WO2019193556A1 - Procédé d'extraction d'oligofucanes et ses applications - Google Patents

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WO2019193556A1
WO2019193556A1 PCT/IB2019/052795 IB2019052795W WO2019193556A1 WO 2019193556 A1 WO2019193556 A1 WO 2019193556A1 IB 2019052795 W IB2019052795 W IB 2019052795W WO 2019193556 A1 WO2019193556 A1 WO 2019193556A1
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WO
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composition
cancer
oligofucan
present
formula
Prior art date
Application number
PCT/IB2019/052795
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-Yves Moigne
Original Assignee
Jymsea
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Jymsea filed Critical Jymsea
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products

Definitions

  • the present invention relates to a process for obtaining oligofucans as synthetic intermediates from brown algae.
  • the present invention also relates to oligofucans as such derived from the process according to the invention and their applications.
  • Brown algae such as kelp
  • Brown algae are a natural source that is inexpensive and relatively easy to obtain. There is therefore interest in using these brown algae as a raw material for chemicals, which products would be much more complex to obtain by synthetic means.
  • the known natural products found in these algae include alginates, some polyphenols and fucans, among other molecules.
  • Fucans are polysaccharides, based on fucose, high molecular weight (up to several hundred thousand Daltons). Oligofucans are fucans of low molecular weight compared to natural fucans. Oligofucans conventionally have a mass of between 10,000 and 60,000 Da.
  • fucans have common characteristics (specific sulfation rates and some fucose content), there are different types of fucans. Fucans differ from each other by the presence of uronic acids or other sugars that fucose in their structures. The fucan molecules are generally linear, more or less substituted. Some fucans are also relatively well branched. It follows from this structural variability a variability of physicochemical and even biological properties.
  • EP 0403377 has been repeated on various occasions in the prior art (eg EP3156078, US2009043399, US6828307, WO2006079698, WO03062412 and FR2797768). To date, only industrial or potentially industrializable processes making it possible to obtain oligofucans with masses greater than 2,000 Da (at the lowest) are known.
  • fucans are relatively reactive molecules.
  • the fucans can react during their depolymerization with other compounds found in algae, such as proteins or polyphenols, which causes secondary compounds, and / or difficulties of extraction and purification.
  • the nature of the fucans may vary from one species of alga to another, for example with the integration of other saccharide derivatives than fucose.
  • the fucans may proceed with the depolymerization of the fucans after their isolation from the algae extract (ie fresh or very weakly treated material, such as dried or formaldehyde) their variable chemical nature (the polymers containing other sugars that fucose) makes this specific process to obtain a product itself specific to the type of seaweed treated.
  • One of the objectives of the present invention is, moreover, the generalization of all types of brown algae containing fucans of an industrial process for the production of oligofucans, themselves useful in the production of fucose or oligomers of fucose.
  • the object of the present invention allows the generation of an easily isolable family of chemical entities, intermediate potentials of fucose synthesis and fucose oligomers.
  • oligofucans have found several applications in the fields of health and cosmetics. Their small size, compared to fucanes larger size, allows them to display biological activities usable in the field of human or animal health (modulation of coagulation, inflammation, angiogenesis), or in human cosmetics, while their counterparts of higher molecular weight are very often blocked at the level of living barriers (skin barrier, cell membranes, etc.).
  • the synthesis intermediates produced and isolated in the present invention have interesting biological characteristics applicable for example in the fields of health and cosmetics.
  • the object of the present invention relates to a process for obtaining a composition of at least one oligofucan from at least one brown macroalga comprising the following successive steps:
  • step (b) purification of oligofucans with a mass less than M, obtained in step (a),
  • step (c) recovering the purified oligofucans of step (b);
  • M is less than 5000 Da, preferably less than 2000 Da.
  • the object of the present invention therefore relates to a composition comprising at least one oligofucan, or a salt thereof, obtainable according to the method of the invention.
  • the composition of the present invention has a sulfur content greater than 15%, preferably greater than 25%, by mass relative to the dry mass of the composition.
  • the composition of the present invention comprises at least 10%, preferably at least 90%, by dry weight of oligofucan relative to the dry mass of composition.
  • composition according to the present invention is characterized in that it has at least one oligofucan of formula (A) below:
  • X1, X2, X3 and X4 represent independently of each other -H, a negative charge, -SO3H, or -SO3 " ,
  • carbon (s) numbered 2 are alpha or beta configurations, independently of each other,
  • n is (an integer) between 1 and 5, preferably between 1 and 4 or a salt of the oligofucan of Formula (A).
  • the object of the present invention also relates to an oligofucan of formula (A) as defined above, XI, X2 and X3 can not all represent -H when X4 is -H.
  • the object of the present invention further relates to the cosmetic use of a composition or an oligofucan according to the present invention, preferably for their anti-aging, anti-wrinkle and / or firming action on the skin.
  • the object of the present invention further relates to a composition or oligofucan according to the present invention for use as a medicament.
  • Said composition according to the present invention is preferably intended for the treatment of inflammation, osteoarthritis, angiogenesis, cancer and / or obesity.
  • Said oligofucan according to the present invention is preferably intended for the treatment of inflammation, osteoarthritis, angiogenesis, cancer and / or obesity.
  • the object of the present invention relates to the use of a composition or an oligofucan according to the present invention as a synthesis intermediate in the synthesis of an oligofucose or fucose.
  • Fucans are polymers of fucose sulfate. For example, they may be ⁇ -1,2-L-fucose-4-sulfate polymers. Fucans are characterized by their sizes of up to several hundred thousand Daltons (Da).
  • Oleofucans are fucans of size between 0 and a few thousand Daltons. In the context of the present invention, the oligofucans are of sizes less than 5,000 Da, preferably less than 2,000 Da.
  • brown macroalgae in the context of the present invention, includes brown algae as commonly known in the state of the art. More particularly, in the context of the present invention, a brown macroalga may be fresh, formaldehyde and / or dry, preferably selected from the group consisting of Ascophyllum sp, Fucus sp, Lamaniria sp, Euchema sp, Macrocystis sp and Alaria sp, for example in fresh, formaldehyde and / or dry forms.
  • the brown macroalgae used in the process of the present invention are Lamaniria dititata and / or Lamaniria hyperborea, for example in fresh, formaldehyde and / or dry forms.
  • depolymerization in the context of the present invention, it is the process of lowering the size of the polymers (ie fucans or oligofucans), for example by hydrolysis in an aqueous medium, or by the action of an enzyme.
  • chemical route the general definition of a chemical reaction is applicable in the context of the present invention.
  • physical route in the context of the present invention, is understood any application of at least one physical method, that is to say involving a physical phenomenon such as radiation or a wave.
  • An example of a physical pathway is ultraviolet treatment, by heat or gamma radiation.
  • enzyme route the general definition of an enzymatic reaction is applicable in the context of the present invention, namely the implication of one or more enzymes that have allowed a chemical reaction.
  • enrichment in sulfate groups in the context of the present invention, it is understood that the amount of sulfate groups is increased in the (s) product (s) from the process according to the invention.
  • one of the means for characterizing the enrichment in sulphate groups is a comparison of the sulfur content (mass content) of the final product with respect to the starting product, or comparable to the starting material (in the case of an enrichment in sulfate fucans before treatment).
  • the usual techniques of analysis such as elemental analysis, and / or mass spectrometry possibly coupled to a liquid or gaseous chromotography, etc. allow this precisely.
  • alpha bond it is understood that the -CO- bonds are directed below the average plane constituted by the hexagonal ring of the saccharide unit of the chemical formulas of sugars described here.
  • beta bond it is understood that the -CO- bonds are directed above the average plane constituted by the hexagonal ring of the saccharide unit of the chemical formulas of sugars described here.
  • salt is meant any type of salt as conventionally known in the art.
  • a salt is characterized by the counter-ion of the molecule of interest, here by specifying a “negative charge” on the oligofucans of the present invention, it is implicit that by “salt” of it “the expression relates to the positive counterion, whether mineral or organic.
  • organic is classically understood any product comprising at least one group “-CH”; the other molecules being considered as minerals.
  • the positive counter-ion may be inorganic, for example chosen from the list consisting of aluminum (Al 3+ ), ammonium (NELC), silver (Ag + ), barium ( Ba 2+ ), calcium (Ca 2+ ), chromium II (Cr 2+ ), chromium III (Cr 3+ ), cobalt (Co 2+ ), copper I (Cu + ), copper II (Cu 2+ ), tin II (Sn 2+ ), tin IV (Sn 4+ ), iron II (Fe 2+ ), iron III (Fe 3+ ), lithium (Li + ), magnesium (Mg 2+ ), manganese (Mn 2+ ), nickel (Ni 2+ ), potassium (K + ), scandium (Sc 2+ ), sodium (Na + ), strontium (Sr 2+ ) or zinc (Zn 2+ ).
  • the counter-ion is chosen from calcium (Ca 2+ ), chromium II (Cr 2+ ), chromium III (Cr 3+ ), cobalt (Co 2+ ), lithium ( Li + ), magnesium (Mg 2+ ), manganese (Mn 2+ ), potassium (K + ), sodium (Na + ) and zinc (Zn 2+ ), more preferentially among calcium ions (Ca 2+ ), magnesium (Mg 2+ ), manganese (Mn 2+ ), potassium (K + ) and sodium (Na + ).
  • isolated in the context of the present invention, it is understood the potential to be isolated by the usual techniques of extractions or purifications.
  • a "strong acid” is an acid whose pKa is less than or equal to 3 and a weak acid is an acid whose pKa is greater than 3.
  • the term "cosmetic formulation” includes any composition intended for cosmetic use without inherent therapeutic effect or at least one detectable / observable therapeutic effect at the doses applied.
  • drug the general definition of a drug is applicable in the context of the present invention, namely a product that can be administered by any route and at a dose that allows a therapeutic effect on a human patient or an animal.
  • One of the objectives of the present invention is to obtain low molecular weight fucans (oligofucans), enriched in sulphate groups, from brown algae.
  • the subject of the present invention therefore relates to a process as defined above for obtaining a composition of at least one oligofucan from at least one brown macroalga, comprising the 3 steps (a), (b ) and (c) described below.
  • the depolymerization step of the fucans present in at least one brown macroalga may comprise a step (a2) of soaking said algae.
  • the depolymerization step (a) comprises a step (a3) of acid treatment of said algae.
  • Steps (a1) (sulphate enrichment), (a2) and / or (a3) can be carried out jointly and / or successively, steps (a2) and / or (a3) being optional.
  • a step (a4) of recovery, preferably by sieving, decantation or centrifugation, of the dipping juice of step (a2) is inserted between step (a2) and step (a3). .
  • a pH correction step (a5) following step (a3) is inserted after the latter.
  • Step (a3) can be replaced or supplemented by an enzymatic and / or physical depolymerization step (a6).
  • the sulphate group enrichment step (a1) may precede, be carried out jointly and / or successively in the depolymerization step (a3) and / or (a6).
  • the sulphate group enrichment step (a1) is carried out jointly with the depolymerization stage (a3) and / or (a6), for example by the action of an acid allowing both the depolymerization and enrichment in sulfate group, such as sulfuric acid.
  • an acid allowing both the depolymerization and enrichment in sulfate group, such as sulfuric acid.
  • step (a2) may be carried out before, after and / or together with the depolymerization step (a3) and / or (a6).
  • the dipping step (a2) is carried out before and / or together with the depolymerization step.
  • the process according to the present invention comprises a step (a1) for enriching sulphate groups in fucans and / or oligofucans.
  • Any sulphation technique is applicable in this case.
  • the sulphation is carried out by an industrial sulphation technique, for example, a simple sulphation by addition of SO 3 gas, by the addition of sulphamic acid (H 2 NSO 3 ), by the addition of sulfuric chlorohydrin (CISO 3 H) or by the addition of sulfuric acid (H 2 SO 4 ) or a salt thereof.
  • the method according to the present invention comprises a step (a2) of dipping at least one brown macroalga in an aqueous solution.
  • the step of (a2) of Soaking may also follow or include grinding any solids present in order to increase the yield of the process.
  • the step (a2) of dipping can be carried out for example at a temperature between 0 and 50 ° C, preferably between 10 and 30 ° C or between 15 and 25 ° C.
  • the recovery of the soaking juice from the soaking step (a2) can be carried out by any known technique, such as sieving, decanting or centrifugation, optionally followed by filtration with permeate recovery.
  • the depolymerization step of the present fucans can be made by any known route.
  • the chemical pathway involves depolymerization by ionic disruption or radical rupture of the chemical bonds.
  • the chemical route can therefore be advantageously hydrolysis.
  • This hydrolysis can be radical or ionic.
  • the ionic hydrolysis is carried out using an acid or a base, preferably an acid. Any type of acid can be used.
  • the acid hydrolysis (step (a3)) can be carried out with at least one strong acid and / or weak, organic and / or mineral, preferably at least one strong mineral acid. More preferably, the acid hydrolysis is carried out with an acid containing at least one sulfur atom, advantageously oxidized or (easily) oxidizable.
  • Step (a3) may be carried out with at least one strong acid selected from the list consisting of nitric acid (HNO 3 ), hydroiodic acid (HI), hydrobromic acid (HBr), hydrochloric acid (HCl), perchloric acid (HCIO 4 ), sulfuric acid (H 2 SO 4 ), chloric acid (HCIO 3 ), fluoroantimonic acid (HFeSbFs), so-called "magic acid” (HSO .FeSbFs) consisting of a mixture of fluorosulfuric acid HFSO 3 and antimony pentafluoride (SbFs), trifluoromethanesulfonic acid (HSO3CF3), fluorosulfuric acid (HSO 3 F), disulfuric acid (H 2 S 2 O 7 ) and / or permanganic acid (1 MnCl).
  • HNO 3 nitric acid
  • HI hydroiodic acid
  • HBr hydrobromic acid
  • HCl hydrochloric acid
  • step (a3) can be carried out with at least one acid chosen from hydrochloric acid (HCl) and / or an acid containing at least one sulfur atom such as the "magic" acid (HSCLFeSbFs), trifluoromethanesulfonic acid (HSO 3 CF 3 ), fluorosulfuric acid (HSO 3 F), disulfuric acid (H 2 S 2 O 7 ) and / or sulfuric acid (H 2 SO 4 ). More preferably, step (a3) is carried out with at least sulfuric acid (H 2 SO 4 ), optionally in combination with another acid such as hydrochloric acid.
  • H 2 SO 4 optionally in combination with another acid such as hydrochloric acid.
  • Step (a3) may be carried out with at least one acid whose pKa is less than 14, preferably less than 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 and / or 0.5.
  • the acid hydrolysis may be carried out with at least one weak acid (pKa greater than 3) selected from the list consisting of hydrofluoric acid (HF / F, pKa 3,17), nitrous acid (HNO 2 / NO 2 pKa 3.3), acetylsalicylic acid (CsLLChCOOH, C 8 H 7 O 2 COO, pKa 3.5), formic acid (HCOOH / HCOO, pKa 3.75), ascorbic acid (GFLOAGH- O,, pKa 4.05), benzoic acid (CeHsCOOH / CeHsCOO-, pKa 4.2), anilinium (GHsNFF '/ GHsNFb, pKa 4.62), acetic acid (CH 3 COOH / CH 3 COO pKa 4.
  • step (a3) is carried out at a pH of less than 4, for example at a pH of between 1 and 4.
  • step (a3) is carried out at a pH of between 1.5 and 3.5 or between 2 and 3, more preferably at a pH of 2 ( ⁇ 10%).
  • These acidities can be obtained by any techniques known in the art, such as an adjustment of the concentrations of the acid (s) employed.
  • Step (a), and more particularly step (a3) may be carried out at any temperature permitting depolymerization (followed by reverse phase liquid chromatography or else gas chromatography, for example with a polar column, such as a column). whose stationary phase contains polyethylene glycol, coupled to a "LC-MS” or "GC-MS” mass spectrometer, for example).
  • step (a), and more particularly step (a3) may be carried out at a temperature between 0 and 60 ° C, more preferably between 10 and 50 ° C, even more preferably between 20 and 40 ° C, such as between 25 and 35 ° C.
  • one of the advantages of the process according to the present invention is its reduced implementation cost: use of a cheap acid; less caloric intake - unnecessary heating to get the middlemen; limiting the number of steps in the process involving little handling or equipment. It has been found that it appears indeed more advantageous to carry out the depolymerization as early as possible in the process in order to immediately isolate the product (s) of interest and to limit the process steps to the industrial level.
  • the preferred process according to the present invention comprises a sulfuric acid treatment step at a pH of between 1 and 4 (step (a3)), without it being necessary to strongly heat the mixture (for example between 0.degree. and 60 ° C as described above).
  • the treatment allows the depolymerization of the natural fucans into oligofucans while preferably enriching these products with sulphate groups (addition of "SO 3 " to the "-OH" step (a1)).
  • the duration of the depolymerization (in particular acidic) is to be adapted to obtain the oligofucans according to the present invention, ie with a mass of less than 5000Da, preferably less than 2000Da.
  • step (a3) when acid treatment (step (a3)) is used on fucans, the pH is adjusted between 1 and 4, and the hydrolysis time is between 30 minutes and 5 hours, preferably between 1 hour and 4 hours. hours, more preferably between 1h30 and 3h, for example 2hour hours ( ⁇ 30 minutes).
  • a simple follow-up by LC-MS or GC-MS makes it possible to follow the evolution of the reaction.
  • step (a4) of recovery of the soaking juice of step (a2) can be inserted between step (a2) and step (a3).
  • Step (a4) may be performed by any applicable recovery technique such as sieving, filtration, decantation or centrifugation.
  • step (a4) is carried out by sieving, decantation or centrifugation.
  • an additional step (a5) can be added where the pH is corrected to reach neutrality, or even to obtain a very slightly acidic pH, for example between 5 and 8, preferably between 5.5 and 7.5, or between 6 and 7.
  • This step is not mandatory, but the resultant oligofucans are then found in the form of salt (s), such as a sodium salt and or calcium, which improves and facilitates purification.
  • the correction of the pH of the mixture of step (a5) can be carried out by the addition of any mineral or organic base.
  • the added base is a mineral base, such as sodium hydroxide, sodium carbonate, calcium carbonate, sodium bicarbonate, calcium bicarbonate.
  • Step (a5) allows a facilitated link with the next step (b) of purification.
  • the corrected pH of step (b) is initially identical with step (a5) and may be between 5 and 8, preferably between 5.5 and 7.5, or between 6 and 7.
  • the method of choice according to the invention allows the generation of a family of isolable and purifiable intermediate molecules.
  • This acid treatment process also makes it possible to limit the molecular variability in depolymerization products at an advantageous cost (inexpensive process as explained above).
  • the depolymerization can also be carried out with physical or enzymatic means such as those known in the art (e.g. EP 0403377).
  • fucan can be depolymerized by controlled lysis carried out for example by radiolysis, by subjecting the fucan to irradiation, in particular by gamma rays or else by its cation.
  • Step (a3) can then be replaced or completed by step (a6).
  • Steps (a2), (a3), (a4) and (a5) as described above are optional with step (a6).
  • the controlled depolymerization of fucan can be carried out by enzymatic hydrolysis.
  • This embodiment involves the use of at least one enzyme capable of fragmenting the hydrocarbon backbone of fucan, for example an ⁇ -I-2-fucosidase enzyme. It is possible to use in this context mixtures of enzymes, which are for example constituted by digestive juices of marine molluscs or obtained therefrom, or enzymes contained in bacteria that degrade algae.
  • the duration of the enzymatic or physical depolymerization is to be adapted (evolution followed by LC-MS or GC-MS) to obtain the oligofucans according to the present invention, ie with a mass less than 5000Da, preferably lower at 2000Da.
  • step (a3) the acid hydrolysis and sulphate group enrichment steps are preferably carried out together with step (a3) by a single treatment (for example with sulfuric acid).
  • step (a) is a chemical depolymerization, comprising:
  • the steps (a2) and (a3) can be carried out successively and / or jointly. More advantageously, the process according to the present invention is characterized in that:
  • step (a) is a chemical depolymerization, comprising the following successive steps:
  • step (a3) of acid treatment of the quenching juice of step (a4) the pH of the treated medium being between 1 and 4, the acid used being preferably one of those listed above, for example, sulfuric acid;
  • An optional step (a5) of pH correction up to neutrality is
  • step (a) is a chemical depolymerization, comprising the steps of:
  • step (a3) of acid treatment of the quenching juice of step (a4) the pH of the treated medium being between 1 and 4, the acid used being preferably one of those listed above, for example, sulfuric acid;
  • the purification step (b) makes it possible to isolate the lighter oligofucans following step (a).
  • the masses M of the oligofucans of the present invention are less than 5000 Da, preferably less than 2000 Da. Depending on the desired degree of polymerization, M may be less than 1000 Da, or even less than 500Da. Any purification technique for isolating oligofucans with a mass of less than M is applicable.
  • the purification step (b) may comprise a step (b1) of filtering the mixture obtained in step (a).
  • the purification step (b) of the process according to the present invention comprises at least one fractionation step (b2) with a cut-off threshold lower than M.
  • Steps (b1) and (b2) can be carried out successively and / or jointly. Indeed, the usual fractionation techniques can at the same time allow filtration.
  • the filtration step (bl) may comprise a clarification step (b3), carried out for example by ultrafiltration.
  • the ultrafiltration of step (b3) can be set at a threshold of 50,000 to 200,000 Da, preferably at the threshold of 100,000 Da.
  • the purification step (b) may further comprise a fractionation step (b4), preferably by ultrafiltration.
  • the fractionation step (b4) can advantageously be implemented jointly or successively in step (b3), if appropriate.
  • the ultrafiltration threshold G of the step (b4) allowing fractionation can be set at a threshold of less than 50,000 Da, preferably less than 25,000 Da, more preferably less than 10,000 Da, even more preferentially less than 5,000 Da or even less than 2,000 Da.
  • the ultrafiltration threshold G of step (b4) allowing the fractionation can be between 500 and 50,000 Da, preferably between 1,000 and 25,000 Da, more preferably between 2,000 and 10,000, or between 2,500 and 2,500. and 5,000.
  • the clarification, filtration and / or fractionation steps can be carried out in a single ultrafiltration purification step with a fairly low cutoff threshold (for example less than or equal to 5000Da, or even 2000Da) making it possible to achieve all of these three steps.
  • the purification step (b) may further comprise an additional concentration step (b5), preferably under vacuum.
  • the concentration step (b5) may advantageously be put in place before, jointly, and / or after step (b3) and / or (b4), as the case may be.
  • the additional step (b5) of concentration can be characterized in that the mixture reaches a degree Bx greater than 10 °, preferably between 15 and 25 ° Bx.
  • the purification step (b) may further comprise an additional step (b6) of demineralization.
  • the demineralization step (b6) may advantageously be put in place before, jointly, and / or after step (b3), (b4) and / or (b5), as the case may be.
  • the additional step (b6) of demineralization can be characterized in that the demineralization of step (b6) is carried out by electrodialysis.
  • the purification step (b) may further comprise an additional step (b7) of precipitation.
  • the precipitation step (b7) can advantageously be implemented before, together, and / or after step (b3), (b4), (b5) and / or (b6), as appropriate.
  • the precipitation step (b7) may advantageously be implemented after step (b3), (b4), (b5) and / or (b6), as the case may be.
  • the additional step (b7) of precipitation can be characterized in that it is carried out using an alcohol.
  • the alcohols used in the context of the present invention are of a purity greater than 90%, preferably greater than or equal to 95%, 96%, 97%, 98% or more. %, 99%, advantageously of a purity of the order of 100%.
  • the alcohol of step (b7) is chosen from a C 1 -C 5 alcohol, such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol and isobutanol. or alternatively tert-butanol, preferably ethanol.
  • a C 1 -C 5 alcohol such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol and isobutanol. or alternatively tert-butanol, preferably ethanol.
  • the alcohol of step (b7) is added in a proportion of 1 to 4 volumes of alcohol per 1 volume of treated mixture, preferably 2 volumes of alcohol per 1 volume of treated mixture.
  • step (b7) comprises a decantation step (b8) with removal of supernatant.
  • step (b7) further comprises, in step (b8), a step (b9) of washing the precipitate obtained by the precipitation, preferably with an alcohol.
  • the washing step (b9) is carried out in a proportion of 0.5 to 3 volumes of alcohol for a volume of precipitate, the alcohol may advantageously be chosen from a C 1 -C 5 alcohol, such as methanol. ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol or tert-butanol, preferably it is ethanol.
  • the steps (b7), (b8) further comprises the step (b9) a decantation step (b 10) with removal of supernatant.
  • step (b) may comprise at least one or two reiterations of steps (b7), (b8), (b9) and / or (b10).
  • step (a) is a depolymerization, for example by chemical means,
  • the oligofucan purification step (b) comprises a step (b1) of precipitation of the oligofucans with the aid of an alcohol.
  • step (a) is a depolymerization, for example by chemical means, comprising: • a step (a2) of soaking said at least one brown macroalga containing fucans in an aqueous solution; A step (a3), if appropriate, of acidic treatment of the mixture of step (a2), the pH of the treated medium being between 1 and 4, the acid used being preferably sulfuric acid;
  • steps (a2) and (a3) can be conducted successively and / or jointly;
  • the step (b) of purification of the oligofucans comprises a step (bl) of precipitating the oligofucans with the aid of an alcohol.
  • the recovery step (c) of the oligofucans comprises a drying step (c1), for example in an enclosure, said enclosure being preferably anti-explosion.
  • step (c) comprises a step (c2) of grinding the product.
  • the step (c2) grinding can advantageously be implemented before, jointly and / or after step (cl), if appropriate. Any technique of grinding products, in particular industrial, known in the art is applicable to the process according to the present invention.
  • the step (c2) of grinding can be characterized in that it makes it possible to obtain a product with a particle size of between 50 and 200 ⁇ m, preferably of 100% ⁇ 25%.
  • particle size is synonymous with "average particle diameter”.
  • step (c) comprises a step (c3) of packaging the product.
  • the grinding step (c3) can advantageously be put in place before, jointly and / or after step (c1) and / or (c2), as the case may be.
  • Any product packaging technique, in particular industrial, known in the art is applicable to the process according to the present invention.
  • the method according to the present invention can be characterized in that:
  • At least one brown macroalga in step (a1) is fresh, formaldehyde and / or dry, preferentially chosen from the group consisting of Ascophyllum sp, Fucus sp, Lamaniria sp, Euchema sp, Macrocystis sp and Alaria sp;
  • step (a4) of recovery preferably by sieving, decantation or centrifugation, of the soaking juice of step (a2) is inserted between step (a2) and step (a3);
  • step (a3) lasts from 0.5 to 4 hours and is followed by an optional step (a5) of pH correction, preferably with sodium hydroxide, of the mixture so that it is between 5 and B ;
  • the purification step (b) comprises a first filtration step (b2), preferably by ultrafiltration with a fractionation whose cutoff threshold is less than 100,000 Da, with recovery of the obtained permeate making it possible to clarify the mixture;
  • the purification step (b) comprises a second step (b3) ultrafiltration fractionation whose cutoff threshold is less than 5000 Da, preferably less than 2000Da, with recovery of the permeate obtained;
  • the purification step (b) comprises a third step (b4) concentration, preferably under vacuum, allowing the mixture to reach a degree Bx between 15 and 25 ° Bx;
  • the purification step (b) comprises a fourth step (b5) of demineralization, preferably by electrodialysis;
  • the alcohol of the purification step (bl) by precipitation is chosen from a C 1 to C 5 alcohol, such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol or isobutanol; or alternatively tert-butanol, preferably ethanol, this step being optionally followed by one or more washes of the precipitate with ethanol;
  • the recovery step (c) comprises a step (c) of drying the product obtained in step (b), optionally followed by a step (c2) grinding.
  • the object of the present invention makes it possible to obtain a synthesis intermediate of fucose or oligofucose.
  • the products according to the present invention have biological property (cosmetic field and / or health), it is quite possible to hydrolyze the oligofucans of the present invention in fucose and / or oligofucose by the example action of a base or an acid, such as those listed above.
  • the fucose obtained according to the present invention may be of L and / or D form, preferably of L form. It may in fact be a mixture of fucoses L and D.
  • the percentage of L-form is greater than 50% by weight, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or even greater than 99.5% by weight.
  • the oligofucan hydrolysis agent of the present invention in oligofucose and / or fucose is a concentrated acid, such as concentrated hydrochloric acid and / or concentrated sulfuric acid.
  • the method according to the present invention may be characterized in that it comprises an additional step (d), preferably between steps (c) and (b) hydrolyzing the sulfate groups present on the fucans in -OH.
  • the process according to the present invention can be characterized in that the hydrolysis is carried out by the action of an acid such as concentrated hydrochloric acid. Any type of catalyst known in this kind of hydrolysis reaction of an ester to alcohol is usable in the context of the present invention.
  • the object of the present invention also relates to the product that can be obtained by the process for obtaining oligofucans and / or oligofucoses as described herein, more particularly in points (a), (b) (c). and D).
  • product likely to be obtained it is understood that it may be the composition of products, or if the operating conditions allow for a single product, identifiable by a fixed chemical structure and / or one of its salts. For example, it is possible to obtain the same products as those by the process of the present invention starting from isolated fucans, natural or synthetic.
  • the object of the present invention relates to a composition that can be obtained according to the process as described herein, more particularly to the titles (a), (b) (c) and (d) above.
  • the subject of the present invention relates to a composition that can be obtained according to the process as described hereinabove, characterized in that said composition has a mineral fraction, for example greater than or equal to 50% by mass of dry matter of composition, preferably greater than or equal to 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% by mass of dry matter of composition.
  • a mineral fraction in the composition according to the present invention may be important (a test on a sample revealed in particular a rate of 94% of minerals).
  • the object of the present invention relates to a composition that can be obtained according to the process as described hereinabove, characterized in that said composition has an organic fraction (ie carbon) greater than or equal to 1% by mass of dry matter of composition , preferably greater than or equal to 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% or 99% by mass of dry matter of composition.
  • organic fraction ie carbon
  • composition obtainable according to the process of the invention may comprise oligofucans with 1,2-fucose-sulphite units of L- and / or D-form, preferably of L-form.
  • Oligofucans can in fact, it is preferable to include Fucose units of the D-form.
  • the percentage of L-form is greater than 50% by weight, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%. %, 99% or even greater than 99.5% by mass of fucose units present.
  • the composition that can be obtained according to the process of the invention can be characterized by its sulfur content.
  • the sulfur content of the composition that can be obtained according to the process of the invention is between 0% (fucose and oligofucose with other extracted products) and 50% by dry weight relative to the total dry mass of composition (possibly with enrichment with sulphate ions SO4 2 ) ⁇
  • the sulfur content of the composition obtainable by the process of the invention is between 5% and 45% by dry weight relative to the total dry mass composition, preferably between 10% and 40%, more preferably between 15 and 35%, even more preferably between 20% and 30%, or between 22 and 25% by dry weight relative to the total dry mass. decomposition.
  • the sulfur content of the composition that can be obtained according to the process of the invention is greater than 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% by dry weight relative to the dry mass. total composition.
  • the sulfur content is representative of the degree of sulfation of the product. From the sulfur level, a simple conversion to add four oxygen atoms to the sulfur makes it possible to know the percentage of sulphate.
  • the composition obtainable according to the process of the invention contains at least one oligofucan in a content of at least 10% by dry weight of oligofucan (s) relative to the total dry mass of the composition, preferably at least 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 80%, 90%, 95%, 98% or at least 99% by dry weight of oligofucan (s) relative to the total dry mass of composition.
  • the composition obtainable according to the process of the invention may be characterized in that it comprises at least one oligofucan of Formula (A) as defined herein.
  • composition obtainable according to the process of the invention may contain at least two oligofucans of formula A as described herein, for example where n is 1 and n is 2, or where n is 2 and n is 3, or where n is 3 and n is 4.
  • the composition obtainable by the process of the invention may further contain a mineral fraction as explained above.
  • two oligofucans are present in the composition according to the present invention, their proportions may be 50/50% by weight relative to the weight of the organic fraction of the dry composition, or 60/40% or 70/30%. .
  • the object of the present invention therefore also relates to an oligofucan of Formula A as described herein.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least one of XI, X2, X3 and / or X4 is -H and / or in that n is 1, 2, 3 or 4, preferably 1 or 2, with the exception of the case where X1, X2, X3 and X4 all represent H and n represents 1 and 2, or even 3 or 4 .
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least one of XI, X2, X3 and / or X4 represents a negative charge and / or that is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least one of X 1, X 2, X 3 and / or X 4 is - SO 3 H and / or in that n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) is limited in that at least one of X 1, X 2, X 3 and / or X 4 is -SO 3 and / or that n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least two of X1, X2, X3 and / or X4 are -H and / or n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2, with the exception of the case where X1, X2, X3 and X4 all represent H and n represents 1 and 2, or even 3 or 4.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least two groups among X1, X2, X3 and / or X4 represent a negative charge and in that n is 1 , 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least two groups among XI, X2, X3 and / or X4 represent -SO 3 H and / or in that n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least two groups among X1, X2, X3 and / or X4 represent -SO3 and / or that n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least three of X1, X2, X3 and / or X4 are -H and / or n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2, except where X 1, X 2, X 3 and X 4 are all H and n is 1, 2, 3 and / or 4.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least three groups among X1, X2, X3 and / or X4 represent a negative charge and / or in that n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least three groups among X1, X2, X3 and / or X4 represent -SO3H and / or that n is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that at least three of XI, X2, X3 and / or X4 represent -SO 3 and / or that is 1, 2, 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that all the groups among X1, X2, X3 and X4 represent a negative charge and / or that n is 1, 2 , 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that all the groups among X1, X2, X3 and X4 represent -SO 3 H and / or that n is 1, 2, 3 or 4, preferably 1 or 2.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that all the groups among X1, X2, X3 and X4 represent -SO 3 and / or that n is 1, 2 , 3, or 4, preferably 1 or 2.
  • formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that n is 2, 3 or 4, and X 2 and / or X 4 is -SO 3 H, or -SO 3 .
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that there is at least one group of different nature from the others in the group of groups XI, X2 and X3.
  • formula A (as an isolated product or in a composition) can be characterized in that not all groups XI, X2 and X3 can represent the -H group when X4 is -H.
  • the process according to the present invention makes it possible to isolate the oligofucans of Formula (A) according to the desired degree of purity. These products have biological properties comparable to fucans / oligofucans of higher molecular weight, with some variations including fewer side effects.
  • formula A (as an isolated product or in a composition) is characterized in that it comprises at the level of carbon 2 an alpha bond or a beta bond.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) is characterized in that it comprises at carbon level 2 at least one or two alpha bonds (preferably two), and / or none , at least one or two beta beasts.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) is characterized in that it comprises at least two carbon atoms, at least two or three alpha bonds (preferably three), and / or none, at least one, at least two or three beta bonds.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) is characterized in that it comprises at least two carbon atoms, at least two, at least three or four alpha bonds ( preferably four), and / or none, at least one, at least two, at least three or four beta bonds.
  • the formula A (as an isolated product or in a composition) is characterized in that it comprises at least two, at least two, at least three, at least four or at least two carbon atoms.
  • five alpha bonds (preferably five), and / or none, at least one, at least two, at least three, at least four or five beta bonds.
  • the molecules of Formula (A) (as an isolated product or in a composition) can be sub-identified and grouped into molecules of Formula (B), Formula (C), Formula (D) and / or Formula (E) described below.
  • Formula (A) (as an isolated product or in a composition) more specifically comprises molecules of Formula (B):
  • X1, X2, X3 and X4 are independently of each other -H, a negative charge, -SO 3 H, or -SO 3 , with at least one, at least two, at least three or all four of the groups XI, X2, X3 and X4 representing -SO 3 H, or -SO 3 , the carbon numbered 2 is of alpha or beta configuration, preferably of alpha configuration,
  • At least one, at least two or at most three of groups XI, X2, X3 and X4 represent -H or a negative charge; the groups XI, X2, X3 and X4 do not all represent -H or a negative charge (the sulfation rate would then be 0).
  • At least one, at least two, or all three of groups XI, X2 and X4 represent -H or a negative charge, and X3 represents -SO 3 H, or -SO3.
  • At least one, at least two or three of the groups XI, X2 and X4 represent-SCLFI or -SO3.
  • Formula A more precisely comprises molecules of Formula (C)
  • X1, X2, X3, X4, X5 and X6 independently of one another -H, a negative charge, -SO 3 H, or -SO 3 , with at least one, at least two, at least three, at least four at least five or all of the groups XI, X2, X3, X4, X5 and X6 representing -SO 3 H, or -SO 3 ,
  • carbons numbered 2 and 4 are independently of each other alpha or beta configurations, preferably both of alpha configurations,
  • At least one, at least two, at least three, at least four or at most five of groups XI, X2, X3, X4, X5 and X6 represent -H or a negative charge; the groups XI, X2, X3, X4, X5 and X6 do not all represent - H or a negative charge (the sulfation rate would then be 0).
  • At least one, at least two, at least three or four of groups XI, X2, X4 and X5 represent -H or a negative charge, and X3 and X6 represent -SO 3 H or -SO 3 .
  • At least one, at least two, at least three or four of groups XI, X2, X4 and X5 represent-SCLFI or -SO 3 .
  • Formula A more precisely comprises molecules of Formula (D):
  • X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7 and X8 are independently of one another -H, a negative charge, -SO 3 H, or -SO 3 , with at least one, at least two, at least three, at least four, at least five, at least six, at least seven or all eight of the groups XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7 and X8 representing -SO 3 H, or - SO3-,
  • the carbons numbered 2, 4 or 6 are independently of each other of alpha or beta configurations, preferably all three of alpha configurations,
  • At least one, at least two, at least three, at least four, at least five, at least six or at most seven of groups XI, X2, X3, X4, X5, X6 X7 and X8 represent -H or a negative charge; the groups XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7 and X8 do not all represent -H or a negative charge (the sulfation rate would then be equal to 0).
  • At least one, at least two, at least three, at least four, or five of the groups XI, X2, X4, X5 and X7 represent -H or a negative charge, and X3, X6 and X8 represent -SO 3 H or -SO 3 .
  • At least one, at least two, at least three, at least four or five of groups XI, X2, X4, X5 and X7 represent-SCEFI or -SO 3 .
  • Formula A more precisely comprises molecules of Formula (E):
  • X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 and X10 are independently of each other -H, a negative charge, -SO 3 H, or -SO 3 , with at least one, at least two at least three, at least four, at least five, at least six, at least seven, at least eight, at least nine or all ten of the groups XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 and X10 representing - SO 3 H, or -SCF,
  • the carbon numbered 2, 4, 6 and 8 are independently of each other of alpha or beta configurations, preferably all four of alpha configuration, or a salt of the oligofucan of Formula (E).
  • At least one, at least two, at least three, at least four, at least five, at least six, at least seven, at least eight or at most nine of groups XI, X2 X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 and X10 represent -H or a negative charge; the groups XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 and X10 do not all represent -H or a negative charge (the sulfation rate would then be 0).
  • At least one, at least two, at least three, at least four, at least five, or six of X 1, X 2, X 4, X 5, X 7, and X 9 represent -H or a negative charge.
  • at least one, at least two, at least three, at least four, or five of the groups XI, X2, X4, X5 and X7 represent -H or a negative charge, and X3, X6, X8 and X10 represent -SO 3 H or -SO 3 .
  • At least one, at least two, at least three, at least four, at least five, or six of X 1, X 2, X 4, X 5, X 7 and X 9 represent SO 3 H or - SCF.
  • the composition according to the present invention comprises molecules of formulas (B), (C), (D) and / or (E) as described above. More preferably, the composition according to the present invention comprises molecules of formulas (B), (C) and / or (D) as described above. Even more preferably, the composition according to the present invention comprises molecules of formulas (B) and / or (C) as described above.
  • the composition according to the present invention (in particular as an active ingredient) comprises (in dry mass) mainly molecules of formulas (B), (C), (D) and / or (E) as described. above.
  • the composition according to the present invention (in particular as an active principle) comprises (in dry mass) mainly molecules of formulas (B), (C), and / or (D) as described above.
  • the composition according to the present invention (in particular as an active principle) comprises (in dry mass) mainly molecules of formulas (B) and / or (C) as described above.
  • “predominantly” it is understood in the context of the present invention a content greater than or equal to 50% by dry weight, preferably greater than 60, 70, 80, 90, 95 or 99%, or even equal to 100% by weight. dried.
  • the molecules included in the composition according to the present invention comprise -SO 3 H, or -SO 3 groups arranged randomly on the structures (at the level of the groups XI, X2 , X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 and XI 0) of formulas (A), (B), (C), (D) and / or (E).
  • the oligofucans according to the present invention do not exhibit the anticoagulant activity of oligofucans / fucans of higher molecular weight.
  • the object of the present invention relates to the oligofucans according to the present invention (formulas (A), (B), (C), (D), (E) and their variants) intended for their anti-inflammatory activities, their applications in:
  • osteoarthritis and inflammatory diseases more generally, the treatment of angiogenesis
  • the object of the present invention relates to the oligofucans (as such and the compositions) according to the present invention (formulas (A), (B), (C), (D), (E) and their variants) as a medicine.
  • the object of the present invention further relates to the use of a composition or an oligofucan according to the present invention in a cosmetic composition.
  • Fucans are conventionally used in cosmetics to stimulate the synthesis of type 1 collagen and the proliferation of dermal fibroblasts.
  • the oligofucans of the present invention have better penetration of the different layers of the skin than fucans of higher molecular weight.
  • the object of the present invention therefore relates to the cosmetic use of the products of the present invention (eg formulas (A), (B), (C), (D), (E) and their variants, for example in composition) for their anti-aging, anti-wrinkle, firming action on the different skin layers (ie the skin).
  • the object of the present invention relates to the use of a composition or an oligofucan according to the present invention as a synthetic intermediate in the synthesis of an oligofucose or fucose, as seen above.
  • Ligure 1 Diagram illustrating an embodiment of the method according to the present invention with the steps (a), (b) and (c):
  • maximum threshold 5000 Da or 2000 Da
  • EtOH EtOH 96%, 1V / 1V
  • Option IX drying, for example in an ADF enclosure at 50-60 ° C
  • Option X grinding, the particle size obtained is for example about 100 mHi Case (6): Enrichment in sulphate groups
  • Example 1 Process for Obtaining Oligofucans l st step: soaking of 1000 kg fresh seaweed in 1000 liters of fresh water acidified to pH 2.0 ( ⁇ 0.2) with sulfuric acid (H (L dititata, Lhyperboreap.e.) 2 SO 4 ) concentrated for 2 to 3 hours at room temperature.
  • sulfuric acid H (L dititata, Lhyperboreap.e.) 2 SO 4
  • 2nd stage soaking juice recovery of the first stage by screening.
  • 3rd step correction of the pH to 6.5 the resulting solution of the 2 nd step by adding 33% sodium hydroxide (NaOH).
  • 4 th step clarifying the solution obtained in the 3rd step by ultrafiltration with a threshold of 100 000 Da.
  • 5 th step fractionation of the permeate obtained in the 4th stage by ultrafiltration Da 2000 threshold.
  • 6 th step the concentration permeate obtained from the 5 th step at 20 ° Bx on vacuum concentrator.
  • 7 th step demineralization thrust concentrate obtained in the 6 th step by electrodialysis.
  • S th step precipitation of oligofucanes contained in the solution obtained in the 7th step by the addition of ethyl alcohol (EtOH) at a rate of 2V EtOH / lV concentrated solution oligofucanes. Leave to settle. Eliminate the supernatant.
  • EtOH ethyl alcohol
  • 9th step washing the precipitate from the 8 th step in an amount of 1 mass EtOH / 1 mass precipitated. Leave to settle. Eliminate the supernatant.
  • ll th step drying of the precipitate from the 10 th step in anti explosion pregnant (ADF).
  • a determination of sulfur by elemental analysis makes it possible to determine the rate and the degree of sulphation.
  • the product obtained by the process described above had a sulfation rate of the order of 45% to 70% (CNS elementary analysis, Dumas method).
  • the degree of polymerization is determined by nanofiltration.
  • the product obtained by the method described above had a degree of polymerization of less than 2000 Da (chromatography ionic).
  • the degree of purity of the products was evaluated close to 95%.
  • Oligofucans of one and two units i.e. formulas B and C: 70 to 80%
  • Oligofucan three and four units (i.e. formulas D and E): 20 to 30%
  • An oligofucan composition obtained according to the method of Example 1 was subjected to a simple blood coagulation test (on blood samples from five different patients).
  • the oligofucans according to the present invention do not exhibit the anticoagulant activity of oligofucans / fucans of higher molecular weight.
  • the molecules have a similar sequence (even identical) but at a lower degree of polymerization) fucans known in the art and known for their different biological activities. This results in very interesting biological application (health) perspectives (activity on inflammation, osteoarthritis, angiogenesis, obesity), without the known side effects of higher molecular weight fucans.
  • the object of the present invention also relates to a composition as described above for the treatment of cancer, which can be characterized in that the cancer is selected from a list consisting of lung cancers, breast cancers, cancer of the prostate cancer, colorectal cancer, thyroid cancer, cervical cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, lip cancer, oral cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, liver cancer, cancer of the brain, testicular cancers, pancreatic cancers, bone cancers, skin cancers, leukemias, small bowel cancers, stomach cancers, pleural cancers, esophageal cancers, cancer of the bladder and lymphomas, preferentially consisting of ovarian cancers, breast cancers, colorectal cancers, pancreatic cancers, leukemia (e.g.
  • the composition as described above is intended for the treatment of ovarian cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, leukemia (for example acute human myeloid leukemia).
  • Fucans are conventionally used in cosmetics to stimulate the synthesis of type 1 collagen and the proliferation of dermal fibroblasts. It has been found that the oligofucans of the present invention have a much greater ease of penetration of the different layers of the skin than fucans of higher molecular weight.
  • An algae extract as obtained according to Example 1 was tested on cancer cells.
  • A2780 (“Human ovarian carcinoma”) human ovarian cancer
  • HCT116 and HT29 (“Human colorectal carcinoma”) human colorectal cancer
  • MiaPaCa2 ("Human pancreas carcinoma") human pancreatic cancer
  • L1210 ("murine leukemia") murine leukemic line
  • MCF7 ("Human breast carcinoma") human breast cancer
  • A549 ("Lung cancer (Non Small Cells)”) lung cancer (non-small cell);
  • HL60 (“Human leukemia”) human leukemia
  • KG-1 (“Human acute myelogenic leukemia”) acute myeloid leukemia.
  • the products were dissolved directly in the cell culture medium on the day of the experiment.
  • D0 Inoculation of cells in 96-well plates at the following densities: A2780: 3500 cells per well, Caco2: 2000 cells per well, HCT116 and MiaPaCa2: 1000 cells / well, HT29: 500 cells per well, KG-1: 7000 cells / well.
  • Jl Addition of 10 mg / well of inhibitors at the concentration lOx. Each dose is tested in 3 wells.
  • Concentrations tested 0.1 to 1000 mM final (semi logarithmic progression), calculation based on an average molecular weight of 800.
  • the extracts inhibit the proliferation of the A2780 ovarian line with 050 of 100 to 300 mM. At 1000 mM, activity was observed on other cell lines with in particular a 40% inhibition of the proliferation of the MiaPaCa2 pancreatic line (batch 1602). However, no activity was found on MCF-7 (breast cancer) lines at the tested concentrations.

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Abstract

L'objet de la présente invention concerne un procédé d'extraction d'oligofucanes à partir d'algues brunes, les compositions résultats de cette extraction, ainsi que leurs applications. Ledit procédé comprend les étapes successives suivantes: (a) dépolymérisation des fucanes présents, par exemple par voie chimique, physique et/ou enzymatique, (b) purification des oligofucanes de masse inférieure à M, obtenus à l'étape (a) (c) récupération des oligofucanes purifiés de l'étape (b); ledit procédé étant caractérisé en ce que: - il comprend une étape (al) d'enrichissement en groupements sulfates présents sur les fucanes et/ou les oligofucanes, préférentiellement lors de l'étape (a) de dépolymérisation et - M est inférieur à 5000 Da, préférentiellement inférieur à 2000 Da.

Description

PROCEDE D’EXTRACTION D’OLIGOFUCANES ET SES APPLICATIONS
La présente invention concerne un procédé d’obtention d’oligofucanes en tant qu’intermédiaires de synthèse à partir d’algues brunes. La présente invention concerne également les oligofucanes en tant que tels issus du procédé selon l’invention et leurs applications.
Les algues brunes, tels que les laminaires, sont une source naturelle peu onéreuse et relativement facile à obtenir. Il y a donc un intérêt à utiliser ces algues brunes comme matière première de produits chimiques, lesquels produits seraient bien plus complexes à obtenir par des voies synthétiques. Les produits naturels connus trouvés dans ces algues comprennent les alginates, certains polyphénols et les fucanes, parmi d’autres molécules.
Les fucanes sont des polysaccharides, à base de fucose, de haut poids moléculaire (allant jusqu’à plusieurs centaines de milliers de Daltons). Les oligofucanes sont des fucanes de bas poids moléculaires par rapport aux fucanes naturels. Les oligofucanes présentent classiquement une masse comprise entre 10 000 et 60 000 Da.
Il parait donc opportun d’utiliser cette source naturelle pour obtenir du fucose ou des oligomères (1, 2, 3, 4, 5 unités) de fucose. Or, et bien que les fucanes présentent des caractéristiques communes (taux spécifiques de sulfatation et une certaine richesse en fucose), il existe différents types de fucanes. Les fucanes diffèrent les uns des autres par la présence d’acides uroniques ou d’autres sucres que le fucose dans leurs structures. Les molécules de fucane sont généralement linéaires plus ou moins substituées. Certains fucanes sont d’ailleurs relativement très ramifiés. Il découle de cette variabilité structurelle une variabilité des propriétés physico-chimiques, voire biologiques.
En termes de procédés d’obtention, les procédés actuels pour obtenir les fucanes natifs (de haut poids moléculaires) à partir d’algues brunes impliquent par exemple l'utilisation, entre autres, d'une extraction aqueuse à chaud (60 à 95°C) suivie d'opérations de clarification, purification, concentration et éventuellement séchage. Le degré de pureté peut ainsi atteindre et dépasser les 90% selon les conditions opératoires. Toutefois, les fucanes obtenus sont caractéristiques du type d’algue traitée : taux de sulfatation, nature et quantité d’autres saccharides/polysaccharides présents, produits secondaires liés au traitement dans l’environnement spécifique à l’algue, etc.
L’obtention industrielle d’oligofucanes (de bas poids moléculaire) passe aujourd’hui classiquement par la dépolymérisation des fucanes naturels isolés de ces algues. Le haut degré de polymérisation des fucanes trouvés dans la nature impose un traitement permettant d’abaisser leurs poids moléculaires. A titre d’illustration, dans EP 0403377 il est décrit différentes techniques d’obtention d’oligofucanes, impliquant le traitement d’extraits d’algues (eux-mêmes obtenus par traitement d’acide chlorhydrique) par l’acide sulfurique, un traitement enzymatique ou un traitement par rayonnement. Les techniques décrites dans EP 0403377 ont été reprises à diverses occasions dans l’art antérieur (e.g. EP3156078 ; US2009043399 ; US6828307 ; W02006079698 ; WO 03062412 ; FR2797768). A ce jour, seuls des procédés industriels ou potentiellement industrialisables permettant l’obtention d’oligofucanes de masses supérieures à 2 000 Da (au plus bas) sont connus.
Il y a plusieurs explications à ceci. D’une part, les fucanes sont des molécules relativement réactives. Ainsi, les fucanes peuvent réagir lors de leur dépolymérisation avec d’autres composés trouvés dans les algues, tels que les protéines ou les polyphénols, ce qui occasionne des composés secondaires, et/ou des difficultés d’extraction et de purification. D’autre part, il n’est pas nécessaire de dépolymériser totalement les fucanes pour obtenir des produits actifs biologiquement. Il ne semble donc pas nécessaire, utile ou souhaitable au regard de l’art antérieur de pousser la dépolymérisation plus loin qu’à des valeurs de masse inférieures à 5 000, voire 2000 Da, pour obtenir des produits biologiquement actifs.
De plus, et comme évoqué si dessus, la nature des fucanes peut varier d’une espèce d’algue à une autre, par exemple avec l’intégration d’autres dérivés saccharidique que le fucose. Ainsi, s’il est possible de procéder à la dépolymérisation des fucanes après leur isolement de l’extrait d’algue (i.e. matière fraîche ou très faiblement traitée -telle que séchée ou formolée) leur nature chimique variable (les polymères contiennes d’autres sucres que le fucose) rend ce procédé spécifique à l’obtention d’un produit lui-même spécifique au type d’algue traité.
L’un des objectifs de la présente invention est d’ailleurs la généralisation à tout type d’algues brunes contenant des fucanes d’un procédé industriel de production d’oligofucanes, eux-mêmes utiles dans l’obtention de fucose ou d’oligomères de fucose.
Il a été trouvé de manière inattendue que l’enrichissement en groupement sulfates des oligofucanes de poids moléculaires inférieur à 2000 Da facilite l’obtention et l’isolement de ces oîigofucanes, d’une manière par ailleurs utilisable par la suite pour la production d’oligomères de fucose.
Ainsi, l’objet de la présente invention permet la génération d’une famille facilement isolable d’entités chimiques, potentiels intermédiaires de synthèse de fucose et d’oligomères de fucose.
Outre ces aspects de synthèse, depuis leur connaissance, les oligofucanes ont trouvé plusieurs applications dans les domaines de la santé et la cosmétique. Leur petite taille, par rapport aux fucanes de plus large taille, leur permet en effet d’afficher des activités biologiques utilisables dans le domaine de la santé humaine ou animale (modulation de la coagulation, de l’inflammation, de l’angiogenèse), ou en cosmétique humaine, alors que leurs homologues de plus haut poids moléculaire sont très souvent bloqués au niveau des barrières vivantes (barrière cutanée, membranes cellulaires, etc.).
Ainsi, les intermédiaires de synthèse produits et isolés lors de la présente invention présentent des caractéristiques biologiques intéressantes applicables par exemple dans les domaines de la santé et de la cosmétique.
RESUME DE L’INVENTION
L’objet de la présente invention concerne un procédé d’obtention d’une composition d’au moins un oligofucane à partir d’au moins une macroalgue brune comprenant les étapes successives suivantes :
(a) dépolymérisation des fucanes présents, par exemple par voie chimique, physique et/ou enzymatique ,
(b) purification des oligofucanes de masse inférieure à M, obtenus à l’étape (a),
(c) récupération des oligofucanes purifiés de l’étape (b) ;
ledit procédé étant caractérisé en ce que :
il comprend une étape (al) d’enrichissement en groupements sulfates présents sur les fucanes et/ou les oligofucanes, préférentiellement lors de l’étape (a) de dépolymérisation, et
M est inférieur à 5000 Da, préférentiellement inférieur à 2000 Da.
L’objet de la présente invention concerne donc une composition comprenant au moins un oligofucane, ou un sel de celui-ci, susceptible d’être obtenu selon le procédé de l’invention. Préférentiellement, la composition de la présente invention a un taux de soufre supérieur à 15 %, préférentiellement supérieur à 25 %, en masse par rapport à la masse sèche de la composition. Préférentiellement, la composition de la présente invention comprend au moins 10%, préférentiellement au moins 90%, en masse sèche d’oligofucane par rapport à la masse sèche de composition.
De manière plus précise, la composition selon la présente invention est caractérisée en ce qu’elle présente au moins un oligofucane de Formule (A) suivante :
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Formule (A)
dans laquelle :
XI, X2, X3 et X4 représentent indépendamment les uns des autres -H, une charge négative, -SO3H, ou -SO3",
le(s) carbone(s) numéroté(s) 2 sont de configurations alpha ou beta, indépendamment les uns des autres,
n est (un nombre entier) compris entre 1 et 5, préférentiellement entre 1 et 4 ou un sel de l’oligofucane de Formule (A).
L’objet de la présente invention concerne également un oligofucane de formule (A) telle que définie ci-dessus, XI, X2 et X3 ne pouvant pas tous représenter -H lorsque X4 représente -H.
L’objet de la présente invention concerne en outre l’utilisation cosmétique d’une composition ou d’un oligofucane selon la présente invention, préférentiellement pour leurs actions anti-âge, antirides et/ou raffermissant sur la peau.
L’objet de la présente invention concerne par ailleurs une composition ou un oligofucane selon la présente invention destinée à une utilisation en tant que médicament. Ladite composition selon la présente invention est préférentiellement destinée au traitement de l’inflammation, de l’arthrose, de l’angiogénèse, du cancer et/ou de l’obésité. Ledit oligofucane selon la présente invention est préférentiellement destiné au traitement de l’inflammation, de l’arthrose, de l’angiogénèse, du cancer et/ou de l’obésité.
L’objet de la présente invention concerne l’utilisation d’une composition ou d’un oligofucane selon la présente invention en tant qu’intermédiaire de synthèse dans la synthèse d’un oligofucose ou de fucose.
DEFINITIONS
Les « fucanes » sont des polymères de fucose-sulfate. Par exemple, il peut s’agir de polymères d’a-1 ,2-L-fucose-4-sulfate. Les fucanes sont caractérisés par leurs tailles pouvant atteindre plusieurs centaines de milliers de Daltons (Da).
Les « oligofucanes » sont des fucanes de taille comprise entre 0 et quelques milliers de Daltons. Dans le cadre de la présente invention, les oligofucanes sont de tailles inférieures à 5 000 Da, préférentiellement inférieurs à 2 000 Da.
Par « macroalgue brune », dans le cadre de la présente invention, il est compris des algues de couleur brune comme communément ainsi appelé dans l’état de la technique. Plus particulièrement, dans le cadre de la présente invention, une macroalgue brune peut être fraîche, formolée et/ou sèche, préférentiellement choisie dans le groupe constitué de Ascophyllum sp, Fucus sp, Lamaniria sp, Euchema sp, Macrocystis sp et Alaria sp, par exemple sous formes fraîches, formolées et/ou sèches. De manière préférée, les macroalgues brunes utilisées dans le procédé de la présente invention sont Lamaniria dititata et/ou Lamaniria hyperborea, par exemple sous formes fraîches, formolées et/ou sèches.
Par « dépolymérisation », dans le cadre de la présente invention, il s’agit du procédé d’abaissement de la taille des polymères (i.e. des fucanes ou oligofucanes), par exemple par hydrolyse dans un milieu aqueux, ou par l’action d’une enzyme.
Par « voie chimique », la définition générale d’une réaction chimique est applicable dans le cadre de la présente invention. Par « voie physique », dans le cadre de la présente invention, il est compris toute application d’au moins une méthode physique, c’est-à-dire impliquant un phénomène physique tel qu’un rayonnement ou encore une onde. Un exemple de voie physique est le traitement ultraviolet, par la chaleur, ou encore par rayonnement gamma. Par « voie enzymatique », la définition générale d’une réaction enzymatique est applicable dans le cadre de la présente invention, à savoir l’implication d’une ou de plusieurs enzymes ayant permis une réaction chimique.
Par « enrichissement en groupements sulfates », dans le cadre de la présente invention, il est compris que la quantité de groupements sulfates est augmentée dans le(s) produit(s) issu(s) du procédé selon l’invention. Ainsi, l’un des moyens pour caractériser l’enrichissement en groupements sulfates est une comparaison du taux (massique) de soufre du produit final par rapport au produit de départ, ou assimilable au produit de départ (s’agissant d’un enrichissement en sulfate des fucanes avant traitement). Les techniques usuelles d’analyses telles qu’une analyse élémentaire, et/ou une spectrométrie de masse éventuellement couplée à une chromotographie liquide ou gazeuse, etc. permettent cela précisément.
Dans le cadre de la présente invention et en accord avec la pratique, par « liaison alpha », il est compris que les liaisons -C-O- sont dirigées en dessous du plan moyen constitué par le cycle hexagonal de l’unité saccharidique des formules chimiques de sucres décrites présentement.
Dans le cadre de la présente invention et en accord avec la pratique, par « liaison béta », il est compris que les liaisons -C-O- sont dirigées au-dessus du plan moyen constitué par le cycle hexagonal de l’unité saccharidique des formules chimiques de sucres décrites présentement.
Par « sel », il est compris tout type de sel tel que classiquement connu dans l’art. Ainsi, et même si un sel est caractérisé par le contre-ion de la molécule d’intérêt, ici en précisant une « charge négative » sur les oligofucanes de la présente invention, il est implicite que par « sel de celui-ci » l’expression concerne le contre-ion positif, qu’il soit minéral ou organique. Par « organique » il est classiquement compris tout produit comprenant au moins un groupement « -C-H » ; les autres molécules étant considérés comme des minéraux. Classiquement, dans le cadre de la présente invention, le contre-ion positif peut-être minéral, par exemple choisi dans la liste consistant en les ions aluminium (Al3+), ammonium (NELC), argent (Ag+), baryum (Ba2+), calcium (Ca2+), chrome II (Cr2+), chrome III (Cr3+), cobalt (Co2+), cuivre I (Cu+), cuivre II (Cu2+), étain II (Sn2+), étain IV (Sn4+), fer II (Fe2+), fer III (Fe3+), lithium (Li+), magnésium (Mg2+), manganèse (Mn2+), nickel (Ni2+), potassium (K+), scandium (Sc2+), sodium (Na+), strontium (Sr2+) ou encore zinc (Zn2+). Préférentiellement dans le cadre de la présente invention, le contre-ion est choisi parmi les ions calcium (Ca2+), chrome II (Cr2+), chrome III (Cr3+), cobalt (Co2+), lithium (Li+), magnésium (Mg2+), manganèse (Mn2+), potassium (K+), sodium (Na+) et zinc (Zn2+), plus préférentiellement parmi les ions calcium (Ca2+), magnésium (Mg2+), manganèse (Mn2+), potassium (K+) et sodium (Na+).
Par « isolable », dans le cadre de la présente invention, il est compris le potentiel d’être isolé par les techniques usuelles d’extractions ou de purifications.
Dans le contexte de la présente invention, un « acide fort » est un acide dont le pKa est inférieur ou égale à 3 et un acide faible est un acide dont le pKa est supérieur à 3.
Par « formulation cosmétique », dans le cadre de la présente invention, il est compris toute composition destinée à une utilisation cosmétique sans effet thérapeutique inhérent ou du moins un effet thérapeutique détectable/constatable aux doses appliquées.
Par « médicament », la définition générale d’un médicament est applicable dans le cadre de la présente invention, à savoir un produit administrable par quelque voie que ce soit et à une dose permettant un effet thérapeutique sur un patient humain ou un animal.
Il est implicite dans le cadre de la présente invention que le terme « comprendre » (ou tout terme équivalent tel que « contient »), où qu’il puisse être trouvé, peut être limité à sa forme plus restrictive « consistant en ».
DESCRIPTION DETAILLEE
L’un des objectifs de la présente invention est l’obtention de fucanes de bas poids moléculaire (oligofucanes), enrichis en groupement sulfates, à partir d’algues brunes.
L’objet de la présente invention concerne donc un procédé tel que défini ci-dessus d’obtention d’une composition d’au moins un oligofucane à partir d’au moins une macroalgue brune, comprenant les 3 étapes (a), (b) et (c) décrits ci-dessous.
(al Etape de dépolvmérisation Dans un mode de réalisation, l’étape de dépolymérisation des fucanes présents dans au moins une macroalgue brune peut comprendre une étape (a2) de trempage desdites algues.
Dans un mode de réalisation éventuellement combinable à l’étape (a2) de trempage, l’étape de dépolymérisation (a) comprend une étape (a3) de traitement acide desdites algues.
Les étapes (al) (enrichissement en sulfates), (a2) et/ou (a3) peuvent être réalisées conjointement et/ou successivement, les étapes (a2) et/ou (a3) étant optionnelles.
Dans un mode de réalisation particulier, une étape (a4) de récupération, préférentiellement par tamisage, décantation ou centrifugation, du jus de trempage de l’étape (a2) est insérée entre l’étape (a2) et l’étape (a3).
Dans un mode de réalisation particulier, une étape (a5) de correction de pH à la suite de l’étape (a3) est insérée après cette dernière.
L’étape (a3) peut être remplacée ou complétée par une étape (a6) de dépolymérisation enzymatique et/ou physique.
Dans le cadre de la présente invention, l’étape d’enrichissement en groupement sulfates (al) peut précéder, se faire conjointement et/ou successivement à l’étape de dépolymérisation (a3) et/ou (a6). Préférentiellement, l’étape d’enrichissement en groupement sulfates (al) se fait conjointement à l’étape de dépolymérisation (a3) et/ou (a6), par exemple par l’action d’un acide permettant à la fois la dépolymérisation et l’enrichissement en groupement sulfates, tel que l’acide sulfurique. Dans ce contexte, il est donc tout à fait envisageable d’utiliser tout moyen de dépolymérisation connu des fucanes, suivi par une sulfatation.
Le trempage de l’étape (a2) peut être effectué avant, après et/ou conjointement à l’étape de dépolymérisation (a3) et/ou (a6). Préférentiellement, l’étape (a2) de trempage est effectué avant et/ou conjointement à l’étape de dépolymérisation.
• Étape (al) d’enrichissement en groupements sulfates
Le procédé selon la présente invention comprend une étape (al) d’enrichissement en groupements sulfates dans les fucanes et/ou oligofucanes. Toute technique de sulfatation est applicable en l’espèce. Préférentiellement, la sulfatation se fait par une technique de sulfatation industrielle, par exemple, une simple sulfatation par addition de SO3 gazeux, par l’addition d’acide sulfamique (H2NSO3), par l’addition de chlorhydrine sulfurique (CISO3H) ou encore par l’addition d’acide sulfurique (H2SO4) ou un sel de ceux-ci.
• Étape (a2) de trempage d’algues
Avantageusement, le procédé selon la présente invention comprend une étape (a2) de trempage d’au moins une macroalgue brune dans une solution aqueuse. L’étape de (a2) de trempage peut également suivre ou comprendre un broyage des éventuels solides présents afin d’augmenter le rendement du procédé.
L’étape (a2) de trempage peut être réalisée par exemple à une température comprise entre 0 et 50°C, préférentiellement entre 10 et 30°C ou entre 15 et 25°C . La récupération du jus de trempage issue de l’étape (a2) de trempage peut être effectuée par toute technique connue, tel que le tamisage, la décantation ou la centrifugation, éventuellement suivie par une filtration avec récupération du perméat.
• Étape (a3) de dépolymérisation chimique
Ainsi, l’étape de dépolymérisation des fucanes présents peut être faite par toute voie connue.
La voie chimique implique une dépolymérisation par rupture ionique ou rupture radicalaire des liaisons chimiques. La voie chimique peut donc être avantageusement une hydrolyse. Cette hydrolyse peut être radicalaire ou ionique. De manière avantageuse, l’hydrolyse ionique est réalisée à l’aide d’un acide ou d’une base, préférentiellement un acide. Tout type d’acide peut être utilisé.
Ainsi, l’hydrolyse acide (étape (a3)) peut être réalisée avec au moins un acide fort et/ou faible, organique et/ou minéral, préférentiellement au moins un acide fort minéral. Plus préférentiellement, l’hydrolyse acide est réalisée avec un acide contenant au moins un atome de soufre, avantageusement oxydé ou (facilement) oxydable.
L’étape (a3) peut être réalisée avec au moins un acide fort choisi dans la liste consistant en l’acide nitrique (HNO3), l’acide iodhydrique (HI), l’acide bromhydrique (HBr), l’acide chlorhydrique (HCl), l’acide perchlorique (HCIO4), l’acide sulfurique (H2SO4), l’acide chlorique (HCIO3), l’acide fluoroantimonique (HFeSbFs), l’acide dit « magique » (HSO .FeSbFs) constitué d’un mélange d’acide fluorosulfurique HFSO3 et de pentafluorure d'antimoine (SbFs), l’acide trifluorométhanesulfonique (HSO3CF3), l’acide fluorosulfurique (HSO3F), l’acide disulfurique (H2S2O7) et/ou l’acide permanganique (^MnCL). Préférentiellement, l’étape (a3) peut être réalisée avec au moins un acide choisi parmi l’acide chlorhydrique (HCl) et/ou un acide contenant au moins un atome de soufre tel que l’acide « magique » (HSCLFeSbFs), l’acide trifluorométhanesulfonique (HSO3CF3), l’acide fluorosulfurique (HSO3F), l’acide disulfurique (H2S2O7) et/ou l’acide sulfurique (H2SO4). Plus préférentiellement, l’étape (a3) est réalisée avec au moins l’acide sulfurique (H2SO4), éventuellement en combinaison avec un autre acide tel que l’acide chlorhydrique. L’étape (a3) peut être réalisée avec au moins un acide dont le pKa est inférieur à 14, préférentiellement inférieur à 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 et/ou 0,5. L’hydrolyse acide peut être réalisée avec au moins un acide faible (pKa supérieur à 3) choisi dans la liste consistant en l’acide fluorhydrique (HF/F, pKa 3,17), l’acide nitreux (HNO2/NO2 , pKa 3,3), l’acide acétylsalicylique (CsLLChCOOH, C8H7O2COO , pKa 3,5), l’acide formique (HCOOH/HCOO , pKa 3,75), l’acide ascorbique (GFLOAGH-O , , pKa 4,05), l’acide benzoïque (CeHsCOOH/CeHsCOO-, pKa 4,2), anilinium (GHsNFF '/GHsNFb, pKa 4,62), l’acide acétique (CH3COOH/CH3COO , pKa 4,75), et/ou l’acide propanoïque (C2H5COOH/C2H5COO , pKa 4,87).
Avantageusement, l’étape (a3) est réalisée à un pH inférieur à 4, par exemple à un pH compris entre 1 et 4.
Préférentiellement, l’étape (a3) est réalisée à un pH compris entre 1,5 et 3,5 ou encore entre 2 et 3, plus préférentiellement à un pH à 2 (± 10%). Ces acidités peuvent être obtenues par toutes techniques connues dans l’art, tel qu’un ajustement des concentrations du ou des acides employés.
L’étape (a), et plus particulièrement l’étape (a3), peut être faite à toute température permettant la dépolymérisation (suivie par chromatographie liquide phase inverse ou encore une chromatographie gazeuse par exemple avec une colonne polaire, telle qu’une colonne dont la phase stationnaire contient du polyéthylène glycol, couplées à un spectromètre de masse « LC-MS » ou « GC-MS », par exemple). Préférentiellement, l’étape (a), et plus particulièrement l’étape (a3), peut être effectuée à une température comprise entre 0 et 60° C, plus préférentiellement entre 10 et 50°C, encore plus préférentiellement entre 20 et 40°C, tel qu’entre 25 et 35°C. Ainsi, l’un des avantages du procédé selon la présente invention est son coût de mise en œuvre réduit : utilisation d’un acide bon marché ; moins d’apport calorique - chauffage inutile pour obtenir les intermédiaires ; limitation du nombre d’étapes dans le procédé impliquant peu de manutention ou de matériel. Il a été découvert qu’il semble en effet plus avantageux de procéder à la dépolymérisation le plus tôt possible dans le procédé afin d’isoler immédiatement le/les produits d’intérêt et de limiter les étapes du procédé au niveau industriel.
Ainsi, le procédé préféré selon la présente invention comprend une étape de traitement à l’acide sulfurique à un pH compris entre 1 et 4 (étape (a3)), sans qu’il soit nécessaire de chauffer fortement le mélange (par exemple entre 0 et 60°C comme décrit ci-dessus). Le traitement permet la dépolymérisation des fucanes naturels en des oligofucanes tout en enrichissant de manière préférée ces produits en groupements sulfates (ajout de « SO3 » sur les « -OH » - étape (al) conjointement). La durée de la dépolymérisation (en particulier acide) est à adapter pour obtenir les oligofucanes selon la présente invention, i.e. avec une masse inférieure à 5000Da, préférentiellement inférieure à 2000Da. Par exemple, lorsqu’un traitement acide (étape (a3)) est utilisé sur les fucanes, le pH est ajusté entre 1 et 4, et le temps d’hydrolyse est compris entre 30 minutes et 5 heures, préférentiellement entre 1 heure et 4 heures, plus préférentiellement entre lh30 et 3h, par exemple 2hl0 heures (± 30 minutes). Un simple suivi par LC-MS ou GC- MS permet de suivre l’évolution de la réaction.
• Étape (a4) de récupération du jus de trempage
L’étape (a4) de récupération du jus de trempage de l’étape (a2) peut être insérée entre l’étape (a2) et l’étape (a3). L’étape (a4) peut être effectuée par toute technique de récupération applicable tels que le tamisage, la filtration, la décantation ou la centrifugation. Préférentiellement l’étape (a4) est effectuée par tamisage, décantation ou centrifugation.
• Étape (a5) de correction de pH
De manière plus générale, une fois la dépolymérisation (acide) effectuée, une étape supplémentaire (a5) peut être ajoutée où le pH est corrigé pour atteindre la neutralité, voire pour obtenir un pH très légèrement acide, par exemple compris entre 5 et 8, préférentiellement entre 5,5 et 7,5, ou encore entre 6 et 7. Cette étape n’est pas obligatoire, mais les oligofucanes qui en résulteront sont retrouvés alors sous forme de sel(s), tels qu’un sel de sodium et/ou calcium, ce qui permet d’améliorer et de faciliter la purification. La correction du pH du mélange de l’étape (a5) peut être effectuée par l’ajout de toute base minérale ou organique. Préférentiellement, la base ajoutée est une base minérale, telle que de la soude, du carbonate de soude, du carbonate de calcium, du bicarbonate de soude, du bicarbonate de calcium. Par exemple si la soude est utilisée pour corriger le pH, celle-ci peut être sous forme dissoute ou solide, à toute concentration utile, par exemple sous forme de soude dissoute concentrée (à 33% en masse). L’étape (a5) permet un lien facilité avec l’étape suivant (b) de purification. Ainsi par exemple, après dépolymérisation du mélange à l’étape (a) le pH corrigé de l’étape (b) est au départ identique avec l’étape (a5) et peut être compris entre 5 et 8, préférentiellement entre 5,5 et 7,5, ou encore entre 6 et 7.
Ainsi, le procédé de choix selon l’invention permet la génération d’une famille de molécules intermédiaires isolables et purifiables. Ce procédé de traitement acide permet en outre de limiter la variabilité moléculaire en produits de dépolymérisation à un coût intéressant (procédé bon marché comme expliqué ci-dessus). • Étape (a6) de dépolymérisation enzymatique et/ou physique
La dépolymérisation peut être également réalisée avec des moyens physiques ou enzymatiques tels que ceux connus dans l’art (e.g. EP 0403377). Par exemple le fucane peut être dépolymérisé par une lyse ménagée réalisée par exemple par radiolyse, en soumettant le fucane à une irradiation, notamment par rayons gamma ou encore par soni cation. L’étape (a3) peut alors être remplacée ou complétée par l’étape (a6). Les étapes (a2), (a3), (a4) et (a5) telles que décrites ci-dessus sont optionnelles avec l’étape (a6).
Selon encore un autre mode de réalisation du procédé selon la présente invention, la dépolymérisation ménagée du fucane peut être réalisée par hydrolyse enzymatique. Ce mode de réalisation implique l'utilisation d'au moins une enzyme capable de fragmenter le squelette hydrocarboné du fucane, par exemple une enzyme du type a-I-2-fucosidase. Il est possible d’utiliser dans ce contexte des mélanges d'enzymes, qui sont par exemple constitués par des sucs digestifs de mollusques marins ou obtenus à partir de ceux-ci, ou encore des enzymes contenues dans des bactéries qui dégradent les algues.
De même que pour le traitement acide, la durée de la dépolymérisation enzymatique ou physique est à adapter (évolution suivie par LC-MS ou GC-MS) pour obtenir les oligofucanes selon la présente invention, i.e. avec une masse inférieure à 5000Da, préférentiellement inférieure à 2000Da.
• Exemples de combinaisons possibles
Toutes les étapes décrites ci-dessus sont combinables les unes avec les autres. Dans les modes de réalisation décrits ci-dessous, les étapes d’hydrolyse acide et d’enrichissement en groupement sulfates sont préférentiellement réalisées conjointement à l’étape (a3) par un seul traitement (par exemple à l’acide sulfurique).
Ainsi, de manière avantageuse le procédé selon la présente invention est caractérisé en ce que :
l’étape (a) est une dépolymérisation par voie chimique, comprenant :
• une étape (a2) de trempage de ladite au moins une macroalgue brune contenant des fucanes dans une solution aqueuse ; et
• une étape (a3) de traitement acide du mélange de l’étape (a2), le pH du milieu traité étant compris entre 1 et 4, l’acide utilisé étant préférentiellement l’un de ceux listés ci-dessus, par exemple l’acide sulfurique ;
les étapes (a2) et (a3) pouvant être menés successivement et/ou conjointement. De manière plus avantageuse le procédé selon la présente invention est caractérisé en ce que :
l’étape (a) est une dépolymérisation par voie chimique, comprenant les étapes successives suivantes :
• une étape (a2) de trempage de ladite au moins une macroalgue brune contenant des fucanes dans une solution aqueuse ;
• une étape (a4) de récupération du jus de trempage de l’étape (a2) et
• une étape (a3) de traitement acide du jus de trempage de l’étape (a4), le pH du milieu traité étant compris entre 1 et 4, l’acide utilisé étant préférentiellement l’un de ceux listés ci-dessus, par exemple l’acide sulfurique ;
• une étape optionnelle (a5) de correction de pH jusqu’à neutralité.
De manière également avantageuse le procédé selon la présente invention est caractérisé en ce que :
l’étape (a) est une dépolymérisation par voie chimique, comprenant les étapes suivantes :
• une étape optionnelle (a2) de trempage de ladite au moins une macroalgue brune contenant des fucanes dans une solution aqueuse ;
• une étape (a3) de traitement acide du jus de trempage de l’étape (a4), le pH du milieu traité étant compris entre 1 et 4, l’acide utilisé étant préférentiellement l’un de ceux listés ci-dessus, par exemple l’acide sulfurique ;
• une étape optionnelle (a5) de correction de pH à neutralité ; les étapes (a2) et (a3) pouvant être menés successivement et/ou conjointement, le cas échéant (bj Etape de purification
L’étape (b) de purification permet d’isoler les oligofucanes les plus légers à la suite de l’étape (a). Les masses M des oligofucanes de la présente invention sont inférieures à 5000 Da, préférentiellement inférieur à 2000 Da. Selon le degré de polymérisation voulu, M peut être inférieur à 1000 Da, voire inférieur à 500Da. Toute technique de purification permettant d’isoler les oligofucanes de masse inférieure à M, est applicable.
Dans le cadre de la présente invention, après dépolymérisation des fucanes en oligofucanes directement sur l’algue ou sur un premier jus obtenu de l’algue, il a été trouvé une méthode de purification des oligofucanes efficace et simple à mettre en œuvre. Ainsi, l’étape (b) de purification peut comprendre une étape (bl) de filtration du mélange obtenu à l’étape (a). Préférentiellement, l’étape (b) de purification du procédé selon la présente invention comprend au moins une étape (b2) de fractionnement avec un seuil de coupure inférieur à M.
Les étapes (bl) et (b2) peuvent être menées successivement et/ou conjointement. En effet, les techniques usuelles de fractionnement peuvent permettre en même temps une filtration.
L’étape de filtration (bl) peut comprendre une étape (b3) de clarification, réalisée par exemple par ultrafiltration. L’ultrafiltration de l’étape (b3) peut être fixée à un seuil de 50 000 à 200 000 Da, préférentiellement au seuil de 100 000 Da.
L’étape de purification (b) peut en outre comprendre une étape (b4) de fractionnement, préférentiellement par ultrafiltration. L’étape (b4) de fractionnement peut avantageusement être mise en place conjointement ou successivement à l’étape (b3), le cas échéant. Le seuil de G ultrafiltration de l’étape (b4) permettant le fractionnement peut être fixé à un seuil inférieur à 50 000 Da, préférentiellement inférieur à 25 000 Da, plus préférentiellement inférieur à 10 000 Da, encore plus préférentiellement inférieur à 5 000 Da ou encore inférieur à 2 000 Da. Ainsi, Le seuil de G ultrafiltration de l’étape (b4) permettant le fractionnement peut être compris entre 500 et 50 000 Da, préférentiellement entre 1 000 et 25 000 Da, plus préférentiellement entre 2 000 et 10 000, ou encore entre 2 500 et 5 000. Les étapes de clarification, filtration et/ou fractionnement peuvent être effectuée lors d’une seule étape de purification d’ultrafiltration avec un seuil de coupure assez bas (par exemple inférieur ou égal à 5000Da, voire 2000Da) permettant de réaliser l’ensemble de ces trois étapes.
L’étape de purification (b) peut en outre comprendre une étape (b5) additionnelle de concentration, préférentiellement sous vide. L’étape (b5) de concentration peut avantageusement être mise en place avant, conjointement, et/ou après l’étape (b3) et/ou (b4), le cas échéant. L’étape (b5) additionnelle de concentration peut être caractérisée en ce que le mélange atteigne un degré Bx supérieur à 10°, préférentiellement compris entre 15 et 25°Bx.
L’étape de purification (b) peut en outre comprendre une étape (b6) additionnelle de déminéralisation. L’étape (b6) de déminéralisation peut avantageusement être mise en place avant, conjointement, et/ou après l’étape (b3), (b4) et/ou (b5), le cas échéant. L’étape (b6) additionnelle de déminéralisation peut être caractérisée en ce que la déminéralisation de l’étape (b6) est effectuée par électrodialyse.
L’étape de purification (b) peut en outre comprendre une étape (b7) additionnelle de précipitation. L’étape (b7) de précipitation peut avantageusement être mise en place avant, conjointement, et/ou après l’étape (b3), (b4), (b5) et/ou (b6), le cas échéant. Préférentiellement, l’étape (b7) de précipitation peut avantageusement être mise en place après l’étape (b3), (b4), (b5) et/ou (b6), le cas échéant. L’étape (b7) additionnelle de précipitation peut être caractérisée en ce qu’elle est réalisée à l’aide d’un alcool.
De manière préférée, les alcools utilisés dans le cadre la présente invention (lors de la précipitation, du lavage par exemple), sont d’une pureté supérieure à 90%, préférentiellement supérieure ou égale à 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, avantageusement d’une pureté de l’ordre de 100%.
De manière avantageuse, l’alcool de l’étape (b7) est choisi parmi un alcool en Ci à C5, tel que le méthanol, l’éthanol le n-propanol, l’isopropanol, le n-butanol, l’isobutanol, ou encore le tert-butanol, préférentiellement l’éthanol.
De manière avantageuse, l’alcool de l’étape (b7) est ajouté à raison de 1 à 4 volumes d’alcool pour 1 volume de mélange traité, préférentiellement de 2 volumes d’alcool pour 1 volume de mélange traité.
De manière avantageuse, l’étape (b7) comprend une étape (b8) de décantation avec élimination de surnageant. Préférentiellement, l’étape (b7) comprend en outre de l’étape (b8) une étape (b9) de lavage du précipité obtenu par la précipitation, préférentiellement par un alcool. Préférentiellement, l’étape (b9) de lavage est effectué à raison de 0,5 à 3 volumes d’alcool pour un volume de précipité, l’alcool pouvant être avantageusement choisi parmi un alcool en Ci à C5, tel que le méthanol, l’éthanol le n-propanol, l’isopropanol, le n-butanol, l’isobutanol, ou encore le tert-butanol, préférentiellement il s’agit d’éthanol. Préférentiellement, les étapes (b7), (b8) comprend en outre de l’étape (b9) une étape (b 10) de décantation avec élimination de surnageant. Préférentiellement, l’étape (b) peut comprend au moins une, ou deux, réitérations des étapes (b7), (b8), (b9) et/ou (b 10).
Ainsi, de manière avantageuse le procédé selon la présente invention est caractérisé en ce que :
- l’étape (a) est une dépolymérisation, par exemple par voie chimique,
- l’étape (b) de purification des oligofucanes comprend une étape (bl) de précipitation des oligofucanes à l’aide d’un alcool.
Ainsi, de manière avantageuse le procédé selon la présente invention est caractérisé en ce que :
l’étape (a) est une dépolymérisation, par exemple par voie chimique, comprenant : • une étape (a2) de trempage de ladite au moins une macroalgue brune contenant des fucanes dans une solution aqueuse ; • une étape (a3), le cas échéant, de traitement acide du mélange de l’étape (a2), le pH du milieu traité étant compris entre 1 et 4, l’acide utilisé étant préférentiellement l’acide sulfurique ;
les étapes (a2) et (a3) pouvant être menés successivement et/ou conjointement ;
- optionnellement, l’étape (b) de purification des oligofucanes comprend une étape (bl) de précipitation des oligofucanes à l’aide d’un alcool.
(cj Etape de récupération des produits d’intérêt
Toute technique de récupération de produits, en particulier industrielle, connue dans l’art est applicable au procédé selon la présente invention.
Préférentiellement, l’étape de récupération (c) des oligofucanes comprend une étape (cl) de séchage, par exemples dans une enceinte, ladite enceinte étant préférentiellement anti déflagration.
De manière avantageuse, l’étape (c) comprend une étape (c2) de broyage du produit. L’étape (c2) de broyage peut avantageusement être mise en place avant, conjointement et/ou après l’étape (cl), le cas échéant. Toute technique de broyage de produits, en particulier industrielle, connue dans l’art est applicable au procédé selon la présente invention. Ainsi, l’étape (c2) de broyage peut être caractérisée en ce qu’elle permet d’obtenir un produit avec une granulométrie comprise entre 50 et 200mhi, préférentiellement de 1 OOmhi ± 25%. Dans le cadre de la présente invention, le terme « granulométrie » est synonyme de « diamètre moyen des particules ».
De manière avantageuse, l’étape (c) comprend une étape (c3) de conditionnement du produit. L’étape (c3) de broyage peut avantageusement être mise en place avant, conjointement et/ou après l’étape (cl) et/ou (c2), le cas échéant. Toute technique de conditionnement de produits, en particulier industrielle, connue dans l’art est applicable au procédé selon la présente invention.
Ainsi de manière plus avantageuse, le procédé selon la présente invention peut être caractérisé en ce que :
- au moins une macroalgue brune à l’étape (al) est fraîche, formolée et/ou sèche, préférentiellement choisie dans le groupe constitué de Ascophyllum sp, Fucus sp, Lamaniria sp, Euchema sp, Macrocystis sp et Alaria sp;
- une étape (a4) de récupération, préférentiellement par tamisage, décantation ou centrifugation, du jus de trempage de l’étape (a2) est insérée entre l’étape (a2) et l’étape (a3) ; - l’étape (a3) dure de 0,5 à 4 heures et est suivie d’une étape (a5) optionnelle de correction du pH, préférentiellement avec de la soude, du mélange pour que celui-ci soit compris entre 5 et B ;
- l’étape de purification (b) comprend une première étape (b2) de filtration, préférentiellement par ultrafiltration avec un fractionnement dont le seuil de coupure est inférieur à 100 000 Da, avec récupération du perméat obtenu permettant une clarification du mélange ;
- l’étape de purification (b) comprend une seconde étape (b3) de fractionnement par ultrafiltration dont le seuil de coupure est inférieur à 5 000 Da, préférentiellement inférieur à 2000Da, avec récupération du perméat obtenu ;
- l’étape de purification (b) comprend une troisième étape (b4) de concentration, préférentiellement sous vide, permettant au mélange d’atteindre un degré Bx compris entre 15 et 25°Bx ;
- l’étape de purification (b) comprend une quatrième étape (b5) de déminéralisation, préférentiellement par électrodialyse ;
- l’alcool de l’étape de purification (bl) par précipitation est choisi parmi un alcool en Cl à C5, tel que le méthanol, l’éthanol le n-propanol, l’isopropanol, le n-butanol, l’isobutanol, ou encore le tert-butanol, préférentiellement l’éthanol, cette étape étant éventuellement suivie par un ou plusieurs lavages du précipité avec de l’éthanol ;
- l’étape de récupération (c) comprend une étape (cl) de séchage du produit obtenu à l’étape (b), éventuellement suivi par une étape (c2) de broyage.
(d3 Obtention de fucose et oligofucose
L’objet de la présente invention permet d’obtenir un intermédiaire de synthèse de fucose ou oligofucose. Bien que les produits selon la présente invention présentent de propriété biologiques (domaine cosmétique et/ou de la santé), il est tout à fait possible d’hydrolyser les oligofucanes de la présente invention en fucose et/ou oligofucose par l’exemple par l’action d’une base ou d’un acide, tels que ceux listé ci-dessus.
Le fucose obtenu selon la présente invention peut être de forme L et/ou D, de manière préférée de forme L. Il peut en effet s’agir d’un mélange de fucoses L et D. De manière préférée, le pourcentage de forme L est supérieur à 50% en masse, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, voire supérieur à 99,5% en masse.
Préférentiellement, l’agent d’hydrolyse des oligofucanes de la présente invention en oligofucose et/ou fucose est un acide concentré, tel que l’acide chlorhydrique concentré et/ou l’acide sulfurique concentré. Ainsi, le procédé selon la présente invention peut être caractérisée en ce qu’il comprend une étape supplémentaire (d), préférentiellement entre les étapes (c) et (b), d’hydrolyse des groupements sulfates présent sur les fucanes en -OH. Le procédé selon la présente invention peut être caractérisée en ce que l’hydrolyse s’effectue par l’action d’un acide tel que l’acide chlorhydrique concentré. Tout type de catalyseur connu dans ce genre de réaction d’hydrolyse d’un ester en alcool est utilisable dans le contexte de la présente invention.
je) Produit et composition selon la présente invention
L’objet de la présente invention concerne également le produit susceptible d’être obtenu par le procédé d’obtention d’oligofucanes et/ou d’oligofucoses tel que décrit présentement, plus particulièrement aux points (a), (b) (c) et (d). Par « produit susceptible d’être obtenu », il est entendu, qu’il peut s’agir de la composition de produits, ou si les conditions opératoires le permettent d’un seul produit, identifiable par une structure chimique figée et/ou de l’un de ses sels. Par exemple, il est possible d’obtenir les mêmes produits que ceux par le procédé de la présente invention en partant de fucanes isolés, naturels ou synthétiques.
L’objet de la présente invention concerne une composition susceptible d’être obtenue selon le procédé tel que décrit présentement, plus particulièrement aux titres (a), (b) (c) et (d) ci-dessus.
L’objet de la présente invention concerne une composition susceptible d’être obtenue selon le procédé tel que décrit présentement, caractérisée en ce que ladite composition présente une fraction minérale, par exemple supérieure ou égale à 50 % en masse de matière sèche de composition, préférentiellement supérieure ou égale à 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% en masse de matière sèche de composition. En effet des tests de calcination ont montrés une fraction minérale dans la composition selon la présente invention pouvant être importante (un test sur un échantillon a révélé en particulier un taux de 94% de minéraux).
L’objet de la présente invention concerne une composition susceptible d’être obtenue selon le procédé tel que décrit présentement, caractérisée en ce que ladite composition présente une fraction organique (i.e. carbonée) supérieure ou égale à 1 % en masse de matière sèche de composition, préférentiellement supérieure ou égale à 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99% en masse de matière sèche de composition.
La composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention peut comprendre des oligofucanes avec des unités de l,2-fucose-suifate(s) de forme L et/ou D, de manière préférée de forme L. Les oligofucanes peuvent en effet comprendre des unités fucoses de forme D. De manière préférée néanmoins, le pourcentage de forme L est supérieur à 50% en masse, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, voire supérieur à 99,5% en masse d’unités fucoses présentes. La composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention peut être caractérisable par son taux de soufre. Le taux de soufre de la composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention est compris entre 0% (fucose et oligofucose avec d’autres produits extraits) et 50% en masse sèche par rapport à la masse sèche totale de composition (avec éventuellement un enrichissement par des ions sulfates SO42 )· Le taux de soufre de la composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention est compris entre 5% et 45% en masse sèche par rapport à la masse sèche totale de composition, préférentiellement compris entre 10% et 40%, plus préférentiellement compris entre 15 et 35%, encore plus préférentiellement compris entre 20% et 30%, ou encore compris entre 22 et 25% en masse sèche par rapport à la masse sèche totale de composition. Préférentiellement, le taux de soufre de la composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention est supérieur à 5 %, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% en masse sèche par rapport à la masse sèche totale de composition. Le taux de soufre est représentatif du degré de sulfatation du produit. A partir du taux de soufre, une simple conversion pour ajouter quatre atomes d’oxygène au soufre permet de connaître le pourcentage en sulfate.
De plus, la composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention contient au moins un oligofucane en une teneur d’au moins 10% en masse sèche d’oligofucane(s) par rapport à la masse sèche totale de composition, préférentiellement au moins 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70 % 80%, 90%, 95%, 98% ou encore au moins 99% en masse sèche d’oligofucane(s) par rapport à la masse sèche totale de composition. La composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention peut être caractérisable en ce qu’elle comprend au moins un oligofucane de Formule (A) telle que définie présentement.
La composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention peut contenir au moins deux oligofucanes de formule A tel que décrit présentement, par exemple avec n est égal à 1 et n est égal à 2, ou avec n est égal à 2 et n est égal à 3, ou encore avec n est égal à 3 et n est égal à 4. La composition susceptible d’être obtenue selon le procédé de l’invention peut en outre contenir une fraction minérale comme expliqué ci-dessus. Lorsque deux oligofucanes sont présent dans la composition selon la présente invention, leurs proportions peut être de 50/50% en masse par rapport à la masse de la fraction organique de la composition sèche , ou 60/40%, ou encore 70/30%.
L’objet de la présente invention concerne donc de plus un oligofucane de Formule A tel que décrit présentement.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins un groupe parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représente -H et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2, à l’exception du cas ou XI, X2, X3 et X4 représentent tous H et n représente 1 et 2, voire 3 ou 4.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins un groupe parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représente une charge négative et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins un groupe parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représente - SO3H et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) est limitée en ce qu’au moins un groupe parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représente -SO3 et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins deux groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent -H et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2, à l’exception du cas ou XI, X2, X3 et X4 représentent tous H et n représente 1 et 2, voire 3 ou 4.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins deux groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent une charge négative et en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins deux groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent -SO3H et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins deux groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent -SO3 et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins trois groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent -H et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2, à l’exception du cas ou XI, X2, X3 et X4 représentent tous H et n représente 1, 2, 3 et/ou 4.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins trois groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent une charge négative et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins trois groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent -SO3H et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2. De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce qu’au moins trois groupes parmi XI, X2, X3 et/ou X4 représentent -SO3 et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce que tous les groupes parmi XI, X2, X3 et X4 représentent une charge négative et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce que tous les groupes parmi XI, X2, X3 et X4 représentent -SO3H et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce que tous les groupes parmi XI, X2, X3 et X4 représentent -SO3 et/ou en ce que n est 1, 2, 3, ou 4, préférentiellement 1 ou 2.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce que n est 2, 3 ou 4, et X2 et/ou X4 est -SO3H, ou -SO3 .
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce que qu’il y a au moins un groupement de nature différente des autres dans l’ensemble des groupements XI, X2 et X3.
De manière préférée, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) peut être caractérisée en ce que tous les groupes XI, X2 et X3 ne peuvent pas tous représenter le groupement -H lorsque X4 représente -H.
Le procédé selon la présente invention permet en effet d’isoler les oligofucanes de Formule (A) selon le degré de pureté souhaité. Ces produits ont des propriétés biologiques comparable aux fucanes/oligofucanes de plus haut poids moléculaires, avec quelques variations dont des effets secondaires en moins.
Lorsque n est égal à 1, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) est caractérisée en ce qu’elle comprend au niveau du carbone 2 une liaison alpha ou une liaison béta.
Lorsque n est égal à 2, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) est caractérisée en ce qu’elle comprend au niveau des carbones 2 au moins une ou deux baisons alpha (préférentiellement deux), et/ou aucune, au moins une ou deux baisons béta.
Lorsque n est égal à 3, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) est caractérisée en ce qu’elle comprend au niveau des carbones 2 au moins une, au moins deux ou trois baisons alpha (préférentiellement trois), et/ou aucune, au moins une, au moins deux ou trois liaisons béta. Lorsque n est égal à 4, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) est caractérisée en ce qu’elle comprend au niveau des carbones 2 au moins une, au moins deux, au moins trois ou quatre liaisons alpha (préférentiellement quatre), et/ou aucune, au moins une, au moins deux, au moins trois ou quatre liaisons béta.
Lorsque n est égal à 5, la formule A (en tant que produit isolé ou dans une composition) est caractérisée en ce qu’elle comprend au niveau des carbones 2 au moins une, au moins deux, au moins trois, au moins quatre ou cinq liaisons alpha (préférentiellement cinq), et/ou aucune, au moins une, au moins deux, au moins trois, au moins quatre ou cinq liaisons béta.
De manière préférée, les molécules de Formule (A) (en tant que produit isolé ou dans une composition) peuvent être sub-identifiées et regroupées en des molécules de Formule (B), Formule (C), Formule (D) et/ou Formule (E) décrits ci-dessous.
Ainsi, la Formule (A) (en tant que produit isolé ou dans une composition) comprend plus précisément des molécules de Formule (B) :
Figure imgf000022_0001
Formule (B)
dans laquelle :
XI, X2, X3 et X4 représentent indépendamment les uns des autres -H, une charge négative, -SO3H, ou -SO3 , avec au moins un, au moins deux, au moins trois ou tous les quatre des groupements XI, X2, X3 et X4 représentant -SO3H, ou -SO3 , le carbone numéroté 2 est de configuration alpha ou beta, préférentiellement de configuration alpha,
ou un sel de l’oligofucane de Formule (B).
De manière préférée dans la Formule (B), au moins un, au moins deux ou au plus trois des groupements XI, X2, X3 et X4 représentent -H ou une charge négative ; les groupements XI, X2, X3 et X4 ne représentent pas tous -H ou une charge négative (le taux sulfatation serait alors égal à 0).
De manière préférée dans la Formule (B), au moins un, au moins deux, ou tous les trois des groupements XI, X2 et X4 représentent -H ou une charge négative, et X3 représente -SO3H, ou -SO3 .
De manière préférée dans la Formule (B), au moins un, au moins deux ou trois des groupements XI, X2 et X4 représentent-SCLFI ou -SO3 .
La Formule A comprend plus précisément des molécules de Formule (C)
Figure imgf000023_0001
Formule (C)
dans laquelle :
XI, X2, X3, X4, X5 et X6 représentent indépendamment les uns des autres -H, une charge négative, -SO3H, ou -SO3 , avec au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, au moins cinq ou tous les six des groupements XI, X2, X3, X4, X5 et X6 représentant -SO3H, ou -SO3 ,
les carbones numérotés 2 et 4 sont indépendamment l’un de l’autre de configurations alpha ou beta, , préférentiellement tous les deux de configurations alpha,
ou un sel de l’oligofucane de Formule (C).
De manière préférée dans la Formule (C), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre ou au plus cinq des groupements XI, X2, X3, X4, X5 et X6 représentent -H ou une charge négative ; les groupements XI, X2, X3, X4, X5 et X6 ne représentent pas tous - H ou une charge négative (le taux sulfatation serait alors égal à 0).
De manière préférée dans la Formule (C), au moins un, au moins deux, au moins trois ou quatre des groupements XI, X2, X4 et X5 représentent -H ou une charge négative, et X3 et X6 représentent -SO3H ou -SO3 .
De manière préférée dans la Formule (C), au moins un, au moins deux, au moins trois ou quatre des groupements XI, X2, X4 et X5 représentent-SCLFI ou -SO3 .
La formule A comprend plus précisément des molécules de Formule (D) :
Figure imgf000023_0002
Formule (D)
dans laquelle :
XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7 et X8 représentent indépendamment les uns des autres -H, une charge négative, -SO3H, ou -SO3 , avec au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, au moins cinq, au moins six, au moins sept ou tous les huit des groupements XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7 et X8 représentant -SO3H, ou - SO3-,
les carbones numérotés 2, 4 ou 6 sont indépendamment les uns des autres de configurations alpha ou beta, préférentiellement tous les trois de configurations alpha,
ou un sel de l’oligofucane de Formule (D).
De manière préférée dans la Formule (D), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, au moins cinq, au moins six ou au plus sept des groupements XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7 et X8 représentent -H ou une charge négative ; les groupements XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7 et X8 ne représentent pas tous -H ou une charge négative (le taux sulfatation serait alors égal à 0).
De manière préférée dans la Formule (D), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, ou cinq des groupements XI, X2, X4, X5 et X7 représentent -H ou une charge négative, et X3, X6 et X8 représentent -SO3H ou -SO3 .
De manière préférée dans la Formule (D), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre ou cinq des groupements XI, X2, X4, X5 et X7 représentent-SCEFI ou -SO3 .
La formule A comprend plus précisément des molécules de Formule (E) :
Figure imgf000024_0001
Formule (E)
dans laquelle :
XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 et X10 représentent indépendamment les uns des autres -H, une charge négative, -SO3H, ou -SO3 , avec au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, au moins cinq, au moins six, au moins sept, au moins huit, au moins neuf ou tous les dix des groupements XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 et X10 représentant - SO3H, ou -SCF ,
les carbones numérotés 2, 4, 6 et 8 sont indépendamment les uns des autres de configurations alpha ou beta, préférentiellement tous les quatre de configuration alpha, ou un sel de l’oligofucane de Formule (E).
De manière préférée dans la Formule (E), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, au moins cinq, au moins six, au moins sept, au moins huit ou au plus neuf des groupements XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 et X10 représentent -H ou une charge négative ; les groupements XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 et X10 ne représentent pas tous -H ou une charge négative (le taux sulfatation serait alors égale à 0).
De manière préférée dans la Formule (E), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, au moins cinq, ou six des groupements XI, X2, X4, X5, X7, et X9 représentent -H ou une charge négative. De manière préférée dans la Formule (E), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, ou cinq des groupements XI, X2, X4, X5 et X7 représentent -H ou une charge négative, et X3, X6, X8 et X10 représentent -SO3H ou -SO3 .
De manière préférée dans la Formule (E), au moins un, au moins deux, au moins trois, au moins quatre, au moins cinq, ou six des groupements XI, X2, X4, X5, X7 et X9 représentent- SO3H ou -SCF .
De manière préférée, la composition selon la présente invention comprend des molécules de formules (B), (C), (D) et/ou (E) telles que décrites ci-dessus. De manière plus préférée, la composition selon la présente invention comprend des molécules de formules (B), (C) et/ou (D) telles que décrites ci-dessus. De manière encore plus préférée, la composition selon la présente invention comprend des molécules de formules (B) et/ou (C) telles que décrites ci-dessus.
De manière préférée, la composition selon la présente invention (en particulier en tant que principe actif) comprend (en masse sèche) majoritairement des molécules de formules (B), (C), (D) et/ou (E) telles que décrites ci-dessus. De manière préférée, la composition selon la présente invention (en particulier en tant que principe actif) comprend (en masse sèche) majoritairement des molécules de formules (B), (C), et/ou (D) telles que décrites ci-dessus. De manière préférée, la composition selon la présente invention (en particulier en tant que principe actif) comprend (en masse sèche) majoritairement des molécules de formules (B) et/ou(C) telles que décrites ci-dessus. Par « majoritairement », il est compris dans le contexte de la présente invention un taux supérieur ou égale à 50% en masse sèche, préférentiellement supérieure à 60, 70, 80, 90, 95 ou 99%, voire égale à 100% en masse sèche.
Dans l’un des modes de réalisations selon la présente invention, les molécules comprises dans la composition selon la présente invention comprennent des groupements -SO3H, ou -SO3 disposés de manière aléatoire sur les structures (au niveau des groupements XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9 et XI 0) de formules (A), (B), (C), (D) et/ou (E). ffl Utilisations du produit et de la composition selon la présente invention
Les oligofucanes selon la présente invention ne présentent pas l’activité anticoagulante des oligofucanes/fucanes de plus haut poids moléculaires.
L’objet de la présente invention concerne les oligofucanes selon la présente invention (formules (A), (B), (C), (D), (E) et leurs variantes) destinés pour leurs activités antiinflammatoires, leurs applications dans :
le traitement de l’arthrose et des maladies inflammatoires plus généralement, le traitement de l’angiogénèse, et
le traitement de l’obésité et des syndromes liés à l’obésité,
sans les effets secondaires anticoagulants retrouvés avec les fucanes ou les oligofucanes de plus haut poids moléculaire.
Ainsi, l’objet de la présente invention concerne les oligofucanes (en tant que tels et les compositions) selon la présente invention (formules (A), (B), (C), (D), (E) et leurs variantes) en tant que médicament.
L’objet de la présente invention concerne en outre l’utilisation d’une composition ou d’un oligofucane selon la présente invention dans une composition cosmétique.
Les fucanes sont classiquement utilisés en cosmétique pour stimuler la synthèse du collagène de type 1 et la prolifération des fibroblastes dermiques. Les oligofucanes de la présente invention ont une meilleure pénétration des différentes couches de la peau que les fucanes de poids moléculaire supérieur. L’objet de la présente invention concerne donc G utilisation cosmétique des produits de la présente invention (e.g. formules (A), (B), (C), (D), (E) et leurs variantes, par exemple en composition) pour leurs actions anti-âge, antirides, raffermissant sur les différentes couches cutanées (i.e. la peau).
Enfin, l’objet de la présente invention concerne G utilisation d’une composition ou d’un oligofucane selon la présente invention en tant qu’intermédiaire de synthèse dans la synthèse d’un oligofucose ou de fucose, comme vu ci-dessus.
LIGURES
Ligure 1 : diagramme illustratif d’un mode de réalisation du procédé selon la présente invention avec les étapes (a), (b) et (c) :
Case (aj : Dépolymérisation de fucanes présents dans alguelsj brunels)
Case (1) : Algue(s)
Case (2) : Option : trempage
Figure imgf000026_0001
Case (3) : Séparation(s) optionnelle(s) solides/liquide(s),
- par exemple filtration, tamisage ou centrifugation Case (4) : Dépolymérisation
- par exemple à un pH entre 1 et 4
- par exemple par H2SO4
- par exemple pendant 2 à 3heures
Case (5) : Option II : correction pH à neutralité
- par exemple à 6,5
- par exemple avec NaOH
Case (b) : Purification
Choix d’une ou plusieurs options dans tout ordre possible (préférentiellement dans l’ordre : III-IV-V-VI-VII-Vni)
Option III : filtration
seuil maximum : 100 000 Da
Option IV : filtration
seuil maximum : 5000 Da, voire 2000 Da
Option Y : concentration
- par exemple par évaporation
Option VI : déminéralisation
- par exemple par électrodialyse
Option VII : précipitation
-par exemple par EtOH (EtOH 96%, 1V/1V)
Option VIII : lavage (répété si besoin)
- par exemple par EtOH (EtOH 96%, 1V/1V)
Case (c) : Récupération :
Simple récupération du produit issu de b) éventuellement suivi des étapes optionnelles suivantes :
Option IX : séchage, Par exemple dans une enceinte ADF à 50-60°C
Option X : broyage, la granulométrie obtenue est par exemple d’environ 100 mhi Case (6) : Enrichissement en groupements Sulfates
EXEMPLES
Les exemples sont donnés à titre d’illustration. L’objet de la présente invention ne se limite pas pour autant aux exemples suivants.
Exemple 1 : Procédé d'obtention des oligofucanes lere étape : trempage de 1000 kg d’algues fraîches (L dititata, Lhyperboreap.e.) dans 1000 litres d’eau douce acidifiée à un pH de 2,0 (± 0,2) par de l'acide sulfurique (H2SO4) concentré pendant 2 à 3 heures à température ambiante.
2eme étape : récupération du jus de trempage de la première étape par tamisage.
3eme étape : correction du pH à 6,5 de la solution obtenue de la 2eme étape par ajout de soude 33 % (NaOH).
4eme étape : clarification de la solution obtenue de la 3eme étape par ultrafiltration avec un seuil fixé à 100 000 Da.
5eme étape : fractionnement du perméat obtenu de la 4eme étape par ultrafiltration au seuil de 2000 Da.
6eme étape : concentration du perméat obtenu de la 5eme étape à 20 °Bx sur concentrateur sous vide.
7eme étape : déminéralisation poussée du concentré obtenu de la 6eme étape par électrodialyse. Seme étape : précipitation des oligofucanes contenus dans la solution obtenue de la 7eme étape par ajout d'alcool éthylique (EtOH) à raison de 2V EtOH/lV solution concentrée d’ oligofucanes. Laisser décanter. Eliminer le surnageant.
9eme étape : lavage du précipité issu de la 8eme étape à raison de 1 masse d’EtOH / 1 masse de précipité. Laisser décanter. Eliminer le surnageant.
l0eme étape : lavage du précipité issu de la 9eme étape à raison de 1 masse d’EtOH / 1 masse de précipité. Laisser décanter. Eliminer le surnageant.
lleme étape : séchage du précipité issu de la 10eme étape dans une enceinte anti déflagration (ADF).
l2eme étape : broyage du produit sec issu de la lleme étape avec granulométrie finale à 100 mhi. Il a pu être récupéré entre 8 et 12 kg de produit selon les différents essais réalisés.
Exemple 2 : Caractérisation du produit obtenu
Toute méthode adaptée à la détermination de la présence de fucose est applicable en l’espèce. Ici, il a été utilisé une méthode de chromatographie avec une colonne de type « TG-225 » (Thermo Fisher Scientific) en phase gazeuse couplée à un détecteur à ionisation de flamme. Le produit obtenu par le procédé décrit ci-dessus présentait 85 à 95% de fucose sulfaté.
Un dosage du soufre par analyse élémentaire permet d’en déterminer le taux et le degré de sulfatation. Le produit obtenu par le procédé décrit ci-dessus présentait un taux de sulfatation de l’ordre de 45% à 70% (analyse élémentaire CNS, méthode Dumas).
Le degré de polymérisation est déterminé par nanofiltration. Le produit obtenu par le procédé décrit ci-dessus présentait un degré de polymérisation inférieur à 2000Da (chromatographie ionique).
Le degré de pureté des produits a été évalué proche de 95%.
La répartition des type d’oligofucanes est estimée à :
Oligofucanes de une et deux unités (i.e. de formules B et C): 70 à 80%
Oligofucane à trois et quatre unités (i.e. de formules D et E): 20 à 30%
Oligofucane à cinq unités et plus : non détectés
Cette répartition est directement liée à la première étape d’hydrolyse. En effet, il a été mené différents essais selon le procédé décrit ci-dessus (à l’exception de l’étape de dépolymérisation) et la répartition des oligofucanes varie comme selon le tableau suivant :
Tableau 1 : Comparaison de la présente invention avec l’art antérieur
Figure imgf000029_0001
* « 1 unité » correspond à la formule (B), « 2 unités » à la formule (C), « 3 unités » à la formule (CD), « 4 unités » à la formule (E), « 5 unités » correspond à la Formule (A) avec n = 5.
Exemple 3 : Tests
• Coagulation
Une composition d’ oligofucanes obtenus selon le procédé de l’exemple 1 a été soumise à un simple test de coagulation sanguine (sur des échantillons de sang de cinq patients différents).
De manière surprenante, les oligofucanes selon la présente invention ne présentent pas l’activité anticoagulante des oligofucanes/fucanes de plus haut poids moléculaires. Or, les molécules présentent un enchaînement similaire (voire identique) mais à un degré de polymérisation moindre) aux fucanes connus dans l’art et qui sont connus pour leurs différentes activités biologiques. Il en résulte des perspectives d’application biologique (santé) très intéressantes (activité sur l’inflammation, l’arthrose, l’angiogénèse, l’obésité), sans les effets secondaires connus des fucanes de poids moléculaire supérieur.
L’objet de la présente invention concerne également une composition telle que décrite ci- dessus destinée au traitement du cancer, pouvant être caractérisée en ce que le cancer est sélectionné dans une liste consistant en les cancers du poumon, cancers du sein, cancers de la prostate, cancers colorectaux, cancers de la thyroïde, cancers du col de l’utérus, cancers de l’endomètre, cancers des ovaires, cancers des lèvres, cancers de la bouche, cancers du larynx, cancers du rein, cancers du foie, cancers du cerveau, cancers des testicules, cancers du pancréas, cancers des os, cancers de la peau, les leucémies, cancers de l’intestin grêle, cancers de l’estomac, cancers de la plèvre, cancers de l’œsophage, cancers de la vessie et les lymphomes, préférentiellement consistant en les cancers des ovaires, cancers du sein, cancers colorectaux, cancers du pancréas, une leucémie (par exemple une leucémie myéloïde aigüe humaine) et cancers du poumon (par exemple non à petites cellules). De manière préférée, la composition telle que décrite ci-dessus est destinée au traitement du cancers des ovaires, cancers colorectaux, cancers du pancréas, une leucémie (par exemple une leucémie myéloïde aigüe humaine).
• Cosmétiques
Les fucanes sont classiquement utilisés en cosmétique pour stimuler la synthèse du collagène de type 1 et la prolifération des fibroblastes dermiques. Il a pu être constaté que les oligofucanes de la présente invention ont une bien plus grande facilité de pénétration des différentes couches de la peau que les fucanes de poids moléculaire supérieur.
Exemple 4 : tests oncologiques
Un extrait d’algue tel qu’obtenu selon l’exemple 1 a été testé sur des cellules cancéreuses.
• Produit testé : « Batch 1802 »
• Lignées cellulaires :
A2780 : (« Human ovarian carcinoma ») cancer de l'ovaire humain ;
Caco2, HCT116 et HT29 : (« Human colorectal carcinoma ») cancer colorectal humain ;
MiaPaCa2 : (« Human pancréas carcinoma ») cancer du pancréas humain ;
L1210 : (« murine leukemia ») lignée leucémique murine ;
MCF7 : (« Human breast carcinoma ») cancer du sein humain ;
A549 : (« Lung cancer (Non Small Cells) ») cancer du poumon (non à petites cellules) ;
HL60 : (« Human leukemia ») leucémie humaine ; et
KG-l : (« Human acute myelogenic leukemia ») leucémie myéloïde aiguë humaine.
• Solubilisation des produits
Les produits ont été dissouts directement dans le milieu de culture des cellules le jour de l’expérience.
• Ensemencement et traitement des cellules
J0 : Ensemencement des cellules en plaques 96 puits aux densités suivantes : A2780 : 3500 cellules par puits, Caco2 : 2000 cellules par puits, HCT116 et MiaPaCa2: 1000 cellules/puits, HT29: 500 cellules par puits, KG-l : 7000 cellules/puits.
Jl : Ajout de 10 mΐ /puit des inhibiteurs à la concentration lOx. Chaque dose est testée dans 3 puits.
Concentrations testées : 0,1 à 1000 mM final (progression semi logarithmique), calcul basé sur une masse moléculaire moyenne de 800.
• Lecture des résultats
J4 : Mesure de la survie cellulaire (WST): Calcul des % d’inhibition pour chaque dose de produit testée par rapport aux puits contrôles.
Tableau 2 : résultats de survie cellulaire après exposition à l’extrait d’algue
Figure imgf000031_0001
(1) : Concentration (mM) ; (2) : A2780; (3) : Caco2; (4) : HCT116; (5): HT29; (6): MiaPaCa2; (7): L1210; (8): MCF7; (9): A549; (10): HL60; (l l):KG-l
• Conclusions
L’extraits inhibe la prolifération de la lignée ovarienne A2780 avec des 050 de 100 à 300 mM. A 1000 mM, une activité a pu être constatée sur d’autres lignées cellulaires avec notamment une inhibition de 40% de la prolifération de la lignée pancréatique MiaPaCa2 (batch 1602). Toutefois, aucune activité n’a été constatée sur les lignées MCF-7 (cancer du sein) aux concentrations testées.
De même, il n’a pas été constaté d’inhibition de la prolifération de la lignée A549 (poumon, non petite cellule).
Bien que les doses actives soient élevées, ces résultats semblent intéressants car il s’agit d’un mélange de molécules.

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé d’obtention d’une composition d’au moins un oligofucane à partir d’au moins une macroalgue brune comprenant les étapes successives suivantes :
(a) dépolymérisation des fucanes présents, par exemple par voie chimique, physique et/ou enzymatique,
(b) purification des oligofucanes de masse inférieure à M, obtenus à l’étape (a)
(c) récupération des oligofucanes purifiés de l’étape (b) ;
ledit procédé étant caractérisé en ce que :
il comprend une étape (al) d’enrichissement en groupements sulfates présents sur les fucanes et/ou les oligofucanes, préférentiellement lors de l’étape (a) de dépolymérisation et
M est inférieur à 5000 Da, préférentiellement inférieur à 2000 Da.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que :
- l’étape (a) est une dépolymérisation par voie chimique comprenant :
- une étape (a2) de trempage de ladite au moins une macroalgue brune contenant des fucanes dans une solution aqueuse ;
- une étape (a3) de traitement acide du mélange de l’étape (a2), le pH du milieu traité étant compris entre 1 et 4, l’acide utilisé étant préférentiellement l’acide sulfurique ; les étapes (a2) et (a3) pouvant être menés successivement et/ou conjointement ;
- optionnellement, l’étape (b) de purification des oligofucanes comprend une étape (bl) de précipitation des oligofucanes à l’aide d’un alcool.
3. Procédé selon la revendication 2 caractérisé en ce que :
- au moins une macroalgue brune à l’étape (al) est fraîche, formolée et/ou sèche, préférentiellement choisie dans le groupe constitué de Ascophyllum sp, Fucus sp, Lamaniria sp, Euchema sp, Macrocystis sp et Alaria sp;
- une étape (a4) de récupération, préférentiellement par tamisage, décantation ou centrifugation, du jus de trempage de l’étape (a2) est insérée entre l’étape (a2) et l’étape (a3) ;
- l’étape (a3) dure de 0,5 à 4 heures et est suivie d’une étape (a5) optionnelle de correction du pH, préférentiellement avec de la soude, du mélange pour que celui-ci soit compris entre 5 et B ; - l’étape de purification (b) comprend une première étape (b2) de filtration, préférentiellement par ultrafiltration avec un fractionnement dont le seuil de coupure est inférieur à 100 000 Da, avec récupération du perméat obtenu permettant une clarification du mélange ;
- l’étape de purification (b) comprend une seconde étape (b3) de fractionnement par ultrafiltration dont le seuil de coupure est inférieur à 5 000 Da, avec récupération du perméat obtenu ;
- l’étape de purification (b) comprend une troisième étape (b4) de concentration, préférentiellement sous vide, permettant au mélange d’atteindre un degré Bx compris entre 15 et 25°Bx ;
- l’étape de purification (b) comprend une quatrième étape (b5) de déminéralisation, préférentiellement par électrodialyse ;
- l’alcool de l’étape de purification (bl) par précipitation est choisi parmi un alcool en Cl à C5, tel que le méthanol, l’éthanol le n-propanol, l’isopropanol, le n-butanol, l’isobutanol, ou encore le tert-butanol, préférentiellement l’éthanol, cette étape étant éventuellement suivie par un ou plusieurs lavages du précipité avec de l’éthanol ;
- l’étape de récupération (c) comprend une étape (cl) de séchage du produit obtenu à l’étape (b), éventuellement suivi par une étape (c2) de broyage.
4. Composition comprenant au moins un oligofucane, ou un sel de celui-ci, susceptible d’être obtenu selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, préférentiellement avec un taux de soufre supérieur à 15 %, préférentiellement supérieur à 25 %, en masse par rapport à la masse sèche de la composition et/ou en ce que ladite composition comprend au moins 10%, préférentiellement au moins 90%, en masse sèche d’oligofucane par rapport à la masse sèche de composition.
5. Composition selon la revendication 4 caractérisée en ce qu’elle présente une fraction minérale, par exemple supérieure ou égale à 50 % en masse de matière sèche de composition, préférentiellement supérieure ou égale à 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% en masse de matière sèche de composition.
6. Composition selon la revendication 4 ou 5 caractérisée en ce qu’elle présente une fraction organique supérieure ou égale à 1 % en masse de matière sèche de composition, préférentiellement supérieure ou égale à 5%, 10%, 15%, 20% ou 30% en masse de matière sèche de composition.
7. Composition selon l’une quelconque des revendications 4 à 6 caractérisée en ce qu’elle présente au moins un oligofucane de Formule (A) suivante :
Figure imgf000034_0001
Formule (A)
dans laquelle :
XI, X2, X3 et X4 représentent indépendamment les uns des autres -H, une charge négative, -SO3H, ou -SO3 ,
le(s) carbone(s) numéroté(s) 2 sont de configurations alpha ou beta, indépendamment les uns des autres,
n est compris entre 1 et 5, préférentiellement entre 1 et 4
ou un sel de l’oligofucane de Formule (A).
8. Composition selon la revendication 7 caractérisée en ce qu’il y a au moins un groupement de nature différente des autres dans l’ensemble des groupements XI, X2 et X3.
9. Oligofucane de Formule (A) telle que définie dans les revendications 7 ou 8, XI, X2 et X3 ne pouvant pas tous représenter le groupement -H lorsque X4 représente H.
10. Oligofucane de Formule (A) selon la revendication 9, caractérisé en ce que n est 2, 3 ou 4, et X2 et/ou X4 est -SO3H, ou -SO3 .
11. Utilisation cosmétique d’une composition selon l’une quelconque des revendications 4 à 8 ou d’un oligofucane selon l’une quelconque des revendications 9 à 10, préférentiellement pour leurs actions anti-âge, antirides et/ou raffermissant sur la peau.
12. Composition selon l’une quelconque des revendications 4 à 8 ou oligofucane selon l’une quelconque des revendications 9 à 10 en tant que médicament.
13. Composition selon l’une quelconque des revendications 4 à 8 ou oligofucane selon l’une quelconque des revendications 9 à 10 destinés au traitement de l’inflammation, de l’arthrose, de l’angiogénèse, du cancer et/ou de l’obésité.
14. Composition ou oligofucane selon la revendication 13 caractérisé en ce que le cancer est sélectionné dans une liste consistant en les cancers du poumon, cancers du sein, cancers de la prostate, cancers colorectaux, cancers de la thyroïde, cancers du col de l’utérus, cancers de l’endomètre, cancers des ovaires, cancers des lèvres, cancers de la bouche, cancers du larynx, cancers du rein, cancers du foie, cancers du cerveau, cancers des testicules, cancer du pancréas, cancer des os, cancer de la peau, les leucémies, cancers de l’intestin grêle, cancer de l’estomac, cancer de la plèvre, cancer de l’œsophage, cancer de la vessie et les lymphomes, préférentiellement consistant en les cancers des ovaires, cancer colorectal, cancer du pancréas, leucémie et cancer du poumon.
15. Utilisation d’une composition selon l’une quelconque des revendications 4 à 6 ou d’un oligofucane selon l’une quelconque des revendications 7 à 8 en tant qu’intermédiaire de synthèse dans la synthèse d’un oligofucose ou de fucose.
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