WO2020101543A1 - Производные нестероидных противовоспалительных средств - Google Patents

Производные нестероидных противовоспалительных средств Download PDF

Info

Publication number
WO2020101543A1
WO2020101543A1 PCT/RU2019/050212 RU2019050212W WO2020101543A1 WO 2020101543 A1 WO2020101543 A1 WO 2020101543A1 RU 2019050212 W RU2019050212 W RU 2019050212W WO 2020101543 A1 WO2020101543 A1 WO 2020101543A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
dopamine
inflammatory
derivatives
mmol
cells
Prior art date
Application number
PCT/RU2019/050212
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Владимир Виленович БЕЗУГЛОВ
Игорь Викторович СЕРКОВ
Игорь Иванович ЛЮБИМОВ
Наталья Михайловна ГРЕЦКАЯ
Михаил Геннадьевич АКИМОВ
Игорь Юрьевич ТЕТЕРИН
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Гурус БиоФарм"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Гурус БиоФарм" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Гурус БиоФарм"
Publication of WO2020101543A1 publication Critical patent/WO2020101543A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/30—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by doubly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C39/00—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C39/02—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring monocyclic with no unsaturation outside the aromatic ring
    • C07C39/06—Alkylated phenols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D209/26—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with an acyl radical attached to the ring nitrogen atom

Definitions

  • the invention relates to the field of medical chemistry and can be used in medicine as anti-inflammatory, neuroprotective agents, as well as cytostatic agents for use in oncology by using derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs containing an additional functional structural element.
  • Nonsteroidal anti-inflammatory drugs are an extensive group of drugs used to reduce pain, inflammation of various etiologies and as an antipyretic. NSAIDs differ in chemical structure of the active substance, the enzyme that they inhibit, as well as the duration of action.
  • salicylates acetylsalicylic acid (aspirin) - one of the best-selling over-the-counter medicines, like other salicylic acid derivatives - salicylamide, diflunisal, etc .;
  • rheumatoid arthritis arthritis, osteoarthritis, gout, dysmenorrhea, migraine, metastatic bone pain, intestinal obstruction, renal colic, postoperative pain, dental procedures, etc.
  • NSAIDs have been used in combination chemotherapy regimens for oncological diseases (Umar, A., Steele, V. E., Menter, DG, & Hawk, ET (2016). Mechanisms of nonsteroidal anti-inflammatory drugs in cancer prevention. Seminars in Oncology, 43 (1), 65-77. doi: 10.1053 / j.seminoncol.2015.09.09.010).
  • HI 1BC The principle of action of HI 1BC is based on the inhibition of the enzyme responsible for prostaglandin biosynthesis - cyclooxygenase (COX-1 or COX-2).
  • COX-1 or COX-2 the enzyme responsible for prostaglandin biosynthesis - cyclooxygenase
  • all NSAIDs are divided into selective and non-selective.
  • the most famous non-selective NSAIDs, such aspirin, ibuprofen, diclofenac, etc. are widely available in most countries of the world, dispensed without prescription and well tolerated by patients, however, in case of prolonged use (for example, with rheumatoid arthritis), the main adverse effects of NSAIDs.
  • the main side effects include, firstly, an ulcerogenic effect (the ability to damage the mucous membrane of the stomach and duodenum) that occurs due to inhibition of the biosynthesis of gastrocytoprotective prostaglandins.
  • an ulcerogenic effect the ability to damage the mucous membrane of the stomach and duodenum
  • Short-term use of NSAIDs can cause indigestion, while long-term use, especially at high doses, can lead to gastric ulcer and stomach bleeding.
  • enteric NSAID dosage forms can cause serious bowel damage (SostresC., CarlaJ., GargalloC.J., LanasA. Nonsteroidal anti-inflammatory drugs and upper and lower gastrointestinal mucosal damage. ArthritisRes.Ther., 2013.15 (15 suppl3) : p. S3).
  • vasoconstriction vasoconstriction
  • a reversible form of renal failure due to non-specific blocking of cyclooxygenase, which with prolonged use of NSAIDs leads to acute renal failure and acute tubular necrosis.
  • a modified H11BC consists of using several pharmacological targets to increase the efficacy and safety of such a drug.
  • the substances claimed in the present invention belong to the second group of modified H11BC.
  • ibuprofen and amino alcohols are known, in particular the amide of ibuprofen and aminoethanol (Zhong, Guangxiang; Chen, Lulu; Jiang, Jiansong, Assignee: Zhejiang University of Technology, Peop. Rep. China, CN 101531611, CN 2009-10096554 Mar 6, 2009) treatment of ibuprofen with thionyl chloride, followed by condensation of the resulting acid chloride with aminoethanol.
  • Amides of ibuprofen and indomethacin and aminoethanol are also described in open sources, which are then converted to methacrylate derivatives followed by controlled polymerization (Davaran, S., & Entezami, A. A. (1997).
  • Acrylic type polymers containing ibuprofen and indomethacin with difunctional spacer group synthesis and hydrolysis. Journal of Controlled Release, 47 (1), 41-49. doi: 10.1016 / s0168-3659 (96) 01614-8).
  • Ibuprofen amide with gamma-aminobutyric acid was used to synthesize bifunctional ibuprofen derivatives with anti-inflammatory properties and the ability to inhibit the pain receptor TRPV1 (Yan L., Pan M., Fu M., Wang J., Huang W., Qian H. Design, synthesis and biological evaluation of novel analgesic agents targeting both cyclooxygenase and TRPV1. BioorgMedChem. 2016 Feb 15; 24 (4): 849-57. doi: 10.1016 / j.bmc.2016.01.009).
  • Derivatives of dopamine attached through a linker consisting of gamma-aminobutyric acid or aminoethanol to prostaglandin E2 are also known (Beyaklov V.V., Gretskaya N.M., Akimov MG, Zinchenko G.N., Tukhovskaya E.A. ., Murashev AN Derivatives of prostaglandin with anti-inflammatory and analgesic activity, RF Patent N ° 2568603, Application N ° 2015100913, priority dated January 15, 2015, published November 20, 2015, Bull. * ⁇ ° 32.)
  • the CAS register lists the structures of amides of non-steroidal anti-inflammatory drugs and dopamine (in particular, for ibuprofen amide and dopamine CAS N ° 1007698-71-6), however, there are no references to sources describing synthesis and biological activity of compounds of this type. Thus, any biological activity of these compounds, including anti-inflammatory activity, is unknown from the prior art.
  • the objective of the invention is the expansion of the range of biologically active derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs with anti-inflammatory effect.
  • the problem is solved by the synthesis of amide derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs (H11BC) containing a carboxyl group, for example, but not limited to, diclofenac, ibuprofen, naproxen, ketoprofen, sulindac, ketorolac, aceclofenac, indomethacin, in which the amide amamino gamino presents acid substituted with a dopamine residue.
  • H11BC non-steroidal anti-inflammatory drugs
  • an object of this invention are amide derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs of General formula (I):
  • NSAID non-steroidal anti-inflammatory drug
  • the present invention also includes amide derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs of the general formula (I):
  • R the remainder of a non-steroidal anti-inflammatory drug containing a carboxyl group and attached by an amide bond
  • X CHg, which have anti-inflammatory, cytotoxic and neuroprotective activity.
  • the anti-inflammatory agent is diclofenac, ibuprofen, naproxen, ketoprofen, sulindac, ketorolac, aceclofenac, indomethacin.
  • the present invention also includes the use of the compounds of the invention as an anti-inflammatory agent.
  • Substituted means that a specific group or residue includes one or more substituents other than a hydrogen atom.
  • Residue means a fragment of a molecule with one or more removed hydrogen atoms.
  • Matture means the joint inclusion of two or more substances without the formation of chemical bonds, and the physical properties of each of the components remain unchanged.
  • “Pharmaceutically acceptable excipient” means that the component used to prepare the dosage form of the claimed substances will not harm the human body.
  • “Pharmaceutically acceptable solvent” means that the solvent will not harm the human body when a solution of the inventive substance is formed.
  • the substances of the present invention can be synthesized by methods known from the field of chemistry. Some processes for the production of specific substances of the present invention are illustrated in the diagrams given in the examples.
  • inventive substances can be used in the form of a mixture with pharmaceutically acceptable excipients for the formation of tablets, capsules, pills, as well as in the form of gels or solutions in pharmaceutically acceptable solvents.
  • inventive substances in these forms can be administered orally, intranasally or parenterally.
  • Biological effects of the claimed substances include anti-inflammatory effects, cytotoxic effects for tumor cells and neuroprotective effects in neurotoxicity models.
  • the objective of this invention is achieved by the synthesis of amide derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs containing a carboxyl group, for example, but not limited to, diclofenac, ibuprofen, naproxen, ketoprofen, sulindac, ketorolac, aceclofenac, indomethacin, in which the amide part is represented by amino-ethanol aminobutyric acid substituted with a dopamine residue, which have anti-inflammatory, cytotoxic and neuroprotective effects.
  • amide derivatives of non-steroidal anti-inflammatory drugs containing a carboxyl group for example, but not limited to, diclofenac, ibuprofen, naproxen, ketoprofen, sulindac, ketorolac, aceclofenac, indomethacin, in which the amide part is represented by amino-ethanol aminobutyric acid substituted with a dopamine residue, which have anti-inflammatory, cytotoxic and neuroprotective effects.
  • Example 1 The conjugate of ibuprofen, gamma-aminobutyric acid and dopamine (IBU-GABA-DA)
  • GABA gamma-aminobutyric acid
  • Example 2 The conjugate of aceclofenac, gamma-aminobutyric acid and dopamine (ACEK-GABA-DA)
  • Ketorolac, gamma-aminobutyric acid and dopamine conjugate KTR-GABA-DA
  • ketoprofen dissolved in 5000 ⁇ l of acetonitrile, 77 mg (0.47 mmol) of 1, G-carbonyldimidazole (I, G-CDI) was added. It was stirred at room temperature for 1 h. Then, 166 mg (0.47 mmol) of GABA-DA in the form of a salt with trifluoroacetic acid and 65 ⁇ l (0.47 mmol) of Et3N in 1 ml of DMF were added, and stirred for 1.5 h at room temperature.
  • Example 4 The conjugate of ibuprofen, ethanolamine and dopamine (IBU-EA-DA)
  • the reaction mixture was evaporated in vacuo, the residue was dissolved in 200 ml of ethyl acetate and washed with 2N sodium bisulfate (200 ml), water (2x100 ml), brine, dried over anhydrous sodium sulfate.
  • the drying agent is filtered off, the filtrate is evaporated in vacuo of a water-jet pump.
  • the residue was purified by silica gel column chromatography (SilicaGel 60) in a chloroform-methanol gradient system. The fractions containing the product (control is carried out using TLC) are combined, the solvent is evaporated in vacuo. 1.61 g of Boc-GABA-DA are obtained, yield 62%.
  • NAP-DA Naproxen-Dopamine Conjugate
  • the reaction mixture was evaporated, the residue was dissolved in 50 ml of ethyl acetate and washed with 2M sodium bisulfate (20 ml), water (2x20 ml), brine, dried over anhydrous sodium sulfate.
  • the dryer is filtered off, the filtrate is evaporated on a rotary evaporator in a vacuum water-jet pump.
  • the residue was purified by silica gel column chromatography (SilicaGel 60) in a chloroform-methanol gradient system. The fractions containing the product (control is carried out using TLC) are combined, the solvent is evaporated in vacuo. 135 mg of aceclofenac-dopamine conjugate are obtained, 49% yield.
  • the RAW-264.7 cell line is monocytes / macrophages isolated from ascites fluid of AMLV-induced mouse leukemia.
  • lipopolysaccharide stimulates the bacterial cell wall, the cells respond according to the inflammatory type, throwing various mediators into the environment - indicators of inflammation, in particular nitric oxide.
  • a change in the level of this mediator is an indicator of the pro- or anti-inflammatory effect of the compounds.
  • RAW-264.7 cells were purchased at the cell bank of the Institute of Cytology of St. Russia. Cells were incubated at 95% humidity, in an atmosphere of 5% COg, at a temperature of 37 ° C. Cultivation was carried out in DMEM medium containing 7% FBS, 2 mM glutamine, 100 u / ml penicillin, 100 ⁇ g / ml streptomycin and 0.25 ⁇ g / ml amphotericin B. Cells were reseeded every 48-72 hours. For suspension, cells were incubated in Versene solution in within 2-3 minutes in Trypsin-EDTA solution (0.25%).
  • Cells were scattered at 100 thousand in wells of a 96-well plate in 100 ⁇ l of medium. An inflammatory response was induced using 1 ⁇ g / ml lipopolysaccharide in a culture medium. An aliquot of a standard solution of the test substances in DMSO was added to the medium for inducing an inflammatory response with stimulants and the culture medium in the wells was replaced with the resulting solution. Incubated for 20 hours. After that, an aliquot of the medium was taken from each well, and the NO concentration was determined by the modified Gris method.
  • A549 lung carcinoma cells were purchased from the cell bank of the Institute of Cytology of St. Russia. Cells were incubated at 95% humidity, in an atmosphere of 5% COg, at a temperature of 37 ° C. Cultivation was carried out in DMEM medium containing 7% FBS, 2 mM glutamine, 100 u / ml penicillin, 100 ⁇ g / ml streptomycin and 0.25 ⁇ g / ml amphotericin B. Cells were re-plated every 48-72 hours.
  • MTT reagent 0.5 mg / ml MTT, 3.5 mg / ml D-glucose in Hanks solution
  • DMSO DMSO
  • the most active compound in this test was ibuprofen amide with dopamine (IBU-DA), the semi-legal concentration for which was 29.81 ⁇ 0.5 ⁇ M.
  • Amides of diclofenac and indomethacin also showed cytotoxic activity in relation to this type of cancer cells in the LC50 range of 40–60 ⁇ M, while the initial NSAIDs were inactive in this test.
  • indomethacin derivatives were significantly more active than the original indomethacin.
  • the LC50 values for INDO-DA and INDO-GABA-DA were 72.1 ⁇ 1.5 and 32.3 ⁇ 2 ⁇ M, respectively, while for indomethacin this value significantly exceeded 100 ⁇ M. It should be noted that the introduction of a fragment of gamma-aminobutyric acid into the structure of the dopamine derivative of indomethacin more than doubled the cytotoxic activity of INDO-GABA-DA in relation to C6 cells.
  • Example 10 Neuroprotective effect of NSAID derivatives with dopamine.
  • SH-SY5Y human neuroblastoma cells are used as a model for testing the neuroprotective potential of chemical compounds.
  • Cells are acquired in the ATCC cell culture collection. Cells were incubated at 95% humidity, in an atmosphere of 5% COg, at a temperature of 37 ° C. Cultivation was carried out in DMEM medium containing 7% FBS, 2 mm glutamine, 100 u / ml penicillin, 100 ⁇ g / ml streptomycin and 0.25 ⁇ g / ml amphotericin B.
  • Ibuprofen dopamine derivatives were also active in the model of chemical hypoxia on SH-SY5Y cells induced by the addition of incubation medium
  • CoCbbNgO 425 ⁇ M.
  • IBU-DA and IBU-GABA-DA ECso values were 18.5 and 55.8 ⁇ M, respectively.
  • the above examples show that the claimed substances have anti-inflammatory, cytotoxic activity in relation to cancer cells, and also have a neuroprotective effect on cells of the nervous system.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицинской химии, и может найти применение в медицине в качестве противовоспалительных, нейропротективных средств, а также в качестве цитостатических агентов для применения в онкологии, путём использования производных нестероидных противовоспалительных средств (НПВС), содержащих дополнительный функциональный структурный элемент.

Description

Производные нестероидных противовоспалительных средств
Область техники
Изобретение относится к области медицинской химии и может найти применение в медицине в качестве противовоспалительных, нейрозащитных средств, а также в качестве цитостатических агентов для применения в онкологии путём использования производных нестероидных противовоспалительных средств, содержащих дополнительный функциональный структурный элемент.
Уровень техники
Нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) представляют собой обширную группу лекарственных препаратов, применяемых для снижения болевого синдрома, воспалений различной этиологии и в качестве жаропонижающего средства. НПВС различаются между собой по химической структуре действующего вещества, ферменту, который они ингибируют, а также продолжительности действия.
Выделяют несколько подгрупп НПВС:
• салицилаты ацетилсалициловая кислота (аспирин) - один из самых продаваемых лекарственных препаратов безрецептурного отпуска, как и другие производные салициловой кислоты - салициламид, дифлунизал и др.;
• производные фенилуксусной кислоты - диклофенак, ацеклофенак, сулиндак, кетеролак;
• производные индолилуксусной кислоты - индометацин;
• производные пропионовой кислоты, имеют окончание «-профен» - кетопрофен, ибупрофен, флуноксапрофен, фенопрофен и др.;
• производные антраниловой кислоты, имеют окончание «-фенамовая кислота» - мефенамовая кислота, флуфенамовая кислота, меклофенамовая кислота и др.;
• препараты из группы «оксикамов» - дроксикам, мелоксикам, пироксикам, теноксикам и др.;
• пиразолоны - метамизол (анальгин), клофезон, кебузон, фенилбутазон и др.;
• коксибы - селективные ингибиторы циклооксигеназы-2 - лумиракоксиб, целекоксиб, вальдекоксиб и др.
Спектр применения препаратов в тактике лечения достаточно обширный: ревматоидный артрит, остеоартрит, подагра, дисменорея, мигрень, метастазирующие боли в костях, кишечная непроходимость, почечные колики, послеоперационные боли, стоматологические процедуры и т.д. В последнее время НПВС стали применять в схемах комбинированной химиотерапии при онкологических заболеваниях (Umar, A., Steele, V. E., Menter, D. G., & Hawk, E. T. (2016). Mechanisms of nonsteroidal anti-inflammatory drugs in cancer prevention. Seminars in Oncology, 43(1), 65-77. doi: 10.1053/j.seminoncol.2015.09.010). Принцип действия HI 1BC основан на ингибировании фермента, ответственного за биосинтез простагландинов - циклооксигеназу (СОХ-1 или СОХ -2). В зависимости от того, ингибируют ли препараты оба фермента или преимущественно только один фермент (СОХ-1 или СОХ-2), все НПВС делятся на селективные и неселективные. Наиболее известные неселективные НПВС, такие как аспирин, ибупрофен, диклофенак и т.д., широко доступны в большинстве стран мира, отпускаются без рецепта и достаточно хорошо переносятся пациентами, однако в случае длительного применения (например, при ревматоидном артрите) необходимо учитывать основные побочные эффекты НПВС.
К основным побочным эффектам можно отнести, во-первых, ульцерогенное действие (способность повреждать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки), возникающее за счет ингибирования биосинтеза гастроцитопротекторных простагландинов. Кратковременное применение НПВС может вызвать расстройство желудка, в то время как длительное применение, особенно в высоких дозах, может приводить к язвенной болезни желудка и желудочным кровотечениям. Кроме того, кишечнорастворимые лекарственные формы НПВС могут вызывать серьёзные поражения кишечника (SostresC., CarlaJ., GargalloC.J., LanasA. Nonsteroidal anti-inflammatory drugs and upper and lower gastrointestinal mucosal damage. ArthritisRes.Ther., 2013. 15(suppl3): p. S3).
Во-вторых, при селективном ингибировании СОХ-2 возникают серьезные осложнения сердечно-сосудистой системы вплоть до смертельных исходов. Именно поэтому ряд препаратов (например, Рофекоксиб) были сняты с производства и применения, а в отношении других (например, Целекоксиб, Валдекоксиб, Эторикоксиб и др.) проводятся дополнительные клинические исследования с целью изучения безопасности их применения.
В-третьих, токсическое воздействие на почки - вазоконстрикция (сужение сосудов) и обратимая форма почечной недостаточности из-за неспецифической блокировки циклооксигеназы, что при продолжительном применении НПВС приводит к острой почечной недостаточности и острому тубулярному некрозу.
Одним из эффективных способов снижения побочных эффектов от действия НПВС является химическая модификация их структуры. С одной стороны, применяются временные защитные группы, блокирующие свободную карбоксильную группу ряда НПВС, что снижает гастротоксичность, а с другой - синтезируются бифункциональные мультитаргетные препараты на основе НПВС. Особенность второй группы модифицированных H11BC состоит в использовании нескольких фармакологических мишеней для повышения эффективности действия и безопасности такого лекарственного средства. Заявляемые в настоящем изобретении вещества относятся ко второй группе модифицированных Н11ВС.
Известны производные ибупрофена и аминоспиртов, в частности амид ибупрофена и аминоэтанола (Zhong, Guangxiang; Chen, Lulu; Jiang, Jiansong, Assignee: ZhejiangUniversityofTechnology, Peop. Rep. China, CN 101531611, CN 2009-10096554 Mar 6, 2009), который получают обработкой ибупрофена тионилхлоридом с последующей конденсацией образовавшегося хлорангидрида с аминоэтанолом. Также описаны в открытых источниках амиды ибупрофена и индометацина и аминоэтанола, которые далее превращали в производные метакрилата с последующей контролируемой полимеризацией (Davaran, S., & Entezami, А. А. (1997). Acrylic type polymers containing ibuprofen and indomethacin with difunctional spacer group: synthesis and hydrolysis. Journal of Controlled Release, 47(1), 41-49. doi: 10.1016/s0168-3659(96)01614-8).
Амид ибупрофена с гамма-аминомасляной кислотой был использован для синтеза бифункциональных производных ибупрофена, обладающих противовоспалительными свойствами и способностью ингибировать болевой рецептор TRPV1 (Yan L., Pan М., Fu М., Wang J., Huang W., Qian H. Design, synthesis and biological evaluation of novel analgesic agents targeting both cyclooxygenase and TRPV1. BioorgMedChem. 2016 Feb 15 ;24(4): 849-57. doi: 10.1016/j.bmc.2016.01.009).
Также известны производные дофамина, присоединенные через линкер, состоящий из гамма-аминомасляной кислоты или аминоэтанола, к простагландину Е2 (Безуглов В. В., Грецкая Н.М., Акимов М.Г., Зинченко Г.Н., Туховская Е.А., Мурашев А.Н. Производные простагландина, обладающие противовоспалительной и анальгезирующей активностью. Патент РФ N° 2568603, заявка N° 2015100913, приоритет от 15.01.2015, опубликовано 20.11.2015, Бюл. *Г°32.)
Однако ни в патентной, ни в открытой литературе не содержится сведений о бифункциональных производных нестероидных противовоспалительных средств, содержащих остаток дофамина, присоединенный через линкер, представляющий собой остаток аминоэтанола и гамма-аминомасляной кислоты, существенное цитотоксическое и нейрозащитное действие которых в комплексе с НПВС было неожиданно обнаружено в процессе исследований.
В регистре CAS приведены структуры амидов нестероидных противовоспалительных средств и дофамина (в частности, для амида ибупрофена и дофамина CAS N° 1007698-71-6), однако отсутствуют ссылки на источники, где описан синтез и биологическая активность соединений данного типа. Таким образом, какая-либо биологическая активность данных соединений, в том числе и противовоспалительная активность, неизвестна из уровня техники.
Раскрытие изобретения
Задача данного изобретения (технический результат) - расширение номенклатуры биологически активных производных нестероидных противовоспалительных средств, обладающих противовоспалительным действием. Поставленная задача решается путём синтеза амидных производных нестероидных противовоспалительных средств (Н11ВС), содержащих карбоксильную группу, например, но не ограничиваясь, диклофенак, ибупрофен, напроксен, кетопрофен, сулиндак, кеторолак, ацеклофенак, индометацин, в которых амидная часть представлена аминоэтанолом или гамма-аминомасляной кислотой, замещенными остатком дофамина.
Таким образом, объектом данного изобретения являются амидные производные нестероидных противовоспалительных средств общей формулы (I):
Figure imgf000005_0001
I где R = остаток нестероидного противовоспалительного средства (НПВС), содержащий карбоксильную группу, например, но не ограничиваясь, диклофенак, ибупрофен, напроксен, кетопрофен, сулиндак, кеторолак, ацеклофенак, индометацин, присоединённых амидной связью, а X = (Cfh CONHCfh или CH2CH20(C0)NHCH2.
Настоящее изобретения также включает амидные производные нестероидных противовоспалительных средств общей формулы (I):
Figure imgf000005_0002
I
где R = остаток нестероидного противовоспалительного средства, содержащий карбоксильную группу и присоединённый амидной связью, а X = СНг, обладающие противовоспалительной, цитотоксической и нейропротекторной активностью. В частных вариантах противовоспалительное средство представляет собой диклофенак, ибупрофен, напроксен, кетопрофен, сулиндак, кеторолак, ацеклофенак, индометацин. Настоящее изобретение также включает применение соединений по изобретению в качестве противовоспалительного средства.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют тот же смысл, который общепринят в области, к которой принадлежит изобретение, и может быть понят специалистом, имеющим соответствующие навыки.
«Замещенный» означает, что специфическая группа или остаток включают один или более заместителей, отличных от атома водорода.
«Остаток» означает фрагмент молекулы с одним или несколькими удаленными атомами водорода.
«Смесь» означает совместное включение двух и более веществ без образования химических связей, а физические свойства каждого из компонентов сохраняются без изменений.
«Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» означает, что компонент, используемый для приготовления лекарственной формы заявляемых веществ, не будет наносить вред организму человека.
«Фармацевтически приемлемый растворитель» означает, что данный растворитель при образовании раствора заявляемого вещества не будет наносить вред организму человека.
В общем виде вещества настоящего изобретения могут быть синтезированы методами, известными из области химии. Некоторые процессы производства конкретных веществ настоящего изобретения иллюстрируют схемы, приведённые в примерах.
Заявляемые вещества могут быть использованы в виде смеси с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами для формирования таблеток, капсул, пилюль, а также в виде гелей или растворов в фармацевтически приемлемых растворителях. Заявляемые вещества в указанных формах могут вводиться перорально, интраназально или парентерально.
Биологические эффекты заявляемых веществ включают противовоспалительное действие, цитотоксическое действие для опухолевых клеток и нейрозащитное действие в моделях нейротоксичности.
Таким образом, задача данного изобретения решается путём синтеза амидных производных нестероидных противовоспалительных средств, содержащих карбоксильную группу, например, но не ограничиваясь, диклофенак, ибупрофен, напроксен, кетопрофен, сулиндак, кеторолак, ацеклофенак, индометацин, в которых амидная часть представлена аминоэтанолом или гамма-аминомасляной кислотой, замещенными остатком дофамина, которые обладают противовоспалительным, цитотоксическим и нейропротекторным действием.
Подробное раскрытие изобретения
Нижеследующие примеры приведены в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения.
Пример 1. Конъюгат ибупрофена, гамма-аминомасляной кислоты и дофамина (IBU-GABA-DA)
Figure imgf000007_0001
i - E3N, iBuCIF, MeCN, 1 ч., комнатная температура; и - GABA (силилированная форма), MeCN, 18 ч., комнатная температура; ш - E3N, iBuCIF, MeCN, 1 ч. комнатная температура; iv - Et3N, MeCN, DA*HC1 (силилированная форма), комнатная температура.
53 мг гамма-аминомасляной кислоты (GABA, 0.51 ммоль) растворяли в ацетонитриле (0.5 мл) и прибавляли 250 мкл BSTFA и перемешивали до полного растворения GABA.
К ибупрофену 110 мг (0.53 ммоль) в 2000 мкл ацетонитрила добавляли 81 мкл (0.58 ммоль) триэтиламина и перемешивали при комнатной температуре в течение 5-10 мин., затем добавили 76 мкл (0.58 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 1 ч. отфильтровывали осадок гидрохлорида триэтиламина и к получившемуся раствору смешанного ангидрида ибупрофена прибавляли силилированную гамма-аминомасляную кислоту в ацетонитриле и оставляли при комнатной температуре на 18 ч. Упаривали ацетонитрил из реакционной смеси, разбавляли остаток водой, подкисленной бисульфатом, и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, рассолом и сушили над безводным Na2S04. Органический слой упаривали, остаток растворяли в хлороформе и наносили на колонку с SilicaGel 60. Продукт элюировали с колонки системой хлороформ-метанол. Выход IBY-GABA 124 мг (93%) в виде бесцветного масла.
104 мг (0.55 ммоль) гидрохлорида дофамина растворяли в 1200 мкл ацетонитрила с 435 мкл BSTF и 100 мкл пиридина. Перемешивали до полного растворения дофамина.
К 124 мг (0.5 ммоль) IBU-GABA в 1200 мкл ацетонитрила прибавляли 76 мкл (0.49 ммоль) триэтиламина и 70 мкл (0.54 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 1 ч. прибавляли раствор силилированного дофамина. Оставляли при комнатной температуре на 18 ч. Реакционную смесь разбавляли метанолом, выдерживали 30 мин., упаривали, разбавляли остаток водой, подкисленной бисульфатом, и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, рассолом и сушили над безводным Na2S04. Органический слой упаривали, остаток растворяли в хлороформе и наносили на колонку с SilicaGel 60. Продукт элюировали с колонки системой хлороформ-метанол. Выход 105 мг (50%). Желтое вязкое масло. Rf=0.37 (хлороформ-метанол, 10: 1). Масс спектр: расчета. 426.252, C25H34N2O4, найдено: 427.27 [М+Н]+.
Пример 2. Конъюгат ацеклофенака, гамма-аминомасляной кислоты и дофамина (ACEK-GABA-DA)
Figure imgf000008_0001
i - DiPCD, CH2CI2, 1-OH-BZT, 1 ч., комнатная температура; и - GABA- DA : CFiCOOH, Et3N, DMF, 1 ч., комнатная температура.
К 150 мг (0.43 ммоль) ацеклофенака, растворенного в 3000 мкл хлористого метилена последовательно прибавляли 72 мкл (0.46 ммоль) диизопропилкарбодиимида (DiPrCD), 65 мг (0.42 ммоль) 1 -гидроксибензотриазола (1-OH-BZT). К полученному активированному производному ацеклофенака прибавляли 193 мг (0,55 ммоль) GABA-DA в виде соли с трифторуксусной кислотой, 100 мкл Et3N (0,55 ммоль) в 2 мл DMF. Оставляли реакционную смесь на 1 ч. при перемешивании при комнатной температуре. Затем упаривали органические растворители, разбавляли остаток водой, подкисленной бисульфатом, и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, рассолом и сушили над безводным Na2S04. Органический слой упаривали, остаток растворяли в хлороформе и наносили на колонку с SilicaGel 60. Продукт элюировали с колонки системой хлороформ-метанол. Выход 193.8 мг (79.8%). Слегка желтое вязкое масло. R/ = 0.27 (хлороформ-метанол, 10: 1). Масс спектр: расчетн. 573,1433, C28H29CI2N3O6; найдено: 574,153 [М+Н]+, 596.129[M+Na]+.
Конъюгат диклофенака, гамма-аминомаслянной кислоты и дофамина (DIK- GABA-DA)
Figure imgf000009_0001
Получен аналогично описанному в примере 2. Выход 50%. Коричневатое вязкое масло. R/= 0.37 (хлороформ-метанол, 10: 1). Масс спектр: расчетн. 515,1379,
C26H27CI2N3O4; найдено: 516.147 [М+Н]+, 540.119 [M+Na]+.
Конъюгат кеторолака, гамма-аминомасляной кислоты и дофамина (KTR- GABA-DA)
Figure imgf000009_0002
Получен аналогично описанному в примере 2. Выход 40%. Бесцветное масло. R /= 0.36 (хлороформ-метанол, 10:1). Масс спектр: расчетн. 475,2107, C27H29N3O5; найдено: 476.221 [М+Н]+, 498.201 [M+Na]+.
Конъюгат напроксена, гамма-аминомасляной кислоты и дофамина (NAP- GABA-DA)
Figure imgf000009_0003
Получен аналогично описанному в примере 2. Выход 82%. Бежевое масло. R /= 0.43 (хлороформ-метанол, 10:1). Масс спектр: расчетн. 450,2155, C26H30N2O5; найдено: 451.233 [М+Н]+, 473.208 [M+Na]+. Пример 3. Конъюгат кетопрофена, гамма-аминомасляной кислоты и дофамина (KET-GABA-DA)
Figure imgf000010_0001
i - I,G-CDI, MeCN, 1 ч., комнатная температура; и - GABA-DA*CF3COOH, Et3N, DMF, 1.5 ч., комнатная температура.
К 100 мг (0.39 ммоль) кетопрофена, растворенного в 5000 мкл ацетонитрила добавляли 77 мг (0.47 ммоль) 1,Г-карбонилдимидазола (I,G-CDI). Перемешивали при комнатной температуре 1 ч. Затем прибавляли 166 мг (0,47 ммоль) GABA-DA в виде соли с трифторуксусной кислотой и 65 мкл (0.47 ммоль) Et3N в 1 мл ДМФА, перемешивали 1.5 ч. при комнатной температуре.
Органические растворители упаривали, остаток разбавляли водой, подкисленной бисульфатом, и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, рассолом и сушили над безводным NaiSOr Органический слой упаривали, остаток растворяли в хлороформе и наносили на колонку с SilicaGel 60. Продукт элюировали с колонки системой хлороформ-метанол. Выход 82 мг (44%). R/ = 0.36. Коричневое масло. Масс спектр: расчетн. 474,2155, C28H30N2O5; найдено: 475.226 [М+Н]+, 497.212[M+Na]+.
Конъюгат сулиндака, гамма-аминомасляной кислоты и дофамина (SUL- GABA-DA)
Figure imgf000010_0002
Получен аналогично описанному в примере 3. Выход 41%. R/= 0.41 (хлороформ- метанол, 10: 1). Желто-коричневое масло. Масс спектр: расчетн. 576,2094, C32H33FN2O5S ; найдено: 577.219 [М+Н]+, 599.209 [M+Na]+. Конъюгат индометацина, гамма-аминомасляной кислоты и дофамина (INDO- GABA-DA)
Figure imgf000011_0001
Получен аналогично описанному в примере 3. Выход 31%. R/= 0.33 (хлороформ- метанол, 10: 1). Слегка желтоватые кристаллы, Т пл. 184-186 °С. Масс спектр: расчетн. 577.1980 (Сз згСШзОе); найдено 578.200 [М+Н] +, 600.192 [M+Na] +.
Пример 4. Конъюгат ибупрофена, этаноламина и дофамина (IBU-EA-DA)
Figure imgf000011_0002
i - E3N, iBuCIF, MeCN, 1 ч., комнатная температура; й-моно-этаноламин, MeCN, 18 ч., комнатная температура; ш - раствор 2М фосген в толуоле, THF, Et3N, 0°С, 20 мин., 1ч. при комнатной температуре; z’v-DA (в силилированной форме), MeCN, 18 ч., комнатная температура.
К ибупрофену 205.7 мг (0.99 ммоль) в 4000 мкл ацетонитрила прибавляли 152 мкл (1.1 ммоль) триэтиламина, перемешивали при комнатной температуре в течение 5-10 мин., прибавляли 142 мкл (1.1 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 15 мин. реакционную смесь фильтровали и к полученному раствору прибавляли 90 мкл (1.5 ммоль) моно- этаноламина в 0.5 мл ацетонитрила и оставляли при комнатной температуре на 18 ч. Реакционную смесь упаривали, остаток разбавляли водой, подкисленной бисульфатом, и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, рассолом и сушили над безводным Na2S04. Органический слой упаривали, остаток растворяли в хлороформе и наносили на колонку с SilicaGel 60. Продукт элюировали с колонки градиентной системой хлороформ-метанол. Выход IBU-EA 209 мг (83%) в виде бесцветного масла. 51 мг (0.25 ммоль) гидрохлорида дофамина растворяли в 1000 мкл ацетонитрила, содержащего 200 мкл BSTF и 100 мкл пиридина. Перемешивали при комнатной температуре до полного растворения дофамина.
К 1 мл охлажденного до 0°С раствора 2М фосгена в толуоле постепенно прибавляли раствор 80 мг (0.23 ммоль) IBU-EA в 4000 мкл тетрагидрофурана и 45 мкл (0.32 ммоль) триэтиламина. Позволяли смеси нагреться до комнатной температуры в течение 20 мин. и фильтровали. К полученному раствору прибавляли раствор силилированного дофамина. Реакционную смесь выдерживали при комнатной температуре на 18 ч. Реакционную смесь разбавляли метанолом, выдерживали 30 мин. При комнатной температуре упаривали, остаток разбавляли водой, подкисленной бисульфатом, и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, рассолом и сушили над безводным Na2S04. Органический слой упаривали, остаток растворяли в хлороформе и наносили на колонку с SilicaGel60. Продукт элюировали с колонки системой хлороформ-метанол. Выход 65,6 мг (65%). Коричневатое масло. R/= 0.24 (хлороформ-метанол, 15: 1). Масс спектр: вычислено 428.2311 (C24H32N2O5); найдено
429.1300 [М+Н] +.
Конъюгат индометацина, этаноламина и дофамина (INDO-EA-DA)
Figure imgf000012_0001
Получали аналогично описанному в примере 4 из индометацина, этаноламина и гидрохлорида дофамина. R/= 0.28 (хлороформ-метанол, 15: 1). Выход 60%, желтоватое масло. Масс спектр: вычислено 579.1772 (C30H30CIN3O7); найдено 580.1823 [М+Н] +.
Пример 5. Конъюгат гамма-аминомасляной кислоты с дофамином (GABA-
DA)
Figure imgf000013_0001
i - B0C2O, NEt3, MeCN-fhO (1 : 1), 2 ч., 0°C; ii - E3N, изобутилхлорформиат, MeCN, 1 4., комнатная температура; iii - силилированный дофамин, NEt3, MeCN, 18 ч., комнатная температура; iv - CF3CO2, CH2CI2, 1 ч., комнатная температура.
К раствору 1.11 г (10.76 ммоль) гамма-аминомасляной кислоты в 10 мл смеси ацетонитрил-вода (1 : 1) прибавляют 2.91 мл (12.68 ммоль) (Вос)гО и 1.75 мл (12.68 ммоль) триэтиламина и перемешивают 2 ч. при 0°С. Реакционную смесь промывают гексаном (2x100 мл), ацетонитрил упаривают, водную фракцию подкисляют до pH 3 и экстрагируют этилацетатом (2 хЮО мл). Объединенный органический экстракт промывают водой (2 х50 мл), рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия. Сушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме водоструйного насоса. Получают 1.56 r N-Boc-GABA, выход 80%, бесцветное масло.
К раствору 1.57 г (8.3 ммоль) гидрохлорида дофамина в 10 мл ацетонитрила прибавляют 5.8 мл BSTF и 1.5 мл пиридина и перемешивают при 25°С до полного растворения дофамина. К раствору 1.56 г (7.69 ммоль) N-Boc-GABA в 15 мл ацетонитрила прибавляют 1.18 мл (8.5 ммоль) триэтиламина и 1.09 мл (8.5 ммоль) изобутилхлорформиата, перемешивают 1 ч. при 25°С, прибавляют раствор силилированного дофамина и перемешивают 18 ч. Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растворяют в 200 мл этилацетата и промывают 2Н раствором бисульфата натрия (200 мл), водой (2x100 мл), рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия. Сушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (SilicaGel 60) в градиентной системе хлороформ-метанол. Фракции, содержащие продукт (контроль осуществляется с помощью ТСХ), объединяют, растворитель упаривают в вакууме. Получают 1.61 г Вос- GABA-DA, выход 62%.
К раствору 1.61 г Boc-GABA-DA в 10 мл хлористого метилена прибавляют 1.0 мл трифторуксусной кислоты и перемешивают 1 ч. при 25°С. Реакционную смесь упаривают в вакууме водоструйного насоса. Получают 1.64 г трифторацета конъюгата гамма- аминомасляной кислоты и дофамина, выход 98%, бесцветное масло. Масс спектр: вычислено 238.1317 (C12H18N2O3); найдено 239.1327 [М+Н] +, 261.1326 [M+Na]+.
Пример 6. Конъюгат ибупрофена и дофамина (IBU-DA)
Figure imgf000014_0001
i - E3N, изобутилхлорформиат, MeCN, 1 ч., комнатная температура; и - силилированный дофамин, NEt3, MeCN, 18 ч., комнатная температура.
К раствору 110 мг (0.58 ммоль) гидрохлорида дофамина в 1 мл ацетонитрила прибавляют 400 мкл BSTF и 100 мкл пиридина и перемешивают до полного растворения дофамина при 25°С. К раствору 200 мг (0.97 ммоль) ибупрофена в 3 мл ацетонитрила добавляют 147 мкл (1.07 ммоль) триэтиамина и 137 мкл (1.07 ммоль) изобутилхлорформиата, перемешивают 1 ч. при 25°С. К полученному смешанному ангидриду ибупрофена прибавляют раствор силилированного дофамина и перемешивают 18 ч. при 25°С. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в 50 мл этилацетата и промывают 2Н раствором бисульфата натрия (20 мл), водой (2x20 мл), рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия. Сушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают на роторном испарителе в вакууме водоструйного насоса. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (SilicaGel 60) в градиентной системе хлороформ-метанол. Фракции, содержащие продукт (контроль осуществляется с помощью ТСХ), объединяют, растворитель упаривают в вакууме. Получают 123 мг конъюгата ибупрофена и дофамина, выход 61%, бесцветное вязкое масло, R /= 0.36 (хлороформ-метанол, 19: 1). Масс спектр: вычислено 341.1991 (C21H27NO3); найдено 342.2098 [М+Н]+, 364.2 [M+Na]+.
Конъюгат диклофенака и дофамина (DIC-DA)
Figure imgf000014_0002
Получают аналогично описанному в примере 6 из диклофенака и гидрохлорида дофамина. Выход 62%, коричневое масло, R/=0.7 (хлороформ-метанол, 9:1). Масс спектр: вычислено 430.0851 (C22H20C12N2O3); найдено 431.095 [М+Н]+,453.072 [M+Na]+. Конъюгат кеторолака и дофамина (KTR-DA)
Figure imgf000015_0001
Получают аналогично описанному в примере 6 из кеторолака и гидрохлорида дофамина. Выход 63%, желтое масло, R/= 0.7 (хлороформ-метанол, 9: 1). Масс спектр: вычислено 390.1580 (C23H22N2O4); найдено 391.1681 [М+Н]+,413.1513 [M+Na]+.
Конъюгат кетопрофена и дофамина (KET-DA)
Figure imgf000015_0002
Получали аналогично описанному в примере 6 из кетопрофена и гидрохлорида дофамина. Выход 59%, кристаллизующееся бесцветное масло, R/=0.4 (хлороформ- метанол, 9: 1). Масс спектр: вычислено 389.1627 (C24H23NO4); найдено 390.1723 [М+Н]+, 412.1581 [M+Na]+.
Конъюгат сулиндака и дофамина (SUL-DA)
Figure imgf000015_0003
Получали аналогично описанному в примере 6 из сулиндака и гидрохлорида дофамина. Выход 54%, желтые кристаллы, Т ил. = 138-142°С. Rf=0.72 (хлороформ- метанол, 9: 1). Масс спектр: вычислено 491.1567 (C28H26FNO4S); найдено 492.1670 [М+Н]+, 514.1447 [M+Na]+. Конъюгат индометацина и дофамина (INDO-DA)
Figure imgf000016_0001
Получали аналогично описанному в примере 6 из индометацина и гидрохлорида дофамина. Выход 80%, желтоватое масло. R/=0.65 (хлороформ-метанол, 9: 1). Масс спектр: вычислено 492.1452 (C27H25CIN2O5); найдено493.1552 [М+Н]+, 515.1322 [M+Na]+.
Конъюгат напроксена и дофамина (NAP-DA)
Figure imgf000016_0002
Получали аналогично описанному в примере 6 из напроксена и гидрохлорида дофамина. Выход 80%, бежевые кристаллы, Т ил. = 143-145°С. Rf=0.75 (хлороформ- метанол, 9: 1). Масс спектр: вычислено 365.1627 (C22H23NO4); найдено366.1729 [М+Н]+, 388.1592 [M+Na]+.
Пример 7. Конъюгат ацеклофенака и дофамина
Figure imgf000016_0003
i - диизопропилкарбодиимид, 1 -гидроксибензотриазол, 1 ч., комнатная температура; и - гидрохлорид дофамина, ДМФА, NEt3, 1 ч., комнатная температура.
К раствору 200 мг (0.56 ммоль) ацеклофенакав 4 мл хлористого метилена прибавляют 86.5 мг (0.56 ммоль) 1 -гидроксибензолтриазола и 96 мкл (0.62 ммоль) диизопропилкарбодиимида и перемешивают 1.5 ч. при 25°С. Выпавший осадок отфильтровывают, прибавляют 117.8 мг (0.62 ммоль) раствора гидрохлорида дофамина в 1.5 мл диметилфорамида и 30 мкл (0.68 ммоль) триэтиламина и перемешивают 1.5 ч. при 25°С. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в 50 мл этилацетата и промывают 2М раствором бисульфата натрия (20 мл), водой (2x20 мл), рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия. Сушитель отфильтровывают, фильтрат упаривают на роторном испарителе в вакууме водоструйного насоса. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (SilicaGel 60) в градиентной системе хлороформ-метанол. Фракции, содержащие продукт (контроль осуществляется с помощью ТСХ), объединяют, растворитель упаривают в вакууме. Получают 135 мг конъюгата ацеклофенака и дофамина, выход 49%. Желто-коричневые светлые кристаллы, Т пл. = 89-92°С. Масс спектр: вычислено 488.0906 (C24H22C12N2O5); найдено 489.099 [М+Н]+, 511.081 [M+Na]+.
Пример 8. Противовоспалительное действие производных НПВС на клетках линии RAW-264.7
Клеточная линия RAW-264.7 представляет собой моноциты/макрофаги, выделенные из асцитной жидкости AMLV-индуцированной лейкемии мыши. При стимуляции липополисахаридом клеточной стенки бактерий клетки отвечают по воспалительному типу, выбрасывая в среду различные медиаторы - индикаторы воспаления, в частности - оксид азота. Изменение уровня этого медиатора (измеряемое по количеству нитрит-иона в среде инкубации клеток) служит показателем про- или противовоспалительного действия соединений.
Клетки RAW-264.7 были приобретены в клеточном банке Института цитологии Санкт-Петербурга. Клетки инкубировали при 95% влажности, в атмосфере 5% СОг, при температуре 37°С. Культивирование проводили в среде DMEM, содержащей 7% FBS, 2 мМ глутамина, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 0.25 мкг/мл амфотерицина В. Клетки пересевали каждые 48-72 ч. Для суспендирования клетки инкубировали в растворе Версена в течение 2-3 мин. в растворе Трипсин-ЭДТА (0.25 %).
Тестирование противовоспалительной активности
Клетки рассеивали по 100 тыс. в лунки 96-луночного планшета в 100 мкл среды. Индукцию воспалительного ответа проводили с помощью 1 мкг/мл липополисахарида в среде культивирования. Аликвоту стандартного раствора исследуемых веществ в DMSO прибавляли к среде для индукции воспалительного ответа со стимуляторами и заменяли среду культивирования в лунках на полученный раствор. Инкубировали 20 ч. После этого из каждой лунки отбирали аликвоту среды, и определяли концентрацию NO по модифицированному методу Гриса. К 75 мкл анализируемой смеси в лунках 96-луночного планшета для ИФА добавляли 12.5 мкл 0,04% водного раствора сульфаниламида, выдерживали при комнатной температуре 10 мин. с защитой от света, прибавляли 12.5 мкл 2% раствора нафтилэтилендиамина в ЗМ НС1, выдерживали ещё 10 мин. при комнатной температуре с защитой от света, после чего определяли оптическое поглощение при длине волны 540 нм.
Наиболее активными в данном тесте оказались дофаминовые производные кетопрофена (КЕТ-DA, KET-GABA-DA) ЕС5028,86±1; 33,65±0,5 и кетеролака (KTR-DA, KTR-GABA-DA) ЕС50 34.73±1; 37.77±2. Следует отметить, что данные производные не оказывали цитотоксического действия на данные клетки.
Другие производные НПВС также обладали умеренной противовоспалительной активностью (таблица 1).
Таблица 1. Противовоспалительное действие производных НПВС с дофамином в концентрации 5 мкМ (уровень генерации NO в % от максимального 100%) на клетках RAW-264.7
Figure imgf000018_0001
В этой модели производные НПВС с дофамином, соединенные через остаток аминоэтанола, проявили высокую противовоспалительную активность. Так, для IBU-EA- DA значение ЕС50 составило 11±3 мкМ.
Производные НПВС с дофамином также оказывали противовоспалительное действие на культуре клеток микроглии BV-2. Вещества тестировали как описано выше. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Противовоспалительное действие производных НПВС с дофамином на клетках BV-2
Figure imgf000018_0002
Figure imgf000019_0001
Наибольшей активностью на данной клеточной линии обладали DIK-DA, DIK- GABA-DA и KET-GABA-DA (ЕС50 53,0; 65,2; 52,6, соответственно). При этом активность производных НПВС с дофамином превосходила активность исходного EL11BC, в некоторых случаях почти в 2 раза. Так, значение ЕС50 для диклофенака составило 126,8 мкМ, а для его производных с дофамином (DIK-DA, DIK-GABA-DA) - 53,0 и 65,2 мкМ, соответственно.
Пример 9. Цитотоксическое действие производных НПВС с дофамином на линии раковых клеток
Клетки карциномы лёгкого А549 приобретены в клеточном банке Института цитологии Санкт-Петербурга. Клетки инкубировали при 95% влажности, в атмосфере 5% СОг, при температуре 37°С. Культивирование проводили в среде DMEM, содержащей 7% FBS, 2 мМ глутамина, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 0.25 мкг/мл амфотерицина В. Клетки пересевали каждые 48-72 ч.
Оценка действия веществ на клетки
Клетки рассеивали по 10 тыс. в лунки 96-луночного планшета в 100 мкл среды. Через 24 ч. культивирования к клеткам добавляли 100 мкл исследуемых веществ в виде раствора DMSO в среде для культивирования клеток с финальной концентрацией DMSO 0.5%. Клетки инкубировали с исследуемыми веществами 24 ч. В качестве положительного контроля использовали клетки, к которым добавляли 100 мкл среды с 0,5% DMSO. Оценка выживаемости клеток в культуре с помощью МТТ-теста
После окончания инкубации из каждой лунки удаляли среду и добавляли по 100 мкл реактива МТТ (0.5 мг/мл МТТ, 3.5 мг/мл D-глюкозы в растворе Хэнкса). Инкубировали в С Oi- инкубаторе 1.5 ч. Среду с МТТ удаляли и в каждую лунку добавляли по 100 мкл DMSO, перемешивали 2 мин. Определяли оптическую плотность раствора при длинах волн 576 нм и 620 нм. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3. Цитотоксическая активность производных НПВС с дофамином в отношении клеток карциномы легкого человека А549
Figure imgf000020_0001
Наиболее активным соединением в данном тесте оказался амид ибупрофена с дофамином (IBU-DA), значение полулегальной концентрации для которого составило 29.81±0.5 мкМ. Амиды диклофенака и индометацина также проявили цитотоксическую активность по отношению к данному типу раковых клеток в диапазоне LC50, 40 - 60 мкМ, в то время как исходные НПВС были неактивны в данном тесте.
На клетках глиомы крысы С6 производные индометацина были существенно активнее исходного индометацина. Значения LC50 для INDO-DA и INDO-GABA-DA составили 72.1±1.5 и 32.3±2 мкМ соответственно, тогда как для индометацина это значение существенно превосходило 100 мкМ. Следует отметить, что введение фрагмента гамма-аминомасляной кислоты в структуру дофаминового производного индометацина более чем в два раза увеличило цитотоксическую активность INDO-GABA-DA по отношению к клеткам С6.
Пример 10. Нейропротективное действие производных НПВС с дофамином Клетки нейробластомы человека SH-SY5Y используют в качестве модели для тестирования нейропротективного потенциала химических соединений.
Клетки приобретены в коллекции клеточных культур АТСС. Клетки инкубировали при 95% влажности, в атмосфере 5% СОг, при температуре 37°С. Культивирование проводили в среде DMEM, содержащей 7% FBS, 2 мМ глутамина, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 0.25 мкг/мл амфотерицина В.
Оценка действия веществ на клетки
Клетки рассеивали по 20 тыс. в лунки 96-луночного планшета в 100 мкл среды. Через 24 ч. культивирования к клеткам добавляли 100 мкл исследуемых веществ в виде раствора DMSO в среде для культивирования клеток с финальной концентрацией DMSO 0.5%. Нейротоксин МРР+ и производное НПВС добавляли либо одновременно, либо в последовательности, указанной в таблице 4. Клетки инкубировали с исследуемыми веществами 24 ч. В качестве положительного контроля использовали клетки, к которым добавляли 100 мкл среды с 0,5% DMSO. Результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4. Нейропротективное действие производных НПВС на клетках SH-SY5Y при индукции клеточной смерти нейротоксином МРР+
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Наибольшую нейропротективную активность при всех вариантах постановки эксперимента проявили дофаминовые производные ибупрофена и диклофенака.
Дофаминовые производные ибупрофена были также активны в модели химической гипоксии на клетках SH-SY5Y, индуцированной добавлением в среду инкубации
СоСЬхбНгО (425 мкМ). Для IBU-DA и IBU-GABA-DA значения ECso составили 18,5 и 55,8 мкМ соответственно.
Таким образом, приведенные примеры показывают, что заявляемые вещества обладают противовоспалительной, цитотоксической активностью по отношению к раковым клеткам, а также оказывают нейропротективное действие на клетки нервной системы.
Должно быть понятно, что, тогда как изобретение описывается совместно с его подробным описанием, вышеупомянутое описание предназначено для иллюстрации и не ограничивает объема изобретения, который определен объемом прилагаемой формулы изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации входят в рамки нижеследующей формулы изобретения.

Claims

Формула изобретения
1. Соединение общей формулы (I):
Figure imgf000023_0001
I где R = остаток нестероидного противовоспалительного средства, содержащий карбоксильную группу и присоединённый амидной связью, а Х= (Cfh CONHCfh или CH2CH20(C0)NHCH2, обладающие противовоспалительной, цитотоксической и нейропротективной активностью.
2. Соединения по и. 1, где противовоспалительное средство представляет собой диклофенак, ибупрофен, напроксен, кетопрофен, сулиндак, кеторолак, ацеклофенак, индометацин.
3. Соединения общей формулы (I):
Figure imgf000023_0002
I
где R = остаток нестероидного противовоспалительного средства, содержащий карбоксильную группу и присоединённый амидной связью, а X = СНг, обладающие противовоспалительной, цитотоксической и нейропротективной активностью.
4. Соединения по и. 3, где противовоспалительное средство представляет собой диклофенак, ибупрофен, напроксен, кетопрофен, сулиндак, кеторолак, ацеклофенак, индометацин.
5. Применение соединения по пи.1-4 в качестве противовоспалительного средства.
PCT/RU2019/050212 2018-11-14 2019-11-12 Производные нестероидных противовоспалительных средств WO2020101543A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018140051 2018-11-14
RU2018140051A RU2732297C2 (ru) 2018-11-14 2018-11-14 Производные нестероидных противовоспалительных средств

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020101543A1 true WO2020101543A1 (ru) 2020-05-22

Family

ID=70730725

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2019/050212 WO2020101543A1 (ru) 2018-11-14 2019-11-12 Производные нестероидных противовоспалительных средств

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2732297C2 (ru)
WO (1) WO2020101543A1 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023272472A1 (zh) * 2021-06-29 2023-01-05 南京海融医药科技股份有限公司 一种布洛芬酯衍生物及其乳状制剂
US11845736B2 (en) 2021-10-01 2023-12-19 Empathbio, Inc. Prodrugs of MDMA, MDA, and derivatives thereof
US11912680B2 (en) 2021-12-28 2024-02-27 Empathbio, Inc. Nitric oxide releasing prodrugs of MDA and MDMA
US11993577B2 (en) 2021-09-01 2024-05-28 Empathbio, Inc. Synthesis of MDMA or its optically active (R)- or (S)-MDMA isomers

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997025064A1 (en) * 1996-01-08 1997-07-17 Astra Aktiebolag Oral pharmaceutical dosage forms comprising a proton pump inhibitor and a nsaid
WO2014018913A2 (en) * 2012-07-27 2014-01-30 University Of Connecticut Santacruzamate a compositions and analogs and methods of use
RU2568603C1 (ru) * 2015-01-15 2015-11-20 Федеральное агентство научных организаций (ФАНО России) Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Производные простагландина, обладающие противовоспалительной и анальгезирующей активностью

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5612369A (en) * 1995-06-07 1997-03-18 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Thrombin inhibitors
US6017919A (en) * 1996-02-06 2000-01-25 Japan Tobacco Inc. Compounds and pharmaceutical use thereof
AU732969B2 (en) * 1997-02-19 2001-05-03 Berlex Laboratories, Inc. (N)-heterocyclic derivatives as NOS inhibitors
SE9801526D0 (sv) * 1998-04-29 1998-04-29 Astra Ab New compounds
US20070208087A1 (en) * 2001-11-02 2007-09-06 Sanders Virginia J Compounds, compositions and methods for the treatment of inflammatory diseases
AU2003233244B2 (en) * 2002-06-07 2010-05-20 Cortical Pty Ltd Therapeutic molecules and methods-1
RU2447060C2 (ru) * 2005-06-17 2012-04-10 Эпоуджи Биотекнолоджи Корпорейшн Ингибиторы сфингозинкиназы
JP6117104B2 (ja) * 2010-11-15 2017-04-19 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｎａｍｐｔおよびｒｏｃｋ阻害薬
US9193762B2 (en) * 2010-12-01 2015-11-24 University Of Mississippi Selective inhibitors of prolylcarboxypeptidase
WO2015050379A1 (ko) * 2013-10-01 2015-04-09 광주과학기술원 신규한 퀴놀리논 유도체 및 이의 용도
WO2015162216A1 (en) * 2014-04-24 2015-10-29 Universita' Degli Studi Di Siena Biaryl amide or urea derivatives as trpv1 ligands

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997025064A1 (en) * 1996-01-08 1997-07-17 Astra Aktiebolag Oral pharmaceutical dosage forms comprising a proton pump inhibitor and a nsaid
WO2014018913A2 (en) * 2012-07-27 2014-01-30 University Of Connecticut Santacruzamate a compositions and analogs and methods of use
RU2568603C1 (ru) * 2015-01-15 2015-11-20 Федеральное агентство научных организаций (ФАНО России) Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Производные простагландина, обладающие противовоспалительной и анальгезирующей активностью

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEMICAL ABSTRACTS, Columbus, Ohio, US; abstract no. 1173289-53-6 *
MAHINDROO NEERAJ ET AL.: "Structure- Activity Relationships and Cancer- Cell Selective Toxicity of Novel Inhibitors of Glioma- Associated Oncogene Homologue 1 (Glil) Mediated Transcription", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 52, no. 14, 23 July 2009 (2009-07-23), pages 4277 - 87, XP055327610, DOI: 10.1021/jm900106f *
SINNING CHRISTIAN ET AL.: "Dopamides, Vanillylamides, Ethanolamides, and Arachidonic Acid Amides of Anti-inflammatory and Analgestic Drug Substances as TRPV1 Ligands", CHEMMEDCHEM, vol. 3, no. 12, December 2008 (2008-12-01), pages 1956 - 64, XP055708058, DOI: 10.1002/cmdc.200800271 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023272472A1 (zh) * 2021-06-29 2023-01-05 南京海融医药科技股份有限公司 一种布洛芬酯衍生物及其乳状制剂
US11993577B2 (en) 2021-09-01 2024-05-28 Empathbio, Inc. Synthesis of MDMA or its optically active (R)- or (S)-MDMA isomers
US11845736B2 (en) 2021-10-01 2023-12-19 Empathbio, Inc. Prodrugs of MDMA, MDA, and derivatives thereof
US11912680B2 (en) 2021-12-28 2024-02-27 Empathbio, Inc. Nitric oxide releasing prodrugs of MDA and MDMA

Also Published As

Publication number Publication date
RU2018140051A3 (ru) 2020-05-14
RU2018140051A (ru) 2020-05-14
RU2732297C2 (ru) 2020-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2020101543A1 (ru) Производные нестероидных противовоспалительных средств
Chasák et al. Squaric acid analogues in medicinal chemistry
ES2866551T3 (es) Nuevos compuestos con actividad protectora frente a toxinas en el modo de acción intracelular
WO2020177744A1 (zh) 水杨酸类小檗碱型生物碱季铵盐及其制备药物的用途
Chiroli et al. Nitric oxide-donating non-steroidal anti-inflammatory drugs: the case of nitroderivatives of aspirin
Hassan et al. Design, synthesis and anti-ulcerogenic effect of some of furo-salicylic acid derivatives on acetic acid-induced ulcerative colitis
Fleck et al. Synthesis of functionalized adamantane derivatives:(3+ 1)-scaffolds for applications in medicinal and material chemistry
Li et al. Discovery of novel β-carboline/acylhydrazone hybrids as potent antitumor agents and overcome drug resistance
Chen et al. Water-soluble derivatives of evodiamine: Discovery of evodiamine-10-phosphate as an orally active antitumor lead compound
Xu et al. Design, synthesis, and biological evaluation of matrine derivatives possessing piperazine moiety as antitumor agents
Ma et al. Melatonin derivatives combat with inflammation-related cancer by targeting the Main Culprit STAT3
Sztaricskai et al. Antiulcer Effect of the N‐and O‐β‐D‐Glucopyranosides of 5‐Aminosalicylic Acid
Ge et al. Design and synthesis of parthenolide-SAHA hybrids for intervention of drug-resistant acute myeloid leukemia
CN106883217A (zh) 一种核苷碱基异羟肟酸衍生化合物及其制备方法与应用
Li et al. Synthesis, structure–activity relationship and biological evaluation of novel nitrogen mustard sophoridinic acid derivatives as potential anticancer agents
Kumar et al. Synthesis and biological evaluation of new 9-aminoacridine-4-carboxamide derivatives as anticancer agents: 1st Cancer Update
Sawraj et al. Design, synthesis and evaluation of novel indomethacin–flavonoid mutual prodrugs as safer NSAIDs
Qiu et al. Design, synthesis and biological evaluation of matrine contains benzimidazole derivatives as dual TOPOI and PARP inhibitors for cancer therapy
CN103113274B (zh) Ras和HDAC双重抑制剂及其制备方法和用途
Shah et al. Synthesis, kinetics and pharmacological evaluation of mefenamic acid mutual prodrug
CN106008373B (zh) 二取代双环衍生物及其作为外排泵抑制剂在抗菌中的应用
CN109336816A (zh) 一种塞来昔布吲哚美辛的共无定形物
Alasmary et al. Novel quinazoline and acetamide derivatives as safe anti-ulcerogenic agent and anti-ulcerative colitis activity
Paliwal et al. Synthesis and biological evaluation of mutual prodrugs of carboxylic group containing some non-steroidal anti-inflammatory drugs and propyphenazone
Rafea et al. Synthesis of New Ibuprofen Derivatives Containing (Oxothiazolidin-3-yl) Amino Moiety with Expected Biological Activity.

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19884676

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19884676

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1