WO2021136390A1 - 凝血因子XIa抑制剂 - Google Patents

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WO2021136390A1
WO2021136390A1 PCT/CN2020/141466 CN2020141466W WO2021136390A1 WO 2021136390 A1 WO2021136390 A1 WO 2021136390A1 CN 2020141466 W CN2020141466 W CN 2020141466W WO 2021136390 A1 WO2021136390 A1 WO 2021136390A1
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tert
butyl
chloro
fluoro
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PCT/CN2020/141466
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安东
刘煜
骆庆合
张斌
苗帅
伍广生
卢凯
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上海京新生物医药有限公司
浙江京新药业股份有限公司
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • C07D257/06—Five-membered rings with nitrogen atoms directly attached to the ring carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00

Definitions

  • the present invention relates to a new type of coagulation factor XIa inhibitor, a pharmaceutical composition containing the same, a preparation method thereof, and use thereof in the preparation of drugs for preventing or treating thrombosis and embolism-related diseases.
  • Cardiovascular and cerebrovascular disease is a common disease that seriously threatens human beings. It has the characteristics of high morbidity, high disability and high mortality. It ranks first among all lethal factors and is regarded as the "top killer" of human beings. The results of the third national cause of death survey published by the former Ministry of Health of China showed that cerebrovascular diseases accounted for 22.45% of the total deaths. There are 2.5 million new cases of stroke each year in my country, and 1.3 million people die of stroke each year. Among the many cardiovascular and cerebrovascular diseases, thrombotic diseases have the highest incidence and have been increasing in recent years. They are hot and difficult issues in contemporary medical research.
  • thrombosis diseases are diseases caused by abnormal blood clots that form in blood vessels during the survival of humans and animals. When they occur, they have serious effects on the body, such as vascular blockage, embolism, and heart valves. Deformation, extensive bleeding, etc. The formation mechanism of thrombus is very complicated.
  • VTE Venous Thromboembolism
  • DVT Deep Venous Thrombosis
  • PE pulmonary embolism
  • PTS Post Thrombotic Syndrome
  • Thrombosis diseases have a widespread impact on human health, and anti-thrombotic drugs have always been a hot spot in the pharmaceutical industry.
  • Traditional anticoagulant drugs such as warfarin, heparin, low molecular weight heparin (LMWH), and new drugs that have been marketed in recent years such as FXa inhibitors (rivaroxaban, apixaban, etc.) and thrombin inhibitors (dabigatran etexilate) , Hirudin, etc.) can effectively reduce the formation of venous thrombosis.
  • BMS262084, BMS724296, and BMS962212 developed by BMS have entered clinical research.
  • BAY1213790 developed by Bayer and ONO8610539 developed by Ono Pharmaceuticals are also in preclinical research status. These clinical trials or pre-clinical compounds are speculated to have their special properties.
  • the clinical dosage form of BMS962212 is an intravenous liquid preparation, suggesting that it is difficult to be absorbed through the stomach or the stomach or has an unacceptable first pass effect.
  • BMS262084 and BMS724296 were terminated after phase I clinical trials, suggesting that the human body may not be effective.
  • Factor XIa is an attractive target for the treatment and prevention of thromboembolic diseases.
  • Factor XIa inhibitors may become a new, effective, potential and safer treatment for human thrombotic diseases.
  • the present invention provides a new class of coagulation factor XIa inhibitors.
  • the compound involved in the present invention can specifically act on factor XIa, and can significantly prolong the clotting time of human whole blood under very low concentration conditions.
  • the classic rat arteriovenous thrombosis test (AVST) verifies that the compound of the present invention has a significant antithrombotic effect in vivo. Therefore, the compounds of the present invention have greater clinical potential than those mentioned in public reports.
  • the compound of the present invention is a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, polymorph, solvate, N-oxide, metabolite or prodrug thereof:
  • A is selected from phenyl and cyclohexyl
  • R 1 is each independently selected from halogen, C 1-6 alkyl, tetrazolyl and triazolyl, and each of said C 1-6 alkyl, tetrazolyl or triazolyl is optionally selected from one or more Substitution from amino and halogen substituents;
  • n 0, 1, 2 or 3;
  • R 2 and R 3 are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • n 0 or 1
  • R 4 is H
  • R 5 is phenyl or C 1-6 alkyl optionally substituted with one or more R 8;
  • R 4 , R 5 and the atoms to which they are connected together form a 5-6 membered azacycloalkyl group optionally fused with a benzene ring, the 5-6 membered azacycloalkyl group or a benzene ring fused therewith Optionally substituted with one or more R 8 ;
  • R 8 is each independently selected from H, -NR a R b , halogen, 5-6 membered cycloalkyl and phenyl;
  • R a is selected from H and C 1-6 alkyl
  • R b is -(CO) p -(CH 2 ) q -R 9 ;
  • p is 0 or 1;
  • q 1 or 2;
  • R 9 is selected from C 1-6 alkoxy and -NR c R d ;
  • R c and R d are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • R 6 is selected from H and C 1-6 alkyl
  • R 7 is phenyl or benzyl optionally substituted with one or more R 10;
  • R 10 is each independently selected from -(CH 2 ) r -C(O) s -R 11 , C 1-6 alkoxy optionally substituted by one or more halogens, tetrazolyl, halogen, -NHCOOC 1-6 alkyl and -SO 2 NHCOC 1-6 alkyl;
  • r is 0 or 1;
  • s 1 or 2;
  • R 11 is selected from H, -NHSO 2 R 12 and C 1-6 alkyl optionally substituted by R 13;
  • R 12 is selected from C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl and phenyl;
  • R 13 is selected from -OCOOR 14 and
  • R 14 is selected from C 1-6 alkyl and C 3-6 cycloalkyl
  • R 6 , R 7 and the N atom to which they are connected together form a 5-6 membered azacycloalkyl group
  • R 8 is And when R 10 is -(CH 2 ) r -C(O) s -R 11 , R 6 is a C 1-6 alkyl group,
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a preventive or therapeutically effective amount of the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, or polymorph of the present invention , Solvates, N-oxides, metabolites or prodrugs, and one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • the present invention provides a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, polymorph, solvate, N-oxide, metabolite or pro- Medicine, which is used to prevent or treat thrombosis and embolism related diseases.
  • the present invention provides a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, polymorph, solvate, N-oxide, metabolite or pro- Use of the medicine in the preparation of medicines for preventing or treating thrombosis and embolism related diseases.
  • the present invention provides a method for preventing or treating thrombosis and embolism-related diseases, which comprises administering to an individual in need thereof a preventive or therapeutically effective amount of a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof. Constructs, tautomers, polymorphs, solvates, N-oxides, metabolites or prodrugs, or the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the present invention provides a method for preparing the compound of the present invention, which is carried out according to the following route 1, 2, 3 or 4:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , m and n are as defined above;
  • PG is a protecting group for an amino group (for example, tert-butoxycarbonyl or 9-fluorenylmethoxycarbonyl).
  • Figure 1 shows the thrombosis reduction range and inhibition rate of the compound of Example 3 in the rat AVST experiment.
  • Figure 2 shows the thrombus inhibitory effect of the compound of Example 3 in the AVST experiment in rats.
  • alkyl is defined as a linear or branched saturated aliphatic hydrocarbon group.
  • C 1-6 alkyl refers to a straight or branched group having 1 to 6 carbon atoms (e.g., methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, N-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl, etc.).
  • cycloalkyl refers to a saturated non-aromatic monocyclic or polycyclic (such as bicyclic) hydrocarbon ring.
  • C 3-6 cycloalkyl refers to a saturated non-aromatic monocyclic or polycyclic (such as bicyclic) hydrocarbon ring (e.g., cyclopropyl, cyclobutyl, cyclo Pentyl or cyclohexyl).
  • C 5-6 cycloalkyl refers to a saturated non-aromatic monocyclic or polycyclic (such as bicyclic) hydrocarbon ring (e.g., cyclopentyl or cyclohexyl) having 5 to 6 ring-forming carbon atoms.
  • alkoxy means a group in which an oxygen atom is inserted at any reasonable position of an alkyl group (as defined above).
  • C 1-6 alkoxy include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, tert-butyl Oxy, pentyloxy, hexyloxy, etc.
  • substitution means that one or more (for example, 1, 2, 3, or 4) hydrogens on the designated atom are replaced by a selection from the indicated group, provided that no more than the designated atom is The normal valence in the current situation and the substitution forms a stable compound. Combinations of substituents and/or variables are only permissible when such combinations form stable compounds.
  • substituents can be (1) unsubstituted or (2) substituted. If the carbon of a substituent is described as being optionally substituted by one or more of the list of substituents, then one or more hydrogens on the carbon (to the extent of any hydrogens present) may be independently and/or together independently The selected substituents are substituted or not substituted. If the nitrogen of a substituent is described as being optionally substituted with one or more of the list of substituents, then one or more hydrogens on the nitrogen (to the extent of any hydrogens present) may each be independently selected substituents Replaced or not replaced.
  • each substituent is selected independently of the other. Therefore, each substituent may be the same or different from another (other) substituent.
  • one or more means one or more than one under reasonable conditions, such as two, three, four, five, six, seven, eight, nine Or 10.
  • the point of attachment of a substituent can be from any suitable position of the substituent.
  • stereoisomer means an isomer formed due to at least one asymmetric center. In compounds with one or more (for example, 1, 2, 3, or 4) asymmetric centers, it can produce racemic mixtures, single enantiomers, diastereomeric mixtures, and Individual diastereomers. Certain molecules can also exist as geometric isomers (cis/trans). Similarly, the compounds of the present invention may exist in a mixture of two or more structurally different forms (commonly referred to as tautomers) in rapid equilibrium. Representative examples of tautomers include keto-enol tautomers, phenol-ketone tautomers, nitroso-oxime tautomers, imine-enamine tautomers Wait.
  • the present invention covers all possible crystalline forms or polymorphs of the compounds of the present invention, which can be a single polymorph or a mixture of more than one polymorph in any ratio.
  • compositions of the present invention may exist in free form for treatment, or, when appropriate, in the form of their pharmaceutically acceptable derivatives.
  • pharmaceutically acceptable derivatives include, but are not limited to: pharmaceutically acceptable salts, solvates, metabolites or prodrugs, which can be directly or indirectly administered to patients in need thereof.
  • the compound of the present invention or its metabolite or residue is provided. Therefore, when the "compound of the present invention" is referred to herein, it is also intended to encompass the above-mentioned various derivative forms of the compound.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention include acid addition salts and base addition salts thereof.
  • Suitable acid addition salts are formed from acids that form pharmaceutically acceptable salts.
  • Suitable base addition salts are formed from bases that form pharmaceutically acceptable salts.
  • the compound of the present invention may exist in the form of a solvate (preferably a hydrate), wherein the compound of the present invention contains a polar solvent as a structural element of the compound crystal lattice, in particular, for example, water, methanol or ethanol.
  • a polar solvent as a structural element of the compound crystal lattice, in particular, for example, water, methanol or ethanol.
  • the amount of polar solvent, especially water, can be present in a stoichiometric or non-stoichiometric ratio.
  • N-oxides can be formed.
  • Nitrogen-containing heterocycle Those skilled in the art will also recognize that tertiary amines can form N-oxides.
  • N-oxides of heterocycles and tertiary amines are well known to those skilled in the art, including the use of peroxyacids such as peroxyacetic acid and m-chloroperoxybenzoic acid (MCPBA), hydrogen peroxide, alkyl Hydrogen peroxide such as tert-butyl hydroperoxide, sodium perborate, and dioxirane such as dimethyldioxirane to oxidize heterocycles and tertiary amines.
  • MCPBA m-chloroperoxybenzoic acid
  • hydrogen peroxide alkyl Hydrogen peroxide such as tert-butyl hydroperoxide
  • sodium perborate sodium perborate
  • dioxirane such as dimethyldioxirane
  • metabolites of the compounds of the present invention that is, substances formed in the body when the compounds of the present invention are administered. Such products can be produced by, for example, oxidation, reduction, hydrolysis, amidation, deamidation, esterification, enzymatic hydrolysis, etc. of the administered compound. Therefore, the present invention includes metabolites of the compounds of the present invention, including compounds prepared by a method in which the compounds of the present invention are contacted with a mammal for a time sufficient to produce their metabolites.
  • the present invention further includes within its scope the prodrugs of the compounds of the present invention, which are certain derivatives of the compounds of the present invention that may themselves have little or no pharmacological activity, when administered to the body or The above can be converted into the compound of the present invention having the desired activity by, for example, hydrolytic cleavage.
  • prodrugs will be functional group derivatives of the compound, which are easily converted into the desired therapeutically active compound in vivo.
  • prodrugs please refer to "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Volume 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi and V. Stella) and "Bioreversible Carriers in Drug Design," Pergamon Press, 1987 ( Edited by EBRoche, American Pharmaceutical Association).
  • prodrugs of the present invention can be used, for example, by using certain parts known to those skilled in the art as “pro-moiety (for example, “Design of Prodrugs", described in H. Bundgaard (Elsevier, 1985))" It can be prepared by substituting appropriate functional groups present in the compounds of the present invention.
  • the present invention also encompasses compounds of the present invention containing protecting groups.
  • protecting groups In any process of preparing the compounds of the present invention, protection of sensitive groups or reactive groups on any relevant molecule may be necessary and/or desirable, thereby forming a chemically protected form of the compounds of the present invention. This can be achieved through conventional protective groups, such as those described in Protective Groups in Organic Chemistry, ed. JFW McOmie, Plenum Press, 1973; and TW Greene & P. GMWuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1991 Protecting groups, these references are incorporated herein by reference. Using methods known in the art, the protecting group can be removed at an appropriate subsequent stage.
  • An object of the present invention is to provide a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, polymorph, solvate, N-oxide, metabolite or Prodrug:
  • A is selected from phenyl and cyclohexyl
  • R 1 is each independently selected from halogen, C 1-6 alkyl, tetrazolyl and triazolyl, and each of said C 1-6 alkyl, tetrazolyl or triazolyl is optionally selected from one or more Substitution from amino and halogen substituents;
  • n 0, 1, 2 or 3;
  • R 2 and R 3 are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • n 0 or 1
  • R 4 is H
  • R 5 is phenyl or C 1-6 alkyl optionally substituted with one or more R 8;
  • R 4 , R 5 and the atoms to which they are connected together form a 5-6 membered azacycloalkyl group optionally fused with a benzene ring, the 5-6 membered azacycloalkyl group or a benzene ring fused therewith Optionally substituted with one or more R 8 ;
  • R 8 is each independently selected from H, -NR a R b , halogen, 5-6 membered cycloalkyl and phenyl;
  • R a is selected from H and C 1-6 alkyl
  • R b is -(CO) p -(CH 2 ) q -R 9 ;
  • p is 0 or 1;
  • q 1 or 2;
  • R 9 is selected from C 1-6 alkoxy and -NR c R d ;
  • R c and R d are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • R 6 is selected from H, C 1-6 alkyl and C 3-6 cycloalkyl
  • R 7 is phenyl or benzyl optionally substituted with one or more R 10;
  • R 10 is each independently selected from -(CH 2 ) r -C(O) s -R 11 , C 1-6 alkoxy optionally substituted by one or more halogens, tetrazolyl, halogen, -NHCOOC 1-6 alkyl and -SO 2 NHCOC 1-6 alkyl;
  • r is 0 or 1;
  • s 1 or 2;
  • R 11 is selected from H, -NHSO 2 R 12 and C 1-6 alkyl optionally substituted by R 13;
  • R 12 is selected from C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl and phenyl;
  • R 13 is selected from -OCOOR 14 and
  • R 14 is selected from C 1-6 alkyl and C 3-6 cycloalkyl
  • R 6 , R 7 and the N atom to which they are connected together form a 5-6 membered azacycloalkyl group
  • R 8 is And when R 10 is -(CH 2 ) r -C(O) s -R 11 , R 6 is a C 1-6 alkyl group,
  • R 2 and R 3 are H.
  • R 4 is H
  • R 5 is phenyl optionally substituted by R 8;
  • R 8 is each independently selected from H, -NR a R b , halogen, 5-6 membered cycloalkyl and phenyl;
  • R a is selected from H and C 1-6 alkyl
  • R b is -(CO) p -(CH 2 ) q -R 9 ;
  • p is 0 or 1;
  • q 1 or 2;
  • R 9 is selected from C 1-6 alkoxy and -NR c R d ;
  • R c and R d are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • R 4 is H
  • R 5 is phenyl optionally substituted by R 8;
  • R 8 is -NR a R b ;
  • R a is H
  • R b is -(CO) p -(CH 2 ) q -R 9 ;
  • p 1;
  • R 9 is -NR c R d ;
  • R c and R d are each independently selected from C 1-6 alkyl.
  • R 4 , R 5 and the atoms to which they are connected together form a 5-6 membered azacycloalkyl group optionally fused with a benzene ring, and the 5-6 membered azacycloalkyl group or the benzene ring fused with it is either Replaced by R 8;
  • R 8 is each independently selected from H, -NR a R b , halogen, 5-6 membered cycloalkyl and phenyl;
  • R a is selected from H and C 1-6 alkyl
  • R b is -(CO) p -(CH 2 ) q -R 9 ;
  • p is 0 or 1;
  • q 1 or 2;
  • R 9 is selected from C 1-6 alkoxy and -NR c R d ;
  • R c and R d are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • R 4 , R 5 and the atoms to which they are connected together form 1,2,3,4-tetrahydroisoquinolinyl or pyrrolidinyl, the 1,2,3,4-tetrahydroisoquinolinyl or pyrrolidine
  • the group is optionally substituted by R 8;
  • R 8 is each independently selected from H, -NR a R b , halogen, 5-6 membered cycloalkyl and phenyl;
  • R a is selected from H and C 1-6 alkyl
  • R b is -(CO) p -(CH 2 ) q -R 9 ;
  • p is 0 or 1;
  • q 1 or 2;
  • R 9 is selected from C 1-6 alkoxy and -NR c R d ;
  • R c and R d are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • R 8 is selected from H, -NR a R b , halogen and
  • R a is selected from H and C 1-6 alkyl
  • R b is -(CO) p -(CH 2 ) q -R 9 ;
  • p is 0 or 1;
  • q 1 or 2;
  • R 9 is selected from C 1-6 alkoxy and -NR c R d ;
  • R c and R d are each independently selected from H and C 1-6 alkyl
  • R 8 is selected from H, -NHCOCH 2 OCH 3 , -NHCOCH 2 N(CH 3 ) 2 , -NH(CH 2 ) 2 N(CH 3 ) 2 , -N(CH 3 )COCH 2 OCH 3 , -N( CH 3 )COCH 2 N(CH 3 ) 2 , Br and
  • R 8 is selected from cyclohexyl and phenyl
  • R 6 is selected from H, C 1-6 alkyl and C 3-6 cycloalkyl
  • R 7 is phenyl or benzyl optionally substituted with one or two R 10;
  • R 10 is each independently selected from -(CH 2 ) r -C(O) s -R 11 , C 1-6 alkoxy optionally substituted by one or more halogens, tetrazolyl, halogen, -NHCOOC 1-6 alkyl and -SO 2 NHCOC 1-6 alkyl;
  • r is 0 or 1;
  • s 1 or 2;
  • R 11 is selected from H, -NHSO 2 R 12 and C 1-6 alkyl optionally substituted by R 13;
  • R 12 is selected from C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl and phenyl;
  • R 13 is selected from -OCOOR 14 and
  • R 14 is selected from C 1-6 alkyl and C 3-6 cycloalkyl
  • R 6 is selected from H, C 1-6 alkyl and C 3-6 cycloalkyl
  • R 7 is phenyl or benzyl optionally substituted with one or two R 10;
  • R 10 is each independently selected from -COOH, -COOCH 3 , -COOCH 2 CH 3 , -COOC(CH 3 ) 3 , -COOCH 2 OCOOCH 2 CH 3 , -COOCH 2 OCOOCH(CH 3 ) 2 , -COOCH(CH 3 )OCOOCH 2 CH 3 , -COOCH(CH 3 )OCOOCH(CH 3 ) 2 , -CONHSO 2 CH 3 , -CH 2 COOH, -OCH 3 , -OCHF 2 , -Cl, -F, -NHCOOCH 3 and -SO 2 NHCOCH 3 ,
  • R 6 , R 7 and the N atom to which they are attached together form a pyrrolidinyl group.
  • the present invention encompasses compounds of formula I obtained by any combination of the above-mentioned preferred groups.
  • the compound of the invention has the structure of formula II:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 6 , R 7 , R 8 , m and n are as defined above.
  • the compound of the present invention has the structure of formula II-1:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the present invention has the structure of formula II-2:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the invention has the structure of formula II-3:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the present invention has the structure of formula II-4:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the present invention has the structure of formula II-5:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the invention has the structure of Formula III:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 6 , R 7 , R 8 , m and n are as defined above.
  • the compound of the present invention has the structure of formula III-1:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the invention has the structure of formula III-2:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the invention has the structure of formula IV:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 6 , R 7 , R 8 , m and n are as defined above.
  • the compound of the present invention has the structure of formula IV-1:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the invention has the structure of formula IV-2:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the invention has the structure of formula IV-3:
  • R 6 , R 7 and R 8 are as defined above.
  • the compound of the invention is selected from:
  • Another object of the present invention is to provide a method for preparing the compound of the present invention, which is carried out according to the following route 1, 2, 3 or 4:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , m and n are as defined above;
  • PG is a protecting group for an amino group (for example, tert-butoxycarbonyl or 9-fluorenylmethoxycarbonyl).
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a preventive or therapeutically effective amount of the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, or polymorph of the present invention , Solvates, N-oxides, metabolites or prodrugs, and one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • pharmaceutically acceptable carrier refers to a diluent, adjuvant, excipient or vehicle administered with the therapeutic agent, and it is suitable for contact with humans and/or within the scope of reasonable medical judgment Tissues of other animals without excessive toxicity, irritation, allergic reactions, or other problems or complications corresponding to a reasonable benefit/risk ratio.
  • water is an exemplary carrier. It is also possible to use physiological saline and aqueous glucose and glycerol solutions as liquid carriers, especially for injections. Suitable pharmaceutical excipients include starch, glucose, lactose, sucrose, gelatin, maltose, chalk, silica gel, sodium stearate, glyceryl monostearate, talc, sodium chloride, skimmed milk powder, glycerin, propylene glycol, water, Ethanol, etc. The composition may also contain small amounts of wetting agents, emulsifiers or pH buffering agents as needed.
  • Oral preparations may contain standard carriers such as pharmaceutical grades of mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, sodium saccharin, cellulose, magnesium carbonate and the like. Examples of suitable pharmaceutically acceptable carriers are described in Remington's Pharmaceutical Sciences (1990).
  • the pharmaceutical composition of the present invention can act systemically and/or locally.
  • they can be administered by a suitable route, for example by injection (such as intravenous, intraarterial, subcutaneous, intraperitoneal, intramuscular injection, including drip) or transdermal administration; or by oral, buccal, or transdermal Administration is nasal, transmucosal, topical, in the form of ophthalmic preparations or by inhalation.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a suitable dosage form.
  • the dosage form includes but not limited to tablet, capsule, lozenge, hard candy, powder, spray, cream, ointment, suppository, gel, paste, lotion, ointment, aqueous suspension , Injectable solutions, elixirs, syrups, etc.
  • the content or amount of the compound of the present invention in the pharmaceutical composition may be about 0.001-1000 mg, suitably 0.01-800 mg, preferably 0.05-500 mg, more preferably 0.1-350 mg, particularly preferably 0.5-100 mg.
  • the present invention provides a method of preparing the pharmaceutical composition of the present invention, the method comprising combining the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, or polymorph of the present invention
  • the form, solvate, N-oxide, metabolite or prodrug is combined with one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • Another object of the present invention is to provide the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, polymorph, solvate, N-oxide, metabolite or pro- Medicine, which is used to prevent or treat thrombosis and embolism related diseases.
  • Another object of the present invention is to provide the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, polymorph, solvate, N-oxide, metabolite or pro- Use of the medicine in the preparation of medicines for preventing or treating thrombosis and embolism related diseases.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating thrombosis and embolism-related diseases, which comprises administering to an individual in need thereof a preventive or therapeutically effective amount of the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer Constructs, tautomers, polymorphs, solvates, N-oxides, metabolites or prodrugs, or the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the thrombosis and embolism related diseases are atherosclerotic disease, myocardial infarction, stroke, ischemic cerebral thrombosis, peripheral arterial disease, peripheral arterial occlusive disease, pulmonary embolism, deep vein thrombosis , Acute coronary syndrome or thrombosis after coronary intervention.
  • the dosage regimen can be adjusted to provide the best desired response. For example, a single bolus can be administered, several divided doses can be administered over time, or the dose can be proportionally reduced or increased as indicated by the urgent need of the treatment situation. It should be noted that the dose value may vary with the type and severity of the condition to be alleviated, and may include single or multiple doses. It should be further understood that for any particular individual, the specific dosing regimen should be adjusted over time according to the individual's needs and the professional judgment of the person administering the composition or supervising the administration of the composition.
  • the amount of the compound of the present invention administered will depend on the individual being treated, the severity of the disorder or condition, the rate of administration, the treatment of the compound, and the judgment of the prescribing physician.
  • the effective dose is about 0.0001 to about 50 mg per kg body weight per day, for example, about 0.01 to about 10 mg/kg/day (single or divided administration). For a 70 kg person, this would add up to about 0.007 mg/day to about 3500 mg/day, for example, about 0.7 mg/day to about 700 mg/day.
  • a dose level not higher than the lower limit of the aforementioned range may be sufficient, while in other cases, a larger dose can still be used without causing any harmful side effects, provided that the larger dose is first used.
  • the dose is divided into several smaller doses to be administered throughout the day.
  • treating means reversing, alleviating, inhibiting the progress of one or more symptoms of the disorder or condition to which such term is applied, or preventing such A disorder or condition or one or more symptoms of such a disorder or condition.
  • “Individual” as used herein includes human or non-human animals.
  • Exemplary human individuals include human individuals (referred to as patients) or normal individuals suffering from diseases such as those described herein.
  • non-human animals include all vertebrates, such as non-mammals (such as birds, amphibians, reptiles) and mammals, such as non-human primates, livestock and/or domesticated animals (such as sheep, dogs). , Cats, cows, pigs, etc.).
  • the first step preparation of 5-(2-methoxyacetamido)-3,4-dihydroisoquinoline-2(1H)-carboxylic acid tert-butyl ester (1-3)
  • reaction solution was quenched by adding 20 mL of water, extracted with dichloromethane, and the organic phase was dried, filtered and concentrated to obtain a pale yellow solid 5-(2-methoxyacetamido)-3,4-dihydroisoquinoline-2 (1H )-Tert-butyl formate 480mg, directly used in the next reaction.
  • the fifth step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-(2- Preparation of methoxyacetamido)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (01)
  • Example 2 The compound obtained in Example 1 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 2.
  • Example 3 The compound obtained in Example 1 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 3.
  • the first step the preparation of 5-(2-(dimethylamino)acetamido)-3,4-dihydroisoquinoline-2(1H)-carboxylic acid tert-butyl ester (4-2)
  • reaction solution was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate, the organic phase was dried, filtered, concentrated and purified by column chromatography to obtain a white solid 5-(2-(dimethylamino)acetamido)-3,4-dihydroisoquinoline 394 mg of tert-butyl -2(1H)-carboxylate, with a yield of 79%.
  • the fifth step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-(2- (Dimethylamino)acetamido)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (04)
  • Example 4 The compound obtained in Example 4 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 5.
  • Example 4 The compound obtained in Example 4 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 6.
  • Example 7 (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-((2 -(Dimethylamino)ethyl)amino)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid
  • the first step Preparation of N 1 -(isoquinolin-5-yl)-N 2 ,N 2 -dimethylethane-1,2-diamine (7-3)
  • N 1 -(isoquinolin-5-yl)-N 2 ,N 2 -dimethylethane-1,2-diamine (7-3,54mg) was dissolved in methanol (3mL), and platinum dioxide was added (10mg), stirred overnight at room temperature under a hydrogen atmosphere, filtered, and concentrated to obtain a white solid N 1 ,N 1 -dimethyl-N 2 -(1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-5-yl ) Ethane-1,2-diamine (50mg).
  • the third step Preparation of N 1 -(3,4-dihydroisoquinolin-5-yl)-N 2 ,N 2 -dimethylethane-1,2-diamine (7-5)
  • N 1 ,N 1 -Dimethyl-N 2 -(1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-5-yl)ethane-1,2-diamine 7-4,50mg
  • Manganese dioxide (200 mg) was added to dichloromethane (3 mL), and the mixture was stirred overnight at room temperature. filter. The filtrate was concentrated to obtain 45 mg of white solid N 1 -(3,4-dihydroisoquinolin-5-yl)-N 2 , N 2 -dimethylethane-1,2-diamine.
  • Example 7 The compound obtained in Example 7 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 8.
  • Example 7 The compound obtained in Example 7 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 9.
  • the first step the preparation of 5-(2-methoxy-N-methylacetamido)-3,4-dihydroisoquinoline-2(1H)-carboxylic acid tert-butyl ester (10-1)
  • reaction solution was quenched by adding water, extracted with dichloromethane, the organic phase was dried, filtered and concentrated, and the residue was purified by column chromatography to obtain a pale yellow oily substance 5-(2-methoxy-N-methylacetamido)-3, 240 mg of tert-butyl 4-dihydroisoquinoline-2(1H)-carboxylate.
  • the third step Preparation of N-(3,4-dihydroisoquinolin-5-yl)-2-methoxy-N-methylacetamide (10-3)
  • the fifth step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-(2- Preparation of methoxy-N-methylacetamido)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (10)
  • Example 10 The compound obtained in Example 10 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 11.
  • Example 10 The compound obtained in Example 10 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 12.
  • the first step Preparation of 5-(methylamino)-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H)-dicarboxylic acid-2-tert-butyl-1-methyl ester (13-3)
  • reaction solution was filtered and concentrated, and the residue was purified by column chromatography to obtain a pale yellow solid 5-(methylamino)-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H)-dicarboxylic acid-2-tert-butyl ester-1 -860 mg of methyl ester, with a yield of 97.7%.
  • the second step 5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido)-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H)-dicarboxylic acid-2-tert-butyl ester- Preparation of 1-methyl ester (13-4)
  • reaction solution was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate, the organic phase was dried, filtered, concentrated and purified by column chromatography to obtain a white solid 5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido)-3,4- Dihydroisoquinoline-1,2(1H)-dicarboxylic acid-2-tert-butyl ester-1-methyl ester 540 mg.
  • the third step 2-(tert-butoxycarbonyl)-5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxy Preparation of acid (13-5)
  • the fourth step 1-((4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl)carbamoyl)-5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido)-3,4-dihydro Synthesis of isoquinoline-2(1H)-tert-butyl formate (13-7)
  • the seventh step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-(2- Preparation of (dimethylamino)-N-methylacetamido)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (13)
  • Example 13 The compound obtained in Example 13 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 14.
  • Example 13 The compound obtained in Example 13 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 15.
  • the first step 1-((4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl)methylcarbamoyl)-5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido)-3,4-di
  • the fourth step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-(2- Preparation of (dimethylamino)-N-methylacetamido)-N-methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (16)
  • Example 16 The compound obtained in Example 16 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 17.
  • Example 16 The compound obtained in Example 16 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 18.
  • the first step 5-(2-methoxy-N-methylacetamido)-3,4-dihydroisoquinoline-dicarboxylic acid-2-tert-butyl ester-1-methyl ester (19-1) preparation
  • the third step 1-((4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl)methylcarbamoyl)-5-(2-(methoxy)-N-methylacetamido)-3,4-dihydro Preparation of isoquinoline-2(1H)-tert-butyl formate (19-3)
  • the fifth step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-(2- (Methoxy)-N-methylacetamido)-N-methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)tert-butyl benzoate (19-5) preparation
  • the sixth step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-5-(2- (Methoxy)-N-methylacetamido)-N-methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (19)
  • Example 19 The compound obtained in Example 19 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 20.
  • Example 19 The compound obtained in Example 19 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 21.
  • the first step 5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H)-dicarboxylic acid-2-tert-butyl ester- Preparation of 1-methyl ester (22-2)
  • reaction solution was added with 3mol/L ammonia water, extracted with dichloromethane, the organic phase was dried, filtered, concentrated and purified by column chromatography to obtain a pale yellow solid 5-(methylamino)-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H) -Dicarboxylic acid-2-tert-butyl-1-methyl ester 1.98g.
  • the second step 2-(tert-butoxycarbonyl)-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxy
  • acid 22-3
  • 5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H)-dicarboxylic acid-2- Tert-butyl-1-methyl ester (260mg) was dissolved in tetrahydrofuran (3mL), added with lithium hydroxide aqueous solution (1mol/L, 1.3mL), methanol 2mL, stirred at room temperature for 4 hours, the organic solvent was concentrated and adjusted with 1mol/L hydrochloric acid pH to 5, extract with dichloromethane, dry, filter and concentrate the organic phase to obtain a white solid 2-(tert-butoxycarbonyl)-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-1,2 ,
  • the fourth step 4-(N-methyl-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-formyl Preparation of tert-butyl (amino)benzoate hydrochloride (22-5)
  • the sixth step (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-N-methyl- Preparation of 5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (22)
  • Example 22 The compound obtained in Example 22 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 23.
  • Example 22 The compound obtained in Example 22 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 24.
  • Step 1 Preparation of 5-bromo-2-(tert-butoxycarbonyl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxylic acid (25-1)
  • the third step 4-(5-bromo-N-methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido) benzoate tert-butyl hydrochloride (25-3) preparation
  • Example 25 The compound obtained in Example 25 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 26.
  • Example 25 The compound obtained in Example 25 was separated by preparative liquid chromatography to obtain the compound of Example 27.
  • reaction solution was quenched by adding water, extracted with dichloromethane, the organic phase was dried, filtered, concentrated and purified by column chromatography to obtain a white solid 5-(2-methoxy-N-methylacetamido)-1-(pyrrolidine-1) -Carbonyl)-3,4-dihydroisoquinoline-2(1H)-carboxylic acid tert-butyl ester 49mg.
  • the third step (E)-N-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-1-(pyrrolidine -1-carbonyl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-5-yl)-2-methoxy-N-methylacetamide (29)
  • the first step the preparation of 2-(benzyloxycarbonyl)-(S)-5-bromo-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H)-carboxylic acid methyl ester (30-2)
  • Step 2 Preparation of 2-(benzyloxycarbonyl)-(S)-5-bromo-3,4-dihydroisoquinoline-1,2(1H)-carboxylic acid (30-3)
  • Example 36 4-((S)-2-((E)-3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-1 ,2,3,4-Tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid 1-((isopropoxycarbonyl)oxy)ethyl
  • Example 37 (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-1,2,3 ,4-Tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid 1-(((cyclohexyloxy)carbonyl)oxy)ethyl
  • Example 38 (E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-1,2,3 ,4-Tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid (5-methyl-2-oxo-1,3-dioxol-4-yl) methyl ester
  • the first step 4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)cyclohexane-1-carbonyl)-1,2,3, Preparation of tert-butyl 4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoate (39-2)
  • the second step 4-((S)-2-((1R,4R)-4-(aminomethyl)cyclohexane-1-carbonyl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline- Preparation of 1-formylamino)benzoic acid (39)
  • Example 40 4-((S)-2-((1R,4R)-4-(aminomethyl)cyclohexane-1-carbonyl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline- 1-formylamino) ethyl benzoate
  • Step 2 Preparation of ethyl (S)-4-(1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoate (40-2)
  • the third step 4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)cyclohexane-1-carbonyl)-1,2,3, Preparation of 4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido) ethyl benzoate (40-3)
  • Example 42 4-(2-((1R,4R)-4-(aminomethyl)cyclohexane-1-carbonyl)-5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido )-1,2,3,4-Tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)benzoic acid
  • the first step 4-(2-((1R,4R)-4-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)cyclohexane-1-carbonyl)-5-(2-(dimethylamino) )-N-Methylacetamido)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido) tert-butyl benzoate (42-1)
  • Example 43 4-(2-((1R,4R)-4-(aminomethyl)cyclohexane-1-carbonyl)-5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido )-1,2,3,4-Tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido) ethyl benzoate (43)
  • the first step 1-((4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl)carbamoyl)-5-(2-(dimethylamino)-N-methylacetamido)-3,4-dihydro Synthesis of isoquinoline-2(1H)-ethyl formate(43-1)
  • the third step 4-(2-((1R,4R)-4-(((tert-butoxycarbonyl)amino)methyl)cyclohexane-1-carbonyl)-5-(2-(dimethylamino) )-N-Methylacetamido)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamido)ethyl benzoate (43-3)
  • the first step the preparation of 1-(isoquinolin-5-yl)-4-methyloxopiperazin-2-one (44-1)
  • Step 2 Preparation of 4-methyl-1-(1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-5-yl)piperidin-2-one (44-2)
  • the third step Preparation of 1-(3,4-dihydroisoquinolin-5-yl)-4-methylpiperidin-2-one (44-3)
  • the fourth step (E)-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acryloyl)-N-(4-difluoro (Methoxyphenyl)-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-1-carboxamide (44)
  • Step 2 Preparation of (2S,4R)-1-tert-butoxycarbonyl-4-(p-toluenesulfonic acid)pyrrolidine-2-carboxylic acid (45-3)
  • Step 4 Preparation of (2S,4R)-2-((4-(tert-butoxycarbonyl)phenyl)carbamoyl)-4-cyclohexylpyrrolidine-1-carboxylate (45-5)
  • Step 5 Preparation of tert-butyl 4-((2S,4R)-4-cyclohexylpyrrolidine-2-carboxamido)benzoate (45-6)
  • the seventh step 4-((2S,4R)-1-((1R,4S)-4-(aminomethyl)cyclohexyl-1-carbonyl)-4-cyclohexylpyrrolidine-2-carboxamido) Preparation of benzoic acid (45)
  • Example 46 4-((2S,4R)-1-(4-(aminomethyl)cyclohexyl-1-carbonyl)-4-phenylpyrrolidine-2-carboxamido)benzoic acid trifluoroacetic acid salt
  • the first step 4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-chloro-2-fluoro-6-(4H-1,2,3-tetrazol-4-yl) (Phenyl)acryloyl)-4-cyclohexylpyrrolidine-2-carboxamido) tert-butyl benzoate (47-1)
  • the second step 4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-chloro-2-fluoro-6-(4H-1,2,3-tetrazol-4-yl) (Phenyl)acryloyl)-4-cyclohexylpyrrolidine-2-carboxamido)benzoic acid (47)
  • Example 48 4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-chloro-2-fluoro-6-(4H-1,2,3-tetrazol-4-yl) (Phenyl)acryloyl)-4-phenylpyrrolidine-2-carboxamido)benzoic acid
  • the first step 4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-chloro-2-fluoro-6-(4H-1,2,3-tetrazol-4-yl) (Phenyl)acryloyl)-4-phenylpyrrolidine-2-carboxamido)tert-butyl benzoate (48-1)
  • the second step 4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-chloro-2-fluoro-6-(4H-1,2,3-tetrazol-4-yl) (Phenyl)acryloyl)-4-phenylpyrrolidine-2-carboxamido)benzoic acid (48)
  • Step 1 Preparation of (S)-4-(2-(((9H-fluoren-ylmethoxy)carbonyl)amino)-2-phenylacetylamino)benzoic acid tert-butyl ester (49-2)
  • Step 2 Preparation of tert-butyl (S)-4-(2-amino-2-phenylacetamido)benzoate (49-3)
  • Step 2 Preparation of (S)-4-(2-amino-N-methyl-2-phenylacetamido) tert-butyl benzoate (50-2)
  • Fmoc-phenylglycine 49-1,374mg, 1mmol
  • methyl N-methylaminobenzoate 51-1, 175mg, 1.06mmol
  • ethyl acetate 7mL
  • DIPEA 0.5mL
  • T3P 50% ethyl acetate solution, 0.71 mL
  • N-(methylsulfonyl)-4-nitrobenzamide 1.092g, 4.47mmol
  • Pd-C 500mg
  • the reaction system is pumped with hydrogen three times, under a hydrogen atmosphere
  • the reaction was carried out overnight, and LCMS detected that the reaction was complete. Filter and concentrate the filtrate to obtain pure N-(methylsulfonyl)-4-aminobenzamide (904 mg, yield 94%).
  • the reaction solution was quenched by adding water, extracted with dichloromethane, the organic layer was dried, filtered, concentrated, and purified by column chromatography to obtain a white solid (S)-(2-((4-((methylsulfonyl)carbamoyl)phenyl) Amino)-2-oxo-1-phenylethyl)tert-butyl carbamate 440 mg.
  • reaction solution was quenched by adding water, extracted with dichloromethane, the organic layer was dried, filtered, concentrated and purified by column chromatography to obtain a white solid (S)-(2-oxo-1-phenyl-2-((4-((benzene) 432 mg of tert-butyl sulfonyl)carbamoyl)phenyl)amino)ethyl)carbamate.
  • Step 4 Preparation of (S)-4-(2-amino-2-phenylacetamido)-N-(benzenesulfonyl)benzamide (55-4)
  • Boc-phenylglycine (251mg, 1mmol), 4-(2H-tetrazol-5-yl)aniline (161mg, 1mmol), HATU (456mg, 1.2mmol) dissolved in DMF (4mL), DIPEA (0.5mL) ), stirring at room temperature overnight.
  • the reaction solution was quenched by adding water, extracted with dichloromethane, the organic layer was dried, filtered and concentrated.
  • Step 2 Preparation of (S)-N-(4-(2H-tetrazol-5-yl)phenyl)-2-amino-2-phenylacetamide hydrochloride (56-3)
  • Boc-phenylglycine (278mg, 1.5mmol), ethyl 4-aminobenzoate (250mg, 1.5mmol), HATU (690mg, 1.8mmol) were dissolved in DMF (4mL), DIPEA (0.78mL) was added, and stirred at room temperature overnight .
  • the reaction solution was quenched by adding water, and the precipitated pale yellow solid was collected by filtration to obtain 556 mg of ethyl (S)-4-(2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-2-phenylacetylamino)benzoate, which was produced The rate is 93%.
  • Step 2 Preparation of ethyl (S)-4-(2-amino-2-phenylacetylamino)benzoate hydrochloride (57-2)
  • Example 59 1-((Ethoxycarbonyl)oxy)ethyl 4-((S)-2-((E)-3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazole) -1-yl)phenyl)acryloyl)-2-phenylacetamido)benzoate
  • Example 60 (S,E)-2-chloro-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(2H-tetrazol-2-yl)phenyl)acrylamido )-2-Phenylacetamido) benzoic acid preparation
  • Step 2 Preparation of tert-butyl 4-amino-2-chlorobenzoate (60-3)
  • n-butyl lithium n-hexane solution (2.5 mol/L, 2.3 mL) was added to tert-butanol (10 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 20 minutes.
  • the crude 2-fluoro-4-nitrobenzoyl chloride was dissolved in tetrahydrofuran (4 mL), added dropwise to the reaction solution, and stirred at room temperature overnight.
  • the reaction solution was concentrated, water was added, and ethyl acetate was added for extraction.
  • the organic layer was separated, dried, filtered and concentrated. The residue was purified by column chromatography to obtain white solid tert-butyl 2-fluoro-4-nitrobenzoate (435 mg).
  • Step 5 Preparation of (S)-4-(2-amino-2-phenylacetylamino)-2-fluorobenzoic acid tert-butyl ester (62-6)
  • the seventh step (S,E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(2H-tetrazol-2-yl)phenyl)acrylamido)-2- Preparation of phenylacetamido)-2-fluorobenzoic acid (62)
  • n-butyl lithium n-hexane solution (2.5 mol/L, 2.3 mL) was added to tert-butanol (10 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 20 minutes.
  • the crude 2-fluoro-4-nitrobenzoyl chloride was dissolved in tetrahydrofuran (4 mL), added dropwise to the reaction solution, and stirred at room temperature overnight.
  • the reaction solution was concentrated, water was added, and ethyl acetate was added.
  • the organic layer was separated, dried, filtered and concentrated. The residue was purified by column chromatography to obtain white solid tert-butyl 3-fluoro-4-nitrobenzoate (450 mg).
  • the seventh step (S,E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(2H-tetrazol-2-yl)phenyl)acrylamido)-2- Preparation of phenylacetamido)-3-fluorobenzoic acid (63)
  • Fmoc-phenylglycine (377mg, 1mmol), tert-butyl 4-amino-2-methoxybenzoate (224mg, 1mmol) were dissolved in ethyl acetate (5mL), DIPEA (0.5mL), T3P (50%) Ethyl acetate solution, 1.2 mL), stirred at 55°C overnight.
  • the reaction solution was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate, the organic layer was separated, dried and filtered.
  • reaction solution was quenched by adding water, the precipitated solid was collected by filtration, and purified by column chromatography to obtain a pale yellow solid (S,E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(2H) -Tetrazol-2-yl)phenyl)acrylamido)-2-phenylacetamido)-2-methoxybenzoic acid tert-butyl ester 212 mg.
  • Example 65 (S,E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acrylamido)-2- Preparation of (3-(2-(dimethylamino)acetamido)phenyl)acetamido)benzoic acid
  • L-Phenylglycine (20g, 132mmol) was added to a mixed solvent of fuming nitric acid (20mL) and concentrated sulfuric acid (20mL) at 0°C, stirred and reacted for 1 hour, and then reacted at room temperature for 30 minutes.
  • Step 2 Preparation of (S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-2-(3-nitrophenyl)acetic acid (65-3)
  • Step 6 Preparation of tert-butyl (S)-4-(2-amino-2-(3-(2-(dimethylamino)acetamido)phenyl)acetamido)benzoate (65-7)
  • the seventh step (S,E)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluoro-6-(1H-tetrazol-1-yl)phenyl)acrylamido)-2- Preparation of (3-(2-(dimethylamino)acetamido)phenyl)acetamido)tert-butyl benzoate (65-8)
  • the first step 4-((S)-2-((1R,4S)-4-(aminomethyl)cyclohexyl-1-carboxamido)-2-(3-(2-(dimethylamino) Preparation of acetylamino)phenyl)acetylamino)tert-butyl benzoate (67-1)

Abstract

式I的凝血因子XIa抑制剂、包含其的药物组合物、其制备方法以及其在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。

Description

凝血因子XIa抑制剂 技术领域
本发明涉及一类新的凝血因子XIa抑制剂、包含其的药物组合物、其制备方法以及其在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。
发明背景
心脑血管疾病是一种严重威胁人类的常见疾病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点，在所有致死因素中排在首位，被视为人类的“头号杀手”。原中国卫生部公布的第三次全国死因调查结果显示，脑血管病已占死亡总数的22.45％。我国每年新发脑卒中患者达250万例，而每年死于脑卒中者为130万人。而在众多心脑血管疾病中，血栓性疾病发病率最高，且近年来有增多之势，是当代医学研究的热点和难点问题。
血栓性疾病(thrombosis diseases)简称血栓病，是人类和动物在存活期间，循环血液中血管内形成异常的血凝块造成的疾病，发病时对机体造成严重影响，如血管阻塞、栓塞、心瓣膜变形、广泛性出血等。血栓的形成机制十分复杂。
研究报道目前静脉血栓栓塞症(Venous Thromboembolism,VTE)已经成为人口死亡的第一大原因，成为全球性的重大健康问题。人体静脉管腔内的血液由于各种因素使得血液不正常凝结从而导致血液回流障碍这一疾病称为深静脉血栓形成(Deep Venous Thrombosis，DVT)，血栓脱落后随着血液的流动到达肺部即形成肺栓塞(Pulmonary Embolism，PE)，若血栓未脱落，长期阻塞静脉或者血栓再通后由于瓣膜的功能破坏，可导致静脉高压的相应症状称为血栓后综合征(Post Thrombotic Syndrome,PTS)。DVT和PE二者合称为VTE。
血栓疾病广泛影响人类健康，抗血栓药物始终是医药行业的热点。传统的抗凝药物如华法林、肝素、低分子量肝素(LMWH)以及近年上市的新药如FXa抑制剂(利伐沙班、阿哌沙班等)和凝血酶抑制剂(达比加群酯、水蛭素等)可以有效地降低静脉血栓的形成，临床上广泛用于治疗骨关节置换手术过程中静脉血栓形成、成人静脉血栓形成，并降低急性DVT之后所引起的肺栓塞(PE)风险，以及一些高危房颤人群(具有心力衰竭、高血压、年龄≥75岁、糖尿病史、脑卒中史等)的脑卒中和全身性栓塞的风险。对减少血栓形成均具有较好效果，但都还面临着共同的不足。这些药物都可能引起出血并发症，对病人和医生带来巨大严峻的考验。为解决这个问题，以FXIa为靶点的抑制剂已成为国内外公司主要的抗血栓药物开发和研究的对象。
Figure PCTCN2020141466-appb-000001
Figure PCTCN2020141466-appb-000002
BMS公司陆续开发的BMS262084、BMS724296、BMS962212等化合物已进入临床研究。拜尔公司开发的BAY1213790，小野制药开发的ONO8610539等化合物，也都处在临床前研究状态。这些临床实验或临床前化合物推测有其特殊的性质，如BMS962212临床剂型为静脉注射液体制剂，提示难以通过肠胃吸收或存在难以接受的首过效应。BMS262084、BMS724296经过临床I期实验就终止，提示可能人体药效不佳。BAY1213790和ONO8610539的研究状态迟迟不更新，提示研究进度慢，显示这一类化合物靶点结合率虽然较好，但是作用于人全血抗凝作用可能效果不佳；也有可能有一定的脱靶效应而产生其他难以接受的副作用。众所周知，新药研究处于早期时，很少公开信息，以上推测仅为依据新药研究经验判断得出。
综合所有公开的体内外研究信息，凝血因子(Factor)XIa是一个治疗和阻止血栓栓塞性疾病吸引人的靶标。凝血因子(Factor)XIa抑制剂可能成为一个新的、有效的、潜在的、更安全的人类血栓性疾病的治疗方法。
发明概述
一方面，本发明提供了一类新的凝血因子XIa抑制剂。本发明所涉及的化合物能够特异性作用于凝血因子(Factor)XIa，且可以在很低浓度条件下即能显著延长人的全血液的凝结时间。经典的大鼠动静脉血栓实验(AVST)验证了本发明的化合物具有显著的生物体内抗血栓作用。所以，本发明的化合物具有比公开报道所提及的化合物具有更大的临床潜力。本发明的化合物为式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药：
Figure PCTCN2020141466-appb-000003
其中
A选自苯基和环己基；
R 1各自独立地选自卤素、C 1-6烷基、四唑基和三唑基，所述C 1-6烷基、四唑基或三唑基各自任选地被一或多个选自氨基和卤素的取代基取代；
n为0、1、2或3；
R 2和R 3各自独立地选自H和C 1-6烷基；
m为0或1；
R 4为H；
R 5为任选地被一或多个R 8取代的苯基或C 1-6烷基；
或者R 4、R 5和与其连接的原子共同形成任选地与苯环稠合的5-6元氮杂环烷基，所述5-6元氮杂环烷基或与其稠合的苯环任选地被一或多个R 8取代；
R 8各自独立地选自H、-NR aR b、卤素、
Figure PCTCN2020141466-appb-000004
5-6元环烷基和苯基；
R a选自H和C 1-6烷基；
R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
p为0或1；
q为1或2；
R 9选自C 1-6烷氧基和-NR cR d；
R c和R d各自独立地选自H和C 1-6烷基；
R 6选自H和C 1-6烷基；
R 7为任选地被一或多个R 10取代的苯基或苄基；
R 10各自独立地选自-(CH 2) r-C(O) s-R 11、任选地被一或多个卤素替代的C 1-6烷氧基、四唑基、卤素、-NHCOOC 1-6烷基和-SO 2NHCOC 1-6烷基；
r为0或1；
s为1或2；
R 11选自H、-NHSO 2R 12和任选地被R 13取代的C 1-6烷基；
R 12选自C 1-6烷基、C 3-6环烷基和苯基；
R 13选自-OCOOR 14和
Figure PCTCN2020141466-appb-000005
R 14选自C 1-6烷基和C 3-6环烷基；
或者R 6、R 7和与其连接的N原子共同形成5-6元氮杂环烷基，
其中当R 8为
Figure PCTCN2020141466-appb-000006
且R 10为-(CH 2) r-C(O) s-R 11时，R 6为C 1-6烷基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000007
表示基团与分子其余部分的连接点。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明提供了预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物。
另一方面，本发明提供了制备本发明的化合物的方法，其按照以下路线1、2、3或4进行：
路线1
Figure PCTCN2020141466-appb-000008
路线2
Figure PCTCN2020141466-appb-000009
路线3
Figure PCTCN2020141466-appb-000010
路线4
Figure PCTCN2020141466-appb-000011
其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、m和n如上文中所定义；且
PG为氨基的保护基(例如叔丁氧羰基或9-芴基甲氧羰基)。
附图说明
图1显示了实施例3的化合物在大鼠AVST实验中的血栓降低幅度及抑制率。
图2显示了实施例3的化合物在大鼠AVST实验中的血栓抑制效果。
发明详述
定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
如本文中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。
如本文中所使用，术语“烷基”定义为直链或支链的饱和脂肪族烃基。例如，如本文中所使用，术语“C 1-6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链的基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基等)。
如本文中所使用，术语“环烷基”指饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环。例如，术语“C 3-6环烷基”指具有3至6个成环碳原子的饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基)。术语“C 5-6环烷基”指具有5至6个成环碳原子的饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如环戊基或环己基)。
如本文中所使用，术语“烷氧基”意指在烷基(如上文所定义)任意合理的位置插入氧原子的基团。例如，术语“C 1-6烷氧基”的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。
如本文中所使用，术语“卤代”或“卤素”基团定义为包括氟、氯、溴或碘。
术语“取代”指所指定的原子上的一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。
如果取代基被描述为“任选地被....取代”，则取代基可(1)未被取代或(2)被取代。如果取代基的碳被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则碳上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度) 可单独和/或一起被独立地选择的取代基替代或未替代。如果取代基的氮被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则氮上的一个或多个氢(至存在的任何氢的程度)可各自被独立地选择的取代基替代或未替代。
如果取代基被描述为“独立地选自”一组基团，则各取代基独立于另一者被选择。因此，各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。
如本文中所使用，术语“一个或多个”意指在合理条件下的1个或超过1个，例如2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个。
除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。要理解，本申请的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。
本发明涵盖本发明的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。
还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于：药学上可接受的盐、溶剂合物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供本发明的化合物或其代谢物或残余物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。适合的酸加成盐由形成药学上可接受盐的酸来形成。适合的碱加成盐由形成药学上可接受盐的碱来形成。适合的盐的综述参见Stahl及Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH,2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。
本发明的化合物可以溶剂合物(优选水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
本领域技术人员会理解，由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物，因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物；本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的，包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(MCPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。这些用于制备N-氧化物的方法已在文献中得到广泛描述和综述，参见例如：T.L.Gilchrist,Comprehensive Organic Synthesis,vol.7,pp 748-750；A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press；以及G.W.H.Cheeseman和E.S.G.Werstiuk，Advances in Heterocyclic Chemistry,vol.22,pp 390-392,A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press。
在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物，当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)及“Bioreversible Carriers in Drug Design,”Pergamon Press,1987(E.B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design of Prodrugs”，H. Bundgaard(Elsevier,1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。
本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在Protective Groups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,1991中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，可以在适当的后续阶段移除保护基。
术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，优选±5％范围内，更优选±2％范围内。
化合物
本发明的一个目的在于提供一种式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药：
Figure PCTCN2020141466-appb-000012
其中
A选自苯基和环己基；
R 1各自独立地选自卤素、C 1-6烷基、四唑基和三唑基，所述C 1-6烷基、四唑基或三唑基各自任选地被一或多个选自氨基和卤素的取代基取代；
n为0、1、2或3；
R 2和R 3各自独立地选自H和C 1-6烷基；
m为0或1；
R 4为H；
R 5为任选地被一或多个R 8取代的苯基或C 1-6烷基；
或者R 4、R 5和与其连接的原子共同形成任选地与苯环稠合的5-6元氮杂环烷基，所述5-6元氮杂环烷基或与其稠合的苯环任选地被一或多个R 8取代；
R 8各自独立地选自H、-NR aR b、卤素、
Figure PCTCN2020141466-appb-000013
5-6元环烷基和苯基；
R a选自H和C 1-6烷基；
R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
p为0或1；
q为1或2；
R 9选自C 1-6烷氧基和-NR cR d；
R c和R d各自独立地选自H和C 1-6烷基；
R 6选自H、C 1-6烷基和C 3-6环烷基；
R 7为任选地被一或多个R 10取代的苯基或苄基；
R 10各自独立地选自-(CH 2) r-C(O) s-R 11、任选地被一或多个卤素替代的C 1-6烷氧基、四唑基、卤素、-NHCOOC 1-6烷基和-SO 2NHCOC 1-6烷基；
r为0或1；
s为1或2；
R 11选自H、-NHSO 2R 12和任选地被R 13取代的C 1-6烷基；
R 12选自C 1-6烷基、C 3-6环烷基和苯基；
R 13选自-OCOOR 14和
Figure PCTCN2020141466-appb-000014
R 14选自C 1-6烷基和C 3-6环烷基；
或者R 6、R 7和与其连接的N原子共同形成5-6元氮杂环烷基，
其中当R 8为
Figure PCTCN2020141466-appb-000015
且R 10为-(CH 2) r-C(O) s-R 11时，R 6为C 1-6烷基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000016
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
Figure PCTCN2020141466-appb-000017
选自：
Figure PCTCN2020141466-appb-000018
Figure PCTCN2020141466-appb-000019
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000020
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，R 2和R 3为H。
根据本发明的一些实施方案，
R 4为H；
R 5为任选地被R 8取代的苯基；
R 8各自独立地选自H、-NR aR b、卤素、
Figure PCTCN2020141466-appb-000021
5-6元环烷基和苯基；
R a选自H和C 1-6烷基；
R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
p为0或1；
q为1或2；
R 9选自C 1-6烷氧基和-NR cR d；且
R c和R d各自独立地选自H和C 1-6烷基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000022
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
R 4为H；
R 5为任选地被R 8取代的苯基；
R 8为-NR aR b；
R a为H；
R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
p为1；
q为1；
R 9为-NR cR d；且
R c和R d各自独立地选自C 1-6烷基。
根据本发明的一些实施方案，
R 4、R 5和与其连接的原子共同形成任选地与苯环稠合的5-6元氮杂环烷基，所述5-6元氮杂环烷基或与其稠合的苯环任选地被R 8取代；
R 8各自独立地选自H、-NR aR b、卤素、
Figure PCTCN2020141466-appb-000023
5-6元环烷基和苯基；
R a选自H和C 1-6烷基；
R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
p为0或1；
q为1或2；
R 9选自C 1-6烷氧基和-NR cR d；且
R c和R d各自独立地选自H和C 1-6烷基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000024
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
R 4、R 5和与其连接的原子共同形成1,2,3,4-四氢异喹啉基或吡咯烷基，所述1,2,3,4-四氢异喹啉基或吡咯烷基任选地被R 8取代；
R 8各自独立地选自H、-NR aR b、卤素、
Figure PCTCN2020141466-appb-000025
5-6元环烷基和苯基；
R a选自H和C 1-6烷基；
R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
p为0或1；
q为1或2；
R 9选自C 1-6烷氧基和-NR cR d；且
R c和R d各自独立地选自H和C 1-6烷基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000026
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
R 4、R 5和与其连接的原子共同形成
Figure PCTCN2020141466-appb-000027
R 8选自H、-NR aR b、卤素和
Figure PCTCN2020141466-appb-000028
R a选自H和C 1-6烷基；
R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
p为0或1；
q为1或2；
R 9选自C 1-6烷氧基和-NR cR d；且
R c和R d各自独立地选自H和C 1-6烷基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000029
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
R 4、R 5和与其连接的原子共同形成
Figure PCTCN2020141466-appb-000030
且
R 8选自H、-NHCOCH 2OCH 3、-NHCOCH 2N(CH 3) 2、-NH(CH 2) 2N(CH 3) 2、-N(CH 3)COCH 2OCH 3、-N(CH 3)COCH 2N(CH 3) 2、Br和
Figure PCTCN2020141466-appb-000031
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000032
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
R 4、R 5和与其连接的原子共同形成
Figure PCTCN2020141466-appb-000033
且
R 8选自环己基和苯基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000034
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
R 6选自H、C 1-6烷基和C 3-6环烷基；
R 7为任选地被一或二个R 10取代的苯基或苄基；
R 10各自独立地选自-(CH 2) r-C(O) s-R 11、任选地被一或多个卤素替代的C 1-6烷氧基、四唑基、卤素、-NHCOOC 1-6烷基和-SO 2NHCOC 1-6烷基；
r为0或1；
s为1或2；
R 11选自H、-NHSO 2R 12和任选地被R 13取代的C 1-6烷基；
R 12选自C 1-6烷基、C 3-6环烷基和苯基；
R 13选自-OCOOR 14和
Figure PCTCN2020141466-appb-000035
且
R 14选自C 1-6烷基和C 3-6环烷基，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000036
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，
R 6选自H、C 1-6烷基和C 3-6环烷基；
R 7为任选地被一或二个R 10取代的苯基或苄基；且
R 10各自独立地选自-COOH、-COOCH 3、-COOCH 2CH 3、-COOC(CH 3) 3、-COOCH 2OCOOCH 2CH 3、-COOCH 2OCOOCH(CH 3) 2、-COOCH(CH 3)OCOOCH 2CH 3、-COOCH(CH 3)OCOOCH(CH 3) 2、
Figure PCTCN2020141466-appb-000037
-CONHSO 2CH 3、
Figure PCTCN2020141466-appb-000038
Figure PCTCN2020141466-appb-000039
-CH 2COOH、-OCH 3、-OCHF 2、
Figure PCTCN2020141466-appb-000040
-Cl、-F、-NHCOOCH 3和-SO 2NHCOCH 3，
其中波浪线
Figure PCTCN2020141466-appb-000041
表示基团与分子其余部分的连接点。
根据本发明的一些实施方案，R 6、R 7和与其连接的N原子共同形成吡咯烷基。
本发明涵盖对上述优选基团进行任意组合所得的式I的化合物。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式II的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000042
其中，R 1、R 2、R 3、R 6、R 7、R 8、m和n如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式II-1的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000043
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式II-2的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000044
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式II-3的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000045
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式II-4的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000046
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式II-5的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000047
Figure PCTCN2020141466-appb-000048
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式III的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000049
其中，R 1、R 2、R 3、R 6、R 7、R 8、m和n如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式III-1的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000050
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式III-2的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000051
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式IV的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000052
其中，R 1、R 2、R 3、R 6、R 7、R 8、m和n如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式IV-1的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000053
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式IV-2的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000054
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物具有式IV-3的结构：
Figure PCTCN2020141466-appb-000055
其中，R 6、R 7和R 8如上文所定义。
在符合本领域常识的基础上，可对上述各优选基团进行任意组合，从而得到本发明的各种优选实施方案。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物选自：
Figure PCTCN2020141466-appb-000056
Figure PCTCN2020141466-appb-000057
Figure PCTCN2020141466-appb-000058
Figure PCTCN2020141466-appb-000059
Figure PCTCN2020141466-appb-000060
制备方法
本发明的另一目的在于提供制备本发明的化合物的方法，其按照以下路线1、2、3或4进行：
路线1
Figure PCTCN2020141466-appb-000061
路线2
Figure PCTCN2020141466-appb-000062
路线3
Figure PCTCN2020141466-appb-000063
路线4
Figure PCTCN2020141466-appb-000064
其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、m和n如上文中所定义；且
PG为氨基的保护基(例如叔丁氧羰基或9-芴基甲氧羰基)。
药物组合物
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包含预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
本发明中“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。
当所述药物组合物通过静脉内给药时，水是示例性载体。还可以使用生理盐水和葡萄糖及甘油水溶液作为液体载体，特别是用于注射液。适合的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽糖、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。所述组合物还可以视需要包含少量的湿润剂、乳化剂或pH缓冲剂。口服制剂可以包含标准载体，如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适合的药学上可接受的载体的实例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)中所述。
本发明的药物组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以适合的途径给药，例如通过注射(如静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内注射，包括滴注)或经皮给药；或者通过口服、含服、经鼻、透粘膜、局部、以眼用制剂的形式或通过吸入给药。
对于这些给药途径，可以适合的剂型给药本发明的药物组合物。所述剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂等。
本发明的化合物在药物组合物中的含量或用量可以是约0.001-1000mg，适合地是0.01-800mg，优选0.05-500mg，更优选0.1-350mg，特别优选0.5-100mg。
在一些实施方案中，本发明提供制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药与一种或多种药学上可接受的载体组合。
治疗方法和用途
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病。
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药预防或治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，或者本发明的药物组合物。
根据本发明的一些实施方案，所述血栓和栓塞相关疾病为动脉粥样硬化疾病、心肌梗死、中风、缺血性脑血栓、外周动脉疾病、周围动脉闭塞性疾病、肺栓塞、深部静脉血栓形成、急性冠脉综合症或冠脉介入术后的血栓形成。
可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可给药单次推注，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言，有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约50mg，例如约0.01至约10mg/kg/日(单次或分次给药)。对70kg的人而言，这会合计为约0.007mg/日至约3500mg/日，例如约0.7mg/日至约700mg/日。在一些情况下，不高于前述范围的下限的剂量水平可以是足够的，而在其它情况下，仍可在不引起任何有害副作用的情况下采用较大剂量，条件是首先将所述较大剂量分成数个较小剂量以在一整天中给药。
除非另外说明，否则如本文中所使用，术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状的进展，或预防这样的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状。
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
实施例
为了使本发明的目的和技术方案更加清楚，以下结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在常规的合成法以及实施例和中间体合成例中，各缩写的含义如下表所示。
缩写 含义
Pd 2dba 3 三(二苄基丙酮)二钯
BINAP 1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
HATU 2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐
DMF N,N-二甲基甲酰胺
XPhos 2-双环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯
EA 乙酸乙酯
THF 四氢呋喃
DCM 二氯甲烷
TFA 三氟乙酸
Boc 叔丁氧羰基
T3P 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物
Py 吡啶
CbzCl 氯甲酸苄酯
DCC N,N-二环己基碳二亚胺
CMPI 2-氯-1-甲基吡啶碘化物
DMAP 二甲氨基吡啶
RT 室温
LCMS 液相色谱-质谱联用
DMSO-d 6 六氘代二甲基亚砜
NMR 核磁共振
MS 质谱
s 单峰(singlet)
d 二重峰(doublet)
t 三重峰(triplet)
q 四重峰(quartet)
dd 双二重峰(double doublet)
m 多重峰(multiplet)
br 宽峰(broad)
J 偶合常数
Hz 赫兹
实施例1：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000065
第一步：5-(2-甲氧基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(1-3)的制备
冰浴下，将2-甲氧基乙酰氯(1-2,164μL，1.8mmol)滴加到溶有5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(1-1,372mg，1.5mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)中，室温下搅拌过夜。于反应液中加入水20mL淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后得到浅黄色固体5-(2-甲氧基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯480mg，直接用于下步反应。
第二步：2-甲氧基-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(1-4)的制备
5-(2-甲氧基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(1-3,360mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌2小时，浓缩，残留物加入1mol/L氢氧化钠水溶液碱化，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后得到黄色油状物2-甲氧基-N-(1,2,3,4-四氢喹啉-5-基)乙酰胺(230mg)。
第三步：N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基乙酰胺(1-5)的制备
2-甲氧基-N-(1,2,3,4-四氢喹啉-5-基)乙酰胺(1-4,230mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入二氧化锰(918mg)，室温下搅拌过夜。过滤。滤液浓缩，残留物经制备薄层色谱纯化得黄色油状物N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基乙酰胺133mg。
第四步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(1-8)的制备
N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基乙酰胺(1-5,133mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7,172mg)，4-异氰基苯甲酸叔丁酯(1-6,137mg)溶于乙醇(5mL)中，反应液升温至85℃搅拌过夜，冷至室温柱色谱纯化得白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(147mg，产率35％)。
第五步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(01)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(1-8,80mg)溶解于二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌1.5小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(46mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.79(s,1H),9.87(s,1H),9.48(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.86(d,2H,J＝8.8Hz),7.68-7.65(m,3H),7.49(d,1H，J＝7.2Hz),7.31(d,1H，J＝6.8Hz),7.26(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(dd,2H,J＝15.8,52.2Hz),5.85(s,1H),4.11-4.05(m,1H),4.04(s，2H)，3.69-3.63(m,1H),3.42(s，3H)，3.00-2.91(m,1H),2.81-2.75(m,1H)。
MS m/z(ESI):634[M+H]+
实施例2
将实施例1所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例2的化合物。
Figure PCTCN2020141466-appb-000066
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.79(s,1H),9.87(s,1H),9.48(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.86(d,2H,J＝8.8Hz),7.68-7.65(m,3H),7.49(d,1H，J＝7.2Hz),7.31(d,1H，J＝6.8Hz),7.26(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(dd,2H,J＝15.8,52.2Hz),5.85(s,1H),4.11-4.05(m,1H),4.04(s，2H)，3.69-3.63(m,1H),3.42(s，3H)，3.00-2.91(m,1H),2.81-2.75(m,1H)。
MS m/z(ESI):634[M+H]+
实施例3
Figure PCTCN2020141466-appb-000067
将实施例1所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例3的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.79(s,1H),9.87(s,1H),9.48(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.86(d,2H,J＝8.8Hz),7.68-7.65(m,3H),7.49(d,1H，J＝7.2Hz),7.31(d,1H，J＝6.8Hz),7.26(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(dd,2H,J＝15.8,52.2Hz),5.85(s,1H),4.11-4.05(m,1H),4.04(s，2H)，3.69-3.63(m,1H),3.42(s，3H)，3.00-2.91(m,1H),2.81-2.75(m,1H)。
MS m/z(ESI):634[M+H]+
实施例4：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000068
第一步：5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(4-2)的制备
5-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(1-1，373mg，1.5mmol)，二甲基甘氨酸(4-1，206mg，2mmol)溶于乙酸乙酯(8mL)中，加入吡啶(0.365mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，1.8mL)，室温下搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯394mg，产率79％。
第二步：2-(二甲基氨基)-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(4-3)的制备
5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(4-2，394mg)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入HCl/1,4-二氧六环溶液(4mol/L，10mL)，室温下搅拌过夜，浓缩，残留物加入1mol/L氢氧化钠水溶液碱化，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后得到白色固体2-(二甲基氨基)-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(270mg)。
第三步：N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-(二甲基氨基)乙酰胺(4-4)的制备
2-(二甲基氨基)-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(4-3，320mg)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入二氧化锰(2.38g)，室温下搅拌过夜。过滤。滤液浓缩，残留物经制备薄层色谱纯化得白色固体N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-(二甲基氨基)乙酰胺213mg。
第四步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(4-5)的制备
N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-(二甲基氨基)乙酰胺(4-4，85mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7，119mg)，4-异氰基苯甲酸叔丁酯(1-6，87mg)溶于乙醇(5mL)中，反应液升温至70℃搅拌过夜，冷至室温柱色谱纯化得黄色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(118mg，产率46％)。
第五步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(04)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(4-5,118mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌2小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(50mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.78(s,1H),9.87(s,1H),9.51(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.86(d,2H,J＝8.4Hz),7.66(d,4H，J＝8.8Hz),7.45(d,1H，J＝8.0Hz),7.25(t,1H,J＝8.0Hz),7.05(dd,2H,J＝15.8,67Hz),5.85(s,1H),4.15-4.07(m,1H),3.76-3.69(m,1H),3.11(s，2H)，3.05-2.93(m,1H),2.85-2.81(m,1H)，2.34(s，6H)。
MS m/z(ESI):647[M+H]+
实施例5
Figure PCTCN2020141466-appb-000069
将实施例4所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例5的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.78(s,1H),9.87(s,1H),9.51(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.86(d,2H,J＝8.4Hz),7.66(d,4H，J＝8.8Hz),7.45(d,1H，J＝8.0Hz),7.25(t,1H,J＝8.0Hz),7.05(dd,2H,J＝15.8,67Hz),5.85(s,1H),4.15-4.07(m,1H),3.76-3.69(m,1H),3.11(s，2H)，3.05-2.93(m,1H),2.85-2.81(m,1H)，2.34(s，6H)。
MS m/z(ESI):647[M+H]+
实施例6
Figure PCTCN2020141466-appb-000070
将实施例4所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例6的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.78(s,1H),9.87(s,1H),9.51(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.86(d,2H,J＝8.4Hz),7.66(d,4H，J＝8.8Hz),7.45(d,1H，J＝8.0Hz),7.25(t,1H,J＝8.0Hz),7.05(dd,2H,J＝15.8,67Hz),5.85(s,1H),4.15-4.07(m,1H),3.76-3.69(m,1H),3.11(s，2H)，3.05-2.93(m,1H),2.85-2.81(m,1H)，2.34(s，6H)。
MS m/z(ESI):647[M+H]+
实施例7：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000071
第一步：N 1-(异喹啉-5-基)-N 2,N 2-二甲基乙烷-1,2-二胺(7-3)的制备
氮气气氛下，N,N-二甲基乙二胺(7-2,66mg，0.75mmol)，5-溴异喹啉(7-1,104mg，0.5mmol)，Pd 2dba 3(91mg，0.1mmol)，BINAP(93mg，0.15mmol)，碳酸铯(244mg，0.75mmol)于1,4-二氧六环(3mL)中加热至100℃搅拌过夜。反应液过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得白色固体N 1-(异喹啉-5-基)-N 2,N 2-二甲基乙烷-1,2-二胺54mg，产率50％。
第二步：N 1,N 1-二甲基-N 2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙烷-1,2-二胺(7-4)的制备
N 1-(异喹啉-5-基)-N 2,N 2-二甲基乙烷-1,2-二胺(7-3,54mg)溶于甲醇(3mL)中，加入二氧化铂(10mg)，氢气气氛下室温下搅拌过夜，过滤，浓缩后得到白色固体N 1,N 1-二甲基-N 2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙烷-1,2-二胺(50mg)。
第三步：N 1-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-N 2,N 2-二甲基乙烷-1,2-二胺(7-5)的制备
N 1,N 1-二甲基-N 2-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙烷-1,2-二胺(7-4,50mg)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入二氧化锰(200mg)，室温下搅拌过夜。过滤。滤液浓缩得白色固体N 1-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-N 2,N 2-二甲基乙烷-1,2-二胺45mg。
第四步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(7-6)的制备
N 1-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-N 2,N 2-二甲基乙烷-1,2-二胺(7-5,45mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7,59mg)，4-异氰基苯甲酸叔丁酯(1-6,46mg)溶于乙醇(3mL)中，反应液升温至70℃搅拌过夜，冷至室温柱色谱纯化得黄色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(62mg，产率43％)。
第五步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(07)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(7-6,62mg)溶解于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌2小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备(30mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.63(s,1H),9.90(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.83-7.81(m,2H),7.66(d,1H，J＝8.8Hz),7.57-7.55(m,2H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.19(t,1H,J＝7.8Hz),7.03(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.8,61Hz),5.76(s,1H),5.26(s,1H),4.11-4.07(m,1H),3.76-3.69(m,1H),3.05-2.98(m,1H),2.94(t,2H,J＝7.0Hz)，2.81(t,2H,J＝7.0Hz)，2.43-2.38(m,1H)，2.14(s，6H)。
MS m/z(ESI):633[M+H]+
实施例8
Figure PCTCN2020141466-appb-000072
将实施例7所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例8的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.63(s,1H),9.90(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.83-7.81(m,2H),7.66(d,1H，J＝8.8Hz),7.57-7.55(m,2H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.19(t,1H,J＝7.8Hz),7.03(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.8,61Hz),5.76(s,1H),5.26(s,1H),4.11-4.07(m,1H),3.76-3.69(m,1H),3.05-2.98(m,1H),2.94(t,2H,J＝7.0Hz)，2.81(t,2H,J＝7.0Hz)，2.43-2.38(m,1H)，2.14(s，6H)。
MS m/z(ESI):633[M+H]+
实施例9
Figure PCTCN2020141466-appb-000073
将实施例7所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例9的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.63(s,1H),9.90(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.83-7.81(m,2H),7.66(d,1H，J＝8.8Hz),7.57-7.55(m,2H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.19(t,1H,J＝7.8Hz),7.03(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.8,61Hz),5.76(s,1H),5.26(s,1H),4.11-4.07(m,1H),3.76-3.69(m,1H),3.05-2.98(m,1H),2.94(t,2H,J＝7.0Hz)，2.81(t,2H,J＝7.0Hz)，2.43-2.38(m,1H)，2.14(s，6H)。
MS m/z(ESI):633[M+H]+
实施例10：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000074
第一步：5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(10-1)的制备
将5-(2-甲氧基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(1-3,231mg，0.72mmol)的四氢呋喃 溶液(6mL)滴入NaH(60mg，1.5mmol)的四氢呋喃(2mL)的悬浊液中，室温下搅拌0.5h。于反应液中滴加碘甲烷(88μL，1.4mmol)，室温下搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩，残留物柱色谱纯化后得到浅黄色油状物5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯240mg。
第二步：2-甲氧基-N-甲基-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(10-2)的制备
5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(10-1,870mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入HCl/1,4-二氧六环(4mol/L，10mL)，室温下搅拌3小时，浓缩，残留物加入10％氢氧化钠甲醇溶液碱化，过滤浓缩后得到黄色油状物2-甲氧基-N-甲基-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(650mg)。
第三步：N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺(10-3)的制备
2-甲氧基-N-甲基-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(10-2,650mg)溶于二氯甲烷(60mL)中，加入二氧化锰(4.70g)，室温下搅拌过夜。过滤。滤液浓缩，残留物经柱色谱纯化得黄色油状物N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺590mg。
第四步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(10-4)的制备
N-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺(10-3，151mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7，193mg)，4-异氰基苯甲酸叔丁酯(1-6，146mg)溶于乙醇(15mL)中，反应液升温至70℃搅拌40小时，冷至室温柱色谱纯化得白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(171mg)。
第五步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(10)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72mg)溶解于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌2小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(45mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.86(s,1H),9.87(s,1H),7.94(t,1H,J＝8.0Hz),7.87(d,2H，J＝7.2Hz),7.73-7.67(m,3H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.30(d,1H,J＝7.6Hz),7.16(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.09(m,1H),3.71-3.65(m,1H),3.17(s，2H)，3.11(s，2H)，3.07(s，3H)，3.05-2.98(m,1H)，2.67-2.62(m,1H).
MS m/z(ESI):648[M+H]+
实施例11
Figure PCTCN2020141466-appb-000075
将实施例10所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例11的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.86(s,1H),9.87(s,1H),7.94(t,1H,J＝8.0Hz),7.87(d,2H，J＝7.2Hz),7.73-7.67(m,3H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.30(d,1H,J＝7.6Hz),7.16(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.09(m,1H),3.71-3.65(m,1H),3.17(s，2H)，3.11(s，2H)，3.07(s，3H)，3.05-2.98(m,1H)，2.67-2.62(m,1H).
MS m/z(ESI):648[M+H]+
实施例12
Figure PCTCN2020141466-appb-000076
将实施例10所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例12的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.86(s,1H),9.87(s,1H),7.94(t,1H,J＝8.0Hz),7.87(d,2H，J＝7.2Hz),7.73-7.67(m,3H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.30(d,1H,J＝7.6Hz),7.16(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.09(m,1H),3.71-3.65(m,1H),3.17(s，2H)，3.11(s，2H)，3.07(s，3H)，3.05-2.98(m,1H)，2.67-2.62(m,1H).
MS m/z(ESI):648[M+H]+
实施例13：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000077
第一步：5-(甲基氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(13-3)的制备
氮气气氛下，5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(13-1,1.017g，2.75mmol)，甲胺盐酸盐(13-2,362mg，5.5mmol)，Pd(OAc) 2(61mg，0.27mmol)，XPhos(265mg，0.55mmol)，碳酸铯(3.63g，11mmol)于1,4-二氧六环(18mL)中，封管加热至105℃搅拌过夜。反应液过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得浅黄色固体5-(甲基氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯860mg，产率97.7％。
第二步：5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(13-4)的制备
5-(甲基氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(13-3,431mg，1.35mmol)，二甲基甘氨酸(181mg)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加入吡啶(326μL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，1.6mL)，室温下搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯540mg。
第三步：2-(叔丁氧羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(13-5) 的制备
5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(13-4,540mg)溶于四氢呋喃(10mL)，加入氢氧化锂水溶液(2mol/L，10mL)，甲醇3mL，室温搅拌2小时，有机溶剂浓缩，用1mol/L盐酸调节pH至6，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后得到白色固体2-(叔丁氧羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(470mg)。
第四步：1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(13-7)的合成
2-(叔丁氧羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(13-5,390mg，1mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(13-6,201mg，1.04mmol)，HATU(402mg，1.05mmol)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，6mL)，加入DIPEA(0.8mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(560mg)。
第五步：4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(13-8)的制备
1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(13-7,560mg)溶解于四氢呋喃(30mL)，加入盐酸乙酸乙酯溶液(3mol/L，30mL)，室温搅拌3小时，浓缩得粗品(600mg)，直接用于下步反应。
第六步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(13-9)的制备
4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(600mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7,300mg)，HATU(402mg，1.05mmol)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，10mL)，加入DIPEA(3mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(680mg)。
第七步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(13)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(13-9,680mg)溶解于二氯甲烷(24mL)中，加入三氟乙酸(8mL)，室温下搅拌2小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(548mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.93(s,1H),9.88(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.88(d,2H,J＝8.4Hz),7.76-7.66(m,4H),7.40-7.36(m,1H),7.30-7.27(m,1H),7.03(dd,2H,J＝16.2,55Hz),5.91(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.05(m,1H),3.69-3.58(m,1H),3.09(s，3H)，2.98-2.87(m,3H),2.76-2.71(m,1H)，2.22(s，3H)，2.14(s，3H)。
MS m/z(ESI):661[M+H]+
实施例14
Figure PCTCN2020141466-appb-000078
将实施例13所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例14的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.93(s,1H),9.88(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.88(d,2H,J＝8.4Hz),7.76-7.66(m,4H),7.40-7.36(m,1H),7.30-7.27(m,1H),7.03(dd,2H,J＝16.2,55Hz),5.91(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.05(m,1H),3.69-3.58(m,1H),3.09(s，3H)，2.98-2.87(m,3H),2.76-2.71(m,1H)，2.22(s，3H)，2.14(s，3H)。
MS m/z(ESI):661[M+H]+
实施例15
Figure PCTCN2020141466-appb-000079
将实施例13所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例15的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.93(s,1H),9.88(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.88(d,2H,J＝8.4Hz),7.76-7.66(m,4H),7.40-7.36(m,1H),7.30-7.27(m,1H),7.03(dd,2H,J＝16.2,55Hz),5.91(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.05(m,1H),3.69-3.58(m,1H),3.09(s，3H)，2.98-2.87(m,3H),2.76-2.71(m,1H)，2.22(s，3H)，2.14(s，3H)。
MS m/z(ESI):661[M+H]+
实施例16：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000080
第一步：1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(16-2)的制备
2-(叔丁氧羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(390mg，1mmol)，4-甲氨基苯甲酸叔丁酯(210mg，1.04mmol)，HATU(402mg，1.05mmol)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，6mL)，加入DIPEA(0.8mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(560mg)。
第二步：4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(16-3)的制备
1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(560mg)溶解于四氢呋喃(30mL)，加入盐酸乙酸乙酯溶液(3mol/L，30mL)， 室温搅拌3小时，浓缩得粗品4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(600mg)，直接用于下步反应。
第三步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(16-4)的制备
4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(600mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(300mg)，HATU(402mg，1.05mmol)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，10mL)，加入DIPEA(3mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(650mg)。
第四步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(16)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(100mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌2小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(54mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.88(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.88(d,2H,J＝8.4Hz),7.76-7.66(m,4H),7.40-7.36(m,1H),7.30-7.27(m,1H),7.03(dd,2H,J＝16.2,55Hz),5.91(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.05(m,1H),3.69-3.58(m,1H),3.42(s,3H),3.09(s，3H)，2.98-2.87(m,3H),2.76-2.71(m,1H)，2.22(s，3H)，2.14(s，3H)。
MS m/z(ESI):675[M+H]+
实施例17
Figure PCTCN2020141466-appb-000081
将实施例16所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例17的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.88(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.88(d,2H,J＝8.4Hz),7.76-7.66(m,4H),7.40-7.36(m,1H),7.30-7.27(m,1H),7.03(dd,2H,J＝16.2,55Hz),5.91(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.05(m,1H),3.69-3.58(m,1H),3.42(s,3H),3.09(s，3H)，2.98-2.87(m,3H),2.76-2.71(m,1H)，2.22(s，3H)，2.14(s，3H)。
MS m/z(ESI):675[M+H]+
实施例18
Figure PCTCN2020141466-appb-000082
将实施例16所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例18的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.88(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.0Hz),7.88(d,2H,J＝8.4Hz),7.76-7.66(m,4H),7.40-7.36(m,1H),7.30-7.27(m,1H),7.03(dd,2H,J＝16.2,55Hz),5.91(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.05(m,1H),3.69-3.58(m,1H),3.42(s,3H),3.09(s，3H)，2.98-2.87(m,3H),2.76-2.71(m,1H)，2.22(s，3H)，2.14(s，3H)。
MS m/z(ESI):675[M+H]+
实施例19：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000083
第一步：5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(19-1)的制备
于5-(甲基氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(400mg)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(0.56mL)，滴加2-甲氧基乙酰氯(0.14mL)，反应液于室温下搅拌2小时。加水淬灭反应，有机层分出干燥过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得白色固体5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯450mg。
第二步：2-(叔丁氧羰基)-5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(19-2)的制备
于5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(103mg)的四氢呋喃(2mL)溶液中加入氢氧化锂水溶液(2mol/L，0.27mL)，甲醇0.5mL，室温下搅拌1.5小时，加1mol/L盐酸至pH 5，加饱和食盐水5mL，二氯甲烷萃取，干燥浓缩得白色固体2-(叔丁氧羰基)-5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸100mg。
第三步：1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(19-3)的制备
2-(叔丁氧羰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(100mg)，4-甲氨基苯甲酸叔丁酯(55mg)，HATU(102mg)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，3mL)，加入DIPEA(0.4mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(120mg)。
第四步：4-(5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁 酯盐酸盐(19-4)的制备
1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(120mg)溶解于四氢呋喃(3mL)，加入盐酸乙酸乙酯溶液(3mol/L，3mL)，室温搅拌3小时，浓缩得粗品4-(5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(130mg)，直接用于下步反应。
第五步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(19-5)的制备
4-(5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(120mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(67mg)，HATU(91mg)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，5mL)，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(100mg)。
第六步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(19)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(100mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌2小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-(2-(甲氧基)-N-甲基乙酰氨基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(45mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.87(s,1H),7.94(t,1H,J＝8.0Hz),7.87(d,2H，J＝7.2Hz),7.73-7.67(m,3H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.30(d,1H,J＝7.6Hz),7.16(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.09(m,1H),3.71-3.65(m,1H),3.41(s,1H),3.17(s，2H)，3.11(s，2H)，3.07(s，3H)，3.05-2.98(m,1H)，2.67-2.62(m,1H).
MS m/z(ESI):662[M+H]+
实施例20
Figure PCTCN2020141466-appb-000084
将实施例19所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例20的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.87(s,1H),7.94(t,1H,J＝8.0Hz),7.87(d,2H，J＝7.2Hz),7.73-7.67(m,3H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.30(d,1H,J＝7.6Hz),7.16(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.09(m,1H),3.71-3.65(m,1H),3.41(s,1H),3.17(s，2H)，3.11(s，2H)，3.07(s，3H)，3.05-2.98(m,1H)，2.67-2.62(m,1H).
MS m/z(ESI):662[M+H]+
实施例21
Figure PCTCN2020141466-appb-000085
将实施例19所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例21的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.87(s,1H),7.94(t,1H,J＝8.0Hz),7.87(d,2H，J＝7.2Hz),7.73-7.67(m,3H),7.36(d,1H,J＝7.6Hz),7.30(d,1H,J＝7.6Hz),7.16(t,1H,J＝7.8Hz),7.04(d,1H,J＝7.6Hz),7.02(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(d,1H,J＝8.8Hz),4.18-4.09(m,1H),3.71-3.65(m,1H),3.41(s,1H),3.17(s，2H)，3.11(s，2H)，3.07(s，3H)，3.05-2.98(m,1H)，2.67-2.62(m,1H).
MS m/z(ESI):662[M+H]+
实施例22：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000086
第一步：5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(22-2)的制备
氮气气氛下，5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(2.53g)，4-甲基哌嗪酮(1.017g)，CuI(1.065g)，邻菲啰啉(135mg)，碳酸钾(2.84g)于二甲基亚砜(11mL)中，加热至130℃搅拌过夜。反应液加入3mol/L氨水，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得浅黄色固体5-(甲基氨基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯1.98g。
第二步：2-(叔丁氧羰基)-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(22-3)的制备5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(260mg)溶于四氢呋喃(3mL)，加入氢氧化锂水溶液(1mol/L，1.3mL)，甲醇2mL，室温搅拌4小时，有机溶剂浓缩，用1mol/L盐酸调节pH至5，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后得到白色固体2-(叔丁氧羰基)-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(133mg)。
第三步：1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(22-4)的制备
2-(叔丁氧羰基)-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(133mg)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(85mg)，HATU(156mg)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，6mL)，加入DIPEA(0.2mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(150mg)。
第四步：4-(N-甲基-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(22-5)的制备
1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(150mg)溶解于四氢呋喃(3mL)，加入盐酸乙酸乙酯溶液(3mol/L，3mL)，室温搅拌3小时，浓缩得粗品4-(N-甲基-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(160mg)，直接用于下步反应。
第五步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-N-甲基-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(22-6)的制备
4-(N-甲基-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(160mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(84mg)，HATU(119mg)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，5mL)，加入DIPEA(0.3mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1
-基)苯基)丙烯酰基)-5-N-甲基-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(145mg)。
第六步：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(22)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-N-甲基-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(145mg)溶解于二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌3小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-5-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(48mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.70(s，1H),7.87(d,2H，J＝8.2Hz),7.87-7.83(m,1H),7.68(d，2H，J＝8.8Hz),7.68-7.62(m,1H),7.58(dd,1H，J＝1.0，8.8Hz,),7.35(t,1H，J＝7.8Hz),7.24(d,1H，J＝7.2Hz),6.98(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(s,1H),4.07-3.99(m,2H),3.98-3.85(m,4H),3.77-3.69(m,2H),3.42(s,3H),2.87(s,3H),2.66-2.59(m,2H)。
MS m/z(ESI):673[M+H]+
实施例23
Figure PCTCN2020141466-appb-000087
将实施例22所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例23的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.70(s，1H),7.87(d,2H，J＝8.2Hz),7.87-7.83(m,1H),7.68(d，2H，J＝8.8Hz),7.68-7.62(m,1H),7.58(dd,1H，J＝1.0，8.8Hz,),7.35(t,1H，J＝7.8Hz),7.24(d,1H，J＝7.2Hz),6.98(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(s,1H),4.07-3.99(m,2H),3.98-3.85(m,4H),3.77-3.69(m,2H),3.42(s,3H),2.87(s,3H),2.66-2.59(m,2H)。
MS m/z(ESI):673[M+H]+
实施例24
Figure PCTCN2020141466-appb-000088
将实施例22所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例24的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.70(s，1H),7.87(d,2H，J＝8.2Hz),7.87-7.83(m,1H),7.68(d，2H，J＝8.8Hz),7.68-7.62(m,1H),7.58(dd,1H，J＝1.0，8.8Hz,),7.35(t,1H，J＝7.8Hz),7.24(d,1H，J＝7.2Hz),6.98(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(s,1H),4.07-3.99(m,2H),3.98-3.85(m,4H),3.77-3.69(m,2H),3.42(s,3H),2.87(s,3H),2.66-2.59(m,2H)。
MS m/z(ESI):673[M+H]+
实施例25：(E)-4-(5-溴-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000089
第一步：5-溴-2-(叔丁氧羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(25-1)的制备
5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-二甲酸-2-叔丁酯-1-甲酯(370mg)溶于四氢呋喃(5mL)，加入氢氧化锂水溶液(1mol/L，1.5mL)，甲醇2mL，室温搅拌4小时，有机溶剂浓缩，用1mol/L盐酸调节pH至5，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后得到白色固体5-溴-2-(叔丁氧羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(253mg)。
第二步：5-溴-1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(25-2)的制备
5-溴-2-(叔丁氧羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(253mg)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(162mg)，HATU(300mg)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，10mL)，加入DIPEA(0.8mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体5-溴-1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(298mg)。
第三步：4-(5-溴-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(25-3)的制备
5-溴-1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)甲氨基甲酰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(298mg)溶解于四氢呋喃(5mL)，加入盐酸乙酸乙酯溶液(3mol/L，5mL)，室温搅拌3小时，浓缩得粗品4-(5-溴-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(300mg)，直接用于下步反应。
第四步：(E)-4-(5-溴-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异 喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(25-4)的制备
4-(5-溴-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯盐酸盐(300mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(176mg)，HATU(249mg)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，6mL)，加入DIPEA(0.6mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体(E)-4-(5-溴-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(300mg)。
第五步：(E)-4-(5-溴-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(25)的制备
(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-5-N-甲基-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(139mg)溶解于二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌3小时，浓缩，残留物纯化后得到白色固体(E)-4-(5-溴-2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(48mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.87(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.87(d,2H,J＝8.4Hz),7.67-7.64(m,4H),7.62-7.59(m,2H),7.25(t,1H,J＝7.6Hz),7.05(dd,2H,J＝15.6,75.6Hz),5.88(s,1H),4.16-4.13(m,1H),3.81-3.77(m,1H),3.45(s，3H)，3.10-3.07(m,1H),3.01-2.98(m,1H)。
MS m/z(ESI):638，640[M+H]+
实施例26
Figure PCTCN2020141466-appb-000090
将实施例25所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例26的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.87(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.87(d,2H,J＝8.4Hz),7.67-7.64(m,4H),7.62-7.59(m,2H),7.25(t,1H,J＝7.6Hz),7.05(dd,2H,J＝15.6,75.6Hz),5.88(s,1H),4.16-4.13(m,1H),3.81-3.77(m,1H),3.45(s，3H)，3.10-3.07(m,1H),3.01-2.98(m,1H)。
MS m/z(ESI):638，640[M+H]+
实施例27
Figure PCTCN2020141466-appb-000091
将实施例25所得到的化合物经制备液相色谱法分离，得到实施例27的化合物。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.87(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.87(d,2H,J＝8.4Hz),7.67-7.64(m,4H),7.62-7.59(m,2H),7.25(t,1H,J＝7.6Hz),7.05(dd,2H,J＝15.6,75.6Hz),5.88(s,1H),4.16-4.13(m,1H),3.81-3.77(m,1H),3.45(s，3H)，3.10-3.07(m,1H),3.01-2.98(m,1H)。
MS m/z(ESI):638，640[M+H]+
实施例28：(E)-N-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5- 基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000092
2-甲氧基-N-甲基-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(10-2，70mg),(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7，100mg)溶于乙酸乙酯(7mL)中，加入吡啶(75μL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.36mL)，60℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(E)-N-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺124mg，产率86％。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.86(s,1H),7.95(t,1H,J＝8.2Hz),7.66(dd,1H,J＝1.2，8.0Hz),7.33-7.29(m,2H),7.22-7.19(m,1H),7.00(dd,2H,J＝15.8,46.2Hz),4.79-4.64(m,2H),3.83-3.67(m,2H),3.49-3.35(m,2H),3.16(s，2H)，3.15(s，2H)，3.06(s，2H)，3.04(s，1H)，2.67-2.62(m,2H).
MS m/z(ESI):485[M+H]+
实施例29：(E)-N-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-1-(吡咯烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000093
第一步：5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1-(吡咯烷-1-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(29-1)的制备
2-(叔丁氧羰基)-5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸(19-2,100mg),吡咯烷(0.045mL)溶于乙酸乙酯(4mL)中，加入吡啶(65μL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.32mL)，60℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1-(吡咯烷-1-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯49mg。
第二步：2-甲氧基-N-甲基-N-(1-(吡咯烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(29-2)的制备
5-(2-甲氧基-N-甲基乙酰氨基)-1-(吡咯烷-1-羰基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(29-1,49mg)溶解于二氯甲烷(3mL)，加入盐酸1,4-二氧六环溶液(4mol/L，3mL)，室温搅拌2小时，旋干得浅黄色固体2-甲氧基-N-甲基-N-(1-(吡咯烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺50mg。
第三步：(E)-N-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-1-(吡咯烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺(29)的制备
2-甲氧基-N-甲基-N-(1-(吡咯烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)乙酰胺(29-2,50mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7,50mg)溶于乙酸乙酯(3mL)中，加入吡啶(35μL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.17mL)，60℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(E)-N-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰 基)-1-(吡咯烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺45mg(两步产率68.2％)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.86(s,1H),7.95(t,1H,J＝8.2Hz),7.66(d,1H,J＝8.4Hz),7.33-7.27(m,3H),7.10(dd,1H,J＝5.6,15.6Hz),6.96(dd,1H,J＝1.8,15.8Hz),6.01(d，1H，J＝10.8Hz)，4.09-3.85(m,2H),3.80-3.74(m,2H),3.73-3.38(m,1H),3.48-3.40(m,1H),3.29-3.18(m,2H),3.16(d，3H，J＝1.2Hz)，3.07(d，3H，J＝8.8Hz)，2.99-2.79(m,1H)，2.72-2.60(m,1H)，2.04-1.88(m,2H)，1.84-1.76(m,2H)。
MS m/z(ESI):582[M+H]+
实施例30：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000094
第一步：2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯(30-2)的制备
将(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯盐酸盐(30-1,1g,3.26mmol)，碳酸氢钠(959mg,11.42mmol)加入到二氧六环(10mL)和水(5mL)的混合体系中搅拌均匀，加入氯甲酸苄酯(612mg，3.59mmol)，室温搅拌反应4小时，LCMS检测反应完全。加入50mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯(1.297g,收率98％)。
MS m/z(ESI):404,406[M+H]+
第二步：2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸(30-3)的制备
将2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯(30-2,1.297g,3.21mmol)加入四氢呋喃(20mL)和水(20mL)的混合溶剂中搅拌均匀，再加入氢氧化锂一水合物(404mg,9.62mmol)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。加入50mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，得粗品2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯(1.197g,收率96％)，直接投下一步。
MS m/z(ESI):390,392[M+H]+
第三步：苄基(S)-5-溴-1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(30-4)的制备
将2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯(30-3,1.197g,3.07mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(652mg,3.37mmol)，HATU(1.4g,3.68mmol)和二异丙基乙胺(1.01mL,6.13mmol)加入DCM(30mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品苄基(S)-5-溴-1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(1.55g,收率89％)。
MS m/z(ESI):563,565[M-H]-
第四步：(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(30-5)的制备
将苄基(S)-5-溴-1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(30-4,200mg,354μmol)加入甲醇(50mL)中，再加入Pd-C(100mg)，反应体系抽换氢气三次，在氢气氛围下反应过夜，LCMS检测反应完全。过滤，滤液浓缩，得纯品(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔 丁酯(125mg,收率100％)。
MS m/z(ESI):353[M+H]+
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(30-6)的制备
将(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(125mg,355μmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(105mg,390μmol)，HATU(162mg,426μmol)和二异丙基乙胺(176μl,1.06mmol)加入DCM(4mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(193mg,收率90％)。
MS m/z(ESI):410[M-192]+
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(30)的制备
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-5-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(173mg,287μmol)加入DCM(10mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(55mg,收率35％)。
MS m/z(ESI):545[M-1]-
实施例31：(S,E)-4-(2-(3-(5-氯-2-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000095
第一步：(S,E)-4-(2-(3-(5-氯-2-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(31-1)的制备
将(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(30-5,187mg,531μmol)，(E)-3-(5-氯-2-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(31-2，166mg,584μmol)，HATU(242mg,637μmol)和二异丙基乙胺(263μl,1.59mmol)加入DCM(5mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(5-氯-2-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(270mg,收率82％)。
MS m/z(ESI):425[M-192]+
第二步：(S,E)-4-(2-(3-(5-氯-2-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(31)的制备
将(S,E)-4-(2-(3-(5-氯-2-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(31-1,270mg,437μmol)加入DCM(10mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(5-氯-2-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(50mg,收率20％)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ12.67(brs，1H)，10.79(s,1H),8.87(s，1H)，8.42(d，1H，1.8Hz)，7.86(d,2H,J＝8.8Hz),7.72(dd,1H,J＝1.8，8.6Hz),7.68(d,2H,J＝7.6Hz),7.60(d,1H,J＝7.2Hz),7.63(t,1H,J＝4.4Hz),7.30-7.25(m,3H),7.29(dd,2H,J＝15.8,205.2Hz),5.82(s,1H),4.37-4.31(m,1H),3.91-3.85(m,1H),3.23-3.16(m,1H),2.95-2.89(m,1H)。
MS m/z(ESI):560[M-1]-
实施例32：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-6-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-氟苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000096
第一步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-6-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-氟苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(32-1)的制备
将(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(30-5,187mg,531μmol)，(E)-3-(3-氯-6-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-氟苯基)丙烯酸(176mg,584μmol)，HATU(242mg,637μmol)和二异丙基乙胺(263μl,1.59mmol)加入DCM(5mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-6-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-氟苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(242mg,收率72％)。
MS m/z(ESI):443[M-192]+
第二步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-6-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-氟苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(32)的制备
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-6-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-氟苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(32-1,242mg,380μmol)加入DCM(10mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-6-(4-氯-1H-1,2,3-三氮唑-1-基)-2-氟苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(50mg,收率23％)。
1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ12.70(brs,1H),10.79(s,1H),8.89(s,1H),7.92(t,1H,J＝8.2Hz),7.86(d,2H,J＝8.8Hz),7.67(d,2H,J＝8.8Hz),7.64-7.60(m,2H),7.27-7.24(m,4H),7.05(dd,2H,J＝15.6,71.6Hz),5.81(s,1H),4.14-4.10(m,1H),3.69-3.63(m,1H),3.23-3.16(m,1H),2.91-2.85(m,1H)。
MS m/z(ESI):578[M-1]-
实施例33：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000097
按照实施例30的合成路线第五步制备标题化合物。
1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.86(s,1H),9.93(s,1H),8.01(t,1H,J＝8.2Hz),7.89(d,2H,J＝8.8Hz),7.76-7.67(m,4H),7.33-7.30(m,3H),7.10(dd,2H,J＝16.0,65.6Hz),5.87(s,1H),4.21-4.18(m,1H),3.74-3.69(m,1H),3.28-3.21(m,1H),2.96-2.90(m,1H)，1.58(s，9H)。
MS m/z(ESI):603[M+H]+。
实施例34：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸((异丙氧基羰基)氧基)甲酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000098
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(30,50mg,91μmol)，碳酸钾(38mg,274μmol)和碘化钾(15mg,91μmol)加入DMF(2mL)中，抽换氮气，氮气氛围下加入氯甲基碳酸异丙酯(21mg,137μmol)，搅拌均匀，60℃反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，制备薄层色谱纯化得纯品(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸((异丙氧基羰基)氧基)甲酯35mg。
MS m/z(ESI):663[M+1]+
实施例35：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸1-((乙氧基羰基)氧基)乙酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000099
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(30,50mg,91μmol)，碳酸钾(38mg,274μmol)和碘化钾(15mg,91μmol)加入DMF(2mL)中，抽换氮气，氮气氛围下加入1-氯乙基碳酸乙酯(21mg,137μmol)，搅拌均匀，60℃反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，制备薄层色谱纯化得纯品(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸((异丙基羰基)氧基)甲酯45mg。
MS m/z(ESI):663[M+1]+
实施例36：4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸1-((异丙氧羰基)氧基)乙酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000100
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(30,50mg,91μmol)，碳酸钾(38mg,274μmol)和碘化钾(15mg,91μmol)加入DMF(2mL)中，抽换氮气，氮气氛围下加入1-氯乙基碳酸异丙酯(21mg,137μmol)，搅拌均匀，60℃反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，制备薄层色谱纯化得纯品4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1- 甲酰氨基)苯甲酸1-((异丙氧羰基)氧基)乙酯(40mg,收率66％)。
1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ10.89(s,1H),9.87(s,1H),7.96(t,1H,J＝8.2Hz),7.90(d,2H,J＝8.8Hz),7.73(d,2H,8.8Hz),7.66(dd,1H,J＝1.2,8.8Hz),7.63-7.61(m,1H),7.27-7.24(m,3H),7.04(dd,2H,J＝15.8,66.4Hz),6.84(q,1H,J＝5.2Hz),5.81(s,1H),4.15(q,2H,J＝7.2Hz),4.14-4.12(m,1H),3.68-3.62(m,1H),3.22-3.15(m,1H),2.91-2.84(m,1H),1.56(d,3H,J＝4.2Hz),1.20(t-d,3H,J＝0.8,7.6Hz)。
MS m/z(ESI):529[M-133]+
实施例37：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸1-(((环己氧基)羰基)氧基)乙酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000101
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(30,50mg,91μmol)，碳酸钾(38mg,274μmol)和碘化钾(15mg,91μmol)加入DMF(2mL)中，抽换氮气，氮气氛围下加入1-氯乙基碳酸环己酯(23mg,137μmol)，搅拌均匀，60℃反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，制备薄层色谱纯化得纯品4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸1-(((环己氧基)羰基)氧基)乙酯(43mg)。
MS m/z(ESI):717[M+1]+
实施例38：(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000102
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(30,50mg,91μmol)，碳酸钾(38mg,274μmol)和碘化钾(15mg,91μmol)加入DMF(2mL)中，抽换氮气，氮气氛围下加入4-氯甲基-5-甲基-2-二氧环戊烯(20mg,137μmol)，搅拌均匀，60℃反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，制备薄层色谱纯化得纯品(E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯(33mg)。
MS m/z(ESI):659[M+1]+
实施例39：4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000103
第一步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(39-2)的制备
将(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(30-5,178mg)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(39-1，129mg)溶于乙酸乙酯(3mL)中，加入DIPEA(0.59mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.59mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体4-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(39-2)165mg。
第二步：4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(39)的制备
4-((S)-2-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(39-2)(67mg)溶解于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体4-((S)-2-((1r,4r)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(39)21mg。
MS m/z(ESI):436[M+1]+
实施例40：4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000104
第一步：苄基(S)-5-溴-1-((4-(乙氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(40-1)的制备
将2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯(30-3,1.197g,3.07mmol)，4-氨基苯甲酸乙酯(652mg,3.37mmol)，HATU(1.4g,3.68mmol)和二异丙基乙胺(1.01mL,6.13mmol)加入DCM(30mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品苄基(S)-5-溴-1-((4-(乙氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(1.55g,收率89％)。
第二步：(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(40-2)的制备
将苄基(S)-5-溴-1-((4-(乙氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(40-1,200mg, 354μmol)加入甲醇(50mL)中，再加入Pd-C(100mg)，反应体系抽换氢气三次，在氢气氛围下反应过夜，LCMS检测反应完全。过滤，滤液浓缩，得纯品(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(125mg,收率100％)。
第三步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(40-3)的制备
将(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(40-2,125mg)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(39-1，99mg)溶于乙酸乙酯(3mL)中，加入DIPEA(0.4mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.4mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯159mg。
第四步：4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(40)的制备
将4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(40-3，159mg)加入DCM(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯75mg。
MS m/z(ESI):464[M+1]+
实施例41：4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000105
第一步：苄基(S)-5-溴-1-((4-(甲氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(41-1)的制备
将2-(苄氧羰基)-(S)-5-溴-3,4-二氢异喹啉-1,2(1H)-甲酸甲酯(30-3,389mg,1mmol)，4-氨基苯甲酸甲酯(151mg,1mmol)，HATU(0.382g,1mmol)和二异丙基乙胺(0.5mL)加入DCM(10mL)中室温搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入50mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品苄基(S)-5-溴-1-((4-(甲氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(420mg,收率80％)。
第二步：(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯(41-2)的制备
将苄基(S)-5-溴-1-((4-(甲氧羰基)苯基)氨基甲酰)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸酯(41-1,210mg)加入甲醇(10mL)中，再加入Pd-C(20mg)，反应体系抽换氢气三次，在氢气氛围下反应过夜，LCMS检测反应完全。过滤，滤液浓缩，得纯品(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯(124mg)。
第三步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯(41-3)的制备
将(S)-4-(1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(41-2,124mg)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(39-1，103mg)溶于乙酸乙酯(3mL)中，加入DIPEA(0.4mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.4mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯150mg。
第四步：4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯(41)的制备
将4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(41-3，150mg)加入DCM(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯65mg。
MS m/z(ESI):450[M+1]+
实施例42：4-(2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000106
第一步：4-(2-((1R,4R)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(42-1)的制备
将4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(13-8,80mg)，(1R,4R)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(39-1，51mg)，HATU(79mg)和二异丙基乙胺(0.1mL)加入二氯甲烷(3mL)中室温搅拌反应2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得4-(2-((1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(102mg)。
第二步：4-(2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸(42)的制备
4-(2-((1R,4R)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(42-1，102mg)加入二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，搅拌反应2.5小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得淡黄色固体4-((S)-2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯85mg。
MS m/z(ESI):550[M+1]+
实施例43：4-(2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(43)的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000107
第一步：1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸乙酯(43-1)的合成
2-(叔丁氧羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧酸(13-5,390mg，1mmol)，4-氨基苯甲酸乙酯(13-6,165mg，1.04mmol)，HATU(402mg，1.05mmol)溶于DMF/二氯甲烷(1/1，6mL)，加入DIPEA(0.8mL)，室温搅拌2小时，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后柱色谱纯化得到白色固体1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸乙酯(520mg)。
第二步：4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯盐酸盐(43-2)的制备
1-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸乙酯(43-1,530mg)溶解于四氢呋喃(10mL)，加入盐酸乙酸乙酯溶液(3mol/L，10mL)，室温搅拌3小时，浓缩得粗品(600mg)，直接用于下步反应。
第三步：4-(2-((1R,4R)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(43-3)的制备
将4-(5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯盐酸盐(43-2,80mg)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(39-1，51mg)，HATU(79mg)和二异丙基乙胺(0.1mL)加入二氯甲烷(3mL)中室温搅拌反应2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得4-(2-((1R,4R)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(120mg)。
第二步：4-(2-((1R,4R)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸乙酯(43)的制备
4-(2-((1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)-5-(2-(二甲基氨基)-N-甲基乙酰氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(42-1，120mg)加入二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，搅拌反应2.5小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得淡黄色固体4-((S)-2-((1r,4r)-4-(氨基甲基)环己烷-1-羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-1-甲酰氨基)苯甲酸甲酯78mg。
MS m/z(ESI):577[M+1]+
实施例44：(E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-(4-二氟甲氧基苯基)-5-(4-甲基2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺的制备
第一步：1-(异喹啉-5-基)-4-甲基氧代哌嗪-2-酮(44-1)的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000108
氮气气氛下，5-溴异喹啉(7-1，1.04g)，4-甲基哌嗪酮(22-1，798mg)，CuI(762mg)，邻菲啰啉(101mg)，碳酸钾(2.26g)于二甲基亚砜(8mL)中，加热至130℃搅拌过夜。反应液加入3mol/L氨水，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得浅黄色固体1-(异喹啉-5-基)-4-甲基氧代哌嗪-2-酮0.84g。
第二步：4-甲基-1-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)哌啶-2-酮(44-2)的制备
1-(异喹啉-5-基)-4-甲基氧代哌嗪-2-酮(44-1，590mg)溶于乙醇(20mL)中，加入二氧化铂(102mg)，2MPa氢气气氛下室温下搅拌过夜，过滤，浓缩后得到黄色油状物4-甲基-1-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)哌啶-2-酮(503mg)。
第三步：1-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-4-甲基哌啶-2-酮(44-3)的制备
4-甲基-1-(1,2,3,4-四氢异喹啉-5-基)哌啶-2-酮(44-2，503mg)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入二氧化锰(1.42g)，室温下搅拌过夜。过滤。滤液浓缩得黄色油状物1-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-4-甲基哌啶-2-酮450mg。
第四步：(E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-(4-二氟甲氧基苯基)-5-(4-甲基2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺(44)的制备
封管反应器中，将1-(3,4-二氢异喹啉-5-基)-4-甲基哌啶-2-酮(44-3，100mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7，110mg)，1-(二氟甲氧基)-4-异氰基苯(44-4，69mg)溶于甲醇(3mL)中，反应液升温至65℃搅拌48小时。冷至室温柱色谱纯化得白色固体(E)-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰基)-N-(4-二氟甲氧基苯基)-5(4-甲基2-氧代哌嗪-1-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酰胺75mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.89-10.81(m，1H)，9.87(s，1H),7.96(t,1H，J＝8.0Hz),7.87(d,2H，J＝7.2Hz),7.73-7.67(m,4H),7.38(t，1H，J＝7.6Hz),7.30(d,1H，J＝7.6Hz),7.05-7.04(m，1H)，7.04(dd,2H,J＝15.6,62.4Hz),5.89(d,1H，J＝9.6Hz),4.07-3.99(m,2H),3.98-3.85(m,4H),3.77-3.69(m,2H),3.09(s,3H),2.66-2.59(m,2H)。
MS m/z(ESI):681[M+H]+
中间体1-(二氟甲氧基)-4-异氰基苯(44-4)的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000109
第一步：N-(4-(二氟甲氧基)苯基)甲酰胺(44-6)的制备
将4-二氟甲氧基苯胺(44-5，1.60g)，DMAP(255mg)，N-甲基吗啉(2.2mL)，甲酸(1.5mL)加入二氯甲烷(25mL)中，室温搅拌过夜。补加甲酸(1.0mL)，回流5小时。冷至室温，用1mol/L稀盐酸洗一次，有机层分出干燥过滤浓缩得棕色油状物N-(4-(二氟甲氧基)苯基)甲酰胺2.16g。
第二步：1-(二氟甲氧基)-4-异氰基苯的制备
将N-(4-(二氟甲氧基)苯基)甲酰胺(44-6，1.87g)溶解于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(5mL)，滴加三氯氧磷(1.4mL)，室温下搅拌2小时。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得黄色油状物1-(二氟甲氧基)-4-异氰基苯850mg。
实施例45：4-((2S,4R)-1-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000110
第一步：(2S,4R)-1-2-甲基-4-(对甲苯磺酸)吡咯烷-1,2-二羧酸叔丁酯(45-2)的制备
将(2S,4R)-1-2-甲基-4-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸叔丁酯(45-1,3g,12.23mmol)和三乙胺(5.1mL,36.69mmol)加入DCM(200mL)中，搅拌均匀，滴加对甲苯磺酰氯(3.5g,18.35mmol)，室温反应4小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入200mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(2S,4R)-1-2-甲基-4-(对甲苯磺酸)吡咯烷-1,2-二羧酸叔丁酯(3.5g,收率72％)。
MS m/z(ESI):400[M+H]+
第二步：(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-(对甲苯磺酸)吡咯烷-2-甲酸(45-3)的制备
将(2S,4R)-1-2-甲基-4-(对甲苯磺酸)吡咯烷-1,2-二羧酸叔丁酯(45-2,1.4g,3.5mmol)加入THF(20mL)和水(20mL)的混合溶剂中，再加入氢氧化锂一水合物(441mg,10.51mmol)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。加入50mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，得粗品(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-(对甲苯磺酸)吡咯烷-2-甲酸(1g,收率74％)，直接投下一步。
MS m/z(ESI):386[M+H]+
第三步：(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-环己基吡咯烷-2-甲酸(45-4)的制备
将(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-(对甲苯磺酸)吡咯烷-2-甲酸(45-3，1g,2.59mmol)，甲醇锂(99mg,2.59mmol)，碘化亚铜(99mg,519μmol)和四甲基乙二胺(121mg,1.04mmol)加入THF(50mL)中，抽换氮气三次，0℃下滴加环己基格式试剂(4.86g,25.94mmol),0℃反应16小时。滴加水淬灭反应至不再冒气泡，旋干溶剂，加入50mL水，用1M盐酸调PH至3，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，得粗品(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-环己基吡咯烷-2-甲酸(600mg,收率78％)，直接投下一步。
MS m/z(ESI):298[M+H]+
第四步：(2S,4R)-2-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰)-4-环己基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(45-5)的制备
将(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-环己基吡咯烷-2-甲酸(45-4，600mg,2.02mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(429mg,2.22mmol)，HATU(921mg,2.42mmol)加入DCM(20mL)中，搅拌均匀，加入DIPEA(1mL,6.05mmol)，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(2S,4R)-2-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰)-4-环己基吡 咯烷-1-甲酸叔丁酯(150mg,收率16％)。
MS m/z(ESI):473[M+H]+
第五步：4-((2S,4R)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(45-6)的制备
将(2S,4R)-2-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰)-4-环己基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(45-5，150mg,254μmol)加入氯化氢乙酸乙酯溶液(10mL)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得纯品4-((2S,4R)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(95mg,产率100％)。
MS m/z(ESI):373[M+H]+
第六步：4-((2S,4R)-1-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-羰基)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(45-7)的制备
将4-((2S,4R)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(45-6，45mg,121μmol)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-甲酸(34mg,133μmol)，HATU(55mg,145μmol)和异丙基二乙基胺(45mg,362μmol)加入DCM(3mL)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((2S,4R)-1-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-羰基)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(60mg,收率81％)。
MS m/z(ESI):612[M+H]+
第七步：4-((2S,4R)-1-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸(45)的制备
将4-((2S,4R)-1-((1r,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-羰基)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(45-7，60mg,98μmol)加入三氟乙酸(2mL)和DCM(4mL)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((2S,4R)-1-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸(39mg,产率87％)。
MS m/z(ESI):456[M+H]+
实施例46：4-((2S,4R)-1-(4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸三氟乙酸盐
Figure PCTCN2020141466-appb-000111
第一步：(2S,4R)-2-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(46-2)的制备
将(2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酸(46-1,200mg,686μmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(146mg,755μmol)，HATU(313mg,824μmol)加入DCM(10mL)中，搅拌均匀，加入DIPEA(0.34mL,2.06mmol)，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(2S,4R)-2-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(320mg,收率99％)。
MS m/z(ESI):467[M+H]+
第二步：4-((2S,4R)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(46-3)的制备
将(2S,4R)-2-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基甲酰基)-4-苯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(46-2,320mg,686 μmol)加入氯化氢乙酸乙酯溶液(10mL)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得纯品4-((2S,4R)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(250mg,产率99％)。
MS m/z(ESI):367[M+H]+
第三步：4-((2S,4R)-1-(4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(46-4)的制备
将4-((2S,4R)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(46-3,100mg,273μmol)，(1R,4R)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-甲酸(77mg,300μmol)，HATU(125mg,327μmol)和异丙基二乙基胺(106mg,817μmol)加入DCM(5mL)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((2S,4R)-1-(4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(120mg,收率73％)。
MS m/z(ESI):606[M+H]+
第四步：4-((2S,4R)-1-(4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸三氟乙酸盐(46)的制备
将4-((2S,4R)-1-(4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(46-4,120mg,198μmol)加入三氟乙酸(2mL)和DCM(4mL)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((2S,4R)-1-(4-(氨基甲基)环己基-1-羰基)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸三氟乙酸盐(80mg,产率90％)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ12.69(s，1H)，10.34(s,1H),7.90(d,2H,J＝8.8Hz),7.73(d,2H,J＝8.8Hz),7.72(brs，3H)，7.36-7.33(m，4H),7.29-7.25(m,1H),4.51-4.47(m,1H),4.25-4.16(m,1H),3.52-3.47(m,2H),2.69-2.64(m,3H),1.99-1.96(m,1H),1.86-1.78(m,4H),1.58-1.47(m,1H),1.36-1.24(m,2H),1.05-0.96(m,2H)。
MS m/z(ESI):450[M+H]+
实施例47：4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000112
第一步：4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(47-1)的制备
将4-((2S,4R)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(45mg,121μmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1氢-四唑-1-基)苯基)丙烯酸(36mg,133μmol)，HATU(55mg,145μmol)和异丙基二乙基胺(47mg,362μmol)加入DCM(3mL)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(55mg,收率73％)。
MS m/z(ESI):622[M+H]+
第二步：4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸(47)的制备
将4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(55mg,88μmol)加入三氟乙酸(2mL)和DCM(4mL)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-环己基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸(28mg,产率56％)。
MS m/z(ESI):566[M+H]+
实施例48：4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000113
第一步：4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(48-1)的制备
将4-((2S,4R)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(46-3,100mg,273μmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(81mg,300μmol)，HATU(125mg,327μmol)和异丙基二乙基胺(106mg,817μmol)加入DCM(5mL)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(110mg,收率65％)。
MS m/z(ESI):616[M+H]+
第二步：4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸(48)的制备
将4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯(48-1,110mg,179μmol)加入三氟乙酸(2mL)和DCM(4mL)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((2S,4R)-1-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(4H-1,2,3-四氮唑-4-基)苯基)丙烯酰)-4-苯基吡咯烷-2-甲酰氨基)苯甲酸(71mg,产率71％)。
MS m/z(ESI):560[M+H]+
实施例49：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000114
第一步：(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(49-2)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(49-1,934mg，2.5mmol)，13-6(486mg，2.5mmol)，HATU(1.16g，3mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)中，加入DIPEA(1.3mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯1.29g，产率94％。
第二步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(49-3)的制备
(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(49-2,548mg)溶解于二氯甲烷(6mL)，加入二甲胺(3mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到黄色油状物(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(49-3,290mg)。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(58)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7,270mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(49-3,290mg)，HATU(380mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到淡黄色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(58)510mg。
第四步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(49)的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(58,135mg)溶解于二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(1.5mL)，室温搅拌2小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(49,60mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ12.63(brs，1H)，10.70(s,1H),9.86(s,1H),9.22(d,1H,J＝7.6Hz),7.93(t,1H,J＝8.2Hz),7.87(d,2H,J＝8.8Hz),7.68(d,2H,J＝8.8Hz),7.63(dd,1H,J＝1.2，8.8Hz),7.50(d,2H,J＝7.2Hz),7.40(t,2H,J＝7.4Hz),7.35-7.32(m,1H),6.90(dd,2H,J＝16.2,67.4Hz),5.71(d,1H,J＝7.6Hz)。
MS m/z(ESI):521[M+H]+
实施例50：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000115
第一步：(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(50-1)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(49-1,798mg，2.1mmol)，16-1(414mg，2.0mmol)溶解于吡啶(10mL)中，冰浴下滴加三氯氧磷(0.25mL)，室温搅拌1.5小时，加1N稀盐酸淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(50-1)1.04g。
第二步：(S)-4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(50-2)的制备
(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(50-1,1.04g)溶解于二氯甲烷(21mL)，加入二甲胺(7mL)，室温搅拌4小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到黄色油状物(S)-4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(50-2,593mg)。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基) 苯甲酸叔丁酯(50-3)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7,112mg)，(S)-4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)(50-2)溶解于吡啶(3mL)中，冰浴下滴加三氯氧磷(0.048mL)，室温搅拌4小时，加1N稀盐酸淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到淡黄色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(50-3)125mg。
第四步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(50)的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(50-3,125mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温搅拌1.5小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(50,57mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz):12.63(brs，1H)，9.86(s,1H),9.12(d,1H,J＝7.6Hz),7.93(t,1H,J＝8.2Hz),7.87(d,2H,J＝8.8Hz),7.68(d,2H,J＝8.8Hz),7.63(dd,1H,J＝1.2，8.8Hz),7.50(d,2H,J＝7.2Hz),7.40(t,2H,J＝7.4Hz),7.35-7.32(m，1H),6.90(dd,2H,J＝16.2,67.4Hz),5.71(d,1H,J＝7.6Hz)，3.40(s,3H)。
MS m/z(ESI):535[M+H]+
实施例51：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000116
第一步：(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51-2)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(49-1,374mg，1mmol)，N-甲氨基苯甲酸甲酯(51-1，175mg，1.06mmol)溶于乙酸乙酯(7mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.71mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51-2)406mg，产率78％。
第二步：(S)-4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51-3)的制备
(S)-4-(2-(((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51-2,406mg)溶解于二氯甲烷(9mL)，加入二甲胺(5mL)，室温搅拌2.5小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到白色蜡状物(S)-4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51-3,230mg)。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(1-7,119mg)，(S)-4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51-3,98mg)，HATU(172mg)溶解于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.185mL)，室 温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(51)121mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.85(s,1H),9.07(d,1H,J＝7.6Hz),7.96(d,2H,J＝8.0Hz),7.92(t,1H,J＝8.2Hz),7.63(dd,1H,J＝1.2，8.8Hz),7.33-7.29(m,5H),7.01(brs,2H),6.84(dd,2H,J＝16,50Hz),5.54(s,1H)，3.87(s,3H)，3.20(s,3H)。
MS m/z(ESI):549[M+H]+
实施例52：(S,E)-3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)-N-(2-(甲基(苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)丙烯酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000117
第一步：(9H-芴-9-基)甲基(S)-(2-(甲基(苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸酯(52-2)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(560mg，1.5mmol)，N-甲基苯胺(201mg，1.9mmol)，DCC(380mg，1.8mmol)，DMAP(22mg，0.18mmol)溶于二氯甲烷/DMF(12mL/1mL)中，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，过滤，二氯甲烷萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(9H-芴-9-基)甲基(S)-(2-(甲基(苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸酯500mg，产率72％。
第二步：(S)-2-氨基-N-甲基-N,2-二苯基乙酰胺(52-3)的制备
(9H-芴-9-基)甲基(S)-(2-(甲基(苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸酯(240mg)溶解于二氯甲烷(9mL)，加入二甲胺(5mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到白色固体(S)-2-氨基-N-甲基-N,2-di苯基乙酰胺(130mg)。
第三步：(S,E)-3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)-N-(2-(甲基(苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)丙烯酰胺(52)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(180mg)，(S)-4-(2-氨基-N-甲基-N,2-二苯基乙酰胺(130mg)，HATU(285mg)溶解于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.3mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到淡黄色固体(S,E)-3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)-N-(2-(甲基(苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)丙烯酰胺163mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ9.85(s,1H),9.04(d,1H,J＝7.2Hz),7.92(t,1H,J＝8.2Hz),7.62(dd,1H,J＝1.4，8.6Hz),7.41-7.38(m,3H),7.28-7.26(m,3H),7.14-7.12(m,2H),6.96-6.93(m,2H),6.84(dd,2H,J＝16.2,62.6Hz),5.51(d,1H，J＝7.6Hz)，3.16(s,3H)。
MS m/z(ESI):491[M+H]+
实施例53：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000118
第一步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(53-1)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(378mg，1mmol)，4-氨基苯甲酸甲酯(151mg，1mmol)，HATU(453mg，1.2mmol) 溶于DMF(5mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，过滤收集得到淡黄色固体(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯500mg，直接用于下步反应。
第二步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(53-2)的制备
甲基(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(500mg)溶解于二氯甲烷(14mL)，加入二甲胺(6mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(189mg)。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(53)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(93mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯(81mg)，HATU(129mg)溶解于DMF(2.5mL)中，加入DIPEA(0.14mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到淡黄色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸甲酯136mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.77(s，1H)，9.86(s,1H),9.23(d,1H,J＝7.6Hz),7.93(t,1H,J＝8.4Hz),7.91(dd,2H,J＝1.8，7.0Hz),7.72(dd,2H,J＝2.0，7.2Hz),7.63(dd,1H,J＝1.2，8.8Hz),7.51(d,2H,J＝8.4Hz),7.41(t,2H,J＝7.4Hz),7.36-7.32(m,1H),6.91(dd,2H,J＝16.2,67.8Hz),5.71(d,1H，J＝7.6Hz)，3.81(s,3H)。
MS m/z(ESI):535[M+H]+
实施例54：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(甲磺酰基)苯甲酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000119
第一步：N-(甲磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(54-3)的制备
将对硝基苯甲酸(2g,11.97mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(3.67g,14.36mmol)，DMAP(73mg,598μmol)，和三乙胺(5mL,35.90mmol)加入DCM(40mL)中搅拌均匀，然后加入甲磺酰胺(2.28g,23.93mmol)，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入50mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品N-(甲磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(1.092g,收率37％)。
MS m/z(ESI):243[M-H]-
第二步：N-(甲磺酰基)-4-氨基苯甲酰胺(54-4)的制备
将N-(甲磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(1.092g,4.47mmol)加入甲醇(100mL)中，再加入Pd-C(500mg)，反应体系抽换氢气三次，在氢气氛围下反应过夜，LCMS检测反应完全。过滤，滤液浓缩，得纯品N-(甲磺酰基)-4-氨基苯甲酰胺(904mg,收率94％)。
MS m/z(ESI):215[M+H]+
第三步：(S)-(2-((4-((甲磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(54-5)的制备
Boc-苯甘氨酸(251mg，1mmol)，4-氨基-N-(甲磺酰基)苯甲酰胺(214mg，1mmol)，HATU(456mg，1.2mmol)溶于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(S)-(2-((4-((甲磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯440mg。
第四步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(甲磺酰基)苯甲酰胺(54-6)的制备
(S)-(2-((4-((甲磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(400mg)溶解于甲醇(1.5mL)，加入盐酸甲醇溶液(5mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩，加2mol/L氢氧化钠水溶液溶解，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(甲磺酰基)苯甲酰胺(300mg)。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(甲磺酰基)苯甲酰胺(54)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(30mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(甲磺酰基)苯甲酰胺(30mg)，HATU(40mg)溶解于DMF(2mL)中，加入DIPEA(0.055mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(甲磺酰基)苯甲酰胺13mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.75(s，1H)，9.83(s,1H),9.22(d,1H,J＝7.6Hz),7.95(t,1H,J＝8.5Hz),7.90(dd,2H,J＝1.8，7.1Hz),7.77(dd,2H,J＝2.0，7.2Hz),7.60(dd,1H,J＝1.18，8.6Hz),7.55(d,2H,J＝8.4Hz),7.41(t,2H,J＝7.6Hz),7.38-7.29(m,1H),6.89(dd,2H,J＝16.2,67.8Hz),5.71(d,1H，J＝8.2Hz)，4.11(s,3H)。
MS m/z(ESI):598[M+H]+
实施例55：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000120
第一步：N-(苯磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(55-1)的制备
将对硝基苯甲酸(1g,5.98mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(1.834g,7.18mmol)，DMAP(37mg,299μmol)，和三乙胺(2.5mL,17.95mmol)加入DCM(20mL)中搅拌均匀，然后加入苯磺酰胺(1.88g,11.97mmol)，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品N-(苯磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(1.5g,收率82％)。
MS m/z(ESI):305[M-H]-
第二步：N-(苯磺酰基)-4-氨基苯甲酰胺(55-2)的制备
将N-(苯磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(1.5g,4.90mmol)加入甲醇(100mL)中，再加入Pd-C(750mg)，反应体系抽换氢气三次，在氢气氛围下反应过夜，LCMS检测反应完全。过滤，滤液浓缩，得纯品4-氨基-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺(1.3g,收率96％)。
MS m/z(ESI):277[M+H]+
第三步：(S)-(2-氧代-1-苯基-2-((4-((苯磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯 (55-3)的制备
Boc-苯甘氨酸(251mg，1mmol)，4-氨基-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺(276mg，1mmol)，HATU(456mg，1.2mmol)溶于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(S)-(2-氧代-1-苯基-2-((4-((苯磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯432mg。
第四步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺(55-4)的制备
(S)-(2-氧代-1-苯基-2-((4-((苯磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(255mg)溶解于甲醇(1mL)，加入盐酸甲醇溶液(5mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩，残留物用乙醇/乙醚＝1/10打浆得到白色固体(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺(180mg)。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺(55)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(115mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺(180mg)，HATU(190mg)溶解于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经乙酸乙酯/石油醚＝1/4打浆得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(苯磺酰基)苯甲酰胺265mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.55(s,1H),9.87(s,1H),9.23(d,1H,J＝7.6Hz),7.93(t,1H,J＝8.2Hz),7.83-7.79(m,4H),7.62(dd,1H,J＝1.2,8.8Hz),7.53-7.50(m,4H),7.40-7.36(m,5H),7.33-7.29(m,1H),6.91(dd,2H,J＝16,80Hz),5.72(d,1H,J＝8.0Hz)。
MS m/z(ESI):660[M+H]+
实施例56：(S,E)-N-(2-((4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000121
第一步：(S)-(2-((4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(56-2)的制备
Boc-苯甘氨酸(251mg，1mmol)，4-(2H-四氮唑-5-基)苯胺(161mg，1mmol)，HATU(456mg，1.2mmol)溶于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩，残留物以二氯甲烷/乙醚(1/4)打浆得白色固体(S)-(2-((4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯410mg。
第二步：(S)-N-(4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)-2-氨基-2-苯基乙酰胺盐酸盐(56-3)的制备
(S)-(2-((4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(240mg)溶解于四氢呋喃(5mL)，加入盐酸甲醇溶液(8mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩得到白色固体(S)-N-(4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)-2-氨基-2-苯基乙酰胺盐酸盐(157mg)。
第三步：(S,E)-N-(2-((4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰胺(56)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(165mg)，(S)-N-(4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)-2-氨基-2-苯基乙酰胺盐酸盐(157mg)，HATU(304mg)溶解于DMF(5mL)中，加入DIPEA(1mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，溶解于甲醇(2mL)中，加入乙醚(20mL)，析出的固体过滤收集，得到白色固体(S,E)-N-(2-((4-(2H-四氮唑-5-基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰胺66mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.51(s，1H)，9.87(s,1H),9.24(d,1H,J＝8.0Hz),7.93(t,1H,J＝8.6 Hz),7.90(dd,2H,J＝2.0，6.8Hz),7.63(dd,2H,J＝1.8，7.0Hz),7.61(d,1H,J＝6.8Hz),7.52(d,2H,J＝7.2Hz),7.41(t,2H,J＝7.4Hz),7.34-7.30(m，1H)，6.93(dd,2H,J＝15.8,79.8Hz),5.75(d,1H，J＝7.6Hz)。
MS m/z(ESI):545[M+H]+
实施例57：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000122
第一步：(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(57-1)乙酯
Boc-苯甘氨酸(278mg，1.5mmol)，4-氨基苯甲酸乙酯(250mg，1.5mmol)，HATU(690mg，1.8mmol)溶于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.78mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，析出的淡黄色固体过滤收集得到(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯556mg，产率93％。
第二步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯盐酸盐(57-2)的制备
(S)-4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯(166mg)溶解于甲醇(1mL)，加入盐酸甲醇溶液(4mol/L，5mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩得到黄色固体(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯盐酸盐(147mg)。
第三步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯(57)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(130mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯盐酸盐(147mg)，HATU(230mg)溶解于DMF(5mL)中，加入DIPEA(0.7mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经制备薄层色谱纯化得到淡黄色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸乙酯145mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.73(s，1H)，9.86(s,1H),9.23(d,1H,J＝7.6Hz),7.93(t,1H,J＝8.0Hz),7.91(d,2H,J＝8.8Hz),7.71(d,2H,J＝9.2Hz),7.63(dd,1H,J＝1.2，8.8Hz),7.51(d,2H,J＝8.8Hz),7.40(t,2H,J＝7.4Hz),7.36-7.32(m,1H),6.90(dd,2H,J＝16,66.4Hz),5.70(d,1H，J＝7.6Hz)，4.27(q，2H，J＝7.2Hz)，1.30(t,3H，J＝7.0Hz)。
MS m/z(ESI):549[M+H]+
实施例58：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000123
按照实施例49的第三步反应制备标题化合物。
MS m/z(ESI):577[M+H]+
实施例59：1-((乙氧羰基)氧基)乙基4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸酯
Figure PCTCN2020141466-appb-000124
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(49，27.5mg,53μmol)，碳酸钾(22mg,158μmol)和碘化钾(9mg,53μmol)加入DMF(1mL)中，抽换氮气，氮气氛围下加入1-氯乙基碳酸乙酯(12mg,79μmol)，搅拌均匀，60℃反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，制备薄层色谱纯化得纯品1-((乙氧羰基)氧基)乙基4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸酯(24mg,收率71％)。
MS m/z(ESI):503[M-133]+
实施例60：(S,E)-2-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000125
第一步：2-氯-4-硝基苯甲酸叔丁酯(60-2)的制备
将2-氯-4-硝基苯甲酰氯(1.11g，5mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，冰浴冷却下，滴加叔丁醇锂四氢呋喃溶液(2.2mol/L，3.4mL)，室温搅拌过夜。反应液浓缩，加入饱和碳酸氢钠水溶液，乙酸乙酯萃取，有机层分出干燥过滤浓缩得黄色固体2-氯-4-硝基苯甲酸叔丁酯1.012g(产率78％)。
第二步：4-氨基-2-氯苯甲酸叔丁酯(60-3)的制备
2-氯-4-硝基苯甲酸叔丁酯(1.01g)溶解于甲醇(20mL)中，加入还原铁粉(1.21g)，冰乙酸(6.2mL)，回流三小时，过滤，滤液浓缩，残留物经柱色谱纯化得白色固体4-氨基-2-氯苯甲酸叔丁酯871mg。
第三步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(60-4)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(374mg，1mmol)，4-氨基-2-氯苯甲酸叔丁酯(228mg，1mmol)，HATU(461mg，1.2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层分出干燥过滤，残留物经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氯苯甲酸叔丁酯440mg，产率75.5％。
第四步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(60-5)的制备
(S)-4-(2-(((9H-芴基甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(250mg)溶解于二氯甲烷(6mL)，加入二甲胺(3mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到黄色油状物(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(129mg)。
第五步：(S,E)-2-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(60-6)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(115mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(129mg)溶解于乙酸乙酯/DMF(3mL/1mL)中，加入DIPEA(0.4mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.425mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-2-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯159mg。
第六步：(S,E)-2-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(60)的制备
(S,E)-2-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(159mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(4mL)，室温搅拌2小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-2-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(100mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ13.10(brs，1H)，10.79(s,1H),9.86(s,1H),9.24(d,1H,J＝7.2Hz),7.93(t,1H,J＝8.2Hz),7.86(d,1H,J＝2.0Hz),7.80(d,1H,J＝8.4Hz),7.63(dd,1H,J＝1.0，8.6Hz),7.52(dd,1H,J＝2.0，8.8Hz),7.49(d,2H,J＝7.2Hz),7.40(t,2H,J＝7.4Hz),7.36-7.33(m,1H),6.90(dd,2H,J＝16.2,61Hz),5.66(d,1H,J＝7.2Hz)。
MS m/z(ESI):555[M+H]+
实施例61：(S,E)-3-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000126
第一步：4-氨基-3-氯苯甲酸叔丁酯(61-1)的制备
将4-氨基苯甲酸叔丁酯(966mg，5mmol)溶于异丙醇/乙腈(12mL/12mL)中，加热至60℃，加入NCS(732mg，5.5mmol/L)，升温至80℃搅拌一小时。反应液冷却浓缩，残留物加入二氯甲烷溶解，用1mol/L氢氧化钠水溶液与饱和食盐水各洗一次，有机层分出干燥过滤浓缩得褐色固体4-氨基-3-氯苯甲酸叔丁酯1.1g。
第二步：(S,E)-3-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(61-2)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(374mg，1mmol)，4-氨基-3-氯苯甲酸叔丁酯(230mg，1mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，1.2mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到米黄色固体(S,E)-3-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯553mg，产率95％。
第三步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-3-氯苯甲酸叔丁酯(61-3)的制备
(S)-4-(2-(((9H-芴基甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氯苯甲酸叔丁酯(250mg)溶解于二氯甲烷(6mL)，加入二甲胺(3mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到黄色油状物(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-3-氯苯甲酸叔丁酯(111mg)。
第四步：(S,E)-3-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(61-4)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(100mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氯苯甲酸叔丁酯(111mg)溶解于乙酸乙酯/DMF(3mL/1mL)中，加入DIPEA(0.4mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.365mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-3-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯130mg。
第五步：(S,E)-3-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(61)的制备
(S,E)-3-氯-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(130mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌2小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯甲酸(79mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ13.18(brs，1H)，10.09(s,1H),9.86(s,1H),9.22(d,1H,J＝7.6Hz),7.93(t,1H,J＝8.2Hz),7.92(d,1H,J＝1.2Hz),7.89-7.86(m,2H),7.63(dd,1H,J＝1.4，8.6Hz),7.54(d,2H,J＝7.2Hz),7.40(t,2H,J＝7.4Hz),7.36-7.33(m,1H),6.92(dd,2H,J＝16,60.4Hz),5.95(d,1H,J＝7.6Hz)。
MS m/z(ESI):555[M+H]+
实施例62：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟 苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000127
第一步：2-氟-4-硝基苯甲酰氯(62-2)的制备
将2-氟-4-硝基苯甲酸(920mg)溶于三氯氧磷(10mL)中，回流1.5小时。反应液冷却浓缩得灰色油状物2-氟-4-硝基苯甲酰氯粗品，直接用于下步反应。
第二步：2-氟-4-硝基苯甲酸叔丁酯(62-3)的制备
于叔丁醇(10mL)中加入正丁基锂正己烷溶液(2.5mol/L，2.3mL)，室温下搅拌20分钟。将2-氟-4-硝基苯甲酰氯粗品溶解于四氢呋喃(4mL)，滴加入反应液中，室温搅拌过夜。反应液浓缩，加入水，乙酸乙酯萃取，有机层分出干燥过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得白色固体2-氟-4-硝基苯甲酸叔丁酯(435mg)。
第三步：4-氨基-2-氟苯甲酸叔丁酯(62-4)的制备
2-氟-4-硝基苯甲酸叔丁酯(435mg)溶解于乙醇(8mL)中，加入10％Pd/C(120mg)，甲酸铵(760mg)，室温搅拌2小时，过滤，滤液浓缩，残留物中加入水，二氯甲烷萃取，有机层分出干燥过滤浓缩得白色固体4-氨基-2-氟苯甲酸叔丁酯367mg。
第四步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(62-5)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(380mg，1mmol)，4-氨基-3-氯苯甲酸叔丁酯(213mg，1mmol)HATU(466mg，1.2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层分出干燥过滤，残留物经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯456mg，产率81％。
第五步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(62-6)的制备
(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(226mg)溶解于二氯甲烷(6mL)，加入二甲胺(3mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到黄色油状物(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(100mg)。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(62-7)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(94mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(100mg)溶解于乙酸乙酯(5mL)中，加入DIPEA(0.2mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.34mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯95mg。
第七步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸(62)的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(95mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌3小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸(48mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ12.90(brs,1H),10.87(s,1H),9.86(s,1H),9.24(d,1H,J＝7.2Hz),7.94(t,1H,J＝8.2Hz),7.83(t,1H,J＝8.4Hz),7.66-7.63(m,2H),7.49(d,2H,J＝7.2Hz),7.41(t,2H,J＝7.4Hz),7.37-7.32(m,2H),6.90(dd,2H,J＝16.2,60.6Hz),5.67(d,1H,J＝7.2Hz)。
MS m/z(ESI):539[M+H]+
实施例63：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000128
第一步：3-氟-4-硝基苯甲酰氯(63-2)的制备
将3-氟-4-硝基苯甲酸(920mg)溶于三氯氧磷(10mL)中，回流1.5小时。反应液冷却浓缩得灰色油状物2-氟-4-硝基苯甲酰氯粗品，直接用于下步反应。
第二步：3-氟-4-硝基苯甲酸叔丁酯(63-3)的制备
于叔丁醇(10mL)中加入正丁基锂正己烷溶液(2.5mol/L，2.3mL)，室温下搅拌20分钟。将2-氟-4-硝基苯甲酰氯粗品溶解于四氢呋喃(4mL)，滴加入反应液中，室温搅拌过夜。反应液浓缩，加入水，乙酸乙酯萃取，有机层分出干燥过滤浓缩，残留物经柱色谱纯化得白色固体3-氟-4-硝基苯甲酸叔丁酯(450mg)。
第三步：4-氨基-3-氟苯甲酸叔丁酯(63-4)的制备
3-氟-4-硝基苯甲酸叔丁酯(450mg)溶解于乙醇(8mL)中，加入10％Pd/C(120mg)，甲酸铵(760mg)，室温搅拌2小时，过滤，滤液浓缩，残留物中加入水，二氯甲烷萃取，有机层分出干燥过滤浓缩得白色固体4-氨基-2-氟苯甲酸叔丁酯380mg。
第四步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(63-5)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(373mg，1mmol)，4-氨基-3-氟苯甲酸叔丁酯(211mg，1mmol)，HATU(461mg，1.2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层分出干燥过滤，残留物经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯456mg。
第五步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(63-6)的制备
(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(230mg)溶解于二氯甲烷(6mL)，加入二甲胺(3mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到黄色油状物(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(100mg)。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(63-7)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(97mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(100mg)溶解于乙酸乙酯(5mL)中，加入DIPEA(0.2mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.34mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩后经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯105mg。
第七步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯 甲酸(63)的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸叔丁酯(105mg)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌3小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-3-氟苯甲酸(45mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ13.11(brs,1H),10.46(s,1H),9.86(s,1H),9.19(d,1H,J＝7.6Hz),8.07(t,1H,J＝8.0Hz),7.93(t,1H,J＝8.2Hz),7.72(d,1H,J＝8.4Hz),7.68(dd,1H,J＝1.2,11.8Hz),7.63(dd,1H,J＝1.2,8.8Hz),7.51(d,2H,J＝6.8Hz),7.40(t,2H,J＝7.4Hz),7.36-7.32(m,1H),6.90(dd,2H,J＝16,64.8Hz),5.94(d,1H,J＝7.2Hz)。
MS m/z(ESI):539[M+H]+
实施例64：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000129
第一步：2-甲氧基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(64-2)的制备
将2-甲氧基-4-硝基苯甲酸(500mg，2.54mmol)溶于甲苯(15mL)中，加热至80℃，加入N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(1.2mL)，80℃搅拌3小时。补加N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(1.2mL)，80℃搅拌过夜。反应液冷却，用饱和碳酸氢钠水溶液洗一次，有机层分出干燥过滤浓缩得褐色油状物体2-甲氧基-4-硝基苯甲酸叔丁酯400mg。
第二步：4-氨基-2-甲氧基苯甲酸叔丁酯(64-3)的制备
2-甲氧基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(400mg)溶解于乙醇(10mL)中，加入10％Pd/C(130mg)，甲酸铵(650mg)，室温搅拌3小时，过滤，滤液浓缩，残留物中加入水，二氯甲烷萃取，有机层分出干燥过滤浓缩得白色固体4-氨基-2-甲氧基苯甲酸叔丁酯336mg。
第三步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(64-4)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(377mg，1mmol)，4-氨基-2-甲氧基苯甲酸叔丁酯(224mg，1mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，1.2mL)，55℃搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机层分出干燥过滤，残留物经柱色谱纯化得到黄色固体(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯516mg。
第四步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸叔丁酯(64-5)的制备
(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-甲氧基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(258mg)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入二甲胺(3mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩经柱色谱纯化得到黄色油状物(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸叔丁酯(139mg)。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧 基苯甲酸叔丁酯(64-6)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(125mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-2-氟苯甲酸叔丁酯(139mg)，HATU(150mg)溶于DMF(3mL)中，加入DIPEA(0.2mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，析出的固体经过滤收集，柱色谱纯化得到淡黄色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸叔丁酯212mg。
第六步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸(64)的制备
(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸叔丁酯150mg)溶解于二氯甲烷/四氢呋喃(4mL/1mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌2小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸(105mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ12.23(brs,1H),10.66(s,1H),9.86(s,1H),9.22(d,1H,J＝7.2Hz),7.94(t,1H,J＝8.2Hz),7.66(d,1H,J＝8.4Hz),7.64(dd,1H,J＝1.2，8.8Hz),7.5(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸.46(m,3H),7.41(t,2H,J＝7.2Hz),7.37-7.32(m,1H),7.19(dd,1H,J＝1.8,8.6Hz)，6.91(dd,2H,J＝16.2,64.2Hz),5.68(d,1H,J＝7.6Hz)，3.78(s，3H)。
MS m/z(ESI):533[M-18]+
实施例65：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000130
第一步：2-氨基-2-(3-硝基苯基)乙酸(65-2)的制备
L-苯甘氨酸(20g,132mmol)在0℃下加入发烟硝酸(20mL)和浓硫酸(20mL)的混合溶剂里，搅拌反应1小时，然后室温下反应30分钟。将反应液倒入冰水(400mL)中，加入4M氨水调PH至6，水中析出淡黄色固体，过滤，滤饼依次用少量冰水、甲醇洗涤，滤饼干燥得产物2-氨基-2-(3-硝基苯基)乙酸(10g,产率39％)。
第二步：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-硝基苯基)乙酸(65-3)的制备
2-氨基-2-(3-硝基苯基)乙酸(10g,51mmol)加入1,4-二氧六环(200mL)和水(100mL)中，0℃下搅拌5分钟，加入碳酸钠(18.91g,178mmol)的水溶液(100mL)，搅拌均匀。将Fmoc-OSu溶于1,4-二氧六环(100mL)中，滴加入反应体系，室温反应16小时。LCMS检测反应完全。旋掉1,4-二氧六环，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-硝基苯基)乙酸(18g,收率84％)。
MS m/z(ESI):419[M+H]+
第三步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-硝基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯 (65-4)的制备
将(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-硝基苯基)乙酸(5g,11.95mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(2.42g,12.55mmol)，HATU(5.45g,14.34mmol)和二异丙基乙胺(3.95mL,23.9mmol)加入DCM(100mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-硝基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(6g,收率85％)。
MS m/z(ESI):370[M-Fmoc-H]-
第四步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-氨基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(65-5)的制备
将(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-硝基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(500mg,842μmol)加入甲醇(50mL)中，加入Raney Ni(250mg)，氢气氛围下反应2小时，过滤掉Raney Ni，滤液旋干得(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-氨基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(350mg,收率72％)。
MS m/z(ESI):564[M+H]+
第五步：(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(65-6)的制备
将(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-氨基苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(350mg,621μmol)，二甲氨基乙酸(77mg,745μmol)，HATU(354mg,931μmol)和二异丙基乙胺(256μl,1.55mmol)加入DCM(20mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，得粗品(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(400mg,收率99％)，直接投下一步。
MS m/z(ESI):649[M+H]+
第六步：(S)-4-(2-氨基-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(65-7)的制备
将(S)-4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(400mg,617μmol)加入二乙基胺(10mL)和DCM(20mL)的混合溶剂中，搅拌反应2小时，旋干溶剂，柱层析纯化得(S)-4-(2-氨基-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(222mg,收率84％)。
MS m/z(ESI):427[M+H]+
第七步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(65-8)的制备
将(S)-4-(2-氨基-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(74mg,174μmol)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(51mg,191μmol)，HATU(79mg,208μmol)和二异丙基乙胺(86μl,521μmol)加入DCM(5mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(87mg,收率74％)。
MS m/z(ESI):677[M+H]+
第八步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(65)的制备
将(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(87mg,128μmol)加入DCM(8mL)中，加入三氟乙酸(4mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得纯品(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(40mg,收率50％)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.76(s,1H),10.63(s,1H),9.86(d,1H，J＝1.2Hz),9.79(brs,1H), 9.24(d,1H,J＝7.2Hz),7.94(t,1H,J＝8.2Hz),7.90(d,2H,J＝8.8Hz),7.72-7.63(m,3H),7.59(t,1H,J＝6.8Hz),7.48(d,1H,J＝8.4Hz),7.40(t,1H,J＝8.0Hz),7.25(d,1H，J＝7.6Hz),6.91(dd,2H,J＝16,67.6Hz),5.72(d,1H，J＝7.6Hz),4.11(s，2H)，2.87(s,6H)。
MS m/z(ESI):621[M+H]+
实施例66：(S)-4-(2-(4-(氨基甲基)苯甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000131
第一步：(S)-4-(2-(4-(氨基甲基)苯甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(66-1)的制备
将(S)-4-(2-氨基-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(74mg,174μmol)，4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯甲酸(48mg,191μmol)，HATU(79mg,208μmol)和二异丙基乙胺(86μl,521μmol)加入DCM(5mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(4-(氨基甲基)苯甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72mg,收率63％)。
MS m/z(ESI):660[M+H]+
第二步：(S)-4-(2-(4-(氨基甲基)苯甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(66)的制备
将(S)-4-(2-(4-(氨基甲基)苯甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72mg,109μmol)加入DCM(8mL)中，加入三氟乙酸(4mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得纯品(S)-4-(2-(4-(氨基甲基)苯甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(30mg,收率55％)。
MS m/z(ESI):504[M+H]+
实施例67：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000132
第一步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(67-1)的制备
将(S)-4-(2-氨基-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(74mg,174μmol)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-甲酸(49mg,191μmol)，HATU(79mg,208μmol)和二异丙基乙胺(86μl,521μmol)加入DCM(5mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(102mg,收率88％)。
MS m/z(ESI):666[M+H]+
第二步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(67)的制备
将4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(102mg,153μmol)加入DCM(8mL)中，加入三氟乙酸(4mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得纯品4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)乙酰氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(40mg,收率51％)。
MS m/z(ESI):510[M+H]+
实施例68：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(环丙基磺酰基)苯甲酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000133
第一步：N-(环丙基磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(68-2)的制备
将对硝基苯甲酸(2g,11.97mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(3.67g,14.36mmol)，DMAP(73mg,598μmol)，和三乙胺(5mL,35.90mmol)加入DCM(40mL)中搅拌均匀，然后加入环丙基磺酰胺(2.28g,23.93mmol)，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入50mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品N-(环丙基磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(1.092g,收率37％)。
第二步：N-(环丙基磺酰基)-4-氨基苯甲酰胺(68-3)的制备
将N-(环丙基磺酰基)-4-硝基苯甲酰胺(1.092g,4.47mmol)加入甲醇(100mL)中，再加入Pd-C(500mg)，反应体系抽换氢气三次，在氢气氛围下反应过夜，LCMS检测反应完全。过滤，滤液浓缩，得纯品N-(环丙基磺酰基)-4-氨基苯甲酰胺(904mg,收率94％)。
第三步：(S)-(2-((4-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(68-4)的制备
Boc-苯甘氨酸(251mg，1mmol)，4-氨基-N-(环丙基磺酰基)苯甲酰胺(214mg，1mmol)，HATU(456mg，1.2mmol)溶于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(S)-(2-((4-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯440mg。
第四步：(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(环丙基磺酰基)苯甲酰胺(68-5)的制备
(S)-(2-((4-((环丙基磺酰基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(400mg)溶解于甲醇(1.5mL)，加入盐酸甲醇溶液(5mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩，加2mol/L氢氧化钠水溶液溶解，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得到白色固体(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(环丙基磺酰基)苯甲酰胺(300mg)。
第五步：(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(环丙基磺酰基)苯甲酰胺(68)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(30mg)，(S)-4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)-N-(环丙基磺酰基)苯甲酰胺(30mg)，HATU(40mg)溶解于DMF(2mL)中，加入DIPEA(0.055mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)-N-(环丙基磺酰基)苯甲酰胺13mg。
MS m/z(ESI):624[M+H]+
实施例69：(S,E)-N-(2-((4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000134
第一步：(S)-(2-((4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(69-2)的制备
Boc-苯甘氨酸(503mg，2mmol)，磺胺醋酰(430mg，2mmol)，HATU(912mg，2.4mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入DIPEA(1mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得白色固体(S)-(2-((4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯847mg。
第二步：(S)-N-(4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)-2-氨基-2-苯基乙酰胺(69-3)的制备
(S)-(2-((4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(180mg)溶解于甲醇(1mL)，加入盐酸甲醇溶液(4mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩得到白色固体(S)-N-(4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)-2-氨基-2-苯基乙酰胺(197mg)。
第三步：(S,E)-N-(2-((4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺(69)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(100mg)，(S)-N-(4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)-2-氨基-2-苯基乙酰胺(197mg)，HATU(155mg)溶解于DMF(2mL)中，加入DIPEA(0.2mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-N-(2-((4-(N-乙酰基氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰胺53mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ11.95(s,1H),10.82(s,1H),9.86(s,1H),9.23(d,1H,J＝7.6Hz),7.93(t,1H,J＝8.2Hz),7.82(d,2H,J＝9.2Hz),7.76(d,2H,J＝8.8Hz),7.63(dd,1H,J＝1.2,8.8Hz),7.49(d,2H,J＝6.8Hz),7.40(t,2H,J＝7.0Hz),7.36-7.30(m,1H),6.90(dd,2H,J＝16,64.4Hz),5.69(d,1H,J＝7.6Hz),1.87(s,3H)。
MS m/z(ESI):598[M+H]+
实施例70：(S,E)-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯基)氨基甲酸甲酯的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000135
第一步：4-叔丁氧羰基氨基苯基氨基甲酸甲酯(70-2)的制备
(4-氨基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.04g)，三乙胺(2.1mL)溶于二氯甲烷(20mL)中，冰浴冷却下，加入氯甲酸甲酯(0.426mL)，室温搅拌过夜。加水淬灭，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩得褐色固体4-叔丁氧羰基氨基苯基氨基甲酸甲酯(1.11g)。
第二步：(4-氨基苯基)氨基甲酸甲酯(70-3)的制备
4-叔丁氧羰基氨基苯基氨基甲酸甲酯(1.11g)溶解于二氯甲烷(30mL)中，加入三氟乙酸(15mL)，室温搅拌2小时。反应液浓缩，残留物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，有机层干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得黄色油状物，放置固化为黄色固体(4-氨基苯基)氨基甲酸甲酯(347mg)。
第三步：(9H-芴-9-基)甲基(S)-(2-((4-((甲氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸酯(70-4)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(423mg)，(4-氨基苯基)氨基甲酸甲酯(186mg)，HATU(510mg)溶于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.55mL)，室温搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，析出的固体经过滤收集，乙醇打浆得白色固体(9H-芴-9-基)甲基(S)-(2-((4-((甲氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸酯(508mg)。
第四步：(S)-(4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯基)氨基甲酸甲酯(70-5)的制备
(9H-芴-9-基)甲基(S)-(2-((4-((甲氧基羰基)氨基)苯基)氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸酯(264mg)溶解于二氯甲烷/四氢呋喃(10mL/10mL)中，加入二乙基胺(5mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩，残留物经柱层析纯化得淡黄色固体(S)-(4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯基)氨基甲酸甲酯(158mg)。
第五步：(S,E)-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯基)氨基甲酸甲酯(70)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(150mg)，(S)-(4-(2-氨基-2-苯基乙酰氨基)苯基)氨基甲酸甲酯(158mg)，HATU(230mg)溶解于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.28mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经乙醇/乙酸乙酯(1/1)打浆得到白色固体(S,E)-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-2-苯基乙酰氨基)苯基)氨基甲酸甲酯130mg。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.39(s,1H),9.86(s,1H),9.58(s,1H),9.21(d,1H,J＝7.6Hz),7.95(t,1H,J＝8.0Hz),7.63(dd,1H,J＝1.4，8.6Hz),7.5(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸.47(m,4H),7.39-7.35(m,4H),7.33-7.29(m,1H),6.91(dd,2H,J＝16.0,80.0Hz),5.70(d,1H,J＝8.0Hz)，3.64(s，3H)。
MS m/z(ESI):550[M+H]+
实施例71：(S,E)-2-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000136
第一步：(S)-2-(4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯(71-2)的制备
Fmoc-苯甘氨酸(49-1，374mg，1mmol)，2-(4-(甲基氨基)苯基)乙酸叔丁酯(216mg，1mmol)溶于乙酸乙酯(7mL)中，加入DIPEA(0.5mL)，T3P(50％乙酸乙酯溶液，0.71mL)，55℃下搅拌过夜。于反应液中加入水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相干燥过滤浓缩经柱色谱纯化得淡黄色固体(S)-2-(4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯460mg，产率79％。
第二步：(S)-2-(4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯(71-3)的制备
(S)-2-(4-(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯(460mg)溶解于二氯甲烷(8mL)中，加入二乙基胺(5mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩，残留物经柱层析纯化得淡黄色固体(S)-2-(4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯(278mg)。
第三步：(S,E)-2-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯(71-4)的制备
(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(127mg)，(S)-2-(4-(2-氨基-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯(139mg)，HATU(194mg)溶解于DMF(4mL)中，加入DIPEA(0.19mL)，室温搅拌过夜，加水淬灭反应，析出的固体过滤收集，经柱色谱纯化得到白色固体(S,E)-2-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯209mg。
第四步：(S,E)-2-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸(71)的制备
(S,E)-2-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸叔丁酯(160mg)溶解于二氯甲烷(9mL)中，加入三氟乙酸(4mL)，室温搅拌1.5小时，浓缩后经制备薄层色谱纯化得到白色固体(S,E)-2-(4-(2-(3-(3-氯-2-氟-6-(2H-四氮唑-2-基)苯基)丙烯酰氨基)-N-甲基-2-苯基乙酰氨基)苯基)乙酸(75mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ12.39(brs，1H)，9.85(s,1H),9.04(d,1H,J＝7.6Hz),7.92(t,1H,J＝8.2Hz),7.62(dd,1H,J＝1.0，8.6Hz),7.29-7.26(m,5H),7.05(d,2H,J＝7.2Hz),6.96(d,2H,J＝8.0Hz),6.84(dd,2H,J＝16.2,65.0Hz),5.51(d,1H,J＝7.2Hz),3.61(s，2H),3.15(s，3H)。
MS m/z(ESI):549[M+H]+
实施例72：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000137
第一步：(S)-2-(3-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(72-2)的制备
将3-溴-L-苯基丙氨酸(2.07g,8.49mmol)加入二氯甲烷(60ml)和水(40ml)的混合溶剂中，加入三乙胺(3ml,21.22mmol)，搅拌均匀，然后加入Boc 2O(2.1ml,9.34mmol),反应4小时，LCMS检测反应完全。旋干二氯甲烷，加1M盐酸调PH至5，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，石油醚打浆得纯品(S)-2-(3-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(2.5g,收率86％)。
MS m/z(ESI):345[M+H] +
第二步：(S)-4-(2-(3-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72-3)的制备
将(S)-2-(3-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(2.5g,7.26mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(1.54g,7.99mmol)，HATU(3.31g,8.72mmol)和二异丙基乙胺(2.4ml,14.53mmol)加入二氯甲烷(75ml)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(3-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(3.75g,收率99％)。
MS m/z(ESI):419,421[M-99] +
第三步：(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72-4)的制备
将(S)-4-(2-(3-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(3.75g,7.22mmol)，甲氨盐酸盐(1.22g,18.05mmol)，Pd2(dba)3(661mg,722μmol)，XPhos(688mg,1.44mmol)和Cs2CO3(10.58g,32.49mmol)加入1,4-二氧六环(100ml)中，抽换氮气，110℃下反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(1.067g,收率31％)。
MS m/z(ESI):468[M-1] -
第四步：(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72-5)的制备
将(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(300mg,639μmol)加入甲醇(10ml)中，加入多聚甲醛(38mg,1.28mmol)和氰基硼氢化钠(120mg,1.92mmol)，搅拌2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(203mg,收率66％)。
MS m/z(ESI):484[M+1]+
第五步：(S)-4-(2-氨基-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72-6)的制备
将(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(203mg,420μmol)加入氯化氢乙酸乙酯溶液(10ml)中，反应3小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-氨基-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(67mg,产率42％)。
MS m/z(ESI):384[M+H]+
第六步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(72-7)的制备
将(S)-4-(2-氨基-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(67mg,139μmol)，(1r,4r)-4-(((叔氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-甲酸(39mg,152μmol)，HATU(63mg,166μmol)和异丙基二乙基胺(54mg,416μmol)加入二氯甲烷(3ml)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(55mg,收率64％)。
MS m/z(ESI):623[M+H]+
第七步：4-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(72)的制备
将4-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(55mg,88μmol)加入三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(4ml)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(3-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(40mg,产率97％)。
MS m/z(ESI):467[M+H]+
实施例73：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000138
第一步：(S)-4-(2-(4-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(73-2)的制备
将(S)-2-(4-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(2g,5.81mmol)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(1.24g,6.39mmol)，HATU(2.65g,6.97mmol)和二异丙基乙胺(1.92ml,11.62mmol)加入二氯甲烷(100ml)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(4-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(2.5g,收率83％)。
MS m/z(ESI):419,421[M-99]+
第二步：(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-(甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(73-3)的制备
将(S)-4-(2-(4-溴苯)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(1.64g,3.16mmol)，甲氨盐酸盐(533mg,7.89mmol)，Pd2(dba)3(29mg,32μmol)，XPhos(62mg,126μmol)和Cs2CO3(4.58g,14.05mmol)加入四氢呋喃(20ml)中，抽换氮气，110℃下反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入50ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-(甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(230mg,收率16％)。
MS m/z(ESI):468[M-1]-
第三步：(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(73-4)的制备
将(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-(甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(230mg,490μmol)加入甲醇(10ml)中，加入多聚甲醛(29mg,980μmol)和氰基硼氢化钠(92mg,1.47mmol)，搅拌2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入500ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(143mg, 收率60％)。
MS m/z(ESI):484[M+1]+
第四步：(S)-4-(2-氨基-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(73-5)的制备
将(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(143mg,296μmol)加入氯化氢乙酸乙酯溶液(10ml)中，反应3小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-氨基-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(98mg,产率86％)。
MS m/z(ESI):384[M+H]+
第五步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(73-6)的制备
将(S)-4-(2-氨基-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(98mg,203μmol)，(1r,4r)-4-(((叔氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-甲酸(57mg,223μmol)，HATU(92mg,243μmol)和异丙基二乙基胺(100mg,208μmol)加入二氯甲烷(5ml)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入10ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(101mg,收率80％)。
MS m/z(ESI):623[M+H]+
第六步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(73)的制备
将4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸叔丁酯(101mg,162μmol)加入三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(4ml)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((S)-2-((1r,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-2-(4-(二甲氨基)苯基)乙酰氨基)苯甲酸(70mg,产率93％)。
MS m/z(ESI):467[M+H]+
实施例74：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000139
第一步：(S)-2-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(74-2)的制备
将3-溴-苯甘氨酸(10g,40.97mmol)和碳酸氢钠(10.32g,123mmol)加入二氯甲烷(300ml)和水(300ml)的混合溶剂中，搅拌均匀，然后加入Boc2O(10.36ml,45mmol),反应4小时，LCMS检测反应完全。旋干二氯甲烷，加1M盐酸调PH至5，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，石油醚打浆得纯品(S)-2-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(14.1g,收率99％)。
第二步：(S)-2-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸苄酯(74-3)的制备
将(S)-3-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(14.1g,10.96mmol)和碳酸铯(10.94g,33.59mmol)加入DMF(100ml)中，加入苄溴(5.11ml,43mmol)，反应3小时，LCMS检测反应完全。加入500ml 水，乙酸乙酯萃取，收集有机相，水洗，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-2-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸苄酯(16g,收率90％)。
第三步：(S)-2-(3-(甲氨基)苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸苄酯(74-4)的制备
将(S)-2-(3-溴苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸苄酯(2g,4.6mmol)，甲氨盐酸盐(777mg,11.51mmol)，Pd2(dba)3(42mg,46μmol)，BrettPhos(90mg,184μmol)和Cs2CO3(3g,9.21mmol)加入四氢呋喃(20ml)中，抽换氮气，110℃下反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-2-(3-(甲氨基)苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸苄酯(565mg,收率32％)。
第四步：(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)乙酸苄酯(74-5)的制备
将(S)-2-(3-(甲氨基)苯基)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸苄酯(565mg,1.47mmol)，二甲氨基乙酸(182mg,1.76mmol)，HATU(838mg,2.2mmol)和二异丙基乙胺(607μl,3.67mmol)加入二氯甲烷(10ml)中搅拌均匀反应16小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入20ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)乙酸苄酯(550mg,收率80％)。
第五步：(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)乙酸(74-6)的制备
将(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)乙酸苄酯(550mg,1.17mmol)加入甲醇(50ml)中，加入钯炭(250mg)，氢气氛围下反应2小时，过滤掉钯炭，滤液旋干得(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)乙酸(366mg,收率82％)。
第六步：(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(74-7)的制备
将(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)乙酸(183mg,482μmol)，4-乙氨基苯甲酸叔丁酯(138mg,530μmol)，HATU(220mg,579μmol)和二异丙基乙胺(159μl,965μmol)加入二氯甲烷(5ml)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(121mg,收率40％)。
第七步：(S)-4-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(74-8)的制备
将(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(121mg,195μmol)加入氯化氢乙酸乙酯溶液(10ml)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-氨基-2-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(50mg,产率49％)。
第八步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(74-9)的制备
将(S)-4-(2-氨基-2-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(50mg,96μmol)，(1R,4R)-4-(((叔氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-甲酸(27mg,105μmol)，HATU(44mg,105μmol)和异丙基二乙基胺(48mg,288μmol)加入二氯甲烷(2ml)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入5ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((S)-2-((1R,4S)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(45mg,收率62％)。
第九步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸(74)的制备
将4-((S)-2-((1R,4S)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(45mg,59μmol)加入三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(4ml)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基) 环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-乙基乙酰氨基)-苯甲酸(23mg,产率64％)。
MS m/z(ESI):552[M+H]+
中间体4-乙氨基苯甲酸叔丁酯(74-M2)的合成
Figure PCTCN2020141466-appb-000140
4-氨基苯甲酸叔丁酯(13-6，1.16g)溶解于甲醇(15mL)中，加入乙醛四氢呋喃溶液(5mol/L，1.2mL)，分批加入氰基硼氢化钠(560mg)，室温下搅拌2小时。溶剂浓缩，残留物经柱色谱纯化得到4-乙氨基苯甲酸叔丁酯(340mg)。
实施例75:4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-异丙基乙酰氨基)-苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000141
第一步：(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-异丙基乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(75-2)的制备
将(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)乙酸(183mg,482μmol)，4-异丙基氨基苯甲酸叔丁酯(138mg,530μmol)，HATU(220mg,579μmol)和二异丙基乙胺(159μl,965μmol)加入二氯甲烷(5ml)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入100ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(121mg,收率40％)。
第二步：(S)-4-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(75-3)的制备
将(S)-4-(2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(121mg,195μmol)加入氯化氢乙酸乙酯溶液(10ml)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，柱层析纯化得纯品(S)-4-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(50mg,产率49％)。
第三步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(75-4)的制备
将(S)-4-(2-氨基-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰氨基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(50 mg,96μmol)，(1R,4R)-4-(((叔氧羰基)氨基)甲基)环己基-1-甲酸(27mg,105μmol)，HATU(44mg,105μmol)和异丙基二乙基胺(48mg,288μmol)加入二氯甲烷(2ml)中，反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，加入5ml水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得纯品4-((S)-2-((1R,4S)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(45mg,收率62％)。
第四步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸(75)的制备
将4-((S)-2-((1r,4S)-4-(叔丁氧羰基氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸叔丁酯(45mg,59μmol)加入三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(4ml)的混合溶剂中，反应1小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，得产品4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨基甲基)环己基-1-甲酰氨基)-3-(3-(2-(二甲氨基)-N-甲基乙酰基)苯基)-N-异丙乙酰氨基)-苯甲酸(23mg,产率64％)。
MS m/z(ESI):566[M+H]+
中间体异丙基氨基苯甲酸叔丁酯(75-M2)的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000142
4-氨基苯甲酸叔丁酯(13-6，1.0g)溶解于甲醇(15mL)中，加入丙酮(1.5mL)，分批加入氰基硼氢化钠(448mg)，室温下搅拌2小时。溶剂浓缩，残留物经柱色谱纯化得到4-异丙基氨基苯甲酸叔丁酯(700mg)。
实施例76：4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基))苯甲酸
Figure PCTCN2020141466-appb-000143
第一步：(S)-2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(76-2)的制备
将天冬氨酸(40mg)，硫代吗啉-1,1-二氧化物(15mg)，HATU(62mg)和二异丙基乙胺(0.30mL)加入二氯甲烷(3mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得(S)-2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗 啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(61mg)。
第二步：(S)-2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(76-3)的制备
将(S)-2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸叔丁酯(61mg)加入二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得(S)-2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(65mg)。
第三步：(S)-4-(2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)苯甲酸叔丁酯(76-4)的制备
将(S)-2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酸(65mg)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(13-6，44mg)，HATU(93mg)和二异丙基乙胺(0.10mL)加入二氯甲烷(3mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得(S)-4-(2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)苯甲酸叔丁酯(59mg)。
第四步：(S)-4-(2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)苯甲酸叔丁酯(76-5)的制备
将(S)-4-(2-((((9H-芴-基甲氧基)羰基)氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)苯甲酸叔丁酯(59mg)加入溶解于二氯甲烷(3mL)中，加入二乙基胺(2mL)，室温搅拌3小时，反应液浓缩，残留物经薄层制备色谱纯化得(S)-4-(2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)苯甲酸叔丁酯(24mg)。
第五步：4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基))苯甲酸叔丁酯(76-6)的制备
将(S)-4-(2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺)苯甲酸叔丁酯(24mg)，(E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酸(14mg)，HATU(23mg)和二异丙基乙胺(0.1mL)加入二氯甲烷(2mL)中搅拌均匀反应2小时，LCMS检测反应完全。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基))苯甲酸叔丁酯(25mg)。
第六步：4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基))苯甲酸(76)的制备
将4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁胺))苯甲酸叔丁酯(25mg)加入二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基))苯甲酸(23mg)。
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ12.56(brs,1H),10.43(s,1H),9.86(s,1H),8.78(d,1H,J＝5.4Hz),7.96-7.88(m,3H),7.71(d,2H,J＝8.4Hz),7.64(d,1H,J＝8.8Hz),6.82(d,1H，J＝15.6Hz),6.75(d,1H,J＝16.4Hz),4.87(q,1H,J＝6.0Hz),3.88-3.84(m，5H)，3.10-3.03(m，2H)，3.00-2.85(m,3H).
MS m/z(ESI):620[M+H]+
实施例77
4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基))苯甲酸1-((异丙氧羰基)氧基)乙酯的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000144
将4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧 代丁酰氨基))苯甲酸(23mg)，碳酸钾(16mg)和碘化钾(6.5mg)加入DMF(2mL)中，抽换氮气，氮气氛围下加入1-氯乙基碳酸异丙酯(12.9mg)，搅拌均匀，60℃反应16小时，LCMS检测反应完全。加入10mL水，乙酸乙酯萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，制备薄层色谱纯化得4-((S)-2-((E)-3-(3-氯-2-氟-6-(1H-四氮唑-1-基)苯基)丙烯酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基))苯甲酸1-((异丙氧羰基)氧基)乙酯(19mg)
MS m/z(ESI):750[M+H]+
1HNMR(DMSO-d6 400MHz)δ10.55(s,1H),9.86(s,1H),8.77(d,1H,J＝7.6Hz),7.96-7.92(m,3H),7.79(d,2H,J＝8.8Hz),7.64(dd,1H,J＝1.2,8.8Hz),6.85(dd,1H，J＝5.2,10.8Hz),6.83(d,1H，J＝16Hz),6.75(d,1H,J＝16.2Hz),4.87(q,1H,J＝6.9Hz),4.82-4.76(m,1H),3.92-3.81(m，4H)，3.27-3.23(m,2H),3.10-3.03(m，2H)，3.01-2.82(m,2H),1.57(d,3H,J＝5.4Hz),1.23(s,6H,J＝6.4Hz).
实施例78
4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨甲基)环己烷-1-甲酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基)苯甲酸的制备
Figure PCTCN2020141466-appb-000145
第一步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基)苯甲酸叔丁酯(78-2)的制备
将(S)-4-(2-氨基-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基)苯甲酸叔丁酯(180mg)，(1r,4r)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸39-1，110mg)，HATU(161mg)和二异丙基乙胺(0.23mL)加入二氯甲烷(5mL)中搅拌均匀反应2小时。加入水，二氯甲烷萃取，收集有机相洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基)苯甲酸叔丁酯(180mg)。
第二步：4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨甲基)环己烷-1-甲酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基)苯甲酸(78)的制备
将4-((S)-2-((1R,4S)-4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基)苯甲酸叔丁酯(180mg)加入二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，搅拌反应2小时，LCMS检测反应完全。旋干溶剂，制备薄层色谱纯化得4-((S)-2-((1R,4S)-4-(氨甲基)环己烷-1-甲酰氨基)-4-(1,1-二氧化硫代吗啉)-4-氧代丁酰氨基)苯甲酸(100mg)。
MS m/z(ESI):509[M+H]+
生物学评价
实验例1：测定本发明化合物作为凝血因子X1a抑制剂的生物活性
试验材料
酶：Human Factor Xa(Haematologic,货号HCXIA-0160)
底物：pyroGlu-Pro-Arg-pNA(GL-China，货号695760)
缓冲液：50mM Tris-HCl,pH 7.5,0.01％Tween-20,150mM NaCl,5mM CaCl 2和0.01％BSA.
试验步骤
准备1x缓冲液(50mm Tris-HCl,pH 7.5,0.01％Tween-20,150mm NaCl,5mm CaCl2和0.01％BSA)。化合物用DMSO稀释。所有的测试化合物用3倍的连续稀释法稀释成10个浓度的100倍溶液。最后的起始浓度1μM测试化合物。使用自动液体处理器，将200nL化合物转移到384孔板上。 用缓冲液稀释FXIa酶成2x(0.5nM)浓度，每孔加入10μL FXIa，接着再加入10μL缓冲液。室温下孵育15分钟。用缓冲液准备2x底物液(pyroGlu-Pro-Arg-pNA)，每孔加入10μL稀释后底物液，开始反应。用EnVision酶标仪405nM处动态读取OD值。
数据处理：
吸光值用Prism进行曲线拟合，并计算每孔抑制率，获得IC 50。
Figure PCTCN2020141466-appb-000146
Figure PCTCN2020141466-appb-000147
结论：:本发明化合物对凝血因子Xla具有明显的抑制活性。
实验例2：人血液体外抗凝血作用的测定
1.试验材料
aPTT试剂(Mindray，货号1904005)
CaCl 2(Mindray，货号1903021A)
血浆：人血收集到含枸橼酸钠溶液的抗凝真空管中(体积比为1:9)，采血后立即于5000×g离心15min，分别分离血浆后即刻用于aPTT检测。
2.仪器
离心机(生产厂家：Eppendorf，型号：5810)
全自动凝血分析仪(生产厂家：Mindray，型号：C3510)
声波移液系统(生产厂家：Labcyte，型号：
Figure PCTCN2020141466-appb-000148
550)
3.试验步骤
将待测化合物按照测试终浓度，分别配制相应浓度100×的100％DMSO溶液。测试时取用5uL 相应100×DMSO溶液加入到495uL血浆样本中。阴性对照为取5uL 100％DMSO溶液加入到495uL血浆样本中。将待测样品送入全自动凝血分析仪进行aPTT测试，获得相应读值。
4.数据处理
以化合物浓度的值作为X轴，对应的aPTT读值为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5拟合曲线，并计算EC2.0X。
化合物编号 抑制血小板凝集(EC2.0X,um)
实施例3 1.85
实施例9 2.51
实施例24 1.57
实施例30 4.15
实施例46 3.38
实施例54 3.50
实施例63 2.61
实施例66 3.22
实施例68 2.89
实施例72 5.35
实施例74 3.82
结论：本发明化合物对人血液凝集具有明显的抑制活性。
实验例3：大鼠动静脉血栓实验
1.试验材料
250-350g Wistar大鼠，聚乙烯软管，3号手术丝线，试验药品
2.试验步骤
所有动物在给药(实施例3化合物)后，腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉，将大鼠置于仰卧位，颈部脱毛并进行皮肤消毒，用灭菌手术器械在颈部切口，分离气管，分离右颈总动脉和左颈外静脉，剪取6cm的3号手术丝线放置于三段式聚乙烯管中，线端从靠近动脉端的接头处暴露1cm，使接触血液的丝线长度为5cm，以生理盐水充满聚乙烯管，建立动脉夹夹闭的颈动、静脉旁路回路。给药一定时间后，打开动脉夹，计时15min后迅速取出手术丝线称重(湿重)，并置于60℃烘箱24h后称重(干重)。
3.数据处理
计录血栓湿重、干重，并计算血栓抑制率。试验数据用Prism软件进行计算和相关统计学处理。实验结果参见图1及图2。
结论：本发明化合物对动物体内血栓形成有明显的抑制作用。
药效学实验结果表明，本发明化合物具有显著的体外抑制凝血因子XIa活性作用，且在体内具有显著的抗血栓形成作用。

Claims (18)

  1. 式I的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药：
    Figure PCTCN2020141466-appb-100001
    其中
    A选自苯基和环己基；
    R 1各自独立地选自卤素、C 1-6烷基、四唑基和三唑基，所述C 1-6烷基、四唑基或三唑基各自任选地被一或多个选自氨基和卤素的取代基取代；
    n为0、1、2或3；
    R 2和R 3各自独立地选自H和C 1-6烷基；
    m为0或1；
    R 4为H；
    R 5为任选地被一或多个R 8取代的苯基或C 1-6烷基；
    或者R 4、R 5和与其连接的原子共同形成任选地与苯环稠合的5-6元氮杂环烷基，所述5-6元氮杂环烷基或与其稠合的苯环任选地被一或多个R 8取代；
    R 8各自独立地选自H、-NR aR b、卤素、
    Figure PCTCN2020141466-appb-100002
    5-6元环烷基和苯基；
    R a选自H和C 1-6烷基；
    R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
    p为0或1；
    q为1或2；
    R 9选自C 1-6烷氧基和-NR cR d；
    R c和R d各自独立地选自H和C 1-6烷基；
    R 6选自H、C 1-6烷基和C 3-6环烷基；
    R 7为任选地被一或多个R 10取代的苯基或苄基；
    R 10各自独立地选自-(CH 2) r-C(O) s-R 11、任选地被一或多个卤素替代的C 1-6烷氧基、四唑基、卤素、-NHCOOC 1-6烷基和-SO 2NHCOC 1-6烷基；
    r为0或1；
    s为1或2；
    R 11选自H、-NHSO 2R 12和任选地被R 13取代的C 1-6烷基；
    R 12选自C 1-6烷基、C 3-6环烷基和苯基；
    R 13选自-OCOOR 14和
    Figure PCTCN2020141466-appb-100003
    R 14选自C 1-6烷基和C 3-6环烷基；
    或者R 6、R 7和与其连接的N原子共同形成5-6元氮杂环烷基，
    其中当R 8为
    Figure PCTCN2020141466-appb-100004
    且R 10为-(CH 2) r-C(O) s-R 11时，R 6为C 1-6烷基，
    其中波浪线
    Figure PCTCN2020141466-appb-100005
    表示基团与分子其余部分的连接点。
  2. 权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    Figure PCTCN2020141466-appb-100006
    选自：
    Figure PCTCN2020141466-appb-100007
    Figure PCTCN2020141466-appb-100008
    其中波浪线
    Figure PCTCN2020141466-appb-100009
    表示基团与分子其余部分的连接点。
  3. 权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 2和R 3为H。
  4. 权利要求1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 4为H；且
    R 5为任选地被R 8取代的苯基。
  5. 权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 8为-NR aR b；
    R a为H；
    R b为-(CO) p-(CH 2) q-R 9；
    p为1；
    q为1；
    R 9为-NR cR d；且
    R c和R d各自独立地选自C 1-6烷基。
  6. 权利要求1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 4、R 5和与其连接的原子共同形成任选地与苯环稠合的5-6元氮杂环烷基，所述5-6元氮杂环烷基或与其稠合的苯环任选地被R 8取代。
  7. 权利要求6的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 4、R 5和与其连接的原子共同形成1,2,3,4-四氢异喹啉基或吡咯烷基，所述1,2,3,4-四氢异喹啉基或吡咯烷基任选地被R 8取代。
  8. 权利要求7的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 4、R 5和与其连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2020141466-appb-100010
    且
    R 8选自H、-NR aR b、卤素和
    Figure PCTCN2020141466-appb-100011
    其中波浪线
    Figure PCTCN2020141466-appb-100012
    表示基团与分子其余部分的连接点。
  9. 权利要求8的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，R 8选自H、-NHCOCH 2OCH 3、-NHCOCH 2N(CH 3) 2、-NH(CH 2) 2N(CH 3) 2、-N(CH 3)COCH 2OCH 3、-N(CH 3)COCH 2N(CH 3) 2、Br和
    Figure PCTCN2020141466-appb-100013
    其中波浪线
    Figure PCTCN2020141466-appb-100014
    表示基团与分子其余部分的连接点。
  10. 权利要求7的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 4、R 5和与其连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2020141466-appb-100015
    且
    R 8选自环己基和苯基，
    其中波浪线
    Figure PCTCN2020141466-appb-100016
    表示基团与分子其余部分的连接点。
  11. 权利要求1-10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 6选自H和C 1-6烷基；且
    R 7为任选地被一或二个R 10取代的苯基或苄基。
  12. 权利要求11的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 10各自独立地选自-COOH、-COOCH 3、-COOCH 2CH 3、-COOC(CH 3) 3、-COOCH 2OCOOCH 2CH 3、-COOCH 2OCOOCH(CH 3) 2、-COOCH(CH 3)OCOOCH 2CH 3、-COOCH(CH 3)OCOOCH(CH 3) 2、
    Figure PCTCN2020141466-appb-100017
    -CONHSO 2CH 3、
    Figure PCTCN2020141466-appb-100018
    Figure PCTCN2020141466-appb-100019
    -CH 2COOH、-OCH 3、-OCHF 2、
    Figure PCTCN2020141466-appb-100020
    -Cl、-F、-NHCOOCH 3和-SO 2NHCOCH 3，
    其中波浪线
    Figure PCTCN2020141466-appb-100021
    表示基团与分子其余部分的连接点。
  13. 权利要求1-10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，
    其中，
    R 6、R 7和与其连接的N原子共同形成吡咯烷基。
  14. 权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：
    Figure PCTCN2020141466-appb-100022
    Figure PCTCN2020141466-appb-100023
    Figure PCTCN2020141466-appb-100024
    Figure PCTCN2020141466-appb-100025
    Figure PCTCN2020141466-appb-100026
    Figure PCTCN2020141466-appb-100027
  15. 药物组合物，其包含预防或治疗有效量的权利要求1-14中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，以及一种或多种药学上可接受的载体。
  16. 权利要求1-14中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药在制备用于预防或治疗血栓和栓塞相关疾病的药物中的用途。
  17. 权利要求16的用途，其中所述血栓和栓塞相关疾病为动脉粥样硬化疾病、心肌梗死、中风、缺血性脑血栓、外周动脉疾病、周围动脉闭塞性疾病、肺栓塞、深部静脉血栓形成、急性冠脉综合症或冠脉介入术后的血栓形成。
  18. 制备权利要求1-14中任一项的化合物的方法，其按照以下路线1、2、3或4进行：
    路线1
    Figure PCTCN2020141466-appb-100028
    路线2
    Figure PCTCN2020141466-appb-100029
    路线3
    Figure PCTCN2020141466-appb-100030
    路线4
    Figure PCTCN2020141466-appb-100031
    其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、m和n如权利要求1-14中任一项所定义；且PG为氨基的保护基，优选为叔丁氧羰基或9-芴基甲氧羰基。
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