 times a week, 3 times a week, 2 times a week, once a week, once every two weeks, once every three weeks. It can be administered once a month, once every two months, once every three months, or once every six months.
  • the composition may also release the composition to be used gradually over a period of time, and the composition may be administered at a low frequency such as once a month, once every 2 to 6 months, once a year, or even a single dose. It can be administered in a sustained release formulation, such as an implantable tablet.
  • Sustained release devices eg, pellets, nanoparticles, microparticles, nanoparticles, microspheres, etc.
  • Sustained release devices can be administered by injection or surgically implanted in various parts of the
  • administration of the GDF15 regulator is adjusted such that the dose reduces or prevents adverse effects, but is still sufficient to completely or partially inhibit the activity of GDF15. ..
  • the activity of GDF15 can be regulated within the target cell using antisense nucleic acid or small molecule interfering nucleic acid.
  • Modulation is an expression construct known in the art for expressing a nucleic acid encoding an anti-GDF15 siRNA or antisense molecule, such as a bare DNA construct, a construct using a DNA vector, and / or a viral vector and / or. It can be achieved using constructs with viruses.
  • DNA constructs and the therapeutic use of such constructs are well known to those of skill in the art (eg, Chiarella et al., 2008, Recent Patents Anti-Infect.Drug Disc., 3: 93-101, Gray et al. , 2008, Expert Opin. Biol. Ther., 8: 911-922, Melman et al., 2008, Hum. Gene Ther., 17: 1165-1176).
  • Naked DNA constructs typically include one or more therapeutic nucleic acids (eg, GDF15 regulators) and promoter sequences.
  • the bare DNA construct can be a DNA vector commonly referred to as pDNA. Naked DNA is typically not integrated into chromosomal DNA. In general, bare DNA constructs do not require or combine with the presence of lipids, polymers, or viral proteins. Such constructs also include one or more of the non-therapeutic ingredients described herein.
  • DNA vectors are known in the art and they are typically circular double-stranded DNA molecules. DNA vectors typically range in size from 3 to 5 kilobase pairs (eg, include inserted therapeutic nucleic acids). Like bare DNA, DNA vectors can be used to deliver and express one or more therapeutic proteins to target cells. DNA vectors are not integrated into chromosomal DNA.
  • a DNA vector contains at least one promoter sequence that allows replication within the target cell. Incorporation of the DNA vector can be facilitated, for example, by combining the DNA vector with a cationic lipid and forming a DNA complex.
  • a viral vector is a double-stranded circular DNA molecule derived from a virus. Viral vectors are typically larger in size than bare DNA and DNA vector constructs and have greater ability to introduce foreign (ie, not encoded by virus) genes. Like naked DNA and DNA vectors, viral vectors can be used to deliver and express one or more therapeutic nucleic acids to target cells. Unlike naked DNA and DNA vectors, certain viral vectors stably integrate themselves into chromosomal DNA.
  • retroviral vectors adenovirus-derived vectors, and / or adeno-related viral vectors as recombinant gene delivery systems for in vivo exogenous gene transfer, especially to humans.
  • Protocols for producing recombinant retroviruses and infecting cells in vitro or in vivo with such viruses are described in Current Protocols in Molecular Biologic, Ausubel, F. et al. M. et al. (Eds.) Greene Publishing Associates, (1989), Sections 9.10-9.14, and other standard experimental manuals.
  • the adenovirus can be used according to the methods described herein.
  • the adenovirus genome can be engineered to encode and express the gene product of interest, but be inactive with respect to its replication capacity during its normal oncolytic life cycle.
  • Suitable adenovirus vectors derived from the adenovirus strain Ad5 type dl324 or other strains of adenovirus (eg, Ad2, Ad3, Ad7, etc.) are known to those of skill in the art.
  • Recombinant adenoviruses can be advantageous in certain situations where non-dividing cells cannot be infected and can be used to infect a wide variety of cell types, including epithelial cells.
  • the virus particles are relatively stable, easy to purify and concentrate, and can be modified to affect the range of infectivity as described above.
  • the introduced adenoviral DNA (and the foreign DNA contained therein) does not integrate into the genome of the host cell but stays in the episome, so that the introduced DNA is integrated into the host genome (eg, retroviral DNA).
  • the host genome eg, retroviral DNA
  • Potential problems resulting from insertion mutations in the insitu are avoided.
  • the capacity of foreign DNA in the adenovirus genome is large (up to 8 kilobases) compared to other gene delivery vectors.
  • Adeno-associated virus is a naturally occurring deficient virus that requires another virus, such as adenovirus or herpesvirus, as a helper virus for efficient replication and productive life cycle. This virus is also one of the few viruses that can integrate its DNA into non-dividing cells and frequently exhibits stable integration.
  • the transfected cells are embryonic stem cells, bone marrow stem cells, umbilical cord stem cells, placenta stem cells, mesenchymal stem cells, neural stem cells, liver stem cells, pancreatic stem cells, heart stem cells, kidney stem cells, or hematopoietic stem cells. be.
  • a host cell transduced with a viral vector according to the invention, expressing one or more polypeptides is administered to a subject to treat and / or prevent a hearing disorder, disorder, or condition. Will be done.
  • Other methods associated with the use of viral vectors include, for example, Kay, 1997, Chest, 111 (6 Supp.): 138S-142S, Ferry et al. , 1998, Hum. Gene Ther. , 9: 1975-81, Shiratory et al. , 1999, Liver, 19: 265-74, Oka et al. , 2000, Curr. Opin. Lipidol. , 11: 179-86, Thule et al.
  • conditional expression of the polynucleotide of interest is provided.
  • expression is controlled by subjecting cells, tissues, organisms, etc. to a treatment or condition that causes expression of the polynucleotide or causes an increase or decrease in the expression of the polynucleotide encoded by the polynucleotide of interest.
  • inducible promoters / systems include steroid-inducible promoters (which can be induced by treatment with the corresponding hormone), metallothionine promoters (various), such as promoters of genes encoding glucocorticoids or estrogen receptors.
  • MX-1 promoter inducible by interferon
  • GeneSwitch mifepriston control system
  • cuminate inducible Examples include, but are not limited to, a gene switch (WO2002 / 088346), a tetracycline-dependent control system, and the like.
  • 12, 15, 20, 30, 50, etc. include excised or integrated proteins, enzymes, cofactors or related proteins involved in recombinant reactions, which are wild proteins (Landy, 1993, It can be a Currency Opinion in Biotechnology, 3: 699-707), or a variant, derivative (eg, a fusion protein containing a recombinant protein sequence or fragment thereof), a fragment, and a variant thereof.
  • Examples of exemplary recombinases suitable for use in certain embodiments of the invention include Cre, Int, IHF, Xis, Flp, Fis, Hin, Gin, OC31, Cin, Tn3 Resolvase, TndX, XerC, XerD, Examples include, but are not limited to, TnpX, Hjc, Gin, SpCCEI, and ParA.
  • the vector comprises a selectable gene, also referred to as a selectable marker.
  • selectable genes include (a) proteins that confer resistance to antibiotics or other toxins such as ampicillin, neomycin, hyglomycin, methotrexate, ZEOCIN, blastsidedin, or tetracycline, (b) nutritional deficiencies.
  • DNA delivery is described, for example, in US Pat. Nos. 5,543,158, 5,641,515, and 5,399,363, respectively, specifically herein by reference in its entirety. It can also be done parenterally, intravenously, intramuscularly, or intraperitoneally, as described in (Incorporated in the Book).
  • a solution of the active compound as a free base or a pharmacologically acceptable salt can be prepared in water which is suitably mixed with a surfactant such as hydroxypropyl cellulose.
  • Dispersions can also be prepared in glycerol, liquid polyethylene glycols and mixtures thereof, and oils. Under normal storage and use conditions, these preparations contain preservatives to prevent the growth of microorganisms.
  • Exemplary formulations for DNA exovivo delivery also include the use of various transfection agents known in the art, such as calcium phosphate, electroporation, heat shock and various liposomal formulations (ie, lipid-mediated transfections). obtain.
  • specific embodiments of the present invention include other formulations, such as those well known in the pharmaceutical field, and, for example, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition. Baltimore, MD: Lippincott Williams & Wilkins, 2000, etc. may be included.
  • GDF15 activity is inhibited by contacting the body fluid with a composition comprising a GDF15 regulator with an exovibo under conditions where the GDF15 regulator can reduce or inhibit GDF15 activity.
  • suitable body fluids include those that can be returned to an individual, such as blood, plasma, or lymph.
  • Apheresis adsorption apheresis is described by Nilsson et al. , 1988, Blood, 58 (1): 38-44, Christie et al. , 1993, Transfusion, 33: 234-242, Richter et al. , 1997, ASAIO J.M. , 43 (1): 53-59, Suzuki et al. , 1994, Autoimmunity, 19: 105-112, US Pat. No.
  • the present invention is a method of treating one or more of the disorders described herein in a subject, such condition under conditions where the GDF15 regulator can reduce or inhibit GDF15 activity in the subject's blood.
  • Includes methods comprising treating a subject's blood extracorporeally (ie, outside the body or exobibo) with a composition comprising.
  • the ocular tissue fibrosis inhibitor according to the present invention is also useful as a dietary supplement (food and drink) orally or via the intestinal tract.
  • a dietary supplement food and drink
  • various conventionally known forms and types can be adopted.
  • the ocular tissue fibrosis inhibitor according to the present invention can also be used as a food additive.
  • When taken as a dietary supplement about 0.1 mg / kg to 100 mg / kg per day is taken once or in several divided doses. Further, if necessary, an amount outside the above range can be used.
  • GDF15 is involved in fibrotic scar formation associated with choroidal angiogenesis.
  • a 7 1 mixed anesthetic solution of ketamine and xylazine diluted 10-fold with physiological saline (1 mL / kg) was administered intramuscularly to the thigh muscles of mice. Then, 0.1% of Hyalein (registered trademark) ophthalmic solution was instilled so that the eyeball would not dry out. While pointing the cover glass to the right eye, look into the fundus of the eye and use a laser photocoagulator (MC500) to irradiate the circumference of the optic nerve head with 6 lasers at regular intervals (wavelength: 647 nm, spot size: 50 ⁇ m, irradiation). Time: 100 msec, laser output: 120 mW).
  • MC500 laser photocoagulator
  • RAW264.7 which is a macrophage cell
  • RAW264.7 which is a macrophage cell
  • the medium was exchanged under 1% FBS conditions, and the cells were cultured for 1 hour.
  • an inflammation-inducing agent Lipopolysaccharide (LPS)
  • LPS Lipopolysaccharide
  • FIGS. 2A to 2B show the localization of GDF15 and macrophage markers.
  • GDF15 co-localized with Iba-1 (macrophage marker) in the CNV lesion.
  • 2C, D and E show the expression of GDF15 in activated macrophage cells.
  • LPS treatment increased the production of activated GDF15 in macrophage cells.
  • the source of GDF15 whose expression is increased under fibrotic pathology is macrophages.
  • FIGS. 3A to 3B show the effect of GDF15 treatment on the cell morphology of retinal pigment epithelial cells.
  • the addition of GDF15 induced an EMT-like morphological change in which the cell morphology became spindle-shaped.
  • GDF15 promotes fibrosis-like transformation of retinal pigment epithelial cells.
  • ARPE-19 a human retinal pigment epithelial cell line
  • a human retinal pigment epithelial cell line was seeded in 24 and 96-well plates at 2.5 ⁇ 10 4 cells / well and 5.0 ⁇ 10 3 cells / well, respectively, to be 90% confluent. It was cultured for 4 days until it became. When 90% confluent was reached, the medium was exchanged under 1% FBS conditions and cultured for 24 hours. After the medium was exchanged again, human recombinant GDF15 (AVISCERA BIOSCIENCE) and human recombinant TGF ⁇ 1 (R & D systems) known as a fibrosis promoting factor were added. The drug was added every 2 days, and sampling was performed 144 hours after the addition, and changes in protein expression of fibronectin (fibrosis marker) were examined by Western blotting and immunostaining.
  • FIGS. 4A to 4F show changes in fibronectin protein expression due to the addition of GDF15.
  • the addition of GDF15 increased the expression of fibronectin, a fibrosis marker.
  • GDF15 acts to promote fibrosis on retinal pigment epithelial cells.
  • Example 5 In Experimental Example 5, the action of a neutralizing antibody targeting GDF15 was investigated.
  • ARPE-19 a human retinal pigment epithelial cell line
  • a human retinal pigment epithelial cell line was seeded in 96-well plates at 5.0 ⁇ 10 3 cells / well and cultured for 4 days until 90% confluent.
  • the medium was exchanged under 1% FBS conditions and cultured for 24 hours.
  • Human GDF-15 Antibody Product No .: AF957, manufactured by R & D, Source: Polyclonal Goat IgG
  • human recombinant GDF15 AVISCERA BIOSCIE
  • FIGS. 5A to 5B show the effect of the anti-GDF15 antibody on retinal pigment epithelial cell fibrosis.
  • the addition of the anti-GDF15 antibody suppressed the increase in GDF15-induced fibronectin expression in a concentration-dependent manner.
  • anti-GDF15 antibody is useful for suppressing fibrosis in retinal pigment epithelial cells.
  • FIGS. 6A to 6C show changes in the expression of downstream signals due to the addition of GDF15. Phosphorylation of the downstream signals Realranged daring transfection (RET), AKT and GSK3 ⁇ of the GFRAL receptor, which has a high affinity for GDF15, was enhanced.
  • RET Realranged daring transfection
  • AKT AKT
  • GSK3 ⁇ of the GFRAL receptor which has a high affinity for GDF15
  • the GFRAL receptor is a receptor having a high affinity for GDF15 as described above, the above signal does not move with TGF ⁇ and is peculiar to GDF15.
  • the present invention is useful for the radical treatment of ocular tissue fibrosis, contributes to the suppression of visual acuity deterioration in patients with predicted fibrotic scar formation, and also in the rehabilitation of the patients and the reduction of medical expenses. It is thought that it will be connected.

Abstract

本発明では、ＧＤＦ１５（Ｇｒｏｗｔｈ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ　１５）の作用を阻害する物質を使用することによって眼組織線維化を引き起こす障害を治療する新規方法を提供する。

Description

眼組織線維化の阻害に使用するためのＧＤＦ１５調節物質
　関連出願の相互参照
　本願は、日本国特許庁にて２０２０年１０月３０日に出願された日本国特許出願第２０２０−１８２５３８号に対する優先権を主張するものであり、該出願は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
　本発明は、ＧＤＦ１５調節物質及び眼組織線維化の抑制におけるそれらの使用に関する。
　加齢黄斑変性は、現在、先進国における失明の主要原因疾患の一つであり、主に５０歳以上の高齢者に見られる。加齢黄斑変性は黄斑の加齢に伴う変化によって起こる疾患であり、滲出型加齢黄斑変性、萎縮型加齢黄斑変性、及びこれらの前駆病変である初期加齢黄斑変性に大別される。ここで、滲出型加齢黄斑変性は、黄斑に脈絡膜から新生血管が発生し、網膜色素上皮または網膜下に出血や滲出性病変を生じ、ついには線維性瘢痕組織を形成する疾患である。網膜下に形成された線維性瘢痕組織は、不可逆的な視野欠損や失明に繋がる。
　滲出型加齢黄斑変性を治療するための方法の一つに、薬物治療がある。薬物治療では、浮腫を抑制するために、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）を阻害する薬物を硝子体内に注入する。血管内皮細胞増殖因子とは、新生血管を発生させると考えられる因子である。この薬物としては、例えば、ルセンティス（登録商標）、アイリーア（登録商標）、ベオビュ（登録商標）等が挙げられる。
　しかしながら、上述した薬物は、網膜下に形成された線維性瘢痕組織に対しては作用しない。一方で、薬物治療後において黄斑が線維性瘢痕化することが報告されている（Ｄａｎｉｅｌ　Ｅ．ｅｔ　ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１４　Ｍａｒｃｈ，１２１（３），ｐｐ．６５６−６６６）。また、薬物治療開始２年後には、約半数の患者に、線維性瘢痕組織の形成が認められることも報告されている（Ｄａｎｉｅｌ　Ｅ．ｅｔ　ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１８　Ｊｕｌｙ，１２５（７），ｐｐ．１０３７−１０４６）。
　前述の通り、従来の滲出型加齢黄斑変性に用いられる薬物では、網膜下に形成された線維性瘢痕組織に対して作用しないことから、この線維性瘢痕組織への特異的な治療法は現時点では存在しない。線維性瘢痕組織の形成は、上述した滲出型加齢黄斑変性のみならず、増殖性硝子体網膜症や糖尿病網膜症といった難治性網膜硝子体疾患においても起こるため、網膜出血や網膜剥離が治療によって治癒したとしても、これに続き二次的に形成された網脈絡膜での線維性瘢痕組織により視力不良となる可能性がある。そのため、網脈絡膜での線維性瘢痕組織の形成を如何にして抑制できるかが重要である。
　このような実情に対し、本発明では、新たな眼組織線維化抑制剤を提供することを主目的とする。
　一態様では、本発明は、眼組織線維化の低下を必要とする対象において眼組織線維化を低下させる方法を提供する。該方法は、有効量のＧＤＦ１５調節物質を対象に投与することによって、対象において眼組織線維化を低下させることを含む。一実施形態では、網膜色素上皮細胞において眼組織線維化が低下させられる。
　別の態様では、本発明は、眼線維化障害の治療を必要とする対象において眼線維化障害を治療する方法を提供する。該方法は、有効量のＧＤＦ１５調節物質を対象に投与することによって、対象において該障害を治療することを含む。ある特定の実施形態では、障害は、黄斑変性（例えば、ウエット型加齢黄斑変性）、難治性網膜硝子体疾患（例えば、増殖性硝子体網膜症または糖尿病網膜症）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜出血、網膜剥離、老眼、脈絡膜血管新生、中心窩下または傍中心窩新生血管、角膜乱視、及び水晶体乱視から選択される。
　前述の方法のある特定の実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質は、ＧＤＦ１５活性を減少させるかまたは阻害する。ある特定の実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質は、抗ＧＤＦ１５抗体、例えば、ヒト化またはヒト抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、
　（ｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８の配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｉｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号４のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｉｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号５のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号６のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号８のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖｉｉｉ）配列番号４７または４９の重鎖配列、及び配列番号３０の軽鎖配列を含む抗体、
　（ｉｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４８、または４９の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列、及び配列番号２８の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉ）配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２７の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉｉ）配列番号３８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２６の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉｉｉ）配列番号３７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２５の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉｖ）配列番号４８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、ならびに
　（ｘｖ）配列番号４７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号３０の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
から選択される。
　別の態様では、本発明は、眼組織線維化の低下を必要とする対象において眼組織線維化を低下させる際に使用するための、ＧＤＦ１５調節物質を提供する。別の態様では、本発明は、眼組織線維化の低下を必要とする対象において眼組織線維化を低下させるための医薬の製造の際に使用するための、ＧＤＦ１５調節物質を提供する。
　別の態様では、本発明は、眼線維化障害の治療を必要とする対象において眼線維化障害を治療するための医薬の製造の際に使用するための、ＧＤＦ１５調節物質を提供する。
　別の態様では、本発明は、眼線維化障害の治療を必要とする対象において眼線維化障害を治療する際に使用するための、ＧＤＦ１５調節物質を提供する。ある特定の実施形態では、障害は、黄斑変性（例えば、ウエット型加齢黄斑変性）、難治性網膜硝子体疾患（例えば、増殖性硝子体網膜症または糖尿病網膜症）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜出血、網膜剥離、老眼、脈絡膜血管新生、中心窩下または傍中心窩新生血管、角膜乱視、及び水晶体乱視から選択される。
　ある特定の実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質は、ＧＤＦ１５活性を減少させるかまたは阻害する。ある特定の実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質は、抗ＧＤＦ１５抗体、例えば、ヒト化またはヒト抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、
　（ｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８の配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｉｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号４のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｉｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号５のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号６のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号８のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
　（ｖｉｉｉ）配列番号４７または４９の重鎖配列、及び配列番号３０の軽鎖配列を含む抗体、
　（ｉｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４８、または４９の重鎖配列，またはその可変領域、及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列、またはその可変領域及び配列番号２８の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉ）配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２７の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉｉ）配列番号３８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２６の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉｉｉ）配列番号３７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２５の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
　（ｘｉｖ）配列番号４８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、ならびに
　（ｘｖ）配列番号４７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号３０の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
から選択される。
　別の態様では、本発明は、ＧＤＦ１５（Ｇｒｏｗｔｈ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ　１５）の作用を阻害する物質を有効成分とする、眼組織線維化抑制剤を提供する。
　ある特定の実施形態では、前記ＧＤＦ１５の作用を阻害する物質は、抗ＧＤＦ１５抗体、またはＧＤＦ１５特異的受容体のアンタゴニストであってよい。
　ある特定の実施形態では、前記眼組織は、網膜色素上皮細胞であってよい。
Ａ~Ｄは、実施例１の結果を示す。 Ａ~Ｄは、実施例２の結果を示す。 Ａ~Ｂは、実施例３の結果を示す。 Ａ~Ｆは、実施例４の結果を示す。 Ａ~Ｃは、実施例５の結果を示す。 Ａ~Ｃは、実施例６の結果を示す。
　本発明によれば、眼組織線維化を阻害する新たな方法が提供される。
　なお、ここに記載された効果は、必ずしも限定されるものではなく、本明細書中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
　以下、本技術を実施するための好適な形態について説明する。
　以下に説明する実施形態は、本技術の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。
　発明に係る眼組織線維化抑制剤は、ＧＤＦ１５（Ｇｒｏｗｔｈ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ　１５）の作用を阻害する物質を有効成分とすることを特徴とする。
　ＧＤＦ１５とは、ＴＧＦβ（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ‐β）のスーパーファミリーに属する分泌型タンパク質であり、マクロファージに対する阻害作用を有することが知られている（Ｂｏｔｔｎｅｒ，ｅｔ　ａｌ．，Ｃｅｌｌ　ａｎｄ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９９９，ｖｏｌｕｍｅ　２９７，ｐａｇｅｓ１０３−１１０）。ＴＧＦβとは、細胞増殖・分化を制御し、細胞死を促すことが知られているサイトカインの一種である。これまでに、ＧＤＦ１５はＴＧＦβ受容体を介して、上皮癌細胞の上皮間葉転換を誘導すること（Ｃｈｅｎ　Ｌｉ，ｅｔ　ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１６　Ｊａｎ　５；７（１）：８６０−７２．）や、ゴルジ体のｆｕｒｉｎ　ｐｒｏｔｅａｓｅにより切断されて活性化体となることが報告されている（Ｊｉｎｇ　Ｊｉｎｇ　Ｌｉ，ｅｔ　ａｌ．，Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ．２０１８　Ｏｃｔ　１５；３８（２１）：ｅ００２４９−１８．ｄｏｉ：１０．１１２８／ＭＣＢ．００２４９−１８．Ｐｒｉｎｔ　２０１８　Ｎｏｖ　１．）。また、近年、ＧＤＦ１５の高親和性受容体として、ＧＦＲＡＬ（Ｇｌｉａｌ　ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｒａｌ　ｆａｃｔｏｒ　ｆａｍｉｌｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ−ｌｉｋｅ）受容体が同定されたことが報告されている（Ｓ．Ｍｕｌｌｉｃａｎ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２３，ｐｐ．１１５０−１１５７，２０１７）。
　ここで、前述の通り、滲出型加齢黄斑変性や、増殖性硝子体網膜症、糖尿病網膜症といった難治性網膜硝子体疾患において、治療後に二次的に形成された網脈絡膜での線維性瘢痕組織が視力不良の原因となることが知られているが、この線維性瘢痕組織への特異的な治療法は現時点では存在しない。線維性瘢痕病態の特徴としては、結合組織や緻密な膠原線維が過剰に蓄積した状態であることが挙げられ、近年では、病変部周辺細胞の上皮間葉転換（以下、「ＥＭＴ」ともいう）が、線維性瘢痕形成に寄与すると考えられている。
　上皮間葉転換とは、上皮細胞が間葉系様の細胞へと変化するプロセスである。該プロセスにより、上皮細胞が筋線維芽様細胞へと変化し、線維性瘢痕形成に繋がる。これまでに成長因子やサイトカインによりＥＭＴ関連因子の発現が調節されることが知られていることから、本願発明者らは、ＥＭＴ関連因子の解明が病態の解明に繋がると考えた。
　そして、本願発明者らは、鋭意実験検討した結果、上述したＧＤＦ１５に着目し、後述する実施例において示される通り、ＧＤＦ１５が線維性瘢痕病態下で発現が増加したことから、ＧＤＦ１５は、上皮間葉転換を誘発することにより、線維化病態の進行に関与することが分かった。したがって、ＧＤＦ１５の作用を阻害する物質が、眼内の線維性瘢痕形成を抑制し得ることが明らかとなった。
　本発明は、眼組織線維化の根本治療に有用であることが示唆され、線維性瘢痕形成が予見される患者の視力低下の抑制に寄与し、該患者の社会復帰や医療費の削減にも繋がると考えられる。
ＧＤＦ１５調節物質
　本発明において、「ＧＤＦ１５調節物質」または「ＧＤＦ１５の作用を阻害する物質」とは、ＧＤＦ１５及び／またはＧＤＦ１５の生物学的経路において、発現量、生物学的活性及び生物学的機能の低下等の結果として生じ得る、ＧＤＦ１５の活性及び／またはＧＤＦ１５の生物学的経路の活性を、低下及び／または阻害する物質をいう。ＧＤＦ１５の作用を阻害する物質としては特に限定されず、例えば、ＧＤＦ１５のアンタゴニスト、抗ＧＤＦ１５抗体、ＧＤＦ１５特異的受容体のアンタゴニスト、抗ＧＤＦ１５特異的受容体抗体、ＧＤＦ１５特異的受容体の下流シグナルの阻害剤、ＧＤＦ１５の発現阻害剤、ＧＤＦ１５特異的受容体の発現阻害剤、ＧＤＦ１５がそのコグネイト結合パートナーに結合するのを阻止する可溶性ＧＤＦ１５模倣体または類似体、ＧＤＦ１５がそのコグネイト結合パートナーに結合するのを阻止する可溶性ＧＤＦ１５受容体模倣体または類似体、ＧＤＦ１５またはＧＤＦ１５受容体の低分子阻害剤、干渉核酸（例えば、内在性ＧＤＦ１５またはコグネイト受容体の発現を干渉する干渉ＲＮＡまたはアンチセンス核酸（例えば、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ）等が挙げられる。本発明では、これらを一種または二種以上組み合わせて用いてもよい。また、これらの物質は、公知の手法によって精製して得ることもできるし、市販品として入手することもできる。
　好ましい実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質は、抗ＧＤＦ１５抗体または抗ＧＤＦ１５受容体抗体を含むことができ、これはヒト化またはヒトのものである。本明細書で使用されるとき、別途指示されない限り、「抗体」という用語は、最適化された、操作された、または化学的に結合させた無傷の抗体または抗体の抗原結合断片（例えば、完全ヒト抗体、半合成抗体、または完全合成抗体を含むファージディスプレイ抗体）を含めた、無傷の抗体（例えば、無傷のモノクローナル抗体）または抗体の抗原結合断片を意味するように理解される。最適化された抗体の例としては、親和性成熟抗体がある。操作された抗体の例としては、Ｆｃ最適化抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）がある。抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、ミニボディ、及びダイアボディが挙げられる。毒素部分に結合させた抗体が、化学的に結合させた抗体の例である。抗体の更なる例としては、ポリクローナル抗体、多特異性抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体、キメラ抗体、抗体の抗原決定部を含む融合タンパク質等の抗体融合物（「抗体結合体」とも称される）、及びそれぞれの断片などが挙げられるが、これらに限定されない。
　ある特定の実施形態では、抗体は、（ａ）構造ＣＤＲＨ１−ＣＤＲＨ２−ＣＤＲＨ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域、及び（ｂ）免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域及び該軽鎖可変領域は一緒に、ＧＤＦ１５またはＧＤＦ１５受容体に結合するための単一の結合部位を画定する。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３配列は、免疫グロブリンフレームワーク（ＦＲ）配列の間に介在する。ある特定の他の実施形態では、抗体は、（ａ）構造ＣＤＲＬ１−ＣＤＲＬ２−ＣＤＲＬ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域、及び（ｂ）免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、該ＩｇＧ軽鎖可変領域及び該ＩｇＧ重鎖可変領域は一緒に、ＧＤＦ１５またはＧＤＦ１５受容体に結合するための単一の結合部位を画定する。ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３配列は、免疫グロブリンＦＲ配列の間に介在する。ある特定の他の実施形態では、抗体は、（ａ）構造ＣＤＲＨ１−ＣＤＲＨ２−ＣＤＲＨ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域、及び（ｂ）構造ＣＤＲＬ１−ＣＤＲＬ２−ＣＤＲＬ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域及び該軽鎖可変領域は一緒に、ＧＤＦ１５またはＧＤＦ１５受容体に結合するための単一の結合部位を画定する。
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表１に定められる９組のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列のうちのいずれか１つを含む重鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表２に定められる４組のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列のうちのいずれか１つを含む軽鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、（ｉ）表１に定められる９組のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列のうちのいずれか１つ、ならびに（ｉｉ）表２に定められる４組のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列のうちのいずれか１つを含んでよい。例えば、例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、
　（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
　（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
　（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
　（ｉｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
　（ｖ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
　（ｖｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
　（ｖｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
を含み得る。
　一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。
　一実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。
　本発明の実施において有用な例示的な抗ＧＤＦ−１５抗体は、米国特許出願公開第２０１４／０１９３４２７号に記載されており（この開示は参照により全目的で本明細書に援用される）、これには０１Ｇ０６、０３Ｇ０５、０４Ｆ０８、０６Ｃ１１、０８Ｇ０１、１４Ｆ１１、１７Ｂ１１、ならびにそれらのヒトまたはヒト化形態が含まれる。
　好ましい実施形態では、本発明の実施において有用な抗ＧＤＦ−１５抗体は、米国特許出願公開第２０１４／０１９３４２７号で０１Ｇ０６と称される。０１Ｇ０６抗体のヒト化形態を、それらのそれぞれ対応する重鎖及び軽鎖領域のアミノ酸配列と一緒に以下に列挙する。例示的なヒト化抗ＧＤＦ−１５抗体としては、Ｈｕ０１Ｇ０６−１、Ｈｕ０１Ｇ０６−４６、Ｈｕ０１Ｇ０６−５２、Ｈｕ０１Ｇ０６−１００、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０１、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０２、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０３、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０４、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０５、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０６、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０７、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０８、Ｈｕ０１Ｇ０６−１０９、Ｈｕ０１Ｇ０６−１１０、Ｈｕ０１Ｇ０６−１１１、Ｈｕ０１Ｇ０６−１１２、Ｈｕ０１Ｇ０６−１１３、Ｈｕ０１Ｇ０６−１１４、Ｈｕ０１Ｇ０６−１２２、Ｈｕ０１Ｇ０６−１２７、Ｈｕ０１Ｇ０６−１３５、Ｈｕ０１Ｇ０６−１３８、Ｈｕ０１Ｇ０６−１４６、Ｈｕ０６Ｃ１１−１、Ｈｕ０６Ｃ１１−２７、Ｈｕ０６Ｃ１１−３０、Ｈｕ１４Ｆ１１−１、Ｈｕ１４Ｆ１１−２３、Ｈｕ１４Ｆ１１−２４、Ｈｕ１４Ｆ１１−３９、及びＨｕ１４Ｆ１１−４７、及び上述の抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む任意の抗体が挙げられる。前述の抗体の各々についての重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、以下の表３に定められる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　次の配列は、配列番号により表３に同定される。これらの重鎖配列及び軽鎖配列の可変領域は、太字で下線付きで強調される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000008
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000009
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000010
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000011
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000012
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000014
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000017
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000020
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000021
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000022
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000023
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000024
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000025
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000026
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000027
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000028
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000029
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000030
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000031
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000032
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000033
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000034
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000035
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000036
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000037
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000038
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000039
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000040
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000041
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000042
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000043
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000044
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000045
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表４に定められる２組のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列のうちのいずれか１つを含む重鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000046
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表５に定められるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列を含む軽鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000047
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、（ｉ）表４に定められる２組のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列のうちのいずれか１つ、ならびに（ｉｉ）表５に定められるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列を含んでよい。例えば、例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含み得る。別の例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含み得る。
　本発明の実施において有用な例示的な抗ＧＤＦ−１５抗体は、米国特許出願公開第２０２０／００５５９３０号に記載されており（この開示は参照により全目的で本明細書に援用される）、これにはＧＤＦ１５＿００１、ならびにそれらのヒトまたはヒト化形態が含まれる。
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表６に定められる２２組の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列のうちのいずれか１つ、または以下の表７に定められる２組の重鎖及び軽鎖配列のうちのいずれかを含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000048
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000049
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000050
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000051
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000052
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000053
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000054
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000055
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000056
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000057
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000058
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000059
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000060
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000061
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000062
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000063
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000064
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000065
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000066
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000067
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000068
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000069
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000070
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000071
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000072
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000073
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000074
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000075
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000076
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000077
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000078
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000079
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000080
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000081
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000082
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000083
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000084
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000085
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000086
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000087
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000088
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000089
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000090
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000091
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000092
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000093
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000094
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000095
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000096
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000097
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000098
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000099
　例示的な抗ＧＤＦ−１５抗体は、ＰＦ−０６９４６８６０（ポンセグロマブ）である。
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表８に定められるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列を含む重鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000100
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表９に定められるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列を含む軽鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000101
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、（ｉ）表８に定められるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列、ならびに（ｉｉ）表９に定められるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列を含んでよい。例えば、例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含み得る。
　本発明の実施において有用な例示的な抗ＧＤＦ−１５抗体は、米国特許出願公開第２０２０／０１３５９０８号に記載されており（この開示は参照により全目的で本明細書に援用される）、これにはＡＢＧＤＦ１５−Ａ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｇ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｂ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｃ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｆ、ＡＢＧＤＦ１５−Ｅ、及びＡＢＧＤＦ１５−Ｄ、ならびにそれらのヒトまたはヒト化形態が含まれる。
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、例えば、以下の表１０に定められる７組の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列のうちのいずれか１つ、または以下の表１１に定められる重鎖及び軽鎖配列を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000102
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000103
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000104
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000105
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000106
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000107
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000108
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000109
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000110
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000111
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000112
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000113
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000114
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000115
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000116
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000117
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000118
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000119
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000120
　更なる例示的な抗ＧＤＦ１５抗体は、ポリクローナルヤギＩｇＧ抗ヒトＧＤＦ−１５抗体（品番ＡＦ９５７、Ｒ＆Ｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ製）である。
　例示的な抗ＧＤＦ１５受容体抗体としては、抗ＧＦＲＡＬ抗体が挙げられる。ＧＦＲＡＬは、ＧＤＦ１５受容体である（Ｍｕｌｌｉｃａｎ　ｅｔ　ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２３：１１５０−１１５７、Ｅｍｍｅｒｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２３：１２１５−１２１９、Ｈｕ　ｅｔ　ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ，５５０：２５５−２５９、及びＹａｎｇ　ｅｔ　ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２３：１１５８−１１６６を参照されたく、これらの開示は参照により全目的で本明細書に援用される）。
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＦＲＡＬ抗体は、例えば、以下の表１２に定められる６組のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列のうちのいずれか１つを含む重鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000121
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＦＲＡＬ抗体は、例えば、以下の表１３に定められる４組のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列のうちのいずれか１つを含む軽鎖可変領域を含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000122
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＦＲＡＬ抗体は、例えば、（ｉ）表１２に定められる６組のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３領域の配列のうちのいずれか１つ、ならびに（ｉｉ）表１３に定められる４組のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３領域の配列のうちのいずれか１つを含んでよい。例えば、例示的な抗ＧＦＲＡＬ抗体は、（ｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、及び配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含み得る。
　本発明の実施において有用な例示的な抗ＧＦＲＡＬ抗体は、米国特許第１０，１７４，１１９号に記載されており（この開示は参照により全目的で本明細書に援用される）、これには１Ｃ１、３Ｐ１０、１２Ａ３、５Ｆ１２、５Ａ２０、８Ｄ８、１７Ｊ１６、２５Ｍ２２、２Ｂ８、２２Ｎ５、２Ｉ２３、６Ｎ１６、１Ｂ３、１９Ｋ１９、２Ｂ３、８Ｃ１０、２Ａ９、２４Ｇ２、６Ｇ９、２Ｂ１１、１Ａ３、Ｐ１Ｂ６、Ｐ１Ｈ８、またはＰ８Ｇ４、ならびにそれらのヒトまたはヒト化形態が含まれる。
　本発明の方法及び組成物において有用な例示的な抗ＧＦＲＡＬ抗体は、例えば、表１４に定められる２組の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列のうちのいずれか１つを含んでよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000123
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000124
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000125
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000126
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000127
　例示的抗ＧＦＲＡＬ抗体は、ＮＧＭ１２０である。
　本明細書に記載される抗体は、当該技術分野で公知の技術を使用して設計、試験、及び製剤化することができると理解される。
　本発明では、これらの中でも、ＧＤＦ１５の作用を阻害する物質としては、上述したＧＤＦ１５結合性断片等を含む抗ＧＤＦ１５抗体、またはＧＤＦ特異的受容体のアンタゴニストであることが好ましく、抗ＧＤＦ１５抗体であることがより好ましい。
　抗体は、ＧＤＦ１５活性を低下する中和抗体であってよい。例えば、抗体は、インビボアッセイにおけるＧＤＦ１５活性を（例えば、Ｊｏｈｎｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，２００７，Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　１３：１３３３−１３４０を参照のこと）、同一アッセイ、同一条件下で抗体を存在させずに測定されるＧＤＦ１５活性と比較して、ＧＤＦ１５の少なくとも１０％、好ましくは、２０％、３０％または４０％、より好ましくは、少なくとも約５０％、６０％、８０％または９０％低下し得る。抗体は、ＧＤＦ１５とその内在性受容体との結合を選択的及び／または顕著に低下もしくは阻害し得る。本明細書で使用される場合、ＧＤＦ１５とその受容体との「結合を顕著に低下または阻害する」という用語は、抗体がＧＤＦ１５結合を阻害し、その効力または阻害パーセントが、前記抗体が存在しない場合のＧＤＦ１５（血清濃度／活性）の少なくとも１０％、好ましくは、２０％、３０％または４０％、より好ましくは、少なくとも約５０％、６０％、８０％または９０％という測定値になることを意味すると理解される。結合は、例えば、Ｔｓａｉ　ｅｔ　ａｌ．，２０１３，ＰＬＯＳ　Ｏｎｅ，８：ｅ５５１７４に記載のとおり、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）の直接法またはサンドイッチ法を使用して測定することができる。本明細書で使用される場合、ＧＤＦ１５またはＧＤＦ１５受容体に結合する抗体との関連において「選択的に」という用語は、抗体が、機能的に関連しないタンパク質またはＴＧＦ−βスーパーファミリーの別のメンバーまたはＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーの受容体の結合親和性より少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍もしくは１０倍大きい結合親和性でＧＤＦ１５またはＧＤＦ１５受容体と結合することを意味すると理解される。
　抗体を作製する方法、例えば、本明細書で開示される方法は、当該技術分野で公知である。例えば、軽鎖可変領域及び／または重鎖可変領域をコードするＤＮＡ分子は、化学的または組換えＤＮＡの方法により合成することができる。例えば、抗体の配列は、適切な合成核酸プライマーを使用して、従来のハイブリダイゼーション技術またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術によりハイブリドーマからクローニングすることができる。目的可変領域をコードする、得られたＤＮＡ分子は、所望の抗体をコードする従来型の遺伝子発現コンストラクト（すなわち、発現ベクター）を作製するために、例えば、定常領域コード配列、及び発現制御配列等、他の適切なヌクレオチド配列に連結することができる。定義された遺伝子コンストラクトの作製は、当業者の慣例的技能の範囲内である。
　所望の抗体をコードする核酸は、発現ベクター内に組み込む（連結する）ことができ、これを、従来のトランスフェクションまたは形質転換技術により宿主細胞内に導入することができる。例示的宿主細胞は、他の場合にはＩｇＧタンパク質を産生しない、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ　Ｇ２）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、及び骨髄腫細胞である。形質転換された宿主細胞は、宿主細胞が免疫グロブリンの軽鎖可変領域及び／または重鎖可変領域をコードする遺伝子を発現できる条件下で増殖させることができる。
　具体的な発現及び精製の条件は、使用される発現系により異なる。例えば、遺伝子をＥ．ｃｏｌｉで発現させる場合は最初に、操作された遺伝子を、好適な細菌プロモーター、例えば、ＴｒｐまたはＴａｃ、及び原核生物シグナル配列の下流に位置させて遺伝子を発現ベクターにクローニングする。発現されたタンパク質は分泌され得る。発現されたタンパク質は、屈折体または封入体に蓄積され得、それを、フレンチプレスまたは超音波処理による細胞破砕後に回収することができる。屈折体はその後、可溶化され、タンパク質は、当該技術分野で公知の方法によりリフォールディング及び／または切断され得る。
　操作遺伝子を宿主真核細胞、例えば、ＣＨＯ細胞で発現させる場合は最初に、好適な真核生物プロモーター、分泌シグナル、ポリＡ配列、及び終止コドンを含む発現ベクター内に挿入する。任意選択で、ベクターまたは遺伝子コンストラクトは、エンハンサー及びイントロンを含んでよい。実施形態では、発現ベクターは、任意選択で、定常領域の全部または一部をコードする配列を含み、重鎖もしくは軽鎖の全部または一部が発現されるのを可能にする。遺伝子コンストラクトは、従来技術を使用して宿主真核細胞内に導入することができる。
　特定の実施形態では、宿主細胞は、別の機能（例えば、細胞毒性）を有する部分にそれぞれが結合され得るＶＬもしくはＶＨの断片、ＶＬ−ＶＨヘテロ二量体、ＶＨ−ＶＬもしくはＶＬ−ＶＨ一本鎖ポリペプチド、免疫グロブリンの完全な重鎖もしくは軽鎖、またはそれらの一部を含む抗体を発現する。いくつかの実施形態では、宿主細胞に、（ｉ）重鎖もしくは重鎖可変領域の全部もしくは一部を含むポリペプチド、及び／または（ｉｉ）軽鎖もしくは軽鎖可変領域の全部もしくは一部を含むポリペプチドを発現する単一ベクターをトランスフェクトする。いくつかの実施形態では、宿主細胞に、２つ以上の発現ベクター（例えば、１つの発現ベクターは重鎖もしくは重鎖可変領域の全部もしくは一部を含むポリペプチドを発現し、もう１つの発現ベクターが軽鎖もしくは軽鎖可変領域の全部もしくは一部を含むポリペプチドを発現し、任意選択で、そこに融合させたシアリダーゼを含む）をコトランスフェクトする。
　ポリペプチドであって、例えば、免疫グロブリンの重鎖可変領域及び／または軽鎖可変領域を含む抗体を含むポリペプチドは、そのような可変領域をコードする発現ベクターをトランスフェクトした宿主細胞を、かかるポリペプチドの発現を可能にする条件下で増殖させること（培養すること）により生産することができる。発現の後、ポリペプチドは、当該技術分野で公知の技術、例えば、グルタチオンＳ−転移酵素（ＧＳＴ）またはヒスチジンタグ等のアフィニティータグを使用して回収及び精製または単離することができる。
　特定の実施形態では、抗体は、（ａ）完全もしくは部分的な免疫グロブリン重鎖をコードする発現ベクター、及び完全もしくは部分的な免疫グロブリン軽鎖をコードする別個の発現ベクター、または（ｂ）両鎖の発現を可能にする条件下で両鎖（例えば、完全または部分的な、重鎖と軽鎖）をコードする単一発現ベクターをトランスフェクトした宿主細胞を増殖させること（培養すること）により生産することができる。無傷抗体は、例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、アフィニティータグ、例えば、グルタチオンＳ−転移酵素（ＧＳＴ）またはヒスチジンタグ等、当該技術分野で公知の技術を使用して回収及び精製または単離することができる。単一発現ベクターまたは２つの別個の発現ベクターから重鎖及び軽鎖を発現させることは当業者の技能の範囲内である。
　抗体及び抗体断片の抗原性を低下または除去する方法は、当該技術分野で公知である。抗体がヒトに投与されるべき場合、抗体は、ヒトにおける抗原性を低下または除去するよう「ヒト化」されていることが好ましい。好ましくは、各ヒト化抗体は、それが由来する非−ヒト化マウス抗体と同じかまたは実質的に同じ親和性を抗原に対して有する。
　ヒト化の一手法では、マウス免疫グロブリン定常領域がヒト免疫グロブリン定常領域で置き換えられているキメラタンパク質を作製する。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１−６８５５，Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ　３１２：６０４−６０８、米国特許第６，８９３，６２５号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）、第５，５００，３６２号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）、及び第４，８１６，５６７号（Ｃａｂｉｌｌｙ）を参照のこと。
　ＣＤＲグラフティングとして知られる手法では、軽鎖と重鎖の可変領域のＣＤＲを、別の種に由来するフレームワーク内に移植する。例えば、マウスのＣＤＲは、ヒトのＦＲ内に移植することができる。いくつかの実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体の軽鎖と重鎖の可変領域のＣＤＲは、ヒトのＦＲ内かまたはコンセンサスヒトＦＲ内に移植される。コンセンサスヒトＦＲを作製するため、ヒトの重鎖または軽鎖のいくつかのアミノ酸配列からのＦＲを整列させてコンセンサスアミノ酸配列を同定する。ＣＤＲグラフティングは、米国特許第７，０２２，５００号（Ｑｕｅｅｎ）、第６，９８２，３２１号（Ｗｉｎｔｅｒ）、第６，１８０，３７０号（Ｑｕｅｅｎ）、第６，０５４，２９７号（Ｃａｒｔｅｒ）、第５，６９３，７６２号（Ｑｕｅｅｎ）、第５，８５９，２０５号（Ａｄａｉｒ）、第５，６９３，７６１号（Ｑｕｅｅｎ）、第５，５６５，３３２号（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ）、第５，５８５，０８９号（Ｑｕｅｅｎ）、第５，５３０，１０１号（Ｑｕｅｅｎ）、Ｊｏｎｅｓ　ｅｔ　ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ　３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ　３３２：３２３−３２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３９：１５３４−１５３６、及びＷｉｎｔｅｒ，１９９８，ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ　４３０：９２−９４に記載されている。
　「ＳＵＰＥＲＨＵＭＡＮＩＺＡＴＩＯＮ（商標）」と呼ばれる手法では、ヒトＣＤＲ配列は、ヒト化されるべきマウス抗体のＣＤＲに対するヒトＣＤＲの構造類似性に基づいて、ヒト生殖細胞系列遺伝子から選択される。例えば、米国特許第６，８８１，５５７号（Ｆｏｏｔｅ）、及びＴａｎ　ｅｔ　ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５を参照のこと。
　免疫原性を低下する他の方法としては、「再構成（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」、「超キメラ化（ｈｙｐｅｒｃｈｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」、及び「ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）／表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」が挙げられる。例えば、Ｖａｓｗａｍｉ　ｅｔ　ａｌ．，１９９８，Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ，＆　Ｉｍｍｕｎｏｌ．８１：１０５、Ｒｏｇｕｓｋａ　ｅｔ　ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒ　９：８９５−９０４、及び米国特許第６，０７２，０３５号（Ｈａｒｄｍａｎ）を参照のこと。ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）／表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）手法では、マウス抗体の表面の接近可能アミノ酸残基が、ヒト抗体の同じ位置でより頻繁に見られるアミノ酸残基により置き換えられている。この種の抗体表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）は、例えば、米国特許第５，６３９，６４１号（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ）に記載されている。
　マウス抗体をヒトでの医療用途に好適な形態に変換するための別の手法は、哺乳類細胞で抗体を発現させるためにワクシニアウイルス系ベクターを使用するＡＣＴＩＶＭＡＢ（商標）技術（Ｖａｃｃｉｎｅｘ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）として知られる。ＩｇＧの重鎖及び軽鎖の高レベルの組み合わせ多様性が生成されると言われている。例えば、米国特許第６，７０６，４７７号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）、第６，８００，４４２号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）、及び第６，８７２，５１８号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）を参照のこと。
　マウス抗体を、ヒトでの使用に好適な形態に変換するための別の手法は、ＫａｌｏＢｉｏｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ　Ａｌｔｏ，ＣＡ）により商業的に実施されている技術である。この技術は、抗体選択用の「エピトープに焦点を当てた」ライブラリーを生成するための、独自に所有するヒト「アクセプター」ライブラリーの使用を伴う。
　マウス抗体を、ヒトでの医療用途に好適な形態に修飾するための別の手法は、ＨＵＭＡＮ　ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ（商標）技術であり、ＸＯＭＡ（ＵＳ）ＬＬＣにより商業的に実施されている。例えば、ＰＣＴ公開番号第ＷＯ９３／１１７９４号、ならびに米国特許第５，７６６，８８６号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）、第５，７７０，１９６号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）、第５，８２１，１２３号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）、及び第５，８６９，６１９号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）を参照のこと。
　抗体のヒト免疫原性を低下または除去するために、上記の任意の手法を含め、好適ないかなる手法も使用することができる。
　更に、完全ヒト抗体をマウスに作製することが可能である。いかなる非ヒト配列をも欠いている完全ヒトｍＡｂは、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ　３６８：８５６−８５９，１９９４、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　１４：８４５−８５１，１９９６、及びＭｅｎｄｅｚ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　１５：１４６−１５６，１９９７で言及されている手法により、ヒト免疫グロブリントランスジェニックマウスから調製することができる。完全ヒトｍＡｂはまた、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：５７−８６，２０００、及びＫｒｅｂｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２５４：６７−８４　２００１）で言及されている手法により、ファージディスプレイライブラリーから調製し、最適化することもできる。
　おとりとして作用する、ＧＤＦ１５の変異型及び誘導体は、本発明の実施において有用であり得ることが意図される。例えば、欠失解析により、ＧＤＦ１５の同族受容体を内在性ＧＤＦ１５と競合する、ＧＤＦ１５の生物学的に活性なより小さな断片を同定することが可能な場合がある。同様に、利用可能なＧＤＦを内在性ＧＤＦ１５受容体と競合する、ＧＤＦ１５受容体の生物学的に活性な可溶性断片を作製することが可能である。例えば、「生物学的に活性な断片」としては、内在性ＧＤＦ１５または内在性ＧＤＦ１５受容体と、同族結合パートナー（例えば、それぞれ、ＧＤＦ１５受容体またはＧＤＦ１５）への結合をそれぞれ競合する、天然に存在するＧＤＦ１５（またはホモログ）またはＧＤＦ１５受容体（またはホモログ）の断片が挙げられるが、これらに限定されない。例示的ＧＤＦ１５リガンドトラップは、Ｙｕｎｇ　ｅｔ　ａｌ．（２０１４）　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　１３０：Ａ１７２８５、及び米国特許出願公開第２０１９／０３６５８７号に記載されている。
　アンチセンス核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）及び低分子干渉核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、当該技術分野で公知の技術を使用して設計及び使用され得ることが意図される。ＧＤＦ１５の例示的ｓｉＲＮＡ阻害剤としては、Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈ製ｓｉＲＮＡ（カタログ番号ｓｃ−３９７９９、マウスＧＤＦ１５指向性；及びカタログ番号ｓｃ−３９７９８、ヒトＧＤＦ１５指向性）、Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製ｓｉＲＮＡ（カタログ番号ＡＭ１６７０８、４３９２４２０、及び１２９９００１、ヒトＧＤＦ１５指向性；ならびにカタログ番号１３２０００１及び４３９０７７１、マウスＧＤＦ１５指向性；ならびにカタログ番号１３３０００１及び４３９０７７１、ラットＧＤＦ１５指向性）、Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製ｓｉＲＮＡ（カタログ番号ＮＣ０６８３８０７、ヒトＧＤＦ１５指向性）、Ｏｒｉｇｅｎｅ製ｓｉＲＮＡ（カタログ番号ＳＲ３０６３２１、ヒトＧＤＦ１５指向性）、ａｍｓｂｉｏ製ｓｉＲＮＡ（カタログ番号ＳＲ５０９８００、ラットＧＤＦ１５（ｒａｔｅ　ＧＤＦ１５））指向性、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ製ｓｉＲＮＡ（カタログ番号Ｄ−０１９８７５−０２を含む、ヒトＧＤＦ１５指向性）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製ｓｉＲＮＡ（カタログ番号ＥＨＵ０５２９０１、ヒトＧＤＦ１５指向性）、ならびにＫｉｍ　ｅｔ　ａｌ．，２００５，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，４：４８７−４９３、Ｃｈａｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，６：２２７１−２２７９、及びＢｏｙｌｅ　ｅｔ　ａｌ．，２００９，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１２９：３８３−３９１に記載のｓｉＲＮＡが挙げられる。
　追加の例示的ＧＤＦ１５調節物質としては、小分子阻害剤及びポリペプチド阻害剤、例えば、Ｈｅｒｂｅｒｔｚ　ｅｔ　ａｌ．（２０１５）　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓ　Ｄｅｖｅｌ　Ｔｈｅｒ．９：４４７９−４４９９、及び米国特許出願公開第２０１８０２８２４０３号に記載のものが挙げられる。
治療的使用
　本明細書で開示される組成物及び方法は、対象における様々な形態の眼障害を治療するために使用することができる。本発明は、対象における眼線維化を低下するため、及び／または眼線維化障害を治療するための方法を提供する。方法は、対象における眼線維化を低下するかまたはかかる障害を治療するために、有効量のＧＤＦ１５調節物質、例えば、抗ＧＤＦ１５抗体を、単独または別の治療剤と組み合わせて対象に投与することを含む。
　本明細書で使用される場合の用語「有効量」とは、有益または所望の結果をもたらすために十分である活性物質（例えば、ＧＤＦ１５調節物質、例えば、抗ＧＤＦ１５抗体）の量を指す。有効量は、１つ以上の投与、適用または投与量で投与することができ、特定の製剤または投与経路に限定されることは意図されない。
　本明細書で使用される場合、用語「眼線維化障害」とは、眼組織の線維化によるかまたはそれと関連して、誘導、増強、そうでなければ促進されている障害を指す。本発明において、「眼組織」とは、眼内に存在する任意の組織をいう。本発明では、眼組織とは、特には、網膜を構成する細胞や、網膜を構成する層である。網膜を構成する細胞としては、例えば、網膜神経節細胞、アマクリン細胞、水平細胞、ミュラーグリア細胞、双極細胞、網膜視細胞（錐体、桿体）、網膜色素上皮細胞等が挙げられる。網膜を構成する層としては、内境界膜、神経線維層、神経節細胞層、内網状膜、内顆粒層、外網状層、外顆粒層、外境界膜、視細胞層、及び網膜色素上皮層が挙げられる。
　本発明では、これらの中でも、眼組織としては、網膜色素上皮細胞であることが好ましい。
　眼線維化障害の例としては、滲出型加齢黄斑変性、増殖性硝子体網膜症及び糖尿病網膜症等の難治性網膜硝子体疾患、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜出血及び網膜剥離が挙げられる。眼障害のさらなる例としては、黄斑性変性と関連するもの、例えば、老視（加齢による遠視の形態）、脈絡膜血管新生、中心窩下または傍中心窩の新生血管、角膜乱視及び水晶体乱視が挙げられる（いずれも、ここでの参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，２２６，９４０号及び米国特許出願公開第２０１７０３２６１０６号を参照のこと）。
　本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」及び「治療」とは、対象における、例えば、ヒトにおける、疾患の治療をいう。これには、（ａ）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を停止させること、及び（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患状態の退縮をもたらすことが含まれる。本明細書で使用される場合、用語「対象」及び「患者」とは、本明細書に記載される方法及び組成物によって治療されるべき生物を指す。そのような生物としては、好ましくは、哺乳類（例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ等）が挙げられ、より好ましくは、ヒトが挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明に係る眼組織線維化抑制剤は、ヒトを含む動物に有効であるが、特に、ヒトを含む哺乳類に有効である。なお、本発明に係る眼組織線維化抑制剤がヒトに投与される場合、抗ＧＤＦ１５抗体は、必要に応じて、本発明の効果を損なわない限り、公知の方法によりヒトに投与可能なように改変され得る。
　本明細書に記載される方法及び組成物は、単独または他の治療剤及び／または様式と組み合わせて使用することができる。「組み合わせて」投与されるという用語は、本明細書で使用される場合、患者に対する治療の効果が時間的にある時点で重なるよう、対象が障害に罹患している期間中に２つ（またはそれ以上）の異なる治療が対象に送達されることを意味すると理解される。特定の実施形態では、１つの治療の送達がまだ行われている時に第２の治療の送達が開始され、そのため、投与の点で重なっている。これは、本明細書では「同時」または「併用送達」といわれることもある。他の実施形態では、１つの治療の送達は、他の治療の送達が開始される前に終了する。いずれの場合の特定の実施形態でも、治療は、併用投与のためより有効である。例えば、第２の治療は、より有効である、例えば、より少量の第２の治療により同等な効果が見られるか、または第２の治療は、第１の治療を用いずに第２の治療を投与した場合に見られるであろう症状軽減よりも大きい程度で症状を軽減するか、または第１の治療を用いた場合と類似の状況が見られる。特定の実施形態では、送達は、症状、またはその障害に関連した他のパラメータの低減が、併用治療の一方を用いずに他方の治療を送達した場合に観察されるであろう軽減より大きくなる送達である。２つの治療の効果は、部分的に相加的であるか、全体的に相加的であるか、または相加的より大きくなり得る。送達は、送達された第１の治療の効果が、第２の治療が送達される時点で依然として検出可能な送達であり得る。
　特定の実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質は、抗血管新生薬と組み合わせて投与される。特定の実施形態では、抗血管新生薬は、アフリベルセプト、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ及びラニビズマブ）、スニチニブ、パゾパニブ、ソラフェニブ、レゴラフェニブ、バンデタニブ、カボザンチニブ、アキシチニブ、チボザニブ、リニファニブ、ペガプタニブ、スピロノラクトン、インドメタシン、サリドマイド、インターロイキン−１２、抗ＦＧＦ抗体、チロシンキナーゼ阻害薬、インターフェロン、スラミン、スラミン類似体、ソマトスタチン、及びソマトスタチン類似体から選択される。特定の実施形態では、抗血管新生薬は、ＶＥＧＦ阻害薬、例えば、アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブ、スニチニブ、パゾパニブ、ソラフェニブ、レゴラフェニブ、バンデタニブ、カボザンチニブ、アキシチニブ、チボザニブ及びリニファニブから選択されるＶＥＧＦ阻害薬である。特定の実施形態では、抗血管新生薬は、ベバシズマブである。
製剤及び送達
　ＧＤＦ１５調節物質を含む医薬組成物、例えば、本明細書で開示されるものは、標準的製剤技術を使用して剤型または投与単位に製剤化することができる。ただし、医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するよう製剤化されるべきである。本発明に係る眼組織線維化抑制剤は、必要に応じて、医薬として許容される添加剤を加え、単独製剤または配合製剤として汎用されている技術を用いて製剤化することができる。
　本明細書に記載される組成物は、任意の経路で対象に投与することができ、それらとしては、静脈内（例えば、注入ポンプによる）、腹腔内、眼球内、動脈内、肺内、経口、吸入、膀胱内、筋肉内、気管内、皮下、眼球内、髄腔内、経皮、経胸膜、動脈内、局所、吸入（例えば、スプレーの噴霧として）、粘膜（経鼻粘膜等）、皮下、経皮、消化管、関節内、大槽内、脳室内、直腸（すなわち、坐剤による）、膣（すなわち、ペッサリーによる）、頭蓋内、尿道内、肝内、及び腫瘍内が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組成物は、全身投与される（例えば、静脈内注射で）。いくつかの実施形態では、組成物は、局所投与される（例えば、動脈内または眼内注射で）。いくつかの実施形態では、組成物は、非経口投与または経口投与される。非経口投与の剤型としては、点眼剤、注射剤、点鼻剤等が挙げられ、経口投与の剤型としては、錠剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤、散剤等が挙げられ、汎用される技術を用いて製剤化することができる。なお、注射剤とした場合、眼球、眼内、硝子体内、結膜下、静脈内、動脈内、皮下、皮内、筋肉内等への注射によって投与することができる。
　有用な製剤は、製薬分野で周知の方法により調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ　ｅｄ．（Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）を参照のこと。非経口投与に好適な製剤の構成成分としては、注射用静菌水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒等の無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベン等の抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム等の抗酸化剤；ＥＤＴＡ等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩等の緩衝液；及び塩化ナトリウムまたはデキストロース等の等張性の調節用薬剤が挙げられる。担体は、製造及び保存の条件化で安定でなければならず、また微生物に対して保護されていなければならない。いくつかの実施形態では、組成物（例えば、抗体）は凍結乾燥され、その後、投与時に緩衝生理食塩水中に再構成される。
　治療的用途の場合、組成物（例えば、抗体）は好ましくは、薬学的に許容される担体と組み合わせられる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」とは、過渡の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴うことなくヒト及び動物の組織と接触する使用に好適であり、妥当なベネフィット／リスク比に見合う緩衝剤、担体、及び賦形剤をいう。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合性があり、かつ、レシピエントにとって有害ではないという意味で、「許容され」なければならない。薬学的に許容される担体としては、薬剤投与と適合性のある、緩衝剤、溶媒、分散媒、コーティング剤、等張剤及び吸収遅延剤等が挙げられる。そのような媒体及び薬剤の薬学的活性物質への使用は、当該技術分野で公知である。
　点眼剤は、例えば、等張化剤、緩衝剤、ｐＨ調節剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、保存剤等を適宜配合することができる。また、ｐＨ調節剤、増粘剤、分散剤等を添加することにより、薬物を懸濁化させて、安定な点眼剤を得ることもできる。等張化剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ソルビトール、マンニトール等を挙げることができる。緩衝剤としては、例えば、リン酸、リン酸塩、クエン酸、酢酸、ε−アミノカプロン酸等を挙げることができる。ｐＨ調節剤としては、例えば、塩酸、クエン酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ホウ酸、ホウ砂、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等を挙げることができる。可溶化剤としては、例えば、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、マクロゴール４０００等を挙げることができる。増粘剤、分散剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース系高分子、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等を、また、安定化剤としては、例えば、エデト酸、エデト酸ナトリウム等を挙げることができる。保存剤（防腐剤）としては、例えば、汎用のソルビン酸、ソルビン酸カリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、クロロブタノール等が挙げられる。
　点眼剤のｐＨは、眼科製剤に許容される範囲内にあればよいが、４．０~８．５の範囲が好ましく、また、浸透圧比を１．０付近に設定することが好ましい。
　医薬組成物は、好ましくは無菌である。滅菌は、例えば、滅菌ろ過膜を通したろ過により達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合は、凍結乾燥及び再構成の前またはその後でフィルター滅菌を実施することができる。
　錠剤は、例えば、乳糖、ブドウ糖、Ｄ−マンニトール、無水リン酸水素カルシウム、デンプン、ショ糖等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポピドン、デンプン、部分アルファー化デンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等の崩壊剤；ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、デンプン、部分アルファー化デンプン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、含水二酸化ケイ素、硬化油等の滑沢剤；精製白糖、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン等のコーティング剤；クエン酸、アスパルテーム、アスコルビン酸、メントール等の矯味剤などを適宜選択して用い、製剤化することができる。
　また、注射剤には、溶液、懸濁液、乳濁液及び用時液中に溶解または懸濁して用いる固形の注射剤が包含され、例えば、本発明に係る眼組織線維化抑制剤を液中に溶解、懸濁または乳化させて用いられる。この際、本発明に係る眼組織線維化抑制剤は、凍結乾燥等の処理が施されていてもよい。注射剤は、例えば、注射用静菌水、生理食塩水、油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等の希釈剤；ベンジルアルコール、メチルパラベン等の抗菌剤；アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム等の抗酸化剤；ＥＤＴＡ等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、リン酸等の緩衝液；塩化ナトリウム、デキストロース等の等張化剤などを適宜選択して用い、製剤化することができる。
　一般に、活性成分の治療的有効量は、０．１ｍｇ／ｋｇ~１００ｍｇ／ｋｇの範囲内、例えば、１ｍｇ／ｋｇ~１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ~１０ｍｇ／ｋｇである。活性成分の治療的有効量はまた、１ｍｇ／ｍ２~１０００ｍｇ／ｍ２の範囲内、例えば、１ｍｇ／ｍ２~５００ｍｇ／ｍ２または５０ｍｇ／ｍ２~５００ｍｇ／ｍ２または２００ｍｇ／ｍ２~７００ｍｇ／ｍ２または３００ｍｇ／ｍ２~６００ｍｇ／ｍ２または４００ｍｇ／ｍ２~８００ｍｇ／ｍ２または５００ｍｇ／ｍ２~１０００ｍｇ／ｍ２であってもよい。投与される量は、治療されるべき疾患または適応の種類と程度、患者の全般的な健康、組成物（例えば、抗体）のインビボ効力、医薬製剤、及び投与経路等の変数に応じて異なる。初回投与量は、所望の血中濃度または組織中濃度を短時間で達成するために、上位レベルを超えて増量することができる。別法として、初回投与量は、最適投与量より少ない量であり得、治療期間中に日用量を徐々に増量してよい。ヒト投与量は、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ~２０ｍｇ／ｋｇで実施するようデザインされた従来の第Ｉ相用量漸増試験で最適化することができる。投与頻度は、投与経路、投与量、組成物（例えば、抗体）の血清中半減期、及び治療される疾患等の因子に応じて異なり得る。例示的投与頻度は、１日１回、週１回及び２週間に１回である。
　組成物の最適有効量は経験的に決定することができ、疾患の種類と重症度、投与経路、疾患進行、ならびに対象の健康、体重、及び体面積に応じて異なる。そのような決定は、当業者の技能の範囲内である。本明細書に記載される方法に使用することができるＧＤＦ１５調節物質分子の投与量の例としては、約０．０１μｇ／ｋｇ~約３００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１μｇ／ｋｇ~約４０ｍｇ／ｋｇ内、または約１μｇ／ｋｇ~約２０ｍｇ／ｋｇ内、または約１μｇ／ｋｇ~約１０ｍｇ／ｋｇ内、のうちの任意の投与量範囲内にある有効量が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、皮下投与される場合、組成物は、例えば、約０．１μｇ／ｋｇ以下、約０．０５μｇ／ｋｇ以下、または０．０１μｇ／ｋｇ以下を含む低いマイクログラムの範囲で投与され得る。
　特定の実施形態では、対象に投与されるＧＤＦ１５調節物質の量は、例えば、１回あたり約１０μｇ~約５０μｇ、約５０μｇ~約１００μｇ、約１００μｇ~約２００μｇ、約２００μｇ~約３００μｇ、約３００μｇ~約５００μｇ、約５００μｇ~約１ｍｇ、約１ｍｇ~約１０ｍｇ、約１０ｍｇ~約５０ｍｇ、約５０ｍｇ~約１００ｍｇ、約１００ｍｇ~約２００ｍｇ、約２００ｍｇ~約３００ｍｇ、約３００ｍｇ~約４００ｍｇ、または約４００ｍｇ~約５００ｍｇのいずれも含まれる、約１０μｇ~約５００ｍｇ／回である。特定の実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質は、投与可能なＧＤＦ１５調節物質の約０．０２５ｍｇ~約４ｍｇ、約０．０３５ｍｇ~約２ｍｇ、約０．０５ｍｇ~約２ｍｇ、約０．１ｍｇ~約２ｍｇ、約０．２ｍｇ~約１ｍｇ、または約０．２ｍｇ~約０．８ｍｇの用量で投与される。一実施形態では、０．５ｍｇのＧＤＦ１５調節物質が局所投与される。他の特定の実施形態では、約０．０５ｍｇ~約２ｍｇ、約０．２ｍｇ~約２ｍｇ、約０．０５ｍｇ~約１．５ｍｇ、約０．１５ｍｇ~約１．５ｍｇ、約０．４ｍｇ~約１ｍｇ、または約０．５ｍｇ~約０．８ｍｇのＧＤＦ１５調節物質が局所投与される。
　ＧＤＦ１５調節物質組成物は、１日１回投与されてよく、または１日総用量を１日２回、３回、もしくは４回の分割用量にして投与されてもよい。組成物はまた、１日１回より低頻度で、例えば、週６回、週５回、週４回、週３回、週２回、週１回、２週間に１回、３週間に１回、月１回、２か月に１回、３か月に１回、または６か月に１回で投与することができる。組成物はまた、使用組成物をある期間にわたり徐々に放出し、組成物が月１回、２~６か月に１回、年１回、さらには単回投与等の低頻度で投与され得るようにする植込錠等、徐放性製剤で投与され得る。徐放性デバイス（例えば、ペレット、ナノ粒子、微粒子、ナノ粒子、ミクロスフィア等）は、注射で投与されるか、または体の様々な部位に外科移植され得る。
　本発明の特定の実施形態では、ＧＤＦ１５調節物質の投与は、用量が、有害作用を軽減または予防するが、なおもＧＤＦ１５の活性を完全または部分的に阻害するのに十分となるよう調節される。
　特定の実施形態では、点眼剤の場合、０．００１~１０％（ｗ／ｖ）の用量を１日１回~数回投与する。特定の実施形態では、注射の場合、１日当たり０．１ｍｇ／ｋｇ~１００ｍｇ／ｋｇの用量を１回または数回に分けて投与する。また、経口剤であれば通常１日当り０．１ｍｇ／ｋｇ~１００ｍｇ／ｋｇを１回または数回に分けて投与することができる。また、必要により上記範囲外の量を用いることができる。
　いくつかの態様では、ＧＤＦ１５の活性は、アンチセンス核酸または低分子干渉核酸を使用して標的細胞内で調節することができる。調節は、抗ＧＤＦ１５　ｓｉＲＮＡまたはアンチセンス分子をコードする核酸を発現させるための、当該技術分野で公知の発現コンストラクト、例えば、裸ＤＮＡコンストラクト、ＤＮＡベクターを用いたコンストラクト、及び／またはウイルスベクター及び／またはウイルスを用いたコンストラクトを使用して達成することができる。
　例示的ＤＮＡコンストラクト及びそのようなコンストラクトの治療的使用は当業者に周知である（例えば、Ｃｈｉａｒｅｌｌａ　ｅｔ　ａｌ．，２００８，Ｒｅｃｅｎｔ　Ｐａｔｅｎｔｓ　Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｒｕｇ　Ｄｉｓｃ．，３：９３−１０１、Ｇｒａｙ　ｅｔ　ａｌ．，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，８：９１１−９２２、Ｍｅｌｍａｎ　ｅｔ　ａｌ．，２００８，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ．，１７：１１６５−１１７６を参照のこと）。裸ＤＮＡコンストラクトには典型的には、１つ以上の治療用核酸（例えば、ＧＤＦ１５調節物質）及びプロモーター配列が含まれる。裸ＤＮＡコンストラクトは、一般的にｐＤＮＡといわれるＤＮＡベクターであり得る。裸ＤＮＡは典型的には染色体ＤＮＡに組み込まれない。一般に、裸ＤＮＡコンストラクトは、脂質、ポリマー、またはウイルスタンパク質の存在を、必要としないかまたはそれらと併用されない。そのようなコンストラクトにはまた、本明細書に記載される非治療用成分のうち１つ以上も含まれる。
　ＤＮＡベクターは当該技術分野で公知であり、それらは典型的には環状二本鎖ＤＮＡ分子である。ＤＮＡベクターは通常、サイズが３~５キロ塩基対の範囲である（例えば、挿入された治療用核酸を含む）。裸ＤＮＡ同様、ＤＮＡベクターは、１つ以上の治療用タンパク質を標的細胞に送達して発現させるために使用することができる。ＤＮＡベクターは染色体ＤＮＡに組み込まれない。
　一般に、ＤＮＡベクターには、標的細胞内での複製を可能にする少なくとも１つのプロモーター配列が含まれる。ＤＮＡベクターの取り込みは、ＤＮＡベクターを、例えば、カチオン性脂質と合わせること、及びＤＮＡ複合体を形成させることにより促進され得る。典型的には、ウイルスベクターは、ウイルスに由来する二本鎖環状ＤＮＡ分子である。ウイルスベクターは典型的には、サイズが裸ＤＮＡ及びＤＮＡベクターコンストラクトより大きく、外来（すなわち、ウイルスではコードされない）遺伝子の導入能がより大きい。裸ＤＮＡ及びＤＮＡベクター同様、ウイルスベクターは、１つ以上の治療用核酸を標的細胞に送達して発現させるために使用することができる。裸ＤＮＡ及びＤＮＡベクターとは異なり、特定のウイルスベクターは自身を染色体ＤＮＡに安定して組み込ませる。典型的には、ウイルスベクターには、ベクターでコードされた１つ以上の核酸、例えば、治療用核酸の複製を宿主細胞内で可能にする少なくとも１つのプロモーター配列が含まれる。ウイルスベクターには、任意選択で、本明細書に記載される１つ以上の非治療用成分が含まれる。有利なことに、標的細胞内へのウイルスベクターの取り込みには、追加の構成成分、例えば、カチオン性脂質を必要としない。むしろ、ウイルスベクターは、標的細胞との接触時に直接細胞にトランスフェクトされるかまたは感染する。
　本明細書に記載される手法には、特にヒトへの、インビボでの外因性遺伝子導入のための組換え遺伝子送達系としてレトロウイルスベクター、アデノウイルス由来ベクター、及び／またはアデノ関連ウイルスベクターを使用することが含まれる。組換えレトロウイルスを作製し、そのようなウイルスに細胞をインビトロまたはインビボで感染させるためのプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ　ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｇｒｅｅｎｅ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９），Ｓｅｃｔｉｏｎｓ　９．１０−９．１４、及び他の標準的実験マニュアルに見出すことができる。
　ＤＮＡベクターならびにアデノウイルス、レトロウイルス、及びレンチウイルス等のウイルスベクターの形質導入物質として使用されるウイルスが、本発明の実施に際して使用され得る。例示的なレトロウイルスとしては、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ−ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプーマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））ならびにレンチウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、用語「レンチウイルス」とは、複雑なレトロウイルスの群（または属）を指す。例示的なレンチウイルスとしては、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶ１型及びＨＩＶ２型を含む）、ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられるが、これらに限定されない。
　特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従ってアデノウイルスを使用することができる。アデノウイルスのゲノムは、それが目的の遺伝子産物をコードして発現するが、その正常なウイルス溶解ライフサイクルでの複製能に関しては不活性であるよう操作され得る。アデノウイルス株のＡｄ５型ｄｌ３２４株またはアデノウイルスの他の株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７等）に由来する好適なアデノウイルスベクターが当業者に公知である。組換えアデノウイルスは、非分裂細胞には感染することができないという特定の状況では有利となり得、それらを使用して、上皮細胞を含めた多種多様な細胞型を感染させることができる。また、ウイルス粒子は比較的安定であり、精製及び濃縮を行いやすく、上記のように、感染力の範囲に影響を与えるよう改変することができる。更に、導入されたアデノウイルスＤＮＡ（及びその中に含まれる外来ＤＮＡ）は、宿主細胞のゲノムには組み込まれずにエピソームに留まるため、導入ＤＮＡが宿主ゲノム（例えば、レトロウイルスＤＮＡ）に組み込まれるという、インサイチュでの挿入変異の結果として生じ得る潜在的問題が回避される。また、アデノウイルスゲノムの外来ＤＮＡの収容量は、他の遺伝子送達ベクターと比べて大きい（最高８キロベース）。
　アデノ随伴ウイルスは、天然に存在する欠損ウイルスであり、効率的複製及び生産的ライフサイクルのためのヘルパーウイルスとしてアデノウイルスまたはヘルペスウイルス等の別のウイルスを必要とする。このウイルスはまた、自身のＤＮＡを非分裂細胞に組み込ませることができる数少ないウイルスの１つであり、安定な組み込みを高頻度で示す。
　様々な実施形態では、治療用導入遺伝子またはＧＤＦ１５調節物質をコードする導入遺伝子を発現する１つ以上のウイルスベクターは、インビボで対象の細胞、組織、または器官に直接注射して投与される。他の様々な実施形態では、ウイルスに封入したそのようなベクターでインビトロまたはエキソビボで細胞に形質導入し、任意選択で、エキソビボで増殖させる。その後、形質導入された細胞は、対象に投与される。形質導入に好適な細胞としては、幹細胞、前駆細胞、及び分化細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、形質導入された細胞は、胚性幹細胞、骨髄幹細胞、臍帯幹細胞、胎盤幹細胞、間葉系幹細胞、神経幹細胞、肝臓幹細胞、膵臓幹細胞、心臓幹細胞、腎臓幹細胞、または造血幹細胞である。
　特定の実施形態では、聴覚の疾患、障害、または状態を治療及び／または予防するため、１つ以上のポリペプチドを発現する、本発明に係るウイルスベクターで形質導入された宿主細胞が対象に投与される。本発明の特定の実施形態に従って利用され得る、ウイルスベクターの使用に関連する他の方法は、例えば、Ｋａｙ，１９９７，Ｃｈｅｓｔ，１１１（６　Ｓｕｐｐ．）：１３８Ｓ−１４２Ｓ、Ｆｅｒｒｙ　ｅｔ　ａｌ．，１９９８，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ．，９：１９７５−８１、Ｓｈｉｒａｔｏｒｙ　ｅｔ　ａｌ．，１９９９，Ｌｉｖｅｒ，１９：２６５−７４、Ｏｋａ　ｅｔ　ａｌ．，２０００，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．，１１：１７９−８６、Ｔｈｕｌｅ　ｅｔ　ａｌ．，２０００，Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ．，７：１７４４−５２、Ｙａｎｇ，１９９２，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１２：３３５−５６、Ａｌｔ，１９９５，Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，２３：７４６−５８、Ｂｒｏｄｙ　ｅｔ　ａｌ．，１９９４，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７１６：９０−１０１、Ｓｔｒａｙｅｒ，１９９９，Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，８：２１５９−２１７２、Ｓｍｉｔｈ−Ａｒｉｃａ　ｅｔ　ａｌ．，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｒｅｐ．，３：４３−４９、及びＬｅｅ　ｅｔ　ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０８：４８３−８に見出すことができる。
　本発明の特定の実施形態では、目的ポリヌクレオチドの条件付き発現を提供する。例えば、発現は、細胞、組織、生物等を、ポリヌクレオチドの発現が引き起こされるか、もしくは目的ポリヌクレオチドによりコードされるポリヌクレオチドの発現の増減が引き起こされる、治療または条件に供することにより制御される。例示的な誘導性プロモーター／系の例としては、グルココルチコイドまたはエストロゲン受容体をコードする遺伝子のプロモーター等のステロイド誘導性プロモーター（対応するホルモンでの治療により誘導可能）、メタロチオニン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーター（様々な重金属での治療により誘導可能）、ＭＸ−１プロモーター（インターフェロンにより誘導可能）、「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ」ミフェプリストン制御性システム（Ｓｉｒｉｎ　ｅｔ　ａｌ．，２００３，Ｇｅｎｅ，３２３：６７）、クミン酸塩誘導性遺伝子スイッチ（ＷＯ２００２／０８８３４６）、テトラサイクリン依存性制御システム等が挙げられるが、これらに限定されない。
　条件付き発現はまた、部位特異的ＤＮＡリコンビナーゼを使用して達成することもできる。本発明の特定の実施形態によれば、ベクターは、部位特異的リコンビナーゼに媒介される組み換え用に少なくとも１つ（典型的には２つ）の部位（複数可）を含む。本明細書で使用される場合、用語「リコンビナーゼ」または「部位特異的リコンビナーゼ」には、１つ以上の組換え部位（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、１０、１２、１５、２０、３０、５０等）に及ぶ組換え反応に関与する、切除型または組み込み型のタンパク質、酵素、補助因子もしくは関連タンパク質が含まれ、それらは、野生型タンパク質（Ｌａｎｄｙ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３：６９９−７０７を参照のこと）、または変異体、誘導体（例えば、組換えタンパク質配列またはその断片を含む融合タンパク質）、断片、及びその変異型であり得る。本発明の特定の実施形態での使用に好適な例示的リコンビナーゼの例としては、Ｃｒｅ、Ｉｎｔ、ＩＨＦ、Ｘｉｓ、Ｆｌｐ、Ｆｉｓ、Ｈｉｎ、Ｇｉｎ、ＯＣ３１、Ｃｉｎ、Ｔｎ３リゾルバーゼ、ＴｎｄＸ、ＸｅｒＣ、ＸｅｒＤ、ＴｎｐＸ、Ｈｊｃ、Ｇｉｎ、ＳｐＣＣＥＩ、及びＰａｒＡが挙げられるが、これらに限定されない。
　ベクターは、多種多様な部位特異的リコンビナーゼのうちのいずれかに対する１つ以上の組換え部位を含んでよい。部位特異的リコンビナーゼの標的部位は、ベクター（例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクター）の組み込みに必要とされる任意の部位（複数可）に追加される部位であることを理解されるべきである。
　特定の実施形態では、ベクターは、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含む。典型的選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他のトキシン、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、ハイグロマイシン、メトトレキサート、Ｚｅｏｃｉｎ、ブラストサイジン、もしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を補完するタンパク質、または（ｃ）複合培地から利用できない重要な栄養を供給するタンパク質をコードし、例えば、ＢａｃｉｌｌｉのＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子である。形質転換細胞株を回収するために選択系をいくつ使用してもよい。これらとしては、ｔｋ細胞またはａｐｒｔ細胞でそれぞれ使用可能な、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ，１１：２２３−２３２）及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ　ｅｔ　ａｌ．，１９９０，Ｃｅｌｌ，２２：８１７−８２３）の遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。
　本明細書に記載される発現コンストラクトを作製するために必要な分子生物学的手法はいずれも、当業者が理解する標準的手法である。
　特定の実施形態では、ＤＮＡ送達は、例えば、米国特許第５，５４３，１５８号、第５，６４１，５１５号、及び第５，３９９，３６３号（参照によりその全体が各々具体的に本明細書に組み込まれる）に記載されるように、非経口、静脈内、筋肉内、または腹腔内でも行われ得る。遊離の塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロース等の界面活性剤と好適に混合されている水に調製され得る。分散液もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びその混合物、ならびに油に調製され得る。通常の保存及び使用条件下、これらの調製物は、微生物の増殖を予防するために保存剤を含む。
　特定の実施形態では、ＤＮＡ送達は、好適な宿主細胞への本発明に係る組成物の導入のための、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフィア、脂質粒子、小胞等の使用により、任意選択で細胞透過ポリペプチドと混合して行われ得る。特に、本発明に係る組成物は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノ粒子、ナノ粒子または同様のものに封入して送達用に製剤化され得る。そのような送達ビヒクルの製剤及び使用は、公知の従来技術を使用して行うことができる。
　ＤＮＡエキソビボ送達用の例示的製剤には、リン酸カルシウム等の当該技術分野で公知の様々なトランスフェクション剤、電気穿孔、熱ショック及び様々なリポソーム製剤（すなわち、脂質媒介性トランスフェクション）の使用も含まれ得る。本発明の特定の実施形態は、他の製剤、例えば、製薬分野で周知のもの、及び、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　＆　Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００に記載のもの等を含み得る。
　特定の実施形態では、ＧＤＦ１５活性は、体液と、ＧＤＦ１５調節物質を含む組成物とを、ＧＤＦ１５調節物質がＧＤＦ１５活性を低下または阻害できる条件下、エキソビボで接触させることにより阻害される。好適な体液としては、血液、血漿、またはリンパ液等、個体に戻すことができるものが挙げられる。親和性吸着アフェレーシスは、Ｎｉｌｓｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ．，１９８８，Ｂｌｏｏｄ，５８（１）：３８−４４、Ｃｈｒｉｓｔｉｅ　ｅｔ　ａｌ．，１９９３，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，３３：２３４−２４２、Ｒｉｃｈｔｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，１９９７，ＡＳＡＩＯ　Ｊ．，４３（１）：５３−５９、Ｓｕｚｕｋｉ　ｅｔ　ａｌ．，１９９４，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９：１０５−１１２、米国特許第５，７３３，２５４号、Ｒｉｃｈｔｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，１９９３，Ｍｅｔａｂｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．，４２：８８８−８９４、及びＷａｌｌｕｋａｔ　ｅｔ　ａｌ．，１９９６，Ｉｎｔ’ｌ　Ｊ．Ｃａｒｄ．，５４：１９１０１９５に概説されている。
　したがって、本発明には、対象における本明細書に記載の１つ以上の疾患を治療する方法であって、ＧＤＦ１５調節物質が対象の血液中でＧＤＦ１５活性を低下または阻害できる条件下、かかる調節物質を含む組成物で対象の血液を体外式に（すなわち、体の外側またはエキソビボで）処理することを含む方法が含まれる。
　本発明に係る眼組織線維化抑制剤は、併用治療等の目的で、公知の他の有効成分（例えば、抗がん剤等）とともに用いてもよい。また、本発明に係る眼組織線維化抑制剤は、ミクロスフィア、ナノスフィア、ナノ粒子、リポソーム、ミセル等の公知の徐放性デバイスまたはＤＤＳデバイスと組み合わせて用いてもよい。
　更に、本発明に係る眼組織線維化抑制剤は、経口または腸管経由の栄養補助剤（飲食品）としても有用である。飲食品の形態や種類は、従来公知の各種形態・種類を採用することができる。また、本発明に係る眼組織線維化抑制剤を、食品添加物として用いることもできる。栄養補助剤として摂取する場合、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ~１００ｍｇ／ｋｇを１回または数回に分けて摂取する。また、必要により上記範囲外の量を用いることができる。
　記載全体を通じて、組成物が特定の構成成分を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載されている場合、または過程及び方法が特定のステップを有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載されている場合は、追加として、記述の構成成分から本質的になるか、もしくはそれからなる本発明に係る組成物があること、ならびに記述の処理ステップから本質的になるか、もしくはそれからなる本発明による過程及び方法があることが意図される。
　出願において、ある要素もしくは構成成分が、記述の要素もしくは構成成分の一覧に含まれること、及び／またはそれから選択されることが述べられている場合、かかる要素もしくは構成成分は、記述の要素もしくは構成成分のうちのいずれでもあり得ること、またかかる要素もしくは構成成分は、記述の要素もしくは構成成分のうちの２つ以上からなる群から選択される得ることを理解されるべきである。
　更に、本明細書に記載される組成物もしくは方法の要素及び／または特徴は、本明細書で明示されているか暗示されているかを問わず、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な様態で組み合わせることができることを理解されるべきである。例えば、特定の化合物に言及されている場合、その化合物は、文脈から他の意味に理解されない限り、本発明に係る組成物の様々な実施形態及び／または本発明に係る方法において使用することができる。言い換えれば、本出願内では、出願が簡潔明瞭に書かれ、かつ描かれるよう、実施形態が説明され、また示されているが、実施形態は、本教示及び本発明（複数可）から逸脱することなく様々に組み合わせても、また切り離してもよいことが意図され、またそのように理解される。例えば、本明細書で記載され、示されているすべての特徴は、本明細書で記載され、示されている本発明（複数可）の全態様に適用可能であることが認識される。
　「のうちの少なくとも１つ」という表現には、文脈及び使用から他の意味に理解されない限り、かかる表現の後に記述される対象物、及び記述される対象物のうちの２つ以上を様々に組み合わせたものの各々が個々に含まれることを理解されるべきである。３つ以上記述されている対象物との関連で「及び／または」という表現は、文脈から他の意味に理解されない限り、同じ意味を持つと理解されるべきである。
　「含む（“ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、または「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語の使用は、その文法上の同等表現を含めて一般に、具体的に記述されるかまたは文脈から他の意味に理解されない限り、オープン・エンドで非限定的である、例えば、記述されていない追加の要素またはステップを除外しないとして理解されるべきである。
　用語「約」の使用が定量値の前にある場合、本発明には、特に具体的に断らない限り、特定の定量値それ自体も含まれる。本明細書で使用される場合、用語「約」とは、別段に示されるかまたは推定されない限り、その名目値からの±１０％の変動を指す。
　ステップの順序または特定の行為を実施するための順序は、本発明が実施可能である限りは重要ではないことを理解されるべきである。また、２つ以上のステップまたは行為が同時に行われ得る。
　本明細書でのすべての例、または例示的な言い回し、例えば、「等」または「挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、本発明をより良く説明することのみを意図しており、特許請求されない限り本発明の範囲に制限を設けるものではない。明細書内のいかなる言い回しも、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に不可欠な要素として示していると解釈されるべきではない。
　以下、実施例に基づいて本発明を更に詳細に説明する。
　なお、以下に説明する実施例は、本発明の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
実施例１
　本実験例１では、レーザー誘発脈絡膜血管新生モデル（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ　ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ＣＮＶ、以下、「ＣＮＶ」ともいう）におけるＧＤＦ１５の局在及び発現変動について検討した。
　ケタミン及びキシラジンの７：１混合麻酔液を生理食塩水で１０倍希釈したもの（１ｍＬ／ｋｇ）をマウス大腿筋肉内へ投与した。その後、眼球が乾燥しないようにヒアレイン（登録商標）点眼液０．１％を点眼した。カバーガラスを右眼に宛てがいながら眼底を覗き、レーザー光凝固装置（ＭＣ５００）を用いて、視神経乳頭の周囲円周上に等間隔に６箇所レーザー照射（波長：６４７ｎｍ、スポットサイズ：５０μｍ、照射時間：１００ｍｓｅｃ、レーザー出力：１２０ｍＷ）を行った。
　レーザー照射３、１４、２８日後にサンプリングを行い、免疫染色法にてＧＤＦ１５及びｃｏｌｌａｇｅｎ−Ｉ（線維化マーカー）の発現変化を検討した。さらに、レーザー照射１、３、５、７、１４日後に網膜色素上皮及び脈絡膜複合体をサンプリングし、ウエスタンブロット法にてＧＤＦ１５の発現変化を検討した。
　図１Ａは、ＧＤＦ１５の局在及び発現変動を示す。レーザー照射３、１４、２８日後の血管新生部位において、ＧＤＦ１５の発現量の増加が認められた。また、レーザー照射１４日後のｃｏｌｌａｇｅｎ−Ｉ集積部位の近傍において、ＧＤＦ１５の発現が認められた。
　図１Ｂ、Ｃ及びＤは、活性化ＧＤＦ１５の発現変動を示す。網膜色素上皮−脈絡膜において、活性化ＧＤＦ１５の発現量が増加した。
　したがって、ＧＤＦ１５が脈絡膜血管新生に附随する線維性瘢痕形成に関与することが示唆された。
実施例２
　本実験例２では、ＣＮＶ病変部で高発現するＧＤＦ１５の産生源について検討した。
　ケタミン及びキシラジンの７：１混合麻酔液を生理食塩水で１０倍希釈したもの（１ｍＬ／ｋｇ）をマウス大腿筋肉内へ投与した。その後、眼球が乾燥しないようにヒアレイン（登録商標）点眼液０．１％を点眼した。カバーガラスを右眼に宛てがいながら眼底を覗き、レーザー光凝固装置（ＭＣ５００）を用いて、視神経乳頭の周囲円周上に等間隔に６箇所レーザー照射（波長：６４７ｎｍ、スポットサイズ：５０μｍ、照射時間：１００ｍｓｅｃ、レーザー出力：１２０ｍＷ）を行なった。
　レーザー照射３日後にサンプリングを行い、免疫染色法にてＧＤＦ１５及びＩｂａ−１（マクロファージマーカー）の発現変化を検討した。
　マクロファージ細胞であるＲＡＷ２６４．７を１２ウェルプレート中に１．５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、１日培養した。１％ＦＢＳ条件下で培地交換を行い、１時間培養した。その後に炎症誘発剤であるＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）を添加した。添加２４時間後にサンプリングを行い、ウエスタンブロット法にて、ＧＤＦ１５のタンパク発現変化を検討した。
　図２Ａ~Ｂは、ＧＤＦ１５及びマクロファージマーカーの局在を示す。ＣＮＶ病変部においてＧＤＦ１５がＩｂａ−１（マクロファージマーカー）と共局在した。
　図２Ｃ、Ｄ及びＥは、活性化マクロファージ細胞でのＧＤＦ１５の発現を示す。ＬＰＳ処置により、マクロファージ細胞における活性化ＧＤＦ１５の産生が増加した。
　したがって、線維化病態下で発現上昇するＧＤＦ１５の産生源がマクロファージであることが示唆された。
実施例３
　本実験例３では、ＧＤＦ１５処置による網膜色素上皮細胞の細胞形態に対する影響について検討した。
　ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９を２４ウェルプレート中に２．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、９０％コンフルエントになるまで４日培養した。９０％コンフルエントに達した時点で、１％ＦＢＳ条件下で培地交換を行い、２４時間培養した。再度、培地交換を行った後にｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＧＤＦ１５、及び線維化促進因子として知られるｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＴＧＦβ１を添加した。薬剤添加は２日毎に行い、添加１４４時間後に形態変化の観察を行った。
　図３Ａ~Ｂは、ＧＤＦ１５処置による網膜色素上皮細胞の細胞形態に対する影響を示す。ＧＤＦ１５の添加により、細胞形態が紡錘形になるＥＭＴ様の形態変化が誘発された。
　したがって、ＧＤＦ１５が網膜色素上皮細胞の線維化様の形質転換を促すことが示唆された。
実施例４
　本実験例４では、ＧＤＦ１５処置による網膜色素上皮細胞の細胞外マトリックス産生能に対する影響について検討した。
　ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９を２４及び９６ウェルプレート中にそれぞれ２．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ、５．０×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、９０％コンフルエントになるまで４日培養した。９０％コンフルエントに達した時点で、１％ＦＢＳ条件下で培地交換を行い、２４時間培養した。再度、培地交換を行った後にｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＧＤＦ１５（ＡＶＩＳＣＥＲＡ　ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ）、及び線維化促進因子として知られるｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＴＧＦβ１（Ｒ＆Ｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。薬剤添加は２日毎に行い、添加１４４時間後にサンプリングを行い、ウエスタンブロット法及び免疫染色法により、ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ（線維化マーカー）のタンパク発現変化を検討した。
　図４Ａ~Ｆは、ＧＤＦ１５添加によるｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎのタンパク発現変動を示す。ＧＤＦ１５添加により線維化マーカーであるｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎの発現が増加した。
　したがって、ＧＤＦ１５が網膜色素上皮細胞に対して、線維化促進的に働くことが示唆された。
実施例５
　本実験例５では、ＧＤＦ１５を標的とした中和抗体の作用について検討した。
　ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９を９６ウェルプレート中に５．０×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、９０％コンフルエントになるまで４日培養した。９０％コンフルエントに達した時点で、１％ＦＢＳ条件下で培地交換を行い、２４時間培養した。再度、培地交換を行った後にＨｕｍａｎ　ＧＤＦ−１５　Ａｎｔｉｂｏｄｙ（品番：ＡＦ９５７、Ｒ＆Ｄ製、Ｓｏｕｒｃｅ：Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ　Ｇｏａｔ　ＩｇＧ）を添加し、その３０分後にｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＧＤＦ１５（ＡＶＩＳＣＥＲＡ　ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ）を添加した。薬剤添加は２日毎に行い、添加１４４時間後にサンプリングを行い、免疫染色法により、ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ（線維化マーカー）のタンパク発現変化を検討した。
　図５Ａ~Ｂは、抗ＧＤＦ１５抗体による網膜色素上皮細胞線維化への影響を示す。抗ＧＤＦ１５抗体の添加により、ＧＤＦ１５誘発ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ発現増大が濃度依存的に抑制された。
　したがって、抗ＧＤＦ１５抗体の添加が、網膜色素上皮細胞における線維化の抑制に有用であることが示唆された。
実施例６
　本実験例６では、ＧＤＦ１５誘発の線維化促進メカニズムについて検討した。
　ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９を４８ウェルプレート中に１．２５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、９０％コンフルエントになるまで４日培養した。９０％コンフルエントに達した時点で、０％ＦＢＳ条件下で培地交換を行い、２４時間培養した。その後、ｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＧＤＦ１５（ＡＶＩＳＣＥＲＡ　ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ）を添加した。添加１５、３０、６０分後にサンプリングを行い、ウエスタンブロット法により、ＧＤＦ１５下流シグナル関連因子のタンパク発現変動を検討した。
　図６Ａ~Ｃは、ＧＤＦ１５添加による下流シグナルの発現変動を示す。ＧＤＦ１５に親和性の高い受容体であるＧＦＲＡＬ受容体の、下流シグナルであるＲｅａｒｒａｎｇｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ（ＲＥＴ）、ＡＫＴ及びＧＳＫ３βのリン酸化が亢進した。
　ＧＤＦ１５がＧＦＲＡＬに結合すると、ＲＥＴ受容体が寄って来て、３つで複合体を形成し、その結果、下流のシグナルが動く。このシステムはＧＤＦ１５特有のものである。したがって、ＧＤＦ１５は網膜色素上皮細胞のＧＦＲＡＬ受容体に結合し、ＲＥＴのリン酸化を誘導し、下流シグナルを動かすことが示唆された。よって、これらのメカニズムを介して、ＧＤＦ１５は網膜色素上皮細胞の線維化に寄与する可能性があることが分かった。
　なお、ＧＦＲＡＬ受容体は、前述の通りＧＤＦ１５に親和性の高い受容体であることから、上記シグナルはＴＧＦβでは動かない、ＧＤＦ１５に特有のものである。
実施例７
　本実験例７では、ＧＤＦ１５を標的とした中和抗体の作用を検討する。
　ヒト網膜色素上皮細胞株であるＡＲＰＥ−１９を９６ウェルプレート中に５．０×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、９０％コンフルエントになるまで４日培養する。９０％コンフルエントに達した時点で、１％ＦＢＳ条件下で培地交換を行い、２４時間培養する。再度、培地交換を行った後に、抗ＧＤＦ１５抗体Ｈｕ０１Ｇ０６−１２７（配列番号３０及び配列番号４７を含む）またはＨｕ０１Ｇ０６−１３５（配列番号２９または配列番号４８を含む）を添加し、その３０分後にｈｕｍａｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＧＤＦ１５（ＡＶＩＳＣＥＲＡ　ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ）を添加する。薬剤添加は２日毎に行い、添加１４４時間後にサンプリングを行い、免疫染色法により、ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ（線維化マーカー）のタンパク発現変化を検討する。
　抗ＧＤＦ１５抗体の添加により、ＧＤＦ１５誘発ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ発現増大が濃度依存的に抑制されることが予期される。
　したがって、Ｈｕ０１Ｇ０６−１２７及びＨｕ０１Ｇ０６−１３５などのＧＤＦ１５抗体が、網膜色素上皮細胞における線維化の抑制及び黄斑変性などの眼線維化障害の治療に有用であることが予期される。
実施例８
　０日目に、ケタミン及びキシラジンの７：１混合麻酔液を生理食塩水で１０倍希釈したもの（１ｍＬ／ｋｇ）をマウス大腿筋肉内へ投与する。その後、眼球が乾燥しないようにヒアレイン（登録商標）点眼液０．１％を点眼する。カバーガラスを右眼に宛てがいながら眼底を覗き、レーザー光凝固装置（ＭＣ５００）を用いて、視神経乳頭の周囲円周上に等間隔に６箇所レーザー照射（波長：６４７ｎｍ、スポットサイズ：５０μｍ、照射時間：１００ｍｓｅｃ、レーザー出力：１２０ｍＷ）を行う。
　処置群のマウスに、抗ＧＤＦ１５抗体Ｈｕ０１Ｇ０６−１２７（配列番号３０及び配列番号４７を含む）またはＨｕ０１Ｇ０６−１３５（配列番号２９または配列番号４８を含む）を硝子体内注射を介して０、７、１４及び２１日目に２０ｍｇ／ｋｇの濃度で投与する。対照群のマウスに、ＰＢＳを硝子体内注射を介して０、７、１４、及び２１日目に投与する。レーザー照射３、１４、２８日後にサンプリングを行い、免疫染色法にてＧＤＦ１５及びｃｏｌｌａｇｅｎ−Ｉ（線維化マーカー）の発現変化を検討する。さらに、レーザー照射１、３、５、７、１４日後に網膜色素上皮及び脈絡膜複合体をサンプリングし、ウエスタンブロット法にてＧＤＦ１５の発現変化を検討する。
　抗ＧＤＦ１５抗体で処置されたマウスは、対照マウスと比較して、網膜色素上皮−脈絡膜におけるＧＤＦ１５の減少ならびに線維化及び瘢痕形成の生成の減少を有することが予期され、抗ＧＤＦ１５抗体が、線維化眼障害における線維化を減少させるための有効な治療であることを示している。
　本発明によれば、新たな眼組織線維化抑制方法が提供される。
　本発明は、眼組織線維化の根本治療に有用であることが示唆され、線維性瘢痕形成が予見される患者の視力低下の抑制に寄与し、該患者の社会復帰や医療費の削減にも繋がると考えられる。
参照による組み込み
　本明細書で言及される特許文献及び科学記事の各々の開示全体は、すべての目的のために参照により組み込まれる。
均等物
　本発明は、その趣旨または本質的特徴から逸脱することなく他の具体的な形態で具現化され得る。そのため、前述の実施形態は、本明細書に記載の発明に対する限定ではなく例示的なあらゆる点で考慮されるべきである。よって、本発明の範囲は、前述の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の意味及び同等の範囲内に入るすべての変更は、特許請求の範囲に包含されることが意図されている。

Claims (32)

  1. 　眼組織線維化の軽減を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、有効量のＧＤＦ１５調節物質を前記対象に投与し、それにより前記対象における眼組織線維化を軽減する、前記方法。
  2. 　前記対象は、黄斑変性、難治性網膜硝子体疾患、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜出血、網膜剥離、老眼、脈絡膜血管新生、中心窩下または中心窩近傍血管新生、角膜乱視、及び水晶体乱視から選択される障害に罹患している、請求項１に記載の方法。
  3. 　眼線維化障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、有効量のＧＤＦ１５調節物質を前記対象に投与し、それにより前記対象における前記障害を治療する、前記方法。
  4. 　前記障害は、黄斑変性、難治性網膜硝子体疾患、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜出血、網膜剥離、老眼、脈絡膜血管新生、中心窩下または中心窩近傍血管新生、角膜乱視、及び水晶体乱視から選択される、請求項３に記載の方法。
  5. 　前記黄斑変性は、滲出型加齢黄斑変性である、請求項２または４に記載の方法。
  6. 　前記難治性網膜硝子体疾患は、増殖性硝子体網膜症または糖尿病網膜症である、請求項２または４に記載の方法。
  7. 　前記ＧＤＦ１５調節物質は、ＧＤＦ１５活性を低下させ、または阻害する、請求項１~６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 　前記ＧＤＦ１５調節物質は、抗ＧＤＦ１５抗体である、請求項１~７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項８に記載の方法。
  10. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、
    （ｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８の配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｉｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号４のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｉｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号５のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号６のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号８のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖｉｉｉ）配列番号４７または４９の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号３０の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｉｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４８、または４９の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２８の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘｉ）配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２７の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘｉｉ）配列番号３８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２６の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘｉｉｉ）配列番号３７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２５の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘｉｖ）配列番号４８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２９の軽鎖配列、またはその可変領域を含む抗体、及び
    （ｘｖ）配列番号４７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号３０の軽鎖配列、またはその可変領域を含む抗体
    から選択される、請求項８または９に記載の方法。
  11. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体である、請求項８~１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号８のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体である、請求項８~１０のいずれか１項に記載の方法。
  13. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号４８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体である、請求項８~１０のいずれか１項に記載の方法。
  14. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号４７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号３０の軽鎖配列、またはその可変領域を含む抗体である、請求項８~１０のいずれか１項に記載の方法。
  15. 　眼組織線維化の軽減を、それを必要とする対象において行う際に使用するためのＧＤＦ１５調節物質。
  16. 　眼線維化障害の治療を、それを必要とする対象において行う際に使用するためのＧＤＦ１５調節物質。
  17. 　眼組織線維化の軽減を、それを必要とする対象において行うための薬剤の製造において使用するためのＧＤＦ１５調節物質。
  18. 　眼線維化障害の治療を、それを必要とする対象において行うための薬剤の製造において使用するためのＧＤＦ１５調節物質。
  19. 　前記障害は、黄斑変性、難治性網膜硝子体疾患、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜出血、網膜剥離、老眼、脈絡膜血管新生、中心窩下または中心窩近傍血管新生、角膜乱視、及び水晶体乱視から選択される、請求項１６または１８に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  20. 　前記黄斑変性は、滲出型加齢黄斑変性である、請求項１９に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  21. 　前記難治性網膜硝子体疾患は、増殖性硝子体網膜症または糖尿病網膜症である、請求項１９に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  22. 　前記ＧＤＦ１５調節物質は、ＧＤＦ１５活性を低下させ、または阻害する、請求項１５~２１のいずれか１項に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  23. 　前記ＧＤＦ１５調節物質は、抗ＧＤＦ１５抗体である、請求項１５~２１のいずれか１項に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  24. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項２３に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  25. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、
    （ｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８の配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｉｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号４のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｉｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号５のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号６のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号８のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖｉｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号９のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体、
    （ｖｉｉｉ）配列番号４７または４９の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号３０の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｉｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４８、または４９の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘ）配列番号４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２８の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘｉ）配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５の重鎖配列またはその可変領域、及び配列番号２７の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘｉｉ）配列番号３８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２６の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、
    （ｘｉｉｉ）配列番号３７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２５の軽鎖配列をまたはその可変領域含む抗体、
    （ｘｉｖ）配列番号４８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体、及び
    （ｘｖ）配列番号４７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号３０の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体
    から選択される、請求項２３または２４に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  26. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２２のＣＤＲＬ３配列を含む抗体である、請求項２３~２５のいずれか１項に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  27. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号１のＣＤＲＨ１配列、配列番号８のＣＤＨ２配列、及び配列番号１３のＣＤＲＨ３配列；ならびに配列番号１６のＣＤＲＬ１配列、配列番号１８のＣＤＲＬ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲＬ３配列を含む抗体である、請求項２３~２５のいずれか１項に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  28. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号４８の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号２９の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体である、請求項２３~２５のいずれか１項に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  29. 　前記抗ＧＤＦ１５抗体は、配列番号４７の重鎖配列またはその可変領域及び配列番号３０の軽鎖配列またはその可変領域を含む抗体である、請求項２３~２５のいずれか１項に記載のＧＤＦ１５調節物質。
  30. 　ＧＤＦ１５（Ｇｒｏｗｔｈ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ　１５）の作用を阻害する物質を有効成分とする、眼組織線維化抑制剤。
  31. 　前記ＧＤＦ１５の作用を阻害する物質は、抗ＧＤＦ１５抗体、またはＧＤＦ１５特異的受容体のアンタゴニストである、請求項３０に記載の眼組織線維化抑制剤。
  32. 　前記眼組織は、網膜色素上皮細胞である、請求項２９または３０に記載の眼組織線維化抑制剤。
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