WO2022075444A1

WO2022075444A1 - フェロトーシス抑制剤

Info

Publication number: WO2022075444A1
Application number: PCT/JP2021/037317
Authority: WO
Inventors: 英換三島; 清隆仲川; 隼哉伊藤; 健一山田
Original assignee: 国立大学法人東北大学
Priority date: 2020-10-09
Filing date: 2021-10-08
Publication date: 2022-04-14
Also published as: JPWO2022075444A1; EP4226919A1

Abstract

本発明は、摂取したときの安全性が比較的高く、経口摂取が可能で、かつ、製造コストが比較的安価な、抗フェロトーシス活性や脂質ペルオキシラジカルの捕捉能を有する低分子化合物を提供することを課題とする。　以下の式（Ｉ）～式（III）で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含むものを、フェロトーシス抑制剤；フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療剤；脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤；あるいは、過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療剤；とする。（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）

Description

フェロトーシス抑制剤

　本発明は、フェロトーシス（フェロプトーシス［Ferroptosis］ともいう）抑制剤；フェロトーシスに関連する疾患の予防剤又は治療剤；脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤（スカベンジャー）；過酸化脂質蓄積の抑制剤；あるいは、過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防剤若しくは治療剤；に関する。

　フェロトーシスは、遊離鉄（Ｆｅ^２＋）依存的な非アポトーシス性の制御された細胞死であり、細胞における過酸化脂質の蓄積を特徴とする（非特許文献１）。フェロトーシスは、急性組織障害や神経変性疾患等の様々な疾患に関与することが報告されている（非特許文献２）。

　脂質が酸化したり、過酸化脂質を還元する酵素であるグルタチオンペルオキシダーゼ４（ＧＰＸ４）活性が低下すると、細胞内に過酸化脂質が生成・蓄積される。そして、細胞内に生成・蓄積された過酸化脂質から、Ｆｅ^２＋を触媒とするフェントン反応により脂質ペルオキシラジカルが生成され、脂質ペルオキシラジカルによる脂質の過酸化が促進される。

　抗酸化物質であるトロロックス（Trolox）及びコエンザイムＱ１０や、過酸化脂質の生成に関与するリポキシゲナーゼの阻害剤であるバイカレイン（Baicalein）は、フェロトーシスを抑制する作用を有することが知られている。また、最近、特定のスピロキノキサリン誘導体がフェロトーシスの抑制効果を有することが報告されている（特許文献１）。さらに、本発明者らは、脂質ペルオキシラジカルを特異的に捕捉し、過酸化脂質蓄積や脂質ペルオキシラジカル生成を抑制し、過酸化脂質や脂質ペルオキシラジカルに起因するフェロトーシスを抑制する作用を有する低分子化合物を見いだしている（特願２０１９－２２７４０５）。

特開２０１９－１９６３９０号公報

Cell. 2012 May 25;149(5):1060-72. Cell. 2017 Oct 5;171(2):273-285.

　本発明の課題は、摂取したときの安全性が比較的高く、経口摂取が可能で、かつ、製造コストが比較的安価な、抗フェロトーシス活性や脂質ペルオキシラジカルの捕捉能を有する低分子化合物を提供することにある。

　本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を続けている。その過程において、シトクロムＰ４５０の基質や当該酵素を誘導する化合物には、抗フェロトーシス抑制能があるという知見に基づき、抗フェロトーシス活性を有する化合物のスクリーニングを行った。その結果、後述する本件ビタミンＫ群化合物には、優れた抗フェロトーシス活性があることをインビトロ及びインビボでの解析により見いだした。さらに、本件ビタミンＫ群化合物には、過酸化脂質蓄積の抑制効果や脂質ペルオキシラジカルの捕捉能を有することを確認した。本発明は、これらの知見に基づき、完成するに至ったものである。

　すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
　以下の式（II）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、及び
　以下の式（III）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物（以下、「本件ビタミンＫ群化合物」ということがある）を含む、フェロトーシス抑制剤。
〔２〕以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療剤。
〔３〕以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤。
〔４〕以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、過酸化脂質蓄積の抑制剤。
〔５〕以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療剤。
〔６〕疾患が肝障害である、上記〔２〕又は〔５〕に記載の剤。
〔７〕経口摂取される、上記〔１〕～〔６〕のいずれかに記載の剤。
〔８〕式（Ｉ）の化合物が下記（１ａ）～（１ｃ）のいずれかである、上記〔１〕～〔７〕のいずれかに記載の剤。

（式（Ｉａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。）

（式（Ｉｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。）

（式（Ｉｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。）
〔９〕式（II）の化合物が下記（IIａ）～（IIｃ）のいずれかである、上記〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の剤。

（式（IIａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。）

（式（IIｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。）

（式（IIｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。）
〔１０〕式（III）の化合物が下記（IIIａ）～（IIIｃ）のいずれかである、上記〔１〕～〔９〕のいずれかに記載の剤。

（式（IIIａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。）

（式（IIIｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。）

（式（IIIｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。）
〔１１〕化合物が、下記のいずれかである、上記〔１〕～〔１０〕のいずれかに記載の剤。

　また本発明の実施の他の形態として、
本件ビタミンＫ群化合物を、フェロトーシスの抑制を必要とする対象に摂取するステップを含む、フェロトーシスを抑制する方法；や、
フェロトーシス抑制剤として使用するための本件ビタミンＫ群化合物；や、
フェロトーシス抑制における使用のための本件ビタミンＫ群化合物；や、
フェロトーシス抑制剤を製造するための、本件ビタミンＫ群化合物の使用；
を挙げることができる。

　また本発明の実施の他の形態として、
本件ビタミンＫ群化合物を、フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療を必要とする対象に摂取（投与）するステップを含む、フェロトーシスに関連する疾患を予防又は治療する方法；や、
フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療剤として使用するための本件ビタミンＫ群化合物；や、
フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療における使用のための本件ビタミンＫ群化合物；や、
フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療剤を製造するための、本件ビタミンＫ群化合物の使用；
を挙げることができる。

　また本発明の実施の他の形態として、
本件ビタミンＫ群化合物を、脂質ペルオキシラジカルの捕捉を必要とする対象に摂取するステップを含む、脂質ペルオキシラジカルを捕捉する方法；や、
脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤として使用するための本件ビタミンＫ群化合物；や、
脂質ペルオキシラジカルの捕捉における使用のための本件ビタミンＫ群化合物；や、
脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤を製造するための、本件ビタミンＫ群化合物の使用；
を挙げることができる。

　また本発明の実施の他の形態として、
本件ビタミンＫ群化合物を、過酸化脂質蓄積の抑制を必要とする対象に摂取するステップを含む、過酸化脂質蓄積を抑制する方法；や、
過酸化脂質蓄積の抑制剤として使用するための本件ビタミンＫ群化合物；や、
過酸化脂質蓄積の抑制における使用のための本件ビタミンＫ群化合物；や、
過酸化脂質蓄積の抑制剤を製造するための、本件ビタミンＫ群化合物の使用；
を挙げることができる。

　また本発明の実施の他の形態として、
本件ビタミンＫ群化合物を、過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療を必要とする対象に摂取（投与）するステップを含む、過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患を予防若しくは治療する方法；や、
過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療剤として使用するための本件ビタミンＫ群化合物；や、
過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療における使用のための本件ビタミンＫ群化合物；や、
過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療剤を製造するための、本件ビタミンＫ群化合物の使用；
を挙げることができる。

　本件ビタミンＫ群化合物は、抗フェロトーシス活性、過酸化脂質蓄積の抑制作用、及び／又は脂質ペルオキシラジカルの捕捉能を有し、フェロトーシスに関連する疾患や過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患（例えば、肝障害）に対する予防・治療効果を発揮する。また、本件ビタミンＫ群化合物は、生体内に存在するビタミンＫに関連する低分子化合物であることから、摂取したときの安全性が比較的高く、経口摂取が可能で、かつ、製造コストが比較的安価な上に、脳血管関門（ＢＢＢ）を通過することが期待され、神経系の上記疾患に対しても予防・治療効果が期待される。

Ｈ９Ｃ２細胞株を、５種類の被験物質（ビタミンＫ１［図中の「ＶＫ１」］、ビタミンＫ２［メナキノン－４］［図中の「ＶＫ２」］、メナジオン［ビタミンＫ３］［図中の「Ｍｅｎａｄ」］、ビタミンＫ３ハイドロキノン［図中の「ＶＫ３ＨＱ」］、又はフェロスタチン１［Ferrostatin-1］［図中の「Ｆｅｒ－１」］）と、４種類のフェロトーシス誘導剤（ＢＳＯ［図中の「Ｂ」］、エラスチン［図中の「Ｅ」］、ＲＳＬ３［図中の「Ｒ」］、又はＦＩＮ５６［図中の「Ｆ」］）の存在下で培養し、生細胞レベル（平均値±標準誤差）を解析した結果（ｎ＝３）を示す図（図１Ａ）と、細胞の位相差顕微鏡画像（図１Ｂ）である。図中の「－」は、かかる被験物質及びフェロトーシス誘導剤の非存在下で培養したときの細胞生存レベルを示し、図中の「ＤＭＳＯ」は、被験物質の溶媒である０．１％ＤＭＳＯと、上記フェロトーシス誘導剤との存在下で培養したときの細胞生存レベルを示す。図１Ａ中の「＊」は、ＡＮＯＶＡ（Dunnett's test）検定により、統計学的に有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示す。Ｈ９Ｃ２細胞株を、４種類の被験物質（ビタミンＫ１［図中の「ＶＫ１」］、ビタミンＫ２［メナキノン－４］［図中の「ＶＫ２」］、メナジオン［ビタミンＫ３］［図中の「Ｍｅｎａｄ」］、又はフェロスタチン１［図中の「Ｆｅｒ－１」］）と、７種類のフェロトーシス誘導剤（ＲＳＬ３、エラスチン、ＭＬ２１０、ＭＬ１６２、ＦＩＮ５６、ＢＳＯ、又はＦＩＮＯ２）の存在下で培養し、生細胞レベル（平均値±標準誤差）を解析した結果（ｎ＝３）を示す図である。図中の「ＤＭＳＯ」は、被験物質の溶媒である０．１％ＤＭＳＯと、上記４種類のフェロトーシス誘導剤との存在下で培養したときの細胞生存レベルを示す。図中の「＊」は、ＡＮＯＶＡ（Dunnett's test）検定により、統計学的に有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示す。図３Ａは、Ｐａｎｃ－１細胞株を、３種類の被験物質（ビタミンＫ１［図中の「ＶＫ１」］、ビタミンＫ２［メナキノン－４］［図中の「ＶＫ２」］、又はメナジオン［ビタミンＫ３］［図中の「Ｍｅｎａｄ」］）と、フェロトーシス誘導剤（エラスチン）の存在下で培養し、生細胞レベル（平均値±標準誤差）を解析した結果（ｎ＝３）を示す図である。図３Ｂは、ＮＲＫ４９Ｆ細胞株を、上記３種類の被験物質と、フェロトーシス誘導剤（ＢＳＯ）の存在下で培養し、生細胞レベル（平均値±標準誤差）を解析した結果（ｎ＝３）を示す図である。図３Ｃは、Ｃ２Ｃ１２細胞株を、上記３種類の被験物質と、フェロトーシス誘導剤（ＢＳＯ）の存在下で培養し、生細胞レベル（平均値±標準誤差）を解析した結果（ｎ＝３）を示す図である。図中の「－」は、かかる被験物質及びフェロトーシス誘導剤の非存在下で培養したときの細胞生存レベルを示し、図中の「Ｄ」は、被験物質の溶媒である０．１％ＤＭＳＯと、フェロトーシス誘導剤（エラスチン又はＢＳＯ）との存在下で培養したときの細胞生存レベルを示す。図中の「＊」は、ＡＮＯＶＡ（Dunnett's test）検定により、統計学的に有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示す。ＨＴ２２細胞株を、３種類の被験物質（ビタミンＫ１［図中の「ＶＫ１」］、ビタミンＫ２［メナキノン－４］［図中の「ＶＫ２」］、又はメナジオン［ビタミンＫ３］［図中の「Ｍｅｎａｄ」］）と、フェロトーシス誘導剤（グルタミン酸）の存在下で培養し、生細胞レベル（平均値±標準誤差）を解析した結果（ｎ＝３）を示す図（図４Ａ）と、細胞の位相差顕微鏡画像（図４Ｂ）である。図中の「－」は、かかる被験物質及びフェロトーシス誘導剤の非存在下で培養したときの細胞生存レベルを示し、図中の「Ｄ」は、被験物質の溶媒である０．１％ＤＭＳＯと、フェロトーシス誘導剤（グルタミン酸）との存在下で培養したときの細胞生存レベルを示す。図４Ｂの画像中のスケールバーは１００μｍを示す。図中の「＊」は、ＡＮＯＶＡ（Dunnett's test）検定により、統計学的に有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示す。図５Ａは、３種類の群（野生型群［図中の「ＷＴ」］、ＡＨＩ／溶媒投与群［図中の「ＡＨＩ　－」］、及びＡＨＩ／ＶＫ２投与群［図中の「ＡＨＩ　ＶＫ２」］）のマウスから調製した肝組織切片について、ヘマトキシリン・エオジン染色法（図中の「ＨＥ」）、抗ＨＥＬ抗体を用いた免疫組織染色法（図中の「ＨＥＬ」）、及びＴＵＮＥＬ法（図中の「ＴＵＮＥＬ」）を行った結果を示す図である。下段のＨＥ画像は、上段のＨＥ画像を高倍率にしたものである。図５Ｂは、上記３種類の群のマウスについて、血漿中のＧＰＴ（グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）値を測定した結果を示す図である。図５Ｃは、図５ＡのＴＵＮＥＬ法により検出された染色レベルを測定した結果を示す図である。図５Ｂ及び５Ｃ中の「＊」は、ＡＮＯＶＡ（Dunnett's test）検定により、統計学的に有意差がある（ｐ＜０．０５）ことを示す。４種類の被験物質（ビタミンＫ１［図中の「ＶＫ１」］、ビタミンＫ２［メナキノン－４］［図中の「ＶＫ２」］、メナジオン［ビタミンＫ３］［図中の「Ｍｅｎａｄ」］、及びビタミンＫ３ハイドロキノン［図中の「ＶＫ３ＨＱ」］）について、ＮＢＤ－Ｐｅｎ蛍光プローブを用いたアラキドン酸（ＡＡ）／リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）システムを用いて脂質ペルオキシラジカルに対する捕捉能を解析した結果を示す図である。図中の「ＤＭＳＯ」は、被験物質の溶媒である０．１％ＤＭＳＯを用いて同様に解析した結果を示す。

　本発明のフェロトーシス抑制剤は、「フェロトーシスを抑制するため」という用途に特定された本件ビタミンＫ群化合物を含有する剤（以下、「本件フェロトーシス抑制剤」ということがある）である。

　本発明のフェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療剤は、「フェロトーシスに関連する疾患を予防又は治療するため」という用途に特定された本件ビタミンＫ群化合物を含有する剤（以下、「本件予防／治療剤１」ということがある）である。

　本発明の脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤は、「生体内の各種臓器又は組織や、生体内の各種臓器又は組織由来の培養細胞株などにおいて生じる脂質ペルオキシラジカルを捕捉するため」という用途に特定された本件ビタミンＫ群化合物を含有する剤（以下、「本件捕捉剤」ということがある）であり、ここで、「脂質ペルオキシラジカルを捕捉する」とは、脂質ペルオキシラジカルが生成される反応、より具体的には、過酸化脂質（脂質ペルオキシド［ＬＯＯＨ］ともいう）からＦｅ^２＋を触媒とするフェントン反応により、脂質ペルオキシラジカルが生成される反応を、抑制することを意味する。したがって、「脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤」は、換言すると、「脂質ペルオキシラジカル生成の抑制剤」である。

　本発明の過酸化脂質蓄積の抑制剤は、「生体内の各種臓器又は組織や、生体内の各種臓器又は組織由来の培養細胞株などにおいて生じる過酸化脂質の蓄積を抑制するため」という用途に特定された本件ビタミンＫ群化合物を含有する剤（以下、「本件過酸化脂質蓄積抑制剤」ということがある）である。

　本発明の過酸化脂質及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療剤は、「過酸化脂質及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患を予防若しくは治療するため」という用途に特定された本件ビタミンＫ群化合物を含有する剤（以下、「本件予防／治療剤２」ということがある）である。

　本件フェロトーシス抑制剤、本件捕捉剤、及び本件過酸化脂質蓄積抑制剤は、本件ビタミンＫ群化合物を、単独で非ヒト哺乳動物用飼料や、飲食品又は医薬品（製剤）として使用してもよいし、さらに添加剤を混合し、組成物の形態（すなわち、非ヒト哺乳動物用飼料組成物や、飲食品組成物又は医薬組成物）として使用してもよい。上記飲食品としては、例えば、健康食品（機能性食品、栄養補助食品、健康補助食品、栄養強化食品、栄養調整食品、サプリメント等）、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等）を挙げることができる。

　本件予防／治療剤１及び本件予防／治療剤２は、本件ビタミンＫ群化合物を、単独で非ヒト哺乳動物用医薬品や、ヒト用医薬品（製剤）として使用してもよいし、さらに添加剤を混合し、組成物の形態（すなわち、非ヒト哺乳動物用医薬組成物や、ヒト用医薬組成物）として使用してもよい。なお、本件フェロトーシス抑制剤、本件予防／治療剤１、本件捕捉剤、本件過酸化脂質蓄積抑制剤、及び本件予防／治療剤２を総称して、以下、「本件剤」ということがある。

　本明細書において、「脂質ペルオキシラジカル」とは、過酸化脂質のラジカル（すなわち、不対電子を有する原子又は分子；「フリーラジカル」ともいう）を意味し、反応性に富む活性酸素の１種であり、「ＬＯＯ・」とも表記される。脂質ペルオキシラジカルは、ＬＯＯＨからＦｅ^２＋を触媒とするフェントン反応により生成される他、脂質ラジカル（Ｌ・）と酸素分子との反応でも生成される。また、過酸化脂質は、例えば、脂質（ＬＨ）から、脂質ペルオキシラジカル等のフリーラジカルによる過酸化反応により生成・蓄積されたり、ＧＰＸ４活性及び／又はSystem Xc－機能が低下することにより生成・蓄積される。

　本明細書において、「フェロトーシス」とは、生体内の各種臓器又は組織や、生体内の各種臓器又は組織由来の培養細胞株において、過酸化脂質の蓄積、脂質ペルオキシラジカル、スーパーオキシドアニオンラジカル（Ｏ_２ ^－・）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）等が要因になって生じる細胞死（より具体的には、能動的又は制御された細胞死）を意味し、フェロトーシス以外の細胞死（例えば、アポトーシス、ネクローシス、オートファジー細胞死）とは異なる。かかる各種臓器又は組織としては、例えば、大腸（結腸又は直腸）、胃、肝臓、心臓、脳、脊髄、肺、食道、十二指腸、小腸、皮膚、前立腺、膀胱、子宮、腎臓、膵臓、脾臓、気管、気管支、胆嚢、胆管等を挙げることができる。

　上記「フェロトーシスに関連する疾患」としては、上記各種臓器又は組織におけるフェロトーシスに関連する疾患（すなわち、フェロトーシスに起因する疾患及び／又はフェロトーシスを伴う疾患）であればよい。また、上記「過酸化脂質及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患」としては、各種臓器若しくは組織における過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルの生成に起因する疾患（より具体的には、フェロトーシスを特徴とする疾患）であればよい。これら疾患としては、例えば、上記各種臓器又は組織における機能障害、例えば、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、緑内障、白内障などの眼における障害（すなわち、眼疾患）（文献「Cells. 2021 Aug 21;10(8):2153. doi: 10.3390/cells10082153.」、文献「Int J Mol Sci. 2020 Oct 1;21(19):7279. doi: 10.3390/ijms21197279.」、文献「Exp Eye Res. 2020 Feb;191:107922. doi: 10.1016/j.exer.2020.107922. Epub 2020 Jan 7.」、文献「Free Radic Biol Med. 2021 May 1;167:94-108. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2021.02.010. Epub 2021 Mar 17.」）；慢性閉塞性肺疾患、肺線維症などの肺における障害（すなわち、肺疾患）；脂肪肝、肝炎などの肝臓における障害（すなわち、肝疾患）；皮膚における障害（すなわち、皮膚疾患）；急性腎障害などの腎臓における障害（すなわち、腎疾患）；潰瘍性大腸炎などの大腸における障害（すなわち、大腸疾患）；狭心症、心筋梗塞、動脈硬化症などの心臓における障害（すなわち、心疾患）；外傷性脳損傷、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、虚血性脳疾患、脳梗塞などの神経における障害（すなわち、神経疾患）；ミトコンドリア病；肉芽腫等の癌；を挙げることができ、後述する本実施例でその効果が実証されているため、肝障害を好適に例示することができる。上記ミトコンドリア病の障害組織、障害、又は臓器としては、単独の組織、器官、又は臓器であってもよいし、複数の組織、器官、又は臓器であってもよい。かかる組織、器官、又は臓器としては、例えば、中枢神経、骨格筋、心臓、眼、肝臓、腎臓、膵臓、血液、内耳、大腸、小腸、皮膚などを挙げることができる。また、フェロトーシスに関連する疾患や、過酸化脂質及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患は、急性疾患でも慢性疾患でもよいが、後述する本実施例でその効果が実証されているため、急性疾患（特に、急性肝障害）を好適に例示することができる。また、上記「フェロトーシスに関連する疾患」や、上記「過酸化脂質及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患」としては、後述する本実施例において、本件ビタミンＫ群化合物が、グルタミン酸によるＨＴ２２細胞株の細胞死（すなわち、神経細胞におけるフェロトーシス）を抑制することが示されていることから、神経疾患が好ましい。

　本発明において、本件ビタミンＫ群化合物とは、以下の式（Ｉ）、式（II）及び式（III）の化合物やその生理的に許容される塩を意味する。

　以下の式（Ｉ）の化合物；

　式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。

　式（Ｉ）の化合物は、ビタミンＫ化合物及びその誘導体を包含する。ビタミンＫ化合物の例としては、ビタミンＫ１（フィロキノン、ファイトメナジオン（フィトメナジオン）とも呼ばれる）、ビタミンＫ２（メナキノンとも呼ばれる）、及びビタミンＫ３（メナジオンとも呼ばれる）を挙げることができる。

　以下の式（II）の化合物；

　式（II）の化合物は、ビタミンＫハイドロキノン化合物及びその誘導体を包含する。ビタミンＫハイドロキノン化合物の例としては、ビタミンＫ１ハイドロキノン、ビタミンＫ２ハイドロキノン、ビタミンＫ３ハイドロキノン（ビタミンＫ４又はメナジオールともいう）を挙げることができる。ビタミンＫ１ハイドロキノン、ビタミンＫ２ハイドロキノン、及びビタミンＫ３ハイドロキノンは、それぞれビタミンＫ１、ビタミンＫ２、及びビタミンＫ３の還元型である。

　以下の式（III）の化合物；

　式（III）の化合物は、ビタミンＫエポキシド化合物及びその誘導体を包含する。ビタミンＫエポキシド化合物の例としては、ビタミンＫ１エポキシド（フィロキノンエポキシド）、ビタミンＫ３エポキシド（メナジオンエポキシド）を挙げることができる。

　本願で用いられる「置換された若しくは置換されていない」という用語において、「置換された」は、１若しくは２以上の置換基を有することを、「置換されていない」は、置換基を全く有さないことを意味する。置換基の例としては、ハロゲン原子（フッ素原子（フルオロ基）、塩素原子（クロロ基）、臭素原子（ブロモ基）、及びヨウ素原子（ヨード基））、素数１～４のアルキル基、素数１～４のアルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、モノ（Ｃ_１－６）アルキルアミノ基、ジ（Ｃ_１－６）アルキルアミノ基、アセチル基、カルボキシル基、ニトロ基、シアノ基、メトキシ基、エトキシ基、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、フェニル基等を挙げることができる。２以上の置換基を有する場合、各置換基は独立的に選択され、同一であっても異なっていてもよい。なお。「（Ｃ_１－６）」は炭素数１～６を意味する。

　本願で用いられる「直鎖」という用語は、水素原子以外の原子が枝分かれせずに直線状に連なっている構造を意味する。

　本願で用いられる「分枝鎖」という用語は、１若しくは２以上の任意の炭素原子に２以上の別の炭素原子が結合している構造を意味する。

　本発明におけるアルキル基の炭素数は１～２０である。本発明の一態様において、アルキル基の炭素数は１～２０である。本発明の一態様において、アルキル基の炭素数は１～１５である。本発明の一態様において、アルキル基の炭素数は１～１０である。本発明の一態様において、アルキル基の炭素数は１～５である。

　「アルキル基」の例として、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－デシル基、ｎ－ペンタデシル基、ｎ－エイコサニル基（ｎ－ジデシル基）等を挙げることができる。ｎ－エイコサニル基は、炭素数２０の直鎖アルキル基である。

　本願で用いられる「ハロゲン」という用語は、フッ素原子（Ｆ）、塩素原子（Ｃｌ）、臭素原子（Ｂｒ）及びヨウ素原子（Ｉ）を意味する。

　本発明におけるアルケニル基の炭素数は２～２０である。本発明の一態様において、アルケニルの炭素数は２～２０である。本発明の一態様において、アルケニルの炭素数は２～１５である。本発明の一態様において、アルケニルの炭素数は２～１０である。本発明の一態様において、アルケニル基の炭素数は２～５である。

　上記「アルケニル基」としては、例えば、エテニル基（ビニル基）、１－プロペニル基、２－プロペニル基（アリル基）、１－ブテニル基、２－ブテニル基、３－ブテニル基、イソブテニル基、１－ペンテニル基、２－ペンテニル基、３－ペンテニル基、４－ペンテニル基、１－ヘキセニル基、２－ヘキセニル基、３－ヘキセニル基、１－デセニル基、２－デセニル基、１－ペンタデセニル基、２－ペンタデセニル基、１－エイコセニル基、２－エイコセニル基等を挙げることができる。エイコセニル基は炭素数２０のアルケニル基、である。

　式（Ｉ）、式（II）及び式（III）の化合物において、Ｒが「－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）」を表す場合、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０，１１、１２のいずれも本発明に包含される。ｎは、側鎖を構成するイソプレン単位の数を表している。

　式（Ｉ）の化合物の一態様として下記（１ａ）～（１ｃ）の化合物を例示することができる。

　式（Ｉａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。ｍ＝３の場合が、ビタミンＫ１（ＶＫ１）である。

　式（Ｉｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。式（Ｉｂ）は、ビタミンＫ２を表している。ｎ＝１の場合が、メナキノン－１（ＭＫ－１）であり、ｎ＝４の場合が、メナキノン－４（ＭＫ－４）であり、ｎ＝７の場合が、メナキノン－７（ＭＫ－７）である。

　式（Ｉｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。Ｒ^１がＨの場合が、メナジオン（menadione）である。本願明細書及び図面においてはメナジオンを「Ｍｅｎａｄ」と略記することがある。メナジオンは、ビタミンＫ３（ＶＫ３）ともいう。

　式（II）の化合物の一態様として下記（IIａ）～（IIｃ）の化合物を例示することができる。

　式（IIａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。ｍ＝３の場合が、ビタミンＫ１（ＶＫ１）のハイドロキノン体である。

　式（IIｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。ｎ＝１の場合が、ビタミンＫ２（ＶＫ２）の一種であるＭＫ－１のハイドロキノン体である。

　式（IIｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。Ｒ^１がＨの場合が、ビタミンＫ３（ＶＫ３）のハイドロキノン体である。

　式（III）の化合物の一態様として下記（IIIａ）～（IIIｃ）の化合物を例示することができる。

　式（IIIａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。ｍ＝３の場合が、ビタミンＫ１（ＶＫ１）のエポキシドである。

　式（IIIｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。ｎ＝１の場合が、ビタミンＫ２（ＶＫ２）のエポキシドである。

　式（IIIｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。Ｒ^１がＨの場合が、ビタミンＫ３（ＶＫ３）のエポキシドである。

　本発明の式（Ｉ）、式（II）、及び式（III）で示される化合物は、市販品を購入するか、あるいは公知の反応を適宜組み合わせることによって合成することができる。原料は市販購入品や市販購入品に一般的な保護基等を付与して合成することができる。また、いずれの工程も有機化学で汎用される保護・脱保護による合成、精製等を適応することができる。

　本明細書において、「生理的に許容される塩」とは、妥当な医学的、薬学的、又は生物学的判断の範囲内で、哺乳動物の組織と接触して用いるのに、過度の毒性、刺激性、アレルギー応答、及びその他の問題や合併症を伴うことなく、適度な受益性／危険性比率に相応して適している塩を意味する。生理的に許容される塩としては、例えば、アンモニウム塩；ナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；アルミニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン等の有機塩基との塩；アルギニン、リシン、オルニチン等のアミノ酸との塩；塩基性窒素含有基により生じる塩；などを挙げることができる。

　本件ビタミンＫ群化合物には、種々の異性体（例えば、光学異性体、位置異性体、互変異性体等）、水和物等の溶媒和物、結晶多形、及びエステル体等のプロドラッグも包含される。
　また、式（Ｉ）、式（II）及び式（III）で表される本発明の化合物を構成する１個若しくは２個以上の原子が同位体である化合物、及びその生理的に許容される塩も本発明に含まれる。本発明の化合物に含まれる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、臭素、及び塩素の同位体、例えば、^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^８２Ｂｒ、及び^３７Ｃｌなどを挙げることができる。

　上記式（Ｉ）、式（II）及び式（III）の化合物として、具体的には、以下の表１に示す化合物を例示することができる。

　本件ビタミンＫ群化合物は、抗フェロトーシス活性；脂質ペルオキシラジカルを捕捉する能力（すなわち、脂質ペルオキシラジカルに対する捕捉能）；及び、過酸化脂質蓄積の抑制作用；から選択される１又は２以上（好ましくは、３）を有する。

　本件剤の摂取（投与）対象としては、特に制限されず、本件剤が本件フェロトーシス抑制剤の場合、通常、フェロトーシス抑制を必要とする哺乳動物（例えば、臓器移植時に生じる、ドナー臓器におけるフェロトーシスを抑制することが必要な臓器移植哺乳動物；フェロトーシスに関連する疾患の発症リスクの高い哺乳動物；前記疾患に罹患した哺乳動物）であり、本件剤が本件捕捉剤の場合、通常、脂質ペルオキシラジカルの捕捉を必要とする哺乳動物（例えば、臓器移植時に生じる、ドナー臓器における脂質ペルオキシラジカルを捕捉することが必要な臓器移植哺乳動物；脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の発症リスクの高い哺乳動物；前記疾患に罹患した哺乳動物）であり、本件剤が本件過酸化脂質蓄積抑制剤の場合、通常、過酸化脂質蓄積の抑制を必要とする哺乳動物（例えば、臓器移植時に生じる、ドナー臓器における過酸化脂質蓄積を抑制することが必要な臓器移植哺乳動物；過酸化脂質に起因する疾患の発症リスクの高い哺乳動物や、前記疾患に罹患した哺乳動物）であり、本件剤が本件予防／治療剤１である場合、通常、フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療を必要とする哺乳動物（例えば、フェロトーシスに関連する疾患の発症リスクの高い哺乳動物；前記疾患に罹患した哺乳動物）であり、本件剤が本件予防／治療剤２である場合、通常、過酸化脂質及び／若しくは脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防又は治療を必要とする哺乳動物（例えば、過酸化脂質及び／若しくは脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の発症リスクの高い哺乳動物；前記疾患に罹患した哺乳動物）である。すなわち、本件フェロトーシス抑制剤、本件捕捉剤、及び本件過酸化脂質蓄積抑制剤は、臓器移植時におけるドナー臓器を保護するために有用である。

　本明細書において、哺乳動物としては、ヒトや、非ヒト哺乳動物（例えば、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、家畜［例えば、ウサギ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、シカ］）等を挙げることができる。

　本件剤を、対象へ摂取（投与）する方法としては、例えば、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液など形態で経口的に摂取する方法（経口摂取）；溶液、乳剤、懸濁液などの形態（剤型）で注射（例えば、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、局所投与）する方法（非経口投与）；スプレー剤の形態で鼻孔内投与する方法（非経口投与）；点眼薬（目薬）の形態で眼に投与する方法（点眼投与）；等を挙げることができる。本件予防／治療剤１及び本件予防／治療剤２を眼疾患の予防又は治療に用いる場合、本件予防／治療剤１の形態としては、点眼薬や眼への局所注射薬が好ましい。本件剤の摂取方法としては、簡便性や、後述する本実施例でその効果が実証されていることを考慮すると、経口摂取を好適に例示することができる。

　本件ビタミンＫ群化合物の摂取量は、摂取対象（哺乳動物）の年齢、体重、性別、症状、薬剤への感受性、生物種等に応じて適宜決定され、例えば、本件ビタミンＫ群化合物に換算したときの濃度が０．１μｇ～２００ｍｇ／ｋｇ（体重）／日の投与量の範囲である。後述する本実施例において、モデルマウスを用いた実験により、４０（ｍｇ／ｋｇ［体重］／日）のビタミンＫ２の投与量が具体的に示されている。かかる投与量は、マウスにおけるヒト等価用量（ＨＥＤ）１２．３（資料「Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers」参照）を基に、ヒトへの投与量に換算した場合、３．２５（ｍｇ／ｋｇ［体重］／日）である。このため、本件ビタミンＫ群化合物の摂取量としては、１．０（μｇ／ｋｇ［体重］／日）～１００（ｍｇ／［体重］／日）が好ましく、１０（μｇ／ｋｇ［体重］／日）～６０（ｍｇ／ｋｇ［体重］／日）がより好ましく、３０（μｇ／ｋｇ［体重］／日）～３０（ｍｇ／ｋｇ［体重］／日）がさらに好ましく、６０（μｇ／ｋｇ［体重］／日）～１０（ｍｇ／ｋｇ［体重］／日）がさらにより好ましく、１００（μｇ／ｋｇ［体重］／日）～５．０（ｍｇ／ｋｇ［体重］／日）が最も好ましい。なお、本件ビタミンＫ群化合物は、一日あたり単回又は複数回（例えば、２～４回）に分けて摂取してもよい。

　本明細書において、添加剤としては、生理的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分を例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。

　本件剤としては、有効成分である本件ビタミンＫ群化合物以外の抗フェロトーシス成分、過酸化脂質蓄積の抑制成分、及び／又は脂質ペルオキシラジカルのスカベンジャー成分を含むものであってもよいが、本件ビタミンＫ群化合物単独でも優れた抗フェロトーシス効果、過酸化脂質蓄積の抑制効果、脂質ペルオキシラジカルのスカベンジャー効果を発揮するため、本件ビタミンＫ群化合物以外の抗フェロトーシス成分、過酸化脂質蓄積の抑制成分、及び／又は脂質ペルオキシラジカルのスカベンジャー成分（例えば、タンパク質、アミノ酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリマー等の化合物；植物由来の抽出物）を含まないものが好ましい。

　以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。

１．材料と方法
［細胞株］
　３種類の細胞株（ラット心筋芽細胞株であるＨ９Ｃ２細胞株、ラット腎臓線維芽細胞であるＮＲＫ４９Ｆ細胞株、及びマウス筋芽細胞株であるＣ２Ｃ１２細胞株）は、ＡＴＣＣ（American Type Culture. Collection）より入手し、ヒト膵がん細胞株であるＰａｎｃ－１細胞株は、東北大学加齢医学研究所医用細胞資源センター・細胞バンクから入手し、マウス海馬神経細胞株であるＨＴ２２細胞株は、Merck Millipore社から購入した。すべての細胞株は、１００倍希釈した１％ペニシリン－ストレプトマイシン（２６２５３－８４、ナカライテスク社製）を含むＤＭＥＭ（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）培養液（以下、単に「ＤＭＥＭ培養液」という）に、１０％ＦＢＳ（fetal bovine serum）及び４．５ｇグルコース／Ｌを含むもの（以下、「ＤＭＥＭ［高グルコース］培養液」という）中で５％ＣＯ_２／２０％Ｏ_２、３７℃条件下で継代した。

［各種フェロトーシス誘導処理］
　以下の手順〔１〕～〔３〕に従って実験を行った。
〔１〕４０００個の５種類の細胞株（Ｈ９Ｃ２細胞株、Ｐａｎｃ－１細胞株、ＮＲＫ４９Ｆ細胞株、Ｃ２Ｃ１２細胞株、又はＨＴ２２細胞株）を、９６ウェルプレートに播種し、１．０ｇグルコース／Ｌ（低グルコース）及び１％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液［以下、「ＤＭＥＭ［低グルコース低血清］培養液」という］）中で１晩培養した。
〔２〕上記〔１〕の手順の後、上記５種類の細胞株において、５種類の本件ビタミンＫ群化合物（ビタミンＫ１、ビタミンＫ２［メナキノン－４］、ビタミンＫ３、及びビタミンＫ３ハイドロキノン）（表１参照）又は公知のフェロトーシス抑制剤（フェロスタチン１）の存在下でフェロトーシスを誘導した。具体的には、Ｈ９Ｃ２細胞株を、各種濃度の６種類の被験物質（１０μＭのビタミンＫ１［富士フイルム和光純薬社製］、１０μＭのメナキノン－４［Sigma-Aldrich社製］、３μＭ又は１μＭのメナジオン［Sigma-Aldrich社製］、１μＭのビタミンＫ３ハイドロキノン［Toronto Research Chemicals社製］、又は０．３μＭのフェロスタチン１［Cayman社製］）と、８種類のフェロトーシス誘導剤（１００μＭのＢＳＯ［Sigma-Aldrich社製］、１．５μＭ又は２μＭのエラスチン［Cayman社製］、５０ｎＭのＲＳＬ３［Selleck Chemicals社製］、０．３μＭのＭＬ２１０［Cayman社製］、０．３μＭのＭＬ１６２［Cayman社製］、０．５μＭのＦＩＮ５６［Cayman社製］、５μＭのＦＩＮＯ２［Cayman社製］、又は４ｍＭのグルタミン酸［Sigma-Aldrich社製］）との存在下で、ＢＳＯ処理の場合は６０時間培養し、エラスチン処理、ＲＳＬ３処理、及びＦＩＮ５６処理の場合は４８時間培養し、ＭＬ２１０処理の場合は２４時間培養し、ＭＬ１６２処理の場合は２４時間培養し、ＦＩＮＯ２処理の場合は２４時間培養し、グルタミン酸処理の場合は２４時間培養した。
〔３〕生細胞レベルを、Cell Count Reagent SFを用いたＷＳＴ－８アッセイにより測定した。生細胞レベルは、被験物質及びフェロトーシス誘導剤の非存在下で培養したときの細胞生存レベルを１としたときの相対値として算出した。

［急性肝障害（ＡＨＩ；Acute Hepatic Injury）モデルマウスを用いたインビボでの解析］
　ＡＨＩモデルマウスは、リポ多糖（ＬＰＳ）及びＤ－ガラクトサミン（Ｄ－ＧａｌＮ）投与により作製した。具体的には、８～９週齢の野生型オスマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ；CLEA社製）を、３種類の群（野生型群［ｎ＝４］、ＡＨＩ／溶媒投与群［ｎ＝７］、及びＡＨＩ／ＶＫ２投与群［ｎ＝８］）に分け、ＬＰＳ及びＤ－ＧａｌＮ投与の１２時間及び２時間前のそれぞれに、ＡＨＩ／溶媒投与群には、０．５％メチルセルロース溶液（溶媒）を２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で経口投与し、ＡＨＩ／ＶＫ２投与群には、ビタミンＫ２（メナキノン－４）を含むメチルセルロース溶液を、２０ｍｇ（ビタミンＫ２）／ｋｇ（体重）の用量で経口投与した。ＬＰＳ及びＤ－ＧａｌＮ投与は、ＬＰＳ及びＤ－ＧａｌＮを含むＰＢＳを、２種類のＡＨＩ群（すなわち、ＡＨＩ溶媒／投与群及びＡＨＩ／ＶＫ２投与群）に、５μｇ（ＬＰＳ）／ｋｇ（体重）及び５００ｍｇ（Ｄ－ＧａｌＮ）／ｋｇ（体重）の用量で腹腔内注射することにより行った（文献「Sci Rep 7: 1884, 2017」参照）。注射後、６時間目にマウスを屠殺し、血液及び肝組織を採取した。採取した血液を基に、血漿中のＧＰＴ値を、富士ドライケムスライドGPT/ALT-P III（富士フイルムメディカル社製）を用いて測定した。また、採取した肝組織を、１０％中性緩衝ホルマリンで固定し、パラフィン包埋を行った。パラフィン包埋した肝組織をスライスし、肝組織切片を作製後、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色法を行った。また、肝組織切片を、０．０１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）中で１２０℃、５分間加熱することにより、脱パラフィン処理を行い、脱パラフィン処理した肝組織切片を調製した。脱パラフィン処理した肝組織切片について、抗ＨＥＬ抗体（５０倍希釈；clone 5F12、JaICA社製）を用いた免疫組織染色法は、ストレプトアビジン・ビオチン－アルカリホスファターゼキット（Histofine SAB-AP [M] kit、ニチレイ社製）と、Vector Red Substrate kit（Vector Laboratories社製）とを用いて定法に従って行った。また、ＴＵＮＥＬ法による死細胞の検出は、Apop Tag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit（Merck Millipore社製）により行った。

［脂質ペルオキシラジカルに対する捕捉能］
　脂質ペルオキシラジカル（ＬＯＯ・）に対する捕捉能は、文献「Nat Chem Biol 12: 608-613, 2016」に記載の方法に従って、ＮＢＤ－Ｐｅｎ蛍光プローブを用いたＡＡ／ＬＯＸシステムにより解析した。具体的には、０．１％ＤＭＳＯ又は１００μＭの４種類の被験物質（ビタミンＫ１［富士フイルム和光純薬社製］、ビタミンＫ２［メナキノン－４］［Sigma-Aldrich社製］、メナジオン［Sigma-Aldrich社製］、又はビタミンＫ３ハイドロキノン［Toronto Research Chemicals社製］）と、５００μＭのアラキドン酸（Sigma-Aldrich社製）を含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）及び１ｍＭのＤＴＴ（Dithiothreitol）との混合液を調製し、９６ウェルプレートに添加した後、５μＭのＮＢＤ－Ｐｅｎ蛍光プローブ及び１０μｇ／ｍＬのＬＯＸ溶液（Sigma-Aldrich社製）を添加し、蛍光レベル（励起光；４７０ｎｍ、蛍光波長；５３０ｎｍ）を、３７℃条件下でマイクロプレートリーダー（Spectra Max M2e；Molecular Devices社製）を用いて測定した。

２．結果
［各種フェロトーシス誘導処理］
　ＢＳＯ（L-Buthionine sulphoximine）は、グルタチオン合成の律速酵素であるγ-グルタミルシステイン合成酵素を阻害することにより、フェロトーシスを誘導することが報告されている（文献「Cell, 156: 317-331, 2014」及び「Biochem Biophys Res Commun, 499: 44-51, 2018」参照）。また、エラスチン及びＲＳＬ３は、それぞれSystem Xc－及びＧＰＸ４を阻害することにより、過酸化脂質が生成され、フェロトーシスが誘導される（文献「Cell Death Differ, 23: 369-379, 2016」参照）。また、低分子化合物ＦＩＮ５６は、過酸化脂質の蓄積を抑制するＧＰＸ４を分解することにより、フェロトーシスを誘導することが報告されている（文献「Nature chemical Biology, 12: 497-503, 2016」参照）。また、ＭＬ２１０は、プロドラッグ型の分子であり、生細胞に取り込まれた後活性化され、ＧＰＸ４を阻害することにより、フェロトーシスを誘導することが報告されている（文献「Nature, 569: 270-274, 2019」参照）。また、ＭＬ１６２は、ＲＳＬ３よりも選択的でかつ強力なＧＰＸ４の阻害物質であり、フェロトーシスを誘導することが報告されている（文献「Bioorg Med Chem Lett, 22: 1822-1826, 2012」参照）。また、ＦＩＮＯ２は、細胞内鉄を酸化し、ＧＰＸ４を阻害することにより、フェロトーシスを誘導することが報告されている（文献「Nat Chem Biol, 14: 507-515, 2018」参照）。また、細胞外の高濃度グルタミン酸が、System Xc－を阻害し、フェロトーシスを誘導することが報告されている（文献「Cell, 149: 1060-1072, 2012」参照）。そこで、これら８種類のフェロトーシス誘導剤（ＢＳＯ、エラスチン、ＲＳＬ３、ＦＩＮ５６、ＭＬ２１０、ＭＬ１６２、ＦＩＮＯ２、及びグルタミン酸）を用いて、本件ビタミンＫ群化合物が抗フェロトーシス活性を有することを確認した。

　Ｈ９Ｃ２細胞株を、４種類のフェロトーシス誘導剤（１００μＭのＢＳＯ、２μＭのエラスチン、５０ｎＭのＲＳＬ３、又は０．５μＭのＦＩＮ５６）の存在下で培養すると、フェロトーシス誘導剤非存在下で培養した場合と比べ、生細胞レベルが大幅に低下したのに対して（図１の「ＤＭＳＯ」及び「－」参照）、Ｈ９Ｃ２細胞株を、上記４種類のフェロトーシス誘導剤とともに、４種類の本件ビタミンＫ群化合物（１０μＭのビタミンＫ１、１０μＭのビタミンＫ２［メナキノン－４］、１μＭのメナジオン［ビタミンＫ３］、又は１μＭのビタミンＫ３ハイドロキノン）や公知のフェロトーシス抑制剤（０．３μＭのフェロスタチン１）の存在下で培養すると、かかる生細胞レベル低下が有意に抑制された（図１の「ＶＫ１」、「ＶＫ２」、「Ｍｅｎａｄ」、「ＶＫ３ＨＱ」、及び「Ｆｅｒ－１」参照）。

　また、Ｈ９Ｃ２細胞株を、７種類のフェロトーシス誘導剤（５０ｎＭのＲＳＬ３、２μＭのエラスチン、０．３μＭのＭＬ２１０、０．３μＭのＭＬ１６２、０．５μＭのＦＩＮ５６、１００μＭのＢＳＯ、又は５μＭのＦＩＮＯ２）と、３種類の本件ビタミンＫ群化合物（１０μＭのビタミンＫ１、１０μＭのビタミンＫ２［メナキノン－４］、又は３μＭのメナジオン［ビタミンＫ３］）や公知のフェロトーシス抑制剤（０．３μＭのフェロスタチン１）との存在下で培養すると、上記７種類のフェロトーシス誘導剤の存在下で培養した場合と比べ、生細胞レベルが有意に増加することが示された（図２参照）。

　また、Ｐａｎｃ－１細胞株を、フェロトーシス誘導剤（５μＭのエラスチン）の存在下で培養すると、かかるフェロトーシス誘導剤非存在下で培養した場合と比べ、生細胞レベルが大幅に低下したのに対して（図３Ａの「Ｄ」及び「－」参照）、Ｐａｎｃ－１細胞株を、フェロトーシス誘導剤（５μＭのエラスチン）とともに、３種類の本件ビタミンＫ群化合物（１０μＭのビタミンＫ１、１０μＭのビタミンＫ２［メナキノン－４］、又は３μＭのメナジオン［ビタミンＫ３］）の存在下で培養すると、かかる生細胞レベル低下が有意に抑制された（図３Ａ参照）。

　また、ＮＲＫ４９Ｆ細胞株やＣ２Ｃ１２細胞株を、フェロトーシス誘導剤（５００μＭのＢＳＯ）の存在下で培養すると、かかるフェロトーシス誘導剤非存在下で培養した場合と比べ、生細胞レベルが大幅に低下したのに対して（図３Ｂ及び３Ｃの「Ｄ」及び「－」参照）、ＮＲＫ４９Ｆ細胞株やＣ２Ｃ１２細胞株を、フェロトーシス誘導剤（５００μＭのＢＳＯ）とともに、３種類の本件ビタミンＫ群化合物（１０μＭのビタミンＫ１、１０μＭのビタミンＫ２［メナキノン－４］、又は３μＭのメナジオン［ビタミンＫ３］）の存在下で培養すると、かかる生細胞レベル低下が有意に抑制された（図３Ｂ及び３Ｃ参照）。

　また、ＨＴ２２細胞株を、フェロトーシス誘導剤（４ｍＭのグルタミン酸）の存在下で培養すると、かかるフェロトーシス誘導剤非存在下で培養した場合と比べ、生細胞レベルが大幅に低下したのに対して（図４の「Ｄ」及び「－」参照）、ＨＴ２２細胞株を、フェロトーシス誘導剤（４ｍＭのグルタミン酸）とともに、３種類の本件ビタミンＫ群化合物（１０μＭのビタミンＫ１、１０μＭのビタミンＫ２［メナキノン－４］、又は３μＭのメナジオン［ビタミンＫ３］）の存在下で培養すると、かかる生細胞レベル低下が有意に抑制された（図４参照）。

　これらの結果は、本件ビタミンＫ群化合物が公知のフェロトーシス抑制剤と同様に、抗フェロトーシス活性を有することを示している。

［ＡＨＩモデルマウスを用いたインビボでの解析］
　さらに、本件ビタミンＫ群化合物が抗フェロトーシス活性を有することをインビボで確認するために、ＡＨＩモデルマウスを用いた解析を行った。まず、ＡＨＩ／溶媒投与群のマウス（すなわち、ＡＨＩモデルマウス）において、過酸化脂質マーカーであるＨＥＬが検出され、重度の出血が確認され、死細胞の割合が増加するとともに（図５Ａ及び５Ｃ参照）、肝機能低下のマーカーである血漿中のＧＰＴ値が、野生型群のマウス（すなわち、野生型マウス）の値と比べ、有意に上昇することが示された（図５Ｂ参照）。

　これらの結果は、ＡＨＩモデルマウスの肝組織において、ＬＰＳ及びＤ－ＧａｌＮにより過酸化脂質が蓄積し、脂質ペルオキシラジカルが生成された結果、フェロトーシスによる細胞死が生じ、肝障害が生じたことを示している。

　一方、ＡＨＩ／ＶＫ２投与群のマウス（すなわち、ビタミンＫ２［メナキノン－４］を投与したＡＨＩモデルマウス）の肝組織において、ＡＨＩ／溶媒投与群のマウスにおいて認められた、肝組織における重度の出血は軽減され、死細胞の割合は、ＡＨＩ／溶媒投与群のマウスの肝組織における死細胞の割合と比べ、有意に減少するとともに、ＨＥＬの検出レベルは、ＡＨＩ／溶媒投与群のマウスの肝組織におけるＨＥＬの検出レベルと比べ、大幅に減少した（図５Ａ及び５Ｃ参照）。また、ＡＨＩ／ＶＫ２投与群のマウスにおけるＧＰＴ値は、ＡＨＩ／溶媒投与群のマウスにおけるＧＰＴ値と比べ、有意に減少した（図５Ｂ参照）。

　これらの結果は、ビタミンＫ２等の本件ビタミンＫ群化合物を、ＡＨＩモデルマウスに投与すると、ビタミンＫ２による作用により、肝組織における過酸化脂質の蓄積及び脂質ペルオキシラジカルの生成が抑制され、その結果、フェロトーシスによる細胞死や肝障害が抑制されたことを示している。

［脂質ペルオキシラジカルに対する捕捉能］
　本件ビタミンＫ群化合物による抗フェロトーシス効果と、脂質ペルオキシラジカルに対する捕捉能との関連性について、ＮＢＤ－Ｐｅｎ蛍光プローブを用いたＡＡ／ＬＯＸシステムにより解析した。ＮＢＤ－Ｐｅｎ蛍光プローブを用いたＡＡ／ＬＯＸシステムは、ＡＡがＬＯＸによる酸化反応により、脂質ペルオキシド（ＬＯＯＨ）が生成され、生成されたＬＯＯＨが鉄イオン（Ｆｅ^２＋）を触媒とするフェントン反応により脂質ペルオキシラジカル（ＬＯＯ・）が生成され、生成された脂質ペルオキシラジカルが、ＮＢＤ－Ｐｅｎと反応することにより生じたＮＢＤ－Ｐｅｎ由来の蛍光レベルを指標として、脂質ペルオキシラジカルに対する捕捉能を検出するものである。

　ＮＢＤ－Ｐｅｎ蛍光プローブを、ＡＡ及びＬＯＸに加えて、４種類の被験物質（ビタミンＫ１、ビタミンＫ２［メナキノン－４］、メナジオン［ビタミンＫ３］、及びビタミンＫ３ハイドロキノン）の存在下に置くと、これら被験物質非存在下に置いた場合と比べ、蛍光シグナルレベルが低下することが示された（図６参照）。

　この結果は、本件ビタミンＫ群化合物には、脂質ペルオキシラジカルに対する捕捉能があることを示しており、かかる作用により抗フェロトーシス活性を発揮したと考えられる。

　本発明は、フェロトーシスに関連する疾患や、過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療に資するものである。

Claims

　以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
　以下の式（II）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、及び
　以下の式（III）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、フェロトーシス抑制剤。
　以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
　以下の式（II）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、及び
　以下の式（III）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、フェロトーシスに関連する疾患の予防又は治療剤。
　以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
　以下の式（II）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、及び
　以下の式（III）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、脂質ペルオキシラジカルの捕捉剤。
　以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
　以下の式（II）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、及び
　以下の式（III）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、過酸化脂質蓄積の抑制剤。
　以下の式（Ｉ）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
　以下の式（II）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、及び
　以下の式（III）；

（式中、Ｒは、Ｈ；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基；置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_２－２０アルケニル基；あるいは、－（ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎＨ（式中、ｎは、１～１２の整数を表す）を表す。）、
で表される化合物、及びその生理的に許容される塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含む、過酸化脂質蓄積及び／又は脂質ペルオキシラジカルに起因する疾患の予防若しくは治療剤。
　疾患が肝障害である、請求項２又は５に記載の剤。
　経口摂取される、請求項１～６のいずれかに記載の剤。
　式（Ｉ）の化合物が下記（１ａ）～（１ｃ）のいずれかである、請求項１～７のいずれかに記載の剤。

（式（Ｉａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。）

（式（Ｉｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。）

（式（Ｉｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。）
　式（II）の化合物が下記（IIａ）～（IIｃ）のいずれかである、請求項１～８のいずれかに記載の剤。

（式（IIａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。）

（式（IIｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。）

（式（IIｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。）
　式（III）の化合物が下記（IIIａ）～（IIIｃ）のいずれかである、請求項１～９のいずれかに記載の剤。

（式（IIIａ）中、ｍは、１～６の整数を表す。）

（式（IIIｂ）中、ｎは、１～１２の整数を表す。）

（式（IIIｃ）中、Ｒ^１は、Ｈ又は置換された若しくは置換されていない直鎖又は分岐鎖のＣ_１－２０アルキル基を表す。）
　化合物が、下記のいずれかである、請求項１～１０のいずれかに記載の剤。