WO2020162452A1 - ＣＡＲライブラリおよびｓｃＦｖの製造方法 - Google Patents

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正貴 安川
弘 藤原
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Definitions

  • the present invention relates to a CAR library and a method for producing scFv.
  • T cells chimeric antigen receptor-expressing T cells, CAR-T cells
  • scFv single chain Fv
  • Screening for scFv is performed by a method using a hybridoma using B cells isolated from a living body, or a phage display method. Specifically, the former prepares a hybridoma library using B cells isolated from a living body after antigen immunization. Then, a hybridoma producing an antibody that binds to the target antigen is selected, and the sequence of the antigen recognition site of the antibody produced by the hybridoma is determined.
  • each scFv is expressed in a phage after creating a scFv library containing a polynucleotide encoding the scFv. Then, it is carried out by selecting a phage that binds to the target antigen and identifying the polynucleotide in the phage.
  • the present invention provides, for example, a CAR library used for screening an scFv that can function in CAR-T cells, and a method for producing an scFv using the CAR library.
  • a chimeric antigen receptor (CAR) library of the present invention comprises a nucleic acid encoding a first chimeric antigen receptor (CAR),
  • the first CAR comprises a first antigen binding domain, a first transmembrane domain, and a first intracellular signaling domain
  • the first antigen binding domain comprises a first single chain antibody (scFv) that screens for binding to a target antigen
  • the first scFv comprises a first heavy chain variable region and a first light chain variable region,
  • the first heavy chain variable region and the first light chain variable region satisfy the following Condition 1 or Condition 2;
  • Condition 1 Heavy chain complementarity determining regions (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region are respectively CDRH1, CDRH2 of the heavy chain variable region in the antibody that binds to the target antigen or an antigen-binding fragment thereof,
  • the method for producing scFv of the present invention comprises a first expression step of expressing the CAR library of the present invention in immune cells, A first contacting step of contacting the immune cells obtained in the first expression step with the target antigen, A first selection step of selecting the first scFv of CAR expressed in immune cells bound to the target antigen in the first contact step as a first candidate scFv binding to the target antigen.
  • a CAR library used for screening an scFv capable of functioning in CAR-T cells and a method for producing an scFv using the same can be provided.
  • FIG. 1 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 1.
  • FIG. 2 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 1.
  • FIG. 3 is a graph showing the ratio of A2/NY-ESO-1 157 tetramer positive cells in Example 1.
  • FIG. 4 is a graph showing changes in the expression level of CD69 in Example 1.
  • FIG. 5 is a graph showing changes in the expression level of CD69 in Example 1.
  • FIG. 6 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 1.
  • FIG. 7A is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 1.
  • FIG. 7B is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 1.
  • FIG. 8 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 2.
  • FIG. 9 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 2.
  • FIG. 10 is a graph showing the ratio of A2/NY-ESO-1 157 tetramer positive cells in Example 2.
  • FIG. 11 is a graph showing changes in the expression level of CD69 when the peptide concentration in Example 2 was 10 ⁇ g/mL.
  • FIG. 12 is a graph showing changes in the expression level of CD69 in Example 2.
  • FIG. 13 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 3.
  • FIG. 14 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 4.
  • FIG. 15 is a graph showing changes in the amount of cytokine produced in Example 4, (A) shows the results for CD8-positive T cells, and (B) shows the results for CD4-positive T cells.
  • FIG. 16 is a graph showing changes in cytokine production in Example 5, (A) shows the results of T cells expressing 3M4E5LH CAR, and (B) is the T cells expressing L1-3M4E5H CAR. The result of is shown.
  • FIG. 17 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 6.
  • FIG. 18 is a graph showing changes in cytokine production in Example 6, where (A) shows the results for CD8-positive T cells and (B) shows the results for CD4-positive T cells.
  • FIG. 19 is a graph showing changes in cytokine production in Example 6, where (A) shows the results for CD8-positive T cells and (B) shows the results for CD4-positive T cells.
  • FIG. 16 is a graph showing changes in cytokine production in Example 5, (A) shows the results of T cells expressing 3M4E5LH CAR, and (B) is the T cells expressing L1-3M4E5H CAR. The result of is shown.
  • FIG. 20 is a graph showing changes in cytokine production in Example 7, (A) shows the results of T cells expressing 3M4E5LH CAR, and (B) shows T cells expressing 3M4E5H-L1 CAR. The result of is shown.
  • FIG. 21 is a graph showing changes in cytokine production in Example 7, where (A) shows the results for CD8-positive T cells and (B) shows the results C for CD4-positive T cells.
  • FIG. 22 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 8.
  • FIG. 23 is a graph showing changes in the amount of cytokine produced in Example 8, where (A) shows the results for CD8-positive T cells and (B) shows the results for CD4-positive T cells.
  • FIG. 24 is a graph showing changes in the amount of cytokine produced in Example 8, where (A) shows the results for CD8-positive T cells and (B) shows the results for CD4-positive T cells.
  • FIG. 25 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 9.
  • FIG. 26 is a graph showing changes in the expression level of CD69 in Example 9.
  • FIG. 27 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 10.
  • FIG. 28 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 10.
  • FIG. 29 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 10.
  • FIG. 30 is a graph showing changes in the expression level of CD69 in Example 10.
  • FIG. 31 is a graph showing the relative proportion of CD19 dimer positive cells in Example 10.
  • FIG. 32 is a graph showing the relative value of the CD69 expression level when the target cell amount was changed in Example 10.
  • FIG. 33 is a graph showing the ratio of cytokine-producing cells in Example 10.
  • FIG. 34 is a diagram regarding the antitumor activity in the living body in Example 11.
  • FIG. 35 is a graph showing the relationship between the index value of structural affinity and the index value of functional affinity in Example 12.
  • FIG. 36 is a graph showing cytotoxicity in Example 13.
  • FIG. 37 is a diagram regarding the overall survival rate in the living body in Example 14.
  • FIG. 38 is a diagram regarding the overall survival rate in the living body in Example 14.
  • FIG. 39 is a graph showing the growth ratio of cells in Example 15.
  • FIG. 40 is a graph showing the ratio of cytokine-producing cells in Example 15.
  • FIG. 40 is a graph showing the ratio of cytokine-producing cells in Example 15.
  • FIG. 41 is a graph showing the cytotoxic activity in Example 15.
  • FIG. 42 is a dot plot showing the distribution of CD45RA/CD62L-positive cells in CD8-positive CAR-T cells and CD4-positive CAR-T cells before and after co-culture in Example 15.
  • 43 is a division ratio of each CAR-T cell in Example 15, a ratio of CD45RA-positive CD62L-positive CCR7-positive cells before and after co-culture, a ratio of CD45RA-negative CD62L-positive CCR7-positive, and CD45RA-positive CD62L-negative PD1-positive cell. It is a graph which shows and.
  • FIG. 44 is a diagram for explaining the mechanism by which the screening method of the present invention in Example 15 can obtain scFv having an excellent antitumor effect in vivo .
  • the CAR library of the present invention contains a nucleic acid encoding a first chimeric antigen receptor (CAR), and the first CAR comprises a first antigen-binding domain and a first transmembrane domain. And a first intracellular signaling domain, wherein the first antigen binding domain comprises a first single chain antibody (scFv) screening for binding to a target antigen, the first scFv being ,
  • the first heavy chain variable region and the first light chain variable region, and the first heavy chain variable region and the first light chain variable region satisfy the following Condition 1 or Condition 2.
  • the CAR library of the present invention is characterized by satisfying the following Condition 1 or Condition 2, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the heavy chain complementarity determining regions (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region are each an antibody or an antigen-binding fragment thereof that binds to the target antigen (hereinafter, also referred to as “antibody or the like”).
  • Including CDRH1, CDRH2, and CDRH3 of the heavy chain variable region in Light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region each include CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the light chain variable region of the first B cell receptor;
  • the heavy chain complementarity determining regions (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region each include CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the heavy chain variable region of the first B cell receptor,
  • Light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region are respectively CDRL1, CDRL2 of the light chain variable region in the antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to the target antigen, And CDRL3.
  • the first CAR comprises the first antigen-binding domain, the first transmembrane domain, and the first intracellular signaling domain,
  • the chain variable region and the first light chain variable region are characterized by satisfying the condition 1 or the condition 2, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the first CAR is a protein containing the first antigen-binding domain, the first transmembrane domain, and the first intracellular signal transduction domain.
  • the first CAR has, for example, a structure similar to CAR including an extracellular domain that binds to an antigen, a transmembrane domain, and an intracellular signaling domain, and the extracellular domain that binds to the antigen is the target antigen.
  • the first antigen binding domain that is screened for binding to is modified.
  • the first CAR thus has a structure similar to that of the CAR.
  • the first CAR that binds to the target antigen can induce a signal in the expressing cell via the first intracellular signaling domain, for example. Then, the first CAR that binds to the target antigen can activate, for example, its expressing cells (eg, proliferation, expression of activation marker, etc.). That is, according to the CAR library of the present invention, for example, the proportion of cells expressing the first CAR that binds to the target antigen in the CAR library-expressing cell group is increased by using the first screening method described below. be able to.
  • the CAR library of the present invention for example, scFv binding to the target antigen can be screened with a smaller number or kinds of nucleic acids as compared with the phage display method.
  • the first CAR that binds to the target antigen contains an scFv that functions in CAR-T cells because it can activate the cells expressing it in the first screening method described below, for example. I can say. Therefore, according to the CAR library of the present invention, for example, an scFv that can function in CAR-T cells can be screened.
  • the first antigen-binding domain contains a first single-chain antibody (scFv) that screens for binding to the target antigen.
  • the first scFv is, for example, a single-chain polypeptide derived from an antibody that binds to an antigen, and has a structure similar to scFv that retains the ability to bind to the antigen.
  • the scFv is a polypeptide in which a variable region fragment (Fv) of a heavy chain (H chain) and a light chain (L chain) of an antibody that binds to the antigen is linked.
  • one of a heavy chain variable region and a light chain variable region is a variable region such as an antibody that binds to the target antigen, and the other is B cell receptor, as described below.
  • the CAR library of the present invention for example, compared with the phage display method in which the heavy chain variable region and the light chain variable region that bind to the target antigen are screened at a time, a smaller number or kind of nucleic acids can be used. , ScFv binding to the target antigen can be screened.
  • the nucleic acid encoding the first CAR means, for example, a nucleic acid (polynucleotide) encoding the amino acid sequence of the first CAR.
  • the nucleic acid may be composed of DNA, RNA, or both.
  • the nucleic acid may be composed of a natural nucleic acid or a modified nucleic acid obtained by modifying the natural nucleic acid, and ENA (2'-O,4'-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids) , LNA (Locked nucleic acid), PNA (Peptide Nucleic Acid), morpholino, and other artificial nucleic acids, or may be composed of two or more of these.
  • the “domain” means, for example, in a polypeptide, a three-dimensionally structured or functionally integrated region.
  • the polypeptide include peptides having a length of 10 amino acids or more.
  • the target antigen is not particularly limited and can be any antigen.
  • the target antigens include tumor antigens, virus antigens, bacterial antigens, parasite antigens, antigens associated with autoimmune diseases, sugar chain antigens and the like.
  • the tumor antigen means, for example, a biomolecule having antigenicity such as an antigen newly expressed by a canceration of cells and an antigen whose expression level is increased.
  • the tumor antigen may be, for example, a tumor-specific antigen or a tumor-associated antigen.
  • the tumor antigen is, for example, 5T4, ⁇ 5 ⁇ 1-integrin, activated integrin ⁇ 7, 707-AP, ⁇ -fetoprotein (AFP), lectin-reactive AFP, ART-4, AURKA (AURORA A), B7H4, BAGE, ⁇ -.
  • the virus antigens include, for example, adenoviruses such as adenovirus (adenovirus) ( Adenoviridae ); coronaviruses such as coronavirus ( Coronaviridae ); Ebolaviruses ( filoviridae ); Flaviviridae such as hepatitis C virus (HCV: hepatitis C virus), dengue virus (Dengue virus), Japanese encephalitis virus (Japanese encephalitis virus), West Nile virus (west Nile virus), yellow fever virus (yellow fever virus) ( Flaviviridae); B hepatitis virus (HVB: hepatitis B virus) hepadnaviridae such as (Hepadnaviridae); herpes simplex virus type 1 (HSV-1: herpes simplex virus -1), herpes simplex virus type 2 (HSV-2 : Herpes simplex virus-2), varicella zoster virus (VZV), human cytomegal
  • the bacterial antigen can be, for example, tetanus (Clostridium tetani) Clostridium genus, etc. (Clostridium); E. (Escherichia coli) Esukerikia genus such as (Escherichia); Helicobacter pylori (Helicobacter pyloris) Helicobacter, such as (Helicobacter); Legionella pneumophila Firia (Legionella pneumophila) Legionella, such as (Legionella); Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes) Listeria such as (Listeria); Mycobacterium tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis), Raikin (Mycobacterium leprae), Mycobacterium avium (Mycobacterium avium), Mycobacterium intracellulare et (Mycobacterium intracellulare), Mycobacterium kansasii (Mycobacterium kansasii), Mycobacterium
  • Staphylococcus pneumococcal (Streptococcus pneumoniae), Streptococcus, such as Streptococcus pyogenes (Streptococcus pyogenes) (Streptococcus); Antigens derived from bacteria such as
  • the parasite antigens include, for example, liver fluke ( Clonorchis sinensis ), Schistosoma japonicum ( Schistosoma japonicum ), Coleoptera ( Ascaris lumbricoides ), human pinworm ( Enterobius vermicularis ), Cysticercus cellulosae , and broad-segment cleft head.
  • Antigens derived from parasites such as insects ( Diphyllobothrium latum ), Echinococcus ( Echinococcus ), Entamoeba histolytica , and Plasmodium are also known.
  • the first scFv contains a first heavy chain variable region and a first light chain variable region.
  • the first heavy chain variable region and the first light chain variable region have the same structure as the heavy chain variable region and the light chain variable region in the antibody molecule.
  • the heavy chain variable region and the light chain variable region of an antibody molecule each have three complementarity determining regions (CDRs).
  • CDR is also called a hypervariable domain. Even in the variable regions of the heavy chain and the light chain, CDR is a region in which the primary structure has a high variability, and the CDR is usually separated at three positions on the primary structure.
  • the three CDRs in the heavy chain variable region are determined from the amino terminal (N-terminal) side in the amino acid sequence of the heavy chain variable region, namely, heavy chain CDR1 (CDRH1), heavy chain CDR2 (CDRH2), and heavy chain CDR3.
  • the three CDRs in the light chain variable region are represented by (CDRH3), and the light chain CDR1 (CDRL1), the light chain CDR2 (CDRL2), and the light chain CDR3 (CDRL3 ). These sites are conformationally close to each other and determine their specificity for binding antigen.
  • the first heavy chain variable region has CDRH1, CDRH2, and CDRH3.
  • the first light chain variable region has CDRL1, CDRL2, and CDRL3. Further, the first heavy chain variable region and the first light chain variable region satisfy the above Condition 1 or Condition 2.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region use an antibody or the like that binds to the target antigen, and for CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region, Screening for binding to the target antigen.
  • Specific examples of the antibody or the antigen-binding fragment thereof can be referred to, for example, the description of the antibody and the antigen-binding fragment in the antibody and the like of the present invention described below.
  • the antibody or the like that binds to the target antigen for example, a known antibody or the like can be used depending on the target antigen.
  • a known antibody or the like can be used depending on the target antigen.
  • 3M4E5 antibody can be used as an antibody against the complex of HLA-A*02:01 and NY-ESO-1 157-165 .
  • an antibody against human CD19 for example, FMC63 antibody can be used as an antibody against human CD19.
  • the antibody or the like that binds to the target antigen may be, for example, scFv obtained by the first screening method of the present invention described below, or an antibody obtained by immunizing the target antigen.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the target antigen, respectively, It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3 such as an antibody that binds to.
  • the region other than CDRH1, CDRH2, and CDRH3, that is, the framework region (FR) may include, for example, the FR of the heavy chain variable region in the antibody or the like that binds to the target antigen. Good.
  • the FRs are usually separated in four places on the primary structure.
  • the four FRs in the heavy chain variable region are labeled from the N-terminal side in the amino acid sequence of the heavy chain variable region to heavy chain FR1 (FRH1), heavy chain FR2 (FRH2), heavy chain FR3 (FRH3). , And heavy chain FR4 (FRH4).
  • the CDRHs and the FRHs are arranged in the order of FRH1, CDRH1, FRH2, CDRH2, FRH3, CDRH3, and FRH4 from the N-terminal side in the amino acid sequence of the heavy chain variable region.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4, such as an antibody that binds to the target antigen. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4, such as an antibody that binds to the target antigen.
  • the “antibody or the like that binds to the target antigen” in the description of each CDRH and the “antibody or the like that binds to the target antigen” in the description of each FRH are preferably the same antibody or the like.
  • the first heavy chain variable region may include, for example, a heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the target antigen.
  • the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the antibody or the like that binds to the target antigen, or the heavy chain in the antibody or the like that binds to the target antigen. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • the first light chain variable region is encoded by, for example, a VJ gene fragment formed by reconstructing a VJ gene fragment from a V gene fragment and a J gene fragment. Therefore, the first B cell receptor is, for example, a B cell receptor containing a polypeptide encoded by an artificial VJ gene fragment designed by artificially combining a V gene fragment and a J gene fragment. Good. In vivo B cells, for example, express the light chain variable region after VJ gene reconstruction. Therefore, the first B cell receptor may be, for example, an isolated B cell-derived B cell receptor. In this case, the first B cell receptor may be, for example, a human-derived B cell B cell receptor, and preferably a human peripheral blood B cell-derived B cell receptor. In the CAR library of the present invention, the first B cell receptor is preferably the light chain variable region of an isolated B cell-derived B cell receptor, because a CAR library can be prepared more easily.
  • the CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the first B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRL2 and CDRL3 of the B cell receptor of.
  • the FR may include, for example, the FR of the light chain variable region in the first B cell receptor.
  • the FRs are usually separated in four places on the primary structure.
  • four FRs in the light chain variable region are labeled from the N-terminal side in the amino acid sequence of the light chain variable region to a light chain FR1 (FRL1), a light chain FR2 (FRL2), a light chain FR3 (FRL3). , And light chain FR4 (FRL4).
  • the CDRLs and the FRLs are arranged, for example, in the order of FRL1, CDRL1, FRL2, CDRL2, FRL3, CDRL3, and FRL4 from the N-terminal side in the amino acid sequence of the light chain variable region.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the first B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the first B cell receptor.
  • the "first B cell receptor" in the description of each CDRL and the "first B cell receptor" in the description of each FRL are preferably the same B cell receptor.
  • the first light chain variable region may include, for example, the light chain variable region in the first B cell receptor.
  • the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in the first B cell receptor, or the light chain in the first B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • the CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region are derived from an antibody or the like that binds to the target antigen, and CDRH1, CDRH2 in the first heavy chain variable region, And CDRH3 are screened for binding to the target antigen.
  • the first heavy chain variable region is encoded by, for example, a VDJ gene fragment formed by reconstructing the VDJ gene fragment, V gene fragment, and J gene fragment. Therefore, the first B cell receptor is, for example, a B cell containing a polypeptide encoded by an artificial VDJ gene fragment designed by artificially combining a V gene fragment, a D gene fragment, and a J gene fragment. It may be a receptor. In vivo B cells, for example, express the heavy chain variable region after VDJ gene reconstruction. Therefore, the first B cell receptor may be, for example, an isolated B cell-derived B cell receptor.
  • the first B cell receptor may be, for example, a human-derived B cell B cell receptor, and preferably a human peripheral blood B cell-derived B cell receptor.
  • the first B cell receptor is preferably an isolated B cell-derived B cell receptor heavy chain variable region because a CAR library can be prepared more easily.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3 of the first B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2 and CDRH3 of the B cell receptor of.
  • FRH1, FRH2, FRH3 and FRH4 in the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3 and FRH4 of the first B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of the first B cell receptor.
  • the “first B cell receptor” in the description of each CDRH and the “first B cell receptor” in the description of each FRH are preferably the same B cell receptor.
  • the first heavy chain variable region may include, for example, the heavy chain variable region in the first B cell receptor.
  • the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the first B cell receptor, or the heavy chain in the first B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the target antigen, or the target antigen, respectively. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3 such as an antibody that binds to.
  • the FR may include, for example, the FR of the light chain variable region in the antibody or the like that binds to the target antigen.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the target antigen. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the target antigen.
  • the “antibody or the like that binds to the target antigen” in the description of each CDRL and the “antibody or the like that binds to the target antigen” in the description of each FRL are preferably the same antibody or the like.
  • the first light chain variable region may include, for example, a light chain variable region in an antibody or the like that binds to the target antigen.
  • the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in the antibody or the like that binds to the target antigen, or the light chain in the antibody or the like that binds to the target antigen. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • the first heavy chain variable region and the first light chain variable region are linked by, for example, a linker peptide (Fv linker peptide).
  • the Fv linker peptide preferably does not, for example, inhibit the binding of the first scFv to the target antigen.
  • the Fv linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the Fv linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and a specific example thereof is (GGGGS) n .
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • the amino acid sequence of the Fv linker peptide includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or 2 below.
  • Fv linker peptide 1 (SEQ ID NO: 1) GSTSGSGKPGSGEGSTKG
  • Fv linker peptide 2 (SEQ ID NO: 2) GGGGSGGGGSGGGGS
  • Nucleotide sequence encoding Fv linker peptide 1 (SEQ ID NO: 3) 5'-GGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGC-3'
  • Nucleotide sequence encoding Fv linker peptide 2 (SEQ ID NO: 4) 5'-GGTGGAGGAGGCTCAGGAGGAGGTGGCTCTGGTGGTGGAGGCTCG-3'
  • the first antigen-binding domain includes a first scFv, but the first binding domain may have a structure other than scFv that includes the heavy chain variable region and the light chain variable region.
  • the first binding domain may be Fab, Fab′, F(ab′) 2 , variable region fragment (Fv), disulfide bond Fv, or the like.
  • the first transmembrane domain is a domain that occupies a region that penetrates the cell membrane when, for example, the first CAR is expressed in cells.
  • the first transmembrane domain may be, for example, a transmembrane domain of a transmembrane protein or an artificially designed artificial transmembrane domain.
  • the transmembrane protein is, for example, ⁇ , ⁇ chain, CD3 ⁇ chain, CD28, CD3 ⁇ , CD45, CD4, CD5, CD8 (CD8 ⁇ or CD8 ⁇ ), CD9, CD16, CD22, CD27, of the T cell receptor.
  • the variant having the same function is, for example, a polypeptide having an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added, and functions as a transmembrane domain.
  • the “one or several” is, for example, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 5, 1 or 2.
  • the artificial transmembrane domain is a polypeptide mainly composed of hydrophobic amino acids such as leucine, isoleucine and valine.
  • the artificial transmembrane domain may have, for example, tripeptides of phenylalanine, tryptophan, and valine at each end.
  • the first transmembrane domain When the first transmembrane domain is a transmembrane domain of the transmembrane protein, the first transmembrane domain may be, for example, an N-terminal side or a C-terminal side continuous with the transmembrane domain of the transmembrane protein. It may contain one or several amino acids.
  • the above-mentioned exemplification can be applied to the above-mentioned “one or several”.
  • the first transmembrane domain is, for example, the transmembrane domain of CD28.
  • the transmembrane domain of CD28 includes, for example, the following amino acid sequence from the 153rd position to the 179th position (SEQ ID NO: 5) in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_006130.
  • the NCBI accession number is a number assigned to the full-length amino acid sequence of the protein precursor (hereinafter the same).
  • a transmembrane unit including an extracellular region on the N-terminal side and an intracellular region on the C-terminal side in addition to the transmembrane domain of CD28 may be used.
  • CD28 transmembrane domain (SEQ ID NO: 5) FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
  • Nucleotide sequence encoding the transmembrane domain of CD28 (SEQ ID NO: 6) 5'-TTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTG-3'
  • CD28 transmembrane unit (SEQ ID NO: 7) IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
  • Nucleotide sequence encoding the transmembrane unit of CD28 (SEQ ID NO: 8) 5'-ATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCT-3 '
  • the first intracellular signal transduction domain is, for example, a domain capable of transducing a signal into cells when the first antigen-binding domain in the same protein binds to the target antigen.
  • the first signal transduction domain include cytoplasmic amino acid sequences of T cell receptor (TCR) complex and costimulatory molecule, and mutants having functions equivalent to these amino acid sequences.
  • TCR T cell receptor
  • the variant having the same function is, for example, a polypeptide consisting of an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added, and which functions as an intracellular signal transduction domain.
  • the “one or several” the above description can be applied, for example.
  • T cells are activated (primary activation) by antigen-dependent cytoplasmic signals such as intracellular signals mediated by the TCR complex. Then, this activation is enhanced by an antigen non-specific cytoplasmic signal such as an intracellular signal mediated by a costimulatory molecule (secondary activation). Therefore, the T cell has, for example, a domain (primary activation domain) that is activated through the TCR complex and a domain (secondary activation domain) that nonspecifically activates the antigen. Therefore, the first intracellular signaling domain has, for example, at least one of the primary activation domain and the secondary activation domain, and preferably has both.
  • the primary activation domain can regulate primary activation by the TCR complex, for example.
  • Examples of the primary activation domain that induces the primary activation include an intracellular signal transduction domain containing an immunoreceptor tyrosine-based activation motif (ITAM).
  • examples of the primary activation domain that acts suppressively on the primary activation include an intracellular signal transduction domain containing an immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif (ITIM).
  • the intracellular signal transduction domain including ITAM is, for example, an intracellular signal transduction domain such as CD3 ⁇ , FcR ⁇ , FcR ⁇ , CD3 ⁇ , CD3 ⁇ , CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD66d or a mutation having a function equivalent to these. I can raise my body.
  • the variant having the same function comprises, for example, an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added, and functions as an intracellular signal transduction domain including ITAM. Is. As for the “one or several”, the above description can be applied, for example.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of CD3 ⁇ includes, for example, the amino acid sequence from the 52nd to the 164th amino acid sequence in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_932170.1, or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 below.
  • the intracellular signal transduction domain including ITAM of Fc ⁇ RI ⁇ includes, for example, the 45th to 86th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_004097.1.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of Fc ⁇ RI ⁇ includes, for example, amino acid sequences 201 to 244 in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_000130.1.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of CD3 ⁇ includes, for example, the 139th to 182nd amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_000064.1.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of CD3 ⁇ includes, for example, the amino acid sequences 128 to 171 in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_000723.1.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of CD3 ⁇ includes, for example, the amino acid sequence at the 153rd to 207th positions in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_000724.1.
  • the intracellular signal transduction domain including ITAM of CD5 includes, for example, the 402nd to 495th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_055022.2.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of CD22 includes, for example, the amino acid sequences at positions 707 to 847 in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_001762.2.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of CD79a includes, for example, the 166th to 226th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_001774.1.
  • the intracellular signal transduction domain including ITAM of CD79b includes, for example, the 182nd to 229th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_000617.1.
  • the intracellular signal transduction domain containing ITAM of CD66d includes, for example, the 177th to 252nd amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_001806.2.
  • Intracellular signaling domain containing ITAM of CD3 ⁇ (SEQ ID NO: 9) RVKSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
  • Nucleotide sequence encoding an intracellular signal transduction domain including ITAM of CD3 ⁇ (SEQ ID NO: 10) 5'-CGAGTGAAGAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCAGA-3 '
  • the secondary activation domain is an intracellular signal transduction domain such as CD2, CD4, CD5, CD8 ⁇ , CD8 ⁇ , CD27, CD28, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD154, GITR, ICOS or the like.
  • a mutant having the function of The variant having the same function is, for example, a polypeptide consisting of an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added, and which functions as an intracellular signal transduction domain.
  • the intracellular signal transduction domain of CD2 includes, for example, the 236th to 351st amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_001758.2.
  • the intracellular signal transduction domain of CD4 includes, for example, amino acid sequences 421 to 458 in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_000607.1.
  • the intracellular signal transduction domain of CD5 includes, for example, the 402nd to 495th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_055022.2.
  • the intracellular signal transduction domain of CD8 ⁇ includes, for example, the 207th to 235th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_001759.3.
  • the intracellular signal transduction domain of CD8 ⁇ includes, for example, the 196th to 210th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number AAA35664.1.
  • the intracellular signal transduction domain of CD27 includes, for example, amino acid sequences 213 to 260 in the amino acid sequence registered under NCBI accession number M63928.1.
  • the intracellular signal transduction domain of CD28 includes, for example, the 181 to 220th amino acid sequence (SEQ ID NO: 11) in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_006130.1.
  • the intracellular signal transduction domain of CD134 includes, for example, the 241st to 277th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_003318.1.
  • the intracellular signal transduction domain of CD137 includes, for example, the amino acid sequence at positions 214 to 255 in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP — 001552.2.
  • the intracellular signal transduction domain of GITR includes, for example, the 193rd to 241st amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_004186.1.
  • the intracellular signal transduction domain of ICOS includes, for example, the 166th to 199th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_036224.1.
  • Intracellular signaling domain of CD28 SEQ ID NO: 11
  • Nucleotide sequence encoding the intracellular signal transduction domain of CD28 (SEQ ID NO: 12) 5'-CGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCT-3'
  • the first CAR includes, for example, one or a plurality of first intracellular signaling domains.
  • the first intracellular signaling domains may be the same or different.
  • the first intracellular signaling domain preferably includes, for example, an intracellular signaling domain containing ITAM of CD3 ⁇ as the primary activation domain.
  • the first intracellular signaling domain preferably includes, for example, at least one intracellular signaling domain selected from the group consisting of CD27, CD28 and CD137 as the secondary activation domain.
  • the first intracellular signaling domain includes, for example, an intracellular signaling domain containing ITAM of CD3 ⁇ and at least one intracellular signaling domain selected from the group consisting of CD27, CD28 and CD137. including.
  • the CAR library of the present invention is screened for scFvs that bind to the target antigen with a smaller number or type of nucleic acids as compared with the phage display method in the first screening method of the present invention described later, for example. it can.
  • the intracellular signaling domain containing ITAM of CD3 ⁇ is the intracellular domain of CD28. It is preferably located on the C-terminal side of the signal transduction domain.
  • the first intracellular signaling domain comprises an intracellular signaling domain containing ITAM of CD3 ⁇ and an intracellular signaling domain of CD28
  • the first intracellular signaling domain further comprises CD134 and CD137. And at least one intracellular signal transduction domain thereof.
  • the first antigen binding domain and the first transmembrane domain are directly or indirectly linked.
  • the first antigen binding domain and the first transmembrane domain are preferably linked by a spacer peptide.
  • the spacer peptide is composed of, for example, 1 to 300, 1 to 100, 10 to 100, and 25 to 50 amino acids.
  • the spacer peptide promotes, for example, the binding between the first CAR and the target antigen, and, when the first CAR and the target antigen bind, a signal by the first intracellular signaling domain It preferably contains an amino acid that induces and/or enhances transduction (eg, cysteine, serine, threonine, etc.).
  • the spacer peptide may be, for example, an immunoglobulin constant region such as CH1 region or L region, a partial region of CD4, CD8 ⁇ , CD8 ⁇ , or CD28.
  • the first spacer peptide may be an artificially designed amino acid sequence.
  • the partial region of CD8 ⁇ includes, for example, the hinge region of CD8 ⁇ , and specific examples thereof include the amino acid sequences at positions 118 to 178 in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_001759.3.
  • the partial region of CD8 ⁇ includes, for example, the 135th to 195th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number AAA35664.1.
  • the partial region of CD4 includes, for example, the 315th to 396th amino acid sequences in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP_000607.1.
  • the partial region of CD28 includes, for example, the 137th to 152nd amino acid sequences (SEQ ID NO: 13) in the amino acid sequence registered under NCBI accession number NP — 006130.1.
  • the spacer peptide may be a part of each exemplified amino acid sequence.
  • Nucleotide sequence encoding a part of CD28 (SEQ ID NO: 14) 5'-ATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCT-3'
  • the domains may be linked by, for example, a linker peptide (domain linker peptide).
  • domain linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the domain linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and (GGGGS) n is a specific example.
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • Examples of the first CAR include a polypeptide having an amino acid sequence represented by the following formula (1) (SEQ ID NO: 15).
  • V 1 and V 2 are the amino acid sequences of the heavy chain variable region and the light chain variable region, or the amino acid sequences of the light chain variable region and the heavy chain variable region, respectively.
  • the amino acid sequence between V 1 and V 2 is the amino acid sequence of the Fv linker peptide
  • the amino acid sequence on the C-terminal side of V 2 is the spacer peptide, transmembrane domain and intracellular signal transduction domain.
  • the Fv linker peptide is Fv linker peptide 1, but it may be Fv linker peptide 2.
  • V 1 [GSTSGSGKPGSGEGSTKG] - [V 2] - [IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS] - [RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR] ⁇ (1)
  • nucleic acid encoding the first CAR examples include a polynucleotide having a base sequence represented by the following formula (2) (SEQ ID NO: 16).
  • N 1 and N 2 are the base sequences encoding the heavy chain variable region and the light chain variable region, or the base sequences encoding the light chain variable region and the heavy chain variable region, respectively.
  • the base sequence between N 1 and N 2 is the base sequence encoding the Fv linker peptide
  • amino acid sequence 3′ from N 2 is the spacer peptide, transmembrane domain and intracellular It is a nucleotide sequence encoding a signal transduction domain.
  • the base sequence encoding the Fv linker peptide is the base sequence encoding the Fv linker peptide 1, but may be the base sequence encoding the Fv linker peptide 2.
  • the CAR library of the present invention preferably contains, for example, a plurality of types of nucleic acids.
  • the CAR library of the present invention is, for example, a mixture of plural kinds of nucleic acids.
  • a part or all of the plurality of kinds of nucleic acids preferably encode different first CARs, and preferably encode different first antigen-binding domains.
  • the regions other than the first antigen-binding domain in the first CAR have, for example, the same or different amino acid sequences.
  • the types of the nucleic acids contained in the CAR library of the present invention are, for example, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 7 types, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 types, 1 ⁇ 10 6 to 5 ⁇ 10 6 types , Preferably about 2 ⁇ 10 6 types (eg, 1 ⁇ 10 6 to 3 ⁇ 10 6 types).
  • about 1 ⁇ 10 8 kinds of nucleic acids are required for screening scFv binding to the target antigen.
  • the CAR library of the present invention for example, even about 1 ⁇ 10 6 kinds of nucleic acids can be screened for scFv binding to the target antigen.
  • scFv binding to the target antigen can be screened with a smaller number or kinds of nucleic acids as compared with the phage display method.
  • the type of nucleic acid can also be referred to as, for example, nucleic acid heterogeneity.
  • the heterogeneity can be measured, for example, by restriction enzyme mapping, a sequence such as Sanger method for each CDR and/or each FRH, and the like.
  • the first CAR may have a signal peptide at the N-terminus, for example.
  • the signal peptide include a signal peptide serving as a transport signal to the endoplasmic reticulum.
  • the first CAR may have a tag, for example.
  • the tag include a peptide tag and a protein tag.
  • the tag include FLAG (registered trademark) tag, HA tag, His tag, Myc tag, V5 tag, and truncated NGFR (nerve growth factor receptor).
  • the tag peptide is added to, for example, at least one of the N-terminus and the C-terminus of the first CAR.
  • the tag When the tag is a truncated NGFR, the tag is arranged, for example, on the C-terminal side of the first CAR.
  • the CAR library of the present invention can adjust the nucleic acid transfer efficiency so that, for example, one cell can be transferred with one type of nucleic acid encoding the first CAR.
  • the first CAR and the tag may be linked by a linker peptide.
  • the nucleic acid encoding the first CAR can be prepared by a conventional method, for example, based on the amino acid sequence of the first CAR.
  • the nucleic acid encoding the first CAR is obtained by, for example, obtaining a base sequence encoding the amino acid sequence in a database in which the amino acid sequences of the above-mentioned domains are registered, and based on the base sequence, It can be prepared by biological methods and/or chemical synthetic methods.
  • the base sequence of the nucleic acid may be codon-optimized depending on the origin of cells expressing the CAR library of the present invention.
  • the nucleic acid encoding the first CAR may be introduced into an expression vector, for example.
  • the expression vector can be prepared, for example, by ligating the nucleic acid encoding the first CAR to a ligation vector.
  • the type of the ligation vector is not particularly limited, and examples thereof include retrovirus vectors such as oncoretrovirus vector, lentivirus vector, pseudotype vector; adenovirus vector, adeno-associated virus (AAV) vector, simian virus vector, vaccinia.
  • retrovirus vectors such as oncoretrovirus vector, lentivirus vector, pseudotype vector; adenovirus vector, adeno-associated virus (AAV) vector, simian virus vector, vaccinia.
  • retrovirus vectors such as oncoretrovirus vector, lentivirus vector, pseudotype vector
  • adenovirus vector such as adeno-associated virus (AAV) vector
  • simian virus vector vaccinia
  • viral vectors such as viral vector
  • the ligation vector examples include pUC, pCMV, pMX, and pELP.
  • the ligation vector can be appropriately set, for example, according to the host into which the expression vector is introduced.
  • the host is not particularly limited, and examples thereof include cultured cells of mammalian origin such as CHO cells, Jurkat cells, Jurkat76 cells, and immune cells.
  • the immune cells include lymphocytes, granulocytes, macrophages and the like. Examples of the lymphocytes include T cells, NK cells, NKT cells, B cells and the like.
  • the immune cells are, for example, cells isolated from a living body, immune cells derived from stem cells such as pluripotent stem cells, or cultured cells derived from immune cells.
  • the T cells may be T cell-like cells. Examples of the T cell-like cells include cultured cells derived from T cells and the like, and specific examples thereof include Jurkat cells, Jurkat 76 cells and the like.
  • the expression vector may have a regulatory sequence that regulates the expression of the nucleic acid encoding the first CAR and the expression of at least one of the first CAR encoded by the nucleic acid encoding the first CAR, for example. preferable.
  • the regulatory sequence include a promoter, a terminator, an enhancer, a polyadenylation signal sequence, an origin of replication sequence (ori), and the like.
  • the arrangement of the regulatory sequences in the expression vector is not particularly limited.
  • the regulatory sequence is arranged so as to functionally regulate the expression of the nucleic acid encoding the first CAR and the expression of at least one of the first CAR encoded by the nucleic acid. However, it can be arranged based on a known method.
  • the regulatory sequence for example, a sequence that the ligation vector has in advance may be used, the regulatory sequence may be further inserted into the ligation vector, or the ligation vector may have other regulatory sequences. It may be replaced with the regulatory sequence of.
  • the expression vector may further have a selection marker coding sequence, for example.
  • selection marker include drug resistance markers, fluorescent protein markers, enzyme markers, cell surface receptor markers, and the like.
  • the first screening method of the present invention is obtained by the first expression step of expressing the CAR library of the present invention (hereinafter, also referred to as “first CAR library”) in immune cells, and the first expression step.
  • a first contact step of contacting the target immune antigen with the target antigen, and the first scFv of CAR expressed in the immune cell bound to the target antigen in the first contact step is used as the target antigen.
  • the first screening method of the present invention comprises the first expression step, the first contact step and the first selection step, wherein the CAR library of the present invention is used in the first expression step. And other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the first screening method of the present invention scFv that can function in CAR-T cells can be screened.
  • an antibody or an antigen-binding fragment thereof that can bind to the target antigen can be prepared based on the amino acid sequences of the CDRs of the heavy chain variable region and the light chain variable region of scFv that bind to the target antigen. Therefore, the first screening method can also be referred to as, for example, a screening method for an antibody or an antigen-binding fragment thereof that binds to the target antigen.
  • the description of the CAR library of the present invention can be applied to the first screening method of the present invention, for example.
  • a new scFv can be screened. Therefore, the method for producing scFv of the present invention can also be referred to as, for example, a screening method for scFv.
  • a chimeric antigen receptor (CAR) or the like that binds to a target antigen by the phage display method or the like
  • a CAR or the like containing scFv is prepared.
  • the effectiveness of the CAR and the like will be examined using immune cells and the like.
  • the CAR library of the present invention and the immune cells are used, for example, screening of scFv that binds to the target antigen and efficacy of the scFv in immune cells The studies can be conducted simultaneously.
  • the first screening method of the present invention as compared with, for example, the phage display method used to obtain an antibody that binds to a target antigen, and the like
  • the scFv that can be used for CAR that effectively functions in the above can be easily screened.
  • the first expression step is a step of expressing the CAR library of the present invention in immune cells. Specifically, in the first expression step, for example, the first CAR library is introduced into the immune cells. Then, in the first expression step, the immune cells are caused to express the first CAR library by, for example, culturing the immune cells into which the first CAR library has been introduced.
  • the method for introducing the first CAR library is not particularly limited, and, for example, a known method for introducing a nucleic acid into cells can be used.
  • the method for introducing the first CAR library includes, for example, a method using a nucleic acid introducing reagent such as liposome or cationic lipid; a method using a virus such as retrovirus or lentivirus;
  • the period for culturing the immune cells is not particularly limited and is, for example, 6 hours to 30 days, 6 to 96 hours, 1 to 30 days.
  • the culture temperature of the immune cells is, for example, 28 to 37°C.
  • the first CAR library may be, for example, a nucleic acid encoding the first CAR or an expression vector into which the nucleic acid encoding the first CAR has been introduced.
  • the immune cells are not particularly limited, and examples thereof include T cells, NK cells, NKT cells, B cells and the like.
  • the immune cells include immune cells isolated from a living body, immune cells derived from stem cells such as pluripotent stem cells, or cultured cells derived from immune cells.
  • the isolated immune cells may be, for example, immune cell-like cultured cells, and specific examples thereof include T cell-like cultured cells, NK cell-like cultured cells, NKT cell-like cultured cells, and B cell-like cultured cells. Examples include cells.
  • the immune cells are, for example, immune cells isolated from a living body, and specific examples thereof include human peripheral blood-derived immune cells. Examples of the T cell-like cultured cells include Jurkat cells and Jurkat76 cells.
  • the immune cells can be screened for scFvs that are more likely to function in CAR-T cells, for example, and in the first contacting step described below, immune cells expressing the first CAR that binds to the target antigen are selected.
  • T cells or T cell-like cultured cells, NK cells, and NKT cells are preferable because they can be enriched.
  • the number of the immune cells is not particularly limited, and may be, for example, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 8 cells, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 7 cells, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 cells, 1 ⁇ 10 6 to 5 ⁇ 10 6 cells, 1 ⁇ 10 6 to 3 ⁇ 10 6 cells.
  • the CAR library of the present invention is preferably expressed in immune cells so that, on average, one or less first CAR is expressed per immune cell.
  • the first screening method of the present invention can suppress, for example, the selection of the non-specific first CAR that does not bind to the target antigen.
  • the number of first CARs expressed per cell can be adjusted, for example, by changing the amount ratio of the number of cells to the vector to be introduced such as nucleic acid or virus. Specifically, in the first expression step, the number of first CARs expressed per cell can be reduced by reducing the ratio of the amount of vector to be introduced to a certain number of cells.
  • the number of the first CAR expressed per cell can be increased by increasing the ratio of the amount of vector to be introduced to a certain number of cells.
  • the efficiency of introducing the vector into the immune cells is not particularly limited and can be, for example, 10 to 60%, 10 to 50%, 20 to 40%, 25 to 35%.
  • the immune cells (candidate immune cells) obtained in the first expression step are contacted with the target antigen.
  • the contact between the candidate immune cells and the target antigen can be carried out, for example, by culturing in the presence of the candidate immune cells and the target antigen.
  • the culture period is, for example, 6 hours to 30 days, 6 to 96 hours, or 1 to 30 days.
  • the culture temperature is, for example, 28 to 37°C.
  • the immune cells are T cells
  • the candidate immune cells can also be referred to as candidate CAR-T, for example.
  • the CAR expressed by the candidate immune cells may be, for example, one kind or plural kinds, but the former is preferable.
  • the candidate immune cells are preferably candidate immune cells expressing CARs having different amino acid sequences, that is, a mixture of two or more candidate immune cells expressing different CARs.
  • Examples of the target antigen to be brought into contact with the candidate immune cells include monomers of the target antigen, complexes of the target antigen, cells expressing the target antigen, and the like, and preferably cells expressing the target antigen. ..
  • Examples of the complex of the target antigen include multimers (multimers) of the target antigen, and specific examples thereof include dimers and tetramers of the target antigen.
  • the target antigen multimer can be prepared by, for example, a method of crosslinking the tagged target antigen with an antibody, a method of complexing the biotinylated target antigen with avidin, or the like.
  • Examples of cells expressing the target antigen include cells that endogenously express the target antigen, cells that express the target antigen by introducing a nucleic acid encoding the target antigen, and the like.
  • Examples of cells expressing the target antigen include cultured cells such as 293 cells, 293T cells, and K562 cells.
  • a molecule that activates immune cells in addition to the target antigen, a so-called costimulatory molecule, may be contacted together.
  • the costimulatory molecule include CD27, CD40, CD40L, CD80, CD83, CD86, OX40L, 4-1BBL, GITRL and ICOS.
  • the costimulatory molecule include a monomer of the costimulatory molecule, a complex of the costimulatory molecule, a cell expressing the costimulatory molecule, and the like, and preferably a cell expressing the costimulatory molecule.
  • the complex of the costimulatory molecule can be prepared, for example, in the same manner as the complex of the target antigen.
  • the target antigen-expressing cells When the target antigen-expressing cells are used as the target antigen, the target antigen-expressing cells preferably also express a molecule that activates immune cells, a so-called co-stimulatory molecule.
  • a molecule that activates immune cells examples include CD27, CD40, CD40L, CD80, CD83, CD86, OX40L, 4-1BBL, GITRL and ICOS.
  • the target antigen-expressing cells may express one type of costimulatory molecule, or may express two or more types of costimulatory molecule.
  • the target antigen-expressing cells are selected from the group consisting of CD80, CD83, CD40, and 4-1BBL, for example, because they can exhibit a function similar to that of antigen-presenting cells in a living body and can select CAR that functions in a living body. It is preferred to express at least one.
  • the candidate immune cells are brought into contact with the target antigen in the first contact step. Therefore, a candidate immune cell expressing a CAR specific to the target antigen may be treated with the target antigen in the same manner as in vivo depending on the degree of affinity (binding) of CAR to the target antigen. It is possible to form immune synapse-like structures continuously or intermittently. As a result, the candidate immune cells expressing the CAR specific to the target antigen can survive, activate and/or derive from CAR depending on, for example, the degree of affinity (binding) of CAR to the target antigen. Or it can receive a growth signal.
  • the candidate immune cells that have undergone the first contacting step have, for example, a degree of affinity (binding) of CAR to the target antigen. Correspondingly, it exhibits a phenotype of survival, expression of activation markers and/or increased cell number.
  • candidate immune cells expressing such a phenotype are evaluated and selected. Therefore, in the first selection step, for example, CAR can be screened based on the phenotype (functionality) generated when the CAR is activated, in addition to the affinity of CAR expressed in the candidate immune cells. .. Therefore, the first screening method of the present invention can suitably screen for scFv that can be used for CAR that effectively functions in vivo or in immune cells by including the first contacting step.
  • the first contact step may be performed multiple times.
  • the plurality of times is, for example, 1 to 5 times, 2 to 3 times, and preferably 2 to 3 times.
  • the candidate immune cells are recovered after the first first contacting step, and the second first contacting step is performed in the same manner as the first first contacting step.
  • Contact step Then, collection and contact are repeated in the same manner up to a desired number of times.
  • CAR expressed by a candidate immune cell that proliferates by carrying out the first contacting step a plurality of times is, for example, as described in the Examples below, the CAR expressed with respect to the cell expressing the CAR.
  • the cells expressing the CAR are preferably grown in a stimulus-dependent manner on the target antigen, and the cells expressing the CAR are dependent on the target antigen. Activation such as specific cytotoxic activity can be induced. Therefore, the first screening method of the present invention can suitably screen, for example, an scFv that can be used for CAR that functions more favorably in vivo by performing the first contacting step a plurality of times.
  • the candidate immune cells expressing CAR that recognizes the target antigen in the candidate immune cells are stimulated with the target antigen. Therefore, the first contacting step can also be referred to as, for example, an antigen stimulating step.
  • the number of the candidate immune cells is not particularly limited, and may be, for example, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 8 cells, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 7 cells, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 cells, 1 ⁇ 10 6 to 5 ⁇ 10 6 cells, 1 ⁇ 10 6 to 3 ⁇ 10 6 cells.
  • the candidate immune cell (E) and the cell expressing the target antigen T Cell ratio (E:T) of 2) to 50:1, 5:1 to 40:1, 10:1 to 30:1, or about 20:1.
  • the first scFv of the first CAR expressed in T cells bound to the target antigen in the first contact step is replaced with a first candidate scFv binding to the target antigen.
  • the binding between the target antigen and the candidate immune cells can be evaluated directly or indirectly, for example.
  • the binding between the target antigen and the candidate immune cells is indirect because, for example, when used as scFv of a chimeric antigen receptor, scFv capable of inducing activation of T cells and exertion of functionality can be obtained. You may carry out by evaluation.
  • the direct evaluation method can be performed by, for example, a method for detecting binding between an antibody and an antigen such as surface plasmon resonance (SPR) or flow cytometry.
  • the direct evaluation method can be performed using, for example, a labeled target antigen monomer or multimer.
  • the labeled target antigen is brought into contact with the candidate immune cells.
  • the candidate immune cell expresses CAR that binds to the target antigen
  • the labeled target antigen and the candidate immune cell form a complex. Therefore, in the first selection step, for example, the candidate immune cells forming the complex containing the label can be evaluated as T cells bound to the target antigen.
  • the candidate immune cells are mixed with a fluorescent-labeled multimer of a target antigen, and the candidate immune cells expressing a CAR specific to the target antigen are combined with the fluorescent label. To form a complex with the targeted target antigen.
  • the resulting mixture is analyzed by flow cytometry, the candidate immune cells forming a complex with the fluorescently labeled target antigen, based on the signal from the fluorescent label, detected, evaluated. And single.
  • the indirect evaluation method can be implemented as follows, for example.
  • the T cell expressing CAR that binds to the target antigen is activated, for example, by binding to the target antigen. Therefore, in the indirect evaluation method, for example, the activation of the candidate immune cells is evaluated as an index.
  • the expression of the activation marker is increased, cytokine and/or Increased production of chemokines, proliferation, etc. occur.
  • the immune cells are T cells, NK cells, NKT cells or B cells, in each of the cells, for example, an increase in the expression of the following activation marker, an increase in the production amount of the following cytokine and/or chemokine, Proliferation occurs. Therefore, in the first selection step, for example, when it is determined that the candidate immune cells are activated based on any one or more indicators, the activated immune cells are treated as the target antigen. It can be evaluated as immune cells bound to.
  • a reporter that increases the expression amount of mRNA or protein when the expression of the cytokine and/or chemokine is induced may be used.
  • the proliferation can be evaluated, for example, by staining cells with a fluorescent cell staining dye such as Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) and the like, and using the attenuation of fluorescence intensity as an index.
  • a fluorescent cell staining dye such as Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) and the like, and using the attenuation of fluorescence intensity as an index.
  • -T cell activation marker cytokine such as CD69, CD107a-chemokine: IFN- ⁇ , IL-12, IL-2, TNF ⁇ , MIP-1 ⁇ etc.
  • -NK cell activation marker cytokine such as CD69, CD107a-chemokine: INF- ⁇ , IL-12, etc.
  • NKT cell activation marker CD69, CD107a, CD25, etc.
  • cytokine, chemokine INF- ⁇ , IL-2, etc.
  • B cell activation marker CD28, CD69,
  • the first scFv of the first CAR expressed in the candidate immune cells bound to the target antigen is selected as the first candidate scFv binding to the target antigen.
  • the selection of the first candidate scFv can be performed, for example, by selecting candidate immune cells that have bound to the target antigen and decoding the base sequence encoding scFv or CAR in the selected candidate immune cells.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the heavy chain variable region and CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the light chain variable region in the first candidate scFv may be further specified.
  • Identification of each CDR can be carried out by a known method with reference to, for example, genome information (for example, IMGT home page ⁇ http://www.imgt.org/>).
  • a new scFv that binds to the target antigen can be screened.
  • the first CAR in the first CAR library satisfies the condition 1
  • a new light chain variable region that binds to the target antigen can be screened by the first screening method of the present invention.
  • the first screening method of the present invention enables screening of a new heavy chain variable region that binds to the target antigen.
  • the first screening method of the present invention is, for example, a method in which a new heavy chain variable region or light chain variable region of the first candidate scFv is added to an antigen or the like that binds to a target antigen in the first CAR library, respectively. Screening of the other region may be performed as the chain variable region or the light chain variable region.
  • the first screening method of the present invention further includes, for example, a preparation step of preparing a second CAR library based on the first candidate scFv.
  • the second CAR library contains, for example, a nucleic acid encoding the second CAR.
  • the second CAR includes, for example, a second antigen binding domain, a second transmembrane domain, and a second intracellular signal transduction domain.
  • the second antigen-binding domain also includes, for example, a second scFv that screens for binding to the target antigen.
  • the nucleic acid encoding the second CAR means, for example, a nucleic acid (polynucleotide) encoding the amino acid sequence of the second CAR.
  • the target antigen is the same as the target antigen in the first scFv.
  • the second scFv has, for example, a structure similar to that of the first scFv.
  • the second scFv includes, for example, a second heavy chain variable region and a second light chain variable region.
  • the second heavy chain variable region has, for example, CDRH1, CDRH2, and CDRH3.
  • the second light chain variable region has, for example, CDRL1, CDRL2, and CDRL3.
  • the second heavy chain variable region and the second light chain variable region satisfy, for example, the following Condition 3 or Condition 4.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region each comprise CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the heavy chain variable region of the second B cell receptor
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region include the light chain variable regions CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first candidate scFv, respectively.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region include CDRH1, CDRH2, and CDRH3 of the heavy chain variable region in the first candidate scFv, respectively
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region include CDRL1, CDRL2, and CDRL3, respectively, in the light chain variable region of the second B cell receptor.
  • the condition 3 is, for example, a case where the second CAR library is prepared by using the first candidate scFv screened using the first CAR library that satisfies the condition 1.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region use the first candidate scFv, and for CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region, Screening for binding to the target antigen.
  • the second B cell receptor in the second heavy chain variable region is defined as, for example, “first B cell receptor” in the description of the first heavy chain variable region of the above Condition 2.
  • the description can be incorporated by replacing "the first heavy chain variable region” with “the second heavy chain variable region” in the "cell receptor”.
  • CDRH1, CDRH2 and CDRH3 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2 and CDRH3 of the second B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2 and CDRH3 of the B cell receptor of.
  • FRH1, FRH2, FRH3 and FRH4 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3 and FRH4 of the second B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of the second B cell receptor.
  • the "second B cell receptor" in the description of each CDRH and the "second B cell receptor" in the description of each FRH are preferably the same B cell receptor.
  • the second heavy chain variable region may include, for example, the heavy chain variable region in the second B cell receptor.
  • the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the second B cell receptor, or the heavy chain in the second B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the first candidate scFv, respectively, or the first candidate. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of scFv CDRH1, CDRL2, and CDRL3.
  • the FR may include, for example, the FR of the light chain variable region in the first candidate scFv.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the first candidate scFv, respectively, It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3 and FRL4 of the first candidate scFv.
  • the “first candidate scFv” in the description of each CDRL and the “first candidate scFv” in the description of each FRL are preferably the same scFv.
  • the second light chain variable region may include, for example, the light chain variable region in the first candidate scFv.
  • the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region of the first candidate scFv, or the amino acid of the light chain variable region of the first candidate scFv. It may be a polypeptide containing the sequence.
  • condition 4 is a case where the second CAR library is prepared using the first candidate scFv screened using the first CAR library satisfying the condition 2, for example.
  • condition 4 for example, CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region use the first candidate scFv, and for CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region, Screening for binding to the target antigen.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3 of the first candidate scFv, respectively, or the first candidate. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of scFv CDRH1, CDRH2, and CDRH3.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of the first candidate scFv, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3 and FRH4 of the first candidate scFv.
  • the “first candidate scFv” in the description of each CDRH and the “first candidate scFv” in the description of each FRH are preferably the same scFv.
  • the second heavy chain variable region may include, for example, the heavy chain variable region in the first candidate scFv.
  • the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the first candidate scFv, or the amino acid of the heavy chain variable region in the first candidate scFv. It may be a polypeptide containing the sequence.
  • the second B cell receptor in the second light chain variable region is defined as, for example, “first B cell receptor” in the description of the first light chain variable region of the above Condition 1.
  • the description can be incorporated by replacing “first light chain variable region” with “second light chain variable region” in “cell receptor”.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the second B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRL2 and CDRL3 of the B cell receptor of.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the second B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the second B cell receptor. It is preferable that the “second B cell receptor” in the description of each CDRL and the “second B cell receptor” in the description of each FRL are the same B cell receptor.
  • the second light chain variable region may include, for example, the light chain variable region of the second B cell receptor.
  • the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in the second B cell receptor, or the light chain in the second B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • the second heavy chain variable region and the second light chain variable region are linked by, for example, the above-mentioned linker peptide (Fv linker peptide).
  • the Fv linker peptide in the second scFv may be the same as or different from the Fv linker peptide in the first scFv, for example.
  • the second antigen-binding domain includes a second scFv, but the second binding domain may have a structure other than scFv including the heavy chain variable region and the light chain variable region.
  • the second binding domain may be Fab, Fab′, F(ab′) 2 , variable region fragment (Fv), disulfide bond Fv, or the like.
  • the second transmembrane domain and the second intracellular signaling domain are, for example, the first transmembrane domain and the first intracellular signal in the first CAR library, respectively. It may be the same as or different from the transduction domain.
  • the second transmembrane domain and the second intracellular signaling domain are, for example, the first transmembrane domain and the first intracellular signal in the CAR library of the present invention, respectively.
  • the description of the transduction domain can be incorporated.
  • the domains may be linked by, for example, a linker peptide (domain linker peptide).
  • domain linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the domain linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and (GGGGS) n is a specific example.
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • Examples of the second CAR include a polypeptide having the amino acid sequence represented by the formula (1) (SEQ ID NO: 15).
  • V 1 and V 2 are the amino acid sequences of the heavy chain variable region and the light chain variable region, or the amino acid sequences of the light chain variable region and the heavy chain variable region, respectively.
  • the order of the heavy chain variable region and the light chain variable region in the second CAR is, for example, that the second CAR library can be prepared more easily. The order and the reverse order are preferred.
  • the heavy chain variable region and the light chain variable region are arranged in this order from the N-terminus in the first CAR, the light chain variable region and the heavy chain variable region and the heavy chain variable region are arranged in this order from the N-terminus in the second CAR.
  • the chain variable regions are, for example, arranged in this order.
  • the heavy chain variable region and the light chain variable region are arranged from the N-terminal in the second CAR. , For example, arranged in this order.
  • nucleic acid encoding the second CAR examples include a polynucleotide having the base sequence represented by the formula (2) (SEQ ID NO: 16).
  • N 1 and N 2 are the base sequences encoding the heavy chain variable region and the light chain variable region, or the base sequences encoding the light chain variable region and the heavy chain variable region, respectively.
  • the second CAR library preferably contains, for example, a plurality of types of nucleic acids.
  • the second CAR library is, for example, a mixture of plural kinds of nucleic acids.
  • a part or all of the plurality of types of nucleic acids preferably encode different second CARs, and preferably encode different second antigen-binding domains.
  • the regions of the second CAR other than the second antigen-binding domain have, for example, the same or different amino acid sequences.
  • the types of the nucleic acids contained in the second CAR library are, for example, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 7 types, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 types, and 1 ⁇ 10 6 to 5 ⁇ 10 6 types. Yes, and preferably about 2 ⁇ 10 6 types (eg, 1 ⁇ 10 6 to 3 ⁇ 10 6 types).
  • the second CAR may have a signal peptide at the N-terminus, for example.
  • the second CAR may have a tag, for example.
  • Regarding the signal peptide and tag for example, in the description of the signal peptide and tag in the first CAR, “first CAR” is replaced with “second CAR”, and the description can be incorporated.
  • the nucleic acid encoding the second CAR can be prepared by a conventional method, for example, based on the amino acid sequence of the second CAR.
  • the nucleic acid encoding the second CAR is obtained by, for example, obtaining a base sequence encoding the amino acid sequence in a database in which the amino acid sequence of each domain described above is registered, and based on the base sequence, a molecule It can be prepared by biological methods and/or chemical synthetic methods.
  • the base sequence of the nucleic acid may be codon-optimized, for example, depending on the origin of cells expressing the second CAR library.
  • the nucleic acid encoding the second CAR may be introduced into an expression vector, for example.
  • an expression vector for example, the description of the expression vector in the CAR library of the present invention can be incorporated.
  • the first screening method of the present invention is performed in the same manner except that the second CAR library prepared in the preparation step is used instead of the first CAR library in the same manner as in the expression step and the contact step, respectively. Perform the process and the selection process.
  • the first screening method of the present invention further includes, for example, a second expression step of expressing the second CAR library in immune cells, and immune cells obtained in the second expression step.
  • a second contact step of contacting the target antigen with the second contact step, and a second scFv of CAR expressed in immune cells bound to the target antigen in the second contact step Second selection step as the candidate scFv of.
  • the immune cells in the first expression step, the first contact step, and the first selection step are the same as the immune cells in the second expression step, the second contact step, and the second selection step. However, it may be different.
  • the immune cells are preferably T cells or T cell-like cells.
  • the second expression step may be referred to as “first expression step” and “second expression step” and “first CAR library” and “second CAR.”
  • the description can be incorporated by replacing “first CAR” with “second CAR” in “library”.
  • the second contacting step is, for example, in the description of the first contacting step, the "first expressing step” is referred to as the “second expressing step”, and the “first contacting step” is referred to as the “second contacting step”.
  • the description can be incorporated by replacing it with "process”.
  • the second selection step is, for example, in the description of the first selection step, "first contact step” is referred to as “second contact step” and “first selection step” is referred to as “second selection step”. "Step”, “first scFv” to “second scFv”, “first candidate scFv” to “second candidate scFv”, “first CAR” to “second CAR” You can read it and use the explanation.
  • the first screening method of the present invention can screen, for example, an scFv having a new heavy chain variable region and new light chain variable region that bind to the target antigen.
  • the first screening method of the present invention may include a design step of designing an antibody or an antigen-binding fragment thereof based on the first candidate scFv or the second candidate scFv.
  • a design step for example, in the first candidate scFv or the second candidate scFv, CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the heavy chain variable region and CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the light chain variable region are newly added. It can be carried out by transplanting the antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the designing step includes, for example, the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first candidate scFv or the second candidate scFv and the first candidate scFv or the second candidate scFv.
  • the transplantation of CDRs in the design step may be performed for one CDR or a plurality of CDRs in the first candidate scFv or the second candidate scFv, for example, but Preference is given to carrying out the CDR.
  • the types of the new antibody and the antigen-binding fragment thereof for example, the description of the types of the antibody of the present invention or the antigen-binding fragment thereof described below can be referred to.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the heavy chain variable region and FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the light chain variable region are set.
  • a new antibody or an antigen-binding fragment thereof may be transplanted.
  • the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the first candidate scFv or the second candidate scFv and the first candidate scFv or the second candidate scFv are used.
  • the FR transplantation in the design step may be performed for one FR or a plurality of FRs in the first candidate scFv or the second candidate scFv, for example. It is preferable to carry out for FR.
  • the first screening method of the present invention includes the first expression step, but the present invention is not limited to this, and the first expression step may not be included.
  • the first screening method of the present invention can be carried out from the first contact step using, for example, previously prepared immune cells expressing the CAR library of the present invention (CAR library cells).
  • the chimeric antigen receptor (CAR) library cells of the present invention include cells expressing the CAR library of the present invention.
  • the CAR library cells of the present invention are characterized in that they include cells expressing the CAR library of the present invention, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the first screening method of the present invention can be preferably carried out.
  • the description of the CAR library of the present invention and the first screening method can be applied.
  • the number of CAR library cells of the present invention is, for example, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 8 cells, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 7 cells, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 cells, 1 ⁇ 10 6 to 5 ⁇ 10 6 cells, 1 ⁇ 10 6 to 3 ⁇ 10 6 cells.
  • the CAR library cells preferably each express different CAR in the CAR library of the present invention.
  • the CAR library cells may include, for example, cells that do not express the CAR library of the present invention, that is, cells into which the CAR library has not been introduced.
  • the types of CAR expressed by the CAR library cells of the present invention are, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 7 types, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 types, per 1 ⁇ 10 6 CAR library cells. There are ⁇ 10 6 to 5 ⁇ 10 6 types and 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 6 types.
  • the CAR library cell of the present invention can be produced, for example, in the same manner as in the first expression step of the first screening method of the present invention.
  • the CAR library cells of the present invention are, for example, preferably cells derived from immune cells, and are preferably derived from T cells, NK cells, and NKT cells.
  • the antibody against the complex of HLA-A*02:01 and NY-ESO-1 157-165 (hereinafter, also referred to as “A2/NY-ESO-1 157 ”) or the antigen-binding fragment thereof of the present invention is as described above. Includes a heavy chain variable region (H) below and a light chain variable region (L) below.
  • the antibody or the like of the present invention is characterized by containing the heavy chain variable region of (H) below and the light chain variable region of (L) below, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the antibody and the like of the present invention bind to A2/NY-ESO-1 157 .
  • A2/NY-ESO-1 157 is known to be expressed in specific cancer cells such as lung cancer, malignant melanoma, synovial sarcoma, myeloma. Therefore, the antibody and the like of the present invention can be preferably used as, for example, a bispecific antibody against A2/NY-ESO-1 157- expressing cancer cells, a CAR antigen-binding domain of CAR-T cells, and the like.
  • the description of the CAR library of the present invention, the first screening method and the like can be incorporated.
  • (H) comprises heavy chain complementarity determining region (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3,
  • CDRH1 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (H1)
  • CDRH2 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (H2)
  • CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3) below
  • one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added (H2)
  • amino acid sequence of one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added (H3) of the following (H3-1), (H3-2) or (H3-3) Amino acid sequence (H3-1) Amino acid sequence (H3-3) having 80% or more identity to the amino acid sequence of any of the CDRH3s (H3-2) (H3-1) in Table 1A below.
  • amino acid sequence of (H3-1) an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L) comprises light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3,
  • CDRL1 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L1)
  • CDRL2 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L2)
  • CDRL3 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L3) light chain variable region (L1) below (L1-1), (L1-2) or (L1-3) amino acid sequence (L1-1) below Amino acid sequence (L1-3) (L1-1) having 80% or more identity to the amino acid sequence (L1-2) (L1-1) of any one of CDRL1 in Table 1B.
  • one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added (L2) The following (L2-1), (L2-2) or (L2-3) amino acid sequence (L2 -1)
  • one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added (L3) of the following (L3-1), (L3-2) or (L3-3) Amino acid sequence (L3-1) Amino acid sequence (L3-3) having 80% or more identity with the amino acid sequence of any of CDRL3 (L3-2) (L3-1) of Table 1B below.
  • HLA-A*02:01 means, for example, a class I antigen derived from the A*02:01 allele of human major histocompatibility complex (MHC).
  • HLA-A*02:01 forms a complex with, for example, human ⁇ 2-microglobulin.
  • the amino acid sequence of HLA-A*02:01 includes, for example, the amino acid sequence registered under NCBI Accession No. HG794376.
  • the amino acid sequence of human ⁇ 2-microglobulin includes, for example, the amino acid sequence registered under NCBI Accession No. NM_004048.2.
  • NY-ESO-1 157-165 means, for example, a peptide consisting of amino acids 157 to 165 (SLLMWITQC (SEQ ID NO: 206) in the amino acid sequence of NY-ESO-1 protein.
  • ESO-1 is a cancer antigen expressed in cancers such as human lung cancer, malignant melanoma, synovial sarcoma, myeloma, etc.
  • the amino acid sequence of NY-ESO-1 protein is, for example, NCBI accession number. The amino acid sequence registered in NM_001327.2 is listed.
  • A2/NY-ESO-1 157 means, for example, a complex formed by HLA-A*02:01 and NY-ESO-1 157-165, and specifically, It means a complex in which NY-ESO-1 157-165 is bound to the peptide binding groove of HLA-A*02:01.
  • A2/NY-ESO-1 157 is preferably a complex in which NY-ESO-1 157-165 is bound to the peptide binding groove of the complex of HLA-A*02:01 and human ⁇ 2-microglobulin. ..
  • the antibody of the present invention may be, for example, a so-called “antibody” whose molecular structure is immunoglobulin, or an antigen-binding fragment thereof.
  • the antibody of the present invention may have the heavy chain variable region and the light chain variable region described above.
  • the present invention is an antibody, for example, its immunoglobulin class and isotype are not particularly limited.
  • the immunoglobulin class include IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE.
  • Examples of the IgG include IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 and the like.
  • the antibody may be, for example, a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, a recombinant antibody, a human (for example, fully human) antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, a multispecific antibody, or the like.
  • the “antigen-binding fragment” in the present invention means a part of the antibody, for example, a partial fragment, which recognizes (binds) the A2/NY-ESO-1 157 .
  • the antigen-binding fragment include Fab, Fab′, F(ab′) 2 , variable region fragment (Fv), disulfide bond Fv, single chain Fv (scFv), bispecific antibody and polymers thereof.
  • Fv variable region fragment
  • scFv single chain Fv
  • bispecific antibody bispecific antibody and polymers thereof.
  • the heavy chain variable region and the light chain variable region are linked via a linker.
  • the order of the heavy chain variable region, the linker, and the light chain variable region may be from the N terminus to the heavy chain variable region, the linker, and the light chain variable region, or from the N terminus to the light chain. It may be the order of the chain region, the linker, and the heavy chain variable region.
  • the antibody or the like of the present invention may have, for example, a constant region in addition to the heavy chain variable region and the light chain variable region described above, and the constant region is, for example, a human constant region or a mouse constant region.
  • the heavy chain constant region includes, for example, the regions CH1, CH2, and CH3, and the light chain constant region includes, for example, the region CL.
  • the antibody or the like of the present invention has the constant region, for example, the heavy chain variable region is bound to at least one of CH1, CH2, and CH3, and the light chain variable region is bound to the CL, The heavy chain variable region is directly linked to, for example, CH1.
  • the heavy and light chains of an antibody molecule each have three complementarity determining regions (CDRs).
  • CDR is also called a hypervariable domain. Even in the variable regions of the heavy chain and the light chain, CDR is a region in which the primary structure has a high variability, and the CDR is usually separated at three positions on the primary structure.
  • the three CDRs in the heavy chain are referred to as the heavy chain CDR1 (CDRH1), the heavy chain CDR2 (CDRH2), and the heavy chain CDR3 (CDRH3) from the amino terminal side in the amino acid sequence of the heavy chain.
  • the three CDRs in the chain are represented as light chain CDR1 (CDRL1), light chain CDR2 (CDRL2), and light chain CDR3 (CDRL3) from the amino terminal side in the amino acid sequence of the light chain. These sites are conformationally close to each other and determine their specificity for binding antigen.
  • the CDRH1 is the CDRH1 in the (HA), (HB), or (HC).
  • the CDRH2 is the CDRH2 in (HA), (HB) or (HC).
  • the CDRH3 is the CDRH3 in (HA), (HB) or (HC).
  • the CDRL1 is any one of CDLA1 of (LA) to (LQ) and (LR).
  • the CDRL2 is any one of the above (LA) to (LQ) and (LR).
  • the CDRL3 is any one of the above (LA) to (LQ) and (LR).
  • identity is, for example, the degree of identity when the sequences to be compared are properly aligned with each other, and means the occurrence rate (%) of exact matches of amino acids between the sequences.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • the identity can be calculated with default parameters using analysis software such as BLAST and FASTA (the same applies hereinafter).
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the substitution of the amino acid may be, for example, a conservative substitution (hereinafter the same).
  • the conservative substitution means substituting one or several amino acids with other amino acids and/or amino acid derivatives so as not to substantially change the function of the protein.
  • the “substituted amino acid” and the “substituted amino acid” have similar properties and/or functions, for example.
  • the hydrophobic and hydrophilic indices (hydropathy), chemical properties such as polarity and charge, or physical properties such as secondary structure are similar.
  • Amino acids or amino acid derivatives having similar properties and/or functions are known in the art, for example.
  • non-polar amino acids such as alanine, valine, isoleucine, leucine, proline, tryptophan, phenylalanine and methionine
  • polar amino acids neutral amino acids
  • neutral amino acids include glycine, serine and threonine.
  • positively charged amino acids include arginine, histidine, lysine, etc.
  • negatively charged amino acids include aspartic acid, glutamic acid.
  • the combination of (H1-1), (H2-1) and (H3-1) is not particularly limited, and examples thereof include (HA) and (HB), respectively. Alternatively, it may be any combination of CDRH1 in (HC), CDRH2 in (HA), (HB) or (HC), and CDRH3 in (HA) or (HB).
  • the combination of (H1-1), (H2-1) and (H3-1) is preferably CDRH1, CDRH2 and CDRH3 in the above (HA), (HB) or (HC).
  • the combination of (L1-1), (L2-1) and (L3-1) is not particularly limited, and examples thereof include (LA) to (LQ), respectively. And any one CDRL1 in (LR), any one CDRL2 in (LA) to (LQ) and (LR) above, and any one CDRL3 in (LA) to (LQ) and (LR) above Can be any combination.
  • the combination of (L1-1), (L2-1) and (L3-1) is preferably any one of CDRL1, CDRL2 and CDRL3 in (LA) to (LQ) and (LR).
  • the combination of (H1-1), (H2-1) and (H3-1) with (L1-1), (L2-1) and (L3-1) is not particularly limited, and, for example, CDRH1 in the above (HA), (HB) or (HC), CDRH2 in the above (HA), (HB) or (HC), and CDRH3 in the above (HA), (HB) or (HC); Any one of CDRL1 in (LA) to (LQ) and (LR), any one of CDRL2 in (LA) to (LQ) and (LR), and (LA) to (LQ) and (LR) In any combination with CDRL3.
  • the combination of (H1-1), (H2-1) and (H3-1) with (L1-1), (L2-1) and (L3-1) is preferably respectively the above ( HA), (HB) or (HC) in combination with CDRH1, CDRH2 and CDRH3 and any one of the above (LA) to (LQ) and (LR) CDRL1, CDRL2 and CDRL3, more preferably, It is a combination of Table 2 below.
  • the antibody of the present invention and the like will be described more specifically with respect to the combination of the heavy chain variable region or heavy chain and the light chain variable region or light chain.
  • the description of the heavy chain variable region and the heavy chain in each combination can be incorporated into each other. Further, the description of the light chain variable region and the light chain in each combination can be incorporated into each other.
  • the underlined amino acid sequences and base sequences are the base sequences encoding the amino acid sequences corresponding to CDRs and the amino acid sequences corresponding to CDRs, unless otherwise specified.
  • the combination of the heavy chain variable region and the light chain variable region is, for example, the combination of (1) to (18) described above.
  • the antibodies and the like of the combination (1) are also referred to as, for example, antibody H1-3M4E5L group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A) below, and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A) below.
  • the light chain variable region of (LA) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-A) below, and CDRL2 is (L2-A) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-A) below.
  • H1-A Amino acid sequence of (H1-A1), (H1-A2) or (H1-A3) below (H1-A1) SEQ ID NO: 17 (GGSISSNY) (H1-A2) Amino acid of SEQ ID NO: 17 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (H1-A3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • H2-A The following (H2-A1), (H2-A2) or (H2-A3) amino acid sequence (H2-A1) SEQ ID NO: 18 (VSYSGST) amino acid sequence (H2-A2) SEQ ID NO: 18 amino acid Amino acid sequence (H2-A3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18.
  • H3-A Amino acid sequence of (H3-A1), (H3-A2) or (H3-A3) below (H3-A1) SEQ ID NO: 19 (ARESYYYYGMDV) (H3-A2) Amino acid of SEQ ID NO: 19 Amino acid sequence (H3-A3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19
  • (L1-A) Amino acid sequence of (L1-A1), (L1-A2) or (L1-A3) below (L1-A1) SEQ ID NO: 29 (SRDVGGYNY) (L1-A2) SEQ ID NO: 29 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-A3) SEQ ID NO: 29, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • L2-A The following (L2-A1), (L2-A2) or (L2-A3) amino acid sequence (L2-A1) SEQ ID NO: 30 (DVI) amino acid sequence (L2-A2) SEQ ID NO: 30 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-A3), wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30.
  • (L3-A) Amino acid sequence of the following (L3-A1), (L3-A2) or (L3-A3) (L3-A1) SEQ ID NO: 31 (WSFAGSYYV) (L3-A2) Amino acid of SEQ ID NO: 31 Amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence (L3-A3) SEQ ID NO: 31, with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (H-A) below.
  • the light chain variable region of (LA) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LA) below.
  • H-A1 following (H-A1), (H -A2) or (H-A3) of the amino acid sequence (H-A1) of SEQ ID NO: 20 amino acid sequence SEQ ID NO 20: QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS (H-A2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20 (H-A3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • (LA) Amino acid sequence of the following (L-A1), (L-A2) or (L-A3) (L-A1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 32 SEQ ID NO: 32: QSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGT SRDVGGYNY VSWYQQHPGKAPKLIIH DVI ERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEVLYYC FFA (L-A2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32 (L-A3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (H-A1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the (H1-A1) of CDRH1, (H2-A1) of CDRH2, and (H3-A1) of CDRH3.
  • the amino acid sequence of (H-A2) includes, for example, (H1-A1) of CDRH1, (H2-A1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-A1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20.
  • the amino acid sequence may have an identity of 80% or more.
  • the amino acid sequence of (H-A3) includes, for example, the amino acid sequences of (H1-A1) of CDRH1, (H2-A1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-A1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20. In, it may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added.
  • the above-mentioned (L-A1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-A1), CDRL2 (L2-A1), and CDRL3 (L3-A1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-A2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-A1) of CDRL1, (L2-A1) of CDRL2, and (L3-A1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 32. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-A3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-A1) of CDRL1, (L2-A1) of CDRL2, and (L3-A1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 32. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-A1). Also known as "H1-3M4E5L”.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, respectively. It is 97% or more, 98% or more, and 99% or more.
  • “1 or several” regarding substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, respectively.
  • the numbers are 1 to 9, 1 to 8, 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LB) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-B) below, and CDRL2 is (L2-B) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-B) below.
  • (L1-B) Amino acid sequence of (L1-B1), (L1-B2) or (L1-B3) below (L1-B1) SEQ ID NO: 33 (QSISSY) amino acid sequence (L1-B2) SEQ ID NO: 33 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-B3) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 33 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • L2-B The following (L2-B1), (L2-B2) or (L2-B3) amino acid sequence (L2-B1) SEQ ID NO: 34 (AAS) amino acid sequence (L2-B2) SEQ ID NO: 34 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-B3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 34 one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-B) The following (L3-B1), (L3-B2) or (L3-B3) amino acid sequence (L3-B1) SEQ ID NO: 35 (QQYYSTPQT) amino acid sequence (L3-B2) SEQ ID NO: 35 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-B3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 35 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (HA).
  • the light chain variable region of (LB) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LB) below.
  • the above-mentioned (L-B1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-B1), CDRL2 (L2-B1), and CDRL3 (L3-B1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-B2) includes, for example, (L1-B1) of CDRL1, (L2-B1) of CDRL2, and (L3-B1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 36. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-B3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-B1) of CDRL1, (L2-B1) of CDRL2, and (L3-B1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 36. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-B1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also called H1-K52".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LC) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-C) below, and CDRL2 is (L2-C) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-C) below.
  • (L1-C) The following (L1-C1), (L1-C2) or (L1-C3) amino acid sequence (L1-C1) SEQ ID NO:37 (QSISSY) amino acid sequence (L1-C2) SEQ ID NO:37 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-C3) SEQ ID NO: 37 amino acid sequence with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-C) Amino acid sequence of the following (L2-C1), (L2-C2) or (L2-C3) (L2-C1) SEQ ID NO: 38 (AAS) (L2-C2) Amino acid of SEQ ID NO: 38 Amino acid sequence (L2-C3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38.
  • (L3-C) Amino acid sequence of (L3-C1), (L3-C2) or (L3-C3) below (L3-C1) SEQ ID NO: 39 (QQYESYRRS) (L3-C2) Amino acid of SEQ ID NO: 39 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-C3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (HA).
  • the light chain variable region of (LC) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LC) below.
  • LC following (L-C1), (L -C2) or (L-C3) amino acid sequence (L-C1) SEQ ID NO: 40 amino acid sequence SEQ ID NO 40: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKAGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYC QQYESYRRS FGQGTKVEIK (L-C2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40 (L-C3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-C1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-C1), CDRL2 (L2-C1), and CDRL3 (L3-C1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-C2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-C1) of CDRL1, (L2-C1) of CDRL2, and (L3-C1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 40. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-C3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-C1) of CDRL1, (L2-C1) of CDRL2, and (L3-C1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 40. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-C1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also called H1-K73".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LD) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-D) below, and CDRL2 is (L2-D) below.
  • CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-D) below.
  • (L1-D) Amino acid sequence of the following (L1-D1), (L1-D2) or (L1-D3) (L1-D1) SEQ ID NO: 41 (QSISSY) (L1-D2) Amino acid of SEQ ID NO: 41 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-D3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 41 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • L2-D The following (L2-D1), (L2-D2) or (L2-D3) amino acid sequence (L2-D1) SEQ ID NO: 42 (AAS) amino acid sequence (L2-D2) SEQ ID NO: 42 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-D3) SEQ ID NO: 42, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-D) Amino acid sequence of the following (L3-D1), (L3-D2) or (L3-D3) (L3-D1) SEQ ID NO:43 (QQYNSYSRT) (L3-D2) Amino acid of SEQ ID NO:43 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-D3) SEQ ID NO: 43 amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (HA).
  • the light chain variable region of (LD) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (L-DA) or (L-DB) below.
  • L-DA following (L-DA1), (L -DA2) or (L-DA3) amino acid sequence (L-DA1) of SEQ ID NO: 44 amino acid sequence SEQ ID NO 44: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIK (L-DA2) Amino acid sequence having 80% or more identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO:44 (L-DA3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO:44, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • L-DB following (L-DB1), (L -DB2) or (L-DB3) of the amino acid sequence (L-DB1) amino acid sequence SEQ ID NO: 45
  • SEQ ID NO 45 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS RLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIK
  • L-DB2 Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 45 (L-DB3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 45 one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-DA1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-D1), CDRL2 (L2-D1), and CDRL3 (L3-D1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-DA2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-D1) of CDRL1, (L2-D1) of CDRL2, and (L3-D1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:44. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-DA3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-D1) of CDRL1, (L2-D1) of CDRL2, and (L3-D1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:44. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the above-mentioned (L-DB1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-D1), CDRL2 (L2-D1), and CDRL3 (L3-D1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-DB2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-D1) of CDRL1, (L2-D1) of CDRL2, and (L3-D1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 45. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-DB3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-D1) of CDRL1, (L2-D1) of CDRL2, and (L3-D1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 45. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-DA1). Also called H1-K121”.
  • the antibody of the present invention for example, the heavy chain variable region is the (H-A1), the light chain variable region is the (L-DB1), the antibody of this combination, Also referred to as "antibody H1-K124".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LE) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-E) below, and CDRL2 is (L2-E) below.
  • CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-E) below.
  • (L1-E) The following (L1-E1), (L1-E2) or (L1-E3) amino acid sequence (L1-E1) SEQ ID NO: 46 (QSISSY) amino acid sequence (L1-E2) SEQ ID NO: 46 amino acid Amino acid sequence (L1-E3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 46.
  • (L2-E) Amino acid sequence of the following (L2-E1), (L2-E2) or (L2-E3) (L2-E1) SEQ ID NO: 47 (AAS) (L2-E2) Amino acid of SEQ ID NO: 47 Amino acid sequence (L2-E3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 47.
  • (L3-E) Amino acid sequence of the following (L3-E1), (L3-E2) or (L3-E3) (L3-E1) SEQ ID NO: 48 (QQYNSYSPCT) (L3-E2) Amino acid of SEQ ID NO: 48 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-E3) SEQ ID NO: 48, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LE) above includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LE) below.
  • the above-mentioned (L-E1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-E1), CDRL2 (L2-E1), and CDRL3 (L3-E1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-E2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-E1) of CDRL1, (L2-E1) of CDRL2, and (L3-E1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 49. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-E3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-E1) of CDRL1, (L2-E1) of CDRL2, and (L3-E1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:49. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is (H-A1)
  • the light chain variable region is (L-E1)
  • the antibody of this combination is referred to as "antibody Also called H1-K125".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LF) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-F) below, and CDRL2 is (L2-F) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-F) below.
  • (L1-F) Amino acid sequence of the following (L1-F1), (L1-F2) or (L1-F3) (L1-F1) SEQ ID NO: 50 (QDISRY) (L1-F2) Amino acid of SEQ ID NO: 50 Amino acid sequence (L1-F3) having 80% or more identity with the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 50.
  • L2-F The following (L2-F1), (L2-F2) or (L2-F3) amino acid sequence (L2-F1) SEQ ID NO: 51 (AAS) amino acid sequence (L2-F2) SEQ ID NO: 51 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-F3) SEQ ID NO: 51, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-F) The following (L3-F1), (L3-F2) or (L3-F3) amino acid sequence (L3-F1) SEQ ID NO: 52 (QQYDNLIT) amino acid sequence (L3-F2) SEQ ID NO: 52 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-F3) SEQ ID NO: 52, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LF) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LF) below.
  • the above-mentioned (L-F1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the amino acid sequences of (L1-F1) of CDRL1, (L2-F1) of CDRL2, and (L3-F1) of CDRL3.
  • the amino acid sequence of (L-F2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-F1) of CDRL1, (L2-F1) of CDRL2, and (L3-F1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 53. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-F3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-F1) of CDRL1, (L2-F1) of CDRL2, and (L3-F1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 53. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-F1). Also called H1-K131".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LG) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, wherein CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-G) below, and CDRL2 is (L2-G) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-G) below.
  • (L1-G) Amino acid sequence (L1-G1), (L1-G2) or (L1-G3) amino acid sequence (L1-G1) SEQ ID NO: 54 (QDISRY) (L1-G2) SEQ ID NO: 54 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-G3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 54 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-G) Amino acid sequence of the following (L2-G1), (L2-G2) or (L2-G3) (L2-G1) SEQ ID NO: 55 (AAS) (L2-G2) SEQ ID NO: 55 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-G3) SEQ ID NO: 55, in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-G) Amino acid sequence of the following (L3-G1), (L3-G2) or (L3-G3) (L3-G1) SEQ ID NO: 56 (QQYNSYSRT) (L3-G2) Amino acid of SEQ ID NO: 56 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-G3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 56, one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (HA).
  • the light chain variable region of (LG) includes, for example, a polypeptide having the following amino acid sequence (L-G).
  • the (L-G1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the CDL1 (L1-G1), CDRL2 (L2-G1), and CDRL3 (L3-G1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-G2) includes, for example, (L1-G1) of CDRL1, (L2-G1) of CDRL2, and (L3-G1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 57. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-G3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-G1) of CDRL1, (L2-G1) of CDRL2, and (L3-G1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 57. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-G1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also called H1-K145”.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LH) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-H) below, and CDRL2 is (L2-H) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-H) below.
  • (L1-H) The following (L1-H1), (L1-H2) or (L1-H3) amino acid sequence (L1-H1) SEQ ID NO:58 (QSISSY) amino acid sequence (L1-H2) SEQ ID NO:58 amino acid Amino acid sequence (L1-H3) having 80% or more identity to the sequence, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58 has one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-H) The following (L2-H1), (L2-H2) or (L2-H3) amino acid sequence (L2-H1) SEQ ID NO:59 (AAS) amino acid sequence (L2-H2) SEQ ID NO:59 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-H3) SEQ ID NO: 59, wherein one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-H) Amino acid sequence of (L3-H1), (L3-H2) or (L3-H3) below (L3-H1) SEQ ID NO: 60 (QQYDNLIT) (L3-H2) Amino acid of SEQ ID NO: 60 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-H3) SEQ ID NO: 60, in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LH) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LH) below.
  • (LH) Amino acid sequence of (L-H1), (L-H2) or (L-H3) below (L-H1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 61
  • SEQ ID NO: 61 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYC Q
  • L-H2 Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61 (L-H3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 61 one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-H1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the amino acid sequences of (L1-H1) of CDRL1, (L2-H1) of CDRL2, and (L3-H1) of CDRL3.
  • the amino acid sequence of (L-H2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-H1) of CDRL1, (L2-H1) of CDRL2, and (L3-H1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 61. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-H3) includes, for example, (L1-H1) of CDRL1, (L2-H1) of CDRL2, and (L3-H1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 61. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-H1)
  • the antibody of this combination is referred to below as "antibody Also called H1-K151”.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LI) above includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-I) below, and CDRL2 is (L2-I) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-I) below.
  • (L1-I) The following (L1-I1), (L1-I2) or (L1-I3) amino acid sequence (L1-I1) SEQ ID NO: 62 (QSVSSN) amino acid sequence (L1-I2) SEQ ID NO: 62 amino acid Amino acid sequence (L1-I3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62.
  • (L2-I) Amino acid sequence of the following (L2-I1), (L2-I2) or (L2-I3) (L2-I1) SEQ ID NO: 63 (GAS) (L2-I2) Amino acid of SEQ ID NO: 63 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-I3) SEQ ID NO: 63, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-I) Amino acid sequence of (L3-I1), (L3-I2) or (L3-I3) below (L3-I1) SEQ ID NO: 64 (QQYNSYSRT) (L3-I2) Amino acid of SEQ ID NO: 64 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-I3) SEQ ID NO: 64, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LI) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LI) below.
  • (LI) Amino acid sequence of (L-I1), (L-I2) or (L-I3) below (L-I1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 65 SEQ ID NO: 65: EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRAS QSVSSN LAWYQQKPGQAPRLLIY GAS TRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISRLEPEDFATYYC QQGTKSYS (L-I2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65 (L-I3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-I1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-I1), CDRL2 (L2-I1), and CDRL3 (L3-I1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-I2) includes, for example, (L1-I1) of CDRL1, (L2-I1) of CDRL2, and (L3-I1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 65. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-I3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-I1) of CDRL1, (L2-I1) of CDRL2, and (L3-I1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 65. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-I1). Also called H1-K160".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody etc. of the combination (10) are also referred to as, for example, antibody H1-K173 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LJ) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-J) below, and CDRL2 is (L2-J) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-J) below.
  • (L1-J) Amino acid sequence of the following (L1-J1), (L1-J2) or (L1-J3) (L1-J1) SEQ ID NO: 66 (QSISSY) amino acid sequence (L1-J2) SEQ ID NO: 66 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-J3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 66 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-J) Amino acid sequence of the following (L2-J1), (L2-J2) or (L2-J3) (L2-J1) SEQ ID NO:67 (AAS) (L2-J2) Amino acid of SEQ ID NO:67 Amino acid sequence (L2-J3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 67.
  • (L3-J) Amino acid sequence of the following (L3-J1), (L3-J2) or (L3-J3) (L3-J1) SEQ ID NO:68 (QQYESYSRT) (L3-J2) Amino acid of SEQ ID NO:68 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-J3) SEQ ID NO: 68, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (HA).
  • the (LJ) light chain variable region includes, for example, a polypeptide consisting of the following (LJ) amino acid sequence.
  • LJ amino acid sequence (L-J1) of SEQ ID NO: 69 amino acid sequence
  • SEQ ID NO 69 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKAGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYC QQYESYSRT FGQGTKVEIK
  • L-J2 Amino acid sequence having 80% or more identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69 (L-J3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 69 one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-J1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-J1), CDRL2 (L2-J1), and CDRL3 (L3-J1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-J2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-J1) of CDRL1, (L2-J1) of CDRL2, and (L3-J1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 69. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-J3) includes, for example, (L1-J1) of CDRL1, (L2-J1) of CDRL2, and (L3-J1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 69. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-J1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also called H1-K173".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody etc. of the combination (11) are also referred to as, for example, antibody 3M4E5H-L1 group.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-B) below, and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-B), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of the following (H3-B).
  • the light chain variable region of (LK) above includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-K) below, and CDRL2 is (L2-K) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-K) below.
  • H1-B Amino acid sequence of (H1-B1), (H1-B2) or (H1-B3) below (H1-B1) SEQ ID NO: 21 (GFTFSTYQ) (H1-B2) Amino acid of SEQ ID NO: 21 Amino acid sequence (H1-B3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21.
  • H2-B The following (H2-B1), (H2-B2) or (H2-B3) amino acid sequence (H2-B1) SEQ ID NO:22 (IVSSGGST) amino acid sequence (H2-B2) SEQ ID NO:22 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence (H2-B3) SEQ ID NO: 22 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • H3-B Amino acid sequence of (H3-B1), (H3-B2) or (H3-B3) below (H3-B1) SEQ ID NO:23 (AGELLPYYGMDV) (H3-B2) Amino acid of SEQ ID NO:23 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (H3-B3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L1-K) The following (L1-K1), (L1-K2) or (L1-K3) amino acid sequence (L1-K1) SEQ ID NO: 70 (SSDVGGYDF) amino acid sequence (L1-K2) SEQ ID NO: 70 amino acid Amino acid sequence (L1-K3) having 80% or more identity to the sequence, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70 has one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-K) Amino acid sequence of (L3-K1), (L3-K2) or (L3-K3) below (L3-K1) SEQ ID NO: 72 (SSYAGSNSV) (L3-K2) Amino acid of SEQ ID NO: 72 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-K3) SEQ ID NO: 72, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes, for example, a polypeptide consisting of the following (H-B) amino acid sequence.
  • the light chain variable region of (LK) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LK) below.
  • (HB) Amino acid sequence of the following (H-B1), (H-B2) or (H-B3) (H-B1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 SEQ ID NO: 24: EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSTYQ MSWVRQAPGKGLEWV IV IVSSGGST AYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQVNTVLAGT (H-B2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 (H-B3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • (LK) Amino acid sequence of the following (L-K1), (L-K2) or (L-K3) (L-K1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 73 SEQ ID NO: 73: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGT SSDVGGYDF VSWYQQHPGEAPKLLVY DVN NRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYC SSYAGSNSVL (L-K2) Amino acid sequence having 80% or more identity with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73 (L-K3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (H-B1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the (H1-B1) of CDRH1, (H2-B1) of CDRH2, and (H3-B1) of CDRH3.
  • the amino acid sequence of (H-B2) includes, for example, the amino acid sequences of (H1-B1) of CDRH1, (H2-B1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-B1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24.
  • the amino acid sequence may have an identity of 80% or more.
  • the amino acid sequence of (H-B3) includes, for example, (H1-B1) of CDRH1, (H2-B1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-B1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24. In, it may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added.
  • the above-mentioned (L-K1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-K1), CDRL2 (L2-K1), and CDRL3 (L3-K1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-K2) includes, for example, (L1-K1) of CDRL1, (L2-K1) of CDRL2, and (L3-K1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 73. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-K3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-K1) of CDRL1, (L2-K1) of CDRL2, and (L3-K1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 73. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-B1) and the light chain variable region is the (L-K1). Also referred to as "3M4E5H-L1".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, respectively. It is 97% or more, 98% or more, and 99% or more.
  • “1 or several” regarding substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, respectively.
  • the numbers are 1 to 9, 1 to 8, 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody or the like of the combination (12) is also referred to as, for example, antibody 3M4E5H-L66 group.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-B), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-B), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of the above (H3-B).
  • the light chain variable region of (LL) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-L) below, and CDRL2 is (L2-L) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-L) below.
  • (L1-L) The following (L1-L1), (L1-L2) or (L1-L3) amino acid sequence (L1-L1) SEQ ID NO:74 (SSDVGGYEF) amino acid sequence (L1-L2) SEQ ID NO:74 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-L3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 74 one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-L) The following (L2-L1), (L2-L2) or (L2-L3) amino acid sequence (L2-L1) SEQ ID NO: 75 (DVI) amino acid sequence (L2-L2) SEQ ID NO: 75 amino acid Amino acid sequence (L2-L3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75
  • (L3-L) Amino acid sequence of the following (L3-L1), (L3-L2) or (L3-L3) (L3-L1) SEQ ID NO: 76 (SSYTSSSTYV) (L3-L2) Amino acid of SEQ ID NO: 76 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-L3) SEQ ID NO: 76, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-B).
  • the light chain variable region of (LL) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (L-L) below.
  • the above-mentioned (L-L1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-L1), CDRL2 (L2-L1), and CDRL3 (L3-L1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-L2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-L1) of CDRL1, (L2-L1) of CDRL2, and (L3-L1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 77. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-L3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-L1) of CDRL1, (L2-L1) of CDRL2, and (L3-L1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 77. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-B1)
  • the light chain variable region is the (L-L1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also known as 3M4E5H-L66".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody etc. of the combination (13) are also referred to as, for example, antibody 3M4E5H-L73 group.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3
  • CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-B)
  • CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-B)
  • CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-B).
  • the light chain variable region of (LM) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-M) below, and CDRL2 is (L2-M) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-M) below.
  • (L1-M) Amino acid sequence of (L1-M1), (L1-M2) or (L1-M3) or (L1-M3) below (L1-M1), SEQ ID NO: 78 (GSDVGAYDY), (L1-M2) amino acid of SEQ ID NO: 78 Amino acid sequence (L1-M3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78
  • (L2-M) Amino acid sequence of the following (L2-M1), (L2-M2) or (L2-M3) (L2-M1) SEQ ID NO: 79 (DVS) amino acid sequence (L2-M2) SEQ ID NO: 79 Amino acid sequence (L2-M3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79.
  • (L3-M) Amino acid sequence (L3-M2), (L3-M2) or (L3-M2) or (L3-M3) amino acid sequence (L3-M1) SEQ ID NO: 80 (SSYSGSSTWV) (L3-M2) SEQ ID NO: 80 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-M3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-B).
  • the light chain variable region of (LM) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LM) below.
  • (LM) Amino acid sequence of (L-M1), (L-M2) or (L-M3) below (L-M1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 81
  • SEQ ID NO: 81 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGT GSDVGAYDY VSWYQHHPGRAPRLIIR DVS VRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADVLC SSYSGSST
  • L-M2 Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81 (L-M3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 81 one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-M1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-M1), CDRL2 (L2-M1), and CDRL3 (L3-M1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-M2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-M1) of CDRL1, (L2-M1) of CDRL2, and (L3-M1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 81. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-M3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-M1) of CDRL1, (L2-M1) of CDRL2, and (L3-M1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 81. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-B1)
  • the light chain variable region is the (L-M1)
  • the antibody of this combination is referred to as "antibody Also known as 3M4E5H-L73".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody etc. of the combination (14) are also referred to as, for example, antibody 3M4E5H-L80 group.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3
  • CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-B)
  • CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-B)
  • CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of the above (H3-B).
  • the light chain variable region of (LN) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, wherein CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-N) below, and CDRL2 is (L2-N) below.
  • CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-N) below.
  • (L1-N) The following (L1-N1), (L1-N2) or (L1-N3) amino acid sequence (L1-N1) SEQ ID NO: 82 (SSDVGSYNL) amino acid sequence (L1-N2) SEQ ID NO: 82 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-N3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • L2-N The following (L2-N1), (L2-N2) or (L2-N3) amino acid sequence (L2-N1) SEQ ID NO:83 (DVS) amino acid sequence (L2-N2) SEQ ID NO:83 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence (L2-N3) SEQ ID NO: 83, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-N) Amino acid sequence of the following (L3-N1), (L3-N2) or (L3-N3) (L3-N1) SEQ ID NO: 84 (SSYTSSSTFAV) (L3-N2) SEQ ID NO: 84 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-N3) SEQ ID NO: 84, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-B).
  • the light chain variable region of (LN) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (L-N) below.
  • (LN) Amino acid sequence of the following (L-N1), (L-N2) or (L-N3) (L-N1) Amino acid sequence of SEQ ID NO:85 SEQ ID NO:85: QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGT SSDVGSYNL VSWYQQHPGKAPKLMIY DVS NRPSGVSYRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDETFYYF SGT (L-N2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85 (L-N3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-N1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-N1), CDRL2 (L2-N1), and CDRL3 (L3-N1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-N2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-N1) of CDRL1, (L2-N1) of CDRL2, and (L3-N1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:85. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-N3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-N1) of CDRL1, (L2-N1) of CDRL2, and (L3-N1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:85. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is (H-B1)
  • the light chain variable region is (L-N1)
  • the antibody of this combination is referred to as "antibody Also called 3M4E5H-L80”.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody etc. of the combination (15) are also referred to as, for example, antibody 3M4E5H-L88 group.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-B), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-B), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of the above (H3-B).
  • the (LO) light chain variable region includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-O) below, and CDRL2 is (L2-O) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-O) below.
  • (L1-O) Amino acid sequence of (L1-O1), (L1-O2) or (L1-O3) below (L1-O1) SEQ ID NO: 86 (SSDVGGYNY) (L1-O2) Amino acid of SEQ ID NO: 86 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-O3) SEQ ID NO: 86 amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-O) Amino acid sequence of the following (L3-O1), (L3-O2) or (L3-O3) (L3-O1) SEQ ID NO: 88 (CSYAGGYYV) (L3-O2) Amino acid of SEQ ID NO: 88 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-O3) SEQ ID NO: 88, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-B).
  • the light chain variable region of (LO) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LO) below.
  • the above-mentioned (L-O1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-O1), CDRL2 (L2-O1), and CDRL3 (L3-O1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-O2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-O1) of CDRL1, (L2-O1) of CDRL2, and (L3-O1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 89. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-O3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-O1) of CDRL1, (L2-O1) of CDRL2, and (L3-O1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 89. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-B1) and the light chain variable region is the (L-O1). Also known as 3M4E5H-L88".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody etc. of the combination (16) are also referred to as, for example, antibody 3M4E5H-L102 group.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-B), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-B), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of the above (H3-B).
  • the light chain variable region of (LP) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-P) below, and CDRL2 is (L2-P) below.
  • CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-P) below.
  • (L1-P) Amino acid sequence of (L1-P1), (L1-P2) or (L1-P3) below (L1-P1) SEQ ID NO: 90 (SSDVGGYNY) (L1-P2) Amino acid of SEQ ID NO: 90 Amino acid sequence (L1-P3) having an identity of 80% or more with respect to the sequence, in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90.
  • (L2-P) Amino acid sequence of the following (L2-P1), (L2-P2) or (L2-P3) (L2-P1) SEQ ID NO: 91 (DVS) amino acid sequence (L2-P2) SEQ ID NO: 91 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-P3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 91 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-P) Amino acid sequence of (L3-P1), (L3-P2) or (L3-P3) below (L3-P1) SEQ ID NO: 92 (SSYAGSGSTPFV) (L3-P2) Amino acid of SEQ ID NO: 92 Amino acid sequence (L3-P3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92.
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-B).
  • the light chain variable region of (LP) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LP) below.
  • the above-mentioned (L-P1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-P1), CDRL2 (L2-P1), and CDRL3 (L3-P1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-P2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-P1) of CDRL1, (L2-P1) of CDRL2, and (L3-P1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 93. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-P3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-P1) of CDRL1, (L2-P1) of CDRL2, and (L3-P1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 93. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-B1) and the light chain variable region is the (L-P1). Also known as 3M4E5H-L102".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the antibody etc. of the combination (17) are also referred to as, for example, antibody 3M4E5H-L124 group.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-B), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-B), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of the above (H3-B).
  • the light chain variable region of (LQ) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, wherein CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-Q) below, and CDRL2 is (L2-Q) below.
  • CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-Q) below.
  • (L1-Q) Amino acid sequence (L1-Q1), (L1-Q2) or (L1-Q2) or (L1-Q3) amino acid sequence (L1-Q1) SEQ ID NO: 94 (SSDVGGYNY) (L1-Q2) SEQ ID NO: 94 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-Q3) SEQ ID NO: 94, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-Q) Amino acid sequence of the following (L3-Q1), (L3-Q2) or (L3-Q3) (L3-Q1) SEQ ID NO: 96 (CSYAGRRYV) (L3-Q2) Amino acid of SEQ ID NO: 96 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-Q3) SEQ ID NO: 96, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HB) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-B).
  • the light chain variable region of (LQ) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LQ) below.
  • the (L-Q1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-Q1), the CDRL2 (L2-Q1), and the CDRL3 (L3-Q1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-Q2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-Q1) of CDRL1, (L2-Q1) of CDRL2, and (L3-Q1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 97. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-Q3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-Q1) of CDRL1, (L2-Q1) of CDRL2, and (L3-Q1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 97. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is (H-B1)
  • the light chain variable region is (L-Q1)
  • antibody of this combination is referred to as "antibody Also known as 3M4E5H-L124".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HC) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-C) below, and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-C), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-C) below.
  • the light chain variable region of (LA) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, wherein CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-A), and CDRL2 is (L2-A). Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-A) above.
  • H1-C Amino acid sequence of (H1-C1), (H1-C2) or (H1-C3) below (H1-C1) SEQ ID NO:25 (GGSISSYY) amino acid sequence (H1-C2) SEQ ID NO:25 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (H1-C3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • H2-C Amino acid sequence of the following (H2-C1), (H2-C2) or (H2-C3) (H2-C1) SEQ ID NO:26 (INHSGST) (H2-C2) Amino acid of SEQ ID NO:26 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (H2-C3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26, one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • H3-C Amino acid sequence of (H3-C1), (H3-C2) or (H3-C3) below (H3-C1) SEQ ID NO: 27 (ARCPIYYYGMDV) (H3-C2) Amino acid of SEQ ID NO: 27 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (H3-C3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27, an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HC) includes, for example, a polypeptide consisting of the following (H-C) amino acid sequence.
  • the light chain variable region of (LA) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LA).
  • (HC) Amino acid sequence of the following (H-C1), (H-C2) or (H-C3) (H-C1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 28: QLQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS GGSISSYY WSWIRQPPGKGLEWIGE INHSGST NYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTPIDTTVYYC (H-C2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 (H-C3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (H-C1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the (H1-C1) of CDRH1, (H2-C1) of CDRH2, and (H3-C1) of CDRH3.
  • the amino acid sequence of (H-C2) includes, for example, (H1-C1) of CDRH1, (H2-C1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-C1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28.
  • the amino acid sequence may have an identity of 80% or more.
  • the amino acid sequence of (H-C3) includes, for example, the amino acid sequences of (H1-C1) of CDRH1, (H2-C1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-C1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28. In, it may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added.
  • the heavy chain variable region is the (H-C1) and the light chain variable region is the (L-A1). Also called H73-3M4E5L".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • amino acid sequences of SEQ ID NOs: 17 to 97 are, for example, human-derived amino acid sequences.
  • the binding between the antibody etc. of the present invention and A2/NY-ESO-1 157 can be confirmed by a method for detecting the binding between the antibody and the antigen, such as surface plasmon resonance (SPR) or flow cytometry.
  • SPR surface plasmon resonance
  • the antibody etc. of the present invention may further have a labeling substance, for example.
  • the labeling substance is not particularly limited, and examples thereof include a fluorescent substance, a dye, an isotope, an enzyme and the like.
  • the fluorescent substance include pyrene, TAMRA, fluorescein, Cy3 dye, Cy5 dye, FAM dye, rhodamine dye, Texas red dye, JOE, MAX, HEX, TYE, and other fluorophores.
  • Alexa dyes such as Alexa488 and Alexa647.
  • the antibody etc. of the present invention may be modified with a low molecular weight compound such as a pharmaceutical compound.
  • the low molecular weight compound include antitumor agents such as tubulin inhibitors.
  • the antibody or the like of the present invention is, for example, directly or indirectly modified with the low molecular weight compound. In the latter case, the antibody or the like of the present invention is modified with the low molecular weight compound, for example, via a linker.
  • the antibody or the like of the present invention may be immobilized on, for example, a carrier or a porous body.
  • the carrier is not particularly limited, and examples thereof include a substrate, beads, and a container, and examples of the container include a microplate, a tube, and the like.
  • the method for producing the antibody or the like of the present invention is not particularly limited, and for example, it can be produced by genetic engineering based on the aforementioned amino acid sequence information. Specifically, for example, it can be performed as follows.
  • the present invention is not limited to this example.
  • a vector containing a nucleic acid sequence encoding the amino acid sequence of each of the regions, the heavy chain, and/or the light chain of the antibody of the present invention is introduced into a host to obtain a transformant. Then, the transformant is cultured, a fraction containing an antibody that binds to A2/NY-ESO-1 157 is collected, and the antibody is isolated or purified from the obtained collected fraction.
  • the vector examples include a vector containing a nucleic acid sequence encoding the heavy chain variable region, a vector containing a nucleic acid sequence encoding the light chain variable region, a vector containing a nucleic acid sequence encoding the heavy chain, the light chain Examples thereof include a vector containing a nucleic acid sequence encoding
  • the host is not particularly limited as long as it can introduce the vector and can express the nucleic acid sequence in the vector.
  • Examples of the host include mammalian cells such as HEK cells, CHO cells, COS cells, NSO cells and SP2/0 cells.
  • the method of introducing the vector into the host is not particularly limited, and known methods can be adopted.
  • the method for culturing the transformant is not particularly limited and can be appropriately determined according to the type of the host.
  • the fraction containing the antibody can be collected as a liquid fraction by crushing the cultured transformant. Isolation or purification of the antibody is not particularly limited, and a known method can be adopted.
  • the antibody is, for example, a monoclonal antibody.
  • the monoclonal antibody include a monoclonal antibody obtained by immunizing an animal, a chimeric antibody, a humanized antibody, a human antibody (also referred to as a fully human antibody), and the like.
  • the chimeric antibody is an antibody in which the variable region of an antibody derived from a non-human animal is linked to the constant region of a human antibody.
  • the chimeric antibody can be produced, for example, as follows. First, for a monoclonal antibody derived from a non-human animal, a variable region (V region) gene that binds to the A2/NY-ESO-1 157 protein was prepared, and the variable region gene and the human antibody constant region (C region) were prepared. Region), and this is further ligated to an expression vector. Then, the cells transfected with the expression vector are cultured to recover the desired chimeric antibody secreted into the culture medium. Thereby, a chimeric antibody can be prepared.
  • V region variable region
  • C region human antibody constant region
  • the animal from which the variable region gene is derived is not particularly limited, and examples thereof include rats and mice.
  • the method for producing the chimeric antibody is not limited to this, and can be produced by referring to a known method such as the method described in JP-B-3-73280.
  • the humanized antibody is an antibody in which only the CDR is derived from an animal other than human and the other regions are derived from human.
  • the humanized antibody can be produced, for example, as follows. First, with respect to a monoclonal antibody derived from a non-human animal, the CDR gene is prepared, transplanted to a human antibody gene, for example, a constant region (CDR grafting), and further ligated to an expression vector. Then, by culturing the cells transfected with the expression vector, the humanized antibody transplanted with the CDR of interest is secreted into the culture medium. It can be prepared by recovering the secreted humanized antibody.
  • the CDR-derived animal is not particularly limited, and examples thereof include a rat and a mouse.
  • the method for producing the humanized antibody is not limited to this, and is produced by referring to known methods such as those described in Japanese Patent Publication No. 4-506458 and Japanese Patent Application Laid-Open No. 62-296890. it can.
  • the human antibody can be produced, for example, by introducing a human antibody gene into an animal other than human.
  • a transgenic animal for producing a human antibody can be used as the animal into which the human antibody gene is introduced.
  • the type of animal is not particularly limited, and examples thereof include mice.
  • the method for producing the human antibody is described in, for example, Nature Genetics, Vol. 7, pp. 13-21, 1994; Nature Genetics, Vol. 15, pp. 146-156, 1994; Manufactured by referring to a known method described in Table 7-509137; WO94/25585; Nature, Vol.368, p.856-859,1994; and Tokuhei 6-500233. it can.
  • human antibody can also be produced, for example, by using the phage display method, for example, Marks, JJ.D. et al.: J. Mol. Biol., Vol.222, p.581-597, It can be produced by referring to a known method described in 1991.
  • the antibody or the like of the present invention can also be prepared, for example, by immunizing an animal with an antigen.
  • the antigen include A2/NY-ESO-1 157 protein.
  • the antigen is preferably immunized multiple times.
  • the peptide fragment may be, for example, a peptide fragment consisting of only an antigenic determinant (epitope) or a peptide fragment containing the antigenic determinant.
  • Monoclonal antibodies obtained by immunizing the animals include, for example, ⁇ Current Protocols in Molecular Biology'' (John Wiley & Sons (1987)), Antibodies: A Laboratory Manual, Ed. )) and the like, and the like can be manufactured by referring to known methods. Specifically, for example, an animal is immunized with an antigen, and antibody-producing cells collected from the immunized animal are fused with myeloma cells (myeloma cells) lacking autoantibody-producing ability to prepare hybridomas. Subsequently, the hybridoma is screened for antibody-producing cells, and a single clone of the hybridoma is prepared by cloning.
  • this hybridoma clone is administered to an animal, and a monoclonal antibody is purified from the obtained abdominal cavity.
  • the hybridoma is cultured, and the monoclonal antibody is purified from the culture solution.
  • a monoclonal antibody with uniform specificity can be stably supplied.
  • the above-mentioned myeloma cells are preferably derived from, for example, mouse, rat, human or the like.
  • the myeloma cells and the antibody-producing cells may be derived from the same species or different species, but are preferably the same species.
  • the (H) heavy chain variable region and the (L) light chain variable region are the following (H) heavy chain variable region and (L) light chain variable region, respectively. May be.
  • (H) comprises heavy chain complementarity determining region (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3,
  • CDRH1 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (H1)
  • CDRH2 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (H2)
  • CDRH3 is a heavy chain variable region that is a polypeptide containing the following amino acid sequence (H3)
  • H1 Amino acid sequence of (H1-1), (H1-2) or (H1-3) below (H1-1) Any amino acid sequence of CDRH1 under the following condition (H1) (H1-2) (H1- In the amino acid sequence (H1-3) (H1-1) having 80% or more identity with the amino acid sequence of 1), one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or Or added amino acid sequence;
  • H2 Amino acid sequence of (H2-1), (H2-2) or (H2-3) below (H2-1)
  • (L) comprises light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3,
  • CDRL1 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L1)
  • CDRL2 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L2)
  • CDRL3 is a light chain variable region that is a polypeptide comprising the amino acid sequence of (L3) below:
  • Examples of the heavy chain variable region that satisfies the above condition (H1) include the heavy chain variable regions of (HA), (HB), and (HC) above.
  • X 7 is preferably absent, T or Y.
  • X 4 , N, D or E is preferable.
  • X 5 , Y, F or L is preferable.
  • X 7 is preferably F or Y.
  • Examples of the light chain variable region that satisfies the above condition (L1) include the light chain variable regions (LB) to (LJ) above.
  • Examples of the light chain variable region that satisfies the above condition (L2) include the light chain variable regions (LA) and (LK) to (LQ) above.
  • CDRH1 of the heavy chain variable region of (H) is GFTFSTYQ (SEQ ID NO: 21), and CDRH2 is IVSSGGST (SEQ ID NO: 22).
  • CDRH3 is AGELLPYYGMDV (SEQ ID NO:23)
  • CDRL1 of the light chain variable region of (L) above is SRDVGGGYNY (SEQ ID NO:29)
  • CDRL2 is DVI (SEQ ID NO:30)
  • CDRL3 is WSFAGSYYV. It is preferably an amino acid sequence other than (SEQ ID NO: 31).
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof against CD19 of the present invention includes the heavy chain variable region of (H) below and the light chain variable region of (L) below.
  • the antibody or the like of the present invention is characterized by containing the heavy chain variable region of (H) below and the light chain variable region of (L) below, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the antibody or the like of the present invention binds to CD19. Further, CD19 is known to be expressed in specific cancer cells such as normal B cells and B cell lymphomas.
  • the antibody and the like of the present invention can be preferably used as, for example, a bispecific antibody against a CD19-expressing cancer cell, an antigen-binding domain of CAR of CAR-T cell, and the like.
  • the description of the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody or the antigen-binding fragment thereof and the like can be incorporated.
  • (H) comprises heavy chain complementarity determining region (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3,
  • CDRH1 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (H1)
  • CDRH2 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (H2)
  • CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3) below
  • one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added (H2)
  • amino acid sequence of one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added (H3) of the following (H3-1), (H3-2) or (H3-3) Amino acid sequence (H3-1)
  • amino acid sequence of (H3-1) an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L) comprises light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3,
  • CDRL1 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L1)
  • CDRL2 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L2)
  • CDRL3 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L3) light chain variable region (L1) below (L1-1), (L1-2) or (L1-3) amino acid sequence (L1-1) below Amino acid sequence (L1-3) (L1-1) having 80% or more identity to the amino acid sequence (L1-2) (L1-1) of any of CDRL1s in Table 3B.
  • one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added (L2) The following (L2-1), (L2-2) or (L2-3) amino acid sequence (L2 -1) An amino acid sequence (L2-3) (L2-1) having at least 80% identity with the amino acid sequence (L2-2) (L2-1) of any of CDRL2s in Table 3B below.
  • amino acid sequence of (1) one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added (L3) of the following (L3-1), (L3-2) or (L3-3) Amino acid sequence (L3-1) An amino acid sequence (L3-3) having 80% or more identity to the amino acid sequence of any of the CDRL3s (L3-2) (L3-1) in Table 3B below.
  • CD19 is, for example, a type I transmembrane glycoprotein having a molecular weight of 95 kDa.
  • CD19 is known to be involved in, for example, B cell development, activation, regulation of differentiation, etc., and is mainly expressed in B cells.
  • the amino acid sequence of human CD19 includes, for example, the amino acid sequence registered under NCBI accession number NM_001770.6.
  • the amino acid sequence of mouse CD19 includes, for example, the amino acid sequence registered under NCBI accession number NM_009844.2.
  • the CDRH1 is the CDRH1 in the (HA).
  • the CDRH2 is the CDRH2 in the (HA).
  • the CDRH3 is the CDRH3 in the above (HA).
  • the CDRL1 is any one of (LA) to (LL) and (LM).
  • the CDRL2 is any one of the above (LA) to (LL) and (LM).
  • the CDRL3 is any one of the above (LA) to (LL) and (LM).
  • the CDRL1, CDRL2, and CDRL3 may satisfy the same condition or different conditions in the above (LA) to (LL) and (LM), but preferably satisfy the same condition. .. When the CDRL1, CDRL2, and CDRL3 satisfy the same condition, the CDRL1, CDRL2, and CDRL3 satisfy any one of the (LA) to (LL) and (LM), CDRL1, CDRL2, and CDRL3.
  • identity is, for example, the degree of identity when the sequences to be compared are properly aligned with each other, and means the occurrence rate (%) of exact matches of amino acids between the sequences.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • the identity can be calculated with default parameters using analysis software such as BLAST and FASTA (the same applies hereinafter).
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the substitution of the amino acid may be, for example, a conservative substitution (hereinafter the same).
  • the conservative substitution means substituting one or several amino acids with other amino acids and/or amino acid derivatives so as not to substantially change the function of the protein.
  • the “substituted amino acid” and the “substituted amino acid” have similar properties and/or functions, for example.
  • the hydrophobic and hydrophilic indices (hydropathy), chemical properties such as polarity and charge, or physical properties such as secondary structure are similar.
  • Amino acids or amino acid derivatives having similar properties and/or functions are known in the art, for example.
  • non-polar amino acids such as alanine, valine, isoleucine, leucine, proline, tryptophan, phenylalanine and methionine
  • polar amino acids neutral amino acids
  • neutral amino acids include glycine, serine and threonine.
  • positively charged amino acids include arginine, histidine, lysine, etc.
  • negatively charged amino acids include aspartic acid, glutamic acid.
  • the combination of (L1-1), (L2-1) and (L3-1) is not particularly limited, and examples thereof include (LA) to (LL), respectively. And any one CDRL1 in (LM), any one CDRL2 in (LA) to (LL) and (LM) above, and any one CDRL3 in (LA) to (LL) and (LM) above. Can be any combination.
  • the combination of (L1-1), (L2-1) and (L3-1) is preferably any one of CDRL1, CDRL2 and CDRL3 in (LA) to (LL) and (LM).
  • the antibody of the present invention and the like will be described more specifically with respect to the combination of the heavy chain variable region or heavy chain and the light chain variable region or light chain.
  • the description of the heavy chain variable region and the heavy chain in each combination can be incorporated into each other. Further, the description of the light chain variable region and the light chain in each combination can be incorporated into each other.
  • the underlined amino acid sequences and base sequences are the base sequences encoding the amino acid sequences corresponding to CDRs and the amino acid sequences corresponding to CDRs, unless otherwise specified.
  • the combination of the heavy chain variable region and the light chain variable region is, for example, any of the above (HA) and (LA) to (LL) and (LM) as described above. Or one combination.
  • the combination (LA) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L4 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A) below, and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A) below.
  • the light chain variable region of (LA) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-A) below, and CDRL2 is (L2-A) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-A) below.
  • H1-A Amino acid sequence of (H1-A1), (H1-A2) or (H1-A3) below (H1-A1) SEQ ID NO:216 (GFTFDDYA) (H1-A2) Amino acid of SEQ ID NO:216 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (H1-A3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 216 one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • H2-A Amino acid sequence of the following (H2-A1), (H2-A2) or (H2-A3) (H2-A1) SEQ ID NO:217 (ISWNSGRI) (H2-A2) Amino acid of SEQ ID NO:217 Amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence (H2-A3), wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 217 has one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • H3-A Amino acid sequence of (H3-A1), (H3-A2) or (H3-A3) (H3-A1) SEQ ID NO:218 (ARDQGYHYYDSAEHAFDI) (H3-A2) Amino acid of SEQ ID NO:218 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (H3-A3) SEQ ID NO: 218, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L1-A) Amino acid sequence of the following (L1-A1), (L1-A2) or (L1-A3) (L1-A1) SEQ ID NO: 220 (KLGDKY) (L1-A2) Amino acid of SEQ ID NO: 220 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-A3) SEQ ID NO: 220, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-A) The following (L2-A1), (L2-A2) or (L2-A3) amino acid sequence (L2-A1) SEQ ID NO:221 (QDS) amino acid sequence (L2-A2) SEQ ID NO:221 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-A3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 221 in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-A) Amino acid sequence of (L3-A1), (L3-A2) or (L3-A3) below (L3-A1) SEQ ID NO: 222 (QAWDSSTHVV) (L3-A2) SEQ ID NO: 222 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-A3) SEQ ID NO: 222, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (H-A) below.
  • the light chain variable region of (LA) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LA) below.
  • H-A1 following (H-A1), (H -A2) or (H-A3) of the amino acid sequence (H-A1) of SEQ ID NO: 219 amino acid sequence SEQ ID NO 219: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAAS GFTFDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSG ISWNSGRI GYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYC ARDQGYHYYDSAEHAFDI WGQGTVVTVSS (H-A2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 219 (H-A3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 219, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • LA the following (L-A1), (L -A2) or (L-A3) of the amino acid sequence (L-A1) of SEQ ID NO: 223 amino acid sequence SEQ ID NO 223: SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGD KLGDKY ACWYQQKPGQSPVLVIY QDS KRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC QAWDSSTHVV FGGGTKLTVL (L-A2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 223 (L-A3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 223, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (H-A1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the (H1-A1) of CDRH1, (H2-A1) of CDRH2, and (H3-A1) of CDRH3.
  • the amino acid sequence of (H-A2) includes, for example, (H1-A1) of CDRH1, (H2-A1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-A1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 219.
  • the amino acid sequence may have an identity of 80% or more.
  • the amino acid sequence of (H-A3) includes, for example, (H1-A1) of CDRH1, (H2-A1) of CDRH2, and CDRH3 (H3-A1), and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 219. In, it may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added.
  • the above-mentioned (L-A1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-A1), CDRL2 (L2-A1), and CDRL3 (L3-A1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-A2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-A1) of CDRL1, (L2-A1) of CDRL2, and (L3-A1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 223. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-A3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-A1) of CDRL1, (L2-A1) of CDRL2, and (L3-A1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 223. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-A1). Also known as 18H-L4".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, respectively. It is 97% or more, 98% or more, and 99% or more.
  • “1 or several” regarding substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, respectively.
  • the numbers are 1 to 9, 1 to 8, 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LB) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L7 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LB) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-B) below, and CDRL2 is (L2-B) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-B) below.
  • (L1-B) Amino acid sequence of (L1-B1), (L1-B2) or (L1-B3) below (L1-B1) SEQ ID NO: 224 (SSDVGGYNY) (L1-B2) SEQ ID NO: 224 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-B3) SEQ ID NO: 224, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-B) Amino acid sequence of (L3-B1), (L3-B2) or (L3-B3) below (L3-B1) SEQ ID NO: 226 (GTWDTSLTAVV) (L3-B2) SEQ ID NO: 226 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-B3) SEQ ID NO: 226, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LB) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LB) below.
  • (LB) Amino acid sequence of (L-B1), (L-B2) or (L-B3) below (L-B1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 227 SEQ ID NO: 227: QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGT SSDVGGYNY VSWYQQHPGKAPKLMIY DVS NRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTGTELAVV GTWDD (L-B2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 227 (L-B3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 227, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-B1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-B1), CDRL2 (L2-B1), and CDRL3 (L3-B1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-B2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-B1) of CDRL1, (L2-B1) of CDRL2, and (L3-B1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 227. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-B3) includes, for example, (L1-B1) of CDRL1, (L2-B1) of CDRL2, and (L3-B1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 227. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-B1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also known as 18H-L7".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LC) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L9 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LC) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-C) below, and CDRL2 is (L2-C) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-C) below.
  • (L1-C) The following (L1-C1), (L1-C2) or (L1-C3) amino acid sequence (L1-C1) SEQ ID NO:228 (WSNIGDDH) amino acid sequence (L1-C2) SEQ ID NO:228 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-C3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 228 in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-C) The following (L2-C1), (L2-C2) or (L2-C3) amino acid sequence (L2-C1) SEQ ID NO: 229 (DTS) amino acid sequence (L2-C2) SEQ ID NO: 229 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-C3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 229 in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-C) Amino acid sequence of the following (L3-C1), (L3-C2) or (L3-C3) (L3-C1) SEQ ID NO: 230 (GTWESSLSGVV) (L3-C2) Amino acid of SEQ ID NO: 230 Amino acid sequence having an identity of 80% or more (L3-C3) SEQ ID NO: 230 with one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LC) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LC) below.
  • (LC) Amino acid sequence of (L-C1), (L-C2) or (L-C3) below (L-C1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 231 SEQ ID NO: 231: QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGS WSNIGDDH VSWYQQFPGAAPKLLIY DTS KRPSRVADRFSGSKSGASATLAITGLQAGDEADYV GTFGSSL (L-C2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:231 (L-C3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO:231, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-C1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-C1), CDRL2 (L2-C1), and CDRL3 (L3-C1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-C2) includes, for example, (L1-C1) of CDRL1, (L2-C1) of CDRL2, and (L3-C1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 231. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-C3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-C1) of CDRL1, (L2-C1) of CDRL2, and (L3-C1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 231. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-C1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also known as 18H-L9".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LC) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L13 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LD) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-D) below, and CDRL2 is (L2-D) below.
  • CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-D) below.
  • (L1-D) Amino acid sequence of the following (L1-D1), (L1-D2) or (L1-D3) (L1-D1) SEQ ID NO:232 (SSDVGGYDY) (L1-D2) SEQ ID NO:232 Amino acid sequence (L1-D3) having 80% or more identity to the sequence, in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO:232
  • L2-D The following (L2-D1), (L2-D2) or (L2-D3) amino acid sequence (L2-D1) SEQ ID NO:233 (DVT) amino acid sequence (L2-D2) SEQ ID NO:233 amino acid sequence Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-D3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 233 in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-D) Amino acid sequence of (L3-D1), (L3-D2) or (L3-D3) below (L3-D1) SEQ ID NO: 234 (SSYTTSTTWV) amino acid sequence (L3-D2) SEQ ID NO: 234 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-D3) SEQ ID NO: 234, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LD) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LD) below.
  • (LD) Amino acid sequence of (L-D1), (L-D2) or (L-D3) below (L-D1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 235 SEQ ID NO: 235: QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGT SSDVGGYNY VSWYQQHPGKAPKLMIY DVS NRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTGTELADVL GTWDADAVYYC GTWD (L-D2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 235 (L-D3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 235, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-D1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-D1), CDRL2 (L2-D1), and CDRL3 (L3-D1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-D2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-D1) of CDRL1, (L2-D1) of CDRL2, and (L3-D1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 235. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-D3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-D1) of CDRL1, (L2-D1) of CDRL2, and (L3-D1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 235. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-D1). Also known as 18H-L13".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LE) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L14 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LE) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-E) below, and CDRL2 is (L2-E) below.
  • CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-E) below.
  • (L1-E) Amino acid sequence of (L1-E1), (L1-E2), or (L1-E2) or (L1-E3) below (L1-E1) SEQ ID NO:236 (TSDVGTTNY) (L1-E2) Amino acid of SEQ ID NO:236 Amino acid sequence (L1-E3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 236.
  • (L2-E) Amino acid sequence of the following (L2-E1), (L2-E2) or (L2-E3) (L2-E1) SEQ ID NO:237 (DVT) (L2-E2) Amino acid of SEQ ID NO:237 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-E3) SEQ ID NO: 237, in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-E) Amino acid sequence of (L3-E1), (L3-E2) or (L3-E3) below (L3-E1) SEQ ID NO: 238 (SYAGSYTFVV) (L3-E2) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 238 Amino acid sequence (L3-E3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 238.
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LE) above includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LE) below.
  • the above-mentioned (L-E1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-E1), CDRL2 (L2-E1), and CDRL3 (L3-E1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-E2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-E1) of CDRL1, (L2-E1) of CDRL2, and (L3-E1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 239. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-E3) includes, for example, (L1-E1) of CDRL1, (L2-E1) of CDRL2, and (L3-E1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 239. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is (H-A1)
  • the light chain variable region is (L-E1)
  • the antibody of this combination is referred to as "antibody Also known as 18H-L14".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LF) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L16 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LF) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-F) below, and CDRL2 is (L2-F) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-F) below.
  • (L1-F) The following (L1-F1), (L1-F2) or (L1-F3) amino acid sequence (L1-F1) SEQ ID NO:240 (SSDVGVYNY) amino acid sequence (L1-F2) SEQ ID NO:240 amino acid Amino acid sequence (L1-F3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 240.
  • (L2-F) The following (L2-F1), (L2-F2) or (L2-F3) amino acid sequence (L2-F1) SEQ ID NO: 241 (DVS) amino acid sequence (L2-F2) SEQ ID NO: 241 amino acid Amino acid sequence (L2-F3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 241.
  • (L3-F) Amino acid sequence of (L3-F1), (L3-F2) or (L3-F3) below (L3-F1) SEQ ID NO:242 (AAWDDSLNGVV) (L3-F2) SEQ ID NO:242 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-F3) SEQ ID NO: 242, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LF) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LF) below.
  • (LF) Amino acid sequence of the following (L-F1), (L-F2) or (L-F3) (L-F1) Amino acid sequence of SEQ ID NO:243 SEQ ID NO:243: QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGT SSDVGVYNY VSWYQQHPGKAPKLMIY DVS KRPSGVPDRFSGSKSANTASLTISGLQAEGTQLVADEADYYV AA (L-F2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 243 (L-F3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 243, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-F1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the amino acid sequences of (L1-F1) of CDRL1, (L2-F1) of CDRL2, and (L3-F1) of CDRL3.
  • the amino acid sequence of (L-F2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-F1) of CDRL1, (L2-F1) of CDRL2, and (L3-F1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 243. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-F3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-F1) of CDRL1, (L2-F1) of CDRL2, and (L3-F1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 243. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-F1). Also known as 18H-L16".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LG) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L17 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3
  • CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A)
  • CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A)
  • CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LG) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, wherein CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-G) below, and CDRL2 is (L2-G) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-G) below.
  • (L1-G) Amino acid sequence of (L1-G1), (L1-G2) or (L1-G3) below (L1-G1), amino acid sequence of (L1-G1) SEQ ID NO: 244 (SSNIGNNY) (L1-G2), amino acid of SEQ ID NO: 244 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-G3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 244 in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • L2-G The following (L2-G1), (L2-G2) or (L2-G3) amino acid sequence (L2-G1) SEQ ID NO:245 (DNV) amino acid sequence (L2-G2) SEQ ID NO:245 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-G3) SEQ ID NO: 245, in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-G) Amino acid sequence of the following (L3-G1), (L3-G2) or (L3-G3) (L3-G1) SEQ ID NO:246 (AAWDDSLSAI) (L3-G2) SEQ ID NO:246 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-G3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 246 one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LG) includes, for example, a polypeptide having the following amino acid sequence (L-G).
  • LG below (L-G1), (L -G2) or (L-G3) of the amino acid sequence (L-G1) SEQ ID NO: 247 amino acid sequence SEQ ID NO 247: QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGS SSNIGNNY VCWYQHLPGTAPKLLIY DNV KRPSGIPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYC AAWDDSLSAI FGGGTELTVL (L-G2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 247 (L-G3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 247, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the (L-G1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the CDL1 (L1-G1), CDRL2 (L2-G1), and CDRL3 (L3-G1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-G2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-G1) of CDRL1, (L2-G1) of CDRL2, and (L3-G1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 247. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-G3) includes, for example, (L1-G1) of CDRL1, (L2-G1) of CDRL2, and (L3-G1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 247. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-G1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also known as 18H-L17”.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LH) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-L22 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3
  • CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A)
  • CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A)
  • CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LH) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-H) below, and CDRL2 is (L2-H) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-H) below.
  • (L1-H) Amino acid sequence of (L1-H1), (L1-H2) or (L1-H3) or (L1-H3) below (L1-H1) SEQ ID NO: 248 (SSDVGGYNY) (L1-H2) SEQ ID NO: 248 Amino acid sequence (L1-H3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 248.
  • (L2-H) The following (L2-H1), (L2-H2) or (L2-H3) amino acid sequence (L2-H1) SEQ ID NO: 249 (DVS) amino acid sequence (L2-H2) SEQ ID NO: 249 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-H3), amino acid sequence of SEQ ID NO: 249 in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-H) Amino acid sequence of the following (L3-H1), (L3-H2) or (L3-H3) (L3-H1) SEQ ID NO:250 (HSYDSSLSHV) (L3-H2) Amino acid of SEQ ID NO:250 Amino acid sequence (L3-H3) having 80% or more identity to the sequence, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 250 has one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LH) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LH) below.
  • the above-mentioned (L-H1) amino acid sequence is, for example, a sequence containing the amino acid sequences of (L1-H1) of CDRL1, (L2-H1) of CDRL2, and (L3-H1) of CDRL3.
  • the amino acid sequence of (L-H2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-H1) of CDRL1, (L2-H1) of CDRL2, and (L3-H1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:251. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-H3) includes, for example, (L1-H1) of CDRL1, (L2-H1) of CDRL2, and (L3-H1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO:251. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-H1)
  • the antibody of this combination is referred to below as "antibody Also known as 18H-L22”.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LI) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody H1-K4 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LI) above includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-I) below, and CDRL2 is (L2-I) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-I) below.
  • L1-I Amino acid sequence (L1-I1), (L1-I2) or (L1-I3) amino acid sequence (L1-I1) SEQ ID NO:252 (QSVSSN) (L1-I2) SEQ ID NO:252 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-I3) SEQ ID NO: 252, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-I) Amino acid sequence of the following (L2-I1), (L2-I2) or (L2-I3) (L2-I1) SEQ ID NO: 253 (GAS) (L2-I2) SEQ ID NO: 253 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-I3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 253, one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-I) Amino acid sequence of (L3-I1), (L3-I2) or (L3-I3) below (L3-I1) SEQ ID NO: 254 (QQYNNWPPLYT) (L3-I2) Amino acid of SEQ ID NO: 254 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-I3) SEQ ID NO: 254, in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LI) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LI) below.
  • the above-mentioned (L-I1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-I1), CDRL2 (L2-I1), and CDRL3 (L3-I1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-I2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-I1) of CDRL1, (L2-I1) of CDRL2, and (L3-I1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 255. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-I3) includes, for example, (L1-I1) of CDRL1, (L2-I1) of CDRL2, and (L3-I1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 255. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-I1). Also called “H1-K4".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LJ) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-K5 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3
  • CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A)
  • CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A)
  • CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LJ) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-J) below, and CDRL2 is (L2-J) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-J) below.
  • (L1-J) Amino acid sequence of the following (L1-J1), (L1-J2) or (L1-J3) (L1-J1) SEQ ID NO: 256 (QSVSSY) (L1-J2) Amino acid of SEQ ID NO: 256 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-J3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 256, one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • L2-J Amino acid sequence (L2-J1), (L2-J2) or (L2-J3) below (L2-J1) SEQ ID NO:257 (DAS) amino acid sequence (L2-J2) SEQ ID NO:257 Amino acid sequence (L2-J3) having 80% or more identity to the sequence, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 257
  • (L3-J) Amino acid sequence of the following (L3-J1), (L3-J2) or (L3-J3) (L3-J1) SEQ ID NO:258 (QQSYSTLLYT) (L3-J2) Amino acid of SEQ ID NO:258 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-J3) SEQ ID NO: 258, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the (LJ) light chain variable region includes, for example, a polypeptide consisting of the following (LJ) amino acid sequence.
  • LJ amino acid sequence (L-J1) of SEQ ID NO: 259 amino acid sequence SEQ ID NO 259: EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRAS QSVSSY LAWYQQKPGQAPRLLIY DAS NRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYC QQSYSTLLYT FGQGTKLEIK (L-J2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 259 (L-J3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 259, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-J1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-J1), CDRL2 (L2-J1), and CDRL3 (L3-J1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-J2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-J1) of CDRL1, (L2-J1) of CDRL2, and (L3-J1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 259. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-J3) includes, for example, (L1-J1) of CDRL1, (L2-J1) of CDRL2, and (L3-J1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 259 It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-J1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also known as 18H-K5".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, wherein CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LK) above includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-K) below, and CDRL2 is (L2-K) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-K) below.
  • (L1-K) Amino acid sequence of the following (L1-K1), (L1-K2) or (L1-K3) (L1-K1) SEQ ID NO: 260 (QSVSSY) (L1-K2) Amino acid of SEQ ID NO: 260 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-K3) SEQ ID NO: 260, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-K) Amino acid sequence of the following (L3-K1), (L3-K2) or (L3-K3) (L3-K1) SEQ ID NO:262 (QQYDSLPLT) (L3-K2) Amino acid of SEQ ID NO:262 Amino acid sequence (L3-K3) having 80% or more identity to the sequence, wherein the amino acid sequence of SEQ ID NO: 262 has one or several amino acids deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LK) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LK) below.
  • the above-mentioned (L-K1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-K1), CDRL2 (L2-K1), and CDRL3 (L3-K1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-K2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-K1) of CDRL1, (L2-K1) of CDRL2, and (L3-K1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:263. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-K3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-K1) of CDRL1, (L2-K1) of CDRL2, and (L3-K1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO:263. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-K1)
  • antibody of this combination hereinafter referred to as "antibody Also known as 18H-K6".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LL) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-K9 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LL) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-L) below, and CDRL2 is (L2-L) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-L) below.
  • (L1-L) The following (L1-L1), (L1-L2) or (L1-L3) amino acid sequence (L1-L1) SEQ ID NO:264 (QTISASS) amino acid sequence (L1-L2) SEQ ID NO:264 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-L3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 264 one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L2-L) The following (L2-L1), (L2-L2) or (L2-L3) amino acid sequence (L2-L1) SEQ ID NO:265 (GAS) amino acid sequence (L2-L2) SEQ ID NO:265 amino acid Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-L3) SEQ ID NO: 265, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • (L3-L) Amino acid sequence of the following (L3-L1), (L3-L2) or (L3-L3) (L3-L1) SEQ ID NO: 266 (QQFNEWPLT) (L3-L2) Amino acid of SEQ ID NO: 266 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-L3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 266, one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LL) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (L-L) below.
  • the above-mentioned (L-L1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-L1), CDRL2 (L2-L1), and CDRL3 (L3-L1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-L2) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-L1) of CDRL1, (L2-L1) of CDRL2, and (L3-L1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 267. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-L3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-L1) of CDRL1, (L2-L1) of CDRL2, and (L3-L1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 267. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1)
  • the light chain variable region is the (L-L1)
  • the antibody of this combination is referred to as "antibody Also known as 18H-K9".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the combination (LM) antibody and the like are also referred to as, for example, antibody 18H-K10 group.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes CDRH1, CDRH2, and CDRH3, CDRH1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H1-A), and CDRH2 is It is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H2-A), and CDRH3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (H3-A).
  • the light chain variable region of (LM) includes CDRL1, CDRL2, and CDRL3, where CDRL1 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L1-M) below, and CDRL2 is (L2-M) below. Is a polypeptide containing the amino acid sequence of, and CDRL3 is a polypeptide containing the amino acid sequence of (L3-M) below.
  • (L1-M) Amino acid sequence of the following (L1-M1), (L1-M2) or (L1-M3) (L1-M1) SEQ ID NO:268 (QSVSSN) (L1-M2) SEQ ID NO:268 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L1-M3)
  • amino acid sequence of SEQ ID NO: 268 one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • L2-M The following (L2-M1), (L2-M2) or (L2-M3) amino acid sequence (L2-M1) SEQ ID NO:269 (GAS) amino acid sequence (L2-M2) SEQ ID NO:269 amino acid sequence Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L2-M3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO: 269, one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added
  • L3-M Amino acid sequence (L3-M2), (L3-M2) or (L3-M2) or (L3-M3) amino acid sequence (L3-M1) SEQ ID NO:270 (QQYGSSPDIFT) (L3-M2) SEQ ID NO:270 Amino acid sequence having 80% or more identity to the sequence (L3-M3) SEQ ID NO: 270, wherein one or several amino acids are deleted, substituted, inserted and/or added
  • “Identity” in each of the above-mentioned CDRs is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more, respectively.
  • substitution and the like is, for example, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, 1 respectively.
  • the heavy chain variable region of (HA) includes, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of (H-A).
  • the light chain variable region of (LM) includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of (LM) below.
  • (LM) Amino acid sequence of the following (L-M1), (L-M2) or (L-M3) (L-M1) Amino acid sequence of SEQ ID NO: 271 SEQ ID NO: 271: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAS QSVSSN LAWYQQKLGQAPRLLIY GAS SRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVDIC QQFG (L-M2) Amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of SEQ ID NO:271 (L-M3) In the amino acid sequence of SEQ ID NO:271, one or several amino acids are deleted or substituted , Inserted and/or added amino acid sequence
  • the above-mentioned (L-M1) amino acid sequence is, for example, a sequence including the CDL1 (L1-M1), CDRL2 (L2-M1), and CDRL3 (L3-M1) amino acid sequences.
  • the amino acid sequence of (L-M2) includes, for example, (L1-M1) of CDRL1, (L2-M1) of CDRL2, and (L3-M1) of CDRL3, and the amino acid of SEQ ID NO: 271. It may be an amino acid sequence having 80% or more identity with the sequence.
  • the amino acid sequence of (L-M3) includes, for example, the amino acid sequences of (L1-M1) of CDRL1, (L2-M1) of CDRL2, and (L3-M1) of CDRL3, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 271. It may be an amino acid sequence in which one or several amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added in the sequence.
  • the heavy chain variable region is the (H-A1) and the light chain variable region is the (L-M1). Also known as 18H-K10".
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99, respectively. % Or more.
  • substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8 respectively. 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • amino acid sequences of SEQ ID NOs: 216 to 271 are, for example, human-derived amino acid sequences.
  • the binding between the antibody and the like of the present invention and CD19 can be confirmed by a method for detecting the binding between the antibody and the antigen, such as surface plasmon resonance (SPR) and flow cytometry.
  • a method for detecting the binding between the antibody and the antigen such as surface plasmon resonance (SPR) and flow cytometry.
  • the antibody or the like of the present invention may be labeled with a labeling substance, or may be immobilized on a carrier, a porous body or the like.
  • the above description can be applied to the labeling and immobilization.
  • the method for producing the antibody or the like of the present invention is not particularly limited, and for example, it can be produced by genetic engineering based on the aforementioned amino acid sequence information. Specifically, for example, it can be performed as follows.
  • the present invention is not limited to this example.
  • a vector containing a nucleic acid sequence encoding the amino acid sequence of each region, the heavy chain, and/or the light chain of the antibody of the present invention is introduced into a host to obtain a transformant. Then, the transformant is cultured, a fraction containing an antibody that binds to CD19 is collected, and the antibody is isolated or purified from the obtained collected fraction.
  • the antibody is, for example, a monoclonal antibody.
  • the monoclonal antibody include a monoclonal antibody obtained by immunizing an animal, a chimeric antibody, a humanized antibody, a human antibody (also referred to as a fully human antibody), and the like. The above description can be applied to the chimeric antibody and the humanized antibody.
  • the antibody etc. of the present invention can also be prepared, for example, by immunizing an animal with an antigen.
  • the antigen include CD19 protein.
  • the antigen is preferably immunized multiple times.
  • the peptide fragment may be, for example, a peptide fragment consisting only of an antigenic determinant (epitope) or a peptide fragment containing the antigenic determinant. The above description can be applied to the method for producing the monoclonal antibody.
  • the (L) light chain variable region may be the following (L) light chain variable region.
  • (L) comprises light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3,
  • CDRL1 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L1)
  • CDRL2 is a polypeptide containing the following amino acid sequence (L2)
  • CDRL3 is a light chain variable region that is a polypeptide comprising the amino acid sequence of (L3) below:
  • (L1) Amino acid sequence of (L1-1), (L1-2) or (L1-3) below (L1-1) Any amino acid sequence of CDRL1 under the following conditions (L1) to (L3) and (L4)
  • the amino acid sequence of (L1-2) (L1-1) which has 80% or more identity with the amino acid sequence (L1-3) (L1-1), one or several amino acids are Amino acid sequences deleted, substituted, inserted and/or added;
  • (L2) Amino acid sequence of (L2-1), (L2-2) or (L2-3) below (L2-1) Any amino acid sequence of CDRL2 under the following conditions (
  • X 3 is preferably V or I.
  • X 5 is preferably absent, Y or T.
  • X 10 is preferably W or Y.
  • X 1 is preferably S or T.
  • X 2 is preferably V or I.
  • X 6 is preferably Y or F.
  • X 12 is preferably absent, Y or F.
  • Examples of the light chain variable region satisfying the condition (L1) include the light chain variable region of the above (LA).
  • Examples of the light chain variable region satisfying the condition (L2) include the light chain variable region of the above (LC).
  • Examples of the light chain variable region that satisfies the condition (L3) include the light chain variable regions of (LB), (LE), (LF), (LG), and (LH) described above.
  • Examples of the light chain variable region satisfying the condition (L4) include the light chain variable regions of (LI), (LJ), (LK), (LL), and (LM) described above.
  • the coding gene of the present invention includes an antibody against the complex of HLA-A*02:01 and NY-ESO-1 157-165 or an antigen-binding fragment thereof or an antibody against CD19 or an antigen-binding fragment thereof (hereinafter, referred to as “the present invention”). Antibody or antigen-binding fragment thereof or “the antibody of the present invention”), and the amino acid sequence of the first antibody or antigen-binding fragment of the present invention or the second antibody of the present invention or A nucleic acid (polynucleotide) encoding an antigen-binding fragment is included.
  • the above-mentioned antibody of the present invention and the like can be obtained.
  • the sequence of the coding gene of the present invention is not particularly limited as long as it is a sequence encoding the amino acid sequence of the antibody of the present invention, and may be a sense sequence or an antisense sequence.
  • the expression vector of the present invention is an expression vector of an antibody against A2/NY-ESO-1 157 or an antigen-binding fragment thereof or an antibody against CD19 or an antigen-binding fragment thereof, and contains the above-mentioned coding gene of the present invention.
  • the coding gene is linked to the linking vector so that the antibody of the present invention or an antigen-binding fragment thereof can be expressed.
  • the expression vector of the present invention is not particularly limited as long as it can express the antibody of the present invention and the like, and other configurations.
  • the expression vector of the present invention may be, for example, an expression vector containing a nucleic acid sequence encoding the heavy chain variable region and a nucleic acid sequence encoding the light chain variable region, or may be a nucleic acid sequence encoding the heavy chain variable region. It may be a set of an expression vector containing the same and an expression vector containing a nucleic acid sequence encoding the light chain variable region.
  • the expression vector of the present invention can be prepared, for example, by ligating the coding gene of the present invention to a ligation vector.
  • the description of the expression vector in the CAR library of the present invention can be incorporated.
  • the type of the ligation vector that ligates the coding gene is not particularly limited, and examples thereof include pUC and pMX.
  • the ligation vector can be appropriately set, for example, according to the host into which the expression vector is introduced.
  • the host is not particularly limited, and examples thereof include mammalian cells such as CHO cells and the like.
  • the transformant of the present invention is a transformant that expresses the antibody or the like of the present invention, and contains a host and the above-mentioned coding gene of the present invention.
  • the transformant of the present invention only needs to have the above-described coding gene of the present invention expressible.
  • the transformant preferably has, for example, the expression vector of the present invention.
  • the method of introducing the expression vector into the host is not particularly limited, and a known method can be adopted.
  • the explanation of the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody, etc., the second antibody of the present invention, etc. can be referred to.
  • the first chimeric antigen receptor (CAR) of the present invention comprises an antigen binding domain, a transmembrane domain, and an intracellular signal transduction domain, and the antigen binding domain is the antibody of the present invention. Or an antigen-binding fragment thereof.
  • the first CAR of the present invention is characterized in that the antigen-binding domain contains the first antibody of the present invention and the like, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the description of the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody, etc., the second antibody, etc., genes, expression vectors, and transformants can be used.
  • the first CAR of the present invention can be preferably used as, for example, CAR-T cell CAR against A2/NY-ESO-1 157- expressing cancer cells.
  • the antigen-binding domain may be, for example, the first antibody of the present invention or an antigen-binding fragment of the first antibody of the present invention.
  • the antigen-binding fragment is preferably a single chain antibody (scFv).
  • scFv single chain antibody
  • antigen-binding domain examples include the following (BD) polypeptide.
  • BD Polypeptide
  • BD2 consisting of the amino acid sequences of any of the following (BD1), (BD2) or (BD3) (BD1) SEQ ID NOS: 98 to 117 (BD2) SEQ ID NO: 98 to 117
  • BD3 consisting of an amino acid sequence having 80% or more identity and binding to A2/NY-ESO-1 157 has one or several amino acid sequences of any of SEQ ID NOs: 98 to 117. Consisting of an amino acid sequence in which the amino acid of is deleted, substituted, inserted and/or added, and binds to A2/NY-ESO-1 157
  • the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 98 to 117 have, for example, the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combinations (1) to (18) in the first antibody of the present invention.
  • an amino acid sequence containing The amino acid sequences of the heavy chain variable region and the light chain variable region in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 98 to 117 are, for example, the heavy chain variable regions of the combinations (1) to (18) in the first antibody of the present invention and the like. Reference can be made to the amino acid sequence containing the light chain variable region.
  • the amino acid sequences corresponding to CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 98 to 117 are conserved, for example.
  • the amino acid sequences of the CDRs in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 98 to 117 are, for example, amino acids containing the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combinations (1) to (18) in the first antibody of the present invention.
  • the amino acid sequence of each CDR in the sequence can be referred to.
  • H1-3M4E5L SEQ ID NO:98
  • QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGT SRDVGGYNY VSWYQQHPGKAPKLIIH DVI ERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC WSFAGSYYV FGTDVTVL
  • K52-H1 DIQMTQSPSAMSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYYSTPQT FGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • K73-H1 (SEQ ID NO: 100) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKAGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYC QQYESYRRS FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • K121-H1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • K124-H1 SEQ ID NO: 102
  • DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS RLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • K145-H1 SEQ ID NO: 105
  • DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRAS QDISRY LNWYQQKPGKAPKLLLY
  • AAS RLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • K151-H1 SEQ ID NO: 106
  • DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYC QQYDNLIT FGQGTRLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • K160-H1 EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRAS QSVSSN LAWYQQKPGQAPRLLIY GAS TRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISRLEPEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • K173-H1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKAGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYC QQYESYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSS
  • Antigen binding domain of 3M4E5H-L1 (SEQ ID NO: 110) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSTYQ MSWVRQAPGKGLEWVSG IVSSGGST AYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AGELLPYYGMDV WGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGT SSDVGGYDF VSWYQQHPGEAPKLLVY DVN NRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYC SSYAGSNSV FGTGTKVTVL
  • Antigen-binding domain of H73-3M4E5L (SEQ ID NO: 117) QLQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS GGSISSYY WSWIRQPPGKGLEWIGE INHSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARCPIYYYGMDV WGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGT SRDVGGYNY VSWYQQHPGKAPKLIIH DVI ERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC WSFAGSYYV FGTDVTVL
  • the polypeptide of (BD1) may be a polypeptide having an amino acid sequence in which the amino acid sequences of the heavy chain variable region and the light chain variable region in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 98 to 117 are exchanged.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99%, respectively. That is all.
  • polypeptide (BD3) “one or several” regarding substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, respectively. It is 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • transmembrane domain and the intracellular signal transduction domain for example, the description of the first transmembrane domain and the first intracellular signal transduction domain of the CAR library of the present invention can be applied, respectively.
  • first CAR of the present invention include the following polypeptide (C).
  • C A polypeptide (C2) consisting of the amino acid sequences of any of the following (C1), (C2) or (C3) (C1) SEQ ID NOS: 118 to 137;
  • C3 C1 SEQ ID NOS: 118 to 137;
  • a polypeptide comprising an amino acid sequence having 80% or more identity with the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOS: 118 to 137
  • a polypeptide comprising an amino acid sequence in which one amino acid has been deleted, substituted, inserted and/or added, and which binds to A2/NY-ESO-1 157
  • H1-3M4E5L CAR (SEQ ID NO: 118) QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGT SRDVGGYNY VSWYQQHPGKAPKLIIH DVI ERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC WSFAGSYYV FGTDVTVLAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLD
  • K52-H1 CAR (SEQ ID NO: 119) DIQMTQSPSAMSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYYSTPQT FGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDV
  • K73-H1 CAR (SEQ ID NO: 120) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKAGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYC QQYESYRRS FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDK
  • K121-H1 CAR (SEQ ID NO: 121) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRR
  • K124-H1 CAR (SEQ ID NO: 122) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKPGKAPKLLIY AAS RLESGVPSRFSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEM
  • K145-H1 CAR (SEQ ID NO: 125) DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRAS QDISRY LNWYQQKPGKAPKLLLY AAS RLESGVPSRFSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGG
  • K160-H1 CAR (SEQ ID NO: 127) EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRAS QSVSSN LAWYQQKPGQAPRLLIY GAS TRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISRLEPEDFATYYC QQYNSYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGK
  • K173-H1 CAR (SEQ ID NO: 128) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSISSY LNWYQQKAGKAPKLLIY AAS SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYC QQYESYSRT FGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVS GGSISSNY WSWIRQAPGKGLEWIGH VSYSGST NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARESYYYYGMDV WGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDK
  • 3M4E5H-L1 CAR (SEQ ID NO: 130) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSTYQ MSWVRQAPGKGLEWVSG IVSSGGST AYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AGELLPYYGMDV WGQGTTVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSTYQ MSWVRQAPGKGLEWVSG IVSSGGST AYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC AGELLPYYGMDV WGQGTTVTVSSQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGT SSDVGGYDF VSWYQQHPGEAPKLLVY DVN NRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYC SSYAGSNSV FGTGTKVTVLAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFW
  • the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 118 to 137 are, for example, the heavy chain variable region and the light chain of the combinations (1) to (18) in the first antibody or the like of the present invention, respectively. It is an amino acid sequence containing a variable region.
  • the amino acid sequences corresponding to CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 118 to 137 are conserved, for example.
  • amino acid sequences of the CDRs in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 118 to 137 are, for example, the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combinations (1) to (18) in the first antibody of the present invention, respectively. Reference can be made to the containing amino acid sequence.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99%, respectively. That is all.
  • polypeptide (C3) “one or several” regarding substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, It is 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the method for producing the first CAR of the present invention is not particularly limited, and it can be produced genetically based on the above-mentioned amino acid sequence information, for example. Specifically, for example, it can be performed as follows.
  • the present invention is not limited to this example.
  • an expression vector containing the nucleic acid encoding the first CAR of the present invention is introduced into a host to obtain a transformant. Then, the transformant is cultured to obtain a transformant expressing the first CAR.
  • Examples of the expression vector include a vector containing a nucleic acid encoding the first CAR, and the like, and the description of the expression vector can be applied, for example.
  • the host is not particularly limited and, for example, the above description of the host can be applied.
  • the second chimeric antigen receptor (CAR) of the present invention comprises an antigen-binding domain, a transmembrane domain, and an intracellular signal transduction domain, as described above, and the antigen-binding domain is the antibody of the present invention. Or an antigen-binding fragment thereof.
  • the second CAR of the present invention is characterized in that the antigen-binding domain contains the second antibody of the present invention and the like, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the description of the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody, etc., the second antibody, etc., genes, expression vectors, and transformants can be used.
  • the second CAR of the present invention can be preferably used, for example, as CAR-T cell CAR against CD19-expressing cancer cells.
  • the antigen-binding domain may be, for example, the second antibody of the present invention or an antigen-binding fragment of the second antibody of the present invention.
  • the antigen-binding fragment is preferably a single chain antibody (scFv).
  • scFv single chain antibody
  • antigen-binding domain examples include the following polypeptide (bd).
  • Bd Polypeptide (bd2) consisting of the amino acid sequences of any of the following (bd1), (bd2) or (bd3) polypeptide (bd1) SEQ ID NOS: 272 to 284, and any of the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 272 to 284
  • amino acid sequence of any one of the polypeptide (bd3) SEQ ID NOs: 272 to 284 which has an amino acid sequence having 80% or more identity to CD19, one or several amino acids are deleted,
  • a polypeptide consisting of a substituted, inserted and/or added amino acid sequence, which binds to CD19
  • the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 272 to 284 are, for example, the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combinations (LA) to (LM) in the second antibody of the present invention.
  • the amino acid sequences of the heavy chain variable region and the light chain variable region in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 272 to 284 are, for example, the heavy chain variable regions of the combinations (LA) to (LM) in the second antibody of the present invention and the like. Reference can be made to the amino acid sequence containing the light chain variable region.
  • amino acid sequences corresponding to CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 272 to 284 are conserved, for example.
  • the amino acid sequences of the CDRs in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 272 to 284 are, for example, amino acids containing the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combinations (LA) to (LM) in the second antibody of the present invention.
  • the amino acid sequence of each CDR in the sequence can be referred to.
  • Antigen binding domain of L4-18H SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGD KLGDKY ACWYQQKPGQSPVLVIY QDS KRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC QAWDSSTHVV FGGGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAAS GFTFDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSG ISWNSGRI GYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYC ARDQGYHYYDSAEHAFDI WGQGTVVTVSS
  • K6-18H SEQ ID NO: 282
  • EIVLTRSPATLSLSPGERATLSCRAS QSVSSY LAWYQQKPGQAPRLLIY DAS NRATGISARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDIATYYC QQYDSLPLT FGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAAS GFTFDDYA MHWVRQAPGKGLEWVSG ISWNSGRI GYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYC ARDQGYHYYDSAEHAFDI WGQGTVVTVSS
  • the polypeptide (BD1) may be a polypeptide having an amino acid sequence in which the amino acid sequences of the heavy chain variable region and the light chain variable region in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 272 to 284 are exchanged.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99%, respectively. That is all.
  • polypeptide (bd3) “one or several” regarding substitution and the like is, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, respectively. It is 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • transmembrane domain and the intracellular signal transduction domain for example, the description of the first transmembrane domain and the first intracellular signal transduction domain of the CAR library of the present invention can be applied, respectively.
  • the second CAR of the present invention include the following (CA) polypeptides.
  • CA Polypeptide
  • CA2 consisting of the amino acid sequences of any of the following (CA1), (CA2) or (CA3) polypeptides (CA1) SEQ ID NOs: 285 to 297, and any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 285 to 297
  • CA3 polypeptides which has an amino acid sequence having 80% or more identity to CD19, one or several amino acids are deleted,
  • a polypeptide comprising a substituted, inserted and/or added amino acid sequence, which binds to CD19
  • the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 285 to 297 are, for example, the heavy chain variable region and the light chain of the combinations (LA) to (LM) in the second antibody of the present invention, respectively. It is an amino acid sequence containing a variable region.
  • the amino acid sequences corresponding to CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 285 to 297 are conserved, for example.
  • amino acid sequences of the CDRs in the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 285 to 297 include, for example, the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combinations (LA) to (LM) in the second antibody of the present invention, respectively. Reference can be made to the containing amino acid sequence.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99%, respectively. That is all.
  • polypeptide of (CA3) “one or several” regarding substitution and the like are, for example, 1 to 20, 1 to 15, 1 to 10, 1 to 9, 1 to 8, respectively. It is 1 to 7, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, 1 to 3, 1 or 2, and 1.
  • the method for producing the second CAR of the present invention is not particularly limited, and it can be produced genetically based on the above-mentioned amino acid sequence information, for example. Specifically, for example, it can be performed as follows.
  • the present invention is not limited to this example.
  • an expression vector containing the nucleic acid encoding the second CAR of the present invention is introduced into a host to obtain a transformant. Then, the transformant is cultured to obtain a transformant expressing the second CAR.
  • Examples of the expression vector include, for example, a vector containing a nucleic acid encoding the second CAR, and the description of the expression vector can be applied, for example.
  • the host is not particularly limited and, for example, the above description of the host can be applied.
  • the nucleic acid of the present invention encodes the aforementioned chimeric antigen receptor of the present invention, as described above.
  • the nucleic acid of the present invention is characterized in that it encodes the first chimeric antigen receptor or the second chimeric antigen receptor of the present invention (hereinafter, also collectively referred to as "chimeric antigen receptor of the present invention").
  • the other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the nucleic acid of the present invention enables cells to express the CAR of the present invention, for example.
  • the nucleic acid of the present invention is, for example, the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody, etc., the first antibody, etc., the gene, the expression vector, the transformant, the first chimeric antigen receptor
  • the descriptions of the two chimeric antigen receptors can be incorporated.
  • the nucleic acid of the present invention can be prepared by a conventional method, for example, based on the amino acid sequence of the CAR of the present invention.
  • the nucleic acid encoding the CAR of the present invention is obtained by, for example, obtaining a base sequence encoding the amino acid sequence in a database in which the amino acid sequences of the above-mentioned domains are registered, and based on the base sequence, a molecule It can be prepared by biological methods and/or chemical synthetic methods.
  • the nucleotide sequence of the nucleic acid may be codon-optimized depending on the origin of cells expressing the CAR of the present invention.
  • nucleic acid of the present invention include the polynucleotide (c) below.
  • C Polynucleotide (nucleic acid) of the following (c1), (c2), (c3), (c4), (c5), or (c6)
  • C1 Polynucleotide encoding a polypeptide consisting of the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 118 to 137 (c2) Amino acid having 80% or more identity with the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 118 to 137
  • a polynucleotide (c3) comprising a sequence and encoding a polypeptide that binds to A2/NY-ESO-1 157 , wherein one or several amino acids are deleted or substituted in the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 118 to 137;
  • a polynucleotide (c4) comprising an inserted and/or added amino acid sequence and encoding a polypeptide that binds to A2/
  • the polynucleotides (c1) to (c3) are nucleic acids encoding the polypeptides (C1) to (C3), respectively, and the description of the polypeptides (C1) to (C3) can be incorporated.
  • the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 138 to 157 are, for example, the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combinations (1) to (18) in the first antibody of the present invention.
  • a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an amino acid sequence comprising:
  • the polynucleotides encoding the amino acid sequences corresponding to CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 138 to 157 are, for example, conserved. Has been done.
  • nucleotide sequences encoding the amino acid sequences of the CDRs in the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 138 to 157 are, for example, the heavy chain variable regions of the combinations (1) to (18) in the first antibody of the present invention and the like, respectively.
  • the amino acid sequence of each CDR in the amino acid sequence containing the light chain variable region can be referred to.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99%, respectively. That is all.
  • polynucleotide (c6) “one or several” regarding substitution and the like are, for example, 1 to 280, 1 to 210, 1 to 140, 1 to 70, 1 to 63, 1 to 56, 1 to 49, 1 to 35, 1 to 28, 1 to 21, 1 to 14, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, One to three, one or two, and one.
  • K145-H1 CAR (SEQ ID NO:145) 5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCTCCATCACTTGCCGGGCAAGT CAGGACATTAGCAGGTAT TTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGCTCTAT GCTGCATCC AGATTGGAAAGTGGGGTCCCATCCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCACCAGCCTGCAGCCTGATGACTTTGCAACTTATTACTGC CAACAGTATAATAGTTATTCCCGGACG TTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCA
  • the following polynucleotide (ca) can be mentioned.
  • a polynucleotide encoding a polypeptide that binds to CD19 consisting of any of the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 298 to 310 (ca5) consisting of any of the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 298 to 310
  • the nucleotide sequence of any one of SEQ ID NOs: 298 to 310 which has a nucleotide sequence having 80% or more identity and which encodes a polypeptide that binds to CD19 (ca6)
  • one or several nucleotides A polynucleotide encoding a polypeptide which binds to CD19 and has a nucleotide sequence in which is deleted, substituted, inserted and/or added
  • the polynucleotides (ca1) to (ca3) are nucleic acids encoding the polypeptides (CA1) to (CA3), respectively, and the description of the polypeptides (CA1) to (CA3) can be incorporated.
  • the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 298 to 310 are, for example, the heavy chain variable region and the light chain variable region of the combination (LA) to (LM) in the second antibody of the present invention.
  • a polynucleotide encoding a polypeptide comprising an amino acid sequence comprising:
  • the polynucleotides encoding the amino acid sequences corresponding to CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 298 to 310 are, for example, conserved. Has been done.
  • nucleotide sequences encoding the amino acid sequences of the CDRs in the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 298 to 310 are, for example, the heavy chain variable regions of the combinations (LA) to (LM) in the second antibody of the present invention and the like, respectively.
  • the amino acid sequence of each CDR in the amino acid sequence containing the light chain variable region can be referred to.
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99%, respectively. That is all.
  • polynucleotide (ca6) “one or several” regarding substitution and the like is, for example, 1 to 280, 1 to 210, 1 to 140, 1 to 70, 1 to 63, 1 to 56, 1 to 49, 1 to 35, 1 to 28, 1 to 21, 1 to 14, 1 to 6, 1 to 5, 1 to 4, One to three, one or two, and one.
  • the nucleic acid of the present invention may be introduced into an expression vector, for example.
  • an expression vector for example, the above description can be incorporated.
  • the various polynucleotides can be produced, for example, by a known genetic engineering method or synthetic method.
  • the cell of the present invention contains the chimeric antigen receptor of the present invention as described above.
  • the cell of the present invention is characterized by containing the chimeric antigen receptor of the present invention, and the other constitution and conditions are not particularly limited.
  • the cell of the present invention can treat cancer, for example.
  • the cells of the present invention include, for example, the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody, etc., the second antibody, etc., a gene, an expression vector, a transformant, a first chimeric antigen receptor, The description of the second chimeric antigen receptor, nucleic acid and the like can be incorporated.
  • the cell of the present invention may express a CAR other than the CAR of the present invention.
  • the cells are preferably T cells.
  • the T cells may be, for example, the T cell-like cells.
  • the method for producing a cell of the present invention includes the step of introducing the nucleic acid of the present invention into a cell.
  • the method for producing a cell of the present invention is characterized in that the nucleic acid of the present invention is introduced into a cell in the introducing step, and other steps and conditions are not particularly limited.
  • cells capable of treating cancer can be produced.
  • the method for producing cells of the present invention includes, for example, the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody and the like, the second antibody and the like, genes, expression vectors, transformants, and first chimeric antigens.
  • the description of the receptor, the second chimeric antigen receptor, the nucleic acid, the cell and the like can be incorporated.
  • the cells are T cells or T cell-like cells.
  • the method of introducing the nucleic acid in the introduction step is not particularly limited, and for example, the description of the first expression step in the first screening method of the present invention can be incorporated.
  • the method for producing a cell of the present invention may include, for example, an expression step of causing the cell to express the chimeric antigen receptor encoded by the nucleic acid after the introduction step.
  • the expression step can be carried out, for example, by culturing the cells after the introduction step.
  • the therapeutic drug for cancer includes the cell, gene, expression vector or nucleic acid of the present invention.
  • the therapeutic agent of the present invention is characterized by containing the cell, gene, expression vector, or nucleic acid of the present invention, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the therapeutic agent of the present invention can treat cancer, for example.
  • the cancer therapeutic agent of the present invention includes, for example, the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody and the like, the second antibody and the like, genes, expression vectors, transformants, and first chimeric antigens.
  • the explanation of the receptor, the second chimeric antigen receptor, the nucleic acid, the cell, the method for producing the cell and the like can be incorporated.
  • the cancer to be treated is not particularly limited and can be appropriately determined depending on, for example, the type of chimeric antigen receptor to be expressed.
  • the cancer therapeutic agent of the present invention is a cell, gene, expression vector or nucleic acid related to CAR that binds to A2/NY-ESO-1 157
  • the cancer to be treated is, for example, malignant melanoma or lung cancer.
  • Synovial sarcoma breast cancer, esophageal cancer, ovarian cancer, bladder cancer, neuroblastoma, myeloma and the like.
  • the cancer to be treated is, for example, B cell lymphoma, acute lymphocytic leukemia, chronic lymphocytic. Examples include leukemia and multiple myeloma.
  • the administration conditions of the therapeutic agent of the present invention are not particularly limited, and, for example, depending on the type of cancer to be targeted, the degree of cancer progression, the age of the patient, etc., the administration form, administration method, administration timing, and dose. Etc. can be set appropriately.
  • the method of using the therapeutic agent of the present invention is not particularly limited, and for example, the therapeutic agent of the present invention may be administered to the administration subject.
  • Examples of the administration target include cells, tissues or organs.
  • Examples of the administration target include humans and non-human animals other than humans.
  • Examples of the non-human animal include mammals such as mouse, rat, dog, monkey, rabbit, sheep, horse and pig.
  • the administration may be, for example, in vivo or in vitro .
  • the administration method is not particularly limited and can be appropriately determined depending on the administration subject, for example.
  • Examples of the administration method include parenteral administration and oral administration.
  • Examples of the parenteral administration include local administration, subcutaneous administration, intradermal administration, intramuscular administration, intraperitoneal administration, intravenous administration, intralymphatic administration, intratumoral administration and the like.
  • the administration form of the therapeutic agent of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include injections (injections), liquid solutions such as intravenous drip infusion, and the like.
  • the compounding amount of the cells is not particularly limited.
  • the administration conditions of the cells are not particularly limited.
  • the administration condition of the cells is, for example, a single dose (total) for adult human male is, for example, 1 ⁇ 10 8 to 3 ⁇ 10 10 cells, and preferably Is 1 ⁇ 10 9 to 1 ⁇ 10 10 cells, and the administration frequency is, for example, once every 1 to 4 weeks.
  • the compounding amount of the cells is contained at a concentration that can realize the exemplified administration conditions.
  • the amount of the gene, expression vector, or nucleic acid compounded is not particularly limited.
  • the administration conditions of the gene, expression vector, or nucleic acid are not particularly limited.
  • the administration method is subcutaneous injection, intravenous injection, or the like, and in the case of systemic administration to humans, the dose (total) per administration is, for example, 5 to 5000 mg, 50 to 500 mg, and the administration frequency is, for example, 2 Once every eight to eight weeks.
  • the therapeutic agent of the present invention may contain only one kind of the cells, genes, expression vectors, and nucleic acids, or may contain plural kinds thereof.
  • the therapeutic agent of the present invention may further contain other additives.
  • the amount of the additive compounded is not particularly limited as long as it does not interfere with the function of the therapeutic agent of the present invention.
  • the additive is not particularly limited, and for example, a pharmaceutically acceptable additive is preferable.
  • the kind of the additive is not particularly limited and can be appropriately selected depending on, for example, the kind of the administration subject. Examples of the additives include bases, stabilizers, preservatives and the like.
  • the method for treating cancer of the present invention includes an administration step of administering the cell, gene, expression vector or nucleic acid of the present invention to an administration subject.
  • the method for treating cancer of the present invention is characterized by administering the cell, gene, expression vector or nucleic acid of the present invention in the administration step, and other steps and conditions are not particularly limited.
  • cancer can be treated.
  • the method for treating cancer of the present invention includes, for example, the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody and the like, the second antibody and the like, genes, expression vectors, transformants, and first chimeras.
  • the description of the antigen receptor, the second chimeric antigen receptor, nucleic acid, cell, method for producing cell, therapeutic agent and the like can be incorporated.
  • any one of the cells, genes, expression vectors, and nucleic acids of the present invention may be administered, or multiple types may be administered.
  • the present invention is the antibody of the present invention or an antigen-binding fragment thereof for use in a method for treating cancer, or the antibody of the present invention or an antigen-binding fragment thereof for treating cancer.
  • the present invention is also the use of the above-mentioned antibody of the present invention or an antigen-binding fragment thereof for the manufacture of a medicament for treating cancer.
  • the present invention provides the cell, gene, expression vector, or nucleic acid of the present invention for use in a method for treating cancer, or the cell, gene, or expression of the present invention for treatment of cancer. It is a vector or nucleic acid.
  • the present invention is also the use of the cell, gene, expression vector or nucleic acid according to the present invention for the manufacture of a medicament for treating cancer.
  • the use of the present invention includes, for example, the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody and the like, the second antibody and the like, the gene, the expression vector, the transformant, the first chimeric antigen receptor, The description of the second chimeric antigen receptor, nucleic acid, cell, method for producing cell, therapeutic agent, therapeutic method and the like can be incorporated.
  • the bispecific antibody (BsAb) library of the present invention comprises a nucleic acid encoding a first bispecific antibody (BsAb), wherein the first BsAb comprises a first antigen-binding domain and a second antigen-binding domain.
  • scFv single-chain antibody
  • a second scFv for screening for binding to an antigen comprising a second heavy chain variable region and a second light chain variable region, said second heavy chain variable region and The second light chain variable region satisfies the following Condition 1 or Condition 2, and the first target antigen or the second target antigen is an immune cell activating receptor.
  • the heavy chain complementarity determining regions (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region are respectively CDRH1 of the heavy chain variable region in the antibody or the antigen-binding fragment thereof that binds to the second target antigen.
  • Light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region each include CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the light chain variable region of the first B cell receptor;
  • the heavy chain complementarity determining regions (CDRH) 1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region each include CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the heavy chain variable region of the first B cell receptor,
  • Light chain complementarity determining regions (CDRL) 1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region are respectively CDRL1 of the light chain variable region in the antibody or the antigen-binding fragment thereof that binds to the second target antigen. , CDRL2, and CDRL3.
  • the first BsAb in the BsAb library of the present invention, includes a first antigen-binding domain and a second antigen-binding domain, and the first antigen-binding domain is the first antigen-binding domain.
  • a second scFv that screens for binding to a second target antigen and the second scFv is a second scFv that binds to a target antigen of A heavy chain variable region and a second light chain variable region, wherein the second heavy chain variable region and the second light chain variable region satisfy the condition 1 or the condition 2;
  • the antigen or the second target antigen is an immune cell activating receptor, and other configurations and conditions are not particularly limited.
  • the BsAb library of the present invention includes, for example, the CAR library of the present invention, the first screening method, the first antibody and the like, the second antibody and the like, genes, expression vectors, transformants, and first chimeric antigen receptors.
  • the description of the second chimeric antigen receptor, nucleic acid, cell, method for producing cell, therapeutic agent, therapeutic method and the like can be incorporated.
  • the first BsAb is a protein containing the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain.
  • the first antigen-binding domain and the second antigen-binding domain respectively bind a first single-chain antibody (scFv) that binds to a first target antigen and a second target antigen to each other.
  • scFv first single-chain antibody
  • the second scFv has, for example, a structure similar to scFv, and the extracellular domain that binds to the antigen is changed to the second antigen binding domain that screens for binding to the second target antigen.
  • the first target antigen or the second target antigen is an immune cell activating receptor. Therefore, when the first target antigen is the immune cell activating receptor, the first BsAb that binds to the second target antigen may be, for example, the second target antigen and the first target antigen.
  • the immune cell activating receptor In the coexistence of immune cells capable of expressing (the immune cell activating receptor), a signal can be induced through the immune cell activating receptor of the immune cells, and as a result, the immune cells are activated (for example, , Proliferation, expression of activation markers, etc.).
  • the first target antigen is the immune cell activating receptor
  • the second screening method described below the first BsAb that activates the immune cells
  • the scFv that binds to the second target antigen can be more easily screened as compared with, for example, the method using a hybridoma and the method using phage display.
  • the first BsAb that binds to the second target antigen can activate the immune cells in, for example, the second screening method described below, and thus is a BsAb that can activate the immune cells. I can say. Therefore, according to the BsAb library of the present invention, for example, BsAbs capable of inducing the immune activity mediated by the immune cells can be screened for the cells expressing the second target antigen.
  • the first BsAb that binds to the second target antigen may be, for example, the first target antigen and the second target antigen (the above-mentioned In the coexistence of immune cells capable of expressing immune cell activating receptors, a signal can be induced through the immune cell activating receptors of the immune cells, and as a result, immune cells can be activated (eg, proliferation, activity). Expression marker, etc.).
  • the second target antigen is an immune cell activating receptor
  • the second target antigen is an immune cell activating receptor
  • the first BsAb that activates immune cells can be selected as the BsAb that binds to the second target antigen. Therefore, according to the BsAb library of the present invention, the scFv that binds to the second target antigen can be more easily screened as compared with, for example, the method using a hybridoma and the method using phage display.
  • the first BsAb that binds to the second target antigen can be said to be a BsAb capable of activating immune cells, since it can activate the immune cells in the second screening method described later, for example. .. Therefore, according to the BsAb library of the present invention, for example, BsAb capable of inducing immune activity mediated by immune cells can be screened for cells expressing the first target antigen.
  • the second antigen binding domain contains a second scFv for screening for binding to the target antigen.
  • the second scFv is, for example, a single-chain polypeptide derived from an antibody that binds to an antigen, and has a structure similar to scFv that retains the ability to bind to the antigen.
  • the scFv is a polypeptide in which a variable region fragment (Fv) of a heavy chain (H chain) and a light chain (L chain) of an antibody that binds to the antigen is linked.
  • one of a heavy chain variable region and a light chain variable region is a variable region such as an antibody that binds to the second target antigen
  • the other is A variable region derived from a B cell receptor, that is, a variable region whose binding to the second target antigen is unknown.
  • the heavy chain variable region or the light chain variable region that binds to the second target antigen can be screened. ..
  • the BsAb library of the present invention for example, as compared with the phage display method in which the heavy chain variable region and the light chain variable region that bind to the second target antigen are screened at once, a smaller number or type , The scFv that binds to the second target antigen can be screened.
  • the nucleic acid encoding the first BsAb means, for example, a nucleic acid (polynucleotide) encoding the amino acid sequence of the first BsAb, and the above description can be applied.
  • BsAb means, for example, an antibody or an antigen-binding fragment thereof in which two antigen-binding sites in an antibody molecule bind to different target antigens.
  • the different target antigens mean, for example, different epitopes and may be epitopes of different antigens or different epitopes of the same antigen.
  • the “BsAb” can adopt, for example, a structure of a known bispecific antibody, and specific examples thereof include a dual variable domain antibody (DVD-Ig (trademark)), a diabody, and a triabody.
  • DVD-Ig dual variable domain antibody
  • Tetrabody, tanda, flexibody which is a combination of scFv and diabody, tandem scFv (eg BiTE®, Micromet), DART® (MacroGenics), Fcab (trademark) or mAb 2 (trademark) (F-star), Fc engineering antibody (Xencor) or DuoBody (registered trademark) (Genmab), etc.
  • tandem scFv eg BiTE®, Micromet
  • DART® MicroGenics
  • Fcab trademark
  • mAb 2 trademark
  • Fc engineering antibody Xencor
  • DuoBody registered trademark
  • the tandem scFv is, for example, a protein in which two scFvs are linked by a linker peptide (inter-Fv linker peptide), and the two scFvs have a heavy chain variable region and a light chain variable region, respectively, as a linker peptide (Fv linker peptide). ) Are connected by.
  • the first target antigen is an immune cell activating receptor and a case where the second target antigen is an immune cell activating receptor will be described respectively.
  • the immune cell activating receptor is, for example, expressed in the immune cell, and binds with a ligand or crosslinks a plurality of immune cell activating receptors.
  • the immune cell activating receptor can be appropriately determined depending on, for example, the type of the immune cell.
  • the immune cell activating receptor includes CD3 and the like. Examples of the CD3 include CD3 ⁇ , CD3 ⁇ , CD3 ⁇ , CD3 ⁇ , CD3 ⁇ , CD3 ⁇ or a complex thereof.
  • the immune cell activating receptors include NK cell activating receptors.
  • NK cell activation receptor examples include CD94/NKG2C, CD94/NKG2E, NKG2D/NKG2D and the like.
  • examples of the immune cell activating receptor include CD3 and the NK cell activating receptor.
  • examples of the immune cell activating receptor include CD19, CD79 ⁇ , CD79 ⁇ and the like.
  • the second target antigen is not particularly limited, and for example, the description of the target antigen in the CAR library can be incorporated.
  • the first scFv contains, for example, a first heavy chain variable region and a first light chain variable region.
  • the first heavy chain variable region and the first light chain variable region have the same structure as the heavy chain variable region and the light chain variable region in the antibody molecule.
  • the heavy chain variable region and the light chain variable region of an antibody molecule each have three complementarity determining regions (CDRs).
  • CDR is also called a hypervariable domain. Even in the variable regions of the heavy chain and the light chain, CDR is a region in which the primary structure has a high variability, and the CDR is usually separated at three positions on the primary structure.
  • the three CDRs in the heavy chain variable region are determined from the amino terminal (N-terminal) side in the amino acid sequence of the heavy chain variable region, namely, heavy chain CDR1 (CDRH1), heavy chain CDR2 (CDRH2), and heavy chain CDR3.
  • the three CDRs in the light chain variable region are represented by (CDRH3), and the light chain CDR1 (CDRL1), the light chain CDR2 (CDRL2), and the light chain CDR3 (CDRL3 ). These sites are conformationally close to each other and determine their specificity for binding antigen.
  • the first heavy chain variable region has CDRH1, CDRH2, and CDRH3.
  • the first light chain variable region has CDRL1, CDRL2, and CDRL3.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region, and CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region are an antibody that binds to an immune cell activating receptor such as CD3 or the like.
  • An antigen-binding fragment is used. Specific examples of the antibody or the antigen-binding fragment thereof can be referred to, for example, the description of the antibody and the antigen-binding fragment in the antibody of the present invention described above.
  • the antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor for example, a known antibody or the like can be used depending on the type of the immune cell activating receptor.
  • examples of the antibody against CD3 ⁇ include OKT3 antibody, UCHT1 antibody, L2K antibody, HIT3a antibody, 28F11 antibody, and 27H5 antibody.
  • examples of the antibody against CD19 include FMC63 antibody and SJ25C1.
  • the antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor may be, for example, an antibody obtained by immunizing the immune cell activating receptor.
  • the antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor may be, for example, scFv obtained by the second screening method of the present invention described below.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region may each be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor.
  • a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor may be used.
  • a region other than CDRH1, CDRH2, and CDRH3, that is, the framework region (FR) is, for example, a heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor. It may include FR.
  • the FRs are usually separated in four places on the primary structure.
  • the four FRs in the heavy chain variable region are labeled from the N-terminal side in the amino acid sequence of the heavy chain variable region to heavy chain FR1 (FRH1), heavy chain FR2 (FRH2), heavy chain FR3 (FRH3). , And heavy chain FR4 (FRH4).
  • the CDRHs and the FRHs are arranged in the order of FRH1, CDRH1, FRH2, CDRH2, FRH3, CDRH3, and FRH4 from the N-terminal side in the amino acid sequence of the heavy chain variable region. .. FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the first heavy chain variable region are each composed of, for example, an amino acid sequence of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor.
  • It may be a peptide or a polypeptide containing the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4, such as an antibody that binds to a preimmune cell activating receptor.
  • the "antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor” in the description of each CDRH and the “antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor” in the description of each FRH may be the same antibody or the like. preferable.
  • the first heavy chain variable region may include, for example, a heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor.
  • the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor, or the immune cell activating receptor It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the heavy chain variable region of an antibody or the like that binds to.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region may each be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor.
  • a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor, may be used.
  • the FR may include, for example, the FR of the light chain variable region in the antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor.
  • the FRs are usually separated in four places on the primary structure.
  • four FRs in the light chain variable region are labeled from the N-terminal side in the amino acid sequence of the light chain variable region to a light chain FR1 (FRL1), a light chain FR2 (FRL2), a light chain FR3 (FRL3). , And light chain FR4 (FRL4).
  • the CDRLs and the FRLs are arranged, for example, in the order of FRL1, CDRL1, FRL2, CDRL2, FRL3, CDRL3, and FRL4 from the N-terminal side in the amino acid sequence of the light chain variable region.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the first light chain variable region are, for example, poly-amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor, respectively. It may be a peptide or a polypeptide containing the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3 and FRL4 such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor.
  • the “antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor” in the description of each CDRL and the “antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor” in the description of each FRL may be the same antibody or the like. preferable.
  • the first light chain variable region may include, for example, a light chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor.
  • the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor, or the immune cell activating receptor It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the light chain variable region of an antibody or the like that binds to.
  • first linker peptide In the first scFv, the first heavy chain variable region and the first light chain variable region are linked by, for example, a first linker peptide (first Fv linker peptide).
  • the first Fv linker peptide preferably does not, for example, inhibit the binding of the first scFv to the immune cell activating receptor.
  • the first Fv linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the first Fv linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and a specific example thereof is (GGGGS) n .
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • the amino acid sequence of the first Fv linker peptide includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or 2.
  • the second scFv contains a second heavy chain variable region and a second light chain variable region.
  • the second heavy chain variable region and the second light chain variable region have the same structure as the heavy chain variable region and the light chain variable region in the antibody molecule.
  • the first scFv The explanation of can be applied.
  • the second heavy chain variable region has CDRH1, CDRH2, and CDRH3.
  • the second light chain variable region has CDRL1, CDRL2, and CDRL3. Further, the second heavy chain variable region and the second light chain variable region satisfy the condition 1 or the condition 2.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region use an antibody or the like that binds to the second target antigen, and CDRL1, CDRL2 in the second light chain variable region, and CDRL3 is screened for binding to the second target antigen.
  • Specific examples of the antibody or the antigen-binding fragment thereof can be referred to, for example, the description of the antibody and the antigen-binding fragment in the antibody of the present invention described above.
  • the antibody or the like that binds to the second target antigen for example, a known antibody or the like can be used according to the second target antigen.
  • a known antibody or the like can be used according to the second target antigen.
  • 3M4E5 antibody can be used as an antibody against the complex of HLA-A*02:01 and NY-ESO-1 157-165 .
  • FMC63 antibody can be used as an antibody against human CD19.
  • the antibody or the like that binds to the second target antigen may be, for example, scFv obtained by the second screening method of the present invention described below, or may be obtained by immunizing with the second target antigen.
  • Antibody may be used.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region may each be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the second target antigen. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the second target antigen.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the second heavy chain variable region are, for example, polypeptides each comprising an amino acid sequence of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4, such as an antibody that binds to the second target antigen.
  • it may be a polypeptide containing the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4, such as an antibody that binds to the second target antigen.
  • the “antibody or the like that binds to the second target antigen” in the description of each CDRH and the “antibody or the like that binds to the second target antigen” in the description of each FRH are preferably the same antibody or the like.
  • the second heavy chain variable region may include, for example, a heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the second target antigen.
  • the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the second target antigen, or may bind to the second target antigen.
  • the antibody may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the heavy chain variable region.
  • the second light chain variable region is encoded by, for example, a VJ gene fragment formed by reconstructing a VJ gene and a V gene fragment. Therefore, the first B cell receptor is, for example, a B cell receptor containing a polypeptide encoded by an artificial VJ gene fragment designed by artificially combining a V gene fragment and a J gene fragment. Good. In vivo B cells, for example, express the light chain variable region after VJ gene reconstruction. Therefore, the first B cell receptor may be, for example, an isolated B cell-derived B cell receptor. In this case, the first B cell receptor may be, for example, a human-derived B cell B cell receptor, and preferably a human peripheral blood B cell-derived B cell receptor. In the BsAb library of the present invention, the first B cell receptor is preferably the light chain variable region of the isolated B cell-derived B cell receptor because the BsAb library can be prepared more easily.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the first B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRL2 and CDRL3 of the B cell receptor of.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the first B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the first B cell receptor.
  • the "first B cell receptor" in the description of each CDRL and the "first B cell receptor" in the description of each FRL are preferably the same B cell receptor.
  • the second light chain variable region may include, for example, the light chain variable region of the first B cell receptor.
  • the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in the first B cell receptor, or the light chain in the first B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • the second heavy chain variable region and the second light chain variable region are linked by, for example, a second linker peptide (second Fv linker peptide).
  • the second Fv linker peptide preferably does not, for example, inhibit the binding of the second scFv to the second target antigen.
  • the second Fv linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the second Fv linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and a specific example thereof is (GGGGS) n .
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • the amino acid sequence of the second Fv linker peptide includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or 2.
  • the second Fv linker peptide may be the same as or different from the first Fv linker peptide, for example.
  • the CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region are derived from an antibody or the like that binds to the second target antigen, and CDRH1 in the second heavy chain variable region is , CDRH2, and CDRH3 are screened for binding to the second target antigen.
  • the second heavy chain variable region is encoded by, for example, a VDJ gene fragment formed by reconstructing the VDJ gene fragment, V gene fragment, and J gene fragment. Therefore, the first B cell receptor is, for example, a B cell containing a polypeptide encoded by an artificial VDJ gene fragment designed by artificially combining a V gene fragment, a D gene fragment, and a J gene fragment. It may be a receptor. In vivo B cells, for example, express the heavy chain variable region after VDJ gene reconstruction. Therefore, the first B cell receptor may be, for example, an isolated B cell-derived B cell receptor.
  • the first B cell receptor may be, for example, a human-derived B cell B cell receptor, and preferably a human peripheral blood B cell-derived B cell receptor.
  • the first B cell receptor is a heavy chain variable region of an isolated B cell-derived B cell receptor because a BsAb library can be prepared more easily.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3 of the first B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2 and CDRH3 of the B cell receptor of.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of the first B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of the first B cell receptor.
  • the “first B cell receptor” in the description of each CDRH and the “first B cell receptor” in the description of each FRH are preferably the same B cell receptor.
  • the second heavy chain variable region may include, for example, the heavy chain variable region in the first B cell receptor.
  • the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the first B cell receptor, or the heavy chain in the first B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region may each be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3 such as an antibody that binds to the second target antigen, It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the second target antigen.
  • the FR may include, for example, the FR of the light chain variable region in the antibody or the like that binds to the second target antigen.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the second light chain variable region are, for example, polypeptides each comprising an amino acid sequence of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the second target antigen.
  • it may be a polypeptide containing the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the second target antigen.
  • the “antibody or the like that binds to the second target antigen” in the description of each CDRL and the “antibody or the like that binds to the second target antigen” in the description of each FRL are preferably the same antibody or the like.
  • the second light chain variable region may include, for example, a light chain variable region in an antibody or the like that binds to the second target antigen.
  • the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in an antibody or the like that binds to the second target antigen, or may bind to the second target antigen.
  • the antibody may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the light chain variable region.
  • the second heavy chain variable region and the second light chain variable region are linked by, for example, a second linker peptide (second Fv linker peptide).
  • the second Fv linker peptide preferably does not, for example, inhibit the binding of the second scFv to the second target antigen.
  • the description of the second Fv linker peptide can be referred to, for example, the description of the first Fv linker peptide.
  • the second Fv linker peptide may be the same as or different from the first Fv linker peptide, for example.
  • the first scFv and the second scFv are, for example, directly or indirectly linked.
  • the connection of the first scFv and the second scFv can be appropriately designed, for example, according to the type of the first BsAb.
  • the first BsAb is a tandem scFv
  • the first scFv and the second scFv are linked by a linker peptide (inter-Fv linker peptide).
  • the inter-Fv linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the inter-Fv linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and a specific example thereof is (GGGGS) n .
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • the amino acid sequence of the inter-Fv linker peptide includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or 2.
  • the first target antigen is not particularly limited, and for example, the description of the target antigen in the CAR library can be applied.
  • the explanation of the first target antigen in “(1) First target antigen: immune cell activating receptor” of the BsAb library of the present invention can be applied.
  • the first scFv contains, for example, a first heavy chain variable region and a first light chain variable region.
  • the first heavy chain variable region and the first light chain variable region have the same structures as the heavy chain variable region and the light chain variable region in the antibody molecule, and the “(1) of the BsAb library of the present invention is used.
  • the description of the first scFv in "First target antigen: immune cell activating receptor" can be incorporated.
  • the first heavy chain variable region has, for example, CDRH1, CDRH2, and CDRH3.
  • the first light chain variable region has, for example, CDRL1, CDRL2, and CDRL3.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region and CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region are an antibody or an antigen-binding fragment thereof that binds to the first target antigen.
  • Specific examples of the antibody or the antigen-binding fragment thereof can be referred to, for example, the description of the antibody and the antigen-binding fragment in the antibody of the present invention described above.
  • the antibody or the like that binds to the first target antigen for example, an antibody or the like that binds to a known first target antigen can be used depending on the type of the first target antigen. Further, the antibody or the like that binds to the first target antigen may be, for example, an antibody obtained by immunizing the first target antigen. The antibody or the like that binds to the first target antigen may be, for example, scFv obtained by the second screening method of the present invention described below.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the first heavy chain variable region may each be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the first target antigen. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the first target antigen.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the first heavy chain variable region are, for example, polypeptides each comprising an amino acid sequence of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4, such as an antibody that binds to the first target antigen.
  • it may be a polypeptide containing the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4, such as an antibody that binds to the first target antigen.
  • the “antibody or the like that binds to the first target antigen” in the description of each CDRH and the “antibody or the like that binds to the first target antigen” in the description of each FRH are preferably the same antibody or the like.
  • the first heavy chain variable region may include, for example, a heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the first target antigen.
  • the first heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the antibody or the like that binds to the first target antigen, or may bind to the first target antigen.
  • the antibody may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the heavy chain variable region.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the first light chain variable region may each be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the first target antigen. It may be a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the first target antigen.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the first light chain variable region are, for example, polypeptides comprising amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the first target antigen, respectively.
  • it may be a polypeptide containing the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the first target antigen.
  • the “antibody or the like that binds to the first target antigen” in the description of each CDRL and the “antibody or the like that binds to the first target antigen” in the description of each FRL are preferably the same antibody or the like.
  • the first light chain variable region may include, for example, the light chain variable region in an antibody or the like that binds to the first target antigen.
  • the first light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in an antibody or the like that binds to the first target antigen, or may bind to the first target antigen.
  • the antibody may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the light chain variable region.
  • first linker peptide In the first scFv, the first heavy chain variable region and the first light chain variable region are linked by, for example, a first linker peptide (first Fv linker peptide).
  • the first Fv linker peptide preferably does not, for example, inhibit the binding of the first scFv to the first target antigen.
  • the first Fv linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the first Fv linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and a specific example thereof is (GGGGS) n .
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • the amino acid sequence of the first Fv linker peptide includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or 2.
  • the second scFv contains a second heavy chain variable region and a second light chain variable region.
  • the second heavy chain variable region and the second light chain variable region have the same structure as the heavy chain variable region and the light chain variable region in the antibody molecule, and the structure thereof is, for example, in (1) above.
  • the description of the first scFv can be incorporated.
  • the second heavy chain variable region has CDRH1, CDRH2, and CDRH3.
  • the second light chain variable region has CDRL1, CDRL2, and CDRL3. Further, the second heavy chain variable region and the second light chain variable region satisfy the condition 1 or the condition 2.
  • the condition 1 is that CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region use an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor, and CDRL1, CDRL2 in the second light chain variable region, And CDRL3 are screened for binding to the immune cell activating receptor.
  • Specific examples of the antibody or the antigen-binding fragment thereof can be referred to, for example, the description of the antibody and the antigen-binding fragment in the antibody of the present invention described above.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region may each be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor.
  • a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor, may be used.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the second heavy chain variable region are each composed of, for example, an amino acid sequence of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor. It may be a peptide or a polypeptide containing the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor.
  • the "antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor" in the description of each CDRH and the "antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor" in the description of each FRH may be the same antibody or the like. preferable.
  • the second heavy chain variable region may include, for example, a heavy chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor.
  • the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor, or the immune cell activating receptor It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the heavy chain variable region of an antibody or the like that binds to.
  • the second light chain variable region is encoded by, for example, a VJ gene fragment formed by reconstructing a VJ gene and a V gene fragment. Therefore, the first B cell receptor is, for example, a B cell receptor containing a polypeptide encoded by an artificial VJ gene fragment designed by artificially combining a V gene fragment and a J gene fragment. Good. In vivo B cells, for example, express the light chain variable region after VJ gene reconstruction. Therefore, the first B cell receptor may be, for example, an isolated B cell-derived B cell receptor. In this case, the first B cell receptor may be, for example, a human-derived B cell B cell receptor, and preferably a human peripheral blood B cell-derived B cell receptor. In the BsAb library of the present invention, the first B cell receptor is preferably the light chain variable region of the isolated B cell-derived B cell receptor because the BsAb library can be prepared more easily.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3 of the first B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRL2 and CDRL3 of the B cell receptor of.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the first B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 of the first B cell receptor.
  • the "first B cell receptor" in the description of each CDRL and the "first B cell receptor" in the description of each FRL are preferably the same B cell receptor.
  • the second light chain variable region may include, for example, the light chain variable region of the first B cell receptor.
  • the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region in the first B cell receptor, or the light chain in the first B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • first linker peptide In the first scFv, the first heavy chain variable region and the first light chain variable region are linked by, for example, a first linker peptide (first Fv linker peptide).
  • the first Fv linker peptide preferably does not, for example, inhibit the binding of the first scFv to the first target antigen.
  • the first Fv linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the first Fv linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and a specific example thereof is (GGGGS) n .
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • the amino acid sequence of the first Fv linker peptide includes, for example, a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or 2.
  • the CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region are derived from an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor, and thus in the second heavy chain variable region.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 are screened for binding to the immune cell activating receptor.
  • the second heavy chain variable region is encoded by, for example, a VDJ gene fragment formed by reconstructing the VDJ gene fragment, V gene fragment, and J gene fragment. Therefore, the first B cell receptor is, for example, a B cell containing a polypeptide encoded by an artificial VDJ gene fragment designed by artificially combining a V gene fragment, a D gene fragment, and a J gene fragment. It may be a receptor. In vivo B cells, for example, express the heavy chain variable region after VDJ gene reconstruction. Therefore, the first B cell receptor may be, for example, an isolated B cell-derived B cell receptor.
  • the first B cell receptor may be, for example, a human-derived B cell B cell receptor, and preferably a human peripheral blood B cell-derived B cell receptor.
  • the first B cell receptor is a heavy chain variable region of an isolated B cell-derived B cell receptor because a BsAb library can be prepared more easily.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2, and CDRH3 of the first B cell receptor, respectively. It may be a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRH1, CDRH2 and CDRH3 of the B cell receptor of.
  • FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 in the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of the first B cell receptor, respectively.
  • the polypeptide may include the amino acid sequences of FRH1, FRH2, FRH3, and FRH4 of the first B cell receptor.
  • the “first B cell receptor” in the description of each CDRH and the “first B cell receptor” in the description of each FRH are preferably the same B cell receptor.
  • the second heavy chain variable region may include, for example, the heavy chain variable region in the first B cell receptor.
  • the second heavy chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence of the heavy chain variable region in the first B cell receptor, or the heavy chain in the first B cell receptor. It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the variable region.
  • the antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor in the second light chain variable region is, for example, “(1) first target antigen: immune cell activating receptor” of the BsAb library of the present invention.
  • the description of the antibody and the like which bind to the immune cell activating receptor can be incorporated by reference.
  • CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor, respectively.
  • a polypeptide containing the amino acid sequences of CDRL1, CDRL2, and CDRL3, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor, may be used.
  • the FR may include, for example, the FR of the light chain variable region in the antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor.
  • FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4 in the second light chain variable region are, for example, poly-amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3, and FRL4, such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor, respectively. It may be a peptide or a polypeptide containing the amino acid sequences of FRL1, FRL2, FRL3 and FRL4 such as an antibody that binds to the immune cell activating receptor.
  • the “antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor” in the description of each CDRL and the “antibody or the like that binds to an immune cell activating receptor” in the description of each FRL may be the same antibody or the like. preferable.
  • the second light chain variable region may include, for example, a light chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor.
  • the second light chain variable region may be, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence of the light chain variable region in an antibody or the like that binds to the immune cell activating receptor, or the immune cell activating receptor It may be a polypeptide containing the amino acid sequence of the light chain variable region of an antibody or the like that binds to.
  • the second heavy chain variable region and the second light chain variable region are linked by, for example, a second linker peptide (second Fv linker peptide).
  • the second Fv linker peptide preferably does not, for example, inhibit the binding of the second scFv to the immune cell activating receptor.
  • the description of the second Fv linker peptide can be referred to, for example, the description of the first Fv linker peptide.
  • the second Fv linker peptide may be the same as or different from the first Fv linker peptide, for example.
  • the first scFv and the second scFv may be linked, for example, directly or indirectly, and when the third scFv and the fourth scFv coexist, they are associated (bound). You may form so that it may be formed.
  • the connection of the first scFv and the second scFv can be appropriately designed, for example, according to the type of the first BsAb. As a specific example, when the first BsAb is a tandem scFv, the first scFv and the second scFv are linked by a linker peptide (inter-Fv linker peptide).
  • the inter-Fv linker peptide is composed of, for example, 1 to 40, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 7, 1 to 3, 1 or 2 amino acids.
  • the inter-Fv linker peptide is composed of amino acids such as glycine and serine, and a specific example thereof is (GGGGS) n .
  • the n is, for example, an integer of 1 to 6.
  • the amino acid sequence of the inter-Fv linker peptide is, for example, a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or 2.
  • charges of amino acid side chains can be used.
  • the association can be induced, for example, by adding a domain of an amino acid having a positive charge to one binding domain and adding a domain of an amino acid having a negative charge to the other binding domain.
  • a combination of a tag sequence and a polypeptide that recognizes the tag sequence can be used.
  • the arrangement order of the first scFv and the second scFv in the first BsAb is, for example, from the N-terminal side, the first scFv and the second scFv are arranged in this order.
  • the second scFv and the first scFv may be arranged in this order from the N-terminal side.
  • the latter can be more easily prepared, so that the latter is preferable.
  • Examples of the first BsAb include a polypeptide having an amino acid sequence represented by the following formula (3) (SEQ ID NO: 158).
  • examples of V 1 , V 2 , V 3 and V 4 include the following combinations (V1) to (V8).
  • V 1 , V 2 , V 3 , and V 4 are preferably (V7) or (V8) below.
  • V 1 , V 2 , V 3 , and V 4 are preferably the following (V5) or (V6).
  • the amino acid sequence between V 1 and V 2 is the amino acid sequence of the first Fv linker peptide
  • the amino acid sequence between V 2 and V 3 is the amino acid sequence of the Fv linker peptide
  • V 3 and V 4 is the amino acid sequence of the second Fv linker peptide.
  • the first Fv linker peptide and the second Fv linker peptide are Fv linker peptide 1, but may be each independently Fv linker peptide 2.

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Abstract

ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能しうるｓｃＦｖのスクリーニングに用いるＣＡＲライブラリ、およびそれを用いたｓｃＦｖの製造方法を提供する。　本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ライブラリは、第１のＣＡＲをコードする核酸を含み、 前記第１のＣＡＲは、第１の抗原結合ドメインと、第１の膜貫通ドメインと、第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、 前記第１の抗原結合ドメインは、標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、 前記第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含み、 前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、所定の条件を満たす。

Description

ＣＡＲライブラリおよびｓｃＦｖの製造方法
　本発明は、ＣＡＲライブラリおよびｓｃＦｖの製造方法に関する。
　がん特異的抗原または標的抗原に結合する一本鎖抗体（ｓｃＦｖ：single chain Fv）を発現するＴ細胞（キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞）を用いた、がんの治療が試みられている。
　ｓｃＦｖのスクリーニングは、生体から単離されたＢ細胞を用いたハイブリドーマを用いた方法、またはファージディスプレイ法により実施される。具体的に、前者は、抗原免疫後に、生体から単離したＢ細胞を用いてハイブリドーマのライブラリを作成する。そして、標的抗原に結合する抗体を産生するハイブリドーマを選抜し、前記ハイブリドーマが産生する抗体の抗原認識部位の配列を決定することにより実施される。
　また、後者は、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含むｓｃＦｖのライブラリを作成後、各ｓｃＦｖをファージに発現させる。そして、標的抗原に結合するファージを選抜し、前記ファージにおけるポリヌクレオチドを同定することにより実施される。
　しかしながら、いずれの方法も標的抗原に結合するｓｃＦｖを選抜できるが、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能するｓｃＦｖかは不明である。このため、前記選抜後、標的抗原結合性のｓｃＦｖをそれぞれＴ細胞に発現させ、機能するかを検討する必要がある。
　そこで、本発明は、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能しうるｓｃＦｖのスクリーニングに用いるＣＡＲライブラリ、およびそれを用いたｓｃＦｖの製造方法を提供する。
　前記目的を達成するため、本発明のキメラ抗原受容体(ＣＡＲ)ライブラリは、第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含み、
前記第１のＣＡＲは、第１の抗原結合ドメインと、第１の膜貫通ドメインと、第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記第１の抗原結合ドメインは、標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、
前記第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含み、
前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たす；
条件１：
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件２：
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
　本発明のｓｃＦｖの製造方法（以下、「第１のスクリーニング方法」ともいう）は、前記本発明のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させる第１の発現工程と、
前記第１の発現工程で得られた免疫細胞と、前記標的抗原とを接触させる第１の接触工程と、
前記第１の接触工程において前記標的抗原と結合した免疫細胞に発現するＣＡＲの第１のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する第１の選抜工程とを含む。
　本発明によれば、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能しうるｓｃＦｖのスクリーニングに用いるＣＡＲライブラリ、およびそれを用いたｓｃＦｖの製造方法を提供できる。
図１は、実施例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図２は、実施例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図３は、実施例１におけるA2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を示すグラフである。 図４は、実施例１におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。 図５は、実施例１におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。 図６は、実施例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図７Ａは、実施例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図７Ｂは、実施例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図８は、実施例２におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図９は、実施例２におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図１０は、実施例２におけるA2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を示すグラフである。 図１１は、実施例２におけるペプチド濃度が１０μｇ／ｍＬの場合におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。 図１２は、実施例２におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。 図１３は、実施例３におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図１４は、実施例４におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図１５は、実施例４におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。 図１６は、実施例５におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、3M4E5LH CARを発現するＴ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、L1-3M4E5H CARを発現するＴ細胞の結果を示す。 図１７は、実施例６におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図１８は、実施例６におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。 図１９は、実施例６におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。 図２０は、実施例７におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、3M4E5LH CARを発現するＴ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、3M4E5H-L1 CARを発現するＴ細胞の結果を示す。 図２１は、実施例７におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果Cを示す。 図２２は、実施例８におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図２３は、実施例８におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。 図２４は、実施例８におけるサイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。 図２５は、実施例９におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図２６は、実施例９におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。 図２７は、実施例１０におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図２８は、実施例１０におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図２９は、実施例１０におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図３０は、実施例１０におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。 図３１は、実施例１０におけるＣＤ１９ダイマー陽性細胞の相対割合を示すグラフである。 図３２は、実施例１０における標的細胞量を変化させた際のＣＤ６９発現量の相対値を示すグラフである。 図３３は、実施例１０におけるサイトカイン産生細胞の割合を示すグラフである。 図３４は、実施例１１における生体における抗腫瘍活性に関する図である。 図３５は、実施例１２における構造的親和性の指標値と、機能的親和性の指標値との関係性を示すグラフである。 図３６は、実施例１３における細胞傷害性を示すグラフであるである。 図３７は、実施例１４における生体における全生存率に関する図である。 図３８は、実施例１４における生体における全生存率に関する図である。 図３９は、実施例１５における細胞の増殖比を示すグラフである。 図４０は、実施例１５におけるサイトカイン産生細胞の割合を示すグラフである。 図４１は、実施例１５における細胞傷害活性を示すグラフである。 図４２は、実施例１５における共培養前後のＣＤ８陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞およびＣＤ４陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ／ＣＤ６２Ｌ陽性細胞の分布を示すドットプロットである。 図４３は、実施例１５における各ＣＡＲ－Ｔ細胞の分裂割合と、共培養前後のＣＤ４５ＲＡ陽性ＣＤ６２Ｌ陽性ＣＣＲ７陽性細胞の割合と、ＣＤ４５ＲＡ陰性ＣＤ６２Ｌ陽性ＣＣＲ７陽性と、ＣＤ４５ＲＡ陽性ＣＤ６２Ｌ陰性ＰＤ１陽性細胞の割合とを示すグラフである。 図４４は、実施例１５における本発明のスクリーニング方法により、ｉｎ　ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果に優れるｓｃＦｖを取得できるメカニズムを説明する図である。
＜ＣＡＲライブラリ＞
　本発明のＣＡＲライブラリは、前述のように、第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含み、前記第１のＣＡＲは、第１の抗原結合ドメインと、第１の膜貫通ドメインと、第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記第１の抗原結合ドメインは、標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、前記第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含み、前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たす。本発明のＣＡＲライブラリは、下記条件１または条件２を満たすことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。
条件１：
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片（以下、「抗体等」ともいう）における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件２：
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
　本発明のＣＡＲライブラリにおいて、前記第１のＣＡＲが、前記第１の抗原結合ドメインと、前記第１の膜貫通ドメインと、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域が、前記条件１または条件２を満たすことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。
　本発明のＣＡＲライブラリにおいて、前記第１のＣＡＲは、前記第１の抗原結合ドメインと、前記第１の膜貫通ドメインと、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含むタンパク質である。前記第１のＣＡＲは、例えば、抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲに類似した構造を有し、前記抗原に結合する細胞外ドメインが、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第１の抗原結合ドメインに変更されている。本発明のＣＡＲライブラリにおいて、前記第１のＣＡＲは、このように前記ＣＡＲと類似する構造を有する。このため、前記標的抗原と結合する第１のＣＡＲは、例えば、前記発現細胞において、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインを介してシグナルを誘導できる。そして、前記標的抗原と結合する第１のＣＡＲは、例えば、その発現細胞を活性化（例えば、増殖、活性化マーカーの発現等）することができる。すなわち、本発明のＣＡＲライブラリによれば、例えば、後述の第１のスクリーニング方法を用いて、前記ＣＡＲライブラリ発現細胞群における前記標的抗原と結合する第１のＣＡＲを発現する細胞の割合を上昇させることができる。したがって、本発明のＣＡＲライブラリによれば、例えば、ファージディスプレイ法と比較して、より少ない数または種類の核酸で、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、前記標的抗原と結合する第１のＣＡＲは、例えば、後述の第１のスクリーニング方法において、その発現細胞を活性化することができるため、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能するｓｃＦｖを含んでいるといえる。したがって、本発明のＣＡＲライブラリによれば、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能しうるｓｃＦｖをスクリーニングできる。
　また、本発明のＣＡＲライブラリにおいて、前記第１の抗原結合ドメインは、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含む。前記第１のｓｃＦｖは、例えば、抗原に結合する抗体由来の一本鎖のポリペプチドであり、かつ前記抗原との結合能を保持するｓｃＦｖと類似する構造を有する。前記ｓｃＦｖは、前記抗原に結合する抗体の重鎖（Ｈ鎖）および軽鎖（Ｌ鎖）の可変領域の断片（Ｆｖ）を連結したポリペプチドである。他方、前記第１のｓｃＦｖは、例えば、後述のように、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のうち一方が、前記標的抗原に結合する抗体等の可変領域であり、他方が、Ｂ細胞受容体に由来する可変領域、すなわち、前記標的抗原に結合するかが不明の可変領域である。本発明のＣＡＲライブラリは、前記第１のｓｃＦｖをこのような構成とすることにより、例えば、前記標的抗原に結合する重鎖可変領域または軽鎖可変領域のスクリーニングを実施することができる。このため、本発明のＣＡＲライブラリによれば、例えば、前記標的抗原に結合する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を一度にスクリーニングするファージディスプレイ法と比較して、より少ない数または種類の核酸で、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。
　本発明のＣＡＲライブラリにおいて、第１のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、第１のＣＡＲのアミノ酸配列をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を意味する。前記核酸は、ＤＮＡから構成されてもよいし、ＲＮＡから構成されてもよいし、両者から構成されてもよい。前記核酸は、天然の核酸から構成されてもよいし、天然の核酸が修飾された修飾核酸から構成されてもよいし、ＥＮＡ（2'-O,4'-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids）、ＬＮＡ（Locked nucleic acid）、ＰＮＡ（Peptide Nucleic Acid）、モルフォリノ等の人工核酸から構成されてもよいし、これらのうち２種類以上から構成されてもよい。
　本発明において「ドメイン」は、例えば、ポリペプチドにおいて、立体構造または機能的にまとまった領域を意味する。前記ポリペプチドは、例えば、１０アミノ酸以上の長さを有するペプチドがあげられる。
前記第１のｓｃＦｖにおいて、前記標的抗原は、特に制限されず、任意の抗原とできる。前記標的抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生虫抗原、自己免疫疾患に関連する抗原、糖鎖抗原等があげられる。前記腫瘍抗原は、例えば、細胞のがん化により、新たに発現する抗原、発現量が増加する抗原等の抗原性を有する生体分子を意味する。前記腫瘍抗原は、例えば、腫瘍特異的抗原でもよいし、腫瘍関連抗原でもよい。
　前記腫瘍抗原は、例えば、５Ｔ４、α５β１－インテグリン、活性化型インテグリンβ７、７０７－ＡＰ、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、ＡＲＴ－４、ＡＵＲＫＡ（AURORA A）、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ、β－カテニン、ＢＣＭＡ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＢＴＡＡ、ＭＮ／ＣＡ　ＩＸ抗原、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－１、ＣＡＳＰ－８、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤ９６、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＬＬ１、ＣＴ、Cyclin A1、Ｃｙｐ－Ｂ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ（ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２等）、ＧＤ２（Ganglioside G2）、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇｐ１００、ＨＡＧＥ、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＰＶ－Ｅ７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｉＣＥ、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－１、ＩＧＦ－２、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ－Ｒａｓ、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、ＭＡＧＥ（ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６等）、ＭＡＲＴ－１／ｍｅｌａｎ－Ａ、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ、mesothelin（ＭＳＬＮ）、ミオシン、ＭＵＣ１、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ＮＡ８８－Ａ、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、プロテイナーゼ－３、ＰＲＡＭＥ（Melanoma antigen preferentially expressed in tumors）、ｐ５３、ｐ１９０マイナーｂｃｒ－ａｂｌ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、前立腺腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＰＲＡＭＥ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ、ＲＡＳ、ＲＨＡＭＭ（ＣＤ１６８）、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、サイログロブリン、サバイビン、テロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴまたはＴＲＴ）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦβ、ＴＩＭ３、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、ＶＥＧＦ、ＷＴ１、ＮＹ－Ｅｓｏ－１、ＮＹ－Ｅｓｏ－Ｂ等があげられる。
　前記ウイルス抗原は、例えば、アデノウイルス（adenovirus）等のアデノウイルス科（Adenoviridae）；コロナウイルス（coronavirus）等のコロナウイルス科（Coronaviridae）；エボラウイルス属（Ebolavirus）等のフィロウイルス科（Filoviridae）；Ｃ型肝炎ウイルス（HCV：hepatitis C virus）、デングウイルス(Dengue virus)、日本脳炎ウイルス（Japanese encephalitis virus）、西ナイルウイルス（west Nile virus）、黄熱ウイルス（yellow fever virus）等のフラビウイルス科（Flaviviridae）；Ｂ型肝炎ウイルス（HVB：Hepatitis B Virus）等のヘパドナウイルス科（Hepadnaviridae）；単純ヘルペスウイルス１型（HSV-1：herpes simplex virus-1）、単純ヘルペスウイルス２型（HSV-2：herpes simplex virus-2）、水痘・帯状疱疹ウイルス（VZV：varicella zoster virus）、ヒトサイトメガロウイルス（HCMV：human cytomegalovirus）、ＥＢウイルス（EBV：Epstein-Barr virus）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV：Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus）等のヘルペスウイルス科（Herpesviridae）；Ａ型インフルエンザウイルス属（Influenzavirus A）、Ｂ型インフルエンザウイルス属（Influenzavirus B）、Ｃ型インフルエンザウイルス属（Influenzavirus C）等のオルソミクソウイルス科（Orthomyxoviridae）；麻疹ウイルス（measles virus）、ヒトパラインフルエンザウイルス１～４型（Human parainfluenza virus 1～4）、ムンプスウイルス（Mumps virus）、RSウイルス（Respiratory syncytial virus）等のパラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）；パルボウイルスＢ１９（Parvovirus B19）等のパルボウイルス科（Parvoviridae）；エンテロウイルス（enterovirus）、ポリオウイルス（poliovirus）、ヒトライノウイルスＡ～Ｂ（human rhinovirus Ａ～Ｂ）、Ａ型肝炎ウイルス（hepatitis A virus）、コクサッキーウイルス（coxsackievirus）、エコーウイルス（echo virus）等のピコルナウイルス科（Picornaviridae）；天然痘ウイルス（variola virus）、ワクチニアウイルス（Vaccinia virus）等のポックスウイルス科（Poxviridae）；ヒト免疫不全ウイルス（HIV：human immunodeficiency virus）-1, 2、ヒトＴリンパ好性ウイルス（HTLV：human T-lymphocytropic virus）-I,II等のレトロウイルス科（Retroviridae）；狂犬病ウイルス（Rabies virus）、水疱性口内炎ウイルス（Vesicular stomatitis virus）等のラブドウイルス科（Rhabdoviridae）；風疹ウイルス（Rubella virus）、チクングニアウイルス（Chikungunya virus）等のトガウイルス科（Togaviridae）；等のウイルス由来の抗原があげられる。
　前記細菌抗原は、例えば、破傷風菌（Clostridium tetani）等のクロストリジウム属（Clostridium）；大腸菌（Escherichia coli）等のエスケリキア属（Escherichia）；ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pyloris）等のヘリコバクター属（Helicobacter）；レジオネラ・ニューモフィリア（Legionella pneumophila）等のレジオネラ属（Legionella）；リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）等のリステリア属（Listeria）；結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、ライ菌（Mycobacterium leprae）、マイコバクテリウム・アビウム（Mycobacterium avium）、マイコバクテリウム・イントラセルラーエ（Mycobacterium intracellulare）、マイコバクテリウム・カンサシ（Mycobacterium kansasii）、マイコバクテリウム・ゴルドネ（Mycobacterium gordonae）等のマイコバクテリウム属（Mycobacterium）；淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）等のナイセリア属（Neisseria）；緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）等のシュードモナス属（Pseudomonas）；チフス菌（Salmonella enterica serovar Typhi）、パラチフス菌（Salmonella enterica serovar Paratyphi A）等のサルモネラ属（Salmonella）；黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）等のブドウ球菌属（Staphylococcus）；肺炎レンサ球菌（Streptococcus pneumoniae）、化膿レンサ球菌（Streptococcus pyogenes）等のレンサ球菌属（Streptococcus）；等の細菌由来の抗原があげられる。
　前記寄生虫抗原は、例えば、肝吸虫（Clonorchis sinensis）、日本住血吸虫（Schistosoma japonicum）、ヒトカイチュウ（Ascaris lumbricoides）、ヒト蟯虫（Enterobius vermicularis）、有鉤嚢虫（Cysticercus cellulosae）、広節裂頭条虫（Diphyllobothrium latum）、エキノコックス（Echinococcus）、赤痢アメーバ（Entamoeba histolytica）、マラリア原虫（Plasmodium）等の寄生虫由来の抗原があげられる。
　本発明のＣＡＲライブラリにおいて、第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含む。前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、抗体分子における重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同様の構造を有する。一般に、抗体分子の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、それぞれ、３ヶ所の相補性決定領域（ＣＤＲ：Complemetarity determining region）を有している。ＣＤＲは、超可変領域（hypervariable domain）ともいう。ＣＤＲは、前記重鎖および軽鎖の可変領域でも、特に一次構造の変異性が高い領域であり、一次構造上において、通常、３ヶ所に分離している。本発明において、重鎖可変領域における３ヶ所のＣＤＲを、重鎖可変領域のアミノ酸配列におけるアミノ末端（Ｎ末端）側から、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＨ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＨ２）、および重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＨ３）と表し、軽鎖可変領域における３ヶ所のＣＤＲを、軽鎖可変領域のアミノ酸配列におけるアミノ末端側から、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＬ２）、および軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＬ３）と表す。これらの部位は、立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。
　前記第１の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第１の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。また、前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、前記条件１または条件２を満たす。
　前記条件１では、前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、前記標的抗原に結合する抗体等を用い、前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３について、前記標的抗原への結合をスクリーニングする。前記抗体またはその抗原結合断片の具体例は、例えば、後述の本発明の抗体等における抗体および抗原結合断片の説明を援用できる。
　前記標的抗原に結合する抗体等は、例えば、前記標的抗原に応じて公知の抗体等を使用できる。具体例として、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１およびＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５の複合体に対する抗体としては、例えば、３Ｍ４Ｅ５抗体が使用できる。また、ヒトＣＤ１９に対する抗体としては、例えば、ＦＭＣ６３抗体が使用できる。前記標的抗原に結合する抗体等は、例えば、後述の本発明の第１のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖであってもよいし、前記標的抗原を免疫することで得られた抗体でもよい。前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の重鎖可変領域において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３以外の領域、すなわち、フレームワーク領域（ＦＲ）は、例えば、前記標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記ＦＲは、一次構造上において、通常、４ヶ所に分離している。本発明において、前記重鎖可変領域における４ヶ所のＦＲを、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、重鎖ＦＲ１（ＦＲＨ１）、重鎖ＦＲ２（ＦＲＨ２）、重鎖ＦＲ３（ＦＲＨ３）、および重鎖ＦＲ４（ＦＲＨ４）と表す。なお、前記各ＣＤＲＨと、前記各ＦＲＨとは、例えば、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、ＦＲＨ１、ＣＤＲＨ１、ＦＲＨ２、ＣＤＲＨ２、ＦＲＨ３、ＣＤＲＨ３、およびＦＲＨ４の順序で配置されている。前記第１の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記標的抗原に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「標的抗原に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＨの説明における「標的抗原に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、Ｖ遺伝子断片およびＪ遺伝子断片がＶＪ遺伝子再構築することで形成されたＶＪ遺伝子断片によりコードされる。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、Ｖ遺伝子断片と、Ｊ遺伝子断片とを人工的に組合せて設計した人工ＶＪ遺伝子断片がコードするポリペプチドを含むＢ細胞受容体であってもよい。また、生体内のＢ細胞は、例えば、ＶＪ遺伝子再構築後の軽鎖可変領域を発現している。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体であってもよい。この場合、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体があげられ、好ましくは、ヒト末梢血Ｂ細胞由来のＢ細胞受容体である。本発明のＣＡＲライブラリにおいて、前記第１のＢ細胞受容体は、ＣＡＲライブラリをより容易に調製できることから、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域であることが好ましい。
　前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域において、ＦＲは、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記ＦＲは、一次構造上において、通常、４ヶ所に分離している。本発明において、前記軽鎖可変領域における４ヶ所のＦＲを、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、軽鎖ＦＲ１（ＦＲＬ１）、軽鎖ＦＲ２（ＦＲＬ２）、軽鎖ＦＲ３（ＦＲＬ３）、および軽鎖ＦＲ４（ＦＲＬ４）と表す。なお、前記各ＣＤＲＬと、前記各ＦＲＬとは、例えば、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、ＦＲＬ１、ＣＤＲＬ１、ＦＲＬ２、ＣＤＲＬ２、ＦＲＬ３、ＣＤＲＬ３、およびＦＲＬ４の順序で配置されている。前記第１の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第１のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＬの説明における「第１のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　つぎに、前記条件２では、前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記標的抗原に結合する抗体等に由来し、前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３について、前記標的抗原への結合をスクリーニングする。
　前記第１の重鎖可変領域は、例えば、Ｖ遺伝子断片、Ｄ遺伝子断片およびＪ遺伝子断片がＶＤＪ遺伝子再構築することで形成されたＶＤＪ遺伝子断片によりコードされる。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、Ｖ遺伝子断片と、Ｄ遺伝子断片と、Ｊ遺伝子断片とを人工的に組合せて設計した人工ＶＤＪ遺伝子断片がコードするポリペプチドを含むＢ細胞受容体であってもよい。また、生体内のＢ細胞は、例えば、ＶＤＪ遺伝子再構築後の重鎖可変領域を発現している。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体であってもよい。この場合、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体があげられ、好ましくは、ヒト末梢血Ｂ細胞由来のＢ細胞受容体である。本発明のＣＡＲライブラリにおいて、前記第１のＢ細胞受容体は、ＣＡＲライブラリをより容易に調製できることから、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体の重鎖可変領域であることが好ましい。
　前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第１のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＨの説明における「第１のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域において、前記標的抗原に結合する抗体等は、例えば、前記条件１における標的抗原に結合する抗体等の説明を援用できる。前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域において、ＦＲは、例えば、前記標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記第１の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記標的抗原に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「標的抗原に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＬの説明における「標的抗原に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１のｓｃＦｖにおいて、前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、リンカーペプチド（Ｆｖリンカーペプチド）により連結されている。前記Ｆｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のｓｃＦｖの前記標的抗原への結合を阻害しないことが好ましい。前記Ｆｖリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記Ｆｖリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記Ｆｖリンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、下記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。
Ｆｖリンカーペプチド１（配列番号１）
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
Ｆｖリンカーペプチド２（配列番号２）
GGGGSGGGGSGGGGS
Ｆｖリンカーペプチド１をコードする塩基配列（配列番号３）
5'-GGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGC-3'
Ｆｖリンカーペプチド２をコードする塩基配列（配列番号４）
5'-GGTGGAGGAGGCTCAGGAGGAGGTGGCTCTGGTGGTGGAGGCTCG-3'
　前記第１の抗原結合ドメインは、第１のｓｃＦｖを含むが、前記第１の結合ドメインは、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域を含む、ｓｃＦｖ以外の構造を有してもよい。具体例として、前記第１の結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、可変領域断片（Ｆｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ等としてもよい。
　前記第１の膜貫通ドメインは、例えば、前記第１のＣＡＲが細胞に発現された場合、細胞膜を貫通する領域を占めるドメインである。前記第１の膜貫通ドメインは、例えば、膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインでもよいし、人工的に設計した人工膜貫通ドメインでもよい。前者の場合、前記膜貫通タンパク質は、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β鎖、ＣＤ３ζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（ＣＤ８αまたはＣＤ８β）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ等、またはこれらと同等の機能を有する変異体があげられる。前記同等の機能を有する変異体は、例えば、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、膜貫通ドメインとして機能するポリペプチドである。前記「１個または数個」は、例えば、１～１５個、１～１０個、１～５個、１または２個である。後者の場合、前記人工膜貫通ドメインは、例えば、ロイシン、イソロイシン、バリン等の疎水性のアミノ酸から主に構成されるポリペプチドである。また、前記人工膜貫通ドメインは、例えば、各両端にフェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンのトリペプチドを有してもよい。前記第１の膜貫通ドメインが前記膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインである場合、前記第１の膜貫通ドメインは、例えば、前記膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインと連続するＮ末端側またはＣ末端側の１個または数個のアミノ酸を含んでもよい。前記「１個または数個」は、例えば、前述の例示を援用できる。
　前記第１の膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ２８の膜貫通ドメインあげられる。ＣＤ２８の膜貫通ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_006130で登録されているアミノ酸配列において、１５３番目から１７９番目の下記のアミノ酸配列（配列番号５）があげられる。なお、前記ＮＣＢＩアクセッション番号は、タンパク質の前駆体の全長アミノ酸配列に付与された番号である（以下、同様）。前記ＣＤ２８の膜貫通ドメインとしては、例えば、前記ＣＤ２８の膜貫通ドメインに加えて、そのＮ末端側の細胞外領域およびそのＣ末端側の細胞内領域を含む膜貫通ユニットを用いてもよい。
ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（配列番号５）
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
ＣＤ２８の膜貫通ドメインをコードする塩基配列（配列番号６）
5'-TTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTG-3'
ＣＤ２８の膜貫通ユニット（配列番号７）
IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
ＣＤ２８の膜貫通ユニットをコードする塩基配列（配列番号８）
5'-ATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCT-3’
　前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、同一タンパク質内の第１の抗原結合ドメインが前記標的抗原と結合した際に、細胞内にシグナルを伝達可能なドメインである。前記第１のシグナル伝達ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体および共刺激分子の細胞質のアミノ酸配列、ならびにこれらのアミノ酸配列と同等の機能を有する変異体があげられる。前記同等の機能を有する変異体は、例えば、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、細胞内シグナル伝達ドメインとして機能するポリペプチドである。前記「1個または数個」は、例えば、前述の説明を援用できる。
　Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲ複合体を介する細胞内シグナル等の抗原依存的な細胞質シグナルにより活性化される（一次活性化）。そして、この活性化は、例えば、共刺激分子を介する細胞内シグナル等の抗原非特異的な細胞質シグナルにより増強される（二次活性化）。このため、Ｔ細胞は、例えば、前記ＴＣＲ複合体を介して活性化させるドメイン（一次活性化ドメイン）と、抗原非特異的に活性化させるドメイン（二次活性化ドメイン）とを有する。したがって、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、前記一次活性化ドメインおよび前記二次活性化ドメインの少なくとも一方を有し、好ましくは、両者を有する。
　前記一次活性化ドメインは、例えば、ＴＣＲ複合体による一次活性化を調整可能である。前記一次活性化を誘導する一次活性化ドメインは、例えば、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインがあげられる。他方、前記一次活性化に対して抑制的に作用する一次活性化ドメインは、例えば、免疫受容体チロシンベース抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインがあげられる。
　前記ＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ等の細胞内シグナル伝達ドメインまたはこれらと同等の機能を有する変異体があげられる。前記同等の機能を有する変異体は、例えば、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインとして機能するポリペプチドである。前記「１個または数個」は、例えば、前述の説明を援用できる。ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_932170.1で登録されているアミノ酸配列において、５２～１６４番目のアミノ酸配列または下記配列番号９のアミノ酸配列があげられる。ＦｃεＲＩγのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_004097.1で登録されているアミノ酸配列において、４５～８６番目のアミノ酸配列があげられる。ＦｃεＲＩβのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_000130.1で登録されているアミノ酸配列において、２０１～２４４番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ３γのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_000064.1で登録されているアミノ酸配列において、１３９～１８２番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ３δのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_000723.1で登録されているアミノ酸配列において、１２８～１７１番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ３εのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_000724.1で登録されているアミノ酸配列において、１５３～２０７番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ５のＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_055022.2で登録されているアミノ酸配列において、４０２～４９５番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ２２のＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001762.2で登録されているアミノ酸配列において、７０７～８４７番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ７９ａのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001774.1で登録されているアミノ酸配列において、１６６～２２６番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ７９ｂのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_000617.1で登録されているアミノ酸配列において、１８２～２２９番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ６６ｄのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001806.2で登録されているアミノ酸配列において、１７７～２５２番目のアミノ酸配列があげられる。
ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号９）
RVKSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインをコードする塩基配列（配列番号１０）
5'-CGAGTGAAGAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
　前記二次活性化ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５４、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ等の細胞内シグナル伝達ドメインまたはこれらと同等の機能を有する変異体があげられる。前記同等の機能を有する変異体は、例えば、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、細胞内シグナル伝達ドメインとして機能するポリペプチドである。前記「１個または数個」は、例えば、前述の説明を援用できる。具体的には、ＣＤ２の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001758.2で登録されているアミノ酸配列において、２３６～３５１番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_000607.1で登録されているアミノ酸配列において、４２１～４５８番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ５の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_055022.2で登録されているアミノ酸配列において、４０２～４９５番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ８αの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001759.3で登録されているアミノ酸配列において、２０７～２３５番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ８βの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号AAA35664.1で登録されているアミノ酸配列において、１９６～２１０番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ２７の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号M63928.1で登録されているアミノ酸配列において、２１３～２６０番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_006130.1で登録されているアミノ酸配列において、１８１～２２０番目のアミノ酸配列（配列番号１１）があげられる。ＣＤ１３４の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_003318.1で登録されているアミノ酸配列において、２４１～２７７番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ１３７の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001552.2で登録されているアミノ酸配列において、２１４～２５５番目のアミノ酸配列があげられる。ＧＩＴＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_004186.1で登録されているアミノ酸配列において、１９３～２４１番目のアミノ酸配列があげられる。ＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_036224.1で登録されているアミノ酸配列において、１６６～１９９番目のアミノ酸配列があげられる。
ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号１１）
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインをコードする塩基配列（配列番号１２）
5'-CGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCT-3'
　前記第１のＣＡＲは、例えば、１または複数の第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。複数の第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含む場合、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、同じでもよいし、異なってもよい。前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、前記一次活性化ドメインとして、ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むことが好ましい。また、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、前記二次活性化ドメインとして、ＣＤ２７、ＣＤ２８およびＣＤ１３７からなる群から選択された少なくとも一つの細胞内シグナル伝達ドメインを含むことが好ましい。具体例として、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２７、ＣＤ２８およびＣＤ１３７からなる群から選択された少なくとも一つの細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。これにより、本発明のＣＡＲライブラリは、例えば、後述の本発明の第１のスクリーニング方法において、ファージディスプレイ法と比較して、さらに少ない数または種類の核酸で、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む場合、ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインのＣ末端側に配置されていることが好ましい。前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む場合、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、さらに、ＣＤ１３４およびＣＤ１３７の少なくとも一方の細胞内シグナル伝達ドメインとを含んでもよい。
　前記第１の抗原結合ドメインおよび前記第１の膜貫通ドメインは、直接または間接的に連結されている。前記間接的な連結の場合、前記第１の抗原結合ドメインおよび前記第１の膜貫通ドメインは、スペーサーペプチドにより連結されていることが好ましい。前記スペーサーペプチドは、例えば、１～３００個、１～１００個、１０～１００個、２５～５０個のアミノ酸から構成される。前記スペーサーペプチドは、例えば、前記第１のＣＡＲと前記標的抗原との結合を促進し、且つ前記第１のＣＡＲと前記標的抗原が結合した際に、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインによるシグナル伝達を誘導および／または亢進するアミノ酸（例えば、システイン、セリン、スレオニン等）を含むことが好ましい。具体例として、前記スペーサーペプチドは、例えば、ＣＨ１領域、Ｌ領域等の免疫グロブリンの定常領域、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、またはＣＤ２８の部分領域等を利用できる。前記第１のスペーサーペプチドは、人工的に設計したアミノ酸配列でもよい。ＣＤ８αの部分領域は、例えば、ＣＤ８αのヒンジ領域があげられ、具体例として、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001759.3で登録されているアミノ酸配列において、１１８～１７８番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ８βの部分領域は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号AAA35664.1で登録されているアミノ酸配列において、１３５～１９５番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ４の部分領域は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_000607.1で登録されているアミノ酸配列において、３１５～３９６番目のアミノ酸配列があげられる。ＣＤ２８の部分領域は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_006130.1で登録されているアミノ酸配列において、１３７～１５２番目のアミノ酸配列（配列番号１３）があげられる。前記スペーサーペプチドは、各例示のアミノ酸配列の一部でもよい。
ＣＤ２８の部分領域（細胞外領域）（配列番号１３）
IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP
ＣＤ２８の一部をコードする塩基配列（配列番号１４）
5'-ATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCT-3'
　前記第１のＣＡＲにおいて、各ドメイン間は、例えば、リンカーペプチド（ドメインリンカーペプチド）により連結されてもよい。前記ドメインリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記ドメインリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。
　前記第１のＣＡＲは、例えば、下記式（１）（配列番号１５）で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。下記式（１）において、Ｖ１およびＶ２は、それぞれ、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列、または軽鎖可変領域および重鎖可変領域のアミノ酸配列である。下記式（１）において、Ｖ１およびＶ２間のアミノ酸配列が、Ｆｖリンカーペプチドのアミノ酸配列であり、Ｖ２よりＣ末端側のアミノ酸配列が、スペーサーペプチド、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列である。下記式（１）において、Ｆｖリンカーペプチドは、Ｆｖリンカーペプチド１であるが、Ｆｖリンカーペプチド２であってもよい。
[Ｖ１]-[GSTSGSGKPGSGEGSTKG]-[Ｖ２]-[IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS]-[RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR]　・・・（１）
　前記第１のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、下記式（２）（配列番号１６）で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。下記式（２）において、Ｎ１およびＮ２は、それぞれ、重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードする塩基配列、または軽鎖可変領域および重鎖可変領域をコードする塩基配列である。下記式（２）において、Ｎ１およびＮ２間の塩基配列が、Ｆｖリンカーペプチドをコードする塩基配列であり、Ｎ２より３’端側のアミノ酸配列が、スペーサーペプチド、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする塩基配列である。下記式（２）において、Ｆｖリンカーペプチドをコードする塩基配列は、Ｆｖリンカーペプチド１をコードする塩基配列であるが、Ｆｖリンカーペプチド２をコードする塩基配列であってもよい。
5'-[Ｎ１]-[GGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGC]-[Ｎ２]-[ATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCT]-[CGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA]-3'　・・・（２）
　本発明のＣＡＲライブラリは、例えば、複数種類の核酸を含むことが好ましい。この場合、本発明のＣＡＲライブラリは、例えば、複数種類の核酸の混合物である。前記複数種類の核酸は、例えば、その一部または全部が、異なる第１のＣＡＲをコードしていることが好ましく、異なる第１の抗原結合ドメインをコードしていることが好ましい。複数種類の核酸が異なる第１の抗原結合ドメインをコードしている場合、前記第１のＣＡＲにおける第１の抗原結合ドメイン以外の領域は、例えば、同じまたは異なるアミノ酸配列である。本発明のＣＡＲライブラリに含まれる前記核酸の種類は、例えば、１×１０５～１×１０７種類、１×１０５～１×１０６種類、１×１０６～５×１０６種類であり、好ましくは、約２×１０６種類（例えば、１×１０６～３×１０６種類）である。前記ファージディスプレイ法では、約１×１０８種類の核酸が、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖのスクリーニングに必要となる。他方、本発明のＣＡＲライブラリによれば、例えば、約１×１０６種類の核酸であっても、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。このため、本発明のＣＡＲライブラリによれば、例えば、ファージディスプレイ法と比較して、より少ない数または種類の核酸で、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。前記核酸の種類は、例えば、核酸の不均一性（heterogeneity）ということもできる。前記不均一性は、例えば、制限酵素マッピング、各ＣＤＲおよび／または各ＦＲＨについてサンガー法等のシークエンス等で測定できる。
　前記第１のＣＡＲは、例えば、Ｎ末端にシグナルペプチドを有してもよい。前記シグナルペプチドは、例えば、小胞体への輸送シグナルとなるシグナルペプチドがあげられる。前記第１のＣＡＲは、例えば、タグを有してもよい。前記タグは、例えば、ペプチドタグ、プロテインタグ等があげられる。前記タグは、例えば、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、ＨＡタグ、Ｈｉｓタグ、Ｍｙｃタグ、Ｖ５タグ、切断型のＮＧＦＲ（nerve growth factor receptor）等があげられる。前記タグペプチドは、例えば、前記第１のＣＡＲのＮ末端およびＣ末端の少なくとも一方に付加される。前記タグが切断型のＮＧＦＲの場合、前記タグは、例えば、前記第１のＣＡＲのＣ末端側に配置される。これにより、本発明のＣＡＲライブラリは、例えば、１つの細胞に１種類の第１のＣＡＲをコードする核酸が導入されるよう、核酸の導入効率を調整できる。前記第１のＣＡＲと前記タグとは、リンカーペプチドにより連結されてもよい。
　本発明において、前記第１のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、前記第１のＣＡＲのアミノ酸配列に基づき、常法により調製できる。具体例として、前記第１のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、前述の各ドメインのアミノ酸配列が登録されたデータベースにおいて、前記アミノ酸配列をコードする塩基配列を取得し、前記塩基配列に基づき、分子生物学的手法および／または化学的合成方法により調製できる。前記核酸の塩基配列は、例えば、本発明のＣＡＲライブラリを発現させる細胞の由来に応じて、コドン最適化してもよい。
　前記第１のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、発現ベクターに導入されてもよい。前記発現ベクターは、例えば、前記第１のＣＡＲをコードする核酸を連結用ベクターに連結することで調製できる。前記連結用ベクターの種類は、特に制限されず、例えば、オンコレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、シュードタイプベクター等のレトロウイルスベクター；アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、シミアンウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、センダイウイルスベクター、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）ベクター、ＨＳＶベクター等のウイルスベクターがあげられる。具体例として、前記連結用ベクターは、例えば、ｐＵＣ、ｐＣＭＶ、ｐＭＸ、ｐＥＬＰがあげられる。前記連結用ベクターは、例えば、前記発現ベクターを導入する宿主に応じて、適宜設定することもできる。前記宿主は、特に制限されず、例えば、ＣＨＯ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞等の哺乳類由来の培養細胞、免疫細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、リンパ球、顆粒球、マクロファージ等があげられる。前記リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、生体から単離された細胞、多能性幹細胞等の幹細胞から誘導された免疫細胞または免疫細胞由来の培養細胞である。前記Ｔ細胞は、Ｔ細胞様の細胞でもよい。前記Ｔ細胞様の細胞は、例えば、Ｔ細胞に由来する培養細胞等があげられ、具体例として、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞等があげられる。
　前記発現ベクターは、例えば、前記第１のＣＡＲをコードする核酸の発現および前記第１のＣＡＲをコードする核酸がコードする第１のＣＡＲの少なくとも一方の発現を調節する、調節配列を有することが好ましい。前記調節配列は、例えば、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル配列、複製起点配列（ｏｒｉ）等があげられる。前記発現ベクターにおいて、前記調節配列の配置は特に制限されない。前記発現ベクターにおいて、前記調節配列は、例えば、前記第１のＣＡＲをコードする核酸の発現およびこれがコードする前記第１のＣＡＲの少なくとも一方の発現を、機能的に調節できるように配置されていればよく、公知の方法に基づいて配置できる。前記調節配列は、例えば、前記連結ベクターが予め備える配列を利用してもよいし、前記連結ベクターに、さらに、前記調節配列を挿入してもよいし、前記連結ベクターが備える調節配列を、他の調節配列に置き換えてもよい。
　前記発現ベクターは、例えば、さらに、選択マーカーのコード配列を有してもよい。前記選択マーカーは、例えば、薬剤耐性マーカー、蛍光タンパク質マーカー、酵素マーカー、細胞表面レセプターマーカー等があげられる。
＜第１のｓｃＦｖのスクリーニング方法＞
　本発明の第１のスクリーニング方法は、前記本発明のＣＡＲライブラリ（以下、「第１のＣＡＲライブラリ」ともいう）を免疫細胞に発現させる第１の発現工程と、前記第１の発現工程で得られた免疫細胞と、前記標的抗原とを接触させる第１の接触工程と、前記第１の接触工程において前記標的抗原と結合した免疫細胞に発現するＣＡＲの第１のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する第１の選抜工程とを含む。本発明の第１のスクリーニング方法は、前記第１の発現工程、前記第１の接触工程および前記第１の選抜工程を含み、前記第１の発現工程において、前記本発明のＣＡＲライブラリを用いることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第１のスクリーニング方法によれば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能しうるｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖの重鎖可変領域および軽鎖可変領域の各ＣＤＲのアミノ酸配列に基づき、例えば、前記標的抗原に結合可能な抗体またはその抗原結合断片を作製できる。このため、前記第１のスクリーニング方法は、例えば、前記標的抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片のスクリーニング方法ということもできる。本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリの説明を援用できる。本発明のｓｃＦｖの製造方法によれば、新たなｓｃＦｖをスクリーニングすることができる。このため、本発明のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、ｓｃＦｖのスクリーニング方法ということもできる。
　ファージディスプレイ法等により標的抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）等を製造する場合、約１×１０１０種類の抗体ライブラリを作成し、標的抗原に結合する抗体を取得した後に、前記抗体からｓｃＦｖを含むＣＡＲ等を調製する。そして、前記ＣＡＲ等について免疫細胞等を用いて、その有効性について検討する。他方、本発明の第１のスクリーニング方法では、前記本発明のＣＡＲライブラリと、前記免疫細胞とを用いるため、例えば、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖのスクリーニングと、前記ｓｃＦｖの免疫細胞における有効性の検討について同時に実施することができる。このため、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、例えば、標的抗原に結合する抗体を得るために用いられているファージディスプレイ法等と比較して、標的抗原に結合し、かつ免疫細胞等において有効に機能するＣＡＲに用いうるｓｃＦｖを簡便にスクリーニングできる。
　前記第１の発現工程は、前記本発明のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させる工程である。具体的には、前記第１の発現工程では、例えば、前記免疫細胞に、前記第１のＣＡＲライブラリを導入する。そして、前記第１の発現工程では、例えば、前記第１のＣＡＲライブラリが導入された免疫細胞を培養することにより、前記免疫細胞に前記第１のＣＡＲライブラリを発現させる。前記第１のＣＡＲライブラリの導入方法は、特に制限されず、例えば、公知の核酸の細胞への導入方法を利用できる。具体例として、前記第１のＣＡＲライブラリの導入方法は、例えば、リポソーム、カチオニックリピッド等の核酸導入試薬を用いる方法；レトロウイルス、レンチウイルス等のウイルスを用いる方法；等があげられる。前記免疫細胞の培養期間は、特に制限されず、例えば、６時間～３０日、６～９６時間、１～３０日である。前記免疫細胞の培養温度は、例えば、２８～３７℃である。
　前記第１のＣＡＲライブラリは、例えば、前記第１のＣＡＲをコードする核酸でもよいし、前記第１のＣＡＲをコードする核酸が導入された発現ベクターでもよい。
　前記免疫細胞は、特に制限されず、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、生体から単離された免疫細胞、多能性幹細胞等の幹細胞から誘導された免疫細胞または免疫細胞由来の培養細胞があげられる。前記単離された免疫細胞は、例えば、免疫細胞様の培養細胞でもよく、具体例として、Ｔ細胞様の培養細胞、ＮＫ細胞様の培養細胞、ＮＫＴ細胞様の培養細胞、Ｂ細胞様の培養細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、生体から単離された免疫細胞であり、具体例として、ヒト末梢血由来の免疫細胞があげられる。前記Ｔ細胞様の培養細胞は、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能する可能性がより高いｓｃＦｖをスクリーニングでき、また後述の第１の接触工程において、前記標的抗原と結合する第１のＣＡＲを発現する免疫細胞を富化できることから、Ｔ細胞またはＴ細胞様の培養細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞が好ましい。
　前記第１の発現工程において、前記免疫細胞の数は、特に制限されず、例えば、１×１０５～１×１０８細胞、１×１０５～１×１０７細胞、１×１０５～１×１０６細胞、１×１０６～５×１０６細胞、１×１０６～３×１０６細胞である。
　前記第１の発現工程では、１つの免疫細胞あたり、平均して、１以下の第１のＣＡＲが発現するように、前記本発明のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させることが好ましい。これにより、本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、前記標的抗原に結合しない非特異的な第１のＣＡＲの選抜を抑制できる。前記１つの細胞あたりに発現する第１のＣＡＲの数は、例えば、細胞数と、導入する核酸、ウイルス等のベクターとの量比を変更することにより調整できる。具体的には、前記第１の発現工程では、一定数の細胞に対して、導入するベクターの量比を減らすことにより、前記１つの細胞あたりに発現する第１のＣＡＲの数を低減できる。他方、前記第１の発現工程では、一定数の細胞に対して、導入するベクターの量比を増やすことにより、前記１つの細胞あたりに発現する第１のＣＡＲの数を増加できる。前記第１の発現工程において、前記免疫細胞へのベクターの導入効率は、特に制限されず、例えば、１０～６０％、１０～５０％、２０～４０％、２５～３５％とできる。
　つぎに、前記第１の接触工程では、前記第１の発現工程で得られた免疫細胞（候補免疫細胞）と、前記標的抗原とを接触させる。前記候補免疫細胞と前記標的抗原との接触は、例えば、前記候補免疫細胞および前記標的抗原の共存下で培養することにより実施できる。培養期間は、例えば、６時間～３０日、６～９６時間、１～３０日である。培養温度は、例えば、２８～３７℃である。以下、前記免疫細胞がＴ細胞の場合、候補免疫細胞は、例えば、候補ＣＡＲ－Ｔということもできる。
　前記候補免疫細胞が発現するＣＡＲは、例えば、１種類でもよいし、複数種類でもよいが、前者が好ましい。前記候補免疫細胞は、異なるアミノ酸配列を有するＣＡＲを発現する候補免疫細胞、すなわち、異なるＣＡＲを発現する２種類以上の候補免疫細胞の混合物であることが好ましい。
　前記候補免疫細胞と接触させる標的抗原は、例えば、前記標的抗原の単量体、前記標的抗原の複合体、前記標的抗原の発現細胞等があげられ、好ましくは、前記標的抗原の発現細胞である。前記標的抗原の複合体は、例えば、前記標的抗原の多量体（マルチマー）があげられ、具体例として、前記標的抗原の二量体、四量体等があげられる。前記標的抗原の多量体は、例えば、タグを付加した標的抗原を抗体により架橋する方法、ビオチン化された標的抗原をアビジンにより複合体化する方法等により調製できる。前記標的抗原の発現細胞は、例えば、前記標的抗原を内在的に発現する細胞、前記標的抗原をコードする核酸を導入することにより前記標的抗原を発現させた細胞等があげられる。前記標的抗原を発現させる細胞は、例えば、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｋ５６２細胞等の培養細胞があげられる。
　前記第１の接触工程では、前記標的抗原に加え、免疫細胞を活性化させる分子、いわゆる、共刺激分子をあわせて接触させてもよい。前記共刺激分子は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ等があげられる。前記共刺激分子は、例えば、前記共刺激分子の単量体、前記共刺激分子の複合体、前記共刺激分子の発現細胞等があげられ、好ましくは、前記共刺激分子の発現細胞である。前記共刺激分子の複合体は、例えば、前記標的抗原の複合体と同様にして調製できる。
　前記標的抗原として、前記標的抗原の発現細胞を用いる場合、前記標的抗原の発現細胞は、免疫細胞を活性化させる分子、いわゆる、共刺激分子をあわせて発現することが好ましい。前記共刺激分子は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ等があげられる。前記標的抗原の発現細胞は、１種類の共刺激分子を発現してもよいし、２種類以上の共刺激分子を発現してもよい。前記標的抗原の発現細胞は、例えば、生体における抗原提示細胞と類似した機能を発揮でき、生体内で機能するＣＡＲを選抜できることから、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ４０、および４－１ＢＢＬからなる群から選択された少なくとも１つを発現することが好ましい。
　本発明の第１のスクリーニング方法では、前記第１の接触工程において、候補免疫細胞と、標的抗原とを接触させる。このため、前記標的抗原に特異的なＣＡＲを発現する候補免疫細胞は、例えば、前記標的抗原へのＣＡＲの親和性（結合性）の程度に応じて、生体内と同様に、前記標的抗原と、持続的または間欠的に免疫シナプス様の構造を形成できる。これにより、前記標的抗原に特異的なＣＡＲを発現する候補免疫細胞は、例えば、前記標的抗原へのＣＡＲの親和性（結合性）の程度に応じて、ＣＡＲに由来する生存、活性化および／または増殖シグナルを受け取ることができる。この結果、前記第１の接触工程を経た候補免疫細胞において、前記標的抗原に特異的なＣＡＲを発現する候補免疫細胞は、例えば、前記標的抗原へのＣＡＲの親和性（結合性）の程度に応じて、生存、活性化マーカーの発現および／または細胞数の増加という表現型を示す。そして、後述の第１の選抜工程では、例えば、このような表現型が発現した候補免疫細胞を評価して、選抜する。このため、第１の選抜工程では、例えば、候補免疫細胞に発現しているＣＡＲの親和性に加えて、当該ＣＡＲが活性化した際に生じる表現型（機能性）に基づき、ＣＡＲをスクリーニングできる。したがって、本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、前記第１の接触工程を備えることにより、生体内または免疫細胞において有効に機能するＣＡＲに用いうるｓｃＦｖを好適にスクリーニングできる。
　前記第１の接触工程は、複数回実施してもよい。前記複数回は、例えば、１～５回、２～３回であり、好ましくは、２～３回である。前記第１の接触工程を複数回実施する場合、１回目の第１の接触工程の実施後、前記候補免疫細胞を回収し、１回目の第１の接触工程と同様にして２回目の第１の接触工程をする。そして、所望の回数まで同様に回収および接触を繰り返し実施する。前記第１の接触工程を複数回実施することにより、前記第１の接触工程において、例えば、前記標的抗原と結合するＣＡＲを発現する候補免疫細胞を増殖および／または富化させることができるため、より効率よく、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、前記第１の接触工程を複数回実施することで増殖する候補免疫細胞が発現するＣＡＲは、例えば、後述の実施例で示しているように、前記ＣＡＲを発現する細胞に対して、前記標的抗原を発現している細胞が多い状況（例えば、がん）においても、前記ＣＡＲを発現する細胞を好適に標的抗原の刺激依存的に増殖させ、かつ前記ＣＡＲを発現する細胞において標的抗原依存的な細胞傷害活性等の活性化を誘導できる。このため、本発明の第１のスクリーニング方法は、前記第１の接触工程を複数回実施することで、例えば、生体内においてより好適に機能するＣＡＲに用いうるｓｃＦｖを好適にスクリーニングできる。
　前記第１の接触工程は、候補免疫細胞において、標的抗原を認識するＣＡＲを発現する候補免疫細胞を、標的抗原により刺激しているともいえる。このため、第１の接触工程は、例えば、抗原刺激工程ということもできる。
　前記第１の接触工程において、前記候補免疫細胞の数は、特に制限されず、例えば、１×１０５～１×１０８細胞、１×１０５～１×１０７細胞、１×１０５～１×１０６細胞、１×１０６～５×１０６細胞、１×１０６～３×１０６細胞である。
　前記第１の接触工程において、前記標的抗原として、前記標的抗原を発現する細胞を用いる場合、前記第１の接触工程において、前記候補免疫細胞（Ｅ）と、前記標的抗原を発現する細胞（Ｔ）の細胞比（Ｅ：Ｔ）は、例えば、２：１～５０：１、５：１～４０：１、１０：１～３０：１、または約２０：１である。
　そして、前記第１の選抜工程では、前記第１の接触工程において前記標的抗原と結合したＴ細胞に発現する第１のＣＡＲの第１のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する。前記標的抗原と前記候補免疫細胞との結合は、例えば、直接または間接的に評価できる。前記標的抗原と前記候補免疫細胞との結合は、例えば、キメラ抗原受容体のｓｃＦｖとして用いたときに、Ｔ細胞の活性化および機能性の発揮を誘導しうるｓｃＦｖを取得できることから、間接的な評価により実施してもよい。
　前記直接的な評価方法は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー等の抗体と抗原との結合検出方法より実施できる。具体例として、前記直接的な評価方法は、例えば、標識化された標的抗原のモノマーまたはマルチマーを用いて実施できる。この場合、前記第１の選抜工程では、例えば、前記標識化された標的抗原と、前記候補免疫細胞とを接触させる。前記候補免疫細胞が前記標的抗原に結合するＣＡＲを発現している場合、前記標識化された標的抗原と、前記候補免疫細胞とは複合体を形成する。このため、前記第１の選抜工程では、例えば、前記標識を含む複合体を形成している候補免疫細胞を、前記標的抗原に結合したＴ細胞と評価できる。
　具体例として、前記直接的な評価方法では、前記候補免疫細胞と、蛍光標識された標的抗原のマルチマーとを混合し、前記標的抗原に特異的なＣＡＲを発現する候補免疫細胞と、前記蛍光標識された標的抗原との複合体を形成させる。つぎに、得られた混合物を、フローサイトメトリーにより解析し、前記蛍光標識された標的抗原との複合体を形成している候補免疫細胞を、前記蛍光標識由来のシグナルに基づき、検出し、評価および選抜する。
　また、前記間接的な評価方法は、例えば、以下のように実施できる。前記標的抗原と結合するＣＡＲを発現するＴ細胞は、例えば、前記標的抗原との結合により活性化する。このため、前記間接的な評価方法は、例えば、前記候補免疫細胞の活性化を指標に評価する。具体例として、前記候補免疫細胞が前記標的抗原と結合すると、例えば、前記免疫細胞では、前記標的抗原と未結合の候補免疫細胞と比較して、活性化マーカーの発現の上昇、サイトカインおよび／またはケモカインの産生量の増加、増殖等が生じる。具体例として、前記免疫細胞がＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞またはＢ細胞の場合、前記各細胞では、例えば、下記活性化マーカーの発現の上昇、下記サイトカインおよび／またはケモカインの産生量の増加、増殖等が生じる。このため、前記第１の選抜工程では、例えば、いずれか１つ以上の指標に基づき、前記候補免疫細胞が活性化していると判断される場合、前記活性化している免疫細胞を、前記標的抗原に結合した免疫細胞と評価できる。前記サイトカインおよび／またはケモカインの産生量の増加は、例えば、前記サイトカインおよび／またはケモカインの発現が誘導されると、ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現量が増加するレポーターを用いてもよい。前記レポーターは、例えば、蛍光タンパク質があげられる。前記増殖は、例えば、細胞を、Carboxyfluorescein succinimidyl ester（ＣＦＳＥ）等の蛍光細胞染色色素等で染色し、蛍光強度の減衰を指標に評価できる。
・Ｔ細胞
活性化マーカー：ＣＤ６９、ＣＤ１０７a等
サイトカイン・ケモカイン：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１β等
・ＮＫ細胞
活性化マーカー：ＣＤ６９、ＣＤ１０７a等
サイトカイン・ケモカイン：ＩＮＦ－γ、ＩＬ－１２等
・ＮＫＴ細胞
活性化マーカー：ＣＤ６９、ＣＤ１０７a、ＣＤ２５等
サイトカイン・ケモカイン：ＩＮＦ－γ、ＩＬ－２等
・Ｂ細胞
活性化マーカー：ＣＤ２８、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ１３８、Ｂ２２０等
サイトカイン・ケモカイン：ＣＸＣＲ４等
　そして、前記標的抗原と結合した候補免疫細胞に発現する第１のＣＡＲの第１のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する。前記第１の候補ｓｃＦｖの選抜は、例えば、前記標的抗原と結合した候補免疫細胞を選抜し、選抜された候補免疫細胞におけるｓｃＦｖまたはＣＡＲをコードする塩基配列を解読することにより実施できる。前記第１の選抜工程では、例えば、さらに、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける、重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とを特定してもよい。各ＣＤＲの特定は、例えば、ゲノム情報（例えば、ＩＭＧＴのホームページ<http://www.imgt.org/>）を参照し、公知の方法により実施できる。
　これにより、前記標的抗原に結合する新たなｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、前記第１のＣＡＲライブラリにおける第１のＣＡＲが前記条件１を満たす場合、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、前記標的抗原に結合する新たな軽鎖可変領域をスクリーニングできる。前記第１のＣＡＲライブラリにおける第１のＣＡＲが前記条件２を満たす場合、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、前記標的抗原に結合する新たな重鎖可変領域をスクリーニングできる。
　本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖの新たな重鎖可変領域または軽鎖可変領域を、それぞれ、前記第１のＣＡＲライブラリにおける標的抗原に結合する抗原等における重鎖可変領域または軽鎖可変領域として、他方の領域のスクリーニングを実施してもよい。この場合、本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、さらに、前記第１の候補ｓｃＦｖに基づき、第２のＣＡＲライブラリを調製する調製工程を含む。
　前記第２のＣＡＲライブラリは、例えば、第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。また、前記第２のＣＡＲは、例えば、第２の抗原結合ドメインと、第２の膜貫通ドメインと、第２の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。また、前記第２の抗原結合ドメインは、例えば、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含む。
　前記第２のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、第２のＣＡＲのアミノ酸配列をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を意味する。
　前記第２のｓｃＦｖにおいて、前記標的抗原は、前記第１のｓｃＦｖにおける標的抗原と同じである。前記第２のｓｃＦｖは、例えば、前記第１のｓｃＦｖと類似の構造を有する。
　前記第２のｓｃＦｖは、例えば、第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域を含む。前記第２の重鎖可変領域は、例えば、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。また、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、下記条件３または条件４を満たす。
条件３：
前記第１の発現工程におけるＣＡＲライブラリが前記条件１を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
条件４：
前記第１の発現工程におけるＣＡＲライブラリが前記条件２を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
　前記条件３は、例えば、前記条件１を満たす第１のＣＡＲライブラリを用いてスクリーニングされた第１の候補ｓｃＦｖを用いて、第２のＣＡＲライブラリを調製する場合である。前記条件３では、例えば、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記第１の候補ｓｃＦｖを用い、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３について、前記標的抗原への結合をスクリーニングする。
　前記第２の重鎖可変領域における第２のＢ細胞受容体は、例えば、前記条件２の第１の重鎖可変領域の説明において、「第１のＢ細胞受容体」を「第２のＢ細胞受容体」に、「第１の重鎖可変領域」を「第２の重鎖可変領域」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第２のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＨの説明における「第２のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域において、ＦＲは、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記第２の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」と、前記各ＦＲＬの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」とは、同じｓｃＦｖであることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　つぎに、前記条件４は、例えば、前記条件２を満たす第１のＣＡＲライブラリを用いてスクリーニングされた第１の候補ｓｃＦｖを用いて、第２のＣＡＲライブラリを調製する場合である。前記条件４では、例えば、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、前記第１の候補ｓｃＦｖを用い、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３について、前記標的抗原への結合をスクリーニングする。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」と、前記各ＦＲＨの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」とは、同じｓｃＦｖであることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域における第２のＢ細胞受容体は、例えば、前記条件１の第１の軽鎖可変領域の説明において、「第１のＢ細胞受容体」を「第２のＢ細胞受容体」に、「第１の軽鎖可変領域」を「第２の軽鎖可変領域」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第２のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＬの説明における「第２のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２のｓｃＦｖにおいて、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前述のリンカーペプチド（Ｆｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第２のｓｃＦｖにおけるＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のｓｃＦｖにおけるＦｖリンカーペプチドと同じでもよいし、異なってもよい。
　前記第２の抗原結合ドメインは、第２のｓｃＦｖを含むが、前記第２の結合ドメインは、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域を含む、ｓｃＦｖ以外の構造を有してもよい。具体例として、前記第２の結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、可変領域断片（Ｆｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ等としてもよい。
　前記第２のＣＡＲにおいて、前記第２の膜貫通ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、それぞれ、前記第１のＣＡＲライブラリにおける前記第１の膜貫通ドメインおよび第１の細胞内シグナル伝達ドメインと、同じでもよいし、異なってもよい。前記第２のＣＡＲライブラリにおいて、前記第２の膜貫通ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、それぞれ、前記本発明のＣＡＲライブラリにおける第１の膜貫通ドメインおよび第１の細胞内シグナル伝達ドメインの説明を援用できる。
　前記第２のＣＡＲにおいて、各ドメイン間は、例えば、リンカーペプチド（ドメインリンカーペプチド）により連結されてもよい。前記ドメインリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記ドメインリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。
　前記第２のＣＡＲは、例えば、前記式（１）（配列番号１５）で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。前記式（１）において、Ｖ１およびＶ２は、それぞれ、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列、または軽鎖可変領域および重鎖可変領域のアミノ酸配列である。前記第２のＣＡＲにおける重鎖可変領域および軽鎖可変領域の順序は、例えば、より簡便に第２のＣＡＲライブラリを調製できることから、前記第１のＣＡＲにおける重鎖可変領域および軽鎖可変領域の順序と、逆の順序が好ましい。具体例として、前記第１のＣＡＲにおいて、Ｎ末端から、重鎖可変領域および軽鎖可変領域がこの順序で配置されている場合、第２のＣＡＲにおいて、Ｎ末端から、軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、この順序で配置されている。前記第１のＣＡＲにおいて、Ｎ末端から、軽鎖可変領域および重鎖可変領域がこの順序で配置されている場合、第２のＣＡＲにおいて、Ｎ末端から、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、例えば、この順序で配置されている。
　前記第２のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、前記式（２）（配列番号１６）で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記式（２）において、Ｎ１およびＮ２は、それぞれ、重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードする塩基配列、または軽鎖可変領域および重鎖可変領域をコードする塩基配列である。
　前記第２のＣＡＲライブラリは、例えば、複数種類の核酸を含むことが好ましい。この場合、前記第２のＣＡＲライブラリは、例えば、複数種類の核酸の混合物である。前記複数種類の核酸は、例えば、その一部または全部が、異なる第２のＣＡＲをコードしていることが好ましく、異なる第２の抗原結合ドメインをコードしていることが好ましい。複数種類の核酸が異なる第２の抗原結合ドメインをコードしている場合、前記第２のＣＡＲにおける第２の抗原結合ドメイン以外の領域は、例えば、同じまたは異なるアミノ酸配列である。前記第２のＣＡＲライブラリに含まれる前記核酸の種類は、例えば、１×１０５～１×１０７種類、１×１０５～１×１０６種類、１×１０６～５×１０６種類であり、好ましくは、約２×１０６種類（例えば、１×１０６～３×１０６種類）である。
　前記第２のＣＡＲは、例えば、Ｎ末端にシグナルペプチドを有してもよい。前記第２のＣＡＲは、例えば、タグを有してもよい。前記シグナルペプチドおよびタグは、例えば、前記第１のＣＡＲにおけるシグナルペプチドおよびタグの説明において、「第１のＣＡＲ」を「第２のＣＡＲ」に読み替えて、その説明を援用できる。
　本発明において、前記第２のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、前記第２のＣＡＲのアミノ酸配列に基づき、常法により調製できる。具体例として、前記第２のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、前述の各ドメインのアミノ酸配列が登録されたデータベースにおいて、前記アミノ酸配列をコードする塩基配列を取得し、前記塩基配列に基づき、分子生物学的手法および／または化学的合成方法により調製できる。前記核酸の塩基配列は、例えば、前記第２のＣＡＲライブラリを発現させる細胞の由来に応じて、コドン最適化してもよい。
　前記第２のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、発現ベクターに導入されてもよい。前記発現ベクターは、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリにおける発現ベクターの説明を援用できる。
　つぎに、本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、前記第１のＣＡＲライブラリに代えて、前記調製工程において調製された第２のＣＡＲライブラリを用いる以外は、同様にして、発現工程、接触工程、および選抜工程を実施する。具体的には、本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、さらに、前記第２のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させる第２の発現工程と、前記第２の発現工程で得られた免疫細胞と、前記標的抗原とを接触させる第２の接触工程と、前記第２の接触工程において前記標的抗原と結合した免疫細胞に発現するＣＡＲの第２のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第２の候補ｓｃＦｖとして第２の選抜工程とを含む。前記第１の発現工程、第１の接触工程、および第１の選抜工程における免疫細胞と、前記第２の発現工程、第２の接触工程、および第２の選抜工程における免疫細胞とは、同じでもよいし、異なってもよい。前記免疫細胞は、Ｔ細胞またはＴ細胞様の細胞が好ましい。
　前記第２の発現工程は、例えば、前記第１の発現工程の説明において、「第１の発現工程」を「第２の発現工程」に、「第１のＣＡＲライブラリ」を「第２のＣＡＲライブラリ」に、「第１のＣＡＲ」を「第２のＣＡＲ」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第２の接触工程は、例えば、前記第１の接触工程の説明において、「第１の発現工程」を「第２の発現工程」に、「第１の接触工程」を「第２の接触工程」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第２の選抜工程は、例えば、前記第１の選抜工程の説明において、「第１の接触工程」を「第２の接触工程」に、「第１の選抜工程」を「第２の選抜工程」に、「第１のｓｃＦｖ」を「第２のｓｃＦｖ」に、「第１の候補ｓｃＦｖ」を「第２の候補ｓｃＦｖ」に、「第１のＣＡＲ」を「第２のＣＡＲ」に読み替えてその説明を援用できる。
　これにより、本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、前記標的抗原に結合する新たな重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有するｓｃＦｖをスクリーニングできる。
　本発明の第１のスクリーニング方法は、第１の候補ｓｃＦｖまたは第２の候補ｓｃＦｖに基づき、抗体またはその抗原結合断片を設計する設計工程を含んでもよい。前記設計工程は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおいて、重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とを、新たな抗体またはその抗原結合断片に移植することにより実施できる。具体的には、前記設計工程は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列と、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列とを、それぞれ、新たな抗体またはその抗原結合断片におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列とすることにより実施できる。前記設計工程におけるＣＤＲの移植は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおいて、１つのＣＤＲについて実施してもよいし、複数のＣＤＲについて実施してもよいが、全てのＣＤＲについて実施することが好ましい。前記新たな抗体およびその抗原結合断片の種類は、例えば、後述の本発明の抗体またはその抗原結合断片の種類の説明を援用できる。
　前記設計工程では、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおいて、重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４と、軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４とを、新たな抗体またはその抗原結合断片に移植してもよい。この場合、前記設計工程では、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列と、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列とを、それぞれ、新たな抗体またはその抗原結合断片におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列とすることにより実施できる。前記設計工程におけるＦＲの移植は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖまたは前記第２の候補ｓｃＦｖにおいて、１つのＦＲについて実施してもよいし、複数のＦＲについて実施してもよいが、全てのＦＲについて実施することが好ましい。
　本発明の第１のスクリーニング方法では、前記第１の発現工程を含むが、本発明はこれに限定されず、前記第１の発現工程を含まなくてもよい。この場合、本発明の第１のスクリーニング方法は、例えば、予め調製された、前記本発明のＣＡＲライブラリを発現する免疫細胞（ＣＡＲライブラリ細胞）を用いて、第１の接触工程から実施できる。
＜ＣＡＲライブラリ細胞＞
　本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ライブラリ細胞は、前記本発明のＣＡＲライブラリを発現する細胞を含む。本発明のＣＡＲライブラリ細胞は、前記本発明のＣＡＲライブラリを発現する細胞を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のＣＡＲライブラリ細胞発現細胞によれば、前記本発明の第１のスクリーニング方法を好適に実施できる。本発明のＣＡＲライブラリ細胞は、前記本発明のＣＡＲライブラリおよび第１のスクリーニング方法の説明を援用できる。
　本発明のＣＡＲライブラリ細胞の数は、例えば、１×１０５～１×１０８細胞、１×１０５～１×１０７細胞、１×１０５～１×１０６細胞、１×１０６～５×１０６細胞、１×１０６～３×１０６細胞である。前記ＣＡＲライブラリ細胞は、例えば、それぞれが、前記本発明のＣＡＲライブラリにおける異なるＣＡＲを発現することが好ましい。前記ＣＡＲライブラリ細胞は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリを発現しない細胞、すなわち、ＣＡＲライブラリが未導入の細胞を含んでもよい。
　本発明のＣＡＲライブラリ細胞が発現するＣＡＲの種類は、１×１０６細胞のＣＡＲライブラリ細胞あたり、例えば、１×１０４～１×１０７種類、１×１０５～１×１０６種類、１×１０６～５×１０６種類、１×１０５～１×１０６種類である。
　本発明のＣＡＲライブラリ細胞は、例えば、前記本発明の第１のスクリーニング方法の第１の発現工程と同様にして、製造できる。本発明のＣＡＲライブラリ細胞は、例えば、免疫細胞由来の細胞であることが好ましく、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞由来であることが好ましい。
＜第１の抗体またはその抗原結合断片＞
　本発明のＨＬＡ－Ａ＊０２：０１およびＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５の複合体（以下、「A2/NY-ESO-1157」ともいう）に対する抗体またはその抗原結合断片は、前述のように、下記（Ｈ）の重鎖可変領域と、下記（Ｌ）の軽鎖可変領域とを含む。本発明の抗体等は、下記（Ｈ）の重鎖可変領域と、下記（Ｌ）の軽鎖可変領域とを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の抗体等は、A2/NY-ESO-1157に結合する。また、A2/NY-ESO-1157は、例えば、肺がん、悪性黒色腫、滑膜肉腫、骨髄腫等の特定のがん細胞に発現することが知られている。このため、本発明の抗体等は、例えば、A2/NY-ESO-1157発現がん細胞に対する二重特異性抗体、ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの抗原結合ドメイン等として好適に使用できる。前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法等の説明を援用できる。
（Ｈ）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
　ＣＤＲＨ１が、下記（H1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ２が、下記（H2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ３が、下記（H3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（H1）下記（H1-1）、（H1-2）または（H1-3）のアミノ酸配列
（H1-1）下記表１ＡのＣＤＲＨ１のいずれかのアミノ酸配列
（H1-2）（H1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-3）（H1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2）下記（H2-1）、（H2-2）または（H2-3）のアミノ酸配列
（H2-1）下記表１ＡのＣＤＲＨ２のいずれかのアミノ酸配列
（H2-2）（H2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-3）（H2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3）下記（H3-1）、（H3-2）または（H3-3）のアミノ酸配列
（H3-1）下記表１ＡのＣＤＲＨ３のいずれかのアミノ酸配列
（H3-2）（H3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-3）（H3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
　ＣＤＲＬ１が、下記（L1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ２が、下記（L2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ３が、下記（L3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（L1）下記（L1-1）、（L1-2）または（L1-3）のアミノ酸配列
（L1-1）下記表１ＢのＣＤＲＬ１のいずれかのアミノ酸配列
（L1-2）（L1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-3）（L1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2）下記（L2-1）、（L2-2）または（L2-3）のアミノ酸配列
（L2-1）下記表１ＢのＣＤＲＬ２のいずれかのアミノ酸配列
（L2-2）（L2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-3）（L2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3）下記（L3-1）、（L3-2）または（L3-3）のアミノ酸配列
（L3-1）下記表１ＢのＣＤＲＬ３のいずれかのアミノ酸配列
（L3-2）（L3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-3）（L3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　本発明において、「ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１」は、例えば、ヒト主要組織適合性抗原（ＭＨＣ）のＡ＊０２：０１アリルに由来するクラスＩ抗原を意味する。ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１は、例えば、ヒトβ２－ミクログロブリンと複合体を形成している。ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１のアミノ酸配列は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号HG794376で登録されているアミノ酸配列があげられる。ヒトβ２－ミクログロブリンのアミノ酸配列は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NM_004048.2で登録されているアミノ酸配列があげられる。
　本発明において、「ＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５」は、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質のアミノ酸配列において１５７～１６５番目のアミノ酸（SLLMWITQC（配列番号２０６）からなるペプチドを意味する。ＮＹ－ＥＳＯ－１は、例えば、ヒト肺がん、悪性黒色腫、滑膜肉腫、骨髄腫等のがんに発現するがん抗原である。ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質のアミノ酸配列は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NM_001327.2で登録されているアミノ酸配列があげられる。
　本発明において、「A2/NY-ESO-1157」は、例えば、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１とＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５とにより形成された複合体を意味し、具体的には、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１のペプチド結合溝にＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５が結合した複合体を意味する。A2/NY-ESO-1157は、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１とヒトβ２－ミクログロブリンとの複合体のペプチド結合溝にＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５が結合した複合体であることが好ましい。
　本発明の抗体は、例えば、分子構造がイムノグロブリンである、いわゆる「抗体」でもよいし、その抗原結合断片でもよい。本発明の抗体等は、前述の前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域を有していればよい。本発明が抗体の場合、例えば、そのイムノグロブリンクラスおよびアイソタイプは、特に制限されない。前記イムノグロブリンクラスは、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等があげられる。前記ＩｇＧは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等があげられる。
　前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒト（例えば、完全ヒト）抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多特異的抗体等であってもよい。
　本発明における「抗原結合断片」は、前記抗体の一部分、例えば、部分断片であり、且つ、前記A2/NY-ESO-1157を認識（結合）するものを意味する。前記抗原結合断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、可変領域断片（Ｆｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二重特異性抗体およびこれらの重合体等があげられる。前記ｓｃＦｖは、例えば、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域が、リンカーを介して連結している。前記重鎖可変領域、前記リンカー、および前記軽鎖可変領域の順序は、Ｎ末端から、前記重鎖可変領域、前記リンカー、および前記軽鎖可変領域の順序でもよいし、Ｎ末端から、前記軽鎖可領域領、前記リンカー、および前記重鎖可変領域の順序でもよい。
　本発明の抗体等は、前述の前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域の他に、例えば、定常領域を有してもよく、前記定常領域は、例えば、ヒト定常領域、またはマウス定常領域である。抗体（イムノグロブリン）の場合、重鎖の定常領域は、例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３という領域を含み、軽鎖の定常領域は、例えば、ＣＬという領域を含む。本発明の抗体等が前記定常領域を有する場合、例えば、前記重鎖可変領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の少なくとも１つと結合し、前記軽鎖可変領域は、前記ＣＬと結合しており、前記重鎖可変領域は、例えば、ＣＨ１と直接結合している。
　一般に、抗体分子の重鎖および軽鎖は、それぞれ、３ヶ所の相補性決定領域（ＣＤＲ：Complemetarity determining region）を有している。ＣＤＲは、超可変領域（hypervariable domain）ともいう。ＣＤＲは、前記重鎖および軽鎖の可変領域でも、特に一次構造の変異性が高い領域であり、一次構造上において、通常、３ヶ所に分離している。本発明においては、重鎖における３ヶ所のＣＤＲを、重鎖のアミノ酸配列におけるアミノ末端側から、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＨ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＨ２）、および重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＨ３）と表し、軽鎖における３ヶ所のＣＤＲを、軽鎖のアミノ酸配列におけるアミノ末端側から、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＬ２）、および軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＬ３）と表す。これらの部位は、立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。
　前記（Ｈ）の重鎖可変領域において、前記ＣＤＲＨ１は、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ１である。前記ＣＤＲＨ２は、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ２である。前記ＣＤＲＨ３は、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ３である。
　前記（Ｌ）の軽鎖可変領域において、前記ＣＤＲＬ１は、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１である。前記ＣＤＲＬ２は、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ２である。前記ＣＤＲＬ３は、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ３である。
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、例えば、比較する配列同士を適切にアライメントしたときの同一性の程度であり、前記配列間のアミノ酸の正確な一致の出現率（％）を意味する。前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記同一性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記アミノ酸の置換は、例えば、保存的置換であってもよい（以下、同様）。前記保存的置換は、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、１個または数個のアミノ酸を、他のアミノ酸および／またはアミノ酸誘導体に置換することを意味する。「置換するアミノ酸」と「置換されるアミノ酸」とは、例えば、性質および／または機能が類似していることが好ましい。具体的には、例えば、疎水性および親水性の指標（ハイドロパシー）、極性、電荷等の化学的性質、または、二次構造等の物理的性質等が類似していることが好ましい。前記性質および／または機能が類似するアミノ酸またはアミノ酸誘導体は、例えば、当該技術分野において公知である。具体例として、非極性アミノ酸（疎水性アミノ酸）は、例えば、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン等があげられ、極性アミノ酸（中性アミノ酸）は、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システイン等があげられ、陽電荷を有するアミノ酸（塩基性アミノ酸）は、アルギニン、ヒスチジン、リジン等があげられ、負電荷を有するアミノ酸（酸性アミノ酸）は、アスパラギン酸、グルタミン酸等があげられる。
　前記（Ｈ）の重鎖可変領域において、前記（H1-1）、（H2-1）および（H3-1）の組合せは、特に制限されず、例えば、それぞれ、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ１と、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ２と、前記（HA）または（HB）におけるＣＤＲＨ３との任意の組合せとできる。前記（H1-1）、（H2-1）および（H3-1）の組合せは、好ましくは、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３である。
　前記（Ｌ）の軽鎖可変領域において、前記（L1-1）、（L2-1）および（L3-1）の組合せは、特に制限されず、例えば、それぞれ、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１と、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ２と、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ３との任意の組合せとできる。前記（L1-1）、（L2-1）および（L3-1）の組合せは、好ましくは、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３である。
　前記（H1-1）、（H2-1）および（H3-1）と、前記（L1-1）、（L2-1）および（L3-1）との組合せは、特に制限されず、例えば、それぞれ、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ１、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ２、および前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ３と、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ２、ならびに前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ３との任意の組合せとできる。前記（H1-1）、（H2-1）および（H3-1）と、前記（L1-1）、（L2-1）および（L3-1）との組合せは、好ましくは、それぞれ、前記（HA）、（HB）または（HC）におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３と、前記（LA）～（LQ）および（LR）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３との組合せであり、より好ましくは、下記表２の組合せである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　以下に、本発明の抗体等について、前記重鎖可変領域または重鎖と前記軽鎖可変領域または軽鎖との組合せについてより具体的に説明する。各組合せにおける重鎖可変領域および重鎖の説明は、互いに援用できる。また、各組合せにおける軽鎖可変領域および軽鎖の説明は、互いに援用できる。また、以下に示すアミノ酸配列および塩基配列において、下線で示すアミノ酸配列および塩基配列は、特に言及しない限り、ＣＤＲに対応するアミノ酸配列およびＣＤＲに対応するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。
　本発明の抗体等において、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域との組合せは、例えば、前述のように、前記（１）～（１８）の組合せである。
組合せ（１）
　組合せ（１）の抗体等は、例えば、抗体H1-3M4E5L群ともいう。前記組合せ（１）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、下記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、下記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、下記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LA）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（H1-A）下記（H1-A1）、（H1-A2）または（H1-A3）のアミノ酸配列
（H1-A1）配列番号１７（GGSISSNY）のアミノ酸配列
（H1-A2）配列番号１７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-A3）配列番号１７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2-A）下記（H2-A1）、（H2-A2）または（H2-A3）のアミノ酸配列
（H2-A1）配列番号１８（VSYSGST）のアミノ酸配列
（H2-A2）配列番号１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-A3）配列番号１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3-A）下記（H3-A1）、（H3-A2）または（H3-A3）のアミノ酸配列
（H3-A1）配列番号１９（ARESYYYYGMDV）のアミノ酸配列
（H3-A2）配列番号１９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-A3）配列番号１９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L1-A）下記（L1-A1）、（L1-A2）または（L1-A3）のアミノ酸配列
（L1-A1）配列番号２９（SRDVGGYNY）のアミノ酸配列
（L1-A2）配列番号２９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-A3）配列番号２９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-A）下記（L2-A1）、（L2-A2）または（L2-A3）のアミノ酸配列
（L2-A1）配列番号３０（DVI）のアミノ酸配列
（L2-A2）配列番号３０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-A3）配列番号３０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-A）下記（L3-A1）、（L3-A2）または（L3-A3）のアミノ酸配列
（L3-A1）配列番号３１（WSFAGSYYV）のアミノ酸配列
（L3-A2）配列番号３１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-A3）配列番号３１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、下記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LA）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（H-A）下記（H-A1）、（H-A2）または（H-A3）のアミノ酸配列
（H-A1）配列番号２０のアミノ酸配列
配列番号２０：QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
（H-A2）配列番号２０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H-A3）配列番号２０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L-A）下記（L-A1）、（L-A2）または（L-A3）のアミノ酸配列
（L-A1）配列番号３２のアミノ酸配列
配列番号３２：QSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLIIHDVIERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCWSFAGSYYVFGTGTDVTVL
（L-A2）配列番号３２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-A3）配列番号３２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（H-A1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-A1）、ＣＤＲＨ２の（H2-A1）、およびＣＤＲＨ３の（H3-A1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（H-A2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-A1）、ＣＤＲＨ２の（H2-A1）、およびＣＤＲＨ３（H3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（H-A3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-A1）、ＣＤＲＨ２の（H2-A1）、およびＣＤＲＨ３（H3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　前記（L-A1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-A1）、ＣＤＲＬ２の（L2-A1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-A1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-A2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-A1）、ＣＤＲＬ２の（L2-A1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号３２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-A3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-A1）、ＣＤＲＬ２の（L2-A1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号３２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-A1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-3M4E5L」ともいう。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（２）
　組合せ（２）の抗体等は、例えば、抗体H1-K52群ともいう。前記組合せ（２）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LB）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-B）下記（L1-B1）、（L1-B2）または（L1-B3）のアミノ酸配列
（L1-B1）配列番号３３（QSISSY）のアミノ酸配列
（L1-B2）配列番号３３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-B3）配列番号３３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-B）下記（L2-B1）、（L2-B2）または（L2-B3）のアミノ酸配列
（L2-B1）配列番号３４（AAS）のアミノ酸配列
（L2-B2）配列番号３４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-B3）配列番号３４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-B）下記（L3-B1）、（L3-B2）または（L3-B3）のアミノ酸配列
（L3-B1）配列番号３５（QQYYSTPQT）のアミノ酸配列
（L3-B2）配列番号３５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-B3）配列番号３５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（２）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LB）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-B）下記（L-B1）、（L-B2）または（L-B3）のアミノ酸配列
（L-B1）配列番号３６のアミノ酸配列
配列番号３６：DIQMTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSTPQTFGPGTKVDIK
（L-B2）配列番号３６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-B3）配列番号３６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-B1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-B1）、ＣＤＲＬ２の（L2-B1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-B1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-B2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-B1）、ＣＤＲＬ２の（L2-B1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-B1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号３６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-B3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-B1）、ＣＤＲＬ２の（L2-B1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-B1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号３６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-B1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K52」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（３）
　組合せ（３）の抗体等は、例えば、抗体H1-K73群ともいう。前記組合せ（３）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LC）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-C）下記（L1-C1）、（L1-C2）または（L1-C3）のアミノ酸配列
（L1-C1）配列番号３７（QSISSY）のアミノ酸配列
（L1-C2）配列番号３７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-C3）配列番号３７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-C）下記（L2-C1）、（L2-C2）または（L2-C3）のアミノ酸配列
（L2-C1）配列番号３８（AAS）のアミノ酸配列
（L2-C2）配列番号３８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-C3）配列番号３８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-C）下記（L3-C1）、（L3-C2）または（L3-C3）のアミノ酸配列
（L3-C1）配列番号３９（QQYESYRRS）のアミノ酸配列
（L3-C2）配列番号３９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-C3）配列番号３９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（３）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LC）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-C）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-C）下記（L-C1）、（L-C2）または（L-C3）のアミノ酸配列
（L-C1）配列番号４０のアミノ酸配列
配列番号４０：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYCQQYESYRRSFGQGTKVEIK
（L-C2）配列番号４０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-C3）配列番号４０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-C1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-C1）、ＣＤＲＬ２の（L2-C1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-C1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-C2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-C1）、ＣＤＲＬ２の（L2-C1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-C1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-C3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-C1）、ＣＤＲＬ２の（L2-C1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-C1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-C1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K73」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（４）
　組合せ（４）の抗体等は、例えば、抗体H1-K121-K124群ともいう。前記組合せ（４）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LD）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-D）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-D）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-D）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-D）下記（L1-D1）、（L1-D2）または（L1-D3）のアミノ酸配列
（L1-D1）配列番号４１（QSISSY）のアミノ酸配列
（L1-D2）配列番号４１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-D3）配列番号４１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-D）下記（L2-D1）、（L2-D2）または（L2-D3）のアミノ酸配列
（L2-D1）配列番号４２（AAS）のアミノ酸配列
（L2-D2）配列番号４２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-D3）配列番号４２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-D）下記（L3-D1）、（L3-D2）または（L3-D3）のアミノ酸配列
（L3-D1）配列番号４３（QQYNSYSRT）のアミノ酸配列
（L3-D2）配列番号４３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-D3）配列番号４３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（４）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LD）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-DA）または（L-DB）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-DA）下記（L-DA1）、（L-DA2）または（L-DA3）のアミノ酸配列
（L-DA1）配列番号４４のアミノ酸配列
配列番号４４：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK
（L-DA2）配列番号４４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-DA3）配列番号４４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L-DB）下記（L-DB1）、（L-DB2）または（L-DB3）のアミノ酸配列
（L-DB1）配列番号４５のアミノ酸配列
配列番号４５：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK
（L-DB2）配列番号４５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-DB3）配列番号４５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-DA1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-DA2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-DA3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　前記（L-DB1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-DB2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-DB3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-DA1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K121」ともいう。また、本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-DB1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K124」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（５）
　組合せ（５）の抗体等は、例えば、抗体H1-K125群ともいう。前記組合せ（５）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LE）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-E）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-E）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-E）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-E）下記（L1-E1）、（L1-E2）または（L1-E3）のアミノ酸配列
（L1-E1）配列番号４６（QSISSY）のアミノ酸配列
（L1-E2）配列番号４６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-E3）配列番号４６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-E）下記（L2-E1）、（L2-E2）または（L2-E3）のアミノ酸配列
（L2-E1）配列番号４７（AAS）のアミノ酸配列
（L2-E2）配列番号４７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-E3）配列番号４７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-E）下記（L3-E1）、（L3-E2）または（L3-E3）のアミノ酸配列
（L3-E1）配列番号４８（QQYNSYSPCT）のアミノ酸配列
（L3-E2）配列番号４８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-E3）配列番号４８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（５）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LE）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-E）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-E）下記（L-E1）、（L-E2）または（L-E3）のアミノ酸配列
（L-E1）配列番号４９のアミノ酸配列
配列番号４９：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSPCTFGPGTKVDIK
（L-E2）配列番号４９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-E3）配列番号４９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-E1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-E1）、ＣＤＲＬ２の（L2-E1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-E1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-E2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-E1）、ＣＤＲＬ２の（L2-E1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-E1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-E3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-E1）、ＣＤＲＬ２の（L2-E1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-E1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号４９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-E1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K125」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（６）
　組合せ（６）の抗体等は、例えば、抗体H1-K131群ともいう。前記組合せ（６）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LF）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-F）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-F）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-F）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-F）下記（L1-F1）、（L1-F2）または（L1-F3）のアミノ酸配列
（L1-F1）配列番号５０（QDISRY）のアミノ酸配列
（L1-F2）配列番号５０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-F3）配列番号５０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-F）下記（L2-F1）、（L2-F2）または（L2-F3）のアミノ酸配列
（L2-F1）配列番号５１（AAS）のアミノ酸配列
（L2-F2）配列番号５１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-F3）配列番号５１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-F）下記（L3-F1）、（L3-F2）または（L3-F3）のアミノ酸配列
（L3-F1）配列番号５２（QQYDNLIT）のアミノ酸配列
（L3-F2）配列番号５２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-F3）配列番号５２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（６）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LF）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-F）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-F）下記（L-F1）、（L-F2）または（L-F3）のアミノ酸配列
（L-F1）配列番号５３のアミノ酸配列
配列番号５３：DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQDISRYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYDNLITFGQGTRLEIK
（L-F2）配列番号５３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-F3）配列番号５３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-F1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-F1）、ＣＤＲＬ２の（L2-F1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-F1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-F2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-F1）、ＣＤＲＬ２の（L2-F1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-F1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号５３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-F3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-F1）、ＣＤＲＬ２の（L2-F1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-F1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号５３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-F1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K131」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（７）
　組合せ（７）の抗体等は、例えば、抗体H1-K145群ともいう。前記組合せ（７）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LG）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-G）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-G）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-G）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-G）下記（L1-G1）、（L1-G2）または（L1-G3）のアミノ酸配列
（L1-G1）配列番号５４（QDISRY）のアミノ酸配列
（L1-G2）配列番号５４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-G3）配列番号５４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-G）下記（L2-G1）、（L2-G2）または（L2-G3）のアミノ酸配列
（L2-G1）配列番号５５（AAS）のアミノ酸配列
（L2-G2）配列番号５５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-G3）配列番号５５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-G）下記（L3-G1）、（L3-G2）または（L3-G3）のアミノ酸配列
（L3-G1）配列番号５６（QQYNSYSRT）のアミノ酸配列
（L3-G2）配列番号５６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-G3）配列番号５６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（７）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LG）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-G）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-G）下記（L-G1）、（L-G2）または（L-G3）のアミノ酸配列
（L-G1）配列番号５７のアミノ酸配列
配列番号５７：DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQDISRYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK
（L-G2）配列番号５７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-G3）配列番号５７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-G1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-G1）、ＣＤＲＬ２の（L2-G1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-G1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-G2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-G1）、ＣＤＲＬ２の（L2-G1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-G1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号５７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-G3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-G1）、ＣＤＲＬ２の（L2-G1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-G1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号５７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-G1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K145」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（８）
　組合せ（８）の抗体等は、例えば、抗体H1-K151群ともいう。前記組合せ（８）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LH）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-H）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-H）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-H）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-H）下記（L1-H1）、（L1-H2）または（L1-H3）のアミノ酸配列
（L1-H1）配列番号５８（QSISSY）のアミノ酸配列
（L1-H2）配列番号５８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-H3）配列番号５８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-H）下記（L2-H1）、（L2-H2）または（L2-H3）のアミノ酸配列
（L2-H1）配列番号５９（AAS）のアミノ酸配列
（L2-H2）配列番号５９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-H3）配列番号５９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-H）下記（L3-H1）、（L3-H2）または（L3-H3）のアミノ酸配列
（L3-H1）配列番号６０（QQYDNLIT）のアミノ酸配列
（L3-H2）配列番号６０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-H3）配列番号６０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（８）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LH）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-H）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-H）下記（L-H1）、（L-H2）または（L-H3）のアミノ酸配列
（L-H1）配列番号６１のアミノ酸配列
配列番号６１：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYDNLITFGQGTRLEIK
（L-H2）配列番号６１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-H3）配列番号６１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-H1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-H1）、ＣＤＲＬ２の（L2-H1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-H1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-H2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-H1）、ＣＤＲＬ２の（L2-H1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-H1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号６１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-H3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-H1）、ＣＤＲＬ２の（L2-H1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-H1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号６１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-H1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K151」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（９）
　組合せ（９）の抗体等は、例えば、抗体H1-K160群ともいう。前記組合せ（９）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LI）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-I）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-I）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-I）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-I）下記（L1-I1）、（L1-I2）または（L1-I3）のアミノ酸配列
（L1-I1）配列番号６２（QSVSSN）のアミノ酸配列
（L1-I2）配列番号６２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-I3）配列番号６２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-I）下記（L2-I1）、（L2-I2）または（L2-I3）のアミノ酸配列
（L2-I1）配列番号６３（GAS）のアミノ酸配列
（L2-I2）配列番号６３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-I3）配列番号６３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-I）下記（L3-I1）、（L3-I2）または（L3-I3）のアミノ酸配列
（L3-I1）配列番号６４（QQYNSYSRT）のアミノ酸配列
（L3-I2）配列番号６４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-I3）配列番号６４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（９）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LI）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-I）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-I）下記（L-I1）、（L-I2）または（L-I3）のアミノ酸配列
（L-I1）配列番号６５のアミノ酸配列
配列番号６５：EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISRLEPEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK
（L-I2）配列番号６５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-I3）配列番号６５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-I1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-I1）、ＣＤＲＬ２の（L2-I1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-I1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-I2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-I1）、ＣＤＲＬ２の（L2-I1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-I1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号６５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-I3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-I1）、ＣＤＲＬ２の（L2-I1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-I1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号６５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-I1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K160」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１０）
　組合せ（１０）の抗体等は、例えば、抗体H1-K173群ともいう。前記組合せ（１０）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LJ）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-J）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-J）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-J）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-J）下記（L1-J1）、（L1-J2）または（L1-J3）のアミノ酸配列
（L1-J1）配列番号６６（QSISSY）のアミノ酸配列
（L1-J2）配列番号６６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-J3）配列番号６６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-J）下記（L2-J1）、（L2-J2）または（L2-J3）のアミノ酸配列
（L2-J1）配列番号６７（AAS）のアミノ酸配列
（L2-J2）配列番号６７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-J3）配列番号６７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-J）下記（L3-J1）、（L3-J2）または（L3-J3）のアミノ酸配列
（L3-J1）配列番号６８（QQYESYSRT）のアミノ酸配列
（L3-J2）配列番号６８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-J3）配列番号６８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１０）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LJ）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-J）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-J）下記（L-J1）、（L-J2）または（L-J3）のアミノ酸配列
（L-J1）配列番号６９のアミノ酸配列
配列番号６９：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYCQQYESYSRTFGQGTKVEIK
（L-J2）配列番号６９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-J3）配列番号６９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-J1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-J1）、ＣＤＲＬ２の（L2-J1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-J1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-J2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-J1）、ＣＤＲＬ２の（L2-J1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-J1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号６９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-J3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-J1）、ＣＤＲＬ２の（L2-J1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-J1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号６９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-J1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K173」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１１）
　組合せ（１１）の抗体等は、例えば、抗体3M4E5H-L1群ともいう。前記組合せ（１１）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、下記（H1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、下記（H2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、下記（H3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LK）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-K）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-K）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-K）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（H1-B）下記（H1-B1）、（H1-B2）または（H1-B3）のアミノ酸配列
（H1-B1）配列番号２１（GFTFSTYQ）のアミノ酸配列
（H1-B2）配列番号２１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-B3）配列番号２１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2-B）下記（H2-B1）、（H2-B2）または（H2-B3）のアミノ酸配列
（H2-B1）配列番号２２（IVSSGGST）のアミノ酸配列
（H2-B2）配列番号２２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-B3）配列番号２２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3-B）下記（H3-B1）、（H3-B2）または（H3-B3）のアミノ酸配列
（H3-B1）配列番号２３（AGELLPYYGMDV）のアミノ酸配列
（H3-B2）配列番号２３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-B3）配列番号２３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L1-K）下記（L1-K1）、（L1-K2）または（L1-K3）のアミノ酸配列
（L1-K1）配列番号７０（SSDVGGYDF）のアミノ酸配列
（L1-K2）配列番号７０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-K3）配列番号７０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-K）下記（L2-K1）、（L2-K2）または（L2-K3）のアミノ酸配列
（L2-K1）配列番号７１（DVN）のアミノ酸配列
（L2-K2）配列番号７１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-K3）配列番号７１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-K）下記（L3-K1）、（L3-K2）または（L3-K3）のアミノ酸配列
（L3-K1）配列番号７２（SSYAGSNSV）のアミノ酸配列
（L3-K2）配列番号７２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-K3）配列番号７２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１１）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、例えば、下記（H-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LK）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-K）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（H-B）下記（H-B1）、（H-B2）または（H-B3）のアミノ酸配列
（H-B1）配列番号２４のアミノ酸配列
配列番号２４：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
（H-B2）配列番号２４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H-B3）配列番号２４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L-K）下記（L-K1）、（L-K2）または（L-K3）のアミノ酸配列
（L-K1）配列番号７３のアミノ酸配列
配列番号７３：QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYDFVSWYQQHPGEAPKLLVYDVNNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYCSSYAGSNSVFGTGTKVTVL
（L-K2）配列番号７３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-K3）配列番号７３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（H-B1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-B1）、ＣＤＲＨ２の（H2-B1）、およびＣＤＲＨ３の（H3-B1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（H-B2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-B1）、ＣＤＲＨ２の（H2-B1）、およびＣＤＲＨ３（H3-B1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（H-B3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-B1）、ＣＤＲＨ２の（H2-B1）、およびＣＤＲＨ３（H3-B1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　前記（L-K1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-K1）、ＣＤＲＬ２の（L2-K1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-K1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-K2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-K1）、ＣＤＲＬ２の（L2-K1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-K1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号７３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-K3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-K1）、ＣＤＲＬ２の（L2-K1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-K1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号７３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-B1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-K1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体3M4E5H-L1」ともいう。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１２）
　組合せ（１２）の抗体等は、例えば、抗体3M4E5H-L66群ともいう。前記組合せ（１２）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LL）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-L）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-L）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-L）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-L）下記（L1-L1）、（L1-L2）または（L1-L3）のアミノ酸配列
（L1-L1）配列番号７４（SSDVGGYEF）のアミノ酸配列
（L1-L2）配列番号７４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-L3）配列番号７４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-L）下記（L2-L1）、（L2-L2）または（L2-L3）のアミノ酸配列
（L2-L1）配列番号７５（DVI）のアミノ酸配列
（L2-L2）配列番号７５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-L3）配列番号７５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-L）下記（L3-L1）、（L3-L2）または（L3-L3）のアミノ酸配列
（L3-L1）配列番号７６（SSYTSSSTYV）のアミノ酸配列
（L3-L2）配列番号７６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-L3）配列番号７６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１２）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LL）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-L）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-L）下記（L-L1）、（L-L2）または（L-L3）のアミノ酸配列
（L-L1）配列番号７７のアミノ酸配列
配列番号７７：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYEFVSWYQQHPGSAPKLIIYDVIERPFGVSYRFSASKSGNTASLTISGLQGEDEADYFCSSYTSSSTYVFGTGTKVTVL
（L-L2）配列番号７７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-L3）配列番号７７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-L1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-L1）、ＣＤＲＬ２の（L2-L1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-L1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-L2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-L1）、ＣＤＲＬ２の（L2-L1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-L1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号７７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-L3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-L1）、ＣＤＲＬ２の（L2-L1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-L1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号７７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-B1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-L1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体3M4E5H-L66」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１３）
　組合せ（１３）の抗体等は、例えば、抗体3M4E5H-L73群ともいう。前記組合せ（１３）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LM）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-M）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-M）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-M）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-M）下記（L1-M1）、（L1-M2）または（L1-M3）のアミノ酸配列
（L1-M1）配列番号７８（GSDVGAYDY）のアミノ酸配列
（L1-M2）配列番号７８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-M3）配列番号７８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-M）下記（L2-M1）、（L2-M2）または（L2-M3）のアミノ酸配列
（L2-M1）配列番号７９（DVS）のアミノ酸配列
（L2-M2）配列番号７９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-M3）配列番号７９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-M）下記（L3-M1）、（L3-M2）または（L3-M3）のアミノ酸配列
（L3-M1）配列番号８０（SSYSGSSTWV）のアミノ酸配列
（L3-M2）配列番号８０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-M3）配列番号８０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１３）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LM）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-M）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-M）下記（L-M1）、（L-M2）または（L-M3）のアミノ酸配列
（L-M1）配列番号８１のアミノ酸配列
配列番号８１：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGAYDYVSWYQHHPGRAPRLIIRDVSVRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYSGSSTWVFGGGTKLTVL
（L-M2）配列番号８１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-M3）配列番号８１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-M1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-M1）、ＣＤＲＬ２の（L2-M1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-M1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-M2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-M1）、ＣＤＲＬ２の（L2-M1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-M1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号８１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-M3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-M1）、ＣＤＲＬ２の（L2-M1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-M1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号８１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-B1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-M1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体3M4E5H-L73」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１４）
　組合せ（１４）の抗体等は、例えば、抗体3M4E5H-L80群ともいう。前記組合せ（１４）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LN）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-N）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-N）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-N）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-N）下記（L1-N1）、（L1-N2）または（L1-N3）のアミノ酸配列
（L1-N1）配列番号８２（SSDVGSYNL）のアミノ酸配列
（L1-N2）配列番号８２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-N3）配列番号８２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-N）下記（L2-N1）、（L2-N2）または（L2-N3）のアミノ酸配列
（L2-N1）配列番号８３（DVS）のアミノ酸配列
（L2-N2）配列番号８３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-N3）配列番号８３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-N）下記（L3-N1）、（L3-N2）または（L3-N3）のアミノ酸配列
（L3-N1）配列番号８４（SSYTSSSTFAV）のアミノ酸配列
（L3-N2）配列番号８４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-N3）配列番号８４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１４）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LN）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-N）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-N）下記（L-N1）、（L-N2）または（L-N3）のアミノ酸配列
（L-N1）配列番号８５のアミノ酸配列
配列番号８５：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSYRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTFAVFGGGTQLTVL
（L-N2）配列番号８５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-N3）配列番号８５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-N1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-N1）、ＣＤＲＬ２の（L2-N1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-N1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-N2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-N1）、ＣＤＲＬ２の（L2-N1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-N1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号８５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-N3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-N1）、ＣＤＲＬ２の（L2-N1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-N1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号８５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-B1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-N1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体3M4E5H-L80」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１５）
　組合せ（１５）の抗体等は、例えば、抗体3M4E5H-L88群ともいう。前記組合せ（１５）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LO）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-O）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-O）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-O）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-O）下記（L1-O1）、（L1-O2）または（L1-O3）のアミノ酸配列
（L1-O1）配列番号８６（SSDVGGYNY）のアミノ酸配列
（L1-O2）配列番号８６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-O3）配列番号８６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-O）下記（L2-O1）、（L2-O2）または（L2-O3）のアミノ酸配列
（L2-O1）配列番号８７（DVS）のアミノ酸配列
（L2-O2）配列番号８７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-O3）配列番号８７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-O）下記（L3-O1）、（L3-O2）または（L3-O3）のアミノ酸配列
（L3-O1）配列番号８８（CSYAGGYYV）のアミノ酸配列
（L3-O2）配列番号８８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-O3）配列番号８８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１５）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LO）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-O）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-O）下記（L-O1）、（L-O2）または（L-O3）のアミノ酸配列
（L-O1）配列番号８９のアミノ酸配列
配列番号８９：QSALPQPASVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYFCCSYAGGYYVFGTGTKLTVL
（L-O2）配列番号８９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-O3）配列番号８９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-O1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-O1）、ＣＤＲＬ２の（L2-O1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-O1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-O2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-O1）、ＣＤＲＬ２の（L2-O1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-O1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号８９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-O3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-O1）、ＣＤＲＬ２の（L2-O1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-O1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号８９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-B1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-O1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体3M4E5H-L88」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１６）
　組合せ（１６）の抗体等は、例えば、抗体3M4E5H-L102群ともいう。前記組合せ（１６）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LP）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-P）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-P）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-P）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-P）下記（L1-P1）、（L1-P2）または（L1-P3）のアミノ酸配列
（L1-P1）配列番号９０（SSDVGGYNY）のアミノ酸配列
（L1-P2）配列番号９０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-P3）配列番号９０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-P）下記（L2-P1）、（L2-P2）または（L2-P3）のアミノ酸配列
（L2-P1）配列番号９１（DVS）のアミノ酸配列
（L2-P2）配列番号９１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-P3）配列番号９１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-P）下記（L3-P1）、（L3-P2）または（L3-P3）のアミノ酸配列
（L3-P1）配列番号９２（SSYAGSGSTPFV）のアミノ酸配列
（L3-P2）配列番号９２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-P3）配列番号９２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１６）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LP）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-P）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-P）下記（L-P1）、（L-P2）または（L-P3）のアミノ酸配列
（L-P1）配列番号９３のアミノ酸配列
配列番号９３：QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQTEDEADYYCSSYAGSGSTPFVFGTGTKLTVL
（L-P2）配列番号９３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-P3）配列番号９３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-P1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-P1）、ＣＤＲＬ２の（L2-P1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-P1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-P2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-P1）、ＣＤＲＬ２の（L2-P1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-P1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号９３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-P3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-P1）、ＣＤＲＬ２の（L2-P1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-P1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号９３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-B1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-P1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体3M4E5H-L102」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１７）
　組合せ（１７）の抗体等は、例えば、抗体3M4E5H-L124群ともいう。前記組合せ（１７）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LQ）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-Q）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-Q）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-Q）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-Q）下記（L1-Q1）、（L1-Q2）または（L1-Q3）のアミノ酸配列
（L1-Q1）配列番号９４（SSDVGGYNY）のアミノ酸配列
（L1-Q2）配列番号９４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-Q3）配列番号９４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-Q）下記（L2-Q1）、（L2-Q2）または（L2-Q3）のアミノ酸配列
（L2-Q1）配列番号９５（DVS）のアミノ酸配列
（L2-Q2）配列番号９５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-Q3）配列番号９５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-Q）下記（L3-Q1）、（L3-Q2）または（L3-Q3）のアミノ酸配列
（L3-Q1）配列番号９６（CSYAGRRYV）のアミノ酸配列
（L3-Q2）配列番号９６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-Q3）配列番号９６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１７）において、前記（HB）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LQ）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-Q）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-Q）下記（L-Q1）、（L-Q2）または（L-Q3）のアミノ酸配列
（L-Q1）配列番号９７のアミノ酸配列
配列番号９７：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSRVPDRFAGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGRRYVFGTGTKLTVL
（L-Q2）配列番号９７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-Q3）配列番号９７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-Q1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-Q1）、ＣＤＲＬ２の（L2-Q1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-Q1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-Q2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-Q1）、ＣＤＲＬ２の（L2-Q1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-Q1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号９７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-Q3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-Q1）、ＣＤＲＬ２の（L2-Q1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-Q1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号９７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-B1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-Q1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体3M4E5H-L124」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
組合せ（１８）
　組合せ（１８）の抗体等は、例えば、抗体H73-3M4E5L群ともいう。前記組合せ（１８）において、前記（HC）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、下記（H1-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、下記（H2-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、下記（H3-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LA）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、前記（L1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、前記（L2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、前記（L3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（H1-C）下記（H1-C1）、（H1-C2）または（H1-C3）のアミノ酸配列
（H1-C1）配列番号２５（GGSISSYY）のアミノ酸配列
（H1-C2）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-C3）配列番号２５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2-C）下記（H2-C1）、（H2-C2）または（H2-C3）のアミノ酸配列
（H2-C1）配列番号２６（INHSGST）のアミノ酸配列
（H2-C2）配列番号２６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-C3）配列番号２６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3-C）下記（H3-C1）、（H3-C2）または（H3-C3）のアミノ酸配列
（H3-C1）配列番号２７（ARCPIYYYGMDV）のアミノ酸配列
（H3-C2）配列番号２７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-C3）配列番号２７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（１８）において、前記（HC）の重鎖可変領域は、例えば、下記（H-C）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LA）の軽鎖可変領域は、例えば、前記（L-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（H-C）下記（H-C1）、（H-C2）または（H-C3）のアミノ酸配列
（H-C1）配列番号２８のアミノ酸配列
配列番号２８：QLQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARCPIYYYGMDVWGQGTTVTVSS
（H-C2）配列番号２８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H-C3）配列番号２８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（H-C1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-C1）、ＣＤＲＨ２の（H2-C1）、およびＣＤＲＨ３の（H3-C1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（H-C2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-C1）、ＣＤＲＨ２の（H2-C1）、およびＣＤＲＨ３（H3-C1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（H-C3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-C1）、ＣＤＲＨ２の（H2-C1）、およびＣＤＲＨ３（H3-C1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-C1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-A1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H73-3M4E5L」ともいう。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　本発明において、前記配列番号１７～９７のアミノ酸配列は、例えば、ヒト由来のアミノ酸配列である。
　本発明の抗体等とA2/NY-ESO-1157との結合は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー等の抗体と抗原との結合検出方法より確認できる。
　本発明の抗体等は、例えば、さらに標識物質を有してもよい。前記標識物質は、特に制限されず、例えば、蛍光物質、色素、同位体、酵素等があげられる。前記蛍光物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素、ＦＡＭ色素、ローダミン色素、テキサスレッド色素、ＪＯＥ、ＭＡＸ、ＨＥＸ、ＴＹＥ等の蛍光団があげられ、前記色素は、例えば、Ａｌｅｘａ４８８、Ａｌｅｘａ６４７等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。本発明の抗体等は、医薬用化合物等の低分子化合物により修飾されてもよい。前記低分子化合物は、例えば、チューブリン阻害剤等の抗癌剤があげられる。本発明の抗体等は、例えば、前記低分子化合物に直接または間接的に修飾される。後者の場合、本発明の抗体等は、例えば、リンカーを介して、前記低分子化合物により修飾されている。
　本発明の抗体等は、例えば、担体、多孔質体等に固定化されてもよい。前記担体は、特に制限されず、例えば、基板、ビーズ、容器等があげられ、前記容器は、例えば、マイクロプレート、チューブ等があげられる。
　本発明の抗体等の製造方法は、特に制限されず、例えば、前述のアミノ酸配列情報に基づいて、遺伝子工学的に製造することができる。具体的には、例えば、以下のようにして行うことができる。なお、本発明は、この例示には限定されない。
　まず、本発明の抗体等における、前記各領域、前記重鎖、および／または軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むベクターを宿主に導入し、形質転換体を得る。そして、前記形質転換体を培養し、A2/NY-ESO-1157に結合する抗体を含む画分を回収し、得られた回収画分から、前記抗体を単離または精製する。
　前記ベクターとしては、例えば、前記重鎖可変領域をコードする核酸配列を含むベクター、前記軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含むベクター、前記重鎖をコードする核酸配列を含むベクター、前記軽鎖をコードする核酸配列を含むベクター等があげられる。前記宿主は、特に制限されず、前記ベクターを導入でき、前記ベクター内の前記核酸配列を発現できるものであればよい。前記宿主としては、例えば、ＨＥＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２／０細胞等の哺乳類細胞等があげられる。前記ベクターを宿主に導入する方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。
　前記形質転換体の培養方法は、特に制限されず、前記宿主の種類に応じて、適宜決定できる。前記抗体を含む画分は、例えば、培養した前記形質転換体を破砕し、液体画分として回収できる。前記抗体の単離または精製は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。
　本発明において、前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体である。前記モノクローナル抗体は、例えば、動物への免疫により得られるモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体（完全ヒト抗体ともいう）等があげられる。
　前記キメラ抗体は、ヒト以外の動物由来抗体の可変領域と、ヒト抗体の定常領域とを連結した抗体である。前記キメラ抗体は、例えば、以下のようにして作製できる。まず、ヒト以外の動物由来のモノクローナル抗体について、A2/NY-ESO-1157タンパク質と結合する可変領域（Ｖ領域）の遺伝子を調製し、前記可変領域の遺伝子と、ヒト抗体の定常領域（Ｃ領域）の遺伝子とを連結し、これを、さらに発現ベクターに連結する。そして、前記発現ベクターをトランスフェクトした細胞を培養し、培養液中に分泌される目的のキメラ抗体を回収する。これによりキメラ抗体を調製できる。前記可変領域の遺伝子の由来動物は、特に制限されず、例えば、ラット、マウス等があげられる。前記キメラ抗体の製造方法は、これには制限されず、例えば、特公平３－７３２８０号公報に記載の方法等の、公知の方法を参照して製造できる。
　前記ヒト化抗体は、前記ＣＤＲのみをヒト以外の動物由来とし、他の領域をヒト由来とする抗体である。前記ヒト化抗体は、例えば、以下のようにして製造できる。まず、ヒト以外の動物由来のモノクローナル抗体について、前記ＣＤＲの遺伝子を調製し、ヒト抗体の遺伝子、例えば、定常領域に移植（ＣＤＲグラフティング）し、これを、さらに発現ベクターに連結する。そして、前記発現ベクターをトランスフェクトした細胞を培養することによって、培養液中に、目的のＣＤＲを移植したヒト化抗体が分泌される。分泌されるヒト化抗体を回収することによって、調製できる。前記ＣＤＲの由来動物は、特に制限されず、例えば、ラット、マウス等があげられる。ヒト化抗体の製造方法は、これには限定されず、例えば、特表平４－５０６４５８号公報および特開昭６２－２９６８９０号公報等に記載の方法等の、公知の方法を参照して製造できる。
　前記ヒト抗体は、全ての領域がヒト由来の抗体である。前記ヒト抗体は、例えば、ヒト以外の動物への、ヒト抗体遺伝子の導入によって作製できる。前記ヒト抗体遺伝子を導入する動物は、例えば、ヒト抗体産生用のトランスジェニック動物が使用できる。前記動物の種類は、特に制限されず、マウス等があげられる。前記ヒト抗体の製造方法は、例えば、Nature Genetics, Vol.7, p.13-21, 1994； Nature Genetics, Vol.15, p.146-156, 1997； 特表平４－５０４３６５号公報； 特表平７－５０９１３７号公報； ＷＯ９４／２５５８５号公報； Nature, Vol.368, p.856-859, 1994；および特表平６－５００２３３号公報等に記載の、公知の方法を参照して製造できる。また、前記ヒト抗体は、例えば、ファージディスプレイ法を用いて製造することもでき、例えば、Marks, J. D. et al.: J. Mol. Biol., Vol.222, p.581-597, 1991等に記載の、公知の方法を参照して製造できる。
　本発明の抗体等は、例えば、抗原を動物に免疫することによっても調製できる。前記抗原は、例えば、A2/NY-ESO-1157タンパク質があげられる。前記抗原は、複数回免疫することが好ましい。前記ペプチド断片は、例えば、抗原決定基（エピトープ）のみからなるペプチド断片でもよいし、前記抗原決定基を含むペプチド断片でもよい
　前記動物への免疫により得られるモノクローナル抗体は、例えば、『Current Protocols in Molecular Biology』(John Wiley & Sons (1987))、Antibodies: A Laboratory Manual, Ed. Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory(1988)）等に記載の方法等の、公知の方法を参照して製造できる。具体的には、例えば、抗原で動物を免疫し、前記免疫動物から採取した抗体産生細胞と、自己抗体産生能を欠く骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）とを融合させ、ハイブリドーマを作製する。続いて、前記ハイブリドーマから抗体産生細胞をスクリーニングして、クローニングによりハイブリドーマの単一クローンを作製する。そして、このハイブリドーマクローンを動物に投与し、得られた腹腔からモノクローナル抗体を精製する。または、前記ハイブリドーマを培養して、その培養液からモノクローナル抗体を精製する。このように、前記ハイブリドーマクローンを作製することで、特異性が均一なモノクローナル抗体を安定に供給できる。
　前記骨髄腫細胞は、例えば、マウス、ラット、ヒト等の由来であることが好ましい。前記骨髄腫細胞と前記抗体産生細胞とは、例えば、それぞれの由来が同一種でも異種でもよいが、同一種であることが好ましい。
　本発明の第１の抗体等において、前記（Ｈ）の重鎖可変領域および（Ｌ）の軽鎖可変領域は、下記（Ｈ）の重鎖可変領域および（Ｌ）の軽鎖可変領域であってもよい。
（Ｈ）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
　ＣＤＲＨ１が、下記（H1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ２が、下記（H2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ３が、下記（H3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域；
（H1）下記（H1-1）、（H1-2）または（H1-3）のアミノ酸配列
（H1-1）下記条件（Ｈ１）のＣＤＲＨ１のいずれかのアミノ酸配列
（H1-2）（H1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-3）（H1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
（H2）下記（H2-1）、（H2-2）または（H2-3）のアミノ酸配列
（H2-1）下記条件（Ｈ１）のＣＤＲＨ２のいずれかのアミノ酸配列
（H2-2）（H2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-3）（H2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
（H3）下記（H3-1）、（H3-2）または（H3-3）のアミノ酸配列
（H3-1）下記条件（Ｈ１）のＣＤＲＨ３のいずれかのアミノ酸配列
（H3-2）（H3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-3）（H3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
条件（Ｈ１）
ＣＤＲＨ１は、ＧＸ１Ｘ２Ｘ3ＳＸ４Ｘ５Ｘ６（配列番号３２２）であり、
ＣＤＲＨ２は、Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＳＸ１１ＧＳＴ（配列番号３２３）であり、
ＣＤＲＨ３は、ＡＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６ＧＭＤＶ（配列番号３２４）であり、
Ｘ１は、ＧまたはＦであり、
Ｘ２は、ＳまたはＴであり、
Ｘ３は、ＩまたはＦであり、
Ｘ４は、ＳまたはＴであり、
Ｘ５は、ＮまたはＹであり、
Ｘ６は、ＹまたはＱであり、
Ｘ７は、存在しないか、Ｉであり、
Ｘ８は、ＶまたはＮであり、
Ｘ９は、ＳまたはＨであり、
Ｘ１０は、存在しないか、Ｙであり、
Ｘ１１は、存在しないか、Ｇであり、
Ｘ１２は、ＲまたはＧであり、
Ｘ１３は、ＥまたはＣであり、
Ｘ１４は、Ｓ、Ｌ、またはＰであり、
Ｘ１５は、Ｙ、Ｌ、またはＩであり、
Ｘ１６は、ＹまたはＰである。
（Ｌ）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
　ＣＤＲＬ１が、下記（L1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ２が、下記（L2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ３が、下記（L3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域；
（L1）下記（L1-1）、（L1-2）または（L1-3）のアミノ酸配列
（L1-1）下記条件（Ｌ１）および（Ｌ２）のＣＤＲＬ１のいずれかのアミノ酸配列
（L1-2）（L1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-3）（L1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
（L2）下記（L2-1）、（L2-2）または（L2-3）のアミノ酸配列
（L2-1）下記条件（Ｌ１）および（Ｌ２）のＣＤＲＬ２のいずれかのアミノ酸配列
（L2-2）（L2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-3）（L2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
（L3）下記（L3-1）、（L3-2）または（L3-3）のアミノ酸配列
（L3-1）下記条件（Ｌ１）および（Ｌ２）のＣＤＲＬ３のいずれかのアミノ酸配列
（L3-2）（L3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-3）（L3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
条件（Ｌ１）
ＣＤＲＬ１は、ＱＸ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４（配列番号３１３）であり、
ＣＤＲＬ２は、ＡＡＳ（配列番号３４）またはＧＡＳ（配列番号６３）であり、
ＣＤＲＬ３は、ＱＱＹＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１（配列番号３１４）であり、
Ｘ１は、ＳまたはＤであり、
Ｘ２は、ＩまたはＶであり、
Ｘ３は、ＳまたはＲであり、
Ｘ４は、ＹまたはＮであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｅ、Ｎ、またはＤであり、
Ｘ６は、ＳまたはＮであり、
Ｘ７は、存在しないか、Ｔ、Ｙ、またはＳであり、
Ｘ８は、Ｐ、Ｓ、Ｒ、またはＬであり、
Ｘ９は、Ｑ、Ｒ、Ｐ、またはＩであり、
Ｘ１０は、存在しないか、ＳまたはＣであり、
Ｘ１１は、存在しないか、Ｔである；
条件（Ｌ２）
ＣＤＲＬ１は、Ｘ１Ｘ２ＤＶＧＸ3ＹＸ４Ｘ５（配列番号３１５）であり、
ＣＤＲＬ２は、ＤＶＮ（配列番号７１）、ＤＶＩ（配列番号７５）、またはＤＶＳ（配列番号７９）であり、
ＣＤＲＬ３は、Ｘ６ＳＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｖ（配列番号３１６）であり、
Ｘ１は、ＳまたはＧであり、
Ｘ２は、ＲまたはＳであり、
Ｘ３は、Ｇ、Ａ、またはＳであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｄ、Ｅ、またはＱであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｆ、Ｌ、またはＷであり、
Ｘ６は、Ｗ、Ｓ、またはＣであり、
Ｘ７は、Ｆ、Ｙ、またはＷであり、
Ｘ８は、存在しないか、ＡまたはＴであり、
Ｘ９は、存在しないか、Ｇであり、
Ｘ１０は、存在しないか、Ｓであり、
Ｘ１１は、ＧまたはＳであり、
Ｘ１２は、存在しないか、Ｓであり、
Ｘ１３は、Ｓ、Ｔ、またはＲであり、
Ｘ１４は、Ｙ、Ｎ、Ｔ、Ｆ、Ｐ、またはＲであり、
Ｘ１５は、Ｙ、Ｓ、Ｗ、Ａ、またはＦである。
　前記条件（Ｈ１）を満たす重鎖可変領域としては、例えば、前記（HA）、（HB）および（HC）の重鎖可変領域があげられる。
　前記（Ｌ）の軽鎖可変領域において、（L1-1）、（L2-1）、および（L3-1）は、条件（Ｌ１）および（Ｌ２）において同一の条件または異なる条件を満たすが、同一の条件を満たすことが好ましい。
　条件（Ｌ１）において、Ｘ７は、存在しないか、Ｔ、またはＹが好ましい。
　条件（Ｌ２）において、Ｘ４は、Ｎ、Ｄ、またはＥが好ましい。Ｘ５は、Ｙ、Ｆ、またはＬが好ましい。Ｘ７は、ＦまたはＹが好ましい。
　前記条件（Ｌ１）を満たす軽鎖可変領域としては、例えば、前記（LB）～（LJ）の軽鎖可変領域があげられる。
　前記条件（Ｌ２）を満たす軽鎖可変領域としては、例えば、前記（LA）および（LK）～（LQ）の軽鎖可変領域があげられる。
　前記（Ｈ）の重鎖可変領域および（Ｌ）の軽鎖可変領域において、前記（Ｈ）の重鎖可変領域のＣＤＲＨ１がＧＦＴＦＳＴＹＱ（配列番号２１）であり、ＣＤＲＨ２がＩＶＳＳＧＧＳＴ（配列番号２２）であり、ＣＤＲＨ３がＡＧＥＬＬＰＹＹＧＭＤＶ（配列番号２３）である場合、前記（Ｌ）の軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１が、ＳＲＤＶＧＧＹＮＹ（配列番号２９）であり、ＣＤＲＬ２がＤＶＩ（配列番号３０）であり、ＣＤＲＬ３がＷＳＦＡＧＳＹＹＶ（配列番号３１）以外のアミノ酸配列であることが好ましい。
＜第２の抗体またはその抗原結合断片＞
　本発明のＣＤ１９に対する抗体またはその抗原結合断片（以下、「第２の抗体等」ともいう）は、下記（Ｈ）の重鎖可変領域と、下記（Ｌ）の軽鎖可変領域とを含む。本発明の抗体等は、下記（Ｈ）の重鎖可変領域と、下記（Ｌ）の軽鎖可変領域とを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の抗体等は、ＣＤ１９に結合する。また、ＣＤ１９は、例えば、正常なＢ細胞およびＢ細胞系のリンパ腫等の特定のがん細胞に発現することが知られている。このため、本発明の抗体等は、例えば、ＣＤ１９発現がん細胞に対する二重特異性抗体、ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲの抗原結合ドメイン等として好適に使用できる。前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体またはその抗原結合断片等の説明を援用できる。
（Ｈ）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
　ＣＤＲＨ１が、下記（H1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ２が、下記（H2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ３が、下記（H3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（H1）下記（H1-1）、（H1-2）または（H1-3）のアミノ酸配列
（H1-1）下記表３ＡのＣＤＲＨ１のいずれかのアミノ酸配列
（H1-2）（H1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-3）（H1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2）下記（H2-1）、（H2-2）または（H2-3）のアミノ酸配列
（H2-1）下記表３ＡのＣＤＲＨ２のいずれかのアミノ酸配列
（H2-2）（H2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-3）（H2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3）下記（H3-1）、（H3-2）または（H3-3）のアミノ酸配列
（H3-1）下記表３ＡのＣＤＲＨ３のいずれかのアミノ酸配列
（H3-2）（H3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-3）（H3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
　ＣＤＲＬ１が、下記（L1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ２が、下記（L2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ３が、下記（L3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（L1）下記（L1-1）、（L1-2）または（L1-3）のアミノ酸配列
（L1-1）下記表３ＢのＣＤＲＬ１のいずれかのアミノ酸配列
（L1-2）（L1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-3）（L1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2）下記（L2-1）、（L2-2）または（L2-3）のアミノ酸配列
（L2-1）下記表３ＢのＣＤＲＬ２のいずれかのアミノ酸配列
（L2-2）（L2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-3）（L2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3）下記（L3-1）、（L3-2）または（L3-3）のアミノ酸配列
（L3-1）下記表３ＢのＣＤＲＬ３のいずれかのアミノ酸配列
（L3-2）（L3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-3）（L3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　本発明において、「ＣＤ１９」は、例えば、分子量９５ｋＤａのＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ１９は、例えば、Ｂ細胞の発生、活性化、分化の調整等に関与することがしられており、Ｂ細胞に主に発現している。ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１７７０．６で登録されているアミノ酸配列があげられる。マウスＣＤ１９のアミノ酸配列は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００９８４４．２で登録されているアミノ酸配列があげられる。
　前記（Ｈ）の重鎖可変領域において、前記ＣＤＲＨ１は、前記（HA）におけるＣＤＲＨ１である。前記ＣＤＲＨ２は、前記（HA）におけるＣＤＲＨ２である。前記ＣＤＲＨ３は、前記（HA）におけるＣＤＲＨ３である。
　前記（Ｌ）の軽鎖可変領域において、前記ＣＤＲＬ１は、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１である。前記ＣＤＲＬ２は、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ２である。前記ＣＤＲＬ３は、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ３である。
　前記ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記（LA）～（LL）および（LM）において、同一の条件を満たしてもよいし、異なる条件を満たしてもよいが、同一の条件を満たすことが好ましい。前記ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３が同一の条件を満たす場合、前記ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記（LA）～（LL）および（LM）のいずれか１つのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を満たす。
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、例えば、比較する配列同士を適切にアライメントしたときの同一性の程度であり、前記配列間のアミノ酸の正確な一致の出現率（％）を意味する。前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記同一性は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記アミノ酸の置換は、例えば、保存的置換であってもよい（以下、同様）。前記保存的置換は、タンパク質の機能を実質的に改変しないように、１個または数個のアミノ酸を、他のアミノ酸および／またはアミノ酸誘導体に置換することを意味する。「置換するアミノ酸」と「置換されるアミノ酸」とは、例えば、性質および／または機能が類似していることが好ましい。具体的には、例えば、疎水性および親水性の指標（ハイドロパシー）、極性、電荷等の化学的性質、または、二次構造等の物理的性質等が類似していることが好ましい。前記性質および／または機能が類似するアミノ酸またはアミノ酸誘導体は、例えば、当該技術分野において公知である。具体例として、非極性アミノ酸（疎水性アミノ酸）は、例えば、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン等があげられ、極性アミノ酸（中性アミノ酸）は、グリシン、セリン、スレオニン、チロシン、グルタミン、アスパラギン、システイン等があげられ、陽電荷を有するアミノ酸（塩基性アミノ酸）は、アルギニン、ヒスチジン、リジン等があげられ、負電荷を有するアミノ酸（酸性アミノ酸）は、アスパラギン酸、グルタミン酸等があげられる。
　前記（Ｌ）の軽鎖可変領域において、前記（L1-1）、（L2-1）および（L3-1）の組合せは、特に制限されず、例えば、それぞれ、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１と、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ２と、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ３との任意の組合せとできる。前記（L1-1）、（L2-1）および（L3-1）の組合せは、好ましくは、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３である。
　以下に、本発明の抗体等について、前記重鎖可変領域または重鎖と前記軽鎖可変領域または軽鎖との組合せについてより具体的に説明する。各組合せにおける重鎖可変領域および重鎖の説明は、互いに援用できる。また、各組合せにおける軽鎖可変領域および軽鎖の説明は、互いに援用できる。また、以下に示すアミノ酸配列および塩基配列において、下線で示すアミノ酸配列および塩基配列は、特に言及しない限り、ＣＤＲに対応するアミノ酸配列およびＣＤＲに対応するアミノ酸配列をコードする塩基配列である。
　本発明の抗体等において、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域との組合せは、例えば、前述のように、前記（HA）と、前記（LA）～（LL）および（LM）におけるいずれか１つの組合せである。
（HA）と（LA）と組合せ（組合せ（LA））
　組合せ（LA）の抗体等は、例えば、抗体18H-L4群ともいう。前記組合せ（LA）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、下記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、下記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、下記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LA）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（H1-A）下記（H1-A1）、（H1-A2）または（H1-A3）のアミノ酸配列
（H1-A1）配列番号２１６（GFTFDDYA）のアミノ酸配列
（H1-A2）配列番号２１６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-A3）配列番号２１６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2-A）下記（H2-A1）、（H2-A2）または（H2-A3）のアミノ酸配列
（H2-A1）配列番号２１７（ISWNSGRI）のアミノ酸配列
（H2-A2）配列番号２１７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-A3）配列番号２１７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3-A）下記（H3-A1）、（H3-A2）または（H3-A3）のアミノ酸配列
（H3-A1）配列番号２１８（ARDQGYHYYDSAEHAFDI）のアミノ酸配列
（H3-A2）配列番号２１８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-A3）配列番号２１８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L1-A）下記（L1-A1）、（L1-A2）または（L1-A3）のアミノ酸配列
（L1-A1）配列番号２２０（KLGDKY）のアミノ酸配列
（L1-A2）配列番号２２０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-A3）配列番号２２０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-A）下記（L2-A1）、（L2-A2）または（L2-A3）のアミノ酸配列
（L2-A1）配列番号２２１（QDS）のアミノ酸配列
（L2-A2）配列番号２２１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-A3）配列番号２２１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-A）下記（L3-A1）、（L3-A2）または（L3-A3）のアミノ酸配列
（L3-A1）配列番号２２２（QAWDSSTHVV）のアミノ酸配列
（L3-A2）配列番号２２２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-A3）配列番号２２２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LA）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、下記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LA）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（H-A）下記（H-A1）、（H-A2）または（H-A3）のアミノ酸配列
（H-A1）配列番号２１９のアミノ酸配列
配列番号２１９：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
（H-A2）配列番号２１９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H-A3）配列番号２１９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L-A）下記（L-A1）、（L-A2）または（L-A3）のアミノ酸配列
（L-A1）配列番号２２３のアミノ酸配列
配列番号２２３：SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTHVVFGGGTKLTVL
（L-A2）配列番号２２３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-A3）配列番号２２３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（H-A1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-A1）、ＣＤＲＨ２の（H2-A1）、およびＣＤＲＨ３の（H3-A1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（H-A2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-A1）、ＣＤＲＨ２の（H2-A1）、およびＣＤＲＨ３（H3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２１９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（H-A3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＨ１の（H1-A1）、ＣＤＲＨ２の（H2-A1）、およびＣＤＲＨ３（H3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２１９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　前記（L-A1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-A1）、ＣＤＲＬ２の（L2-A1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-A1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-A2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-A1）、ＣＤＲＬ２の（L2-A1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２２３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-A3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-A1）、ＣＤＲＬ２の（L2-A1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-A1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２２３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-A1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L4」ともいう。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記重鎖可変領域のポリペプチドおよび前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LB）との組合せ（組合せ（LB））
　組合せ（LB）の抗体等は、例えば、抗体18H-L7群ともいう。前記組合せ（LB）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LB）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-B）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-B）下記（L1-B1）、（L1-B2）または（L1-B3）のアミノ酸配列
（L1-B1）配列番号２２４（SSDVGGYNY）のアミノ酸配列
（L1-B2）配列番号２２４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-B3）配列番号２２４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-B）下記（L2-B1）、（L2-B2）または（L2-B3）のアミノ酸配列
（L2-B1）配列番号２２５（DVS）のアミノ酸配列
（L2-B2）配列番号２２５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-B3）配列番号２２５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-B）下記（L3-B1）、（L3-B2）または（L3-B3）のアミノ酸配列
（L3-B1）配列番号２２６（GTWDTSLTAVV）のアミノ酸配列
（L3-B2）配列番号２２６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-B3）配列番号２２６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LB）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LB）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-B）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-B）下記（L-B1）、（L-B2）または（L-B3）のアミノ酸配列
（L-B1）配列番号２２７のアミノ酸配列
配列番号２２７：QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTGDEADYYCGTWDTSLTAVVFGGGTELTVL
（L-B2）配列番号２２７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-B3）配列番号２２７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-B1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-B1）、ＣＤＲＬ２の（L2-B1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-B1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-B2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-B1）、ＣＤＲＬ２の（L2-B1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-B1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２２７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-B3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-B1）、ＣＤＲＬ２の（L2-B1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-B1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２２７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-B1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L7」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LC）との組合せ（組合せ（LC））
　組合せ（LC）の抗体等は、例えば、抗体18H-L9群ともいう。前記組合せ（LC）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LC）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-C）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-C）下記（L1-C1）、（L1-C2）または（L1-C3）のアミノ酸配列
（L1-C1）配列番号２２８（WSNIGDDH）のアミノ酸配列
（L1-C2）配列番号２２８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-C3）配列番号２２８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-C）下記（L2-C1）、（L2-C2）または（L2-C3）のアミノ酸配列
（L2-C1）配列番号２２９（DTS）のアミノ酸配列
（L2-C2）配列番号２２９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-C3）配列番号２２９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-C）下記（L3-C1）、（L3-C2）または（L3-C3）のアミノ酸配列
（L3-C1）配列番号２３０（GTWESSLSGVV）のアミノ酸配列
（L3-C2）配列番号２３０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-C3）配列番号２３０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LC）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LC）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-C）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-C）下記（L-C1）、（L-C2）または（L-C3）のアミノ酸配列
（L-C1）配列番号２３１のアミノ酸配列
配列番号２３１：QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSWSNIGDDHVSWYQQFPGAAPKLLIYDTSKRPSRVADRFSGSKSGASATLAITGLQAGDEADYYCGTWESSLSGVVFGGGTELTVL
（L-C2）配列番号２３１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-C3）配列番号２３１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-C1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-C1）、ＣＤＲＬ２の（L2-C1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-C1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-C2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-C1）、ＣＤＲＬ２の（L2-C1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-C1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２３１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-C3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-C1）、ＣＤＲＬ２の（L2-C1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-C1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２３１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-C1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L9」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LD）との組合せ（組合せ（LD））
　組合せ（LC）の抗体等は、例えば、抗体18H-L13群ともいう。前記組合せ（LD）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LD）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-D）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-D）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-D）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-D）下記（L1-D1）、（L1-D2）または（L1-D3）のアミノ酸配列
（L1-D1）配列番号２３２（SSDVGGYDY）のアミノ酸配列
（L1-D2）配列番号２３２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-D3）配列番号２３２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-D）下記（L2-D1）、（L2-D2）または（L2-D3）のアミノ酸配列
（L2-D1）配列番号２３３（DVT）のアミノ酸配列
（L2-D2）配列番号２３３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-D3）配列番号２３３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-D）下記（L3-D1）、（L3-D2）または（L3-D3）のアミノ酸配列
（L3-D1）配列番号２３４（SSYTTSTTWV）のアミノ酸配列
（L3-D2）配列番号２３４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-D3）配列番号２３４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LD）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LD）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-D）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-D）下記（L-D1）、（L-D2）または（L-D3）のアミノ酸配列
（L-D1）配列番号２３５のアミノ酸配列
配列番号２３５：QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTGDEADYYCGTWDTSLTAVVFGGGTELTVL
（L-D2）配列番号２３５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-D3）配列番号２３５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-D1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-D2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２３５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-D3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-D1）、ＣＤＲＬ２の（L2-D1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-D1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２３５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-D1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L13」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LE）との組合せ（組合せ（LE））
　組合せ（LE）の抗体等は、例えば、抗体18H-L14群ともいう。前記組合せ（LE）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LE）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-E）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-E）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-E）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-E）下記（L1-E1）、（L1-E2）または（L1-E3）のアミノ酸配列
（L1-E1）配列番号２３６（TSDVGTTNY）のアミノ酸配列
（L1-E2）配列番号２３６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-E3）配列番号２３６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-E）下記（L2-E1）、（L2-E2）または（L2-E3）のアミノ酸配列
（L2-E1）配列番号２３７（DVT）のアミノ酸配列
（L2-E2）配列番号２３７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-E3）配列番号２３７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-E）下記（L3-E1）、（L3-E2）または（L3-E3）のアミノ酸配列
（L3-E1）配列番号２３８（SYAGSYTFVV）のアミノ酸配列
（L3-E2）配列番号２３８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-E3）配列番号２３８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LE）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LE）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-E）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-E）下記（L-E1）、（L-E2）または（L-E3）のアミノ酸配列
（L-E1）配列番号２３９のアミノ酸配列
配列番号２３９：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGTTNYVSWYQQHPGKAPKLLIYDVTNRPSGVPDRFSGSKSANTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGSYTFVVFGGGTELTVL
（L-E2）配列番号２３９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-E3）配列番号２３９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-E1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-E1）、ＣＤＲＬ２の（L2-E1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-E1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-E2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-E1）、ＣＤＲＬ２の（L2-E1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-E1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２３９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-E3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-E1）、ＣＤＲＬ２の（L2-E1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-E1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２３９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-E1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L14」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LF）との組合せ（組合せ（LF））
　組合せ（LF）の抗体等は、例えば、抗体18H-L16群ともいう。前記組合せ（LF）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LF）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-F）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-F）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-F）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-F）下記（L1-F1）、（L1-F2）または（L1-F3）のアミノ酸配列
（L1-F1）配列番号２４０（SSDVGVYNY）のアミノ酸配列
（L1-F2）配列番号２４０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-F3）配列番号２４０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-F）下記（L2-F1）、（L2-F2）または（L2-F3）のアミノ酸配列
（L2-F1）配列番号２４１（DVS）のアミノ酸配列
（L2-F2）配列番号２４１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-F3）配列番号２４１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-F）下記（L3-F1）、（L3-F2）または（L3-F3）のアミノ酸配列
（L3-F1）配列番号２４２（AAWDDSLNGVV）のアミノ酸配列
（L3-F2）配列番号２４２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-F3）配列番号２４２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LF）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LF）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-F）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-F）下記（L-F1）、（L-F2）または（L-F3）のアミノ酸配列
（L-F1）配列番号２４３のアミノ酸配列
配列番号２４３：QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGVYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSANTASLTISGLQAEDEADYYCAAWDDSLNGVVFGGGTQLTVL
（L-F2）配列番号２４３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-F3）配列番号２４３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-F1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-F1）、ＣＤＲＬ２の（L2-F1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-F1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-F2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-F1）、ＣＤＲＬ２の（L2-F1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-F1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２４３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-F3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-F1）、ＣＤＲＬ２の（L2-F1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-F1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２４３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-F1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L16」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LG）との組合せ（組合せ（LG））
　組合せ（LG）の抗体等は、例えば、抗体18H-L17群ともいう。前記組合せ（LG）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LG）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-G）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-G）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-G）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-G）下記（L1-G1）、（L1-G2）または（L1-G3）のアミノ酸配列
（L1-G1）配列番号２４４（SSNIGNNY）のアミノ酸配列
（L1-G2）配列番号２４４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-G3）配列番号２４４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-G）下記（L2-G1）、（L2-G2）または（L2-G3）のアミノ酸配列
（L2-G1）配列番号２４５（DNV）のアミノ酸配列
（L2-G2）配列番号２４５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-G3）配列番号２４５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-G）下記（L3-G1）、（L3-G2）または（L3-G3）のアミノ酸配列
（L3-G1）配列番号２４６（AAWDDSLSAI）のアミノ酸配列
（L3-G2）配列番号２４６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-G3）配列番号２４６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LG）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LG）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-G）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-G）下記（L-G1）、（L-G2）または（L-G3）のアミノ酸配列
（L-G1）配列番号２４７のアミノ酸配列
配列番号２４７：QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNYVCWYQHLPGTAPKLLIYDNVKRPSGIPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAIFGGGTELTVL
（L-G2）配列番号２４７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-G3）配列番号２４７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-G1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-G1）、ＣＤＲＬ２の（L2-G1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-G1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-G2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-G1）、ＣＤＲＬ２の（L2-G1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-G1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２４７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-G3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-G1）、ＣＤＲＬ２の（L2-G1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-G1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２４７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-G1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L17」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LH）との組合せ（組合せ（LH））
　組合せ（LH）の抗体等は、例えば、抗体18H-L22群ともいう。前記組合せ（LH）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LH）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-H）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-H）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-H）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-H）下記（L1-H1）、（L1-H2）または（L1-H3）のアミノ酸配列
（L1-H1）配列番号２４８（SSDVGGYNY）のアミノ酸配列
（L1-H2）配列番号２４８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-H3）配列番号２４８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-H）下記（L2-H1）、（L2-H2）または（L2-H3）のアミノ酸配列
（L2-H1）配列番号２４９（DVS）のアミノ酸配列
（L2-H2）配列番号２４９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-H3）配列番号２４９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-H）下記（L3-H1）、（L3-H2）または（L3-H3）のアミノ酸配列
（L3-H1）配列番号２５０（HSYDSSLSHV）のアミノ酸配列
（L3-H2）配列番号２５０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-H3）配列番号２５０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LH）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LH）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-H）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-H）下記（L-H1）、（L-H2）または（L-H3）のアミノ酸配列
（L-H1）配列番号２５１のアミノ酸配列
配列番号２５１：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCHSYDSSLSHVFGTGTKVTVL
（L-H2）配列番号２５１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-H3）配列番号２５１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-H1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-H1）、ＣＤＲＬ２の（L2-H1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-H1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-H2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-H1）、ＣＤＲＬ２の（L2-H1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-H1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２５１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-H3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-H1）、ＣＤＲＬ２の（L2-H1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-H1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２５１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-H1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-L22」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LI）との組合せ（組合せ（LI））
　組合せ（LI）の抗体等は、例えば、抗体H1-K4群ともいう。前記組合せ（LI）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LI）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-I）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-I）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-I）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-I）下記（L1-I1）、（L1-I2）または（L1-I3）のアミノ酸配列
（L1-I1）配列番号２５２（QSVSSN）のアミノ酸配列
（L1-I2）配列番号２５２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-I3）配列番号２５２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-I）下記（L2-I1）、（L2-I2）または（L2-I3）のアミノ酸配列
（L2-I1）配列番号２５３（GAS）のアミノ酸配列
（L2-I2）配列番号２５３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-I3）配列番号２５３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-I）下記（L3-I1）、（L3-I2）または（L3-I3）のアミノ酸配列
（L3-I1）配列番号２５４（QQYNNWPPLYT）のアミノ酸配列
（L3-I2）配列番号２５４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-I3）配列番号２５４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LI）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LI）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-I）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-I）下記（L-I1）、（L-I2）または（L-I3）のアミノ酸配列
（L-I1）配列番号２５５のアミノ酸配列
配列番号２５５：EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPLYTFGQGTKLEIK
（L-I2）配列番号２５５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-I3）配列番号２５５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-I1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-I1）、ＣＤＲＬ２の（L2-I1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-I1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-I2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-I1）、ＣＤＲＬ２の（L2-I1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-I1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２５５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-I3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-I1）、ＣＤＲＬ２の（L2-I1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-I1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２５５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-I1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体H1-K4」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LJ）との組合せ（組合せ（LJ））
　組合せ（LJ）の抗体等は、例えば、抗体18H-K5群ともいう。前記組合せ（LJ）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LJ）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-J）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-J）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-J）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-J）下記（L1-J1）、（L1-J2）または（L1-J3）のアミノ酸配列
（L1-J1）配列番号２５６（QSVSSY）のアミノ酸配列
（L1-J2）配列番号２５６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-J3）配列番号２５６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-J）下記（L2-J1）、（L2-J2）または（L2-J3）のアミノ酸配列
（L2-J1）配列番号２５７（DAS）のアミノ酸配列
（L2-J2）配列番号２５７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-J3）配列番号２５７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-J）下記（L3-J1）、（L3-J2）または（L3-J3）のアミノ酸配列
（L3-J1）配列番号２５８（QQSYSTLLYT）のアミノ酸配列
（L3-J2）配列番号２５８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-J3）配列番号２５８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LJ）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LJ）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-J）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-J）下記（L-J1）、（L-J2）または（L-J3）のアミノ酸配列
（L-J1）配列番号２５９のアミノ酸配列
配列番号２５９：EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQSYSTLLYTFGQGTKLEIK
（L-J2）配列番号２５９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-J3）配列番号２５９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-J1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-J1）、ＣＤＲＬ２の（L2-J1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-J1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-J2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-J1）、ＣＤＲＬ２の（L2-J1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-J1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２５９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-J3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-J1）、ＣＤＲＬ２の（L2-J1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-J1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２５９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-J1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-K5」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LK）との組合せ（組合せ（LK））
　組合せ（LK）の抗体等は、例えば、抗体18H-K6群ともいう。前記組合せ（LK）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LK）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-K）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-K）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-K）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-K）下記（L1-K1）、（L1-K2）または（L1-K3）のアミノ酸配列
（L1-K1）配列番号２６０（QSVSSY）のアミノ酸配列
（L1-K2）配列番号２６０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-K3）配列番号２６０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-K）下記（L2-K1）、（L2-K2）または（L2-K3）のアミノ酸配列
（L2-K1）配列番号２６１（DAS）のアミノ酸配列
（L2-K2）配列番号２６１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-K3）配列番号２６１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-K）下記（L3-K1）、（L3-K2）または（L3-K3）のアミノ酸配列
（L3-K1）配列番号２６２（QQYDSLPLT）のアミノ酸配列
（L3-K2）配列番号２６２のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-K3）配列番号２６２のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LK）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LK）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-K）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-K）下記（L-K1）、（L-K2）または（L-K3）のアミノ酸配列
（L-K1）配列番号２６３のアミノ酸配列
配列番号２６３：EIVLTRSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGISARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDIATYYCQQYDSLPLTFGGGTKLEIK
（L-K2）配列番号２６３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-K3）配列番号２６３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-K1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-K1）、ＣＤＲＬ２の（L2-K1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-K1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-K2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-K1）、ＣＤＲＬ２の（L2-K1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-K1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２６３のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-K3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-K1）、ＣＤＲＬ２の（L2-K1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-K1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２６３のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-K1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-K6」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LL）との組合せ（組合せ（LL））
　組合せ（LL）の抗体等は、例えば、抗体18H-K9群ともいう。前記組合せ（LL）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LL）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-L）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-L）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-L）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-L）下記（L1-L1）、（L1-L2）または（L1-L3）のアミノ酸配列
（L1-L1）配列番号２６４（QTISASS）のアミノ酸配列
（L1-L2）配列番号２６４のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-L3）配列番号２６４のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-L）下記（L2-L1）、（L2-L2）または（L2-L3）のアミノ酸配列
（L2-L1）配列番号２６５（GAS）のアミノ酸配列
（L2-L2）配列番号２６５のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-L3）配列番号２６５のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-L）下記（L3-L1）、（L3-L2）または（L3-L3）のアミノ酸配列
（L3-L1）配列番号２６６（QQFNEWPLT）のアミノ酸配列
（L3-L2）配列番号２６６のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-L3）配列番号２６６のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LL）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LL）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-L）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-L）下記（L-L1）、（L-L2）または（L-L3）のアミノ酸配列
（L-L1）配列番号２６７のアミノ酸配列
配列番号２６７：EIVLTQSPATLSLSPGERATVSCRPSQTISASSVAWYQQKAGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFNEWPLTFGGGTKVEIK
（L-L2）配列番号２６７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-L3）配列番号２６７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-L1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-L1）、ＣＤＲＬ２の（L2-L1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-L1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-L2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-L1）、ＣＤＲＬ２の（L2-L1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-L1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２６７のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-L3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-L1）、ＣＤＲＬ２の（L2-L1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-L1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２６７のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-L1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-K9」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
（HA）と（LM）との組合せ（組合せ（LM））
　組合せ（LM）の抗体等は、例えば、抗体18H-K10群ともいう。前記組合せ（LM）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１が、前記（H1-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ２が、前記（H2-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＨ３が、前記（H3-A）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。また、前記（LM）の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１が、下記（L1-M）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ２が、下記（L2-M）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、ＣＤＲＬ３が、下記（L3-M）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
（L1-M）下記（L1-M1）、（L1-M2）または（L1-M3）のアミノ酸配列
（L1-M1）配列番号２６８（QSVSSN）のアミノ酸配列
（L1-M2）配列番号２６８のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-M3）配列番号２６８のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2-M）下記（L2-M1）、（L2-M2）または（L2-M3）のアミノ酸配列
（L2-M1）配列番号２６９（GAS）のアミノ酸配列
（L2-M2）配列番号２６９のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-M3）配列番号２６９のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3-M）下記（L3-M1）、（L3-M2）または（L3-M3）のアミノ酸配列
（L3-M1）配列番号２７０（QQYGSSPDIFT）のアミノ酸配列
（L3-M2）配列番号２７０のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-M3）配列番号２７０のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記各ＣＤＲにおいて、「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記各ＣＤＲにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記組合せ（LM）において、前記（HA）の重鎖可変領域は、例えば、前記（H-A）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。また、前記（LM）の軽鎖可変領域は、例えば、下記（L-M）のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
（L-M）下記（L-M1）、（L-M2）または（L-M3）のアミノ酸配列
（L-M1）配列番号２７１のアミノ酸配列
配列番号２７１：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKLGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPDIFTFGPGTKVDIK
（L-M2）配列番号２７１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L-M3）配列番号２７１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
　前記（L-M1）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-M1）、ＣＤＲＬ２の（L2-M1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-M1）のアミノ酸配列を含む配列である。前記（L-M2）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-M1）、ＣＤＲＬ２の（L2-M1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-M1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２７１のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。前記（L-M3）のアミノ酸配列は、例えば、ＣＤＲＬ１の（L1-M1）、ＣＤＲＬ２の（L2-M1）、およびＣＤＲＬ３の（L3-M1）のアミノ酸配列を含み、且つ、配列番号２７１のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列であってもよい。
　本発明の抗体は、例えば、前記重鎖可変領域が、前記（H-A1）であり、前記軽鎖可変領域が、前記（L-M1）であり、この組合せの抗体を、以下、「抗体18H-K10」ともいう。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記軽鎖可変領域のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　本発明において、前記配列番号２１６～２７１のアミノ酸配列は、例えば、ヒト由来のアミノ酸配列である。
　本発明の抗体等とＣＤ１９との結合は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー等の抗体と抗原との結合検出方法より確認できる。
　本発明の抗体等は、例えば、標識物質により標識されてもよいし、担体、多孔質体等に固定化されてもよい。前記標識および固定化は、前述の説明を援用できる。
　本発明の抗体等の製造方法は、特に制限されず、例えば、前述のアミノ酸配列情報に基づいて、遺伝子工学的に製造することができる。具体的には、例えば、以下のようにして行うことができる。なお、本発明は、この例示には限定されない。
　まず、本発明の抗体等における、前記各領域、前記重鎖、および／または軽鎖のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むベクターを宿主に導入し、形質転換体を得る。そして、前記形質転換体を培養し、ＣＤ１９に結合する抗体を含む画分を回収し、得られた回収画分から、前記抗体を単離または精製する。
　前記ベクターおよび前記ベクターが導入された形質転換体の培養方法は、前述の説明を援用できる。
　本発明において、前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体である。前記モノクローナル抗体は、例えば、動物への免疫により得られるモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体（完全ヒト抗体ともいう）等があげられる。前記キメラ抗体およびヒト化抗体は、前述の説明を援用できる。
　本発明の抗体等は、例えば、抗原を動物に免疫することによっても調製できる。前記抗原は、例えば、ＣＤ１９タンパク質があげられる。前記抗原は、複数回免疫することが好ましい。前記ペプチド断片は、例えば、抗原決定基（エピトープ）のみからなるペプチド断片でもよいし、前記抗原決定基を含むペプチド断片でもよい。前記モノクローナル抗体の製造方法は、前述の説明を援用できる。
　本発明の第２の抗体等において、前記（Ｌ）の軽鎖可変領域は、下記（Ｌ）の軽鎖可変領域であってもよい。
（Ｌ）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
　ＣＤＲＬ１が、下記（L1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ２が、下記（L2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ３が、下記（L3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域；
（L1）下記（L1-1）、（L1-2）または（L1-3）のアミノ酸配列
（L1-1）下記条件（Ｌ１）～（Ｌ３）および（Ｌ４）のＣＤＲＬ１のいずれかのアミノ酸配列
（L1-2）（L1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-3）（L1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
（L2）下記（L2-1）、（L2-2）または（L2-3）のアミノ酸配列
（L2-1）下記条件（Ｌ１）～（Ｌ３）および（Ｌ４）のＣＤＲＬ２のいずれかのアミノ酸配列
（L2-2）（L2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-3）（L2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
（L3）下記（L3-1）、（L3-2）または（L3-3）のアミノ酸配列
（L3-1）下記条件（Ｌ１）～（Ｌ３）および（Ｌ４）のＣＤＲＬ３のいずれかのアミノ酸配列
（L3-2）（L3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-3）（L3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列；
条件（Ｌ１）
ＣＤＲＬ１は、ＫＬＧＤＫＹ（配列番号２２０）であり、
ＣＤＲＬ２は、ＱＤＳ（配列番号２２１）であり、
ＣＤＲＬ３は、ＱＡＷＤＳＳＴＨＶ（配列番号２２２）である；
条件（Ｌ２）
ＣＤＲＬ１は、ＷＳＮＩＧＤＤＨ（配列番号２２８）であり、
ＣＤＲＬ２は、ＤＴＳ（配列番号２２９）であり、
ＣＤＲＬ３は、ＧＴＷＥＳＳＬＳＧＶＶ（配列番号２３０）である；
条件（Ｌ３）
ＣＤＲＬ１は、Ｘ１ＳＸ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＮＹ（配列番号３１７）であり、
ＣＤＲＬ２は、ＤＸ６Ｘ７（配列番号３１８）であり、
ＣＤＲＬ３は、Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２ＳＸ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（配列番号３１９）であり、
Ｘ１は、ＳまたはＴであり、
Ｘ２は、ＤまたはＮであり、
Ｘ３は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、またはＡであり、
Ｘ４は、Ｇ、Ｔ、Ｖ、またはＮであり、
Ｘ５は、存在しないか、Ｙ、Ｔ、またはＳであり、
Ｘ６は、ＶまたはＮであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｉ、またはＶであり、
Ｘ８は、存在しないか、Ｇ、Ａ、またはＨであり、
Ｘ９は、Ｔ、Ｓ、またはＡであり、
Ｘ１０は、Ｗ、Ｙ、またはＦであり、
Ｘ１１は、ＡまたはＤであり、
Ｘ１２は、Ｔ、Ｇ、Ｄ、またはＳであり、
Ｘ１３は、ＬまたはＹであり、
Ｘ１４は、Ｔ、Ｎ、またはＳであり、
Ｘ１５は、Ａ、Ｆ、Ｇ、またはＨであり、
Ｘ１５は、ＶまたはＩであり、
Ｘ１７は、存在しないか、Ｖである；
条件（Ｌ４）
ＣＤＲＬ１は、ＱＸ１Ｘ２ＳＸ３ＳＸ４（配列番号３２０）であり、
ＣＤＲＬ２は、ＧＡＳ（配列番号２５３）またはＤＡＳ（配列番号２５７）であり、
ＣＤＲＬ３は、ＱＱＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１ＬＸ１２Ｔ（配列番号３２１）であり、
Ｘ１は、Ｓ、Ｔ、Ｎ、またはＱであり、
Ｘ２は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、またはＡであり、
Ｘ３は、存在しないか、Ａ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、またはＧであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｙ、またはＳであり、
Ｘ５は、存在しないか、Ｓであり、
Ｘ６は、Ｙ、Ｆ、またはＷであり、
Ｘ７は、Ｎ、Ｓ、Ｄ、またはＧであり、
Ｘ８は、Ｎ、Ｔ、Ｓ、またはＥであり、
Ｘ９は、Ｗ、Ｌ、またはＳであり、
Ｘ１０は、存在しないか、Ｐであり、
Ｘ１１は、存在しないか、ＰまたはＤであり、
Ｘ１２は、存在しないか、Ｙ、Ｆ、またはＷである。
　前記（Ｌ）の軽鎖可変領域において、（L1-1）、（L2-1）、および（L3-1）は、条件（Ｌ１）～（Ｌ４）において同一の条件または異なる条件を満たすが、同一の条件を満たすことが好ましい。
　条件（Ｌ３）において、Ｘ３は、ＶまたはＩが好ましい。Ｘ５は、存在しないか、ＹまたはＴが好ましい。Ｘ１０は、ＷまたはＹが好ましい。
　条件（Ｌ４）において、Ｘ１は、ＳまたはＴが好ましい。Ｘ２は、ＶまたはＩが好ましい。Ｘ６は、ＹまたはＦが好ましい。Ｘ１２は、存在しないか、ＹまたはＦが好ましい。
　前記条件（Ｌ１）を満たす軽鎖可変領域としては、例えば、前記（LA）の軽鎖可変領域があげられる。
　前記条件（Ｌ２）を満たす軽鎖可変領域としては、例えば、前記（LC）の軽鎖可変領域があげられる。
　前記条件（Ｌ３）を満たす軽鎖可変領域としては、例えば、前記（LB）、（LE）、（LF）、（LG）、および（LH）の軽鎖可変領域があげられる。
　前記条件（Ｌ４）を満たす軽鎖可変領域としては、例えば、前記（LI）、（LJ）、（LK）、（LL）、および（LM）の軽鎖可変領域があげられる。
＜遺伝子、発現ベクターおよび形質転換体＞
　本発明のコード遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１およびＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５の複合体に対する抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＤ１９に対する抗体もしくはその抗原結合断片（以下、あわせて「本発明の抗体またはその抗原結合断片」または「本発明の抗体等」ともいう）のコード遺伝子であり、前記本発明の第１の抗体もしくは抗原結合断片のアミノ酸配列または前記本発明の第２の抗体もしくは抗原結合断片をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含む。
　本発明のコード遺伝子を発現させることによって、前述した本発明の抗体等を得ることができる。本発明のコード遺伝子の配列は、特に制限されず、前記本発明の抗体等のアミノ酸配列をコードする配列であればよく、センス配列でもアンチセンス配列でもよい。
　本発明の発現ベクターは、A2/NY-ESO-1157に対する抗体もしくはその抗原結合断片またはＣＤ１９に対する抗体もしくはその抗原結合断片の発現ベクターであり、前記本発明のコード遺伝子を含む。前記発現ベクターにおいて、前記コード遺伝子は、例えば、前記本発明の抗体またはその抗原結合断片を発現可能に、前記連結用ベクターに連結されている。本発明の発現ベクターは、前記本発明の抗体等を発現できればよく、その他の構成は特に制限されない。
　本発明の発現ベクターは、例えば、前記重鎖可変領域をコードする核酸配列と前記軽鎖可変領域をコードする核酸配列とを含む発現ベクターでもよいし、前記重鎖可変領域をコードする核酸配列を含む発現ベクターと、前記軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含む発現ベクターとのセットでもよい。本発明の発現ベクターは、例えば、前記本発明のコード遺伝子を、連結用ベクターに連結することで調製できる。前記連結ベクターは、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリにおける発現ベクターの説明を援用できる。前記コード遺伝子を連結する前記連結用ベクターの種類は、特に制限されず、例えば、ｐＵＣ、ｐＭＸ等があげられる。前記連結用ベクターは、例えば、前記発現ベクターを導入する宿主に応じて、適宜設定することもできる。前記宿主は、特に制限されず、例えば、ＣＨＯ細胞等の哺乳類細胞等があげられる。
　本発明の形質転換体は、本発明の抗体等を発現する形質転換体であり、宿主と、前記本発明のコード遺伝子を含む。本発明の形質転換体は、前記本発明のコード遺伝子を発現可能に有していればよい。前記形質転換体は、例えば、前記本発明の発現ベクターを有することが好ましい。前記発現ベクターを前記宿主に導入する方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。
　本発明の遺伝子、発現ベクターおよび形質転換体は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、本発明の第２の抗体等の説明を援用できる。
＜第１のキメラ抗原受容体＞
　本発明の第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、前述のように、抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記抗原結合ドメインは、前記本発明の抗体またはその抗原結合断片を含む。本発明の第１のＣＡＲは、前記抗原結合ドメインが、前記本発明の第１の抗体等を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第１のＣＡＲは、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクターおよび形質転換体の説明を援用できる。本発明の第１のＣＡＲは、例えば、A2/NY-ESO-1157発現がん細胞に対するＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲとして好適に使用できる。
　前記抗原結合ドメインは、例えば、前記本発明の第１の抗体でもよいし、前記本発明の第１の抗体の抗原結合断片でもよい。前記抗原結合断片は、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）が好ましい。前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖの場合、前記抗原結合ドメインにおいて、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域は、Ｃ末端またはＮ末端からこの順序で配置される。
　前記抗原結合ドメインは、具体例として、例えば、下記（ＢＤ）のポリペプチドがあげられる。
（ＢＤ）下記（ＢＤ１）、（ＢＤ２）または（ＢＤ３）のポリペプチド
（ＢＤ１）配列番号９８～１１７のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド
（ＢＤ２）配列番号９８～１１７いずれかのアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチド
（ＢＤ３）配列番号９８～１１７のいずれかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチド
　前記（ＢＤ１）のポリペプチドにおいて、前記配列番号９８～１１７のアミノ酸配列は、例えば、前記本発明の第１の抗体等における組合せ（１）～（１８）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列である。前記配列番号９８～１１７のアミノ酸配列における重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、例えば、前記本発明の第１の抗体等における組合せ（１）～（１８）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列を参照できる。前記（ＢＤ２）および（ＢＤ３）のポリペプチドにおいて、前記配列番号９８～１１７のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３に対応するアミノ酸配列は、例えば、保存されている。前記配列番号９８～１１７のアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列は、例えば、前記本発明の第１の抗体等における組合せ（１）～（１８）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列を参照できる。
H1-3M4E5Lの抗原結合ドメイン（配列番号９８）
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLIIHDVIERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCWSFAGSYYVFGTGTDVTVL
K52-H1の抗原結合ドメイン（配列番号９９）
DIQMTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSTPQTFGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K73-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１００）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYCQQYESYRRSFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K121-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０１）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K124-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K125-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０３）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSPCTFGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K131-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQDISRYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYDNLITFGQGTRLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K145-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０５）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQDISRYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K151-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYDNLITFGQGTRLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K160-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０７）
EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISRLEPEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
K173-H1の抗原結合ドメイン（配列番号１０８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYCQQYESYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
L1-3M4E5Hの抗原結合ドメイン（配列番号１０９）
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYDFVSWYQQHPGEAPKLLVYDVNNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYCSSYAGSNSVFGTGTKVTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
3M4E5H-L1の抗原結合ドメイン（配列番号１１０）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYDFVSWYQQHPGEAPKLLVYDVNNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYCSSYAGSNSVFGTGTKVTVL
L66-3M4E5Hの抗原結合ドメイン（配列番号１１１）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYEFVSWYQQHPGSAPKLIIYDVIERPFGVSYRFSASKSGNTASLTISGLQGEDEADYFCSSYTSSSTYVFGTGTKVTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
L73-3M4E5Hの抗原結合ドメイン（配列番号１１２）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGAYDYVSWYQHHPGRAPRLIIRDVSVRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYSGSSTWVFGGGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
L80-3M4E5Hの抗原結合ドメイン（配列番号１１３）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSYRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTFAVFGGGTQLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
L88-3M4E5Hの抗原結合ドメイン（配列番号１１４）
QSALPQPASVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYFCCSYAGGYYVFGTGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
L102-3M4E5Hの抗原結合ドメイン（配列番号１１５）
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQTEDEADYYCSSYAGSGSTPFVFGTGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
L124-3M4E5Hの抗原結合ドメイン（配列番号１１６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSRVPDRFAGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGRRYVFGTGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
H73-3M4E5Lの抗原結合ドメイン（配列番号１１７）
QLQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARCPIYYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLIIHDVIERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCWSFAGSYYVFGTGTDVTVL
　前記（ＢＤ１）のポリペプチドにおいて、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列の順序は、逆の順序でもよい。具体例として、前記（ＢＤ１）のポリペプチドは、配列番号９８～１１７のアミノ酸配列において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を交換したアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよい。
　前記（ＢＤ２）のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記（ＢＤ３）のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記膜貫通ドメインおよび前記細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、それぞれ、前記本発明のＣＡＲライブラリの第１の膜貫通ドメインおよび第１の細胞内シグナル伝達ドメインの説明を援用できる。
　本発明の第１のＣＡＲは、具体例として、例えば、下記（Ｃ）のポリペプチドがあげられる。
（Ｃ）下記（Ｃ１）、（Ｃ２）または（Ｃ３）のポリペプチド
（Ｃ１）配列番号１１８～１３７のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド
（Ｃ２）配列番号１１８～１３７のいずれかのアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチド
（Ｃ３）配列番号１１８～１３７のいずれかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチド
H1-3M4E5L CAR（配列番号１１８）
QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLIIHDVIERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCWSFAGSYYVFGTGTDVTVLAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K52-H1 CAR（配列番号１１９）
DIQMTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSTPQTFGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K73-H1 CAR（配列番号１２０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYCQQYESYRRSFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K121-H1 CAR（配列番号１２１）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K124-H1 CAR（配列番号１２２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K125-H1 CAR（配列番号１２３）
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K131-H1 CAR（配列番号１２４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQDISRYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYDNLITFGQGTRLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K145-H1 CAR（配列番号１２５）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVSITCRASQDISRYLNWYQQKPGKAPKLLLYAASRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K151-H1 CAR（配列番号１２６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTITSLQPDDFATYYCQQYDNLITFGQGTRLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K160-H1 CAR（配列番号１２７）
EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISRLEPEDFATYYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K173-H1 CAR（配列番号１２８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKAGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDVATYYCQQYESYSRTFGQGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L1-3M4E5H CAR（配列番号１２９）
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYDFVSWYQQHPGEAPKLLVYDVNNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYCSSYAGSNSVFGTGTKVTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
3M4E5H-L1 CAR（配列番号１３０）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYDFVSWYQQHPGEAPKLLVYDVNNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEGDYYCSSYAGSNSVFGTGTKVTVLAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L66-3M4E5H CAR（配列番号１３１）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYEFVSWYQQHPGSAPKLIIYDVIERPFGVSYRFSASKSGNTASLTISGLQGEDEADYFCSSYTSSSTYVFGTGTKVTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L73-3M4E5H CAR（配列番号１３２）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTGSDVGAYDYVSWYQHHPGRAPRLIIRDVSVRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYSGSSTWVFGGGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L80-3M4E5H CAR（配列番号１３３）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSYRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTFAVFGGGTQLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L88-3M4E5H CAR（配列番号１３４）
QSALPQPASVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYFCCSYAGGYYVFGTGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L102-3M4E5H CAR（配列番号１３５）
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQTEDEADYYCSSYAGSGSTPFVFGTGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L124-3M4E5H CAR（配列番号１３６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSRVPDRFAGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGRRYVFGTGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
H73-3M4E5L CAR（配列番号１３７）
QLQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARCPIYYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLIIHDVIERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCWSFAGSYYVFGTGTDVTVLAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
　前記（Ｃ１）のポリペプチドにおいて、前記配列番号１１８～１３７のアミノ酸配列は、例えば、それぞれ、前記本発明の第１の抗体等における組合せ（１）～（１８）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列である。前記（Ｃ２）および（Ｃ３）のポリペプチドにおいて、前記配列番号１１８～１３７のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３に対応するアミノ酸配列は、例えば、保存されている。前記配列番号１１８～１３７のアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列は、例えば、それぞれ、前記本発明の第１の抗体等における組合せ（１）～（１８）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列を参照できる。
　前記（Ｃ２）のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記（Ｃ３）のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　本発明の第１のＣＡＲの製造方法は、特に制限されず、例えば、前述のアミノ酸配列情報に基づいて、遺伝子工学的に製造することができる。具体的には、例えば、以下のようにして行うことができる。なお、本発明は、この例示には限定されない。
　まず、本発明の第１のＣＡＲをコードする核酸を含む発現ベクターを宿主に導入し、形質転換体を得る。そして、前記形質転換体を培養し、前記第１のＣＡＲを発現する形質転換体を得る。
　前記発現ベクターは、例えば、前記第１のＣＡＲをコードする核酸を含むベクター等があげられ、例えば、前述の発現ベクターの説明を援用できる。前記宿主は、特に制限されず、例えば、前述の宿主の説明を援用できる。
＜第２のキメラ抗原受容体＞
　本発明の第２のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、前述のように、抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、前記抗原結合ドメインは、前記本発明の抗体またはその抗原結合断片を含む。本発明の第２のＣＡＲは、前記抗原結合ドメインが、前記本発明の第２の抗体等を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第２のＣＡＲは、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクターおよび形質転換体の説明を援用できる。本発明の第２のＣＡＲは、例えば、ＣＤ１９発現がん細胞に対するＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲとして好適に使用できる。
　前記抗原結合ドメインは、例えば、前記本発明の第２の抗体でもよいし、前記本発明の第２の抗体の抗原結合断片でもよい。前記抗原結合断片は、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）が好ましい。前記抗原結合ドメインがｓｃＦｖの場合、前記抗原結合ドメインにおいて、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域は、Ｃ末端またはＮ末端からこの順序で配置される。
　前記抗原結合ドメインは、具体例として、例えば、下記（ｂｄ）のポリペプチドがあげられる。
（ｂｄ）下記（ｂｄ１）、（ｂｄ２）または（ｂｄ３）のポリペプチド
（ｂｄ１）配列番号２７２～２８４のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド
（ｂｄ２）配列番号２７２～２８４のいずれかのアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチド
（ｂｄ３）配列番号２７２～２８４のいずれかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチド
　前記（ｂｄ１）のポリペプチドにおいて、前記配列番号２７２～２８４のアミノ酸配列は、例えば、前記本発明の第２の抗体等における組合せ（LA）～（LM）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列である。前記配列番号２７２～２８４のアミノ酸配列における重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、例えば、前記本発明の第２の抗体等における組合せ（LA）～（LM）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列を参照できる。前記（ｂｄ２）および（ｂｄ３）のポリペプチドにおいて、前記配列番号２７２～２８４のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３に対応するアミノ酸配列は、例えば、保存されている。前記配列番号２７２～２８４のアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列は、例えば、前記本発明の第２の抗体等における組合せ（LA）～（LM）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列を参照できる。
L4-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７２）
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTHVVFGGGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
L7-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７３）
QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTGDEADYYCGTWDTSLTAVVFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
L9-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７４）
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSWSNIGDDHVSWYQQFPGAAPKLLIYDTSKRPSRVADRFSGSKSGASATLAITGLQAGDEADYYCGTWESSLSGVVFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
L13-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７５）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGLSSDVGGYDYVSWYQQHPGIAPKLMIYDVTNRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTTSTTWVFGAGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
L14-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGTTNYVSWYQQHPGKAPKLLIYDVTNRPSGVPDRFSGSKSANTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGSYTFVVFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
L16-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７７）
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGVYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSANTASLTISGLQAEDEADYYCAAWDDSLNGVVFGGGTQLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
L17-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７８）
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNYVCWYQHLPGTAPKLLIYDNVKRPSGIPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAIFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
L22-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２７９）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCHSYDSSLSHVFGTGTKVTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
K4-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２８０）
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPLYTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
K5-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２８１）
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQSYSTLLYTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
K6-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２８２）
EIVLTRSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGISARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDIATYYCQQYDSLPLTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
K9-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２８３）
EIVLTQSPATLSLSPGERATVSCRPSQTISASSVAWYQQKAGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFNEWPLTFGGGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
K10-18Hの抗原結合ドメイン（配列番号２８４）
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKLGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPDIFTFGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
　前記（ｂｄ１）のポリペプチドにおいて、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列の順序は、逆の順序でもよい。具体例として、前記（ＢＤ１）のポリペプチドは、配列番号２７２～２８４のアミノ酸配列において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を交換したアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよい。
　前記（ｂｄ２）のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記（ｂｄ３）のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　前記膜貫通ドメインおよび前記細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、それぞれ、前記本発明のＣＡＲライブラリの第１の膜貫通ドメインおよび第１の細胞内シグナル伝達ドメインの説明を援用できる。
　本発明の第２のＣＡＲは、具体例として、例えば、下記（ＣＡ）のポリペプチドがあげられる。
（ＣＡ）下記（ＣＡ１）、（ＣＡ２）または（ＣＡ３）のポリペプチド
（ＣＡ１）配列番号２８５～２９７のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド
（ＣＡ２）配列番号２８５～２９７のいずれかのアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチド
（ＣＡ３）配列番号２８５～２９７のいずれかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチド
L4-18H CAR（配列番号２８５）
SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTHVVFGGGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L7-18H CAR（配列番号２８６）
QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTGDEADYYCGTWDTSLTAVVFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L9-18H CAR（配列番号２８７）
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSWSNIGDDHVSWYQQFPGAAPKLLIYDTSKRPSRVADRFSGSKSGASATLAITGLQAGDEADYYCGTWESSLSGVVFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L13-18H CAR（配列番号２８８）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGLSSDVGGYDYVSWYQQHPGIAPKLMIYDVTNRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTTSTTWVFGAGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L14-18H CAR（配列番号２８９）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGTTNYVSWYQQHPGKAPKLLIYDVTNRPSGVPDRFSGSKSANTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGSYTFVVFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L16-18H CAR（配列番号２９０）
QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGVYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSANTASLTISGLQAEDEADYYCAAWDDSLNGVVFGGGTQLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L17-18H CAR（配列番号２９１）
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNYVCWYQHLPGTAPKLLIYDNVKRPSGIPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSAIFGGGTELTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L22-18H CAR（配列番号２９２）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCHSYDSSLSHVFGTGTKVTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K4-18H CAR（配列番号２９３）
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K5-18H CAR（配列番号２９４）
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQSYSTLLYTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K6-18H CAR（配列番号２９５）
EIVLTRSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGISARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDIATYYCQQYDSLPLTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K9-18H CAR（配列番号２９６）
EIVLTQSPATLSLSPGERATVSCRPSQTISASSVAWYQQKAGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFNEWPLTFGGGTKVEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K10-18H CAR（配列番号２９７）
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKLGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPDIFTFGPGTKVDIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
　前記（ＣＡ１）のポリペプチドにおいて、前記配列番号２８５～２９７のアミノ酸配列は、例えば、それぞれ、前記本発明の第２の抗体等における組合せ（LA）～（LM）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列である。前記（ＣＡ２）および（ＣＡ３）のポリペプチドにおいて、前記配列番号２８５～２９７のアミノ酸配列のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３に対応するアミノ酸配列は、例えば、保存されている。前記配列番号２８５～２９７のアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列は、例えば、それぞれ、前記本発明の第２の抗体等における組合せ（LA）～（LM）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列を参照できる。
　前記（ＣＡ２）のポリペプチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記（ＣＡ３）のポリペプチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２０個、１～１５個、１～１０個、１～９個、１～８個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
　本発明の第２のＣＡＲの製造方法は、特に制限されず、例えば、前述のアミノ酸配列情報に基づいて、遺伝子工学的に製造することができる。具体的には、例えば、以下のようにして行うことができる。なお、本発明は、この例示には限定されない。
　まず、本発明の第２のＣＡＲをコードする核酸を含む発現ベクターを宿主に導入し、形質転換体を得る。そして、前記形質転換体を培養し、前記第２のＣＡＲを発現する形質転換体を得る。
　前記発現ベクターは、例えば、前記第２のＣＡＲをコードする核酸を含むベクター等があげられ、例えば、前述の発現ベクターの説明を援用できる。前記宿主は、特に制限されず、例えば、前述の宿主の説明を援用できる。
＜核酸＞
　本発明の核酸は、前述のように、前記本発明のキメラ抗原受容体をコードする。本発明の核酸は、前記本発明の第１のキメラ抗原受容体または第２のキメラ抗原受容体（以下、あわせて「本発明のキメラ抗原受容体」ともいう）をコードすることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の核酸によれば、例えば、細胞に本発明のＣＡＲを発現させることができる。本発明の核酸は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第１の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体第２のキメラ抗原受容体の説明を援用できる。
　本発明の核酸は、例えば、前記本発明のＣＡＲのアミノ酸配列に基づき、常法により調製できる。具体例として、前記本発明のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、前述の各ドメインのアミノ酸配列が登録されたデータベースにおいて、前記アミノ酸配列をコードする塩基配列を取得し、前記塩基配列に基づき、分子生物学的手法および／または化学的合成方法により調製できる。前記核酸の塩基配列は、例えば、本発明のＣＡＲを発現させる細胞の由来に応じて、コドン最適化してもよい。
　本発明の核酸は、具体例として、例えば、下記（ｃ）のポリヌクレオチドがあげられる。
（ｃ）下記（ｃ１）、（ｃ２）、（ｃ３）、（ｃ４）、（ｃ５）、または（ｃ６）のポリヌクレオチド（核酸）
（ｃ１）配列番号１１８～１３７のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃ２）配列番号１１８～１３７のいずれかのアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃ３）配列番号１１８～１３７いずれかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃ４）配列番号１３８～１５７のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド
（ｃ５）配列番号１３８～１５７のいずれかの塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃ６）配列番号１３８～１５７のいずれかの塩基配列において、１個または数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、A2/NY-ESO-1157に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
　前記（ｃ１）～（ｃ３）のポリヌクレオチドは、それぞれ、前記（Ｃ１）～（Ｃ３）のポリペプチドをコードする核酸であり、前記（Ｃ１）～（Ｃ３）のポリペプチドの説明を援用できる。
　前記（ｃ４）のポリヌクレオチドにおいて、前記配列番号１３８～１５７の塩基配列は、例えば、前記本発明の第１の抗体等における組合せ（１）～（１８）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。前記（ｃ５）および（ｃ６）のポリヌクレオチドにおいて、前記配列番号１３８～１５７の塩基配列のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３に対応するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、例えば、保存されている。前記配列番号１３８～１５７の塩基配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列をコードする塩基配列は、例えば、それぞれ、前記本発明の第１の抗体等における組合せ（１）～（１８）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列を参照できる。
　前記（ｃ５）のポリヌクレオチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記（ｃ６）のポリヌクレオチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２８０個、１～２１０個、１～１４０個、１～７０個、１～６３個、１～５６個、１～４９個、１～３５個、１～２８個、１～２１個、１～１４個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
H1-3M4E5L CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１３８）
5'-CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGAGCGAGCTGACACAGCCTAGATCCGTGTCTGGCAGCCCTGGCCAGAGCGTGACCATCAGCTGTACCGGCACCAGCAGAGATGTGGGCGGCTACAACTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCATCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATCATCCACGACGTGATCGAGCGGAGCAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATCAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGTTGGAGCTTCGCCGGCAGCTACTACGTGTTCGGCACCGGCACCGATGTGACCGTGCTGGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K52-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１３９）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCTGCCATGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAGCAATATTATAGTACTCCTCAAACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K73-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４０）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAGCAGGGAAAGCCCCTAAGCTTCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCTGCCTGCAGTCTGAAGATGTTGCAACCTATTACTGCCAACAGTATGAAAGTTATCGAAGGTCGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K121-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４１）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCTGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCCCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K124-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４２）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGATTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCTGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCCCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K125-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４３）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGCTCTATGCTGCATCCAGATTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCTCCGTGCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K131-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４４）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCTCCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGACATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGCTCTATGCTGCATCCAGATTGGAAAGTGGGGTCCCATCCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCACCAGCCTGCAGCCTGATGACTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATGATAATCTGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K145-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４５）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCTCCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGACATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGCTCTATGCTGCATCCAGATTGGAAAGTGGGGTCCCATCCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCACCAGCCTGCAGCCTGATGACTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCCCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K151-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４６）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCACCAGCCTGCAGCCTGATGACTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATGATAATCTGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K160-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４７）
5'-GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAACCTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCCCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K173-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４８）
5'-GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAGCAGGGAAAGCCCCTAAGCTTCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCTGCCTGCAGTCTGAAGATGTTGCAACCTATTACTGCCAACAGTATGAAAGTTATTCCCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L1-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４９）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATGACTTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCGAAGCCCCCAAACTCCTCGTTTATGATGTCAATAACCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGGTGACTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCAACAGCGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
3M4E5H-L1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５０）
5'-GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATGACTTTGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCGAAGCCCCCAAACTCCTCGTTTATGATGTCAATAACCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGGTGACTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCAACAGCGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L66-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５１）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGGACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATGAATTTGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAGCGCCCCCAAACTCATTATTTATGACGTAATAGAGCGTCCCTTCGGTGTCTCCTATCGGTTCTCTGCCTCCAAGTCAGGCAACACGGCCTCCCTGACGATCTCTGGGCTCCAGGGTGAAGACGAGGCTGATTACTTCTGCAGCTCATATACAAGCAGCAGCACTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L73-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５２）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCGGCAGTGACGTTGGTGCTTATGACTATGTCTCCTGGTACCAACATCACCCAGGCAGAGCCCCCAGACTCATCATTCGTGATGTCAGTGTGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCTCCTCATATTCAGGCAGCAGCACTTGGGTGTTCGGCGGGGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L80-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５３）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGGAGTTATAACCTTGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTTATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAGCAGCACTTTCGCGGTGTTCGGCGGAGGGACCCAGCTGACCGTCCTCGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L88-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５４）
5'-CAATCTGCCCTGCCTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGTTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTTCTGCTGTTCGTATGCAGGCGGCTATTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L102-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５５）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGACTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGCAGCTCATATGCAGGCAGCGGCAGCACCCCCTTTGTCTTCGGAACTGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L124-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５６）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAATCGGCCCTCAAGGGTCCCTGATCGCTTCGCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAAGACGAGGCTGATTATTACTGCTGCTCATATGCCGGCAGACGTTATGTGTTCGGAACTGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
H73-3M4E5L CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５７）
5'-CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGTGCCCTATCTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGAGCGAGCTGACACAGCCTAGATCCGTGTCTGGCAGCCCTGGCCAGAGCGTGACCATCAGCTGTACCGGCACCAGCAGAGATGTGGGCGGCTACAACTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCATCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATCATCCACGACGTGATCGAGCGGAGCAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATCAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGTTGGAGCTTCGCCGGCAGCTACTACGTGTTCGGCACCGGCACCGATGTGACCGTGCTGGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
　本発明の核酸は、他の具体例として、例えば、下記（ｃａ）のポリヌクレオチドがあげられる。
（ｃａ）下記（ｃａ１）、（ｃａ２）、（ｃａ３）、（ｃａ４）、（ｃａ５）、または（ｃａ６）のポリヌクレオチド（核酸）
（ｃａ１）配列番号２７２～２８４のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃａ２）配列番号２７２～２８４のいずれかのアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃａ３）配列番号２７２～２８４のいずれかのアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃａ４）配列番号２９８～３１０のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド
（ｃａ５）配列番号２９８～３１０のいずれかの塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｃａ６）配列番号２９８～３１０のいずれかの塩基配列において、１個または数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなり、ＣＤ１９に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
　前記（ｃａ１）～（ｃａ３）のポリヌクレオチドは、それぞれ、前記（ＣＡ１）～（ＣＡ３）のポリペプチドをコードする核酸であり、前記（ＣＡ１）～（ＣＡ３）のポリペプチドの説明を援用できる。
　前記（ｃａ４）のポリヌクレオチドにおいて、前記配列番号２９８～３１０の塩基配列は、例えば、前記本発明の第２の抗体等における組合せ（LA）～（LM）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。前記（ｃａ５）および（ｃａ６）のポリヌクレオチドにおいて、前記配列番号２９８～３１０の塩基配列のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３に対応するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、例えば、保存されている。前記配列番号２９８～３１０の塩基配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列をコードする塩基配列は、例えば、それぞれ、前記本発明の第２の抗体等における組合せ（LA）～（LM）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むアミノ酸配列における各ＣＤＲのアミノ酸配列を参照できる。
　前記（ｃａ５）のポリヌクレオチドにおいて、前記「同一性」は、それぞれ、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　前記（ｃａ６）のポリヌクレオチドにおいて、置換等に関する「１個または数個」は、それぞれ、例えば、１～２８０個、１～２１０個、１～１４０個、１～７０個、１～６３個、１～５６個、１～４９個、１～３５個、１～２８個、１～２１個、１～１４個、１～７個、１～６個、１～５個、１～４個、１～３個、１または２個、１個である。
L4-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号２９８）
5'-TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCTCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATAAATTGGGGGATAAATATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGCTGGTCATCTATCAAGATAGCAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAGCAGCACACATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L7-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号２９９）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATACCAGCCTGACTGCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCGAGCTGACCGTCCTCGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L9-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３００）
5'-CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCTGGTCCAACATTGGAGATGATCATGTCTCCTGGTACCAGCAGTTCCCAGGAGCAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACACTTCTAAGCGACCCTCACGCGTTGCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCGCGTCAGCCACCCTGGCCATCACTGGACTCCAGGCTGGGGACGAGGCCGACTATTATTGCGGAACATGGGAAAGCAGCCTGAGTGGTGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L13-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０１）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGACTCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATGACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCATAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCACTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAGTCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAACCAGCACGACTTGGGTCTTCGGAGCTGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L14-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０２）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCACCAGTGACGTTGGTACTACTAATTATGTCTCCTGGTACCAGCAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTAATTTATGATGTCACTAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGCCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCTGCTCATATGCAGGCAGCTACACCTTCGTGGTATTCGGCGGAGGGACCGAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L16-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０３）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGTTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGCCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTGTGGTATTCGGCGGAGGCACCCAGCTGACCGTCCTCGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L17-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０４）
5'-CAGTCTGTACTGACTCAACCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGCTCTGGCAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATTATGTATGCTGGTACCAACACCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTTCTCATTTATGACAATGTTAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGCCATATTCGGCGGAGGGACCGAGCTGACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
L22-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０５）
5'-CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCACTCCTATGACAGCAGCCTGAGTCATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K4-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０６）
5'-GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATAATAACTGGCCTCCCTTGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K5-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０７）
5'-GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCTTTTGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K6-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０８）
5'-GAAATTGTGTTGACACGGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCCTCCAACAGGGCCACTGGTATTTCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAGTCTCCCACTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGGAGATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K9-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０９）
5'-GAAATAGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCGTCTCCTGTAGGCCCAGTCAGACCATTAGTGCCAGTTCCGTAGCCTGGTATCAGCAGAAAGCTGGCCAGGCTCCACGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAATTTAATGAATGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K10-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３１０）
5'-GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAAAAACTTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCCGATATATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCTGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
　本発明の核酸は、例えば、発現ベクターに導入されてもよい。前記発現ベクターは、例えば、前述の説明を援用できる。
　本発明の核酸において、前記各種ポリヌクレオチドは、例えば、公知の遺伝子工学的手法または合成手法によって製造できる。
＜細胞＞
　本発明の細胞は、前述のように、前記本発明のキメラ抗原受容体を含む。本発明の細胞は、前記本発明のキメラ抗原受容体を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の細胞によれば、例えば、がんを治療できる。本発明の細胞は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体、第２のキメラ抗原受容体、核酸等の説明を援用できる。
　本発明の細胞は、前記本発明のＣＡＲ以外のＣＡＲを発現してもよい。前記細胞は、Ｔ細胞が好ましい。前記Ｔ細胞は、例えば、前記Ｔ細胞様の細胞でもよい。
＜細胞の製造方法＞
　本発明の細胞の製造方法は、前述のように、前記本発明の核酸を細胞に導入する導入工程を含む。本発明の細胞の製造方法は、前記導入工程において、前記本発明の核酸を細胞に導入することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の細胞の製造方法によれば、例えば、がんを治療可能な細胞を製造できる。本発明の細胞の製造方法は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体、第２のキメラ抗原受容体、核酸、細胞等の説明を援用できる。
　前記細胞は、Ｔ細胞またはＴ細胞様の細胞が好ましい。
　前記導入工程における核酸の導入方法は、特に制限されず、例えば、前記本発明の第１のスクリーニング方法における第１の発現工程の説明を援用できる。
　本発明の細胞の製造方法は、例えば、前記導入工程後、前記細胞に前記核酸がコードするキメラ抗原受容体を発現させる発現工程を含んでもよい。前記発現工程は、例えば、前記導入工程後の細胞を培養することにより実施できる。
＜がん治療薬＞
　本発明のがん治療薬（以下、「治療薬」ともいう）は、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、または核酸を含む。本発明の治療薬は、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、または核酸を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の治療薬によれば、例えば、がんを治療できる。本発明のがん治療薬は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体、第２のキメラ抗原受容体、核酸、細胞、細胞の製造方法等の説明を援用できる。
　本発明において、治療対象のがんは、特に制限されず、例えば、発現するキメラ抗原受容体の種類等に応じて、適宜決定できる。本発明のがん治療薬がA2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲに関連する細胞、遺伝子、発現ベクター、または核酸の場合、前記治療対象のがんは、例えば、悪性黒色腫、肺がん、滑膜肉腫、乳がん、食道がん、卵巣がん、膀胱がん、神経芽腫、骨髄腫等があげられる。本発明のがん治療薬がＣＤ１９に結合するＣＡＲに関連する細胞、遺伝子、発現ベクター、または核酸の場合、前記治療対象のがんは、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫等があげられる。
　本発明の治療薬の投与条件は、特に制限されず、例えば、対象となるがんの種類、がんの進行度、患者の年齢等に応じて、投与形態、投与方法、投与時期、投与量等を適宜設定できる。本発明の治療薬の使用方法は、特に制限されず、例えば、前記投与対象に、本発明の治療薬を投与すればよい。
　前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ、ブタ等の哺乳類等があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。
　前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象に応じて適宜決定できる。前記投与方法は、例えば、非経口投与、経口投与等があげられる。前記非経口投与は、例えば、局所投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、リンパ管内投与、腫瘍内投与等があげられる。
　本発明の治療薬の投与形態は、特に制限されず、例えば、注射液（注射剤）、点滴静注液等の液剤等である。
　本発明の治療薬において、前記細胞の配合量は、特に制限されない。また、前記細胞の投与条件は、特に制限されない。前記投与方法が静脈内投与の場合、前記細胞の投与条件は、例えば、ヒト成人男子に対する１回あたりの投与量（合計）は、例えば、１×１０８～３×１０１０細胞であり、好ましくは、１×１０９～１×１０１０細胞であり、投与回数は、例えば、１週間～４週間に１回である。本発明の治療薬において、前記細胞の配合量は、例示した投与条件を実現できるような濃度で含まれていることが好ましい。
　本発明の治療薬において、前記遺伝子、発現ベクター、または核酸の配合量は、特に制限されない。また、前記遺伝子、発現ベクター、または核酸の投与条件は、特に制限されない。前記投与方法が皮下注射または静脈注射等であり、ヒトに全身投与する場合、１回あたりの投与量（合計）は、例えば、５～５０００ｍｇ、５０～５００ｍｇであり、投与回数は、例えば、２週間～８週間に１回である。
　本発明の治療薬は、前記細胞、遺伝子、発現ベクター、および核酸のいずれか１種類のみを含んでもよいし、複数種類を含んでもよい。また、本発明の治療薬は、さらにその他の添加物を含んでもよい。前記添加物の配合量は、本発明の治療薬の機能を妨げるものでなければ、特に制限されない。前記添加物は、特に制限されず、例えば、薬学的に許容された添加物が好ましい。前記添加物の種類は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。前記添加物は、例えば、基剤、安定化剤、保存剤等があげられる。
＜がんの治療方法＞
　本発明のがんの治療方法は、投与対象に、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、または核酸を投与する投与工程を含む。本発明のがんの治療方法は、前記投与工程において、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、または核酸を投与することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の治療方法によれば、がんを治療できる。本発明のがんの治療方法は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体、第２のキメラ抗原受容体、核酸、細胞、細胞の製造方法、治療薬等の説明を援用できる。
　前記投与工程では、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、および核酸のうち、いずれか１種類を投与してもよいし、複数種類を投与してもよい。
＜抗体等または細胞、遺伝子、発現ベクター、もしくは核酸の使用＞
　本発明は、がんの治療方法に使用するための、前記本発明の抗体またはその抗原結合断片、または、がんの治療のための、前記本発明の抗体またはその抗原結合断片である。また、本発明は、がんの治療用医薬の製造のための、前記本発明の抗体またはその抗原結合断片の使用である。さらに、本発明は、がんの治療方法に使用するための、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、もしくは核酸、または、がんの治療のための、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、もしくは核酸である。また、本発明は、がんの治療用医薬の製造のための、前記本発明の細胞、遺伝子、発現ベクター、または核酸の使用である。本発明の使用は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体、第２のキメラ抗原受容体、核酸、細胞、細胞の製造方法、治療薬、治療方法等の説明を援用できる。
＜ＢｓＡｂライブラリ＞
　本発明の二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）ライブラリは、第１の二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）をコードする核酸を含み、前記第１のＢｓＡｂは、第１の抗原結合ドメインと、第２の抗原結合ドメインとを含み、前記第１の抗原結合ドメインは、第１の標的抗原に結合する第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、前記第２の抗原結合ドメインは、第２の標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含み、前記第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含み、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たし、前記第１の標的抗原または前記第２の標的抗原は、免疫細胞活性化受容体である。
条件１：
前記第２の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件２：
前記第２の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、本発明のＢｓＡｂライブラリは、前記第１のＢｓＡｂは、第１の抗原結合ドメインと、第２の抗原結合ドメインとを含み、前記第１の抗原結合ドメインは、第１の標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含み、前記第２の抗原結合ドメインは、第２の標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含み、前記第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含み、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、前記条件１または条件２を満たし、前記第１の標的抗原または前記第２の標的抗原は、免疫細胞活性化受容体であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のＢｓＡｂライブラリは、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体、第２のキメラ抗原受容体、核酸、細胞、細胞の製造方法、治療薬、治療方法等の説明を援用できる。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第１のＢｓＡｂは、前記第１の抗原結合ドメインと、前記第２の抗原結合ドメインとを含むタンパク質である。前記第１の抗原結合ドメインと、前記第２の抗原結合ドメインとは、それぞれ、第１の標的抗原に結合する第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）と、第２の標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖとを含む。前記第２のｓｃＦｖは、例えば、ｓｃＦｖに類似した構造を有し、前記抗原に結合する細胞外ドメインが、前記第２の標的抗原への結合をスクリーニングする第２の抗原結合ドメインに変更されている。また、本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第１の標的抗原または前記第２の標的抗原が、免疫細胞活性化受容体である。このため、前記第１の標的抗原が前記免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２の標的抗原と結合する第１のＢｓＡｂは、例えば、前記第２の標的抗原および前記第１の標的抗原（前記免疫細胞活性化受容体）を発現可能な免疫細胞の共存下で、前記免疫細胞の前記免疫細胞活性化受容体を介してシグナルを誘導でき、その結果、前記免疫細胞を活性化（例えば、増殖、活性化マーカーの発現等）することができる。すなわち、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、前記第１の標的抗原が前記免疫細胞活性化受容体の場合、後述の第２のスクリーニング方法を用いて、前記ＢｓＡｂライブラリから発現されたＢｓＡｂ群において、前記免疫細胞を活性化させる第１のＢｓＡｂを前記第２の標的抗原と結合するＢｓＡｂとして選抜できる。このため、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、例えば、ハイブリドーマを用いる方法およびファージディスプレイを用いる方法と比較して、より簡便に、第２の標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、前記第２の標的抗原と結合する第１のＢｓＡｂは、例えば、後述の第２のスクリーニング方法において、前記免疫細胞を活性化させることができるため、前記免疫細胞を活性化可能なＢｓＡｂといえる。したがって、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、例えば、前記第２の標的抗原を発現する細胞に対して、前記免疫細胞を介した傷害活性等を誘導しうるＢｓＡｂをスクリーニングできる。
　また、前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２の標的抗原と結合する第１のＢｓＡｂは、例えば、前記第１の標的抗原および前記第２の標的抗原（前記免疫細胞活性化受容体）を発現可能な免疫細胞の共存下で、前記免疫細胞の免疫細胞活性化受容体を介してシグナルを誘導でき、その結果、免疫細胞を活性化（例えば、増殖、活性化マーカーの発現等）することができる。すなわち、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、後述の第２のスクリーニング方法を用いて、前記ＢｓＡｂライブラリから発現されたＢｓＡｂ群において、前記免疫細胞を活性化させる第１のＢｓＡｂを前記第２の標的抗原と結合するＢｓＡｂとして選抜できる。このため、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、例えば、ハイブリドーマを用いる方法およびファージディスプレイを用いる方法と比較して、より簡便に、第２の標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、前記第２の標的抗原と結合する第１のＢｓＡｂは、例えば、後述の第２のスクリーニング方法において、前記免疫細胞を活性化させることができるため、免疫細胞を活性化可能なＢｓＡｂといえる。したがって、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、例えば、前記第１の標的抗原を発現する細胞に対して、免疫細胞を介した傷害活性等を誘導しうるＢｓＡｂをスクリーニングできる。
　また、本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第２の抗原結合ドメインは、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含む。前記第２のｓｃＦｖは、例えば、抗原に結合する抗体由来の一本鎖のポリペプチドであり、かつ前記抗原との結合能を保持するｓｃＦｖと類似する構造を有する。前記ｓｃＦｖは、前記抗原に結合する抗体の重鎖（Ｈ鎖）および軽鎖（Ｌ鎖）の可変領域の断片（Ｆｖ）を連結したポリペプチドである。他方、前記第２のｓｃＦｖは、例えば、後述のように、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のうち一方が、前記第２の標的抗原に結合する抗体等の可変領域であり、他方が、Ｂ細胞受容体に由来する可変領域、すなわち、前記第２の標的抗原に結合するかが不明の可変領域である。本発明のＢｓＡｂライブラリは、前記第２のｓｃＦｖをこのような構成とすることにより、例えば、前記第２の標的抗原に結合する重鎖可変領域または軽鎖可変領域のスクリーニングを実施することができる。このため、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、例えば、前記第２の標的抗原に結合する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を一度にスクリーニングするファージディスプレイ法と比較して、より少ない数または種類の核酸で、前記第２の標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、第１のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、第１のＢｓＡｂのアミノ酸配列をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を意味し、前述の説明を援用できる。
　本発明において、「ＢｓＡｂ」は、例えば、抗体分子における２つの抗原結合部位が、それぞれ異なる標的抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片を意味する。前記異なる標的抗原は、例えば、エピトープが異なることを意味し、異なる抗原のエピトープでもよいし、同じ抗原における異なるエピトープでもよい。前記「ＢｓＡｂ」は、例えば、公知の二重特異性抗体の構造を採用でき、具体例として、二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ－Ｉｇ（商標））、ダイアボディ（diabody）、トリアボディ（triabody）、テトラボディ（tetrabody）、タンダブ（tanda）、ｓｃＦｖとダイアボディとの組合せであるフレキシボディ（flexibody）、タンデム（tandem）ｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥ（登録商標）、Micromet社）、ＤＡＲＴ（登録商標）（MacroGenics社）、Ｆｃａｂ（商標）またはｍＡｂ２（商標）（F-star社）、Fc engineering抗体（Xencor社）またはDuoBody（登録商標）（Ｇｅｎｍａｂ社）等の構造が採用でき、ライブラリを容易に構築できることから好ましくは、タンデムｓｃＦｖである。前記タンデムｓｃＦｖは、例えば、２つのｓｃＦｖがリンカーペプチド（Ｆｖ間リンカーペプチド）により連結されたタンパク質であり、２つのｓｃＦｖは、それぞれ、重鎖可変領域および軽鎖可変領域がリンカーペプチド（Ｆｖリンカーペプチド）により連結されている。
　以下、第１のＢｓＡｂについて、第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合と、前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合とについて、それぞれ説明する。
（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体
　前記免疫細胞活性化受容体は、例えば、前記免疫細胞に発現し、かつ、リガンドとの結合または複数の免疫細胞活性化受容体の架橋により前記免疫細胞活性化受容体が発現する免疫細胞を活性化可能な受容体を意味する。前記免疫細胞活性化受容体は、例えば、前記免疫細胞の種類に応じて適宜決定できる。具体例として、前記免疫細胞がＴ細胞の場合、前記免疫細胞活性化受容体は、ＣＤ３等があげられる。前記ＣＤ３は、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ηまたは、これらの複合体があげられる。前記免疫細胞がＮＫ細胞の場合、前記免疫細胞活性化受容体は、ＮＫ細胞の活性化受容体等があげられる。前記ＮＫ細胞の活性化受容体は、例えば、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ／ＮＫＧ２Ｄ等があげられる。前記免疫細胞がＮＫＴ細胞の場合、前記免疫細胞活性化受容体は、ＣＤ３、前記ＮＫ細胞の活性化受容体等があげられる。前記免疫細胞がＢ細胞の場合、前記免疫細胞活性化受容体は、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ７９α、ＣＤ７９β等があげられる。
　前記第１の標的抗原が前記免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２の標的抗原は、特に制限されず、例えば、前記ＣＡＲライブラリにおける標的抗原の説明を援用できる。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、第１のｓｃＦｖは、例えば、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含む。前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、抗体分子における重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同様の構造を有する。一般に、抗体分子の重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、それぞれ、３ヶ所の相補性決定領域（ＣＤＲ：Complemetarity determining region）を有している。ＣＤＲは、超可変領域（hypervariable domain）ともいう。ＣＤＲは、前記重鎖および軽鎖の可変領域でも、特に一次構造の変異性が高い領域であり、一次構造上において、通常、３ヶ所に分離している。本発明において、重鎖可変領域における３ヶ所のＣＤＲを、重鎖可変領域のアミノ酸配列におけるアミノ末端（Ｎ末端）側から、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＨ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＨ２）、および重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＨ３）と表し、軽鎖可変領域における３ヶ所のＣＤＲを、軽鎖可変領域のアミノ酸配列におけるアミノ末端側から、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲＬ２）、および軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲＬ３）と表す。これらの部位は、立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。
　前記第１の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第１の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。
　前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とは、ＣＤ３等の免疫細胞活性化受容体に結合する抗体またはその抗原結合断片を用いる。前記抗体またはその抗原結合断片の具体例は、例えば、前述の本発明の抗体等における抗体および抗原結合断片の説明を援用できる。
　前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体の種類に応じて、公知の抗体等を使用できる。具体例として、前記免疫細胞活性化受容体がＣＤ３の場合、ＣＤ３εに対する抗体は、例えば、ＯＫＴ３抗体、ＵＣＨＴ１抗体、Ｌ２K抗体、ＨＩＴ３a抗体、２８Ｆ１１抗体、２７Ｈ５抗体等があげられる。前記免疫細胞活性化受容体がＣＤ１９の場合、ＣＤ１９に対する抗体は、例えば、ＦＭＣ６３抗体、ＳＪ２５Ｃ１等があげられる。前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体を免疫することにより得られた抗体でもよい。前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等は、例えば、後述の本発明の第２のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖであってもよい。前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の重鎖可変領域において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３以外の領域、すなわち、フレームワーク領域（ＦＲ）は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における重鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記ＦＲは、一次構造上において、通常、４ヶ所に分離している。本発明において、前記重鎖可変領域における４ヶ所のＦＲを、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、重鎖ＦＲ１（ＦＲＨ１）、重鎖ＦＲ２（ＦＲＨ２）、重鎖ＦＲ３（ＦＲＨ３）、および重鎖ＦＲ４（ＦＲＨ４）と表す。なお、前記各ＣＤＲＨと、前記各ＦＲＨとは、例えば、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、ＦＲＨ１、ＣＤＲＨ１、ＦＲＨ２、ＣＤＲＨ２、ＦＲＨ３、ＣＤＲＨ３、およびＦＲＨ４の順序で配置されている。前記第１の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＨの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域において、ＦＲは、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記ＦＲは、一次構造上において、通常、４ヶ所に分離している。本発明において、前記軽鎖可変領域における４ヶ所のＦＲを、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、軽鎖ＦＲ１（ＦＲＬ１）、軽鎖ＦＲ２（ＦＲＬ２）、軽鎖ＦＲ３（ＦＲＬ３）、および軽鎖ＦＲ４（ＦＲＬ４）と表す。なお、前記各ＣＤＲＬと、前記各ＦＲＬとは、例えば、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列におけるＮ末端側から、ＦＲＬ１、ＣＤＲＬ１、ＦＲＬ２、ＣＤＲＬ２、ＦＲＬ３、ＣＤＲＬ３、およびＦＲＬ４の順序で配置されている。前記第１の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＬの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１のｓｃＦｖにおいて、前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、第１のリンカーペプチド（第１のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のｓｃＦｖの前記免疫細胞活性化受容体への結合を阻害しないことが好ましい。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記第１のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含む。前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、抗体分子における重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同様の構造を有し、その構造について、例えば、前記第１のｓｃＦｖの説明を援用できる。
　前記第２の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第２の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。また、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、前記条件１または条件２を満たす。
　前記条件１では、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、前記第２の標的抗原に結合する抗体等を用い、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３について、前記第２の標的抗原への結合をスクリーニングする。前記抗体またはその抗原結合断片の具体例は、例えば、前述の本発明の抗体等における抗体および抗原結合断片の説明を援用できる。
　前記第２の標的抗原に結合する抗体等は、例えば、前記第２の標的抗原に応じて公知の抗体等を使用できる。具体例として、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１およびＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５の複合体に対する抗体としては、例えば、３Ｍ４Ｅ５抗体が使用できる。また、ヒトＣＤ１９に対する抗体としては、例えば、ＦＭＣ６３抗体が使用できる。前記第２の標的抗原に結合する抗体等は、例えば、後述の本発明の第２のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖであってもよいし、前記第２の標的抗原を免疫することで得られた抗体でもよい。前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第２の標的抗原に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＨの説明における「第２の標的抗原に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第２の標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第２の標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２の標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、Ｖ遺伝子断片およびＪ遺伝子断片がＶＪ遺伝子再構築することで形成されたＶＪ遺伝子断片によりコードされる。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、Ｖ遺伝子断片と、Ｊ遺伝子断片とを人工的に組合せて設計した人工ＶＪ遺伝子断片がコードするポリペプチドを含むＢ細胞受容体であってもよい。また、生体内のＢ細胞は、例えば、ＶＪ遺伝子再構築後の軽鎖可変領域を発現している。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体であってもよい。この場合、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体があげられ、好ましくは、ヒト末梢血Ｂ細胞由来のＢ細胞受容体である。本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第１のＢ細胞受容体は、ＢｓＡｂライブラリをより容易に調製できることから、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域であることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第１のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＬの説明における「第１のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２のｓｃＦｖにおいて、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、第２のリンカーペプチド（第２のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第２のｓｃＦｖの前記第２の標的抗原への結合を阻害しないことが好ましい。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記第２のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のＦｖリンカーペプチドと同じでもよいし、異なってもよい。
　つぎに、前記条件２では、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記第２の標的抗原に結合する抗体等に由来し、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３について、前記第２の標的抗原への結合をスクリーニングする。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、Ｖ遺伝子断片、Ｄ遺伝子断片およびＪ遺伝子断片がＶＤＪ遺伝子再構築することで形成されたＶＤＪ遺伝子断片によりコードされる。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、Ｖ遺伝子断片と、Ｄ遺伝子断片と、Ｊ遺伝子断片とを人工的に組合せて設計した人工ＶＤＪ遺伝子断片がコードするポリペプチドを含むＢ細胞受容体であってもよい。また、生体内のＢ細胞は、例えば、ＶＤＪ遺伝子再構築後の重鎖可変領域を発現している。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体であってもよい。この場合、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体があげられ、好ましくは、ヒト末梢血Ｂ細胞由来のＢ細胞受容体である。本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第１のＢ細胞受容体は、ＢｓＡｂライブラリをより容易に調製できることから、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体の重鎖可変領域であることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第１のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＨの説明における「第１のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域において、前記第２の標的抗原に結合する抗体等は、例えば、前記条件１における第２の標的抗原に結合する抗体等の説明を援用できる。前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域において、ＦＲは、例えば、前記第２の標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記第２の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第２の標的抗原に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＬの説明における「第２の標的抗原に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第２の標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第２の標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２の標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２のｓｃＦｖにおいて、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、第２のリンカーペプチド（第２のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第２のｓｃＦｖの前記第２の標的抗原への結合を阻害しないことが好ましい。前記第２のＦｖリンカーペプチドの説明は、例えば、前記第１のＦｖリンカーペプチドの説明を援用できる。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のＦｖリンカーペプチドと、同じでもよいし、異なってもよい。
　前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖは、例えば、直接または間接的に連結されている。前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖの連結は、例えば、前記第１のＢｓＡｂの種類に応じて、適宜設計できる。具体例として、前記第１のＢｓＡｂがタンデムｓｃＦｖの場合、前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖは、リンカーペプチド（Ｆｖ間リンカーペプチド）により連結されている。前記Ｆｖ間リンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記Ｆｖ間リンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記Ｆｖ間リンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。
（２）第２の標的抗原：免疫細胞活性化受容体
　前記第１の標的抗原は、特に制限されず、例えば、前記ＣＡＲライブラリにおける標的抗原の説明を援用できる。
　前記第２の標的抗原は、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」における第１の標的抗原の説明を援用できる。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、第１のｓｃＦｖは、例えば、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含む。前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、抗体分子における重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同様の構造を有し、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」における第１のｓｃＦｖの説明を援用できる。前記第１の重鎖可変領域は、例えば、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。
　前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とは、前記第１の標的抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片を用いる。前記抗体またはその抗原結合断片の具体例は、例えば、前述の本発明の抗体等における抗体および抗原結合断片の説明を援用できる。
　前記第１の標的抗原に結合する抗体等は、例えば、前記第１の標的抗原の種類に応じて、公知の第１の標的抗原に結合する抗体等を使用できる。また、前記第１の標的抗原に結合する抗体等は、例えば、前記第１の標的抗原を免疫することにより得られた抗体でもよい。前記第１の標的抗原に結合する抗体等は、例えば、後述の本発明の第２のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖであってもよい。前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第１の標的抗原に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＨの説明における「第１の標的抗原に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記第１の標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の重鎖可変領域は、例えば、前記第１の標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の標的抗原に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の標的抗原に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第１の標的抗原に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＬの説明における「第１の標的抗原に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１の標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１の標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の標的抗原に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１のｓｃＦｖにおいて、前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、第１のリンカーペプチド（第１のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のｓｃＦｖの前記第１の標的抗原への結合を阻害しないことが好ましい。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記第１のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含む。前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、抗体分子における重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同様の構造を有し、その構造について、例えば、前記（１）における第１のｓｃＦｖの説明を援用できる。
　前記第２の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第２の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。また、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、前記条件１または条件２を満たす。
　前記条件１は、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等を用い、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３について、前記免疫細胞活性化受容体への結合をスクリーニングする。前記抗体またはその抗原結合断片の具体例は、例えば、前述の本発明の抗体等における抗体および抗原結合断片の説明を援用できる。
　前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等は、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」における免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等の説明を援用できる。前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＨの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、Ｖ遺伝子断片およびＪ遺伝子断片がＶＪ遺伝子再構築することで形成されたＶＪ遺伝子断片によりコードされる。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、Ｖ遺伝子断片と、Ｊ遺伝子断片とを人工的に組合せて設計した人工ＶＪ遺伝子断片がコードするポリペプチドを含むＢ細胞受容体であってもよい。また、生体内のＢ細胞は、例えば、ＶＪ遺伝子再構築後の軽鎖可変領域を発現している。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体であってもよい。この場合、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体があげられ、好ましくは、ヒト末梢血Ｂ細胞由来のＢ細胞受容体である。本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第１のＢ細胞受容体は、ＢｓＡｂライブラリをより容易に調製できることから、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域であることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第１のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＬの説明における「第１のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第１のｓｃＦｖにおいて、前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、例えば、第１のリンカーペプチド（第１のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のｓｃＦｖの前記第１の標的抗原への結合を阻害しないことが好ましい。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記第１のＦｖリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記第１のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。
　つぎに、前記条件２では、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等に由来し、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３について、前記免疫細胞活性化受容体への結合をスクリーニングする。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、Ｖ遺伝子断片、Ｄ遺伝子断片およびＪ遺伝子断片がＶＤＪ遺伝子再構築することで形成されたＶＤＪ遺伝子断片によりコードされる。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、Ｖ遺伝子断片と、Ｄ遺伝子断片と、Ｊ遺伝子断片とを人工的に組合せて設計した人工ＶＤＪ遺伝子断片がコードするポリペプチドを含むＢ細胞受容体であってもよい。また、生体内のＢ細胞は、例えば、ＶＤＪ遺伝子再構築後の重鎖可変領域を発現している。このため、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体であってもよい。この場合、前記第１のＢ細胞受容体は、例えば、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体があげられ、好ましくは、ヒト末梢血Ｂ細胞由来のＢ細胞受容体である。本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第１のＢ細胞受容体は、ＢｓＡｂライブラリをより容易に調製できることから、単離されたＢ細胞由来のＢ細胞受容体の重鎖可変領域であることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第１のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＨの説明における「第１のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の重鎖可変領域は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域において、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等は、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」における免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等の説明を援用できる。前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２の軽鎖可変領域において、ＦＲは、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記第２の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」と、前記各ＦＲＬの説明における「免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等」とは、同じ抗体等であることが好ましい。
　前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記免疫細胞活性化受容体に結合する抗体等における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第２のｓｃＦｖにおいて、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、第２のリンカーペプチド（第２のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第２のｓｃＦｖの前記免疫細胞活性化受容体への結合を阻害しないことが好ましい。前記第２のＦｖリンカーペプチドの説明は、例えば、前記第１のＦｖリンカーペプチドの説明を援用できる。前記第２のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のＦｖリンカーペプチドと、同じでもよいし、異なってもよい。
　前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖは、例えば、直接または間接的に連結されてもよいし、前記第３のｓｃＦｖおよび前記第４のｓｃＦｖを共存させた場合、両者が会合（結合）するように形成してもよい。前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖの連結は、例えば、前記第１のＢｓＡｂの種類に応じて、適宜設計できる。具体例として、前記第１のＢｓＡｂがタンデムｓｃＦｖの場合、前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖは、リンカーペプチド（Ｆｖ間リンカーペプチド）により連結されている。前記Ｆｖ間リンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記Ｆｖ間リンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。具体例として、前記Ｆｖ間リンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。前記会合は、例えば、アミノ酸側鎖の電荷を利用できる。具体例として、前記会合は、例えば、一方の結合ドメインに正の電荷を有するアミノ酸のドメインを付加し、他方の結合ドメインに負の電荷を有するアミノ酸のドメインを付加することにより、誘導できる。また、前記会合は、例えば、タグ配列とタグ配列を認識するポリペプチドの組合せ等も利用できる。
　本発明のＢｓＡｂライブラリにおいて、前記第１のＢｓＡｂにおける前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖの配置順序は、例えば、Ｎ末端側から、前記第１のｓｃＦｖおよび前記第２のｓｃＦｖがこの順序で配置されてもよいし、Ｎ末端側から、前記第２のｓｃＦｖおよび前記第１のｓｃＦｖがこの順序で配置されてもよいが、より簡便に第１のＢｓＡｂライブラリを調製できることから、後者が好ましい。
　前記第１のＢｓＡｂは、例えば、下記式（３）（配列番号１５８）で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。下記式（３）において、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、およびＶ４は、例えば、下記（Ｖ１）～（Ｖ８）の組合せがあげられる。前記第２のｓｃＦｖが前記条件１を満たす場合、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、およびＶ４は、下記（Ｖ７）または（Ｖ８）が好ましい。また、前記第２のｓｃＦｖが前記条件２を満たす場合、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、およびＶ４は、下記（Ｖ５）または（Ｖ６）が好ましい。下記式（３）において、Ｖ１およびＶ２間のアミノ酸配列が、第１のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列であり、Ｖ２およびＶ３間のアミノ酸配列が、Ｆｖ間リンカーペプチドのアミノ酸配列であり、Ｖ３およびＶ４間のアミノ酸配列が、第２のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列である。下記式（３）において、第１のＦｖリンカーペプチドおよび第２のＦｖリンカーペプチドは、Ｆｖリンカーペプチド１であるが、それぞれ、独立に、Ｆｖリンカーペプチド２であってもよい。
[Ｖ１]-[GSTSGSGKPGSGEGSTKG]-[Ｖ２]-[SGSG]-[Ｖ３]-[GSTSGSGKPGSGEGSTKG]-[Ｖ４]　・・・（３）
（Ｖ１）Ｖ１：ＶＨ１、Ｖ２：ＶＬ１、Ｖ３：ＶＨ２、Ｖ４：ＶＬ２
（Ｖ２）Ｖ１：ＶＬ１、Ｖ２：ＶＨ１、Ｖ３：ＶＨ２、Ｖ４：ＶＬ２
（Ｖ３）Ｖ１：ＶＨ１、Ｖ２：ＶＬ１、Ｖ３：ＶＬ２、Ｖ４：ＶＨ２
（Ｖ４）Ｖ１：ＶＬ１、Ｖ２：ＶＨ１、Ｖ３：ＶＬ２、Ｖ４：ＶＨ２
（Ｖ５）Ｖ１：ＶＨ２、Ｖ２：ＶＬ２、Ｖ３：ＶＨ１、Ｖ５：ＶＬ１
（Ｖ６）Ｖ１：ＶＨ２、Ｖ２：ＶＬ２、Ｖ３：ＶＬ１、Ｖ４：ＶＨ１
（Ｖ７）Ｖ１：ＶＬ２、Ｖ２：ＶＨ２、Ｖ３：ＶＨ１、Ｖ４：ＶＬ１
（Ｖ８）Ｖ１：ＶＬ２、Ｖ２：ＶＨ２、Ｖ３：ＶＬ１、Ｖ４：ＶＨ１
　　　ＶＨ１：第１の重鎖可変領域
　　　ＶＬ１：第１の軽鎖可変領域
　　　ＶＨ２：第２の重鎖可変領域
　　　ＶＬ２：第２の軽鎖可変領域
　前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、下記式（４）（配列番号１５９）で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。下記式（４）において、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、およびＮ４は、例えば、下記（Ｎ１）～（Ｎ８）の組合せがあげられる。下記（Ｎ１）～（Ｎ８）は、それぞれ、前記（Ｖ１）～（Ｖ８）の組合せの第１のＢｓＡｂをコードする核酸である。下記式（４）において、Ｎ１およびＮ２間の塩基配列が、第１のＦｖリンカーペプチドをコードする塩基配列であり、Ｎ２およびＮ３間の塩基配列が、Ｆｖ間リンカーペプチドをコードする塩基配列であり、Ｎ３およびＮ４間の塩基配列が、第２のＦｖリンカーペプチドをコードする塩基配列である。下記式（４）において、第１のＦｖリンカーペプチドおよび第２のＦｖリンカーペプチドをコードする塩基配列は、Ｆｖリンカーペプチド１をコードする塩基配列であるが、それぞれ、独立に、Ｆｖリンカーペプチド２をコードする塩基配列であってもよい。
5'-[Ｎ１]-[GGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGC]-[Ｎ２]-[AGCGGATCTGGC]-[Ｎ３]-[GGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGC]-[Ｎ４]-3’　・・・（４）
（Ｎ１）Ｎ１：ＮＨ１、Ｎ２：ＮＬ１、Ｎ３：ＮＨ２、Ｎ４：ＮＬ２
（Ｎ２）Ｎ１：ＮＬ１、Ｎ２：ＮＨ１、Ｎ３：ＮＨ２、Ｎ４：ＮＬ２
（Ｎ３）Ｎ１：ＮＨ１、Ｎ２：ＮＬ１、Ｎ３：ＮＬ２、Ｎ４：ＮＨ２
（Ｎ４）Ｎ１：ＮＬ１、Ｎ２：ＮＨ１、Ｎ３：ＮＬ２、Ｎ４：ＮＨ２
（Ｎ５）Ｎ１：ＮＨ２、Ｎ２：ＮＬ２、Ｎ３：ＮＨ１、Ｎ４：ＮＬ１
（Ｎ６）Ｎ１：ＮＨ２、Ｎ２：ＮＬ２、Ｎ３：ＮＬ１、Ｎ４：ＮＨ１
（Ｎ７）Ｎ１：ＮＬ２、Ｎ２：ＮＨ２、Ｎ３：ＮＨ１、Ｎ４：ＮＬ１
（Ｎ８）Ｎ１：ＮＬ２、Ｎ２：ＮＨ２、Ｎ３：ＮＬ１、Ｎ４：ＮＨ１
　　　ＮＨ１：第１の重鎖可変領域をコードする塩基配列
　　　ＮＬ１：第１の軽鎖可変領域をコードする塩基配列
　　　ＮＨ２：第２の重鎖可変領域をコードする塩基配列
　　　ＮＬ２：第２の軽鎖可変領域をコードする塩基配列
　本発明のＢｓＡｂライブラリは、例えば、複数種類の核酸を含むことが好ましい。この場合、本発明のＢｓＡｂライブラリは、例えば、複数種類の核酸の混合物である。前記複数種類の核酸は、例えば、その一部または全部が、異なる第１のＢｓＡｂをコードしていることが好ましく、異なる第２の抗原結合ドメインをコードしていることが好ましい。複数種類の核酸が異なる第２の抗原結合ドメインをコードしている場合、前記第１のＢｓＡｂにおける第２の抗原結合ドメイン以外の領域は、例えば、同じまたは異なるアミノ酸配列である。本発明のＢｓＡｂライブラリに含まれる前記核酸の種類は、例えば、１×１０５～１×１０６種類、１×１０６～５×１０６種類であり、好ましくは、約１×１０６種類（例えば、８×１０５～２×１０６種類）である。前記ファージディスプレイ法では、約１×１０８種類の核酸が、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖのスクリーニングに必要となる。他方、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、例えば、約１×１０６種類の核酸であっても、前記第２の標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。このため、本発明のＢｓＡｂライブラリによれば、例えば、ファージディスプレイ法と比較して、より少ない数または種類の核酸で、前記第２の標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。
　前記第１のＢｓＡｂは、例えば、Ｎ末端にシグナルペプチドを有してもよい。前記シグナルペプチドは、例えば、小胞体への輸送シグナルとなるシグナルペプチドがあげられる。前記第１のＢｓＡｂは、例えば、タグを有してもよい。前記タグは、例えば、ペプチドタグ、プロテインタグがあげられる。前記タグは、例えば、ＦＬＡＧ（登録商標）タグ、ＨＡタグ、Ｈｉｓタグ、Ｍｙｃタグ、Ｖ５タグ、切断型のＮＧＦＲ（nerve growth factor receptor）等があげられる。前記タグペプチドは、例えば、前記第１のＢｓＡｂのＮ末端およびＣ末端の少なくとも一方に付加される。前記タグが切断型のＮＧＦＲの場合、前記タグは、例えば、前記第１のＢｓＡｂのＣ末端側に配置される。これにより、本発明のＢｓＡｂライブラリは、例えば、１つの細胞に１種類の第１のＢｓＡｂをコードする核酸が導入されるよう、核酸の導入効率を調整できる。前記第１のＢｓＡｂと前記タグとは、リンカーペプチドにより連結されてもよい。
　本発明において、前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、前記第１のＢｓＡｂのアミノ酸配列に基づき、常法により調製できる。具体例として、前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、前述の各ドメインのアミノ酸配列が登録されたデータベースにおいて、前記アミノ酸配列をコードする塩基配列を取得し、前記塩基配列に基づき、分子生物学的手法および／または化学的合成方法により調製できる。前記核酸の塩基配列は、例えば、本発明のＢｓＡｂライブラリを発現させる細胞の由来に応じて、コドン最適化してもよい。
　前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、発現ベクターに導入されてもよい。前記発現ベクターは、例えば、前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸を連結用ベクターに連結することで調製できる。前記連結用ベクターの種類は、特に制限されず、例えば、オンコレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、シュードタイプベクター等のレトロウイルスベクター；アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、シミアンウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、センダイウイルスベクター、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）ベクター、ＨＳＶベクター等のウイルスベクターがあげられる。具体例として、前記連結用ベクターは、例えば、ｐＵＣ、ｐＣＭＶ、ｐＭＸ、ｐＥＬＰ等があげられる。前記連結用ベクターは、例えば、前記発現ベクターを導入する宿主に応じて、適宜設定することもできる。前記宿主は、特に制限されず、例えば、ＣＨＯ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞等の哺乳類由来の培養細胞、免疫細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、リンパ球、顆粒球、マクロファージ等があげられる。前記リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、生体から単離された細胞、多能性幹細胞等の幹細胞から誘導された免疫細胞または免疫細胞由来の培養細胞である。前記Ｔ細胞は、Ｔ細胞様の細胞でもよい。前記Ｔ細胞様の細胞は、例えば、Ｔ細胞に由来する培養細胞等があげられ、具体例として、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞等があげられる。
　前記発現ベクターは、例えば、前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸の発現および前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸がコードする第１のＢｓＡｂの少なくとも一方の発現を調節する、調節配列を有することが好ましい。前記調節配列は、例えば、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル配列、複製起点配列（ｏｒｉ）等があげられる。前記発現ベクターにおいて、前記調節配列の配置は特に制限されない。前記発現ベクターにおいて、前記調節配列は、例えば、前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸の発現およびこれがコードする前記第１のＢｓＡｂの少なくとも一方の発現を、機能的に調節できるように配置されていればよく、公知の方法に基づいて配置できる。前記調節配列は、例えば、前記連結ベクターが予め備える配列を利用してもよいし、前記連結ベクターに、さらに、前記調節配列を挿入してもよいし、前記連結ベクターが備える調節配列を、他の調節配列に置き換えてもよい。
　前記発現ベクターは、例えば、さらに、選択マーカーのコード配列を有してもよい。前記選択マーカーは、例えば、薬剤耐性マーカー、蛍光タンパク質マーカー、酵素マーカー、細胞表面レセプターマーカー等があげられる。
＜第２のスクリーニング方法＞
　本発明の第２のｓｃＦｖのスクリーニング方法（以下、「第２のスクリーニング方法」ともいう）は、前記本発明のＢｓＡｂライブラリから第１のＢｓＡｂを準備する第１の準備工程と、
前記第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、
　前記第１のＢｓＡｂと、前記第２の標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞とを接触させ、
前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、
　前記第１のＢｓＡｂと、前記第１の標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞とを接触させる第１の接触工程と、
前記第１の接触工程において、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂの第２のｓｃＦｖを、前記第２の標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する第１の選抜工程とを含む。
　本発明の第２のスクリーニング方法は、前記第１の準備工程、前記第１の接触工程および前記第１の選抜工程を含み、前記第１の準備工程において、前記本発明のＢｓＡｂライブラリを用いることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の第２のスクリーニング方法によれば、例えば、ハイブリドーマを用いる方法およびファージディスプレイを用いる方法と比較して、より簡便に、第２の標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、本発明の第２のスクリーニング方法によれば、例えば、前記第１の標的抗原または第２の標的抗原を発現する細胞に対して、Ｔ細胞を介した傷害活性等を誘導しうるＢｓＡｂをスクリーニングできる。さらに、前記第２の標的抗原に結合するｓｃＦｖの重鎖可変領域および軽鎖可変領域の各ＣＤＲのアミノ酸配列に基づき、例えば、前記標的抗原に結合可能な抗体またはその抗原結合断片を作製できる。このため、前記第２のスクリーニング方法は、例えば、前記標的抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片のスクリーニング方法ということもできる。本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、第１の抗体等、第２の抗体等、遺伝子、発現ベクター、形質転換体、第１のキメラ抗原受容体、第２のキメラ抗原受容体、核酸、細胞、細胞の製造方法、治療薬、治療方法、ＢｓＡｂライブラリ等の説明を援用できる。本発明の第２のスクリーニング方法によれば、例えば、標的抗原に結合する新たなｓｃＦｖを製造できる。このため、本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、ｓｃＦｖの製造方法ということもできる。
　ファージディスプレイ法等により標的抗原に結合するＢｓＡｂ等を製造する場合、約１×１０１０種類の抗体ライブラリを作成し、標的抗原に結合する抗体を取得した後に、前記抗体からｓｃＦｖを含むＢｓＡｂ等を調製する。そして、前記ＢｓＡｂ等について免疫細胞等を用いて、その有効性について検討する。他方、本発明の第２のスクリーニング方法では、前記本発明のＢｓＡｂライブラリと、前記免疫細胞とを用いるため、例えば、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖのスクリーニングと、前記ライブラリから発現するＢｓＡｂの免疫細胞における有効性の検討について同時に実施することができる。このため、本発明の第２のスクリーニング方法によれば、例えば、標的抗原に結合する抗体を得るために用いられているファージディスプレイ法等と比較して、標的抗原に結合し、かつ免疫細胞等において有効に機能するＢｓＡｂに用いうるｓｃＦｖを簡便にスクリーニングできる。
　前記第１の準備工程は、前記本発明のＢｓＡｂライブラリから第１のＢｓＡｂを準備する工程である。前記第１のＢｓＡｂの準備方法は、特に制限されず、例えば、公知の核酸からタンパク質を合成する方法を利用できる。具体例として、前記第１の準備工程では、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリ（第１のＢｓＡｂライブラリ）を宿主に導入する。そして、前記第１の準備工程では、例えば、前記第１のＢｓＡｂライブラリが導入された宿主を培養することにより、前記宿主に前記ＢｓＡｂを発現させる。前記第１のＢｓＡｂライブラリの導入方法は、特に制限されず、例えば、前記宿主の種類に応じて適宜決定できる。前記宿主が細胞の場合、前記導入方法は、例えば、公知の核酸の細胞への導入方法を利用でき、前記本発明の第１のスクリーニング方法の前記第１の発現工程における導入方法の説明を援用できる。前記宿主の培養条件は、特に制限されず、例えば、前記宿主の種類に応じて適宜決定できる。具体例として、前記宿主が細胞の場合、前記細胞の培養期間は、特に制限されず、例えば、２４時間～２週間、２４～４８時間、１～２週間である。前記細胞の培養温度は、例えば、２８～３７℃である。
　前記第１のＢｓＡｂライブラリは、例えば、前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸でもよいし、前記第１のＢｓＡｂをコードする核酸が導入された発現ベクターでもよい。前記宿主は、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの説明を援用できる。前記宿主は、２９３細胞が好ましい。前記第１のＢｓＡｂは、ライブラリを容易に構築できることから、タンデムｓｃＦｖが好ましい。
　つぎに、前記第１の接触工程では、前記第１のＢｓＡｂと、前記標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞とを接触させる。具体的には、前記第１のＢｓＡｂの第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第１の接触工程では、前記第１のＢｓＡｂと、前記第２の標的抗原と、前記免疫細胞とを接触させる。他方、前記第１のＢｓＡｂの第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第１の接触工程では、前記第１のＢｓＡｂと、前記第１の標的抗原と、前記免疫細胞とを接触させる。前記第１のＢｓＡｂと、前記標的抗原と、前記免疫細胞との接触は、例えば、前記第１のＢｓＡｂと、前記標的抗原と、前記免疫細胞との共存下で培養することにより実施できる。前記培養期間は、例えば、１～９６時間、１～６時間、６～９６時間である。前記培養温度は、例えば、２８～３７℃である。前記免疫細胞と、前記第１のＢｓＡｂの分子数の比は、例えば、１×１０６個の免疫細胞あたり、０．１ｐｍｏｌ以上の第１のＢｓＡｂとなるように設定されることが好ましい。
　前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞は、前記免疫細胞活性化受容体を発現している免疫細胞でもよいし、所定の条件で前記免疫細胞活性化受容体の発現する免疫細胞でもよい。前記所定の条件は、例えば、前記免疫細胞の種類に応じて、適宜設定できる。前記免疫細胞は、前記免疫細胞活性化受容体の種類に応じて適宜決定できる。前記免疫細胞活性化受容体がＣＤ３の場合、前記免疫細胞は、例えば、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞等があげられる。前記免疫細胞活性化受容体がＮＫ細胞の活性化受容体の場合、前記免疫細胞は、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞があげられる。前記免疫細胞活性化受容体がＣＤ１９、ＣＤ７９α、またはＣＤ７９βの場合、前記免疫細胞は、Ｂ細胞があげられる。前記Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、およびＢ細胞は、それぞれ、前述のＴ細胞様の培養細胞、ＮＫ細胞様の培養細胞、ＮＫＴ細胞様の培養細胞、およびＢ細胞様の培養細胞であってもよい。前記免疫細胞活性化受容体および免疫細胞は、それぞれ、ＣＤ３およびＴ細胞またはＴ細胞様の培養細胞であることが好ましい。これにより、本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、前記第１の標的抗原または第２の標的抗原を発現する細胞に対して、Ｔ細胞を介した傷害活性を誘導する可能性が高いＢｓＡｂをスクリーニングできる。
　前記第１のＢｓＡｂは、例えば、１種類でもよいし、複数種類でもよい。後者の場合、前記第１の接触工程では、例えば、前記第１のＢｓＡｂとして、アミノ酸配列の異なる複数種類の第１のＢｓＡｂの混合物を使用する。
　前記第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第１の接触工程において接触させる第２の標的抗原は、例えば、前記第２の標的抗原の単量体、前記第２の標的抗原の複合体、前記第２の標的抗原の発現細胞等があげられ、好ましくは、前記第２の標的抗原の発現細胞である。前記第２の標的抗原の複合体は、例えば、前記第２の標的抗原の多量体（マルチマー）があげられ、具体例として、前記標的抗原の二量体、四量体等があげられる。前記第２の標的抗原の多量体は、例えば、タグを付加した標的抗原を抗体により架橋する方法、ビオチン化された標的抗原をアビジンにより複合体化する方法等により調製できる。前記第２の標的抗原の発現細胞は、例えば、前記第２の標的抗原を内在的に発現する細胞、前記第２の標的抗原をコードする核酸を導入することにより前記第２の標的抗原を発現させた細胞等があげられる。前記第２の標的抗原を発現させる細胞は、例えば、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｋ５６２細胞等があげられる。前記第２の標的抗原を発現させる細胞は、例えば、前記宿主と同じでもよいし、異なってもよい。
　前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第１の接触工程において接触させる第１の標的抗原は、例えば、前記第１の標的抗原の単量体、前記第１の標的抗原の複合体、前記第１の標的抗原の発現細胞等があげられ、好ましくは、前記第１の標的抗原の発現細胞である。前記第１の標的抗原の複合体は、例えば、前記第１の標的抗原の多量体（マルチマー）があげられ、具体例として、前記標的抗原の二量体、四量体等があげられる。前記第１の標的抗原の多量体は、例えば、タグを付加した標的抗原を抗体により架橋する方法、ビオチン化された標的抗原をアビジンにより複合体化する方法等により調製できる。前記第１の標的抗原の発現細胞は、例えば、前記第１の標的抗原を内在的に発現する細胞、前記第１の標的抗原をコードする核酸を導入することにより前記第２の標的抗原を発現させた細胞等があげられる。前記第１の標的抗原を発現させる細胞は、例えば、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｋ５６２細胞等の培養細胞等があげられる。前記第１の標的抗原を発現させる細胞は、例えば、前記宿主と同じでもよいし、異なってもよい。
　そして、前記第１の選抜工程では、前記第１の接触工程において、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂの第２のｓｃＦｖを、前記第２の標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する。前記第２の標的抗原と前記第１のＢｓＡｂとの結合は、例えば、直接または間接的に評価できるが、前記第１の標的抗原または第２の標的抗原を発現する細胞に対して、Ｔ細胞を介した傷害活性等を誘導しうるＢｓＡｂをスクリーニングできることから間接的な評価が好ましい。
　前記直接的な評価方法は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー等の抗体と抗原との結合検出方法より実施できる。具体例として、前記直接的な評価方法は、例えば、標識化された第１の標的抗原または第２の標的抗原のモノマーまたはマルチマーを用いて実施できる。この場合、前記第１の選抜工程では、例えば、前記第１のＢｓＡｂと、前記標識化された第１の標的抗原または第２の標的抗原と、前記免疫細胞とを接触させる。前記第１のＢｓＡｂが前記２の標的抗原に結合する場合、前記第１のＢｓＡｂと、前記標識化された第１の標的抗原または第２の標的抗原と、前記免疫細胞とは複合体を形成する。このため、前記第１の選抜工程では、例えば、前記標識を含む複合体を形成している免疫細胞が存在する場合、前記第１のＢｓＡｂは、前記第２の標的抗原に結合していると評価できる。
　また、前記間接的な評価方法は、例えば、以下のように実施できる。前記第２の標的抗原と結合する第１のＢｓＡｂは、例えば、前記免疫細胞の免疫細胞活性化受容体を架橋する。すると、前記免疫細胞活性化受容体を架橋された免疫細胞は、例えば、前記免疫細胞活性化受容体から生じたシグナルにより活性化する。このため、前記間接的な評価方法は、例えば、前記免疫細胞の活性化を指標に評価する。具体例として、前記第１のＢｓＡｂが前記第２の標的抗原と結合すると、例えば、前記第２の標的抗原と未結合の第１のＢｓＡｂが存在する場合と比較して、前記免疫細胞における活性化マーカーの発現の上昇、サイトカインおよび／またはケモカインの産生量の増加、増殖等が生じる。具体例として、前記免疫細胞がＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞またはＢ細胞の場合、前記各細胞では、例えば、下記活性化マーカーの発現の上昇、下記サイトカインおよび／またはケモカインの産生量の増加、増殖等が生じる。このため、前記第１の選抜工程では、例えば、いずれか１つ以上の指標に基づき、前記免疫細胞が活性化していると判断される場合、前記免疫細胞を活性化させた第１のＢｓＡｂを、前記第２の標的抗原に結合していると評価できる。前記サイトカインおよび／またはケモカインの産生量の増加は、例えば、前記サイトカインおよび／またはケモカインの発現が誘導されると、ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現量が増加するレポーターを用いてもよい。前記レポーターは、例えば、蛍光タンパク質があげられる。
・Ｔ細胞
活性化マーカー：ＣＤ６９、ＣＤ１０７a等
サイトカイン・ケモカイン：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１β等
・ＮＫ細胞
活性化マーカー：ＣＤ６９、ＣＤ１０７a等
サイトカイン・ケモカイン：ＩＮＦ－γ、ＩＬ－１２等
・ＮＫＴ細胞
活性化マーカー：ＣＤ６９、ＣＤ１０７a、ＣＤ２５等
サイトカイン・ケモカイン：ＩＮＦ－γ、ＩＬ－２等
・Ｂ細胞
活性化マーカー：ＣＤ２８、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ１３８、Ｂ２２０等
サイトカイン・ケモカイン：ＣＸＣＲ４等
　そして、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂの第２のｓｃＦｖを、前記第２の標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する。前記第１の候補ｓｃＦｖの選抜は、例えば、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂを発現させた宿主を選抜し、選抜された宿主におけるｓｃＦｖまたはＢｓＡｂをコードする塩基配列を解読することにより実施できる。前記第１の選抜工程では、例えば、さらに、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける、重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とを特定してもよい。各ＣＤＲの特定は、例えば、ゲノム情報を参照し、公知の方法により実施できる。
　これにより、前記第２の標的抗原に結合する新たなｓｃＦｖをスクリーニングできる。また、前記第１のＢｓＡｂライブラリにおける第１のＢｓＡｂが前記条件１を満たす場合、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、前記第２の標的抗原に結合する新たな軽鎖可変領域をスクリーニングできる。前記第１のＢｓＡｂライブラリにおける第１のＢｓＡｂが前記条件２を満たす場合、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、前記第２の標的抗原に結合する新たな重鎖可変領域をスクリーニングできる。
　前記第１のＢｓＡｂが複数種類のＢｓＡｂを含む場合、前記第１の接触工程および前記第１の選抜工程は、１回でもよいし、複数回でもよいが、複数回実施することが好ましい。前記複数回は、例えば、２～５回、２～４回であり、好ましくは、２～３回である。この場合、前記第１の接触工程および前記第１の選抜工程を１セットとし、前記セットを複数回実施することが好ましい。前記第１の接触工程および前記第１の選抜工程を複数回実施する場合、１回目の第１の接触工程および第１の選抜工程の実施後、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂを発現する宿主から、例えば、新たな第１のＢｓＡｂを準備する。この場合、新たな第１のＢｓＡｂが含むＢｓＡｂの種類数は、１つ前の回に第１の接触工程および第１の選抜工程に供したＢｓＡｂの種類数より少ないことが好ましい。前記新たな第１のＢｓＡｂは、例えば、第１のＢｓＡｂを発現する宿主を回収後、希釈する。そして、前記希釈後の宿主を、回収時の細胞密度より低い密度で再播種後、培養し、培養上清を回収することにより、新たな第１のＢｓＡｂを調製できる。そして、本発明の第２のスクリーニング方法では、例えば、新たな第１のＢｓＡｂを用いて、前記第１の接触工程および前記第１の選抜工程を実施する。そして、所望の回数まで同様に接触および選抜を繰り返し実施し、例えば、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂを発現する宿主を単クローン化する。これにより、本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂをより確実に同定できる。
　本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖの新たな重鎖可変領域または軽鎖可変領域を、それぞれ、前記第１のＢｓＡｂライブラリの第２のｓｃＦｖにおける第２の標的抗原に結合する抗原等における重鎖可変領域または軽鎖可変領域として、他方の領域のスクリーニングを実施してもよい。この場合、本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、さらに、前記第１の候補ｓｃＦｖに基づき、第２のＢｓＡｂライブラリを調製する調製工程を含む。
　前記第２のＣＡＲライブラリは、例えば、第２のＢｓＡｂをコードする核酸を含む。また、前記第２のＢｓＡｂは、例えば、第３の抗原結合ドメインと、第４の抗原結合ドメインとを含む。前記第３の抗原結合ドメインは、例えば、前記第１の標的抗原に結合する第３のｓｃＦｖを含む。また、前記第４の抗原結合ドメインは、例えば、前記第２の標的抗原への結合をスクリーニングする第４のｓｃＦｖを含む。
　前記第２のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、第２のＢｓＡｂのアミノ酸配列をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を意味する。
　本発明の第２のスクリーニング方法において、前記第２のＢｓＡｂは、例えば、前記第１のＢｓＡｂと同じ構造を有してもよいし、異なる構造を有してもよい。前記第２のＢｓＡｂは、ライブラリを容易に構築できることから、タンデムｓｃＦｖであることが好ましい。
　前記第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、第２のＢｓＡｂにおける前記第１の標的抗原は、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」の第１のＢｓＡｂにおける前記第１の標的抗原と同じでもよいし、異なってもよい。後者の場合、前記第２のＢｓＡｂの第１の標的抗原は、例えば、前記第１のＢｓＡｂの第１の標的抗原とは異なるサブユニットまたは複合体である。
　前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２のＢｓＡｂにおける前記第１の標的抗原は、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（２）第２の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」の第１のＢｓＡｂにおける前記第１の標的抗原と同じであり、その説明を援用できる。
　前記第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２のＢｓＡｂにおける前記第２の標的抗原は、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」の第１のＢｓＡｂにおける前記第２の標的抗原と同じであり、その説明を援用できる。
　前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２のＢｓＡｂにおける前記第２の標的抗原は、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（２）第２の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」の第１のＢｓＡｂにおける前記第２の標的抗原と同じでもよいし、異なってもよい。後者の場合、前記第２のＢｓＡｂの第２の標的抗原は、例えば、前記第１のＢｓＡｂの第１の標的抗原とは異なるサブユニットまたは複合体である。
　前記第３のｓｃＦｖは、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリにおける「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」の第１のｓｃＦｖの説明において、「第１のｓｃＦｖ」を「第３のｓｃＦｖ」に、「第１の重鎖可変領域」を「第３の重鎖可変領域」に、「第１の軽鎖可変領域」を「第３の軽鎖可変領域」に読み替えて、その説明を援用できる。前記第２のＢｓＡｂにおける第３のｓｃＦｖは、前記第１のＢｓＡｂにおける第１のｓｃＦｖと同じでもよいし、異なってもよい。
　前記第３のｓｃＦｖにおいて、前記第３の重鎖可変領域および前記第３の軽鎖可変領域は、例えば、第３のリンカーペプチド（第３のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第３のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第３のｓｃＦｖの前記第２の標的抗原への結合を阻害しないことが好ましい。前記第３のＦｖリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記第３のＦｖリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記第３のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。
　前記第２のＢｓＡｂにおいて、第４のｓｃＦｖは、第４の重鎖可変領域と、第４の軽鎖可変領域とを含む。前記第４の重鎖可変領域および前記第４の軽鎖可変領域は、抗体分子における重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同様の構造を有し、その構造について、例えば、前記第１のｓｃＦｖの説明を援用できる。
　前記第４の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第４の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。また、前記第４の重鎖可変領域および前記第４の軽鎖可変領域は、下記条件３または条件４を満たす。
条件３：
前記第１の準備工程におけるＢｓＡｂライブラリが前記条件１を満たす場合、
前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記第１の候補ＢｓＡｂにおける軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件４：
前記第１の準備工程におけるＢｓＡｂライブラリが前記条件２を満たす場合、
前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記第１の候補ＢｓＡｂにおける重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
　前記条件３は、例えば、前記条件１を満たす第１のＢｓＡｂライブラリを用いてスクリーニングされた第１の候補ｓｃＦｖを用いて、第２のＢｓＡｂライブラリを調製する場合である。前記条件３では、例えば、前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記第１の候補ｓｃＦｖを用い、前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３について、前記第２の標的抗原への結合をスクリーニングする。
　前記第４の重鎖可変領域における第２のＢ細胞受容体は、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」の条件２の第２の重鎖可変領域の説明において、「第１のＢ細胞受容体」を「第２のＢ細胞受容体」に、「第２の重鎖可変領域」を、「第４の重鎖可変領域」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第４の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第２のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＨの説明における「第２のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第４の重鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第４の重鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体における重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第４の軽鎖可変領域において、ＦＲは、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のＦＲを含んでもよい。前記第４の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」と、前記各ＦＲＬの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」とは、同じｓｃＦｖであることが好ましい。
　前記第４の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第４の軽鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　つぎに、前記条件４は、例えば、前記条件２を満たす第１のＢｓＡｂライブラリを用いてスクリーニングされた第１の候補ｓｃＦｖを用いて、第２のＢｓＡｂライブラリを調製する場合である。前記条件４では、例えば、前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、前記第１の候補ｓｃＦｖを用い、前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３について、前記第２の標的抗原への結合をスクリーニングする。
　前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第４の重鎖可変領域におけるＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４は、例えば、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖのＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３、およびＦＲＨ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＨの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」と、前記各ＦＲＨの説明における「第１の候補ｓｃＦｖ」とは、同じｓｃＦｖであることが好ましい。
　前記第４の重鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第４の重鎖可変領域は、例えば、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第４の軽鎖可変領域における第２のＢ細胞受容体は、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリの「（１）第１の標的抗原：免疫細胞活性化受容体」の条件１の第２の軽鎖可変領域の説明において、「第１のＢ細胞受容体」を「第２のＢ細胞受容体」に、「第２の軽鎖可変領域」を「第４の軽鎖可変領域」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第４の軽鎖可変領域におけるＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４は、例えば、それぞれ、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体のＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３、およびＦＲＬ４のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。前記各ＣＤＲＬの説明における「第２のＢ細胞受容体」と、前記各ＦＲＬの説明における「第２のＢ細胞受容体」とは、同じＢ細胞受容体であることが好ましい。
　前記第４の軽鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域を含んでもよい。この場合、前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列からなるポリペプチドでもよいし、前記第２のＢ細胞受容体における軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むポリペプチドでもよい。
　前記第４のｓｃＦｖにおいて、前記第４の重鎖可変領域および前記第４の軽鎖可変領域は、例えば、第４のリンカーペプチド（第４のＦｖリンカーペプチド）により連結されている。前記第４のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第４のｓｃＦｖの前記免疫細胞活性化受容体への結合を阻害しないことが好ましい。前記第４のＦｖリンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記第４のＦｖリンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。前記第４のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。前記第４のｓｃＦｖにおける第４のＦｖリンカーペプチドは、例えば、前記第１のｓｃＦｖにおける第１のＦｖリンカーペプチドと同じでもよいし、異なってもよい。
　前記第３のｓｃＦｖおよび前記第４のｓｃＦｖは、例えば、直接または間接的に連結されていてもよいし、前記第３のｓｃＦｖおよび前記第４のｓｃＦｖを共存させた場合、両者が会合（結合）するように形成してもよい。前記第３のｓｃＦｖおよび前記第４のｓｃＦｖの連結は、例えば、前記第２のＢｓＡｂの種類に応じて、適宜設計できる。具体例として、前記第２のＢｓＡｂがタンデムｓｃＦｖの場合、前記第３のｓｃＦｖおよび前記第４のｓｃＦｖは、リンカーペプチド（Ｆｖ間リンカーペプチド）により連結されている。前記Ｆｖ間リンカーペプチドは、例えば、１～４０個、１～１８個、１～１５個、１～７個、１～３個、１個または２個のアミノ酸から構成される。前記Ｆｖ間リンカーペプチドは、例えば、グリシンおよびセリン等のアミノ酸から構成されており、具体例として、（GGGGS）ｎがあげられる。前記ｎは、例えば、１～６の整数である。具体例として、前記Ｆｖ間リンカーペプチドのアミノ酸配列は、例えば、前記配列番号１または２のアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。前記会合は、例えば、アミノ酸側鎖の電荷を利用できる。具体例として、前記会合は、例えば、一方の結合ドメインに正の電荷を有するアミノ酸のドメインを付加し、他方の結合ドメインに負の電荷を有するアミノ酸のドメインを付加することにより、誘導できる。また、前記会合は、例えば、タグ配列とタグ配列を認識するポリペプチドの組合せ等も利用できる。
　前記第２のＢｓＡｂにおいて、前記第３のｓｃＦｖおよび前記第４のｓｃＦｖの配置順序は、例えば、Ｎ末端側から、前記第３のｓｃＦｖおよび前記第４のｓｃＦｖがこの順序で配置されてもよいし、Ｎ末端側から、前記第４のｓｃＦｖおよび前記第３のｓｃＦｖがこの順序で配置されてもよい。
　前記第２のＢｓＡｂは、例えば、下記式（５）（配列番号１６０）で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドがあげられる。下記式（５）において、Ｖ５、Ｖ６、Ｖ７、およびＶ８は、例えば、下記（Ｖ９）～（Ｖ１６）の組合せがあげられる。前記第４のｓｃＦｖが前記条件３を満たす場合、Ｖ５、Ｖ６、Ｖ７、およびＶ８は、下記（Ｖ１３）または（Ｖ１４）を満たすことが好ましい。前記第４のｓｃＦｖが前記条件４を満たす場合、Ｖ５、Ｖ６、Ｖ７、およびＶ８は、下記（Ｖ１５）または（Ｖ１６）を満たすことが好ましい。下記式（５）において、Ｖ５およびＶ６間のアミノ酸配列が、第１のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列であり、Ｖ６およびＶ７間のアミノ酸配列が、Ｆｖ間リンカーペプチドのアミノ酸配列であり、Ｖ７およびＶ８間のアミノ酸配列が、第２のＦｖリンカーペプチドのアミノ酸配列である。下記式（４）において、第１のＦｖリンカーペプチドおよび第２のＦｖリンカーペプチドは、Ｆｖリンカーペプチド１であるが、それぞれ、独立に、Ｆｖリンカーペプチド２であってもよい。
[Ｖ５]-[GSTSGSGKPGSGEGSTKG]-[Ｖ６]-[SGSG]-[Ｖ７]-[GSTSGSGKPGSGEGSTKG]-[Ｖ８]　・・・（５）
（Ｖ９）　Ｖ５：ＶＨ３、Ｖ６：ＶＬ３、Ｖ７：ＶＨ４、Ｖ８：ＶＬ４
（Ｖ１０）Ｖ５：ＶＬ３、Ｖ６：ＶＨ３、Ｖ７：ＶＨ４、Ｖ８：ＶＬ４
（Ｖ１１）Ｖ５：ＶＨ３、Ｖ６：ＶＬ３、Ｖ７：ＶＬ４、Ｖ８：ＶＨ４
（Ｖ１２）Ｖ５：ＶＬ３、Ｖ６：ＶＨ３、Ｖ７：ＶＬ４、Ｖ８：ＶＨ４
（Ｖ１３）Ｖ５：ＶＨ４、Ｖ６：ＶＬ４、Ｖ７：ＶＨ３、Ｖ８：ＶＬ３
（Ｖ１４）Ｖ５：ＶＨ４、Ｖ６：ＶＬ４、Ｖ７：ＶＬ３、Ｖ８：ＶＨ３
（Ｖ１５）Ｖ５：ＶＬ４、Ｖ６：ＶＨ４、Ｖ７：ＶＨ３、Ｖ８：ＶＬ３
（Ｖ１６）Ｖ５：ＶＬ４、Ｖ６：ＶＨ４、Ｖ７：ＶＬ３、Ｖ８：ＶＨ３
　　　ＶＨ３：第３の重鎖可変領域
　　　ＶＬ３：第３の軽鎖可変領域
　　　ＶＨ４：第４の重鎖可変領域
　　　ＶＬ４：第４の軽鎖可変領域
　前記第２のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、下記式（６）（配列番号１６１）で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。下記式（６）において、Ｎ５、Ｎ６、Ｎ７、およびＮ８は、例えば、下記（Ｎ９）～（Ｎ１６）の組合せがあげられる。下記（Ｎ９）～（Ｎ１６）は、それぞれ、前記（Ｖ９）～（Ｖ１６）の組合せの第２のＢｓＡｂをコードする核酸である。下記式（６）において、Ｎ５およびＮ６間の塩基配列が、第１のＦｖリンカーペプチドをコードする塩基配列であり、Ｎ６およびＮ７間の塩基配列が、Ｆｖ間リンカーペプチドをコードする塩基配列であり、Ｎ７およびＮ８間の塩基配列が、第２のＦｖリンカーペプチドをコードする塩基配列である。下記式（６）において、第１のＦｖリンカーペプチドおよび第２のＦｖリンカーペプチドをコードする塩基配列は、Ｆｖリンカーペプチド１をコードする塩基配列であるが、それぞれ、独立に、Ｆｖリンカーペプチド２をコードする塩基配列であってもよい。
5'-[Ｎ５]-[GGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGC]-[Ｎ６]-[AGCGGATCTGGC]-[Ｎ７]-[GGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGC]-[Ｎ８]-3’・・・（６）
（Ｎ９）　Ｎ５：ＮＨ３、Ｎ６：ＮＬ３、Ｎ７：ＮＨ４、Ｎ８：ＮＬ４
（Ｎ１０）Ｎ５：ＮＬ３、Ｎ６：ＮＨ３、Ｎ７：ＮＨ４、Ｎ８：ＮＬ４
（Ｎ１１）Ｎ５：ＮＨ３、Ｎ６：ＮＬ３、Ｎ７：ＮＬ４、Ｎ８：ＮＨ４
（Ｎ１２）Ｎ５：ＮＬ３、Ｎ６：ＮＨ３、Ｎ７：ＮＬ４、Ｎ８：ＮＨ４
（Ｎ１３）Ｎ５：ＮＨ４、Ｎ６：ＮＬ４、Ｎ７：ＮＨ３、Ｎ８：ＮＬ３
（Ｎ１４）Ｎ５：ＮＨ４、Ｎ６：ＮＬ４、Ｎ７：ＮＬ３、Ｎ８：ＮＨ３
（Ｎ１５）Ｎ５：ＮＬ４、Ｎ６：ＮＨ４、Ｎ７：ＮＨ３、Ｎ８：ＮＬ３
（Ｎ１６）Ｎ５：ＮＬ４、Ｎ６：ＮＨ４、Ｎ７：ＮＬ３、Ｎ８：ＮＨ３
　　　ＮＨ３：第３の重鎖可変領域をコードする塩基配列
　　　ＮＬ３：第３の軽鎖可変領域をコードする塩基配列
　　　ＮＨ４：第４の重鎖可変領域をコードする塩基配列
　　　ＮＬ４：第４の軽鎖可変領域をコードする塩基配列
　前記第２のＢｓＡｂライブラリは、例えば、複数種類の核酸を含むことが好ましい。この場合、前記第２のＢｓＡｂライブラリは、例えば、複数種類の核酸の混合物である。前記複数種類の核酸は、例えば、その一部または全部が、異なる第２のＢｓＡｂをコードしていることが好ましく、異なる第４の抗原結合ドメインをコードしていることが好ましい。複数種類の核酸が異なる第４の抗原結合ドメインをコードしている場合、前記第２のＢｓＡｂにおける第４の抗原結合ドメイン以外の領域は、例えば、同じまたは異なるアミノ酸配列である。前記２のＢｓＡｂライブラリに含まれる前記核酸の種類は、例えば、１×１０５～１×１０６種類、１×１０６～５×１０６種類であり、好ましくは、約１×１０６種類（例えば、８×１０５～２×１０６種類）である。
　前記第２のＢｓＡｂは、例えば、Ｎ末端にシグナルペプチドを有してもよい。前記第２のＢｓＡｂは、例えば、タグを有してもよい。前記シグナルペプチドおよびタグは、例えば、前記第１のＢｓＡｂにおけるシグナルペプチドおよびタグの説明において、「第１のＢｓＡｂ」を「第２のＢｓＡｂ」に読み替えて、その説明を援用できる。
　本発明において、前記第２のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、前記第２のＢｓＡｂのアミノ酸配列に基づき、常法により調製できる。具体例として、前記第２のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、前述の各ドメインのアミノ酸配列が登録されたデータベースにおいて、前記アミノ酸配列をコードする塩基配列を取得し、前記塩基配列に基づき、分子生物学的手法および／または化学的合成方法により調製できる。前記核酸の塩基配列は、例えば、前記第２のＢｓＡｂライブラリを発現させる細胞の由来に応じて、コドン最適化してもよい。
　前記第２のＢｓＡｂをコードする核酸は、例えば、発現ベクターに導入されてもよい。前記発現ベクターは、例えば、前記本発明のＢｓＡｂライブラリにおける発現ベクターの説明を援用できる。
　つぎに、本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、前記第１のＢｓＡｂライブラリに代えて、前記調製工程において調製された第２のＢｓＡｂライブラリを用いる以外は、同様にして、準備工程、接触工程、および選抜工程を実施する。具体的には、本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、さらに、前記第２のＢｓＡｂライブラリから第２のＢｓＡｂを準備する第２の準備工程と、前記第２のＢｓＡｂと、前記標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能免疫細胞とを接触させる第２の接触工程と、前記第２の接触工程において、前記第２の標的抗原と結合した第２のＢｓＡｂの第４のｓｃＦｖを、前記第２の標的抗原に結合する第２の候補ｓｃＦｖとして選抜する第２の選抜工程とを含む。また、前記第２のＢｓＡｂの第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２の接触工程では、例えば、前記第２のＢｓＡｂと、前記第２の標的抗原と、前記免疫細胞とを接触させる。他方、前記第２のＢｓＡｂの第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、前記第２の接触工程では、例えば、前記第２のＢｓＡｂと、前記第１の標的抗原と、前記免疫細胞とを接触させる。
　前記第２の準備工程は、例えば、前記第１の準備工程の説明において、「第１の準備工程」を「第２の準備工程」に、「第１のＢｓＡｂライブラリ」を「第２のＢｓＡｂライブラリ」に、「第１のＢｓＡｂ」を「第２のＢｓＡｂ」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第２の接触工程は、例えば、前記第１の接触工程の説明において、「第１の準備工程」を「第２の準備工程」に、「第１の接触工程」を「第２の接触工程」に読み替えてその説明を援用できる。
　前記第２の選抜工程は、例えば、前記第１の選抜工程の説明において、「第１の接触工程」を「第２の接触工程」に、「第１の選抜工程」を「第２の選抜工程」に、「第２のｓｃＦｖ」を「第４のｓｃＦｖ」に、「第１の候補ｓｃＦｖ」を「第２の候補ｓｃＦｖ」に、「第１のＢｓＡｂ」を「第２のＢｓＡｂ」に読み替えてその説明を援用できる。
　これにより、本発明の第２のスクリーニング方法は、例えば、前記第２の標的抗原に結合する新たな重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有するｓｃＦｖをスクリーニングできる。
＜第３のｓｃＦｖの製造方法＞
　本発明のｓｃＦｖの製造方法は、前述のように、第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ライブラリの発現細胞を動物に投与する第１の投与工程と、
前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する第１の採取工程とを含み、
前記第１のＣＡＲライブラリは、第１のＣＡＲをコードする核酸を含み、
前記第１のＣＡＲは、第１の抗原結合ドメインと、第１の膜貫通ドメインと、第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記第１の抗原結合ドメインは、標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、
前記第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含み、
前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たす。
（条件１）
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
（条件２）
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を動物に投与する第１の投与工程と、前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する第１の採取工程を含むことが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記本発明のＣＡＲライブラリ、第１のスクリーニング方法、およびＣＡＲライブラリ細胞の説明を援用できる。
　ＣＡＲライブラリ発現細胞において、前記標的抗原に結合するｓｃＦｖを有するＣＡＲを発現している細胞は、前記動物内において、前記標的抗原依存的に活性化する。そして、活性化されたＣＡＲライブラリ発現細胞は、前記動物において、前記標的抗原を発現する部位に移動し、集積する。このため、本発明の製造方法は、前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取することで、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能しうり、さらに、例えば、局所浸潤にも関与しうるｓｃＦｖを製造できる。また、前記細胞は、前記標的抗原依存的に活性化するため、前記標的抗原が発現する組織に集積するＣＡＲライブラリ発現細胞におけるｓｃＦｖは、前記標的抗原を認識する可能性が高いといえる。したがって、本発明の製造方法は、例えば、前記標的抗原に結合し、Ｔ細胞等の免疫細胞を活性化しうるｓｃＦｖを製造できるといえる。
　さらに、本発明の製造方法で用いる第１のＣＡＲライブラリにおいて、前記第１のＣＡＲは、前記第１の抗原結合ドメインと、前記第１の膜貫通ドメインと、前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含むタンパク質である。前記第１のＣＡＲは、例えば、抗原に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲに類似した構造を有し、前記抗原に結合する細胞外ドメインが、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第１の抗原結合ドメインに変更されている。このため、本発明の製造方法によれば、前記標的抗原に結合し、Ｔ細胞等の免疫細胞を活性化しうる新たなｓｃＦｖをスクリーニングできる。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法において、前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞（以下、「第１の発現細胞」ともいう）は、例えば、前記第１のＣＡＲをコードする核酸を含む第１のＣＡＲライブラリを、細胞に導入することにより調製できる。このため、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第１の投与工程に先立ち、前記第１のＣＡＲライブラリを準備する第１の準備工程を含んでもよい。また、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第１の投与工程に先立ち、前記第１のＣＡＲライブラリを細胞に導入し、前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を調製する第１の調製工程を含んでもよい。
　前記第１の準備工程は、前記第１のＣＡＲライブラリを準備する。前記第１のＣＡＲライブラリは、前述のように、第１のＣＡＲをコードする核酸を含む。前記第１のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、第１のＣＡＲのアミノ酸配列をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を意味する。前記第１のＣＡＲライブラリは、前記本発明のＣＡＲライブラリにおける第１のＣＡＲライブラリと同様であり、その説明を援用できる。
　前記第１のｓｃＦｖにおいて、前記標的抗原は、例えば、前記本発明のＣＡＲライブラリにおける説明を援用できる。
　前記第１の調製工程では、前記第１のＣＡＲライブラリを細胞に導入し、前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を調製する。具体的には、前記第１の調製工程では、例えば、前記細胞に、前記第１のＣＡＲライブラリを導入する。そして、前記第１の調製工程では、例えば、前記第１のＣＡＲライブラリが導入された細胞を培養することにより、前記細胞に前記第１のＣＡＲライブラリを発現させる。前記第１のＣＡＲライブラリの導入方法は、特に制限されず、例えば、公知の核酸の細胞への導入方法を利用できる。具体例として、前記第１のＣＡＲライブラリの導入方法は、例えば、リポソーム、カチオニックリピッド等の核酸導入試薬を用いる方法、レトロウイルス、レンチウイルス等のウイルスを用いる方法等があげられる。前記細胞の培養期間は、特に制限されず、例えば、６時間～３０日、６～９６時間、１～３０日である。前記細胞の培養温度は、例えば、２８～３７℃である。
　前記第１のＣＡＲライブラリは、例えば、前記第１のＣＡＲをコードする核酸でもよいし、前記第１のＣＡＲをコードする核酸が導入された発現ベクターでもよい。
　前記細胞は、特に制限されず、例えば、ＣＨＯ細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞等の哺乳類由来の培養細胞、免疫細胞等があげられる。前記免疫細胞は、特に制限されず、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、生体から単離された免疫細胞、多能性幹細胞等の幹細胞から誘導された免疫細胞または免疫細胞由来の培養細胞があげられる。前記単離された免疫細胞は、例えば、免疫細胞様の培養細胞でもよく、具体例として、Ｔ細胞様の培養細胞、ＮＫ細胞様の培養細胞、ＮＫＴ細胞様の培養細胞、Ｂ細胞様の培養細胞等があげられる。前記免疫細胞は、例えば、生体から単離された免疫細胞であり、具体例として、ヒト末梢血由来の免疫細胞があげられる。前記Ｔ細胞様の培養細胞は、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞等があげられる。前記細胞は、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能する可能性がより高いｓｃＦｖをスクリーニングできることから、Ｔ細胞またはＴ細胞様の培養細胞が好ましい。
　つぎに、前記第１の投与工程では、前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を動物に投与する。前記第１の投与工程では、複数種類の第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を投与することが好ましい。この場合、前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞は、例えば、複数種類の発現細胞の混合物である。前記複数種類の発現細胞は、例えば、その一部または全部が、異なる第１のＣＡＲをコードしていることが好ましく、異なる第１の抗原結合ドメインをコードしていることが好ましい。複数種類の発現細胞が異なる第１の抗原結合ドメインをコードしている場合、前記第１のＣＡＲにおける第１の抗原結合ドメイン以外の領域は、例えば、同じまたは異なるアミノ酸配列である。前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞の種類は、例えば、前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞に含まれる前記第１のＣＡＲの種類ともいえる。前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞に含まれる前記第１のＣＡＲの種類は、例えば、１×１０５～１×１０７種類、１×１０５～１×１０６種類、１×１０６～５×１０６種類であり、好ましくは、約２×１０６種類（例えば、１×１０６～３×１０６種類）である。前記第１のＣＡＲの種類は、例えば、１×１０６細胞あたりの種類である。前記第１のＣＡＲの種類は、例えば、第１のＣＡＲをコードする核酸の不均一性（heterogeneity）ということもできる。前記不均一性は、前述のように、例えば、制限酵素マッピング、各ＣＤＲおよび／または各ＦＲＨについてサンガー法等のシークエンス等で測定できる。
　前記第１の発現細胞の投与条件は、特に制限されず、例えば、前記標的抗原の種類および量、ならびに前記動物における標的抗原の発現位置に応じて、投与形態、投与方法、投与時期、投与量等を適宜設定できる。
　前記動物（投与対象）は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ、ブタ等の哺乳類等があげられる。
　前記動物は、免疫抑制動物であることが好ましい。前記動物がマウスの場合、前記免疫抑制マウスは、ヌードマウス、ＳＣＩＤ（Severe combined immunodeficiency）マウス、ＮＯＧ（NOD/Shi-scid,IL-2RγKO）マウス等があげられる。
　前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象に応じて適宜決定できる。前記投与方法は、例えば、非経口投与、経口投与等があげられる。前記非経口投与は、例えば、局所投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、リンパ管内投与、腫瘍内投与等があげられる。前記投与方法は、好ましくは、静脈内投与またはリンパ管内投与である。
　前記第１の発現細胞の投与条件は、特に制限されない。前記投与方法が静脈内投与の場合、前記第第１の発現細胞の投与条件は、例えば、マウスに対する１回あたりの投与量（合計）は、例えば、１×１０６～３×１０１０細胞であり、好ましくは、１×１０６～１×１０８細胞、１×１０６～１×１０７細胞、または約５×１０６細胞である。前記第１の発現細胞の投与回数は、例えば、１週間～４週間に１回である。
　前記動物は、例えば、前記標的抗原を内在性に発現してもよいし、外因性に発現してもよい。後者の場合、前記動物は、例えば、前記標的抗原をコードする核酸または発現ベクターを導入することにより発現させてもよいし、前記標的抗原を発現する細胞を導入することにより発現させてもよい。
　前記標的抗原を発現する細胞を導入する場合、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第１の投与工程に先立ち、標的抗原を発現する細胞を前記動物に導入し、前記標的抗原を発現する組織を形成させる第１の形成工程を含んでもよい。前記導入される細胞は、例えば、標的抗原を発現する細胞でもよいし、分化後または特定の条件で標的抗原を発現する細胞でもよい。前記特定の条件で標的抗原を発現する細胞は、例えば、ドキシサイクリン等の誘導物質処理により標的抗原の発現が誘導される細胞等があげられる。導入された細胞により形成される組織の種類は、特に制限されず、前記標的抗原に応じて、適宜設定できる。前記組織は、１種類でもよいし、２種類以上でもよい。後者の場合、導入された細胞により、臓器が形成されてもよい。具体例として、前記標的抗原が腫瘍抗原の場合、前記第１の形成工程では、前記標的抗原を発現する腫瘍細胞を前記動物に、前記標的抗原を発現する腫瘍組織を形成させる。本発明において、前記「組織」は、例えば、細胞の集合体を意味する。前記集合体内の細胞の種類は、１種類でもよいし、２種類以上でもよい。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、前記第１の投与工程後、前記標的抗原を前記動物に投与する第１の刺激工程を含む。本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第１の刺激工程を含むことで、前記第１の発現細胞において、標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞をプライミングでき、これにより、標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞をより効率よく前記標的抗原を発現する組織に集積させることができる。前記第１の刺激工程は、例えば、前記第１の投与工程後、後述の第１の採取工程に実施する。
　前記第１の刺激工程は、例えば、前記標的抗原を用いた動物免疫と同様の方法で実施できる。具体的には、前記第１の刺激工程では、前記標的抗原、前記標的抗原をコードする核酸分子、または前記標的抗原を発現する細胞を前記動物に投与することにより、実施できる。前記標的抗原の投与においては、例えば、免疫賦活剤（アジュバント）を併用してもよい。
　つぎに、前記第１の採取工程では、前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する。前記第１の採取工程では、組織に集積した前記第１の発現細胞を回収してもよいし、前記第１の発現細胞が集積した組織を採取し、前記組織から前記第１の発現細胞を回収してもよい。前記組織は、前述のように、１種類でもよい、２種類以上でもよい。後者の場合、前記第１の採取工程では、２種類以上の組織に集積した前記第１の発現細胞を回収することが好ましい。この場合、前記第１の採取工程では、前記第１の発現細胞が集積した２種類以上の組織を採取し、前記２種類以上の組織から前記第１の発現細胞を回収してもよい。前記第１の採取工程において、前記組織を採取する場合、前記組織の一部または全部を採取する。前記第１の採取工程では、前記第１の発現細胞の採取に先立ち、前記組織に前記第１の発現細胞が集積しているかを確認してもよい。前記確認は、例えば、２光子励起顕微鏡等のライブイメージングが可能な顕微鏡を用いて実施できる。また、前記確認を実施する場合、前記第１の発現細胞は、ＳＬＲ等のルシフェラーゼを発現させることが好ましい。また、前記確認を実施する場合、前記第１の発現細胞は、例えば、前記確認に先立ち、蛍光タンパク質等の標識物質により標識してもよい。
　前記第１の採取工程は、前記第１の投与工程後、任意の期間後に実施してよい。前記第１の投与工程後、前記第１の採取工程までの期間は、例えば、８時間～１ヶ月、１日～２週間、１日～１週間があげられる。前記第１の刺激工程後に、前記第１の採取工程を実施する場合、前記第１の投与工程後、前記第１の採取工程までの期間は、例えば、前記標的抗原特異的ＣＡＲを発現する細胞が活性化および集積する迄の時間であり、具体例として、１日～２週間、１日～１週間があげられる。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第１の採取工程後、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を、前記標的抗原で再刺激する第１の再刺激工程を含むことが好ましい。これにより、前記第１の再刺激工程では、前記標的抗原を発現する組織に集積した第１のＣＡＲライブラリ発現細胞において、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を増殖させることができる。このため、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第１の再刺激工程を含むことにより、例えば、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を富化でき、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞における第１の重鎖可変領域および第１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列およびそれをコードする塩基配列を容易に決定できる。
　前記第１の再刺激工程において、前記標的抗原による再刺激の方法は、特に制限されず、例えば、前記組織から採取された第１のＣＡＲライブラリ発現細胞と、前記標的抗原とを共存させることにより実施できる。前記標的抗原は、例えば、前記共存下において、単体で存在してもよいし、二量体、三量体等の多量体として存在してもよいし、細胞として存在してもよい。前記標的抗原が細胞として存在する場合、前記細胞は、前記標的抗原を発現する細胞である。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、前記第１の採取工程で採取された第１の発現細胞における第１の重鎖可変領域および第１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定する第１の配列決定工程を含んでもよい。前記第１の重鎖可変領域および第１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、例えば、前記第１の重鎖可変領域および第１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードする塩基配列を決定することにより実施できる。具体的には、前記第１の配列決定工程では、前記第１の採取工程で採取された第１の発現細胞から核酸を抽出し、前記核酸における前記第１の重鎖可変領域および第１の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を増幅し、前記塩基配列を決定することにより実施できる。これにより、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、前記第１のＢ細胞受容体由来の第１の重鎖可変領域または第１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定できる。
　前記第１の配列決定工程では、例えば、さらに、前記第１の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、前記第１の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とを特定してもよい。各ＣＤＲの特定は、例えば、ゲノム情報（例えば、ＩＭＧＴのホームページ<http://www.imgt.org/>）を参照し、公知の方法により実施できる。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、前記第１の採取工程で採取された第１の発現細胞における第１のＢ細胞受容体由来の第１の重鎖可変領域または第１の軽鎖可変領域を、それぞれ、前記第１のＣＡＲライブラリにおける標的抗原に結合する抗原等における重鎖可変領域または軽鎖可変領域として、他方の領域のスクリーニングを実施してもよい。すなわち、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、第１のＣＡＲライブラリを用いてスクリーニングされた第１のｓｃＦｖ（前記第１の採取工程で採取された第１の発現細胞における第１のｓｃＦｖ）において新たに同定された第１の重鎖可変領域または第１の軽鎖可変領域を用いて、他方の領域のスクリーニングを実施してもよい。この場合、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、さらに、前記第１の採取工程で採取された第１の発現細胞における第１のＢ細胞受容体由来の第１の重鎖可変領域または第１の軽鎖可変領域に基づき、第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を調製し、前記第１の投与工程および第１の採取工程と同様の工程を実施してもよい。この場合、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、第２のＣＡＲライブラリの発現細胞を動物に投与する第２の投与工程と、前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する第２の採取工程とを含む。
　前記第２のＣＡＲライブラリは、例えば、第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。また、前記第２のＣＡＲは、例えば、第２の抗原結合ドメインと、第２の膜貫通ドメインと、第２の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。また、前記第２の抗原結合ドメインは、例えば、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含む。
　前記第２のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、第２のＣＡＲのアミノ酸配列をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を意味する。
　前記第２のｓｃＦｖにおいて、前記標的抗原は、前記第１のｓｃＦｖにおける標的抗原と同じである。前記第２のｓｃＦｖは、例えば、前記第１のｓｃＦｖと類似の構造を有する。
　前記第２のｓｃＦｖは、例えば、第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域を含む。前記第２の重鎖可変領域は、例えば、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。また、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、例えば、下記条件３または条件４を満たす。
（条件３）
前記第１のＣＡＲライブラリが前記条件１を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞のｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
（条件４）
前記第１のＣＡＲライブラリが前記条件２を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞のｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法において、前記第２のＣＡＲライブラリの発現細胞（以下、「第２の発現細胞」ともいう）は、例えば、前記第２のＣＡＲをコードする核酸を含む第２のＣＡＲライブラリを、細胞に導入することにより調製できる。このため、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第２の投与工程に先立ち、前記第２のＣＡＲライブラリを準備する第２の準備工程を含んでもよい。また、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第２の投与工程に先立ち、前記第２のＣＡＲライブラリを細胞に導入し、前記第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を調製する第２の調製工程を含んでもよい。
　前記第２の準備工程は、前記第２のＣＡＲライブラリを準備する。前記第２のＣＡＲライブラリは、前述のように、第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。前記第２のＣＡＲをコードする核酸は、例えば、第２のＣＡＲのアミノ酸配列をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を意味する。前記第２のＣＡＲライブラリは、前記本発明のＣＡＲライブラリにおける第２のＣＡＲライブラリと同様であり、その説明を援用できる。
　前述のように、前記第２の重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を有する。前記第２の軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を有する。また、前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、前記条件３または条件４を満たす。
　前記条件３は、例えば、前記条件１を満たす第１のＣＡＲライブラリを用いてスクリーニングされた第１の軽鎖可変領域を用いて、第２のＣＡＲライブラリを調製する場合である。前記条件３では、例えば、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、前記第１のＣＡＲライブラリを用いてスクリーニングされた第１の軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を用い、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３について、前記標的抗原への結合をスクリーニングする。
　つぎに、前記条件４は、例えば、前記条件２を満たす第１のＣＡＲライブラリを用いてスクリーニングされた重鎖可変領域を用いて、第２のＣＡＲライブラリを調製する場合である。前記条件４では、例えば、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、前記第１のＣＡＲライブラリを用いてスクリーニングされた重鎖可変領域を用い、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３について、前記標的抗原への結合をスクリーニングする。
　つぎに、前記第２の調製工程では、前記第２のＣＡＲライブラリを細胞に導入し、前記第２のＣＡＲライブラリの発現細胞を調製する。具体的には、前記第２の調製工程では、例えば、前記細胞に、前記第２のＣＡＲライブラリを導入する。そして、前記第２の調製工程では、例えば、前記第２のＣＡＲライブラリが導入された細胞を培養することにより、前記細胞に前記第２のＣＡＲライブラリを発現させる。前記第２のＣＡＲライブラリの導入方法は、例えば、前記第１のＣＡＲライブラリの導入方法の説明を援用できる。
　前記第２のＣＡＲライブラリは、例えば、前記第２のＣＡＲをコードする核酸でもよいし、前記第２のＣＡＲをコードする核酸が導入された発現ベクターでもよい。
　前記細胞は、特に制限されず、例えば、前記第１のＣＡＲライブラリにおける導入対象の細胞の説明を援用できる。
　つぎに、前記第２の投与工程では、前記第２のＣＡＲライブラリの発現細胞を動物に投与する。前記第２の投与工程では、複数種類の第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を投与することが好ましい。この場合、前記第２のＣＡＲライブラリの発現細胞は、例えば、複数種類の発現細胞の混合物である。前記複数種類の発現細胞は、例えば、その一部または全部が、異なる第２のＣＡＲをコードしていることが好ましく、異なる第２の抗原結合ドメインをコードしていることが好ましい。複数種類の発現細胞が異なる第２の抗原結合ドメインをコードしている場合、前記第２のＣＡＲにおける第２の抗原結合ドメイン以外の領域は、例えば、同じまたは異なるアミノ酸配列である。前記第２のＣＡＲライブラリの発現細胞の種類は、例えば、前記第２のＣＡＲライブラリの発現細胞に含まれる前記第２のＣＡＲの種類ともいえる。前記第２のＣＡＲライブラリの発現細胞に含まれる前記第２のＣＡＲの種類は、例えば、１×１０５～１×１０７種類、１×１０５～１×１０６種類、１×１０６～５×１０６種類であり、好ましくは、約２×１０６種類（例えば、１×１０６～３×１０６種類）である。前記第２のＣＡＲの種類は、例えば、第２のＣＡＲをコードする核酸の不均一性（heterogeneity）ということもできる。前記不均一性は、前述のように、例えば、制限酵素マッピング、各ＣＤＲおよび／または各ＦＲＨについてサンガー法等のシークエンス等で測定できる。
　前記第２の発現細胞の投与条件は、特に制限されず、例えば、前記第２の発現細胞の投与条件の説明を援用できる。
　前記第２の投与工程において、前記動物は、例えば、前記標的抗原を内在性に発現してもよいし、外因性に発現してもよい。後者の場合、前記動物は、例えば、前記標的抗原をコードする核酸または発現ベクターを導入することにより発現させてもよいし、前記標的抗原を発現する細胞を導入することにより発現させてもよい。
　前記標的抗原を発現する細胞を導入する場合、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第２の投与工程に先立ち、標的抗原を発現する細胞を前記動物に導入し、前記標的抗原を発現する組織を形成させる第２の形成工程を含んでもよい。前記導入される細胞は、例えば、標的抗原を発現する細胞でもよいし、分化後または特定の条件で標的抗原を発現する細胞でもよい。前記特定の条件で標的抗原を発現する細胞は、例えば、ドキシサイクリン等の誘導物質処理により標的抗原の発現が誘導される細胞等があげられる。導入された細胞により形成される組織の種類は、特に制限されず、前記標的抗原に応じて、適宜設定できる。前記組織は、１種類でもよいし、２種類以上でもよい。後者の場合、導入された細胞により、臓器が形成されてもよい。具体例として、前記標的抗原が腫瘍抗原の場合、前記第２の形成工程では、前記標的抗原を発現する腫瘍細胞を前記動物に、前記標的抗原を発現する腫瘍組織を形成させる。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、前記第２の投与工程後、前記標的抗原を前記動物に投与する第２の刺激工程を含む。本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第２の刺激工程を含むことで、前記第２の発現細胞において、標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞をプライミングでき、これにより、標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞をより効率よく前記標的抗原を発現する組織に集積させることができる。前記第２の刺激工程は、例えば、前記第２の投与工程後、後述の第２の採取工程に実施する。
　前記第２の刺激工程は、例えば、前記標的抗原を用いた動物免疫と同様の方法で実施できる。具体的には、前記第２の刺激工程では、前記標的抗原、前記標的抗原をコードする核酸分子、または前記標的抗原を発現する細胞を前記動物に投与することにより、実施できる。前記標的抗原の投与においては、例えば、免疫賦活剤（アジュバント）を併用してもよい。
　つぎに、前記第２の採取工程では、前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する。前記第２の採取工程では、組織に集積した前記第２の発現細胞を回収してもよいし、前記第２の発現細胞が集積した組織を採取し、前記組織から前記第２の発現細胞を回収してもよい。前記組織は、前述のように、１種類でもよい、２種類以上でもよい。後者の場合、前記第２の採取工程では、２種類以上の組織に集積した前記第２の発現細胞を回収することが好ましい。この場合、前記第２の採取工程では、前記第２の発現細胞が集積した２種類以上の組織を採取し、前記２種類以上の組織から前記第２の発現細胞を回収してもよい。前記第２の採取工程において、前記組織を採取する場合、前記組織の一部または全部を採取する。前記第２の採取工程では、前記第２の発現細胞の採取に先立ち、前記組織に前記第２の発現細胞が集積しているかを確認してもよい。前記確認は、例えば、２光子励起顕微鏡等のライブイメージングか可能な顕微鏡を用いて実施できる。また、前記確認を実施する場合、前記第１の発現細胞は、ＳＬＲ等のルシフェラーゼを発現させることが好ましい。また、前記確認を実施する場合、前記第１の発現細胞は、例えば、前記確認に先立ち、蛍光タンパク質等の標識物質により標識してもよい。
　前記第２の採取工程は、前記第２の投与工程後、任意の期間後に実施してよい。前記第２の投与工程後、前記第２の採取工程までの期間は、例えば、８時間～１ヶ月、１日～２週間、１日～１週間があげられる。前記第２の刺激工程後に、前記第２の採取工程を実施する場合、前記第２の投与工程後、前記第２の採取工程までの期間は、例えば、前記標的抗原特異的ＣＡＲを発現する細胞が活性化および集積する迄の時間であり、具体例として、１日～２週間、１日～１週間があげられる。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第２の採取工程後、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を、前記標的抗原で再刺激する第２の再刺激工程を含むことが好ましい。これにより、前記第２の再刺激工程では、前記標的抗原を発現する組織に集積した第２のＣＡＲライブラリ発現細胞において、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を増殖させることができる。このため、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、前記第２の再刺激工程を含むことにより、例えば、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を富化でき、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞における第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列およびそれをコードする塩基配列を容易に決定できる。
　前記第２の再刺激工程において、前記標的抗原による再刺激の方法は、特に制限されず、例えば、前記第１の再刺激工程の説明において、「第１のＣＡＲライブラリ」を「第２のＣＡＲライブラリ」に読み替えて、その説明を援用できる。
　本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、前記第２の採取工程で採取された第２の発現細胞における第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定する第２の配列決定工程を含んでもよい。前記第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、例えば、前記第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列をコードする塩基配列を決定することにより実施できる。具体的には、前記第２の配列決定工程では、前記第２の採取工程で採取された第２の発現細胞から核酸を抽出し、前記核酸における前記第２の重鎖可変領域および第２の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を増幅し、前記塩基配列を決定することにより実施できる。これにより、本発明の第３のｓｃＦｖの製造方法は、例えば、前記第２のＢ細胞受容体由来の第２の重鎖可変領域または第２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定できる。
　前記第２の配列決定工程では、例えば、さらに、前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と、前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とを特定してもよい。各ＣＤＲの特定は、例えば、ゲノム情報（例えば、ＩＭＧＴのホームページ<http://www.imgt.org/>）を参照し、公知の方法により実施できる。
　次に、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記実施例により制限されない。市販の試薬は、特に示さない限り、それらのプロトコルに基づいて使用した。
［実施例１］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により、A2/NY-ESO-1157に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることを確認した。
（１）3M4E5 CARの調製
　3M4E5 CARは、A2/NY-ESO-1157特異的抗体（clone：３Ｍ４Ｅ５）を用いて調製した。具体的には、３Ｍ４Ｅ５の免疫グロブリン重鎖由来の重鎖可変領域をコードする核酸（配列番号１６２）および３Ｍ４Ｅ５の免疫グロブリン軽鎖由来の軽鎖可変領域をコードする核酸（配列番号１６３）を、Ｆｖリンカーペプチド（GSTSGSGKPGSGEGSTKG：配列番号１）をコードする核酸（配列番号３）で連結することにより、3M4E5 scFv（をコードする核酸を調製した。３Ｍ４Ｅ５の重鎖可変領域、Ｆｖリンカーペプチド、および３Ｍ４Ｅ５の軽鎖可変領域をこの順番で連結したｓｃＦｖを、3M4E5HL scFvという。また、３Ｍ４Ｅ５の軽鎖可変領域、Ｆｖリンカーペプチド、および３Ｍ４Ｅ５の重鎖可変領域をこの順番で連結したｓｃＦｖを、3M4E5LH scFvという。
３Ｍ４Ｅ５の免疫グロブリン重鎖由来の重鎖可変領域をコードする核酸（配列番号１６２）
5’-GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCA-3'
３Ｍ４Ｅ５の免疫グロブリン軽鎖由来の軽鎖可変領域をコードする核酸（配列番号１６３）
5’-CAGAGCGAGCTGACACAGCCTAGATCCGTGTCTGGCAGCCCTGGCCAGAGCGTGACCATCAGCTGTACCGGCACCAGCAGAGATGTGGGCGGCTACAACTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCATCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATCATCCACGACGTGATCGAGCGGAGCAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATCAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGTTGGAGCTTCGCCGGCAGCTACTACGTGTTCGGCACCGGCACCGATGTGACCGTGCTG-3'
3M4E5HL scFv（配列番号１６４）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGQSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLIIHDVIERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCWSFAGSYYVFGTGTDVTVL
3M4E5HL scFvをコードする核酸（配列番号１６５）
5’-GAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGAGCGAGCTGACACAGCCTAGATCCGTGTCTGGCAGCCCTGGCCAGAGCGTGACCATCAGCTGTACCGGCACCAGCAGAGATGTGGGCGGCTACAACTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCATCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATCATCCACGACGTGATCGAGCGGAGCAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATCAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGTTGGAGCTTCGCCGGCAGCTACTACGTGTTCGGCACCGGCACCGATGTGACCGTGCTG-3’
3M4E5LH scFv（配列番号１６６）
QSELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLIIHDVIERSSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCWSFAGSYYVFGTGTDVTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSS
3M4E5LH scFvをコードする核酸（配列番号１６７）
5’-CAGAGCGAGCTGACACAGCCTAGATCCGTGTCTGGCAGCCCTGGCCAGAGCGTGACCATCAGCTGTACCGGCACCAGCAGAGATGTGGGCGGCTACAACTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCATCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGATCATCCACGACGTGATCGAGCGGAGCAGCGGCGTGCCCGATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATCAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGTTGGAGCTTCGCCGGCAGCTACTACGTGTTCGGCACCGGCACCGATGTGACCGTGCTGGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCA-3’
　つぎに、3M4E5HL scFvおよび3M4E5LH scFvをコードする核酸の３’端に、それぞれ、ヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号１６８）をコードする核酸（配列番号１６９）と、ヒトＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸とを、５’端側からこの順番に配置されるように連結した。これにより、3M4E5HL scFvを含む3M4E5HL CARをコードする核酸および3M4E5LH scFvを含む3M4E5LH CARをコードする核酸を調製した。なお、ヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸と、ヒトＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸とは、GeneArt（商標）（Thermo Fisher Scientific社）人工遺伝子合成サービスを利用し、取得した。また、ヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸の５’端には、NotIの制限酵素サイトを付加したものを使用した。
ヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号１６８）
AAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
ヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸（配列番号１６９）
5’-GCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCT-3’
ヒトＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメイン（配列番号１７０）
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
ヒトＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸（配列番号１７１）
5’-CGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3’
　さらに、3M4E5HL CARをコードする核酸および3M4E5LH CARをコードする核酸の３’末端に、切断型のＮＧＦＲ遺伝子（ΔNGFR）をコードする核酸を、フーリン（furin）切断部位（RAKR：配列番号１７２）、スペーサー配列（SGSG：配列番号１７３）およびコドン最適化Ｐ２Ａ配列（ATNFSLLKQAGDVEENPGP：配列番号１７４）をコードする核酸を介して、連結した。これにより、タグ付加3M4E5HL CARをコードする核酸およびタグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を調製した。各核酸は、ｐＭＸ発現ベクターに導入した。
（２）第１のＣＡＲライブラリの調製
　Ｂ細胞精製キット（CD19-positive selection kit、MACS（登録商標）beads、Miltenyi Biotec社製）を用いて、ヒト末梢血単核球から１～３×１０６細胞のヒト末梢血Ｂ細胞を精製した。得られたＣＤ１９＋Ｂ細胞を回収後、ｃＤＮＡ合成キット（SMARTer（商標）RACE cDNA amplification kit、Takara Bio社製）を用いて、ＲＮＡを抽出し、さらに、前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。
　前記ｃＤＮＡと、5’-RACEプライマー、3’IGHCプライマーおよび3’IGHMプライマーの混合物とを用い、ＰＣＲにより、免疫グロブリン重鎖由来の重鎖可変領域および定常領域の一部を含むタンパク質をコードする核酸を増幅した。前記3’IGHCプライマーは、ヒトＩｇＧのＣＨ１領域にハイブリダイズする。また、3’IGHMプライマーは、ヒトＩｇＭのＣＨ１領域にハイブリダイズする。
5’-RACEプライマー（配列番号１７５）
　　5’-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3’
3’IGHCプライマー（配列番号１７６）
　　5’-TGAGTTCCACGACACCGTCAC-3’
3’IGHMプライマー（配列番号１７７）
　　5’-TCCAGGACAAAGTGATGGAGTC-3’
　つぎに、１回目のＰＣＲ産物と、改変5’-RACEプライマー、3’IGHJ1プライマー、3’IGHJ2プライマーおよび3’IGHJ3プライマーの混合物とを用い、semi-nested ＰＣＲを実施し、重鎖可変領域をコードする核酸を増幅した。これにより、ヒト末梢血Ｂ細胞由来の重鎖可変領域をコードする核酸のライブラリを調製した。前記3’IGHJ1プライマー、3’IGHJ2プライマーおよび3’IGHJ3プライマーは、重鎖のＪ領域（Ｊ遺伝子断片）にハイブリダイズする。
改変5’-RACEプライマー（配列番号１７８）
　　5’-GTGTGGTGGTACGGGAATTCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3’
3’IGHJ1プライマー（配列番号１７９）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTGAGGAGACGGTGACCAGGG-3’
3’IGHJ2プライマー（配列番号１８０）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTGAAGAGACGGTGACCATTGTC-3’
3’IGHJ3プライマー（配列番号１８１）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTC-3’
　つぎに、１回目のＰＣＲにおいて、3’IGHCプライマーおよび3’IGHMプライマーに代えて、3’IGKCプライマーおよび3’IGLCプライマーを用い、２回目のsemi-nested ＰＣＲにおいて、3’IGHJ1プライマー、3’IGHJ2プライマーおよび3’IGHJ3プライマーに代えて、3’IGKJ1プライマー、3’IGKJ2プライマー、3’IGKJ3プライマー、3’IGKJ4プライマー、3’IGLJ1プライマー、3’IGLJ2プライマー、3’IGLJ4プライマー、3’IGLJ5プライマー、および3’IGLJ7プライマーを用いた以外は、前記重鎖可変領域をコードする核酸の増幅と同様にして、免疫グロブリン軽鎖由来の軽鎖可変領域をコードする核酸を増幅した。これにより、ヒト末梢血Ｂ細胞由来の軽鎖可変領域をコードする核酸のライブラリを調製した。3’IGKCプライマーおよび3’IGLCプライマーは、それぞれ、κ鎖およびλ鎖のＣＨ１領域にハイブリダイズする。また、3’IGKJ1プライマー、3’IGKJ2プライマー、3’IGKJ3プライマー、3’IGKJ4プライマー、3’IGLJ1プライマー、3’IGLJ2プライマー、3’IGLJ4プライマー、3’IGLJ5プライマー、および3’IGLJ7プライマーは、それぞれ、軽鎖のＪ領域（Ｊ遺伝子断片）にハイブリダイズする。
3’IGKCプライマー（配列番号１８２）
　　5’-AGGGTCAGAGGCCAAAGGATGG-3’
3’IGLCプライマー（配列番号１８３）
　　5’-CTTGGAGCTCCTCAGAGGAG-3’
3’IGKJ1プライマー（配列番号１８４）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTTTGATTTCCACCTTGGTCCC-3’
3’IGKJ2プライマー（配列番号１８５）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTTTGATCTCCAGCTTGGTCCC-3’
3’IGKJ3プライマー（配列番号１８６）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTTTGATATCCACTTTGGTCCC-3’
3’IGKJ4プライマー（配列番号１８７）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTTTAATCTCCAGTCGTGTCCC-3’
3’IGLJ1プライマー（配列番号１８８）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTAGGACGGTGACCTTGGTCCC-3’
3’IGLJ2プライマー（配列番号１８９）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTAGGACGGTCAGCTTGGTCCC-3’
3’IGLJ4プライマー（配列番号１９０）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTAAAATGATCAGCTGGGTTCC-3’
3’IGLJ5プライマー（配列番号１９１）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCTAGGACGGTCAGCTCGGTCCC-3’
3’IGLJ7プライマー（配列番号１９２）
　　5’-CTTGCCAGAGCCGCTTGTAGAGCCGAGGACGGTCAGCTGGGTGCC-3’
　前記（１）の3M4E5HL scFvをコードする核酸の５’側の重鎖可変領域をコードする核酸を、前記ヒト末梢血Ｂ細胞由来の重鎖可変領域の核酸を含むライブラリで置換することにより、hH-3M4E4L scFvライブラリを調製した。そして、3M4E5HL scFvをコードする核酸に代えて、hH-3M4E4L scFvライブラリを用いた以外は、前記（１）と同様にして、タグが付加されたhH-3M4E4L CARライブラリを調製した。タグが付加されたhH-3M4E4L CARライブラリを、ｐＭＸ発現ベクターに導入し、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを調製した。なお、hH-3M4E4L CARライブラリにおける重鎖可変領域の不均一性（heterogeneity）は、制限酵素マッピングおよび各領域をサンガー法によりシークエンスすることで、約１×１０６種類であることを確認した。
（３）第１のＣＡＲライブラリ発現Ｔ細胞（第１の候補ＣＡＲ－Ｔ）の調製
　Ｐｌａｔ－Ａ細胞（国立大学法人東京大学医科学研究所　北村俊雄先生より分与）に、トランスフェクション試薬（TransIT293、Takara Bio社製）を用い、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入し、エコトロピックレトロウイルス（Ecotropic retrovirus）を含む培養上清を調製した。前記Ｐｌａｔ－Ａ細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、１μｇ／ｍＬピューロマイシン、１０μｇ／ｍＬブラストサイジン含有ＤＭＥＭ培地で維持したものを使用した。つぎに、前記エコトロピックウイルスを含む培養上清を添加することにより、パッケージング細胞であるＰＧ１３細胞にhH-3M4E4L CARライブラリを導入し、hH-3M4E4L CARライブラリを含むGaLV-pseudotypedレトロウイルスを調製した。そして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスをヒト末梢血Ｔ細胞に感染させることにより、ＣＡＲ－Ｔを調製した。ＰＧ１３細胞の培地の組成は、１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ培地とし、培養条件は、３７℃、５％ＣＯ２とし、湿潤雰囲気下とした。以下、特に言及しない限り細胞の培養条件は同様とした。
　つぎに、健常者からヒト末梢血単核球を単離した。得られたヒト末梢血単核球を、５０ｎｇ／ｍＬ　抗ＣＤ３抗体（clone：OKT3）および１００ＩＵ／ｍＬ　ヒトＩＬ－２の存在下、２日間培養した。前記ヒト末梢血単核球の培地の組成は、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、１０％ヒトＡＢ血清（Sigma社製）含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記培養後、GaLV-pseudotypedレトロウイルスの存在下、１０００×ｇ、３２℃の条件下で１時間遠心することにより、前記レトロウイルスをＴ細胞に感染させ、hH-3M4E4L CARライブラリをＴ細胞に導入した。同様のレトロウイルスの感染およびhH-3M4E4L CARライブラリの導入を、更に５回（合計６回）実施した。得られたＴ細胞について、ＰＥ標識anti-human NGFR mAb (clone：ME20.4）で染色後、フローサイトメーター（Gallios flow cytometer、Beckman Coulter社製）を用いて、Ｔ細胞上のタグの発現を確認することにより、３０％の導入効率で１つのhH-3M4E4L CARが１つのＴ細胞に発現していることを確認した。フローサイトメーターで得られたデータの解析には、解析ソフト（FlowJo Version 7.6.5 software、TreeStar社製）を用いた（以下、同様）。
　前記hH-3M4E4 CARライブラリの導入後のＴ細胞を、前記ＰＥ標識anti-human NGFR mAbと反応させた。前記反応後、抗ＰＥマイクロビーズ（Miltenyi Biotec社製）を用いて、hH-3M4E4 CARライブラリが導入されたＴ細胞を精製し、これを第１の候補ＣＡＲ－Ｔとした。
（４）標的抗原の発現細胞の調製
　レトロウイルスを用いて、HLA-A*02:01をコードする核酸と、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ４０、および４－１ＢＢＬをコードする核酸とを、Ｋ５６２細胞（ＨＬＡおよびＣＤ１９の発現無し、ＡＴＣＣより入手）に導入し、抗原提示細胞（ＡＰＣ、K562/A2）とした。
HLA-A*02:01をコードする核酸（配列番号１９３）
5'-ATGGCCGTCATGGCGCCCCGAACCCTCGTCCTGCTACTCTCGGGGGCTCTGGCCCTGACCCAGACCTGGGCGGGCTCTCACTCCATGAGGTATTTCTTCACATCCGTGTCCCGGCCCGGCCGCGGGGAGCCCCGCTTCATCGCAGTGGGCTACGTGGACGACACGCAGTTCGTGCGGTTCGACAGCGACGCCGCGAGCCAGAGGATGGAGCCGCGGGCGCCGTGGATAGAGCAGGAGGGTCCGGAGTATTGGGACGGGGAGACACGGAAAGTGAAGGCCCACTCACAGACTCACCGAGTGGACCTGGGGACCCTGCGCGGCTACTACAACCAGAGCGAGGCCGGTTCTCACACCGTCCAGAGGATGTATGGCTGCGACGTGGGGTCGGACTGGCGCTTCCTCCGCGGGTACCACCAGTACGCCTACGACGGCAAGGATTACATCGCCCTGAAAGAGGACCTGCGCTCTTGGACCGCGGCGGACATGGCAGCTCAGACCACCAAGCACAAGTGGGAGGCGGCCCATGTGGCGGAGCAGTTGAGAGCCTACCTGGAGGGCACGTGCGTGGAGTGGCTCCGCAGATACCTGGAGAACGGGAAGGAGACGCTGCAGCGCACGGACGCCCCCAAAACGCATATGACTCACCACGCTGTCTCTGACCATGAAGCCACCCTGAGGTGCTGGGCCCTGAGCTTCTACCCTGCGGAGATCACACTGACCTGGCAGCGGGATGGGGAGGACCAGACCCAGGACACGGAGCTCGTGGAGACCAGGCCTGCAGGGGATGGAACCTTCCAGAAGTGGGCGGCTGTGGTGGTGCCTTCTGGACAGGAGCAGAGATACACCTGCCATGTGCAGCATGAGGGTTTGCCCAAGCCCCTCACCCTGAGATGGGAGCCGTCTTCCCAGCCCACCATCCCCATCGTGGGCATCATTGCTGGCCTGGTTCTCTTTGGAGCTGTGATCACTGGAGCTGTGGTCGCTGCTGTGATGTGGAGGAGGAAGAGCTCAGATAGAAAAGGAGGGAGCTACTCTCAGGCTGCAAGCAGTGACAGTGCCCAGGGCTCTGATGTGTCTCTCACAGCTTGTAAAGTG-3'
ＣＤ８０をコードする核酸（配列番号１９４）
5'-ATGGGCCACACACGGAGGCAGGGAACATCACCATCCAAGTGTCCATACCTCAATTTCTTTCAGCTCTTGGTGCTGGCTGGTCTTTCTCACTTCTGTTCAGGTGTTATCCACGTGACCAAGGAAGTGAAAGAAGTGGCAACGCTGTCCTGTGGTCACAATGTTTCTGTTGAAGAGCTGGCACAAACTCGCATCTACTGGCAAAAGGAGAAGAAAATGGTGCTGACTATGATGTCTGGGGACATGAATATATGGCCCGAGTACAAGAACCGGACCATCTTTGATATCACTAATAACCTCTCCATTGTGATCCTGGCTCTGCGCCCATCTGACGAGGGCACATACGAGTGTGTTGTTCTGAAGTATGAAAAAGACGCTTTCAAGCGGGAACACCTGGCTGAAGTGACGTTATCAGTCAAAGCTGACTTCCCTACACCTAGTATATCTGACTTTGAAATTCCAACTTCTAATATTAGAAGGATAATTTGCTCAACCTCTGGAGGTTTTCCAGAGCCTCACCTCTCCTGGTTGGAAAATGGAGAAGAATTAAATGCCATCAACACAACAGTTTCCCAAGATCCTGAAACTGAGCTCTATGCTGTTAGCAGCAAACTGGATTTCAATATGACAACCAACCACAGCTTCATGTGTCTCATCAAGTATGGACATTTAAGAGTGAATCAGACCTTCAACTGGAATACAACCAAGCAAGAGCATTTTCCTGATAACCTGCTCCCATCCTGGGCCATTACCTTAATCTCAGTAAATGGAATTTTTGTGATATGCTGCCTGACCTACTGCTTTGCCCCAAGATGCAGAGAGAGAAGGAGGAATGAGAGATTGAGAAGGGAAAGTGTACGCCCTGTA-3'
ＣＤ８３をコードする核酸（配列番号１９５）
5'-ATGTCGCGCGGCCTCCAGCTTCTGCTCCTGAGCTGCGCCTACAGCCTGGCTCCCGCGACGCCGGAGGTGAAGGTGGCTTGCTCCGAAGATGTGGACTTGCCCTGCACCGCCCCCTGGGATCCGCAGGTTCCCTACACGGTCTCCTGGGTCAAGTTATTGGAGGGTGGTGAAGAGAGGATGGAGACACCCCAGGAAGACCACCTCAGGGGACAGCACTATCATCAGAAGGGGCAAAATGGTTCTTTCGACGCCCCCAATGAAAGGCCCTATTCCCTGAAGATCCGAAACACTACCAGCTGCAACTCGGGGACATACAGGTGCACTCTGCAGGACCCGGATGGGCAGAGAAACCTAAGTGGCAAGGTGATCTTGAGAGTGACAGGATGCCCTGCACAGCGTAAAGAAGAGACTTTTAAGAAATACAGAGCGGAGATTGTCCTGCTGCTGGCTCTGGTTATTTTCTACTTAACACTCATCATTTTCACTTGTAAGTTTGCACGGCTACAGAGTATCTTCCCAGATTTTTCTAAAGCTGGCATGGAACGAGCTTTTCTCCCAGTTACCTCCCCAAATAAGCATTTAGGGCTAGTGACTCCTCACAAGACAGAACTGGTA-3'
ＣＤ４０をコードする核酸（配列番号１９６）
5'-ATGGTTCGTCTGCCTCTGCAGTGCGTCCTCTGGGGCTGCTTGCTGACCGCTGTCCATCCAGAACCACCCACTGCATGCAGAGAAAAACAGTACCTAATAAACAGTCAGTGCTGTTCTTTGTGCCAGCCAGGACAGAAACTGGTGAGTGACTGCACAGAGTTCACTGAAACGGAATGCCTTCCTTGCGGTGAAAGCGAATTCCTAGACACCTGGAACAGAGAGACACACTGCCACCAGCACAAATACTGCGACCCCAACCTAGGGCTTCGGGTCCAGCAGAAGGGCACCTCAGAAACAGACACCATCTGCACCTGTGAAGAAGGCTGGCACTGTACGAGTGAGGCCTGTGAGAGCTGTGTCCTGCACCGCTCATGCTCGCCCGGCTTTGGGGTCAAGCAGATTGCTACAGGGGTTTCTGATACCATCTGCGAGCCCTGCCCAGTCGGCTTCTTCTCCAATGTGTCATCTGCTTTCGAAAAATGTCACCCTTGGACAAGCTGTGAGACCAAAGACCTGGTTGTGCAACAGGCAGGCACAAACAAGACTGATGTTGTCTGTGGTCCCCAGGATCGGCTGAGAGCCCTGGTGGTGATCCCCATCATCTTCGGGATCCTGTTTGCCATCCTCTTGGTGCTGGTCTTTATCAAAAAGGTGGCCAAGAAGCCAACCAATAAGGCCCCCCACCCCAAGCAGGAACCCCAGGAGATCAATTTTCCCGACGATCTTCCTGGCTCCAACACTGCTGCTCCAGTGCAGGAGACTTTACATGGATGCCAACCGGTCACCCAGGAGGATGGCAAAGAGAGTCGCATCTCAGTGCAGGAGAGACAG-3'
４－１ＢＢＬをコードする核酸（配列番号１９７）
5'-ATGGAATACGCCTCTGACGCTTCACTGGACCCCGAAGCCCCGTGGCCTCCCGCGCCCCGCGCTCGCGCCTGCCGCGTACTGCCTTGGGCCCTGGTCGCGGGGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTCGCTGCCGCCTGCGCCGTCTTCCTCGCCTGCCCCTGGGCCGTGTCCGGGGCTCGCGCCTCGCCCGGCTCCGCGGCCAGCCCGAGACTCCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA-3'
（５）第１のスクリーニング方法（１回目）
　前記（３）の第１の候補ＣＡＲ－Ｔと、前記（４）で調製したＡＰＣとを用いて、スクリーニングを行なった。具体的には、２×１０６第１の候補ＣＡＲ－Ｔと、１×１０５ＡＰＣとを各ウェル（２４ウェルプレート）に播種後、７日間共培養した。前記ＡＰＣは、２０Ｇｙでγ線処理後、１～１０μｇ／ｍＬでNY-ESO-1157-165ペプチド（NY-ESO-1157ペプチド、SLLMWITQC：配列番号２０６）をパルスし、前記パルス後にHLA-A*02:01に結合していないペプチドを除去した細胞を用いた。また、前記第１の候補ＣＡＲ－ＴとＡＰＣとの共培養に用いた培地の組成は、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、１０％ヒトＡＢ血清（Sigma社製）、１０ＩＵ／ｍＬ　ヒトＩＬ－２（Roche社製）、および１０ｎｇ／ｍＬ　ヒトＩＬ－１５（PeproTech社製）含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、第１の候補ＣＡＲ－Ｔを回収し、同様の条件でＡＰＣとの共培養をさらに２回（合計３回）実施した。これにより、A2/NY-ESO-1157と結合するhH-3M4E4L CARを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔを富化した。
　つぎに、富化後の第１の候補ＣＡＲ－Ｔを回収し、２０μｇ／ｍＬ　ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した。前記ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーは、ビオチン化HLA-A2/NY-ESO-1157の単量体と、ＰＥ標識ストレプトアビジン（Thermo Fisher Scientific社製）とを混合することにより調製した。前記染色後、前記Ｔ細胞をさらに、PC5標識anti-human CD8a mAb（clone：B9.11）、FITC標識anti-human CD4 mAb（clone：OKT4）、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。各抗体の濃度は、約１０μｇ／ｍＬとした。そして、テトラマー染色後の第１の候補ＣＡＲ－Ｔについて、前記フローサイトメーターを用いて、A2/NY-ESO-1157と結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔの存在を確認した（donor 1）。同様の試験を、異なる健常者由来のＴ細胞を用いて実施した（donor 2）。また、ポジティブコントロールは、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5HL CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、HLA-A*02:01およびHIV Gag77-85ペプチド（SLYNTVATL：配列番号１９８）の複合体（A2/HIV-Gag77）のテトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋、ＳＳＣ＋、ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図１に示す。
　図１は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図１において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示す。図１に示すように、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかったＴ細胞（コントロール２）では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合するＴ細胞は存在しなかった。また、3M4E5HL CARを発現するＣＡＲ－Ｔ（3M4E5-CAR、ポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分（各ドットプロットの右上画分）が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しないことから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが確認できた。そして、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔ（donor 1および2）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。このことから、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔに、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔが存在することがわかった。
　つぎに、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔを選抜し、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔが発現するＣＡＲを同定した。具体的には、前記（５）と同様にして、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔを染色した。つぎに、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔからフローサイトメーター（FACSAria（商標）、Becton Dickinson社製）を用いた細胞選別により、ＮＧＦＲ＋ＣＤ８＋A2/NY-ESO-1157テトラマー＋画分、またはＮＧＦＲ＋ＣＤ４＋A2/NY-ESO-1157テトラマー＋画分を、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔとして分取した。総ＲＮＡ抽出試薬（TRIzol（登録商標）、Ambion社製）を用いて、得られた第１の候補ＣＡＲ－Ｔから総ＲＮＡを抽出した。逆転写酵素（Superscript（登録商標）III、Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、前記総ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。
得られたｃＤＮＡと、下記フォワードプライマー１およびリバースプライマー１の混合物とを用いて、ＰＣＲを実施し、ｓｃＦｖをコードする核酸を増幅した。クローニングキット（Gibson Assembly Master Mix、New England Biolab社製）を用い、得られたｓｃＦｖをコードする核酸を、ｓｃＦｖをコードする核酸がヒトＣＤ２８の部分領域の５’端に連結されるように、ｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターに導入した（ｐＭＸ／ｓｃＦｖ発現ベクター）。ｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターは、ｐＭＸ発現ベクターにヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸（配列番号１６９）と、ヒトＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸（配列番号１７１）とを、５’端側からこの順番に配置されるように連結し、導入することにより調製した。そして、得られたｐＭＸ／ｓｃＦｖ発現ベクターについて、サンガー法によりシークエンスすることで、ＣＡＲをコードする塩基配列（H1-3M4E5L CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１３８）およびH73-3M4E5L CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５７））を同定した。また、前記塩基配列に基づき、ｓｃＦｖのアミノ酸配列（H1-3M4E5L（配列番号９８）およびH73-3M4E5L（配列番号１１７））を同定した。そして、ｓｃＦｖのアミノ酸配列に基づき、前記表１Ａに示す新たな重鎖可変領域（HA）および（HC）のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を同定した。また、前記ｐＭＸ／ｓｃＦｖ発現ベクターから、H1-3M4E5Lをコードするポリヌクレオチドを含むｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターおよびH73-3M4E5Lをコードするポリヌクレオチドを含むｐＭＸ／H73-3M4E5L発現ベクターを調製した。
フォワードプライマー１（配列番号１９９）
　　5'-ATCCCAGTGTGGTGGTACGGG-3'
リバースプライマー１（配列番号２００）
　　5'-GGGTACATCACTTCGATTGC-3'
（６）第１の候補ｓｃＦｖの解析
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、ｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターまたはｐＭＸ／H73-3M4E5L発現ベクターを用いた以外は、前記（３）と同様にして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を調製した。つぎに、前記GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を添加することにより、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞にｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターまたはｐＭＸ／H73-3M4E5L発現ベクターを導入し、ｓｃＦｖとしてH1-3M4E5LまたはH73-3M4E5Lを含むＣＡＲ（H1-3M4E5L CARまたはH73-3M4E5L CAR）を発現させた。前記ＣＡＲ発現後のＪｕｒｋａｔ７６細胞を、前記ＰＥ標識anti-human NGFR mAbと反応させた。前記反応後、前記抗ＰＥマイクロビーズを用いて、H1-3M4E5L CARおよびH73-3M4E5L CARを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞（H1-3M4E5L CAR-TまたはH73-3M4E5L CAR T）を精製した。H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR Tについて、５μｇ／ｍＬ ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色後、V450標識 anti-human NGFR mAbで染色した。前記染色後のH1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR Tについて、フローサイトメトリーにより解析した。ポジティブコントロールは、ｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターまたはｐＭＸ／H73-3M4E5L発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、ｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターまたはｐＭＸ／H73-3M4E5L発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋ＳＳＣ＋ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図２に示す。
　図２は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図２において、横軸は、A2/NY-ESO-1157テトラマーまたはA2/HIV-Gag77テトラマーで染色した際の平均蛍光強度を示し、縦軸は、側方散乱光（ＳＳＣ）の平均強度を示す。図２に示すように、ｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターまたはｐＭＸ／H73-3M4E5L発現ベクターを導入しなかったＪｕｒｋａｔ７６細胞（コントロール２）では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合する細胞は存在しなかった。また、3M4E5HL CAR-T（3M4E5 CAR、ポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ほぼ全ての細胞がＡ２テトラマー＋であり、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、Ａ２テトラマー－であることから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが確認できた。そして、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tは、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ほぼ全ての細胞がＡ２テトラマー＋であり、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、Ａ２テトラマー－であった。このことから、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tは、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（７）第１の候補ｓｃＦｖの親和性
　つぎに、前記（６）で得られたH1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR Tと、3M4E5LH CARを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞（3M4E5LH CAR-T）について、所定濃度（０．０００４１９４３０４、０．００１０４８５７６、０．００２６２１４４、０．００６５５３６、０．０１６３８４、０．０４０９６、０．１０２４、０．２５６、０．６４、１．６、４、または１０μｇ／ｍＬ）のＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色後、V450標識 anti-human NGFR mAbで染色した以外は、前記（６）と同様にして、フローサイトメトリーにより解析した。そして、A2/NY-ESO-1157テトラマーの各濃度における、A2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を算出した。この結果を、図３に示す。
　図３は、A2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を示すグラフである。図３において、横軸は、A2/NY-ESO-1157テトラマーの濃度を示し、縦軸は、A2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を示す。図３に示すように、各CAR-Tは、A2/NY-ESO-1157テトラマーの濃度依存的にA2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合が増加した。また、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR Tは、3M4E5LH CAR-Tと同程度のA2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞を得るのに、A2/NY-ESO-1157テトラマーをより高濃度にする必要があることから、これらのCAR-TにおけるｓｃＦｖのA2/NY-ESO-1157テトラマーに対する親和性は異なることがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合する異なる親和性を有するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（８）第１の候補ｓｃＦｖの機能
　つぎに、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tが、前記標的抗原との結合により、活性化するかを検討した。具体的には、３×１０５細胞のH1-3M4E5L CAR-TまたはH73-3M4E5L CAR-Tと、５×１０４細胞のＴ２細胞とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記Ｔ２細胞（HLA-A*02:01発現細胞）は、所定濃度（０．０００５、０．００１５、０．００４、０．０１、０．０４、０．１２２、０．３６６、１．１１、３．３３または１０μｇ／ｍＬ）でNY-ESO-1157ペプチドをパルスした細胞（T2 + NY-ESO-1157）を用いた。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tを回収し、FITC標識anti-human CD69 mAb（clone：FN50）およびV450標識anti-human NGFR mAbで染色した。前記染色後のH1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＮＧＦＲ＋細胞について、ＣＤ６９の平均蛍光強度を測定した。ポジティブコントロールは、前記（６）で得られた3M4E5HL CAR-Tを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、NY-ESO-1157ペプチドに代えて、HIV Gag77-85ペプチドをパルスしたＴ２細胞（T2 + HIV Gag77）を用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、ｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。そして、各ペプチドの濃度について、コントロール２におけるＣＤ６９の平均蛍光強度を基準として、各サンプルのＣＤ６９の発現上昇の割合を算出した。これらの結果を図４および５に示す。
　図４は、ペプチド濃度が１０μｇ／ｍＬの場合におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。図４において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＣＤ６９の発現上昇の割合を示す。図４に示すように、コントロール２では、ＣＤ６９の発現上昇は生じなかった。他方、3M4E5HL CAR-T（ポジティブコントロール）は、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、ＣＤ６９の発現が上昇し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化していることが確認できた。また、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tは、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、ＣＤ６９の発現が上昇し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化した。さらに、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tは、3M4E5 HL CAR-Tと比較して、T2 + HIV Gag77刺激時のＣＤ６９の発現量の上昇率を基準とした、ＣＤ６９の発現上昇率が高い。このため、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR-Tは、3M4E5 HL CAR-Tと比較して、A2/NY-ESO-1157に対する特異性が高いことがわかった。また、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能し、かつより特異性の高いｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
　つぎに、NY-ESO-1157ペプチドの段階希釈時のＣＤ６９の発現変化の結果を図５に示す。図５は、ＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。図５において、横軸は、NY-ESO-1157ペプチドの濃度を示し、縦軸は、ＣＤ６９の発現上昇の割合を示す。図５に示すように、各CAR-Tは、NY-ESO-1157ペプチドの濃度依存的にＣＤ６９の発現が上昇した。また、H1-3M4E5L CAR-TおよびH73-3M4E5L CAR Tは、3M4E5LH CAR-Tと比較して、ＣＤ６９の発現上昇がシャープであり、A2/NY-ESO-1157に対する特異性が高いことがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能し、かつより特異性の高いｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（９）第２のＣＡＲライブラリの調製
　第１のＣＡＲライブラリからスクリーニングされた重鎖可変領域（HA）を用いて、第２のＣＡＲライブラリを調製した。具体的には、タグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸が導入されたｐＭＸ発現ベクターについて、重鎖可変領域（3M4E5H）をコードする核酸を、重鎖可変領域（HA）をコードする核酸で置換した（3M4E5L-H1発現ベクター）。つぎに、3M4E5L-H1発現ベクターについて、軽鎖可変領域（3M4E5L）をコードする核酸を、前記（２）の軽鎖可変領域をコードする核酸のライブラリで置換した。これにより、第２のＣＡＲライブラリを含む発現ベクター（hK-H1 CARライブラリの発現ベクター）を調製した。なお、hK-H1 CARライブラリにおける重鎖可変領域の不均一性（heterogeneity）は、制限酵素マッピングおよび各領域をサンガー法によりシークエンスすることで、約１×１０６種類であることを確認した。
（１０）第２のＣＡＲライブラリ発現Ｔ細胞（第２の候補ＣＡＲ－Ｔ）の調製
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、hK-H1 CARライブラリの発現ベクターを用いた以外は、前記（３）と同様にして、hK-H1 CARライブラリが導入されたＴ細胞を精製し、これを第２の候補ＣＡＲ－Ｔとした。
（１１）第１のスクリーニング方法（２回目）
　つぎに、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔに代えて、前記第２の候補ＣＡＲ－Ｔを用いた以外は、前記（５）と同様にして、A2/NY-ESO-1157と結合するＣＡＲを発現する第２の候補ＣＡＲ－Ｔの存在を確認した（donor 1）。同様の試験を、異なる健常者由来のヒト末梢血Ｂ細胞由来の重鎖可変領域の核酸を含むライブラリを用いて実施した（donor 2）。また、ポジティブコントロールは、hK-H1 CARライブラリの発現ベクターに代えて、ｐＭＸ／3M4E5L-H1発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hH-3M4E5L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋ＳＳＣ＋ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図６に示す。
　図６は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図６において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示す。図６に示すように、hK-H1 CARライブラリの発現ベクターを導入しなかったＴ細胞（コントロール２）では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合するＴ細胞は存在しなかった。また、3M4E5L-H1 CARを発現するＣＡＲ－Ｔ（3M4E5L-H1 CAR、ポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分（各ドットプロットの右上画分）が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しないことから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが再確認できた。そして、前記第２の候補ＣＡＲ－Ｔ（donor 1および2）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。このことから、前記第２の候補ＣＡＲ－Ｔに、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第２の候補ＣＡＲ－Ｔが存在することがわかった。
　つぎに、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第２の候補ＣＡＲ－Ｔを選抜し、前記第２の候補ＣＡＲ－Ｔが発現するＣＡＲを同定した。具体的には、A2/NY-ESO-1157テトラマーを用いて前記第２の候補ＣＡＲ－Ｔを染色した。つぎに、前記第２の候補ＣＡＲ－Ｔからフローサイトメーターを用いた細胞選別により、ＮＧＦＲ＋ＣＤ８＋A2/NY-ESO-1157テトラマー＋画分、またはＮＧＦＲ＋ＣＤ４＋A2/NY-ESO-1157テトラマー＋画分を、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第２の候補ＣＡＲ－Ｔとして分取した。A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔに代えて、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第２の候補ＣＡＲ－Ｔを用いた以外は、前記（５）と同様にして、ｓｃＦｖを調製し、ｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターに導入した。そして、得られたｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターについて、サンガー法によりシークエンスすることで、ＣＡＲをコードする塩基配列（K52-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１３９）、K73-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４０）、K121-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４１）、K124-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４２）、K125-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４３）、K131-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４４）、K145-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４５）、K151-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４６）、K160-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４７）、K173-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４８））を同定した。また、前記塩基配列に基づき、ｓｃＦｖのアミノ酸配列（K52-H1（配列番号９９）、K73-H1（配列番号１００）、K121-H1（配列番号１０１）、K124-H1（配列番号１０２）、K125-H1（配列番号１０３）、K131-H1（配列番号１０４）、K145-H1（配列番号１０５）、K151-H1（配列番号１０６）、K160-H1（配列番号１０７）、K173-H1（配列番号１０８））を同定した。そして、ｓｃＦｖのアミノ酸配列に基づき、前記表１Ｂ記載の新たな軽鎖可変領域（LB）～（LJ）のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を同定した。
（１２）第２の候補ｓｃＦｖの解析
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターのｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドに代えて、前記（１１）の各ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドが導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを用いた以外は、前記（３）と同様にして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を調製した。つぎに、前記GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を添加することにより、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞に各ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドが導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを導入し、ｓｃＦｖとしてK52-H1、K73-H1、K121-H1、K124-H1、K125-H1、K131-H1、K145-H1、K151-H1、K160-H1、またはK173-H1を含むＣＡＲを発現させた。前記ＣＡＲ発現後のＪｕｒｋａｔ７６細胞を、前記ＰＥ標識anti-human NGFR mAbと反応させた。前記反応後、前記抗ＰＥマイクロビーズを用いて、各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞を精製した。精製された各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞について、５μｇ／ｍＬ ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色後、V450標識 anti-human NGFR mAbで染色した。前記染色後の各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞について、フローサイトメトリーにより解析した。また、各ｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターに代えて、ｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。ポジティブコントロールは、各ｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、各ｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図７（Ａ）および（Ｂ）に示す。
　図７（Ａ）および（Ｂ）は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図７（Ａ）および（Ｂ）において、横軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示し、縦軸は、側方散乱光（ＳＳＣ）の平均強度を示す。図７（Ａ）および（Ｂ）に示すように、各ｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを導入しなかったＪｕｒｋａｔ７６細胞（コントロール２）では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合する細胞は存在しなかった。また、3M4E5LH CAR-T（3M4E5-CARポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ほぼ全ての細胞がＡ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、Ａ２テトラマー＋画分が存在しないことから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが確認できた。そして、H1-3M4E5L、K52-H1、K73-H1、K121-H1、K124-H1、K125-H1、K131-H1、K145-H1、K151-H1、K160-H1、またはK173-H1を含むＣＡＲを発現するＴ細胞は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ほぼ全てまたは一部の細胞がＡ２テトラマー＋画分に存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。このことから、H1-3M4E5L、K52-H1、K73-H1、K121-H1、K124-H1、K125-H1、K131-H1、K145-H1、K151-H1、K160-H1、またはK173-H1を含むＣＡＲは、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合する新たな重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。また、A2/NY-ESO-1157テトラマーでの染色の程度が異なるＣＡＲを発現するＴ細胞が存在することから、標的抗原に対して異なる親和性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
［実施例２］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により、A2/NY-ESO-1157に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることを確認した。
（１）第１のＣＡＲライブラリの調製
　前記実施例１（１）の3M4E5LH scFvをコードする核酸の５’側の軽鎖可変領域をコードする核酸を、前記ヒト末梢血Ｂ細胞由来の軽鎖可変領域の核酸を含むライブラリで置換することにより、hL-3M4E4H scFvライブラリを調製した。そして、3M4E5LH scFvをコードする核酸に代えて、hL-3M4E4H scFvライブラリを用いた以外は、前記実施例１（１）と同様にして、タグが付加されたhL-3M4E4H CARライブラリを調製した。タグが付加されたhL-3M4E4H CARライブラリを、ｐＭＸ発現ベクターに導入し、hL-3M4E4H CARライブラリの発現ベクターを調製した。なお、hL-3M4E4H CARライブラリの重鎖可変領域の不均一性は、制限酵素マッピングおよび各領域をサンガー法によりシークエンスすることで確認した。
（２）第１のＣＡＲライブラリ発現Ｔ細胞（第１の候補ＣＡＲ－Ｔ）の調製
　前記hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、hL-3M4E4H CARライブラリの発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、hL-3M4E4H CARライブラリが導入されたＴ細胞を精製し、これを第１の候補ＣＡＲ－Ｔとした。
（３）第１のスクリーニング方法
　前記実施例１（３）の第１の候補ＣＡＲ－Ｔに代えて、前記実施例２（２）の第１の候補ＣＡＲ－Ｔを用いた以外は、前記実施例１（５）と同様にして、A2/NY-ESO-1157と結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔの存在を確認した（donor 1）。同様の試験を、異なる健常者由来のヒト末梢血Ｂ細胞由来の重鎖可変領域の核酸を含むライブラリを用いて実施した（donor 2）。また、ポジティブコントロールは、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hL-3M4E4H CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋ＳＳＣ＋ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図８に示す。
　図８は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図８において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示す。図８に示すように、hL-3M4E4H CARライブラリの発現ベクターを導入しなかったＴ細胞（コントロール２）では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合するＴ細胞は存在しなかった。また、3M4E5LH CARを発現するＣＡＲ－Ｔ（3M4E5-CAR、ポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分（各ドットプロットの右上画分）が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しないことから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが確認できた。そして、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔ（donor 1および2）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。このことから、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔに、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔが存在することがわかった。
　つぎに、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔを選抜し、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔが発現するＣＡＲを同定した。具体的には、前記実施例２（３）と同様にして、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔを染色した。つぎに、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔからフローサイトメーターを用いた細胞選別により、ＮＧＦＲ＋ＣＤ８＋A2/NY-ESO-1157テトラマー＋画分、またはＮＧＦＲ＋ＣＤ４＋A2/NY-ESO-1157テトラマー＋画分を、A2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔとして分取した。前記実施例１（５）のA2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔに代えて、新たに分取したA2/NY-ESO-1157に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔを用いた以外は、前記実施例１（５）と同様にして、ｓｃＦｖを調製し、ｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターに導入した。そして、得られたｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターについて、サンガー法によりシークエンスすることにより、ＣＡＲをコードする塩基配列（L1-3M4E5 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１４９）、L66-3M4E5 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５１）、L73-3M4E5 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５２）、L80-3M4E5 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５３）、L88-3M4E5 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５４）、L102-3M4E5 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５５）、およびL124-3M4E5 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号１５６））を同定した。また、前記塩基配列に基づき、ｓｃＦｖのアミノ酸配列（L1-3M4E5（配列番号１０９）、L66-3M4E5（配列番号１１１）、L73-3M4E5（配列番号１１２）、L80-3M4E5（配列番号１１３）、L88-3M4E5（配列番号１１４）、L102-3M4E5（配列番号１１５）、およびL124-3M4E5（配列番号１１６））を同定した。そして、ｓｃＦｖのアミノ酸配列に基づき、前記表１Ｂ記載の新たな軽鎖可変領域（LK）～（LQ）のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を同定した。
（４）第１の候補ｓｃＦｖの解析
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターのｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドに代えて、前記実施例２（３）の各ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドが導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を調製した。つぎに、前記GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を添加することにより、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞に各ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドが導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを導入し、ｓｃＦｖとしてL1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L80-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、またはL124-3M4E5を含むＣＡＲを発現させた。前記ＣＡＲ発現後のＪｕｒｋａｔ７６細胞を、前記ＰＥ標識anti-human NGFR mAbと反応させた。前記反応後、前記抗ＰＥマイクロビーズを用いて、各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞を精製した。精製された各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞について、５μｇ／ｍＬ ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色後、V450標識 anti-human NGFR mAbで染色した。前記染色後の各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞について、フローサイトメトリーにより解析した。ポジティブコントロールは、各ｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、各ｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図９に示す。
　図９は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図９において、横軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示し、縦軸は、側方散乱光（ＳＳＣ）の平均強度を示す。図９に示すように、各ｓｃＦｖを導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターを導入しなかったＪｕｒｋａｔ７６細胞（コントロール２）では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合する細胞は存在しなかった。また、3M4E5LH CAR-T（3M4E5 CAR、ポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ほぼ全ての細胞がＡ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、Ａ２テトラマー＋画分が存在しないことから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが確認できた。そして、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L80-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、またはL124-3M4E5を含むＣＡＲを発現するＴ細胞は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ほぼ全てまたは一部の細胞がＡ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。このことから、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L80-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、またはL124-3M4E5を含むＣＡＲは、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合する新たな重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。また、A2/NY-ESO-1157テトラマーでの染色の程度が異なるＣＡＲを発現するＴ細胞が存在することから、標的抗原に対して異なる親和性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（５）第１の候補ｓｃＦｖの親和性
　つぎに、前記実施例２（４）で得られたL1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L80-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、またはL124-3M4E5を含むＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞と、3M4E5LH CAR-Tについて、所定濃度（０．０００４１９４３０４、０．００１０４８５７６、０．００２６２１４４、０．００６５５３６、０．０１６３８４、０．０４０９６、０．１０２４、０．２５６、０．６４、１．６、４、または１０μｇ／ｍＬ）のＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色後、V450標識 anti-human NGFR mAbで染色した以外は、前記（６）と同様にして、フローサイトメトリーにより解析した。そして、A2/NY-ESO-1157テトラマーの各濃度における、A2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を算出した。この結果を、図１０に示す。
　図１０は、A2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を示すグラフである。図１０において、横軸は、A2/NY-ESO-1157テトラマーの濃度を示し、縦軸は、A2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合を示す。図１０に示すように、各CAR-Tは、A2/NY-ESO-1157テトラマーの濃度依存的にA2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞の割合が増加した。また、L1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L80-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、またはL124-3M4E5を含むＣＡＲを発現するＴ細胞は、3M4E5LH CAR-Tと同程度のA2/NY-ESO-1157テトラマー陽性細胞を得るのに、A2/NY-ESO-1157テトラマーをより高濃度にする必要があることから、これらのCAR-TにおけるｓｃＦｖのA2/NY-ESO-1157テトラマーに対する親和性は異なることがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合する異なる親和性を有するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（６）第１の候補ｓｃＦｖの機能
　つぎに、ｓｃＦｖとしてL1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L80-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、またはL124-3M4E5を発現するCAR-Tが、前記標的抗原との結合により、活性化するかを検討した。具体的には、３×１０５細胞の各CAR-Tと、５×１０４細胞のＴ２細胞とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記Ｔ２細胞（HLA-A*02:01発現細胞）は、所定濃度（０．０００５、０．００１５、０．００４、０．０１、０．０４、０．１２２、０．３６６、１．１１、３．３３または１０μｇ／ｍＬ）でNY-ESO-1157-165ペプチドをパルスした細胞（T2 + NY-ESO-1157）を用いた。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、各CAR-Tを回収し、FITC標識anti-human CD69 mAb（clone：FN50）およびV450標識anti-human NGFR mAbで染色した。前記染色後の各CAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＮＧＦＲ＋細胞について、ＣＤ６９の平均蛍光強度を測定した。ポジティブコントロールは、ｐＭＸ／H1-3M4E5L発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、NY-ESO-1157-165ペプチドに代えて、HIV Gag77-85ペプチドをパルスしたＴ２細胞（T2 + HIV Gag77）を用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、前記発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。そして、コントロール２におけるＣＤ６９の平均蛍光強度を基準として、各サンプルのＣＤ６９の発現上昇の割合を算出した。これらの結果を図１１に示す。
　図１１は、ペプチド濃度が１０μｇ／ｍＬの場合におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。図１１において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＣＤ６９の発現上昇の割合を示す。図１１に示すように、コントロール２では、ＣＤ６９の発現上昇は生じなかった。他方、3M4E5LH CAR-T（ポジティブコントロール）は、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、ＣＤ６９の発現が上昇し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化していることが確認できた。また、ｓｃＦｖとしてL1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L80-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、またはL124-3M4E5を発現するCAR-Tは、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、ＣＤ６９の発現が上昇し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化した。また、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能し、かつより特異性の高いｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
　つぎに、NY-ESO-1157ペプチドの段階希釈時のＣＤ６９の発現変化の結果を図１２に示す。図１２は、ＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。図１２において、横軸は、NY-ESO-1157ペプチドの濃度を示し、縦軸は、ＣＤ６９の発現上昇の割合を示す。図１２に示すように、各CAR-Tは、NY-ESO-1157ペプチドの濃度依存的にＣＤ６９の発現が上昇した。また、ｓｃＦｖとして、L1-3M4E5またはL102-3M4E5を発現するCAR-Tは、3M4E5LH CAR-Tと比較して、ＣＤ６９の発現上昇がシャープであり、A2/NY-ESO-1157に対する特異性が高いことがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能し、かつより特異性の高いｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
［実施例３］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることを確認した。
（１）FMC63 CARの調製
　前記A2/NY-ESO-1157特異的抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域に代えて、ヒトＣＤ１９特異的抗体（clone：ＦＭＣ６３）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を用いた以外は、前記実施例１（１）と同様にして、FMC63HL scFvまたはFMC63LH scFvをコードする核酸を調製し、３’末端にタグを付加したタグ付加FMC63HL CARおよびタグ付加FMC63LH CARをコードする核酸を取得した。各核酸は、ｐＭＸ発現ベクターに導入した。
FMC63HL scFv（配列番号２０１）
EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT
FMC63HL scFvをコードする核酸（配列番号２０２）
5'-GAAGTGAAACTGCAAGAGTCTGGCCCTGGACTGGTGGCCCCATCTCAGTCTCTGAGCGTGACCTGTACAGTCAGCGGAGTGTCCCTGCCTGATTACGGCGTGTCCTGGATCAGACAGCCTCCTCGGAAAGGCCTGGAATGGCTGGGAGTGATCTGGGGCAGCGAGACAACCTACTACAACAGCGCCCTGAAGTCCCGGCTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAGGTGTTCCTGAAGATGAACAGCCTGCAGACCGACGACACCGCCATCTACTATTGCGCCAAGCACTACTACTACGGCGGCAGCTACGCTATGGACTATTGGGGCCAGGGCACCAGCGTTACAGTGTCCTCGGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGATATCCAGATGACCCAGACAACAAGCAGCCTGAGCGCCAGCCTGGGCGATAGAGTGACCATCAGCTGTAGAGCCAGCCAGGACATCAGCAAGTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCCGACGGCACCGTGAAGCTGCTGATCTACCACACCAGCAGACTGCACAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTACAGCCTGACCATCTCCAACCTGGAACAAGAGGATATCGCTACCTACTTCTGCCAGCAAGGCAACACCCTGCCTTACACCTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCACA-3'
FMC63LH scFv（配列番号２０３）
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
FMC63LH scFvをコードする核酸（配列番号２０４）
5'-GATATCCAGATGACCCAGACAACAAGCAGCCTGAGCGCCAGCCTGGGCGATAGAGTGACCATCAGCTGTAGAGCCAGCCAGGACATCAGCAAGTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCCGACGGCACCGTGAAGCTGCTGATCTACCACACCAGCAGACTGCACAGCGGCGTGCCAAGCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCTGGCACCGACTACAGCCTGACCATCTCCAACCTGGAACAAGAGGATATCGCTACCTACTTCTGCCAGCAAGGCAACACCCTGCCTTACACCTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCACAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGAAACTGCAAGAGTCTGGCCCTGGACTGGTGGCCCCATCTCAGTCTCTGAGCGTGACCTGTACAGTCAGCGGAGTGTCCCTGCCTGATTACGGCGTGTCCTGGATCAGACAGCCTCCTCGGAAAGGCCTGGAATGGCTGGGAGTGATCTGGGGCAGCGAGACAACCTACTACAACAGCGCCCTGAAGTCCCGGCTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAGGTGTTCCTGAAGATGAACAGCCTGCAGACCGACGACACCGCCATCTACTATTGCGCCAAGCACTACTACTACGGCGGCAGCTACGCTATGGACTATTGGGGCCAGGGCACCAGCGTTACAGTGTCCTCG-3'
（２）第１のＣＡＲライブラリの調製
　前記実施例３（１）のFMC63HL scFvをコードする核酸の５’側の重鎖可変領域をコードする核酸を、前記ヒト末梢血Ｂ細胞由来の重鎖可変領域の核酸を含むライブラリで置換することにより、hH-FMC63L scFvライブラリを調製した。そして、3M4E5LH scFvをコードする核酸に代えて、hH-FMC63L scFvライブラリを用いた以外は、前記実施例１（１）と同様にして、タグが付加されたhH-FMC63L CARライブラリを調製した。タグが付加されたhH-FMC63L CARライブラリを、ｐＭＸ発現ベクターに導入し、hH-FMC63L CARライブラリの発現ベクターを調製した。なお、hH-FMC63L CARライブラリの重鎖可変領域の不均一性は、制限酵素マッピングおよび各領域をサンガー法によりシークエンスすることで、約１×１０６種類であることを確認した。
（３）第１のＣＡＲライブラリ発現Ｔ細胞（第１の候補ＣＡＲ－Ｔ）の調製
　前記hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、hH-FMC63L CARライブラリの発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、hH-FMC63L CARライブラリが導入されたＴ細胞を精製し、これを第１の候補ＣＡＲ－Ｔとした。
（４）標的抗原の発現細胞の調製
　レトロウイルスを用いて、ヒトＣＤ１９をコードする核酸を、Ｋ５６２細胞に導入し、抗原提示細胞（ＡＰＣ－ＣＤ１９）とした。
ヒトＣＤ１９をコードする核酸（配列番号２０５）
5'-ATGCCACCTCCTCGCCTCCTCTTCTTCCTCCTCTTCCTCACCCCCATGGAAGTCAGGCCCGAGGAACCTCTAGTGGTGAAGGTGGAAGAGGGAGATAACGCTGTGCTGCAGTGCCTCAAGGGGACCTCAGATGGCCCCACTCAGCAGCTGACCTGGTCTCGGGAGTCCCCGCTTAAACCCTTCTTAAAACTCAGCCTGGGGCTGCCAGGCCTGGGAATCCACATGAGGCCCCTGGCCATCTGGCTTTTCATCTTCAACGTCTCTCAACAGATGGGGGGCTTCTACCTGTGCCAGCCGGGGCCCCCCTCTGAGAAGGCCTGGCAGCCTGGCTGGACAGTCAATGTGGAGGGCAGCGGGGAGCTGTTCCGGTGGAATGTTTCGGACCTAGGTGGCCTGGGCTGTGGCCTGAAGAACAGGTCCTCAGAGGGCCCCAGCTCCCCTTCCGGGAAGCTCATGAGCCCCAAGCTGTATGTGTGGGCCAAAGACCGCCCTGAGATCTGGGAGGGAGAGCCTCCGTGTCTCCCACCGAGGGACAGCCTGAACCAGAGCCTCAGCCAGGACCTCACCATGGCCCCTGGCTCCACACTCTGGCTGTCCTGTGGGGTACCCCCTGACTCTGTGTCCAGGGGCCCCCTCTCCTGGACCCATGTGCACCCCAAGGGGCCTAAGTCATTGCTGAGCCTAGAGCTGAAGGACGATCGCCCGGCCAGAGATATGTGGGTAATGGAGACGGGTCTGTTGTTGCCCCGGGCCACAGCTCAAGACGCTGGAAAGTATTATTGTCACCGTGGCAACCTGACCATGTCATTCCACCTGGAGATCACTGCTCGGCCAGTACTATGGCACTGGCTGCTGAGGACTGGTGGCTGGAAGGTCTCAGCTGTGACTTTGGCTTATCTGATCTTCTGCCTGTGTTCCCTTGTGGGCATTCTTCATCTTCAAAGAGCCCTGGTCCTGAGGAGGAAAAGAAAGCGAATGACTGACCCCACCAGGAGATTCTTCAAAGTGACGCCTCCCCCAGGAAGCGGGCCCCAGAACCAGTACGGGAACGTGCTGTCTCTCCCCACACCCACCTCAGGCCTCGGACGCGCCCAGCGTTGGGCCGCAGGCCTGGGGGGCACTGCCCCGTCTTATGGAAACCCGAGCAGCGACGTCCAGGCGGATGGAGCCTTGGGGTCCCGGAGCCCGCCGGGAGTGGGCCCAGAAGAAGAGGAAGGGGAGGGCTATGAGGAACCTGACAGTGAGGAGGACTCCGAGTTCTATGAGAACGACTCCAACCTTGGGCAGGACCAGCTCTCCCAGGATGGCAGCGGCTACGAGAACCCTGAGGATGAGCCCCTGGGTCCTGAGGATGAAGACTCCTTCTCCAACGCTGAGTCTTATGAGAACGAGGATGAAGAGCTGACCCAGCCGGTCGCCAGGACAATGGACTTCCTGAGCCCTCATGGGTCAGCCTGGGACCCCAGCCGGGAAGCAACCTCCCTGGGGTCCCAGTCCTATGAGGATATGAGAGGAATCCTGTATGCAGCCCCCCAGCTCCGCTCCATTCGGGGCCAGCCTGGACCCAATCATGAGGAAGATGCAGACTCTTATGAGAACATGGATAATCCCGATGGGCCAGACCCAGCCTGGGGAGGAGGGGGCCGCATGGGCACCTGGAGCACCAGG-3'
（５）第１のスクリーニング方法
　前記実施例３（３）の第１の候補ＣＡＲ－Ｔと、前記実施例３（４）で調製したＡＰＣ－ＣＤ１９とを用いて、スクリーニングを行なった。具体的には、２×１０６第１の候補ＣＡＲ－Ｔと、１×１０５ＡＰＣ－ＣＤ１９とを各ウェル（２４ウェルプレート）に播種後、７日間共培養した。前記ＡＰＣ－ＣＤ１９は、２０Ｇｙでγ線処理した細胞を用いた。また、前記第１の候補ＣＡＲ－ＴとＡＰＣ－ＣＤ１９との共培養に用いた培地の組成は、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、１０％ヒトＡＢ血清（Sigma社製）、１０ＩＵ／ｍＬ　ヒトＩＬ－２（Roche社製）、および１０ｎｇ／ｍＬ　ヒトＩＬ－１５（PeproTech社製）含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、第１の候補ＣＡＲ－Ｔを回収し、同様の条件でＡＰＣ－Ｃ１９との共培養をさらに２回（合計３回）実施した。これにより、ヒトＣＤ１９と結合するhH-FMC63L CARを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔを富化した。
　つぎに、富化後の第１の候補ＣＡＲ－Ｔを回収し、２０μｇ／ｍＬ　ＰＥ標識ＣＤ１９ダイマーで染色した。前記ＰＥ標識ＣＤ１９ダイマーは、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインのＣ末端にＳＧＳＧリンカーを介してヒスタグを付加した溶解型ＣＤ１９を用いて調製した。具体的には、前記ＰＥ標識ＣＤ１９ダイマーは、前記溶解型ＣＤ１９と、ＰＥ標識anti-His mAb（clone：GG11-8F3.5.1）とを、モル数が２：１となるように混合することにより調製した。前記染色後、前記Ｔ細胞を、さらにPC5標識anti-human CD8a mAb（clone：B9.11）、FITC標識anti-human CD4 mAb（clone：OKT4）、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。そして、ダイマー染色後の第１の候補ＣＡＲ－Ｔについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＣＤ１９と結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔの存在を確認した。また、ポジティブコントロールは、hH-FMC63L CARライブラリの発現ベクターに代えて、タグ付加FMC63HL CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。なお、タグ付加FMC63LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた場合も、タグ付加FMC63HL CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた場合と同様の結果を得ている。また、コントロール１は、ＣＤ１９ダイマーで染色しなかった以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hH-FMC63L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋ＳＳＣ＋ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図１３に示す。
　図１３は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図１３において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、ＣＤ１９ダイマーの平均蛍光強度を示す。図１３に示すように、hH-FMC63 CARライブラリの発現ベクターを導入しなかったＴ細胞（コントロール２）では、ＣＤ１９ダイマーに結合するＴ細胞は存在しなかった。また、FMC63 CARを発現するＣＡＲ－Ｔ（FMC63-CAR、ポジティブコントロール）は、ＣＤ１９ダイマーで染色した場合、ＣＤ８＋ＣＤ１９ダイマー＋画分（各ドットプロットの右上画分）が存在し、ＣＤ１９ダイマーで染色しなかった場合、ＣＤ８＋ＣＤ１９ダイマー＋画分が存在しないことから、ＣＤ１９ダイマーに結合することが確認できた。そして、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔは、ＣＤ１９ダイマーで染色した場合、ＣＤ８＋ＣＤ１９ダイマー＋画分が存在し、ＣＤ１９ダイマーで染色しなかった場合、ＣＤ８＋ＣＤ１９ダイマー＋画分が存在しなかった。このことから、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔに、ＣＤ１９ダイマーに結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔが存在することがわかった。これらの結果から、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。なお、データは示していないが、ＣＤ８＋ＣＤ１９ダイマー＋画分の細胞は、ＣＤ６９の発現が、ＣＤ１９ダイマー－画分の細胞と比較して上昇しており、ＣＤ８＋ＣＤ１９ダイマー＋画分の細胞に発現するＣＡＲがＴ細胞の活性化機能を有することが確認された。
［実施例４］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲが、標的抗原に対して高い特異性を有することを確認した。
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、ｓｃＦｖ（抗原結合ドメイン）としてL1-3M4E5HまたはH73-3M4E5Lをコードするポリヌクレオチドが導入されたｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクター（それぞれ、L1-3M4E5H発現ベクターおよびH73-3M4E5L発現ベクター）を用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を調製した。つぎに、得られたGaLV-pseudotypedレトロウイルスを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、前記レトロウイルスをＴ細胞に感染させ、L1-3M4E5H発現ベクターまたはH73-3M4E5L発現ベクターをＴ細胞に導入した。同様のレトロウイルスの感染およびL1-3M4E5H発現ベクターまたはH73-3M4E5L発現ベクターの導入を、更に５回（合計６回）実施した。得られたＴ細胞について、２０μｇ／ｍＬ　ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した。前記染色後、前記Ｔ細胞をさらに、PC5標識anti-human CD8a mAb（clone：B9.11）、FITC標識anti-human CD4 mAb（clone：OKT4）、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。各抗体の濃度は、約１０μｇ／ｍＬとした。そして、テトラマー染色後のＴ細胞について、前記フローサイトメーターを用いて、A2/NY-ESO-1157と結合するＣＡＲを発現するＴ細胞の存在を確認した。また、ポジティブコントロールは、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5HL CARまたはタグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋ＳＳＣ＋ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図１４に示す。
　図１４は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図１４において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示す。図１４に示すように、コントロール２では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合するＴ細胞は存在しなかった。また、3M4E5HL CARまたは3M4E5LH CARを発現するCAR-T（3M4E5HL CAR または3M4E5LH CAR、ポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分（各ドットプロットの右上画分）が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しないことから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが確認できた。そして、L1-3M4E5H CAR-TまたはH73-3M4E5L CAR-Tは、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。
　つぎに、前記レトロウイルス感染後の各Ｔ細胞が、前記標的抗原との結合により、活性化し、サイトカインを産生するかを検討した。具体的には、前記６回のレトロウイルス感染後のＴ細胞（CAR-T）について、３×１０５細胞のＴ細胞と、５×１０４細胞のＴ２細胞とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記Ｔ２細胞（HLA-A*02:01発現細胞）は、１０μｇ／ｍＬでNY-ESO-1157ペプチドをパルスした細胞（T2 + NY-ESO-1157）を用いた。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、Ｔ細胞を回収し、パラホルムアルデヒドで固定後、透過処理を行ない、APC標識anti-human IL-2 mAb（clone：MQ1-17H12）、PE標識anti-human TNFα mAb（clone：Mab11）、PC7標識anti-human IFN-γ mAb（clone：B27）、FITC標識anti-human CD4 mAb (clone：OKT4)、PC5標識anti-human CD8a mAb (clone：B9.11)、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。前記染色後のCAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、CAR-T（NGFR陽性画分）におけるＣＤ８陽性細胞またはＣＤ４陽性細胞のＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－２産生量を測定した。ポジティブコントロールは、ｓｃＦｖとして3M4E5HLまたは3M4E5LHをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、NY-ESO-1157ペプチドに代えて、A2/HIV-Gag77ペプチドを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。そして、コントロール２におけるサイトカインの産生量を基準として、各サンプルのサイトカインの産生増加の割合を算出した。これらの結果を図１５に示す。
　図１５は、サイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。図１５において、横軸は、サンプル（ＣＡＲ）の種類を示し、縦軸は、サイトカインの産生増加の割合を示す。図１５に示すように、コントロール２では、サイトカインの産生増加は生じなかった。他方、3M4E5LH CAR-Tまたは3M4E5HL CAR-T（ポジティブコントロール）は、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生量が増加し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化していることが確認できた。また、3M4E5HL CAR-Tまたは3M4E5LH CAR-Tを、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生が増加し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化し、サイトカインを産生していた。さらに、3M4E5HL CAR-Tまたは3M4E5LH CAR-Tは、T2 + HIV Gag77で刺激した場合におけるサイトカインの産生がコントロール２と同等以下であり、ポジティブコントロールより低かった。以上のことから、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲが、標的抗原に対して高い特異性を有することがわかった。
［実施例５］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲが、スクリーニングに用いた標的抗原に結合する抗体と異なる抗原認識性を示すことを確認した。
　前記実施例４と同様にして、L1-3M4E5H CARを発現するＣＤ８陽性Ｔ細胞およびＣＤ４陽性Ｔ細胞を作製した。つぎに、３×１０５細胞のＴ細胞と、５×１０４細胞のＴ２細胞とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記Ｔ２細胞（HLA-A*02:01発現細胞）は、１０μｇ／ｍＬでNY-ESO-1157ペプチドまたはNY-ESO-1157ペプチドの変異ペプチドをパルスした細胞（T2 + NY-ESO-1157）を用いた。前記変異ペプチドは、NY-ESO-1157ペプチドのアミノ酸配列において、各アミノ酸を１つずつアラニンに置換したペプチドである。前記共培養後、培養上清を回収し、前記実施例４と同様にして、CAR-TにおけるＩＦＮ－γの濃度を測定した。コントロールは、3M4E5LH CARを発現するＣＤ８陽性Ｔ細胞またはＣＤ４陽性Ｔ細胞を用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157ペプチドに代えて、A2/HIV-Gag77ペプチドを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、発現ベクターを導入しなかったＣＤ８陽性Ｔ細胞またはＣＤ４陽性Ｔ細胞を用いた以外は、同様にして実施した。そして、コントロール２におけるサイトカインの産生量を基準として、各サンプルのサイトカインの産生増加の割合を算出した。これらの結果を図１６に示す。
　図１６は、サイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、3M4E5LH CARを発現するＴ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、L1-3M4E5H CARを発現するＴ細胞の結果を示す。図１６（Ａ）および（Ｂ）において、横軸は、ペプチドの種類を示し、縦軸は、サイトカイン産生量の変化を示す。図１６（Ａ）に示すように、3M4E5LH CARは、NY-ESO-1157ペプチドの１６０～１６２番のアミノ酸を認識するのに対して、（Ｂ）に示すように、L1-3M4E5H CARは、NY-ESO-1157ペプチドの１５８および１６０～１６２番のアミノ酸を認識していた。これらの結果から、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲが、スクリーニングに用いた標的抗原に結合する抗体と異なる抗原認識性を示すことがわかった。
［実施例６］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲについて、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域との順序を交換しても、抗原認識性を維持することを確認した。
　前記L1-3M4E5H発現ベクターにおいて、重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドと、軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドの順序を逆にすることにより、3M4E5H-L1発現ベクターを作製した。
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、3M4E5H-L1発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を調製した。つぎに、得られたGaLV-pseudotypedレトロウイルスを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、前記レトロウイルスをＴ細胞に感染させ、3M4E5H-L1発現ベクターをＴ細胞に導入した。同様のレトロウイルスの感染および3M4E5H-L1発現ベクターの導入を、更に５回（合計６回）実施した。得られたＴ細胞について、２０μｇ／ｍＬ　ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した。前記染色後、前記Ｔ細胞をさらに、PC5標識anti-human CD8a mAb（clone：B9.11）、FITC標識anti-human CD4 mAb（clone：OKT4）、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。各抗体の濃度は、約１０μｇ／ｍＬとした。そして、テトラマー染色後のＴ細胞について、前記フローサイトメーターを用いて、A2/NY-ESO-1157と結合するＣＡＲを発現するＴ細胞の存在を確認した。また、ポジティブコントロールは、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、タグ付加3M4E5LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋、ＳＳＣ＋、ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図１７に示す。
　図１７は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図１７において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示す。図１７に示すように、コントロール２では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合するＴ細胞は存在しなかった。また、3M4E5LH CARを発現するCAR-T（3M4E5LH CAR、ポジティブコントロール）は、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分（各ドットプロットの右上画分）が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しないことから、A2/NY-ESO-1157に結合し、A2/HIV-Gag77に結合しないことが確認できた。そして、3M4E5H-L1を発現するCAR-Tは、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。
　つぎに、前記レトロウイルス感染後の各Ｔ細胞が、前記標的抗原との結合により、活性化し、サイトカインを産生するかを検討した。具体的には、前記６回のレトロウイルス感染後のＴ細胞（CAR-T）について、３×１０５細胞のＴ細胞と、５×１０４細胞のＴ２細胞または前記実施例１（４）で調製したＡＰＣとを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記Ｔ２細胞（HLA-A*02:01発現細胞）およびＡＰＣは、１０μｇ／ｍＬでNY-ESO-1157ペプチドをパルスした細胞（T2 + NY-ESO-1157）またはＡＰＣ（K562/A2/NY-ESO-1）を用いた。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、Ｔ細胞を回収し、パラホルムアルデヒドで固定後、透過処理を行ない、APC標識anti-human IL-2 mAb（clone：MQ1-17H12）、PE標識anti-human TNFα mAb（clone：Mab11）、PC7標識anti-human IFN-γ抗体（clone：B27）、FITC標識anti-human CD4 mAb (clone：OKT4)、PC5標識anti-human CD8a mAb (clone：B9.11)、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。前記染色後のCAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、CAR-T（NGFR陽性画分）におけるＣＤ８陽性細胞またはＣＤ４陽性細胞のＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－２産生量を測定した。ポジティブコントロールは、ｓｃＦｖとして3M4E5LHをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、前記Ｔ２細胞において、コントロール１は、NY-ESO-1157ペプチドに代えて、HIV-Gag77ペプチドを用いた以外は、同様にして実施した。前記ＡＰＣ（K562/A2/NY-ESO-1）において、コントロール１は、NY-ESO-1を遺伝子導入していないK562/A2を用いた以外は、同様に実施した。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。そして、コントロール２におけるサイトカインの産生量を基準として、各サンプルのサイトカインの産生増加の割合を算出した。これらの結果を図１８および１９に示す。
　Ｔ２細胞を用いた結果を図１８に示す。図１８は、サイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。図１８において、横軸は、サンプル（ＣＡＲ）の種類を示し、縦軸は、サイトカインの産生増加の割合を示す。図１８に示すように、コントロール２では、サイトカインの産生増加は生じなかった。他方、3M4E5LH CAR-T（ポジティブコントロール）は、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生量が増加し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化していることが確認できた。また、3M4E5H-L1 CAR-Tを、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生が増加し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化し、サイトカインを産生していた。さらに、3M4E5H-L1 CAR-Tは、T2 + HIV Gag77で刺激した場合におけるサイトカインの産生がコントロール２と同等以下であり、ポジティブコントロールより低かった。
　ＡＰＣを用いた結果を図１９に示す。図１９は、サイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。図１９において、横軸は、サンプル（ＣＡＲ）の種類を示し、縦軸は、サイトカインの産生増加の割合を示す。図１９に示すように、コントロール２では、サイトカインの産生増加は生じなかった。他方、3M4E5LH CAR-T（ポジティブコントロール）は、K562/A2/NY-ESO-1で刺激すると、K562/A2で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生量が増加し、K562/A2/NY-ESO-1に結合して活性化していることが確認できた。また、3M4E5H-L1 CAR-Tを、K562/A2/NY-ESO-1で刺激すると、K562/A2で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生が増加し、K562/A2/NY-ESO-1に結合して活性化し、サイトカインを産生していた。さらに、3M4E5H-L1 CAR-Tは、K562/A2で刺激した場合におけるサイトカインの産生がコントロール２と同等であり、ポジティブコントロールより低かった。以上のことから、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲについて、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域との順序を交換しても、抗原認識性を維持できることがわかった。
［実施例７］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲが、スクリーニングに用いた標的抗原に結合する抗体と異なる抗原認識性を示すことおよびＣＡＲにおけるｓｃＦｖの交差反応性を制御しながらスクリーニングできることを確認した。
（１）抗原認識性
　前記実施例６と同様にして、3M4E5H-L1 CARを発現するＣＤ８陽性Ｔ細胞およびＣＤ４陽性Ｔ細胞を作製した。つぎに、３×１０５細胞のＴ細胞と、５×１０４細胞のＴ２細胞とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記Ｔ２細胞（HLA-A*02:01発現細胞）は、１０μｇ／ｍＬでNY-ESO-1157ペプチドまたはNY-ESO-1157ペプチドの変異ペプチドをパルスした細胞（T2 + NY-ESO-1157）を用いた。前記変異ペプチドは、NY-ESO-1157ペプチドのアミノ酸配列において、各アミノ酸を１つずつアラニンに置換したペプチドである。前記共培養後、培養上清を回収し、前記実施例４と同様にして、CAR-TにおけるＩＬ－２の産生量を測定した。コントロールは、3M4E5LH CARを発現するＣＤ８陽性Ｔ細胞またはＣＤ４陽性Ｔ細胞を用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157ペプチドに代えて、A2/HIV-Gag77ペプチドを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、発現ベクターを導入しなかったＣＤ８陽性Ｔ細胞またはＣＤ４陽性Ｔ細胞を用いた以外は、同様にして実施した。そして、コントロール２におけるサイトカインの産生量を基準として、各サンプルのサイトカインの産生増加の割合を算出した。これらの結果を図２０に示す。
　図２０は、サイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、3M4E5LH CARを発現するＴ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、3M4E5H-L1 CARを発現するＴ細胞の結果を示す。図２０（Ａ）および（Ｂ）において、横軸は、ペプチドの種類を示し、縦軸は、サイトカイン産生量の変化を示す。図２０（Ａ）に示すように、3M4E5LH CARは、主にNY-ESO-1157ペプチドの１６０～１６２番のアミノ酸を認識するのに対して、（Ｂ）に示すように、3M4E5H-L1 CARは、NY-ESO-1157ペプチドの１５８、１６０～１６２、および１６４番のアミノ酸を認識していた。これらの結果から、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲが、スクリーニングに用いた標的抗原に結合する抗体と異なる抗原認識性を示すことがわかった。
（２）交差反応性
　前記実施例７（１）で示したように、3M4E5LH CARは、NY-ESO-1157ペプチドの１６０～１６２番のアミノ酸を認識するのに対して、3M4E5H-L1 CARは、NY-ESO-1157ペプチドの１５８および１６０～１６２番、１６４番目のアミノ酸を認識する。3M4E5LH CARおよび3M4E5H-L1 CARの他のペプチドに対する交差反応性を検討するため、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１に結合し、かつ3M4E5LH CARおよび3M4E5H-L1 CARと交差反応しうるペプチドを含むヒトタンパク質について、アルゴリズム（netMHC4.0、http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/）を用いて予測した。タンパク質のデータベースとしては、uniprotKB/swissprotを用いた。また、得られたタンパク質におけるペプチドにおいて、NY-ESO-1157ペプチドと相同性が高い相同ペプチド（homologous peptide）を、アルゴリズム（ScanProsit、https://prosite.expasy.org/scanprosite/）を用いて絞り込んだ。その結果、交差反応しうるペプチド（配列番号２０７：GLRMWIKQV）を含む、Lysophospholipase-like protein 1（LYPLAL1）タンパク質がヒットした。そこで、Ｋ５６２細胞に、LYPLAL1タンパク質を発現させ、3M4E5LH CARおよび3M4E5H-L1 CARの交差反応性を検討した。
　レトロウイルスを用いて、HLA-A*02:01をコードする核酸と、ΔNGFRを前記フーリン切断部位、前記スペーサー配列および前記コドン最適化Ｐ２Ａ配列を介して付加したLYPLAL1（配列番号２０８）またはNY-ESO-1（配列番号２０９）をコードする核酸とをＫ５６２細胞（ＨＬＡおよびＣＤ１９の発現無し）に導入し、抗原提示細胞（K562/A2/NY-ESO-1またはK562/A2/LYPLAL1）とした。また、ΔNGFRを付加したNY-ESO-1またはLYPLAL1をコードする核酸を導入しなかった以外は同様にして、抗原提示細胞（K562/A2）を調製した。前記実施例６と同様にして、3M4E5LH CAR-Tと3M4E5H-L1 CAR-Tを調製し、３×１０５細胞のCAR-T細胞と、５×１０４細胞の抗原提示細胞とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、CAR-Tを回収し、パラホルムアルデヒドで固定後、透過処理を行ない、APC標識anti-human IL-2 mAb（clone：MQ1-17H12）、PE標識anti-human TNFα mAb（clone：Mab11）、PC7標識anti-human IFN-γ抗体（clone：B27）、FITC標識anti-human CD4 mAb (clone：OKT4)、PC5標識anti-human CD8a mAb (clone：B9.11)およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。前記染色後のCAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、CAR-T（NGFR陽性画分）におけるＣＤ８陽性細胞またはＣＤ４陽性細胞のＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－２の産生量を測定した。前記ＡＰＣにおいて、コントロール１は、NY-ESO-1を遺伝子導入していないK562/A2を用いた。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。そして、コントロール２におけるサイトカインの産生量を基準として、各サンプルのサイトカインの産生増加の割合を算出した。これらの結果を図２１に示す。
LYPLAL1をコードする核酸分子（配列番号２０８）
5'-ATGGCGGCTGCATCTGGAAGCGTGCTGCAGAGATGTATCGTGTCCCCAGCCGGCAGACATAGCGCCAGCCTGATTTTTCTGCACGGCAGCGGCGATTCTGGCCAGGGACTGAGAATGTGGATCAAACAGGTGCTGAACCAGGACCTGACCTTCCAGCACATCAAGATCATCTACCCCACCGCTCCACCTCGGAGCTACACACCTATGAAGGGCGGCATCAGCAACGTTTGGTTCGACCGGTTCAAGATCACCAACGACTGCCCCGAGCACCTGGAATCCATCGACGTGATGTGTCAGGTGCTCACCGACCTGATCGACGAGGAAGTGAAGTCCGGCATCAAGAAGAACAGAATCCTGATCGGCGGCTTCAGCATGGGCGGCTGTATGGCCATTCACCTGGCCTACAGAAACCACCAGGATGTGGCTGGCGTGTTCGCCCTGAGCAGCTTTCTGAACAAAGCCAGCGCCGTGTATCAGGCCCTGCAGAAATCTAACGGCGTGCTGCCTGAGCTGTTCCAGTGTCATGGCACAGCCGATGAGCTGGTGCTGCACTCTTGGGCCGAAGAGACAAATAGCATGCTGAAAAGCCTGGGCGTGACCACCAAGTTCCACAGCTTCCCCAACGTGTACCACGAGCTGAGCAAGACCGAGCTGGACATCCTGAAACTGTGGATTCTGACCAAGCTGCCCGGCGAGATGGAAAAGCAGAAG-3'
ＮＹ－ＥＳＯ－１をコードする核酸分子（配列番号２０９）
5'-ATGCAGGCCGAAGGCCGGGGCACAGGGGGTTCGACGGGCGATGCTGATGGCCCAGGAGGCCCTGGCATTCCTGATGGCCCAGGGGGCAATGCTGGCGGCCCAGGAGAGGCGGGTGCCACGGGCGGCAGAGGTCCCCGGGGCGCAGGGGCAGCAAGGGCCTCGGGGCCGGGAGGAGGCGCCCCGCGGGGTCCGCATGGCGGCGCGGCTTCAGGGCTGAATGGATGCTGCAGATGCGGGGCCAGGGGGCCGGAGAGCCGCCTGCTTGAGTTCTACCTCGCCATGCCTTTCGCGACACCCATGGAAGCAGAGCTGGCCCGCAGGAGCCTGGCCCAGGATGCCCCACCGCTTCCCGTGCCAGGGGTGCTTCTGAAGGAGTTCACTGTGTCCGGCAACATACTGACTATCCGACTGACTGCTGCAGACCACCGCCAACTGCAGCTCTCCATCAGCTCCTGTCTCCAGCAGCTTTCCCTGTTGATGTGGATCACGCAGTGCTTTCTGCCCGTGTTTTTGGCTCAGCCTCCCTCAGGGCAGAGGCGC-3'
　図２１は、サイトカイン産生細胞の割合を示すグラフである。図２１において、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。図２１において、各グラフの横軸は、サンプル（ＣＡＲ）の種類を示し、縦軸は、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、またはＩＬ－２陽性細胞の割合を示す。図２１（Ａ）および（Ｂ）に示すように、コントロール１（Control）では、サイトカインの産生増加は生じなかった。他方、ポジティブコントロール（K562/A2/NY-ESO-1）では、3M4E5H-L1 CARまたは3M4E5LH CARを発現するＴ細胞は、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－２を産生した。また、図２１（Ａ）および（Ｂ）に示すように、LYPLAL1を提示する抗原提示細胞（K562/A2/LYPLAL1）と共培養した場合、3M4E5LH CARおよび3M4E5H-L1 CARを発現するＴ細胞におけるサイトカイン産生細胞の割合は、バックグラウンドであるコントロール２（K562/A2）と同程度であり、交差反応性を示さなかった。これらの結果から、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により、ＣＡＲが含むｓｃＦｖの交差反応性を制御できることがわかった。
［実施例８］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲについて、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域との順序を交換することで、抗原特異性が変化することを確認した。
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、3M4E5H-L1発現ベクターまたはL1-3M4E5H発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を調製した。つぎに、得られたGaLV-pseudotypedレトロウイルスを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、前記レトロウイルスをＴ細胞に感染させ、3M4E5H-L1発現ベクターまたはL1-3M4E5H発現ベクターをＴ細胞に導入した。同様のレトロウイルスの感染および3M4E5H-L1発現ベクターまたはL1-3M4E5H発現ベクターの導入を、更に５回（合計６回）実施した。得られたＴ細胞について、２０μｇ／ｍＬ　ＰＥ標識A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した。前記染色後、前記Ｔ細胞をさらに、PC5標識anti-human CD8a mAb（clone：B9.11）、FITC標識anti-human CD4 mAb（clone：OKT4）、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。各抗体の濃度は、約１０μｇ／ｍＬとした。そして、テトラマー染色後のＴ細胞について、前記フローサイトメーターを用いて、A2/NY-ESO-1157と結合するＣＡＲを発現するＴ細胞の存在を確認した。また、コントロール１は、A2/NY-ESO-1157テトラマーに代えて、A2/HIV-Gag77テトラマーを用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋、ＳＳＣ＋、ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図２２に示す。
　図２２は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図２２において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、Ａ２テトラマーの平均蛍光強度を示す。図２２に示すように、コントロール２では、A2/NY-ESO-1157またはA2/HIV-Gag77に結合するＴ細胞は存在しなかった。また、L1-3M4E5Hまたは3M4E5H-L1を発現するCAR-Tは、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在し、A2/HIV-Gag77テトラマーで染色した場合、ＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分が存在しなかった。さらに、L1-3M4E5Hまたは3M4E5H-L1を発現するCAR-Tについて、ＣＤ８－またはＣＤ８＋のＡ２テトラマー＋画分を比較すると、ＣＤ８－Ａ２テトラマー＋画分およびＣＤ８＋Ａ２テトラマー＋画分のいずれにおいても3M4E5H-L1 CAR-Tは、L1-3M4E5H CAR-Tと比較して、A2/NY-ESO-1157に強く結合しており、抗原特異性が異なった。
　つぎに、前記レトロウイルス感染後の各Ｔ細胞が、前記標的抗原との結合により、活性化し、サイトカインを産生するかを検討した。具体的には、前記６回のレトロウイルス感染後のＴ細胞（CAR-T）について、３×１０５細胞のＴ細胞と、５×１０４細胞のＴ２細胞または前記実施例１（４）で調製したＡＰＣとを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記Ｔ２細胞（HLA-A*02:01発現細胞）およびＡＰＣは、１０μｇ／ｍＬでNY-ESO-1157ペプチドをパルスした細胞（T2 + NY-ESO-1157）またはＡＰＣ（K562/A2/NY-ESO-1）を用いた。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、Ｔ細胞を回収し、パラホルムアルデヒドで固定後、透過処理を行ない、APC標識anti-human IL-2 mAb（clone：MQ1-17H12）、PE標識anti-human TNFα mAb（clone：Mab11）、PC7標識anti-human IFN-γ抗体（clone：B27）、FITC標識anti-human CD4 mAb (clone：OKT4)、PC5標識anti-human CD8a mAb (clone：B9.11)およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。前記染色後のCAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、CAR-T（NGFR陽性画分）におけるＣＤ８陽性細胞またはＣＤ４陽性細胞のＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－２の産生量を測定した。また、前記Ｔ２細胞において、コントロール１は、NY-ESO-1157ペプチドに代えて、HIV-Gag77ペプチドを用いた以外は、同様にして実施した。前記ＡＰＣ (K562/A2/NY-ESO-1)において、コントロール１は、NY-ESO-1を遺伝子導入していないK562/A2を用いた。コントロール２は、hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。そして、コントロール２におけるサイトカインの産生量を基準として、各サンプルのサイトカインの産生増加の割合を算出した。これらの結果を図２３および２４に示す。
　Ｔ２細胞を用いた結果を図２３に示す。図２３は、サイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。図２３において、横軸は、サンプル（ＣＡＲ）の種類を示し、縦軸は、サイトカインの産生増加の割合を示す。図２３に示すように、コントロール２では、サイトカインの産生増加は生じなかった。他方、L1-3M4E5H CAR-Tまたは3M4E5H-L1 CAR-Tは、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、T2 + HIV Gag77で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生量が増加し、A2/NY-ESO-1157に結合して活性化していることが確認できた。また、T2 + NY-ESO-1157で刺激すると、3M4E5H-L1 CAR-Tは、L1-3M4E5H CAR-Tと比較して、多量のサイトカインを産生した。
　ＡＰＣを用いた結果を図２４に示す。図２４は、サイトカイン産生量の変化を示すグラフであり、（Ａ）は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示し、（Ｂ）は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示す。図２４において、横軸は、サンプル（ＣＡＲ）の種類を示し、縦軸は、サイトカインの産生増加の割合を示す。図２４に示すように、コントロール２では、サイトカインの産生増加は生じなかった。他方、L1-3M4E5H CAR-Tまたは3M4E5H-L1 CAR-Tは、K562/A2/NY-ESO-1で刺激すると、K562/A2で刺激した場合と比較して、サイトカインの産生量が増加し、K562/A2/NY-ESO-1に結合して活性化していることが確認できた。また、K562/A2/NY-ESO-1で刺激すると、3M4E5H-L1 CAR-Tは、L1-3M4E5H CAR-Tと比較して、多量のサイトカインを産生した。本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲについて、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域との順序を交換することで、抗原特異性が変化することがわかった。また、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたＣＡＲについて、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の順序を交換することにより、標的抗原に対する特異性を向上できる可能性があることがわかった。
［実施例９］
　本発明の第１のスクリーニング方法により、標的抗原における認識部位が異なるｓｃＦｖをスクリーニングできることを確認した。
　まず、前記実施例１（９）～（１２）および前記実施例２（１）～（３）と同様にして、第２の候補ＣＡＲ－Ｔが発現するＣＡＲおよび第１の候補ＣＡＲ－Ｔが発現するＣＡＲを同定し、新たなＣＡＲ（L52-3M4E5H CARおよびK156-H1 CAR）を取得した。下記アミノ酸配列および塩基配列において、下線で示す配列が、L52またはL156のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲ３Ｌのアミノ酸配列もしくは塩基配列である。
L52-3M4E5H CAR（配列番号２１０）
QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNLGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGSTTRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAGVFGGGTQLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMSWVRQAPGKGLEWVSGIVSSGGSTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGELLPYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
L52-3M4E5H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号２１１）
5'-CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACCTCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAGCACCACTCGGCCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTGGGGTGTTCGGCGGAGGCACCCAGCTGACCGTCCTCGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTGCTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGCACCTACCAGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGGCATCGTGTCCAGCGGCGGCTCTACAGCCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGTGCCGGGGAGCTGCTGCCCTACTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTGTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
K156-H1 CAR（配列番号２１２）
EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYNNWPPKFTFGPGTKVDIRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCLVSGGSISSNYWSWIRQAPGKGLEWIGHVSYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARESYYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
K156-H1 CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号２１３）
5'-GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATAATAACTGGCCTCCGAAATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAGAGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGATACCCTGTCCCTCACCTGTCTTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTAATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGGCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGACATGTCTCCTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCAATCGAAGTGATGTACCCCCCTCCCTACCTGGACAACGAGAAGTCCAACGGCACCATTATCCACGTGAAGGGAAAGCACCTGTGCCCCAGCCCTCTGTTCCCTGGCCCTAGCAAGCCTTTCTGGGTGCTGGTGGTCGTGGGCGGAGTGCTGGCCTGTTATAGCCTGCTCGTGACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTGCGCAGCAAGCGGAGCCGGCTGCTGCACAGCGACTACATGAACATGACCCCCAGACGGCCCGGACCCACCAGAAAGCACTACCAGCCTTACGCCCCTCCCAGAGACTTCGCCGCCTACAGATCTCGAGTGAAGTTCAGCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTATCAGCAGGGCCAGAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAAGAGTACGACGTGCTGGACAAGCGGAGAGGCAGGGACCCTGAGATGGGCGGCAAGCCCAGAAGAAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTATAACGAACTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAGCGGAGAAGAGGCAAGGGCCACGATGGCCTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGACACCTATGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCCAGA-3'
　hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターのｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドに代えて、L52-3M4E5H CARまたはK156-H1 CARをコードするポリヌクレオチドが導入されたＣＡＲ発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１（６）および（８）と同様にして、A2/NY-ESO-1157テトラマーおよびA2/HIV-Gag77テトラマーに対する結合性およびＣＤ６９の発現上昇の割合をフローサイトメトリーにより解析した。ＣＤ６９の発現上昇の割合の解析において、コントロール１は、CAR-Tを添加しなかった以外は同様にして実施した。また、コントロール２は、NY-ESO-1157ペプチドまたはHIV Gag77-85ペプチドをパルスしなかった以外は同様にして実施した。これらの結果を図２５および２６に示す。
　図２５は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図２５において、横軸は、A2/NY-ESO-1157テトラマーまたはA2/HIV-Gag77テトラマーで染色した際の平均蛍光強度を示し、縦軸は、側方散乱光（ＳＳＣ）の平均強度を示す。図２５に示すように、L52-3M4E5H CAR-TおよびK156-H1 CAR-Tは、A2/NY-ESO-1157テトラマーで染色される画分を有し、かつA2/HIV-Gag77テトラマーで染色される画分を有した。すなわち、L52-3M4E5H CARおよびK156-H1 CARは、A2/NY-ESO-1157およびA2/HIV-Gag77と結合した。これは、L52-3M4E5H CARおよびK156-H1 CARのｓｃＦｖが、L1-3M4E5H CARのｓｃＦｖ等と比較して、ペプチドおよびＨＬＡ分子の複合体において、ＨＬＡ分子寄りの部位を認識して結合しているためであると推定される。
　図２６は、ペプチド濃度が１０μｇ／ｍＬの場合におけるＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。図２６において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＣＤ６９の発現上昇の割合を示す。図２６に示すように、コントロール１では、ＣＤ６９の発現上昇は生じなかった。他方、L52-3M4E5H CAR-TおよびK156-H1 CAR-Tは、ペプチドをパルスしていない抗原提示細胞（コントロール２、T2）、およびA2/NY-ESO-1157（T2+NY-ESO-1157）またはA2/HIV-Gag77（T2+HIV Gag57）でパルスした抗原提示細胞で刺激すると、ＣＤ６９の発現が上昇した。コントロール２においてもＣＤ６９の発現が生じていることから、L52-3M4E5H CARおよびK156-H1 CARのｓｃＦｖが、L1-3M4E5H CARのｓｃＦｖ等と比較して、ペプチドおよびＨＬＡ分子の複合体において、ＨＬＡ分子寄りの部位を認識して結合していることが裏付けられた。
　以上のことから、本発明の第１のスクリーニング方法により、標的抗原における認識部位が異なるｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった、すなわち、標的抗原における異なる部位に対する結合性を有するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
［実施例１０］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることを確認した。
（１）clone18 CARの調製
　ヒトＣＤ１９特異的抗体であるＦＭＣ６３の重鎖可変領域および軽鎖可変領域に代えて、ヒトＣＤ１９特異的抗体（clone18（国際公開第2016/033570号参照））の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を用いた以外は、前記実施例３（１）と同様にして、clone18 scFvまたはclone18 scFvをコードする核酸を調製した。各核酸は、ｐＭＸ発現ベクターに導入した。なお、各ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を下線で示す。
clone18LH scFv（配列番号２１４）
QSALTQPRSVSGFPGQSVTISCTGTTSDDVSWYQQHPGKAPQLMLYDVSKRPSGVPHRFSGSRSGRAASLIISGLQTEDEADYFCCSYAGRYNSVLFGGGTKLTVLGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGRIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDQGYHYYDSAEHAFDIWGQGTVVTVSS
clone18LH scFvをコードする核酸（配列番号２１５）
5'-CAATCTGCTCTGACACAGCCTAGAAGCGTGTCCGGCTTTCCTGGCCAGAGCGTGACCATCAGCTGTACCGGCACCACCTCCGATGACGTGTCCTGGTATCAGCAGCATCCTGGCAAAGCCCCTCAGCTGATGCTGTACGACGTGTCCAAAAGACCTAGCGGCGTGCCCCACAGATTCAGCGGATCTAGAAGTGGCAGAGCCGCCAGCCTGATCATCTCTGGACTGCAGACAGAGGACGAGGCCGACTACTTCTGCTGTAGCTACGCCGGCAGATACAACAGCGTGCTGTTTGGCGGCGGAACAAAGCTGACAGTGCTGGGCTCTACAAGCGGCTCTGGCAAGCCTGGATCTGGCGAGGGAAGCACCAAGGGCGAAGTGCAGCTTGTGGAATCTGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGAAGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCGGCATCTCTTGGAACAGCGGCAGAATCGGCTACGCCGACTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTTCCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGATCAGGGCTACCACTACTACGACTCTGCCGAGCACGCCTTCGATATCTGGGGCCAGGGAACAGTGGTCACCGTTAGTTCT-3'
（２）第１のＣＡＲライブラリの調製
　前記実施例１０（１）のclone18LH scFvをコードする核酸の５’側の軽鎖可変領域をコードする核酸を、前記ヒト末梢血Ｂ細胞由来の軽鎖可変領域の核酸を含むライブラリで置換することにより、hK-clone18H scFvライブラリおよびhL-clone18H scFvライブラリを調製した。そして、3M4E5LH scFvをコードする核酸に代えて、hK-clone18H scFvライブラリおよびhL-clone18H scFvライブラリを用いた以外は、前記実施例１（２）と同様にして、hK-clone18H scFvライブラリおよびhL-clone18H scFvライブラリを調製した。つぎに、hK-clone18H scFvライブラリおよびhL-clone18H scFvライブラリを、実施例１（１）のヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸と、ヒトＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸とが、各ライブラリの３’端側にこの順番で配置されるようにｐＭＸ発現ベクターに導入し、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARライブラリの発現ベクターを調製した。なお、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARの軽鎖可変領域の不均一性は、制限酵素マッピングおよび各領域をサンガー法によりシークエンスすることで、約１×１０６種類であることを確認した。
（３）第１のＣＡＲライブラリ発現Ｔ細胞（第１の候補ＣＡＲ－Ｔ）の調製
　前記hH-3M4E4L CARライブラリの発現ベクターに代えて、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARライブラリの発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１（３）と同様にして、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARライブラリが導入されたＴ細胞を精製し、これを第１の候補ＣＡＲ－Ｔとした。
（４）標的抗原の発現細胞の調製
　前記実施例３（４）と同様にして、レトロウイルスを用いて、ヒトＣＤ１９をコードする核酸を、Ｋ５６２細胞に導入し、抗原提示細胞（ＡＰＣ－ＣＤ１９）とした。
（５）第１のスクリーニング方法
　前記実施例１０（３）の第１の候補ＣＡＲ－Ｔと、前記実施例１０（４）で調製したＡＰＣ－ＣＤ１９とを用いた以外は、前記実施例３（５）と同様にして、ヒトＣＤ１９と結合するhK-clone18H CARまたはhL-clone18H CARを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔを富化した。
　つぎに、富化後の第１の候補ＣＡＲ－Ｔを回収し、４０μｇ／ｍＬ　ＰＥ標識ＣＤ１９ダイマーで染色した。前記ＰＥ標識ＣＤ１９ダイマーは、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインのＣ末端にＳＧＳＧリンカーを介してヒスタグを付加した溶解型ＣＤ１９を用いて調製した。具体的には、前記ＰＥ標識ＣＤ１９ダイマーは、前記溶解型ＣＤ１９と、ＰＥ標識anti-His mAb（clone：GG11-8F3.5.1）とを、モル数が２：１となるように混合することにより調製した。前記染色後、前記Ｔ細胞を、さらにPC5標識anti-human CD8a mAb（clone：B9.11）、FITC標識anti-human CD4 mAb（clone：OKT4）、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。そして、ダイマー染色後の第１の候補ＣＡＲ－Ｔについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＣＤ１９と結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔの存在を確認した。また、ポジティブコントロールは、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARライブラリの発現ベクターに代えて、clone18LH CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、ＣＤ１９ダイマーで染色しなかった以外は、同様にして実施した。コントロール２は、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18Hライブラリの発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。同様の試験を、異なる健常者由来の末梢血Ｂ細胞由来の軽鎖可変領域の核酸を含むライブラリを用いて実施した（donor 2）。ＦＳＣ＋ＳＳＣ＋ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図２７に示す。
　図２７は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図２７において、横軸は、ＣＤ８ａの平均蛍光強度を示し、縦軸は、ＣＤ１９ダイマーの平均蛍光強度を示す。図２７に示すように、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARライブラリの発現ベクターを導入しなかったＴ細胞（コントロール２）では、ＣＤ１９ダイマーに結合するＴ細胞は存在しなかった。また、clone18LH CARを発現するＣＡＲ－Ｔ（clone18LH、ポジティブコントロール）は、ＣＤ１９ダイマーで染色した場合、ＣＤ１９ダイマー＋画分（各ドットプロットの右上画分）が存在し、ＣＤ１９ダイマーで染色しなかった場合、ＣＤ１９ダイマー＋画分が存在しないことから、ＣＤ１９ダイマーに結合することが確認できた。そして、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔは、hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARライブラリの発現ベクターを導入したいずれの集団においても、ＣＤ１９ダイマーで染色した場合、ＣＤ１９ダイマー＋画分が存在し、ＣＤ１９ダイマーで染色しなかった場合、ＣＤ１９ダイマー＋画分が存在しなかった。このことから、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔに、ＣＤ１９ダイマーに結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔが存在することがわかった。これらの結果から、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、異なる抗体を用いても、標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
　つぎに、ＣＤ１９に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔを選抜し、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔが発現するＣＡＲを同定した。具体的には、前記実施例１０（５）と同様にして、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔを染色した。つぎに、前記第１の候補ＣＡＲ－Ｔからフローサイトメーター（FACSAria（商標）、Becton Dickinson社製）を用いた細胞選別により、ＮＧＦＲ＋ＣＤ８＋ＣＤ１９ダイマー＋画分、またはＮＧＦＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ１９ダイマー＋画分を、ＣＤ１９に結合するＣＡＲを発現する第１の候補ＣＡＲ－Ｔとして分取した。総ＲＮＡ抽出試薬（TRIzol（登録商標）、Ambion社製）を用いて、得られた第１の候補ＣＡＲ－Ｔから総ＲＮＡを抽出した。逆転写酵素（Superscript（登録商標）III、Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、前記総ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。
得られたｃＤＮＡと、前記フォワードプライマー１（配列番号１９９）および前記リバースプライマー１（配列番号２００）の混合物とを用いて、ＰＣＲを実施し、ｓｃＦｖをコードする核酸を増幅した。クローニングキット（Gibson Assembly Master Mix、New England Biolab社製）を用い、得られたｓｃＦｖをコードする核酸を、ｓｃＦｖをコードする核酸がヒトＣＤ２８の部分領域の５’端に連結されるように、ｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターに導入した（ｐＭＸ／ｓｃＦｖ発現ベクター）。ｐＭＸ／ＣＡＲ発現ベクターは、ｐＭＸ発現ベクターにヒトＣＤ２８の部分領域、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸（配列番号１６９）と、ヒトＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸（配列番号１７１）とを、５’端側からこの順番に配置されるように連結し、導入することにより調製した。そして、得られたｐＭＸ／ｓｃＦｖ発現ベクターについて、サンガー法によりシークエンスすることで、ＣＡＲをコードする塩基配列（L4-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号２９８）、L7-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号２９９）、L9-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３００）、L13-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０１）、L14-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０２）、L16-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０３）、L17-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０４）、L22-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０５）、K4-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０６）、K5-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０７）、K6-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０８）、K9-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３０９）、K10-18H CARをコードするポリヌクレオチド（配列番号３１０））を同定した。また、前記塩基配列に基づき、ｓｃＦｖのアミノ酸配列（L4-18H（配列番号２７２）、L7-18H（配列番号２７３）、L9-18H（配列番号２７４）、L13-18H（配列番号２７５）、L14-18H（配列番号２７６）、L16-18H（配列番号２７７）、L17-18H（配列番号２７８）、L22-18H（配列番号２７９）、K4-18H（配列番号２８０）、K5-18H（配列番号２８１）、K6-18H（配列番号２８２）、K9-18H（配列番号２８３）、K10-18H（配列番号２８４））を同定した。そして、ｓｃＦｖのアミノ酸配列に基づき、前記表３Ｂに示す新たな軽鎖可変領域（LA）～（LM）のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を同定した。また、前記ｐＭＸ／ｓｃＦｖ発現ベクターから、各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター（ｐＭＸ／L4-18H発現ベクター、ｐＭＸ／L7-18H発現ベクター、ｐＭＸ／L9-18H発現ベクター、ｐＭＸ／L13-18H発現ベクター、ｐＭＸ／L14-18H発現ベクター、ｐＭＸ／L16-18H発現ベクター、ｐＭＸ／L17-18H発現ベクター、ｐＭＸ／L22-18H発現ベクター、ｐＭＸ／K4-18H発現ベクター、ｐＭＸ／K5-18H発現ベクター、ｐＭＸ／K6-18H発現ベクター、ｐＭＸ／K9-18H発現ベクター、ｐＭＸ／K10-18H発現ベクター）を調製した。
（６）第１の候補ｓｃＦｖの解析
　hK-clone18H CARライブラリおよびhL-clone18H CARライブラリの発現ベクターに代えて、各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを用いた以外は、前記実施例１０（３）と同様にして、GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を調製した。つぎに、前記GaLV-pseudotypedレトロウイルスを含む培養上清を添加することにより、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞に各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを導入し、ｓｃＦｖとしてL4-18H、L7-18H、L9-18H、L13-18H、L14-18H、L16-18H、L17-18H、L22-18H、K4-18H、K5-18H、K6-18H、K9-18H、またはK10-18Hを含む各ＣＡＲ（L4-18H CAR、L7-18H CAR、L9-18H CAR、L13-18H CAR、L14-18H CAR、L16-18H CAR、L17-18H CAR、L22-18H CAR、K4-18H CAR、K5-18H CAR、K6-18H CAR、K9-18H CAR、またはK10-18H CAR）を発現させた。前記ＣＡＲ発現後のＪｕｒｋａｔ７６細胞を、前記ＰＥ標識anti-human NGFR mAbと反応させた。前記反応後、前記抗ＰＥマイクロビーズを用いて、各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞（L4-18H CAR-T、L7-18H CAR-T、L9-18H CAR-T、L13-18H CAR-T、L14-18H CAR-T、L16-18H CAR-T、L17-18H CAR-T、L22-18H CAR-T、K4-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、K6-18H CAR-T、K9-18H CAR-T、またはK10-18H CAR-T）を精製した。各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞について、前記実施例１０（５）と同様にして染色した。前記染色後の各ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ７６細胞について、フローサイトメトリーにより解析した。ポジティブコントロールは、各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターに代えて、タグ付加clone18LH CARまたはclone18HL CARをコードする核酸を含む発現ベクターを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、ＣＤ１９ダイマーで染色しなかった以外は同様にして実施した。コントロール２は、各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。ＦＳＣ＋ＳＳＣ＋ＮＧＦＲ＋細胞にゲートをかけた結果を図２８および２９に示す。
　図２８および２９は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図２８および２９において、横軸は、ＣＤ１９ダイマーで染色した際の平均蛍光強度を示し、縦軸は、側方散乱光（ＳＳＣ）の平均強度を示す。図２８および２９に示すように、各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを導入しなかったＪｕｒｋａｔ７６細胞（コントロール２）では、ＣＤ１９に結合する細胞は存在しなかった。また、clone18LH CAR-Tおよびclone18HL CAR-T（clone18LH CARまたはclone18HL CAR、ポジティブコントロール）は、ＣＤ１９ダイマーで染色した場合、ほぼ全ての細胞がＣＤ１９ダイマー＋であり、ＣＤ１９ダイマーで染色しない場合、ＣＤ１９ダイマー－であることから、ＣＤ１９に結合していることが確認できた。そして、L4-18H CAR-T、L7-18H CAR-T、L9-18H CAR-T、L13-18H CAR-T、L14-18H CAR-T、L16-18H CAR-T、L17-18H CAR-T、L22-18H CAR-T、K4-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、K6-18H CAR-T、K9-18H CAR-T、またはK10-18H CAR-Tは、ＣＤ１９ダイマーで染色した場合、ＣＤ１９ダイマー＋であり、ＣＤ１９ダイマーで染色しない場合、ＣＤ１９ダイマー－であった。このことから、L4-18H CAR-T、L7-18H CAR-T、L9-18H CAR-T、L13-18H CAR-T、L14-18H CAR-T、L16-18H CAR-T、L17-18H CAR-T、L22-18H CAR-T、K4-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、K6-18H CAR-T、K9-18H CAR-T、またはK10-18H CAR-Tは、ＣＤ１９ダイマーに結合することがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（７）第１の候補ｓｃＦｖの機能
　つぎに、前記実施例１０（６）で得られた各CAR-Tが、前記標的抗原との結合により、活性化するかを検討した。具体的には、２×１０５細胞の各CAR-Tと、５×１０４細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ－ＣＤ１９またはＲａｊｉ細胞）とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記抗原提示細胞（ＡＰＣ－ＣＤ１９）は、前記実施例１０（４）と同様にして調製した。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記共培養後、各CAR-Tを回収し、FITC標識anti-human CD69 mAb（clone：FN50）およびV450標識anti-human NGFR mAbで染色した。前記染色後の各CAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＮＧＦＲ＋細胞について、ＣＤ６９の平均蛍光強度を測定した。ポジティブコントロールは、前記実施例１０（６）で得られたclone18LH CAR-Tおよびclone18HL CAR-Tを用いた以外は、同様に実施した。また、コントロール１は、ＣＤ１９をコードする核酸を導入していないＫ５６２細胞を用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。そして、共培養前のＣＤ６９の平均蛍光強度を基準として、各サンプルのＣＤ６９の発現上昇の割合を算出した。これらの結果を図３０に示す。
　図３０は、ＣＤ６９の発現量の変化を示すグラフである。図３０において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＣＤ６９の発現上昇の割合を示す。図３０に示すように、コントロール２では、ＣＤ６９の発現上昇はほとんど生じなかった。他方、clon19LH CAR-Tおよびclon19HL CAR-T（ポジティブコントロール）は、ＡＰＣ－ＣＤ１９（K562/CD19）またはＲａｊｉ細胞（Raji）で刺激すると、コントロール１（K562）で刺激した場合と比較して、ＣＤ６９の発現が上昇し、ＣＤ１９に結合して活性化していることが確認できた。また、L4-18H CAR-T、L7-18H CAR-T、L9-18H CAR-T、L13-18H CAR-T、L14-18H CAR-T、L16-18H CAR-T、L17-18H CAR-T、L22-18H CAR-T、K4-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、K6-18H CAR-T、K9-18H CAR-T、またはK10-18H CAR-Tは、ＡＰＣ－ＣＤ１９（K562/CD19）またはＲａｊｉ細胞（Raji）で刺激すると、コントロール１（K562）で刺激した場合と比較して、ＣＤ６９の発現が上昇し、ＣＤ１９に結合して活性化した。また、各CAR-TのＣＤ６９の発現上昇率は、大きく異なることから、ＣＤ１９に対する特異性が異なるｓｃＦｖがスクリーニングできていることがわかった。
（８）第１の候補ｓｃＦｖの親和性
　つぎに、前記実施例１０（６）で得られたL4-18H CAR-T、L7-18H CAR-T、L16-18H CAR-T、L17-18H CAR-T、K4-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、K6-18H CAR-T、およびK9-18H CAR-Tと、clone18LH CAR-Tが、前記標的抗原との親和性の違いを検討した。各CAR-Tについて、所定濃度（１．２５、２．５、５、１０、２０、または４０μｇ／ｍＬ）のＰＥ標識ＣＤ１９ダイマーで染色後、V450標識 anti-human NGFR mAbで染色した以外は、前記実施例１０（６）と同様にして、フローサイトメトリーにより解析した。そして、ＣＤ１９ダイマーの各濃度における、ＣＤ１９ダイマー陽性細胞の割合を算出後、４０μｇ／ｍＬのＣＤ１９ダイマーで染色した際のＣＤ１９ダイマー陽性細胞の割合を基準として、各ＣＤ１９ダイマーで染色した際のＣＤ１９ダイマー陽性細胞の相対割合を算出した。この結果を、図３１に示す。
　図３１は、ＣＤ１９ダイマー陽性細胞の相対割合を示すグラフである。図３１において、横軸は、ＣＤ１９ダイマーの濃度を示し、縦軸は、ＣＤ１９ダイマー陽性細胞の相対割合を示す。図３１に示すように、各CAR-Tは、ＣＤ１９ダイマーの濃度依存的にＣＤ６９陽性細胞の割合が増加した。また、各CAR-Tは、様々な染色強度を示すことから、これらのCAR-TにおけるｓｃＦｖのＣＤ１９ダイマーに対する親和性は異なることがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合する異なる親和性を有するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（９）第１の候補ｓｃＦｖの応答性
　つぎに、前記（６）で得られたL4-18H CAR-T、L7-18H CAR-T、L16-18H CAR-T、L17-18H CAR-T、K4-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、K6-18H CAR-T、およびK9-18H CAR-Tと、clone18LH CAR-Tが、前記標的抗原を発現する細胞に対する応答性の違いを検討した。具体的には、２×１０５細胞の各CAR-Tと、５×１０４細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ－ＣＤ１９）とＫ５６２細胞との混合細胞とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記混合細胞におけるＡＰＣ－ＣＤ１９（Ａ）とＫ５６２（Ｋ）との比率（Ａ：Ｋ）は、所定比率（０：１００、６．２５：９３．７５、１２．５：８７．５、５０：５０、１００：０）とした。前記共培養後、各CAR-Tを回収し、FITC標識anti-human CD69 mAb（clone：FN50）およびV450標識anti-human NGFR mAbで染色した。前記染色後の各CAR-Tについて、前記フローサイトメーターを用いて、ＮＧＦＲ＋細胞について、ＣＤ６９陽性細胞の割合を測定した。比率（Ａ：Ｋ）＝１００：０におけるＣＤ６９陽性細胞の割合を基準として、各比率（Ａ：Ｋ）で培養した際のＣＤ６９陽性細胞の相対割合（％　Maximal responses）を算出した。また、これらの結果を図３２に示す。
　図３２は、ＣＤ６９陽性細胞の相対割合を示すグラフである。図３２において、横軸は、比率（Ａ：Ｋ）を示し、縦軸は、ＣＤ６９陽性細胞の相対割合（％　Maximal responses）を示す。図３２に示すように、各CAR-Tは、ＡＰＣ－ＣＤ１９（Ａ）の比率に比例してＣＤ６９陽性細胞の割合が増加した。また、各CAR-Tは、ＡＰＣ－ＣＤ１９に対して様々に反応性を示すことから、これらのCAR-TにおけるｓｃＦｖの標的細胞に対する親和性は異なることがわかった。すなわち、本発明の第１のスクリーニング方法によれば、標的抗原に結合する異なる親和性を有するｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
（１０）第１の候補ｓｃＦｖの機能
　つぎに、前記（６）で得られたL4-18H CAR-T、L7-18H CAR-T、L16-18H CAR-T、L17-18H CAR-T、K4-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、K6-18H CAR-T、およびK9-18H CAR-Tと、clone18LH CAR-Tが、前記標的抗原との結合により、サイトカイン産生するかを検討した。具体的には、３×１０５細胞の各CAR-Tと、５×１０４細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ－ＣＤ１９またはＲａｊｉ細胞）とを各ウェル（９６ウェルプレート）に播種後、５時間共培養した。前記抗原提示細胞（ＡＰＣ－ＣＤ１９）は、前記実施例１０（４）と同様にして調製した。また、前記共培養の培養液は、１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地とした。前記培養後、５μｍｏｌ／ＬとなるようにＢＦＡを添加し、さらに５時間培養した。そして、培養後の細胞を、１％PFAで固定後、細胞膜の透過処理を行った。さらに、APC標識anti-human IL-2 mAb（clone：MQ1-17H12）、PE標識anti-human TNFα mAb（clone：Mab11）、PC7標識anti-human IFN-γ mAb（clone：B27）、FITC標識anti-human CD4 mAb (clone：OKT4)、PC5標識anti-human CD8a mAb (clone：B9.11)、およびV450標識anti-human NGFR mAb（clone：C40-1457）で染色した。前記染色後の細胞について、前記フローサイトメーターで測定した。そして、サイトカイン発現の割合を算出した。ポジティブコントロールは、前記実施例１０（６）で得られたclone18LH CAR-Tを用いた以外は、同様に実施した。コントロール１は、ＣＤ１９をコードする核酸を導入していないＫ５６２細胞を用いた以外は、同様にして実施した。コントロール２は、各CARをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを導入しなかった以外は、同様にして実施した。これらの結果を図３３に示す。
　図３３は、サイトカイン産生細胞の割合を示すグラフである。図３３において、横軸は、ＣＡＲ－Ｔの種類を示し、縦軸は、各サイトカインの産生細胞の割合を示す。また、図３３において、上段は、ＣＤ８陽性ＣＡＲ－Ｔの結果を示し、下段は、ＣＤ４陽性ＣＡＲ－Ｔの結果を示す。図３３に示すように、標的抗原であるＣＤ１９を発現するＡＰＣ－ＣＤ１９またはＲａｊｉ細胞が存在する場合、標的抗原を発現しないコントロール１（K562）またはコントロール２と比較して、各ＣＡＲ－ＴのＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γおよびＩＬ－２の産生細胞の割合の上昇が生じ、各ＣＡＲ－Ｔが活性化していることがわかった。これらの結果から、本発明のスクリーニング方法によれば、ＣＤ１９に結合し、かつＣＡＲ－Ｔにおいてエフェクター機能を誘導可能なｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
［実施例１１］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖを含むＣＡＲが、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍効果を発揮することを確認した。
　前記実施例１０と同様にして、L17-18H CAR-T、K5-18H CAR-Tと、clone18LH CAR-Tとを調製した。
　ＳＬＲを発現するＲａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ／ＳＬＲ細胞）は、Ｋ５６２細胞に代えて、Ｒａｊｉ細胞を用い、ヒトＣＤ１９をコードするポリヌクレオチドに代えて、ＳＬＲをコードするポリヌクレオチドを用いた以外は、前記実施例１（４）と同様にして、調製した。なお、ＳＬＲは細胞内タンパク質であるため、ＳＬＲをコードするポリヌクレオチドには、切断型のＮＧＦＲ遺伝子（ΔNGFR）をコードする核酸を、フーリン（furin）切断部位（RAKR：配列番号１７２）、スペーサー配列（SGSG：配列番号１７３）およびコドン最適化Ｐ２Ａ配列（ATNFSLLKQAGDVEENPGP：配列番号１７４）をコードするポリヌクレオチドを介して、連結した。
ＳＬＲタンパク質（SLR/furin-sgsg-p2a/dNGFR、配列番号３１１）
MEEENIVNGDRPRDLVFPGTAGLQLYQSLYKYSYITDGIIDAHTNEVISYAQIFETSCRLAVSLEKYGLDHNNVVAICSENNIHFFGPLIAALYQGIPMATSNDMYTEREMIGHLNISKPCLMFCSKKSLPFILKVQKHLDFLKKVIVIDSMYDINGVECVFSFVSRYTDHAFDPVKFNPKEFDPLERTALIMTSSGTTGLPKGVVISHRSITIRFVHSSDPIYGTRIAPDTSILAIAPFHHAFGLFTALAYFPVGLKIVMVKKFEGEFFLKTIQNYKIASIVVPPPIMVYLAKSPLVDEYNLSSLTEIACGGSPLGRDIADKVAKRLKVHGILQGYGLTETCSALILSPNDRELKKGAIGTPMPYVQVKVIDINTGKALGPREKGEICFKSQMLMKGYHNNPQATRDALDKDGWLHTGDLGYYDEDRFIYVVDRLKELIKYKGYQVAPAELENLLLQHPNISDAGVIGIPDEFAGQLPSACVVLEPGKTMTEKEVQDYIAELVTTTKHLRGGVVFIDSIPKGPTGKLMRNELRAIFAREQAKSKLRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMDGPRLLLLLLLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCLPCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDLIASTVAGVVTTVMGSSQPVVTRGTTDNLIPVYCSILAAVVVGLVAYIAFKRWNS
ＳＬＲをコードするポリヌクレオチド（配列番号３１２）
5'-ATGGAAGAAGAGAACATCGTGAATGGCGATCGCCCTCGGGATCTGGTGTTCCCTGGCACAGCCGGCCTGCAGCTGTATCAGTCCCTGTATAAATACTCTTACATCACCGACGGAATCATCGACGCCCACACCAACGAGGTGATCTCCTATGCCCAGATTTTCGAAACAAGTTGCCGCCTGGCCGTGAGCCTGGAGAAGTATGGCCTGGATCACAACAACGTGGTGGCCATTTGCAGCGAGAACAACATCCACTTCTTCGGCCCTCTGATCGCTGCCCTATACCAGGGGATTCCAATGGCCACATCCAACGATATGTACACCGAGAGGGAGATGATCGGCCACCTGAACATCTCCAAGCCATGTCTGATGTTCTGTTCCAAGAAGTCCCTGCCATTCATCCTGAAGGTGCAGAAGCACCTGGACTTTCTCAAGAAGGTGATCGTGATCGACAGCATGTACGACATCAACGGCGTGGAGTGCGTGTTCAGTTTCGTGTCCCGGTACACCGATCATGCGTTCGATCCAGTGAAGTTCAACCCTAAAGAGTTTGATCCCCTGGAGAGAACCGCGCTGATCATGACATCCTCTGGAACAACCGGCCTGCCTAAGGGCGTGGTGATCAGCCACAGGAGCATCACCATCAGATTCGTCCACAGCAGCGATCCCATCTACGGCACCCGCATCGCCCCAGATACATCCATCCTGGCCATCGCCCCTTTCCACCACGCCTTCGGACTGTTTACCGCCCTGGCTTACTTTCCAGTGGGCCTGAAGATCGTGATGGTGAAAAAGTTTGAGGGCGAGTTCTTCCTGAAGACCATCCAGAACTACAAGATCGCTTCTATCGTGGTGCCTCCTCCAATCATGGTGTATCTGGCCAAGAGCCCTCTGGTGGATGAGTACAATCTGTCCAGCCTGACAGAGATCGCCTGTGGCGGCTCCCCTCTGGGCAGAGACATCGCCGACAAGGTGGCCAAGAGACTGAAGGTCCACGGCATCCTGCAGGGCTATGGCCTGACCGAGACCTGTAGCGCCCTGATCCTGAGCCCCAACGATAGAGAGCTGAAGAAGGGCGCCATCGGCACCCCTATGCCCTATGTCCAGGTGAAGGTGATTGACATCAACACCGGCAAAGCCCTGGGACCAAGAGAGAAGGGCGAGATTTGCTTCAAGAGCCAGATGCTGATGAAGGGCTACCACAACAACCCACAGGCCACCAGGGATGCCCTGGACAAGGACGGGTGGCTGCACACCGGCGATCTGGGCTACTACGACGAGGACAGATTCATCTATGTGGTGGATCGGCTGAAAGAACTCATCAAGTACAAGGGCTACCAGGTGGCCCCTGCCGAGCTGGAGAACTTGCTTCTGCAGCACCCTAACATCTCTGATGCCGGCGTCATCGGCATCCCAGACGAGTTTGCCGGCCAGCTGCCTTCCGCCTGTGTCGTGCTGGAGCCTGGCAAGACCATGACCGAGAAGGAGGTGCAGGATTATATCGCCGAGCTGGTGACCACCACCAAGCACCTGCGGGGCGGCGTGGTGTTCATCGACAGCATTCCGAAAGGCCCAACAGGCAAGCTGATGAGAAACGAGCTGAGGGCCATCTTTGCCCGCGAGCAGGCCAAGTCCAAGCTGAGGGCCAAGCGGTCCGGATCCGGAGCCACCAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCCGGCCCCATGGACGGGCCGCGCCTGCTGCTGTTGCTGCTTCTGGGGGTGTCCCTTGGAGGTGCCAAGGAGGCATGCCCCACAGGCCTGTACACACACAGCGGTGAGTGCTGCAAAGCCTGCAACCTGGGCGAGGGTGTGGCCCAGCCTTGTGGAGCCAACCAGACCGTGTGTGAGCCCTGCCTGGACAGCGTGACGTTCTCCGACGTGGTGAGCGCGACCGAGCCGTGCAAGCCGTGCACCGAGTGCGTGGGGCTCCAGAGCATGTCGGCGCCATGCGTGGAGGCCGACGACGCCGTGTGCCGCTGCGCCTACGGCTACTACCAGGATGAGACGACTGGGCGCTGCGAGGCGTGCCGCGTGTGCGAGGCGGGCTCGGGCCTCGTGTTCTCCTGCCAGGACAAGCAGAACACCGTGTGCGAGGAGTGCCCCGACGGCACGTATTCCGACGAGGCCAACCACGTGGACCCGTGCCTGCCCTGCACCGTGTGCGAGGACACCGAGCGCCAGCTCCGCGAGTGCACACGCTGGGCCGACGCCGAGTGCGAGGAGATCCCTGGCCGTTGGATTACACGGTCCACACCCCCAGAGGGCTCGGACAGCACAGCCCCCAGCACCCAGGAGCCTGAGGCACCTCCAGAACAAGACCTCATAGCCAGCACGGTGGCAGGTGTGGTGACCACAGTGATGGGCAGCTCCCAGCCCGTGGTGACCCGAGGCACCACCGACAACCTCATCCCTGTCTATTGCTCCATCCTGGCTGCTGTGGTTGTGGGTCTTGTGGCCTACATAGCCTTCAAGAGGTGGAACAGCTGA-3'
　５週齢のＮＯＧマウス（NOD/Shi-scid,IL-2RγKO・Jicマウス、In-Vivo Science社から購入）に１．５Ｇｙのγ線を照射した。つぎに、図３４（Ａ）に示すように、前記ＮＯＧマウスに、５×１０５個のＲａｊｉ／ＳＬＲ細胞を静脈投与し、移植した。前記移植後を０日目として、５日目に、２×１０６個の各CAR-Tを静脈投与した。そして、前記移植後６、９、１３、および１７日目における腫瘍の大きさをイメージアナライザー（AEQUORIA-2D/8600 bioluminescence imaging assays、Hamamatsu Photonics社製）により測定した。コントロールは、前記CARを導入していないＴ細胞を投与した以外は、同様にして測定した。なお、各群３匹で実施した。これらの結果を図３４に示す。
　図３４は、生体における抗腫瘍活性に関する図である。図３４において、（Ａ）は、プロトコルを示し、（Ｂ）は、イメージアナライザーで測定された写真であり、（Ｃ）は、腫瘍の大きさを示すグラフである。図３４（Ｂ）において、白線で囲った領域は、腫瘍が存在する領域である。図３４（Ｂ）および（Ｃ）に示すように、前記CAR-T投与群は、コントロールと比較して、腫瘍の大きさが縮小した。また、前記L17-18H CAR-TまたはK5-18H CAR-T投与群は、前記clone18LH CAR-T投与群と比較して、腫瘍が有意に縮小した。これらの結果から、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖを含むＣＡＲが、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍効果を発揮することがわかった。また、本発明のスクリーニング方法によれば、鋳型とするｓｃＦｖと比較して、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、優れたエフェクター機能を誘導可能なｓｃＦｖをスクリーニングできることがわかった。
［実施例１２］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法の第１の選抜工程および第２の選抜工程において、間接的な評価方法に基づく選抜、すなわち、標的抗原とＣＡＲとの結合により生じる候補免疫細胞の活性化指標の評価に基づく選抜により、ＣＡ－Ｔ細胞を機能的に活性化しうるｓｃＦｖを含むＣＡＲをスクリーニング出来ることを確認した。
　L1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、L124-3M4E5、H73-3M4E5、H1-3M4E5、または3M4E5LH CAR-Tについて、実施例２（５）および（７）の結果から、テトラマー陽性細胞の割合が、陽性細胞の最大割合の半分となるテトラマー濃度（ＥＣ５０）を構造的親和性の指標値として算出した。前記構造的親和性は、標的抗原に対するＣＡＲ（ｓｃＦｖ）の特異性ということもできる。また、L1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、L124-3M4E5、H73-3M4E5、H1-3M4E5、または3M4E5LH CAR-Tについて、実施例２（６）および（８）の結果から、ＣＤ６９の発現上昇率が、ＣＤ６９の最大発現上昇率の半分となるテトラマー濃度（ＥＣ）を機能的親和性の指標値として算出した。前記機能的親和性は、標的抗原に結合した際にＣＡＲがＴ細胞を活性化させる能力を意味する。そして、L1-3M4E5、L66-3M4E5、L73-3M4E5、L88-3M4E5、L102-3M4E5、L124-3M4E5、H73-3M4E5、H1-3M4E5、または3M4E5LH CAR-Tについて、構造的親和性の指標値と、機能的親和性の指標値との相関性を検討した。この結果を図３５に示す。
　図３５は、構造的親和性の指標値と、機能的親和性の指標値との関係性を示すグラフである。図３５において、横軸は、構造的親和性の指標値（Structural avidity）を示し、縦軸は、機能的親和性の指標値（Functional avidity）を示す。図３５に示すように、構造的親和性の指標値および機能的親和性の指標値が高い領域では、正の相関性が見られるものの、構造的親和性の指標値が低くなると、構造的親和性の指標値と機能的親和性の指標値との相関性は見られなくなった。これらの結果から、標的抗原とＣＡＲとの結合により生じる候補免疫細胞の活性化指標の評価に基づき、候補ｓｃＦｖを選抜することで、標的抗原とＣＡＲとの結合により、候補ｓｃＦｖを選抜する場合と比較して、ＣＡＲ－Ｔ細胞を機能的に活性化しうるｓｃＦｖを含むＣＡＲをスクリーニング出来ることがわかった。
［実施例１３］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖを含むＣＡＲが、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで細胞傷害活性を発揮することを確認した。
　前記実施例１０と同様にして、L17-18H CAR-T、K5-18H CAR-Tと、clone18LH CAR-Tとを調製した。
　つぎに、５．０×１０３個の標的細胞であるＡＰＣ－ＣＤ１９（K562/CD19）またはＲａｊｉ細胞（Raji）について、クロム５１（５１Ｃｒ）存在下で、１．５時間培養することにより、クロム５１でラベルした。つぎに、前記L17-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、またはclone18LH CAR-T（Ｅ）と、前記クロム５１でラベルしたターゲット細胞（Ｔ）について、Ｅ：Ｔが、２０：１、１０：１、５：１または２．５：１となるように、前記標的細胞を培養しているウェルに、各ＣＡＲ－Ｔ細胞を添加した。そして、５～６時間培養後、上清を回収し、１分間あたりの放射線の計数率（ＣＰＭ：count per minute）を、AccuFLEXg7010（HITACHI社製）を用いて測定した。また、コントロール１は、ＣＡＲ－Ｔ細胞に代えて、ＮＧＦＲの発現ベクターを導入したＴ細胞を用いた以外は同様にして、コントロール２は、前記標的細胞として、Ｋ５６２細胞を用いた以外は同様にして測定した。そして、下記式（１）に基づき、細胞傷害性（特異的融解の割合）を測定した。これらの結果を、図３６に示す。
 
　Ｋ＝（ＬＥ－ＬＳ）／（ＬＭａｘ－ＬＳ）×１００（％）　　・・・（１）
　　　Ｋ：細胞傷害性
　　　ＬＥ：ＣＰＭの測定値
　　　ＬＳ：ターゲット細胞のみの場合のＣＰＭの測定値
　　　ＬＭａｘ：ターゲット細胞のみのウェルに0.2%Triton-X含有PBSを添加した場合のＣＰＭの測定値
　図３６は、細胞傷害性を示すグラフである。図３６において、横軸はＥ／Ｔ比を示し、縦軸は、細胞傷害性を示す。図３６に示すように、標的抗原であるＣＤ１９を発現しないＫ５６２を標的細胞として用いた場合（コントロール２）、特異的な細胞傷害は生じず、各群における細胞傷害性は同等であった。また、ＣＤ１９特異的なＣＡＲを発現してないＴ細胞を用いた場合（コントロール１）、いずれの標的細胞に対しても特異的な細胞傷害は生じなかった。他方、標的抗原であるＣＤ１９を発現するＫ５６２およびＲａｊｉ細胞をターゲット細胞として用いた場合、L17-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、またはclone18LH CAR-T添加群では、エフェクターの量比依存的に細胞傷害性が増大した。また、L17-18H CAR-T、K5-18H CAR-T、およびclone18LH CAR-T添加群において、細胞傷害性に大きな違いはなかった。これらの結果から、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖを含むＣＡＲが、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで細胞傷害活性を発揮し、かつL17-18H CAR-TおよびK5-18H CAR-Tは、clone18LH CAR-Tと同等の細胞傷害活性を示すことがわかった。
［実施例１４］
　本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖを含むＣＡＲが、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍効果を発揮することを確認した。
　前記実施例１０と同様にして、L17-18H CAR-T、K5-18H CAR-Tと、clone18LH CAR-Tとを調製した。つぎに、実施例１１と同様にして、ＳＬＲを発現するＲａｊｉ細胞を調製した。
　５週齢のＮＯＧマウス（NOD/Shi-scid,IL-2RγKO・Jicマウス、In-Vivo Science社から購入）に１．５Ｇｙのγ線を照射した。つぎに、図３７（Ａ）および図３８（Ａ）に示すように、前記ＮＯＧマウスに、５×１０５個のＲａｊｉ／ＳＬＲ細胞を静脈投与し、移植した。前記移植後を０日目として、５日目または７日目に、２×１０６個の各CAR-Tを静脈投与した。前記移植後、経時的に腫瘍の大きさを前記イメージアナライザーにより測定し、かつマウスの生存率を測定した。なお、各群５匹で実施した。コントロールは、ＣＡＲ－Ｔ細胞に代えて、ＮＧＦＲの発現ベクターを導入したＴ細胞を用いた以外は同様にして実施した。これらの結果を図３７および図３８に示す。
　図３７および図３８は、生体における全生存率に関する図である。図３７および図３８において、（Ａ）は、プロトコルを示し、（Ｂ）は、全生存率を示すKaplan-Meier曲線である。図３７（Ｂ）に示すように、腫瘍が小さい時期、すなわち、初期がんの状態においては、L17-18H CAR-TまたはK5-18H CAR-Tの投与群と、clone18LH CAR-Tの投与群との間で、全生存率に大きな違いはなく、抗腫瘍効果はほぼ同等であった。また、図には示していないが、イメージアナライザーによる画像分析においても同様の結果が得られた。他方、図３８（Ｂ）に示すように、腫瘍が十分に浸潤している時期、すなわち、腫瘍が進行している状態においては、clone18LH CAR-Tの投与群と比較して、L17-18H CAR-TまたはK5-18H CAR-Tの投与群では、全生存率が大きく向上し、L17-18H CAR-T投与群では、１００％の生存率であった。また、図には示していないが、イメージアナライザーによる画像分析においても同様の結果が得られた。
　これらの結果から、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖを含むＣＡＲが、ｉｎ　ｖｉｖｏで抗腫瘍効果を発揮することがわかった。また、本発明のＣＡＲライブラリを用いた本発明のスクリーニング方法により得られたｓｃＦｖを含むＣＡＲは、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、進行している腫瘍モデルにおいても十分な治療効果を奏することがわかった。
［実施例１５］
　本発明のスクリーニング方法により、ｉｎ　ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果に優れるｓｃＦｖを取得できるメカニズムを検討した。
（１）細胞増殖能の比較
　前記実施例１０と同様にして、L17-18H CAR-Tと、clone18LH CAR-Tとを調製した。つぎに、２０Ｇｙでγ線照射したＡＰＣ－ＣＤ１９（K562/CD19）またはＲａｊｉ細胞（Raji）（Ｔ）と、L17-18H CAR-Tまたはclone18LH CAR-T（Ｅ）とについて、Ｅ：Ｔが、１：１または１０：１となるように、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞を培養しているウェルに、標的細胞を添加した。前記標的細胞添加時を基準として、５日間培養した。前記培養では、１０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２および１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を培地に添加した。さらに、培養５日目において、培養開始時と同じ条件で、各ＣＡＲ－Ｔ細胞を再刺激した。そして、培養開始時から所定時（０、３、５、７または１０日）における細胞数をカウントし、培養開始時の細胞数を１とした際の細胞数比を増殖比として算出した。これらの結果を図３９に示す。
　図３９は、細胞の増殖比を示すグラフである。図３９において、横軸は、培養開始時からの時間を示し、縦軸は、増殖比を示す。図３９に示すように、いずれのＥ：Ｔ比においても、本発明のスクリーニング方法で得られるＣＡＲは、Ｔ細胞の増殖誘導能が高かった。また、Ｅ：Ｔ＝１：１においても、L17-18H CAR-Tは、clone18LH CAR-Tと比較して、優れた増殖比を示すことから、L17-18H CAR-Tは、標的抗原が多い環境、例えば、腫瘍が進行し、腫瘍細胞が多い状況においても増殖性に優れていることがわかった。
（２）サイトカイン産生能の比較
　前記実施例１５（１）の培養１０日目のL17-18H CAR-Tおよびclone18LH CAR-Tのサイトカイン産生能について検討した。具体的には、３．０×１０５細胞のＣＡＲ－Ｔ細胞と、５．０×１０４個の標的細胞（Ｋ５６２細胞、Ｒａｊｉ細胞、ＡＰＣ－ＣＤ１９（K562/CD19）とを共培養した。２時間培養後、５μｇ／ｍＬとなるように、Brefeldin A（BFA）を添加し、さらに、１４～１８時間培養した。そして、ＣＡＲ－Ｔ細胞を回収後、１％パラホルムアルデヒド（PFA）で固定後、細胞膜の透過処理を行い、ＰＥ標識抗ヒトＴＮＦ－α抗体（clone MAb11）、ＡＰＣ標識抗ヒトＩＬ－２抗体（clone MQ1-17H12）およびＰＣ７標識抗ヒトＩＦＮ－γ抗体（clone B27）と、ＰＣ５標識抗ヒトＣＤ８抗体（clone B9.11）、ＦＩＴＣ標識抗ＣＤ４抗体（clone OKT4）およびＶ４５０標識anti-human NGFR（clone：C40-1457）で染色した。前記染色後のＣＡＲ－Ｔ細胞について、前記フローサイトメーターで測定し、各サイトカインを産生している細胞の割合を算出した。これらの結果を図４０に示す。
　図４０は、サイトカイン産生能を示すグラフである。図４０において、横軸は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の種類を示し、縦軸は、サイトカイン産生細胞の割合を示し、図の上部は、１０日目までの培養条件を示す。図４０に示すように、L17-18H CAR-Tは、clone18LH CAR-Tと比較して、いずれのサイトカインについても、サイトカイン産生細胞の割合がやや低かった、すなわち、サイトカイン産生能がやや弱いことがわかった。
（３）細胞傷害活性の比較
　前記実施例１５（１）の培養１０日目のL17-18H CAR-Tおよびclone18LH CAR-Tの細胞傷害活性について検討した。つぎに、５．０×１０３個の標的細胞であるＡＰＣ－ＣＤ１９（K562/CD19）またはＲａｊｉ細胞（Raji）およびＫ５６２細胞について、クロム５１（５１Ｃｒ）存在下で、１．５時間培養することにより、クロム５１でラベルした。
　つぎに、前記L17-18H CAR-Tまたはclone18LH CAR-T（Ｅ）と、前記クロム５１でラベルしたターゲット細胞（Ｔ）について、Ｅ：Ｔが、１０：１、５：１または２．５：１となるように、前記標的細胞を培養しているウェルに、各ＣＡＲ－Ｔ細胞を添加した。そして、５～６時間培養後、上清を回収し、１分間あたりの放射線の計数率（ＣＰＭ：count per minute）を、AccuFLEXg7010を用いて測定した。そして、前記式（１）に基づき、細胞傷害性（特異的融解の割合）を測定した。これらの結果を、図４１に示す。
　図４１は、細胞傷害活性を示すグラフである。図４１において、横軸は、Ｅ：Ｔ比を示し、縦軸は、細胞傷害活性を示し、図の上部は、１０日目までの培養条件を示す。図４１に示すように、L17-18H CAR-Tは、clone18LH CAR-Tと同等の細胞傷害活性を示すことが分かった。
（４）Ｔ細胞の疲弊の比較
　４人の異なるドナー（ヒト）由来のＴ細胞を用いた以外は、前記実施例１０と同様にして、L17-18H CAR-Tおよびclone18LH CAR-Tを調製した。得られたＣＡＲ－Ｔ細胞について、０．５μｍｏｌ／Ｌ　ＣＦＳＥを含むＰＢＳ内で、１５分間３７℃でインキュベートし、ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識した。つぎに、２０Ｇｙでγ線照射したＲａｊｉ細胞（Raji）（Ｔ）と、L17-18H CAR-Tまたはclone18LH CAR-T（Ｅ）とについて、Ｅ：Ｔが、１：１または５：１となるように、それぞれをウェルに添加した。前記標的細胞添加時を基準として、３日間培養した。
　前記培養後、ＣＡＲ－Ｔ細胞を回収し、PE標識抗PD-1抗体（clone EH12.2H7）、APC標識CD45RA抗体（clone HI100）、PC7標識CCR7抗体（clone G043H7）、BV421標識CD62L抗体（clone DREG-56）、PC5標識CD8抗体（clone B9.11）、APC-Cy7標識CD4抗体（clone RPA-T4）で染色後、フローサイトメーターで蛍光強度を測定した。得られたCFSEの蛍光強度のＭＦＩから、下記式（２）に基づき、分裂したＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を算出した。また、共培養前後のＣＤ８陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞およびＣＤ４陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ／ＣＤ６２Ｌ陽性細胞の分布を、図４２に示す。さらに、各ＣＡＲ－Ｔ細胞の分裂割合と、共培養前後のＣＤ４５ＲＡ陽性ＣＤ６２Ｌ陽性ＣＣＲ７陽性細胞の割合と、ＣＤ４５ＲＡ陰性ＣＤ６２Ｌ陽性ＣＣＲ７陽性と、ＣＤ４５ＲＡ陽性ＣＤ６２Ｌ陰性ＰＤ１陽性細胞の割合とを、図４３に示す。
 
　Proliferation（%）=（control MFI-sample MFI)/control MFI×100　・・・（２）
　　control MFI：K562細胞株とE:T＝1:1の条件で共培養したＣＡＲ－Ｔ細胞のＭＦＩ
　　sample MFI：各ＣＡＲ－Ｔ細胞のＭＦＩ
　図４２は、共培養前後のＣＤ８陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞およびＣＤ４陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞中のＣＤ４５ＲＡ／ＣＤ６２Ｌ陽性細胞の分布を示すドットプロットである。また、図４３は、各ＣＡＲ－Ｔ細胞の分裂割合と、共培養前後のＣＤ４５ＲＡ陽性ＣＤ６２Ｌ陽性ＣＣＲ７陽性細胞の割合と、ＣＤ４５ＲＡ陰性ＣＤ６２Ｌ陽性ＣＣＲ７陽性と、ＣＤ４５ＲＡ陽性ＣＤ６２Ｌ陰性ＰＤ１陽性細胞の割合とを示すグラフである。図４２および図４３に示すように、共培養前のL17-18H CAR-Tおよびclone18LH CAR-Tの形質は概ね同じであった。他方で、ｉｎ　ｖｉｖｏ環境を模倣していると考えられる腫瘍が多い環境下（Raji/CAR-T E/T 1:1）で刺激した場合、L17-18H CAR-Tは、clone18LH CAR-Tと比較して、再現性をもって優れた増幅性を示した。さらに、同様の環境下において、L17-18H CAR-Tは、clone18LH CAR-Tと比較して、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋の若いＴ細胞形質が保持されやすいこと、ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋のセントラルメモリーＴ細胞の割合が増加すること、同時にＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ－ＰＤ１＋の疲弊したＴ細胞の割合が低下することが明らかとなった。
　以上のことから、本発明の第１のスクリーニング方法では、以下のようなメカニズムで、ｉｎ　ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果に優れるｓｃＦｖを取得できると推定された。なお、前記推定により、本発明は何ら制限されない。本発明のスクリーニング方法では、図４４に示すように、ＣＡＲライブラリを導入したＴ細胞等の免疫細胞（ＣＡＲライブラリ細胞）について、第１の接触工程または第２の接触工程において、標的抗原と接触させる。これにより、前記ＣＡＲライブラリ細胞において、標的抗原に特異的なＣＡＲを発現する細胞が増殖する。ただし、前記第１の接触工程および第２の接触工程において、個々のｓｃＦｖのアミノ酸配列の異なるＣＡＲライブラリ細胞からみると、E/T ratioは極めて低い状況となる（図４４　Step1）。この結果、L17-18H CAR-Tのような低いE/T ratioにおいても増幅しやすい特徴を持つＣＡＲライブラリ細胞が、前記第１の接触工程および第２の接触工程において、最終的に濃縮されることになる（図４４　Step2）。そして、このような特徴を持つＣＡＲライブラリ細胞が富化された状態で、前記第１の選抜工程および第２の選抜工程を実施するため、相対的に、低いE/T ratioにおいても増幅しやすく、かつ増殖し続けても疲弊しにくい特徴を持つＣＡＲライブラリ細胞由来のｓｃＦｖが選抜されることになる（図４４　Step3）。他方、L17-18H CAR-Tに示されるように、低いE/T ratioにおいて増幅可能なＣＡＲライブラリ細胞は、通常の細胞傷害活性を示す。したがって、本発明のスクリーニング方法によれば、優れた増殖能を示し、かつ細胞傷害活性を示すｓｃＦｖを備えるＣＡＲライブラリ細胞が選抜されるため、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいても高い抗腫瘍活性を付与可能なｓｃＦｖを備えるＣＡＲをスクリーニングできると推定された。なお、上記メカニズムは、ＣＡＲの基本骨格を変えても同様に生じるため、ＣＤ２８およびＣＤ３ζ以外の細胞内ドメイン等を有するＣＡＲを用いてスクリーニングを行なっても、同様にｉｎ　ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果に優れるｓｃＦｖを取得できると推定される。
　以上、実施形態を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。
　この出願は、２０１９年２月４日に出願された日本出願特願２０１９－０１８２６９、２０１９年５月１８日に出願された日本出願特願２０１９－０９４１８８、２０１９年７月３０日に出願された日本出願特願２０１９－１４０１２１、および２０１９年１０月４日に出願された日本出願特願２０１９－１８４０７１を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。
＜付記＞
　上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
（付記１）
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含み、
前記第１のＣＡＲは、第１の抗原結合ドメインと、第１の膜貫通ドメインと、第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記第１の抗原結合ドメインは、標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、
前記第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含み、
前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たす、ＣＡＲライブラリ；
条件１：
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件２：
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
（付記２）
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、付記１記載のＣＡＲライブラリ。
（付記３）
前記第１の膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通ドメインを含む、付記１または２記載のＣＡＲライブラリ。
（付記４）
前記第１のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、付記１から３のいずれかに記載のＣＡＲライブラリ。
（付記５）
付記１から４のいずれかに記載のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させる第１の発現工程と、
前記第１の発現工程で得られた免疫細胞と、前記標的抗原とを接触させる第１の接触工程と、
前記第１の接触工程において前記標的抗原と結合した免疫細胞に発現するＣＡＲの第１のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する第１の選抜工程とを含む、ｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記６）
前記第１の候補ｓｃＦｖに基づき、第２のＣＡＲライブラリを調製する調製工程を含み、
前記第２のＣＡＲライブラリは、第２のＣＡＲをコードする核酸を含み、
前記第２のＣＡＲは、第２の抗原結合ドメインと、第２の膜貫通ドメインと、第２の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記第２の抗原結合ドメインは、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含み、
前記第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含み、
前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、下記条件３または条件４を満たし、
さらに、前記第２のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させる第２の発現工程と、
前記第２の発現工程で得られた免疫細胞と、前記標的抗原とを接触させる第２の接触工程と、
前記第２の接触工程において前記標的抗原と結合した免疫細胞に発現するＣＡＲの第２のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第２の候補ｓｃＦｖとして第２の選抜工程とを含む、付記５記載の製造方法（スクリーニング方法）；
条件３：
前記第１の発現工程におけるＣＡＲライブラリが前記条件１を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件４：
前記第１の発現工程におけるＣＡＲライブラリが前記条件２を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
（付記７）
前記第２の接触工程を複数回実施する、付記６記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記８）
前記第２の選抜工程において、前記標的抗原のモノマーまたはマルチマーを用いて、前記標的抗原に結合する免疫細胞を検出し、
検出された免疫細胞に発現するｓｃＦｖを、前記第２の候補ｓｃＦｖとして選抜する、付記６または７記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記９）
前記第２のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、付記６から８のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記１０）
前記第１の接触工程を複数回実施する、付記５から９のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記１１）
前記第１の選抜工程において、前記標的抗原のモノマーまたはマルチマーを用いて、前記標的抗原に結合する免疫細胞を検出し、
検出された免疫細胞に発現するｓｃＦｖを、前記第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する、付記５から１０のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記１２）
前記免疫細胞は、Ｔ細胞である、付記５から１１のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記１３）
下記（Ｈ）の重鎖可変領域と、下記（Ｌ）の軽鎖可変領域とを含む、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１およびＮＹ－ＥＳＯ－１１５７－１６５の複合体に対する抗体またはその抗原結合断片。
（Ｈ）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
　ＣＤＲＨ１が、下記（H1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ２が、下記（H2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ３が、下記（H3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（H1）下記（H1-1）、（H1-2）または（H1-3）のアミノ酸配列
（H1-1）前記表１ＡのＣＤＲＨ１のいずれかのアミノ酸配列
（H1-2）（H1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-3）（H1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2）下記（H2-1）、（H2-2）または（H2-3）のアミノ酸配列
（H2-1）前記表１ＡのＣＤＲＨ２のいずれかのアミノ酸配列
（H2-2）（H2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-3）（H2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3）下記（H3-1）、（H3-2）または（H3-3）のアミノ酸配列
（H3-1）前記表１ＡのＣＤＲＨ３のいずれかのアミノ酸配列
（H3-2）（H3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-3）（H3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
　ＣＤＲＬ１が、下記（L1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ２が、下記（L2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ３が、下記（L3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（L1）下記（L1-1）、（L1-2）または（L1-3）のアミノ酸配列
（L1-1）前記表１ＢのＣＤＲＬ１のいずれかのアミノ酸配列
（L1-2）（L1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-3）（L1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2）下記（L2-1）、（L2-2）または（L2-3）のアミノ酸配列
（L2-1）前記表１ＢのＣＤＲＬ２のいずれかのアミノ酸配列
（L2-2）（L2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-3）（L2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3）下記（L3-1）、（L3-2）または（L3-3）のアミノ酸配列
（L3-1）前記表１ＢのＣＤＲＬ３のいずれかのアミノ酸配列
（L3-2）（L3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-3）（L3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（付記１４）
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域の組合せが、前記表２のいずれかの組合せである、付記１３記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記１５）
抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記抗原結合ドメインは、付記１３または１４記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体。
（付記１６）
前記抗原結合断片は、一本鎖抗体である、付記１５記載のキメラ抗原受容体。
（付記１７）
付記１５または１６記載のキメラ抗原受容体をコードする、核酸。
（付記１８）
付記１５または１６記載のキメラ抗原受容体を含む、細胞。
（付記１９）
前記細胞は、Ｔ細胞を含む、付記１８記載の細胞。
（付記２０）
付記１７記載の核酸を細胞に導入する導入工程を含む、細胞の製造方法。
（付記２１）
前記細胞は、Ｔ細胞を含む、付記２０記載の細胞の製造方法。
（付記２２）
第１の二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）をコードする核酸を含み、
前記第１のＢｓＡｂは、第１の抗原結合ドメインと、第２の抗原結合ドメインとを含み、
前記第１の抗原結合ドメインは、第１の標的抗原に結合する第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、
前記第２の抗原結合ドメインは、第２の標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含み、
前記第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含み、
前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たし、
前記第１の標的抗原または前記第２の標的抗原は、免疫細胞活性化受容体である、ＢｓＡｂライブラリ；
条件１：
前記第２の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件２：
前記第２の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記第２の標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
（付記２３）
前記第１のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、付記２２記載のＢｓＡｂライブラリ。
（付記２４）
前記免疫細胞活性化受容体は、ＣＤ３である、付記２２または２３記載のＢｓＡｂライブラリ。
（付記２５）
付記２２から２４のいずれかに記載のＢｓＡｂライブラリから第１のＢｓＡｂを準備する第１の準備工程と、
前記第１の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、
　前記第１のＢｓＡｂと、前記第２の標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞とを接触させ、
前記第２の標的抗原が免疫細胞活性化受容体の場合、
　前記第１のＢｓＡｂと、前記第１の標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞とを接触させる第１の接触工程と、
前記第１の接触工程において、前記第２の標的抗原と結合した第１のＢｓＡｂの第２のｓｃＦｖを、前記第２の標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する第１の選抜工程とを含む、ｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記２６）
前記第１の候補ｓｃＦｖに基づき、第２のＢｓＡｂライブラリを調製する調製工程を含み、
前記第２のＢｓＡｂライブラリは、前記第２のＢｓＡｂをコードする核酸を含み、
前記第２のＢｓＡｂは、第３の抗原結合ドメインと、第４の抗原結合ドメインとを含み、
前記第３の抗原結合ドメインは、前記第１の標的抗原に結合する第３のｓｃＦｖを含み、
前記第４の抗原結合ドメインは、前記第２の標的抗原への結合をスクリーニングする第４のｓｃＦｖを含み、
前記第４のｓｃＦｖは、第４の重鎖可変領域と、第４の軽鎖可変領域とを含み、
前記第４の重鎖可変領域および前記第４の軽鎖可変領域は、下記条件３または条件４を満たし、
さらに、前記第２のＢｓＡｂライブラリから第２のＢｓＡｂを準備する第２の準備工程と、
前記第１の標的抗原が前記免疫細胞活性化受容体の場合、
　前記第２のＢｓＡｂと、前記第２の標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞とを接触させ、
前記第２の標的抗原が前記免疫細胞活性化受容体の場合、
　前記第２のＢｓＡｂと、前記第１の標的抗原と、前記免疫細胞活性化受容体を発現可能な免疫細胞とを接触させる第２の接触工程と、
前記第２の接触工程において、前記第２の標的抗原と結合した第２のＢｓＡｂの第４のｓｃＦｖを、前記第２の標的抗原に結合する第２の候補ｓｃＦｖとして選抜する第２の選抜工程とを含む、付記２５記載のｓｃＦｖ製造方法（スクリーニング方法）；
条件３：
前記第１の準備工程におけるＢｓＡｂライブラリが前記条件１を満たす場合、
前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記第１の候補ＢｓＡｂにおける軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
条件４：
前記第１の準備工程におけるＢｓＡｂライブラリが前記条件２を満たす場合、
前記第４の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記第１の候補ＢｓＡｂにおける重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第４の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
（付記２７）
前記第２の接触工程および前記第２の選抜工程を１セットとし、前記セットを複数回実施する、付記２６記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記２８）
前記第２の選抜工程において、前記免疫細胞の活性化分子の発現を検出し、
前記免疫細胞の活性化分子を誘導した第２のＢｓＡｂを、前記第２の候補ＢｓＡｂとして選抜する、付記２６または２７記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記２９）
前記第２のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、付記２５から２８のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記３０）
前記第１の接触工程および前記第１の選抜工程を１セットし、前記セットを複数回実施する、付記２５から２９のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記３１）
前記第１の選抜工程において、前記免疫細胞の活性化分子の発現を検出し、
前記免疫細胞の活性化分子を誘導した第１のＢｓＡｂを、前記第１の候補ＢｓＡｂとして選抜する、付記２５から３０のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記３２）
前記免疫細胞活性化受容体は、ＣＤ３である、付記２５から３１のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記３３）
前記免疫細胞は、Ｔ細胞である、付記２５から３２のいずれかに記載のｓｃＦｖの製造方法（スクリーニング方法）。
（付記３４）
下記（Ｈ）の重鎖可変領域と、下記（Ｌ）の軽鎖可変領域とを含む、ＣＤ１９に対する抗体またはその抗原結合断片。
（Ｈ）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
　ＣＤＲＨ１が、下記（H1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ２が、下記（H2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＨ３が、下記（H3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである重鎖可変領域
（H1）下記（H1-1）、（H1-2）または（H1-3）のアミノ酸配列
（H1-1）前記表３ＡのＣＤＲＨ１のいずれかのアミノ酸配列
（H1-2）（H1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H1-3）（H1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H2）下記（H2-1）、（H2-2）または（H2-3）のアミノ酸配列
（H2-1）前記表３ＡのＣＤＲＨ２のいずれかのアミノ酸配列
（H2-2）（H2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H2-3）（H2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（H3）下記（H3-1）、（H3-2）または（H3-3）のアミノ酸配列
（H3-1）前記表３ＡのＣＤＲＨ３のいずれかのアミノ酸配列
（H3-2）（H3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（H3-3）（H3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（Ｌ）軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、
　ＣＤＲＬ１が、下記（L1）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ２が、下記（L2）のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、
　ＣＤＲＬ３が、下記（L3）のアミノ酸配列を含むポリペプチドである軽鎖可変領域
（L1）下記（L1-1）、（L1-2）または（L1-3）のアミノ酸配列
（L1-1）前記表３ＢのＣＤＲＬ１のいずれかのアミノ酸配列
（L1-2）（L1-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L1-3）（L1-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L2）下記（L2-1）、（L2-2）または（L2-3）のアミノ酸配列
（L2-1）前記表３ＢのＣＤＲＬ２のいずれかのアミノ酸配列
（L2-2）（L2-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L2-3）（L2-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（L3）下記（L3-1）、（L3-2）または（L3-3）のアミノ酸配列
（L3-1）前記表３ＢのＣＤＲＬ３のいずれかのアミノ酸配列
（L3-2）（L3-1）のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列
（L3-3）（L3-1）のアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列
（付記３５）
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域の組合せが、前記表２のいずれかの組合せである、付記３４記載の抗体またはその抗原結合断片。
（付記３６）
抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記抗原結合ドメインは、付記３４または３５記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体。
（付記３７）
前記抗原結合断片は、一本鎖抗体である、付記３６記載のキメラ抗原受容体。
（付記３８）
付記３６または３７記載のキメラ抗原受容体をコードする、核酸。
（付記３９）
付記３６または３７記載のキメラ抗原受容体を含む、細胞。
（付記４０）
前記細胞は、Ｔ細胞を含む、付記３９記載の細胞。
（付記４１）
付記３８記載の核酸を細胞に導入する導入工程を含む、細胞の製造方法。
（付記４２）
前記細胞は、Ｔ細胞を含む、付記４１記載の細胞の製造方法。
（付記４３）
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ライブラリの発現細胞を動物に投与する第１の投与工程と、
前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する第１の採取工程とを含み、
前記第１のＣＡＲライブラリは、第１のＣＡＲをコードする核酸を含み、
前記第１のＣＡＲは、第１の抗原結合ドメインと、第１の膜貫通ドメインと、第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記第１の抗原結合ドメインは、標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、
前記第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含み、
前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たす、ｓｃＦｖの製造方法：
（条件１）
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
（条件２）
前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
（付記４４）
前記第１の投与工程において、複数種類の第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を投与する、付記４３記載の製造方法。
（付記４５）
前記第１の投与工程後、前記標的抗原を前記動物に投与する第１の刺激工程を含む、付記４３または４４記載の製造方法。
（付記４６）
前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を、前記標的抗原で再刺激する第１の再刺激工程を含む、付記４３から４５のいずれかに記載の製造方法。
（付記４７）
前記第１の投与工程に先立ち、標的抗原を発現する細胞を前記動物に導入し、前記標的抗原を発現する組織を形成させる第１の形成工程を含む、付記４３から４６のいずれかに記載の製造方法。
（付記４８）
発現する組織に集積した前記第１のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する、付記４３から４７のいずれかに記載の製造方法。
（付記４９）
前記第１のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、付記４３から４８のいずれかに記載の製造方法。
（付記５０）
第２のＣＡＲライブラリの発現細胞を動物に投与する第２の投与工程と、
前記動物において、標的抗原を発現する組織に集積した前記第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する第２の採取工程とを含み、
前記第２のＣＡＲライブラリは、第２のＣＡＲをコードする核酸を含み、
前記第２のＣＡＲは、第２の抗原結合ドメインと、第２の膜貫通ドメインと、第２の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
前記第２の抗原結合ドメインは、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含み、
前記第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含み、
前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、下記条件３または条件４を満たす、付記４３から４９のいずれかに記載の製造方法：
（条件３）
前記第１のＣＡＲライブラリが前記条件１を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞のｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
（条件４）
前記第１のＣＡＲライブラリが前記条件２を満たす場合、
前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞のｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
（付記５１）
前記第２の投与工程において、複数種類の第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を投与する、付記５０記載の製造方法。
（付記５２）
前記第２の投与工程後、前記標的抗原を前記動物に投与する第２の刺激工程を含む、付記５０または５１記載の製造方法。
（付記５３）
前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞を、前記標的抗原で再刺激する第１の再刺激工程を含む、付記５０から５２のいずれかに記載の製造方法。
（付記５４）
前記第２の投与工程に先立ち、標的抗原を発現する細胞を前記動物に導入し、前記標的抗原を発現する組織を形成させる第２の形成工程を含む、付記５０から５３のいずれかに記載の製造方法。
（付記５５）
前記第２の採取工程において、前記標的抗原を発現する組織を採取し、前記標的抗原を発現する組織に集積した前記第２のＣＡＲライブラリ発現細胞を、前記標的抗原特異的なＣＡＲを発現する細胞として採取する、付記５０から５４のいずれかに記載の製造方法。
（付記５６）
前記第２のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、付記５０から５５のいずれかに記載の製造方法。
（付記５７）
前記発現細胞は、Ｔ細胞である、付記４３から５６のいずれかに記載の製造方法。
（付記５８）
前記標的抗原は、腫瘍抗原である、付記４３から５７のいずれかに記載の製造方法。
（付記５９）
前記動物は、非ヒト動物である、付記４３から５８のいずれかに記載の製造方法。
（付記６０）
前記動物は、免疫抑制動物である、付記４３から５９のいずれかに記載の製造方法。
　以上説明したように、本発明によれば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において機能しうるｓｃＦｖのスクリーニングに用いるＣＡＲライブラリ、およびそれを用いたｓｃＦｖのスクリーニング方法を提供できる。このため、本発明は、医薬分野等において、極めて有用といえる。

Claims (12)

  1. 第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含み、
    前記第１のＣＡＲは、第１の抗原結合ドメインと、第１の膜貫通ドメインと、第１の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
    前記第１の抗原結合ドメインは、標的抗原への結合をスクリーニングする第１の一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、
    前記第１のｓｃＦｖは、第１の重鎖可変領域と、第１の軽鎖可変領域とを含み、
    前記第１の重鎖可変領域および前記第１の軽鎖可変領域は、下記条件１または条件２を満たす、ＣＡＲライブラリ；
    条件１：
    前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
    前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
    条件２：
    前記第１の重鎖可変領域における重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第１のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
    前記第１の軽鎖可変領域における軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記標的抗原に結合する抗体もしくはその抗原結合断片における軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
  2. 前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１記載のＣＡＲライブラリ。
  3. 前記第１の膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通ドメインを含む、請求項１または２記載のＣＡＲライブラリ。
  4. 前記第１のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、請求項１から３のいずれか一項に記載のＣＡＲライブラリ。
  5. 請求項１から４のいずれか一項に記載のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させる第１の発現工程と、
    前記第１の発現工程で得られた免疫細胞と、前記標的抗原とを接触させる第１の接触工程と、
    前記第１の接触工程において前記標的抗原と結合した免疫細胞に発現するＣＡＲの第１のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する第１の選抜工程とを含む、ｓｃＦｖの製造方法。
  6. 前記第１の候補ｓｃＦｖに基づき、第２のＣＡＲライブラリを調製する調製工程を含み、
    前記第２のＣＡＲライブラリは、第２のＣＡＲをコードする核酸を含み、
    前記第２のＣＡＲは、第２の抗原結合ドメインと、第２の膜貫通ドメインと、第２の細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、
    前記第２の抗原結合ドメインは、前記標的抗原への結合をスクリーニングする第２のｓｃＦｖを含み、
    前記第２のｓｃＦｖは、第２の重鎖可変領域と、第２の軽鎖可変領域とを含み、
    前記第２の重鎖可変領域および前記第２の軽鎖可変領域は、下記条件３または条件４を満たし、
    さらに、前記第２のＣＡＲライブラリを免疫細胞に発現させる第２の発現工程と、
    前記第２の発現工程で得られた免疫細胞と、前記標的抗原とを接触させる第２の接触工程と、
    前記第２の接触工程において前記標的抗原と結合した免疫細胞に発現するＣＡＲの第２のｓｃＦｖを、前記標的抗原に結合する第２の候補ｓｃＦｖとして第２の選抜工程とを含む、請求項５記載の製造方法；
    条件３：
    前記第１の発現工程におけるＣＡＲライブラリが前記条件１を満たす場合、
    前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
    前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける軽鎖可変領域のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む；
    条件４：
    前記第１の発現工程におけるＣＡＲライブラリが前記条件２を満たす場合、
    前記第２の重鎖可変領域におけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、前記第１の候補ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含み、
    前記第２の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３は、それぞれ、第２のＢ細胞受容体の軽鎖可変領域におけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む。
  7. 前記第２の接触工程を複数回実施する、請求項６記載のｓｃＦｖの製造方法。
  8. 前記第２の選抜工程において、前記標的抗原のモノマーまたはマルチマーを用いて、前記標的抗原に結合する免疫細胞を検出し、
    検出された免疫細胞に発現するｓｃＦｖを、前記第２の候補ｓｃＦｖとして選抜する、請求項６または７記載のｓｃＦｖの製造方法。
  9. 前記第２のＢ細胞受容体は、ヒト由来Ｂ細胞のＢ細胞受容体である、請求項６から８のいずれか一項に記載のｓｃＦｖの製造方法。
  10. 前記第１の接触工程を複数回実施する、請求項５から９のいずれか一項に記載のｓｃＦｖの製造方法。
  11. 前記第１の選抜工程において、前記標的抗原のモノマーまたはマルチマーを用いて、前記標的抗原に結合する免疫細胞を検出し、
    検出された免疫細胞に発現するｓｃＦｖを、前記第１の候補ｓｃＦｖとして選抜する、請求項５から１０のいずれか一項に記載のｓｃＦｖの製造方法。
  12. 前記免疫細胞は、Ｔ細胞である、請求項５から１１のいずれか一項に記載のｓｃＦｖの製造方法。
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