WO2021027249A1 - 一种鉴定自花授粉植物异交率的方法 - Google Patents

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    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A01H1/04—Processes of selection involving genotypic or phenotypic markers; Methods of using phenotypic markers for selection

Definitions

  • Hybrids obtained by crossing the female parent (sterile line, code: A-Lines) ⁇ male parent (restorer line, code: R-Lines) are used as hybrid soybean seeds for market sales.
  • the reproduction of sterile lines (A-Lines) also requires the cross of female parent (sterile line, A-Lines) ⁇ male parent (maintainer line, B-Lines); the restorer line is fertile material and reproduces normally.
  • Soybeans are difficult to cross artificially and the rate of natural outcrossing is very low, and the possibility of wind pollination is very small (Zhao Limei et al., 1999).
  • the flower thrips is used as a soybean pollinator, but it has not been applied to field production at present.
  • the spray concentration of the herbicide is 0.37%-0.59%, and the typical spray concentration of the herbicide is 0.59%.
  • Figure 2 is a schematic cross-sectional view of the net room
  • the aforementioned herbicide resistance gene is epsps, ahas, GAT, gat4621, sxglr-11 or a combination thereof.
  • Radiation mutagenesis is the use of radiation as a genetic mutagenic factor to process plant materials to induce mutations in genetic material and make new types of mutations appear in the offspring.
  • the radiation used for radiation mutagenesis is selected from x, ⁇ , ⁇ , ⁇ rays and neutrons, ultraviolet light and the like.

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Abstract

涉及作物杂交选育技术领域，具体地，提供了一种鉴定自花授粉植物异交率的方法。该鉴定方法包括选择待测的自花授粉植株作为母本，选择携带抗除草剂基因的自花授粉植株作为父本，在指定授粉昆虫或封闭条件下天然进行杂交，统计子代抗除草剂的植株数量，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植物的异交率。该方法应用后代检测方法，不仅有效提升了自花授粉植物杂交率，而且根据子代抗除草剂的植株数量可以高效地对自花授粉植物进行异交率性状的评估，省去了多代回交转育不育系的中间环节，有利于加快杂交植物育种的进程，降低了制种成本。

Description

一种鉴定自花授粉植物异交率的方法
相关申请的交叉引用
本公开要求于2019年08月15日提交中国专利局的申请号为201910756100.X、名称为“一种鉴定自花授粉植物异交率的方法”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本公开中。
技术领域
本公开涉及作物杂交选育技术领域，具体而言，涉及一种鉴定自花授粉植物异交率的方法。
背景技术
异交率(Outcrossing Rate)是指植物不同个体间发生杂交的概率。研究植物异交率主要有两种方法：间接法和直接法。间接法又叫居群结构方法(Population structure approach，PSA)，其是通过居群的自交系数(inbreeding coefficient，Fis)和异交率的关联关系，估计异交率的方法(Li，1955)。间接法由于以居群为单位进行异交率估计，所得到的结果代表居群异交率，间接法无法了解群内各家系的异交率和变异情况。间接法主要用于分析生物血缘，时间跨度较长的进化分析。直接法又叫后代检测方法(Progeny-array approach，PAA)，其是检测特定母株后代中杂交后代的比例以估计母株异交率的方法(Jarne et al.，2008)。例如，当检测来自同一母株的10个后代中出现了5个异交后代，则母株的异交率即为50％。
从传统的观点看，大豆是一种典型的自花授粉作物，天然异交率很低，在0.03％-19％之间(Caviness，1966；Carlson and Lersten，1987；Sun et al.，1992；Ahrent and Cavinsee，1994；Fujita et al.，1997；Jeffery，2003)。
通过母本(不育系，代号：A-Lines)×父本(恢复系，代号：R-Lines)进行杂交获得的杂交种作为市场销售的杂交大豆种子。在这其中不育系(A-Lines)的繁殖还需要母本(不育系，A-Lines)×父本(保持系，B-Lines)进行杂交获得；恢复系为可育材料，正常繁殖。大豆人工杂交困难且天然异交率非常低，风力传粉的可能性微乎其微(赵丽梅等，1999)。在专利文献CN1391795A公开的大豆杂交种制种方法中所声明的以花蓟马作为大豆授粉昆虫，但目前未见应用于大田生产。
为了保证不育系繁殖和杂交种制种产量，需要选育出来的杂交种不仅具有优势目标性状(例如，高产、高油、高蛋白等)，同时要保证作为母本的不育系材料具有高异交率性状。选择有产量潜力或针对某一优异性状的亲本，需要经过至少五代以上的回交转育，才能获得稳定的不育系。然而，在生产上应用上述回交转育的不育系时，却发现其异交性能低、繁殖系数小、制种成本高而无法继续使用，这将会导致大量时间、成本、精力的浪费。因此，对可育材料入选杂交组合之前进行异交率性状的提前甄别，将加快杂交大豆育种的进程。
现有技术大多通过测定雄性不育植株异交结实率来计算异交率，但这种方法受到雄性不 育株在生理和代谢缺陷上的影响，难以全面的反映正常大豆群体的异交率。
发明内容
本公开的目的包括，例如，提供一种鉴定自花授粉植物异交率的方法。该方法应用后代检测方法，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植物的异交率，可以对自花授粉植物进行异交率性状的评估，这省去了多代回交转育不育系的中间环节，也避免了雄性不育植株由于生理和代谢缺陷上的差异而导致异交结实率不准确从而无法全面地反映正常自花授粉植物的异交率，对可育材料入选杂交组合之前进行异交率性状的提前甄别，有利于加快杂交植物育种的进程，降低了制种成本。
为了达到至少上述目的，本公开提供了一种鉴定自花授粉植物异交率的方法，其包括：选择待测的自花授粉植株作为母本，选择携带抗除草剂基因的自花授粉植株作为父本，在指定授粉昆虫或封闭条件下天然进行杂交，统计子代抗除草剂的植株数量，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植株的异交率。
在一种或多种实施方式中，待测的自花授粉植株的异交率通过如下公式计算：
异交率＝子代抗除草剂的植株数量/子代总植株数×100％。
在一种或多种实施方式中，该方法还包括：将封闭授粉条件下获得的母本种子培养至子叶期，喷施与抗除草剂基因相对应的除草剂，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植株的异交率。
在一种或多种实施方式中，除草剂的喷施浓度为0.27％-0.59％。
在一种或多种实施方式中，除草剂的喷施浓度为0.37％-0.59％，除草剂的典型喷施浓度为0.59％。
在一种或多种实施方式中，在喷施与抗除草剂基因相对应的除草剂的4-7天后，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植株的异交率。
在一种或多种实施方式中，子叶期为植株处于2-3个叶片时期。
在一种或多种实施方式中，喷施时将与抗除草剂基因相对应的除草剂施于植株叶片。
在一种或多种实施方式中，抗除草剂基因为epsps、ahas、GAT、gat4621、sxglr-11或其组合，典型的抗除草剂基因为epsps。
在一种或多种实施方式中，抗除草剂基因的组合为以下串联组合中的任一种：epsps和GAT的串联组合，epsps和gat4621的串联组合，epsps和sxglr-11的串联组合。
在一种或多种实施方式中，抗除草剂基因epsps、GAT、gat4621、sxglr-1分别整合于不同的染色体上。
在一种或多种实施方式中，待测的自花授粉植株选自大豆、油菜、水稻、芝麻、花生、绿豆、苏子、草莓或西红柿，典型的待测自花授粉植株为大豆。
在一种或多种实施方式中，携带抗除草剂基因的自花授粉植株为H03-06-4。
在一种或多种实施方式中，除草剂为草甘膦。
在一种或多种实施方式中，指定授粉昆虫为蜜蜂。
在一种或多种实施方式中，将父本和母本间隔种植，父本和母本的垄距为60-65cm，父 本和母本的株距均为10-20cm。
在一种或多种实施方式中，携带抗除草剂基因的自花授粉植株通过化学诱变或辐射诱变选育。
在一种或多种实施方式中，化学诱变为甲基磺酸乙酯(EMS)诱变。
在一种或多种实施方式中，父本和母本穴播出苗后，在开花前覆盖尼龙网。
在一种或多种实施方式中，尼龙网的孔目为1.5mm。
附图说明
为了更清楚地说明本公开实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本公开的某些实施方式，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为网室的立体示意图；
图2为网室的截面示意图；
图3为网室的俯视示意图；
图4为育种箱定穴板种植示意图；
图5为实施例2中草甘膦喷施不同浓度的结果对比图；
图6为不同生长期的大豆植株长势示意图；
图7为实施例3中不同生长期的大豆植株对草甘膦耐受性结果对比图；
图8为实施例4中后代群体栽培鉴定图；
图9为实施例5中后代群体栽培鉴定图。
具体实施方式
根据本公开提供的一种鉴定自花授粉植物异交率的方法，该方法包括：选择待测的自花授粉植株作为母本，选择携带抗除草剂基因的自花授粉植株作为父本，在指定授粉昆虫或封闭条件下天然进行杂交，统计子代抗除草剂的植株数量，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植物的异交率。
在一种或多种实施方式中，携带上述抗除草剂基因的植株能抗除草剂。当喷施除草剂时，非异交自花授粉植物由于不含抗除草剂基因而代谢异常，进而枯萎、死亡，而异交自花授粉植物由于核基因组中通过杂交含有抗除草剂基因能够耐除草剂，正常存活，最后统计正常存活的自花授粉植株，计算得到待测自花授粉植株的异交率。
待测的自花授粉植物的异交率通过如下公式计算：
异交率＝子代抗除草剂的植株数量/子代总植株数×100％。
在一种或多种实施方式中，该方法还包括：将封闭授粉条件下获得的母本种子培养至子叶期，喷施与抗除草剂基因相对应的除草剂，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植物的异交率。
在一种或多种实施方式中，子叶期为植株处于2-3个叶片时期。
在一种或多种实施方式中，除草剂的喷施浓度可为0.27％-0.59％，例如为0.31％-0.55％， 例如为0.35％-0.49％，例如为0.39％-0.45％，例如为0.37％-0.59％，例如为0.27％、0.29％、0.31％、0.33％、0.35％、0.37％、0.39％、0.41％、0.43％、0.45％、0.47％、0.49％、0.51％、0.53％、0.55％、0.57％、0.59％，典型地，除草剂的喷施浓度可为0.59％。
在本公开提供的除草剂喷施浓度范围内能够高效地筛分出异交自花授粉植物，若高于该喷施浓度，则正常的抗性异交自花授粉植物也会植株叶片枯萎，影响正常生长发育，导致无法筛分出异交自花授粉植物；若低于该喷施浓度，则非异交自花授粉植物叶片部分枯萎，甚至会在后续一段的培养时间通过植株的自身生理代谢耐受除草剂，恢复叶片颜色及正常的生长发育，也导致无法筛分出异交自花授粉植物。
在一种或多种实施方式中，喷施时将与抗除草剂基因相对应的除草剂施于植株叶片。
在一种或多种实施方式中，上述抗除草剂基因为epsps、ahas、GAT、gat4621、sxglr-11或其组合。
在一种或多种实施方式中，抗除草剂基因为epsps。
在一种或多种实施方式中，上述抗除草剂基因的组合可以是以下串联组合中的任一种：epsps和GAT的串联组合，epsps和gat4621的串联组合，epsps和sxglr-11的串联组合。
在一种或多种实施方式中，上述抗除草剂基因的组合也可以是抗除草剂基因epsps、GAT、gat4621、sxglr-1分别整合于不同的染色体上。
在一种或多种实施方式中，上述携带抗除草剂基因的自花授粉植株也可以是通过化学诱变或辐射诱变选育的抗除草剂基因的自花授粉植株。
化学诱变是使用化学诱变剂处理植物材料，以诱发遗传物质的突变，从而引起形态特征的变异，然后根据育种目标，对这些变异进行鉴定、培育和选择，最终育成新品种。在一种或多种实施方式中，化学诱变剂可以选自烷化剂、核酸碱基类似物以及其他诱变剂，诸如亚硝酸、叠氮化纳、秋水仙素等。在一种或多种实施方式中，化学诱变为甲基磺酸乙酯(EMS)诱变。
辐射诱变是利用射线作为基因诱变因素来处理植物材料，以诱发遗传物质的突变，使其后代出现新的变异类型。在一种或多种实施方式中，辐射诱变所利用的射线选自χ、γ、α、β射线和中子、紫外光等。
自花授粉植株是指其雌雄配子来源于同一植株或同一花朵的植物。不同自花授粉植物的天然异交率差异较大，但一般应该在0.03％-20％范围内。在本公开中，对自花授粉植株的种类没有特别限制，只要是能够自花授粉的植物都在本公开的范围内。在一种或多种实施方式中，自花授粉植株可以选自自花授粉农作物、观赏植物或树木。在一种或多种实施方式中，自花授粉植株可以是粮食作物、蔬菜、水果、藤本植物或观赏植物。在一种或多种实施方式中，自花授粉植株可以是草本植物、木本植物或藤本植物。在一种或多种实施方式中，自花授粉植株可以是豆科植物，例如：大豆、蚕豆、豌豆、绿豆、赤豆、豇豆、菜豆、藊豆、木豆、花生等。在一种或多种实施方式中，农作物可以是谷物。在一种或多种实施方式中，上述待测的自花授粉植株选自大豆、油菜、水稻、芝麻、花生、绿豆、苏子、草莓或西红柿，典型的待测的自花授粉植株为大豆。
在一种或多种实施方式中，上述携带抗除草剂基因的自花授粉植株为H03-06-4。
在一种或多种实施方式中，携带上述抗除草剂基因的植株能够抗以下除草剂中的一种或多种：草甘膦；磺酰脲类、咪唑啉酮类、三唑嘧啶磺酰胺类及水杨酸类除草剂；吡啶氧乙酸类除草剂。在一种或多种实施方式中，典型的除草剂为草甘膦。
在一种或多种实施方式中，在喷施与抗除草剂基因相对应的除草剂的4-7天后，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植株的异交率。具体地，当喷施除草剂4-7天后，调查植株叶片颜色，统计亲本子代抗除草剂植株数，并计算待测自花授粉植株的异交率。若调查统计植株叶片的颜色时间在7天后，则部分非异交自花授粉植株可能恢复生长代谢，使叶片恢复颜色，不利于后续植株耐受除草剂的甄别。若调查统计植株叶片的颜色时间在4天内，部分非异交自花授粉植株可能尚未发生生理阻遏，叶片颜色尚未发生变化，也不利于后续植株耐受除草剂的甄别。
授粉昆虫指的是习惯于花上活动并能传授花粉的昆虫。在一种或多种实施方式中，授粉昆虫可以是鞘翅目、双翅目、膜翅目、鳞翅目、直翅目、半翅目或缨翅目。在一种或多种实施方式中，授粉昆虫可以是蜜蜂、黄蜂、蝶、蛾、蚁或甲虫。在一种或多种实施方式中，上述指定授粉昆虫为蜜蜂。通过提供蜜蜂对自花授粉植物进行授粉，有效提升了自花授粉植物杂交率。
在一种或多种实施方式中，上述使用蜜蜂作为虫媒进行传粉时，设置24平方米放蜂1500只，设置72平方米放蜂3000只。此外，在大面积制种中，可以提高放蜂的数量。
在一种或多种实施方式中，将父本和母本间隔种植，父本和母本的垄距为60-65cm，例如为60、61、62、63、64、65cm，父本和母本的株距均为10-20cm，例如为12-18cm，例如为14-16cm，例如为10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20cm。
在一种或多种实施方式中，父本和母本穴播出苗后，在开花前覆盖尼龙网，该尼龙网的孔目为1.5mm。
本公开提供的鉴定自花授粉植物异交率的方法实现的有益效果包括，例如：
本公开提供的鉴定自花授粉植物异交率的方法可利用携带抗除草剂基因的植株能抗除草剂。当喷施除草剂时，非异交自花授粉植物由于不含抗除草剂基因而代谢异常，进而枯萎、死亡，而异交自花授粉植物由于核基因组中通过杂交含有抗除草剂基因能够耐除草剂，正常存活，最后统计正常存活的自花授粉植物，计算得到待测自花授粉植物的异交率。这种方法根据子代抗除草剂的植株数量鉴定待测的自花授粉植物的异交率，对于自花授粉植物异交率鉴定提供了新思路，省去了多代回交转育不育系的中间环节，降低了制种成本。
实施例
为使本公开实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本公开实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本公开的特征和性能作进一步的详细描述。
以下是生物材料说明：
H03-06-4：抗草甘膦转基因大豆，是吉林省育成品系，其由吉林省农业科学院，大豆研究所，分子育种团队选育；
JLCMS82B：非抗草甘膦大豆，是辽宁省育成品种，其是由吉林省农业科学院，大豆研究所，杂交大豆团队保存的种质资源；
JLCMS89B：非抗草甘膦大豆，是吉林省育成品系，其是由吉林省农业科学院，大豆研究所，杂交大豆团队保存的种质资源；
吉育47：非抗草甘膦大豆，是吉林省育成品种，其是由吉林省农业科学院，大豆研究所，杂交大豆团队保存的种质资源；
水稻品种吉粳88：非抗草甘膦水稻，是吉林省育成品种，其由吉林省农业科学院，水稻研究所，常规育种课题育成；
K12-08：EMS诱变抗草甘膦水稻，是吉林省育成品系，其由吉林省农业科学院，水稻研究所，育种团队选育；以及
草甘膦药剂：其药剂名称为草甘膦异丙胺盐，有效成分含量为41％(以异丙胺盐计)，农药等级证号为PD73-88，原产地为马来西亚，生产商为美国孟山都公司。
一种鉴定大豆异交率的方法，具体包括如下依次进行的步骤：
1.异源花粉在蜜蜂授粉条件下的传播：
在第一年春，将待测大豆种质资源作为母本，H03-06-4(抗草甘膦转基因自选品系)作为父本种质在同一网室(4m×6m×2m或6m×18m×2m)内，网室立体示意图参照图1所示，网室的截面示意图和俯视示意图分别参照图2和图3所示，每穴2-3粒穴播，出苗后定苗1株。田间管理同大田生产田，开花前及时除草除虫，开花后禁止施用杀虫剂，避免对授粉昆虫蜜蜂造成危害。每份待测大豆种质种植3-20穴。开花前覆盖尼龙网，孔目1.5mm，父母本间隔种植，垄距60-65cm，株距10-20cm，开花期放置蜜蜂蜂箱。在整个大豆开花期，对蜜蜂进行饲喂，维持蜜蜂蜂群密度。开花期结束，撤离蜜蜂蜂箱，撤除尼龙网。
本公开实施例中网室用于提供一个可控蜂群及授粉源的结构，在其他实施方式中也可以通过其他简易装置实现授粉源的控制。
2.待测大豆种质后代异交种子的检测：
在第一年秋，将步骤1网室内种质的待测大豆种质按单株收获(每株对应一个株系)。将收获的种子在育种箱中按照株系种植，在其他实施方式中，参照图4所示，也可以采用育种箱定穴板进行种植。对每个株系设置标签，以便于调查。设置种植深度为1-4cm，顶层覆盖育苗基质土或草炭土，防止灌溉时土壤表面板结。及时灌溉，经13-20天，当植株处于2个叶片的子叶期时，对这些植株喷施草甘膦除草剂，喷施时注意药液施于植株叶片，尽量避免喷施于表层土壤。再经过6-7天，调查存活植株，存活植株判定为母株的异交粒，根据以下公式计算待测种质的异交率：
Figure PCTCN2020071224-appb-000001
此外，在其他实施方式中，也可以将步骤1收获的种子在室内进行培养，待长至2个叶 片的子叶期时，对这些植株喷施草甘膦除草剂，因此，可以在一年内实现待测种质异交率的鉴定，极大缩短了育种周期。
实施例1
将JLCMS82B和JLCMS89B作为两种母本待测大豆品系，H03-06-4作为父本种植在同一网室(4m×6m×2m)，开花前覆盖尼龙网，孔目1.5mm，父母本间隔种植，垄距60cm，株距10cm，开花期放置蜜蜂蜂箱，共3个网室(分别为A、B和C网室)，每个网室的待测材料JLCMS82B和JLCMS89B各选取5株。通过后代草甘膦抗性检测统计JLCMS82B和JLCMS89B大豆异交率。JLCMS82B和JLCMS89B品种的大豆异交率参照表1所示：
表1. JLCMS82B和JLCMS89B品种的大豆异交率
Figure PCTCN2020071224-appb-000002
由表1可知，大豆品种JLCMS82B的异交率明显高于JLCMS89B。
实施例2
本实施例对生长至2个叶片的子叶期的正常非转基因大豆和抗草甘膦大豆同时进行4.1％、1.36％、0.82％、0.59％、0.45％、0.37％、0.31％、0.27％、0.24％和0.21％共10个有效成分浓度的草甘膦喷施对比试验，喷施5天后的结果参照图5所示。每个育种箱分为上下两个区域，上下两个区域中间间隔一行设置，上面区域种植有5行H03-06-4(抗草甘膦大豆自选品系)，下面区域种植有5行吉育47(非抗草甘膦大豆品种)，由图5可知，当喷施草甘膦有效浓度为0.59％时，非转基因大豆能在5天内全部枯萎，而抗草甘膦大豆的植株叶片颜色均未受损，长势未受影响。当喷施草甘膦有效浓度大于0.59％时，非转基因大豆能在5天内全部枯萎，而部分抗草甘膦大豆的植株叶片颜色变黄，生长受抑制。当喷施草甘膦有效浓度低于0.59％时，部分非转基因大豆在5天内叶片没有呈现严重枯萎，继续观察，在后续生长 期内恢复绿色，抗草甘膦大豆的植株叶片颜色无明显变化，生长正常。因此，当草甘膦有效喷施浓度为0.59％时，鉴定效果最佳。
实施例3
本实施例对不同生长期的大豆植株进行草甘膦耐受试验，不同生长期的大豆植株参照图6所示。对照组为抗草甘膦大豆H03-06-4，实验组为常规非转基因大豆品种(吉育47)，两个处理组的水、氧、温度、肥料等条件均一致，种植时间相同，喷施有效浓度为0.59％的草甘膦时间相同。分别将对照组长至VE(发芽期)、VC(子叶期)、V2、V3、V5、R1、R5期的植株喷施0.59％的草甘膦，实验组的处理与对照组相同。在喷施5天后观察结果，草甘膦的喷施期在VC(子叶期)、V2和V3期时实验组(左)大豆品种全部枯萎，而对照组(右)的大豆品种未受影响，喷施效果较好。而在VE期以及R5期的实验组大豆品种喷施鉴定效果较差，试验结果参照图7所示。本公开通过选择2-3个叶片子叶期作为最适喷施时期，一方面可以缩短鉴定周期，另一方面有利于降低喷施除草剂的成本。
实施例4
本实施例实际提供了针对1034株大豆资源的异交率统计，将1034株大豆资源作为母本，H03-06-4作为父本种植在同一网室内。开花前覆盖尼龙网，孔目1.5mm，父母本间隔种植，垄距为60cm，株距为10cm，在开花期放置蜜蜂蜂箱。采用有效浓度为0.59％的草甘膦喷施后代群体，测得每株大豆资源的异交率，参照图8和表2所示。去除受冷害影响以及未出苗或死苗的情况，共检测868株大豆资源。
表2. 868个待测大豆种质异交率数据统计表
编号 异交粒数 总粒数 异交率(％) 编号 异交粒数 总粒数 异交率(％)
1 43 103 41.7 480 0 51 0
3 27 62 43.5 481 19 287 6.6
5 89 270 33 482 5 205 2.4
6 44 160 27.5 483 12 231 5.2
7 21 46 45.7 484 4 50 8
9 53 103 51.5 485 0 2 0
10 64 118 54.2 486 15 119 12.6
11 65 112 58 487 0 40 0
12 16 32 50 488 0 8 0
13 18 39 46.2 489 4 117 3.4
14 47 78 60.3 490 4 341 1.2
15 9 20 45 491 1 92 1.1
16 58 124 46.8 492 3 123 2.4
17 1 4 25 493 8 234 3.4
18 26 89 29.2 494 0 96 0
19 111 235 47.2 495 3 73 4.1
20 23 51 45.1 496 2 80 2.5
21 90 205 43.9 497 0 36 0
22 27 77 35.1 498 3 54 5.6
23 77 120 64.2 499 0 120 0
24 4 9 44.4 500 13 322 4
25 21 39 53.8 501 9 119 7.6
26 14 20 70 502 3 209 1.4
27 13 27 48.1 503 15 206 7.3
28 5 14 35.7 504 10 190 5.3
29 33 47 70.2 505 3 94 3.2
30 61 129 47.3 506 3 53 5.7
31 4 5 80 507 4 172 2.3
32 17 26 65.4 508 11 252 4.4
33 159 227 70 509 6 197 3
34 6 9 66.7 510 2 38 5.3
35 3 7 42.9 511 5 120 4.2
36 22 29 75.9 512 18 329 5.5
37 37 69 53.6 513 3 109 2.8
38 102 173 59 514 0 39 0
39 71 122 58.2 515 4 59 6.8
40 70 129 54.3 516 3 107 2.8
41 27 40 67.5 517 1 56 1.8
42 65 89 73 518 4 217 1.8
43 125 202 61.9 519 2 132 1.5
44 43 100 43 520 55 583 9.4
45 15 43 34.9 521 39 314 12.4
46 89 162 54.9 522 10 254 3.9
47 18 49 36.7 523 8 64 12.5
48 46 153 30.1 524 4 52 7.7
51 50 195 25.6 525 3 25 12
53 17 51 33.3 526 2 7 28.6
54 87 193 45.1 528 8 162 4.9
57 5 21 23.8 529 12 280 4.3
58 45 114 39.5 530 1 168 0.6
61 24 95 25.3 531 6 252 2.4
62 21 91 23.1 532 4 35 11.4
63 18 39 46.2 533 7 174 4
65 32 94 34 534 0 137 0
66 1 11 9.1 535 1 53 1.9
67 25 108 23.1 536 7 106 6.6
68 44 148 29.7 537 8 141 5.7
69 29 64 45.3 538 7 261 2.7
70 33 121 27.3 539 10 144 6.9
71 12 90 13.3 540 3 193 1.6
72 14 105 13.3 541 0 2 0
73 4 153 2.6 542 1 111 0.9
74 33 168 19.6 543 4 414 1
75 32 166 19.3 544 0 7 0
76 19 114 16.7 545 6 123 4.9
78 43 266 16.2 546 6 313 1.9
79 19 45 42.2 547 2 69 2.9
80 1 14 7.1 548 2 62 3.2
81 11 37 29.7 549 2 303 0.7
82 2 5 40 550 2 65 3.1
83 5 8 62.5 551 13 519 2.5
84 25 70 35.7 552 2 108 1.9
85 19 54 35.2 553 1 110 0.9
86 42 128 32.8 554 1 112 0.9
89 6 31 19.4 555 6 86 7
90 15 42 35.7 556 4 128 3.1
92 5 33 15.2 557 4 233 1.7
93 24 78 30.8 558 0 26 0
94 3 16 18.8 559 2 138 1.4
95 2 7 28.6 560 1 77 1.3
96 20 89 22.5 561 9 205 4.4
97 26 110 23.6 563 4 196 2
99 11 102 10.8 564 2 42 4.8
100 5 179 2.8 565 12 251 4.8
101 42 295 14.2 566 8 210 3.8
102 13 113 11.5 567 5 158 3.2
103 40 128 31.3 568 5 97 5.2
104 27 143 18.9 569 4 35 11.4
105 18 84 21.4 570 0 46 0
106 36 166 21.7 571 4 60 6.7
107 15 57 26.3 572 17 125 13.6
108 19 68 27.9 573 16 212 7.5
109 31 103 30.1 574 23 228 10.1
110 0 1 0 575 21 295 7.1
112 5 34 14.7 576 3 45 6.7
113 26 129 20.2 577 12 102 11.8
115 4 25 16 578 1 14 7.1
116 35 127 27.6 579 23 274 8.4
117 15 57 26.3 580 0 48 0
118 44 226 19.5 581 10 94 10.6
119 37 174 21.3 583 7 216 3.2
120 4 23 17.4 584 0 206 0
121 17 78 21.8 585 0 32 0
122 19 88 21.6 586 2 77 2.6
124 7 30 23.3 587 3 176 1.7
125 12 73 16.4 588 0 19 0
126 42 166 25.3 589 2 26 7.7
127 16 126 12.7 590 1 153 0.7
128 1 51 2 591 2 12 16.7
130 2 39 5.1 592 9 378 2.4
131 7 164 4.3 593 0 64 0
132 3 18 16.7 594 3 186 1.6
133 6 222 2.7 595 1 57 1.8
134 3 83 3.6 596 12 463 2.6
137 29 389 7.5 597 4 85 4.7
138 15 144 10.4 598 3 209 1.4
139 4 48 8.3 599 9 353 2.5
140 26 202 12.9 600 4 150 2.7
141 0 2 0 601 18 417 4.3
142 18 286 6.3 602 3 63 4.8
144 10 109 9.2 603 7 416 1.7
145 8 137 5.8 604 2 38 5.3
146 8 74 10.8 605 3 80 3.8
147 2 39 5.1 606 1 72 1.4
148 16 205 7.8 607 5 129 3.9
149 9 121 7.4 608 10 117 8.5
150 5 191 2.6 609 6 234 2.6
151 1 22 4.5 610 4 80 5
152 1 26 3.8 611 16 250 6.4
153 9 177 5.1 612 8 37 21.6
154 17 180 9.4 613 7 96 7.3
155 11 209 5.3 614 8 130 6.2
156 10 105 9.5 615 16 211 7.6
157 13 120 10.8 616 3 42 7.1
158 5 75 6.7 617 3 116 2.6
160 9 81 11.1 618 10 244 4.1
161 0 48 0 621 4 127 3.1
162 2 32 6.3 622 0 52 0
163 6 66 9.1 623 1 60 1.7
164 21 235 8.9 624 10 172 5.8
165 10 79 12.7 625 5 163 3.1
166 5 90 5.6 626 1 21 4.8
167 4 139 2.9 627 4 135 3
168 0 8 0 628 10 305 3.3
169 0 33 0 629 2 109 1.8
170 4 184 2.2 630 1 106 0.9
171 1 120 0.8 631 9 125 7.2
172 2 176 1.1 633 2 64 3.1
173 1 139 0.7 634 6 106 5.7
174 8 247 3.2 635 0 5 0
175 0 6 0 636 8 135 5.9
177 1 89 1.1 637 0 44 0
178 5 291 1.7 638 2 77 2.6
179 0 19 0 639 4 153 2.6
180 0 26 0 640 5 278 1.8
181 3 88 3.4 641 9 189 4.8
182 2 68 2.9 642 10 211 4.7
183 9 161 5.6 643 6 170 3.5
184 1 29 3.4 644 14 217 6.5
186 2 122 1.6 645 6 169 3.6
187 1 168 0.6 646 1 89 1.1
188 1 26 3.8 647 7 167 4.2
189 0 3 0 648 25 292 8.6
190 19 268 7.1 649 7 138 5.1
191 5 132 3.8 650 6 154 3.9
193 11 89 12.4 651 6 114 5.3
194 1 32 3.1 652 13 245 5.3
195 2 58 3.4 653 10 155 6.5
196 2 72 2.8 654 0 8 0
197 1 13 7.7 655 2 29 6.9
198 1 5 20 656 1 28 3.6
200 11 364 3 657 4 7 57.1
201 4 76 5.3 658 0 6 0
202 4 82 4.9 659 7 103 6.8
203 3 34 8.8 660 14 152 9.2
205 0 4 0 661 4 91 4.4
206 24 88 27.3 662 6 135 4.4
207 5 64 7.8 663 2 8 25
208 23 180 12.8 664 12 180 6.7
209 4 27 14.8 666 5 72 6.9
210 14 112 12.5 667 8 81 9.9
211 19 142 13.4 668 2 78 2.6
212 9 143 6.3 669 8 105 7.6
213 5 51 9.8 670 20 196 10.2
214 0 22 0 671 16 201 8
215 0 15 0 672 5 76 6.6
216 13 147 8.8 673 7 114 6.1
217 8 130 6.2 674 15 260 5.8
218 20 76 26.3 675 6 130 4.6
219 20 296 6.8 676 3 25 12
220 12 103 11.7 677 4 24 16.7
221 36 203 17.7 678 4 128 3.1
222 8 149 5.4 680 13 227 5.7
223 5 84 6 681 12 183 6.6
224 5 65 7.7 682 3 25 12
225 6 79 7.6 683 16 179 8.9
226 0 15 0 685 7 187 3.7
228 20 187 10.7 686 12 123 9.8
229 10 90 11.1 687 8 125 6.4
230 18 161 11.2 688 13 195 6.7
231 1 34 2.9 689 6 89 6.7
232 10 121 8.3 690 8 180 4.4
233 18 178 10.1 691 6 95 6.3
235 5 29 17.2 692 10 78 12.8
236 16 191 8.4 693 12 208 5.8
238 39 318 12.3 694 13 150 8.7
239 10 69 14.5 695 12 108 11.1
240 12 36 33.3 696 0 11 0
241 15 88 17 697 12 166 7.2
243 0 22 0 698 24 271 8.9
244 16 72 22.2 699 0 11 0
245 8 47 17 700 4 93 4.3
246 12 56 21.4 701 8 84 9.5
247 33 212 15.6 702 15 225 6.7
248 37 231 16 703 1 116 0.9
249 23 216 10.6 705 5 121 4.1
250 20 76 26.3 708 0 21 0
251 2 19 10.5 709 3 138 2.2
253 3 35 8.6 710 0 123 0
254 13 101 12.9 711 7 192 3.6
255 9 84 10.7 712 1 81 1.2
256 4 48 8.3 713 1 33 3
258 10 189 5.3 714 6 131 4.6
259 6 158 3.8 715 1 245 0.4
260 3 66 4.5 716 3 66 4.5
261 2 71 2.8 717 3 155 1.9
262 2 121 1.7 718 8 216 3.7
263 10 338 3 719 6 173 3.5
264 7 169 4.1 720 5 80 6.3
265 9 127 7.1 721 5 176 2.8
266 1 98 1 722 3 94 3.2
268 7 89 7.9 723 3 16 18.8
269 8 185 4.3 724 6 99 6.1
270 2 139 1.4 725 2 32 6.3
271 3 73 4.1 726 14 278 5
272 0 75 0 727 4 193 2.1
273 0 133 0 728 11 203 5.4
274 2 153 1.3 729 12 277 4.3
276 3 176 1.7 731 11 212 5.2
277 1 40 2.5 732 0 16 0
278 0 4 0 733 5 124 4
279 11 70 15.7 734 5 164 3
280 2 137 1.5 735 0 53 0
281 5 107 4.7 736 0 10 0
262 2 121 1.7 718 8 216 3.7
263 10 338 3 719 6 173 3.5
264 7 169 4.1 720 5 80 6.3
265 9 127 7.1 721 5 176 2.8
266 1 98 1 722 3 94 3.2
268 7 89 7.9 723 3 16 18.8
269 8 185 4.3 724 6 99 6.1
270 2 139 1.4 725 2 32 6.3
271 3 73 4.1 726 14 278 5
272 0 75 0 727 4 193 2.1
273 0 133 0 728 11 203 5.4
274 2 153 1.3 729 12 277 4.3
276 3 176 1.7 731 11 212 5.2
277 1 40 2.5 732 0 16 0
278 0 4 0 733 5 124 4
279 11 70 15.7 734 5 164 3
280 2 137 1.5 735 0 53 0
281 5 107 4.7 736 0 10 0
282 10 149 6.7 737 10 375 2.7
283 1 51 2 738 2 5 40
284 0 12 0 739 6 272 2.2
285 10 99 10.1 740 11 244 4.5
286 0 20 0 741 12 415 2.9
287 2 319 0.6 742 7 301 2.3
288 2 134 1.5 743 2 116 1.7
289 0 5 0 744 6 104 5.8
290 9 277 3.2 745 7 85 8.2
291 1 26 3.8 746 3 26 11.5
292 7 144 4.9 747 15 141 10.6
293 2 82 2.4 748 17 313 5.4
294 5 87 5.7 749 9 169 5.3
295 3 123 2.4 750 5 52 9.6
296 5 112 4.5 751 10 220 4.5
297 0 20 0 752 10 257 3.9
298 6 191 3.1 753 2 62 3.2
299 3 33 9.1 754 0 11 0
300 5 103 4.9 755 16 294 5.4
301 5 148 3.4 756 0 5 0
302 2 103 1.9 757 8 107 7.5
303 7 178 3.9 758 5 166 3
304 8 173 4.6 759 0 42 0
305 17 144 11.8 760 0 12 0
306 1 32 3.1 761 0 44 0
307 19 314 6.1 762 0 10 0
308 5 160 3.1 763 8 355 2.3
309 15 184 8.2 764 0 207 0
310 4 43 9.3 765 2 117 1.7
311 4 148 2.7 766 13 327 4
312 13 170 7.6 767 4 128 3.1
315 0 12 0 768 4 67 6
316 6 281 2.1 769 4 89 4.5
317 4 13 30.8 770 10 174 5.7
318 5 48 10.4 771 3 177 1.7
319 1 53 1.9 772 0 13 0
321 6 234 2.6 773 0 167 0
322 9 129 7 774 2 57 3.5
323 1 82 1.2 775 13 377 3.4
324 7 150 4.7 776 1 8 12.5
326 7 145 4.8 777 2 59 3.4
327 9 131 6.9 778 2 25 8
328 9 150 6 779 2 82 2.4
329 2 326 0.6 780 10 122 8.2
331 2 256 0.8 781 5 146 3.4
332 4 113 3.5 782 24 294 8.2
333 3 182 1.6 783 17 196 8.7
334 4 106 3.8 784 1 41 2.4
335 1 34 2.9 785 8 298 2.7
336 12 163 7.4 786 9 201 4.5
337 4 117 3.4 787 17 324 5.2
338 0 18 0 789 1 36 2.8
340 12 247 4.9 790 2 14 14.3
341 8 136 5.9 791 1 30 3.3
342 14 274 5.1 792 6 224 2.7
343 8 337 2.4 793 12 234 5.1
344 3 142 2.1 794 9 259 3.5
345 10 170 5.9 795 4 139 2.9
346 1 107 0.9 796 4 232 1.7
347 1 25 4 797 6 210 2.9
348 2 132 1.5 798 16 303 5.3
349 16 292 5.5 799 17 382 4.5
350 0 64 0 800 13 336 3.9
351 4 83 4.8 801 2 132 1.5
352 6 74 8.1 802 5 318 1.6
353 4 128 3.1 803 0 29 0
354 0 6 0 804 4 145 2.8
355 5 116 4.3 805 5 450 1.1
356 1 31 3.2 806 2 61 3.3
357 10 340 2.9 807 3 54 5.6
358 2 143 1.4 813 2 122 1.6
359 6 211 2.8 814 3 0
360 4 232 1.7 815 8 305 2.6
361 7 81 8.6 816 0 13 0
362 9 122 7.4 817 14 206 6.8
363 2 20 10 818 3 14 21.4
364 3 49 6.1 819 0 5 0
365 2 33 6.1 820 13 288 4.5
366 1 13 7.7 821 7 177 4
367 17 217 7.8 822 11 117 9.4
368 4 145 2.8 823 5 103 4.9
369 2 222 0.9 824 3 154 1.9
370 8 113 7.1 825 10 217 4.6
371 1 132 0.8 826 4 91 4.4
372 8 135 5.9 827 1 43 2.3
373 9 182 4.9 828 11 196 5.6
374 5 80 6.3 829 9 118 7.6
375 6 145 4.1 830 2 73 2.7
376 7 180 3.9 831 7 244 2.9
377 2 33 6.1 832 4 26 15.4
378 2 74 2.7 833 1 15 6.7
379 0 14 0 834 0 44 0
380 2 55 3.6 835 6 53 11.3
381 8 124 6.5 836 9 147 6.1
382 5 150 3.3 837 9 223 4
383 7 264 2.7 838 2 6 33.3
384 8 123 6.5 839 5 299 1.7
385 5 199 2.5 840 4 84 4.8
386 11 176 6.3 841 4 193 2.1
387 12 196 6.1 842 8 279 2.9
388 4 66 6.1 843 0 15 0
389 5 64 7.8 844 7 26 26.9
390 7 121 5.8 845 7 194 3.6
391 6 108 5.6 846 6 99 6.1
392 2 232 0.9 847 2 17 11.8
393 0 37 0 848 4 70 5.7
394 4 87 4.6 850 3 295 1
395 7 212 3.3 851 1 80 1.3
396 0 10 0 852 11 384 2.9
397 13 186 7 853 1 123 0.8
398 5 234 2.1 854 5 176 2.8
399 1 49 2 855 12 429 2.8
400 0 37 0 856 11 228 4.8
401 4 245 1.6 858 5 121 4.1
402 2 129 1.6 859 10 199 5
403 0 19 0 860 4 74 5.4
404 3 153 2 861 25 253 9.9
405 7 382 1.8 863 3 23 13
406 4 56 7.1 864 1 40 2.5
407 0 103 0 865 4 166 2.4
408 6 99 6.1 866 0 25 0
409 8 82 9.8 867 15 367 4.1
410 0 13 0 868 2 65 3.1
411 3 16 18.8 869 15 294 5.1
412 2 125 1.6 870 0 12 0
413 2 63 3.2 871 27 345 7.8
414 9 165 5.5 872 24 583 4.1
415 3 130 2.3 873 15 117 12.8
416 6 238 2.5 874 28 285 9.8
417 4 62 6.5 875 19 220 8.6
418 6 291 2.1 881 29 243 11.9
419 3 175 1.7 882 26 287 9.1
420 3 59 5.1 883 11 60 18.3
421 1 104 1 884 9 140 6.4
422 3 119 2.5 885 5 18 27.8
423 4 210 1.9 886 34 312 10.9
424 0 168 0 887 5 84 6
425 1 98 1 888 5 28 17.9
426 16 293 5.5 889 13 124 10.5
427 4 99 4 890 26 295 8.8
428 8 49 16.3 891 10 158 6.3
429 7 154 4.5 892 7 54 13
430 3 347 0.9 893 15 170 8.8
431 2 123 1.6 894 8 68 11.8
432 3 95 3.2 895 53 510 10.4
433 9 177 5.1 896 24 282 8.5
434 8 98 8.2 897 2 28 7.1
435 0 10 0 898 17 144 11.8
436 7 90 7.8 899 58 379 15.3
437 3 191 1.6 900 23 174 13.2
438 3 239 1.3 901 30 222 13.5
439 0 103 0 902 21 130 16.2
440 4 113 3.5 903 39 244 16
441 0 7 0 904 34 172 19.8
442 2 19 10.5 905 31 294 10.5
443 12 370 3.2 906 27 242 11.2
444 2 151 1.3 908 26 82 31.7
445 0 33 0 910 0 6 0
446 1 80 1.3 913 19 144 13.2
447 8 121 6.6 914 26 120 21.7
448 3 125 2.4 915 20 72 27.8
449 6 320 1.9 916 49 383 12.8
451 5 179 2.8 917 2 6 33.3
452 5 161 3.1 918 21 93 22.6
453 4 157 2.5 919 6 20 30
454 0 73 0 920 8 79 10.1
455 3 152 2 921 59 310 19
456 6 220 2.7 922 37 330 11.2
457 2 95 2.1 923 13 51 25.5
458 1 35 2.9 924 8 57 14
459 15 228 6.6 925 30 140 21.4
460 3 167 1.8 926 27 106 25.5
461 0 133 0 927 19 115 16.5
462 2 98 2 928 34 125 27.2
463 0 7 0 929 43 139 30.9
464 5 116 4.3 930 13 59 22
465 3 54 5.6 931 41 255 16.1
466 7 205 3.4 932 25 70 35.7
467 10 203 4.9 933 14 55 25.5
468 0 43 0 934 12 36 33.3
469 4 179 2.2 935 43 152 28.3
470 5 105 4.8 936 9 18 50
471 4 222 1.8 937 25 134 18.7
472 1 100 1 938 16 52 30.8
473 0 67 0 939 31 221 14
474 0 81 0 940 19 172 11
475 21 404 5.2 941 17 114 14.9
476 1 63 1.6 942 1 55 1.8
478 0 47 0 943 4 120 3.3
479 10 134 7.5 944 8 283 2.8
实施例5
本实施例实际提供了针对水稻品种吉粳88的异交率鉴定，将10株水稻品种吉粳88作为母本，K12-08作为父本种植在同一水稻苗池内。在这其中K12-08为通过甲基磺酸乙酯(EMS)诱变产生的水稻草甘膦抗性品系。父母本间隔种植，行距为30cm，株距为20cm，开花前插入支杆立柱，覆盖尼龙网，孔目1.5mm，网内放置蜜蜂蜂箱。采用有效浓度为0.27％的草甘膦喷施吉粳88收获的后代群体，测得每株吉粳88的异交率，参照图9和表3所示。去除受冷害影响以及未出苗或死苗的情况，共检测6株水稻。
表3. 6株待测水稻种质异交率数据统计表
编号 异交粒数 总粒数 异交率(％)
1 6 2671 0.224
2 3 3652 0.082
3 2 3271 0.061
4 0 4026 0
5 7 2638 0.265
6 5 3219 0.155
以上所有描述仅为本公开的典型实施例而已，并不用于限制本公开，对于本领域的技术人员来说，本公开可以有各种更改和变化。凡在本公开的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。
工业实用性
本公开提供的一种鉴定自花授粉植物异交率的方法，该方法应用后代检测方法，通过虫媒授粉不仅有效提升了自花授粉植物杂交率，而且根据子代抗除草剂的植株数量可以高效地鉴定待测的自花授粉植物的异交率。该方法省去了多代回交转育不育系的中间环节，也避免了雄性不育植株由于生理和代谢缺陷上的差异导致异交结实率不准确，从而无法全面的反映正常自花授粉植物的异交率，有利于加快杂交植物育种的进程，降低了制种成本，易于实现，可以在工业上大批量进行实施和应用。

Claims (20)

  1. 一种鉴定自花授粉植物异交率的方法，其包括：选择待测的自花授粉植株作为母本，选择携带抗除草剂基因的自花授粉植株作为父本，在指定授粉昆虫或封闭条件下天然进行杂交，统计子代抗除草剂的植株数量，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定所述待测的自花授粉植株的异交率。
  2. 根据权利要求1所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述待测的自花授粉植株的异交率通过如下公式计算：
    异交率＝子代抗除草剂的植株数量/子代总植株数×100％。
  3. 根据权利要求1或2所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述方法还包括：将封闭授粉条件下获得的母本种子培养至子叶期，喷施与所述抗除草剂基因相对应的除草剂，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定所述待测的自花授粉植株的异交率。
  4. 根据权利要求3所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述除草剂的喷施浓度为0.27％-0.59％。
  5. 根据权利要求3所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述除草剂的喷施浓度为0.37％-0.59％；
    优选的，所述除草剂的喷施浓度为0.59％。
  6. 根据权利要求3至5中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，在喷施与所述抗除草剂基因相对应的除草剂的4-7天后，根据子代抗除草剂的植株数量鉴定所述待测的自花授粉植株的异交率。
  7. 根据权利要求3至6中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述子叶期为植株处于2-3个叶片时期。
  8. 根据权利要求3至7中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，喷施时将与所述抗除草剂基因相对应的除草剂施于植株叶片。
  9. 根据权利要求1至8中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述抗除草剂基因为epsps、ahas、GAT、gat4621、sxglr-11或其组合；
    优选的，所述抗除草剂基因为epsps。
  10. 根据权利要求9所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述抗除草剂基因的组合为以下串联组合中的任一种：epsps和GAT的串联组合，epsps和gat4621的串联组合，epsps和sxglr-11的串联组合。
  11. 根据权利要求9所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述抗除草剂基因epsps、GAT、gat4621、sxglr-1分别整合于不同的染色体上。
  12. 根据权利要求1至11中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中， 所述待测的自花授粉植株选自大豆、油菜、水稻、芝麻、花生、绿豆、苏子、草莓或西红柿；
    优选的，所述待测的自花授粉植株为大豆。
  13. 根据权利要求12所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述携带抗除草剂基因的自花授粉植株为H03-06-4。
  14. 根据权利要求13所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述除草剂为草甘膦。
  15. 根据权利要求1至14中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述指定授粉昆虫为蜜蜂。
  16. 根据权利要求1至15中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，将所述父本和母本间隔种植，所述父本和母本的垄距为60-65cm，所述父本和母本的株距均为10-20cm。
  17. 根据权利要求1至16中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述携带抗除草剂基因的自花授粉植株通过化学诱变或辐射诱变选育。
  18. 根据权利要求17所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述化学诱变为甲基磺酸乙酯(EMS)诱变。
  19. 根据权利要求1至18中任一项所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述父本和母本穴播出苗后，在开花前覆盖尼龙网。
  20. 根据权利要求19所述的鉴定自花授粉植物异交率的方法，其中，所述尼龙网的孔目为1.5mm。
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