JP2019533675A - モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム - Google Patents
モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019533675A JP2019533675A JP2019520024A JP2019520024A JP2019533675A JP 2019533675 A JP2019533675 A JP 2019533675A JP 2019520024 A JP2019520024 A JP 2019520024A JP 2019520024 A JP2019520024 A JP 2019520024A JP 2019533675 A JP2019533675 A JP 2019533675A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- acid sequence
- domain
- cdrs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 676
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 221
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 92
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 61
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 61
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 43
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 43
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 38
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 37
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 26
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 19
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 18
- -1 ICOS Proteins 0.000 claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 13
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 claims description 10
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 8
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 7
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims description 5
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003325 follicular Effects 0.000 claims description 3
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 2
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 2
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 claims description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 claims description 2
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 9
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 352
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 287
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 284
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 74
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 73
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 65
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 63
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 56
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 53
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 50
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 44
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 42
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 39
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 39
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 37
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 37
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 37
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 25
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 25
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 24
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 24
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 24
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 23
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 22
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 21
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 19
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 19
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 15
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 15
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 14
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 14
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 14
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 13
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 13
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 13
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 11
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 10
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 10
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 9
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 9
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 8
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 6
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 6
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 6
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 5
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 5
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 5
- 101000597780 Mus musculus Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Proteins 0.000 description 5
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 239000008049 TAE buffer Substances 0.000 description 5
- 102100035283 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18 Human genes 0.000 description 5
- HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 4
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 4
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 4
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 102000004498 CCR4 Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010017317 CCR4 Receptors Proteins 0.000 description 3
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 3
- 101150052158 F10 gene Proteins 0.000 description 3
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 3
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 3
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102200007903 rs796065047 Human genes 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108700012439 CA9 Proteins 0.000 description 2
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 2
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 2
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 2
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 2
- 239000011542 SDS running buffer Substances 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- AIDBEARHLBRLMO-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecyl sulfate;2-morpholin-4-ylethanesulfonic acid Chemical compound [Na+].OS(=O)(=O)CCN1CCOCC1.CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O AIDBEARHLBRLMO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102100025466 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 1
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 1
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000914337 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000984189 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000984186 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000597785 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Proteins 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108020003285 Isocitrate lyase Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 101150075239 L1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282842 Lama glama Species 0.000 description 1
- 102100025583 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025578 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102000018170 Lymphotoxin beta Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010091221 Lymphotoxin beta Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100030301 MHC class I polypeptide-related sequence A Human genes 0.000 description 1
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241001024304 Mino Species 0.000 description 1
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100268066 Mus musculus Zap70 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000000160 Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Peptides and Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010080432 Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Peptides and Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100035284 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Human genes 0.000 description 1
- INAPMGSXUVUWAF-GCVPSNMTSA-N [(2r,3s,5r,6r)-2,3,4,5,6-pentahydroxycyclohexyl] dihydrogen phosphate Chemical compound OC1[C@H](O)[C@@H](O)C(OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H]1O INAPMGSXUVUWAF-GCVPSNMTSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000006420 basal activation Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000005890 cell-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003889 chemical engineering Methods 0.000 description 1
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000011654 childhood malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012191 childhood neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000011347 external beam therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical compound [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000001126 phototherapy Methods 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical group 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000005382 thermal cycling Methods 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001296 transplacental effect Effects 0.000 description 1
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/524—CH2 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Abstract
Description
本出願は、参照によりその内容の全てが本明細書に組み込まれる、2016年10月14日出願のU.S.S.N.62/408,271の利益及び優先権を主張する。
本発明は、概して、四量体二重特異性抗体分子、その産生方法及びシステムに関する。
本発明は、[]によって与えられた[]の下で政府支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
二重特異性抗体(BsAb)は、2つの異なる結合特異性を有する抗体または抗体様分子である。BsAbは生物医学、特に腫瘍に対する免疫療法において広範な用途を有する。現在、免疫療法研究の焦点は、腫瘍細胞を殺傷するためにBsAbの細胞媒介性細胞傷害をいかに利用するかという点にある。BsAbは、腫瘍細胞及びエフェクター細胞を同時に標的としつつ、エフェクター細胞による腫瘍細胞の破壊を引き起こすように設計することができる。
を有するものが隣接していてもよい。実施形態において、リンカードメインは、免疫グロブリンFcドメイン、例えば、IgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4のFcドメインの少なくとも一部を含む。免疫グロブリンFcドメインの少なくとも一部は、CH2ドメインであってよい。Fcドメインは、免疫グロブリンヒンジ領域(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4のヒンジ領域)のアミノ酸配列のC末端に連結していてもよい。リンカードメインは、一方の末端または両方の末端において、フレキシブルリンカーアミノ酸配列
を含んでいてもよい。
を含んでいてもよい。
本発明は、各受容体に対する2つの結合部位を含む二重特異性抗体(すなわち四価二重特異性抗体または「tBsAb」)、それを産生するシステム及び方法に関する。
例示的な抗PDL1抗体は、SEQ ID NO:1485を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1487を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1485を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1487を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1489を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1491を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1493を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1495を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1497を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1499を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1501を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1503を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1505を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1507を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1509を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1511を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1513を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1515を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1517を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1519を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1521を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1523を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1525を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1527を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1529を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1531を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1533を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1535を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1537を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1539を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的なSARS中和抗体は、SEQ ID NO:1626を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1628を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1630を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1639を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1634を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1640を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1632を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1641を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1633を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1642を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1634を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1643を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1635を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1644を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1636を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1645を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1637を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1646を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗CXCR4抗体は、SEQ ID NO:771を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:779を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:772を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:780を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:773を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:781を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:774を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:782を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:775を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:783を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:776を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:784を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:777を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:785を有するVLアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:778を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:786を有するVLアミノ酸配列を有する抗体を含む。
例示的な抗CA IX抗体は、SEQ ID NO:845を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:846を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:847を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:868を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:848を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:869を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:849を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:870を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:850を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:871を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:851を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:872を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:852を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:873を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:853を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:874を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:854を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:875を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:855を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:876を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:856を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:877を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:857を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:878を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:858を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:879を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:859を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:880を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:860を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:881を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:861を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:882を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:862を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:883を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:863を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:884を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:864を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:885を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:865を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:886を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:866を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:887を有するVLアミノ酸配列、SEQ ID NO:867を有するVHアミノ酸配列及びSEQ ID NO:888を有するVLアミノ酸配列を有する抗体を含む。
例示的なCC−ケモカイン受容体4(CCR4)抗体は、SEQ ID NO:969を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:971を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:969を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:SEQ ID NO:972を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗中東呼吸器症候群コロナウイルス(MERS−CoV)抗体は、SEQ ID NO:677を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:679を有するVLヌクレオチド配列SEQ ID NO:681を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:683を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:685を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:687を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:689を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:692を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:693を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:695を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:697を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:699を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:701を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:703を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗ヒトGITR抗体は、SEQ ID NO:1361を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1363を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1365を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1367を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1369を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1371を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1381を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1375を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1377を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1379を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1381を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1383を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1385を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1387を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1389を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1391を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1393を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1395を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1397を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1398を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1401を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1403を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗西ナイルウイルスエンベロープタンパク質E(WNE)抗体は、SEQ ID NO:1224を有するVHアミノ酸配列を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1226を有するVLアミノ酸配列を有する抗体を含む。
例示的な抗CC−ケモカイン受容体4(CCR4)抗体は、SEQ ID NO:1329を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1331を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1333を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1335を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1337を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1192を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1341を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1343を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1357を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1359を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域生殖細胞系列遺伝子VH1−69抗体は、SEQ ID NO:1153を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1155を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1163を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1155を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗インフルエンザ抗体は、SEQ ID NO:981を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:983を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:985を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:989を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:987を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:991を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:993を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:997を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:995を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:999を有するVKヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1001を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1005を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1003を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1007を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1009を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1011を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1013を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1015を有するVLヌクレオチド配列、ならびにSEQ ID NO:1017を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1019を有するVKヌクレオチド配列、SEQ ID NO:1020を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1022を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗インフルエンザ抗体は、SEQ ID NO:397を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:398を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:399を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:400を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:401を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:402を有するVLヌクレオチド配列、SEQ ID NO:403を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:404を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:405を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:406を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:407を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:408を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:409を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:410を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:411を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:412を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:413を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:414を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:415を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:416を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:417を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:418を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:419を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:420を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:421を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:422を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:423を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:424を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:425を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:426を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:427を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:428を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:429を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:430を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:431を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:432を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:433を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:434を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:435を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:436を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:437を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:438を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:439を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:440を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:441を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:442を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:541を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:542を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:543を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:544を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:545を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:546を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:547を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:548を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:549を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:550を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:551を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:552を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:553を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:554を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:555を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:556を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:557を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:558を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:559を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:560を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:561を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:562を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:563を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:564を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:565を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:566を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:567を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:568を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:569を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:570を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:571を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:572を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:573を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:574を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:575を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:576を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:577を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:578を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:579を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:580を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:581を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:582を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:583を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:584を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:585を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:586を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:587を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:588を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:589を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:590を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:591を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:592を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:593を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:594を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:595を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:596を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:597を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:598を有するVLヌクレオチド配列、または、SEQ ID NO:599を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:600を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
のアミノ酸配列を含む3つのCDRを有する重鎖及びそれぞれ335、365、395のアミノ酸配列を含む3つのCDRを有する軽鎖、または、それぞれ245、285、306のアミノ酸配列を含む3つのCDRを有する重鎖及びそれぞれ336、366、396のアミノ酸配列を含む3つのCDRを有する軽鎖を有する。
例示的なCCR4抗体は、SEQ ID NO:1678を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1679を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1680を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1681を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1682を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1683を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1684を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1685を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1686を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1687を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1688を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1689を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域生殖細胞系列遺伝子VH1−69抗体は、SEQ ID NO:1744を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1745を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1748を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1749を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1752を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1753を有するVLヌクレオチド配列を含む。
ジカウイルスを標的とし中和する例示的な抗体は、SEQ ID NO:1762を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1763を有するVLヌクレオチド配列を有する抗体を含む。
例示的な抗グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体(GITR)抗体は、SEQ ID NO:1772を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1773を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1774を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1775を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1776を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1777を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1778を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1779を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1780を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1781を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1782を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1783を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1784を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1785を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1786を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1787を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1788を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1789を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1790を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1791を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1792を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1793を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1794を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1795を有するVLヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:1796を有するVHヌクレオチド配列及びSEQ ID NO:1797を有するVLヌクレオチド配列を含む。
を含む。
を含む。
本発明のtBsAbは、キメラ抗原受容体(CAR)を産生するのに使用できる。CARは、一般的に、本発明のtBsAbを含む少なくとも1つの細胞外リガンド結合ドメインを含む少なくとも1つの膜貫通ポリペプチドと、少なくとも1つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む膜貫通ポリペプチドとを含む。
本発明によるtBsAb、tBsAbを発現する細胞、またはCARは、がん、ウイルス感染、または自己免疫疾患の治療を必要とする患者において治療を行うために使用できる。別の実施形態では、本発明によるtBsAb、tBsAbを発現する細胞、またはCARは、がん、ウイルス感染、または自己免疫疾患の治療を必要とする患者におけるその治療のための医薬の作製に使用できる。
用語「1つの(a)」または「1つの(an)」の実体は、その実体の1つ以上を指し、例えば、「二重特異性抗体」は、1つ以上の二重特異性抗体を表すと理解されることに留意されたい。したがって、用語「1つの(a)」(または「1つの(an)」)、「1つ以上」、及び「少なくとも1つ」は、本明細書において交換可能に使用され得る。
クローニング戦略
フレキシブルリンカーによって結合した、異なる親抗体を起源とする2つの組換え単鎖可変断片(scFv)を含むプラスミドをクローニングすることを目的とした。scFvの一方がGITRタンパク質に対するものであり、他方がPD−L1に対するものである。そのようなプラスミドは、リンカー−ヒンジ−リンカードメインによって共有結合する2つのscFvを産生し、四量体二重特異性抗体(αGITR−αPD−L1 tBsAb)をもたらす。
6つのαGITR scFv遺伝子配列をpcDNA3.4発現ベクターに個別にクローニングした。6つのVHGITR−リンカー−VLGITR遺伝子配列は、VHGITRL1−VLGITRL1、VHGITRL10−VLGITRL10、VHGITRL11−VLGITRL11、VHGITRL14−VLGITRL14、VHGITRL15−VLGITRL15、及びVHGITRL17−VLGITRL17とラベルされた。全ての6つのαGITR遺伝子配列は、SfiI及びNotI制限部位が隣接し、対応するドナープラスミドから消化によって単離された(表1)。同様に、pcDNA3.4発現ベクターもまた、SfiI及びNotI制限酵素によって消化された。消化されたベクター及び断片は、1%アガロースゲルで解析され、QIAquick Gel Extraction Kitを用いて精製された。SfiI及びNotI消化からの突出末端インサートを、T4 Ligation Kitを用いて5倍モル比で、対応するベクターpcDNA3.4に連結した。ライゲーション反応あたり、50ナノグラムの受容ベクターを使用した。ライゲーション生成物は、VHGITR−リンカー−VLGITR−リンカー−ヒンジ−リンカー−VHPD−L1−リンカー−VLPD−L1の最終構造をもたらした(図12)。
(1)VHF10−リンカー−VLF10−リンカー−ヒンジ−リンカー−VHPD−L1−リンカー−VLPD−L1(F10−αPD−L1)
(2)VHGITR1−リンカー−VLGITR1−リンカー−ヒンジ−リンカー−VHF10−リンカー−VLF10(αGITR1−F10)
(3)VHGITR10−リンカー−VLGITR10−リンカー−ヒンジ−リンカー−VHF10−リンカー−VLF10(αGITR10−F10)。
VHF10−リンカー−VLF10遺伝子を、SfiI及びNotIのREによる消化を介してpcDNA3.1ベクターから単離した。発現ベクターに関して、同一のpcDNA3.4ベクターを使用した(図13)。それは、所望の挿入部位にSfiI及びNotI制限部位を含み、したがって、対応する制限酵素によって消化された。最終的なプラスミドは、両方の消化生成物を互いに連結することによって得られた。ライゲーションは、16℃で一晩、T4 Ligation Kitを用いて実施された。
上述のコンストラクトにおいてαPD−L1 scFvを置き換えることを目的として、BsiWI及びBamHI制限部位とVHF10−リンカー−VLF10断片の5’末端及び3’末端とをそれぞれ導入するためにフォワード及びリバースプライマーを設計して合成した。PCR増幅の後、VHF10−リンカー−VLF10を含むPCR産物とpcDNA3.4発現ベクターをBsiWI及びBamHIで消化し、以前に構築した発現プラスミド、VHGITR1−リンカー−VLGITR1−リンカー−ヒンジ−リンカー−VHPD−L1−リンカー−VLPD−L1及びVHGITR10−リンカー−VLGITR10−リンカー−ヒンジ−リンカー−VHPD−L1−リンカー−VLPD−L1においてVHPD−L1−リンカー−VLPDーL1をコードするDNA断片を置き換えるのに使用した。消化した発現ベクター及びインサートを、QIAquick gel extraction Kitを用いてゲル精製(1%アガロース)し、続いて、Quick ligation(5分間、室温にて)によって互いに連結した。この手順はプラスミド(2)及び(3)をもたらした(図14)。
上述のように、対照プラスミド(2)及び(3)について、VHF10−リンカー−VLF10を単離するための2つのプライマーを設計した。フォワードプライマー(5’−3’)は、DNAの相補鎖の3’末端に結合するよう設計され、リバースプライマー(3’−5’)は、DNAの主鎖の3’末端に結合するように設計され、逆相補的であった。プライマーは約20bp長であり、最適融解温度は62〜65℃であり、±1℃を超えて逸脱しない。フォワードプライマー(BsiWI制限部位(番号1)を含む)及びリバースプライマー(BamHI制限部位(番号2)を含む)は、Genewizによって合成された。PCR反応のために、熱サイクルにおいて、100ngのDNAテンプレート(pcDNA3.1)を使用した。PCR生成物は、製造者のプロトコールに従って、QIAquick PCR Purification Kitによって精製し、1%アガロースゲルで解析した。
クローニング戦略
この実施例の目的は、以前に構築されたプラスミドにIgG1由来のCH2ドメインを導入し、VHGITR−リンカー−VLGITR−リンカー−ヒンジ−CH2−リンカー−VHPD−L1−リンカー−VLPD−L1の基本構造をもたらすことであった。CH2の付加は、エフェクター機能を付与し、三機能性tBsAbをもたらす。
GITR10−PDL1ベクターの変異導入は、製造者のプロトコールに従って、QuikChange Lightning Site−Directed Mutagenesis Kit(Aligent technologies(登録商標))を用いて達成された。各々がベクターの反対側の鎖に相補的な2つのオリゴヌクレオチドプライマーを合成した。両方のプライマーは、所望の変異としてHindIIIを含んだ。
ライゲーション生成物をヒートパルスによりXL10−Gold(登録商標)Ultracompetent細胞に形質転換した。これらの細胞を氷上でゆっくりと溶解した。各形質転換について、45μLの細胞を2μLのB−メルカプトエタノール及び1.5μLの対象のDNAと混合した。形質転換反応物を30分間インキュベートし、続いて42℃の水浴中で40秒間ヒートパルスした。0.5 mLのS.O.C.Medium(Life Technologies(登録商標))を各チューブに添加し、37℃で1時間インキュベートした。形質転換反応物をLB−アンピシリンプレート上で37℃において一晩増殖させた。
タンパク質発現のために、293Fヒト細胞株293FをLife Technologies(登録商標)より、293T接着細胞株をATCC細胞バンクより入手した。細胞に基づくELISAアッセイを目的として、細胞表面上にGITRを発現するためにMarasco LaboratoryにおいてCF2ーGITR細胞株を生成した。
293F細胞(ヒト胚腎臓細胞、HEK細胞に由来する)の懸濁培養物を、Erlenmeyerフラスコ(Corning(登録商標))及び293フリースタイル培地(Life Technologies(登録商標))中に37℃において5%CO2で維持した。細胞は、継続した増殖のために、対数増殖期で継代し、新鮮な培地により最適な密度(200,000細胞/mL)に希釈した。
接着性の293TまたはCF2−GITR細胞は、75cm2フラスコ(Cellstar)ならびに10%FBS(ウシ胎仔血清)(Life Technologies(登録商標))及び1%SP(ピルビン酸ナトリウム)(Life Technologies(登録商標))を補充したDMEM培地(Life Technologies(登録商標))中に37℃において5%CO2で維持した。継続した増殖のために、細胞は80〜100%コンフルエントで継代し、新鮮な培地により最適な播種密度(2×106細胞)に希釈した。
四量体二重特異性抗体(tBsAb)(αGITR1−αPD−1L1、αGITR10−αPD−L1、αGITR11−αPD−L1、αGITR14−αPD−L1、αGITR15−αPD−L1、αGITR17−αPDL1、及びαGITR10−αPD−L1(CH2を有する))ならびに対照抗体(αGITR1−F10、αGITR10−F10、F10−αPD−L1、αGITR IgG)の産生のために、293F細胞または293T細胞を、対応するプラスミドでトランスフェクトした。
トランスフェクションの1日前に、細胞を、300mLの全体積中6×105細胞/mLの最終濃度に継代した。トランスフェクションの日に、細胞密度は1.0×106〜1.4×106細胞/mLであった。対応するプラスミドをトランスフェクションのために調製した。トランスフェクション複合体の全体の電荷は、トランスフェクション試薬対DNAの比によって決定される。DNA骨格中のホスフェートによって寄与された負電荷は、トランスフェクション試薬の正電荷によって相殺される。これは、良好な複合体形成を可能にし、そして負に荷電した細胞膜によって、DNAに付与された静電反発力の中和を可能にした。プラスミド:PEIの1:1の比は、ポリマーのDNAに対する完全な結合を可能にし、そしてカーゴを保護するための完全な縮合が起こったが、過剰のPEIは、アニオン性細胞表面の阻害効果を克服するために重要である。細胞100万個ごとに、1μgのプラスミド及び3μgのPEIをトランスフェクションに使用し、それぞれを別個に15mLのOpti−MEM(低血清培地)(Life Technologies(登録商標))に希釈した。希釈したPEIをプラスミドに添加し、室温で20分間インキュベートした。中和効率は、PEI−DNA複合体への曝露時間とともに増加するが、脂質試薬に対して過度に長時間曝露することは有毒になる可能性がある。PEI/プラスミド複合体を293F懸濁細胞(1×106細胞/mL、フラスコ当たり300mL)に注ぎ入れ、37℃において140rpmで6日間インキュベートした。
PEI細胞を用いた293T HEKのトランスフェクションは、293F懸濁HEK細胞について上述したものと同一だが少し変更を加えたプロトコールに従った。トランスフェクションは、組織培養皿(200mm)に10%FBSを補充した希釈したDMEM培地中に80%コンフルエントで増殖している293T細胞に対して行った。40μgのDNAに対して、200μgのPEIを使用し(1:5の比率)、それぞれを別々に1mLのOpti−MEM(低血清培地)(Life Technologies(登録商標))中で別々に希釈した。希釈したPEIをプラスミドに添加し、室温で20分間保存した。細胞の解離及び死を防ぐためにDNA/PEI複合体を皿に静かに滴下した。次いで細胞を37℃で2日間インキュベートした。
二重特異性抗体のNi−NTA精製
293 HEK細胞の懸濁物を採取し、4℃において5000rpmで35分間遠心分離した。N末端6×Hisタグを介して二重特異性抗体を精製するために、ろ過した上清(0.22μmのPEV、Costar(登録商標))を、1mLのNi−NTAアガロース(Qiagen)と共に2時間(240rpm、室温)インキュベートした。上清を15mlのNi−NTA Sepharose重力流カラムに2回通した。洗浄後、ビーズを含むカラムを4カラム用量のNi−NTA洗浄緩衝液(0.02Mのイミダゾール、0.3MのNaCl、1MのTris HCl(pH=7.0))で洗浄し、タンパク質を13mLのNi−NTA溶離緩衝液(0.5Mのイミダゾール、0.3NaCl、0.02Tris HCl(pH=7.0))でゆっくり溶離した。溶離したタンパク質の緩衝液を、遠心フィルターユニット100,000MW(Amicon(登録商標))を用いてPBS緩衝液に交換した。tBsAbの収率は、NanoDrop ND−1000を用いて測定した。
αGITR IgG抗体を293 HEK細胞の懸濁液から採取し、4℃において、5000rpmで35分間遠心分離した。Fcドメインを介してαGITR IgG抗体を精製するために、ろ過した上清を1mLのプロテインA(GE Lifesciences)と共に2時間インキュベートし(室温、振とう)、次いで15mLの重力流カラム(Biorad)に2回通過させ、続いて洗浄のために10mLのPBSを通した。αGITR IgGを2mlのTEA(100nM)で溶離し、200μlのTris−HCl(1M、(pH=7))を溶離液に添加してTEAを中和した。追加の2mLのPBSをカラムに添加し、溶離したタンパク質と共にチューブに集めた。
SDS−PAGE解析
SDS−PAGE解析を用いて、NuPAGE NuPAGE(登録商標)テクニカルガイド(Invitrogen)に従ってタンパク質の純度を検証した。NuPAGE Bis−Tris Gel(4〜12%)(Novex)をMES SDSランニング緩衝液中で使用し、全タンパク質量は3μg〜5μgであった。タンパク質試料を、ドデシル硫酸塩を含む4×LDS試料緩衝液(Novex)と混合してタンパク質を変性させた。還元条件下において、タンパク質試料を100℃で10分間さらに煮沸した。次いで試料をMES SDS泳動緩衝液中でNovex Bis−Tris Gelに負荷した。ゲルをXcell SureLock Mini−Cell中、200Vで35分間泳動した後、simplyBlue(商標)Safe Stain(Novex)を用いたクマシーG−250染色で処理した。
Maxisorb96ウェルプレート(Costar(登録商標))を、PBS中の5μg/mLのPD−L1ウサギFc抗原及びCCR4タンパク質(陰性対照)100μLで室温において一晩コーティングした。次の日に、プレートをPBSで3回洗浄し、200μLのブロッキング溶液(PBS中2%BSA)によって室温で2時間ブロッキングした。プレートをPBSで3回洗浄した。様々な濃度で1×PBS中に調製した一次抗体、αGITR1−αPD−L1、αGITR10−αPD−L1、αGITR11−αPD−L1、αGITR14−αPD−L1、αGITR15−αPD−L1、αGITR17−αPD−L1、F10−αPD−L1 BsAB、及び市販の抗マウスPD−L1 mAb(Biolegend)をウェルに添加し(100μL)、室温で2時間インキュベートした。試験された抗体の最高濃度は1μg/mLであり、次いで1×105μg/mL希釈まで10倍で連続希釈した。各々の試料を、全ての濃度において三つ組で実施した。いくつかの対照を設定し、以下の表に列挙する(表2)。96ウェルプレート(Costar)を1×PBS緩衝液で3回洗浄した。二次抗体(6×His−HRP(Thermoscientific)及びヤギ抗マウスIgG Fc、HRPコンジュゲート(Thermoscientific)の溶液を1×PBSで希釈した(1:2000及び1:5000)。二次抗体(100μL)を各ウェルに添加し、そして室温で2時間インキュベートした。最後に、各ウェルをPBSで4回洗浄した。96ウェルプレートを100μLのTBM基質溶液(Thermoscientific)で発色させ、発色後、100μLのリン酸停止溶液(Thermoscientific)を添加した。終点ODデータをBio−Rad Benchmark Plusを用いて450nmで記録し、そしてMicroplate Manager 5.2.1ソフトウェアを用いて解析した。
細胞に基づくELISAのために、GITR+ CF2細胞に対する結合能の維持についてαGITR1−αPD−L1、αGITR10−αPD−L1、及びCH2を有するαGITR10−αPD−L1抗体を試験した。全部で4つのELISA実験が設定された。
GITR+ CF2細胞に対するαGITRの生物活性は、蛍光標識細胞分取FACS解析によって解析された。GITR+ CF2細胞及びGITR− CF2細胞を75cm2フラスコ(Cellstar)で、およそ80%コンフルエントに到達するまで増殖させた。PBS中0.25%トリプシン−EDTA(Life Technologies)を含む1:10希釈トリプシンを添加することによってそれらを解離し、そして再懸濁し、次いでFACS緩衝液(PBS、1%FBS、2mMのEDTA)中で96ウェル丸底プレートに添加した。次のステップで、αGITR1−αPD−L1及びαGITR10−αPD−L1を様々な濃度において、4℃で1時間添加した。試験された抗体の最高濃度は100μg/mLであり、次いで0.05μg/mL希釈まで2倍で連続希釈した。一次抗体はHisタグ Alexa Fluor 488コンジュゲート(Biotechne)によって検出した。二次抗体はPBS(Life Technologies)中に希釈して、各々のウェルに30分間添加した。次いで細胞をPBS緩衝液によって3回洗浄し、FACS緩衝液に再懸濁した。全部で10,000事象がFACSCaliburによって解析された。結果は、FlowJo 10.1ソフトウェアによって解析された。いくつかの対照が実施され、以下の表に列挙する。(表5)
GITR+ CF2細胞に対する、CH2を有するαGITR−αPDL1の、ADCCアッセイ
GITR+ CF2細胞に対する、CH2を有するαGITR−αPD−L1の抗体依存性細胞傷害を、ADCC Reporter Bioassay Complete Kit(WIL2−S)(Promega)を用いて解析し、製造者のプロトコールに従って実施した。目的は、CH2を有するαGITR10−αPD−L1をADCCについて試験することであった。アッセイは、Fcγ受容体及び応答エレメント駆動型ルシフェラーゼ遺伝子を有するADCCレポーター細胞(WIL2−S)を用いて実施された。
CH2を有するαGITR10−α−PDL1 tBsAbの補体依存性細胞傷害(CDC)の試験のために、構成細胞中でDNAに結合するCellTox Green Dye(Promega)を用いたCellTox(商標)Green Cytotoxicity assay(Promega)において、子ウサギ補体(Cedarlane Laboratories)を用いた。死細胞DNAに結合する色素によって生じる蛍光シグナルは細胞毒性に比例する。アッセイは、製造者のプロトコールに従って実施した。CellTox(商標)Green Cytotoxicity assay(Promega)を用いて実施されたアッセイの発色及び解析を除いて、補体依存性細胞傷害の試験のための実験手順及び設定は上述のCDC試験と同様であった。補体依存性細胞傷害について試験された抗体は、αGITR10−αPDL1及びCH2を有するαGITR10−α−PDL1四量体二重特異性抗体(tBsAb)であった。αGITR mAbは陽性対照として使用され、F10−αPD−L1は陰性対照として使用された。
発現ベクターの生成
全部で6つのベクターにおいて、(αGITR−αPD−L1)が構築されて、所望のtBsAbを産生し、追加の3つのベクターは、対照のAb(αGITR1−F10、αGITR10−F10、及びF10−αPD−L1)の産生のためであった。発現ベクターは、上述のクローニング戦略に従って生成した。
αGITR−αPD−L1タンパク質は293F HEK細胞において発現し、Ni−NTA精製によって単離された。αGITR IgGタンパク質はHEK293F細胞において発現し、プロテインA精製によって単離された。収率をNanoDrop分光光度計によって測定し、表6に列挙する。
tBsAb αGITR1−αPDL1、αGITR10−αPDL1、αGITR11−αPDL1、αGITR14−αPDL1、αGITR15−αPDL1、αGITR17−αPDL1、及びF10−αPD−L1の純度はSDS−PAGEによって解析された。3μg〜5μgのタンパク質試料をゲルに負荷し、電気泳動で分離し、クマシーブルーによって染色した。
αGITR−αPD−L1 BsAbの直接ELISAを、それらのPD−L1抗原に対する反応性を特性決定するために実施した。図19に示すように、PD−L1抗原に対する反応性は、全てのαGITR−αPD−L1 tBsAbにおいて観察することができたが、CCR4に対する非特異的な粘着性は見られなかった(示さず)。読み出しシグナルは、全ての濃度の全てのαGITR−αPD−L1 tBsAbについて非常に類似していた。最も高いELISAシグナルが最高濃度で測定された。さらに、αGITR−αPD−L1 tBsAb結合の吸光度値は市販のαPD−L1 mAbに対するものと同程度であり、強度シグナルはより低い濃度で減少した。ELISAは、高濃度では飽和を示さず、0.01mg/mL未満の濃度では非常に弱いシグナルを有する。
αGITR IgGの以前の研究では、αGITR1 IgG及びαGITR10 IgGが最良の特徴を有することが証明されており、そのため、ここでのプロジェクトでは以下の実験をαGITR10−αPD−L1及びαGITR1−αPD−L1 tBsAbに絞り込んだ。細胞に基づく酵素結合免疫吸着検査法(ELISA)は、GITR+ CF2細胞に対して種々の濃度のαGITR1−αPD−L1、αGITR10−αPD−L1を試験してそれらの反応性を解析するのに使用された。図20に示すように、GITR+ CF2に対する反応性は、αGITR1−αPD−L1及びαGITR10−αPD−L1抗体について観察することができた。αGITR1−αPD−L1及びαGITR10−αPD−L1のOD値は、それらのそれぞれの濃度に依存する。予想と一致して、より強いシグナルはより高い濃度で測定され、その後濃度が減少するにつれて徐々に減少した。
フローサイトメトリー解析は、GITR+ CF2細胞に対するαGITR1−αPD−L1及びαGITR10−αPD−L1抗体の結合を評価する(図23及び24)。結果は、両方の抗体(APC標識His−タグ Alexa Fluor 488で共染色)がGITR+ CF2に特異的に結合できることを示している。さらに、tBsAbはGITR− CF2に対して反応性を示さなかった(図34)。対照に示されるように、いくらかの非特異的結合が二次抗体によって引き起こされることに留意されたい(図34)。2つの抗体を互いに比較すると、それらが同一条件下で同様の結合を示すことが示される。したがって、さらなる特性決定のためにαGITR10−αPD−L1 tBsAbのみを選択した。αGITR1 IgG及びαGITR10 IgGの標準測定は、tBsAbと比較したときに同様の結合特性を明らかにした。
細菌発現ベクターの生成
以前の研究において、αGITR10 mAbが、最良の特徴を示すことが証明されており、そのため、CH2ドメインを含む新しいコンストラクトの改変のための発現ベクターとしてαGITR10−αPD−L1が選ばれた。ベクターは上述のクローニング戦略に従って生成され、以下の順番の遺伝子:VHGITR−リンカー−VLGITR−リンカー−ヒンジ−CH2−リンカー−VHPD−L1−リンカー−VLPD−L1をもたらした。
CH2を有するαGITR10−αPD−L1タンパク質は、293T HEK細胞において発現し、Ni−NTA精製によって単離された。合計100mLの培地は200ngのタンパク質収量をもたらした(NanoDrop解析)。CH2を有するGITR10−PDL1 tBsAbの純度をSDS−PAGEによって解析した(図28)。全部で3μgのタンパク質試料をゲルに負荷し、電気泳動で分離し、クマシーブルーによって染色した。注目すべきことに、非還元条件下で、特に注意を引く2つのバンドが存在する。上部のバンドは140kDaよりわずかに上にある。このバンドの量的優位性及びその見かけの分子サイズがCH2を有するαGITR10−αPD−L1 tBsAb(150kDa)の分子サイズとの近似性は、抗体産生の成功を示唆する。下部のバンドは80kDaの見かけの分子量を有し、したがって、二量体化しなかったCH2(75kDa)を含むかなりの量のタンデムscFvからなる可能性がある。還元条件下では、80kDaの1つのバンドしか見られず、これはtBsAbのタンデムscFv(75kDa)へのジスルフィド結合の還元を示唆する。
細胞に基づく酵素結合免疫吸着検査法(ELISA)は、GITR+CF2に対する、種々の濃度の、CH2を有するαGITR10−αPD−L1を試験してそれらのシグナル強度を解析するために実施された。
機能的データを確立するための最初の試みにおいて、補体依存性細胞傷害(CDC)及び抗体依存性細胞傷害(ADCC)を、CH2を有するαGITR−αPD−L1 BsAbについて試験した。しかし、結果は決定的ではなかった。
CH2を有するαGITR10−αPD−L1 BsAbは、GITR+ CF2細胞(標的細胞)及びWIL2−S(エフェクター細胞)を用いて(E/T=5:1)、ADCC活性について試験された。ADCCにおける抗体の生物活性は、NFAT経路活性化の結果として産生されるルシフェラーゼを通して定量化され、そしてエフェクター細胞におけるその活性は発光読み出しにより定量化された。ADCC解析において、αGITR10−αPD−L1及びCH2を有するαGITR10−αPD−L1は、驚くべき結果を示した(図30)。陰性対照F10−αPD−L1は、標的細胞及びエフェクター細胞のみと比較してADCCについて同様のシグナル強度を示し、様々な濃度に対して不偏である。一方、陽性対照αGITR IgGは、予想通り、より高い濃度で増加する値を示した。驚くべきことに、αGITR10−αPD−L1及びCH2を有するαGITR10−αPD−L1については、ADCCシグナル強度はより高い濃度で減少し、20μg/mLのtBsAbでの標的細胞及びエフェクター細胞のみのシグナルよりも実質的に低かった。
CH2を有するαGITR10−αPD−L1抗体は、GITRを発現するCF2細胞に対する補体依存性細胞傷害について、構成DNAに結合した蛍光CellTox Greenの量を測定することによって試験された。溶解の割合は、試料から得られたシグナルの強度の、完全に溶解したGITR+ CF2細胞からのシグナルの強度に対する比として計算される(図31)。
本発明は、それらの詳細な説明と共に記載されてきたが、上述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示することを意図し、それを限定することを意図しない。他の態様、利点、及び改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
Claims (44)
- 第1の抗原に対する第1の結合部位と第2の抗原に対する第2の結合部位とを含む二重特異性scFv断片の二量体である四価抗体分子であって、前記2つの結合部位が、リンカードメインを介して共に結合している、前記四価抗体分子。
- 前記scFv断片がタンデムscFvである、請求項1に記載の四価抗体分子。
- 前記リンカードメインが免疫グロブリンヒンジ領域アミノ酸配列を含む、請求項1に記載の四価抗体分子。
- 前記ヒンジ領域が、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のヒンジ領域である、請求項3に記載の四価抗体分子。
- 前記免疫グロブリンヒンジ領域アミノ酸配列が、フレキシブルリンカーアミノ酸配列に隣接している、請求項3または請求項4に記載の四価抗体分子。
- 前記リンカードメインが、免疫グロブリンFcドメインの少なくとも一部を含む、請求項1または請求項2に記載の四価抗体分子。
- 前記Fcドメインが、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のFcドメインである、請求項7に記載の四価抗体分子。
- 前記免疫グロブリンFcドメインの少なくとも一部がCH2ドメインである、請求項7または請求項8に記載の四価抗体分子。
- 前記Fcドメインが免疫グロブリンヒンジ領域アミノ酸配列のC末端に連結している、請求項7〜9のいずれか1項に記載の四価抗体分子。
- 前記ヒンジ領域が、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のヒンジ領域である、請求項10に記載の四価抗体分子。
- 前記リンカードメインが、一方の末端または両方の末端にフレキシブルリンカーアミノ酸配列を含む、請求項9または請求項10に記載の四価抗体分子。
- 以下をコードする核酸分子を含む、核酸コンストラクト:
第1の抗原に特異的に結合することのできる抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域、
第2の抗原に特異的に結合することのできる抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域、ならびに
リンカードメイン。 - 前記リンカードメインが免疫グロブリンヒンジ領域アミノ酸配列を含む、請求項14に記載の核酸コンストラクト。
- 前記ヒンジ領域が、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のヒンジ領域である、請求項15に記載の核酸コンストラクト。
- 前記リンカードメインが、免疫グロブリンFcドメインの少なくとも一部を含む、請求項14〜16のいずれか1項に記載の核酸コンストラクト。
- 前記Fcドメインが、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4のFcドメインである、請求項17に記載の核酸コンストラクト。
- 前記免疫グロブリンFcドメインの少なくとも一部がCH2ドメインである、請求項17または請求項18に記載の核酸コンストラクト。
- 前記Fcドメインが前記ヒンジ領域のC末端に連結している、請求項17〜19のいずれか1項に記載の核酸コンストラクト。
- 前記リンカードメインが、一方の末端または両方の末端にフレキシブルリンカーアミノ酸配列を含む、請求項14〜20のいずれか1項に記載の核酸コンストラクト。
- 請求項14〜22のいずれか1項に記載の核酸コンストラクトを含む、ベクター。
- 請求項23に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- T細胞、B細胞、濾胞性T細胞、またはNK細胞である、請求項24に記載の宿主細胞。
- 細胞内シグナル伝達ドメインと、膜貫通ドメインと、請求項1に記載の四価抗体分子を含む細胞外ドメインとを含む、キメラ抗原受容体(CAR)。
- 前記膜貫通ドメインが、前記細胞外ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に位置するストーク領域をさらに含む、請求項26に記載のCAR。
- 前記膜貫通ドメインがCD28を含む、請求項26に記載のCAR。
- 前記膜貫通ドメインと前記細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置する1つ以上の追加の共刺激分子をさらに含む、請求項26に記載のCAR。
- 前記共刺激分子が、CD28、4−1BB、ICOS、またはOX40である、請求項29に記載のCAR。
- 前記細胞内シグナル伝達ドメインがCD3ゼータ鎖を含む、請求項26に記載のCAR。
- その細胞表面膜上に、請求項26〜31のいずれか1項に記載のキメラ抗原受容体を発現し、それを担持する、遺伝子改変された細胞。
- T細胞またはNK細胞である、請求項32に記載の遺伝子改変された細胞。
- 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、請求項33に記載の遺伝子改変された細胞。
- CD4+細胞とCD8+細胞との混合した集団を含む、請求項34に記載の遺伝子改変された細胞。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載の四価抗体分子を投与する段階を含む、疾患または障害を治療するための方法。
- 前記疾患または障害がCNS関連疾患または障害である、請求項36に記載の方法。
- 前記CNS関連疾患または障害がCNSがんである、請求項37に記載の方法。
- 前記CNSがんが膠芽細胞腫(GBM)である、請求項38に記載の方法。
- 前記CNS関連疾患または障害が神経変性疾患である、請求項37に記載の方法。
- 前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、アルツハイマー病、またはハンチントン病である、請求項40に記載の方法。
- 前記四価抗体分子が、CNS輸送受容体を認識し、及び/またはそれにより結合される、請求項37〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 前記CNS輸送受容体が、トランスフェリン受容体(TfR)、VCAM−1、CD98hc、またはインスリン受容体である、請求項42に記載の方法。
- 前記四価抗体分子が、血液脳関門を通過する輸送を増強する、請求項37〜42のいずれか1項に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023069848A JP2023093642A (ja) | 2016-10-14 | 2023-04-21 | モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662408271P | 2016-10-14 | 2016-10-14 | |
US62/408,271 | 2016-10-14 | ||
PCT/US2017/056814 WO2018071913A2 (en) | 2016-10-14 | 2017-10-16 | Modular tetrameric bispecific antibody platform |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023069848A Division JP2023093642A (ja) | 2016-10-14 | 2023-04-21 | モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019533675A true JP2019533675A (ja) | 2019-11-21 |
JP2019533675A5 JP2019533675A5 (ja) | 2020-11-26 |
JP7269167B2 JP7269167B2 (ja) | 2023-05-08 |
Family
ID=60327374
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019520024A Active JP7269167B2 (ja) | 2016-10-14 | 2017-10-16 | モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム |
JP2023069848A Pending JP2023093642A (ja) | 2016-10-14 | 2023-04-21 | モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023069848A Pending JP2023093642A (ja) | 2016-10-14 | 2023-04-21 | モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20200017588A1 (ja) |
EP (1) | EP3526257A2 (ja) |
JP (2) | JP7269167B2 (ja) |
CN (1) | CN110214152A (ja) |
AU (1) | AU2017341936A1 (ja) |
CA (1) | CA3038504A1 (ja) |
WO (1) | WO2018071913A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI797609B (zh) * | 2020-05-15 | 2023-04-01 | 大陸商三生國健藥業(上海)股份有限公司 | 抗pd-1和pd-l1的四價雙特異性抗體 |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3049689A1 (en) * | 2017-02-06 | 2018-08-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for augmenting antibody mediated receptor signaling |
EP3880247A4 (en) * | 2018-11-13 | 2022-10-26 | JN Biosciences, LLC | BISPECIFIC ANTIBODIES TO ACTIVATE IMMUNE CELLS |
EP3902834A4 (en) * | 2018-11-30 | 2022-08-24 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | HETERODIMERIC COMPOSITIONS OF SPECIFIC AND TETRAVALENT ANTIBODIES, AND USES THEREOF |
CN113563473A (zh) * | 2020-04-29 | 2021-10-29 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 四价双特异性抗体、其制备方法和用途 |
WO2023034288A1 (en) | 2021-08-31 | 2023-03-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for treatment of autoimmune disorders and cancer |
WO2023097024A1 (en) | 2021-11-24 | 2023-06-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies against ctla-4 and methods of use thereof |
WO2023172694A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-09-14 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Genetically engineered b cells and methods of use thereof |
WO2024039672A2 (en) | 2022-08-15 | 2024-02-22 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies against msln and methods of use thereof |
WO2024039670A1 (en) | 2022-08-15 | 2024-02-22 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antibodies against cldn4 and methods of use thereof |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006074399A2 (en) * | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Multispecific binding molecules comprising connecting peptides |
JP2013515509A (ja) * | 2009-12-29 | 2013-05-09 | エマージェント プロダクト デベロップメント シアトル, エルエルシー | ヘテロダイマー結合タンパク質およびその使用 |
WO2013096346A1 (en) * | 2011-12-22 | 2013-06-27 | Development Center For Biotechnology | Bispecific t-cell activator antibody |
JP2015513394A (ja) * | 2012-02-13 | 2015-05-14 | シアトル チルドレンズ ホスピタル ドゥーイング ビジネ | 二重特異性キメラ抗原受容体およびその治療的使用 |
WO2015197582A1 (en) * | 2014-06-27 | 2015-12-30 | Innate Pharma | Monomeric multispecific antigen binding proteins |
JP2016516049A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-06-02 | メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター | 多量体化技術 |
JP2016526878A (ja) * | 2013-05-20 | 2016-09-08 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗トランスフェリン受容体抗体及び使用方法 |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5892019A (en) | 1987-07-15 | 1999-04-06 | The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services | Production of a single-gene-encoded immunoglobulin |
JP2005518336A (ja) * | 2001-06-26 | 2005-06-23 | イムクローン システムズ インコーポレイティド | Vegf受容体に結合する二重特異性抗体 |
EP1697415A1 (en) | 2003-11-12 | 2006-09-06 | Biogen Idec MA Inc. | NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO |
WO2005060520A2 (en) | 2003-11-25 | 2005-07-07 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | ANTIBODIES AGAINST SARS-CoV AND METHODS OF USE THEREOF |
EP1695093A1 (en) * | 2003-12-05 | 2006-08-30 | multimmune GmbH | Compositions and methods for the treatment and diagnosis of neoplastic and infectious diseases |
WO2006089141A2 (en) | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Dana-Farber Cancer Institute | Antibodies against cxcr4 and methods of use thereof |
CA2632094C (en) | 2005-12-02 | 2015-01-27 | Wayne A. Marasco | Carbonic anhydrase ix (g250) antibodies and methods of use thereof |
US20110038935A1 (en) | 2007-12-06 | 2011-02-17 | Marasco Wayne A | Antibodies against influenza virus and methods of use thereof |
US8962806B2 (en) | 2007-12-28 | 2015-02-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Humanized monoclonal antibodies and methods of use |
EP2575882B1 (en) | 2010-06-02 | 2017-11-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Humanized monoclonal antibodies and methods of use |
EP2543680A1 (en) * | 2011-07-07 | 2013-01-09 | Centre National de la Recherche Scientifique | Multispecific mutated antibody Fab fragments |
LT2794658T (lt) * | 2011-12-19 | 2017-05-10 | Synimmune Gmbh | Bispecifinė antikūno molekulė |
JP6411329B2 (ja) | 2012-05-04 | 2018-10-24 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート,インコーポレイテッド | 親和性成熟抗ccr4ヒト化モノクローナル抗体および使用法 |
WO2014055897A2 (en) | 2012-10-04 | 2014-04-10 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Human monoclonal anti-pd-l1 antibodies and methods of use |
BR112015021341B1 (pt) | 2013-03-15 | 2023-03-28 | Dana-Farber Cancer Institute Inc. | Anticorpos monoclonais humanizados isolados neutralizantes de flavivírus e usos terapêuticos dos mesmos |
SG11201605093VA (en) * | 2013-12-23 | 2016-07-28 | Zymeworks Inc | Antibodies comprising c-terminal light chain polypeptide extensions and conjugates and methods of use thereof |
AU2015231164B2 (en) | 2014-03-19 | 2020-04-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Immunogenetic restriction on elicitation of antibodies |
US10131704B2 (en) | 2014-04-25 | 2018-11-20 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Middle east respiratory syndrome coronavirus neutralizing antibodies and methods of use thereof |
AU2015327781A1 (en) | 2014-10-03 | 2017-04-20 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR) antibodies and methods of use thereof |
AU2015328273B2 (en) | 2014-10-06 | 2020-09-17 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Humanized CC chemokine receptor 4 (CCR4) antibodies and methods of use thereof |
CN107750253B (zh) | 2015-04-08 | 2022-10-04 | 达纳-法伯癌症研究所公司 | 人源化流感单克隆抗体及其使用方法 |
US20220047634A1 (en) * | 2018-11-30 | 2022-02-17 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Chimeric antigen receptor factories and methods of use thereof |
-
2017
- 2017-10-16 WO PCT/US2017/056814 patent/WO2018071913A2/en unknown
- 2017-10-16 CN CN201780067582.7A patent/CN110214152A/zh active Pending
- 2017-10-16 EP EP17798026.5A patent/EP3526257A2/en active Pending
- 2017-10-16 CA CA3038504A patent/CA3038504A1/en active Pending
- 2017-10-16 JP JP2019520024A patent/JP7269167B2/ja active Active
- 2017-10-16 AU AU2017341936A patent/AU2017341936A1/en active Pending
- 2017-10-16 US US16/340,878 patent/US20200017588A1/en active Pending
-
2023
- 2023-04-21 JP JP2023069848A patent/JP2023093642A/ja active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006074399A2 (en) * | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Multispecific binding molecules comprising connecting peptides |
JP2013515509A (ja) * | 2009-12-29 | 2013-05-09 | エマージェント プロダクト デベロップメント シアトル, エルエルシー | ヘテロダイマー結合タンパク質およびその使用 |
WO2013096346A1 (en) * | 2011-12-22 | 2013-06-27 | Development Center For Biotechnology | Bispecific t-cell activator antibody |
JP2015513394A (ja) * | 2012-02-13 | 2015-05-14 | シアトル チルドレンズ ホスピタル ドゥーイング ビジネ | 二重特異性キメラ抗原受容体およびその治療的使用 |
JP2016516049A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-06-02 | メモリアル スローン−ケタリング キャンサー センター | 多量体化技術 |
JP2016526878A (ja) * | 2013-05-20 | 2016-09-08 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗トランスフェリン受容体抗体及び使用方法 |
WO2015197582A1 (en) * | 2014-06-27 | 2015-12-30 | Innate Pharma | Monomeric multispecific antigen binding proteins |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
FEBS LETTERS, vol. Vol. 432, No. 1-2, JPN5020000405, July 1998 (1998-07-01), pages 45 - 49, ISSN: 0004805932 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI797609B (zh) * | 2020-05-15 | 2023-04-01 | 大陸商三生國健藥業(上海)股份有限公司 | 抗pd-1和pd-l1的四價雙特異性抗體 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018071913A3 (en) | 2018-05-24 |
CN110214152A (zh) | 2019-09-06 |
JP7269167B2 (ja) | 2023-05-08 |
JP2023093642A (ja) | 2023-07-04 |
US20200017588A1 (en) | 2020-01-16 |
AU2017341936A1 (en) | 2019-04-04 |
CA3038504A1 (en) | 2018-04-19 |
WO2018071913A2 (en) | 2018-04-19 |
EP3526257A2 (en) | 2019-08-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7269167B2 (ja) | モジュラー四価二重特異性抗体プラットフォーム | |
JP7305538B2 (ja) | 細胞によって発現される生物活性を調節する結合分子 | |
AU2018393424B2 (en) | Triabody, preparation method and use thereof | |
CN111133003A (zh) | 新型双特异性多肽复合物 | |
WO2017159287A1 (ja) | 癌の治療に用いるための細胞傷害誘導治療剤 | |
JP2023513003A (ja) | Cd28シングルドメイン抗体ならびにその多価および多重特異性の構築物 | |
JP2022516557A (ja) | 修飾il-2ポリペプチドを含むポリペプチド及びその使用 | |
KR20170128234A (ko) | Ror1에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체 | |
BRPI0611194B1 (pt) | Moléculas de ligação anti-cd16 | |
TW202128756A (zh) | 用於癌症治療之多重專一性結合蛋白 | |
JP6175590B1 (ja) | 癌の治療に用いるための細胞傷害誘導治療剤 | |
KR20220050971A (ko) | 신규 항-cd39 항체 | |
AU2018241535A1 (en) | Tumor antigen presentation inducer constructs and uses thereof | |
JP7036729B2 (ja) | 治療用抗cd9抗体 | |
JP7462611B2 (ja) | Ox40結合性ポリペプチド及びその使用 | |
JP7003295B2 (ja) | Lag-3に特異的に結合する単クローン抗体及びその用途 | |
TW202216745A (zh) | 包含經修飾il-2多肽之多肽及其用途 | |
KR20200042467A (ko) | 이중특이적 항pd-1 tim3 항체 | |
KR20230113752A (ko) | Cd39 및 tgf베타를 표적화하는 신규 접합체 분자 | |
CA3201518A1 (en) | Bi-functional molecules | |
WO2022006451A2 (en) | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins and pd-1 antibodies | |
CN114127112A (zh) | 与t细胞结合的多功能分子及其治疗自身免疫性病症的用途 | |
WO2023133424A2 (en) | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins and anti-pd-1 fusion peptides | |
TW202334193A (zh) | 靶向γδ T細胞之經修飾IL-2多肽及其用途 | |
KR20230156727A (ko) | 항-vsig4 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20190412 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201013 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201013 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20210622 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210730 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210811 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20211109 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220214 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220622 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220921 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221222 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230323 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230421 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7269167 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |