WO2020091052A1 - 関節炎治療剤 - Google Patents

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foxm1
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thiostrepton
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優 石井
順一 菊田
哲雄 長谷川
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国立大学法人大阪大学
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Definitions

  • the present invention relates to a novel therapeutic agent for arthritis. More specifically, it relates to a therapeutic agent for arthritis, preferably a therapeutic agent for rheumatoid arthritis, which contains an inhibitor of the transcription factor FoxM1 as an active ingredient.
  • Arthritis is a general term for diseases accompanied by inflammation of joints, and is exemplified as a chronic inflammatory disease resulting from pathological bone destruction such as rheumatoid arthritis, spondyloarthritis, and histiocytosis.
  • rheumatoid arthritis is a kind of collagen disease, and immunomodulators, immunosuppressants, or biological agents have been used for the treatment.
  • these therapeutic agents increase the risk of suffering from a serious infection by suppressing the immune reaction (see Non-Patent Document 1 below).
  • FoxM1 (Forkhead box M1) is one of the transcription factors that regulate the expression of genes important for cell growth, and is widely known to be involved in the regulation of carcinogenesis and cell growth, and regulates FoxM1. Then, the method of treating cancer is also proposed.
  • FoxM1 antibody Patent Document 1 described below
  • Patent Documents 2 and 3 controlling the expression of FoxM1 for use in treating, preventing, and / or delaying progression of cancer
  • FoxM1 A method for treating cancer using a compound that inhibits the activity of the above (Patent Document 3 described below) has been proposed.
  • Immunomodulators, immunosuppressants or biologics currently used for the treatment of collagen disease aim to control the disease state by suppressing the immunity, but on the other hand, the immune reaction to foreign microorganisms may also occur. At the same time, it reduces the risk of serious infections. It is an object of the present invention to provide a novel therapeutic agent for arthritis based on a new mechanism, which does not have such side effects.
  • the present inventors have identified osteoclast progenitor cells that specifically appear in inflammatory synovium in a study using arthritis model mice, and have clarified that the transcription factor FoxM1 controls the pathogenicity of the cells. Furthermore, in a rheumatoid arthritis model, a FoxM1 inhibitor suppresses osteoclast differentiation in vitro and joint destruction in vivo, and also in humans, monocytes and rheumatoid arthritis samples collected from human rheumatoid arthritis patients. It was confirmed that osteoclast differentiation of macrophage cells was suppressed by the same inhibitor, and the present invention was completed.
  • the transcription factor FoxM1 is expressed in osteoclast progenitor cells that specifically appear in the inflammatory synovium of arthritis, and is involved in the function of osteoclasts that are involved in normal bone metabolism in the bone marrow of healthy subjects. Absent. Therefore, by using the FoxM1 inhibitor, it is possible to prevent and / or treat arthritis without causing side effects. In addition, by using a therapeutic agent containing a FoxM1 inhibitor as an active ingredient, the risk of suffering from a serious infection caused by the above-mentioned foreign microorganism can be avoided, and as a FoxM1 inhibitor, a low level such as thiostrepton can be avoided. By using the molecular compound, it is possible to reduce the burden on the medical economy compared to the treatment with the existing biologics.
  • the results of discriminating cell fractions by fluorescence of CX3CR1-EGFP and Ly6C-APC by gated by flow cytometry on CD45-positive cells of blood and synovium of arthritis model mice are shown.
  • the difference in cell surface markers between osteoclast precursor cells (hereinafter referred to as R3) present in the inflamed synovium and osteoclast precursor cells (BM-OP) present in bone marrow is shown.
  • the results of comprehensive transcriptome analysis / upstream analysis of R3 are shown. It is a figure which shows the effect (in vitro) of thiostrepton on the osteoclast differentiation of R3.
  • the photographs show that osteoclast differentiation (red indicates osteoclasts, green indicates progenitor cells) is suppressed by thiostrepton administration.
  • the vertical axis of the graph defines cells having three or more nuclei as osteoclasts, and shows the number of nuclei contained in the osteoclasts in one visual field.
  • FIG. 6 is a graph showing the results of administering thiostrepton to an arthritis model mouse (CIA model) and evaluating the effect with an arthritis score.
  • thiostrepton was administered to an arthritis model mouse (CIA model), and the bone destruction degree of the joint was evaluated by the bone destruction score imaged by micro CT.
  • Thio represents thiostrepton.
  • the photograph is an image of bone tissue taken by micro CT, and the vertical axis of the graph is an erosion score, which indicates the degree of bone destruction. It is a figure which shows the protocol which induces arthritis with respect to the FoxM1 knockout mouse induced by tamoxifen administration.
  • FIG. 5A shows the effect of thiostrepton on osteoclast differentiation of the cell fraction of CX3CR1-positive HLA-DRhi of the rheumatoid arthritis patient shown in FIG. 5A.
  • the photographs show that osteoclast differentiation is inhibited by thiostrepton administration.
  • the vertical axis of the graph shows the number of nuclei contained in the osteoclasts in one visual field.
  • the FoxM1 inhibitor used in the present invention is preferably an inhibitor of FoxM1 activity consisting of a low molecular weight compound such as thiostrepton or RCM-1 (Non-patent Document 2).
  • compounds capable of suppressing the expression of FoxM1 can also be used as the FoxM1 inhibitor of the present invention, and for example, any compound that inhibits transcription of its gene, maturation of RNA, translation of mRNA, post-translational modification of its protein, etc.
  • the compound is of interest.
  • the splicing modifier of the FoxM1 gene see the above-mentioned Patent Document 1
  • siRNA see the above-mentioned Patent Document 2
  • the like can be exemplified.
  • the therapeutic agent for arthritis containing the FoxM1 inhibitor of the present invention as an active ingredient can be widely used for the treatment and / or prevention of diseases associated with joint inflammation.
  • diseases associated with joint inflammation For example, rheumatoid arthritis, spondyloarthritis, histiocytosis, etc. are targeted.
  • rheumatoid arthritis spondyloarthritis, histiocytosis, etc.
  • it is preferably used for the treatment and / or prevention of rheumatoid arthritis.
  • the FoxM1 inhibitor of the present invention can be prepared in the form of a conventional pharmaceutical preparation (pharmaceutical composition) suitable for oral administration, parenteral administration or topical administration.
  • Formulations for oral administration include solid preparations such as tablets, granules, powders, capsules and liquid preparations such as syrups. These formulations can be prepared by conventional methods. Solid forms may be prepared by using conventional pharmaceutical carriers such as lactose, starch such as corn starch, crystalline cellulose such as microcrystalline cellulose, hydroxypropyl cellulose, calcium carboxymethyl cellulose, talc, magnesium stearate and the like. it can. Capsules can be prepared by encapsulating the granules or powder thus prepared.
  • a syrup can be prepared by dissolving or suspending a FoxM1 inhibitor in an aqueous solution containing sucrose, carboxymethylcellulose and the like.
  • Formulations for parenteral administration include injectables such as infusion.
  • injectable formulations can also be prepared by conventional methods, including isotonic agents (eg, mannitol, sodium chloride, glucose, sorbitol, glycerol, xylitol, fructose, maltose, mannose), stabilizers (eg, sodium sulfite, Albumin) and a preservative (eg, benzyl alcohol, methyl p-oxybenzoate).
  • Dosage forms for topical or transdermal administration include ointments, pastes, creams, lotions, gels, powders, solutions, sprays, inhalants or patches.
  • the active ingredient, FoxM1 inhibitor is admixed under sterile conditions with a pharmaceutically acceptable carrier and any needed preservatives or buffers which may be required.
  • the dose of the FoxM1 inhibitor of the present invention can be varied according to the inhibitory active compound, the type of disease, the severity, the age, sex, and weight of the patient, the dosage form, etc. It is in the range of up to 1,000 mg, which can be administered by the oral or parenteral route in one, or two or three divided doses.
  • the present invention also provides a method for treating arthritis using the FoxM1 inhibitor.
  • the early FoxM1 inhibitor may be used alone or in combination with one or more other therapeutic agents.
  • the drug used in combination examples include disease-modifying anti-rheumatic drug (DMARD), pain management drug, steroid, nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID), cytokine antagonist, bone anabolic drug, bone anti-resorptive drug, and the like. It can be administered in combination with at least one therapeutic agent for arthritis such as a combination (dual or triple therapy). When co-administered with one or more additional agents, the pro-FoxM1 inhibitor can be administered concurrently or sequentially with the other agent. When administered sequentially, the attending physician will decide on the appropriate sequence of administering the FoxM1 inhibitor in combination with other agents.
  • DMARD disease-modifying anti-rheumatic drug
  • NSAID nonsteroidal anti-inflammatory drug
  • cytokine antagonist cytokine antagonist
  • bone anabolic drug bone anti-resorptive drug, and the like.
  • the pro-FoxM1 inhibitor can be administered concurrently or sequentially with the other agent. When administered sequentially, the attending physician will decide on the appropriate
  • DMARDs used in combination with FoxM1 inhibitors include methotrexate, antimalarial drugs (eg, hydroxychloroquine and chloroquine), sulfasalazine, leflunomide, azathioprine, cyclosporine, gold salts, minocycline, cyclophosphamide, D-penicillamine, minocycline, aura.
  • antimalarial drugs eg, hydroxychloroquine and chloroquine
  • sulfasalazine eg., leflunomide, azathioprine, cyclosporine, gold salts, minocycline, cyclophosphamide, D-penicillamine, minocycline, aura.
  • steroids prednisolone, prednisone, dexamethasone, cortisol, cortisone, hydrocortisone, methylprednisolone, betamethasone, triamcinolone, beclomethasone, fludrocotisone, deoxycorticosterone, pain management, aldosterone, etc.
  • Drugs or non-steroidal anti-inflammatory drugs include lumiracoxib, ibuprofen, fe Profen, ketoprofen, flurbiprofen, oxaprozin, indomethacin, sulindac, etodolac, ketorolac, nabumetone, aspirin, naproxen, valdecoxib, etoricoxib, rofecoxib, acetominophen, celecoxib, diclofenac, tramadol, piroxicam, meloxicamet, meloxicam, meloxicam.
  • NSAIDs non-steroidal anti-inflammatory drugs
  • Isoxicam mefenamic acid, meclofenamic acid, flufenamic acid, tolfenamic, valdecoxib, parecoxib, etodolac, indomethacin, aspirin, ibuprofen, filocoxib and the like, but are not limited thereto.
  • the present invention will be specifically described with reference to examples, but these examples do not limit the present invention.
  • Test Example 1 Expression of FoxM1 in osteoclast progenitor cells A) CD45-positive cells in blood and synovium of collagen-induced arthritis model mouse (CIA model) were selected by flow cytometry, and the cell fraction was detected by CX3CR1-EGFP and Ly6C-APC fluorescence. The picture was identified. The fraction of CX3CR1lowLy6Chi in blood was designated as R1, the fraction of CX3CR1lowLy6Chi in inflammatory synovium was designated as R2, and the fraction of CX3CR1hiLy6Cint was designated as R3 (FIG. 1A).
  • RNA-sequence analysis was performed (Illumina HiSeq 2500 platform in 75-base single-end mode). .. When the transcription factors elevated in R3 were listed and subjected to upstream analysis (Up-stream analysis), FoxM1 was located at the highest position, and FoxM1 was shown as a regulatory factor of this cell (FIG. 1C).
  • Test Example 2 Inhibition of osteoclast differentiation (in vitro) R3 cells were collected using flow cytometry (cell sorter SH800, Sony), and M-CSF 10 ng / ml, RANKL 100 ng / ml and FoxM1 inhibitor thiostrepton (SIGMA) 0.5 on a 96-well plate. , 1 or 2 ⁇ M was added and cultured, the ability to differentiate into osteoclasts was significantly suppressed in the thiostrepton-administered group (FIG. 2).
  • Test Example 3 Effect in model mouse (in vivo) Collagen-induced arthritis (CIA) mice were divided into 3 groups, and thiostrepton 20 mg / kg, 50 mg / kg or a vehicle (control) was intraperitoneally administered every other day from the 21st day.
  • the method for producing and evaluating CIA mice is as follows. Arthritis was induced using DBA-1 / J mice aged 8 to 10 weeks. Chicken type II collagen was dissolved in a 0.05 M aqueous acetic acid solution, rotated overnight at 4 ° C. to a concentration of 4.0 mg / ml, and mixed with an equal amount of Freund's complete adjuvant.
  • Arthrogen-CAIA antibody (Condolex) (5 mg) was administered iv on the first day, and 40 ⁇ g of LPS was intraperitoneally administered on the 3rd and 10th days to induce arthritis.
  • the severity of arthritis was evaluated by the same semi-quantitative method as in the CIA model above.
  • the arthritis model mice were divided into a control group, an intraperitoneal administration group of tamoxifen 2 mg for 5 days, and a group of adoptively transplanted monocytes in which FoxM1 was not knocked out after administration of tamoxifen, and the bone destruction scores were compared on the 14th day. ..
  • Test example 5 When blood, joint fluid, and joint tissue samples of a rheumatoid arthritis patient (human) were evaluated by flow cytometry, CX3CR1-positive HLA-DRhi cells were found in the joint fluid and joint tissue, as in R3 of Test 1. (It was shown in FIG. 1B that IA / IE corresponded to human HLA-DR in mice, and that HLA-DR was highly expressed in R3 as well). These cells were collected by flow cytometry, added with M-CSF 50 ng / ml, RANKL 100 ng / ml, and thiostrepton 0.5 ⁇ M, and cultured in a 96-well plate. When thiostrepton was administered, osteoclasts were formed. Was significantly suppressed (FIGS. 5A and 5B).

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Abstract

本発明は、例えばチオストレプトンのような、低分子ＦｏｘＭ１阻害剤を有効成分とする、関節炎治療剤を提供する。ＦｏｘＭ１は、関節炎の炎症性滑膜に特異的に出現する破骨前駆細胞に発現し、健常者の骨髄中にあって通常の骨代謝に関与する破骨細胞の機能には関与していないので、ＦｏｘＭ１阻害剤を用いることで、副作用を伴うことなく、関節炎の予防および／または治療が可能である。

Description

関節炎治療剤
　本発明は、新規な関節炎治療剤に関する。より詳しくは、転写因子ＦｏｘＭ１の阻害剤を有効成分とする関節炎治療剤、好ましくは関節リウマチ治療剤に関する。
　関節炎は、関節の炎症をともなう疾病の総称であり、例えば関節リウマチの他、脊椎関節炎、組織球増殖症等が病的な骨破壊に帰結する慢性の炎症性疾患として例示される。
　中でも、関節リウマチは膠原病の一種であり、免疫調節剤や免疫抑制剤、または生物学的製剤がその治療に用いられてきた。しかしながら、これら治療剤では免疫反応を抑制することで重篤な感染症に罹患するリスクが上昇することが示されている（後記非特許文献１）。
　一方、ＦｏｘＭ１（Forkhead box M1）は細胞増殖に重要な遺伝子の発現を調整する転写因子の一つであり、発癌や細胞増殖の制御に関連していることが広く知られていて、ＦｏｘＭ１を制御して、癌を治療する方法も提案されている。例えば、ＦｏｘＭ１の抗体（後記特許文献１）や、その発現を制御してがんの治療、予防及び／又は進行の遅延のために使用すること（後記特許文献２および３）や、また、ＦｏｘＭ１の活性を阻害する化合物を用いる癌治療方法（後記特許文献３）が提案されている。
　その他、アレルゲンに曝露されたマウスにおいて胚細胞の異形成を抑制し、ＩＬ１３とＳＴＡＴ６のシグナル伝達を妨げるＦｏｘＭ１阻害因子・ＲＣＭ－１の報告があり、ここで同定された低分子のＲＣＭ－１については、喘息などの慢性気道疾患の治療剤としての用途が示唆されている（後記非特許文献２）。
　しかしながら、後述する破骨前駆細胞にＦｏｘＭ１が発現されていることはこれまで報告がなく、ＦｏｘＭ１阻害剤を用いる関節炎の治療方法は全く知られていない。
特開２０１４－１９３８９３号公報 特表２０１８－５０５８８０号公報 特表２０１６－５０９５９６号公報
Singh, J.A., Lancet, 2015 L.Sun et al., Science Signal, 10, eaai8583(2017)
　現在、膠原病の治療に用いられている免疫調節剤、免疫抑制剤または生物学的製剤は、免疫を抑制することで病勢を制御することを目的としているが、一方で外来微生物に対する免疫反応も同時に抑えてしまうので、重篤な感染症に罹患するリスクが上昇する。本発明の目的は、かかる副作用のない、新しいメカニズムに基づく新規な関節炎治療剤を提供することを目的とする。
　本発明者らは、関節炎モデルマウスを用いた研究により、炎症性滑膜に特異的に出現する破骨前駆細胞を同定し、転写因子ＦｏｘＭ１が該細胞の病原性を司ることを明らかにした。さらに、関節リウマチモデルにおいて、ＦｏｘＭ１阻害剤がin vitroでの破骨細胞の分化とin vivoでの関節破壊を抑制すること、また、ヒトにおいても、関節リウマチ患者の検体から採取された単球・マクロファージ系細胞の破骨細胞分化が同阻害剤により抑制されることを確認し、本発明を完成するに至った。
　転写因子ＦｏｘＭ１は、関節炎の炎症性滑膜に特異的に出現する破骨前駆細胞に発現し、健常者の骨髄中にあって通常の骨代謝に関与する破骨細胞の機能には関与していない。よってＦｏｘＭ１阻害剤を用いることで、副作用を伴うことなく、関節炎の予防および／または治療が可能である。
　また、ＦｏｘＭ１阻害剤を有効成分とする治療剤を用いることで、前述した外来微生物による重篤な感染症に罹患するリスクが回避され、また、ＦｏｘＭ１阻害剤として、例えばチオストレプトンのような低分子化合物を用いることで、既存の生物学的製剤による治療より医療経済に対する負担を減らすことも可能となる。
関節炎モデルマウスの血液と滑膜のＣＤ４５陽性細胞をフローサイトメトリーでゲートし、ＣＸ３ＣＲ１－ＥＧＦＰとＬｙ６Ｃ－ＡＰＣの蛍光で細胞分画を識別した結果を示す。 炎症滑膜に存在する破骨前駆細胞（以後Ｒ３と表記する）と骨髄中に存在する破骨前駆細胞（ＢＭ－ＯＰ）の細胞表面マーカーの違いを示す。 Ｒ３の網羅的なトランスクリプトーム解析・上流解析を行った結果を示している。 Ｒ３の破骨細胞分化に及ぼすチオストレプトンの効果（in vitro）を示す図である。写真は、破骨細胞分化（赤が破骨細胞、緑が前駆細胞を示す）がチオストレプトン投与により抑制されることを表す。グラフの縦軸は三つ以上の核を持つ細胞を破骨細胞と定義し、一視野中の破骨細胞に含まれる核の数を示している。
関節炎モデルマウス（ＣＩＡモデル）に対して、チオストレプトンを投与し、関節炎スコアでその効果を評価した結果を示すグラフである。 同様に関節炎モデルマウス（ＣＩＡモデル）へチオストレプトンを投与し、マイクロＣＴで撮像した骨破壊スコアにより、関節の骨破壊程度を評価した結果を示す。「Thio」はチオストレプトンを表す。写真は、マイクロＣＴで撮影した骨組織の画像、グラフの縦軸はびらんスコア(Erosion Score)で、骨破壊の程度を示している。 タモキシフェン投与により誘導されるＦｏｘＭ１ノックアウトマウスに対し、関節炎を惹起するプロトコールを示す図である。タモキシフェン２mgを五日間腹腔内投与し、５mgのＣＡＩＡ抗体を静脈注射してから二週間後に関節炎を評価することを表す。 図４Ａで示したプロトコールに従って作製したＦｏｘＭ１ノックアウトマウスにおいて関節炎を惹起し、骨破壊程度を確認した。写真は、マイクロＣＴで撮影した骨組織の画像、グラフの縦軸はびらんスコア(Erosion Score)で、骨破壊の程度を示している。 関節リウマチ患者（ヒト）の血液、関節液および関節組織の検体をフローサイトメトリーにより対比した結果である。関節液と関節組織にＣＸ３ＣＲ１陽性ＨＬＡ－ＤＲhiの細胞が認められる。 図５Ａで示した関節リウマチ患者のＣＸ３ＣＲ１陽性ＨＬＡ－ＤＲｈｉの細胞分画の破骨細胞分化に及ぼす、チオストレプトンの効果を示す。写真は、破骨細胞分化がチオストレプトン投与により阻害されることを表す。グラフの縦軸は三つ以上の核を持つ細胞を破骨細胞と定義した場合、一視野中の破骨細胞に含まれる核の数を示している。
　本発明で用いられるＦｏｘＭ１阻害剤は、好ましくは、チオストレプトンやＲＣＭ－１（前記非特許文献２）のような低分子化合物よりなる、ＦｏｘＭ１活性の阻害剤である。
　他方、ＦｏｘＭ１の発現を抑制できる化合物も、本発明のＦｏｘＭ１阻害剤として使用可能であり、例えば、その遺伝子の転写、ＲＮＡの成熟化、ｍＲＮＡの翻訳、そのタンパク質の翻訳後修飾等を阻害するあらゆる化合物が対象である。具体的には、ＦｏｘＭ１遺伝子のスプライシングモディファイヤー（前記特許文献１参照）やｓｉＲＮＡ（前記特許文献２参照）等を例示できる。
　本発明のＦｏｘＭ１阻害剤を有効成分とする関節炎治療剤は、広く、関節の炎症をともなう疾病の治療および／または予防に用いることができ、例えば関節リウマチ、脊椎関節炎、組織球増殖症等が対象疾患として例示されるが、好ましくは、関節リウマチの治療および／または予防に用いられる。
　本発明のＦｏｘＭ１阻害剤は、経口投与、非経口投与または局所的投与に適した従来の薬学製剤（医薬組成物）の形態に調製することができる。
　経口投与のための製剤は、錠剤、顆粒、粉末、カプセルなどの固形剤、およびシロップなどの液体製剤を含む。これらの製剤は従来の方法によって調製することができる。固形剤は、ラクトース、コーンスターチなどのデンプン、微結晶性セルロースなどの結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルシウムカルボキシメチルセルロース、タルク、ステアリン酸マグネシウムなどのような従来の薬学的担体を用いることによって調製することができる。カプセルは、このように調製した顆粒または粉末をカプセルに包むことによって調製することができる。シロップは、ショ糖、カルボキシメチルセルロースなどを含む水溶液中で、ＦｏｘＭ１阻害剤を溶解または懸濁することによって調製することができる。
　非経口投与のための製剤は、点滴注入などの注入物を含む。注入製剤もまた従来の方法によって調製することができ、等張化剤（例えば、マンニトール、塩化ナトリウム、グルコース、ソルビトール、グリセロール、キシリトール、フルクトース、マルトース、マンノース）、安定化剤（例えば、亜硫酸ナトリウム、アルブミン）、防腐剤（例えば、ベンジルアルコール、ｐ－オキシ安息香酸メチル）中に適宜組み入れることができる。
　局所又は経皮投与用の剤形には、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、溶液剤、スプレー剤、吸入剤、又はパッチ剤が含まれる。有効成分のＦｏｘＭ１阻害剤は、無菌条件の下で、医薬的に許容される担体と、必要とされる保存剤又は必要とされ得る緩衝液と一緒に混合される。
　本発明のＦｏｘＭ１阻害剤の用量は、当該阻害活性化合物、疾患の種類、重症度、患者の年齢、性別、および体重、投薬形態などに従って変化させることができるが、通常は成人において１日あたり１ｍｇ～１，０００ｍｇの範囲であり、それは経口経路または非経口経路によって、１回、または２回もしくは３回に分割して投与することができる。
　本発明によればまた、前期ＦｏｘＭ１阻害剤を用いる関節炎の治療方法が提供される。この場合、前期ＦｏｘＭ１阻害剤は単独で、または１種以上の他の治療剤と組合せて使用することができる。組み合わせて用いられる薬剤としては、例えば、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、疼痛管理薬、ステロイド、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サイトカインアンタゴニスト、骨同化作用薬、骨抗吸収薬及びそれらの組合せなどの少なくとも１つの関節炎治療薬と併用して（二剤併用療法または三剤併用療法）、投与することができる。１つ又は複数の追加の薬剤と併用投与する場合、前期ＦｏｘＭ１阻害剤は他の薬剤と同時または連続して投与することができる。連続して投与する場合、主治医がＦｏｘＭ１阻害剤を他の薬剤と併用投与する適切な順序を決定する。
　ＦｏｘＭ１阻害剤と併用されるＤＭＡＲＤとしては、メトトレキセート、抗マラリア薬（例えば、ヒドロキシクロロキン及びクロロキン）、スルファサラジン、レフルノミド、アザチオプリン、シクロスポリン、金塩、ミノサイクリン、シクロホスファミド、Ｄ－ペニシラミン、ミノサイクリン、オーラノフィン、タクロリムス、ミオクリシン、クロラムブシル等；ステロイドとしては、プ レドニゾロン、プレドニゾン、デキサメタゾン、コルチソル、コルチゾン、ヒドロコルチ ゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、フル ドロコチゾン、デオキシコルチコステロン、アルドステロン等；疼痛管理薬または非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）としては、ルミラコキシブ、イブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、インドメタシン、スリンダック、エトドラック、ケトロラック、ナブメトン、アスピリン、ナプロキセン、バルデコキシブ、エトリコキシブ、ロフェコキシブ、アセトミノフェン、セレコキシブ、ジクロフェナク、トラマドール、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、イソキシカム、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナミック、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトドラク、インドメタシン、アスピリン、イブプロフェン、フィロコキシブ等が例示されるが、これらに限定はされない。
　以下に実施例を示して、本発明を具体的に説明するが、これら実施例は本発明を限定するものでは決してない。
試験例１　破骨前駆細胞におけるＦｏｘＭ１の発現
Ａ）コラーゲン誘発関節炎モデルマウス（ＣＩＡモデル）の血液と滑膜のＣＤ４５陽性細胞をフローサイトメトリーで選び出し、ＣＸ３ＣＲ１－ＥＧＦＰとＬｙ６Ｃ－ＡＰＣの蛍光で細胞分画を識別した。血液中のＣＸ３ＣＲ１ｌｏｗＬｙ６Ｃｈｉの分画をＲ１とし、炎症滑膜中のＣＸ３ＣＲ１ｌｏｗＬｙ６Ｃｈｉの分画をＲ２とし、ＣＸ３ＣＲ１ｈｉＬｙ６Ｃｉｎｔの分画をＲ３とした（図１Ａ）。
Ｂ）Ｒ３の分画はこれまで骨髄中の破骨前駆細胞（ＢＭ－ＯＰ）と報告されてきた分画とは異なり、フローサイトメトリーによる解析の結果ＣＤ８０，ＣＤ８６，Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ，ＣＤ１１ｃが発現していた（図１Ｂ）。
Ｃ）上記Ａ）で示したＲ１、Ｒ２およびＲ３の分画のｍＲＮＡの発現状況を網羅的に解析するため、ＲＮＡ－シーケンス解析を行った（Illumina HiSeq 2500 platform in 75-base single-end mode）。Ｒ３で上昇している転写因子をリストアップし、上流解析（Up-stream analysis）にかけたところ、ＦｏｘＭ１が最上位に位置し、ＦｏｘＭ１が本細胞の制御因子として示された（図１Ｃ）。
試験例２　破骨細胞への分化の抑制（in vitro）
　Ｒ３の細胞をフローサイトメトリー（セルソーターSH800、ソニー社）を用いて回収し、９６ウエルプレート上でＭ－ＣＳＦ １０ng/ml、ＲＡＮＫＬ 100ng/mlおよびＦｏｘＭ１阻害薬であるチオストレプトン（ＳＩＧＭＡ社）0.5、1または2μMを加えて培養したところ、破骨細胞へ分化する能力がチオストレプトン投与群では顕著に抑制された（図２）。
試験例３　モデルマウスにおける効果（in vivo）
　コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）マウスを３群に分け、チオストレプトン20mg/kg、50mg/kgまたは基剤（対照）を２１日目から隔日で腹腔内投与した。ＣＩＡマウスの作製と評価方法は以下のとおりである。
　８～１０週齢のＤＢＡ－１／Ｊマウスを用いて関節炎を惹起した。ニワトリII型コラーゲンを0.05M酢酸水溶液に溶解し、4℃で終夜回転させて濃度4.0mg/mlとし、等量のフロインドの完全アジュバントと混合した。初日に、上記ＤＢＡ－１／Ｊマウスにエマルジョン１００μlを尾部に注入して免役し、同様に21日目に投与を繰り返した。関節炎の重症度は確立済みの５ポイントスケールからなる半定量的スコア法に従って評価した。０：腫れなし、１：踵または足根骨にのみ僅かな腫れ、２：踵から足根骨にかけて僅かな腫れ、３：踵から中足関節にかけてかなりの腫れ、４：踵、足、指を含めて広がる重篤な腫れ。
各マウス四肢の累積スコア（最大１６）を関節炎スコアとして用いた〔Brand, D. D., Latham, K. A. & Rosloniec, E. F. Collagen-induced arthritis. Nat. Protoc. 2, 1269-1275 (2007)参照〕。
　また、マイクロＣＴを用いた画像解析を実施した。骨破壊スコアは先行研究を参考に行った（O’Brien, Arthritis Rheumatol. 2016参照)。上記関節炎スコアとマイクロＣＴで撮像した骨破壊スコアが、コントロール群に比べ有意に減少した（図３Ａ、３Ｂ）。
試験例４　ノックアウトマウスにおける評価
　ＦｏｘＭ１ノックアウトマウスは胎性致死となるため、タモキシフェンを用いて時間特異的にＦｏｘＭ１をノックアウトするマウス（ＲｏｓａＥＲＴ２Ｃｒｅ；ＦｏｘＭ１ｆｌ／ｆｌ）を用い、ＣＡＩＡモデルを評価した。これまでのＣＩＡモデルはＤＢＡ１／Ｊという系統では関節炎を惹起するが、ノックアウトマウスのＢ６という系統では関節炎を惹起しにくいため、Ｂ６でも関節炎を安定して惹起するＣＡＩＡモデルを用いた。
　ノックアウトモデルの作製は図４Ａに示すプロトコールに従った。即ち、初日に、５クローンArthrogen-CAIA抗体（コンドレックス社）５mgをiv投与し、３および１０日目にＬＰＳ４０ μgを腹腔内投与して関節炎を惹起した。関節炎の重症度は上記ＣＩＡモデルと同じ半定量的方法で評価した。この関節炎モデルマウスを、コントロール群、タモキシフェン２ mgを五日間腹腔内投与群、さらにタモキシフェン投与後にＦｏｘＭ１がノックアウトされていない単球を養子移植する群にわけ、１４日目に骨破壊スコアを比較した。
　すると、タモキシフェン投与群では、骨破壊スコアがコントロール群と比較して有意に抑制されており、ここにＦｏｘＭ１がノックアウトされていない単球を養子移植すると骨破壊が増悪した（図４Ｂ）。
試験例５
　関節リウマチ患者（ヒト）の血液と関節液、および関節組織の検体をフローサイトメトリーを用いて評価すると、試験１のＲ３と同様、関節液と関節組織にＣＸ３ＣＲ１陽性ＨＬＡ－ＤＲhiの細胞を認めた（マウスではＩ－Ａ／Ｉ－ＥがヒトＨＬＡ－ＤＲに相当し、Ｒ３でもＨＬＡ－ＤＲが高発現することが図１Ｂで示された）。フローサイトメトリーによってこれらの細胞を回収し、Ｍ－ＣＳＦ 50 ng/ml、ＲＡＮＫＬ 100 ng/ml、およびチオストレプトン 0.5 μMを加えて９６ウエルプレートで培養すると、チオストレプトン投与により破骨細胞への分化が有意に抑制された（図５Ａ、５Ｂ）。
　ＦｏｘＭ１の阻害剤を有効成分とすることで、重篤な感染症に罹患するリスクのない関節炎治療剤が製造されるから、本発明は産業上利用することができる。

Claims (8)

  1. 　ＦｏｘＭ１の阻害剤を有効成分とする、関節炎治療剤。
  2. 　ＦｏｘＭ１の阻害剤が、ＦｏｘＭ１活性の阻害剤である請求項１に記載の治療剤。
  3. 　ＦｏｘＭ１活性の阻害剤がチオストレプトンである、請求項２に記載の関節炎治療剤。
  4. 　ＦｏｘＭ１活性の阻害剤がＲＣＭ－１である、請求項２に記載の関節炎治療剤。
  5. 　関節炎が関節リウマチである、請求項１～４のいずれかに記載の治療剤。
  6. 　経口投与製剤である、請求項１～５のいずれかに記載の治療剤。
  7. 　治療を必要とする患者に、請求項１～６のいずれかに記載の治療剤の治療上有効な量を投与することを含む、関節炎または関節リウマチの治療方法。
  8. 　関節炎または関節リウマチの治療薬を製造するための、請求項１～４のいずれかに記載のＦｏｘＭ１阻害剤の使用。
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