WO2021230258A1

WO2021230258A1 - 高レバウジオシドｅ含有ステビア植物体

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Publication number: WO2021230258A1
Application number: PCT/JP2021/017955
Authority: WO
Inventors: 正良平井; 一考岩城; 兼太郎落合; 沙織竹山; 克郎宮川
Original assignee: サントリーホールディングス株式会社
Priority date: 2020-05-12
Filing date: 2021-05-11
Publication date: 2021-11-18
Also published as: AR122075A1; AU2021271046A1; PE20230432A1; CN115551347A; EP4151083A4; JPWO2021230258A1; US20230180690A1; BR112022022876A2; EP4151083A1

Abstract

以下の（Ａ）～（Ｅ）の遺伝的特徴の少なくとも１つを有する、植物体。（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。

Description

高レバウジオシドＥ含有ステビア植物体

　本発明は、レバウジオシドＥの含有量が高いステビア植物体及びそのスクリーニング方法等に関する。

　多様化する消費者ニーズに対応すべく、様々な飲料が開発され、市販されている。ショ糖等の糖類は、甘味を与える等の目的で飲料にごく普通に配合される成分であるが、過剰摂取による健康への影響が指摘されてきており、より低カロリーであり、かつ天然由来の甘味料に対するニーズが高まりつつある。例えば特許文献１は、ビタミン、高甘味度甘味料、及び甘味改善組成物を含有する機能性甘味料組成物を開示している。

　ステビオール配糖体は、ステビア抽出物に含まれる甘味成分として知られている。ステビア抽出物は、主にステビアの葉から抽出、精製される。ステビアは南米パラグアイを原産地とする菊科多年生植物で、学名をステビア・レバウディアナ・ベルトニー（Ｓｔｅｖｉａ　Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ　Ｂｅｒｔｏｎｉ）という。ステビアは砂糖の約３００倍以上の甘味を持つ成分を含むので、この甘味成分を抽出して天然甘味料として用いる為に栽培されている。ステビオール配糖体としては、レバウジオシドＡ（Ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ　Ａ、以下「レバウジオシド」（Ｒｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅ）を「Ｒｅｂ」と略すことがある）、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＥ、ＲｅｂＭ等、様々な配糖体の存在が報告されている（特許文献２）。様々なステビオール配糖体の中で、例えばＲｅｂＡは、高甘味度と良質甘味を有する甘味料として評価されており、広く用いられている。その他のステビオール配糖体についても、その独自の甘さ及び付随する味を有することが判明しつつある。

　そのような状況において、ＲｅｂＥを乾燥葉あたり５．３３％又は５．７１％含むステビア植物体が知られている（特許文献３）。

ＷＯ２００７／０７０２２４ＷＯ２０１０／０３８９１１ＷＯ２０１８／１０２６４８

　ステビア植物の遺伝子情報や、生体内事象の制御にどのような遺伝子が関与しているか等については未知の部分が多い。そのため、ステビアの遺伝子情報のさらなる解明が求められている。

　本発明は、ゲノム塩基配列中に特定の一塩基多型（ＳＮＰ）を有するステビア植物体並びに当該植物体の作出方法及びスクリーニング方法を提供する。このようなステビア植物体は、レバウジオシドＥの含有量が高いという特徴を有する。

　一態様において、本発明は以下を提供する。
［１］以下の（Ａ）～（Ｅ）の遺伝的特徴の少なくとも１つを有する、ステビア植物体。
（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
［２］乾燥葉の単位質量当たり０．０７％以上のレバウジオシドＥを含む、上記［１］に記載の植物体。
［３］非遺伝子組換ステビア植物体である、上記［１］又は［２］に記載の植物体。
［４］変異誘発処理を行ったステビア植物体及びその子孫植物体を含む、上記［１］～［３］のいずれかに記載の植物体。
［５］上記［１］～［４］のいずれかに記載の植物体の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞。
［６］胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片及びカルスから選択される、上記［５］に記載の組織、組織培養物又は細胞。
［７］上記［１］～［４］のいずれかに記載のステビア植物体と第２のステビア植物体とを交雑させる工程を含む、乾燥葉の単位質量あたり０．０７％以上のレバウジオシドＥを含むことを特徴とする、高レバウジオシドＥ含有ステビア植物体を作出する方法。
［８］第２の植物体が上記［１］～［４］のいずれかに記載のステビア植物体である、上記［７］に記載の方法。
［９］レバウジオシドＥを含む、上記［１］～［４］のいずれかに記載の植物体、上記［５］に記載の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞の抽出物。
［１０］上記［９］に記載の抽出物を含む飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品。
［１１］上記［１］～［４］のいずれかに記載の植物体、上記［５］に記載の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞からレバウジオシドＥ含有抽出物を得る工程を含む、レバウジオシドＥ含有抽出物の製造方法。
［１２］上記［１１］に記載のレバウジオシドＥ含有抽出物からレバウジオシドＥを精製する工程を含む、レバウジオシドＥの製造方法。
［１３］上記［１］～［４］のいずれかに記載の植物体の抽出物、上記［５］に記載の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞の抽出物、或いは、上記［１１］に記載の抽出物を提供する工程、及び
　前記抽出物を、飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の原料に添加する工程
を含む、飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法。
［１４］被験植物のゲノムから、以下の（Ａ）～（Ｅ）の遺伝的特徴の少なくとも１つの存在及び／又は不在を検出する工程を含む、上記［１］～［４］のいずれかに記載のステビア植物体をスクリーニングする方法。
（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
［１５］さらに、葉組織のレバウジオシドＥの含有量を測定する工程を含む、上記［１４］に記載の方法。
［１６］スクリーニングにより得られる植物体が、乾燥葉の単位質量あたり０．０７％以上のレバウジオシドＥを含む、上記［１４］又は［１５］に記載の方法。

　本発明によって、ゲノム塩基配列中に特定のＳＮＰを有し、レバウジオシドＥの含有量が高いステビア植物体の取得、そのような植物体を作出するための手段、そのような植物体より得られる葉、この葉より得られた有用なステビオール配糖体を含む食物や飲料等の提供が可能になる。

図１は、配列番号１６の塩基配列における、変異（Ａ）を示した図である。枠で囲った塩基が変異（Ａ）に係る塩基である。図２は、配列番号２０の塩基配列における、変異（Ｂ）を示した図である。枠で囲った塩基が変異（Ｂ）に係る塩基である。図３は、配列番号２４の塩基配列における、変異（Ｃ）を示した図である。枠で囲った塩基が変異（Ｃ）に係る塩基である。図４は、配列番号２８の塩基配列における、変異（Ｄ）を示した図である。枠で囲った塩基が変異（Ｄ）に係る塩基である。図５は、配列番号３２の塩基配列における、変異（Ｅ）を示した図である。枠で囲った塩基が変異（Ｅ）に係る塩基である。実施例における、遺伝的特徴（Ａ）と平均ＲｅｂＥ含有量の関係を示す。ステビア植物体が遺伝的特徴（Ａ）を有するか否かをｄＣＡＰＳ法で分析した結果を示した図である。レーン１は変異（Ａ）を有するアレルについてホモ接合性の個体、レーン２は変異（Ａ）を有するアレルについてヘテロ接合性の個体、レーン３は変異（Ａ）を有しないアレルについてホモ接合性の個体のＤＮＡを制限酵素ＲｓａＩで処理したサンプルの電気泳動像をそれぞれ示す。

　以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をそのような実施の形態のみに限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、様々な形態で実施をすることができる。
　なお、本明細書において引用した全ての文献、及び公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、２０２０年５月１２日に出願された本願優先権主張の基礎となる日本国特許出願（特願２０２０－０８４１３０号）の明細書及び図面に記載の内容を包含する。

１．ステビア植物体

　本発明は、野生種のステビア植物体から派生し、以下の（Ａ）～（Ｅ）の遺伝的特徴の少なくとも１つ（以下、遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つを「本発明の遺伝的特徴」と総称する場合がある）を有するステビア植物体（以下、「本発明の植物体」又は「本発明のステビア植物体」と総称する場合がある）を提供する。（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ａ）」と称する場合がある）。
（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｂ）」と称する場合がある）。
（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｃ）」と称する場合がある）。
（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｄ）」と称する場合がある）。
（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｅ）」と称する場合がある）。

　好ましい態様において、本発明のステビア植物体は、本発明の遺伝的特徴（Ａ）を有する。より好ましい態様において、本発明のステビア植物体は、本発明の遺伝的特徴（Ａ）のうち、配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性である遺伝的特徴（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ａ’）」と称する場合がある。）を有する。なお、配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてヘテロ接合性である遺伝的特徴を、本発明の遺伝的特徴（Ａ’’）と称する場合がある。

　本発明の遺伝的特徴（Ｂ）としては、配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性である遺伝的特徴（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｂ’）」と称する場合がある。）が好適である。なお、配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてヘテロ接合性である遺伝的特徴を、本発明の遺伝的特徴（Ｂ’’）と称する場合がある。
　本発明の遺伝的特徴（Ｃ）としては、配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性である遺伝的特徴（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｃ’）」と称する場合がある。）が好適である。なお、配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてヘテロ接合性である遺伝的特徴を、本発明の遺伝的特徴（Ｃ’’）と称する場合がある。
　本発明の遺伝的特徴（Ｄ）としては、配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性である遺伝的特徴（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｄ’）」と称する場合がある。）が好適である。なお、配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてヘテロ接合性である遺伝的特徴を、本発明の遺伝的特徴（Ｄ’’）と称する場合がある。
　本発明の遺伝的特徴（Ｅ）としては、配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性である遺伝的特徴（以下、「本発明の遺伝的特徴（Ｅ’）」と称する場合がある。）が好適である。なお、配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてヘテロ接合性である遺伝的特徴を、本発明の遺伝的特徴（Ｅ’’）と称する場合がある。

　一部の態様において、本発明の植物体は、上記の遺伝的特徴を複数有していてもよい。この態様において、遺伝的特徴の数は２～５種のいずれか、すなわち、２、３、４又は５種であってよい。遺伝的特徴の組合せは特に限定されず、例えば以下の括弧内の各組合せを含む：（Ａ、Ｂ）、（Ａ、Ｃ）、（Ａ、Ｄ）、（Ａ、Ｅ）、（Ｂ、Ｃ）、（Ｂ、Ｄ）、（Ｂ、Ｅ）、（Ｃ、Ｄ）、（Ｃ、Ｅ）、（Ｄ、Ｅ）、（Ａ、Ｂ、Ｃ）、（Ａ、Ｂ、Ｄ）、（Ａ、Ｂ、Ｅ）、（Ａ、Ｃ、Ｄ）、（Ａ、Ｃ、Ｅ）、（Ａ、Ｄ、Ｅ）、（Ｂ、Ｃ、Ｄ）、（Ｂ、Ｃ、Ｅ）、（Ｂ、Ｄ、Ｅ）、（Ｃ、Ｄ、Ｅ）、（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）、（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ）、（Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ）、（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ）、（Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ）、（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ）、（Ａ’、Ｂ）、（Ａ’、Ｃ）、（Ａ’、Ｄ）、（Ａ’、Ｅ）、（Ａ’、Ｂ、Ｃ）、（Ａ’、Ｂ、Ｄ）、（Ａ’、Ｂ、Ｅ）、（Ａ’、Ｃ、Ｄ）、（Ａ’、Ｃ、Ｅ）、（Ａ’、Ｄ、Ｅ）、（Ａ’、Ｂ、Ｃ、Ｄ）、（Ａ’、Ｂ、Ｃ、Ｅ）、（Ａ’、Ｂ、Ｄ、Ｅ）、（Ａ’、Ｃ、Ｄ、Ｅ）、（Ａ’、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ）、（Ａ’、Ｂ’）、（Ａ’、Ｃ’）、（Ａ’、Ｄ’）、（Ａ’、Ｅ’）、（Ｂ’、Ｃ’）、（Ｂ’、Ｄ’）、（Ｂ’、Ｅ’）、（Ｃ’、Ｄ’）、（Ｃ’、Ｅ’）、（Ｄ’、Ｅ’）、（Ａ’、Ｂ’、Ｃ’）、（Ａ’、Ｂ’、Ｄ’）、（Ａ’、Ｂ’、Ｅ’）、（Ａ’、Ｃ’、Ｄ’）、（Ａ’、Ｃ’、Ｅ’）、（Ａ’、Ｄ’、Ｅ’）、（Ｂ’、Ｃ’、Ｄ’）、（Ｂ’、Ｃ’、Ｅ’）、（Ｂ’、Ｄ’、Ｅ’）、（Ｃ’、Ｄ’、Ｅ’）、（Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、Ｄ’）、（Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、Ｅ’）、（Ａ’、Ｂ’、Ｄ’、Ｅ’）、（Ａ’、Ｃ’、Ｄ’、Ｅ’）、（Ｂ’、Ｃ’、Ｄ’、Ｅ’）、（Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、Ｄ’、Ｅ’）。上記において、例えば（Ａ、Ｂ）は遺伝的特徴（Ａ）と遺伝的特徴（Ｂ）の組合せを意味する。

　好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ）を有する。より好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有する。別の好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）の少なくとも１つを有し、より好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）のすべてを有する。別の好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）の少なくとも１つを有し、より好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）のすべてを有する。別の好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）の少なくとも１つを有し、より好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）のすべてを有する。別の好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）の少なくとも１つを有し、より好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）のすべてを有する。別の好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｅ’）の少なくとも１つを有し、より好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｅ’）のすべてを有する。別の好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｄ’）の少なくとも１つを有し、より好ましい態様において、本発明の植物体は、遺伝的特徴（Ａ’）を有し、且つ、遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｄ’）のすべてを有する。

　「～に相当する位置」とは、ゲノム中に基準配列（例えば、配列番号１～５等）と同一の配列が存在する場合は、ゲノム中に存在するその配列中の位置（例えば、４０位、２１位、２８位、５９位、６４位等）を意味し、ゲノム中に基準配列と同一の配列が存在しない場合は、ゲノム中の基準配列に相当する配列中の、基準配列中の位置に相当する位置を意味する。ゲノム中に基準配列と同一又はそれに相当する配列が存在するかどうかは、例えば、基準配列をＰＣＲで増幅し得るプライマーで、対象となるステビア植物のゲノムＤＮＡを増幅し、増幅産物のシーケンシングを行い、得られた配列と基準配列とのアラインメント解析を行うことで決定することができる。基準配列に相当する配列の非限定例としては、例えば、基準配列に対し６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９８．１％以上、９８．４％以上、９８．７％以上、９９％以上、９９．２％以上、９９．５％以上又は９９．８％以上の配列同一性を有する塩基配列が挙げられる。ゲノム中の基準配列に相当する配列中の、基準配列中の位置に相当する位置は、基準配列中の位置の前後の塩基配列等を考慮して決定することができる。例えば、基準配列とゲノム中の基準配列に相当する配列とのアライメント解析により、ゲノム中の基準配列に相当する配列中の、基準配列中の位置に相当する位置を決定することができる。

　例えば、本発明の遺伝的特徴（Ａ）の「配列番号１の４０位に相当する位置」を例にとると、ステビア植物体のゲノムが配列番号１と同一の塩基配列からなる部分を有している場合、「配列番号１の４０位に相当する位置」はゲノム中の配列番号１と同一の塩基配列からなる部分の５’側から４０位である。一方、ステビア植物体のゲノムが配列番号１と同一ではないがこれに相当する塩基配列からなる部分を有している場合、ゲノムは配列番号１と同一の塩基配列からなる部分を有しないため、「配列番号１の４０位に相当する位置」は、必ずしも配列番号１に相当する部分の５’側から４０位に該当するわけではないが、配列番号１の４０位の前後の塩基配列等を考慮し、かかるステビア植物体のゲノムにおける「配列番号１の４０位に相当する位置」を特定することができる。例えば、ステビア植物体のゲノムにおける配列番号１に相当する部分の塩基配列と、配列番号１の塩基配列とのアライメント解析により、ステビア植物体のゲノムにおける「配列番号１の４０位に相当する位置」を特定することができる。

　ここで、（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置、（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置、（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置、（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する位置、（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する位置からなる群から選択される位置を、「本発明の多型部位」又は「本発明の変異部位」と総称することがある。また、上記（Ａ）～（Ｅ）の各位置を、「本発明の多型部位（Ａ）」、「本発明の多型部位（Ｂ）」、又は「本発明の変異部位（Ａ）」、「本発明の変異部位（Ｂ）」等と称することがある。

　「配列番号１に相当する塩基配列からなる部分」は、例えば、配列番号１の塩基配列に対し、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９８．１％以上、９８．４％以上、９８．７％以上、９９％以上、９９．２％以上、９９．５％以上又は９９．８％以上の配列同一性を有する塩基配列からなる部分を意味する。

　一部の態様において、「配列番号１に相当する塩基配列からなる部分」には、配列番号１の５’末端から１～３９位（すなわち、配列番号１の５’末端から、変異部位（Ａ）の１塩基５’末端側の塩基まで）の部分の相補配列にハイブリダイズするフォワードプライマーと、配列番号１の３’末端側から１～１６３位（すなわち、配列番号１の３’末端から、変異部位（Ａ）の１塩基３’末端側の塩基まで）の部分にハイブリダイズするリバースプライマーとを用いたＰＣＲにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　ここでは簡潔のため本発明の遺伝的特徴（Ａ）を例に説明したが、本発明の遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）についても同様である。

　特定の態様において、「配列番号１に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号６の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号７の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたＰＣＲにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号２に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号８の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号９の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたＰＣＲにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号３に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号１０の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号１１の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたＰＣＲにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号４に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号１２の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号１３の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたＰＣＲにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。
　特定の態様において、「配列番号５に相当する塩基配列からなる部分」には、例えば、配列番号１４の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号１５の塩基配列を含むリバースプライマーとを用いたＰＣＲにより増幅され得るステビア植物体のゲノムの部分が含まれる。

　特定の態様において、「配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレル」は、配列番号１６、１７、１８又は１９の塩基配列を含む。
　特定の態様において、「配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレル」は、配列番号２０、２１、２２又は２３の塩基配列を含む。
　特定の態様において、「配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレル」は、配列番号２４、２５、２６又は２７の塩基配列を含む。
　特定の態様において、「配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレル」は、配列番号２８、２９、３０又は３１の塩基配列を含む。
　特定の態様において、「配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレル」は、配列番号３２、３３、３４又は３５の塩基配列を含む。

（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置におけるＴからＣへの変異、（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置におけるＡからＴへの変異、（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置におけるＣからＴへの変異、（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する位置におけるＡからＣへの変異、（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する位置におけるＣからＴへの変異からなる群から選択される変異を、「本発明の多型」又は「本発明の変異」と総称することがある。また、上記（Ａ）～（Ｅ）の各変異を、「本発明の多型（Ａ）」、「本発明の多型（Ｂ）」、又は「本発明の変異（Ａ）」、「本発明の変異（Ｂ）」等と称することがある。

　上記の遺伝的特徴は、ＰＣＲ法、ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法、シーケンス法、マイクロアレイ法、インベーダー法、ＴＩＬＬＩＮＧ法、ＲＡＤ（random amplified polymorphic DNA）法、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）法、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法、ＡＦＬＰ（amplified fragment length polymorphism）法、ＳＳＬＰ（simple sequence length polymorphism）法、ＣＡＰＳ（cleaved amplified polymorphic sequence）法、ｄＣＡＰＳ（derived cleaved amplified polymorphic sequence）法、アレル特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）法、ＡＲＭＳ法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）法、ＣＣＭ（chemical cleavage of mismatch）法、ＤＯＬ法、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ法、ＴＤＩ法、パドロックプローブ法、分子ビーコン法、ＤＡＳＨ（dynamic allele specific hybridization）法、ＵＣＡＮ法、ＥＣＡ法、ＰＩＮＰＯＩＮＴ法、ＰＲＯＢＥ（primer oligo base extension）法、ＶＳＥＴ（very short extension）法、Ｓｕｒｖｉｖｏｒ　ａｓｓａｙ、Ｓｎｉｐｅｒ　ａｓｓａｙ、Ｌｕｍｉｎｅｘ　ａｓｓａｙ、ＧＯＯＤ法、ＬＣｘ法、ＳＮａＰｓｈｏｔ法、Ｍａｓｓ　ＡＲＲＡＹ法、パイロシーケンス法、ＳＮＰ－ＩＴ法、融解曲線分析法等により検出することが可能であるが、検出方法はこれらに限定されるものではない。

　特定の態様において、本発明の遺伝的特徴は、以下のプライマーセット及び制限酵素の組合せで検出することが可能である。
　候補植物体が変異（Ａ）を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムＤＮＡに対し、配列番号３６に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号３７に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約２０３ｂｐ長、例えば配列番号３８）を制限酵素ＲｓａＩで処理しても約２０３ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号３８）しか得られない。一方、候補植物体が変異（Ａ）を有しない（配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＴである）場合、上記と同様にＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約２０３ｂｐ長、例えば、配列番号３９）を制限酵素ＲｓａＩで処理すると、約４０ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号４０）と約１６３ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号４１）が得られる。上記手法により変異（Ａ）を検出した例を図７に示す。レーン１には変異（Ａ）を有するアレルについてホモ接合性のステビア個体、レーン２には変異（Ａ）を有するアレルについてヘテロ接合性のステビア個体、レーン３には変異（Ａ）を有しないアレルについてホモ接合性のステビア個体のＤＮＡを制限酵素ＲｓａＩで処理したサンプルをそれぞれ負荷した。レーン１には、酵素により分解されなかった約２０３ｂｐ長のバンドが認められる。レーン２には、酵素により分解された約４０ｂｐ長のバンドと約１６３ｂｐ長のバンド、及び、酵素により分解されなかった約２０３ｂｐ長のバンドが認められる。したがって、上記のｄＣＡＰＳ法により、非分解物に由来する約２０３ｂｐ長のバンドが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ａ）を有すると決定することができる。分解物に由来する約４０ｂｐ長のバンド及び／又は約１６３ｂｐ長のバンドが認められず、非分解物に由来する約２０３ｂｐ長のバンドが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ａ’）を有すると決定することができる。分解物に由来する約４０ｂｐ長のバンド及び／又は約１６３ｂｐ長のバンドと、非分解物に由来する約２０３ｂｐ長のバンドとが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ａ’’）を有すると決定することができる。

　候補植物体が変異（Ｂ）を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムＤＮＡに対し、配列番号４２に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号４３に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３６４ｂｐ長、例えば、配列番号４４）を制限酵素ＡｃｌＩで処理すると、約１８ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号４６）と約３４６ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号４７）が得られる。一方、候補植物体が変異（Ｂ）を有しない場合、上記と同様にＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３６４ｂｐ長、例えば、配列番号４５）を制限酵素ＡｃｌＩで処理しても約３６４ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号４５）しか得られない。したがって、上記のｄＣＡＰＳ法により、分解物に由来する約１８ｂｐ長のバンド及び／又は約３４６ｂｐ長のバンドが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｂ）を有すると決定することができる。分解物に由来する約１８ｂｐ長のバンド及び／又は約３４６ｂｐ長のバンドが認められ、非分解物に由来する約３６４ｂｐ長のバンドが認められない場合、本発明の遺伝的特徴（Ｂ’）を有すると決定することができる。分解物に由来する約１８ｂｐ長のバンド及び／又は約３４６ｂｐ長のバンドと、非分解物に由来する約３６４ｂｐ長のバンドとが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｂ’’）を有すると決定することができる。

　候補植物体が変異（Ｃ）を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムＤＮＡに対し、配列番号４８に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号４９に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３５３ｂｐ長、例えば、配列番号５０）を制限酵素ＡｌｕＩで処理すると、約１９ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号５２）と約３３４ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号５３）が得られる。一方、候補植物体が変異（Ｃ）を有しない場合、上記と同様にＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３５３ｂｐ長、例えば、配列番号５１）を制限酵素ＡｌｕＩで処理しても約３５３ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号５１）しか得られない。したがって、上記のｄＣＡＰＳ法により、分解物に由来する約１９ｂｐ長のバンド及び／又は約３３４ｂｐ長のバンドが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｃ）を有すると決定することができる。分解物に由来する約１９ｂｐ長のバンド及び／又は約３３４ｂｐ長のバンドが認められ、非分解物に由来する約３５３ｂｐ長のバンドが認められない場合、本発明の遺伝的特徴（Ｃ’）を有すると決定することができる。分解物に由来する約１９ｂｐ長のバンド及び／又は約３３４ｂｐ長のバンドと、非分解物に由来する約３５３ｂｐ長のバンドとが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｃ’’）を有すると決定することができる。

　候補植物体が変異（Ｄ）を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムＤＮＡに対し、配列番号５４に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号５５に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３４９ｂｐ長、例えば、配列番号５６）を制限酵素ＡｌｕＩで処理すると、約２１ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号５８）と約３２８ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号５９）が得られる。一方、候補植物体が変異（Ｄ）を有しない場合、上記と同様にＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３４９ｂｐ長、例えば、配列番号５７）を制限酵素ＡｌｕＩで処理しても約３４９ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号５７）しか得られない。したがって、上記のｄＣＡＰＳ法により、分解物に由来する約２１ｂｐ長のバンド及び／又は約３２８ｂｐ長のバンドが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｄ）を有すると決定することができる。分解物に由来する約２１ｂｐ長のバンド及び／又は約３２８ｂｐ長のバンドが認められ、非分解物に由来する約３４９ｂｐ長のバンドが認められない場合、本発明の遺伝的特徴（Ｄ’）を有すると決定することができる。分解物に由来する約２１ｂｐ長のバンド及び／又は約３２８ｂｐ長のバンドと、非分解物に由来する約３４９ｂｐ長のバンドとが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｄ’’）を有すると決定することができる。

　候補植物体が変異（Ｅ）を有する場合、例えば、候補植物体のゲノムＤＮＡに対し、配列番号６０に示す塩基配列を有するフォワードプライマー及び配列番号６１に示す塩基配列を有するリバースプライマーを用いてＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３４９ｂｐ長、例えば、配列番号６２）を制限酵素ＡｌｕＩで処理すると、約２１ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号６４）と約３２８ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号６５）が得られる。一方、候補植物体が変異（Ｅ）を有しない場合、上記と同様にＰＣＲ増幅を行い、得られたＰＣＲ産物（約３４９ｂｐ長、例えば、配列番号６３）を制限酵素ＡｌｕＩで処理しても約３４９ｂｐ長のバンド（例えば、配列番号６３）しか得られない。したがって、上記のｄＣＡＰＳ法により、分解物に由来する約２１ｂｐ長のバンド及び／又は約３２８ｂｐ長のバンドが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｅ）を有すると決定することができる。分解物に由来する約２１ｂｐ長のバンド及び／又は約３２８ｂｐ長のバンドが認められ、非分解物に由来する約３４９ｂｐ長のバンドが認められない場合、本発明の遺伝的特徴（Ｅ’）を有すると決定することができる。分解物に由来する約２１ｂｐ長のバンド及び／又は約３２８ｂｐ長のバンドと、非分解物に由来する約３４９ｂｐ長のバンドとが認められた場合、本発明の遺伝的特徴（Ｅ’’）を有すると決定することができる。

　上記ｂｐ長に関し、「約」とは、±５ｂｐを意味する。制限酵素処理は、使用する各制限酵素の販売元が推奨する条件に従って行うことができる。

　本発明の変異部位（Ａ）～（Ｅ）は、ゲノム上の互いの位置が１７３ｂｐ以内と近接しており、連鎖不平衡の状態にある。したがって、本発明の植物体が遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）のいずれかを有していれば、遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の他のものも有している傾向がある。本発明の植物体が遺伝的特徴（Ａ’）～（Ｅ’）のいずれかを有していれば、遺伝的特徴（Ａ’）～（Ｅ’）の他のものも有している傾向がある。

　本発明の遺伝的特徴を有するステビア植物体は、乾燥葉の単位質量当たり０．０７％以上のＲｅｂＥを含むという化学的特徴を有する。

　ＲｅｂＥは、甘味倍率が高く、例えばステビオシドに比べて１．５倍以上の甘味倍率を有し、味質が良いことが知られている。また、溶解性が高く、安定であると言われている。ＲｅｂＥを含む甘味料は、口当たりと味質が良い甘味料として期待されている。そのため、ＲｅｂＥ高含有のステビア植物体が期待されている。

　本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の存在は、本発明の化学的特徴の存在と関連性が高い。このため、本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つを有するステビア植物体は、本発明の化学的特徴を有する可能性が高く、本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つを指標にして、本発明の化学的特徴を有するステビア植物体をスクリーニングすることも可能である。

　本発明のステビア植物体において、ＲｅｂＥの含量が乾燥葉の単位質量当たり０．０７％以上とは、例えば、所定の質量の乾燥葉（例えば、５０ｍｇ）に、０．０７質量％以上の割合でＲｅｂＥ（例えば、０．０３５ｍｇ以上）が含まれることを意味する。この態様における乾燥葉の単位質量当たりのＲｅｂＥの割合は、限定されずに、例えば、０．０７％以上、０．１０％より多い、０．１５％以上、０．４９％より多い、０．５７％以上、０．６２％より多い、１．０７％以上、１．５７％以上、１．７４％以上、２．０７％以上、２．１０％以上、２．５７％以上、３．０７％以上、３．５７％以上、４．０７％以上、４．５７％以上、５．０７％以上、５．５７％以上、６．０７％以上等であってよい。乾燥葉の単位質量当たりのＲｅｂＥの割合の上限は特に限定されないが、例えば、２０％、１５％、１０％、７％等であってよい。
　ここで乾燥葉とは、本発明のステビア植物体の新鮮葉を乾燥させることにより含水量を３～４重量％にまで減らしたものをいう。

　一態様において、本発明の植物体は、総ステビオール配糖体（Ｔｏｔａｌ　Ｓｔｅｖｉｏｌ　Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ：ＴＳＧ）に対するＲｅｂＥの質量比が０．５％以上である。これは、例えば葉（例えば、乾燥葉又は新鮮葉）に含まれるＲｅｂＥの合計質量を、葉から得られたステビオール配糖体の総質量に対する比率としてＲｅｂＥ／ＴＳＧ％で表した場合、ＲｅｂＥ／ＴＳＧの値が０．５％以上であることを意味する。この態様におけるＲｅｂＥ／ＴＳＧの値は、限定されずに、例えば、０．５％以上、１．５％以上、２．０％以上、２．４％以上、２．５％以上、３．０％以上、３．５％以上、４．０％以上、４．５％以上、５．０％以上、５．５％以上、６．０％以上、６．５％以上、７．０％以上、７．５％以上、８．０％以上、８．５％以上、９．０％以上、９．５％以上、１０．０％以上、１５．０％以上、２０．０％以上、２２．４％以上、２５．０％以上、２５．５％以上、３０．０％以上、３３．５％以上、３５．０％以上、４０．０％以上、４５．０％以上であってよい。ＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比の上限は特に限定されないが、例えば、８５％、７５％、６５％、５５％等であってよい。

　ＴＳＧとは、測定可能なステビオール配糖体の総称であり、未知のステビオール配糖体や、検出限界未満の量で存在するステビオール配糖体を含まない。好ましくは、ＴＳＧとは、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＥ、ＲｅｂＦ、ＲｅｂＧ、ＲｅｂＩ、ＲｅｂＪ、ＲｅｂＫ、ＲｅｂＭ、ＲｅｂＮ、ＲｅｂＯ、ＲｅｂＱ、ＲｅｂＲ、ズルコシドＡ、ルブソシド、ステビオールモノシド、ステビオールビオシド及びステビオシドからなる群より選択される２つ以上の任意の組み合わせである。例えば、ある実施形態では、ＴＳＧは、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＥ、ＲｅｂＦ、ＲｅｂＧ、ＲｅｂＭ、ＲｅｂＮ及びステビオシドからなる。

　一態様において、本発明の植物体は、ＲｅｂＥ／ステビオシドの値が１以下である。これは、例えば葉（例えば、乾燥葉又は新鮮葉）に含まれるステビオシドの質量に対する、葉から得られたＲｅｂＥの質量の割合ＲｅｂＥ／ステビオシドが１以下であることを意味する。ＲｅｂＥ／ステビオシドの値は、限定されずに、例えば、１以下、０．９５以下、０．９０以下、０．８５以下、０．６５以下等であってよい。ＲｅｂＥ／ステビオシドの下限は特に限定されないが、例えば、０．０７以上、０．１１以上、０．１２以上、０．１３以上、０．１４以上、０．１５以上、０．１７以上、０．１８以上、０．２０以上、０．２２以上、０．２５以上、０．２７以上、０．２８以上、０．３０以上、０．３２以上、０．３５以上、０．３８以上、０．３７以上、０．５０以上等であってよい。

　ＲｅｂＥ、ステビオシド等のステビオール配糖体は、本発明の植物体の新鮮葉又は乾燥葉に適切な溶媒（水等の水性溶媒又はアルコール、エーテル及びアセトン等の有機溶媒）を反応させることにより抽出液の状態で抽出することができる。抽出条件等はOhta et al., J. Appl. Glycosci., Vol. 57, No. 3, 199-209 (2010)又はＷＯ２０１０／０３８９１１に記載の方法や、後述の実施例に記載の方法を参照することができる。
　さらに、このようにして得られた抽出液に対し、酢酸エチルその他の有機溶媒：水の勾配、高速液体クロマトグラフィー（High Performance Liquid Chromatography：ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー、飛行時間型質量分析（Time-of-Flight mass spectrometry：ＴＯＦ－ＭＳ）、超高性能液体クロマトグラフィー（Ultra (High) Performance Liquid chromatography：ＵＰＬＣ）等の公知の方法を用いることにより個々のステビオール配糖体、例えばＲｅｂＥを精製することができる。

　ＲｅｂＥ、ステビオシド等のステビオール配糖体の含量は、上記Ohta et al.又はＷＯ２０１０／０３８９１１に記載の方法や、後述の実施例に記載の方法で測定することができる。具体的には、例えば、本発明のステビア植物体から新鮮葉をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを行うこと等により測定することができる。

　本発明の植物体は、遺伝子組換的手法により得られたもの又はその子孫（以下、「遺伝子組換植物体」と称することがある。）であっても、非遺伝子組換的手法により得られたもの又はその子孫（以下、「非遺伝子組換植物体」と称することがある。）であってもよい。「非遺伝子組換的手法」の例としては、交雑や自殖等のほか、外来遺伝子の導入を行わずに宿主細胞（又は宿主植物体）の遺伝子に変異を誘発する方法が挙げられる。そのような方法としては植物細胞に変異誘発剤を作用させる方法が挙げられる。そのような変異誘発剤としては、エチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）及びアジ化ナトリウム等が挙げられる。例えば、ＥＭＳは、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％等の濃度で植物細胞を処理することができる。処理時間は１～４８時間、２～３６時間、３～３０時間、４～２８時間、５～２６時間、６～２４時間である。処理の手順自体は公知であるが、吸水過程を経た吸水種子を上記濃度で変異誘発剤を含む処理液に、上記処理時間浸漬することで行うことができる。

　或いは、非遺伝子組換的手法の例としてＸ線、γ線、紫外線等の放射線や光線を植物細胞に照射する方法も挙げられる。この場合、適当な紫外線の照射量（紫外線ランプの強さ、距離、時間）を用いて照射した細胞を、選択培地等で培養させた後、目的の形質を有する細胞、カルス、植物体を選択できる。その際の照射強度は０．０１～１００Ｇｒ、０．０３～７５Ｇｒ、０．０５～５０Ｇｒ、０．０７～２５Ｇｒ、０．０９～２０Ｇｒ、０．１～１５Ｇｒ、０．１～１０Ｇｒ、０．５～１０Ｇｒ、１～１０Ｇｒであり、照射距離は１ｃｍ～２００ｍ、５ｃｍ～１００ｍ、７ｃｍ～７５ｍ、９ｃｍ～５０ｍ、１０ｃｍ～３０ｍ、１０ｃｍ～２０ｍ、１０ｃｍ～１０ｍであり、照射時間は１分～２年、２分～１年、３分～０．５年、４分～１か月、５分～２週間、１０分～１週間である。照射の強度、距離及び時間は、放射線の線種や照射対象となる状態（細胞、カルス、植物体）により異なるが、当業者であれば適宜調整することができる。

　また、細胞融合、葯培養（半数体育成）、遠縁交雑（半数体育成）等の手法も公知である。
　一般に、植物細胞は、培養の間に変異を伴うことがあるため、より安定した形質維持のために植物個体に戻すことが好ましい。
　本発明の植物体を宿主として事後的に遺伝子組み換え（例えばゲノム編集等により）を行って得られた植物体（例えば、本発明の植物体を宿主として遺伝子組み換えを行って、さらに別の形質を付加した植物体）も、本発明の範囲から除外されるものではない。

　本発明の植物体には植物体全体のみならず、植物器官（例えば葉、花弁、茎、根、種子等）、植物組織（例えば表皮、師部、柔組織、木部、維管束、柵状組織、海綿状組織等）等或いは種々の形態の植物細胞（例えば、懸濁培養細胞）、プロトプラスト、葉の切片、カルス等が含まれ得る。葉は乾燥葉であってもよい。

　また、本発明の植物体には、植物培養細胞又は組織培養物も含まれ得る。このような植物培養細胞又は組織培養物を培養することにより、植物体を再生することができるからである。
　本発明の植物体の再生可能な形態の例としては、胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片及びカルス等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

２．本発明の植物体の作出方法
　本発明は、別の実施態様において、本発明のステビア植物体と第２のステビア植物体とを交雑させる工程を含む、乾燥葉あたり０．０７質量％以上のＲｅｂＥを含むことを特徴とする、ステビア植物体を作出する方法（以下、「本発明の作出方法」と称する場合がある）を提供する。当該方法により作出されるステビア植物体は、本発明の植物体と同じ表現型と遺伝的特徴を有する。

　本発明の作出方法によって得られる植物体におけるＲｅｂＥの量、ステビオシドに対するＲｅｂＥの量、ＴＳＧ量に対するＲｅｂＥの量、各特徴（化学的特徴及び／又は遺伝的特徴）の組合せ等は、本発明の植物体の項で記載したとおりである。

　一態様において、本発明の作出方法によって得られる植物体は、本発明の植物体の項において記載した、各特徴（化学的特徴及び／又は遺伝的特徴）の組合せ等を有する。

　本発明の作出方法において、「交雑させる」とは、本発明の植物体（第一代（Ｓ１））と、第２の植物体（Ｓ１）とを交配させることにより、その子植物体（本発明の作出方法により作出される植物体（第二代（Ｓ２））を得ることを意味する。交雑方法としては、戻し交雑が好ましい。「戻し交雑」とは、本発明の植物体と第２の植物体との間に生まれた子植物体（Ｓ２）を、さらに本発明の植物体（つまり、本発明の遺伝的特徴を有する植物体）（Ｓ１）と交雑させて、本発明の遺伝的特徴を有する植物体を作出する手法である。本発明の作出方法に用いられる第２の植物体（Ｓ１）が、本発明の植物体と同じ表現型と遺伝的特徴を有する場合には、実質的に戻し交雑となる。

　交雑は二代以上に亘って行うことが好ましいが、遺伝的特徴がヘテロ接合性等の場合は、一代で所望の遺伝的特徴の組合せを有する植物体が得られることがある。

　或いは、本発明の植物体は自殖により作出することもできる。自殖は、本発明の植物体のおしべの花粉を本発明の植物体のめしべに自家受粉させることにより行うことができる。

　本発明の作出方法により作出される植物体は、表現型及び遺伝的特徴が本発明の植物体と同じであるため、本発明の作出方法により作出される植物体をさらに第３のステビア植物体と交雑させることにより、本発明の植物体と同等の表現型を有するステビア植物体を作出することも可能である。

　別の態様として、本発明の植物体は、先に述べた組織培養物又は細胞を培養することにより植物体を再生することで作出することも可能である。培養条件については、野生型ステビア植物の組織培養物又は植物培養細胞を培養する条件と同じであり、公知である（Protocols for In Vitro cultures and secondary metabolite analysis of aromatic and medicinal plants, Method in molecular biology, vol. 1391, pp113-123）。

　さらに別の態様として、本発明の植物体は、ステビア植物体のゲノムに、本発明の変異を導入することで作出することも可能である。変異の導入は、遺伝子組換的手法により行っても、非遺伝子組換的手法により行ってもよい。非遺伝子組換的手法については、本発明の植物体の項で記載したとおりである。

３．本発明の植物体のスクリーニング方法
　本発明の植物体及び本発明の植物体と同じ表現型及び／又は遺伝的特徴を有する植物体は、当該植物体の組織から本発明の遺伝的特徴を検出することによりスクリーニングすることができる。ここで、「スクリーニング」とは、本発明の植物体とそれ以外の植物体とを識別し、本発明の植物体を選択することを意味する。
　したがって、本発明は、別の側面において、被験植物体のゲノムから本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つの存在及び／又は不在を検出する工程を含む、ステビア植物体をスクリーニングする方法（以下、「本発明のスクリーニング方法」と称する場合がある）を提供する。

　一態様において、検出対象となる遺伝的特徴は遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つである。好ましい態様において、検出対象となる遺伝的特徴は、遺伝的特徴（Ａ）であり、より好ましくは、遺伝的特徴（Ａ’）である。別の好ましい態様において、検出対象となる遺伝的特徴は、遺伝的特徴（Ａ）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）の少なくとも１つであり、より好ましくは、遺伝的特徴（Ａ）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）のすべてである。別の好ましい態様において、検出対象となる遺伝的特徴は、遺伝的特徴（Ａ）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）の少なくとも１つであり、より好ましくは、遺伝的特徴（Ａ）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）のすべてである。別の好ましい態様において、検出対象となる遺伝的特徴は、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）の少なくとも１つであり、より好ましくは、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）のすべてである。別の好ましい態様において、検出対象となる遺伝的特徴は、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）の少なくとも１つであり、より好ましくは、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｄ）のすべてである。別の好ましい態様において、検出対象となる遺伝的特徴は、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｅ’）の少なくとも１つであり、より好ましくは、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｅ’）のすべてである。別の好ましい態様において、検出対象となる遺伝的特徴は、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｄ’）の少なくとも１つであり、より好ましくは、遺伝的特徴（Ａ’）と遺伝的特徴（Ｂ’）～（Ｄ’）のすべてである。なお、上記のとおり、本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）に係る変異は連鎖不平衡の状態にあるため、これらの遺伝的特徴のいずれか１つを検出することにより、残りの遺伝的特徴の存否を推定し得る。
　本発明のスクリーニング方法は、上記の少なくとも１つの遺伝的特徴の存在が検出された植物体を被験植物体の中から選択する工程をさらに含んでもよい。

　本発明の遺伝的特徴の存在は、例えば、
（Ｉ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレル（例えば、配列番号１６、１７、１８又は１９の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルａ」と称することがある）の存在、
（ＩＩ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレル（例えば、配列番号２０、２１、２２又は２３の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルｂ」と称することがある）の存在、
（ＩＩＩ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレル（例えば、配列番号２４、２５、２６又は２７の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルｃ」と称することがある）の存在、
（ＩＶ）配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレル（例えば、配列番号２８、２９、３０又は３１の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルｄ」と称することがある）の存在、及び／又は
（Ｖ）配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレル（例えば、配列番号３２、３３、３４又は３５の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルｅ」と称することがある）の存在
により決定することができる。

　本発明の遺伝的特徴の不在は、例えば、
（ｉ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＴであるアレル（例えば、配列番号１、６６、６７又は６８の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルＡ」と称することがある）のみの存在、
（ｉｉ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＡであるアレル（例えば、配列番号２、６９、７０又は７１の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルＢ」と称することがある）のみの存在、
（ｉｉｉ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＣであるアレル（例えば、配列番号３、７２、７３又は７４の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルＣ」と称することがある）のみの存在、
（ｉｖ）配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＡであるアレル（例えば、配列番号４、７５、７６又は７７の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルＤ」と称することがある）のみの存在、及び／又は
（ｖ）配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＣであるアレル（例えば、配列番号５、７８、７９又は８０の塩基配列を含むアレル、以下、「アレルＥ」と称することがある）のみの存在、
により決定することができる。

　本発明の遺伝的特徴（Ａ’）の存在は、例えば、アレルａのみの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ａ’’）の存在は、例えば、アレルａとアレルＡの両方の存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｂ’）の存在は、例えば、アレルｂのみの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｂ’’）の存在は、例えば、アレルｂとアレルＢの両方の存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｃ’）の存在は、例えば、アレルｃのみの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｃ’’）の存在は、例えば、アレルｃとアレルＣの両方の存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｄ’）の存在は、例えば、アレルｄのみの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｄ’’）の存在は、例えば、アレルｄとアレルＤの両方の存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｅ’）の存在は、例えば、アレルｅのみの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｅ’’）の存在は、例えば、アレルｅとアレルＥの両方の存在により決定することができる。

　本発明の遺伝的特徴（Ａ’）の不在は、例えば、アレルＡの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ａ’’）の不在は、例えば、アレルＡかアレルａのいずれか一方のみの存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｂ’）の不在は、例えば、アレルＢの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｂ’’）の不在は、例えば、アレルＢかアレルｂのいずれか一方のみの存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｃ’）の不在は、例えば、アレルＣの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｃ’’）の不在は、例えば、アレルＣかアレルｃのいずれか一方のみの存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｄ’）の不在は、例えば、アレルＤの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｄ’’）の不在は、例えば、アレルＤかアレルｄのいずれか一方のみの存在により決定することができる。
　本発明の遺伝的特徴（Ｅ’）の不在は、例えば、アレルＥの存在により決定することができる。遺伝的特徴（Ｅ’’）の不在は、例えば、アレルＥかアレルｅのいずれか一方のみの存在により決定することができる。

　本発明の遺伝的特徴の検出方法の具体例としては、ＰＣＲ法、ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法、シーケンス法、マイクロアレイ法、インベーダー法、ＴＩＬＬＩＮＧ法、ＲＡＤ法、ＲＦＬＰ法、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法、ＡＦＬＰ法、ＳＳＬＰ法、ＣＡＰＳ法、ｄＣＡＰＳ法、ＡＳＯ法、ＡＲＭＳ法、ＤＧＧＥ法、ＣＣＭ法、ＤＯＬ法、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ法、ＴＤＩ法、パドロックプローブ法、分子ビーコン法、ＤＡＳＨ法、ＵＣＡＮ法、ＥＣＡ法、ＰＩＮＰＯＩＮＴ法、ＰＲＯＢＥ法、ＶＳＥＴ法、Ｓｕｒｖｉｖｏｒ　ａｓｓａｙ、Ｓｎｉｐｅｒ　ａｓｓａｙ、Ｌｕｍｉｎｅｘ　ａｓｓａｙ、ＧＯＯＤ法、ＬＣｘ法、ＳＮａＰｓｈｏｔ法、Ｍａｓｓ　ＡＲＲＡＹ法、パイロシーケンス法、ＳＮＰ－ＩＴ法、融解曲線分析法等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

　ＰＣＲ法の場合、３’末端部分が本発明の変異部位に相補的な配列を有するようなプライマーを作製することが好ましい。このように設計されたプライマーを用いると、鋳型となるサンプルが本発明の変異を有する場合には、プライマーが完全に鋳型にハイブリダイズするため、ポリメラーゼ伸長反応が進むが、鋳型が本発明の変異を有しない場合には、プライマーの３’末端のヌクレオチドが鋳型とミスマッチを生じるので、伸長反応は起こらない。したがって、このようなプライマーを用いてＰＣＲ増幅を行い、増幅産物をアガロースゲル電気泳動等によって分析し、所定のサイズの増幅産物が確認できれば、サンプルである鋳型が変異を有していることになり、増幅産物が存在しない場合には、鋳型が変異を有していないものと判断できる。
　或いは、本発明の変異とプライマー配列とは重複させず、かつ本発明の遺伝子変異をＰＣＲ増幅させることが可能なようにプライマー配列を設計し、増幅されたヌクレオチド断片の塩基配列をシーケンスすることにより、本発明の遺伝的特徴を検出することができる。
　ＰＣＲ及びアガロースゲル電気泳動については、以下を参照：Sambrook, Fritsch and Maniatis, ”Molecular Cloning: A Laboratory Manual” 2nd Edition (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press。

　ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法とは、蛍光標識したアレル特異的オリゴとＴａｑ　ＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲ反応とを利用した方法である（Livak, K.J. Genet. Anal. 14, 143 (1999)； Morris T. et al., J. Clin. Microbiol. 34, 2933 (1996)）。
　シーケンス法とは、変異を含む領域をＰＣＲにて増幅させ、Ｄｙｅ　Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ等を用いてＤＮＡ配列をシーケンスすることで、変異の有無を解析する方法である（Sambrook, Fritsch and Maniatis, ”Molecular Cloning: A Laboratory Manual” 2nd Edition (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press）。
　ＤＮＡマイクロアレイは、ヌクレオチドプローブの一端が支持体上にアレイ状に固定されたものであり、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅチップ、マイクロチップ、ビーズアレイ等を包含する。本発明の変異部位と相補的な配列を含むプローブを用いることで、網羅的に本発明の多型の有無を検出することができる。ＤＮＡチップ等のＤＮＡマイクロアレイアッセイとしてはＧｅｎｅＣｈｉｐアッセイが挙げられる（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社；米国特許第６，０４５，９９６号、同第５，９２５，５２５号、及び同第５，８５８，６５９号参照）。ＧｅｎｅＣｈｉｐ技術は、チップに貼り付けたオリゴヌクレオチドプローブの小型化高密度マイクロアレイを利用するものである。

　インベーダー法とは、ＳＮＰ等の変異のそれぞれのアレルに特異的な２種類のレポータープローブ及び１種類のインベーダープローブの鋳型ＤＮＡへのハイブリダイゼーションと、ＤＮＡの構造を認識して切断するという特殊なエンドヌクレアーゼ活性を有するＣｌｅａｖａｓｅ酵素によるＤＮＡの切断を組み合わせた方法である（Livak, K. J. Biomol. Eng. 14, 143-149 (1999)； Morris T. et al., J. Clin.Microbiol. 34, 2933 (1996)； Lyamichev, V. et al., Science, 260, 778-783 (1993)等）。
　ＴＩＬＬＩＮＧ（Targeting Induced Local Lesions IN Genomes）法とは、変異導入した突然変異体集団のゲノム中の変異ミスマッチをＰＣＲ増幅とＣＥＬ　Ｉヌクレアーゼ処理によってスクリーニングする方法である。

　一態様において、本発明の遺伝的特徴（Ａ）は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたｄＣＡＰＳ法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号３６の３’末端から１５～３９塩基長の連続する配列を含むフォワードプライマーと、配列番号１又は１６の４１位より３’側に位置する任意の連続する１５塩基以上の配列に相補的な配列（例えば、配列番号３７）を含むリバースプライマーとを含むプライマーセット、又は、配列番号８１又は８２の３’末端から１５～２０塩基長の連続する配列を含むフォワードプライマーと、配列番号８３又は８４の２２位より３’側に位置する任意の連続する１５塩基以上の配列に相補的な配列（例えば、配列番号８５）を含むリバースプライマーを含むプライマーセット。
・制限酵素：
　配列番号３６に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＲｓａＩ、配列番号８１に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＴｓｐ４５Ｉ、配列番号８２に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＡｃｉＩをそれぞれ含む。

　一態様において、本発明の遺伝的特徴（Ｂ）は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたｄＣＡＰＳ法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号４２、８６又は８７の３’末端から１５～２０塩基長の連続する配列を含むフォワードプライマーと、配列番号２又は２０の２２位より３’側に位置する任意の連続する１５塩基以上の配列に相補的な配列（例えば、配列番号４３）を含むリバースプライマーを含むプライマーセット。
・制限酵素：
　配列番号４２に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＡｃｌＩ、配列番号８６に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＡｌｕＩ、配列番号８７に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＰａｃＩをそれぞれ含む。

　一態様において、本発明の遺伝的特徴（Ｃ）は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたｄＣＡＰＳ法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号４８、８８又は８９の３’末端から１５～２０塩基長の連続する配列を含むフォワードプライマーと、配列番号５０又は５１の２２位より３’側に位置する任意の連続する１５塩基以上の配列に相補的な配列（例えば、配列番号４９）を含むリバースプライマーとを含むプライマーセット。
・制限酵素：
　配列番号４８に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＡｌｕＩ、配列番号８８に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＢｇｌＩ、配列番号８９に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＳｃａＩをそれぞれ含む。

　一態様において、本発明の遺伝的特徴（Ｄ）は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたｄＣＡＰＳ法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号５４、９０又は９１の３’末端から１５～２１塩基長の連続する配列を含むフォワードプライマーと、配列番号５６又は５７の２３位より３’側に位置する任意の連続する１５塩基以上の配列に相補的な配列（例えば、配列番号５５）を含むリバースプライマーとを含むプライマーセット。
・制限酵素：
　配列番号５４に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＡｌｕＩ、配列番号９０に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＭｂｏＩ、配列番号９１に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＢｇｌＩＩをそれぞれ含む。

　一態様において、本発明の遺伝的特徴（Ｅ）は、例えば、以下のプライマーセットと制限酵素とを用いたｄＣＡＰＳ法により検出することができる。
・プライマーセット：
　配列番号６０、９２又は９３の３’末端から１５～２２塩基長の連続する配列を含むフォワードプライマーと、配列番号６２又は６３の２４位より３’側に位置する任意の連続する１５塩基以上の配列に相補的な配列（例えば、配列番号６１）を含むリバースプライマーとを含むプライマーセット。
・制限酵素：
　配列番号６０に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＡｌｕＩ、配列番号９２に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＭｂｏＩ、配列番号９３に基づくプライマーセットに対応する制限酵素はＢｇｌＩＩをそれぞれ含む。

　プライマーの配列は、上記の条件を満たす範囲で最適化することができる。プライマー設計の最適化については、例えば、Sambrook and Russell, ”Molecular Cloning: A Laboratory Manual” 3rd Edition (2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press等を参照のこと。上記各プライマーは、１５～５０塩基長、１８～４８塩基長、２０～４５塩基長、３０～４０塩基長等であってよい。各プライマーセットに対応する制限酵素には、上記酵素と同じ配列を認識し、同じ個所を切断する他の酵素、又は上記酵素のアイソシゾマーも含まれる。また、本発明の遺伝的特徴に基づき、上記以外のプライマーセットを設計し、それに対応する制限酵素を選択することも可能である。

　特定の態様において、本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）は、例えば、以下の配列を有するプライマーセットと制限酵素とを用いたｄＣＡＰＳ法により検出することができる。

　なお、上記プライマーセットと制限酵素との組合せは一例にすぎず、当業者であれば、本発明の遺伝的特徴を検出し得る他のプライマーセットと制限酵素との組合せを見出すことができる。

　本発明のスクリーニング方法は、被験ステビア植物体の組織（例えば葉）のＲｅｂＥの含有量を測定する工程をさらに含んでもよい。含有量の測定は、本発明の植物体の項に記載したとおりである。また、この態様において、本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物体のうち、ＲｅｂＥの含有量が高い個体を選択して、これを他のステビア植物体と交配し、得られた子植物体について、本発明のスクリーニング方法を適用してもよい。したがって、本発明のスクリーニング方法は、被験ステビア植物体のゲノムから、本発明の遺伝的特徴を検出する工程を含み、さらに、以下の１以上の工程を含み得る。
（ｉ）本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物組織（例えば葉）のＲｅｂＥの含有量を測定する工程、
（ｉｉ）本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物体のうち、ＲｅｂＥの含有量が高い個体を選択する工程、
（ｉｉｉ）選択したＲｅｂＥの含有量が高い個体を他のステビア植物体と交配する工程、
（ｉｖ）交配により得られた子植物体のゲノムから、本発明の遺伝的特徴を検出する工程、
（ｖ）本発明の遺伝的特徴が検出された子植物組織のＲｅｂＥの含有量を測定する工程、
（ｖｉ）本発明の遺伝的特徴が検出された子植物体のうち、ＲｅｂＥの含有量が高い個体を選択する工程。

　また、本発明のスクリーニング方法は、以下の１以上の工程を含み得る。
（ｉ’）本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物組織（例えば葉）のステビオシド又はＴＳＧの含有量を測定する工程、
（ｉｉ’）本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物体のうち、ＲｅｂＥ／ステビオシド又はＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比が高い個体を選択する工程、
（ｉｉｉ’）選択したＲｅｂＥ／ステビオシド又はＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比が高い個体を他のステビア植物体と交配する工程、
（ｉｖ’）交配により得られた子植物体のゲノムから、本発明の遺伝的特徴を検出する工程、
（ｖ’）本発明の遺伝的特徴が検出された子植物組織のステビオシド又はＴＳＧの含有量を測定する工程、
（ｖｉ’）本発明の遺伝的特徴が検出された子植物体のうち、ＲｅｂＥ／ステビオシド又はＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比が高い個体を選択する工程。

　選択するＲｅｂＥの含有量、ＲｅｂＥ／ステビオシド又はＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比が高い個体は、例えば、本発明の遺伝的特徴が検出された被験ステビア植物体のうち、ＲｅｂＥの含有量、ＲｅｂＥ／ステビオシド又はＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比の高さに関し上位５０％まで、上位４０％まで、上位３０％まで、上位２０％まで、上位１０％まで、上位５％まで、上位４％まで、上位３％まで、上位２％まで又は上位１％までの個体等であってよい。また、交配する他のステビア植物体は、本発明の遺伝的特徴を含んでいても含んでいなくてもよい。上記態様において、工程（ｉｉｉ）～（ｖｉ）又は工程（ｉｉｉ’）～（ｖｉ’）は、複数回繰り返すことができる。このようにして、ＲｅｂＥの含有量、ＲｅｂＥ／ステビオシド又はＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比がより高いステビア植物体をスクリーニングすることができる。

　本発明のスクリーニング方法において、被験ステビア植物体は、天然ステビア植物体であっても、非遺伝子組換ステビア植物体であってもよい。非遺伝子組換ステビア植物体については、本発明の植物体の項に記載したとおりである。
　本発明のスクリーニング方法において、被験ステビア植物体は、変異誘発処理を行ったステビア植物体及びその子孫植物体を含んでもよい。変異の誘発については、本発明の植物体の項に記載したとおりであり、変異誘発剤による処理や、放射線又は光線の照射による処理等を含む。

　本発明のスクリーニング方法により得られる植物体におけるＲｅｂＥの量、ステビオシドの量、ＴＳＧ量に対するＲｅｂＥの量等は、本発明の植物体の項において記載したとおりである。

　また、本発明は、上記に記載されたプライマーセット及びその組合せ、例えば、上記表１～５に記載のプライマーセット、及び、これらのプライマーセット同士の組合せを提供する。本発明は、さらに、配列番号１～５、１６、２０、２４、２８及び３２からなる群から選択される塩基配列を有する領域をＰＣＲにより増幅し得るプライマーセット、例えば、配列番号６の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号７の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット、配列番号８の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号９の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット、配列番号１０の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号１１の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット、配列番号１２の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号１３の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット、配列番号１４の塩基配列を含むフォワードプライマーと、配列番号１５の塩基配列を含むリバースプライマーとのプライマーセット等を提供する。

　さらに、本発明は、本発明の遺伝的特徴の存在及び／又は不在を検出し得るプローブ（以下、「本発明のプローブ」と称する場合がある）を提供する。本発明のプローブは、本発明の遺伝的特徴の存在及び／又は不在の各種検出方法（例えば、Ｔａｑ　Ｍａｎ　ＰＣＲ法等のリアルタイムＰＣＲ法）に適した構造を有し得る。例えば、本発明のプローブは、本発明の変異部位を含むゲノムの部分に相補性を有する塩基配列を含み得る。かかるプローブの非限定例としては、配列番号１７～１９、２１～２３、２５～２７、２９～３１、３３～３５、６６～８０から選択される塩基配列に相補性を有する配列を含むものが挙げられる。これらの配列のうち、配列番号１７～１９、２１～２３、２５～２７、２９～３１、３３～３５は本発明の変異を含むアレルに特異的であり、配列番号６６～８０は、本発明の変異を含まないアレルに特異的である。また、配列番号１７～１９はアレルａに特異的であり、配列番号２１～２３はアレルｂに特異的であり、配列番号２５～２７はアレルｃに特異的であり、配列番号２９～３１はアレルｄに特異的であり、配列番号３３～３５はアレルｅに特異的である。一方、配列番号６６～６８はアレルＡに特異的であり、配列番号６９～７１はアレルＢに特異的であり、配列番号７２～７４はアレルＣに特異的であり、配列番号７５～７７はアレルＤに特異的であり、配列番号７８～８０はアレルＥに特異的である。本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の存在は、本発明の変異を含むアレルのみの検出、又は、本発明の変異を含むアレルの検出と本発明の変異を含まないアレルの両方の検出により検出することができ、本発明の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の不在は、本発明の変異を含まないアレルのみの検出により検出することができる。本発明の遺伝的特徴（Ａ’）～（Ｅ’）の存在は、本発明の変異を含むアレルのみの検出により検出することができ、本発明の遺伝的特徴（Ａ’）～（Ｅ’）の不在は、本発明の変異を含まないアレルの検出により、検出することができる。本発明のプローブは、好ましくは標識を有する。かかる標識の非限定例としては、蛍光標識、発光標識、放射性標識、色素、酵素、クエンチャー、検出可能な標識との結合部分等が挙げられる。特定の態様において、本発明のプローブは、配列番号１７～１９、２１～２３、２５～２７、２９～３１、３３～３５、６６～８０から選択される塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチドと、標識とを有する。

　本発明はさらに、上記のプライマーセットとこれに対応する制限酵素とを含むキットを提供する。特定の態様において、本発明のキットは前記表１～５に記載のプライマーセットと、これに対応する制限酵素とを含む。
　本発明はまた、上記の配列番号１～５、１６、２０、２４、２８及び３２からなる群から選択される塩基配列を有する領域をＰＣＲにより増幅し得るプライマーセットと、それに対応する上記の本発明のプローブとを含むキットを提供する。

　これらのプライマーセット、プローブ及びキットは、本発明の遺伝的特徴を検出するために用いること、本発明のスクリーニング方法に用いること等が可能である。また、これらのプライマーセット及びキットには、本発明の遺伝的特徴の検出や、本発明のスクリーニング方法に関する説明を含む指示、例えば、使用説明書や、使用方法に関する情報を含むサイトの情報（例えば、ＵＲＬ、二次元コード）、使用方法に関する情報を記録した媒体（例えば、フレキシブルディスク、ＣＤ、ＤＶＤ、ブルーレイディスク、メモリーカード、ＵＳＢメモリー）等が含まれていてもよい。

　一部の態様において、本発明は、遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つの存在及び／又は不在を検出するための試薬を含む、本発明のステビア植物体のスクリーニングキットを提供する。試薬は、ＣＡＰＳ法、ｄＣＡＰＳ法又はＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法に使用するプライマー及び／又はプローブを含み得る。特定の態様において、遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つの存在及び／又は不在を検出するための試薬は、上記の遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つをｄＣＡＰＳ法で検出するためのプライマーセットと制限酵素との組合せ、例えば表１～５に記載のプライマーセットと制限酵素との組合せ、又は、ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法等で使用することができる、本発明の変異部位（例えば、配列番号１６～３５から選択される配列を含む部位）を増幅するプライマーセットと、遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）の少なくとも１つに係る部位（例えば、配列番号１７～１９、２１～２３、２５～２７、２９～３１、３３～３５から選択される配列を含む部位）に相補的な塩基配列を有するプローブとの組合せを含む。

４．植物体由来ＲｅｂＥ含有抽出物の製造方法、当該抽出物及び当該抽出物を用いた製品
　本発明のさらなる態様において、本発明の植物体、本発明のスクリーニング方法により選別されたステビア植物体若しくは本発明の作出方法により製造されたステビア植物体、又は当該植物体の種子、葉（例えば、乾燥葉又は新鮮葉）、組織、組織培養物若しくは細胞からＲｅｂＥ含有抽出物を得る工程を含む、ＲｅｂＥ含有抽出物の製造方法（以下、「本発明のＲｅｂＥ含有抽出物の製造方法」と称する場合がある）が提供される。

　さらに、本発明の植物体、本発明のスクリーニング方法により選別されたステビア植物体若しくは本発明の作出方法により製造されたステビア植物体、又は当該植物体の種子、葉（例えば、乾燥葉又は新鮮葉）、組織、組織培養物若しくは細胞からのＲｅｂＥ含有抽出物（以下、「本発明のＲｅｂＥ含有抽出物」と称する場合がある）が提供される。本発明のＲｅｂＥ含有抽出物は、好適には、本発明のＲｅｂＥ含有抽出物の製造方法により製造されたものである。さらにまた、本発明のＲｅｂＥ含有抽出物からＲｅｂＥを精製する工程を含む、ＲｅｂＥの製造方法（以下、「本発明のＲｅｂＥの製造方法」と称する場合がある）が提供される。本発明のＲｅｂＥの製造方法は、本発明の植物体、本発明のスクリーニング方法により選別されたステビア植物体又は本発明の作出方法により製造されたステビア植物体からＲｅｂＥを含む抽出物を得る工程をさらに含んでもよい。

　ＲｅｂＥ含有抽出物は、例えば、本発明の植物体の新鮮葉又は乾燥葉に適切な溶媒（水等の水性溶媒又はアルコール、エーテル及びアセトン等の有機溶媒）を反応させることにより得ることができる。抽出条件等は上記Ohta et al.又はＷＯ２０１０／０３８９１１に記載の方法や、後述の実施例に記載の方法を参照することができる。

　また、酢酸エチルその他の有機溶媒：水の勾配、高速液体クロマトグラフィー（High Performance Liquid Chromatography：ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー、飛行時間型質量分析（Time-of-Flight mass spectrometry：ＴＯＦ－ＭＳ）、超高性能液体クロマトグラフィー（Ultra (High) Performance Liquid chromatography：ＵＰＬＣ）等の公知の方法を用いることによりＲｅｂＥ含有抽出物を精製することもできる。

　本発明のＲｅｂＥ含有抽出物は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア種から得られたＲｅｂＥ含有抽出物と比べＲｅｂＥをより高い含量で含む。
　本発明のＲｅｂＥ含有抽出物は、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体からのＲｅｂＥ含有抽出物と比べＲｅｂＥを１００％より多い、１０５％以上、１０９％以上、１５０％以上、２００％以上、２１０％以上、２９０％以上、４００％以上、６００％以上、８００％以上、１０００％以上、１２００％以上、１３００％以上、１４００％以上、１５００％以上、１６００％以上、１７００％以上、１８００％以上、１９００％以上、２０００％以上、２１００％以上、２２００％以上、２３００％以上、２４００％以上、２５００％以上、２６００％以上、２７００％以上、２８００％以上、２９００％以上、３０００％以上、３１００％以上、３２００％以上、３３００％以上、３４００％以上、３５００％以上、３６００％以上、３７００％以上、３８００％以上、３９００％以上、４０００％以上、４１００％以上、４２００％以上、４３００％以上、４４００％以上、４５００％以上、４６００％以上、４７００％以上、４８００％以上、４９００％以上、５０００％以上高い含量で含んでいてもよい。上限は、特に制限されないが、例えば２１０００％以下、１８０００％以下等であってよい。ここで、本発明のＲｅｂＥ含有抽出物と、本発明の遺伝的特徴を有しないステビア植物体から得られたＲｅｂＥ含有抽出物は、同じ方法で得られたものであってよい。

　このようにして得られた本発明のＲｅｂＥ含有抽出物及び／又は本発明のＲｅｂＥの製造方法により得られるＲｅｂＥと他の成分とを混合することにより、ＲｅｂＥの含量を高めた新規な飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品を製造することができる。そこで、本発明は、別の実施態様として、本発明のＲｅｂＥ含有抽出物及び／又は本発明のＲｅｂＥの製造方法により得られるＲｅｂＥを提供する工程、及び、かかる抽出物及び／又はＲｅｂＥを、飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の原料に添加する工程を含む、飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法を提供する。

　さらに、本発明は、前記製造方法により得られた、ＲｅｂＥの含量を高めた新規な飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品を提供する。ここで飲食品とは、飲料及び食品を意味する。したがって、ある実施態様では、本発明は新規な飲料、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品を提供し、また、当該飲料、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法を提供する。

　５．本発明の植物体に係る塩基配列
　本発明は、別の態様において、本発明の植物体に係る塩基配列を提供する。
　遺伝的特徴（Ａ）を有するステビア植物体に係る塩基配列は、配列番号１６～１９から選択される塩基配列を含む、又はそれからなる。遺伝的特徴（Ｂ）を有するステビア植物体に係る塩基配列は、配列番号２０～２３から選択される塩基配列を含む、又はそれからなる。遺伝的特徴（Ｃ）を有するステビア植物体に係る塩基配列は、配列番号２４～２７から選択される塩基配列を含む、又はそれからなる。遺伝的特徴（Ｄ）を有するステビア植物体に係る塩基配列は、配列番号２８～３１から選択される塩基配列を含む、又はそれからなる。遺伝的特徴（Ｅ）を有するステビア植物体に係る塩基配列は、配列番号３２～３５から選択される塩基配列を含む、又はそれからなる。

　以下に本発明に関する実施例を記載するが、本発明はこれらの具体的な態様に限定されるものではない。

［実施例１］高ＲｅｂＥステビア植物の作製
　本発明者らは、ＲｅｂＤを多く含有するステビア植物体を得るべく、ステビア植物体の選別と交配を繰り返した。その過程で、ＲｅｂＥを多く含有するステビア植物体の存在に気づいた。具体的な手順は以下のとおりである。

１．試験系統の作製
　野生型ステビア種子（市販品種）に対してエチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）処理を行い、これをサントリーワールドリサーチセンター内温室にて播種、栽培した。成長した各個体より適量の新鮮葉をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ（島津ＬＣＭＳ８０５０）にてＲｅｂＤの濃度を定量した。具体的には、０．２５ｇの新鮮葉をフリーズドライにより乾燥し、破砕乾物０．０５ｇを１００倍量（５ｍＬ）の純水中に投入した。超音波処理２０分にて抽出し、遠心・濾過した後、３２％アセトニトリルで６０倍希釈したものをサンプル液とした。このサンプル液１ｍＬをＬＣＭＳ８０５０のＭＲＭモードにてＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、ＲｅｂＤの濃度を定量し、その濃度が２％以上の個体を選別して交配し、種子を得た。このような選別を４世代にわたって繰り返し、雑種第４代（Ｓ４世代）の集団Ａ及びＢを得た。

２．各個体に含まれるステビオール配糖体の測定
　集団Ａ及びＢの各個体より適量の新鮮葉をサンプリングし、上記１．と同様にＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行い、ＲｅｂＡ、ＲｅｂＢ、ＲｅｂＣ、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＥ、ＲｅｂＦ、ＲｅｂＧ、ＲｅｂＭ、ＲｅｂＮ及びステビオシド（ＳＴＶ）の濃度（乾燥葉に対する質量％）を定量し、その合計をＴＳＧ濃度とした。結果を下表に示す。なお、表中の各値は、ステビア植物体一個体の測定値である。

　上記結果が示すとおり、集団ＡのうちＳ４１－１～Ｓ４１－７３は、乾燥葉ベースで０．１０質量％を超える量のＲｅｂＥを含んでおり、すなわち、ＲｅｂＥを多く含んでいた。そのうち、Ｓ４１－１～Ｓ４１－２２は、乾燥葉ベースで０．６２質量％を超える量のＲｅｂＥを含んでおり、すなわち、特に多くのＲｅｂＥを含んでいた。

　上記結果が示すとおり、集団ＢのうちＳ４２－１～Ｓ４２－７８は、乾燥葉ベースで０．０６質量％を超える量のＲｅｂＥを含んでおり、すなわち、ＲｅｂＥを多く含んでいた。さらに、そのうちＳ４２－１～Ｓ４２－２９は、乾燥葉ベースで０．４９質量％を超える量のＲｅｂＥを含んでおり、すなわち、ＲｅｂＥを特に多く含んでいた。

［実施例２］高ＲｅｂＥステビア植物体に特有の遺伝的特徴の検出
　実施例１で試験した一部の個体の新鮮葉からゲノムＤＮＡを抽出し、シーケンサー（HiSeq 2500、Illumina）により遺伝的特徴の分析を行った。
　その結果、ＲｅｂＥ含量の高い系統で遺伝的特徴（Ａ）～（Ｅ）が検出される傾向がみられた。そこで、遺伝的特徴の検出を効率化すべく、遺伝的特徴（Ａ）を検出するためのｄＣＡＰＳプライマーを作製し、残りの個体についてこれらの遺伝的特徴の有無をｄＣＡＰＳ法により評価した。なお、遺伝的特徴（Ｂ）～（Ｅ）については、変異部位が遺伝的特徴（Ａ）のものとゲノム上の位置が近く、連鎖不平衡の状態にあると考えられたため、ｄＣＡＰＳ法による検討は省略した。

　ｄＣＡＰＳプライマー及び制限酵素は、以下のものを使用した。

　ｄＣＡＰＳ法による遺伝的特徴の検出は以下のように行った。まず、実施例１で試験した各個体の新鮮葉からゲノムＤＮＡを抽出し、各遺伝的特徴に対応する上記ｄＣＡＰＳプライマーを用いてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物に上記制限酵素を添加し、３７℃で酵素反応を行った。マイクロチップ型電気泳動装置ＬａｂＣｈｉｐ　ＧＸ　Ｔｏｕｃｈ　ＨＴ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により制限酵素処理物の電気泳動を行い、得られたバンドパターンに基づいて遺伝的特徴の有無を判定した。具体的には、非分解物のバンドのみが認められた個体をＡ’、分解産物と非分解物の両方のバンドが認められた個体をＡ’’、分解産物のバンドのみが認められた個体を×と判定した。Ａ’とＡ’’を、遺伝的特徴（Ａ）有りと評価し、×を遺伝的特徴（Ａ）無しと評価した。特にＡ’は、遺伝的特徴（Ａ’）有りと評価した。

　下表に示すとおり、集団Ａ、Ｂ両方において、ＲｅｂＥ含量の多いステビア植物体では、遺伝的特徴（Ａ）を有する傾向にあった。一方、ＲｅｂＥ含量の少ないステビア植物体（集団Ａにおいては０．１０質量％以下。集団Ｂにおいては０．０６質量％以下。）は遺伝的特徴（Ａ）を有さない傾向にあった。また、特にＲｅｂＥ含量の多いステビア植物体（Ｓ４１－１～Ｓ４１－２２でＲｅｂＥ含量が２．１０％以上、Ｓ４２－１～Ｓ４２－２９でＲｅｂＥ含量が１．７４％以上）は、遺伝的特徴（Ａ’）を有していた。

　上記結果から明らかなように、本発明の遺伝的特徴を有する系統は、ＲｅｂＥ含量が高い傾向にある（集団Ａにおいて平均約１．１３％、最大４．１６％。集団Ｂにおいて平均約１．１７％、最大３．５２％）。本発明の遺伝的特徴（Ａ’）を有する系統は、特にＲｅｂＥ含有量が高い（集団Ａにおいて平均約２．９８％、最大４．１６％。集団Ｂにおいて平均約２．７９％、最大３．５２％）。
　本発明の遺伝的特徴を有する系統は、ＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比が高い傾向にあり（集団Ａにおいて、最小２．４％、最大４５．８％。集団Ｂにおいて、最小１．５％、最大３９．３％）、本発明の遺伝的特徴（Ａ’）を有する系統は、ＴＳＧに対するＲｅｂＥの質量比が特に高い傾向にあった（集団Ａにおいて、最小２５．５％、最大４５．８％。集団Ｂにおいて、最小２２．４％、最大３９．３％）。
　本発明の遺伝的特徴を有する系統は、ステビオシドに対するＲｅｂＥ含量が１以下（集団Ａにおいて０．１１～０．８５。集団Ｂにおいて０．０７～０．６５）であり、本発明の遺伝的特徴（Ａ’）を有する系統は、ステビオシドに対するＲｅｂＥ含量が０．０７～０．８５（集団Ａにおいて、０．３５～０．８５。集団Ｂにおいて、０．２９～０．６５）であった。

　本発明によってＲｅＥ等の有用なステビオール配糖体がより効率的に提供可能になるので、こうしたステビオール配糖体を含む上質な味質の飲料、食品、甘味料組成物、香料又は医薬品等の提供を促進することができる。

Claims

　以下の（Ａ）～（Ｅ）の遺伝的特徴の少なくとも１つを有する、ステビア植物体。
（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
　乾燥葉の単位質量当たり０．０７％以上のレバウジオシドＥを含む、請求項１に記載の植物体。
　非遺伝子組換ステビア植物体である、請求項１又は２に記載の植物体。
　変異誘発処理を行ったステビア植物体及びその子孫植物体を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の植物体。
　請求項１～４のいずれか一項に記載の植物体の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞。
　胚、分裂組織細胞、花粉、葉、根、根端、花弁、プロトプラスト、葉の切片及びカルスから選択される、請求項６に記載の組織、組織培養物又は細胞。
　請求項１～４のいずれか一項に記載のステビア植物体と第２のステビア植物体とを交雑させる工程を含む、乾燥葉の単位質量あたり０．０７％以上のレバウジオシドＥを含むことを特徴とする、高レバウジオシドＥ含有ステビア植物体を作出する方法。
　第２の植物体が請求項１～４のいずれか一項に記載のステビア植物体である、請求項７に記載の方法。
　レバウジオシドＥを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の植物体、請求項５に記載の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞の抽出物。
　請求項９に記載の抽出物を含む飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品。
　請求項１～４のいずれか一項に記載の植物体、請求項５に記載の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞からレバウジオシドＥ含有抽出物を得る工程を含む、レバウジオシドＥ含有抽出物の製造方法。
　請求項１１に記載のレバウジオシドＥ含有抽出物からレバウジオシドＥを精製する工程を含む、レバウジオシドＥの製造方法。
　請求項１～４のいずれか一項に記載の植物体の抽出物、請求項５に記載の種子、乾燥葉、組織、組織培養物又は細胞の抽出物、或いは、請求項１１に記載の抽出物を提供する工程、及び
　前記抽出物を、飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の原料に添加する工程
を含む、飲食品、甘味料組成物、香料又は医薬品の製造方法。
　被験植物体のゲノムから、以下の（Ａ）～（Ｅ）の遺伝的特徴の少なくとも１つの存在及び／又は不在を検出する工程を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のステビア植物体をスクリーニングする方法。
（Ａ）配列番号１の４０位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｂ）配列番号２の２１位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｃ）配列番号３の２８位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｄ）配列番号４の５９位に相当する位置の塩基がＣであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
（Ｅ）配列番号５の６４位に相当する位置の塩基がＴであるアレルについてホモ接合性又はヘテロ接合性である。
　さらに、葉組織のレバウジオシドＥの含有量を測定する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
　スクリーニングにより得られる植物体が、乾燥葉の単位質量あたり０．０７％以上のレバウジオシドＥを含む、請求項１４又は１５に記載の方法。