WO2021060388A1 - 反芻動物用飼料添加組成物 - Google Patents

Abstract

本発明の目的は、コリン塩を含有し、ルーメンにおける高い保護性を備え、且つ、下部消化管における溶出性にも優れる反芻動物用飼料添加組成物等を提供することにある。　本発明は、（Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ、（Ｂ）０．０１～６重量％の界面活性剤、（Ｃ）１０～６０重量％のコリン塩、（Ｄ）１～４０重量％のＬ－リジン又はその塩、（Ｅ）吸湿剤、並びに（Ｆ）０．１～３重量％のステアリン酸金属塩を含有することを特徴とする、反芻動物用飼料添加組成物等に関する。

Description

反芻動物用飼料添加組成物

　本発明は、反芻動物用飼料添加組成物に関する。より詳細には、コリン塩を含有し、ルーメンにおける高い保護性を備え、且つ、下部消化管における溶出性にも優れる反芻動物用飼料添加組成物に関する。

　反芻動物が飼料を摂取すると、第一胃（ルーメン）に生息する微生物が栄養源として飼料中の栄養素の一部を分解する。この機能により、反芻動物は直接には消化できない物質を栄養素として吸収することができる。例えば、微生物はセルロースを分解し生成した糖類で揮発性有機化合物を発酵生産する。その生産物を反芻動物は栄養として吸収する。一方で、反芻動物に直接吸収させたい栄養源があった場合でも、微生物が分解してしまうため、反芻動物は微生物が発酵して生産する物質しか吸収することができない。

　反芻動物の健康状態を向上させ、その生産物（例えば、牛乳、食肉等）の生産性を向上させるためには、通常の餌料を補完する栄養素を供与することが望ましい場合がある。
　このような場合には、生物学的活性物質（栄養素）が微生物に分解されずに、効果的に吸収されるよう、ルーメンにおいて栄養素が保護され、その後第四胃以降の消化管で栄養素が吸収されるような反芻動物用飼料添加製剤が用いられている。

　例えば、本出願人は以前に、ルーメンにおける高い保護性（耐ルーメンジュース性）を備え、且つ、第四胃以降の下部消化管（例、小腸等）における溶出性にも優れる反芻動物用飼料添加組成物の製造方法として、原料（硬化植物油、硬化動物油等の保護剤、生物学的活性物質等）を、エクストルーダー（押出し造粒機）を使用して溶融混合し、得られた溶融混合物を水中で固化すること等を含む方法を提案した（特許文献１、２）。

　コリンには、反芻動物の脂質代謝を改善する効果や脂肪肝を予防する効果があることが知られている。一方で、コリン塩の中で最も安価に入手できる塩化コリンは吸湿性が高い。
　また、溶解度が高い物質は、ルーメンを通過させることが難しいことが知られている（非特許文献１）。

国際公開第２００８／０４１３７１号 国際公開第２００９／１２２７５０号

Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ（２００６）７７，４９５－５０２

　本発明の課題は、塩化コリン等のコリン塩を含有し、ルーメンにおける高い保護性を備え、且つ、下部消化管における溶出性にも優れる反芻動物用飼料添加組成物を提供することにある。

　本発明者らは、コリン塩（塩化コリン等）を含有する反芻動物用飼料添加組成物について検討する中で、コリン塩を他の原料とともに、エクストルーダーを使用して溶融混合すると、エクストルーダーの排出口やスクリューに固形物が付着して、排出口の閉塞やスクリューへの過負荷が発生し、溶融混合物の製造が困難になるという新たな技術的課題を知見した。
　本発明者らは、鋭意検討した結果、驚くべきことに、Ｌ－リジン又はその塩、吸湿剤、並びに、ステアリン酸金属塩を組み合わせて、コリン塩と併用することによって、エクストルーダーの排出口の閉塞及びスクリューへの過負荷を解消でき、溶融混合物を安定して製造し得ることを見出し、かかる知見に基づいて更に研究を進めることによって本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は以下の通りである。

［１］（Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ、
（Ｂ）０．０１～６重量％の界面活性剤、
（Ｃ）１０～６０重量％のコリン塩、
（Ｄ）１～４０重量％のＬ－リジン又はその塩、
（Ｅ）吸湿剤、並びに
（Ｆ）０．１～３重量％のステアリン酸金属塩
を含有することを特徴とする、反芻動物用飼料添加組成物。
［２］前記ステアリン酸金属塩が、ステアリン酸カルシウム及びステアリン酸マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一つである、［１］記載の組成物。
［３］前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン、Ｌ－リジン塩酸塩、Ｌ－リジン硫酸塩、Ｌ－リジンとカルボン酸との塩及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも一つである、［１］又は［２］記載の組成物。
［４］前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン塩酸塩である、［１］～［３］のいずれか一つに記載の組成物。
［５］（Ｇ）無機粉体を更に含有する、［１］～［４］のいずれか一つに記載の組成物。
［６］前記界面活性剤が、乳化剤である、［１］～［５］のいずれか一つに記載の組成物。
［７］前記乳化剤が、レシチンである、［６］記載の組成物。
［８］前記吸湿剤が、シリカである、［１］～［７］のいずれか一つに記載の組成物。
［９］０．１重量％以上５重量％未満の水を更に含有する、［１］～［８］のいずれか一つに記載の組成物。
［１０］（Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ、（Ｂ）０．０１～６重量％の界面活性剤、（Ｃ）１０～６０重量％のコリン塩、（Ｄ）１～４０重量％のＬ－リジン又はその塩、（Ｅ）吸湿剤、並びに（Ｆ）０．１～３重量％のステアリン酸金属塩を含有する溶融混合物を、水中で固化させることを含む、反芻動物用飼料添加組成物の製造方法。
［１１］（Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ、（Ｂ）１．１～１．４重量％のレシチン、（Ｃ）１８～２５重量％のコリン塩、（Ｄ）１５～３３重量％のＬ－リジン塩酸塩、（Ｅ）吸湿剤、並びに（Ｆ）０．７～１．５重量％のステアリン酸金属塩を含有する溶融混合物を、水中で固化させることを含む、反芻動物用飼料添加組成物の製造方法。
［１２］前記ステアリン酸金属塩が、ステアリン酸カルシウム及びステアリン酸マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一つである、［１０］又は［１１］記載の製造方法。
［１３］前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン、Ｌ－リジン塩酸塩、Ｌ－リジン硫酸塩、Ｌ－リジンとカルボン酸との塩及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも一つである、［１０］～［１２］のいずれか一つに記載の製造方法。
［１４］前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン塩酸塩である、［１０］～［１３］のいずれか一つに記載の製造方法。
［１５］前記溶融混合物が（Ｇ）無機粉体を更に含有する、［１０］～［１４］のいずれか一つに記載の製造方法。
［１６］前記界面活性剤が、乳化剤である、［１０］及び［１２］～［１５］のいずれか一項に記載の製造方法。
［１７］前記乳化剤が、レシチンである、［１６］記載の製造方法。
［１８］前記吸湿剤が、シリカである、［１０］～［１７］のいずれか一つに記載の製造方法。

　本発明によれば、コリン塩を含有し、ルーメンにおける高い保護性を備え、且つ、下部消化管における溶出性にも優れる反芻動物用飼料添加組成物を提供することができる。
　本発明の反芻動物用飼料添加組成物によれば、コリン塩を反芻動物の下部消化管まで効率よく運搬することができるため、反芻動物が栄養素としてコリン塩を十分に吸収することができ、その結果、例えば、反芻動物の脂質代謝を改善し、脂肪肝を効果的に予防すること等を可能とする。
　以下において、反芻動物用飼料添加組成物のルーメンにおける保護性を、単に「保護性」と称し、反芻動物用飼料添加組成物の下部消化管における溶出性を、単に「溶出性」と称する場合がある。

Ｘ軸（横軸）をリジン塩酸塩の配合割合、Ｙ軸（縦軸）をステアリン酸カルシウムの配合割合として、実施例１－１～１－１３及び比較例１－１～１－３の溶融混合物を、それぞれプロットしたグラフ（バブルチャート）である。プロットされた円（バブル）の大きさは、原料投入から５分後の２軸エクストルーダーのモーター電流値（Ａ）を示す。 実施例２、比較例２の溶融混合物を水中で固化させて得られた反芻動物用飼料添加組成物の、塩化コリンの保護率、溶出率及び残渣率の測定結果を示すグラフである。 実施例２、比較例２の溶融混合物を水中で固化させて得られた反芻動物用飼料添加組成物の、リジン塩酸塩の保護率、溶出率及び残渣率の測定結果を示すグラフである。

　本発明の反芻動物用飼料添加組成物（以下において、「本発明の組成物」とも称する）は、（Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ（以下において、「成分Ａ」とも称する）、（Ｂ）界面活性剤（以下において、「成分Ｂ」とも称する）、（Ｃ）コリン塩（以下において、「成分Ｃ」とも称する）、（Ｄ）Ｌ－リジン又はその塩（以下において、「成分Ｄ」とも称する）、（Ｅ）吸湿剤（以下において、「成分Ｅ」とも称する）、並びに（Ｆ）ステアリン酸金属塩（以下において、「成分Ｆ」とも称する）を含有することを特徴の一つとする。
　本発明の組成物は、成分Ａ～Ｆに加えて、（Ｇ）無機粉体を更に含有することが好ましい。
　本発明の組成物は、成分Ａ～Ｆ又は成分Ａ～Ｇに加えて、水を更に含有してもよい。
　本発明において「反芻動物用飼料添加組成物」とは、通常、反芻動物用飼料に添加されて、反芻動物が当該飼料を摂取する際にあわせて摂取される組成物をいう。ただし、反芻動物に摂取されさえすれば必ずしも飼料に添加されなくてもよく、例えば、本発明の組成物は単独で反芻動物に摂取され得る。

［成分Ａ］
　本発明の組成物において、成分Ａは保護剤として作用する。成分Ａとして用いられる硬化油は、常温（２５℃）で液状の植物油又は動物油に水素を添加して固化させたものであり、極度硬化油も包含する概念である。本発明において用いられる硬化油及びワックスの融点は、通常５０℃より高く、ルーメンにおける保護性に優れ得ることから、好ましくは５５℃以上であり、より好ましくは６０℃以上である。また、当該融点は、通常９０℃より低く、下部消化管での溶出性に優れ得ることから、好ましくは８０℃以下であり、より好ましくは７０℃以下である。

　硬化油の具体例としては、大豆硬化油、パーム硬化油、菜種硬化油、キャノーラ硬化油、オリーブ硬化油、アーモンド硬化油、アボカド硬化油、落花生硬化油、綿実硬化油、コーン硬化油、サフラワー硬化油、ヒマワリ硬化油、紅花硬化油、米硬化油、それらの極度硬化油等の硬化植物油；牛脂、豚脂等の硬化動物油等が挙げられ、産業上の入手が容易であることから、好ましくは、大豆硬化油、大豆極度硬化油、牛硬化油、豚硬化油である。ワックスの具体例としては、キャンデリラワックス、カルナバワックス、ライスワックス、木ロウ、ミツロウ、鯨ロウ等が挙げられる。これらの硬化油及びワックスは単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。

　本発明の組成物における成分Ａの含有量は、本発明の組成物に対して、通常２３重量％を超え、ルーメンにおける保護性と溶出性とのバランスに優れ得ることから、好ましくは３０重量％以上であり、より好ましくは３５重量％以上であり、特に好ましくは４０重量％以上である。また当該含有量は、本発明の組成物に対して、通常６０重量％未満であり、コリン塩等の生物学的活性物質を高濃度で含有させ得ることから、好ましくは５５重量％以下であり、より好ましくは５０重量％以下であり、特に好ましくは、４５重量％以下である。

［成分Ｂ］
　成分Ｂとして用いられる界面活性剤は、生物学的活性物質を溶融された保護剤中で偏在させずに均一分散させると考えられる。生物学的活性物質が溶融された保護剤中で均一に分散することにより、本発明の組成物は、緻密な保護構造を構築し得る。

　界面活性剤の具体例としては、限定されるものではないが、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤等が挙げられ、中でも乳化効果をもつものが望ましい。本発明の組成物は反芻動物の飼料とあわせて摂取されるものであることから、乳化剤が好ましい界面活性剤の一つである。これらの界面活性剤は単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。

　乳化剤の具体例としては、限定されるものではないが、レシチン、サポニン、カゼインナトリウム、脂肪酸モノグリセリド（例、ステアリン酸モノグリセリド、オレイン酸モノグリセリド等）、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等が挙げられ、中でも産業上の入手が容易であることから、レシチンは好ましい乳化剤の一つである。これらの乳化剤は単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。

　レシチンの具体例としては、限定されるものではないが、大豆レシチン、アブラナレシチン、なたねレシチン、ひまわりレシチン、サフラワーレシチン、綿実レシチン、トウモロコシレシチン、アマニレシチン、ごまレシチン、米レシチン、ヤシレシチン、パームレシチン等の植物性レシチン；卵黄レシチン等が挙げられ、産業上の入手が容易であることから、好ましくは植物性レシチンであり、より好ましくは大豆レシチンである。これらのレシチンは、例えば、水素添加物、酵素処理物、酵素分解物、レシチン分別物等であってよい。また、これらのレシチンは単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。

　本発明の組成物における成分Ｂの含有量は、本発明の組成物に対して、通常０．０１重量％以上であり、ルーメンでの保護性に優れ、かつ下部消化管での溶出性に優れることから、好ましくは０．０５重量％以上であり、より好ましくは０．５重量％以上であり、特に好ましくは１重量％以上であり、さらに好ましくは１．１重量％以上である。また当該含有量は、本発明の組成物に対して、通常６重量％以下であり、ルーメンでの保護性に優れ得ることから、好ましくは５重量％以下であり、より好ましくは３重量％以下であり、特に好ましくは２重量％以下であり、さらに好ましくは１．４重量％以下である。

［成分Ｃ］
　成分Ｃとして用いられるコリン塩の具体例としては、例えば、コリンと塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機塩との塩；コリンと酒石酸、酢酸、クエン酸塩等の有機酸塩との塩等が挙げられ、好ましくは、コリンと塩酸との塩（塩化コリン）である。これらのコリン塩は単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。

　成分Ｃとして用いられるコリン塩の製造方法は特に制限されず、自体公知の方法又はそれに準ずる方法によって製造したものを用いてよい。

　本発明の組成物における成分Ｃの含有量は、本発明の組成物に対して、通常１０重量％以上であり、反芻動物に塩化コリンを効率的に供与し得ることから、好ましくは１５重量％以上であり、より好ましくは１７重量％以上であり、特に好ましくは１８重量％以上である。また当該含有量は、本発明の組成物に対して、通常６０重量％以下であり、ルーメンでの保護性及び下部消化管での溶出性のバランスに優れ得ることから、好ましくは５５重量％以下であり、より好ましくは５０重量％以下であり、特に好ましくは４５重量％以下であり、さらに好ましくは３５重量％以下であり、より一層好ましくは２５重量％以下である。

　成分Ｃは粉砕して用いてよく、成分Ｃを粉砕する場合、その粒径は、好ましくは１５０μｍ以下であり、より好ましくは７５μｍ以下である。

［成分Ｄ］
　成分Ｄとして用いられるＬ－リジン又はその塩は、成分Ｂ（界面活性剤）と同様に、生物学的活性物質（コリン塩）を、溶融された保護剤中で偏在させずに均一に分散させると考えられる。生物学的活性物質を、溶融された保護剤中で均一に分散させるためには、成分Ｂ及びＤの両方が必要である。

　成分Ｄは、遊離のＬ－リジンであってよく、またＬ－リジンの塩であってもよい。Ｌ－リジンの塩の形態としては、例えば、無機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩及びそれらの水和物等が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アンモニウム塩等が挙げられる。無機酸との塩としては、例えば、ハロゲン化水素酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸等）、硫酸、硝酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩としては、例えば、カルボン酸（例、ギ酸、酢酸、プロピオン酸等の炭素数１～３のカルボン酸等）、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸等との塩が挙げられる。これらのＬ－リジンの塩は単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。
　成分Ｄは、好ましくは、Ｌ－リジン、Ｌ－リジンと無機酸との塩、Ｌ－リジンと有機酸との塩及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも一つであり、より好ましくは、Ｌ－リジン、Ｌ－リジン塩酸塩、Ｌ－リジン硫酸塩、Ｌ－リジンとカルボン酸との塩及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも一つであり、特に好ましくは、Ｌ－リジン塩酸塩である。

　成分Ｄとして用いられるＬ－リジン又はその塩は、天然に存在する動植物等から抽出し精製したもの、或いは、化学合成法、発酵法、酵素法又は遺伝子組換え法によって得られるもののいずれを使用してもよい。また市販品をそのまま又は粉砕して用いてもよい。成分Ｄを粉砕する場合、その粒径は、好ましくは１５０μｍ以下であり、より好ましくは７５μｍ以下である。

　本発明の組成物における成分Ｄの含有量は、本発明の組成物に対して、通常１重量％以上であり、ルーメンにおける保護性と溶出性とのバランスに優れ得ること、反芻動物にＬ－リジン又はその塩を効率的に供与し得ることから、好ましくは３重量％以上であり、より好ましくは１５重量％以上であり、特に好ましくは２０重量％以上である。本発明の組成物は、成分Ｄを上記の量で含有することによって、溶融混合物の均一性を改善し得、エクストルーダーへの排出性を向上し、スクリューへの過負荷を低減し得る。また当該含有量は、本発明の組成物に対して、通常４０重量％以下であり、コリン塩の含有量とのバランスの観点や、ルーメンでの保護性に優れ得ることから、好ましくは３３重量％以下であり、より好ましくは３０重量％以下である。成分Ｄとして、Ｌ－リジンの塩が用いられる場合、Ｌ－リジンの塩の量の計算は、全て遊離体（Ｌ－リジン）に換算して行われる。
　Ｌ－リジン又はその塩は、泌乳牛の乳量を増産する作用等を有することから、生物学的活性物質としても用いられ得るが、そのような場合でも、本発明の組成物におけるＬ－リジン又はその塩の含有量は、上記の範囲内であることが好ましい。

［成分Ｅ］
　成分Ｅとして用いられる吸湿剤は、水分を吸収、吸着し得る性質（吸湿性）を有し、反芻動物に摂取され得る物質であれば特に制限されないが、例えば、シリカ（二酸化ケイ素）、ゼオライト、カオリン、ケイ酸、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、珪藻土、小麦粉、米ぬか、コーンコブール、コーンスターチ、セルロース、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、デキストリン、天然ケイ酸ナトリウム、トウモロコシ粉、ふすま、プルラン、ベントナイト、無水ケイ酸、無水ケイ酸塩類、もみ殻、リン酸一水素カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸二水素カルシウム等が挙げられ、飼料添加物用賦形物質としてより汎用的に用いられていることから、好ましくは、シリカである。これらの吸湿剤は単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。また、これらの吸湿剤の中には、国によって飼料添加組成物への使用が法で規制されているものもあるが、各国の法規制にしたがって適切な吸湿剤を使用すればよい。

　シリカとしては、例えば、湿式シリカ（例、沈降シリカ、シリカゲル、コロイダルシリカ等）、乾式シリカ（例、フュームドシリカ等）、溶融シリカ（例、フューズドシリカ等）等が挙げられ、好ましくは、湿式シリカである。

　成分Ｅとして用いられる吸湿剤の製造方法は特に制限されず、自体公知の方法又はそれに準ずる方法によって製造したものを用いてよい。また吸湿剤は市販品を用いてもよく、簡便であることから好ましい。

　コリン塩（成分Ｃ）は、吸湿剤（成分Ｅ）と予め組み合わせられていてよい。

　本発明の組成物における成分Ｅの含有量は、本発明の組成物に対して、通常１重量％以上であり、吸湿防止の観点から、好ましくは１．５重量％以上であり、より好ましくは２重量％以上である。また当該含有量は、本発明の組成物に対して、通常１５重量％以下であり、生物学的活性物質とのバランスに優れ得ることから、好ましくは１０重量％以下であり、より好ましくは５重量％以下であり、更に好ましくは４重量％以下であり、特に好ましくは３重量％以下である。

　本発明の組成物における成分Ｅの含有量と成分Ｃの含有量の重量比は特に制限されないが、コリン塩の効果的な吸湿防止の観点から、好ましくは、成分Ｅ：成分Ｃ＝１：１～２０であり、より好ましくは、成分Ｅ：成分Ｃ＝１：３～１５であり、特に好ましくは、成分Ｅ：成分Ｃ＝１：６～１２である。

［成分Ｆ］
　本発明は成分Ｆとして、ステアリン酸金属塩を用いる。ステアリン酸金属塩は、従来、粉体を打錠して錠剤を製造する際等に滑沢剤として汎用され、粉体表面を被覆して粉体の流動性を改善し得ること等が知られている。本発明は、いかなる理論によっても拘泥されないが、本発明の組成物を製造する過程で調製される溶融混合物は非固形物であり、非固形物におけるステアリン酸金属塩の作用は、固形物である粉体において得られる一般的な滑沢作用から予測し得ない。

　成分Ｆとして用いられるステアリン酸金属塩は、例えば、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸鉛、ステアリン酸リチウム、ステアリン酸ストロンチウム、ステアリン酸カドミウム、ステアリン酸バリウム等が挙げられる。成分Ｆは、飼料添加物用賦形物質としてより汎用的に用いられていること、入手が容易であることから、好ましくは、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛及びステアリン酸鉛からなる群より選択される少なくとも一つであり、より好ましくは、ステアリン酸カルシウム及びステアリン酸マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一つである。

　成分Ｆとして用いられるステアリン酸金属塩の製造方法は特に制限されず、自体公知の方法又はそれに準ずる方法によって製造したものを用いてよい。

　本発明の組成物における成分Ｆの含有量は、本発明の組成物に対して、通常０．１重量％以上であり、溶融混合物の流動性改善の観点から、好ましくは０．３重量％以上であり、より好ましくは０．７重量％以上である。また当該含有量は、本発明の組成物に対して、通常３重量％以下であり、ルーメンにおける保護性と溶出性とのバランスに優れ得ることから、好ましくは２重量％以下であり、より好ましくは１．５重量％以下である。

［成分Ｇ］
　成分Ｇとして用いられる無機粉体は、化学的に不活性であり、反芻動物に摂取され得る物質であれば特に制限されず、例えば、タルク、マイカ等の粘土鉱物；酸化チタン、酸化ジルコニウム、酸化亜鉛等の金属酸化物等が挙げられ、飼料添加物用賦形物質としてより汎用的に用いられていること、入手が容易であることから、好ましくは、タルクである。これらの無機粉体は単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。

　本発明の組成物が成分Ｇを含有する場合、本発明の組成物における成分Ｇの含有量は、本発明の組成物に対して、通常１重量％以上であり、ルーメンにおける保護性を向上させる効果の観点から、好ましくは２重量％以上であり、より好ましくは２．５重量％以上である。また当該含有量は、本発明の組成物に対して、通常１０重量％以下であり、ルーメンにおける保護性と溶出性とのバランスに優れ得ることから、好ましくは８重量％以下であり、より好ましくは７重量％以下である。

　本発明の組成物に含有される水は、本発明の組成物の保存安定性に影響し、ルーメンにおける保護性を改善すると考えられる。本発明の組成物に含有される水は、飼料添加組成物の製造に通常用いられ得るものであれば特に制限されず、例えば、超純水、純水、イオン交換水、蒸留水、精製水、水道水等が挙げられる。

　本発明の組成物における水の含有量（水分含量）は、本発明の組成物に対して、通常０．１重量％以上であり、ルーメンでの保護性に優れ得ることから、好ましくは１重量％以上であり、より好ましくは１．５重量％以上である。また当該水分含量は、本発明の組成物に対して、通常５重量％未満であり、ルーメンでの保護性に優れ得ることから、好ましくは４重量％以下であり、より好ましくは３重量％以下である。
　本発明の組成物における水分含量は、乾燥減量法（１１０℃、３時間）より求められる。

　本発明の組成物は、成分Ａ～Ｆ及び任意の成分Ｇ、水に加えて、それら以外の他の成分を含有してもよい。当該他の成分は、本発明の目的を損なわない限り特に制限されないが、例えば、コリン塩以外の生物学的活性物質；炭酸カルシウム等の賦形剤；炭酸水素ナトリウム、クエン酸等のｐＨ調整剤；ケイ酸カルシウム、アルミノケイ酸ナトリウム等の固化防止剤等が挙げられる。当該他の成分は単独で用いてよく、又は２種以上を併用してもよい。

　本発明の組成物は反芻動物が摂取しやすい形状として成形されることが好ましく、その形状は特に制限されないが、例えば、球状、顆粒状、ペレット状、ラグビーボール状、押し麦状、鶏卵状、錠剤状等が挙げられる。

　本発明の組成物は球状又はそれに近い形状であることが好ましい。本発明の組成物の成形物の粒径は特に制限されないが、通常０．１～２０ｍｍであり、飼料との混合度の観点から、好ましくは０．３～１０ｍｍであり、より好ましくは０．５～５ｍｍである。本発明の組成物の粒径は、日本工業規格のＪＩＳ　Ｚ　８８０１にて規定される標準篩によって篩分することで規定される。

　本発明の組成物の製造方法は特に制限されず、本発明の組成物は自体公知の方法で製造すればよいが、例えば、国際公開第２００８／０４１３７１号、米国特許出願公開第２００９／０２３２９３３号明細書、国際公開第２００９／１２２７５０号、米国特許出願公開第２０１１／００８１４４４号明細書等に記載の方法又はこれに準ずる方法で製造し得る。具体的には、本発明の組成物は、成分Ａ～Ｆ（又は成分Ａ～Ｇ）を含有する溶融混合物を水中で固化させることを含む方法等によって製造し得る。

　溶融混合物における成分Ａ～Ｆの各含有量は、製造する本発明の組成物における成分Ａ～Ｆの各含有量に応じて適宜設定すればよいが、溶融混合物における成分Ａの含有量は、溶融混合物に対して、通常２３重量％を超え６０重量％未満であり、好ましくは３０～５５重量％であり、より好ましくは３５～５０重量％であり、特に好ましくは４０～４５重量％であり；溶融混合物における成分Ｂの含有量は、溶融混合物に対して、通常０．０１～６重量％であり、好ましくは０．０５～５重量％であり、より好ましくは０．５～３重量％であり、特に好ましくは１～２重量％であり、さらに好ましくは１．１～１．４重量％であり；溶融混合物における成分Ｃの含有量は、溶融混合物に対して、通常１０～６０重量％であり、好ましくは１５～５５重量％であり、より好ましくは１７～５０重量％であり、特に好ましくは１８～４５重量％であり、さらに好ましくは１８～３５重量％であり、より一層好ましくは１８～２５重量％であり；溶融混合物における成分Ｄの含有量は、溶融混合物に対して、通常１～４０重量％であり、好ましくは３～３５重量％であり、より好ましくは１５～３３重量％であり、特に好ましくは２０～３０重量％であり；溶融混合物における成分Ｅの含有量は、溶融混合物に対して、通常１～１５重量％であり、好ましくは１．５～１０重量％であり、より好ましくは２～５重量％であり、更に好ましくは、２～４重量％であり、特に好ましくは２～３重量％であり；溶融混合物における成分Ｆの含有量は、溶融混合物に対して、通常０．１～３重量％であり、好ましくは０．３～２重量％であり、より好ましくは０．７～１．５重量％である。
　溶融混合物が成分Ｇを含有する場合、溶融混合物における成分Ｇの含有量は、溶融混合物に対して、通常１～１０重量％であり、好ましくは２～８重量％であり、より好ましくは２．５～７重量％である。

　成分Ａ～Ｆ（又は成分Ａ～Ｇ）を含有する溶融混合物の調製方法は特に制限されず、例えば、市販のエクストルーダー（好ましくは、２軸エクストルーダー）等を用いて、成分Ａ～Ｇ（所望により他の成分を含んでよい）を加熱する方法等が挙げられる。エクストルーダーのシリンダーに成分Ａ～Ｆ又は成分Ａ～Ｇを添加する順序は特に制限されないが、成分Ｃの表面を成分Ｂで被覆するために、当該成分Ｂ及びＣを予めミキサー等で混合してから添加してよく、又は生産効率を上げるために、成分Ａ～Ｆ又は成分Ａ～Ｇをほぼ同時に添加してもよい。あるいは、成分Ａ及びＣを先に室温付近で混合した後、残りの成分を添加して加熱することによっても、溶融混合物を得ることができる。成分Ｃは粉砕して用いてよく、例えば、吸湿を防止するために成分Ｅとミキサー等で混合して得られた混合物、又は、成分Ｃ及び成分Ｅのプレミックス品等を、パルペライザーを用いて平均粒径（メジアン径）が好ましくは１５０μｍ以下、より好ましくは７５μｍ以下となるまで粉砕し、必要に応じて篩分して用いてよい。

　成分Ａ～Ｆ又は成分Ａ～Ｇを加熱するときの温度は、成分Ａの融点以上であれば特に制限されないが、成分Ａの融点より５～１５℃程度高いことが好ましい。例えば、成分Ａとして大豆極度硬化油（融点：６７～６８℃）を用いる場合は、７２～８５℃で加熱すればよい。この際、成分Ａ以外の成分は必ずしも溶融しなくてもよく、例えば、成分Ｃが溶融せずに分散し、溶融混合物はスラリー状態であってもよい。また加熱当初から成分Ａの融点以上の温度で加熱する必要はなく、例えば、まず成分Ａの融点より５～１０℃低い温度で予備加熱を行い、次いで、エクストルーダーのシリンダー内のスクリューで原料を搬送した後、成分Ａの融点以上の所定の温度で加熱すると、効率的に安定した溶融混合物が得られる。

　尚、溶融混合物の調製に利用可能な機器は、エクストルーダーに限定されず、自然落下させたときに液滴となり得る溶融混合物を調製できるものであれば適宜用いてよい。

　成分Ａ～Ｆ（又は成分Ａ～Ｇ）を含有する溶融混合物を水中で固化する方法は特に制限されないが、溶融混合物を水中に浸漬させること、具体的には、例えば、溶融混合物を、所定の径の孔（穴）を有する容器に貯留し、当該孔から水中に落下させること等によって行い得る。溶融混合物を所定の径の孔から落下（好ましくは、自然落下）させると、落下中に表面直力の作用で切断されて、個々に独立した液滴となる。当該液滴を、所定の温度の水槽中に落下させると、液滴は水中で瞬間的に冷却されて固化し、所定の形状の固形物が得られる。液滴が固化して固形物となる際、水槽中の水が固形物に取り込まれるが、この水はその後の加熱乾燥処理（後述）で減少させ得る。尚、溶融混合物を水中で固化させると、一部の生物学的活性物質が水中に溶出する場合があるが、その量は極僅かである。

　溶融混合物を貯留する容器が有する孔の直径は、得られる造粒物（溶融混合物の液滴が固化したもの）の大きさ等に応じて適宜選択すればよいが、通常１～５ｍｍであり、好ましくは０．５～３ｍｍである。

　溶融混合物を貯留する容器は、所定の径の孔を有すれば特に制限されないが、生産量を効率的に増加させ得ることから、多孔シューターを用いることが好ましい。ここで「多孔シューター」とは、底に複数穿孔された容器であって、溶融混合物を一時的に貯留する設備をいう。また溶融混合物を貯留する容器は、貯留する溶融混合物が冷えないように、加温設備を備えることが好ましい。

　水中に落下させるときの溶融混合物の温度は特に制限されないが、通常６０～９０℃であり、融点の観点から、好ましくは７０～９０℃である。

　溶融混合物を落下させる水の温度は、溶融混合物が瞬間的に固化すれば特に制限されないが、通常０～３０℃である。

　成分Ａ～Ｅを含有する溶融混合物を水中で固化させて得られた造粒物（本明細書中、「水中造粒物」とも称する）は、加熱乾燥処理を施されることが好ましい。当該加熱乾燥処理により、造粒物の水分含有量を調節できる。加熱乾燥処理は、例えば、造粒物に含まれる成分Ａの融点より低い温度に設定された雰囲気（例えば、熱水、蒸気、熱風等）に、造粒物を概ね数分～数十分曝露すること等によって行い得る。加熱乾燥処理の時間は、加熱乾燥処理の温度、成分Ａの種類及び造粒物の量等に基づいて、適宜設定すればよい。

　本発明の組成物を、成分Ａ～Ｆ（又は成分Ａ～Ｇ）を含有する溶融混合物を水中で固化させることを含む方法によって製造する場合、当該方法は、固化した混合物を被覆剤で被覆することを更に含んでよい。使用できる被覆剤としては、例えば、硬化油、界面活性剤、天然植物油、動物油、植物油、脂肪酸又はその塩、ワックス、ロウ、多糖類（キトサンやアルギン酸等）、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、脂肪酸エステル、脂肪酸アルコール、セルロース類（カルボキシメチルセルロース等）、粘土、シリカ、ｐＨ感受性ポリビニル誘導体（ポリビニルピロリドン等）、アクリル樹脂（樹脂ＩＶ号等）等が挙げられる。固化した混合物を被覆する方法は特に制限されず、自体公知の方法で被覆すればよいが、例えば、米国特許第８，１３７，７１９号明細書、米国特許第８，１８２，８５１号明細書等に記載の方法又はこれらに準ずる方法で製造し得る。

　本発明の組成物は、一態様として、分散型（マトリクス型）であってよい。ここで「分散型」の反芻動物用飼料添加組成物とは、生物学的活性物質含む各成分を、当該各成分が略均一に分散した状態で含有する反芻動物用飼料添加組成物をいう。また本発明の組成物は、他の一態様として、分散型のコアを被覆剤で被覆した被覆型であってよい。ここで「分散型のコアを被覆剤で被覆した被覆型」の反芻動物用飼料添加組成物とは、中心部（コア）が分散型（生物学的活性物質を含む各成分を、当該各成分が略均一に分散した状態で含有）であって、そのコアの表面が被覆剤によって被覆されている反芻動物用飼料添加組成物をいう。

　本発明の組成物は、その表層に生物学的活性物質（例、コリン塩等）を実質的に含有しない層を有することが好ましい。本発明の組成物は、生物学的活性物質を実質的に含有しない層を表層に有することによって、撥水性を有し得る。ここで「生物学的活性物質を実質的に含有しない層」とは、生物学的活性物質を全く含有しないか、又は、撥水性を阻害しない量（通常２重量％以下、好ましくは１重量％以下）で生物学的活性物質を含有する層を意味する。

　生物学的活性物質を実質的に含有しない層の厚さは、通常１０～１１０μｍであり、撥水性に優れ得ることから、好ましくは１０～８０μｍである。

　生物学的活性物質を実質的に含有しない層を表層に有する本発明の組成物は、例えば、成分Ａ～Ｆ（又は成分Ａ～Ｇ）を含有する溶融混合物を水中で固化させること、及び、固化した混合物を被覆剤で被覆することを含む方法等によって製造できる。

　本発明の組成物の、ルーメンにおける保護性および下部消化管における溶出性は、溶出試験器を用いるｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験により測定される、生物学的活性物質（例、コリン塩等）の保護率及び溶出率から評価できる。

＜保護率算出のための生物学的活性物質の濃度（濃度Ａ）の測定＞
　溶出試験器（富山産業社製）を用い、反芻動物（例、乳牛等）の体温に相当する温度（例、３９℃）に加温した超純水（Ｍｉｌｌｉ　Ｑ（ミリポア社製）を使用して製造）９００ｍｌに製剤サンプル約３ｇを入れ１００ｒｐｍで撹拌し、撹拌開始から２０時間後に、撹拌中の試験液から保護率測定用に２ｍｌを採取し、生物学的活性物質の濃度を測定する（濃度Ａ、単位：ｍｇ／ｄｌ）。
＜溶出率算出のための生物学的活性物質の濃度（濃度Ｂ）の測定＞
　上記保護率測定用サンプルを採取した直後の試験液に、１００ｒｐｍで撹拌を続けながら、胆汁末（富士フイルム和光純薬社製）とパンクレアチン（富士フイルム和光純薬社製）の水溶液（胆汁末及びパンクレアチンの濃度は、いずれも２３．４ｇ／１００ｍｌ）８ｍｌを添加して小腸相当試験液とし、当該水溶液の添加から５時間後に、撹拌中の試験液から溶出率測定用に２ｍｌを採取し、生物学的活性物質の濃度を測定する（濃度Ｂ、単位：ｍｇ／ｄｌ）。
　上記生物学的活性物質の濃度（濃度Ａ及びＢ）は、液体クロマトグラフィー（ウォータース社製）、またはバイオセンサー（王子計測機器社製）を用いて測定する。
＜生物学的活性物質の保護率および溶出率の算出＞
　生物学的活性物質の保護率および溶出率は次の式により算出する。
保護率［％］＝｛１－（濃度Ａ［ｍｇ／ｄｌ］×９）／（製剤サンプル重量［ｇ］×１０００×製剤サンプル中の生物学的活性物質の含有量［重量％］／１００）｝×１００
溶出率［％］＝｛（（濃度Ｂ［ｍｇ／ｄｌ］－濃度Ａ［ｍｇ／ｄｌ］）×９）／（製剤サンプル重量［ｇ］×１０００×製剤サンプル中の生物学的活性物質の含有量［重量％］／１００）｝×１００

　本発明の組成物の生物学的活性物質の保護率は、好ましくは５０％以上であり、より好ましくは７０％以上であり、特に好ましくは８０％以上である。一方、本発明の組成物の保護率の上限は特に制限されないが、通常１００％である。

　本発明の組成物の生物学的活性物質の溶出率は高いほど好ましく、その上限は特に制限されない。

　本発明の組成物が用いられる反芻動物は特に制限されないが、例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、シカ、キリン、ラクダ及びラマ等が挙げられ、好ましくはウシである。

　本発明の組成物の反芻動物用飼料に対する添加量は特に制限されず、生物学的活性物質（例、塩化コリン等）の必要量等に応じて適宜調節し得る。本発明の組成物は、通常、飼料に添加されて、当該飼料とともに反芻動物に摂取されるように用いられるが、反芻動物に摂取されさえすれば必ずしも飼料に添加されなくてもよく、例えば、本発明の組成物は単独で反芻動物に摂取され得る。

　以下の実施例において本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。

＜試験例１＞
［実施例１－１～１－４、１－１０、１－１１、１－１３の溶融混合物の製造］
　塩化コリン（Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｄｏｎｇｌｏｕ　Ｂｉｏ－Ｎｕｔｒｉｅｎｔ社製）及びシリカ（Ｅｖｏｎｉｋ社製「Ｃａｒｐｌｅｘ　＃８０」）をナウターミキサー（ホソカワミクロン社製）にて混合して得られた混合物、あるいは、塩化コリンとシリカとのプレミックス品（シリカ比率：１０重量％、Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｄｏｎｇｌｏｕ　Ｂｉｏ－Ｎｕｔｒｉｅｎｔ社製）を、微粉砕機（ホソカワミクロン社製）にて粉砕した。得られた粉砕物に、表１、２に示す比率（単位：重量％）で大豆極度硬化油（横関油脂工業社製）、大豆レシチン（ＡＤＭ社製）、必要に応じて微粉砕機（Ｂｅｐｅｘ社製）にて粉砕したリジン塩酸塩、ステアリン酸カルシウム（日油社製）、タルク（浅田製粉社製）を加えて十分に混合したものを２軸エクストルーダー（日本製鋼所社製）に連続的に投入した。エクストルーダーのシリンダー内温度は予備加熱温度：６５℃、本加熱温度：８８℃、出口設定温度：７７℃として溶融混合し、溶融スラリー状態の溶融混合物を得た。

［実施例１－５～１－９、１－１２の溶融混合物の製造］
　タルクを使用しなかったこと以外は、実施例１－１等の溶融混合物と同様の手順で、溶融スラリー状態の溶融混合物を得た。

［比較例１－１の溶融混合物の製造］
　ステアリン酸カルシウム及びタルクを使用しなかったこと以外は、実施例１－１等の溶融混合物と同様の手順で、溶融スラリー状態の溶融混合物を得た。

［比較例１－２、１－３の溶融混合物の製造］
　リジン塩酸塩及びタルクを使用しなかったこと以外は、実施例１－１等の溶融混合物と同様の手順で、溶融スラリー状態の溶融混合物を得た。

［比較例１－４の溶融混合物の製造］
　塩化コリン及びシリカをナウターミキサーにて混合して得られた混合物に代えて、塩化コリン（Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｄｏｎｇｌｏｕ　Ｂｉｏ－Ｎｕｔｒｉｅｎｔ社製）のみを用いたこと（すなわち、シリカを使用しなかったこと）以外は、実施例１－１等の溶融混合物と同様の手順で、溶融混合物の調製を試みたが、塩化コリンが吸湿するため微粉砕できず、溶融混合物を製造できなかった。

［実施例１－１～１－１３及び比較例１－１～１－３の溶融混合物の評価］
（１）溶融混合物の排出状況
　２軸エクストルーダーへの原料投入から５分後に、エクストルーダー出口からの溶融混合物の排出状況を目視にて観察し、下記の基準に基づいて評価を行った。
［評価基準］
○：溶融混合物が、エクストルーダー出口から排出され続けている。
×：溶融混合物が、エクストルーダー出口から排出されなくなった。
（２）２軸エクストルーダーのモーター電流値
　２軸エクストルーダーへの原料投入から５分後に、２軸エクストルーダーのモーター電流値（Ａ）を確認した。モーター電流値は、２軸エクストルーダーのスクリューへの負荷が増加すると上昇し、モーター電流値が低いことは、２軸エクストルーダーのスクリューへの負荷が少ないことを示す。またモーター電流値が１５Ａを上回ると、２軸エクストルーダーの運転が強制的に停止される。

　結果を表１、２に示す。

　実施例１－１～１－１３においては、原料投入後５分でも溶融混合物は滑らかなスラリー状態でエクストルーダー出口より排出され続けた。特に、実施例１－１２については３時間連続運転しても溶融混合物は滑らかなスラリー状態でエクストルーダー出口より排出され続けた。
　一方、比較例１－１～１－３においては、原料投入直後は溶融混合物がエクストルーダー出口より滑らかなスラリー状態で排出されていたが、原料投入後５分以内にはエクストルーダー出口に固形物が付着して閉塞し、溶融混合物が排出されなくなった。
　２軸エクストルーダーの運転を停止してスクリューを抜き出したところ、溶融混合物が滑らかに排出され続けた実施例１－１２においてはスクリューへの固形の付着物は観察されなかったのに対し、エクストルーダー出口が閉塞した比較例１－１～１－３においてはスクリューに大量の固形の付着物が観察された。

　また、実施例１－１～１－１３においては、原料投入後５分以降でも、２軸エクストルーダーのモーター電流値は、強制シャットダウン値である１５Ａを大きく下回ったのに対し、比較例１－１～１－３においては、原料投入後５分以内にモーター電流値が急激に上昇し、最終的には強制シャットダウン値である１５Ａを上回り、２軸エクストルーダーの運転が強制的に停止され、連続製造が不可能であった。

　図１は、Ｘ軸（横軸）をリジン塩酸塩の配合割合、Ｙ軸（縦軸）をステアリン酸カルシウムの配合割合として、実施例１－１～１－１３及び比較例１－１～１－３を、それぞれプロットしたグラフ（バブルチャート）である。プロットされた円（バブル）の大きさは、２軸エクストルーダーのモーター電流値（Ａ）を示す。
　当該グラフにおいて、円（バブル）の大きい範囲（すなわち、２軸エクストルーダーが運転不能となる範囲）は、当該グラフ中に記載の点線の下の範囲と考えられた。

＜試験例２＞
［実施例２の溶融混合物の製造］
　塩化コリン（Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｄｏｎｇｌｏｕ　Ｂｉｏ－Ｎｕｔｒｉｅｎｔ社製）及びシリカ（Ｅｖｏｎｉｋ社製「Ｃａｒｐｌｅｘ　＃８０」）をナウターミキサー（ホソカワミクロン社製）にて混合して得られた混合物を、微粉砕機（ホソカワミクロン社製）にて粉砕した。得られた粉砕物に、表３に示す比率（単位：重量％）で大豆極度硬化油（横関油脂工業社製）、大豆レシチン（ＡＤＭ社製）、必要に応じて微粉砕機（Ｂｅｐｅｘ社製）にて粉砕したリジン塩酸塩、ステアリン酸カルシウム（日油社製）を加えて十分に混合したものを２軸エクストルーダー（日本製鋼所社製）に連続的に投入した。エクストルーダーのシリンダー内温度は予備加熱温度：６５℃、本加熱温度：８８℃、出口設定温度：７７℃として溶融混合し、溶融スラリー状態の溶融混合物を得た。

［比較例２の溶融混合物の製造］
　ステアリン酸カルシウムを使用しなかったこと以外は、実施例２の溶融混合物と同様の手順で、溶融スラリー状態の溶融混合物を得た。尚、２軸エクストルーダーのモーター電流値が若干増加し始め、エクストルーダー出口に閉塞が生じる気配があったが、運転は継続できた。

［反芻動物用飼料添加組成物の製造］
　実施例２及び比較例２において得られた各溶融混合物を、エクストルーダー出口より排出し、多孔シューター（孔の数：１０８個、孔の直径：１ｍｍ）に投入した後、当該溶融混合物を、多孔シューターの孔から冷却用水槽（水温：０～１０℃）に自然落下させた。多孔シューターから冷却用水槽の水面までの距離は１０ｃｍとした。多孔シューターから落下した溶融混合物は、落下中に液滴となり、水中に浸漬後、冷却されて瞬間的に固化した。これを脱水した後、５２℃に設定した流動層乾燥機（フロイント産業社製）にて１０分間加熱乾燥処理を行い、造粒物（反芻動物用飼料添加組成物）を得た。

　製造直後の実施例２及び比較例２の反芻動物用飼料添加組成物について、水分含量、塩化コリンの含有量、リジン塩酸塩の含有量、並びに、生物学的活性物質（塩化コリン、リジン塩酸塩）の保護率及び溶出率を、それぞれ以下の手順で測定、算出した。

［飼料添加組成物の水分含量の測定］
　各組成物の水分含量は、乾燥減量法（１１０℃、３時間）により求めた。

［飼料添加組成物の塩化コリンの含有量及びリジン塩酸塩の含有量の測定］
　各組成物の塩化コリンの含有量及びリジン塩酸塩の含有量は、以下の手順で測定、算出した。
　５０ｍｌのＦＡＬＣＯＮ製コニカルチューブに飼料添加組成物1．０ｇを入れ、濃塩酸２ｍＬ及び純水１８ｍＬを加え密栓した後、これを９０℃で３時間加熱した。冷却後、１００ｍＬのメスフラスコに移し純水でフィルアップし、０．４５μｍのフィルターでろ過し、コリン及びリジンの水溶液を調製した。この水溶液を１０倍希釈し、バイオセンサーＢＦ－７（王子計測機器製）を用いて、コリンはコリン電極、リジンはリジン電極で定量分析し、飼料添加組成物の塩化コリン及びリジン塩酸塩の含有量（重量％）をそれぞれ求めた。

［保護率及び溶出率の測定］
＜保護率算出のための生物学的活性物質の濃度（濃度Ａ）の測定＞
　溶出試験器（富山産業社製）を用い、反芻動物（例、乳牛等）の体温に相当する温度（例、３９℃）に加温した超純水（Ｍｉｌｌｉ　Ｑ（ミリポア社製）を使用して製造）９００ｍｌに製剤サンプル約３ｇを入れ１００ｒｐｍで撹拌し、撹拌開始から２０時間後に、撹拌中の試験液から保護率測定用に２ｍｌを採取し、生物学的活性物質の濃度を測定した（濃度Ａ、単位：ｍｇ／ｄｌ）。
＜溶出率算出のための生物学的活性物質の濃度（濃度Ｂ）の測定＞
　上記保護率測定用サンプルを採取した直後の試験液に、１００ｒｐｍで撹拌を続けながら、胆汁末（富士フイルム和光純薬社製）とパンクレアチン（富士フイルム和光純薬社製）の水溶液（胆汁末及びパンクレアチンの濃度は、いずれも２３．４ｇ／１００ｍｌ）８ｍｌを添加して小腸相当試験液とし、当該水溶液の添加から５時間後に、撹拌中の試験液から溶出率測定用に２ｍｌを採取し、生物学的活性物質の濃度を測定した（濃度Ｂ、単位：ｍｇ／ｄｌ）。
　上記生物学的活性物質の濃度（濃度Ａ及びＢ）は、液体クロマトグラフィー（ウォータース社製）、またはバイオセンサー（王子計測機器社製）を用いて測定した。
＜生物学的活性物質の保護率、溶出率及び残渣率の算出＞
　生物学的活性物質の保護率および溶出率は次の式により算出した。
保護率［％］＝｛１－（濃度Ａ［ｍｇ／ｄｌ］×９）／（製剤サンプル重量［ｇ］×１０００×製剤サンプル中の生物学的活性物質の含有量［重量％］／１００）｝×１００
溶出率［％］＝｛（（濃度Ｂ［ｍｇ／ｄｌ］－濃度Ａ［ｍｇ／ｄｌ］）×９）／（製剤サンプル重量［ｇ］×１０００×製剤サンプル中の生物学的活性物質の含有量［重量％］／１００）｝×１００
　また生物学的活性物質の残渣率は次の式により算出した。
残渣率［％］＝｛１－（濃度Ｂ［ｍｇ／ｄｌ］×９）／（製剤サンプル重量［ｇ］×１０００×製剤サンプル中の生物学的活性物質の含有量［重量％］／１００）｝×１００
　尚、保護率［％］は、溶出率［％］と残渣率［％］との合計である。

　実施例２、比較例２の溶融混合物を水中で固化させて得られた反芻動物用飼料添加組成物の水分含量、塩化コリンの含有量及びリジン塩酸塩の含有量の測定結果を表４に示す。また当該組成物の生物学的活性物質（塩化コリン、リジン塩酸塩）の保護率、溶出率及び残渣率の測定結果を図２、図３に示す。
　尚、溶融混合物中の大豆極度硬化油、大豆レシチン、シリカ、ステアリン酸カルシウムの含有量は、水中での造粒の前後で変わらない。

　図２、図３に示される結果から明らかなように、ステアリン酸カルシウムを含有しない比較例２の溶融混合物を水中で固化させて得られた反芻動物用飼料添加組成物に比べて、ステアリン酸カルシウムを含有する実施例２の溶融混合物を水中で固化させて得られた反芻動物用飼料添加組成物の方が保護率及び溶出率が高かった。

　本発明によれば、コリン塩を含有し、ルーメンにおける高い保護性を備え、且つ、下部消化管における溶出性にも優れる反芻動物用飼料添加組成物を提供することができる。
　本発明の反芻動物用飼料添加組成物によれば、コリン塩を反芻動物の下部消化管まで効率よく運搬することができるため、反芻動物が栄養素としてコリン塩を十分に吸収することができ、その結果、例えば、反芻動物の脂質代謝を改善し、脂肪肝を効果的に予防すること等を可能とする。

　本出願は、日本で出願された特願２０１９－１７６２４２（出願日：２０１９年９月２６日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (18)

1. （Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ、
   （Ｂ）０．０１～６重量％の界面活性剤、
   （Ｃ）１０～６０重量％のコリン塩、
   （Ｄ）１～４０重量％のＬ－リジン又はその塩、
   （Ｅ）吸湿剤、並びに
   （Ｆ）０．１～３重量％のステアリン酸金属塩
   を含有することを特徴とする、反芻動物用飼料添加組成物。
2. 　前記ステアリン酸金属塩が、ステアリン酸カルシウム及びステアリン酸マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一つである、請求項１記載の組成物。
3. 　前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン、Ｌ－リジン塩酸塩、Ｌ－リジン硫酸塩、Ｌ－リジンとカルボン酸との塩及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも一つである、請求項１又は２記載の組成物。
4. 　前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン塩酸塩である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
5. 　（Ｇ）無機粉体を更に含有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
6. 　前記界面活性剤が、乳化剤である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
7. 　前記乳化剤が、レシチンである、請求項６記載の組成物。
8. 　前記吸湿剤が、シリカである、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 　０．１重量％以上５重量％未満の水を更に含有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
10. 　（Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ、（Ｂ）０．０１～６重量％の界面活性剤、（Ｃ）１０～６０重量％のコリン塩、（Ｄ）１～４０重量％のＬ－リジン又はその塩、（Ｅ）吸湿剤、並びに（Ｆ）０．１～３重量％のステアリン酸金属塩を含有する溶融混合物を、水中で固化させることを含む、反芻動物用飼料添加組成物の製造方法。
11. 　（Ａ）融点が５０℃より高く９０℃より低い硬化油及びワックスから選ばれる少なくとも一つ、（Ｂ）１．１～１．４重量％のレシチン、（Ｃ）１８～２５重量％のコリン塩、（Ｄ）１５～３３重量％のＬ－リジン塩酸塩、（Ｅ）吸湿剤、並びに（Ｆ）０．７～１．５重量％のステアリン酸金属塩を含有する溶融混合物を、水中で固化させることを含む、反芻動物用飼料添加組成物の製造方法。
12. 　前記ステアリン酸金属塩が、ステアリン酸カルシウム及びステアリン酸マグネシウムからなる群より選択される少なくとも一つである、請求項１０又は１１記載の製造方法。
13. 　前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン、Ｌ－リジン塩酸塩、Ｌ－リジン硫酸塩、Ｌ－リジンとカルボン酸との塩及びそれらの水和物からなる群より選択される少なくとも一つである、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の製造方法。
14. 　前記Ｌ－リジン又はその塩が、Ｌ－リジン塩酸塩である、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の製造方法。
15. 　前記溶融混合物が（Ｇ）無機粉体を更に含有する、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の製造方法。
16. 　前記界面活性剤が、乳化剤である、請求項１０及び１２～１５のいずれか一項に記載の製造方法。
17. 　前記乳化剤が、レシチンである、請求項１６記載の製造方法。
18. 　前記吸湿剤が、シリカである、請求項１０～１７のいずれか一項に記載の製造方法。

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