WO2021054864A1 - Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1н-селеноксантена с в-циклодекстрином для коррекции нарушений сперматогенеза - Google Patents
Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1н-селеноксантена с в-циклодекстрином для коррекции нарушений сперматогенеза Download PDFInfo
- Publication number
- WO2021054864A1 WO2021054864A1 PCT/RU2020/050223 RU2020050223W WO2021054864A1 WO 2021054864 A1 WO2021054864 A1 WO 2021054864A1 RU 2020050223 W RU2020050223 W RU 2020050223W WO 2021054864 A1 WO2021054864 A1 WO 2021054864A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- spermatogenesis
- selenoxanthene
- octahydro
- phenyl
- drug
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D345/00—Heterocyclic compounds containing rings having selenium or tellurium atoms as the only ring hetero atoms
Definitions
- the invention relates to medicine, namely to andrology, and can be used in pharmacology for the correction of spermatogenesis disorders caused by cytostatic effects.
- the invention also relates to veterinary medicine and can be used to treat fertile mammals.
- cytostatics regardless of their mechanism of action, have a pronounced toxic effect on actively dividing normal (not damaged by a tumor) body tissues.
- the latter include the spermatogenic epithelium of the male gonads [Gershanovich M.L. Complication of chemotherapy and hormone therapy of malignant tumors. - M. Medicine, 1982. - P.51-80], in which, due to constant cell division (spermatogonia and spermatocytes), the maturation of male germ cells occurs - spermatogenesis.
- Violation of spermatogenesis observed against the background of cytostatic exposure, by etiology, pathogenesis, differs from other types of pathological processes that are accompanied by inhibition of spermatogenesis (trauma, inflammation, endocrine disorders, genetic diseases).
- Irreversible changes are based on a damaging effect on the source of the proliferative pool of spermatogenesis - stem spermatogonia. Irreversible changes in the male gonads can significantly reduce the quality of life of young patients, since the state of their reproductive function, taking into account its biological, social, psychological significance, is an important factor in life.
- non-glycosylated protein consisting of 175 amino acids, produced by a laboratory strain of the bacterium Escherichia coli, into which the gene of granules of human ocyte colony-stimulating factor is introduced by genetic engineering methods;
- Irreversible changes in the convoluted seminiferous tubule, leading to pathozoospermia may be associated with depletion of the proliferative pool of spermatogenesis, the source of which is the population of spermatogonia, namely, stem (reserve) cells
- stem (reserve) cells the source of which is the population of spermatogonia, namely, stem (reserve) cells
- the technical problem to be solved by the claimed invention is the expansion of the arsenal of means intended for the correction of spermatogenesis disorders caused by cytostatic effects by enhancing the processes of reparative regeneration of testicular tissue while reducing the number of the cell population of rapidly renewing and reserve (stem) spermatogonia.
- the technical result consists in the implementation of the proposed means that provide correction of spermatogenesis disorders caused by cytostatic effects.
- the present invention proposes the use of 9-phenyl-2,3,4,5,6,7,8,9-octahydro-1 // - selenoxanthene as a means for correcting spermatogenesis disorders, caused by cytostatic effects, due to the enhancement of the processes of reparative regeneration of testicular tissue.
- the proposed pharmaceutical composition for the correction of disorders of spermatogenesis caused by cytotoxic effects which contains as an active component 9-phenyl-2,3,4,5,6,7,8,9-octahydro-1 // - selenoxanthene in an effective amount.
- the active component of the pharmaceutical composition for the correction of spermatogenesis disorders caused by cytotoxic effects 9-phenyl-2,3,4,5,6,7,8,9-octahydro-1H-selenoxanthene can be presented in the form of a clathrate complex with b-cycle o dextrin or may additionally contain b-cyclodextrin in ratios from 1: 1 to 1:10.
- the proposed drug for the correction of disorders of spermatogenesis caused by cytotoxic effects which contains the specified pharmaceutical composition as an active component.
- the specified drug can be used in the form of tablets containing 9-phenyl-2,3,4,5,6,7,8,9-octahydro-1H-selenoxanthene from 2 to 10%, and the rest is one or more fillers ( and).
- tablets can be formed by pressing or molding.
- the drug can also be used in the form of gelatin capsules, with the following ratio of components:
- the drug can be made in the form of solutions, emulsions, suspensions, etc., with an active ingredient content of 0.025 to 1%; the rest is filler (s) or carrier (s).
- the proposed invention can be used as a means for correcting disorders of spermatogenesis caused by cytotoxic effects.
- the proposed tool provides an enhancement of the processes of reparative regeneration of testicular tissue while reducing the number of the cell population of rapidly renewing and reserve (stem) spermatogonia.
- the animals were quarantined in the vivarium for 5 days. Further, the body weight of the animals and their distribution into groups were determined. "Paclitaxel” was administered to 30 male rats of the experimental groups once intravenously at the maximum permissible dose (MTD) - 5.0 mg / kg of body weight. The dose of "Paclitaxel” was selected taking into account the experience of clinical use and was calculated for animals by the method of graphical probit analysis when observing them for 30 days.
- MTD maximum permissible dose
- paraffin sections were prepared. Dewaxed 5 ⁇ m sections were stained with hematoxylin-eosin. On a section of the testis, the following was determined: the number of the cell population of spermatogonia, the number of Sertoli and Leydig cells [Sanotskiy IV, Fomenko VI Long-term consequences of the effect of chemical compounds on the body. - M.: Nauka, 1979. -210s].
- the endocrine activity of the testis was calculated as the ratio of the number of Leydig cells to Sertoli cells. Based on the count of Sertoli cells, the degree of maturity of the spermatogenic layer was calculated [Sukhorukov VS, Shamshad DS.
- the duration of spermatogenesis in rats was taken into account, which is 3 months.
- the period of 2 months after the administration of the drug corresponds, in terms of the time of manifestation, to the effect on actively renewing spermatogonia, 3 months - on the stem (reserve spermatogonia, which divide when damaged).
- “Paclitaxel” was injected intravenously, "Neupogen” - subcutaneously, which corresponds to the methods of their use in the clinic.
- the “complex” was administered intravascularly, which corresponds to the intended clinical use - oral administration.
- the dose and mode of administration of the drug "Neupogen” are based on data obtained in studies on the stimulating effect of the drug on the regenerative processes in the testes [Borovskaya TG, Dygai AM, Zhdanov V.V., Rumpel O.A., Pakhomova A V.V., Perova A.V., Zyuzkov G.N., Goldberg V.E. - Patent for invention of the Russian Federation N ° 2406527. Method for correcting spermatogenesis disorders caused by cytostatic effects. - 2010].
- the rats were randomized into groups based on their body weight:
- Rats (n 10) were injected with "Paclitaxel" once intravenously at the maximum tolerated dose (MID) - 5.0 mg / kg body weight and distilled water;
- the data obtained indicate that the "Complex" drug, like the reference drug, has the ability to stimulate the processes of reparative regeneration of spermatogenic tissue. Of course, this should lead to an increase in the productivity of spermatogenesis 3 months after the administration of the cytostatic drug. Judging by the percentage of the background, the degree of maturity of the spermatogenic layer in rats, who received G-CSF, was higher than that when using the drug "Complex". Since this indicator is calculated based on the number of Sertoli cells, the observed effect of G-CSF is the result of a significant increase in their number compared to the background.
- the percentage of mobile forms in the group of rats receiving the "Complex” drug in both studied doses (0.3 and 1.0 mg / kg) 1 month after administration of "Paclitaxel” was at the level of control values.
- the introduction of the reference drug (G-CSF) led to a statistically significant increase in the percentage of mobile forms compared to the control, reaching background values.
- the data obtained indicate that the "Complex” drug led to an increase in the productivity of spermatogenesis, the effectiveness of which, judging by the ACS, was higher than that of the reference drug. In terms of sperm motility, however, the reference drug, G-CSF, turned out to be more effective.
- the spermatogenic epithelium in the "Complex" administration groups looked less sparse than in the control (the single cytostatic drug administration group). Between the tubules, Leydig cells were clearly detected, in an amount close to normal.
- testicular insufficiency simulates testicular insufficiency in the testes of rats, caused by the depletion of the spermatogonia population (2 months - failure of rapidly renewing spermatogonia, 3 months - failure of stem spermatogonia).
- Testicular insufficiency is evidenced by a decrease in the productivity of spermatogenesis (indicator - ACS).
- Evidence that this is due to the depletion of the sources of the proliferative pool of spermatogenesis is a decrease in the number of spermatogonia 2 and 3 months after cytostatic exposure.
- the formation of new spermatogonia in the convoluted seminiferous tubule is limited by the number of cells of the microenvironment, which do not multiply in mature tubules.
- Reparative regeneration of spermatogenic tissue occurs only through the formation of new convoluted seminiferous tubules from the regenerative zone containing Sertoli cells and primary reproductive determinants that subsequently become spermatogonia.
- the newly formed seminiferous tubules are characterized by an increased content of Sertoli cells, which does not limit the reproduction of spermatogonia.
- the criterion for the effectiveness of reparative tissue regeneration is, first of all, the degree of maturity of the spermatogenic layer.
- Sertoli cells does not limit the reproduction of spermatogonia.
- Their number on the background of the introduction of the drug "Complex" in both doses increased (period 2 months - compared with the control; period -3 months - compared with control and background).
- the comparison drug led to a significant increase in this indicator compared to the background only 2 months after the introduction of "Paclitaxel”.
- the proposed invention allows for an effective correction of spermatogenesis disorders caused by cytotoxic effects using the "Complex" by stimulating the reparative processes of testicular tissue as a whole, leading to the formation of new sources of the proliferative pool of spermatogenesis.
- the proposed drug expands the arsenal of means intended in andrology for the correction of spermatogenesis disorders caused by cytotoxic effects, by enhancing the processes of reparative regeneration of testicular tissue.
- solid dosage forms include, for example, tablets, pills, gelatin capsules, etc.
- liquid dosage forms for injection and parenteral administration include solutions, emulsions, suspensions, etc.
- Compositions are generally prepared using standard procedures involving mixing the active compound with a liquid or micronized solid carrier.
- the finished medicinal product according to the invention in the form of tablets contains from 2 to 10% of the active compound and the excipient (s) or carrier (s).
- the following are used as such for tablets: a) diluents: beet sugar, lactose, glucose, sodium chloride, sorbitol, mannitol, glycol, disubstituted calcium phosphate; b) binders: magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, carboxymethylcellulose and polyvinyl pyrrole and don; c) disintegrants: dextrose, agar, alginic acid or its salts, starch, tween.
- a tablet can be formed by pressing or molding the active ingredient with one or more additional ingredients.
- the production of compressed tablets is carried out in a special installation.
- the active ingredient in free form such as powder or granules, in quantities of 20 g or 50 g or 100 g (the amount of substance required to obtain 10,000 tablets) is mixed with a binder - tragacanth (200 g), mixed with a diluent - lactose ( 530 g or 500 g or 450 g), a disintegrant - alginic acid (200 g) and a perfume - citric acid (50 g) are added to the mixture.
- gelatin capsules additional colorants and stabilizers are usually used. Used as dyes: tetrazine, indigo; as stabilizers can be presented: sodium metabisulfite, sodium benzoate.
- the proposed gelatin capsules contain from 2 to 10% of the active ingredient.
- 1 capsule 10 mg contains:
- the active ingredient in free form such as powder or granules, in quantities of 20 g or 50 g or 100 g (the amount of the substance required to obtain 10,000 capsules) is mixed with the substance b-cyclodextrin (betadex) (1880 g or 1850 g or 1800 d).
- injectable forms of the composition are preferably isotonic and oily solutions, suspensions and contain from 0.025 to 0.1% of the active ingredient.
- the above forms can be sterilized and contain additives such as preservatives: sodium metabisulfite, benzoic acid, sodium benzoate, a mixture of methylparaben and propylparaben; stabilizers: apricot and gum arabic, dextrin, starch paste, methylcellulose, tween; salts that regulate osmotic pressure (sodium chloride), or buffers. In addition, they may contain other therapeutically useful substances.
- Hydrogenated soybean oil 2 ml For the preparation of injectable forms, the active compound (0.5 g or 1 g or 2 g; quantities required for the manufacture of 1000 ampoules) is finely ground and mixed in a mixer with hydrogenated soybean oil (2000 ml). The resulting solution is packed into 2 ml ampoules and sterilized with steam for 30 minutes.
- the prescribed dose of the active ingredient (9-phenyl-2,3,4,5,6,7,8,9-octahydro-1H-selenoxanthene of formula 1 or its mixture with b-cyclodextrin or a clathrate complex with b-cyclodextrin ) varies depending on many factors, such as age, sex, body weight of the patient, symptoms and severity of the disease, the specific compound to be administered, the route of administration, and the form of the drug in which the active compound is administered. Usually, the total prescribed dose is 1 to 20 mg per day. The total dose can be divided into several doses, for example, to be taken 1 to 4 times a day.
- the range of total doses of the active substance is from 1 to 20 mg per day, preferably from 1 to 10 mg.
- the dosage range is 0.5 to 5 mg per day, preferably 0.5 to 2 mg.
- the effective therapeutic dose of the drug can be chosen by the attending physician.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине, конкретно андрологии и может быть использовано в фармакологии для коррекции нарушений сперматогенеза. Предлагается применение 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро- 1Н-селеноксантена для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитостатическим воздействием. Предлагается также лекарственный препарат и фармацевтическая композиция, включающие в качестве активного компонента 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен. Изобретение расширяет арсенал средств, способствует коррекции нарушений сперматогенеза за счет усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани.
Description
ПРИМЕНЕНИЕ КОМПЛЕКСА 9-ФЕНИЛ-2,3,4,5,6,7,8,9-ОКТАГИДРО-1 Н- СЕЛЕНОКСАНТЕНА С В-ЦИКЛОДЕКСТРИНОМ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ СПЕРМАТОГЕНЕЗА
Изобретение относится к медицине а именно к андрологии и может быть использовано в фармакологии для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием.
Изобретение также относится к ветеринарии и может быть использовано для лечения млекопитающих с нарушенной фертильностью.
Часто применяемые противоопухолевые препараты (цитостатики), независимо от их механизма действия, обладают выраженным токсическим эффектом на активно делящиеся нормальные (не поврежденные опухолью) ткани организма. К числу последних принадлежит сперматогенный эпителий мужских половых желез [Гершанович М.Л. Осложнение при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. - М. Медицина, 1982. - С.51-80], в котором, благодаря постоянным клеточным делениям (сперматогониев и сперматоцитов), происходит созревание мужских половых клеток - сперматогенез. Нарушение сперматогенеза, наблюдаемое на фоне цитостатического воздействия, по этиологии, патогенезу отличается от других видов патологических процессов, которые сопровождаются угнетением сперматогенеза (травмы, воспаление, эндокринные расстройства, генетические заболевания).
В настоящее время химиотерапевтический метод лечения злокачественных новообразований позволяет добиться в ряде случаев не только длительных полных ремиссий, но даже излечения [Противоопухолевая химиотерапия. / Под ред. Н.И. Переводчиковой. - М.: Медицина, 2005. - С.27-51]. В связи с этим актуальной становиться проблема необратимого мужского бесплодия как возможного последствия цитостатической химиотерапии [Резниченко А.Г. Влияние химио- и
радиотерапии на сперматогенез у онкологических больных. // Проблемы репродукции. - 2007. - N° 4. - С.70-75].
В основе необратимых изменений лежит повреждающее действие на источник пролиферативного пула сперматогенеза - стволовые сперматогонии. Необратимые изменения в мужских половых железах могут существенно снизить качество жизни пациентов молодого возраста, поскольку состояние их репродуктивной функции, с учетом его биологического, социального, психологического значения, является важным жизненным фактором.
Одним из способов решения проблемы отцовства пациентов, перенесших цитостатическую терапию и находящихся в длительной полной ремиссии, является криоконсервация семенной жидкости до начала лечения [Auger J., Kuntsmann J., Czuglik F. et al. Coservation du sperme avant traitement anticancerenx. Une mesure efficce pour preserverles chances de conception future. // Contacept.-fertil.-sex. - 1993. - Vol.21, N° 10. - Р.749-752]. Однако в силу ограниченной доступности этого способа для большинства пациентов криоконсервация не нашла широкого применения. Поиски способов борьбы с мужским бесплодием, вызванным цитостатическим воздействием, продолжаются. Возлагаются большие надежды на трансплантацию зародышевых клеток [Meachem S., Schonfeldt V., Schlatt S. Spermatogonia: stem cells with a great perspective. // Reprod. - 2001. - Vol.121, N° 6. - P.825- 834], но необходимо доказать, что их введение не приведет к снижению лечебного эффекта цитостатика.
Известен способ снижения повреждающего действия цитостатических препаратов на мужские половые железы с помощью средств фармакотерапии: антиоксиданты (левзея софлоровидная) [Щемерова Ю.А. Влияние ингибиторов топоизомеразной активности вепезида и иринотекана на репродуктивную систему крыс-самцов: Автореф. дисс. кан-та биол. наук. - Томск, 2006. - 23 с]; гормоны (тестостерон) [Delic J., Harwood J., Stanly J.
Time dependence for the protective effect of androgen from procarbazine - induced damage to rat spermatogenesis. // Cancer. - 1987. - N° 5. - P.1344-1347]; препарат фосфолицин, который ослабляет токсическое действие на семенники платиновых цитостатических препаратов за счет снижения их нефротоксичности [Yoshi S., Monabe F., Hiroshi T. et al. Huxon ragary pexo tarray dsasel. // Chemotherapy. - 1990. - Vol.38, N° 7. - Р.670-675]. Недостатками предложенных способов снижения повреждающего действия цитостатических препаратов на мужские половые железы являются низкая эффективность, ограниченность использования, возможность появления побочных эффектов и противопоказаний для пациентов, имеющих в анамнезе онкологическое заболевание. В инструкциях по медицинскому применению выше указанных лекарственных средств отсутствует информация о состоянии сперматогенеза в отдаленные сроки после введения препаратов (3 и 6 мес.), что наиболее актуально для пациентов, находящихся в длительной полной ремиссии после перенесенного лечения. Отсутствуют также данные о влиянии на стволовые сперматогенные клетки, сохранение которых препятствует развитию необратимого мужского бесплодия.
Известен также способ коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитотоксическим воздействием, с помощью препарата «Нейпоген» - рекомбинантного человеческого гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) / Патент на изобретение РФ2406527, опубл. 20.12.2010г./. Этот способ, заключающийся в использовании средств фармакотерапии, является наиболее близким к заявленному и выбран в качестве прототипа. Существенными недостатками этого способа коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитотоксическим воздействием, с помощью препарата Г-КСФ являются:
- наличие побочных эффектов (тошнота/рвота, боль в мышцах и костях, дизурия, алопеция, диарея, кожная сыпь, воспаление слизистых оболочек,
лихорадка, утомляемость, головные боли, кашель, анорексия, лейкоцитоз и др );
- сложный и дорогой метод его получения (негликозилированный протеин, состоящий из 175 аминокислот, вырабатываемый лабораторным штаммом бактерии Escherichia coli, в которую методами генной инженерии введен ген гранул оцитарного колониестимулирующего фактора человека);
- неудобный и трудоемкий способ приготовления, применения препарата, который требует особых условий хранения (выпускается в виде иньекционного раствора для внутривенного и подкожного введения; применение осуществляется под пристальным наблюдением врача; храниться при температуре 2-8 °С).
Данные клинических наблюдений свидетельствуют о том, что нарушение сперматогенеза после использования ряда химиотерапевтических схем носит необратимый характер [Гершанович М.Л. Осложнение при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. - М. Медицина, 1982. - С.51-80; Резниченко А.Г. Влияние химио- и радиотерапии на сперматогенез у онкологических больных. // Проблемы репродукции. - 2007. - 4» 4. - С.70-75]. Необратимые изменения в извитом семенном канальце, приводящие к патозооспермии, могут быть связаны с истощением пролиферативного пула сперматогенеза, источником которого является популяция сперматогоний, а именно, стволовых (резервных) клеток [Липатова Н.А. Лабораторные критерии фертильности эякулята // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - Т.5. - С. 11-15; Сухоруков В. С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1989. - Т.97, N°9. - 89 с.]. Это клетки-родоначальники, делятся только при повреждении и являются основой пролиферативного пула сперматогенеза. Для образования стволовых сперматогоний необходимо наличие ниш, которые формируют клетки Сертоли (клетки микроокружения)
[Биология стволовых клеток и клеточные технологии. / Под ред. М.А. Пальцева. - М.: Мединина. Шико, 2009. - Т.2. - 456 с]. Последние утрачивают способность к делению в зрелых извитых семенных канальцах [Курносова Т.Р., Вербицкий М.Ш., Сухих Г.Т., Молнар Е.М. Современные представления о структурных основах репаративной регенерации семенника млекопитающих животных и человека. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1994. - N°4. - С. 396-399]. Регенерация семенных канальцев в целом возможна только одним путем - путем формирования семенных канальцев незрелого типа из регенерационной зоны, которая содержит клетки Сертоли и первичные половые детерминанты, дающие начало новым сперматогониям. Недостаточность регенераторного потенциала семенника приводит к атрофии ткани в целом и служит причиной бесплодия.
В результате проведенных нами экспериментальных исследований обнаружено неизвестное до сих пор свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1//-селеноксантена с b-циклодекстрином стимулировать процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний при нарушениях сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием.
Свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9- октагидро- 1//-селеноксантена с b -цикл о декстрином усиливать процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний при нарушениях сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием, является для специалиста фактом неочевидным и не вытекает из уровня техники в данной области, не обнаружено в патентной и научно -медицинской литературе. Выше указанное свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро- 1//-селеноксантена с b -цикл о декстрином может быть использовано в
практическом здравоохранении и ветеринарии для повышения качества лечения. Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям патентоспособности изобретения, а именно «новизна», «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».
Технической проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала средств, предназначенных для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитостатическим воздействием за счет усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний. Технический результат заключается в реализации предлагаемых средств, обеспечивающих коррекцию нарушений сперматогенеза, вызванного цитостатическим воздействием.
Для решения поставленной технической проблемы и достижения максимально возможного результата в настоящем изобретении предлагается применение 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1//-селеноксантена в качестве средства для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитостатическим воздействием, за счет усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани.
Предлагается фармацевтическая композиция для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитотоксическим воздействием, которая содержит в качестве активного компонента 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро- 1//-селеноксантен в эффективном количестве.
Активный компонент фармацевтической композиции для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитотоксическим воздействием, 9- фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен может быть представлен в виде клатратного комплекса с b -цикл о декстрином или может содержать дополнительно b-цикло декстрин в соотношениях от 1:1 - до 1:10.
Предлагается лекарственный препарат для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитотоксическим воздействием, который содержит в качестве активного компонента указанную фармацевтическую композицию. Указанный лекарственный препарат может применяться в форме таблеток, с содержанием 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена от 2 до 10%, а остальное - один или более наполнитель(и). При этом таблетки могут быть сформированы посредством прессовки или формовки. Лекарственный препарат может применяется и в форме желатиновых капсул, при следующем соотношении компонентов:
- 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен от 2 до 10 %;
- наполнитель (и) или носитель(и) - остальное.
Лекарственный препарат может быть выполнен в виде растворов, эмульсий, суспензий и др., с содержанием активного компонента от 0,025 до 1%; остальное - наполнитель(и) или носитель(и).
Предлагаемое изобретение можно использовать в качестве средства для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитотоксическим воздействием. Предлагаемое средство обеспечивает усиление процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний.
Сущность изобретения поясняется примерами конкретного выполнения, в которых:
«Комплекс» - клатратный комплекс b-циклодекстрина с 9-фенил- 2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном в соотношении 10:1, полученный стандартным способом /патент RU2451680, C07D 345/00, опубл. 27.05.2012г./.
Усиление процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани при сокращении численности клеточной популяции быстро обновляющихся и резервных (стволовых) сперматогоний у самцов крыс популяции Вистар
под влиянием заявляемых средств для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитотоксическим воздействием, продемонстрировано в двух сериях экспериментов. В настоящем изобретении, если не указано иное, концентрации представлены в мас.%.
ПРИМЕР. Клатратный комплекс 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена с b-циклодекстрином («Комплекс») как средство для коррекции сперматогенеза оценивалось в экспериментах на крысах популяции Вистар при цитотоксическом воздействии «Паклитакселом».
Эксперименты проведены на 50 крысах-самцах Вистар, возраст 3 месяца. Животные содержались в стандартных пластиковых клетках (не более 10 особей в каждой) с мелкой древесной стружкой, на стандартном рационе - гранулированный корм ПК 120-3 (согласно приказу N° 1179 М3 СССР от 10.10.83).
До проведения эксперимента животные проходили карантин в виварии в течение 5 дней. Далее определялась масса тела животных и их распределение по группам. «Паклитаксел» вводился 30-ти крысам-самцам опытных групп однократно внутривенно в максимально допустимой дозе (МПД) - 5,0 мг/кг массы тела. Доза «Паклитаксела» выбрана с учетом опыта клинического применения и была рассчитана для животных методом графического пробит-анализа при наблюдении за ними в течение 30 суток.
Через 1 месяц после введения «Паклитаксела» в течение 10-ти дней внутрижелудочно вводился клатратный комплекс 9-фенил-2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9- октагидро- 1Н-селеноксантена с b-цикло декстрином в следующих дозах: 0,3 и 1,0 мг/кг массы тела. Другой группе животных подкожно в течение 5-ти дней вводился препарат сравнения «Нейпоген» в дозе 100 мкг/кг через 1 месяц после введения «Паклитаксела». Животные контрольной группы получали «Паклитаксел» и дистиллированную воду в эквивалентном объеме. Через 2 и 3 месяца после введения «Паклитаксела» определяли массу тела крыс, затем их умерщвляли дислокацией шейных позвонков (по 5 животных на каждый
срок эксперимента), выделяли семенник и эпидидимис. Далее определяли общее количество половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процент их подвижных форм [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Хабриева Р.У. - М.: Медицина, 2005]. При подсчете общего количества сперматозоидов (ОКС), приходящихся на придаток, использовали гомогенизированную клеточную взвесь эпидидимиса. Семенники фиксировали для проведения гистологического анализа в жидкости Карнуа. Затем были приготовлены парафиновые срезы. Депарафинированные срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. На срезе семенника определяли: численность клеточной популяции сперматогоний, количество клеток Сертоли и Лейдига [Саноцкий И.В., Фоменко В. И. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. - М.:Наука, 1979. -210с]. Эндокринную активность семенника вычисляли как соотношение количества клеток Лейдига к клеткам Сертоли. На основании подсчета клеток Сертоли вычисляли степень зрелости сперматогенного пласта [Сухоруков В. С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1989. - Т.97, N°9. - 89 с].
При выборе сроков исследований учитывали длительность сперматогенеза у крыс, которая составляет 3 месяца. Срок 2 месяца после введения препарата соответствует, по времени проявления, воздействию на активно обновляющиеся сперматогонии, 3 месяца - на стволовые (резервные сперматогонии, которые делятся при повреждении).
«Паклитаксел» вводился внутривенно, «Нейпоген» - подкожно, что соответствует способам их применения в клинике. «Комплекс» вводился внутриже луд очно, что соответствует предполагаемому клиническому применению - приему внутрь.
Доза и режим введения препарата «Нейпоген» основаны на данных, полученных в исследованиях по стимулирующему действию препарата на регенераторные процессы в семенниках [Боровская Т.Г, Дыгай А.М., Жданов В.В., Румпель О. А., Пахомова А.В., Перова А.В., Зюзьков Г.Н., Гольдберг В.Е. - Патент на изобретение РФ N° 2406527. Способ коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием. - 2010].
Крысы были рандомизированы на группы с учетом их массы тела:
1. Интактные животные (п= 10) - фон;
2. Контроль. Крысам (п=10) вводился «Паклитаксел» однократно внутривенно в максимально переносимой дозе (МИД) - 5,0 мг/кг массы тела и дистиллированная вода;
3. Клатратный комплекс b-циклодекстрина с 9-фенил-2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9- октагидро- 1Н-селеноксантен ом («Комплекс») Крысам (п=10) вводился внутрижелудочно испытуемый препарат в дозе 0,3 мг/кг в течение 10-ти дней, начиная через 1 месяц после введения «Паклитаксела»;
4. Клатратный комплекс b-циклодекстрина с 9-фенил-2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9- октагидро- 1Н-селеноксантен ом («Комплекс») Крысам (п=10) вводился внутрижелудочно испытуемый препарат в дозе 1,0 мг/кг в течение 10-ти дней, начиная через 1 месяц после введения «Паклитаксела»;
5. Препарат сравнения. Крысам (п=10) вводился подкожно «Нейпоген» (Г-КСФ) в дозе 100 мкг/кг массы тела 1 раз в день в течение 5-ти дней через 1 месяц после введения «Паклитаксела».
Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни [Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - М.: Медицина, 1978. - С.72-75].
Первая серия эксперимента
Оценка состояния репродуктивной системы крыс-самцов через 2 месяца после введения «Паклитаксела»
Результаты оценки массы тела крыс, общего количества половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процента подвижных форм зрелых спермиев через 2 месяца после введения «Паклитаксела» и 1 месяц после лечения препаратом «Комплекс» представлены в таблице 1. Установлено, что масса тела животных в начале эксперимента и через 2 месяца после введения цитостатического препарата во всех сравниваемых группах не отличалась (Р>0,05). Полученные данные свидетельствуют о том, что в начале эксперимента была осуществлена качественная рандомизация животных по массе тела, а также о том, что в течение 2-х месяцев эксперимента, все оказываемые фармакологические воздействия не приводили к изменению массы тела животных.
У интактных животных общее количество половых клеток (приходящихся на эпидидимис) и процент их подвижных форм находились в пределах возрастной нормы (возраст крыс 5-6 месяцев) [Боровская Т.Г., Гольдберг В.Е., Щемерова Ю.А., Полуэктова М.Е., Тимина Е.А., Перова А.В. Влияние ингибиторов топоизомеразной активности на морфологические и функциональные показатели сперматогенеза крыс // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 2005. -Прил. оЕ - С. 28-30]. Через 2 месяца после введения крысам- самцам «Паклитаксела» отмечалось статистически значимое снижение общего количества клеток, приходящихся на эпидидимис, а также процента их подвижных форм.
Таблица 1 - Морфологические и функциональные показатели зрелых спермиев и семенников крыс через 2 месяца после введения цитостатика «Паклитаксел»
Примечание: здесь и далее
# - статистическая значимость различий по сравнению с фоном
* - статистическая значимость различий по сравнению с контролем («Паклитакселом»).
Снижение общего количества половых клеток и их подвижности, наблюдаемые в эти сроки исследования в группах крыс, получавших «Паклитаксел», свидетельствует (с учетом длительности сперматогенеза у крыс) о токсическом действии препарата на полустволовые сперматогонии. Данные литературы подтверждают тот факт, что сперматогонии являются мишенью действия «Паклитаксела» [Сухачева Т.В., Богуш Т.А., Коломиец О.Л. Повреждающее действие таксола на сперматогенез мыши. // Бюлл. эксперим. биол. и мед - 2001.- Т.132, N°ll. - С. 554-560].
ОКС в группах крыс, получавших препарат «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг), статистически значимо возрастало (на 18-19,6 % соответственно) по сравнению с контролем («Паклитаксел»), и достигало фоновых значений. Введение препарата сравнения (Г -КСФ) также приводило к возрастанию (на 75 %) этого показателя по сравнению с контролем, превышая фоновые значения.
Процент подвижных форм в группе крыс, которым после «Паклитаксела» вводили препарат «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг, возрастал по сравнению с контролем («Паклитаксел») и практически не отличался от фона. При введении препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг значение этого показателя оказалось ниже фона. Введение препарата сравнения Г-КСФ приводило к достоверному возрастанию процента подвижных форм по сравнению с контролем до уровня фоновых значений.
Таким образом, через 2 месяца после введения «Паклитаксела» выявляется тестикулярная недостаточность, признаками которой являются олигоспермия и астеноспермия. Судя по срокам проявления, эти нарушения обусловлены токсическим действием на делящиеся сперматогонии
(полустволовые клетки). Введение препарата «Комплекс» оказывало положительное влияние на состояние сперматогенеза крыс, подвергнувшихся воздействию «Паклитаксела», о чем свидетельствует увеличение продуктивности сперматогенеза (возрастание ОКС в обеих дозах, увеличение доли подвижных форм - в группе «Комплекс», доза 0,3 мг/кг).
Установлено (табл. 2), что через 2 месяца после введения «Паклитаксела» численность клеточной популяции сперматогоний оказалась сниженной (составила 69,7% от фоновых значений). При введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг через 1 месяц после введения «Паклитаксела» количество сперматогоний так же было статистически значимо снижено, по сравнению с фоном и практически не отличалось от значений контроля. У крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг, этот показатель оказался статистически значимо выше (на 17 %) по сравнению с контролем, хотя и не достигал значений интактных животных. Сходные данные были получены при введении препарата сравнения.
Определение количества клеток Лейдига (тестостерон продуцирующих клеток) показало, что во всех экспериментальных группах оно оказалось сходным с таковым у интактных животных (табл. 2).
При подсчете количества клеток микроокружения (клеток Сертоли) выявилось их статистически значимое снижение в группах крыс, подвергнувшихся воздействию «Паклитаксела». У животных, получавших препарат «Комплекс» в обеих используемых дозах, этот показатель возрастал по сравнению с контролем. Статистически значимое возрастание количества клеток Сертоли по сравнению с контролем выявилось и при введении препарата сравнения. Этот показатель оказался выше фоновых значений.
При изучении эндокринной активности семенника, которая высчитывается по отношению количества клеток Лейдига к клеткам Сертоли, установлено, что она была сходной почти во всех исследуемых группах животных, за исключением крыс, получавших «Паклитаксел» и Г-КСФ.
Животные этой группы характеризовались пониженной эндокринной активностью, как по сравнению с контролем, так и фоном. Последнее обусловлено, очевидно, тем, что на фоне введения Г-КСФ существенно возрастало количества клеток Сертоли.
Таблица 2 - Морфологические и функциональные показатели семенников крыс через 2 месяца после введения препарата «Паклитаксел»
При определении степени зрелости сперматогенного пласта, являющейся основным показателем, характеризующим выраженность процессов репарации ткани, оказалось, что при введении как одного цитостатического препарата, так и всех изучаемых соединений, её значения достоверно снижались по сравнению с фоном. Это свидетельствует о том, что в семенниках всех животных, получавших цитостатический препарат, происходили процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани за счет образования новых канальцев. Однако, при введении препарата «Комплекс» (в обеих примененных дозах) и препарата сравнения через 1 месяц после введения «Паклитаксела», степень зрелости сперматогенного пласта оказалась ниже контрольных значений (на соответственно, 10,8; 10,4 и 23,0 %). Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат «Комплекс», как и препарат сравнения, обладает способностью стимулировать процессы репаративной регенерации сперматогенной ткани. Безусловно, это должно привести к возрастанию продуктивности сперматогенеза через 3 месяца после введения цитостатического препарата. Судя по проценту от фона, степень зрелости сперматогенного пласта у крыс,
получавших Г-КСФ, оказалась выше, по сравнению с таковой при использовании препарата «Комплекс». Так как, этот показатель вычисляется на основании количества клеток Сертоли, то отмеченный эффект Г-КСФ, является результатом значительного возрастания их числа по сравнению с фоном.
Таким образом, через 2 месяца после цитостатического воздействия «Паклитаксела» на тестикулярную ткань, в семенниках крыс всех групп запущены процессы регенерации ткани, однако в группах терапии исследуемыми препаратом и препаратом сравнения обновление тестикулярной ткани, судя по степени зрелости сперматогенного пласта, происходило более интенсивно. Эффективность препарата сравнения оказалась по данному показателю выше таковой у «Комплекса» (обе дозы), что, очевидно, обусловлено существенным возрастанием количества клеток Сертоли. На фоне введения «препарата «Комплекс» (в дозе 1,0 мг/кг) через 1 месяц после введения «Паклитаксела» отмечается повышение, как и при использовании Г-КСФ, количества сперматогоний, что является, по- видимому, следствием повышенной интенсивности репаративных процессов.
Вторая серия эксперимента
Оценка состояния репродуктивной системы крыс-самцов через 3 месяца после воздействия «Паклитакселом»
Результаты оценки массы тела крыс, количество общих половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процента подвижных форм зрелых спермиев через 3 месяца после введения «Паклитаксела» и 2 месяца после лечения препаратом «Комплекс» представлены в таблице 3. Установлено, что масса тела животных в начале эксперимента и через 3 месяца после введения цитостатического препарата во всех сравниваемых группах не различалась (Р>0,05). Полученные данные свидетельствуют о том, что в начале эксперимента была осуществлена качественная рандомизация животных по массе тела, а также о том, что в течение 3-х месяца эксперимента все
оказываемые фармакологические воздействия не приводили к существенному снижению массы тела животных.
У крыс, получивших «Паклитаксел», ОКС, приходящихся на эпидидимис, оставалось статистически значимо сниженным (57% от фоновых значений). Это свидетельствует о выраженной недостаточности сперматогенеза в срок, соответствующий проявлению воздействия на стволовые сперматогонии. Значения ОКС в группе крыс, получавших препарат «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг) через 1 месяц после введения «Паклитаксела», оказались выше, соответственно, на 96 и 69 % по сравнению с контролем («Паклитаксел») ОКС при введении препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг статистически значимо не отличалось от фоновых значений. Введение препарата сравнения (Г-КСФ) также приводило к возрастанию этого показателя (на 72 %), по сравнению с контролем, и не отличалось от фоновых показателей. Обращает внимание на себя тот факт, что в группе крыс, получавших «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг, ОКС статистически значимо превышало фоновые значения.
Процент подвижных форм в группе крыс, получавших препарат «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг) через 1 месяц после введения «Паклитаксела», оказался на уровне контрольных значений. Введение препарата сравнения (Г-КСФ) приводило к статистически значимому возрастанию процента подвижных форм по сравнению с контролем, достигая фоновые значения. Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат «Комплекс» приводил к увеличению продуктивности сперматогенеза, эффективность которого, судя по ОКС, была выше, чем у препарата сравнения. По показателю подвижность сперматозоидов, однако, более эффективным оказался препарат сравнения - Г-КСФ.
Таблица 3 - Морфологические и функциональные показатели зрелых спермиев крыс через 3 месяца после введения цитостатика «Паклитаксел»
Показатели Фон Контроль «Комплекс» «Комплекс» Г-КСФ
Через 3 месяца после введения «Паклитаксела» сперматогенный эпителий животных выглядел изреженным по сравнению с таковым у интактных крыс. Между канальцами располагалось небольшое число клеток Лейдига.
Установлено (табл. 4), что через 3 месяца после введения «Паклитаксела» численность клеточной популяции сперматогоний оставалась сниженной и составляла 67 % от фоновых значений. Эти данные свидетельствуют о том, что количество сперматогоний с течением времени не возрастает. Источником пополнения этой клеточной популяции являются стволовые сперматогоний, делящиеся при повреждении. Учитывая длительность сперматогенеза, срок проявления их повреждений - 3 месяца. В связи с этим, полученный факт свидетельствует о сокращении под действием «Паклитаксела» количества стволовых сперматогоний.
Через 3 месяца после начала эксперимента в группах введения «Комплекса» сперматогенный эпителий выглядел менее изреженным, чем в контроле (группа введения одного цитостатического препарата). Между канальцами отчетливо выявлялись клетки Лейдига, в количестве близком к норме.
При введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг количество сперматогоний было статистически значимо сниженным по сравнению с фоном и не отличалось от контрольных значений. У крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг, этот показатель статистически значимо превышал контрольные значения (на 22 %). Сходные данные были получены в группе препарата сравнения.
При подсчете тестостерон продуцирующих клеток (клетки Лейдига) установлено, что в этот срок наблюдения их число в контроле оказалось сниженным по сравнению с фоном (табл.4), что может быть результатом токсического действия препарата на гонадотропные клетки гипофиза. У крыс, которым вводились препараты «Комплекс» (в обеих дозах) и Г-КСФ количество клеток Лейдига не отличалось от фоновых значений. Значение этого показателя у крыс, получавших препарат «Комплекс», превышало таковое в контроле.
При подсчете количества клеток микроокружения (клетки Сертоли) выявлялось их статистически значимое снижение в группе крыс, получавших «Паклитаксел». У животных, получавших «Комплекс» в обеих используемых дозах, а также препарат сравнения, этот показатель превышал значения контроля. При введении препарата «Комплекс» в обеих дозах число клеток Сертоли превышало фоновые значения.
При определении степени зрелости сперматогенного пласта было установлено, что при введении цитостатического препарата значения этого параметра статистически значимо снижались по сравнению с фоном. В группе крыс, получивших исследуемые препараты-корректоры, этот показатель был также ниже фоновых значений. Отмеченные факты свидетельствуют о том, что в семенниках животных экспериментальных групп происходили процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани. Примечательно, что при введении препарата «Комплекс» (в обеих используемых дозах), а также препарата сравнения степень зрелости сперматогенного пласта оказалась ниже контрольных значений (соответственно на 13, 14 и 10 %), что, возможно, указывают на то, что препарат «Комплекс», как и препарат сравнения, обладает способностью стимулировать процессы образования стволовых сперматогоний. Следует отметить, что наиболее низкие значения этого показателя выявлялись в группе крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг.
Таблица 4 - Морфологические и функциональные показатели семенников крыс через 3 месяца после воздействия «Паклитаксела»
Введение цитостатического препарата «Паклитаксел» моделирует в семенниках крыс тестикулярную недостаточность, обусловленную истощением популяции сперматогоний (срок 2 месяца - недостаточность быстро обновляющихся сперматогоний, срок 3 месяца - недостаточность стволовых сперматогоний). О тестикулярной недостаточности свидетельствует снижение продуктивности сперматогенеза (показатель - ОКС). Доказательством того, что это обусловлено истощением источников пролиферативного пула сперматогенеза является снижение численности сперматогоний через 2 и 3 месяца после цитостатического воздействия. Учитывая, что стволовые клетки восполняют численность сперматогоний при повреждении, полученные данные свидетельствуют о частичной гибели под действием «Паклитаксела» стволовых сперматогоний, что подтверждают данные литературы [Сухачева Т.В., Богуш Т.А., Коломиец О.Л. Повреждающее действие таксола на сперматогенез мыши. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 2001.- Т.132, 1. - С. 554-560].
Образование новых сперматогоний в извитом семенном канальце лимитируется количеством клеток микроокружения, которые в зрелых канальцах не размножаются. Репаративная регенерация сперматогенной ткани идет только путем образования новых извитых семенных канальцев из регенераторной зоны, содержащей клетки Сертоли и первичные половые
детерминанты, которые, впоследствии становятся сперматогониями. Вновь образующиеся семенные канальца характеризуются повышенным содержанием клеток Сертоли, что не ограничивает размножение сперматогоний. Критерием эффективности репаративной регенерации ткани является, прежде всего, степень зрелости сперматогенного пласта.
Результаты исследований показали, что степень зрелости сперматогенного пласта на фоне введения одного «Паклитаксела» снижается по сравнению с фоновыми значениями, как через 2, так и через 3 месяца после введения цитостатического препарата. Таким образом, после цитостатического повреждения в тестикулярной ткани идут естественные процессы репаративной регенерации. На фоне введения препарата «Комплекс» (в обеих дозах) этот показатель также снижался, но в большей степени, что свидетельствует о более интенсивных процессах репаративной регенерации. Сходный по степени выраженности эффект наблюдался при введении препарата сравнения. Наименьшие значения этого показателя выявлялись через 2 месяца после введения «Паклитаксела» в группе препарата сравнения, и через 3 месяца после введения «Паклитаксела» в группе препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг.
В сперматогенном пласте более низкой степени зрелости, клеток микроокружения больше. Это подтверждают полученные результаты: через 2 месяца их число было больше на фоне введения Г -КСФ, через 3 месяца - на фоне введения препарата «Комплекс» (в обеих дозах), где этот параметр оказался выше, чем у препарата сравнения Г -КСФ и выше фоновых значений. У крыс, получавших Г-КСФ, количество клеток Сертоли не превышало фоновые значения.
Возрастание клеток Сертоли не ограничивает размножение сперматогоний. Их количество на фоне введения препарата «Комплекс» в обеих дозах возрастало (срок 2 мес - по сравнению с контролем; срок -3 месяца - по сравнению с контролем и фоном). Препарат сравнения приводил
к существенному возрастанию этого показателя по сравнению с фоном только через 2 месяца после введения «Паклитаксела».
Возрастание количества сперматогоний должно привести к увеличению продуктивности сперматогенеза (увеличению общего количества сперматозоидов). И действительно, этот показатель в экспериментальных группах возрастал по сравнению с контролем: на фоне введения препарата «Комплекс» (срок 2 и 3 месяца - дозы 0,3 и 1,0 мг/кг); на фоне введения Г-КСФ также отмечалось возрастание продуктивности сперматогенеза (срок 2 и 3 месяца). Через 2 месяца после начала опыта эффективность препарата сравнения по этому показателю оказалась выше. Наибольшее возрастание ОКС (выше уровня фона) выявлялось при введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг через 3 месяца после начала опыта. Это может быть связано не только со стимуляцией процессов репаративной регенерации, но и нормализацией количества тестостерон синтезирующих клеток (в этой группе их число практически не отличалось от фоновых значений). Данные литературы свидетельствуют о крайней резистентности клеток Лейдига к фармакологическим воздействиям [Сухоруков В. С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1989. - Т.97, N°9. - 89 с]. Между тем, их роль в гормональной регуляции сперматогенеза является неоспоримой.
На модели тестикулярной недостаточности, связанной с истощением пролиферативного пула сперматогенеза (полу- и стволовых сперматогоний), вызванного цитотоксическим воздействием «Паклитаксела» установлено, что препарат «Комплекс» (в обеих дозах) обладает способностью корректировать нарушения сперматогенеза, за счет усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани. Наиболее выраженный терапевтический эффект на стволовые сперматогоний выявлялся у препарата в дозе 1,0 мг/кг. Эффективность препарата сравнения, как стимулятора образования
стволовых сперматогоний, оказалась сопоставимой с таковой у препарата «Комплекс». Вместе с тем при воздействии препарата «Комплекс» выявилось большее, чем при введении Г-КСФ, количество клеток Сертоли. Этот факт свидетельствует о большем регенераторном потенциале семенников на фоне введения препарата «Комплекс», чем Г-КСФ.
Проведенные исследования выявили способность препарата «Комплекс» нормализовать уровень тестостерон синтезирующих клеток, что не выявлялось при введении препарата сравнения. Это также может быть одним из преимуществ тестируемого лекарственного средства. Препарат «Комплекс» (доза 0,3 мг/кг) стимулировал сперматогенез в большей степени, чем препарат сравнения, о чем свидетельствуют показатель продуктивности сперматогенеза через 3 месяца после начала эксперимента.
Таким образом, корректирующее действие «Комплекса» на мужские половые железы при цитотоксическом повреждении обусловлено стимуляцией механизмов репаративной регенерации ткани семенника в целом, приводящей к образованию новых семенных канальцев, содержащих необходимое количество сперматогоний для обеспечения нормального уровня сперматогенеза.
Предлагаемое изобретение позволяет провести эффективную коррекцию нарушений сперматогенеза, вызванных цитотоксическим воздействием, с помощью «Комплекса» за счет стимуляции репаративных процессов тестикулярной ткани в целом, приводящих к образованию новых источников пролиферативного пула сперматогенеза.
Предлагаемый препарат расширяет арсенал средств, предназначенных в андрологии для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванного цитотоксическим воздействием, за счет усиления процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани.
Примеры твердых лекарственных форм включают, например, таблетки, пилюли, желатиновые капсулы и др.
Примеры жидких лекарственных форм для инъекций и парентерального введения включают растворы, эмульсии, суспензии и др. Композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем.
Готовый лекарственный препарат согласно изобретению в форме таблеток содержат от 2 до 10 % активного соединения и наполнитель(и) или носитель(и). В качестве таковых для таблеток применяются: а) разбавители: свекловичный сахар, лактоза, глюкоза, натрия хлорид, сорбит, маннит, гликоль, фосфат кальция двузамещенный; б) связующие вещества: магниевый силикат алюминия, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и поливинил пиррол и дон; в) разрыхлители: декстроза, агар, альгиновая кислота или ее соли, крахмал, твин.
ПРИМЕР. 1.1
100 мг таблетки, содержащие по 2 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 2 мг
Лактоза 53,0 мг
Альгиновая кислота 20,0 мг
Лимонная кислота 5,0 мг
Трагакант 20,0 мг
ПРИМЕР. 1.2
100 мг таблетки, содержащие по 5 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 5 мг
Лактоза 50,0 мг
Альгиновая кислота 20,0 мг
Лимонная кислота 5,0 мг
Трагакант 20,0 мг
ПРИМЕР. 1.3
100 мг таблетки, содержащие по 10 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 10 мг
Лактоза 45,0 мг
Альгиновая кислота 20,0 мг
Лимонная кислота 5,0 мг
Трагакант 20,0 мг
Таблетка может быть сформирована посредством прессовки или формовки активного ингредиента с одним или более дополнительными ингредиентами. Получение прессованных таблеток осуществляется на специальной установке. Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количествах 20 г или 50 г или 100 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 таблеток) перемешивается со связующим веществом - трагакантом (200 г), смешивается с разбавителем - лактозой (530 г или 500 г или 450 г), в смесь добавляется разрыхляющее вещество - альгиновая кислота (200 г) и отдушка - лимонная кислота (50 г).
Для желатиновых капсул обычно используются дополнительно красители и стабилизаторы. В качестве красителей применяются: тетразин, индиго; в качестве стабилизаторов могут быть представлены: натрия метабисульфит, натрия бензоат. Предлагаемые желатиновые капсулы содержат от 2 до 10 % активного ингредиента.
ПРИМЕР 2.1 1 капсула 2 мг содержит:
Активное вещество:
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 2 мг в пересчете на безводное вещество
Вспомогательные вещества :
Бетадекс (b-цикло декстрин) до массы содержимого 190 мг Капсулы твердые желатиновые:
Желатин
Титана диоксид (Е171)
ПРИМЕР 2.2 1 капсула 5 мг содержит:
Активное вещество:
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 5 мг в пересчете на безводное вещество Вспомогательные вещества:
Бетадекс (b-цикло декстрин) до массы содержимого 190 мг Капсулы твердые желатиновые:
Желатин
Титана диоксид (Е171)
ПРИМЕР 2.3
1 капсула 10 мг содержит:
Активное вещество:
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 10 мг в пересчете на безводное вещество Вспомогательные вещества:
Бетадекс (b-цикло декстрин) до массы содержимого 190 мг Капсулы твердые желатиновые:
Желатин
Титана диоксид (Е171)
Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количествах 20 г или 50 г или 100 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 капсул) перемешивается с веществом b- циклодекстрин (бетадекс) (1880 г или 1850 г или 1800 г).
Инъекционные формы композиции предпочтительно представляют собой изотонические и масляные растворы, суспензии и содержат от 0,025 до 0,1 % активного ингредиента. Вышеуказанные формы могут стерилизоваться и содержать добавки, такие как консерванты: натрия метабисульфит, бензойная кислота, натрия бензоат, смесь метилпарабена и пропилпарабена; стабилизаторы: абрикосовая и аравийская камедь, декстрин, крахмальный клейстер, метилцеллюлоза, твин; соли, регулирующие осмотическое давление (хлорид натрия), или буферы. Кроме того, они могут содержать другие терапевтически полезные вещества.
ПРИМЕР ЗЛ
2 мл ампулы, содержащие по 0,5 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-
0,5 мг селеноксантен
Соевое масло гидрированное 2 мл ПРИМЕР 3.2
2 мл ампулы, содержащие по 1,0 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-
1,0 мг селеноксантен
Соевое масло гидрированное 2 мл ПРИМЕР 3.3
2 мл ампулы, содержащие по 2,0 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантена
9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-
2,0 мг селеноксантен
Соевое масло гидрированное 2 мл
Для приготовления инъекционных форм активное соединение (0,5 г или 1 г или 2 г; количества, необходимые для изготовления 1000 ампул) тонко измельчают и смешивают в смесителе с соевым маслом гидрированным (2000 мл). Полученный раствор фасуют в ампулы по 2 мл и стерилизуют паром в течение 30 мин.
Назначаемая для приема доза активного компонента (9-фенил- 2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена формулы 1 или его смеси с b- цикло декстрином или клатратного комплекса с b-цикло декстрином) варьирует в зависимости от многих факторов, таких как возраст, пол, масса тела пациента, симптомы и тяжесть заболевания, конкретно назначаемое соединение, способ приема, форма препарата, в виде которой назначается активное соединение. Обычно, общая назначаемая доза составляет от 1 до 20 мг в день. Общая доза может быть разделена на несколько доз, например, для приема от 1 до 4 раз в день. При оральном назначении интервал общих доз активного вещества составляет от 1 до 20 мг в день, предпочтительно, от 1 до 10 мг. При парентеральном приеме интервал назначаемых доз составляет от 0,5 до 5 мг в день, предпочтительно, от 0,5 до 2 мг. Эффективная терапевтическая доза препарата может быть выбрана лечащим врачом.
Claims
1. Применение b-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантеном для коррекции нарушений сперматогенеза.
2. Фармацевтическая композиция для коррекции нарушений сперматогенеза, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента содержит 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н- селеноксантен по п.1.
3. Фармацевтическая композиция по и.2, отличающаяся тем, что содержит 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен в виде клатратного комплекса с b-циклодекстрином или содержит b- цикло декстрин в соотношениях от 1:1 - до 1:10.
4. Лекарственный препарат для коррекции нарушений сперматогенеза, отличающийся тем, что в качестве активного компонента содержит фармацевтическую композицию по и.2 в эффективном количестве.
5. Лекарственный препарат по п.4, отличающийся тем, что применяется в форме таблеток.
6. Лекарственный препарат по и.5, отличающийся тем, что содержит :
- 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен от 2 до 10 %;
- один или более наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
7. Лекарственный препарат по и.5, отличающийся тем, что таблетка сформирована посредством прессовки или формовки 9-фенил- 2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с одним или более дополнительными ингредиентами.
8. Лекарственный препарат по п.4, отличающийся тем, что применяется в форме желатиновых капсул.
9. Лекарственный препарат по и.7, отличающийся тем, что содержит:
- 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен от 2 до 10%;
- наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
28
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
10. Лекарственный препарат по п.4, отличающийся тем, что выполнен в виде растворов, эмульсий, суспензий и др.
11. Лекарственный препарат по п.9, отличающийся тем, что содержит:
- 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен от 0,025 до 0,1
%;
- наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
29
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019129395A RU2782758C2 (ru) | 2019-09-18 | Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитотоксическим воздействием | |
| RU2019129395 | 2019-09-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO2021054864A1 true WO2021054864A1 (ru) | 2021-03-25 |
Family
ID=74874000
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/RU2020/050223 WO2021054864A1 (ru) | 2019-09-18 | 2020-09-13 | Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1н-селеноксантена с в-циклодекстрином для коррекции нарушений сперматогенеза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| WO (1) | WO2021054864A1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2451680C1 (ru) * | 2011-02-21 | 2012-05-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Исследовательская Компания "Медбиофарм" | Клатратный комплекс циклодекстрина или арабиногалактана с 9-фенил-симм-октагидроселеноксантеном, способ его получения (варианты), фармацевтическая композиция и лекарственное средство |
| RU2480221C1 (ru) * | 2012-02-28 | 2013-04-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздравсоцразвития России) | Способ коррекции сперматогенеза у животных в условиях хронической интоксикации природным газом |
| RU2487705C1 (ru) * | 2012-03-21 | 2013-07-20 | ОКТАПАМ Лимитед | Средство для улучшения репродуктивной функции |
| RU2489142C1 (ru) * | 2012-03-21 | 2013-08-10 | ОКТАПАМ Лимитед | Средство для улучшения репродуктивной функции |
-
2020
- 2020-09-13 WO PCT/RU2020/050223 patent/WO2021054864A1/ru active Application Filing
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2451680C1 (ru) * | 2011-02-21 | 2012-05-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Научно-Исследовательская Компания "Медбиофарм" | Клатратный комплекс циклодекстрина или арабиногалактана с 9-фенил-симм-октагидроселеноксантеном, способ его получения (варианты), фармацевтическая композиция и лекарственное средство |
| RU2480221C1 (ru) * | 2012-02-28 | 2013-04-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздравсоцразвития России) | Способ коррекции сперматогенеза у животных в условиях хронической интоксикации природным газом |
| RU2487705C1 (ru) * | 2012-03-21 | 2013-07-20 | ОКТАПАМ Лимитед | Средство для улучшения репродуктивной функции |
| RU2489142C1 (ru) * | 2012-03-21 | 2013-08-10 | ОКТАПАМ Лимитед | Средство для улучшения репродуктивной функции |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2019129395A3 (ru) | 2022-03-02 |
| RU2019129395A (ru) | 2021-03-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4489946B2 (ja) | 修復プロセスを刺激する物質およびその適用方法 | |
| El-Domeiri et al. | Reversal by melatonin of the effect of pinealectomy on tumor growth | |
| BR112014014004B1 (pt) | uso de um composto para redução de gordura corporal e adipócitos | |
| McGee et al. | The development of secondary sex characters in capons by injections of extracts of bull testes | |
| Soyková-Pachnerová et al. | Placenta as a lactagogon | |
| US20240180898A1 (en) | Use of aminothiazole derivative in treatment of immune inflammation | |
| RU2782758C2 (ru) | Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитотоксическим воздействием | |
| WO2021054864A1 (ru) | Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1н-селеноксантена с в-циклодекстрином для коррекции нарушений сперматогенеза | |
| RU2778238C2 (ru) | Стимулятор процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани | |
| WO2021054863A1 (ru) | Стимулятор процессов репаративной регенерации тестикулярной ткани | |
| DE2432393C3 (de) | Arzneipräparat zur Behandlung von bösartigen Neubildungen | |
| CN109512948B (zh) | 一种预防和治疗化疗所致周围神经病变的中药组合物及其应用 | |
| CN112546056A (zh) | 一种用于治疗化疗诱发的外周神经病变的组合物及其应用 | |
| Richmond et al. | Multiple myeloma—an in vitro study | |
| CH660303A5 (de) | Analgetische praeparate. | |
| RU2782140C2 (ru) | Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином для лечения патозооспермии | |
| WO2021054865A1 (ru) | Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1н-селеноксантена с β-циклодекстрином для лечения патозооспермии | |
| RU2782133C2 (ru) | Применение фармацевтической композиции β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном для повышения/восстановления либидо | |
| WO2016204646A1 (ru) | Средство хронобиологической коррекции | |
| RU2813546C1 (ru) | Средство для лечения и профилактики послеродовых заболеваний у коров | |
| WO2021054866A1 (ru) | Применение фармацевтической композиции β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1н-селеноксантеном для повышения/восстановления либидо | |
| RU2812192C1 (ru) | Способ профилактики родовых и послеродовых осложнений коров | |
| CN112656887B (zh) | 一种具有抗炎抗氧化的中药组合物、制剂及其制备方法 | |
| RU2768589C1 (ru) | Способ профилактики острого послеродового эндометрита у коров | |
| CN109939117B (zh) | 环黄芪醇在制备治疗银屑病药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 20865450 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
| NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
| 122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 20865450 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |