WO2019160103A1 - 肝脂肪低減剤 - Google Patents

肝脂肪低減剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2019160103A1
WO2019160103A1 PCT/JP2019/005655 JP2019005655W WO2019160103A1 WO 2019160103 A1 WO2019160103 A1 WO 2019160103A1 JP 2019005655 W JP2019005655 W JP 2019005655W WO 2019160103 A1 WO2019160103 A1 WO 2019160103A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
liver
tyrosine
methionine
reducing agent
amino acids
Prior art date
Application number
PCT/JP2019/005655
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
英二 嘉数
晃俊 佐野
Original Assignee
国立大学法人東北大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人東北大学 filed Critical 国立大学法人東北大学
Publication of WO2019160103A1 publication Critical patent/WO2019160103A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/175—Amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to a composition having an effect of promoting the metabolism of liver fat and reducing the amount of fat present in hepatocytes, particularly for fatty liver, alcoholic steatohepatitis, or nonalcoholic steatohepatitis (NASH). It relates to a composition used for treatment or prevention.
  • Fatty liver is a state in which neutral fat (triglyceride) has accumulated in the liver, and fat accumulation in the liver is a non-progressive (reversible) change. Return. However, when fat accumulation progresses and liver dysfunction occurs, it may develop into cirrhosis or liver cancer. Alcoholic steatohepatitis caused by drinking is a typical example of fatty liver.
  • NASH nonalcoholic fatty liver disease
  • liver damage in NASH In addition to the knowledge that fatty liver caused by obesity, diabetes, dyslipidemia, hypertension, etc. progresses and develops into NASH, it is also thought to be caused by stress on the liver. As the stress, oxidative stress due to active oxygen, lipid peroxide, iron, insulin resistance, cytokine release, and the like are assumed. Above all, iron excess in liver tissue is considered to be an exacerbation factor of liver damage in NASH.
  • the object of the present invention is to provide a composition effective for improving liver function, particularly improving liver function by promoting metabolism of liver fat.
  • Another object of the present invention is to provide a composition effective for the treatment or prevention of nonalcoholic fatty liver disease, particularly nonalcoholic steatohepatitis.
  • the inventors of the present invention have made extensive studies in order to achieve the above-mentioned problems. As a result, the inventors have found an effect of reducing liver fat in a composition containing methionine and / or tyrosine and completed the present invention.
  • [1-1] A liver fat reducing agent containing methionine or tyrosine as an active ingredient.
  • the liver fat reducing agent according to [1-1] or [1-2] which contains methionine and tyrosine as active ingredients.
  • [1-4] The liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-3], wherein the molar fraction of methionine and tyrosine with respect to the total content of natural amino acids is 1% to 42%, respectively. .
  • [1-5] The liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-4], wherein the total molar fraction of methionine and tyrosine with respect to the total content of natural amino acids is 5% to 57% .
  • [1-6] The liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-5], further comprising one or more amino acids selected from glycine, serine, threonine, lysine, and arginine.
  • the liver fat reducing agent as described.
  • [1-9] The total molar fraction of methionine, tyrosine, glycine, serine, threonine, lysine, and arginine with respect to the total content of natural amino acids is 49% to 100%, [1-1] to [1-8 ]
  • the liver fat reducing agent in any one of. [1-10] Liver fat according to any of [1-1] to [1-9], which is used for the treatment of nonalcoholic fatty liver disease, alcoholic steatohepatitis, or nonalcoholic steatohepatitis Reducing agent. [1-11]
  • the liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-10] which is used for the treatment of nonalcoholic steatohepatitis.
  • [1-12] The liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-11], which is used for improving liver function.
  • [1-13] A composition for oral consumption for use in reducing liver fat, comprising the liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-12].
  • [1-14] A pharmaceutical composition for use in reducing liver fat, comprising the liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-12].
  • [1-15] A food composition for use in reducing liver fat, comprising the liver fat reducing agent according to any one of [1-1] to [1-12].
  • the following medicament or composition is provided.
  • a liver fat reducing agent comprising methionine or tyrosine as an active ingredient.
  • the liver fat reducing agent according to [2-1] wherein the molar fraction of methionine or tyrosine with respect to the total content of natural amino acids is 8% or more.
  • [2-5] The liver fat reducing agent according to any one of [2-1] to [2-4], wherein the total molar fraction of methionine and tyrosine with respect to the total content of natural amino acids is 16% to 53% .
  • [2-6] The liver fat reducing agent according to any one of [2-1] to [2-5], further comprising one or more amino acids selected from glycine, serine, threonine, lysine, and arginine.
  • [2-7] Any one of [2-1] to [2-6], wherein the molar fraction of one or more amino acids selected from glycine, serine, threonine, lysine, and arginine is 8% or more, respectively.
  • the liver fat reducing agent as described.
  • liver fat reducing agent according to any one of [2-1] to [2-7], further comprising glycine, serine, threonine, lysine, and arginine.
  • the total molar fraction of methionine, tyrosine, glycine, serine, threonine, lysine, and arginine with respect to the total content of natural amino acids is 50% to 100%, [2-1] to [2-8 ]
  • the liver fat reducing agent in any one of.
  • liver fat according to any one of [2-1] to [2-9], which is used for the treatment of nonalcoholic fatty liver disease, alcoholic steatohepatitis, or nonalcoholic steatohepatitis Reducing agent.
  • the liver fat reducing agent according to any one of [2-1] to [2-11] which is used for improving liver function.
  • a composition for oral consumption for use in reducing liver fat comprising the liver fat reducing agent according to any one of [2-1] to [2-12].
  • a pharmaceutical composition for use in reducing liver fat comprising the liver fat reducing agent according to any one of [2-1] to [2-12].
  • a food composition for use in reducing liver fat comprising the liver fat reducing agent according to any one of [2-1] to [2-12].
  • the following experimental animals are provided.
  • [3-1] Does not contain tyrosine and / or methionine, or the contents of tyrosine and methionine are 0.7 wt% or less, 0.5 wt% or less, 0.3 wt% or less, or 0.2 wt%, respectively.
  • a liver disease model animal which is a non-human mammal fed with the following food: [3-2] The liver disease model animal according to [3-1], wherein the diet does not contain either tyrosine or methionine.
  • the bait contains tyrosine and does not contain methionine, and the tyrosine content is 0.7% by weight or less, 0.5% by weight or less, 0.3% by weight or less, or 0.2% by weight or less.
  • the liver disease model animal according to [3-1] or [3-2].
  • the breeding period is 1 week or more, 2 weeks or more, 3 weeks or more, 4 weeks or more, 5 weeks or more, 6 weeks or more, 7 weeks or more, 8 weeks or more, 10 weeks or more, or 12 weeks or more , [3-1] to [3-4] liver disease model animal according to any one of.
  • [3-7] The liver disease model animal according to any one of [3-1] to [3-6], wherein the non-human mammal is a C57BL / 6J wild-type mouse.
  • liver disease model animal according to any of [3-1] to [3-7], wherein the liver disease is nonalcoholic fatty liver disease, nonalcoholic steatohepatitis, cirrhosis or liver cancer .
  • liver disease model animal according to any one of [3-1] to [3-8], wherein lipid droplets or balloon-like swelling is observed in hepatocytes.
  • no tyrosine and / or methionine is contained, or the contents of tyrosine and methionine are 0.7 wt% or less, 0.5 wt% or less, 0.3 wt% or less, respectively.
  • a method for producing a liver disease model animal according to any one of [3-1] to [3-9], comprising feeding a non-human mammal with a feed of 0.2% by weight or less.
  • a composition that is effective in improving liver function, particularly in improving liver function by promoting metabolism of liver fat, and safe even when ingested for a long time is provided.
  • the present invention also provides provision of a composition effective for the treatment or prevention of nonalcoholic fatty liver disease, particularly nonalcoholic steatohepatitis.
  • Figure 1 shows C57BL / 6JhamSlc-ob / ob (+ / +) (wild species, wt), C57BL / 6JhamSlc-ob / ob (ob / ob) (ob), and KK-Ay / It is the photograph of TaJcl, and the liver cell after each liver and hematoxylin eosin (HE) dyeing
  • FIG. 2A is a photograph showing that when TLR4 cells are incubated under the conditions of two-dimensional culture using PBM-wt, the cells have settled in the culture dish and viability is maintained.
  • FIG. 2B shows a Scaffold photograph before cell colonization (left) when Neutral Red (Neutral Red solution (Sigma, N6264) is used after cell colonization when TLR4 cells are incubated under the conditions of three-dimensional perfusion culture using PBM-wt. )) When the cells are stained (middle), and when the cells are stained with JC-1 dye (MitoProbe TM JC-1 Assay Kit) (right).
  • FIG. 2C-1 is a diagram showing an outline of an apparatus for three-dimensional perfusion cell culture.
  • FIG. 2C-2 is a diagram showing the medium used in perfusion culture (incubation for about 7 days under D-MEM before perfusion, and further culture for 24 hours with 200 ⁇ M oleic acid. Perfusion culture is performed for 24-48 hours).
  • FIG. 2D is a graph showing changes in the amount of triglyceride in cells when three-dimensional perfusion culture is performed under the conditions of a) in FIG. 2C-2.
  • the triglyceride content (OA ⁇ ) in the cells before perfusion culture is taken as 1, and the triglyceride content in the cells after perfusion culture is displayed.
  • FIG. 2E is a graph showing changes in the amount of triglyceride in the cells when three-dimensional perfusion culture is performed under the conditions of a) in FIG. 2C-2.
  • the triglyceride content (OA +) in the cells before perfusion culture is taken as 1, and the triglyceride content in the cells after perfusion culture is displayed. * Means P ⁇ 0.05.
  • FIG. 1 Means P ⁇ 0.05.
  • FIG. 2F is a graph showing the free fatty acid concentration in the supernatant of the medium collected by three-dimensional perfusion culture.
  • FIG. 2G is a photograph of TLR4 cells cultured under three-dimensional perfusion conditions and lipid droplets fluorescently stained with Oil red O or Lipidye. The top row is the cells perfused using PBM-wt, the bottom row is the cells perfused using PBM-ob, the cells before staining (left), the cells stained with LipidDye (center), and Oil red O A photograph of stained cells (right) is shown.
  • FIG. 2H is a chart showing the results of analyzing the cells stained with lipid droplets using Lipidye using flow cytometry.
  • FIG. 2I is a graph showing the mean fluorescence intensity (MFI) in the flow cytometry shown in FIG. 2H. * Indicates p ⁇ 0.05.
  • FIG. 2J is a graph showing changes in the amount of triglyceride in cells when three-dimensional perfusion culture is performed using a medium to which oleic acid is not added under the conditions of a) in FIG. 2C-2.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • FIG. 3A shows that TLR4 cells are cultured by three-dimensional perfusion culture using a medium (PBM-ob + AA) containing 7 types of amino acids: methionine, tyrosine, glycine, serine, threonine, lysine, and arginine to 500 ⁇ M each. It is the chart which added the result of the flow cytometry of the cell which culture
  • FIG. 3B is a graph showing the mean fluorescence intensity (MFI) in the flow cytometry shown in FIG. 3A. * Indicates p ⁇ 0.05.
  • MFI mean fluorescence intensity
  • FIG. 3C is a chart showing the average fluorescence intensity as a result of performing the same flow cytometry analysis using human hepatoma cell line HepG2 instead of TLR4 cells as cells used for culture.
  • FIG. 3D is a graph showing the results obtained by adding 7 ⁇ m amino acids to PBM-ob, one by 500 ⁇ M, and conducting flow cytometry in the same manner. * Indicates p ⁇ 0.05.
  • 3E shows the use of PBM-ob supplemented with methionine (500 ⁇ M), methionine and tyrosine (500 ⁇ M each), methionine, tyrosine and arginine (500 ⁇ M each), and leucine, isoleucine and valine (BCAAs, 500 ⁇ M each). It is a graph which shows the result of having conducted the flow cytometry similarly and examined. * Indicates p ⁇ 0.05.
  • FIG. 3F is a graph showing the results obtained by conducting flow cytometry in the same manner using a medium in which 500 ⁇ M methionine and tyrosine are added to PBM-ob and 1 mM respectively. * Indicates p ⁇ 0.05.
  • FIG. 3E shows the use of PBM-ob supplemented with methionine (500 ⁇ M), methionine and tyrosine (500 ⁇ M each), methionine, tyrosine and arginine (500 ⁇ M
  • FIG. 4A is a graph showing changes in average body weight of mice in each group in L-Met and L-Tyr high intake mice.
  • FIG. 4B is a graph showing changes in liver weight (average) of mice of each group in mice with high L-Met and L-Tyr intake.
  • FIG. 4C is a graph showing the amount of water consumed in each group.
  • FIG. 4D is a graph showing changes in blood triglycerides (average) of mice in each group in mice with high intake of L-Met and L-Tyr.
  • FIG. 4E is a photograph showing hepatocytes of each group of mice in mice with high L-Met and L-Tyr intake.
  • FIG. 4F is a photograph showing changes in blood ALT values of mice in each group in mice with high intake of L-Met and L-Tyr.
  • FIG. 5A is a graph showing the fluorescence intensity of the culture supernatant after cell culture under conditions containing methionine or tyrosine at various concentrations.
  • FIG. 5B is a graph showing the intracellular fluorescence intensity after cell culture under conditions containing methionine or tyrosine at various concentrations.
  • 6A is a graph showing the results of weight transition of mice in each group in the test of Example 7.
  • FIG. FIG. 6B is a graph showing the results of measurement of intrahepatic lipids (triglycerides, cholesterol, free fatty acids) in mice of each group.
  • FIG. 6C is a photograph showing liver tissue images (HE staining, Oil Red O staining) after termination of mice in the high fat Met-restricted Tyr deficient diet group (HF-MRTD diet) and the high fat diet group (HF diet). is there.
  • FIG. 7A is a graph showing the results of measuring the level of each free amino acid in the plasma of patients with nonalcoholic fatty liver disease classified into two groups of S0-S1 (mild) and S2-S3 (severe).
  • FIG. 7B shows the result of analyzing the correlation between the degree of fatty liver calculated from CT data of patients with nonalcoholic fatty liver disease (hepatic spleen CT value ratio, L / S ratio) and methionine, tyrosine, and glutamine concentrations in plasma.
  • FIG. 8 is a graph showing plasma ALT and triglyceride concentrations in mice of each group in the test of Example 9.
  • the vertical axis of the ALT graph indicates IU / L
  • the vertical axis of the triglyceride graph indicates mg / dL.
  • a liver fat reducing agent containing methionine or tyrosine as an active ingredient is provided.
  • methionine or tyrosine may be a salt or a derivative such as an ethyl ester, or may be included as an amino acid constituting a peptide or protein.
  • the liver fat reducing agent of the present invention is a natural amino acid, that is, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, cysteine, asparagine, glutamine. , Proline, phenylalanine, and tryptophan.
  • the amino acid may be a salt, a derivative such as ethyl ester, a dimer such as cystine, or may be included as an amino acid constituting a peptide or protein. Good.
  • a liver function improving agent comprising methionine or tyrosine as an active ingredient.
  • methionine or tyrosine may be a salt or a derivative such as an ethyl ester, or may be included as an amino acid constituting a peptide or protein.
  • the liver function improving agent of the present invention includes natural amino acids, that is, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, cysteine, asparagine, glutamine. , Proline, phenylalanine, and tryptophan.
  • the amino acid may be a salt, a derivative such as ethyl ester, a dimer such as cystine, or may be included as an amino acid constituting a peptide or protein. Good.
  • a therapeutic or prophylactic agent for nonalcoholic steatohepatitis containing methionine or tyrosine as an active ingredient is provided.
  • methionine or tyrosine may be a salt or a derivative such as an ethyl ester, or may be included as an amino acid constituting a peptide or protein.
  • the therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention includes natural amino acids, that is, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, cysteine, asparagine, Glutamine, proline, phenylalanine, and tryptophan may be included.
  • the amino acid may be a salt, a derivative such as ethyl ester, a dimer such as cystine, or may be included as an amino acid constituting a peptide or protein. Good.
  • liver function improving effect according to the present invention is caused by the promotion of fat metabolism in hepatocytes.
  • therapeutic effect or preventive effect of nonalcoholic steatohepatitis is due to the improvement of liver function by promoting fat metabolism in hepatocytes.
  • the molar fraction of methionine or tyrosine with respect to the total content of natural amino acids is, for example, 1% or more, 5% or more, 8% or more, 10% or more, 12% or more, 16% or more. Or 20% or more.
  • These amino acids may be administered as a composition free of other natural amino acids (ie, at a 100% molar fraction relative to the total content of natural amino acids).
  • the upper limit of the molar fraction of methionine or tyrosine relative to the total content of natural amino acids is, for example, 22%, 36%, 37%, 42%, 57%, 68%, or 100%.
  • the molar fraction of methionine or tyrosine with respect to the total content of natural amino acids is, for example, 8% or more, 10% or more, 12% or more, 16% or more, or 20% or more.
  • These amino acids may be administered as a composition free of other natural amino acids (ie, at a 100% molar fraction relative to the total content of natural amino acids).
  • the upper limit of the molar fraction of methionine or tyrosine relative to the total content of natural amino acids is, for example, 22%, 36%, 68%, or 100%.
  • methionine and tyrosine may be taken together. These ingredients may be taken as ingredients in one composition. Or methionine and tyrosine may be taken as components of separate compositions, for example, compositions that do not contain other natural amino acids, i.e., each at a molar fraction of 100% with respect to the total content of natural amino acids. May be administered.
  • methionine and tyrosine are components of one composition, and each molar fraction of methionine and tyrosine with respect to the total content of natural amino acids in the composition is 8% or more, 10% or more, It is 12% or more, 16% or more, or 20% or more.
  • the upper limit of the molar fraction of methionine or tyrosine relative to the total content of natural amino acids is, for example, 22%, 36%, 68%, or 100%.
  • the total molar fraction of methionine and tyrosine with respect to the total content of natural amino acids is, for example, 16% or more, 21% or more, or 24% or more, for example, 36% or less, 53% or less, or 100% or less. is there.
  • methionine and / or glycine may be taken in combination with one or more amino acids selected from serine, threonine, lysine, and arginine. These ingredients may be taken as ingredients in one composition.
  • methionine, tyrosine and one or more amino acids may be taken as components of separate compositions, for example, compositions that each do not contain other natural amino acids, ie, 100 relative to the total content of natural amino acids. Each may be administered in a molar fraction of%.
  • methionine, tyrosine and one or more amino acids are components of one composition, each mole fraction of methionine, tyrosine and one or more amino acids relative to the total content of natural amino acids in the composition.
  • the rate is 8% or more, 10% or more, 12% or more, 16% or more, or 20% or more.
  • the upper limit of the molar fraction of methionine, tyrosine and one or more amino acids relative to the total content of natural amino acids is, for example, 10%, 15%, 21%, or 33%.
  • the total molar fraction of methionine, tyrosine and one or more amino acids with respect to the total content of natural amino acids is, for example, 30% or more, 45% or more, or 63% or more, such as 73% or less, 82% or less, Or it is 100% or less.
  • methionine and / or glycine may be taken in combination with serine, threonine, lysine, and arginine. These ingredients may be taken as ingredients in one composition.
  • methionine, tyrosine and other amino acids may be taken as components of separate compositions, for example, compositions that each do not contain other natural amino acids, i.e. 100% of the total content of natural amino acids.
  • methionine, tyrosine and other amino acids are components of one composition, and the respective mole fractions of methionine, tyrosine and other amino acids relative to the total content of natural amino acids in the composition are It is 8% or more, 10% or more, 12% or more, 16% or more, or 20% or more.
  • the upper limit of the molar fraction of methionine, tyrosine and other amino acids relative to the total content of natural amino acids is, for example, 8%, 10%, 12% or 14%.
  • the total molar fraction of methionine, tyrosine and other amino acids relative to the total content of natural amino acids is, for example, 58% or more, 73% or more, or 85% or more, such as 86% or less, 93% or less, or 100% or less.
  • methionine and / or glycine may be taken in combination with serine, threonine, lysine, and arginine. These ingredients may be taken as ingredients in one composition.
  • methionine, tyrosine and other amino acids may be taken as components of separate compositions, for example, compositions that each do not contain other natural amino acids, i.e. 100% of the total content of natural amino acids.
  • methionine, tyrosine, serine, threonine, lysine, and arginine are components of one composition, and methionine, tyrosine, serine, threonine relative to the total content of natural amino acids in the composition,
  • the molar fraction of lysine and arginine is 1% or more. 5% or more, 8% or more, 10% or more, 12% or more, 16% or more, or 20% or more.
  • the upper limit of the molar fraction of methionine, tyrosine, serine, threonine, lysine, and arginine with respect to the total content of natural amino acids is, for example, 8%, 10%, 12%, or 14%.
  • the total molar fraction of methionine, tyrosine, serine, threonine, lysine, and arginine with respect to the total content of natural amino acids is, for example, 49% or more, 50% or more, 58% or more, 73% or more, or 85% or more. For example, 86% or less, 93% or less, or 100% or less.
  • these components may be taken as components in one composition.
  • the daily dose of methionine intake is, for example, 1 mg / kg day or more, 3.5 mg / kg day or more, 7 mg / kg day or more, 15 mg / kg day or less, 30 mg / kg day or less, 45 mg / kg day or less. is there.
  • the daily dosage of tyrosine intake is, for example, 1 mg / kg day or more, 4.5 mg / kg day or more, 9 mg or more, 19 mg / kg day or less, 37 mg / kg day or less, 55 mg / kg or less.
  • the daily dosage of glycine intake is, for example, 1 mg / kg day or more, 1.8 mg / kg day or more, 3.7 mg / kg day or more, 8 mg / kg day or less, 16 mg / kg day or less, 24 mg / kg day It is as follows.
  • the daily dose of serine intake is, for example, 1 mg / kg day or more, 2.5 mg / kg day or more, 5 mg / kg day or more, 11 mg / kg day or less, 22 mg / kg day or less, 33 mg / kg day or less. is there.
  • the daily dose of threonine intake is, for example, 1 mg / kg day or more, 2.9 mg / kg day or more, 5.9 mg / kg day or more, 12 mg / kg day or less, 24 mg / kg day or less, 36 mg / kg day It is as follows.
  • Daily doses of lysine intake are, for example, 1 mg / kg day or more, 3.6 mg / kg day or more, 7.3 mg / kg day or more, 15 mg / kg day or less, 30 mg / kg day or less, 45 mg / kg day It is as follows.
  • the daily dose of arginine intake is, for example, 1 mg / kg day or more, 4.3 mg / kg day or more, 8.7 mg / kg day or more, 18 mg / kg day or less, 36 mg / kg day or less, 54 mg / kg day It is as follows. It is desirable to calculate the above daily dose separately from the intake of amino acids taken from meals and the like.
  • ingredients that contain a large amount of serine per 100g of edible portion include herring roots (dried) (4200mg), sesame seeds (mackerel) (3000mg), and so on.
  • Ingredients that contain a lot of threonine per 100g of edible portion include herring root (dry) (5000mg), scallop (dried) (2300mg).
  • ingredients containing a large amount of lysine per 100 g of edible portion include tatamiwashi (6400 mg), parmesan cheese (3400 mg), and the like.
  • ingredients that contain a lot of arginine per 100g of edible portion include tatamiwashi (4500mg) and abalone (dried) (3400mg).
  • the liver fat reducing agent or liver function improving agent of the present invention can be used for the purpose of improving liver function by promoting metabolism of liver fat, such as non-alcoholic fatty liver disease, alcoholic steatohepatitis. Or for the treatment or prevention of non-alcoholic steatohepatitis.
  • the amino acid salt that can be used in the present invention is not particularly limited as long as it is a salt that can be used as an active ingredient of an oral ingestant.
  • the salt may be a salt formed with a base, such as a salt with an inorganic base such as sodium, potassium, magnesium, calcium, or aluminum; a salt with an organic base such as methylamine, ethylamine, or ethanolamine.
  • the salt may be an acid addition salt.
  • the salt examples include hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and other mineral acids; and formic acid, Examples include acid addition salts with organic acids such as acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid, and ethanesulfonic acid.
  • organic acids such as acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid, and ethanesulfonic acid.
  • the liver fat reducing agent, liver function improving agent, and non-alcoholic steatohepatitis therapeutic agent or preventive agent of the present invention are compositions for ingestion, pharmaceutical compositions, and foods. It can be used as a component of the composition.
  • the composition for oral ingestion, pharmaceutical composition, and food composition of the present invention (hereinafter also referred to as the composition of the present invention) can reduce liver fat, improve liver function, or treat or prevent nonalcoholic steatohepatitis. Can be used as a purpose.
  • the agents and compositions of the present invention can be used in various dosage forms such as tablets, capsules, powders, granules, pills, solutions, emulsions, suspensions, solutions, alcoholic agents for oral administration. , Syrup, extract and elixir, but not limited to these. These preparations can be produced by known methods usually used in the preparation process. In the present invention, it is preferably administered as an oral preparation.
  • various commonly used components can be used, for example, one or more pharmaceutically acceptable excipients, disintegrants, diluents, lubricants, flavoring agents, coloring agents, and the like.
  • Agents, sweeteners, flavoring agents, suspending agents, wetting agents, emulsifying agents, dispersing agents, adjuvants, preservatives, buffering agents, binders, stabilizers, coating agents and the like can be included as components.
  • the liver fat reducing agent and composition of the present invention may be in a sustained or sustained release dosage form.
  • the dose or intake of the drug and composition of the present invention can be appropriately selected depending on the administration route, patient's body shape, age, physical condition, degree of disease, elapsed time after onset, etc.
  • the reducing agent and composition can comprise an effective amount of methionine or tyrosine.
  • methionine or tyrosine can generally be used at a dose of 1 to 10000 mg / day / adult.
  • the administration of the drug or pharmaceutical composition of the present invention may be performed in a single dose or multiple doses, and may be used in combination with other drugs such as antidiabetic drugs.
  • the agents and compositions of the present invention may contain conventionally known colorants, preservatives, flavors, flavors, coating agents, antioxidants, vitamins, amino acids, peptides, proteins, and minerals (iron, zinc, Components such as magnesium, iodine, etc.) may be contained.
  • the drug and composition of the present invention are suitable for food compositions, compositions for oral consumption, pharmaceutical compositions, functional foods, health foods, beverages, supplements, etc., such as granules (including dry syrup), capsules, etc. (Soft capsules, hard capsules), tablets (including chewables), powders (powder), various solid preparations such as pills, or liquids for internal use (including liquids, suspensions, syrups) You may prepare with forms, such as liquid formulation.
  • liver fat reducing agent, liver function improving agent, and non-alcoholic steatohepatitis therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention are directly used as a pharmaceutical composition, a food composition, a composition for oral consumption, a functional food, It can also be used as a health food or supplement.
  • additives for formulation for example, excipients, lubricants, binders, disintegrants, fluidizers, dispersants, wetting agents, preservatives, thickeners, pH adjusters, colorants, Examples include flavoring agents, surfactants, and solubilizing agents.
  • thickeners such as pectin, xanthan gum, and guar gum, can be mix
  • thickeners such as pectin, xanthan gum, and guar gum
  • it can also be set as a coating tablet using a coating agent, or it can also be set as a paste-form glue. Furthermore, even if it is a case where it prepares in another form, what is necessary is just to follow the conventional method.
  • the non-human mammal used in the present invention is not particularly limited as long as it is used as an experimental animal.
  • examples of the non-human mammal include mouse, rat, hamster, guinea pig, rabbit, cat, dog, goat, sheep. , Pigs, cows, monkeys and the like.
  • the non-human mammal is a rodent such as a mouse, rat, hamster, guinea pig, preferably a mouse.
  • Example 1 Mouse portal vein blood / metabolome analysis C57BL / 6JhamSlc-ob / ob (+ / +) (Charles River), C57BL / 6JhamSlc-ob / ob (ob / ob) (Charles River), KK- Ay / TaJcl (Charles River, Inc.) 6-week-old males and 5 males were fasted overnight, and all blood was collected from the abdominal vena cava or portal vein using a heparin-Na treated syringe under isoflurane anesthesia. .
  • CE-TOFMS metabolome analysis was performed on the centrifuged plasma (consigned to Human Metabolome Technologies, Inc.), and the concentrations of free amino acids, free fatty acids and glucose were measured. The results are shown in Table 1.
  • the ob / ob mice had significantly higher glucose and free fatty acid concentrations than the other mice, whereas seven free amino acids: arginine (Arg), methionine ( Met), tyrosine (Tyr), threonine (Thr), lysine (Lys), serine (Ser), and glycine (Gly) concentrations were confirmed to be significantly reduced (Table 1).
  • liver of each mouse was removed and the state of the cells was observed with a microscope (FIG. 1). Only ob / ob mice showed yellowish liver enlargement and hematoxylin and eosin (HE) staining revealed hepatic steatosis. None of the mice showed inflammation or fibrosis (FIG. 1). At 6 weeks of age, the body weights of wild type, ob / ob, and KK-Ay mice were 18.2 ⁇ 1.62 g, 29.2 ⁇ 1.44 g, and 24.8 ⁇ 0.65 g, respectively.
  • HE hematoxylin and eosin
  • Example 2 Lipid drop regression effect confirmation test using immortalized hepatocytes TLR4 Used cells and used medium C57BL / 6 mouse-derived immortalized hepatocytes TLR4 (Exp Cell Res. 197 (1): 50-6) was used. For preincubation, D-MEM containing penicillin (100 U / ml), streptomycin (100 ⁇ g / ml), and 6% fetal bovine serum was used.
  • PBM portal blood medium
  • new serum-free media matched to portal blood amino acid and glucose concentrations in wild-type and ob / ob mice from data obtained from mouse portal metabolome analysis (Table 1) -ob was prepared (Table 2).
  • CCM has the same composition as commercially available Dulbecco's modified Eagle medium (D-MEM).
  • Lipid droplet induction and lipid droplet retraction effect confirmation test The following method was used to compare lipid droplet induction using PBM-wt and PBM-ob.
  • TLR4 cells were fixed on Alvetex (registered trademark) Scaffold insert (6 well, Reinnervate) coated with Matrigel (registered trademark) (Corning), and precultured for 7 days under D-MEM. Thereafter, PBM-wt or PBM-ob containing 200 ⁇ M oleic acid (OA) was cultured for 24 hours while perfusing at 0.5 mL / hour (FIG. 2C-2 a)). The cultured scaffold was washed twice with PBS, and the cells were collected in Eppendorf Tubes (registered trademark).
  • the free fatty acid in the supernatant of the medium collected by 3D perfusion culture was measured based on the manual using LabAssayTM NEFA (Wako Pure Chemical Industries).
  • lipid droplets of TLR4 cells cultured under the same conditions under 3D perfusion conditions were fluorescently stained with Oil ⁇ red O (SIGMA) or Lipidye (registered trademark, Funakoshi) and observed using a fluorescence microscope (FIG. 2G).
  • SIGMA Oil ⁇ red O
  • Lipidye registered trademark, Funakoshi
  • FIG. 2G The TLR4 cells cultured with PBM-ob showed more residual lipid droplets than PBM-wt, which was consistent with the above results.
  • lipid droplets were detected by flow cytometry for cells stained with Lipidye, and the average fluorescence intensity (MFI) was examined (FIG. 2H).
  • lipid droplet fluorescence staining and fluorescence microscope observation were performed according to the following procedure. As described above, scaffolds obtained by culturing TLR4 cells under 3D perfusion conditions were fixed with 4% formaldehyde and washed twice with PBS. To this was added 1 ⁇ M Lipidye (Funakoshi), and lipid droplet staining was performed at 4 ° C. for 30 minutes or more. Thereafter, the plate was washed three times with PBS, subjected to anti-fading treatment with ProLong (registered trademark) Gold® (Thermo Fisher® Scientific) ®, and then observed using BZ-8000® (KEYENCE) ®.
  • ProLong registered trademark
  • Gold® Thermo Fisher® Scientific
  • flow cytometry was performed by the following method. As described above, TLR4 cells were cultured under 2D conditions, and Lipidye was added to the medium to a concentration of 1 ⁇ M 2 hours before cell collection, and lipid droplet fluorescence staining was performed. After staining, after washing twice with PBS, cells were collected using trypsin EDTA, and a cell mass was prepared by centrifugation. To this, 500-1000 ⁇ l of PBS was added to obtain a cell suspension, and flow cytometry was performed using BD FACSCanto TM II II (BD Biosciences) to determine fat droplets. Data analysis was performed using FACSDiva TM (BD Biosciences).
  • Example 3 Lipid drop regression effect confirmation test using mouse primary hepatocytes The same method as in Example 2 except that mouse primary hepatocytes (Lonza Japan KK) were used instead of TLR4 cells as cells to be cultured. A lipid droplet retraction effect confirmation test was performed using a medium to which oleic acid was not added. The results are shown in FIG. 2J.
  • Example 5 Confirmation of liver fat reduction effect in mice with high intake of L-Met and L-Tyr 7-week-old male C57BL / 6J + / + (WT) mice and leptin gene-deficient mice C57BL / 6J ob / ob ( ob / ob) mice (Japan SLC, Inc.) (1) WT (normal diet + normal water), (2) ob / ob (normal diet + normal water), (3) ob / ob (normal diet + high L-Met (2mM) , L-Tyr (2.5 mM) water) were bred until 20 weeks of age and then sacrificed, blood was collected from the heart, and blood glucose level, ALT and triglyceride were measured. In addition, fatty liver was evaluated by HE staining of the liver and right lobe, respectively. There were no differences in body weight change, liver weight, and water consumption between (2) and (3) (FIGS. 4A, 4B, and 4C).
  • FIG. 4E is a photograph showing the tissue image of the liver at this time. The amount of fat droplets was clearly reduced in (3) compared to (2). The result is shown in FIG. 4D. Liver fat decreased in mice with high intake of L-Met and L-Tyr (AA), and the increase in blood triglyceride in (3) was caused by the release of fat accumulated in the liver It is shown that.
  • L-Met and L-Tyr AA
  • FIG. 4E shows the measurement result of the blood ALT level at this time.
  • Blood ALT is known to increase in fatty liver, and blood ALT is decreased in (3) compared to (2), suggesting improvement in fatty liver.
  • (3) shows that the accumulation of fat in hepatocytes is released to the outside of hepatocytes as triglycerides (neutral fat) by ingestion of AA, and liver function is improved by improving fatty liver. Suggests.
  • TLR4 cells were cultured in collagen-coated 96-well plates (CORNING) in a D-MEM medium containing 100 ⁇ M-200 ⁇ M oleic acid for about 9 hours to cause fat denaturation. I let you. Fatty denatured TLR4 cells were cultured for 9 hours in D-MEM medium supplemented with oleic acid (100 ⁇ M) and C16 palmitate FL BODIPY (Thermo Fisher, 4 ⁇ M). Thereafter, fluorescence was observed in the intracellular lipid droplets, confirming the incorporation of the label.
  • CORNING collagen-coated 96-well plates
  • the cells were cultured for 12 hours in a medium having the same composition as PBM-wt except that a concentration gradient (0 to 500 nmol / mL) was applied to L-methionine (Met) or L-tyrosine (Tyr).
  • a concentration gradient (0 to 500 nmol / mL) was applied to L-methionine (Met) or L-tyrosine (Tyr).
  • TM Fluoroskan Ascent TM (Thermo Fischer).
  • FIGS. 5A and 5B It was confirmed that the fat accumulated in the cells decreased and the fat released outside the cells increased depending on the methionine and tyrosine concentrations. This indicates that methionine and tyrosine have the effect of promoting intracellular lipid release. In the case of methionine addition, the release to the outside of the cell became significant when 62 ⁇ M or more was added, and when tyrosine was added, 125 ⁇ M or more was significant.
  • Example 7 Confirmation test of influence of methionine and tyrosine intake on intrahepatic lipid amount Seven-week-old male C57BL / 6J wild type mice (Japan SLC Co., Ltd.) were randomly selected (a) high fat diet (HF) Group (Fat: 60 kcal%, Met: 0.65 wt%, Tyr: 1.2 wt%), (b) High-fat Met-deficient Tyr-deficient diet (HF-MTD) group (Fat: 60 kcal%, Met: not containing, Tyr : Not contained), (c) high fat Met restricted Tyr deficient diet (HF-MRTD) group (Fat: 60 kcal%, Met: 0.20 wt%, Tyr: not contained), (d) high fat Met restricted diet (HF -MR) group (Fat: 60 kcal%, Met: 0.20 wt%, Tyr: 1.2 wt%), and (e) high fat Tyr deficient diet (HF-TD) group (Fat: 60 kcal% (Fat
  • MR stock (Nippon Agricultural Industrial Co., Ltd.) was added to male C57BL / 6J wild type mice (Japan SLC) and leptin gene-deficient mice C57BL / 6J ob / ob (ob / ob) mice (Japan SLC); (Fat: 3.9%, Met: 0.26 wt%, Tyr: 0.55 wt%)) and the groups fed and fed (Chow wt and Chow ob / ob, respectively) were used as controls.
  • a high fat diet As a high fat diet, a high fat diet (HFD-60, Oriental Yeast Co., Ltd.) with a fat content of 60% calorie is used, and as a high fat Met-deficient Tyr-deficient diet, except that it does not contain methionine and tyrosine, A feed containing the same ingredients was used. In the other groups, a feed containing the same components as the high fat diet was prepared and used except that the amounts of methionine and tyrosine were the above amounts. (A) and (b) were raised to 11 weeks of age, and (c) to (e) were killed after being raised to 16 weeks of age. Blood was collected from the heart and ALT and triglycerides were measured (FUJI Dry Chem 7000V).
  • liver tissue was evaluated by HE staining and Oil red O staining.
  • a cell lysate of liver tissue was prepared using RIPA buffer (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and hepatic lipids (triglycerides, cholesterol, free fatty acids) were attached using LabAssay TM (WAKO). Measured according to The results of changes in body weight (average value) of each experimental group animal are shown in FIG. 6A, and the measurement results of intrahepatic lipids are shown in FIG. 6B.
  • FIG. 6C shows liver tissue images (HE staining, Oil Red O staining) after completion of breeding in the HF-MRTD group and the HF group.
  • the HF-MRTD group obtained a pathological image very similar to NASH.
  • marked lipid droplets and hepatocyte balloning characteristic of NASH were strongly observed.
  • HF-MR and HF-TD showed slightly similar findings but were weaker than those in HF-MRTD.
  • HF-MTD showed strong findings similar to HF-MRTD, it was significantly different from actual NASH patients in terms of weight loss (FIG. 6A).
  • Example 8 Plasma free amino acid analysis of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) patients Liver of 70 nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) patients admitted to the Department of Gastroenterology, Tohoku University between 2005 and 2018 Biopsy tissue and plasma free amino acid analysis data were analyzed. The pathological evaluation of the patients was performed based on the NAFLD activity score (NAS), and the patients were evaluated for steatosis (S) in 4 stages from S0 to S3. Based on the severity of the disease, patients were divided into two groups: S0-S1 (mild) and S2-S3 (severe). Patient profiles are shown in the table below.
  • NAS NAFLD activity score
  • Plasma free amino acid concentrations were compared between the mild fatty liver group (S0-S1) and the high fatty liver group (S2-S3). The results are shown in FIG. 7A.
  • L / S ratio is an index that expresses that the higher the value, the less (normal) liver fat. A significant correlation was obtained that the higher the Met and Tyr in peripheral blood, the higher the L / Sratio, and the other amino acids (eg Gln) did not.
  • mice C57BL / 6J ob / ob (ob / ob) mice (Japan SLC, Inc.) were randomly selected (a ) Normal diet group, (b) High Met high Tyr diet (methionine: 1.0 wt%, tyrosine: 2.0 wt%) group, (c) High BCAA diet (valine: 2.1 wt%, leucine: 4.3 wt%) , Isoleucine: 2.1 wt%).
  • MR stock (Nippon Agricultural Industrial Co., Ltd .; methionine: 0.26 wt%, tyrosine: 0.55 wt%, valine: 0.79 wt%, leucine: 1.36 wt%, isoleucine: 0.67 wt%) is used as a normal food.
  • the high Met high Tyr diet and the high BCAA diet were prepared by adding each of the above components to the normal diet so as to have a predetermined content.
  • the mice in each group were raised to 20 weeks of age and then sacrificed, blood was collected from the heart, and ALT and triglycerides were measured (FUJI Dry Chem 7000V). The results are shown in FIG.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本発明の目的は、肝機能の改善、特に肝脂肪の代謝を促進することによる肝機能の改善に有効な組成物、および非アルコール性脂肪肝疾患、特に非アルコール性脂肪性肝炎の治療または予防に有効な組成物を提供することである。本発明により、メチオニンまたはチロシンを有効成分として含む、肝脂肪低減剤が提供される。

Description

肝脂肪低減剤
　本発明は、肝脂肪の代謝を促進し、肝細胞に存在する脂肪の量を減少させる効果を有する組成物、特に脂肪肝、アルコール性脂肪性肝炎、または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療または予防に使用される組成物に関する。
　脂肪肝は肝臓内に中性脂肪（トリグリセリド）が蓄積した状態であり、肝臓での脂肪の蓄積は非進行性（可逆的）変化であるため、原因を除去すると肝臓での脂肪蓄積は正常に戻る。しかし、脂肪の蓄積が進行し、肝機能障害が生じることになると、肝硬変や肝臓ガンに発展する場合がある。飲酒が原因のアルコール性脂肪性肝炎が脂肪肝の典型例である。
　一方で、アルコールをほとんど摂取しない人にも脂肪肝が生じる場合があり、これは非アルコール性脂肪肝疾患（nonalcoholic fatty liver disease: NAFLD）と呼ばれている。ＮＡＦＬＤの中でも重度のものは、非アルコール性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis：NASH）と呼ばれている。ＮＡＳＨは肝硬変や肝がんの重要な原因と考えられている。
　肥満、糖尿病、脂質異常症、高血圧症などに伴って生じる脂肪肝が進行してＮＡＳＨに発展するとの知見に加えて、肝臓にかかるストレスが原因とも考えられている。ストレスとしては、活性酸素による酸化ストレス、過酸化脂質、鉄、インスリン抵抗性、サイトカインの放出などが想定されている。中でも肝組織内の鉄の過剰は、ＮＡＳＨにおける肝障害の増悪因子と考えられている。
　ＮＡＳＨの処置において特に有効な方法は確立しておらず、その処置方法について多数の報告がされている。
特開２０１５－１８２９９８号 特開２０１７－０１９７２６号 特開２０１７－０５７１５５号 特開２０１７－１６５７３５号 ＷＯ２００７／１４２２９７Ａ１
　本発明は、肝機能の改善、特に肝脂肪の代謝を促進することによる肝機能の改善に有効な組成物を提供することを目的とする。本発明はまた、非アルコール性脂肪肝疾患、特に非アルコール性脂肪性肝炎の治療または予防に有効な組成物を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意研究を進めたところ、メチオニンおよび／またはチロシンを含有する組成物に肝脂肪の低減効果を見いだし、本発明を完成させた。
　［１－１］メチオニンまたはチロシンを有効成分として含む、肝脂肪低減剤。
　［１－２］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのモル分率が１％以上である、［１－１］に記載の肝脂肪低減剤。
　［１－３］メチオニンおよびチロシンを有効成分として含有する、［１－１］または［１－２］に記載の肝脂肪低減剤。
　［１－４］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンのモル分率がそれぞれ１％～４２％である、［１－１］～［１－３］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－５］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンの合計モル分率が５％～５７％である、［１－１］～［１－４］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－６］グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンから選択される１以上のアミノ酸をさらに含む、［１－１］～［１－５］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－７］グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンから選択される１以上のアミノ酸のモル分率がそれぞれ８％以上である、［１－１］～［１－６］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－８］グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンをさらに含む、［１－１］～［１－７］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－９］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシン、グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンの合計モル分率が４９％～１００％である、［１－１］～［１－８］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－１０］非アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、または非アルコール性脂肪性肝炎の治療に用いられる、［１－１］～［１－９］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－１１］非アルコール性脂肪性肝炎の治療に用いられる、［１－１］～［１－１０］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－１２］肝機能の改善のために用いられる、［１－１］～［１－１１］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［１－１３］［１－１］～［１－１２］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための経口摂取用組成物。
　［１－１４］［１－１］～［１－１２］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための医薬組成物。
　［１－１５］［１－１］～［１－１２］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための食品組成物。
　本発明の別の側面によれば、以下の薬剤または組成物が提供される。
　［２－１］メチオニンまたはチロシンを有効成分として含む、肝脂肪低減剤。
　［２－２］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのモル分率が８％以上である、［２－１］に記載の肝脂肪低減剤。
　［２－３］メチオニンおよびチロシンを有効成分として含有する、［２－１］または［２－２］に記載の肝脂肪低減剤。
　［２－４］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンのモル分率がそれぞれ８％～３７％である、［２－１］～［２－３］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－５］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンの合計モル分率が１６％～５３％である、［２－１］～［２－４］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－６］グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンから選択される１以上のアミノ酸をさらに含む、［２－１］～［２－５］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－７］グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンから選択される１以上のアミノ酸のモル分率がそれぞれ８％以上である、［２－１］～［２－６］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－８］グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンをさらに含む、［２－１］～［２－７］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－９］天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシン、グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンの合計モル分率が５０％～１００％である、［２－１］～［２－８］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－１０］非アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、または非アルコール性脂肪性肝炎の治療に用いられる、［２－１］～［２－９］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－１１］非アルコール性脂肪性肝炎の治療に用いられる、［２－１］～［２－１０］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－１２］肝機能の改善のために用いられる、［２－１］～［２－１１］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤。
　［２－１３］［２－１］～［２－１２］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための経口摂取用組成物。
　［２－１４］［２－１］～［２－１２］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための医薬組成物。
　［２－１５］［２－１］～［２－１２］のいずれかに記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための食品組成物。
　本発明の別の側面によれば、以下の実験動物が提供される。
　［３－１］チロシンおよび／またはメチオニンを含まないか、またはチロシンおよびメチオニンの含有量がそれぞれ０．７重量％以下、０．５重量％以下、０．３重量％以下または０．２重量％以下である餌を与えて飼育した非ヒト哺乳動物である、肝疾患モデル動物。
　［３－２］餌がチロシンまたはメチオニンのいずれか一方を含まない、［３－１］に記載の肝疾患モデル動物。
　［３－３］餌がチロシンを含みメチオニンを含まず、チロシンの含有量が０．７重量％以下、０．５重量％以下、０．３重量％以下または０．２重量％以下である、［３－１］または［３－２］に記載の肝疾患モデル動物。
　［３－４］餌が脂肪を２０ｋｃａｌ％以上、３０ｋｃａｌ％以上、４０ｋｃａｌ％以上、５０ｋｃａｌ％以上、または６０ｋｃａｌ％の量以上で含む、［３－１］～［３－３］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物。
　［３－５］飼育期間が１週間以上、２週間以上、３週間以上、４週間以上、５週間以上、６週間以上、７週間以上、８週間以上、１０週間以上、または１２週間以上である、［３－１］～［３－４］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物。
　［３－６］非ヒト哺乳動物がマウスである、［３－１］～［３－５］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物。
　［３－７］非ヒト哺乳動物がC57BL/6J野生型マウスである、［３－１］～［３－６］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物。
　［３－８］肝疾患が非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変または肝がんである、［３－１］～［３－７］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物。
　［３－９］肝細胞に脂肪滴または風船様腫大が認められる、［３－１］～［３－８］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物。
　本発明の別の側面によれば、チロシンおよび／またはメチオニンを含まないか、またはチロシンおよびメチオニンの含有量がそれぞれ０．７重量％以下、０．５重量％以下、０．３重量％以下または０．２重量％以下である餌を与えて非ヒト哺乳動物を飼育することを含む、［３－１］～［３－９］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物の製造方法が提供される。
　本発明の別の側面によれば、［３－１］～［３－９］のいずれかに記載の肝疾患モデル動物を使用する、肝疾患治療剤のスクリーニング方法が提供される。
　本発明によれば、肝機能の改善、特に肝脂肪の代謝を促進することによる肝機能の改善に有効であり、長期に摂取しても安全な組成物を提供される。本発明によればまた、非アルコール性脂肪肝疾患、特に非アルコール性脂肪性肝炎の治療または予防に有効な組成物を提供が提供される。
図１は、6週齢・雄のC57BL/6JhamSlc-ob/ob（+/+）（野生種、wt）、C57BL/6JhamSlc-ob/ob(ob/ob)（ob）、およびKK-Ay/TaJclの写真、およびそれぞれの肝臓、およびヘマトキシリン・エオシン（HE）染色後の肝細胞の写真である。 図２Ａは、TLR4細胞をPBM-wtを用いて２次元培養の条件下でインキュベーションした場合に、培養用のディッシュに細胞が定着し、バイアビリティーが保たれていることを示す写真である。 図２Ｂは、TLR4細胞をPBM-wtを用いて３次元灌流培養の条件下でインキュベーションした場合の、細胞定着前のScaffoldの写真（左）、細胞定着後にNeutral Red（Neutral Red solution (Sigma, N6264)）で細胞を染色した際の写真（中央）、および細胞定着後にJC-1 dye（MitoProbeTM JC-1 Assay Kit）で細胞を染色した際の写真（右）である。 図２Ｃ－１は３次元灌流細胞培養の装置の概要を示す図である。 図２Ｃ－２は灌流培養で用いた培地を示す図である（灌流前にD-MEM下で約7日間培養し更にオレイン酸200μMで24時間培養する。灌流培養は24－48時間行う）。 図２Ｄは、図２Ｃ－２のａ）の条件で３次元灌流培養を行った場合の細胞中のトリグリセリドの量の変化を示すグラフである。灌流培養前の細胞中のトリグリセリド量（ＯＡ－）を１として、灌流培養後の細胞中のトリグリセリド量を表示する。 図２Ｅは、図２Ｃ－２のａ）の条件で３次元灌流培養を行った場合の細胞中のトリグリセリドの量の変化を示すグラフである。灌流培養前の細胞中のトリグリセリド量（ＯＡ＋）を１として、灌流培養後の細胞中のトリグリセリド量を表示する。＊はＰ＜０．０５を意味する。 図２Ｆは、３次元灌流培養により回収した培地の上清中の遊離脂肪酸濃度を示すグラフである。 図２Ｇは、３次元灌流条件下で培養し、脂肪滴をOil red OもしくはLipiDyeで蛍光染色したTLR4細胞の写真である。上段はPBM-wtを用いて灌流培養した細胞、下段はPBM-obを用いて灌流培養した細胞であり、染色前の細胞（左）、LipidDyeで染色した細胞（中央）、およびOil red Oで染色した細胞（右）の写真を示す。 図２Ｈは、LipiDyeにより脂肪滴を染色した細胞についてフローサイトメトリーを用いて分析した結果を示すチャートである。（lipidye-: LipiDye非添加TLR4, PBM OA-: オレイン酸非添加PBM, Pre: PBM-wtとPBM-obに培地交換前のTLR4）。 図２Ｉは、図２Ｈにおいて示すフローサイトメトリーにおける平均蛍光強度 (MFI)を示すグラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。 図２Ｊは、図２Ｃ－２のａ）の条件でオレイン酸を添加しない培地を用いて３次元灌流培養を行った場合の細胞中のトリグリセリドの量の変化を示すグラフである。 図３Ａは、７種類のアミノ酸：メチオニン、チロシン、グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンを添加しそれぞれ500μMとした培地 (PBM-ob+AA) を用いて３次元灌流培養によりTLR4細胞を24時間培養し、脂肪滴を染色した細胞のフローサイトメトリーの結果を図２Ｈに示すチャートに追記したチャートである。 図３Ｂは、図３Ａにおいて示すフローサイトメトリーにおける平均蛍光強度 (MFI)を示すグラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。 図３Ｃは、培養に使用する細胞としてTLR4細胞に代えてヒト肝がん細胞株HepG2を用いて、同様のフローサイトメトリー分析を行い、その結果の平均蛍光強度を示すチャートである。 図３Ｄは、PBM-obに7種類のアミノ酸をそれぞれ1種類ずつ500μM添加し、同様にフローサイトメトリーを行い検討した結果を示すグラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。 図３Ｅは、PBM-obにメチオニン（500μM）、メチオニンおよびチロシン（それぞれ500μM）、メチオニン、チロシンおよびアルギニン（それぞれ500μM）、およびロイシン、イソロイシンおよびバリン（ＢＣＡＡｓ、それぞれ500μM）を添加した培地を用いて、同様にフローサイトメトリーを行い検討した結果を示すグラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。 図３Ｆは、PBM-obにメチオニンおよびチロシンをそれぞれ500μM、およびそれぞれ１ｍMを添加した培地を用いて、同様にフローサイトメトリーを行い検討した結果を示すグラフである。＊はｐ＜０．０５を示す。 図４Ａは、L-Met,およびL-Tyr高摂取マウスにおける各群マウスの平均体重の変化を示すグラフである。 図４Ｂは、L-Met,およびL-Tyr高摂取マウスにおける各群マウスの肝重量（平均）の変化を示すグラフである。 図４Ｃは各群の飲水量を示すグラフである。 図４Ｄは、L-Met,およびL-Tyr高摂取マウスにおける各群マウスの血中のトリグリセリド（平均）の変化を示すグラフである。 図４Ｅは、L-Met,およびL-Tyr高摂取マウスにおける各群マウスの肝細胞を示す写真である。 図４Ｆは、L-Met,およびL-Tyr高摂取マウスにおける各群マウスの血中ＡＬＴ値の変化を示す写真である。 図５Ａは、メチオニンまたはチロシンを各濃度で含む条件で細胞培養した後の培養上清の蛍光強度を示すグラフである。 図５Ｂは、メチオニンまたはチロシンを各濃度で含む条件で細胞培養した後の細胞内の蛍光強度を示すグラフである。 図６Ａは、実施例７の試験における各群のマウスの体重推移の結果を示すグラフである。 図６Ｂは、各群のマウスの肝内脂質（トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸）を測定した結果を示すグラフである。 図６Ｃは、高脂肪Met制限Tyr欠損食群(HF-MRTD diet)と高脂肪食群（HF diet）のマウスの飼育終了後の肝臓組織像（HE染色、Oil Red O染色）を示す写真である。 図７Ａは、S0-S1（軽度）とS2-S3（重度）の２群に分類した非アルコール性脂肪肝疾患患者の血漿中の各遊離アミノ酸レベルを測定した結果を示すグラフである。 図７Ｂは、非アルコール性脂肪肝疾患患者のCTデータから算出した脂肪肝の程度（肝脾CT値比、L/S ratio）と血漿中のメチオニン、チロシン、グルタミン濃度との相関を解析した結果を示すグラフである。 図８は、実施例９の試験における各群のマウスの血漿中ＡＬＴとトリグリセリド濃度を示すグラフである。ＡＬＴのグラフの縦軸はＩＵ／Ｌを示し、トリグリセリドのグラフの縦軸はｍｇ／ｄＬを示す。
　以下、本発明を更に具体的に説明する。
　本発明の一つの側面によれば、メチオニンまたはチロシンを有効成分として含む、肝脂肪低減剤が提供される。ここで使用される、メチオニンまたはチロシンは、塩またはエチルエステルなどの誘導体であってもよく、またはペプチドもしくはタンパク質を構成するアミノ酸として含まれていてもよい。
　本発明の肝脂肪低減剤は、メチオニンまたはチロシンに加えて、天然アミノ酸、すなわちアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、およびトリプトファンを含んでいてもよい。これらのアミノ酸が本発明の成分として含まれる場合、該アミノ酸は塩またはエチルエステルなどの誘導体、シスチンなどの２量体であってもよく、またはペプチドもしくはタンパク質を構成するアミノ酸として含まれていてもよい。
　本発明の一つの側面によれば、メチオニンまたはチロシンを有効成分として含む、肝機能改善剤が提供される。ここで使用される、メチオニンまたはチロシンは、塩またはエチルエステルなどの誘導体であってもよく、またはペプチドもしくはタンパク質を構成するアミノ酸として含まれていてもよい。
　本発明の肝機能改善剤は、メチオニンまたはチロシンに加えて、天然アミノ酸、すなわちアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、およびトリプトファンを含んでいてもよい。これらのアミノ酸が本発明の成分として含まれる場合、該アミノ酸は塩またはエチルエステルなどの誘導体、シスチンなどの２量体であってもよく、またはペプチドもしくはタンパク質を構成するアミノ酸として含まれていてもよい。
　本発明の一つの側面によれば、メチオニンまたはチロシンを有効成分として含む、非アルコール性脂肪性肝炎の治療剤または予防剤が提供される。ここで使用される、メチオニンまたはチロシンは、塩またはエチルエステルなどの誘導体であってもよく、またはペプチドもしくはタンパク質を構成するアミノ酸として含まれていてもよい。
　本発明の治療剤または予防剤は、メチオニンまたはチロシンに加えて、天然アミノ酸、すなわちアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、プロリン、フェニルアラニン、およびトリプトファンを含んでいてもよい。これらのアミノ酸が本発明の成分として含まれる場合、該アミノ酸は塩またはエチルエステルなどの誘導体、シスチンなどの２量体であってもよく、またはペプチドもしくはタンパク質を構成するアミノ酸として含まれていてもよい。
　本発明のよる肝機能改善効果は、肝細胞における脂肪の代謝が促進されることに起因するものと想定される。また、非アルコール性脂肪性肝炎の治療効果または予防効果は、肝細胞において脂肪の代謝が促進されることによる肝機能の改善に起因するものと想定される。
　本発明の一つの態様において、天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのそれぞれモル分率は、例えば、１％以上、５％以上、８％以上、１０％以上、１２％以上、１６％以上、または２０％以上である。これらのアミノ酸は他の天然アミノ酸を含まない組成物として、（すなわち、天然アミノ酸の総含有量に対して１００％のモル分率で）投与されてもよい。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのそれぞれモル分率の上限としては、例えば２２％、３６％、３７％、４２％、５７％、６８％、または１００％である。
　本発明の一つの態様において、天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのそれぞれモル分率は、例えば、８％以上、１０％以上、１２％以上、１６％以上、または２０％以上である。これらのアミノ酸は他の天然アミノ酸を含まない組成物として、（すなわち、天然アミノ酸の総含有量に対して１００％のモル分率で）投与されてもよい。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのそれぞれモル分率の上限としては、例えば２２％、３６％、６８％、または１００％である。
　本発明の一つの側面において、メチオニンおよびチロシンを合わせて摂取してもよい。これらの成分は、一つの組成物中の成分として摂取してもよい。またはメチオニンおよびチロシンは、別々の組成物の成分として摂取してもよく、例えば、他の天然アミノ酸を含まない組成物、すなわち、天然アミノ酸の総含有量に対して１００％のモル分率でそれぞれが投与されてもよい。本発明の一つの態様において、メチオニンおよびチロシンは一つの組成物の成分であり、該組成物中の天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンのそれぞれモル分率は８％以上、１０％以上、１２％以上、１６％以上、または２０％以上である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのそれぞれモル分率の上限としては、例えば２２％、３６％、６８％、または１００％である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンの合計のモル分率は、例えば、１６％以上、２１％以上、または２４％以上であり、例えば、３６％以下、５３％以下、または１００％以下である。
　本発明の一つの側面において、メチオニンおよび／またはグリシンは、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンから選択される１以上のアミノ酸と合わせて摂取してもよい。これらの成分は、一つの組成物中の成分として摂取してもよい。またはメチオニン、チロシンおよび１以上のアミノ酸は、別々の組成物の成分として摂取してもよく、例えば、それぞれが他の天然アミノ酸を含まない組成物、すなわち、天然アミノ酸の総含有量に対して１００％のモル分率でそれぞれが投与されてもよい。本発明の一つの態様において、メチオニン、チロシンおよび１以上のアミノ酸は一つの組成物の成分であり、該組成物中の天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシンおよび１以上のアミノ酸のそれぞれモル分率は８％以上、１０％以上、１２％以上、１６％以上、または２０％以上である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシンおよび１以上のアミノ酸のそれぞれモル分率の上限としては、例えば１０％、１５％、２１％、または３３％である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシンおよび１以上のアミノ酸の合計のモル分率は、例えば、３０％以上、４５％以上、または６３％以上であり、例えば、７３％以下、８２％以下、または１００％以下である。
　本発明の一つの側面において、メチオニンおよび／またはグリシンは、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンと合わせて摂取してもよい。これらの成分は、一つの組成物中の成分として摂取してもよい。またはメチオニン、チロシンおよび他のアミノ酸は、別々の組成物の成分として摂取してもよく、例えば、それぞれが他の天然アミノ酸を含まない組成物、すなわち、天然アミノ酸の総含有量に対して１００％のモル分率でそれぞれが投与されてもよい。本発明の一つの態様において、メチオニン、チロシンおよび他のアミノ酸は一つの組成物の成分であり、該組成物中の天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシンおよび他のアミノ酸のそれぞれモル分率は８％以上、１０％以上、１２％以上、１６％以上、または２０％以上である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシンおよび他のアミノ酸のそれぞれモル分率の上限としては、例えば８％、１０％、１２％、または１４％である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシンおよび他のアミノ酸の合計のモル分率は、例えば、５８％以上、７３％以上、または８５％以上であり、例えば、８６％以下、９３％以下、または１００％以下である。
　本発明の一つの側面において、メチオニンおよび／またはグリシンは、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンと合わせて摂取してもよい。これらの成分は、一つの組成物中の成分として摂取してもよい。またはメチオニン、チロシンおよび他のアミノ酸は、別々の組成物の成分として摂取してもよく、例えば、それぞれが他の天然アミノ酸を含まない組成物、すなわち、天然アミノ酸の総含有量に対して１００％のモル分率でそれぞれが投与されてもよい。本発明の一つの態様において、メチオニン、チロシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンは一つの組成物の成分であり、該組成物中の天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンのそれぞれモル分率は１％以上。５％以上、８％以上、１０％以上、１２％以上、１６％以上、または２０％以上である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンのそれぞれモル分率の上限としては、例えば８％、１０％、１２％、または１４％である。天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンの合計のモル分率は、例えば、４９％以上、５０％以上、５８％以上、７３％以上、または８５％以上であり、例えば、８６％以下、９３％以下、または１００％以下である。
　本発明の一つの側面において、これらの成分は、一つの組成物中の成分として摂取してもよい。メチオニン摂取の日薬量は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ日以上、３．５ｍｇ／ｋｇ日以上、７ｍｇ／ｋｇ日以上であり、１５ｍｇ／ｋｇ日以下、３０ｍｇ／ｋｇ日以下、４５ｍｇ／ｋｇ日以下である。チロシン摂取の日薬量は、例えば１ｍｇ／ｋｇ日以上、４．５ｍｇ／ｋｇ日以上、９ｍｇ以上であり、１９ｍｇ／ｋｇ日以下、３７ｍｇ／ｋｇ日以下、５５ｍｇ／ｋｇ以下である。グリシン摂取の日薬量は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ日以上、１．８ｍｇ／ｋｇ日以上、３．７ｍｇ／ｋｇ日以上であり、８ｍｇ／ｋｇ日以下、１６ｍｇ／ｋｇ日以下、２４ｍｇ／ｋｇ日以下である。セリン摂取の日薬量は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ日以上、２．５ｍｇ／ｋｇ日以上、５ｍｇ／ｋｇ日以上であり、１１ｍｇ／ｋｇ日以下、２２ｍｇ／ｋｇ日以下、３３ｍｇ／ｋｇ日以下である。スレオニン摂取の日薬量は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ日以上、２．９ｍｇ／ｋｇ日以上、５．９ｍｇ／ｋｇ日以上であり、１２ｍｇ／ｋｇ日以下、２４ｍｇ／ｋｇ日以下、３６ｍｇ／ｋｇ日以下である。リシン摂取の日薬量は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ日以上、３．６ｍｇ／ｋｇ日以上、７．３ｍｇ／ｋｇ日以上であり、１５ｍｇ／ｋｇ日以下、３０ｍｇ／ｋｇ日以下、４５ｍｇ／ｋｇ日以下である。アルギニン摂取の日薬量は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ日以上、４．３ｍｇ／ｋｇ日以上、８．７ｍｇ／ｋｇ日以上であり、１８ｍｇ／ｋｇ日以下、３６ｍｇ／ｋｇ日以下、５４ｍｇ／ｋｇ日以下である。上記の日薬量は、食事などから摂取するアミノ酸の摂取とは別に計算するのが望ましい。
　日本食品標準成分表2015年版（七訂）（文部科学省）によれば、可食部100gあたりのメチオニンを多く含む食材として、ごまさば（さば節）（2400mg）、カゼイン（2600mg）、たたみいわし（2000mg）などが挙げられる。可食部100gあたりのチロシンを多く含む食材として、乾燥卵白（3900mg）、かつお（削り節）（2700mg）、パルメザンチーズ（2700mg）などが挙げられる。可食部100gあたりのグリシンを多く含む食材として、ゼラチン（24000mg）、ほたてがい（煮干し）（7700mg）などが挙げられる。可食部100gあたりのセリンを多く含む食材として、にしんかずのこ（乾）（4200mg）、ごまさば（さば節）（3000mg）などが挙げられる。可食部100gあたりのスレオニンを多く含む食材として、にしんかずのこ（乾）（5000mg）、ほたてがい（煮干し）（2300mg）などが挙げられる。可食部100gあたりのリシンを多く含む食材として、たたみいわし（6400mg）、パルメザンチーズ（3400mg）、などが挙げられる。可食部100gあたりのアルギニンを多く含む食材として、たたみいわし（4500mg）、あわび（干し）（3400mg）などが挙げられる。
　本発明の肝脂肪低減剤または肝機能改善剤は、肝脂肪の代謝を促進することによる肝機能の改善を目的として使用することができ、例えば、非アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、または非アルコール性脂肪性肝炎の治療または予防に用いることができる。
　本発明に用いることができるアミノ酸の塩は、経口摂取剤の有効成分として使用可能な塩であれば特に限定されない。当該塩は塩基と形成する塩であってもよく、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウムなどの無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。当該塩は、酸付加塩であってもよく、かかる塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸；および、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸などの有機酸との酸付加塩が挙げられる。
　本発明の肝脂肪低減剤、肝機能改善剤、および非アルコール性脂肪性肝炎の治療剤または予防剤（以下、本発明の薬剤とも称する）は、経口摂取用組成物、医薬組成物、および食品組成物の成分として使用することができる。本発明の経口摂取用組成物、医薬組成物、および食品組成物（以下、本発明の組成物とも称する）は、肝脂肪低減、肝機能改善、または非アルコール性脂肪性肝炎の治療または予防を目的として使用することができる。
　本発明の薬剤、および組成物は、種々の剤形、例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁液、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤とすることができるが、これらには限定されない。これらの製剤は、製剤工程において通常用いられる公知の方法により製造することができる。本発明においては、好ましくは経口剤として投与される。
　本発明の製造においては、一般に用いられる各種成分を使用することができ、例えば、１種以上の薬学的に許容され得る賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、コーティング剤等を成分として含みうる。また本発明の肝脂肪低減剤および組成物は、持続性または徐放性剤形であってもよい。
　本発明の薬剤および組成物の投与量または摂取量は、投与経路、患者の体型、年齢、体調、疾患の度合い、発症後の経過時間等により、適宜選択することができ、本発明の肝脂肪低減剤および組成物は、有効量のメチオニンまたはチロシンを含むことができる。本発明においてメチオニンまたはチロシンは、一般に１～１００００ｍｇ／日／成人の用量で使用されうる。
　本発明の薬剤または医薬組成物の投与は、単回投与または複数回投与であってもよく、他の医薬、例えば抗糖尿病薬と組み合わせて使用することもできる。
　本発明の薬剤および組成物は、必要に応じ、従来公知の着色剤、保存剤、香料、風味剤、コーティング剤、抗酸化剤、ビタミン、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、およびミネラル分（鉄、亜鉛、マグネシム、ヨードなど）などの成分を含有していてもよい。本発明の薬剤および組成物は、食品組成物、経口摂取用組成物、医薬組成物、機能性食品、健康食品、飲料、サプリメントなどに適した形態、例えば顆粒剤（ドライシロップを含む）、カプセル剤（軟カプセル剤、硬カプセル剤）、錠剤（チュアブル剤などを含む）、散剤（粉末剤）、丸剤などの各種の固形製剤、または内服用液剤（液剤、懸濁剤、シロップ剤を含む）などの液状製剤などの形態で調製してもよい。また、本発明の肝脂肪低減剤、肝機能改善剤、および非アルコール性脂肪性肝炎の治療剤または予防剤は、そのまま、医薬組成物、食品組成物、経口摂取用組成物、機能性食品、健康食品、サプリメントなどとして使用することもできる。
　製剤化のための添加物としては、例えば、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、流動化剤、分散剤、湿潤剤、防腐剤、粘稠剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、溶解補助剤が挙げられる。また、液剤の形態にする場合は、ペクチン、キサンタンガム、グアガムなどの増粘剤を配合することができる。また、コーティング剤を用いてコーティング錠剤にしたり、ペースト状の膠剤とすることもできる。さらに、他の形態に調製する場合であっても、従来の方法に従えばよい。
　本発明に用いる非ヒト哺乳類は、実験動物として使用されるものであれば特に限定されず、例えば、非ヒト哺乳動物としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、サルなどが例示される。ある実施形態において、非ヒト哺乳動物は、マウス、ラット、ハムスター、モルモットなどの齧歯類、好ましくはマウスである。
　以下、実施例を示すことにより本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
　［実施例１］マウス門脈血・メタボローム解析
　C57BL/6JhamSlc-ob/ob（+/+）（チャールズリバー社）、C57BL/6JhamSlc-ob/ob(ob/ob) （チャールズリバー社）、KK-Ay/TaJcl（チャールズリバー社）の6週齢・雄各5匹を一晩絶食させた上でイソフルラン麻酔下に、腹部大静脈あるいは門脈よりヘパリンNa処理済シリンジを用いて全採血を行った。遠心分離した血漿についてCE-TOFMSメタボローム解析を行い（Human Metabolome Technologies, Inc.に委託）、遊離アミノ酸、遊離脂肪酸およびグルコースの濃度を測定した。その結果をTable 1に示す。これらのマウスの空腹時門脈血において、ob/obマウスではグルコースおよび遊離脂肪酸濃度が他のマウスと比較して有意に高いのに対して、7種類の遊離アミノ酸：アルギニン（Arg）、メチオニン（Met）、チロシン（Tyr）、スレオニン（Thr）、リシン（Lys）、セリン（Ser）、グリシン（Gly）の濃度が有意に低下していることが確認された（Table 1）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　また各マウスの肝臓を摘出し、細胞の状態を顕微鏡で観察した（図１）。ob/obマウスのみ黄色調で肝腫大を呈しており、ヘマトキシリン・エオシン（HE）染色で肝細胞の脂肪変性を認めた。いずれのマウスも炎症・線維化は認めなかった（図１）。6週齢の時点で、野生型、ob/ob、KK-Ayマウスの体重はそれぞれ18.2±1.62g, 29.2±1.44g, 24.8±0.65gであった。
　［実施例２］不死化肝細胞TLR4を用いた脂肪滴退縮効果確認試験
　１．使用細胞及び使用培地
　C57BL/6マウス由来不死化肝細胞TLR4（Exp Cell Res. 197 (1) : 50-6）を使用した。プレインキュベーションにはペニシリン（100U/ml）、ストレプトマイシン（100μg/ml）、6% ウシ胎児血清を含むD-MEMを使用した。マウス門脈メタボローム解析から得られたデータ (Table 1)から野生型およびob/obマウスの門脈血アミノ酸・グルコース濃度に一致させた新規無血清培地であるPortal Blood Medium (PBM)-wtとPBM-obをそれぞれ作製した（Table 2）。培地にはペニシリン (100U/ml)、ストレプトマイシン (100μg/ml) 、2％ウシ胎児血清を添加した。なお、CCMは市販のダルベッコ変法イーグル培地（D-MEM）と同組成である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　２．脂肪滴誘導および脂肪滴退縮効果確認試験
　以下の手法で、PBM-wtおよびPBM-obを用いて脂肪滴誘導を比較する試験を行った。TLR4細胞をMatrigel（登録商標）（Corning）でコートしたAlvetex（登録商標） Scaffold insert (6 well, Reinnervate)に定着させてD-MEM下で7日間前培養を行った。その後、オレイン酸 (OA) 200μMを含むPBM-wtまたはPBM-obを0.5mL/時間で灌流しながら24時間培養した（図２Ｃ－２のａ））。培養後のscaffoldをPBSで2回洗浄し、細胞をEppendorf Tubes（登録商標）に回収した。該容器内にLipid Extraction Solution (BioVision) を400μlずつ入れ、95℃で30分間加熱しトリグリセリドを抽出した。得られた溶液中のトリグリセリドをAdipogenesis Colorimetric/Fluorometric Assay Kit (BioVision) を用いてマニュアルに基づき測定した。
　結果を図２Ｄのグラフに示す。該グラフでは、灌流培養前の細胞中のトリグリセリド量（ＯＡ－）を１として、灌流培養後のトリグリセリド量を表示する。脂肪滴誘導に関して、細胞内のTG量は両培地で差は認めなられなかった。
　さらに脂肪滴退縮を比較する試験を以下の手法で行った。TLR4細胞を上記の手法でscaffold上でオレイン酸 (OA) 200μMを含むD-MEM下で24時間前培養を行った。その後、PBM-wtまたはPBM-obを0.5mL/時間で灌流しながら24時間培養した（図２Ｃ－２のｂ））。培養後の細胞について上記と同様の手法により、トリグリセリド量を測定した。その結果を図２Ｅに示す。脂肪滴退縮に関して、PBM-obではPBM-wtと比較し有意に高値 (P=0.04)であった (図２Ｅ) 。
　3D灌流培養により回収した培地の上清中の遊離脂肪酸をLabAssayTM NEFA (和光純薬工業) を用いてマニュアルに基づき測定した。PBM-obで培養した上清の遊離脂肪酸は4.5±1.4μMであり、PBM-wtでの結果6.1±2.3μMと比較して有意差は無い(P=0.18)ものの低い結果となった (図２Ｆ)。これらの結果からは、PBM-obで培養したほうが上清中への脂質の放出が抑制され細胞内の脂質退縮効果が抑制されていることが示唆される。
　これらの効果を可視化するために、3D灌流条件下、同様の条件で培養したTLR4細胞の脂肪滴をOil red O（SIGMA）もしくはLipiDye（登録商標、フナコシ）で蛍光染色し蛍光顕微鏡を用いて観察した（図２Ｇ）。PBM-obで培養したTLR4細胞の方がPBM-wtに比べてより脂肪滴の残存を認め、前述の結果と矛盾しない所見であった。更にLipiDyeにより染色した細胞についてフローサイトメトリーを用いて脂肪滴を検出し平均蛍光強度 (MFI) を検討した（図２Ｈ)。PBM-wtを基準としたPBM-obでのMFIの比率は1.3±0.08と有意に高くなり (P=0.0007) 、PBM-obで培養することにより脂肪滴退縮が抑制されることが確認された（図２Ｉ）。
　なお、脂肪滴蛍光染色および蛍光顕微鏡観察以下の手順により行った。前述のようにTLR4細胞を3D灌流条件下で培養したscaffoldを4％のホルムアルデヒドで固定し、PBSで2回洗浄した。これに1μMのLipiDye (フナコシ)を加え4℃で30分以上脂肪滴染色を行った。その後PBSで3回洗浄し、ProLong（登録商標）Gold (Thermo Fisher Scientific) で褪色防止処置を行った後、BZ-8000 (KEYENCE) を用いて観察を行った。
　また、フローサイトメトリーは以下の手法により行った。前述のようにTLR4細胞を2D条件下で培養し、細胞回収2時間前よりLipiDyeを1μMの濃度となるように培地に添加し脂肪滴蛍光染色を行った。染色後、PBSで2回洗浄後にトリプシンEDTAを用いて細胞を回収し、遠心分離により細胞塊を作成した。これに500-1000μlのPBSを加え細胞懸濁液とし、BD FACSCantoTM II (BD Biosciences) を用いてフローサイトメトリーを行い脂肪滴の定量を行った。データ解析はFACSDivaTM (BD Biosciences) を用いて行った。
　［実施例３］マウス初代肝細胞を用いた脂肪滴退縮効果確認試験
　培養する細胞としてTLR4細胞の代わりにマウス初代肝細胞（ロンザジャパン株式会社）を用いた以外は実施例２と同じ手法により、オレイン酸を添加しない培地を用いて脂肪滴退縮効果確認試験を行った。結果を図２Ｊに示す。
　［実施例４］アミノ酸添加による脂肪滴退縮促進の確認
　ob/obマウス門脈血で有意に低下している７種類のアミノ酸（Table 1）、すなわちメチオニン、チロシン、グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンを添加しそれぞれ500μMとした培地 (PBM-ob+AA) を用いて、上記手法の３次元灌流培養によりTLR4細胞を24時間培養し、上述の手法によるフローサイトメトリーで脂肪滴の検討を行った (図３Ａ) 。するとPBM-ob+AAで得られた平均蛍光強度 (MFI)はPBM-obに比べ有意に低くなった (図３Ｂ)。このことより、不足するアミノ酸を加えることにより脂肪滴退縮効果が改善することが示された。ヒト肝がん細胞株HepG2でも同様な結果が得られた（図３Ｃ）。
　この効果が7種類のアミノ酸のうちどのアミノ酸に由来しているのか調べるため、PBM-obに7種類のアミノ酸をそれぞれ1種類ずつ500μM添加し、同様にフローサイトメトリーを行い検討した（図３Ｄ）。７種類のうちPBM-wtを基準としたMFIの比率がPBM-obと比べて有意に減少しているのはメチオニン（0.94±0.045、P=0.003）およびチロシン（1.1±0.04、P=0.04）であった。そこでメチオニンおよびチロシンをともにPBM-obに加えて500μMとした培地で同様に検討してみたところ（図３Ｄ）、7種類のアミノ酸全てを加えた培地よりも強い脂肪滴退縮効果の改善を示し、またメチオニンとチロシンを両方加えた場合は僅かではあるが相加作用を認めた（図３Ｅ）。これまでの検討により、我々はTLR4細胞の脂肪滴退縮効果の改善にはメチオニンおよびチロシンが強く関わっていると示すことが出来た。次に我々はこれらの効果に濃度依存性があるかどうか、メチオニン・チロシンを1mMとして同様に検討した (図３Ｆ)。すると500μMと比べて1mMの方が脂肪滴退縮改善効果はわずかではあるが強いようであり、濃度依存的に脂肪滴退縮改善効果を示している可能性が示唆された。
　［実施例５］L-Met,およびL-Tyr高摂取マウスにおける肝脂肪低減効果確認試験
　7週齢の雄C57BL/6J +/+(WT)マウス及びレプチン遺伝子欠損マウスC57BL/6J ob/ob (ob/ob)マウス（日本エスエルシー株式会社）を（１）WT (normal diet＋normal water)、（２）ob/ob (normal diet＋normal water)、（３）ob/ob (normal diet＋high L-Met (2mM), L-Tyr (2.5mM) water)の３群で２０週齢まで飼育したのち殺処分し、心臓から採血を行い血糖値、ALT、トリグリセリドを測定した。また、肝臓・右葉をそれぞれHE染色で脂肪肝を評価した。（２）および（３）の間で体重変化、肝重量および飲水量に差を認めなかった（図４Ａ、図４Ｂ、および図４Ｃ）。
　図４Ｄに示すように、（２）に比して（３）では血中トリグリセリド量が増加した。このことは、肝臓に蓄積していた脂肪が血中に放出されたことを示唆している。
　図４Ｅは、この時の肝臓の組織像を示す写真である。（２）に比して（３）では明らかに脂肪滴の量が減少していた。この結果は、図４Ｄで示す。L-Met,およびL-Tyr（ＡＡ）の高摂取マウスにおいて肝脂肪が低減し、（３）での血中トリグリセリド量の増加が、肝臓に蓄積していた脂肪が血中に放出されたものであることを示している。
　図４Ｅは、この時の血中ALT量の測定結果である。血中ALTは脂肪肝で上昇することが知られており、（２）に比して（３）で血中ALTの低下が認められ、脂肪肝の改善が示唆される。これまでの結果から（３）では肝細胞内の脂肪蓄積がAAの摂取によりトリグリセリド（中性脂肪）として肝細胞外に放出され、脂肪肝が改善することで肝機能が改善していることを示唆している。
　［実施例６］TLR4細胞を用いた脂肪酸放出量確認試験
　コラーゲンコート９６穴プレート（CORNING）上で、100μM-200μMのオレイン酸を含むD-MEM培地下でTLR4細胞を約9時間培養し脂肪変性させた。脂肪変性したTLR4細胞を、オレイン酸（100μM）とC16 palmitate FL BODIPY（Thermo Fisher、4μM）を添加したD-MEM培地下で9時間培養した。その後細胞内の脂肪滴に蛍光が観察され標識の取り込みが確認された。その後Ｌ－メチオニン（Met）またはＬ－チロシン（Tyr）に濃度勾配（０～５００ｎｍｏｌ／ｍＬ）をつけた以外はＰＢＭ－ｗｔと同じ組成の培地中で１２時間培養し培養上清中と細胞内の蛍光をFluoroskan AscentTM（Thermo Fischer）で測定した。結果を図５Ａおよび図５Ｂに示す。メチオニンおよびチロシン濃度依存性に細胞内に蓄積した脂肪が減少し細胞外に放出される脂肪が増加したことが確認された。これはメチオニンおよびチロシンが細胞内の脂質の放出を促進する効果を有することを示す。メチオニン添加の場合、細胞外への放出は６２μＭ以上、チロシン添加の場合は１２５μＭ以上の添加で有意となった。
　［実施例７］メチオニンおよびチロシン摂取量の肝内脂質量に対する影響の確認試験
　7週齢の雄C57BL/6J野生型マウス（日本エスエルシー株式会社）をランダムに（ａ）高脂肪食（ＨＦ）群（Fat: 60 kcal％、Met: 0.65 wt%、Tyr: 1.2 wt%）、（ｂ）高脂肪Met欠損Tyr欠損食（ＨＦ－ＭＴＤ）群（Fat: 60 kcal％、Met: 非含有、Tyr: 非含有）、（ｃ）高脂肪Met制限Tyr欠損食（ＨＦ－ＭＲＴＤ）群（Fat: 60 kcal％、Met: 0.20 wt％、Tyr: 非含有）、（ｄ）高脂肪Met制限食（ＨＦ－ＭＲ）群（Fat: 60 kcal％、Met: 0.20 wt％、Tyr: 1.2 wt%）、および（ｅ）高脂肪Tyr欠損食（ＨＦ－ＴＤ）群（Fat: 60 kcal％、Met: 0.65 wt%、Tyr: 非含有）に割り付け、飼育した。さらに、雄C57BL/6J野生型マウス（日本エスエルシー株式会社）およびレプチン遺伝子欠損マウスC57BL/6J ob/ob (ob/ob)マウス（日本エスエルシー株式会社）にＭＲストック（日本農産工業株式会社；Fat: 3.9 ％、Met: 0.26 wt％、Tyr: 0.55 wt%））与えて飼育した群（それぞれChow wt およびChow ob/ob）をコントロールとした。高脂肪食として、脂肪分６０％カロリー比高脂肪飼料（ＨＦＤ－６０、オリエンタル酵母工業株式会社）を使用し、高脂肪Met欠損Tyr欠損食として、メチオニンとチロシンを含まない以外は高脂肪食と同じ成分を含む飼料を使用した。またその他の群にはメチオニンとチロシンの量が上記の量である以外は高脂肪食と同じ成分を含む飼料を調製して使用した。（ａ）および（ｂ）は11週齢、（ｃ）～（ｅ）は16週齢まで飼育した後に殺処分した。心臓から採血を行いALT、トリグリセリドを測定（FUJI ドライケム7000V）した。HE染色、Oil red O染色で肝組織を評価した。また、肝組織の細胞溶解液をRIPA buffer（富士フイルム和光純薬株式会社）を用いて調製し、肝内脂質（トリグリセリド、コレステロール、遊離脂肪酸）をLabAssayTM（WAKO）を使用して添付のマニュアルにしたがって測定した。各実験群動物の体重（平均値）の推移の結果を図６Ａに示し、肝内脂質の測定結果を図６Ｂに示す。図６ＣにHF-MRTD群、HF群の飼育終了後の肝臓組織像（HE染色、Oil Red O染色）を示す。HF群の肝臓組織像と比較して、HF-MRTD群ではNASHに極めて類似した病理像が得られた。すなわち、HF-MRTD群ではNASHに特徴的な著明な脂肪滴と肝細胞の風船様腫大（balloning）が強く認められた。HF群ではこのような所見はなく、HF-MR, HF-TDはわずかに同様の所見が認められたが、HF-MRTDにおける所見より弱いものであった。HF-MTDはHF-MRTD同様に強い所見が認められたが、体重が減少する点において実際のNASH患者と大きく異なった（図６Ａ）。
　［実施例８］非アルコール性脂肪肝疾患（NAFLD）患者の血漿遊離アミノ酸分析
　2005年～2018年の間に東北大学消化器内科に入院した非アルコール性脂肪肝疾患（NAFLD）患者70人の肝生検組織と血漿遊離アミノ酸分析データを解析した。患者のの病理学的評価をNAFLD activity score (NAS)に基づいて行い、脂肪変性（Steatosis (S)）について患者をS0からS3の４段階で評価した。疾患の重篤度に基づいて患者をS0-S1（軽度）とS2-S3（重度）の２群に分類した。患者のプロファイル以下の表に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　血漿遊離アミノ酸濃度を軽度脂肪肝群（S0-S1）と高度脂肪肝群(S2-S3)で比較した。結果を図７Ａに示す。
　上記患者のうち、CTのデータが参照可能な患者（ｎ＝５７）について、CTから算出した脂肪肝の程度（肝脾CT値比、L/S ratio）と血漿Met, Tyr濃度との相関を解析した。L/S ratioは下式により計算した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000004
　結果を図７Ｂに示す。L/S ratioは値が高いほど、肝臓の脂肪が少ない（正常）であることを表現する指標である。末梢血中Met、Tyrが高いほどL/S ratioが高いという有意な相関が得られ、それ以外のアミノ酸（例：Gln）では有意な相関は得られなかった。
　［実施例９］高Met高Tyr食による肝脂肪低減効果確認試験
　7週齢の雄レプチン遺伝子欠損マウスC57BL/6J ob/ob (ob/ob)マウス（日本エスエルシー株式会社）をランダムに（ａ）通常食群、（ｂ）高Met高Tyr食（メチオニン：１．０ｗｔ％、チロシン：２．０ｗｔ％）群、（ｃ）高BCAA食（バリン：２．１ｗｔ％、ロイシン：４．３ｗｔ％、イソロイシン：２．１ｗｔ％）群の３群に割り付けた。通常食としてＭＲストック（日本農産工業株式会社；メチオニン：０．２６ｗｔ％、チロシン：０．５５ｗｔ％、バリン：０．７９ｗｔ％、ロイシン：１．３６ｗｔ％、イソロイシン：０．６７ｗｔ％）を使用し、高Met高Tyr食および高BCAA食は、通常食に上記の各成分を所定の含有量となるように追加して調製した。各群のマウスは20週齢まで飼育したのち殺処分し、心臓から採血を行いALT、トリグリセリドを測定（FUJI ドライケム7000V）した。結果を図８に示す。ａ群およびｃ群と比較してｂ群においてALT値の顕著な低下が確認され、高Met高Tyr食による効果と解される。血中TGはｂ群がａ群およびｃ群に比べ高く、肝臓組織に蓄積した脂肪の血中への放出効果によるものと解することができ、高Met高Tyr食による肝脂肪低減効果が示唆される。

Claims (15)

  1. 　メチオニンまたはチロシンを有効成分として含む、肝脂肪低減剤。
  2. 　天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンまたはチロシンのモル分率が１％以上である、請求項１に記載の肝脂肪低減剤。
  3. 　メチオニンおよびチロシンを有効成分として含有する、請求項１または２に記載の肝脂肪低減剤。
  4. 　天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンのモル分率がそれぞれ１％～４２％である、請求項１～３のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  5. 　天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニンおよびチロシンの合計モル分率が５％～５７％である、請求項１～４のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  6. 　グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンから選択される１以上のアミノ酸をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  7. 　グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンから選択される１以上のアミノ酸のモル分率がそれぞれ１％以上である、請求項１～６のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  8. 　グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンをさらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  9. 　天然アミノ酸の総含有量に対するメチオニン、チロシン、グリシン、セリン、スレオニン、リシン、およびアルギニンの合計モル分率が４９％～１００％である、請求項１～８のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  10. 　非アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、または非アルコール性脂肪性肝炎の治療に用いられる、請求項１～９のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  11. 　非アルコール性脂肪性肝炎の治療に用いられる、請求項１～１０のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  12. 　肝機能の改善のために用いられる、請求項１～１１のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤。
  13. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための経口摂取用組成物。
  14. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための医薬組成物。
  15. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載の肝脂肪低減剤を含有する、肝脂肪低減に用いるための食品組成物。
PCT/JP2019/005655 2018-02-15 2019-02-15 肝脂肪低減剤 WO2019160103A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018025413A JP2021066662A (ja) 2018-02-15 2018-02-15 肝脂肪低減剤
JP2018-025413 2018-02-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019160103A1 true WO2019160103A1 (ja) 2019-08-22

Family

ID=67618500

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2019/005655 WO2019160103A1 (ja) 2018-02-15 2019-02-15 肝脂肪低減剤

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP2021066662A (ja)
WO (1) WO2019160103A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021112217A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10 味の素株式会社 肝臓の中性脂肪量の増加抑制用組成物

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5741506A (en) * 1994-05-06 1998-04-21 Rhone-Poulenc Nutrition Animale Use of active ingredients protected against degradation in the rumen as hepatoprotectors
WO2002074302A1 (fr) * 2001-03-15 2002-09-26 Riken Compositions d'acides amines utilisees pour ameliorer l'insuffisance hepatique
JP2003155242A (ja) * 2001-11-19 2003-05-27 Nippon Beet Sugar Mfg Co Ltd 肝機能改善剤
WO2007049818A1 (ja) * 2005-10-27 2007-05-03 Ajinomoto Co., Inc. 抗脂肪肝、抗肥満及び抗高脂血症用組成物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5741506A (en) * 1994-05-06 1998-04-21 Rhone-Poulenc Nutrition Animale Use of active ingredients protected against degradation in the rumen as hepatoprotectors
WO2002074302A1 (fr) * 2001-03-15 2002-09-26 Riken Compositions d'acides amines utilisees pour ameliorer l'insuffisance hepatique
JP2003155242A (ja) * 2001-11-19 2003-05-27 Nippon Beet Sugar Mfg Co Ltd 肝機能改善剤
WO2007049818A1 (ja) * 2005-10-27 2007-05-03 Ajinomoto Co., Inc. 抗脂肪肝、抗肥満及び抗高脂血症用組成物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PARLESAK, A. ET AL.: "Free methionine supplementation limits alcohol-induced liver damage in rats", ALCOHOL. CLIN. EXP. RES., vol. 22, no. 2, April 1998 (1998-04-01), pages 352 - 358, XP055634603 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021112217A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10 味の素株式会社 肝臓の中性脂肪量の増加抑制用組成物

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021066662A (ja) 2021-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20080038321A1 (en) Prophylactic/therapeutic compositions for liver diseases
CN108697704A (zh) 使用fxr激动剂的方法
Jung et al. AMPK activator-mediated inhibition of endoplasmic reticulum stress ameliorates carrageenan-induced insulin resistance through the suppression of selenoprotein P in HepG2 hepatocytes
US20090239944A1 (en) Novel Use of Organic Compounds
JP6752285B2 (ja) 脂肪蓄積抑制剤、脂肪前駆細胞の分化抑制剤、内臓脂肪低減剤、及び内臓脂肪低減用飲食品
JP2023145714A (ja) 脂肪肝の予防または処置用医薬組成物
Tomaszewska et al. Chronic dietary supplementation with kynurenic acid, a neuroactive metabolite of tryptophan, decreased body weight without negative influence on densitometry and mandibular bone biomechanical endurance in young rats
Leucht et al. Sphingomyelin and phosphatidylcholine contrarily affect the induction of apoptosis in intestinal epithelial cells
Turski et al. On the toxicity of kynurenic acid in vivo and in vitro
WO2019160103A1 (ja) 肝脂肪低減剤
Barzegar et al. Effect of L-carnitine supplementation on serum adipokines (leptin and visfatin) levels in obese type II diabetes mellitus women with hypocaloric diet
US10729157B2 (en) Methods for regulating weight and size of animals
US20190247343A1 (en) Use of fenofibric acid in the treatment of hepatic diseases
JP6650053B2 (ja) ブチリデンフタリドの用途
JP2008543903A (ja) 非自己免疫性２型糖尿病および／またはｘ症候群の処置のための化合物
US20120122984A1 (en) Methods of Treating Lipomas and Liposarcomas
US20220265603A1 (en) Hepatic fibrosis-inhibiting agent and brown fat cell-activating agent containing taxifolin
JP2022538265A (ja) 骨格筋における状態又は障害を予防又は治療するための、トリゴネリン及び高タンパク質を使用する組成物及び方法
Ikeda et al. Tissue Distribution of Menaquinone-7 and the Effect of α-Tocopherol Intake on Menaquinone-7 Concentration in Rats
JP6426991B2 (ja) 体脂肪減少促進剤
US20230404953A1 (en) Compound for the reduction of white adipose tissue and the treatment of overweight and obesity
JP2011001333A (ja) アシル−ＣｏＡ合成阻害剤
WO2012030165A2 (ko) P P A R δ 활성물질의 태자재프로그래밍용도
Turska et al. A Review of the Health Benefits of Food Enriched with Kynurenic Acid. Nutrients 2022, 14, 4182
KR100898832B1 (ko) 항비만용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19753823

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19753823

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP