WO2021157619A1 - 膵液瘻の予防または治療剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、リパーゼ阻害剤を有効成分として含有する、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療剤、および有効量のリパーゼ阻害剤をその投与を必要とする哺乳動物に投与することを含む、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療方法を提供する。

Description

膵液瘻の予防または治療剤

　本発明は、腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻の予防または治療剤、および腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻の予防または治療方法に関するものであり、医薬の分野において有用である。

　膵臓手術は、様々な膵臓腫瘍性病変に対する唯一の根治的治療法として臨床で広く行われている。膵臓手術を含む腹部外科手術後には、手術操作に関連して傷ついた膵臓から膵液が漏出することがある。膵液瘻は、術後に漏出した膵液が周囲組織を障害することによっておこる腹部外科手術後の重大な合併症であり、膵臓手術および膵周囲を扱う腹部外科手術の安全な施行において大きな課題となっている。

　膵液瘻は、臨床的には有害な影響を及ぼさないＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｌｅａｋと、重症で種々の治療を要するＣｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｆｉｓｔｕｌａ　（ＣＲ－ＰＯＰＦ）に分類されている（非特許文献１）。しかし、術後の膵液漏出が、一部の患者ではＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｌｅａｋにとどまる一方で、一部の患者ではＣＲ－ＰＯＰＦへと重症化してしまう原因は不明であった。

　従って、腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻に特異的な薬物治療は未だ確立されておらず、その確立が待たれていた。

Ｓｕｒｇｅｒｙ,　１６１（２０１７）５８４－５９１

　上記の通り、腹部外科手術後の膵液漏出並びに膵液瘻予防法および薬物治療は未だ確立されているとは言えず、臨床的効果の高い予防または治療剤の開発が、医薬の技術分野においては急務の課題であった。

　本発明者らは、かかる状況下、鋭意検討を重ねた結果、リパーゼ阻害剤が、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療に有用であることを初めて見出し、本発明を完成した。さらに、リパーゼ阻害剤が難水溶性である点をも解決した、患者への投与に好適なリパーゼ阻害剤を含有する製剤をも見出した。
　すなわち、本発明は以下の通りである。

［１］リパーゼ阻害剤を有効成分として含有する、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療剤。
［２］腹部手術後の膵液瘻の予防または治療のための、上記［１］に記載の予防または治療剤。
［３］膵液瘻が、臨床的処置を要する術後膵液瘻（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｆｉｓｔｕｌａ　（ＣＲ－ＰＯＰＦ））である、上記［２］に記載の予防または治療剤。
［４］腹部手術が膵臓手術である、上記［１］～［３］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。

［５］リパーゼ阻害剤が、オルリスタット、セチリスタット、ラリスタットおよびアトグリスタチンから選択される１種または２種以上の薬剤の組み合わせである、上記［１］～［４］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。
［６］リパーゼ阻害剤が、オルリスタットおよびセチリスタットから選択される１種または２種の薬剤の組み合わせである、上記［５］に記載の予防または治療剤。

［７］リパーゼ阻害剤を、０．０１から２０％（ｗ／ｗ）含有する、上記［１］～［６］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。

［８］腹腔内投与（好ましくは、腹腔内局所投与）のためのものである、上記［１］～［７］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。

［９］リパーゼ阻害剤および分散剤を含有する乳化製剤である、上記［１］～［８］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。

［１０］リパーゼ阻害剤と、ハイドロゲルとの複合体を含有するハイドロゲル製剤である、上記［１］～［８］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。
［１１］ハイドロゲルが、以下のハイドロゲル形成成分の組み合わせのいずれか一つから形成される、上記［１０］に記載の予防または治療剤。
１）親水性生体適合性ポリマーおよび生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ；
２）官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＡ）およびポリマーＡと生体内条件下で反応する官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＢ）の組み合わせ；または
３）官能基を持つ低分子化合物および生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ。
［１２］合成生体適合性ポリマーが、官能基を有するポリアルキレンオキシドを含有するものである、上記［１１］に記載の予防または治療剤。
［１３］親水性生体適合性ポリマーが、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、セルロース、およびキトサン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ（より好ましくは、架橋ゼラチン、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ、特に好ましくは、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ）である、上記［１１］に記載の予防または治療剤。
［１４］リパーゼ阻害剤を０．０１～１０％（Ｗ／Ｗ）含有する上記［１０］～［１３］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。
［１５］リパーゼ阻害剤を０．０１～５％（リパーゼ阻害剤重量／ハイドロゲル形成成分重量）含有する、上記［１４］に記載の予防または治療剤。
［１６］さらに分散剤を含有する、上記［１０］～［１５］のいずれか一つに記載の予防または治療剤。

［１７］有効量のリパーゼ阻害剤をその投与を必要とする哺乳動物に投与することを含む、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療方法。
［１８］腹部手術後の膵液瘻の予防または治療方法である、上記［１７］に記載の予防または治療方法。
［１９］膵液瘻が、臨床的処置を要する術後膵液瘻（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｆｉｓｔｕｌａ　（ＣＲ－ＰＯＰＦ））である、上記［１８］に記載の予防または治療方法。
［２０］腹部手術が膵手術である、上記［１７］～［１９］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。

［２１］リパーゼ阻害剤が、オルリスタット、セチリスタット、ラリスタットおよびアトグリスタチンから選択される１種または２種以上の薬剤の組み合わせである、上記［１７］～［２０］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。
［２２］リパーゼ阻害剤が、オルリスタットおよびセチリスタットから選択される１種または２種の薬剤の組み合わせである、上記［２１］に記載の予防または治療方法。

［２３］リパーゼ阻害剤が、リパーゼ阻害剤を０．０１から２０％（ｗ／ｗ）含有する医薬組成物の形態で投与される、上記［１７］～［２２］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。

［２４］リパーゼ阻害剤が、腹腔内投与（好ましくは、腹腔内局所投与）される、上記［１７］～［２３］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。

［２５］リパーゼ阻害剤が、リパーゼ阻害剤および分散剤を含有する乳化製剤の形態で投与される、上記［１７］～［２４］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。

［２６］リパーゼ阻害剤が、リパーゼ阻害剤とハイドロゲルとの複合体を含有するハイドロゲル製剤の形態で投与される、上記［１７］～［２４］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。
［２７］ハイドロゲルが、以下のハイドロゲル形成成分の組み合わせのいずれか一つから形成される、上記［２６］に記載の予防または治療方法。
１）親水性生体適合性ポリマーおよび生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ；
２）官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＡ）およびポリマーＡと生体内条件下で反応する官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＢ）の組み合わせ；または
３）官能基を持つ低分子化合物および生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ。
［２８］合成生体適合性ポリマーが、官能基を有するポリアルキレンオキシドを含有するものである、上記［２７］に記載の予防または治療方法。
［２９］親水性生体適合性ポリマーが、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、セルロース、およびキトサン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ（より好ましくは、架橋ゼラチン、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ、特に好ましくは、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ）である、上記［２７］に記載の予防または治療方法。
［３０］ハイドロゲル製剤が、リパーゼ阻害剤を０．０１～１０％（Ｗ／Ｗ）含有する、上記［２６］～［２９］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。
［３１］ハイドロゲル製剤が、リパーゼ阻害剤を０．０１～５％（リパーゼ阻害剤重量／ハイドロゲル形成成分重量）含有する、上記［３０］に記載の予防または治療方法。
［３２］ハイドロゲル製剤が、さらに分散剤を含有する、上記［２６］～［３１］のいずれか一つに記載の予防または治療方法。

［３３］リパーゼ阻害剤と、ハイドロゲルとの複合体を含有するハイドロゲル製剤。
［３４］ハイドロゲルが、以下のハイドロゲル形成成分の組み合わせのいずれか一つから形成される、上記［３３］に記載のハイドロゲル製剤。
１）親水性生体適合性ポリマーおよび生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ； 
２）官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＡ）およびポリマーＡと生体内条件下で反応する官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＢ）の組み合わせ；または
３）官能基を持つ低分子化合物および生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ。
［３５］合成生体適合性ポリマーが、官能基を有するポリアルキレンオキシドを含有するものである、上記［３４］に記載のハイドロゲル製剤。
［３６］親水性生体適合性ポリマーが、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、セルロース、およびキトサン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ（より好ましくは、架橋ゼラチン、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ、特に好ましくは、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つ）である上記［３４］に記載のハイドロゲル製剤。
［３７］リパーゼ阻害剤を０．０１～１０％（Ｗ／Ｗ）含有する上記［３３］～［３６］のいずれか一つに記載のハイドロゲル製剤。
［３８］リパーゼ阻害剤を０．０１～５％（リパーゼ阻害剤重量／ハイドロゲル形成成分重量）含有する、上記［３７］に記載のハイドロゲル製剤。
［３９］さらに分散剤を含有する、上記［３３］～［３８］のいずれか一つに記載のハイドロゲル製剤。

　本発明によれば、腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻の予防または治療に有効かつ安全に使用可能な薬剤；当該薬剤を使用する腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻の予防または治療方法；を提供することができる。

図１は、膵液瘻モデルマウス（ＰＴ）の作製と脂肪損傷処置（＋Ｆ）の概略図を示す。 図２は、実施例１（１）で検討された各群の腹腔内所見（処置２４時間後）を示す。 図３は、実施例１（２）で検討された各群の腹水遊離脂肪酸濃度を示す。有意差検定は、Ｓｈａｍ群との間で、Ｔｕｋｅｙ検定を用いて行われた。図中、ＴＦＡは、総遊離脂肪酸、ＳＦＡは、飽和遊離脂肪酸、ＵＦＡは、不飽和遊離脂肪酸をそれぞれ意味する。ＴＦＡ濃度（μＭ）の具体的な値は、以下の通りである。Ｓｈａｍ群：２６３、Ｓｈａｍ＋Ｆ群：３９０、ＰＴ群：５２８、ＰＴ＋Ｆ群：４１４５。 図４は、実施例１（３）で検討された各群の腹水中膵酵素活性（ＩＵ／Ｌ）を示す。各酵素の具体的な活性は、以下の通りである。Ａｍｙｌａｓｅ（アミラーゼ）：　Ｓｈａｍ群：３４、Ｓｈａｍ＋Ｆ群：１０４、ＰＴ群：２４６８、ＰＴ＋Ｆ群：１６８６８＊）ＰＴ＋Ｆ群はＰＴ群に対して有意に酵素活性が高い（ｐ＝０．００９；Ｍａｎｎ　Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　検定）。Ｌｉｐａｓｅ（リパーゼ）：　Ｓｈａｍ群：０、Ｓｈａｍ＋Ｆ群：２、ＰＴ群：４６、ＰＴ＋Ｆ群：２０１７＊）ＰＴ＋Ｆ群はＰＴ群に対して有意に酵素活性が高い（ｐ＝０．００９；Ｍａｎｎ；Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　検定）。 図５は、実施例１（４）で検討された各群の組織学的所見を示す。Ｓｈａｍ群と比較し、Ｓｈａｍ＋Ｆ群では膵臓に明らかな変化は認められない。ＰＴ群においては、間質の軽度の浮腫や、細胞浸潤などが認められ軽度の炎症性変化が確認できた。ＰＴ＋Ｆ群では、それらの変化に加え、膵臓表面に硝子様物質の沈着が認められた。同部はアリザリン染色で橙色に染色されることから、脂肪酸カルシウムの沈着であることが判明した。硝子様沈着物の周囲には炎症細胞浸潤が高度に認められ、腺房細胞障害像が認められた。 図６は、実施例１（５）で検討されたＰＴ群とＰＴ＋Ｆ群における生存率を示す。 図７は、実施例２（１）で検討された中性脂肪がラット膵腺房細胞に与える影響を示す。 図８は、実施例２（２）で検討されたＰＥＧ－Ｃによる膵腺房細胞保護効果を示す。図中、Ｃ２０はＰＥＧ－Ｃ　２０μＭ投与群、Ｃ１００はＰＥＧ－Ｃ　１００μＭ投与群、ＮｏｎｅはＰＥＧ－Ｃ無投与群、ＰＥＧはＰＥＧ水溶液（ＰＥＧ－Ｃ　１００μＭと等量）投与群を意味する。 図９は、実施例３（１）で検討された各群の腹腔内所見（処置２４時間後）を示す。 図１０は、実施例３（２）で検討された各群の腹水中膵酵素活性（ＩＵ／Ｌ）を示す。各酵素の具体的な活性は、以下の通りである。Ａｍｙｌａｓｅ（アミラーゼ）：　ＰＴ群：２４６８、ＰＴ＋Ｆ群：１６８６８、ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群：４３７４、ＰＴ＋Ｆ＋Ｖ群：３０１２０＊）ＰＴ＋Ｆ群はＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群に対して有意に酵素活性が高い（ｐ＝０．００９；Ｍａｎｎ　Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　検定）。Ｌｉｐａｓｅ（リパーゼ）：　ＰＴ群：４６、ＰＴ＋Ｆ群：２０１７；ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群：５７３、ＰＴ＋Ｆ＋Ｖ群：７７２５＊）ＰＴ＋Ｆ群はＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群に対して有意に酵素活性が高い（ｐ＝０．０７９；Ｍａｎｎ　Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　検定）。 図１１は、実施例３（３）で検討された各群中の腹水遊離脂肪酸濃度（μＭ）を示す。図中、ＴＦＡは、総遊離脂肪酸、ＳＦＡは、飽和遊離脂肪酸、ＵＦＡは、不飽和遊離脂肪酸をそれぞれ意味する。ＴＦＡ濃度（μＭ）の具体的な値は、以下の通りである。ＰＴ群：４７１、ＰＴ＋Ｆ群：４１７２、ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群：１２９４、ＰＴ＋Ｆ＋Ｖ群：２８７７＊）ＰＴ＋Ｆ群はＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群に対して有意に酵素活性が高い（ｐ＝０．０１６；Ｍａｎｎ　Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　検定）。 図１２は、実施例３（４）で検討された各群の生存率を示す。 図１３は、実施例５（１）で検討された（ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ投与群）での組織学的所見を示す。膵臓周囲（ハイドロゲルの周囲）に少し鹸化物質付着を認めるが、全体として鹸化の抑制が認められる。無治療群（ＰＴ＋Ｆ群）と比較して、明らかに鹸化は抑制されている。 図１４は、実施例５（１）で検討された（ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ投与群）での組織学的所見を示す。膵臓周囲（ハイドロゲルの周囲）に少し鹸化物質付着を認めるが、全体として鹸化の抑制が認められる。無治療群（ＰＴ＋Ｆ群）と比較して、明らかに鹸化は抑制されている。 図１５は、実施例５（１）で検討された（ＰＥＧｇｅｌ投与群）での組織学的所見を示す。広範な鹸化、溶血所見が認められる。重症化していることが窺われた。 図１６は、実施例５（１）で検討された（ＰＥＧｇｅｌ投与群）での組織学的所見を示す。鹸化が目立つことが確認された。 図１7は、実施例５（１）での組織学的所見の検討結果（ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ投与群／ＰＥＧｇｅｌ投与群）と比較対照された無治療群（ＰＴ＋Ｆ群）での組織学的所見を示す。腹腔内に広範な鹸化が認められる。 図１８は、実施例５（２）での腹水中の膵酵素活性（ＩＵ／Ｌ）の検討結果を示す。図中、腹水AMYは、アミラーゼの酵素活性、腹水Ｌｉｐａｓｅは、リパーゼの酵素活性を示す。Ａｍｙｌａｓｅ（アミラーゼ）：　ＰＴ＋Ｆ群：１６８６８、ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ群：１２７８（ｐ＝０．０２５；Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　検定）。Ｌｉｐａｓｅ（リパーゼ）：　ＰＴ＋Ｆ群：２０１７、ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ群：５２（ｐ＝０．０２５；Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ　検定）。 図１９は、実施例７（１）で検討された（ＰＥＧｇｅｌ－Ｏ投与群）での組織学的所見を示す。ＰＥＧｇｅｌ－О群では、無治療群（図１７参照）と比較して、腹腔内全般の炎症所見および鹸化のいずれの評価項目においても明らかな低減（抑制）が確認された。 図２０は、実施例９（１）で検討された（ボルヒール－Ｃ投与群）での組織学的所見を示す。ボルヒール－Ｃ群では、無治療群（図１７参照）と比較して、腹腔内全般の炎症所見および鹸化のいずれの評価項目においても明らかな低減（抑制）が確認された。 図２１は、比較例２（１）で検討された（ボルヒール単体投与群）での組織学的所見を示す。ボルヒール単体投与群では、無治療群（図１７参照）と同様の、腹腔内全般の炎症所見および鹸化が確認された。

　本発明は、リパーゼ阻害剤を有効成分として含有する、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療剤；有効量のリパーゼ阻害剤をその投与を必要とする哺乳動物に投与することを含む、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療方法；腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療における使用のための、リパーゼ阻害剤；腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療薬を製造するための、リパーゼ阻害剤の使用；並びに本発明の実施のために有用なリパーゼ阻害剤含有医薬組成物；に関する。

　以下、上記した本発明について詳述するが、特に断らない限り、本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味をもつ。

（リパーゼ阻害剤について）
　本明細書中、「リパーゼ阻害剤」とは、膵液中に含まれる脂肪分解酵素（リパーゼ）による中性脂肪の遊離脂肪酸への分解を阻害する作用を有する化合物の総称であり、既に多くの「リパーゼ阻害剤」が当技術分野では知られており、当業者にはこれら一群の化合物を指す包括的な用語として「リパーゼ阻害剤」が認識され、用いられている。例えば、オルリスタット（Ｏｒｌｉｓｔａｔ）、セチリスタット（Ｃｅｔｉｌｉｓｔａｔ）、ラリスタット（Ｌａｌｉｓｔａｔ）、アトグリスタチン（Ａｔｇｌｉｓｔａｔｉｎ）等が好適な例として挙げられ、より好ましくはオルリスタットまたはセチリスタットが挙げられる。

　例えば、オルリスタットは、特開昭６０－１３７７７号公報に記載された方法により製造することができる。セチリスタット、ラリスタット、アトグリスタチンについても、当業者であれば当技術分野で公知の方法を用いて適宜合成して入手することが可能である。

　オルリスタットおよびセチリスタットを「リパーゼ阻害剤」の代表として用いて、後記の実施例の項で実証される通り、「リパーゼ阻害剤」は、それが有する中性脂肪の遊離脂肪酸への分解を阻害するという機能に基づいて、膵臓から漏出したリパーゼ（脂肪分解酵素）による腹腔内での中性脂肪の遊離脂肪酸への分解を抑制することにより、膵液瘻の治療効果を発揮するものである。

　本発明の実施に当たっては、リパーゼ阻害剤は、遊離の形態、またはその医薬として許容される塩の形態のいずれにおいても使用することができる。使用される個々のリパーゼ阻害剤の特性を踏まえて当業者であれば両形態から適宜選択して本発明を実施することができる。
　医薬として許容される塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、等の無機酸との塩、酢酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシル酸塩、マレイン酸塩、等の有機酸との塩等の酸との塩；およびナトリウム塩、カリウム塩、等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、等のアルカリ土類金属塩等の塩基との塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸との塩等が挙げられる。

（対象疾患について）
　本明細書中、「腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻」における「腹部手術」には、膵臓、胃、十二指腸、脾臓、腎臓、副腎または大腸等における手術が含まれ、中でも膵手術後または胃手術後（特に膵手術後）の膵液漏出および／または膵液瘻が、本発明の適用対象となる。
　本明細書中、「膵液漏出」とは、腹部の手術に伴って膵臓から膵液が腹腔内に漏出することをいう。
　本明細書中、「膵液瘻」とは、漏出した膵液が周囲組織を障害することによっておこる合併症をいうが、臨床的には有害な影響を及ぼさないもの（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｌｅａｋ）および重篤な症状が惹起され臨床的処置を要するもの（Ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｆｉｓｔｕｌａ　（ＣＲ－ＰＯＰＦ））の両者が含まれる。

　本明細書中、「予防」には、疾患（病態の全体、もしくは１つまたは複数の病態）の発症の防止、および当該疾患の発症の遅延が含まれる。「予防有効量」とは、かかる目的を達成するに足るリパーゼ阻害剤の用量をいう。

　本明細書において、「治療」には、疾患（病態の全体、もしくは１つまたは複数の病態）の治癒、当該疾患の改善、および当該疾患の重篤度の進展の抑制が含まれる。「治療有効量」とは、かかる目的を達成するに足るリパーゼ阻害剤の用量をいう。

（投与経路について）
　本発明を実施するに当たっては、リパーゼ阻害剤は、単独で、または医薬組成物として、経口的又は非経口的に投与を必要とする対象に投与し得るが、腹腔内投与が好ましく、特に腹腔内への局所投与が好ましい。

（投与量について）
　本発明を実施するに当たってのリパーゼ阻害剤の投与量は、投与対象、投与経路および投与対象者の年齢や症状によって異なるが、特に限定されない。例えば、成人患者（体重約４０～８０ｋｇ、例えば、６０ｋｇ）に腹腔内投与する場合、その投与量は、１日当たり１～１０００ｍｇの範囲内で選択することができる。手術時に一括して投与を行ってもよく、手術後に複数回投与しても良い。なお、リパーゼ阻害剤の投与量は、使用される個々の薬剤によっても異なるため、より少量の範囲内で、例えば、一日当たり１～５００ｍｇの範囲内で、あるいは、一日当たり１～３００ｍｇの範囲内で投与され得ることは、当業者には容易に理解される事項である。従って、リパーゼ阻害剤のこのような範囲内での投与態様は、前記「１～１０００ｍｇの範囲内での投与」に、自ずと包含されるものである。
　本発明の予防・治療剤は、その投与を必要とする対象（ヒトを含む哺乳動物、特にヒト）に安全に投与することができる。

（投与形態について）
　本発明を実施するに当たっては、リパーゼ阻害剤は、単独の形態で、またはリパーゼ阻害剤を有効成分として、医薬として許容される担体等とともに含有する医薬組成物の形態でのいずれの形態でも「腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻の予防または治療剤」（以下「本発明の予防・治療剤」と略記する場合がある）として使用される。好ましくは、医薬組成物の形態で使用される。

　本発明を実施するに当たっては、医薬組成物としては、例えば錠剤、乳化剤、懸濁剤、放出制御製剤、ハイドロゲル製剤、等当技術分野で使用されている剤形を選択することができる。当該「医薬として許容される担体」としては、製剤技術の分野で慣用されている各種の担体を用いることができる。
　本発明の医薬組成物は、剤型、投与方法、担体などにより異なるが、リパーゼ阻害剤を製剤全量に対して通常０．００１～２０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．０１～１０％（ｗ／ｗ）の割合で添加することにより、製造し得る。当該医薬組成物は、その形態に応じて、製剤技術の分野で慣用の方法により製造できる。

　以下、本発明を実施するに当たって好ましい医薬組成物の形態について説明する。

（１）乳化製剤
　本発明を実施するに当たっての、一つの好ましい医薬組成物の態様は、「リパーゼ阻害剤および分散剤を含有する乳化製剤」である。
　ここで、分散剤としては、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール等）、エーテル型非イオン系界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル等）等を使用することができる。
　例えば、ポリエチレングリコールを使用する場合、分子量が１０００～２００００の範囲のものを使用することが好ましい。
　本発明を実施するに当たっては、リパーゼ阻害剤を０．０１～１０％（リパーゼ阻害剤重量／分散剤重量）含有する乳化製剤を用いることが好ましい。
　本発明の「リパーゼ阻害剤および分散剤を含有する乳化製剤」は、リパーゼ阻害剤、分散剤、およびその他必要な添加剤を用いて、当技術分野で汎用される方法により製造することができる。

（２）ハイドロゲル製剤
　本発明を実施するに当たっての、別の好ましい医薬組成物の態様は、「リパーゼ阻害剤とハイドロゲルとの複合体を含有するハイドロゲル製剤」である。
　リパーゼ阻害剤をハイドロゲルとの複合体（ハイドロゲル製剤）とすることにより、膵液の漏れを防止するとともに、腹腔内の局所においてリパーゼ阻害剤を一定の時間をかけて持続的に作用させることができる（徐放性製剤）。

　本発明のハイドロゲル製剤は、リパーゼ阻害剤とハイドロゲル形成成分を用いて、当技術分野で公知の技術により目的とする持続時間等を考慮して適宜製造することができるが、ハイドロゲルを形成する好ましいハイドロゲル形成成分としては、例えば以下の組み合わせが挙げられる。
１）親水性生体適合性ポリマーおよび生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ（ハイドロゲル形成成分１）
２）官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＡ）およびポリマーＡと生体内条件下で反応する官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＢ）の組み合わせ（ハイドロゲル形成成分２）、または
３）官能基を持つ低分子化合物および生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ（ハイドロゲル形成成分３）。

ハイドロゲル形成成分１について
　「親水性生体適合性ポリマー」としては、タンパク質、多糖類、非生物学的ポリマー、それらの誘導体または組み合わせが挙げられる。
　当該タンパク質は、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、ヘモグロビン、フィブリノーゲン、フィブリン、カゼイン、フィブロネクチン、エラスチン、ケラチン、およびラミニン、ならびに、それらの誘導体および組み合わせからなる群より選択することができる。
　当該多糖類は、グリコサミノグリカン、デンプン、セルロース、デキストラン、ヘミセルロース、キシラン、アガロース、アルギネート、およびキトサン、ならびに、それらの誘導体および組み合わせからなる群より選択することができる。
　当該非生物学的ポリマーは、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリエチレンイミン、ポリビニル樹脂、ポリラクチド－グリコリド、ポリカプロラクトン、およびポリオキシエチレン、ならびに、それらの誘導体および組み合わせからなる群より選択することができる。
　ここで、「親水性生体適合性ポリマー」は、架橋化されていてもよい。架橋化は、当技術分野で公知の方法により行うことができる。
　当該親水性生体適合性ポリマーとしては、限定はされないが、好ましくは、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、セルロース、およびキトサン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つが挙げられ、より好ましくは、架橋ゼラチン、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つが挙げられ、特に好ましくは、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つが挙げられる。また、別の特に好ましいものとして、架橋ゼラチンが挙げられる。

「生体適合性親水性ポリマー架橋剤」としては、親水性ポリマー架橋剤が挙げられ、例えば、スクシンイミジルエステル（－ＣＯＮ（ＣＯＣＨ_２）_２）、ＮＨＳ－エステル基、イミドエステル基、アルデヒド基、カルボジイミドの存在下でのカルボキシ基、イソシアネート、ＴＨＰＰ（ベータ－［トリス（ヒドロキシメチル）ホスフィノ］プロピオン酸）、マレイミド、ハロアセチル、チオール基、アミノ基、アジド基、エチニル基等のアルキン基、シクロオクチン基等を含む環状アルキン基およびそれらの混合物からなる群より選択される官能基を含むポリアルキレンオキシドポリマーが好適な例として挙げられる。
　当該官能基を有する親水性ポリマー架橋剤としては、スクシンイミジルエステル（－ＣＯＮ（ＣＯＣＨ_２）_２）、アルデヒド（－ＣＨＯ）、チオール基、アミノ基、アジド基、エチニル基等のアルキン基、シクロオクチン基等を含む環状アルキン基およびイソシアネート（－Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）から選択される官能基を含むポリエチレングリコールが特に好ましい。

　本態様においては、「親水性生体適合性ポリマー」が、「生体適合性親水性ポリマー架橋剤」により架橋化されて互いに結合しネットワークを構成することによりゲル化し、ハイドロゲルとして供される。なお、このゲル化反応は、当技術分野で汎用される他の成分を適宜加えて行ってもよい。
　以上の製造工程は、当技術分野でハイドロゲルを作製するための常法に従って当業者は実施することができる。

ハイドロゲル形成成分２について
　「官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＡ）」としては、２以上の反応基を有するポリアルキレンオキシドを含み、官能基は、上記親水性ポリマー架橋剤で例示される官能基と同じものが挙げられる。
　ここで、ポリアルキレンオキシドとしては、例えば、ポリエチレンオキシドまたはその誘導体が好ましい。
　「ポリマーＡと生体内条件下で反応する官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＢ）」としては、２以上の反応基を有するポリアルキレンオキシドを含み、官能基は、上記親水性ポリマー架橋剤で例示される官能基と同じものが挙げられる。
　ここで、ポリアルキレンオキシドとしては、例えば、ポリエチレンオキシドまたはその誘導体が好ましい。ポリエチレンオキシドまたはその誘導体を使用する場合、分子量が１０００～８００００の範囲のものを使用することが好ましい。

　本態様においては、「官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＡ）」と、「ポリマーＡと生体内条件下で反応する官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＢ）」とが互いにその官能基間で結合しネットワークを構成することによりゲル化し、ハイドロゲルとして供される。なお、このゲル化反応は、当技術分野で汎用される他の成分を適宜加えて行ってもよい。
　以上の製造工程は、当技術分野でハイドロゲルを作製するための常法に従って当業者は実施することができる。

ハイドロゲル形成成分３について
　「官能基を持つ低分子化合物」は、１種以上の官能基を２個以上含む化合物であり、官能基は、上記親水性ポリマー架橋剤で例示される官能基と同じものが挙げられる。
　例えば、アミノ基、チオール基等を有するアミノ酸もしくはオリゴペプチド、スペルミン等のポリアミン、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン等のジアミン、トリアミン化合物等が挙げられる。
　「生体適合性親水性ポリマー架橋剤」としては、上記のハイドロゲル形成成分１についてにおいて「生体適合性親水性ポリマー架橋剤」として例示されたものと同じものが挙げられる。

　本態様においては、「官能基を持つ低分子化合物」と「生体適合性親水性ポリマー架橋剤」とが架橋化されて互いに結合しネットワークを構成することによりゲル化し、ハイドロゲルとして供される。なお、このゲル化反応は、当技術分野で汎用される他の成分を適宜加えて行ってもよい。
　以上の製造工程は、当技術分野でハイドロゲルを作製するための常法に従って当業者は実施することができる。

　本発明のハイドロゲル製剤は、リパーゼ阻害剤と上記のハイドロゲル形成成分、その他の当技術分野で汎用される成分とを、溶解（乳化・懸濁）・混合・攪拌等を含むハイドロゲル作成の常法に従って製造することができ、二液型の押し出し、噴霧、またはハイドロゲルシートとして使用することができる。例えば、上記のハイドロゲルを形成する各成分を、それぞれ水溶液として予備混合した後、押し出し、噴霧によりハイドロゲルを形成することができるほか、二成分の水溶液を個別に封入できるシリンジから混合チップを用いて押し出し、噴霧によりハイドロゲルを形成することもできる。さらに、予めハイドロゲル形成成分からハイドロゲルシートを形成し直接患部に張り付けるほか、ハイドロゲルシートにリパーゼ阻害剤を含侵させた後、使用することもできる。さらにまた、予めハイドロゲル形成成分からハイドロゲルシートを形成し、凍結乾燥等により粉末化または乾燥シート化した後、当該粉末をリパーゼ阻害剤を含む水溶液で膨潤させハイドロゲルシートとし、直接患部に張り付け使用することができる。

　また、予めリパーゼ阻害剤を上記の（乳化製剤）の項において記載された「リパーゼ阻害剤および分散剤を含有する乳化製剤」とした後に、ハイドロゲル製剤を製造することもできる。

　リパーゼ阻害剤が水に難溶性の場合には、当技分野でその他の公知の方法（例えば、高分子ミセル内への封入）により予め水溶性化した形態へと導いた後に「リパーゼ阻害剤」として用いて、ハイドロゲルを製造することもできる。

　本発明を実施するに当たっては、リパーゼ阻害剤を０．０１～５％（リパーゼ阻害剤重量／ハイドロゲル形成成分重量）含有するハイドロゲル製剤を用いることが好ましい。

（他剤との併用について）

　本発明の予防・治療剤は、他の薬剤と組み合わせて、腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻の予防または治療に用いることができ、他の薬剤との併用による優れた予防または治療効果が期待できる。また、かかる併用療法により他の薬剤の用量を下げて、これらが有する副作用を低減することも期待できる。

　以下、実施例に沿って本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではない。また、本発明において使用する試薬や装置、材料は特に言及されない限り、商業的に入手可能であるか、当業者であれば適宜調製することが可能である。

[実験材料および実験方法]
＜実験材料＞
　セチリスタットは、東京化成工業株式会社から購入した。ポリエチレングリコール（分子量６０００）（以下、本実施例中ＰＥＧと略記する場合がある）は、日油株式会社（東京、日本）から提供を受けた。

＜ＰＥＧ－セチリスタット含有エマルジョンの調製＞
　以下の手順によりＰＥＧ－セチリスタット含有エマルジョンを調製した。
１）セチリスタット（Ｃｅｔｉｌｉｓｔａｔ）（５０ｍｇ）とＰＥＧ（１５００ｍｇ）（ともに常温個体、粉末状）を室温で５分間攪拌混和した。
２）両成分を、温浴中（７５℃）で、１５分間攪拌混和した
３）この混合物にＤＤＷ（ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ　ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ　ｗａｔｅｒ）（３４５０ｍｇ）を添加して、さらに温浴中（７５℃）で１５分間攪拌混和した。
４）得られたエマルジョンを１ｍｌ分取（１ｍｌ＝１１４０ｍｇ、ＲＴ）して、１１．４倍に希釈（１０．４ｍｌのＤＤＷを添加）して、セチリスタットの白濁エマルジョンを得た（濃度１ｍｇ／ｍｌ）（以下、本実施例中ＰＥＧ－Ｃと略記する場合がある）。

＜ＰＥＧ－Ｃの膵腺房細胞保護効果（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）の検討＞
（細胞の採取）
　以下の手順により一次腺房細胞（Ｐｒｉｍａｒｙ　ａｃｉｎａｒ　ｃｅｌｌ）を採取した。
１）ＳＤ系ラット（９～１２週齢、清水実験材料株式会社）を安楽死させ、脱血した。
２）２ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＤ（ロッシュ、クロストリジウム ヒストリチクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）由来、０．２４Ｕ／ｍｇ）含有培地をラット胆管に注入した。
３）膵臓を摘出し、１５ｍｌのコラゲナーゼＤ含有培地中、３７℃で約２０分間インキュベートした。
４）その後当該溶液を、２０秒間シェークして細胞懸濁液を得た。
５）１ｍｍ金属メッシュで濾過して、１００ｘｇで３分間遠心分離した後、上清を破棄した。
６）沈殿物を再度培地（５０ｍｌ）に懸濁して、メッシュが７０μｍであるセルストレーナー３５２３５０（ファルコン）で濾過した後、１００ｘｇで３分間遠心分離して、上清を破棄して目的とする細胞を回収した。

（細胞の播種）
　約１．５×１０^５ｃｅｌｌ／ｍｌの濃度で４８ウェルプレート（ポリスチレン製、表面処理なし、旭硝子）の各ウェルに１ｍｌずつ分注した。細胞採取時、桑の実状に分離されるため正確な細胞密度判定は困難であるが、各ウェルは必ず同じ密度になるように細胞懸濁液を分注して実験を行った。

　上記の実験で使用された培地の組成（１０００ｍｌ当たり）は、以下の通りである。
クレブス－リンガー重炭酸緩衝液（Ｋ４００２－１Ｌ、シグマ－アルドリッチ）：１本
塩化カルシウム：１ｍＭ
ＨＥＰＥＳ：１０ｍＭ
炭酸水素ナトリウム：１０ｍＭ
ウシ血清アルブミン（脂肪酸不含）（０８５８７－８４、ナカライテスク）：１０００ｍｇ
トリプシン阻害剤（大豆由来）（２０２－０９２２１、富士フイルム和光純薬株式会社）：１００ｍｇ

（培地への中性脂肪およびＰＥＧ－Ｃの混和）
　トリオレイン（２０８－０２９８１、富士フイルム和光純薬株式会社）をＤＭＳＯ（１３４０８－６４、ナカライテスク）に溶解したストック溶液を調整（トリオレイン濃度：５０ｍＭ）し、このトリオレイン－ＤＭＳＯストック溶液およびＰＥＧ－Ｃを最終濃度の２倍になるように溶解した培地の０．５ｍｌと細胞懸濁液０．５ｍｌを合わせて１ｍｌとして、ウェルに分注して目的濃度を得た。

（ＬＤＨアッセイ）
　各タイムポイントで１００μｌの上清を採取し、ＬＤＨ細胞毒性アッセイキット－ＷＳＴ（株式会社同仁化学研究所）を説明書に従って用いて、吸光度を測定し、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を測定した。

＜動物実験＞
（動物）
　全ての動物実験は、京都大学の動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃａｒｅ　ａｎｄ　Ｕｓｅ　Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認され、ＡＲＲＩＶＥガイドラインに沿って実施された。
　肥満ラットは、以前の報告に従って作出した。概要は以下の通りである。
　３週齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（清水実験材料株式会社）に、６週間以上にわたって高脂肪食（Ｄ１２４５１、Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｄｉｅｔｓ　Ｉｎｃ）を自由に与えた。ラットは、体重が４００～４５０ｇのものを使用した。雄の動物を使用して、体重と生化学の変動を最小限に抑えた。ラットは２１～２５℃の温度で１２時間の明暗サイクルで飼育し、自由に飲むことができるものとした。

（膵液瘻モデルラットの作出と脂肪組織の損傷処置；図１を参照）
　膵液瘻モデルラット（ＰＴ群）は、以前の報告に従い、膵臓切離によって作出した。概要は以下の通りである。
　ラットを、セボフルラン吸入とペントバルビタールの腹腔内注射により麻酔した。ブプレノルフィンの皮下注射により鎮痛した。正中線開腹後、膵臓を受動することなく、膵臓を門脈の腹側で確保した。脾動脈および静脈は温存した。ラット膵管は、胃管、十二指腸管、総管、脾管の４つの部位で構成されているが、脾管と周囲の膵臓実質を門脈直上のレベルで剪刀で切断した。膵臓の切断端からの出血はガーゼ自然圧迫により止血した。脂肪組織は、傷つけないように留意した。
　脂肪組織の損傷の影響を明らかにするために、一部の動物は脂肪組織の損傷処置を施した（＋Ｆとして当該処置を記号化）。両側精巣上体周囲脂肪組織を切離し、３５ｍｍのポリスチレン滅菌皿に入れ、１ｍｌの生理食塩水に浸した。ｂｉｐｏｌａｒ　ｅｌｅｃｔｒｏｃａｕｔｅｒｙ　ｓｙｓｔｅｍ（コンメドセーバージェネシス）を用いて（出力５０Ｗ）、脂肪組織を５分間凝固させた。（熱傷を避けるために）室温で３分間冷却した後、損傷した脂肪組織と滲出液を腹腔内に戻した（ＰＴ＋Ｆ群）。

（動物の群分けと処置）
実験動物を群分けし、各群に以下の処置を行った。
Ｓｈａｍ群　　　：単開腹のみを施した。
Ｓｈａｍ＋Ｆ群　：単開腹および脂肪損傷処置を施した。
ＰＴ群　　　　　：膵切離操作のみを施した。
ＰＴ＋Ｆ群　　　：膵切離操作および脂肪損傷処置を施した。
ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ　　：膵切離操作後、ＰＥＧ－Ｃを投与し（ＰＥＧ－Ｃ；１ｍｌ腹腔内投与）、さらに脂肪損傷処置を施した。
ＰＴ＋Ｆ＋Ｖ　　：膵切離操作後、ＰＥＧ水溶液を投与し、さらに脂肪損傷処置を施した（ＰＥＧ水溶液；１ｍｌ腹腔内投与；ＰＥＧ含有量は、ＰＥＧ－Ｃにおけるものと等量）。

（血液サンプルの採取）
　手術の２４時間後にラットを屠殺するか、生存期間の解析のために７日間観察した。
　血液サンプルは、死亡直後に下大静脈から採取し、血清を分離した。腹腔洗浄液は、４ｍｌの生理食塩水で灌注した後、腹腔から採取し、遠心分離して上清を得、当該上清を腹水として評価に付した。すべての腹水、血清サンプルはすぐに分析するか、のちの解析のために-80度で凍結保存して一回解凍後のみ使用した。

（生化学的アッセイ）
　アミラーゼおよびリパーゼの活性は、専門の臨床検査機関（株式会社日本医学臨床検査研究所）で実施した。

（遊離脂肪酸濃度の測定）
　各血液サンプルの遊離脂肪酸濃度は、標識薬剤（ＸＳＲＦＡＲ０１；株式会社ワイエムシイ）を使用して、高速液体クロマトグラフィーによって決定した（検出器：Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ　ＳＰＤ－２０Ａ、島津；カラム：ＹＭＣパックＦＡ、株式会社ワイエムシイ）。マーガリン酸（Ｃ１７：０）を内部標準として使用した。総遊離脂肪酸（ｔｏｔａｌ　ｆｒｅｅ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ;ＴＦＡ）濃度は、個々のＣ１２：０、Ｃ１４：０、Ｃ１６：０、Ｃ１８：０、Ｃ１６：１、Ｃ１８：１およびＣ１８：２の脂肪酸を添加して計算され、不飽和脂肪酸濃度は、個々のＣ１６：１、Ｃ１８：１およびＣ１８：２の脂肪酸を添加して、以前の報告に従って、計算した。

（組織学的分析）
　屠殺後に組織を摘出し、１０％緩衝ホルマリンで４８時間固定し、厚さ４μｍのパラフィン包埋切片を調製した。ヘマトキシリンおよびエオシン染色、およびカルシウム沈着の検出のためのアリザリンレッドＳ染色（シグマ－アルドリッチ）は、標準プロトコルに従って実施した。

（統計分析）
　Ｌｅｖｅｎｅの分散の検定を適用した後、ｔ検定、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ　Ｕ検定、および多重比較Ｔｕｋｅｙ検定を伴うｏｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ、またはＳｔｅｅｌ－Ｄｗａｓｓ検定を適宜使用して、各群を比較した。カテゴリ変数は、フィッシャーの正確確率検定を使用して比較した。実験結果の数値は、平均値を表示する。特に明記しない限り、５つの独立した動物／サンプルを分析した。生存分析は、ログランク検定の手法による評価を、カプラン・マイヤープロットを使用して行った。データ分析は、ＪＭＰ　Ｐｒｏバージョン１４．０（ＳＡＳ）を使用して行った。

［実施例１：脂肪損傷が膵液瘻モデルマウスに与える影響の評価］

　上記の通り、膵液瘻モデルマウスの作出（膵切離処置）と脂肪損傷処置は図１に示された概略図に従って実施した。
（１）軽症膵液瘻様モデルであるＰＴ群において、腹腔内の変化はＳｈａｍ群と比較して目立った変化が認められず、Ｓｈａｍ群への脂肪損傷処置（＋Ｆ）によっても（Ｓｈａｍ＋Ｆ群）目立った変化は生じなかった。一方でその両者の処置を併せたＰＴ＋Ｆ群においては、腹腔内に顕著な白色の沈着物が生じた（図２）。

（２）各群の腹水中遊離脂肪酸濃度（μＭ）を検討した。
　ＰＴ＋Ｆ群において、腹腔内で高度に脂肪分解が生じて遊離脂肪酸が産生されていることが判明した。膵切離処置のみ、または脂肪損傷処置のみでは、遊離脂肪酸の産生は対照群と比較して有意な上昇は見られなかった（図３）。

（３）腹水中の膵酵素活性（ＩＵ／Ｌ）を検討した。
　ＰＴ群では腹腔内に有意な膵液漏出が生じていた。ＰＴ＋Ｆ群ではＰＴ群と比較して有意に高度な膵液漏出が認められ、有意な腹水中膵酵素活性の増強が認められた（図４）。

（４）膵臓の組織学的所見を検討した。
　ＰＴ群では膵臓に軽度の浮腫像、炎症細胞浸潤が認められた。ＰＴ＋Ｆ群でも同様の変化が認められたが、ＰＴ＋Ｆ群においては膵表面に硝子様沈着物の付着とその周囲の炎症細胞浸潤が認められた。この沈着物はアリザリンＳ染色で橙色に染色され、脂肪酸カルシウムの沈着と考えられた（図５）。

（５）ＰＴ群とＰＴ＋Ｆ群の生存率を検討した。
　ＰＴ群では１週間の観察で死亡例は認められなかった。ＰＴ＋Ｆ群では有意な生存率低下が認められ、より重症であることが判明した（図６）。

［実施例２：リパーゼ阻害剤の効果の評価（in vitro）］

（１）膵腺房細胞はリパーゼを含む膵酵素を産生、分泌するため、中性脂肪はその環境下で遊離脂肪酸に分解される。膵腺房細胞に中性脂肪が与える影響を検証するため、培地中に中性脂肪（トリオレイン）を投与して細胞障害性を検証した。
　培地内の中性脂肪濃度に依存して、上清中ＬＤＨ濃度の経時的上昇が認められ、経時的な細胞障害性の増強が確認された（図７）。この変化は膵腺房細胞に特徴的であり、別種の細胞（Ｒａｔ　ＭＳＣ（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ））での同様の実験では全く観察されなかった。

（２）培地中にＰＥＧ－Ｃを投与することにより、中性脂肪存在下でも膵腺房細胞への障害性が低減されることが確認された。
　図８に示された通り、対照群（ＰＥＧ－Ｃ添加なし）と比較してＰＥＧ－Ｃ使用群では、容量依存的に膵腺房細胞保護効果が認められた。特に、ＰＥＧ－Ｃ１００μＭ投与群において、有意に培地中のオレイン酸濃度の低下が認められた。

［実施例３：リパーゼ阻害剤の効果の評価（in vivo）］

（１）ＰＥＧ－Ｃの膵液瘻モデルマウスへの治療効果を評価した（腹腔内所見）。
　腹腔内変化を確認すると、ＰＴ＋Ｆ群で認められていた腹腔内の白色沈着物は、ＰＥＧ－Ｃの投与によりその沈着が抑制された（ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群）。ビーイクル投与（ＰＥＧ水溶液）のみでは、ＰＴ＋Ｆ群と同様の変化が認められた（ＰＴ＋Ｆ＋Ｖ群）（図９）。

（２）腹水中膵酵素活性（ＩＵ／Ｌ）を検討した。
　ＰＴ＋Ｆ群と比較し、ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群では有意な膵液漏出の減少が確認された。他方、ビーイクル投与群（ＰＴ＋Ｆ＋Ｖ群）ではこの効果は認められなかった（図１０）。

（３）腹水中遊離脂肪酸濃度（μＭ）を検討したところ、ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群ではＰＴ＋Ｆ群と比較して腹水中遊離脂肪酸濃度は有意に低く、遊離脂肪酸産生が有意に抑制されていることが判明した（図１１）。

（４）各群の生存率を検証した。
　ＰＴ＋Ｆ＋Ｃ群は観察期間中、死亡例が認められず、ＰＴ＋Ｆ群と比較して有意に生存率が改善することが確認された（図１２）。

（小括）
　実施例１～３に示された種々の観点からの検証結果により、ＰＥＧ－Ｃの腹腔内投与により、腹腔内脂肪分解の抑制を通して、膵液瘻の重症化を抑制できることが明らかとなった。
　リパーゼ阻害剤は、膵液瘻の有効な予防・治療戦略に資するものである。

[実施例４：セチリスタット－ハイドロゲル複合体の調製]
＜ハイドロゲル形成成分＞
　ハイドロゲル形成成分として、市販の４官能基タイプのポリエチレングリコール修飾剤である、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＧＳ（分子量１０，０００、末端がｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　ｇｌｕｔａｒａｔｅ）（日油株式会社）およびＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＳＨ（分子量１０，０００、末端がｔｈｉｏｌ）（日油株式会社）を、使用した。
＜ＰＥＧｇｅｌ調整液の調製＞
　ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＧＳを、２０％（ｗ／ｖ）の濃度となるように希塩酸に溶解した溶液（ｐＨ６．０）を調製した（溶液１）。他方、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＳＨを、２０％（ｗ／ｖ）の濃度となるようにリン酸－炭酸緩衝液に溶解した溶液（ｐＨ９．６）を調製した（溶液２）。Ｎｏｒｄｓｏｎ社製ＤＩＹデュアルシリンジ　４ｍｌに溶液１、溶液２を入れ、ミキシング可能なニードルアウトレットを装着しＰＥＧｇｅｌ調整液とした。
　本デュアルシリンジにより各溶液を押し出すことで、速やかにハイドロゲルが形成される（以下、本実施例中ＰＥＧｇｅｌと略記する場合がある）。

＜セチリスタット－ハイドロゲル複合体調整液の調製＞
　セチリスタットとＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＧＳを、1：５０（重量比）の比率で、粉末状態で混和し、７５℃の温浴中で５分間攪拌した後、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＧＳの濃度が２０％（ｗ／ｖ）となるように希塩酸を加え、白濁したエマルジョン状の溶液３を調整した（ｐＨ６．０）。
　他方、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＳＨを２０％（ｗ／ｖ）となるようにリン酸－炭酸緩衝溶液に加えて、溶液４（ｐＨ９．６）を調製した。
　Ｎｏｒｄｓｏｎ社製ＤＩＹデュアルシリンジ　４ｍｌに溶液３、溶液４を入れ、ミキシング可能なニードルアウトレットを装着しセチリスタット－ハイドロゲル複合体調整液とした。
　本デュアルシリンジにより各溶液を押し出すことで、速やかにセチリスタットを含有するハイドロゲルが形成される（以下、本実施例中ＰＥＧｇｅｌ－Ｃと略記する場合がある）。
　なお、当該ハイドロゲルにおいては、セチリスタット濃度は、２．５ｍｇ／ｍｌ（比重約１；２．５ｍｇ／ｇに相当）となり、動物の膵臓周囲にハイドロゲルを５００μl投与する場合のセチリスタット投与量は、１．２５ｍｇであった。

[実施例５：ＰＥＧｇｅｌ－Ｃの効果の評価（ｉｎ　ｖｉｖｏ）]
　ＰＥＧｇｅｌ－Ｃの膵液瘻への効果を評価するため、膵液瘻モデルマウスを用いて動物実験を行った。
＜実験方法＞
　実験動物は、前記の＜動物実験＞（動物）の項で記載されたものと同じ動物を用いた。
　動物実験は以下の手順で行った。
１．実験当日に、ＰＥＧｇｅｌ調整液およびセチリスタット－ハイドロゲル複合体調整液を調製した。
２．全身麻酔下にラットの膵臓を切離し、（＜動物実験＞PT群と同様）止血後にＰＥＧｇｅｌ調整液またはセチリスタット－ハイドロゲル複合体調整液を膵臓の周囲に５００μｌ投与した（ＰＥＧｇｅｌ（Ｎ＝２）、ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ（Ｎ＝３）、ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ群：セチリスタットの投与量は１．２５ｍｇ／ｂｏｄｙ）。
３．薬液投与後のゲル化の完了を確認した（投与後１分程度）。
４．図１に示された脂肪損傷処置を行い、脂肪を焼灼凝固したもの、および浸出液を腹腔内に戻し（＋Ｆ処置）、その後閉創した。
５．手術から２４時間経過後にラットを屠殺して、組織を摘出し、組織学的分析に付した。

　本動物実験での動物の群分けは、以下の通りである。
ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ群：上記の動物実験で、ＰＥＧｇｅｌ－Ｃを投与した群（Ｎ＝３）。
ＰＥＧｇｅｌ群：上記の動物実験で、ＰＥＧｇｅｌを投与した群（Ｎ＝２）。
ＰＴ群：膵切離操作のみを施した群（実施例１で行われた動物実験で取得されたデータを参照）（Ｎ＝５）。
ＰＴ＋Ｆ群：ＰＥＧｇｅｌ－ＣおよびＰＥＧｇｅｌのいずれも投与しない無治療群（実施例１で行われた動物実験で取得されたデータを参照）（Ｎ＝５）。

＜実験結果＞
（１）組織学的所見の検討
（ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ投与群）
　図１３および図１４に示された通り、ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ群では、すべてにおいて、無治療群（図１７参照）と比較して、腹腔内全般の炎症所見および鹸化のいずれの評価項目においても明らかな低減（抑制）が確認された。
（ＰＥＧｇｅｌ投与群）
　図１５および図１６に示された通り、ＰＥＧｇｅｌ群では、無治療群（図１７参照）と比較して、腹腔内全般の所見に明らかな変化は確認されなかった。

（２）腹水中の膵酵素活性（ＩＵ／Ｌ）の検討
　図１８に測定結果を示す。ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ群では、無治療群（ＰＴ＋Ｆ群）と比較して腹水中への膵酵素の漏出が有意に抑制されていることが確認された。ＰＴ群とＰＴ＋Ｆ群は、前記の実施例１で得られたデータを援用した。

（小括）
　セチリスタット－ハイドロゲル複合体（ＰＥＧｇｅｌ－Ｃ）により膵臓を被覆することによって、膵液瘻の重症化を抑制できる可能性が確認された。
　リパーゼ阻害剤を含有するハイドロゲル製剤は、リパーゼ阻害剤を膵臓局所に効率的に分布させることによる膵液瘻の新たな治療戦略を提供するものである。

［実施例６：オルリスタット－ハイドロゲル複合体の調製］
　実施例４の＜セチリスタット－ハイドロゲル複合体調整液の調製＞に記載された調製方法において、セチリスタットとＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＧＳを、１：５０（重量比）の比率で、粉末状態で混和する代わりに、オルリスタットとＳＵＮＢＲＩＧＨＴ　ＰＴＥ－１００ＧＳを、１：３０（重量比）の比率で、粉末状態で混和する以外は同様の操作を行い、オルリスタットを含むオルリスタット－ハイドロゲル複合体調整液を得た。
　デュアルシリンジにより各溶液を押し出すことで、速やかにオルリスタットを含有するハイドロゲルが形成される（以下、本実施例中ＰＥＧｇｅｌ－Оと略記する場合がある）。
　なお、当該ハイドロゲルにおいては、オルリスタット濃度は、３．３ｍｇ／ｍｌ（比重約１；３．３ｍｇ／ｇに相当）となり、動物の膵臓周囲にハイドロゲルを５００μｌ投与する場合のオルリスタット投与量は、１．６７ｍｇであった。

［実施例７：ＰＥＧｇｅｌ－Оの効果の評価（ｉｎ　ｖｉｖｏ）］
　ＰＥＧｇｅｌ－Ｃの代わりにＰＥＧｇｅｌ－Оを用いた以外は実施例５と同様の操作を行い、膵液瘻への効果を評価した。

　本動物実験での動物の群分けは、以下の通りである。
　ＰＥＧｇｅｌ－О群：上記の動物実験で、ＰＥＧｇｅｌ－Оを投与した群（Ｎ＝２）。

＜実験結果＞
（１）組織学的所見の検討
（ＰＥＧｇｅｌ－О投与群）
　図１９に示された通り、ＰＥＧｇｅｌ－О群では、無治療群（図１７参照）と比較して、腹腔内全般の炎症所見および鹸化のいずれの評価項目においても明らかな低減（抑制）が確認された。

（２）腹水中の膵酵素活性（ＩＵ／Ｌ）の検討
　膵酵素活性として腹水アミラーゼを測定した結果、ＰＥＧｇｅｌ－О群では３５５９ＩＵ／Ｌであり、無治療群（ＰＴ＋Ｆ群）と比較して腹水中への膵酵素の漏出が有意に抑制されていることが確認された。ＰＴ群とＰＴ＋Ｆ群は、前記の実施例１で得られたデータ（１６８６８ＩＵ／Ｌ）を援用した。

（小括）
　オルリスタット－ハイドロゲル複合体（ＰＥＧｇｅｌ－Ｏ）により膵臓を被覆することによって、膵液瘻の重症化を抑制できる可能性が確認された。

［実施例８：セチリスタット－ボルヒール（フィブリンゲル）複合体の調製］
＜ハイドロゲル形成成分＞
　ハイドロゲル形成成分として、帝人ファーマ（株）ボルヒール組織接着用１ｍｌ製剤^注１（以下、ボルヒールと略記する場合がある）を、使用した。
注１）ボルヒール組織接着製剤について
　ボルヒール組織接着製剤は、フィブリノーゲン凍結乾燥粉末、フィブリノーゲン溶解液、トロンビン凍結乾燥粉末、およびトロンビン溶解液から構成され、詳細は以下の通りである。
バイアル１：フィブリノーゲン凍結乾燥粉末
（人血漿由来のフィブリノーゲン及び血液凝固第ＸＩＩＩ因子を含む）
バイアル２：フィブリノーゲン溶解液
（牛肺由来のアプロチニンを含む）
バイアル３：トロンビン凍結乾燥粉末
（人血漿由来のトロンビンを含む）
バイアル４：トロンビン溶解液
（塩化カルシウム水和物を含む）
　ボルヒール組織接着製剤をハイドロゲル形成成分として使用することにより、血漿中の糖タンパク質であるフィブリノーゲンにトロンビンが作用し、フィブリン・モノマーが生成され、フィブリン・モノマーはさらにカルシウムの作用によって重合してフィブリン・ポリマーに、さらに第ＸＩＩＩ因子の作用でフィブリン・ポリマー間の架橋結合がなされることで安定化フィブリンと呼ばれるメッシュ状の繊維となり、いわゆるフィブリンゲルが生成される。

＜セチリスタット－ボルヒール複合体調整液の調製＞
　前記の実施例で調整したＰＥＧ－Ｃ　０．１２ｍＬとボルヒールのトロンビン溶解液　０．８８ｍＬを混合し、ＰＥＧ－Ｃを含むトロンビン溶解液を調製し、トロンビン凍結乾燥粉末に加えることで、ＰＥＧ－Ｃを含むトロンビン溶液を調製した。
　他方、「ボルヒール組織接着用１ｍｌ製剤」の添付文書記載の方法でフィブリノーゲン溶解液をフィブリノーゲン凍結乾燥粉末に加え、フィブリノーゲン溶液を作成した。
　ボルヒールに付属するデュアルシリンジに上記ＰＥＧ－Ｃを含むトロンビン溶液とフィブリノーゲン溶液を加え、本デュアルシリンジにより各溶液を押し出すことで、速やかにセチリスタットを含有するハイドロゲルが形成されることを確認した（以下、本実施例中ボルヒール－Ｃと略記する場合がある）。
　なお、当該ハイドロゲルにおいては、セチリスタット濃度は、２．０ｍｇ／ｍｌ（比重約１；２．０ｍｇ／ｇに相当）となり、動物の膵臓周囲にハイドロゲルを５００μｌ投与する場合のセチリスタット投与量は、１．０ｍｇであった。

［実施例９：ボルヒール－Ｃの効果の評価（ｉｎ　ｖｉｖｏ）］
　ＰＥＧｇｅｌ－Ｃの代わりにボルヒール－Ｃを用いた以外は実施例５と同様の操作を行い、膵液瘻への効果を評価した。

　本動物実験での動物の群分けは、以下の通りである。
　ボルヒール－Ｃ群：上記の動物実験で、ボルヒール－Ｃを投与した群（Ｎ＝２）。

＜実験結果＞
（１）組織学的所見の検討
（ボルヒール－Ｃ投与群）
　図２０に示された通り、ボルヒール－Ｃ群では、無治療群（図１７参照）と比較して、腹腔内全般の炎症所見および鹸化のいずれの評価項目においても低減（抑制）が確認された。

（小括）
　セチリスタット－ボルヒール複合体（ボルヒール－Ｃ）により膵臓を被覆することによって、膵液瘻の重症化を抑制できる可能性が確認された。

［比較例１：ボルヒール単体の調製］
　実施例８の＜セチリスタット－ボルヒール複合体調整液の調製＞に記載された調製方法において、ＰＥＧ－Ｃを含むトロンビン溶解液の代わりに、ボルヒールのトロンビン溶解液を用いた以外は同様の操作を行い、セチリスタットを含まないボルヒール単体からなるハイドロゲルを調製した（以下、本実施例中ボルヒール単体と略記する場合がある）。

［比較例２：ボルヒール単体の効果の評価（ｉｎ　ｖｉｖｏ）］
　ＰＥＧｇｅｌ－Ｃの代わりにボルヒール単体を用いた以外は実施例５と同様の操作を行い、膵液瘻への効果を評価した。

　本動物実験での動物の群分けは、以下の通りである。
　ボルヒール単体群：上記の動物実験で、ボルヒール単体を投与した群（Ｎ＝２）。

＜実験結果＞
（１）組織学的所見の検討
（ボルヒール単体投与群）
　図２１に示された通り、ボルヒール単体群では、無治療群（図１７参照）と同様の、腹腔内全般の炎症所見および鹸化が確認された。

（まとめ）
　リパーゼ阻害剤は、膵液瘻の有効な予防・治療戦略に資するものであることが明らかとなった。また、リパーゼ阻害剤のハイドロゲル製剤は、その有効な投与方法の一つであることも明らかとなった。

　本発明は、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療剤、および腹部手術後の膵液漏出または膵液瘻の予防または治療方法を提供するものであり、医薬の分野において有用である。

　本出願は、日本で出願された特願２０２０－１８３０９（出願日：２０２０年２月５日）および特願２０２０－１６７８８１（出願日：２０２０年１０月２日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (16)

1. 　リパーゼ阻害剤を有効成分として含有する、腹部手術後の膵液漏出および／または膵液瘻の予防または治療剤。
2. 　腹部手術後の膵液瘻の予防または治療のための、請求項１に記載の予防または治療剤。
3. 　膵液瘻が、臨床的処置を要する術後膵液瘻（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｆｉｓｔｕｌａ　（ＣＲ－ＰＯＰＦ））である、請求項２に記載の予防または治療剤。
4. 　腹部手術が膵臓手術である、請求項１～３のいずれか一項に記載の予防または治療剤。
5. 　リパーゼ阻害剤が、オルリスタット、セチリスタット、ラリスタットおよびアトグリスタチンから選択される１種または２種以上の薬剤の組み合わせである、請求項１～４のいずれか一項に記載の予防または治療剤。
6. 　リパーゼ阻害剤が、オルリスタットおよびセチリスタットから選択される１種または２種の薬剤の組み合わせである、請求項５に記載の予防または治療剤。
7. 　リパーゼ阻害剤を０．０１から２０％（ｗ／ｗ）含有することを特徴とする請求項１～６のいずれか一項に記載の予防または治療剤。
8. 　リパーゼ阻害剤および分散剤を含有する乳化製剤である、請求項１～７のいずれか一項に記載の予防または治療剤。
9. 　リパーゼ阻害剤とハイドロゲルとの複合体を含有するハイドロゲル製剤である、請求項１～７のいずれか一項に記載の予防または治療剤。
10. 　ハイドロゲルが、以下のハイドロゲル形成成分の組み合わせのいずれか一つから形成されるハイドロゲル製剤である、請求項９に記載の予防または治療剤。
    １）親水性生体適合性ポリマーおよび生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ；
    ２）官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＡ）およびポリマーＡと生体内条件下で反応する官能基を持つ合成生体適合性ポリマー（ポリマーＢ）の組み合わせ；または
    ３）官能基を持つ低分子化合物および生体適合性親水性ポリマー架橋剤の組み合わせ。
11. 　合成生体適合性ポリマーが、官能基を有するポリアルキレンオキシドを含有するものである、請求項１０に記載の予防または治療剤。
12. 　親水性生体適合性ポリマーが、ゼラチン、コラーゲン、フィブリノーゲン、フィブリン、セルロース、およびキトサン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つである、請求項１０に記載の予防または治療剤。
13. 　親水性生体適合性ポリマーが、架橋ゼラチン、フィブリノーゲン、およびフィブリン、ならびにそれらの誘導体から選択される少なくとも一つである、請求項１０に記載の予防または治療剤。
14. 　リパーゼ阻害剤を０．０１～１０％（Ｗ／Ｗ）含有する請求項９～１３のいずれか一項に記載の予防または治療剤。
15. 　リパーゼ阻害剤を０．０１～５％（リパーゼ阻害剤重量／ハイドロゲル形成成分重量）含有する、請求項１４に記載の予防または治療剤。
16. 　さらに分散剤を含有する、請求項９～１５のいずれか一項に記載の予防または治療剤。

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