WO2021182330A1 - 抗がん剤効果を増強するがん治療補助剤 - Google Patents

抗がん剤効果を増強するがん治療補助剤 Download PDF

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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to a cancer treatment aid that enhances the effect of an anticancer drug on chemotherapeutic drug-resistant cancers and the like.
  • Non-Patent Document 1 In the treatment of lung cancer, it has been shown that administration of a high concentration of ambroxol as a single agent improved the results regarding the occurrence of postoperative pulmonary complications and the administration period of antibiotics (Non-Patent Document 1). ), And it has been shown that the effect of the anticancer drug was enhanced by the combined use of paclitaxel, which is a taxane-based anticancer drug, and ambroxol (Non-Patent Document 2). However, in Cited Documents 1 and 2, ambroxol is not used for the purpose of acting on the anticancer drug itself to enhance the effect of the anticancer drug, and ambroxol is actually used as an anticancer drug. It was not clear if it would act on the cancer drug itself. On the other hand, these documents show that the expectorant action of ambroxol suppressed the physical symptoms caused by lung cancer, thereby suppressing the exacerbation of lung cancer.
  • ambroxol When ambroxol was administered in vitro to a drug-resistant ovarian cancer cell line together with cisplatin, the rate of cell death of cancer cells increased compared to cisplatin alone, and ambroxol was an anticancer drug for cisplatin. The result was that the effect was enhanced. Furthermore, when ambroxol and cisplatin were co-administered to tumorigenesis model mice in vivo, tumor growth was suppressed as compared with cisplatin alone, and ambroxol had an anticancer drug effect by cisplatin, that is, a tumor retraction effect. The result was that it was enhanced. Based on the above findings, the present inventors have completed the invention.
  • a cancer treatment aid other than lung cancer which contains a polysulfide remover as an active ingredient and is used in combination with a DNA intercalator type anticancer agent.
  • the cancer treatment aid according to [8], wherein the anticancer drug resistance is resistance to a platinum preparation.
  • a drug for treating cancer other than lung cancer which comprises a polysulfide remover and a DNA intercalator type anticancer agent.
  • Drugs for cancer treatment [18] The cancer therapeutic agent according to any one of [11] to [17], wherein the cancer is an anticancer drug resistant cancer.
  • cancers that show drug resistance to platinum preparations have been confirmed in many cancer types such as uterine cancer, lung cancer, and stomach cancer, in addition to ovarian cancer.
  • a polysulfide remover such as ambroxol
  • a DNA intercalator-type anticancer drug such as a platinum preparation
  • anticancer drugs can be treated against these drug-resistant cancers for which the anticancer drug effect has not been confirmed so far.
  • the effect of the drug can be expected, and drug-resistant cancer, for which treatment options have been limited to surgical radical surgery, can now be selected as a combination treatment with chemotherapy, reducing the physical and mental burden on the patient. Can lead to.
  • ambroxol is a drug that has already been approved as an expectorant, it is considered that there are few obstacles to expanding its indication as a combination drug for anticancer drugs.
  • a is an HE-stained photograph of a CCC tissue section
  • b is a photograph of SERS imaging of a Raman shift 480 cm -1 of a CCC tissue section.
  • the black annotation indicates the cancer cell cluster part (hereinafter, also simply referred to as the cancer part)
  • the white annotation indicates the cancer stromal cell cluster part (hereinafter, also simply referred to as the cancer stromal part). ..
  • This pathological annotation was made by a pathologist. After performing SERS imaging, the sections were used for HE staining. In the figure, the length of the bar is 1 mm.
  • a represents a spectral diagram of ambroxol itself, but there is no clear peak at positions other than Ramanshift 396 cm -1.
  • bc is a spectrum diagram when ambroxol is added to polysulfides (Na 2 S 3 and Na 2 S 4 respectively).
  • d indicates the effect on the survival rate of OVISE cells (cell line derived from clear cell adenocarcinoma of human ovary) as the concentration of ambroxol added increases.
  • e is a diagram showing the effect of addition of 25 ⁇ mol / L ambroxol (black bar graph) on cisplatin-induced cell death of OVISE cells. Cell death was assessed by the Annexin V transfer assay. Luminescence intensity was standardized in cells to which cisplatin (indicated by CDDP in the figure) was not added. In one-way ANOVA with Fisher's LSD test, a P-value of less than 0.05 was considered to be statistically significant.
  • b is an HE-stained photographic diagram of a pancreatic cancer tissue section
  • d is a photographic diagram of SERS imaging of a Raman shift 480 cm -1 of a pancreatic cancer tissue section. After each SERS imaging was performed, the sections were used for HE staining. It is a figure which shows the enhancement of the anticancer agent effect of cisplatin by ambroxol in vivo in the tumor formation model mouse which subcutaneously transplanted OVISE cells.
  • daily intraperitoneal administration of cisplatin from Day 0 to 10 mg / kg / day
  • daily administration of ambroxol from Day 0 to 100 mg / kg / day (in the figure, shown by OVISE + CDDP).
  • N 8
  • N indicates a significant difference P ⁇ 0.05 with respect to the OVISE group
  • ⁇ indicates a significant difference P ⁇ 0.05 with respect to the OVISE + CDDP group.
  • the present invention is a cancer treatment auxiliary agent other than lung cancer (hereinafter, also simply referred to as an auxiliary agent), which contains a polysulfide remover as an active ingredient and is used in combination with a DNA intercalator type anticancer agent.
  • an auxiliary agent which contains a polysulfide remover as an active ingredient and is used in combination with a DNA intercalator type anticancer agent.
  • the polysulfide is a polymer containing one or more disulfide bonds or a salt thereof, and is a compound represented by the chemical formula of RS x R.
  • R is, for example, an alkyl group that may be substituted with H, Na or any substituent, and is preferably Na.
  • x is an arbitrary integer of 2 or more, but x is preferably an integer of 2 to 4.
  • the polysulfide is not particularly limited, but when R is Na, it is preferably Na 2 S 2 , Na 2 S 3 or Na 2 S 4 .
  • the polysulfide remover is an agent that binds to polysulfide and decomposes and eliminates polysulfide when administered to a subject, and reduces the amount of polysulfide expressed in the subject to which the agent is administered. Refers to what you want to do.
  • the polysulfide remover is not particularly limited as long as it has a polysulfide remover action, but the polysulfide remover is preferably a sputum remover, and the sputum remover is preferably ambroxol.
  • the polysulfide remover may be any pharmacologically acceptable salt, for example, a hydrochloride or the like.
  • the DNA intercalator type anticancer agent is an agent that is inserted between the bases of the double-stranded structure of DNA and causes a structural change of DNA to inhibit DNA supercoyling.
  • the DNA intercalator type anticancer agent is not particularly limited, and examples thereof include a platinum preparation, cyclophosphamide, and irinotecan.
  • the platinum preparation is not particularly limited, and examples thereof include cisplatin, carboplatin, and oxaliplatin, and cisplatin is preferable.
  • the DNA intercalator type anticancer agent may be any pharmacologically acceptable salt or may be a hydrate.
  • the cancer to be treated is preferably a cancer having a high level of polysulfide as compared with the level of polysulfide in a non-cancer control tissue, and may be an anticancer drug-resistant cancer. ..
  • the anticancer drug-resistant cancer is preferably a cancer having resistance to a platinum preparation.
  • Anti-cancer drug resistance is defined not only when the effect of the anti-cancer drug is not obtained at all, but also when the therapeutic effect of the anti-cancer drug is weak and the therapeutic effect cannot be sufficiently obtained, or when the anti-cancer drug is used. It refers to the case where the effect is temporary but recurs soon afterwards.
  • the cancer to be treated may be a cancer other than lung cancer, and specific examples thereof include ovarian cancer, pancreatic cancer, breast cancer, and glioma, and the ovary is preferable. Cancer or pancreatic cancer.
  • the ovarian cancer is preferably clear cell cancer of the ovary.
  • the method for measuring the level of polysulfide is not particularly limited, but can be measured by, for example, Raman spectroscopy or an electrochemical measurement method as described in Non-Patent Document 2. It is preferable to measure by Raman spectroscopy, and it is known to those skilled in the art that there are a plurality of methods as Raman spectroscopy, but the present invention is not particularly limited, and for example, conventional resonance Raman spectroscopy or surface-enhanced Raman spectroscopy.
  • the method (SERS) can be used. In Raman spectroscopy, due to the characteristics of the measurement method, a specific peak on the Raman shift shifts by several cm-1 for each measurement.
  • Shift of the peak in each the measurement since it is within often ⁇ 10 cm -1, in the case of Raman shift within ⁇ 10 cm -1 from the peak position, denote the same signals.
  • the specific peak representing polysulfide is shifted depending on the measurement target and is not particularly limited. For example, when the cancer tissue is measured as the measurement target, the peak is at the position of Raman shift 480 ⁇ 10 cm -1. Appears, and when the solution is measured as the measurement target, a peak appears at the position of Raman shift 460 ⁇ 10 cm -1.
  • the level of polysulfide represents the height of a specific peak representing polysulfide when the Raman analysis method is used, but when other measurement methods are used, the measured value of the amount of polysulfide in the cancer tissue, It may represent a correction value obtained by correcting an actually measured value with a control measurement value or the like, or an index value.
  • High levels of polysulfide mean that the levels of polysulfide in the cancerous tissue are higher than the levels of polysulfide in the control tissue. Statistically significant differences are preferred, but not necessarily significant.
  • the control tissue is, for example, the normal tissue of the corresponding part in a healthy person or the cancer tissue of the corresponding part in another cancer patient having cancer in the corresponding tissue.
  • the content of the polysulfide remover in an adjunct or a cancer therapeutic drug described below is not particularly limited as long as the anticancer drug effect of the anticancer drug can be enhanced by the combined use.
  • it may be 5 to 50 nmol / g, 10 to 40 nmol / g, 15 to 35 nmol / g, or 20 to 30 nmol / g.
  • the auxiliary agent or the drug is a liquid agent, for example, it may be 5 to 50 ⁇ mol / L, 10 to 40 ⁇ mol / L, 15 to 35 ⁇ mol / L, or 20 to 30 ⁇ mol / L.
  • the content in the auxiliary agent or pharmaceutical is preferably 5 to 50 nmol / g, more preferably 10 to 40 nmol / g, further preferably 15 to 35 nmol / g, and 20 to 35 nmol / g. 30 nmol / g is more preferable.
  • the auxiliary agent or the drug is a liquid agent, it is preferably 5 to 50 ⁇ mol / L, more preferably 10 to 40 ⁇ mol / L, further preferably 15 to 35 ⁇ mol / L, and even more preferably 20 to 30 ⁇ mol / L.
  • the content of the DNA intercalator type anticancer agent in the auxiliary agent or the drug is not particularly limited, but may be, for example, 1 to 10 nmol / g or 2 to 5 nmol / g.
  • the auxiliary agent or the drug is a liquid agent, for example, it may be 1 to 10 ⁇ mol / L or 2 to 5 ⁇ mol / L.
  • cisplatin is used as a DNA intercalator-type anticancer agent
  • its content in an adjunct or drug is preferably 1 to 10 nmol / g, and more preferably 2 to 5 nmol / g.
  • the auxiliary agent or the drug is a liquid agent, it is preferably 1 to 10 ⁇ mol / L, and more preferably 2 to 5 ⁇ mol / L.
  • the dose of the polysulfide remover is not particularly limited as long as the anticancer drug effect of the anticancer drug can be enhanced by the combined use, and is appropriately selected depending on the age, sex, weight, symptoms, type of cancer, etc. of the patient. , It is preferable that the amount of the polysulfide remover does not cause toxicity or is less toxic when administered to the subject alone. Specifically, for example, in the case of a normal adult, the body weight can be 1 to 100 mg / 60 kg per day. This dose of the polysulfide remover may be administered in a single dose or in multiple doses. For example, when ambroxol hydrochloride is used, 15 mg / 60 kg body weight may be administered 3 times a day.
  • the dose of the DNA intercalator type anticancer drug is not particularly limited as long as it is within the range normally used for the cancer to be treated as an anticancer drug, and the patient's age, sex, weight, symptoms, and so on. It is appropriately selected depending on the type of cancer and the like, but it may be less than the range of the normally used dose depending on the dose of the polysulfide remover. Specifically, for example, it can be 1 to 500 mg / m 2 (body surface area) per day.
  • This dose of the DNA intercalator type anticancer agent may be administered once or may be administered in a plurality of doses.
  • cisplatin 50 to 70 mg / m 2 (body surface area) may be administered once a day, and 15 to 20 mg / m 2 (body surface area) once a day for 5 consecutive days. It may be administered.
  • carboplatin 300 to 400 mg / m 2 (body surface area) may be administered once a day.
  • the molar ratio of these two agents is not particularly limited as long as the above-mentioned dose is followed and the anticancer agent effect is enhanced by the combined use of the polysulfide remover and the DNA intercalator type anticancer agent.
  • the auxiliary agent or medicine of the present invention includes excipients, binders, disintegrants, lubricants, and stabilizers usually used for formulation. It can contain components such as an agent, a flavoring agent, a flavoring agent, a pH adjuster, and a coloring agent.
  • the auxiliary agent or medicine of the present invention can be appropriately formulated into a desired dosage form according to the administration method.
  • a desired dosage form for example, in the case of oral administration, it can be formulated into a solid preparation such as a powder, a granule, a tablet or a capsule; a liquid preparation such as a solution, a syrup, a suspension or an emulsion.
  • parenteral administration it can be formulated into an injection, a liquid, a suspension or the like.
  • the combined use may be administered to the subject at the same time, or the other agent may be administered to the subject after a certain period of time after the administration of one agent.
  • the fixed time is 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes, 20 minutes, 30 minutes, 1 hour, 2 hours, 3 hours, 4 hours, 5 hours, 6 hours, 7 hours, 8 hours, 9 hours, 10 hours.
  • the administration method is not particularly limited as long as the anticancer agent enhancing effect of the present invention can be obtained, and a method usually used by those skilled in the art when administering these agents to a therapeutic subject may be used.
  • the administration method may be a method suitable for each agent, and each agent can be administered by a different method.
  • oral administration or parenteral administration may be used, and in the case of parenteral administration, intravenous drip infusion may be mentioned.
  • auxiliary agent or medicine of the present invention may be further used in combination with other agents, medicines, etc., or may be used in combination with other therapeutic methods.
  • Another embodiment of the present invention is a drug for treating cancer other than lung cancer, which comprises a polysulfide remover and a DNA intercalator type anticancer agent.
  • the drug of the present embodiment may be a single drug formulated by containing a polysulfide remover and a DNA intercalator type anticancer agent in a single drug, or a polysulfide remover and a DNA intercalator type. It may be a concomitant drug in which the anticancer drug is formulated as a separate drug.
  • the types of the polysulfide remover, the types of the DNA intercalator type anticancer agent, their contents, the dose of the drug, the administration method, the type of the target cancer, etc. are described above. As described in the section on cancer treatment aids.
  • SERS Surface-enhanced Raman spectroscopy
  • the Al film was boiled in hot water (100 ° C.) for 15 minutes to form boehmite (AlO (OH)) and dried with nitrogen gas.
  • gold (Au) was vapor-deposited by an electron beam vapor deposition system (EBX-8C, ULVAC) at a vapor deposition angle of 80 °.
  • EBX-8C, ULVAC electron beam vapor deposition system
  • a random sequence of broad bean-type Au nanoparticles named Gold-nanofeve (GNF) was constructed on the substrate.
  • the use of this substrate creates electromagnetic hotspots as excitation sources in surface-enhanced Raman spectroscopy (SERS) analysis and provides a wide range of molecular vibrations of metabolites in tissue sections with sufficient sensitivity and uniformity. It can be visualized.
  • SERS surface-enhanced Raman spectroscopy
  • the sensitivity and frequency of this microscope system was calibrated with a Raman shift 520 cm -1 in silicon phonon mode before making SERS measurements.
  • the background noise of the SERS signal was subtracted from the measured spectrum by performing a weighted average fitting with the second function of Lanczos.
  • OVISE cells were obtained from ATCC. OVISE cells were seeded on a 96-well plate (Thermo Fisher) at a cell concentration of 3 ⁇ 10 3 cells / well. Adherent cells (50-60% confluent) were treated with 25 ⁇ mol / L ambroxol hydrochloride (A9797, Sigma) and CDDP (cis-diammineplatinum (II) dichloride; SIGMA, P4394) for 48 hours. Apoptosis was assessed using the Realtime-Glo Annexin V Apoptosis Assay Kit (Promega, JA1000) as directed by the manufacturer. A reagent for detection was added 4 hours before the measurement. Luminescence was measured using a SpectraMAX L microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA).
  • Example 1 SERS imaging of ovarian cancer tissue
  • CCC cancer ovarian cell cancer
  • HE staining was performed using the same section by a method known to those skilled in the art.
  • the range of Raman shift 480 ⁇ 10 cm -1 was set as the same signal.
  • Example 2 Ambroxol promotes cell death of OVISE cells by cisplatin by degrading polysulfide
  • a compound that decomposes endogenous polysulfide is an adjuvant reagent that promotes cisplatin-induced cell death of ovarian cancer cells. I hypothesized that it could be useful as a cell death.
  • ambroxol an expectorant that cleaves mucin disulfide bonds, acts on polysulfides.
  • Example 3 SERS imaging of pancreatic cancer tissue
  • the present inventors performed SERS imaging and HE staining using the pancreatic cancer tissue in the same manner as in the method of Example 1.
  • SERS imaging the range of Raman shift 480 ⁇ 10 cm -1 was set as the same signal.
  • pancreatic cancer also shows a strong SERS signal at 480 ⁇ 10 cm -1 over the entire cancer tissue (FIGS. 3b and d).
  • the results of SERS imaging of chronic pancreatitis as a control are also shown (FIGS. 3a and 3c).
  • the anticancer drug can be used in combination with the anticancer drug as in the case of ovarian cancer. It was suggested that the effect of the anticancer drug possessed could be enhanced.
  • Example 4 In vivo, ambroxol enhances the anticancer drug effect of cisplatin in in vivo, nude mice were used.
  • a tumorigenesis model mouse for clear cell adenocarcinoma of the ovary was prepared by subcutaneously transplanting OVISE cells into this nude mouse purchased from Japan Marie Co., Ltd. (8 to 10 weeks old, female). Specifically, it was prepared by injecting 2 ⁇ 10 6 OVISE cells subcutaneously into mice. The patient was followed up for 10 days after the subcutaneous transplantation and set to Day 0.
  • Tumor formation model mice were administered to the following three groups: (1) cisplatin and ambroxol unadministered group; (2) day 0 to 10 mg / kg / day cisplatin alone peritoneally administered daily; and (3) from Day 0.
  • the group was divided into groups in which 10 mg / kg / day of cisplatin was administered daily peritoneally and ambroxol of Day 0 to 100 mg / kg / day was administered daily.
  • Tumor volume in each group was measured every 2 days. The tumor volume was calculated by the formula of LS 2 with the major axis of the tumor as L and the width as S. The average tumor volume of each group on Day 0 was set to 1 and shown as a relative value (Mean ⁇ standard error).
  • the relative volume of the tumor increased significantly with the passage of days in the cisplatin and ambroxol non-administered group, and the relative tumor volume increased in the cisplatin alone-administered group as compared with the cisplatin and ambroxol unadministered group.
  • the relative volume of the tumor increased with the passage of days.
  • the cisplatin and ambroxol combination group no increase in the relative volume of the tumor was observed even after the lapse of days (Fig. 4). From the above, it was clarified that ambroxol enhances the anticancer drug effect of cisplatin, that is, the tumor regression effect, even in tumorigenesis model mice in which OVISE cells are subcutaneously transplanted into nude mice.

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Abstract

アンブロキソールを、シスプラチンとともに薬剤耐性卵巣がん細胞株にｉｎ　ｖｉｔｒｏで投与したところ、シスプラチン単独投与に比べてがん細胞の細胞死の割合が増加し、アンブロキソールがシスプラチンの抗がん剤効果を増強することを明らかにした結果、抗がん剤の抗がん剤効果を増強し、抗がん剤耐性となった癌へも抗がん剤の効果を増強するがん治療補助剤を見出した。

Description

抗がん剤効果を増強するがん治療補助剤
　本発明は、化学療法薬剤耐性がんなどに対し抗がん剤効果を増強するがん治療補助剤に関する。
　従来技術では、強力な抗がん剤耐性能を有するがんに対する治療としては、外科的手術による可能な限りがんを完全切除することや放射線療法を行うことが必須であり、患者への身体的かつ精神的な負担が大きかった。また、そのような患者負担の大きな治療を行った場合でも、がんが再発することが多く、抗がん剤耐性能を有するがんを治療することは困難であった。一方で、抗がん剤による抗がん効果が得られるがんについては、拡大手術を施行せずに、抗がん剤の使用による治療が期待出来る。
　ここで、肺がんの治療において、高濃度のアンブロキソールを単剤投与することで手術後の肺合併症の発生や抗生物質投与期間に関する成績が向上したことが示されており（非特許文献１）、またタキサン系抗がん剤であるパクリタキセルとアンブロキソールを併用することにより抗がん剤の効果が増強されたことが示されている（非特許文献２）。しかしながら、引用文献１及び２においては、アンブロキソールは、抗がん剤自体に作用して抗がん剤の効果を増強することを目的として使用されておらず、実際にアンブロキソールが抗がん剤自体に作用するかは明らかになっていなかった。一方で、これらの文献においては、アンブロキソールの去痰作用によって、肺がんに起因する身体症状が抑制されたことによって、肺がんの悪化が抑制されたことが示されている。
Cell Biochem Biophys., 2015, 73(2), 281-284 Am J Cancer Res., 2017, 7(12), 2406-2421 Nature Communications, 2018, 9, Article number:1561
　すなわち、本発明は抗がん剤の抗がん剤効果を増強し、抗がん剤耐性となった癌へも抗がん剤の効果を増強するがん治療補助剤を提供することを課題とする。
　これまでに本発明者等は、シスプラチン等の白金製剤に対して薬剤耐性を示す卵巣がん組織においてはポリスルフィドの発現量が増加していることを見出し、シスプラチンがポリスルフィドと直接反応することにより構造変化を起こし、シスプラチンが活性を失うことを見出した（特願2019-162162）。
　ここで、アンブロキソールは、ムチンのジスルフィド結合を切断することによって、痰の粘性を抑制する効果を有する去痰剤の１つである。
　アンブロキソールを、シスプラチンとともに薬剤耐性卵巣がん細胞株にｉｎ　ｖｉｔｒｏで投与したところ、シスプラチン単独投与に比べてがん細胞の細胞死の割合が増加し、アンブロキソールがシスプラチンの抗がん剤効果を増強するという結果が得られた。さらに、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、腫瘍形成モデルマウスにアンブロキソール及びシスプラチンを併用投与したところ、シスプラチン単独投与に比べて腫瘍増殖が抑えられ、アンブロキソールはシスプラチンによる抗がん剤効果、すなわち腫瘍退縮効果を増強するという結果が得られた。
　以上のような知見に基づき、本発明者らは発明を完成させた。
　すなわち、この出願は、以下の発明を提供するものである。
［１］ポリスルフィド除去剤を有効成分とする、ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤と併用される、肺がん以外のがん治療補助剤。
［２］前記ポリスルフィド除去剤が、去痰剤である、［１］に記載のがん治療補助剤。
［３］前記去痰剤が、アンブロキソールである、［１］又は［２］に記載のがん治療補助剤。
［４］前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、白金製剤である、［１］～［３］のいずれかに記載のがん治療補助剤。
［５］前記白金製剤がシスプラチンである、［４］に記載のがん治療補助剤。
［６］前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、シクロフォスファミド又はイリノテカンである、［１］～［３］のいずれかに記載のがん治療補助剤。
［７］前記がんが、非がん対照組織中のポリスルフィドのレベルと比較して、がん組織中のポリスルフィドのレベルが高いがんである、［１］～［６］のいずれかに記載のがん治療補助剤。
［８］前記がんが、抗がん剤耐性がんである、［１］～［７］のいずれかに記載のがん治療補助剤。
［９］前記抗がん剤耐性が、白金製剤に対する耐性である、［８］に記載のがん治療補助剤。
［１０］前記がんが、卵巣がん又は膵臓がんである、［１］～［９］のいずれかに記載のがん治療補助剤。
［１１］ポリスルフィド除去剤及びＤＮＡインターカレーター型抗がん剤を含む、肺がん以外のがん治療用医薬。
［１２］前記ポリスルフィド除去剤が、去痰剤である、［１１］に記載のがん治療用医薬。
［１３］前記去痰剤が、アンブロキソールである、［１１］又は［１２］に記載のがん治療用医薬。
［１４］前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、白金製剤である、［１１］～［１３］のいずれかに記載のがん治療用医薬。
［１５］前記白金製剤がシスプラチンである、［１４］に記載のがん治療用医薬。
［１６］前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、シクロフォスファミド又はイリノテカンである、［１１］～［１３］のいずれかに記載のがん治療用医薬。
［１７］前記がんが、非がん対照組織中のポリスルフィドのレベルと比較して、がん組織中のポリスルフィドのレベルが高いがんである、［１１］～［１６］のいずれかに記載のがん治療用医薬。
［１８］前記がんが、抗がん剤耐性がんである、［１１］～［１７］のいずれかに記載のがん治療用医薬。
［１９］前記抗がん剤耐性が、白金製剤に対する耐性である、［１８］に記載のがん治療補助剤。
［２０］前記がんが、卵巣がん又は膵臓がんである、［１１］～［１９］のいずれかに記載のがん治療用医薬。
　白金製剤に対して薬剤耐性を示すがんは、卵巣がん以外にも子宮がん、肺がん、胃がん等、多くの癌種で確認されている。アンブロキソールなどのポリスルフィド除去剤と白金製剤などのＤＮＡインターカレーター型抗がん剤との併用投与により、これまで抗がん剤効果が確認出来なかったこれらの薬剤耐性がんについても抗がん剤の効果が期待でき、これまで外科的根治手術のみしか治療の選択肢が無かった薬剤耐性がんについても化学療法との併用治療という選択が可能となり、患者への身体的及び精神的負担の減少へと導くことが出来る。またアンブロキソールは去痰剤としてすでに承認を得ている医薬品であることから、抗がん剤に対する併用薬としての適応拡大に向けての障害が少ないと考えられる。
卵巣明細胞がん（Ｃｌｅａｒ　Ｃｅｌｌ　Ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ＣＣＣ）に由来する組織切片のＳＥＲＳイメージングによるポリスルフィドを可視化した図を表す。ａはＣＣＣ組織切片のＨ－Ｅ染色写真図であり、ｂはＣＣＣ組織切片のラマンシフト４８０ｃｍ－１のＳＥＲＳイメージングの写真図である。ｂにおいて、黒のアノテーションはがん細胞クラスター部（以下、単にがん部とも言う）を示し、白のアノテーションはがん間質細胞クラスター部（以下、単にがん間質部とも言う）を示す。この病理学的なアノテーションは病理の専門家によって付けられた。ＳＥＲＳイメージングを行った後にその切片を用いて、Ｈ－Ｅ染色を行った。図中、バーの長さは１ｍｍである。 ポリスルフィドを分解する化合物であるアンブロキソールの、シスプラチン誘発の細胞死に対する効果を表す表面増強ラマン分光スペクトル図である。ａは、アンブロキソールそのもののスペクトル図を表すが、ラマンシフト３９６ｃｍ－１以外の位置に明確なピークはない。ｂ－ｃは、ポリスルフィド（それぞれＮａ２Ｓ３、Ｎａ２Ｓ４）にアンブロキソールを添加した時のスペクトル図である。ｄは、アンブロキソールの添加濃度が増加するに従い、ＯＶＩＳＥ細胞（ヒト卵巣明細胞腺癌由来細胞株）の生存率への影響を示す。フィッシャーの最小有意差法（Ｆｉｓｃｈｅｒ’ｓ　ＬＳＤ　ｔｅｓｔ）を伴う一元配置分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ）において、Ｐ値が０．０５未満である場合に、統計学的に有意差があるとした。ｅは、ＯＶＩＳＥ細胞のシスプラチン誘発細胞死に対する、２５μｍｏｌ／Ｌのアンブロキソール（黒い棒グラフ）添加の効果を示す図である。細胞死は、アネキシンＶ転移アッセイによって評価した。シスプラチン（図中、ＣＤＤＰで表す）を添加していない細胞で発光強度を標準化した。フィッシャーの最小有意差法（Ｆｉｓｃｈｅｒ’ｓ　ＬＳＤ　ｔｅｓｔ）を伴う一元配置分散分析（ｏｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ）において、Ｐ値が０．０５未満である場合に、統計学的に有意差があるとした。＊：シスプラチン添加かつアンブロキソール未添加である群（白い棒グラフ）と比較して、Ｐ値が０．０５未満であることを表す。 膵臓がん及びコントロールとしての慢性膵炎に由来する組織切片のＳＥＲＳイメージングによるポリスルフィドを可視化した図を表す。ａは慢性膵炎の組織切片のＨ－Ｅ染色写真図であり、ｃは慢性膵炎の組織切片のラマンシフト４８０ｃｍ－１のＳＥＲＳイメージングの写真図である。ｂは膵臓がん組織切片のＨ－Ｅ染色写真図であり、ｄは膵臓がん組織切片のラマンシフト４８０ｃｍ－１のＳＥＲＳイメージングの写真図である。それぞれＳＥＲＳイメージングを行った後にその切片を用いて、Ｈ－Ｅ染色を行った。 ＯＶＩＳＥ細胞を皮下移植した腫瘍形成モデルマウスにおける、ｉｎ　ｖｉｖｏでのアンブロキソールによるシスプラチンの抗がん剤効果の増強を示す図である。（１）シスプラチン及びアンブロキソール未投与群（図中、ＯＶＩＳＥ皮下注で示す、Ｎ＝８）、（２）Ｄａｙ０から１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのシスプラチンを単独で連日腹腔投与した群（図中、ＯＶＩＳＥ＋ＣＤＤＰで示す、Ｎ＝１０）、及び（３）Ｄａｙ０から１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのシスプラチンの連日腹腔投与を行い、かつＤａｙ０から１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのアンブロキソールを連日投与した群（図中、ＯＶＩＳＥ＋ＣＤＤＰ＋Ａｍｂｒｏｘｏｌで示す、Ｎ＝８）に分け、腫瘍体積の推移を確認した。図中、＊はＯＶＩＳＥ群に対しての有意差Ｐ＜０．０５を示し、†はＯＶＩＳＥ＋ＣＤＤＰ群に対しての有意差Ｐ＜０．０５を示す。
　本発明は、ポリスルフィド除去剤を有効成分とする、ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤と併用される、肺がん以外のがん治療補助剤（以下、単に補助剤とも言う）である。
　本発明においてポリスルフィドとは、１又は複数のジスルフィド結合を含むポリマー又はその塩のことであり、Ｒ－Ｓｘ－Ｒの化学式で表される化合物である。前記化学式中、特に限定されることはないが、Ｒは、例えば、Ｈ、Ｎａ又は任意の置換基で置換されていてもよいアルキル基であり、好ましくはＮａである。また、ｘは２以上の任意の整数であるが、ｘは２～４の整数であることが好ましい。
　本発明において、ポリスルフィドは特に限定されることはないが、ＲがＮａである場合、Ｎａ２Ｓ２、Ｎａ２Ｓ３又はＮａ２Ｓ４であることが好ましい。
　本発明において、ポリスルフィド除去剤は、対象に投与することにより、ポリスルフィドと結合してポリスルフィドを分解して消去する剤のことであり、当該剤を投与した対象に発現しているポリスルフィドの量を減少させるものを指す。
　ポリスルフィド除去剤は、ポリスルフィド除去作用を有する限り特に限定されないが、ポリスルフィド除去剤は去痰剤であることが好ましく、去痰剤はアンブロキソールであることが好ましい。
　本発明において、ポリスルフィド除去剤は、薬理学的に許容される任意の塩であってもよく、例えば塩酸塩等であってもよい。
　本発明において、ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤とは、ＤＮＡの二本鎖構造の塩基間に挿入され、ＤＮＡの構造変化が起こることによって、ＤＮＡのスーパーコイリングを阻害する剤のことである。特に限定されないが、ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤は、例えば白金製剤やシクロフォスファミド、イリノテカンが挙げられる。白金製剤としては、特に限定されないが、例えばシスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチンを挙げることができ、好ましくはシスプラチンである。
　本発明において、ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤は、薬理学的に許容される任意の塩であってもよく、又は水和物であってもよい。
　本発明において、治療対象となるがんは、非がん対照組織中のポリスルフィドのレベルと比較して、ポリスルフィドのレベルが高いがんであることが好ましく、抗がん剤耐性がんであってもよい。抗がん剤耐性がんは、白金製剤に対する耐性を有するがんであることが好ましい。抗がん剤耐性とは、抗がん剤の効果が全く得られない場合のみならず、例えば、抗がん剤の治療効果が弱く治療効果が十分に得られない場合や抗がん剤の効果が一時的にはあってもその後すぐに再発するような場合のことをいう。
　本発明において、治療対象となるがんは肺がん以外のがんであればよいが、具体的には例えば、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、神経膠芽腫などが挙げられ、好ましくは、卵巣がん又は膵臓がんである。卵巣がんとしては、好ましくは卵巣明細胞がんである。
　ポリスルフィドのレベルの測定方法は、特に限定されないが、例えば、ラマン分光法や非特許文献２に記載されるような電気化学的測定法によって測定できる。ラマン分光法によって測定することが好ましく、ラマン分光法としては複数の方法があることが当業者に公知であるが、特に限定されることはなく、例えば通常型共鳴ラマン分光法や表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ）を用いる事ができる。
　ラマン分光法は、その測定方法の特性上、測定ごとにラマンシフト上の特定のピークが数ｃｍ－１シフトするものである。この測定ごとのピークのシフトは、多くの場合±１０ｃｍ－１以内であるので、ピーク位置から±１０ｃｍ－１以内のラマンシフトの場合に、同一のシグナルを表すものとする。
　ポリスルフィドを表す特定のピークは測定対象によってシフトするものであり、特に限定されることはないが、例えば、がん組織を測定対象として測定した場合は、ラマンシフト４８０±１０ｃｍ－１の位置にピークが現れ、溶液を測定対象として測定した場合は、ラマンシフト４６０±１０ｃｍ－１の位置にピークが現れる。
　ポリスルフィドのレベルとは、ラマン分析法を用いた場合は、ポリスルフィドを表す特定のピークの高さを表すが、他の測定方法を用いた場合は、がん組織中のポリスルフィドの量の実測値、対照の測定値等で実測値を補正した補正値、又はインデックス値を表すものであってもよい。
　ポリスルフィドのレベルが高いとは、がん組織中のポリスルフィドのレベルが対照組織中のポリスルフィドのレベルよりも高いことを言う。統計学的に有意差があることが好ましいが、必ずしも有意差があることは必要とはしない。
　対照組織とは、例えば、健常人における対応する部分の正常組織や、対応する組織にがんを有する他のがん患者における対応する部分のがん組織のことである。
　ポリスルフィド除去剤の、補助剤又は後述のがん治療用医薬（以下、単に医薬とも言う）中の含有量は、併用による抗がん剤の抗がん剤効果を増強できる限り特に限定されないが、例えば、５～５０ｎｍｏｌ／ｇでもよく、１０～４０ｎｍｏｌ／ｇでもよく、１５～３５ｎｍｏｌ／ｇでもよく、２０～３０ｎｍｏｌ／ｇでもよい。また、補助剤又は医薬が液剤の場合は、例えば、５～５０μｍｏｌ／Ｌでもよく、１０～４０μｍｏｌ／Ｌでもよく、１５～３５μｍｏｌ／Ｌでもよく、２０～３０μｍｏｌ／Ｌでもよい。
　ポリスルフィド除去剤としてアンブロキソールを用いる場合は、その補助剤又は医薬中の含有量は５～５０ｎｍｏｌ／ｇが好ましく、１０～４０ｎｍｏｌ／ｇがさらに好ましく、１５～３５ｎｍｏｌ／ｇがさらに好ましく、２０～３０ｎｍｏｌ／ｇがより好ましい。また、補助剤又は医薬が液剤の場合は、５～５０μｍｏｌ／Ｌが好ましく、１０～４０μｍｏｌ／Ｌがさらに好ましく、１５～３５μｍｏｌ／Ｌがさらに好ましく、２０～３０μｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
　ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤の、補助剤又は医薬中の含有量は特に限定されないが、例えば、１～１０ｎｍｏｌ／ｇでもよく、２～５ｎｍｏｌ／ｇでもよい。また、補助剤又は医薬が液剤の場合は、例えば、１～１０μｍｏｌ／Ｌでもよく、２～５μｍｏｌ／Ｌでもよい。
　ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤としてシスプラチンを用いる場合は、その補助剤又は医薬中の含有量は１～１０ｎｍｏｌ／ｇであることが好ましく、２～５ｎｍｏｌ／ｇであることがさらに好ましい。また、補助剤又は医薬が液剤の場合は、１～１０μｍｏｌ／Ｌであることが好ましく、２～５μｍｏｌ／Ｌであることがさらに好ましい。
　ポリスルフィド除去剤の投与量は、併用による抗がん剤の抗がん剤効果を増強できる限り特に限定されず、患者の年齢、性別、体重、症状、がんの種類などにより適宜選択されるが、ポリスルフィド除去剤を単独で対象に投与した時に毒性が生じない又は毒性が少ない量であることが好ましい。
　具体的には、例えば、通常の成人であれば、１日あたり、１～１００ｍｇ／６０ｋｇ体重とすることが出来る。この投与量のポリスルフィド除去剤を、１回で投与してもよく、複数回に分けて投与してもよい。例えば、アンブロキソール塩酸塩を用いた場合は、１日あたり、１回１５ｍｇ／６０ｋｇ体重を１日３回投与してもよい。
　ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤の投与量は、抗がん剤として治療対象のがんに対して通常使用される範囲内であれば特に限定されず、患者の年齢、性別、体重、症状、がんの種類などにより適宜選択されるが、ポリスルフィド除去剤の投与量によっては通常使用される投与量の範囲よりも少なくてもよい。
　具体的には、例えば、１日あたり、１～５００ｍｇ／ｍ２（体表面積）とすることが出来る。ここで、ヒトの体表面積は、例えば、当業者に既知のＤｕＢｏｉｓの式：体表面積（ｍ２）＝７１．８４×身長（ｃｍ）０．７２５×体重（ｋｇ）０．４２５×１０-４によって求めることが出来る。この投与量のＤＮＡインターカレーター型抗がん剤を、１回で投与してもよく、複数回に分けて投与してもよい。
　例えば、シスプラチンを用いた場合は、１日１回５０～７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）を投与してもよく、また１日１回１５～２０ｍｇ／ｍ２（体表面積）を５日連続で投与してもよい。また、例えば、カルボプラチンを用いた場合は、１日１回３００～４００ｍｇ／ｍ２（体表面積）を投与してもよい。
　上述の投与量に従い、かつ、ポリスルフィド除去剤とＤＮＡインターカレーター型抗がん剤の併用による抗がん剤効果を増強する限り、これら二剤のモル比は特に限定されない。
　本発明の補助剤又は医薬は、ポリスルフィド除去剤及び／又はＤＮＡインターカレーター型抗がん剤以外にも、通常製剤化に用いられている賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味剤、矯臭剤、ｐＨ調整剤、着色剤等の成分を含むことができる。
　本発明の補助剤又は医薬は、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合は、注射剤、液剤、懸濁剤等に製剤化することができる。
　併用とは、同時に対象に投与することでもよく、一方の剤を投与してから一定の時間を空けて他方の剤を対象に投与することでもよい。例えば、一定の時間とは５分間、１０分間、１５分間、２０分間、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２１時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、１週間等が挙げられる。
　投与方法は、本発明の抗がん剤増強効果が得られる限り特に限定されず、これらの剤を治療対象に投与するときに当業者が通常用いる方法で用いてよい。例えば、投与方法は剤ごとに適した方法で投与すればよく、剤ごとに異なる方法で投与することができる。例えば経口投与又は非経口投与のいずれであってもよく、非経口投与であれば点滴静注が挙げられる。
　本発明の補助剤又は医薬は、さらに他の剤や医薬等と併用してもよく、また他の治療法と併用してもよい。
　本発明の他の実施態様は、ポリスルフィド除去剤及びＤＮＡインターカレーター型抗がん剤を含む、肺がん以外のがん治療用医薬である。
　本実施形態の医薬は、ポリスルフィド除去剤及びＤＮＡインターカレーター型抗がん剤を単一の医薬中に含有させて製剤化した単一医薬であってもよく、またポリスルフィド除去剤とＤＮＡインターカレーター型抗がん剤をそれぞれ別個の医薬として製剤化した併用医薬であってもよい。
　本実施形態において、ポリスルフィド除去剤の種類、ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤の種類、それらの含有量や、医薬の投与量、投与方法、対象となるがんの種類などについては、前述のがん治療補助剤の項にて記載した通りである。
　実施例は、開示する目的のために記載されており、本発明の範囲を制限する意図はない。
＜材料及び方法＞
使用した検体
　実施例に記載するがん組織を用いた実験データの取得は、防衛医科大学（ＮＤＭＣ、所沢）及び国立がん研究センター（ＮＣＣ、東京）の倫理問題に関する内部審査委員会から承認を得て行った。使用した患者由来の卵巣がん組織及び膵臓がん組織は、ＮＣＣバイオバンクから入手した。
表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ）解析
＜基板の作成＞
　２４×２４×０．５ｍｍ３のガラスプレートを、有機物の混入を防ぐために表面活性剤（Ｗ３０４／ＬＢ９３、ＡＤＥＫＡ　Ｃｏｒｐ．）で洗浄し、超音波槽において超精製水でリンスした。スピンドライヤーでプレートを乾燥させた後、アルミニウム（Ａｌ）が反応性ＤＣマグネトロンスパッタリングシステム（ＳＰＦ－５３０Ｈ、ＡＮＥＬＶＡ）を５Å　ｓ－１の蒸着速度で使用して、５０ｎｍの厚さになるようにプレートに蒸着した。その後、Ａｌフィルムを熱水（１００℃）で１５分間煮沸して、ベーマイト（ＡｌＯ（ＯＨ））を形成させ、窒素ガスで乾燥させた。さらに金（Ａｕ）を電子ビーム蒸着システム（ＥＢＸ－８Ｃ、ＵＬＶＡＣ）によって、８０°という蒸着角度で蒸着させた。この方法により、基板上でＧｏｌｄ－ｎａｎｏｆｅｖｅ（ＧＮＦ）と名付けたソラマメ型Ａｕナノ粒子のランダム配列を構築した。この基板を使用することで、表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ）解析において、励起源としての電磁的なホットスポットを生み出し、組織切片中の代謝物の分子振動を十分な感度と均一性を以て広範囲の可視化をすることができる。
＜ラマンスペクトルの測定＞
　ラマンスペクトルの測定は、５０倍（ＮＡ＝０．６５）の対物レンズを備えた倒立ラマン顕微鏡システム（ＲＡＭＡＮｆｏｒｃｅ、Ｎａｎｏｐｈｏｔｏｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、大阪府吹田）により行った。この顕微鏡システムの感度と周波数は、ＳＥＲＳ測定を行う前にシリコンフォノンモードのラマンシフト５２０ｃｍ－１を較正した。ＳＥＲＳシグナルのバックグラウンドノイズは、Ｌａｎｃｚｏｓの第二関数で加重平均フィッティングを行うことにより、測定したスペクトルから差し引いた。
＜ｉｎ　ｖｉｖｏ及びｉｎ　ｖｉｔｒｏでの代謝産物のＧＮＦ－ＳＥＲＳイメージング＞
　ＮＣＣ　Ｂｉｏｂａｎｋに保存された卵巣がんの凍結ブロックから調製された空気乾燥組織切片の代謝物は、５μｍ厚の組織切片をＧＮＦ基板に乗せ、真空乾燥チャンバーに入れることで可視化した。
　ＳＥＲＳイメージング実験の前に、マイクロニードルを使用して、ＳＥＲＳ基板の表面の組織スライスの外側領域に３つのマイクロスクラッチを付けた。このマイクロスクラッチは光学顕微鏡法とＳＥＲＳイメージングによって特定できるため、ＳＥＲＳ画像とＨ－Ｅ染色の向きを一致させることができた。より高いＳ／Ｎ比でＳＥＲＳイメージングを達成するために、±１０ｃｍ－１の中心ピーク波数でＳＥＲＳシグナルを蓄積した。
＜がん部及びがん間質部の病理学的アノテーション＞
　組織切片のＳＥＲＳイメージングを行った直後に、同じ組織切片を用いてＨ－Ｅ染色を行った。ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ　ｖ．２．０－ＨＴ（浜松ホトニクス）を使用して、光学的に透明なＧＮＦ基板上にマウントしたＨ－Ｅ染色組織切片の顕微鏡画像をデジタル写真ファイルとしてインポートした。がん細胞は、ＮＤＰ　ｖｉｅｗ２ソフトウェア（浜松ホトニクス）を使用して、病理の専門家ががん部及びがん間質部にそれぞれアノテーションを付けた。がん組織内において、間質部の候補領域にがん細胞が含まれる場合には、その領域にはアノテーションを付けなかった。
＜細胞培養及び生存率試験に使用される化学物質＞
　ＯＶＩＳＥ細胞はＡＴＣＣから入手した。ＯＶＩＳＥ細胞は、９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ）に３×１０３細胞／ウェルの細胞濃度で播種した。接着細胞（５０～６０％コンフルエント）を２５μｍｏｌ／Ｌのアンブロキソール塩酸塩（Ａ９７９７、Ｓｉｇｍａ）及びＣＤＤＰ（ｃｉｓ－ｄｉａｍｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ）ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ；ＳＩＧＭＡ、Ｐ４３９４）で４８時間処理した。製造業者の指示通りに、Ｒｅａｌｔｉｍｅ－Ｇｌｏ　Ａｎｎｅｘｉｎ　Ｖアポトーシスアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＪＡ１０００）を使用して、アポトーシスを評価した。測定の４時間前に検出用の試薬を追加した。ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ　Ｌマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を用い、発光を測定した。
＜実施例１＞卵巣がん組織のＳＥＲＳイメージング
　本発明者らは、ＣＣＣ（卵巣明細胞がん）が、抗がん剤が効きにくいがんであることを見出した。
　また、これまでの本発明者等の研究において、ラマンシフト４８０ｃｍ－１のＳＥＲＳピークは、ポリスルフィドの存在によるものであることが示されている（非特許文献３）。ここで、ＣＣＣのがん組織を用いて、上述の方法によるＳＥＲＳイメージングを行った後、同一の切片を用いて当業者に既知の方法でＨ－Ｅ染色を行った。ＳＥＲＳイメージングにおいて、ラマンシフト４８０±１０ｃｍ－１の範囲を同一のシグナルとした。
　ＳＥＲＳイメージングの結果、ＣＣＣのがん組織中のがん部（図１ａ中、黒のアノテーションで示す）及びがん間質部（図１ａ中、白のアノテーションで示す）の何れの部分においても、４８０±１０ｃｍ－１に強いＳＥＲＳシグナルを示すことが明らかになった（図１ｂ）。すなわち、抗がん剤が効きにくいがんであるＣＣＣにはポリスルフィドがその組織全体にわたって強く発現していることが示された。
＜実施例２＞アンブロキソールがポリスルフィドを分解することによって、シスプラチンによるＯＶＩＳＥ細胞の細胞死を促進する
　内因性ポリスルフィドを分解する化合物は、卵巣がん細胞のシスプラチン誘発の細胞死を促進するアジュバント試薬として役立つ可能性があるという仮説を立てた。
　本発明者らは、ムチンのジスルフィド結合を切断する去痰剤であるアンブロキソールが、ポリスルフィドに作用するかを検討した。アンブロキソール未添加だとＮａ２Ｓ３はラマンシフト４２６及び４５６ｃｍ－１に、Ｎａ２Ｓ４はラマンシフト４３０及び４５６ｃｍ－１に、それぞれ明確なダブルピークが現れるが、アンブロキソールを添加することによって、そのダブルピークのシグナル強度がアンブロキソールの添加濃度依存的に減少した。すなわち、アンブロキソールは、濃度依存的にポリスルフィドを分解消去することを示した（図２ａ－ｃ）。
　次に、アンブロキソール自体の細胞毒性の検討を行った。アネキシンＶ転移アッセイを行った結果、アネキシンＶの転移を指標として判断できる通り、アンブロキソールの濃度が２５μｍｏｌ／Ｌ以下であれば、７２時間ＯＶＩＳＥ細胞の培養を行っても、有意な細胞傷害を生じないことが示された（図２ｄ）。
　次に、アンブロキソールとシスプラチンを併用することにより、抗がん剤作用が増強されるかを検討した。図２ｅにおいて白い棒グラフで示す通り、シスプラチン（図中、ＣＤＤＰと表す）濃度を増強させると、その濃度依存的にがん細胞の細胞死を増加させることが示されたが、そのシスプラチン濃度依存的な細胞死の増加はわずかなものであった。一方で、黒い棒グラフで示す通り、シスプラチンと２５μｍｏｌ／Ｌのアンブロキソールを併用することにより、シスプラチン濃度に依存して、がん細胞の細胞死が有意に増大することが示された。
　以上より、ＣＣＣのように、シスプラチンに対する抗がん剤耐性能を有するがん細胞において、シスプラチンとアンブロキソールを併用することによって、シスプラチンの有する抗がん剤効果が増強されることが示された。
＜実施例３＞膵臓がん組織のＳＥＲＳイメージング
　本発明者等は、膵臓がんの組織を用いて、実施例１の方法と同様にＳＥＲＳイメージング及びＨ－Ｅ染色を行った。ＳＥＲＳイメージングにおいて、ラマンシフト４８０±１０ｃｍ－１の範囲を同一のシグナルとした。
　ＳＥＲＳイメージングの結果、膵臓がんにおいてもそのがん組織全体にわたって、４８０±１０ｃｍ－１に強いＳＥＲＳシグナルを示すことが明らかになった（図３ｂ及びｄ）。コントロールとして慢性膵炎のＳＥＲＳイメージングの結果も示す（図３ａ及びｃ）。
　以上の結果を踏まえると、膵臓がんにおいてもその組織中のポリスルフィドのレベルが高いため、卵巣がんの場合と同様に抗がん剤とアンブロキソールを併用することによって、抗がん剤の有する抗がん剤効果を増強できることが示唆された。
＜実施例４＞ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、アンブロキソールはシスプラチンの抗がん剤効果を増強する
　ｉｎ　ｖｉｖｏにおいてアンブロキソールがシスプラチンの抗がん剤効果を増強することを確認するために、ヌードマウスを日本クレア（株）から購入し（８～１０週齢、雌）、このヌードマウスにＯＶＩＳＥ細胞を皮下移植することによって卵巣明細胞腺癌の腫瘍形成モデルマウスを作成した。具体的には、２×１０６個のＯＶＩＳＥ細胞をマウスの皮下に注射することにより作成した。皮下移植後１０日間経過観察を行い、Ｄａｙ０とした。
　腫瘍形成モデルマウスを以下の三つの群：（１）シスプラチン及びアンブロキソール未投与群；（２）Ｄａｙ０から１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのシスプラチンを単独で連日腹腔投与した群；及び（３）Ｄａｙ０から１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのシスプラチンの連日腹腔投与を行いかつＤａｙ０から１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのアンブロキソールを連日投与した群に分けた。各群における腫瘍体積を２日毎に計測した。腫瘍体積は、腫瘍の長径をＬ、幅をＳとして、ＬＳ２の計算式により算出した。Ｄａｙ０における各群の腫瘍体積平均値を１として相対値で示した（Ｍｅａｎ±標準誤差）。
　その結果、シスプラチン及びアンブロキソール未投与群は、日数経過に伴い腫瘍の相対体積が著しく増加し、シスプラチン単独投与群は、シスプラチン及びアンブロキソール未投与群と比較して腫瘍の相対体積の増加が抑えられたものの、日数経過に伴い腫瘍の相対体積が増加した。一方で、シスプラチン及びアンブロキソール併用群は、日数経過しても腫瘍の相対体積の増加がみられなかった（図４）。
　以上より、ヌードマウスにＯＶＩＳＥ細胞を皮下移植した腫瘍形成モデルマウスにおいても、アンブロキソールはシスプラチンによる抗がん剤効果、すなわち腫瘍退縮効果を増強することが明らかになった。

Claims (20)

  1. 　ポリスルフィド除去剤を有効成分とする、ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤と併用される、肺がん以外のがん治療補助剤。
  2. 　前記ポリスルフィド除去剤が、去痰剤である、請求項１に記載のがん治療補助剤。
  3. 　前記去痰剤が、アンブロキソールである、請求項１又は２に記載のがん治療補助剤。
  4. 　前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、白金製剤である、請求項１～３のいずれか一項に記載のがん治療補助剤。
  5. 　前記白金製剤がシスプラチンである、請求項４に記載のがん治療補助剤。
  6. 　前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、シクロフォスファミド又はイリノテカンである、請求項１～３のいずれか一項に記載のがん治療補助剤。
  7. 　前記がんが、非がん対照組織中のポリスルフィドのレベルと比較して、がん組織中のポリスルフィドのレベルが高いがんである、請求項１～６のいずれか一項に記載のがん治療補助剤。
  8. 　前記がんが、抗がん剤耐性がんである、請求項１～７のいずれか一項に記載のがん治療補助剤。
  9. 　前記抗がん剤耐性が、白金製剤に対する耐性である、請求項８に記載のがん治療補助剤。
  10. 　前記がんが、卵巣がん又は膵臓がんである、請求項１～９のいずれか一項に記載のがん治療補助剤。
  11. 　ポリスルフィド除去剤及びＤＮＡインターカレーター型抗がん剤を含む、肺がん以外のがん治療用医薬。
  12. 　前記ポリスルフィド除去剤が、去痰剤である、請求項１１に記載のがん治療用医薬。
  13. 　前記去痰剤が、アンブロキソールである、請求項１１又は１２に記載のがん治療用医薬。
  14. 　前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、白金製剤である、請求項１１～１３のいずれか一項に記載のがん治療用医薬。
  15. 　前記白金製剤がシスプラチンである、請求項１４に記載のがん治療用医薬。
  16. 　前記ＤＮＡインターカレーター型抗がん剤が、シクロフォスファミド又はイリノテカンである、請求項１１～１３のいずれか一項に記載のがん治療用医薬。
  17. 　前記がんが、非がん対照組織中のポリスルフィドのレベルと比較して、がん組織中のポリスルフィドのレベルが高いがんである、請求項１１～１６のいずれか一項に記載のがん治療用医薬。
  18. 　前記がんが、抗がん剤耐性がんである、請求項１１～１７のいずれか一項に記載のがん治療用医薬。
  19. 　前記抗がん剤耐性が、白金製剤に対する耐性である、請求項１８に記載のがん治療補助剤。
  20. 　前記がんが、卵巣がん又は膵臓がんである、請求項１１～１９のいずれか一項に記載のがん治療用医薬。
     
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109568299A (zh) * 2017-09-28 2019-04-05 复旦大学 氨溴索在制备肿瘤化疗药物增效制剂中用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109568299A (zh) * 2017-09-28 2019-04-05 复旦大学 氨溴索在制备肿瘤化疗药物增效制剂中用途

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEN, BAISHEN ET AL.: "Glutathione peroxidase 1 promotes NSCLC resistance to cisplatin via ROS- induced activation of PI3K/AKT pathway", BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL, vol. 2019, no. 7640547, 27 March 2019 (2019-03-27), pages 8,10, XP055798828, DOI: 10.1155/2019/7640547 *
CHINTALA SREENIVASULU, TÓTH KÁROLY, YIN MING-BIAO, BHATTACHARYA ARUP, SMITH SYLVIA B., OLA M. SHAMSUL, CAO SHOUSONG, DURRANI FARUK: "Downregulation of cystine transporter xc-by irinotecan in human head and neck cancer FaDu xenografts", CHEMOTHERAPY, vol. 56, no. 3, 2010, pages 223 - 233, XP055856803 *
CHOI SEUNG HO, HONG HYE KYUNG, CHO YONG BEOM, LEE WOO YONG, YOO HAE YONG: "Identification of Sestrin3 involved in the in vitro resistance of colorectal cancer cells to irinotecan", PLOS ONE, vol. 10, no. e0126830, 2015, pages 12, XP055856806 *
HONDA KAZUFUMI, HISHIKI TAKAKO, YAMAMOTO SOHEI, YAMAMOTO TAKEHIRO, MIURA NAMI, KUBO AKIKO, ITOH MAI, CHEN WEI-YU, TAKANO MASASHI, : "On-tissue polysulfide visualization by surface-enhanced Raman spectroscopy benefits patients with ovarian cancer to predict post-operative chemosensitivity", REDOX BIOLOGY, vol. 41, no. 101926, 2 March 2021 (2021-03-02), pages 1 - 17, XP055856935 *
KUNIKATA, HIROSHI ET AL.: "Metabolomic profiling of reactive persulfides and polysulfides in the aqueous and vitreous humors", SCIENTIFIC REPORTS, vol. 7, no. 1, 7 February 2017 (2017-02-07), pages 1 - 10, XP055586796 *
NAGANO, OSAMU ET AL.: "Oxidation stress evasion mechanism in cancer stem cells", JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINE, vol. 247, 30 November 2013 (2013-11-30), pages 983 - 988 *
SHIOTA MEGUMI, NAYA MASAYUKI, YAMAMOTO TAKEHIRO, HISHIKI TAKAKO, TANI TAKEHARU, TAKAHASHI HIROYUKI, KUBO AKIKO, KOIKE DAISUKE, ITO: "Gold-nanofeve surface-enhanced Raman spectroscopy visualizes hypotaurine as a robust anti-oxidant consumed in cancer survival", NATURE COMMUNICATIONS, vol. 9, no. 1561, 19 April 2018 (2018-04-19), pages 11, XP055798825 *

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