WO2021058892A1 - Solution de préservation et/ou de rinçage d'organe á transplanter - Google Patents

Solution de préservation et/ou de rinçage d'organe á transplanter Download PDF

Info

Publication number
WO2021058892A1
WO2021058892A1 PCT/FR2020/051589 FR2020051589W WO2021058892A1 WO 2021058892 A1 WO2021058892 A1 WO 2021058892A1 FR 2020051589 W FR2020051589 W FR 2020051589W WO 2021058892 A1 WO2021058892 A1 WO 2021058892A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
concentration
mmol
ions
solution
solution according
Prior art date
Application number
PCT/FR2020/051589
Other languages
English (en)
Inventor
Georges Antoine Lopez
Alexandre LOPEZ
Original Assignee
Institut Georges Lopez
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut Georges Lopez filed Critical Institut Georges Lopez
Priority to EP20781054.0A priority Critical patent/EP4033898A1/fr
Publication of WO2021058892A1 publication Critical patent/WO2021058892A1/fr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids

Definitions

  • the present invention relates to an aqueous solution for preserving and / or rinsing an organ to be transplanted and its use for static preservation, dynamic preservation and / or rinsing of an organ to be transplanted.
  • Organ transplantation is the last resort in case of failure of a vital organ which is then replaced by a healthy organ called a transplant.
  • transplanted organs usually come from subjects in a state of encephalic death (or brain death), whose circulation and respiration are artificially maintained by resuscitation procedures.
  • encephalic death or brain death
  • the law indicates that all individuals are presumed donors, i.e. organ and tissue donors, unless an individual has
  • Opting out of organ harvesting may also be decided by the medical team due to the donor's pathological history (tumors, infectious diseases or others) or medical obstacles.
  • many transplants are performed from living donors, for example kidney transplants.
  • the organs After being removed from the donor, the organs go through an inevitable period of blood flow interruption or ischemia (hot then cold) to ensure their preservation before being allocated to a compatible recipient and then transplanted.
  • Ischemia-reperfusion is one of the main factors causing damage to organs before transplantation, a delayed and / or impaired resumption of organ function, an increased risk of rejection or even reduced graft survival long-term. This results in too much damage to organs that can no longer be transplanted or the need to resort to a new graft because of a functional failure of the graft in the more or less long term.
  • xeno-transplantation organs taken from animals
  • cell therapy are possible, but they may not be available for several years.
  • liver transplantation For example, for liver transplantation, one solution to dealing with organ shortage would be to use "marginal" grafts such as livers with steatosis.
  • Hepatic steatosis is a disease of the liver associated with an overload of lipids, primarily triglycerides, in the cytoplasm of hepatocytes. The prevalence of this pathology is 20% to 30% in developed countries. It is therefore a frequent pathology, the prevalence of which tends to increase with the increase in cases of obesity and diabetes.
  • Two types of hepatic steatosis are observed, micro-vacuolar steatosis with varied etiology and is characterized by the presence of several small lipid vacuoles in the cytoplasm, the presence of which does not induce displacement of the hepatocyte nucleus.
  • the second and most severe type of steatosis is macro-vacuolar steatosis
  • This type of steatosis is characterized by a single large lipid vacuole that displaces the nucleus of hepatocytes.
  • Preservation solutions or rinsing solutions are commonly used to wash the graft from residual blood, to cool the organ or to preserve it, especially during transport.
  • the organ By the time the organ is removed from the donor's body, it is cut off from all vascularity and is subject to hot ischemia. The cells quickly necrotize which impairs the viability of the graft. To limit this phenomenon, the organ is quickly placed in a preservation solution at + 4 ° C. It's about the
  • the role of the preservative fluid is to reduce the impact of ischemia-reperfusion lesions (cell lesions and alloimmune reaction) but also
  • Document WO 00/69259 describes a preservation solution of extracellular type which uses as an oncotic agent a polyethylene glycol of 35,000 Daltons (PEG 35) at a concentration of 0.029 mM, ie Ig.L 1 .
  • This preservation solution is implemented for static hypothermic preservation and has shown properties in the
  • a first possibility for the preservation and transport of the graft consists in immersing the organ to be transplanted in the preservation solution maintained between +2 and
  • An alternative is to perfuse the graft continuously until it is implanted in the recipient (dynamic preservation) in a condition of hypothermia.
  • the principle of dynamic preservation requires the use of an infusion machine (or PM) and is based on a continuous or pulsatile controlled circulation of a perfusate (or solution).
  • the RM3 ® machine is a pulsatile MP marketed by the company IGL and which allows the transport of one or two kidneys. It has a regulated pumping system that mimics the systole and diastole phenomena observed in the heart.
  • the preservative solution used in an infusion machine must be chosen judiciously, especially with regard to its viscosity in order to ensure efficient and continuous infusion of the graft.
  • the Applicant has developed a new generation of solution for the preservation
  • the solution according to the invention ensures better rinsing and / or preservation of the graft making it possible to reduce cellular damage as well as damage to the function of the organ.
  • the solution according to the invention is also effective for rinsing and / or preserving “marginal” grafts. This results in an increase
  • the invention relates to an aqueous preservation solution
  • the polyethylene glycol has a molar concentration of between 0.057 and 0.143 mmol.L 1 .
  • solution is meant a homogeneous mixture, consisting of
  • solvent a single phase (solvent), containing at least one substance (solute) dissolved in the solvent.
  • the term "preservation” denotes the maintenance ex vivo of the viability of the cells of the organ to be transplanted as well as of its physiological functions. In the sense
  • the term "preservation" can be used to refer to the same mechanism.
  • cleaning is meant the action of cleaning the organ to be transplanted after its removal to eliminate residual blood, eliminate products
  • organ to be transplanted or “graft” denote the same object, namely an organ or a tissue to be transplanted from a donor to a recipient by a surgical intervention in order to replace an organ. failing organ.
  • transplantation is meant the transfer of an entire organ from a donor, involving the reestablishment of afferent and efferent vascular continuity of this organ with the circulatory system of the recipient.
  • graft can be used.
  • the solution is of the extracellular type in that it contains a greater concentration of Na + than of K + .
  • the solution according to the invention further comprises glutathione, as an antioxidant, at an advantageously understood concentration
  • Glutathione is an enzyme which participates in the elimination of free radicals (or ROS) which makes it possible to reduce the phenomenon of oxidative stress which causes damage to the organ to be transplanted.
  • the solution according to the invention further comprises zinc ions (Zn 2+ ) at a concentration advantageously between 0.08 mmol.L 1 and 0.210 mmol.L 1 , preferably between 0.08 mmol.L 1 and 0.170 mmol.L 1 , even more advantageously between 0.08 mmol.L 1 and 0.1 mmol.L 1 , for example 0.091 mmol.L 1 .
  • the solution according to the invention further comprises zinc ions (Zn 2+ ) at a concentration advantageously between 0.170 and 0.210 mmol.L 1 , for example 0.191 mmol.L 1 .
  • Zinc plays several roles in cellular metabolism, including being an activating cofactor of the endothelial form of nitric oxide synthase (or eNOS or NOS3). Zinc therefore indirectly participates in increasing the concentration of nitric oxide in the graft.
  • the Zn 2+ ions are provided by a zinc salt, for example zinc gluconate or zinc chloride, preferably zinc chloride.
  • the solution according to the invention further comprises nitrite ions (NO 2 ) at a concentration advantageously between 5 and 100 nmol.L 1 , for example 50 nmol.L 1 .
  • Nitrite is the soluble form of nitrogen monoxide or nitric oxide (NO) which notably induces vasodilation of the endothelium of blood vessels leading to increased blood flow.
  • the NO 2 ions are provided by a nitrite salt, for example nitrite
  • NaNCh sodium (NaNCh), calcium nitrite (Ca (N0 2 ) 2 or potassium nitrite (KNO2) preferably sodium nitrite (NaNCL).
  • the pH of the preservation and / or rinsing solution according to the invention is advantageously between 7.2 and 7.6, for example equal
  • the osmolarity of the solution is advantageously between 250 and 380 mosm.L 1 , for example equal to 290 mosm.L 1 .
  • the solution according to the invention further comprises at least one impermeable anion, at least one sugar, at least one cell membrane stabilizer, a buffer solution and / or at least one source of 'energy.
  • the solution according to the invention comprises, in
  • the solution according to the invention further comprises:
  • the solution according to the invention further comprises:
  • Lactobionic acid at a concentration advantageously between 80 and 120 mmol.L 1 , for example 100 mmol.L 1 ;
  • SO4 2 - sulfate ions
  • MgSCL magnesium sulfate
  • POr - phosphate ions
  • KH2PO4 potassium phosphate
  • composition of the solution according to the invention comprises:
  • composition of the solution according to the invention comprises:
  • composition of the solution according to the invention comprises:
  • composition of the solution according to the invention is a composition of the solution according to the invention.
  • 25 includes:
  • composition of the solution according to the invention comprises:
  • composition of the solution according to the invention comprises:
  • the invention relates to the use of the solution according to the invention for the preservation, advantageously hypothermic, static of an organ to be transplanted.
  • the solution is used at a temperature advantageously between +1 and + 12 ° C, preferably between +2 and + 8 ° C, for example + 5 ° C, for the static preservation of an organ. to transplant.
  • the invention relates to the use of the solution according to the invention for the preservation, advantageously hypothermic, dynamic of an organ to be transplanted.
  • the solution is used at a temperature advantageously between +1 and + 12 ° C, preferably between +2 and + 8 ° C, for example + 5 ° C, for the dynamic preservation of an organ to transplant.
  • the solution according to the invention is used for
  • the solution according to the invention is used for the perfusion of a graft in a pulsatile flow machine.
  • the invention relates to the use of the solution according to the invention for rinsing an organ to be transplanted.
  • the solution is used at a temperature advantageously between +1 and + 12 ° C, preferably between +2 and + 8 ° C, for example + 5 ° C, for rinsing
  • the solution according to the invention is used to rinse the organ to be transplanted and to ensure its preservation, static or dynamic, before transplantation to a recipient.
  • the organ to be transplanted is a healthy or "marginal" organ.
  • the organ to be transplanted is an organ
  • Abdominal preferably the liver, pancreas, kidney or intestines.
  • the liver to be transplanted is a healthy liver or a steatotic liver.
  • the organ to be transplanted is a tissue.
  • a tissue according to the invention is the cornea, bone, skin, blood vessels, tendons or even heart valves.
  • Figure 1 represents the quantification of the activity in aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH 2) after 24 hours of static hypothermic preservation of a liver in a UW ® solution, IGL-0, IGL-1 or according to invention (INV).
  • Figure 2 shows the quantification of transaminases content in the liver tissue after 24 hours of static hypothermic preservation of a liver in a UW ® solution, or IGL-1 according to the invention (INV).
  • FIG. 3 shows the quantification of the content of glutamate dehydrogenase (GLDH) in liver tissue after 24 hours of static hypothermic preservation.
  • FIG. 4 represents the determination of the quantity of cells present in the rinsing effluent from a healthy liver or from a steatotic liver, rinsed with the IGL-1 ® solution or the solution according to the invention (INV) .
  • Figure 5 shows the quantification of the number of red blood cells remaining
  • FIG. 6 shows the evaluation of the activity in 2 aldehyde dehydrogenase (ALDH 2) in the liver after hypothermic preservation with the dynamic PERF-GEN ® solution or the solution according to the invention (INV).
  • FIG. 7 represents the evaluation of the degradation of the hepatic parenchyma by measuring the content of aspartate aminotransferase (ASAT) in the liver after dynamic hypothermic preservation with the PERF-GEN ® solution or the solution according to the invention (INV) .
  • ASAT aspartate aminotransferase
  • Figure 8 represents the evaluation of the degradation of the hepatic parenchyma
  • a solution according to the invention is prepared by mixing the ingredients according to the formulation (for 1 liter) of Table 1:
  • the preparation of the solution consists in dissolving all the ingredients, with magnetic stirring, in an aqueous solution, the pH of the solution obtained is adjusted from 10 to 7.4.
  • the viscosity was determined by the method of the European Pharmacopoeia in chapter 15 2.2.9 “Viscosity - Capillary tube method”.
  • the viscosity of the solution according to the invention is therefore suitable for its use for static (such as IGL-1 ® ) and dynamic (such as Perf-Gen ® ) preservation.
  • liver of normal (healthy) rats and obese rats was collected.
  • UW - Belzer UW ® solution
  • the organ is then stored statically in the rinsing solution (100 mL;
  • ADH 2 Mitochondrial aldehyde dehydrogenase 2
  • ADH2 is a major enzyme in the metabolism of aldehyde which protects against the toxic accumulation of aldehyde at the cellular level, for example, by ensuring the transformation of acetaldehyde into acetic acid.
  • Activation of aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) is associated with
  • IGL-0 IGL-1 ® solution formulated without PEG
  • IGL-1 ® or INV an analysis of the activation of ALDH2 by enzymatic kit was carried out on healthy livers .
  • Transaminases (alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, etc.) are enzymes synthesized by hepatocytes and released in the event of hepatocellular injury or necrosis. The concentration of transaminases is therefore a marker of the effectiveness of liver preservation by a preservation solution.
  • the data show that the transaminase concentration is lower after 24 hours of preservation with the INV solution according to the invention compared to that with the UW ® solution.
  • the INV solution provides better preservation than the
  • Glutamate dehydrogenase is a specific mitochondrial enzyme in the liver which plays an important role in the catabolism of amino acids. She participates in the
  • liver of normal (healthy) and obese rats Chinese rats; steatotic and designated liver
  • UW - Belzer UW ® solution
  • HTK ® preservation solution for histidine-tryptophan-ketoglutarate or Custodiol ® HTK solution
  • the liver is flushed by influx of the flushing solution through the aorta and outflow through the portal vein.
  • the invention on hepatic flushing.
  • the data show that, for the healthy liver, the effluent obtained after rinsing the liver with the INV solution is more concentrated in cells, in this case in red blood cells, than the IGL-1 ® solution at TO, T1 and T2 .
  • the INV effluent is therefore "dirtier", more concentrated.
  • INV The solution of the invention thus ensures better flushing of the liver that IGL-1 ® solution.
  • fatty - steatotic liver tissue
  • the data show that the liver rinsed with the INV solution contains 7 times less red blood cells than the liver rinsed with the HTK ® solution and 2 times less than that rinsed with the IGL-1 ® solution .
  • a hypothermic perfusion machine is used to keep a liver to be transplanted.
  • This device makes it possible to implement the HOPE protocol (Hypothermia Oxygenated Perfusion) which ensures passive oxygenation of the hypothermic perfusion, that is to say without carrier
  • the liver to be transplanted is stored in a preservation solution for 7 hours, then placed in a hypothermic perfusion machine for 1 hour in order to be subjected to the
  • the liver is then reperfused with a Krebs solution in normothermia.
  • the Perf-Gen® solution is one of the prior art solutions used in a hypothermic infusion machine. This solution includes hydroxyethylated starch as an oncotic agent and glucose as an osmotic agent.
  • the concentration of ALDH2 was measured in healthy liver tissue to assess the concentration of ALDH2
  • ASAT aspartate aminotransferase
  • the data show a lower content of ASAT in the liver tissue perfused with the solution according to the invention compared to the use of the solution of the art
  • the GLDH content was measured by enzymatic kit, at the start of the HOPE protocol then every 15 minutes, ie at 0, 15, 30, 45 and 60 minutes.
  • the perfusion with the solution according to the invention of a liver in a hypothermic perfusion machine leads to lower levels of ASAT and GLDH, reflecting a decrease in the degradation of the hepatic tissue compared to the Perf-Gen ® solution. .
  • the solution according to the invention is suitable for use for the static preservation in hypothermia of an organ to be transplanted and / or for the dynamic rinsing of the organ in a hypothermic perfusion apparatus.
  • the INV solution according to the invention is more effective than the solutions of the art
  • INV protects the organ to be transplanted and reduces liver tissue damage caused by ischemia and reperfusion

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

La présente invention concerne une solution aqueuse de préservation et de rinçage d'organe à transplanter comprenant : - des ions sodium (Na+) à une concentration comprise entre 30 et 150 mmol.L-1; - des ions potassium (K+) à une concentration comprise entre 10 et 40 mmol.L-1; - du polyéthylène glycol de masse molaire de 35000 g.mol-1 (PEG 35000) à une concentration comprise entre 2 et 5 g.L-1.

Description

Description
Titre de l’invention : SOLUTION DE PRÉSERVATION ET/OU DE RINÇAGE D’ORGANE A TRANSPLANTER
5 DOMAINE DE L’INVENTION
La présente invention concerne une solution aqueuse de préservation et/ou de rinçage d’un organe à transplanter et son utilisation pour la préservation statique, la préservation dynamique et/ou le rinçage d’un organe à transplanter.
10
ETAT DE LA TECHNIQUE ANTERIEURE
La transplantation d’organe est le dernier recours en cas de défaillance d’un organe vital qui est alors remplacé par un organe sain appelé greffon.
15
Les organes greffés proviennent généralement de sujet en état de mort encéphalique (ou mort cérébrale), dont la circulation et la respiration sont maintenues artificiellement par des procédures de réanimation. En France, la loi indique que tous les individus sont présumés donneurs, c'est-à-dire donneurs d'organes et de tissus, sauf si un individu a
20 exprimé de son vivant son refus d’être prélevé. Un renoncement au prélèvement d’organes peut également être décidé par l’équipe médicale en raison d’antécédents pathologiques du donneur (tumeurs, maladies infectieuses ou autres) ou d’obstacles médicaux. En parallèle, de nombreuses greffes sont réalisées à partir de donneur vivant, par exemple, les greffes rénales.
25
Après avoir été prélevés chez le donneur, les organes sont soumis à une période inévitable d’arrêt de la circulation du sang ou ischémie (chaude puis froide) pour assurer leur préservation avant d’être attribués à un receveur compatible puis transplantés.
30 Dans ce contexte, tous les organes sont exposés aux lésions du syndrome ischémie- reperfusion. Ce syndrome regroupe un ensemble de processus physiopathologiques responsables de lésions au niveau du greffon, notamment une altération des populations cellulaires.
35 L’ischémie-reperfusion est un des principaux facteurs à l’origine d’une atteinte des organes avant transplantation, d’une reprise différée et/ou altérée de la fonction de l’organe, d’un risque accru de rejet ou encore d’une réduction de la survie des greffons à long terme. Il en résulte une atteinte trop importante des organes qui ne peuvent plus être transplantés ou le besoin de recourir à une nouvelle greffe en raison d’une défaillance fonctionnelle du greffon à plus ou moins long terme.
5 En dépit des progrès constants dans le domaine du don d’organe, la liste des personnes en attente d’une greffe d’organe s’allonge, notamment en raison de la réussite de l’activité de transplantation, de ses bénéfices pour les patients et du vieillissement de la population. A ce jour, plus de 20 000 personnes sont en attente d’une greffe d’organe. En 5 ans, ce nombre a augmenté de 17% (Agence de la biomédecine).
10
La carence d’organe disponible en vue d’une transplantation, constitue actuellement un des problèmes majeurs de la santé publique.
Ce constat amène à rechercher d’autres greffons disponibles, voire de nouvelles
15 possibilités thérapeutiques. A titre d’exemple, la xéno-transplantation (organes prélevés chez les animaux) et la thérapie cellulaire sont envisageables mais elles ne seront éventuellement disponibles que dans plusieurs années.
D’autres possibilités plus accessibles et plus rapides à mettre en place consistent à
20 améliorer/adapter la préservation des greffons pour :
- diminuer le nombre de perte de greffons ; et
- pouvoir utiliser des greffons dits « marginaux » généralement trop sensibles, qui se détériorent plus vite que les greffons « sains », au cours de la procédure de transplantation.
25
A titre d’exemple, pour la transplantation hépatique, une solution pour faire face à la pénurie d’organes serait d’utiliser des greffons « marginaux » comme les foies atteints de stéatose.
30 La stéatose hépatique est une pathologie du foie associée à une surcharge de lipides, essentiellement les triglycérides, dans le cytoplasme des hépatocytes. La prévalence de cette pathologie est de 20% à 30% dans les pays développés. Il s’agit donc d’une pathologie fréquente, dont la prévalence tend à augmenter avec l’accroissement des cas d’obésité et de diabète. Deux types de stéatose hépatique sont observés, la stéatose micro-vacuolaire à l’étiologie variée et se caractérise par la présence de plusieurs petites vacuoles lipidiques dans le cytoplasme et dont la présence n’induit pas de déplacement du noyau des hépatocytes. Le second type de stéatose, le plus sévère, est la stéatose macro-vacuolaire
5 dont l’une des étiologies est une consommation excessive d’alcool. Ce type de stéatose se caractérise par une grande vacuole lipidique unique qui déplace le noyau des hépatocytes.
Les foies stéatosiques sont plus sensibles à la préservation statique en hypothermie. En
10 effet, dans ce contexte pathologique, la disponibilité en oxygène est réduite en raison d’anomalie morphologiques des hépatocytes.
Les critères de transplantation ou non des greffons « marginaux » ne sont pas clairs et chaque centre de transplantation possède ses propres paramètres d’évaluation pour
15 choisir de prélever et ensuite d’attribuer ou non un greffon à un receveur.
Les solutions de préservation ou les solutions de rinçage sont couramment utilisées pour laver le greffon du sang résiduel, refroidir l’organe ou le préserver, notamment au cours du transport.
20
Au moment où l’organe est retiré du corps du donneur, il est coupé de toute vascularisation et est soumis à un phénomène d’ischémie chaude. Les cellules se nécrosent rapidement ce qui altère la viabilité du greffon. Pour limiter ce phénomène, l’organe est rapidement placé dans une solution de préservation à +4°C. Il s’agit de la
25 préservation hypothermique statique qui est la méthode de préservation la plus répandue. L’organe peut être maintenu dans cette solution jusqu’au moment de la greffe.
Dans ce contexte, le rôle du liquide de préservation est de diminuer l’impact des lésions d’ischémie-reperfusion (lésions cellulaires et réaction allo-immune) mais également
30 d’assurer une irrigation du greffon pour une élimination quasi-complète du sang, de distribuer de façon homogène l’hypothermie et de limiter les effets délétères engendrés par l’ischémie froide.
Cependant cette méthode assure la préservation des organes pour une période limitée,
35 par exemple moins de 24 heures pour le rein, 8 à 12 heures pour le foie ou encore 4 à 6 heures pour le cœur. Parmi les principales solutions utilisées on retrouve :
- Les solutions pour lesquelles la concentration en potassium (K+) est supérieure à celle en sodium (Na+), dites solutions intracellulaires. A titre d’exemple, on peut citer la solution BELZER UW® (UW®) pour la préservation rénale, hépatique et pancréatique,
5 commercialisée par BRIDGE TO LIFE ;
- Les solutions pour lesquelles la concentration en potassium (K+) est inférieure à celle en sodium (Na+), dites solutions extracellulaires. A titre d’exemple on peut citer le liquide SAINT THOMAS® pour la préservation de greffon cardiaque, commercialisé par LES LABORATOIRES AGUETTANT.
10
Le document WO 00/69259 décrit une solution de préservation de type extracellulaire qui utilise comme agent oncotique un polyéthylène glycol de 35000 Daltons (PEG 35) à une concentration de 0,029 mM soit lg.L 1. Cette solution de préservation est mise en œuvre pour la préservation hypothermique statique et a montré des propriétés dans la
15 protection des cellules endothéliales ainsi que des propriétés antioxydantes pour la préservation rénale et hépatique avant transplantation.
Une première possibilité pour la préservation et le transport de greffon consiste à immerger l’organe à transplanter dans la solution de préservation maintenue entre +2 et
20 +8°C (préservation hypothermique statique) comme mentionné ci-avant. Il n’y a pas de circulation de la solution dans le greffon.
Une alternative consiste à perfuser le greffon de façon continue jusqu’à son implantation chez le receveur (préservation dynamique) en condition d’hypothermie.
25
Le principe de la préservation dynamique nécessite l’utilisation de machine de perfusion (ou MP) et est basé sur une circulation contrôlée continue ou pulsatile d'un perfusât (ou solution).
30 A ce jour, il existe deux types de MP: machine à écoulement continu ou à écoulement pulsatile. Cet écoulement apporte un supplément en nutriments assortis plus ou moins d'oxygène tandis que les déchets toxiques et les radicaux libres produits peuvent être éliminés. A titre d’exemple la machine Lifeport®, commercialisée par ORGAN RECOVERY SYSTEM, est une machine utilisée pour la perfusion hypothermique des greffons rénaux. Une des solutions utilisées avec cette machine est la solution Belzer-MPS®, dérivée de la solution UW®.
5
La machine RM3® est une MP pulsatile commercialisée par la société IGL et qui permet le transport d'un ou deux reins. Elle dispose d'un système de pompage régulé qui mime les phénomènes de systole et de diastole observés au niveau du cœur.
10 La solution de préservation utilisée dans une machine de perfusion doit être choisie judicieusement, notamment par rapport à sa viscosité afin d’assurer une perfusion efficace et continue du greffon.
A ce jour, il est nécessaire de nettoyer l’organe au moyen d’un liquide de rinçage par
15 exemple du type de celui décrit dans le document du Demandeur WO 2012/150392. Ce document décrit une solution de rinçage extracellulaire comprenant une forte proportion de PEG et une quantité de K+ inférieure à 10 mmol.L 1. L’organe est ensuite conservé en choisissant une autre solution qui correspond à une solution de préservation adaptée au système de préservation sélectionné (statique ou dynamique). En outre, il ressort des
20 éléments développés précédemment que la solution de préservation doit également être choisie en fonction de l’organe à transplanter.
En d’autres termes, il n’y a pas de solution adaptée, notamment en termes de formulation et de viscosité, qui permet de l’utiliser pour le rinçage du greffon mais aussi pour la
25 préservation du greffon que ce soit en système statique ou en système dynamique.
Il subsiste donc un besoin évident de mettre au point une solution universelle apte à assurer le rinçage d’un greffon de la même façon que sa préservation efficace via la mise en œuvre des méthodes de préservation statique ou dynamique. En outre, cette solution
30 devrait permettre de rincer et/ou conserver des greffons « marginaux ».
EXPOSE DE L’INVENTION
Le Demandeur a mis au point une nouvelle génération de solution pour la préservation
35 et/ou le rinçage d’organe à transplanter qui permet de résoudre les problèmes de l’art antérieur évoqués précédemment. En particulier, la solution selon l’invention assure un meilleur rinçage et/ou préservation du greffon permettant de diminuer les altérations cellulaires de même que les atteintes de la fonction de l’organe. La solution selon l’invention est également efficace pour le rinçage et/ou la préservation des greffons « marginaux ». Il en résulte une augmentation
5 du nombre de greffons candidats à une transplantation, un rétablissement fonctionnel du greffon plus rapide et plus efficace et une amélioration de la qualité des organes à transplanter.
Contre toute attente, la présence de PEG 35 à une concentration supérieure à lg.L 1 au
10 sein d’une solution de composition spécifique en ions sodium (Na+) et (K+), n’altère pas sa viscosité initiale et en fait une solution utilisable pour la conservation statique de même que dans les machines à perfusion (MP).
Selon un premier aspect, l’invention concerne une solution aqueuse de préservation
15 et/ou de rinçage d’organe à transplanter comprenant :
- des ions sodium (Na+) à une concentration comprise entre 30 et 150 mmol.L 1 ;
- des ions potassium (K+) à une concentration comprise entre 10 et 40 mmol.L 1 ;
- du polyéthylène glycol de masse molaire de 35000 g.mol 1 (PEG 35000) à une concentration massique comprise entre 2 et 5 g.L 1.
20
Ainsi, selon l’invention le polyéthylène glycol a une concentration molaire comprise entre 0,057 et 0,143 mmol.L 1.
An sens de l’invention, par « solution », on désigne un mélange homogène, constitué
25 d’une seule phase (solvant), contenant au moins une substance (soluté) dissoute dans le solvant.
Au sens de l’invention, par « préservation », on désigne le maintien ex vivo de la viabilité des cellules de l’organe à transplanter ainsi que de ses fonctions physiologiques. Au sens
30 de l’invention, le terme « conservation » peut être utilisé pour désigner le même mécanisme.
Au sens de l’invention, par « rinçage », on désigne l’action de nettoyer l’organe à transplanter après son prélèvement pour éliminer le sang résiduel, éliminer les produits
35 de dégradation du métabolisme cellulaire ou catabolites (par exemple, l’endothéline) libérés après l’ischémie chaude ou encore éliminer l’accumulation de fortes quantités de potassium susceptibles de provoquer des troubles du rythme cardiaque chez le receveur. Au sens de l’invention, les termes « organe à transplanter » ou « greffon » désignent le même objet, à savoir, un organe ou un tissu à transplanter d’un donneur à un receveur par une intervention chirurgicale dans le but de remplacer un organe défaillant.
5 Au sens de l’invention, par « transplantation », on désigne le transfert d'un organe entier d'un donneur, impliquant le rétablissement de la continuité vasculaire afférente et efférente de cet organe avec l’appareil circulatoire du receveur. Dans un sens élargi, on pourra employer le terme de « greffe ».
10 Selon un mode de réalisation particulier, la solution est du type extracellulaire en ce qu’elle contient une concentration plus importante de Na+ que de K+.
Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention comprend en outre du glutathion, comme agent antioxydant, à une concentration avantageusement comprise
15 entre 1 et 11 mmol.L 1, par exemple 9 mmol.L 1.
Le glutathion est une enzyme qui participe à l’élimination des radicaux libres (ou ROS) permettant de réduire le phénomène de stress oxydatif à l’origine d’une détérioration de l’organe à transplanter.
20
Selon un mode de réalisation préféré, la solution selon l’invention comprend en outre des ions zinc (Zn2+) à une concentration avantageusement comprise entre 0,08 mmol.L 1 et 0,210 mmol.L 1, de préférence entre 0,08 mmol.L 1 et 0,170 mmol.L 1, encore plus avantageusement entre 0,08 mmol.L 1 et 0,1 mmol.L 1, par exemple 0,091 mmol.L 1.
25
Selon un autre mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention comprend en outre des ions zinc (Zn2+) à une concentration avantageusement comprise entre 0,170 et 0,210 mmol.L 1, par exemple 0,191 mmol.L 1.
30 Le zinc joue plusieurs rôles dans le métabolisme cellulaire, notamment il s’agit d’un cofacteur d’activation de la forme endothéliale de l’oxyde nitrique synthase (ou eNOS ou NOS3). Le zinc participe donc indirectement à l’augmentation de la concentration en oxyde nitrique dans le greffon.
35 Avantageusement, les ions Zn2+ sont apportés par un sel de zinc, par exemple le gluconate de zinc ou le chlorure de zinc, de préférence le chlorure de zinc. Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention comprend en outre des ions nitrites (NO2 ) à une concentration avantageusement comprise entre 5 et 100 nmol.L 1, par exemple 50 nmol.L 1.
5 Le nitrite est la forme soluble du monoxyde d’azote ou oxyde nitrique (NO) qui induit notamment une vasodilatation de l’endothélium des vaisseaux sanguin à l’origine d’une augmentation du débit sanguin.
Avantageusement, les ions NO2 sont apportés par un sel de nitrite, par exemple le nitrite
10 de sodium (NaNCh), le nitrite de calcium (Ca(N02)2 ou le nitrite de potassium (KNO2) de préférence le nitrite de sodium (NaNCL).
Selon un mode de réalisation particulier, le pH de la solution de préservation et/ou de rinçage selon l’invention est avantageusement compris entre 7,2 et 7,6, par exemple égal
15 à 7,4.
Selon un mode de réalisation particulier, l’osmolarité de la solution est avantageusement comprise entre 250 et 380 mosm.L 1, par exemple égale à 290 mosm.L 1.
20 Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention comprend, en outre, au moins un anion imperméant, au moins un sucre, au moins un agent stabilisant de membrane cellulaire, une solution tampon et/ou au moins une source d’énergie.
Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention comprend, en
25 outre :
- du raffînose à une concentration avantageusement comprise entre 25 et 35 mmol.L 1, par exemple 30 mmol.L 1; et de l’allopurinol à une concentration avantageusement comprise entre 0,5 et 1,5 mmol.L 1, par exemple 1 mmol.L 1; ou alternativement
- du mannitol à une concentration avantageusement comprise entre 40 et 80 mmol.L 1,
30 par exemple 60 mmol.L 1.
Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention comprend, en outre :
- du raffînose à une concentration avantageusement comprise entre 25 et 35 mmol.L 1,
35 par exemple 30 mmol.L 1; et de l’allopurinol à une concentration avantageusement comprise entre 0,5 et 1,5 mmol.L 1, par exemple 1 mmol.L 1; ou alternativement - du mannitol à une concentration avantageusement comprise entre 40 et 80 mmol.L 1, par exemple 60 mmol.L 1, et de rhistidine à une concentration avantageusement comprise entre 25 et 35 mmol.L 1, par exemple 30 mmol.L 1.
5 Dans un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention comprend en outre:
- de l’acide lactobionique à une concentration avantageusement comprise entre 80 et 120 mmol.L 1, par exemple 100 mmol.L 1;
- des ions sulfates (SO42 ), de préférence apportés par le sulfate de magnésium (MgSCL), à une concentration avantageusement comprise entre 4 et 6 mmol.L 1, par exemple 5
10 mmol.L 1 ;
- des ions phosphates (POr ), de préférence apportés par le phosphate de potassium (KH2PO4), à une concentration avantageusement comprise entre 20 et 30 mmol.L 1 , par exemple 25 mmol.L 1; et
- de l’adénosine à une concentration avantageusement comprise entre 4 et 6 mmol.L 1,
15 par exemple 5 mmol.L 1.
Dans un mode de réalisation préféré, la composition de la solution selon l’invention comprend :
- du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
20 - du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
- des ions Zn2+ à une concentration de 0,191 mmol.L 1;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ;
- du raffînose à une concentration de 30 mmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
25 - des ions SO4 2 , de préférence apportés par le MgS04, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- des ions PO4 2 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
30 - de l’allopurinol à une concentration de 1 mmol.L 1.
Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition de la solution selon l’invention comprend :
- du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
35 - du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
- des ions Zn2+ à une concentration de 0,091 mmol.L 1;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ; - du raffinose à une concentration de 30 mmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
- des ions SCL2 , de préférence apportés par le MgSCL, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
5 - des ions PO42 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- de l’allopurinol à une concentration de 1 mmol.L 1.
10 Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition de la solution selon l’invention comprend :
- du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
- du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
- des ions Zn2+ à une concentration de 0,191 mmol.L 1 ;
15 - des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ;
- du mannitol à une concentration de 60 mmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
- des ions SO42 , de préférence apportés par le MgSCL, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
20 - des ions PO42 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1.
Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition de la solution selon l’invention
25 comprend :
- du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
- du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
- des ions Zn2+ à une concentration de 0,091 mmol.L 1 ;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ;
30 - du mannitol à une concentration de 60 mmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
- des ions SO42 , de préférence apportés par le MgSCL, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- des ions PO42 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de
35 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1. Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition de la solution selon l’invention comprend :
- du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
- du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
5 - des ions Zn2+ à une concentration de 0,191 mmol.L 1 ;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ;
- du mannitol à une concentration de 60 mmol.L 1 ;
- de l’histidine à une concentration de 30 mmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
10 - des ions SO42 , de préférence apportés par le MgSCL, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- des ions PO4 3 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1.
15
Dans un autre mode de réalisation préféré, la composition de la solution selon l’invention comprend :
- du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
- du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
20 - des ions Zn2+ à une concentration de 0,091 mmol.L 1 ;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ;
- du mannitol à une concentration de 60 mmol.L 1 ;
- de l’histidine à une concentration de 30 mmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
25 - des ions SO42 , de préférence apportés par le MgSCL, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- des ions PO43 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1.
30
Selon un autre aspect, l’invention concerne l’utilisation de la solution selon l’invention pour la préservation, avantageusement hypothermique, statique d’un organe à transplanter.
35 Selon l’invention, la solution est utilisée à une température avantageusement comprise entre +1 et +12°C, de préférence entre +2 et +8°C, par exemple +5°C, pour la préservation statique d’un organe à transplanter. Selon un autre aspect, l’invention concerne l’utilisation de la solution selon l’invention pour la préservation, avantageusement hypothermique, dynamique d’un organe à transplanter.
5 Selon l’invention, la solution est utilisée à une température avantageusement comprise entre +1 et +12°C, de préférence entre +2 et +8°C, par exemple +5°C, pour la préservation dynamique d’un organe à transplanter.
Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention est utilisée pour la
10 perfusion d’un greffon dans une machine à écoulement continu.
Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention est utilisée pour la perfusion d’un greffon dans une machine à écoulement pulsatile.
15 Selon un autre aspect, l’invention concerne l’utilisation de la solution selon l’invention pour le rinçage d’un organe à transplanter.
Selon l’invention, la solution est utilisée à une température avantageusement comprise entre +1 et +12°C, de préférence entre +2 et +8°C, par exemple +5°C, pour le rinçage
20 d’un organe à transplanter.
Selon un mode de réalisation particulier, la solution selon l’invention est utilisée pour rincer l’organe à transplanter et pour assurer sa préservation, statique ou dynamique, avant transplantation à un receveur.
25
Selon un mode de réalisation particulier, l’organe à transplanter est un organe sain ou « marginal ».
Selon un mode de réalisation particulier, l’organe à transplanter est un organe
30 abdominal, de préférence le foie, le pancréas, le rein ou les intestins.
Selon un mode de réalisation particulier, le foie à transplanter est un foie sain ou un foie stéatosique.
35 Selon un autre mode de réalisation, l’organe à transplanter est un tissu. A titre d’exemple, un tissu selon l’invention est la cornée, l’os, la peau, les vaisseaux sanguins, les tendons ou encore les valves cardiaques.
L’invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des figures et des
5 exemples suivants donnés afin d’illustrer l’invention et non de manière limitative.
[Fig. 1] La figure 1 représente la quantification, de l’activité en aldéhyde déshydrogénase-2 (ALDH 2) après 24 heures de préservation hypothermique statique d’un foie dans une solution UW®, IGL-0, IGL-1 ou selon l’invention (INV).
10 [Fig. 2] La figure 2 représente la quantification de la teneur en transaminases dans le tissu hépatique après 24 heures de préservation hypothermique statique d’un foie dans une solution UW®, IGL-1 ou selon l’invention (INV).
[Fig. 3] La figure 3 représente la quantification de la teneur en glutamate déshydrogénase (GLDH) dans le tissu hépatique après 24 heures de préservation hypothermique statique
15 d’un foie dans une solution UW®, IGL-1 ou selon l’invention (INV).
[Fig. 4] La figure 4 représente la détermination de la quantité de cellules présentes dans l’effluent de rinçage d’un foie sain ou d’un foie stéatosique, rincé avec la solution IGL- 1® ou la solution selon l’invention (INV).
[Fig. 5] La figure 5 représente la quantification du nombre de globules rouges restant
20 dans le tissu hépatique après rinçage d’un foie sain ou d’un foie stéatosique, avec la solution UW®, IGL-1® ou la solution selon l’invention (INV).
[Fig. 6] La figure 6 représente l’évaluation de l’activité en aldéhyde déshydrogénase-2 (ALDH 2) dans le foie après préservation hypothermique dynamique avec la solution PERF-GEN® ou la solution selon l’invention (INV).
25 [Fig. 7] La figure 7 représente l’évaluation de la dégradation du parenchyme hépatique par mesure de la teneur en aspartate aminotransférase (ASAT) dans le foie après préservation hypothermique dynamique avec la solution PERF-GEN® ou la solution selon l’invention (INV).
[Fig. 8] La figure 8 représente l’évaluation de la dégradation du parenchyme hépatique
30 par mesure de la teneur en glutamate déshydrogénase (GLDH) dans le foie après préservation hypothermique dynamique avec la solution PERF-GEN® ou la solution selon l’invention (INV). EXEMPLE DE REALISATION DE L’INVENTION
1/ Préparation de la solution de préservation et de rinçage selon l’invention
Une solution selon l’invention est préparée par mélange des ingrédients selon la 5 formulation (pour 1 litre) du Tableau 1 :
Tableau 1]
Figure imgf000015_0001
La préparation de la solution consiste à dissoudre l’ensemble des ingrédients, sous agitation magnétique, dans une solution aqueuse, le pH de la solution obtenue est ajusté 10 à 7,4.
2/ Comparaison de la viscosité des solutions de l’art antérieur par rapport à la solution selon l’invention
La viscosité a été déterminée par la méthode de la pharmacopée européenne du chapitre 15 2.2.9 « Viscosité - Méthode au tube capillaire ».
Tableau 2]
Figure imgf000015_0002
Ces résultats montrent que, de manière inattendue, l’augmentation importante de la concentration en PEG dans la solution INV par rapport à la solution IGL-1®, n’induit pas une augmentation de la viscosité de la solution.
5 La viscosité de la solution selon l’invention est donc adaptée à son utilisation pour la préservation statique (comme IGL-1®) et dynamique (comme Perf-Gen®).
3/ Préservation statique d’un foie en condition d’hypothermie
Pour apprécier l’efficacité de la solution de préservation selon l’invention des
10 évaluations ont été menées sur des foies sains ou atteints de stéatose.
3.1/ Conditions expérimentales
Le foie de rats normaux (sains) et de rats obèse (rats Zucker ; foie stéatosique et désigné par le terme « Ob » ou « fatty » dans les figures) âgés de 10 à 12 semaines a été prélevé
15 puis conservé selon les techniques connues de l’homme du métier.
Ces expériences ont pour but de comparer les performances de la solution selon l’invention (Solution INV) sur la préservation en hypothermie du foie ex vivo par rapport à une solution IGL-0 (solution IGL-1® formulée sans PEG) ou à des solutions de l’art
20 antérieur, à savoir :
- Solution Belzer UW® (ci-après dénommée UW);
- Solution IGL-1®.
L’organe est ensuite conservé de manière statique dans la solution de rinçage (100 mL ;
25 HTK®, IGL-1® ou INV) pendant 24h à 4°C.
Différents paramètres ont été mesurés pour évaluer l’efficacité de la solution selon l’invention sur la préservation hépatique en condition d’hypothermie.
30 3.2/ Quantification de la teneur en aldéhyde déshydrogénase-2 dans le tissu hépatique L'aldéhyde déshydrogénase mitochondriale 2 (ALDH 2) est une enzyme majeure du métabolisme de l’aldéhyde qui protège contre l'accumulation toxique d'aldéhyde au niveau cellulaire, par exemple, en assurant la transformation de l’acétaldéhyde en acide acétique. L’activation de l’aldéhyde déshydrogénase-2 (ALDH2) est associée à une
35 protection des cellules de l’organe à transplanter. Après 24h de préservation dans les solutions UW®, IGL-0 (solution IGL-1® formulée sans PEG), IGL-1® ou INV une analyse de l’activation de l’ALDH2 par kit enzymatique a été faite sur des foies sains.
5 Les résultats sont représentés par la figure 1.
Les données montrent que la préservation du foie dans une solution INV induit une augmentation de l’activité ALDH2 dans le tissu par rapport aux solutions IGL-0, IGL- 1® et UW®. Il en résulte une protection de l’organe contre les dommages liés l’ischémie.
10
La formulation des solutions IGL-0 et UW est exempte de PEG. Ces résultats montrent donc que le PEG 35 utilisé à une concentration selon l’invention dans la solution INV assure une meilleure protection de l’organe (valeur de p < 0,05).
15 3.3/ Quantification de la teneur en transaminases dans le tissu hépatique Les transaminases (alanine aminotransférase, aspartate aminotransférase...) sont des enzymes synthétisées par les hépatocytes et relâchées en cas de lésion ou nécrose hépatocellulaire. La concentration en transaminases est donc un marqueur de l’efficacité de la préservation du foie par une solution de préservation.
20
Après 24h de préservation dans les solutions UW®, IGL-1® ou INV une analyse quantitative des taux de transaminases par kit enzymatique a été faite sur des foies stéatosiques.
25 Les résultats sont représentés par la figure 2.
Les données montrent que la concentration en transaminases est plus faible après 24h de préservation avec la solution INV selon l’invention par rapport à celle avec la solution UW®. En d’autres termes, la solution INV assure une meilleure préservation que la
30 solution UW®.
3.4/ Quantification de la teneur en glutamate déshydrogénase dans le tissu hépatique La glutamate déshydrogénase (GLDH) est une enzyme mitochondriale spécifique du foie qui joue un rôle important dans le catabolisme des acides aminés. Elle participe à la
35 désamination de l’acide glutamique (ou glutamate) en acide a-cétoglutarate. Une augmentation de la concentration sérique en GLDH indique une dégradation du parenchyme hépatique et plus spécifiquement une dégradation de la mitochondrie. Après 24h de préservation dans les solutions UW®, IGL-1® ou INV une analyse quantitative des taux de GLDH par kit enzymatique a été faite sur des foies stéatosiques.
Les résultats sont représentés par la figure 3.
5
Les données montrent que la concentration en GLDH est 2,5 fois plus faible après 24h de préservation avec la solution INV par rapport à celle avec la solution IGL-1® et 5 fois plus faible qu’avec la préservation avec la solution UW®. Ces résultats indiquent que la solution INV assure une meilleure préservation du foie à transplanter que des solutions
10 de l’art antérieur.
4/ Rinçage d’un foie à transplanter
4 1/ Conditions expérimentales
Le foie de rats normaux (sains) et de rats obèses (rats Zucker ; foie stéatosique et désigné
15 par le terme « Ob » ou « fatty » dans les figures) âgés de 10 à 12 semaines a été prélevé puis lavé selon les techniques connues de l’homme du métier.
Ces expériences ont pour but de comparer les performances de rinçage de la solution selon l’invention (Solution INV) par rapport à celles des solutions de l’art antérieur, à
20 savoir :
- Solution Belzer UW® (ci-après dénommée UW);
- Solution de préservation HTK® (pour histidine-tryptophane-cétoglutarate ou solution de Custodiol® HTK) ;
- Solution IGL-1®.
25
Le foie est rincé par influx de la solution de rinçage par l’aorte et efflux par la veine porte.
Différents paramètres ont été mesurés pour évaluer l’efficacité de la solution selon
30 l’invention sur le rinçage hépatique.
4 2/ Détermination de la quantité de cellules présentes dans l’effluent de rinçage du tissu hépatique
Les performances de rinçage de la solution selon l’invention (INV) sont évaluées à :
35 - T0 (dissection aortique après que le volume total de rinçage soit passé par l’aorte dans tous les groupes expérimentaux à l’exception de HTK) ;
- Tl (après que le volume de rinçage total soit passé par l’aorte dans le groupe HTK) ; - T2 (après que le volume total de rinçage soit passé par la veine porte) ; et
- T24 (24 heures post-ischémie), sur des foies sains et stéatosiques, en comparaison avec la solution IGL-1®.
5 Les résultats sont représentés par la figure 4.
Les données montrent que, pour le foie sain, l’effluent obtenu après le rinçage du foie avec la solution INV est plus concentré en cellules, en l’espèce en globules rouges, que la solution IGL-1® à TO, Tl et T2. L’effluent INV est donc plus « sale », plus concentré
10 en globules rouges, que l’effluent d’ IGL-1 tout au long de la procédure de prélèvement du foie. La solution INV selon l’invention assure donc un meilleur rinçage du foie que la solution IGL-1®.
De façon connue de l’homme du métier, le rinçage d’un foie stéatosique est moins
15 efficace que celui d’un foie sain en raison de l’atteinte cellulaire et tissulaire. Les résultats montrent que la solution INV induit une diminution de la concentration en cellules dans l’effluent au cours du temps. Ces données traduisent donc que la solution selon l’invention assure un rinçage efficace du foie stéatosique.
20 4 3/ Quantification du nombre de globules rouges présents dans le tissu hépatique après rinçage
Une analyse histologique a été menée afin de quantifier le nombre de globules rouges restants dans :
- le tissu hépatique sain, après prélèvement et rinçage avec les solutions HTK®, IGL-1
25 et INV ; et
- le tissu hépatique stéatosique (« fatty »), après prélèvement et rinçage avec les solutions UW et INV.
Les résultats sont représentés par la figure 5.
30
Concernant le foie sain, les données montrent que le foie rincé avec la solution INV contient 7 fois moins de globules rouges que le foie rincé avec la solution HTK® et 2 fois moins que celui rincé avec la solution IGL-1®.
35 Concernant le foie stéatosique, les données montrent que le foie rincé avec la solution INV contient plus d’ 1,5 fois moins de globules rouges que le foie rincé avec la solution UW®. Ces résultats confirment que la solution selon l’invention assure un meilleur rinçage hépatique que les solutions de l’art antérieur.
5/ Perfusion dynamique d’un foie
5 5.1/ Perfusion dynamique en condition d’hypothermie d’un foie
Une machine de perfusion hypothermique est utilisée pour conserver un foie à transplanter cette appareillage permet de mettre en œuvre le protocole HOPE (Hypothermie Oxygenated Perfusion ou perfusion oxygénée hypothermique) qui assure une oxygénation passive de la perfusion hypothermique, c'est-à-dire sans transporteur
10 de l'oxygène, ce qui protège l'intégrité mitochondriale, et permet de diminuer les lésions d'ischémie-rep erfusion hépatique .
Le foie à transplanter est conservé dans une solution de préservation pendant 7h, puis placé dans une machine de perfusion hypothermique pendant lh afin d’être soumis au
15 protocole HOPE. Le foie est ensuite reperfusé avec une solution Krebs en normothermie.
La solution Perf-Gen® est une des solutions de l’art antérieur utilisée dans une machine de perfusion hypothermique. Cette solution comprend de l’amidon hydroxyéthylé comme agent oncotique et du glucose comme agent osmotique.
20
Ces expériences ont pour but de comparer les performances de la solution selon l’invention (Solution INV) par rapport à la solution Perf-Gen®.
Différents paramètres ont été mesurés pour évaluer l’efficacité de la solution selon
25 l’invention sur la préservation hépatique en condition de perfusion dynamique en hypothermie :
5.2/ Evaluation de la teneur en ALDH2 dans le tissu hépatique
La concentration en ALDH2 a été mesurée dans le tissu hépatique sain pour évaluer les
30 propriétés de la protection des cellules de l’organe à transplanter de la solution INV utilisée dans un appareil de perfusion selon le protocole HOPE (voir point 3.4), par rapport à la solution Perf-Gen®.
Les résultats sont représentés par la figure 6.
35 Les données montrent que la solution INV selon l’invention induit une activité ALDH2 significativement supérieure par rapport à celle de la solution Perf-Gen® après une perfusion dynamique en hypothermie.
5 5.3/ Evaluation de la dégradation du parenchyme hépatique 5.3.1/ Aspartate aminotransférase
La teneur en aspartate aminotransférase (ASAT), un type de transaminase particulier, a été mesurée par kit enzymatique, lh après avoir été placé sous protocole HOPE (voir point 3.4).
10
Les résultats sont représentés par la figure 7.
Les données montrent une plus faible teneur en ASAT dans le tissu hépatique perfusé avec la solution selon l’invention en comparaison de l’utilisation de la solution de l’art
15 antérieur.
5.3.2/ GLDH
La teneur en GLDH a été mesurée par kit enzymatique, au lancement du protocole HOPE puis toutes les 15 minutes, soit à 0, 15, 30, 45 et 60 minutes.
20
Les résultats sont représentés par la figure 8.
Les données montrent que la perfusion avec la solution INV assure une diminution de la teneur en GLDH par rapport à la solution Perf-Gen®.
25
En conclusion, la perfusion avec la solution selon l’invention d’un foie dans une machine à perfuser hypothermique conduit à de plus faibles teneurs en ASAT et GLDH traduisant une diminution de la dégradation du tissu hépatique par rapport à la solution Perf-Gen®.
30 6/ Conclusion
La solution selon l’invention est adaptée à une utilisation pour la préservation statique en hypothermie d’un organe à transplanter et/ou pour le rinçage dynamique de l’organe dans un appareil de perfusion hypothermique. En outre, dans ces 2 contextes d’utilisation, la solution INV selon l’invention est plus efficace que les solutions de l’art
35 antérieur. INV permet de protéger l’organe à transplanter et de diminuer les dommages du tissu hépatique causés par l’ischémie et la reperfusion

Claims

REVENDICATIONS
1. Solution aqueuse de préservation et/ou de rinçage d’organe à transplanter comprenant :
5 - des ions sodium (Na+) à une concentration comprise entre 30 et 150 mmol.L 1 ;
- des ions potassium (K+) à une concentration comprise entre 10 et 40 mmol.L 1 ;
- du polyéthylène glycol de masse molaire de 35000 g.mol 1 (PEG 35000) à une concentration comprise entre 2 et 5 g. L 1.
10 2. Solution selon la revendication 1, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre du glutathion, comme agent antioxydant, à une concentration comprise entre 1 et 11 mmol.L 1.
3. Solution selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle 15 comprend en outre des ions zinc (Zn2+) à une concentration comprise entre 0,08 et
0,210 mmol.L 1.
4. Solution selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre des ions nitrites (NO2 ) à une concentration comprise entre 5 et
20 lOO nmol.L 1.
5. Solution selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le pH est compris entre 7,2 et 7,6, de préférence égal à 7,4.
25 6. Solution selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre un anion imperméant, un sucre, un agent stabilisant de membrane cellulaire, une solution tampon et/ou une source d’énergie.
7. Solution selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle 30 comprend en outre :
- du raffïnose à une concentration comprise entre 25 et 35 mmol.L 1 et de l’allopurinol à une concentration comprise entre 0,5 et 1,5 mmol.L 1 ; ou
- du mannitol à une concentration comprise entre 40 et 80 mmol.L 1, avantageusement du mannitol à une concentration comprise entre 40 et 80 mmol.L 1 et de rhistidine à une concentration comprise entre 25 et 35 mmol.L 1.
8. Solution selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle
5 comprend en outre:
- de l’acide lactobionique à une concentration comprise entre 80 et 120 mmol.L 1 ;
- des ions sulfates (SO42 ), de préférence apportés par le sulfate de magnésium (MgSCL), à une concentration comprise entre 4 et 6 mmol.L 1 ;
- des ions phosphates (POr ), de préférence apportés par le phosphate de potassium
10 (KH2PO4), à une concentration comprise entre 20 et 30 mmol.L 1 ; et
- de l’adénosine à une concentration comprise entre 4 et 6 mmol.L 1.
9. Solution selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend:
15 - du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
- du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
- des ions Zn2+ à une concentration de 0,191 mmol.L 1 ;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ;
- du raffînose à une concentration de 30 mmol.L 1 ;
20 - de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
- des ions SO4 2 , de préférence apportés par le MgS04, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- des ions PO4 2 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de 25 mmol.L 1 ;
25 - de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- de l’allopurinol à une concentration de 1 mmol.L 1.
10. Solution selon l’une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu’elle comprend:
- du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
30 - du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
- des ions Zn2+ à une concentration de 0,191 mmol.L 1 ;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ; - du mannitol à une concentration de 60 mmmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
- des ions SCL2 , de préférence apportés par le MgS04, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
5 - des ions PO4 2 , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1.
11. Solution selon l’une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu’elle comprend:
10 - du PEG 35000 à une concentration de 5 g.L 1 ;
- du glutathion à une concentration de 9 mmol.L 1 ;
- des ions Zn2+ à une concentration de 0,191 mmol.L 1 ;
- des ions NO2 à une concentration de 50 nmol.L 1 ;
- du mannitol à une concentration de 60 mmol.L 1 ;
15 - de l’histidine à une concentration de 30 mmol.L 1 ;
- de l’acide lactobionique à une concentration de 100 mmol.L 1 ;
- des ions SO42 , de préférence apportés par le MgSCL, à une concentration de 5 mmol.L 1 ;
- des ions PO4' , de préférence apportés par le KH2PO4, à une concentration de
20 25 mmol.L 1 ;
- de l’adénosine à une concentration de 5 mmol.L 1.
12. Utilisation d’une solution selon l’une des revendications 1 à 10, pour la préservation statique d’organe à transplanter.
25
13. Utilisation d’une solution selon l’une des revendications 1 à 10, pour la préservation dynamique d’organe à transplanter.
14. Utilisation d’une solution selon l’une des revendications 1 à 10, pour le rinçage
30 d’organe à transplanter.
15. Utilisation selon l’une des revendication 11 à 13, caractérisée en ce que l’organe à transplanter est un organe abdominal, de préférence le foie, le pancréas, le rein ou les intestins.
PCT/FR2020/051589 2019-09-27 2020-09-14 Solution de préservation et/ou de rinçage d'organe á transplanter WO2021058892A1 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20781054.0A EP4033898A1 (fr) 2019-09-27 2020-09-14 Solution de préservation et/ou de rinçage d'organe á transplanter

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1910747A FR3101227B1 (fr) 2019-09-27 2019-09-27 Solution de préservation et/ou de rincage d’organe a transplanter
FR1910747 2019-09-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021058892A1 true WO2021058892A1 (fr) 2021-04-01

Family

ID=69104706

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2020/051589 WO2021058892A1 (fr) 2019-09-27 2020-09-14 Solution de préservation et/ou de rinçage d'organe á transplanter

Country Status (4)

Country Link
US (1) US11213026B2 (fr)
EP (1) EP4033898A1 (fr)
FR (1) FR3101227B1 (fr)
WO (1) WO2021058892A1 (fr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11452288B1 (en) 2022-03-08 2022-09-27 Terry Earl Brady Innocuous sterilant using hemocyanin and functionalized fullerenes with broad-spectrum intracellular and interstitial microbiocidal and radical scavenging effects for packaged matter, biologics and organics including liquids, gases, tissue, organs, cells, and limbs with copper mediated oxygenation for viability and preservation

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000069259A1 (fr) 1999-05-18 2000-11-23 Cair L.G.L Solution aqueuse de conservation de tissus et d'organes
WO2012150392A2 (fr) 2011-05-02 2012-11-08 Groupe Igl Solution de rincage de greffon ou de tissu et procede de rincage dudit greffon ou tissu avant revascularisation

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2330404B1 (es) * 2008-05-19 2010-09-22 Universidad De Barcelona Solucion acuosa para la preservacion de tejidos y organos.
US10433538B2 (en) * 2012-10-12 2019-10-08 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Compositions and methods for organ preservation

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000069259A1 (fr) 1999-05-18 2000-11-23 Cair L.G.L Solution aqueuse de conservation de tissus et d'organes
WO2012150392A2 (fr) 2011-05-02 2012-11-08 Groupe Igl Solution de rincage de greffon ou de tissu et procede de rincage dudit greffon ou tissu avant revascularisation

Also Published As

Publication number Publication date
FR3101227A1 (fr) 2021-04-02
US11213026B2 (en) 2022-01-04
FR3101227B1 (fr) 2021-09-10
US20210092947A1 (en) 2021-04-01
EP4033898A1 (fr) 2022-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1809101B1 (fr) Composition pour la préservation et la perfusion à froid d&#39;organes
EP1047299B1 (fr) Solution de perfusion et/ou de conservation et/ou de reperfusion lors de la transplantation d&#39;organes
US6024698A (en) Apparatus for monitoring functional characteristics of an organ intended for transplantations
US20020164795A1 (en) Storage agent for preservation of an animal cell, tissue or organ, and preserved process of the same
FR2625073A1 (fr) Liquide de perfusion pour la conservation d&#39;organes
WO2000064254A1 (fr) Nouvelle solution de preservation d&#39;organes
FR2919785A1 (fr) Utilisation d&#39;une globine, d&#39;un protomere de globine ou d&#39;une hemoglobine extracellulaire pour la preservation d&#39;organes, de tissus, ou de cellules d&#39;organes ou de tissus, ou de culture de cellules
JP6292640B2 (ja) 臓器保存液
EP1178726B1 (fr) Solution aqueuse de conservation de tissus et d&#39;organes
Daniel et al. Extracorporeal perfusion of isolated organs of large animals-Bridging the gap between in vitro and in vivo studies
WO2021058892A1 (fr) Solution de préservation et/ou de rinçage d&#39;organe á transplanter
Minor et al. Evaluation of antioxidant treatment with superoxide dismutase in rat liver transplantation after warm ischemia
Herrmann et al. Preservation of canine kidneys: By hypothermia and low flow perfusion with bloodless perfusate
US20020115593A1 (en) Organ and biological tissue preservation machine perfusion solution
US20220087252A1 (en) Solution for preserving and/or rinsing an organ to be transplanted
EP2704559B1 (fr) Solution de rincage de greffon ou de tissu et procede de rincage dudit greffon ou tissu avant revascularisation
WO2021183653A1 (fr) Compositions pour prolonger la conservation viable et la durée de conservation d&#39;organes et de tissus
EP1997374B1 (fr) Procédé de rinçage et de conservation d&#39;un organe en vue de sa transplantation et solution mise en oeuvre dans ce procédé
JPH08325101A (ja) 動物組織保存方法
US20100311035A1 (en) Preservation solution for organs and biological tissues
JPH08217601A (ja) 生物組織保存方法および潅流液
Stubenitsky et al. Prospective evaluation of renal function

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20781054

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2020781054

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020781054

Country of ref document: EP

Effective date: 20220428