WO2019154261A1 - 与kmd5通路相关的吡啶衍生物 - Google Patents

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WO2019154261A1
WO2019154261A1 PCT/CN2019/074144 CN2019074144W WO2019154261A1 WO 2019154261 A1 WO2019154261 A1 WO 2019154261A1 CN 2019074144 W CN2019074144 W CN 2019074144W WO 2019154261 A1 WO2019154261 A1 WO 2019154261A1
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PCT/CN2019/074144
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French (fr)
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杨亚讯
江志赶
贺海鹰
龚珍
黎健
陈曙辉
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Medshine Discovery Inc
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Definitions

  • the present invention relates to a class of pyridine derivatives, and in particular to compounds of formula (III) and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • KMD5 The regulation of epigenetic binding to DNA damage repair is an effective way to treat some malignant tumors, and there is a good prospect for good synergy.
  • Members of the KMD5 family have abnormalities in breast cancer and have great market potential. About 15% of breast cancer patients have KDM5A gene amplification; KMD5B is abnormally expressed in luminal subtype breast cancer (about 60% of breast cancer). KMD5A and KMD5B are abnormally highly expressed in non-small cell lung cancer (accounting for more than 80% of the total lung cancer).
  • the global R&D investment in NSCLC is large, and the market space is large.
  • KDM5C plays a role in neuronal development, while KDM5D encoded by the Y chromosome is widely expressed and involved in spermatogenesis.
  • WO2016168349 reports that the compound is GS-5801.
  • the present invention provides a compound of the formula (III) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • Y is selected from O and S;
  • R 1 is selected from H and C 1-6 alkyl, wherein said C 1-6 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R a ;
  • R a is independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 2 is selected from H and C 1-6 alkyl, wherein said C 1-6 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R b ;
  • R b is independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring, a 5- to 6-membered heteroaryl ring or a C 3-6 cycloalkyl group, wherein the benzene ring and the 5- to 6-membered heteroaryl ring are optionally 1, 2 Or 3 R 3 substitutions;
  • R 3 is independently selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 4 is selected from the group consisting of OH and C 1-3 alkoxy
  • R 5 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl
  • R 6 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl
  • R 1 and R 5 are joined together to form a C 3-6 cycloalkyl group
  • R 2 and R 6 are joined together to form a C 3-6 cycloalkyl group
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring or a 5- to 6-membered heteroaryl ring, R 5 and R 6 are empty;
  • R 7 is selected from H and C 1-5 alkyl, wherein said C 1-5 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R c ;
  • R 8 is selected from H and C 1-5 alkyl, wherein said C 1-5 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R c ;
  • R 7 , R 8 and the N atoms to which they are attached are joined together to form Said Optionally substituted by 1, 2 or 3 R c ;
  • R c is independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • the 5- to 6-membered heteroaryl ring contains 1, 2 or 3 heteroatoms and heteroatoms independently selected from the group consisting of -O-, -S-, -NH- and N.
  • the present invention provides a compound of the formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • Y is selected from O and S;
  • R 1 is selected from H and C 1-6 alkyl, wherein said C 1-6 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R a ;
  • R a is independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 2 is selected from H and C 1-6 alkyl, wherein said C 1-6 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R b ;
  • R b is independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring, a 5- to 6-membered heteroaryl ring or a C 3-6 cycloalkyl group, wherein the benzene ring and the 5- to 6-membered heteroaryl ring are optionally 1. 2 or 3 R 3 substitutions;
  • R 3 is independently selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 4 is selected from the group consisting of OH and C 1-3 alkoxy
  • R 5 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl
  • R 6 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl
  • R 1 and R 5 are joined together to form a C 3-6 cycloalkyl group
  • R 2 and R 6 are joined together to form a C 3-6 cycloalkyl group
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring or a 5- to 6-membered heteroaryl ring, R 5 and R 6 are empty;
  • the 5- to 6-membered heteroaryl ring contains 1, 2 or 3 heteroatoms and heteroatoms independently selected from the group consisting of -O-, -S-, -NH- and N.
  • R 1 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl, wherein the C 1-3 alkyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 R a , and other variables are as defined in the present invention .
  • R 1 above is selected from the group consisting of H, Me, and Et, and other variables are as defined herein.
  • R 2 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl, wherein the C 1-3 alkyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 R b , and other variables are as defined in the present invention .
  • R 2 is selected from the group consisting of H, Me, and Et, and other variables are as defined herein.
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring, cyclopropyl or pyridine ring, wherein the benzene ring and the pyridine ring are optionally substituted by 1, 2 or 3 R 3 ,
  • Other variables are as defined by the present invention.
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring, a cyclopropyl group and a pyridine ring, and the benzene ring, cyclopropyl group and pyridine are optionally substituted by R 3 , and other variables are The invention is defined.
  • the structural unit Selected from Other variables are as defined by the present invention.
  • R 4 is selected from the group consisting of OH, Other variables are as defined by the present invention.
  • R 1 and R 5 are joined together to form a cyclopropyl group, and other variables are as defined herein.
  • R 2 and R 6 are joined together to form a cyclopropyl group, and other variables are as defined herein.
  • R 7 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl, wherein the C 1-3 alkyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 R c , and other variables are as defined in the present invention .
  • R 7 above is selected from the group consisting of H, Me, CH 2 F, CHF 2 , CF 3 , CH 2 CF 3 , CHFCH 2 F, and Et, and other variables are as defined herein.
  • R 8 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl, wherein the C 1-3 alkyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 R c , and other variables are as defined in the present invention .
  • R 7 above is selected from the group consisting of H, Me, CH 2 F, CHF 2 , CF 3 , CH 2 CF 3 , CHFCH 2 F, and Et, and other variables are as defined herein.
  • the structural unit Selected from Other variables are as defined by the present invention.
  • the present invention provides a compound of the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • Y is selected from O and S;
  • R 1 is selected from H and C 1-6 alkyl, wherein said C 1-6 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R a ;
  • R a is independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 2 is selected from H and C 1-6 alkyl, wherein said C 1-6 alkyl is optionally substituted by 1, 2 or 3 R b ;
  • R b is independently selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring or a 5- to 6-membered heteroaryl ring, wherein the benzene ring and the 5- to 6-membered heteroaryl ring are optionally substituted by 1, 2 or 3 R 3 ;
  • R 3 is independently selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, OH, NH 2 and CF 3 ;
  • R 4 is selected from C 1-3 alkoxy
  • the 5- to 6-membered heteroaryl ring contains 1, 2 or 3 heteroatoms and heteroatoms independently selected from the group consisting of -O-, -S-, -NH- and N.
  • R 1 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl, wherein the C 1-3 alkyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 R a , and other variables are as defined in the present invention .
  • R 1 above is selected from the group consisting of H, Me, and Et, and other variables are as defined herein.
  • R 2 is selected from the group consisting of H and C 1-3 alkyl, wherein the C 1-3 alkyl group is optionally substituted by 1, 2 or 3 R b , and other variables are as defined in the present invention .
  • R 2 is selected from the group consisting of H, Me, and Et, and other variables are as defined herein.
  • R 1 and R 2 are bonded together to form a benzene ring or a pyridine ring, wherein the benzene ring and the pyridine ring are optionally substituted by 1, 2 or 3 R 3 , and other variables such as The invention is defined.
  • R 1 and R 2 are joined together to form a benzene or pyridine ring, and other variables are as defined herein.
  • R 4 is selected from Other variables are as defined by the present invention.
  • the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof selected from the group consisting of
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and Y are as defined in the present invention.
  • the present invention provides a compound of the formula: or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • the present invention also provides the use of the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of a medicament for treating a disease associated with the KDM5 pathway.
  • the above-described diseases associated with the KDM5 pathway are tumors and hepatitis B.
  • the tumor is breast cancer, gastric cancer, colorectal cancer, lung cancer, and liver cancer.
  • the compound of the present invention has a 4'-carboxylic acid pyridine heterocyclic ring as a mother nucleus, and a different substituent is attached to the heterocyclic ring, so that the compound of the present invention has a significant inhibitory effect on the demethylation of histone (KDM5), and the chromosome is maintained. Methylation of the histone residue H3K4me2/3, thereby silencing or eliminating replication of cccDNA.
  • the compound of the present invention has a remarkable inhibitory effect on KDM5A.
  • the compounds of the invention can significantly increase the single or partial index of pharmacokinetics in mice.
  • Compound 1 inhibited the five CYP isoenzymes to a lesser extent, and the compound was not cardiotoxic.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt of a compound of the invention prepared from a compound having a particular substituent found in the present invention and a relatively non-toxic acid or base.
  • a base addition salt can be obtained by contacting a neutral amount of such a compound with a sufficient amount of a base in a neat solution or a suitable inert solvent.
  • Pharmaceutically acceptable base addition salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amine or magnesium salts or similar salts.
  • an acid addition salt can be obtained by contacting a neutral form of such a compound with a sufficient amount of an acid in a neat solution or a suitable inert solvent.
  • pharmaceutically acceptable acid addition salts include inorganic acid salts including, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, hydrogencarbonate, phosphoric acid, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, sulfuric acid, Hydrogen sulfate, hydroiodic acid, phosphorous acid, etc.; and an organic acid salt, such as acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, maleic acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, suberic acid, Similar acids such as fumaric acid, lactic acid, mandelic acid, phthalic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, citric acid, tartaric acid, and me
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present invention can be synthesized from the parent compound containing an acid group or a base by conventional chemical methods.
  • such salts are prepared by reacting these compounds in water or an organic solvent or a mixture of the two via a free acid or base form with a stoichiometric amount of a suitable base or acid.
  • the compounds of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes on one or more of the atoms that make up the compound.
  • radiolabeled compounds can be used, such as tritium (3 H), iodine -125 (125 I) or C-14 (14 C).
  • hydrogen can be replaced by heavy hydrogen to form a deuterated drug.
  • the bond composed of barium and carbon is stronger than the bond composed of common hydrogen and carbon.
  • deuterated drugs have reduced side effects and increased drug stability. Enhance the efficacy and prolong the biological half-life of the drug.
  • Alterations of all isotopic compositions of the compounds of the invention, whether radioactive or not, are included within the scope of the invention.
  • "Optional" or “optionally” means that the subsequently described event or condition may, but is not necessarily, to occur, and that the description includes instances in which the event or condition occurs and instances in which the event or condition does not occur.
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on a particular atom are replaced by a substituent, and may include variants of heavy hydrogen and hydrogen, as long as the valence of the particular atom is normal and the substituted compound is stable. of.
  • Oxygen substitution does not occur on the aromatic group.
  • optionally substituted means that it may or may not be substituted, and unless otherwise specified, the kind and number of substituents may be arbitrary on the basis of chemically achievable.
  • any variable eg, R
  • its definition in each case is independent.
  • the group may optionally be substituted with at most two R, and each case has an independent option.
  • combinations of substituents and/or variants thereof are permissible only if such combinations result in stable compounds.
  • linking group When the number of one linking group is 0, such as -(CRR) 0 -, it indicates that the linking group is a single bond.
  • one of the variables When one of the variables is selected from a single bond, it means that the two groups to which it is attached are directly linked. For example, when L represents a single bond in A-L-Z, the structure is actually A-Z.
  • substituent When a substituent is vacant, it means that the substituent is absent.
  • X when X is vacant in A-X, the structure is actually A.
  • substituents are not indicated by which atom is attached to the substituted group, such a substituent may be bonded through any atom thereof, for example, a pyridyl group as a substituent may be passed through any one of the pyridine rings. A carbon atom is attached to the substituted group.
  • the medium linking group L is -MW-, and at this time, -MW- can be connected in the same direction as the reading order from left to right to form ring A and ring B. It is also possible to connect the ring A and the ring B in a direction opposite to the reading order from left to right. Combinations of the linking groups, substituents and/or variants thereof are permissible only if such combinations result in stable compounds.
  • ring means substituted or unsubstituted cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkenyl, heterocycloalkenyl, cycloalkynyl, heterocycloalkynyl, aryl or heteroaryl.
  • the ring includes a single ring, and also includes a bicyclic or polycyclic ring system such as a spiro ring, a ring and a bridge ring.
  • the number of atoms on the ring is usually defined as the number of elements of the ring. For example, "5 to 7-membered ring" means 5 to 7 atoms arranged in a circle. Unless otherwise specified, the ring optionally contains from 1 to 3 heteroatoms.
  • the "5-7 membered ring” includes, for example, phenyl, pyridyl and piperidinyl; on the other hand, the term “5-7 membered heterocycloalkyl” includes pyridyl and piperidinyl, but does not include phenyl.
  • the term “ring” also includes ring systems containing at least one ring, each of which "ring” independently conforms to the above definition.
  • alkyl is used to mean a straight or branched saturated hydrocarbon group, and in some embodiments, the alkyl group is a C 1-12 alkyl group; in other embodiments The alkyl group is a C 1-6 alkyl group; in other embodiments, the alkyl group is a C 1-3 alkyl group. It may be monosubstituted (such as -CH 2 F) or polysubstituted (such as -CF 3 ), and may be monovalent (such as methyl), divalent (such as methylene) or polyvalent (such as methine). .
  • alkyl groups include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n-propyl and isopropyl), butyl (including n-butyl, isobutyl, s-butyl) And t-butyl), pentyl (including n-pentyl, isopentyl and neopentyl), hexyl and the like.
  • heteroalkyl by itself or in conjunction with another term, denotes a stable straight or branched alkyl radical or a combination thereof consisting of a number of carbon atoms and at least one heteroatom or heteroatom. Things.
  • the heteroatoms are selected from the group consisting of B, O, N, and S, wherein the nitrogen and sulfur atoms are optionally oxidized, and the nitrogen heteroatoms are optionally quaternized.
  • the heteroalkyl group is a C1-6 heteroalkyl group; in other embodiments, the heteroalkyl group is a C1-3 heteroalkyl group.
  • a heteroatom or heteroatom can be located at any internal position of a heteroalkyl group, including the position at which the alkyl group is attached to the rest of the molecule, but the terms "alkoxy”, “alkylamino” and “alkylthio” (or thioalkyl) Oxyl) is a conventional expression and refers to those alkyl groups which are attached to the remainder of the molecule through an oxygen atom, an amino group or a sulfur atom, respectively.
  • cycloalkyl includes any stable cyclic alkyl group including monocyclic, bicyclic or tricyclic systems wherein the bicyclic and tricyclic systems include spiro, co and ring.
  • the cycloalkyl group is a C 3-8 cycloalkyl group; in other embodiments, the cycloalkyl group is a C 3-6 cycloalkyl group; in other embodiments, the The cycloalkyl group is a C 5-6 cycloalkyl group. It may be monosubstituted or polysubstituted, and may be monovalent, divalent or multivalent.
  • cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, norbornyl, [2.2.2]bicyclooctane, [4.4.0] Dicyclodecane and the like.
  • cycloalkenyl includes any stable cyclic alkenyl group containing one or more unsaturated carbon-carbon double bonds at any position of the group, including monocyclic, bicyclic or tricyclic The system wherein the bicyclic and tricyclic systems include spiro, parallel and bridged rings, but any ring of this system is non-aromatic.
  • the cycloalkenyl group is a C 3-8 cycloalkenyl group; in other embodiments, the cycloalkenyl group is a C 3-6 cycloalkenyl group; in other embodiments, the The cycloalkenyl group is a C 5-6 cycloalkenyl group.
  • cycloalkenyl groups include, but are not limited to, cyclopentenyl, cyclohexenyl, and the like.
  • cycloalkynyl includes any stable cyclic alkynyl group containing one or more carbon-carbon triple bonds at any position of the group, including monocyclic, bicyclic or tricyclic systems, wherein Bicyclic and tricyclic systems include spiro, parallel and bridging rings. It may be monosubstituted or polysubstituted, and may be monovalent, divalent or multivalent.
  • heterocycloalkyl by itself or in conjunction with other terms, denotes a cyclized “heteroalkyl”, respectively, which includes monocyclic, bicyclic, and tricyclic systems, wherein the bicyclic and tricyclic systems include spiro rings, And ring and bridge ring. Further, in the case of the "heterocycloalkyl group", a hetero atom may occupy a position where a heterocycloalkyl group is bonded to the rest of the molecule.
  • the heterocycloalkyl group is a 4-6 membered heterocycloalkyl group; in other embodiments, the heterocycloalkyl group is a 5-6 membered heterocycloalkyl group.
  • heterocycloalkyl groups include, but are not limited to, azetidinyl, oxetanyl, thioheterobutyl, pyrrolidinyl, pyrazolidinyl, imidazolidinyl, tetrahydrothiophenyl (including tetrahydrothiophene) -2-yl and tetrahydrothiophen-3-yl, etc.), tetrahydrofuranyl (including tetrahydrofuran-2-yl, etc.), tetrahydropyranyl, piperidinyl (including 1-piperidinyl, 2-piperidinyl and 3-piperidinyl, etc.), piperazinyl (including 1-piperazinyl and
  • alkoxy represents attached through an oxygen bridge
  • C 1-6 alkoxy groups include C 1, C 2, C 3 , C 4, C 5 , and C 6 alkoxy groups.
  • the alkoxy group is a C 1-3 alkoxy group.
  • alkoxy groups include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, n-pentyloxy, and S- Pentyloxy.
  • aromatic ring and “aryl” are used interchangeably and the term “aryl ring” or “aryl” means a polyunsaturated carbocyclic ring system which may be monocyclic, bicyclic or poly A ring system in which at least one ring is aromatic, and each ring in the bicyclic and polycyclic ring system is fused together. It may be mono- or poly-substituted, may be monovalent, divalent or multivalent, in some embodiments, the aryl is a C 6-12 aryl; in other embodiments, the aryl It is a C 6-10 aryl group.
  • aryl groups include, but are not limited to, phenyl, naphthyl (including 1-naphthyl and 2-naphthyl, and the like). Substituents for any of the above aryl ring systems are selected from the group of acceptable substituents described herein.
  • heteroaryl ring and “heteroaryl” are used interchangeably and the term “heteroaryl” means 1, 2, 3 or 4 independently selected from B, N, O and An aryl (or aromatic ring) of a hetero atom of S, which may be a monocyclic, bicyclic or tricyclic ring system in which the nitrogen atom may be substituted or unsubstituted (ie, N or NR, wherein R is H or has been herein Other substituents are defined, and are optionally quaternized, and the nitrogen and sulfur heteroatoms can be optionally oxidized (i.e., NO and S(O) p , p is 1 or 2).
  • a heteroaryl group can be attached to the remainder of the molecule through a heteroatom.
  • the heteroaryl is a 5-10 membered heteroaryl; in other embodiments, the heteroaryl is a 5-6 membered heteroaryl.
  • the heteroaryl group include, but are not limited to, pyrrolyl (including N-pyrrolyl, 2-pyrrolyl, and 3-pyrrolyl, etc.), pyrazolyl (including 2-pyrazolyl and 3-pyrazolyl, etc.) , imidazolyl (including N-imidazolyl, 2-imidazolyl, 4-imidazolyl and 5-imidazolyl, etc.), oxazolyl (including 2-oxazolyl, 4-oxazolyl and 5-oxazolyl, etc.) , triazolyl (1H-1,2,3-triazolyl, 2H-1,2,3-triazolyl, 1H-1,2,4-triazolyl and 4H-1,2,4- Triazolyl
  • C n-n+m or C n -C n+m includes any one of n to n+m carbons, for example, C 1-12 includes C 1 , C 2 , C 3 , C 4 , C 5 , C 6 , C 7 , C 8 , C 9 , C 10 , C 11 , and C 12 , also including any range of n to n+m, for example, C 1-12 includes C 1-3 , C 1-6 , C 1-9 , C 3-6 , C 3-9 , C 3-12 , C 6-9 , C 6-12 , and C 9-12 , etc.; similarly, n to n
  • the +m element indicates that the number of atoms on the ring is n to n+m, for example, the 3-12 element ring includes a 3-membered ring, a 4-membered ring, a 5-membered ring, a 6-membered ring, a 7-membered ring, an 8-membere
  • a 10-membered ring, a 11-membered ring, and a 12-membered ring and includes any one of n to n+m, for example, a 3-12-membered ring including a 3-6-membered ring, a 3-9-membered ring, and a 5-6-membered ring. Ring, 5-7 membered ring, 6-7 membered ring, 6-8 membered ring, and 6-10 membered ring.
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments set forth below, combinations thereof with other chemical synthetic methods, and those well known to those skilled in the art. Equivalent alternatives, preferred embodiments include, but are not limited to, embodiments of the invention.
  • the solvent used in the present invention is commercially available.
  • the present invention employs the following abbreviations: aq for water; HATU for O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate ; EDC stands for N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride; m-CPBA stands for 3-chloroperoxybenzoic acid; eq stands for equivalent, equivalent; CDI stands for Carbonyldiimidazole; DCM stands for dichloromethane; PE stands for petroleum ether; DIAD stands for diisopropyl azodicarboxylate; DMF stands for N,N-dimethylformamide; DMSO stands for dimethyl sulfoxide; EtOAc stands for acetic acid Esters; EtOH for ethanol; MeOH for methanol; CBz for benzyl
  • the crude product of the present invention is subjected to a preparative HPLC purification method which is a neutral system.
  • BB-1-1 (2 g, 11.97 mmol) and TsOH.H 2 O (4.55 g, 23.94 mmol) were dissolved in anhydrous toluene (30 mL) in a pre-dried 100 mL three-necked flask at 25 ° C and heated to Anhydrous ethanol (5.51 g, 119.68 mmol) was slowly added dropwise to the system at 110 ° C, and the mixture was stirred at this temperature for 12 h. The reaction solution was cooled to room temperature, 20 mL ethyl acetate was added, and a saturated sodium carbonate aqueous solution was added to adjust the pH to 7.
  • Step 2 BB-1 synthesis
  • Substrate BB-6-1 (30 g, 260.67 mmol) and solvent acetone (150 mL), water (150 mL) were added to a vial, and sodium carbonate (13.81 g, 130.34 mmol), benzyl chloroformate was added to the system at 0 °C. (44.47 g, 260.67 mmol), slowly warmed to 22 ° C and stirred for 2 h. A conical flask was taken, 80 mL of water was added, and the reaction mixture was poured, and the mixture was extracted three times with ethyl acetate (80 mL).
  • BB-2 (0.3 g, 1.05 mmol) and solvent toluene (5 mL) were added to the pre-dried single-mouth bottle, and 2,4-bis(p-methoxyphenyl)-1,3-disulfide was added to the system.
  • Diphosphetane-2,4 sulfide (297.63 mg, 735.86 ⁇ mol), stirred at 120 ° C for 12 h, 5 mL water was added to the system, ethyl acetate was extracted (3 ⁇ 50 mL), and the organic phase was combined, 5 mL The mixture was washed with EtOAc (EtOAc m. MS m/z: 302 [M + H] + .
  • reaction flask To the reaction flask was added 10-3 (31 g, 90.56 mmol), Pd / C (5 g, 90.56 mmol, 5% purity) and MeOH (400 mL), and the reaction solution was replaced with hydrogen three times, then at 25 ° C and H 2 (15 psi) After stirring for 16 hours, the reaction mixture was filtered through Celite, and washed with methanol (300 mL).
  • the raw material 13-5 (0.1 g, 260.10 ⁇ mol) and the solvent TFA (1 mL) were added to the pre-dried single-mouth bottle at 40 ° C for 1 h, the system was concentrated, and the pH of the system was adjusted to 7 with a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate. The mixture was extracted with ethyl acetate (20 mL ⁇ 1). MS m/z: 235 [M + H] + .
  • the treatment liquid of the 17-3 obtained in the previous reaction (3.91 g, 39.04 mmol) and the reagent (Boc) 2 O (5.11 g, 23.42 mmol, 5.38 mL) were stirred at 25 ° C for 4 h. The mixture was washed with aq.
  • the raw material 17-5 (0.5 g, 1.84 mmol) and anhydrous dichloromethane (5 mL) were added to a pre-dried single-mouth flask, and N,N-diisopropylethylamine (237.28 mg, 1.84 mmol) was added to the system.
  • raw material 20-2 (0.1 g, 403.61 ⁇ mol), BB-1 (68.87 mg, 384.39 ⁇ mol) and anhydrous dichloromethane (4 mL), followed by the addition of reagent N, N-diisopropyl Ethylethylamine (59.61 mg, 461.27 ⁇ mol, 80.34 ⁇ L), glacial acetic acid (1.15 mg, 19.22 ⁇ mol, 1.10 ⁇ L), adjust the pH of the system to 6, and stir at 25 ° C for 0.5 hours, followed by the addition of triacetoxyborohydride Sodium (162.94 mg, 768.78 ⁇ mol) was reacted at 25 ° C for 0.5 hours.
  • the raw material 22-3 (0.05 g, 117.79 ⁇ mol) and water (1 mL) were added to a pre-dried single-mouth bottle, followed by the reagent LiOH.H 2 O (28.21 mg, 1.18 mmol), and stirred at 25 ° C for 5 minutes.
  • the pH of the system was adjusted to 7 with 1M aqueous HCl.
  • Test Example 1 Evaluation: Inhibition of KDM5A by a compound:
  • the concentration of the four compounds was first prepared in DMSO, 4000 ⁇ M, 148.15 ⁇ M, 5.49 ⁇ M and 0.2 ⁇ M, respectively, and the four concentrations of the compound were transferred from 8 ⁇ L to 384 LDV plates. Then transfer to 384 analytical plate with Echo 550 to obtain 10 concentration points, 3 times dilution, and two duplicate wells.
  • H3K4Me3 biotin
  • biotin label histone third subunit tetra-lysine trimethylated peptide
  • an automatic dispenser negative control well, or no Add the enzyme to the well.
  • Centrifuge 1000 rpm for 1 min. Incubate for 60 min in a 25-degree incubator.
  • HTRF 340 nm excitation light, 665 nm and 612 nm emission light, and 665 nm/612 nm were read by TECAN Spark 10M microplate reader to calculate the original signal value of IC 50 .
  • % inhibition rate 100-100 x (average signal value of signal value - min) / (average signal value of max - average signal value of min).
  • the compounds of the present invention have a significant inhibitory effect on KDM5A.
  • Test Example 2 Compound pharmacokinetic evaluation
  • the compounds were tested by standard protocol for intravenous injection of 0.2 mg/ml in saline and orally administered with 2 mg/ml in saline.
  • the candidate compounds were formulated into a clear solution and administered to mice in a single intravenous injection. Oral administration.
  • the intravenous and oral vehicles are a certain proportion of physiological saline solution. Collect whole blood samples within 24 hours, centrifuge at 3000g for 15 minutes, separate the supernatant to obtain plasma samples, add 4 times volume of acetonitrile solution containing internal standard to precipitate protein, centrifuge to remove the supernatant, add equal volume of water and centrifuge to remove the supernatant.
  • the LC-MS/MS analysis method was used to quantitatively analyze the plasma concentration, and the pharmacokinetic parameters such as peak concentration, peak time, clearance rate, half-life, area under the curve of the drug, and bioavailability were calculated.
  • the compounds of the present invention can significantly increase the single or partial index of pharmacokinetics in mice.
  • Test Example 3 Human liver microsome CYP inhibition experiment
  • the aim of the study was to evaluate the inhibitory effect of the test article on human liver microsomal cytochrome P450 isoenzymes (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 and CYP3A4) using a 5-in-1 probe substrate of CYP isoenzyme.
  • HMM Mixed human liver microsomes
  • the diluted serial concentration of 10 mM, 5 mM, 1.5 mM, 0.5 mM, 0.15 mM, 0.05 mM, 0.015 mM test solution was added to the incubation system containing cofactors of human liver microsomes, probe substrate and circulation system. Among them, a control containing no solvent and containing a solvent was used as an enzyme activity control (100%).
  • the concentration of the metabolite produced by the probe substrate in the sample was determined by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Non-linear regression analysis was performed on the average percent activity versus concentration of the test article using SigmaPlot (V.11).
  • the IC 50 value ( ⁇ M) was calculated by a three-parameter or four-parameter recursive logarithmic equation. The test results are shown in Table 3:
  • Test Example 4 Inhibition test of hERG potassium channel
  • Example 1 The effect of Example 1 on the hERG potassium ion channel was examined by a fully automated patch clamp method.
  • the cells stably expressing the hERG potassium channel used in the experiment were obtained from CHO-hERE of Aviva Biosciences, and CHO-hERG was cultured in a 5% CO 2 atmosphere at 37 °C.
  • CHO hERG culture solution is shown in Table 4.
  • the CHO-hERG cells prepared for the experiment were cultured for at least two days, and the cell density reached 75% or more. Prior to the start of the experiment, cells were digested with TrypLE and then resuspended in extracellular fluid to collect the cells.
  • the extracellular fluid needs to be prepared once a month.
  • the intracellular fluid must be frozen at -20 °C.
  • the internal and external fluid components are shown in Table 5.
  • Extracellular fluid Extracellular fluid (mM) Intracellular fluid (mM) NaCl 145 - KCl 4 120 KOH - 31.25 CaCl 2 2 5.374 MgCl 2 1 1.75 glucose 10 - Na 2 ATP - 4 Zwitterionic buffer 10 10
  • test compound is dissolved in DMSO into a certain concentration of the stock solution, and then diluted according to different gradients, and finally added to the extracellular fluid in a certain ratio, and diluted to a concentration to be measured. Visual inspection was performed to see if there was any precipitation before the start of the experiment. Finally, the concentration of DMSO in the test solution and the positive control Amitriptyline should not exceed 0.3%.
  • the hERG QPatch HTX experiment was performed at room temperature. A whole cell protocol, a voltage stimulation protocol and a compound detection protocol were established on the software of QPatch Assay Software 5.2 (Sophion Bioscience).
  • I (C) I b + (I fr - I b ) ⁇ c n / (IC 50 n + c n )
  • C is the compound test concentration
  • n is the slope
  • the curve fitting and inhibition rate calculations were all analyzed by Qpatch analysis software. If the inhibition rate exceeds half of the inhibition at the lowest concentration or the inhibition rate does not reach half the inhibition at the highest concentration, the corresponding IC 50 of the compound is lower than the lowest concentration or IC 50 value. Greater than the highest concentration.

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Abstract

本发明公开了一类吡啶衍生物，具体公开了式(Ⅲ)所示化合物及其药学上可接受的盐。

Description

与KMD5通路相关的吡啶衍生物
相关申请的引用
本申请主张如下优先权：
CN201810136955.8，申请日2018-02-09；
CN201810312269.1，申请日2018-04-09；
CN201810639113.4，申请日2018-06-20；
CN201811466305.6，申请日2018-12-03。
技术领域
本发明涉及一类吡啶衍生物，具体涉及式(Ⅲ)所示化合物及其药学上可接受的盐。
背景技术
表观遗传结合DNA损伤修复的调节是治疗部分恶性肿瘤的有效途径，同时具有良好的协同应有前景。KMD5家族成员在乳腺癌中出现异常，市场潜力很大。其中大约15％左右的乳腺癌患者有KDM5A基因扩增；KMD5B在luminal亚型乳腺癌(占乳腺癌比例为60％左右)中异常表达。KMD5A和KMD5B在非小细胞肺癌(占整个肺癌比例为80％以上)中都异常高表达，全球在NSCLC上研发投入很大，整个市场空间较大。KDM5C在神经元发育中起作用，而Y染色体编码的KDM5D广泛表达并参与精子发生。
WO2016168349报道化合物为GS-5801。
Figure PCTCN2019074144-appb-000001
发明内容
本发明提供式(Ⅲ)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2019074144-appb-000002
其中，
Y选自O和S；
R 1选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R a取代；
R a分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
R 2选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R b取代；
R b分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
或者，R 1与R 2连接在一起，形成苯环、5～6元杂芳环或C 3-6环烷基，其中所述苯环和5～6元杂芳环任选被 1、2或3个R 3取代；
R 3分别独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
R 4选自OH和C 1-3烷氧基；
R 5选自H和C 1-3烷基；
R 6选自H和C 1-3烷基；
或者，R 1与R 5连接在一起，形成一个C 3-6环烷基；
或者，R 2与R 6连接在一起，形成一个C 3-6环烷基；
且，当R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环或5～6元杂芳环时R 5与R 6为空；
R 7选自H和C 1-5烷基，其中所述C 1-5烷基任选被1、2或3个R c取代；
R 8选自H和C 1-5烷基，其中所述C 1-5烷基任选被1、2或3个R c取代；
或者，R 7、R 8及其所连接的N原子连接在一起形成
Figure PCTCN2019074144-appb-000003
所述
Figure PCTCN2019074144-appb-000004
Figure PCTCN2019074144-appb-000005
任选被1、2或3个R c取代；
R c分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
所述5～6元杂芳环包含1、2或3个独立选自-O-、-S-、-NH-和N的杂原子和杂原子团。
本发明提供了式(Ⅱ)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2019074144-appb-000006
其中，
Y选自O和S；
R 1选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R a取代；
R a分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
R 2选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R b取代；
R b分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
或者，R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环、5～6元杂芳环或C 3-6环烷基，其中所述苯环和5～6元杂芳环任选被1、2或3个R 3取代；
R 3分别独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
R 4选自OH和C 1-3烷氧基；
R 5选自H和C 1-3烷基；
R 6选自H和C 1-3烷基；
或者，R 1与R 5连接在一起，形成一个C 3-6环烷基；
或者，R 2与R 6连接在一起，形成一个C 3-6环烷基；
且，当R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环或5～6元杂芳环时R 5与R 6为空；
所述5～6元杂芳环包含1、2或3个独立选自-O-、-S-、-NH-和N的杂原子和杂原子团。
本发明的一些方案中，上述R 1选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R a取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1选自H、Me和Et，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 2选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R b取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 2选自H、Me和Et，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环、环丙基或吡啶环，其中所述苯环和吡啶环任选被1、2或3个R 3取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环、环丙基和吡啶环，所述苯环、环丙基和吡啶任选被R 3取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2019074144-appb-000007
选自
Figure PCTCN2019074144-appb-000008
Figure PCTCN2019074144-appb-000009
Figure PCTCN2019074144-appb-000010
其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 4选自OH、
Figure PCTCN2019074144-appb-000011
其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1与R 5连接在一起，形成一个环丙基，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 2与R 6连接在一起，形成一个环丙基，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 7选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R c取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 7选自H、Me、CH 2F、CHF 2、CF 3、CH 2CF 3、CHFCH 2F和Et，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 8选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R c取代， 其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 7选自H、Me、CH 2F、CHF 2、CF 3、CH 2CF 3、CHFCH 2F和Et，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述结构单元
Figure PCTCN2019074144-appb-000012
选自
Figure PCTCN2019074144-appb-000013
Figure PCTCN2019074144-appb-000014
其它变量如本发明所定义。
本发明提供了式(Ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2019074144-appb-000015
其中，
Y选自O和S；
R 1选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R a取代；
R a分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
R 2选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R b取代；
R b分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
或者，R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环或5～6元杂芳环，其中所述苯环和5～6元杂芳环任选被1、2或3个R 3取代；
R 3分别独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
R 4选自C 1-3烷氧基；
所述5～6元杂芳环包含1、2或3个独立选自-O-、-S-、-NH-和N的杂原子和杂原子团。
本发明的一些方案中，上述R 1选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R a取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1选自H、Me和Et，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 2选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R b取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 2选自H、Me和Et，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环或吡啶环，其中所述苯环和吡啶环任选被1、2或3个R 3取代，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环或吡啶环，其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述R 4选自
Figure PCTCN2019074144-appb-000016
其它变量如本发明所定义。
本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其选自
Figure PCTCN2019074144-appb-000017
其中，
R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8和Y如本发明所定义。
本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。
本发明提供了下式所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2019074144-appb-000018
Figure PCTCN2019074144-appb-000019
本发明还提供上述的化合物或其药学上可接受的盐在制备与KDM5通路相关疾病治疗药物中的应用。
在本发明的一些方案中，上述与KDM5通路相关疾病是肿瘤和乙肝。
在本发明的一些方案中，上述肿瘤是乳腺癌，胃癌，结直肠癌，肺癌和肝癌。
技术效果
本发明化合物以4’-羧酸吡啶连杂环为母核，同时在杂环上连接不同的取代基，使得本发明化合物针对组蛋白(KDM5)去甲基化有明显的抑制作用，保持染色体组蛋白残基H3K4me2/3的甲基化，从而沉默或者清除cccDNA的复制。
本发明化合物对KDM5A的抑制作用显著。本发明化合物可以显著提高小鼠药代动力学单项或部分指标。化合物1对五个CYP同工酶抑制程度均较弱，该化合物没有心脏毒性。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无 毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR) 0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure PCTCN2019074144-appb-000020
中连接 基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2019074144-appb-000021
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2019074144-appb-000022
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所述的环包括单环，也包括螺环、并环和桥环等双环或多环体系。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶基和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和的碳氢基团，在一些实施方案中，所述烷基为C 1-12烷基；在另一些实施方案中，所述烷基为C 1-6烷基；在另一些实施方案中，所述烷基为C 1-3烷基。其可以是单取代(如-CH 2F)或多取代的(如-CF 3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的实例包括但不限于甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(包括n-丙基和异丙基)，丁基(包括n-丁基，异丁基，s-丁基和t-丁基)，戊基(包括n-戊基，异戊基和新戊基)、己基等。
除非另有规定，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合，表示由一定数目碳原子和至少一个杂原子或杂原子团组成的，稳定的直链或支链的烷基原子团或其组合物。在一些实施方案中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。在另一些实施方案中，杂原子团选自-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O) 2-、-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O) 2N(H)-和-S(＝O)N(H)-。在一些实施方案中，所述杂烷基为C 1-6杂烷基；在另一些实施方案中，所述杂烷基为C 1-3杂烷基。杂原子或杂原子团可以位于杂烷基的任何内部位置，包括该烷基与分子其余部分的连接位置，但术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。杂烷基的实例包括但不限于-OCH 3、-OCH 2CH 3、-OCH 2CH 2CH 3、-OCH 2(CH 3) 2、-CH 2-CH 2-O-CH 3、-NHCH 3、-N(CH 3) 2、-NHCH 2CH 3、-N(CH 3)(CH 2CH 3)、-CH 2-CH 2-NH-CH 3、-CH 2-CH 2-N(CH 3)-CH 3、-SCH 3、-SCH 2CH 3、-SCH 2CH 2CH 3、-SCH 2(CH 3) 2、-CH 2-S-CH 2-CH 3、-CH 2-CH 2、-S(＝O)-CH 3、-CH 2-CH 2-S(＝O) 2-CH 3、-CH＝CH-O-CH 3、-CH 2-CH＝N-OCH 3和–CH＝CH-N(CH 3)-CH 3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH 2-NH-OCH 3。
除非另有规定，“环烷基”包括任何稳定的环状烷基，其包括单环、双环或者三环体系，其中双环和三环体系包括螺环、并环和桥环。在一些实施方案中，所述环烷基为C 3-8环烷基；在另一些实施方案中，所述环烷基为C 3-6环烷基；在另一些实施方案中，所述环烷基为C 5-6环烷基。其可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。
除非另有规定，“环烯基”包括任何稳定的环状烯基，在该基团的任何位点含有一个或多个不饱和的碳- 碳双键，其包括单环、双环或者三环体系，其中双环和三环体系包括螺环、并环和桥环，但是此体系的任意环都是非芳香性的。在一些实施方案中，所述环烯基为C 3-8环烯基；在另一些实施方案中，所述环烯基为C 3-6环烯基；在另一些实施方案中，所述环烯基为C 5-6环烯基。其可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烯基的实例包括，但不限于，环戊烯基、环己烯基等。
除非另有规定，“环炔基”包括任何稳定的环状炔基，在该基团的任何位点含有一个或多个碳-碳三键，其包含单环、双环或者三环体系，其中双环和三环体系包括螺环、并环和桥环。其可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。
除非另有规定，术语“杂环烷基”本身或者与其他术语联合分别表示环化的“杂烷基”，其包括单环、双环和三环体系，其中双环和三环体系包括螺环、并环和桥环。此外，就该“杂环烷基”而言，杂原子可以占据杂环烷基与分子其余部分的连接位置。在一些实施方案中，所述杂环烷基为4～6元杂环烷基；在另一些实施方案中，所述杂环烷基为5～6元杂环烷基。杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢噻吩基(包括四氢噻吩-2-基和四氢噻吩-3-基等)、四氢呋喃基(包括四氢呋喃-2-基等)、四氢吡喃基、哌啶基(包括1-哌啶基、2-哌啶基和3-哌啶基等)、哌嗪基(包括1-哌嗪基和2-哌嗪基等)、吗啉基(包括3-吗啉基和4-吗啉基等)、二噁烷基、二噻烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、1,2-噁嗪基、1,2-噻嗪基、六氢哒嗪基、高哌嗪基、高哌啶基或氧杂环庚烷基。
“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C 1-6烷氧基包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5和C 6的烷氧基。在一些实施方案中，所述烷氧基为C 1-3烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。
除非另有规定，本发明术语“芳环”和“芳基”可以互换使用，术语“芳环”或“芳基”表示多不饱和的碳环体系，它可以是单环、双环或多环体系，其中至少一个环是芳香性的，所述双环和多环体系中的各个环稠合在一起。其可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，在一些实施方案中，所述芳基为C 6-12芳基；在另一些实施方案中，所述芳基为C 6-10芳基。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基(包括1-萘基和2-萘基等)。上述任意一个芳基环系的取代基选自本发明所述的可接受的取代基。
除非另有规定，本发明术语“杂芳环”和“杂芳基”可以互换使用，术语“杂芳基”是指含有1、2、3或4个独立选自B、N、O和S的杂原子的芳基(或芳环)，其可以是单环、双环或三环体系，其中氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)，且任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O) p，p是1或2)。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。在一些实施方案中，所述杂芳基为5-10元杂芳基；在另一些实施方案中，所述杂芳基为5-6元杂芳基。所述杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基、嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)、苯并噻唑基(包括5-苯并噻唑基等)、嘌呤基、苯并咪唑基(包括2-苯并咪唑基等)、吲哚基(包括5-吲哚基等)、异喹啉基(包 括1-异喹啉基和5-异喹啉基等)、喹喔啉基(包括2-喹喔啉基和5-喹喔啉基等)、喹啉基(包括3-喹啉基和6-喹啉基等)、吡嗪基、嘌呤基、苯基并噁唑基。上述任意一个杂芳基环系的取代基选自本发明所述的可接受的取代基。
除非另有规定，C n-n+m或C n-C n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C 1-12包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、和C 12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C 1-12包括C 1-3、C 1-6、C 1-9、C 3-6、C 3-9、C 3-12、C 6-9、C 6-12、和C 9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH 3代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc 2O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl 2代表氯化亚砜；CS 2代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；n-Bu 4NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔点；LDA代表二异丙基胺基锂；Ti(i-PrO) 4代表四异丙醇钛；n-BuLi代表正丁基锂；Et 3N代表三乙胺；T 3P代表丙基磷酸酐；LiOH·H 2O代表一水合氢氧化锂；DIBAL-代表二异丁基氢化铝；TBDPS代表叔丁基二甲基硅基；M代表mol/L。
本发明粗品经制备HPLC纯化方法均为中性体系。
化合物经手工或者
Figure PCTCN2019074144-appb-000023
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
参考例1：片段BB-1
Figure PCTCN2019074144-appb-000024
步骤1：BB-1-2合成
在25℃下，在预先干燥过的100mL三口瓶中将BB-1-1(2g,11.97mmol)和TsOH.H 2O(4.55g,23.94mmol)溶于无水甲苯(30mL)，加热至110℃，缓慢向体系中滴加无水乙醇(5.51g,119.68mmol)，在此温度下搅拌12h，将反应液冷却到室温，加入20mL乙酸乙酯，加入饱和碳酸钠水溶液调节pH为7,分液，水相用乙酸乙酯萃取(2×20mL)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到产品BB-1-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:8.84(br d,J＝4.63Hz,1H),8.57(s,1H),7.97(dd,J＝3.42,1.21Hz,1H),4.26-4.52(m,4H),1.30-1.48(m,6H)。MS m/z:224[M+H] +。
步骤2：BB-1合成
向预先干燥过的50mL三口瓶中加入BB-1-2和溶剂无水四氢呋喃(12mL)，随后在-78℃下逐滴加入DIBAL-H(1M,6.72mL)，反应在-78℃下反应2h，将反应液倒入冰的醋酸(3mL)和水(18mL)的混合溶液中淬灭反应，搅拌10min后，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)调至pH为8,乙酸乙酯萃取(2×50mL)，合并有机相，饱和食盐水洗涤有机相(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到BB-1。MS m/z:180[M+H] +。
参考例2：片段BB-2
Figure PCTCN2019074144-appb-000025
步骤1：BB-2合成
预先干燥过的50mL单口瓶中加入原料BB-2-1(1g,4.67mmol)和溶剂DMF(20mL)，在0℃下，向体系中加入NaH(466.68mg,11.68mmol,60％纯度)，在0℃下，搅拌0.5h，随后向体系中加入2-氯-N,N-二甲基-乙胺盐酸盐(739.95mg,5.14mmol)，氮气保护，在25℃下，搅拌12h，向体系中加入10mL饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取(3×50mL),合并有机相，饱和食盐水洗涤(1×10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到BB-2。MS m/z:286[M+H] +。
参考例3：片段BB-3
Figure PCTCN2019074144-appb-000026
步骤：BB-3合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-3-1(5g,29.90mmol,4.50mL)和四氢呋喃(125mL)，随后向体系中加入三乙胺(9.08g,89.71mmol,12.49mL)，BB-3-2(4.57g,29.90mmol,2.82mL)，在70℃下反应1h，将体系降温至室温，固体直接过滤，滤液减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(洗脱剂石油醚:乙酸乙酯＝1:1-1:2)纯化得到BB-3, 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.10(d,J＝8.00Hz,1H),6.30-6.50(m,2H),3.75-3.81(m,6H),3.72(s,2H),3.65-3.69(m,3H),3.37(s,2H)。MS m/z:240[M+H] +。
参考例4：片段BB-4
Figure PCTCN2019074144-appb-000027
步骤1：化合物BB-4合成
原料BB-4-1(10g,80.02mmol,5.68mL)加入到无水二氯甲烷(200mL)中，随后加入试剂咪唑(8.17g,120.03mmol)和叔丁基二苯基氯硅烷(22.00g,80.02mmol,20.56mL)，在25℃下，搅拌1小时，向体系中加入30mL水，分液，水相用二氯甲烷萃取(100mL×3)，合并有机相，20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(石油醚)纯化得到BB-4。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.63-7.72(m,4H),7.32-7.49(m,6H),3.92(t,J＝6.40Hz,2H),3.42(t,J＝6.40Hz,2H),1.07(s,9H)。
参考例5：片段BB-5
Figure PCTCN2019074144-appb-000028
步骤1：BB-5-1合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-2-1(2g,9.33mmol)和溶剂二甲基亚砜(30mL)，在25℃下，向体系中加入NaH(746.75mg,18.67mmol,60％纯度)，在25℃下，反应0.5小时，随后加入BB-4(4.41g,12.13mmol)，在40℃下，搅拌12小时，向体系中加入30mL水，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1-1:1)纯化得到BB-5-1。MS m/z:497[M+H] +。
步骤2：BB-5-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-5-1(3g,6.04mmol)和无水四氢呋喃(50mL)，在25℃下，向体系中 加入四丁基氟化铵(1M,18.12mL)，在25℃下反应0.5小时，直接减压浓缩，向体系中加入10mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1-10:1)纯化得到BB-5-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 3.99-4.23(m,2H),3.73(t,J＝5.20Hz,2H),3.49-3.57(m,4H),3.42-3.48(m,2H),1.80-1.91(m,2H),1.43(s,9H)。
步骤3：BB-5合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-5-2(0.5g,1.94mmol)和无水二氯甲烷(10mL)，在25℃下，向体系中加入戴斯-马丁氧化剂(1.23g,2.90mmol)，在25℃下，反应2小时，向体系中加入10mL饱和硫代硫酸钠水溶液，搅拌10分钟，淀粉碘化钾试纸检测不变蓝，向体系中加入10mL饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌20分钟，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到BB-5。MS m/z:201[M+H] +。
参考例6：片段BB-6
Figure PCTCN2019074144-appb-000029
步骤1：化合物BB-6合成
在单口瓶中加入底物BB-6-1(30g,260.67mmol)和溶剂丙酮(150mL)，水(150mL)，0℃向体系中加入碳酸钠(13.81g,130.34mmol)，氯甲酸苄酯(44.47g,260.67mmol)，缓慢升温到22℃搅拌2h。取锥形瓶，加入80mL水，倒入反应液，加入80mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物BB-6。
实施例1：化合物1
Figure PCTCN2019074144-appb-000030
步骤1：化合物1-1合成
在预先干燥过的50mL单口瓶中加入BB-2(2g,7.01mmol)和试剂HCl/MeOH(4M,10mL)，在25℃下，搅拌1.5h，反应逐渐产生白色固体，将固体过滤,得到化合物1-1。MS m/z:186[M+H] +。
步骤2：化合物1-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料化合物1-1(149.32mg,673.46μmol,HCl),溶剂MeOH(0.4mL)和DCE(2mL)，试剂N,N-二异丙基乙胺(87.04mg,673.46μmol,117.30μL)，在25℃下，搅拌10min，随后加入BB-1，在25℃下搅拌20min,随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(178.42mg,841.82μmol)，在25℃搅拌1h,向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3),合并有机相，饱和食盐水洗涤(10mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品,粗品经制备HPLC纯化得到化合物1-2。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ:8.75(d,J＝5.52Hz,1H),7.85-8.08(m,2H),4.57(s,2H),4.36(q,J＝7.36Hz,2H),4.11(s,2H),3.79(br t,J＝6.02Hz,2H),3.63-3.73(m,2H),3.53(br t,J＝5.77Hz,2H),3.30(t,J＝6.27Hz,2H),2.85(s,6H),2.11(br s,2H),1.30(t,J＝7.28Hz,3H)。MS m/z:349[M+H] +
步骤3：化合物1合成
向预先干燥过的单口瓶中加入化合物1-2(0.02g,57.40μmol)和溶剂H 2O(1mL)，在25℃下，向体系中加入LiOH.H 2O(9.63mg,229.60μmol)，在25℃下，搅拌0.25h,反应液用盐酸水溶液(2mol/L)调其至pH为6，反应液蒸干，粗品通过制备HPLC纯化得到1。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ:8.42(d,J＝5.02Hz,1H),7.36-7.70(m,2H),3.73(s,2H),3.63(br t,J＝5.77Hz,2H),3.41(br s,4H),3.14(br t,J＝5.77Hz,2H),2.79(br s,2H),2.72(s,6H),1.71(br s,2H)。MS m/z:321[M+H] +。
实施例2：化合物2
Figure PCTCN2019074144-appb-000031
步骤1：化合物2-1合成
向预先干燥过的单口瓶中加入BB-2(0.3g,1.05mmol)和溶剂甲苯(5mL)，向体系中加入2,4-双(对甲氧苯基)-1,3-二硫-二磷杂环丁烷-2,4硫化物(297.63mg,735.86μmol)，在120℃下，搅拌12h,向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品,粗品经过柱层析(洗脱剂二氯甲烷：甲醇＝10:1-1:1)得到化合物2-1。MS m/z:302[M+H] +。
步骤2：化合物2-2合成
在预先干燥过的50mL单口瓶中加入化合物2-1(0.07g,232.21μmol)和试剂HCl/MeOH(4M,10mL)，在25℃下，搅拌1h，将体系减压浓缩，得到化合物2-2。MS m/z:202[M+H] +。
步骤3：化合物2-3合成
在预先干燥过的单口瓶中加入化合物2-2(48.04mg,202.04μmol,HCl),溶剂MeOH(0.4mL)，DCE(2mL)和N,N-二异丙基乙胺(26.11mg,202.04μmol),在25℃下，搅拌10min，随后加入BB-1和HOAc(1.01mg,16.84μmol)，在25℃下搅拌20min,随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(53.52mg,252.55μmol)，25℃搅拌1h,向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3),合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品,粗品通过制备HPLC得到化合物2-3，MS m/z:365[M+H] +。
步骤4：化合物2合成
预先干燥过的单口瓶中加入化合物2-3(0.01g,27.43μmol)和溶剂H 2O(1mL)，在25℃下，向体系中加入LiOH.H2O(4.61mg,109.74μmol)，在25℃下，搅拌0.25h,反应液用盐酸水溶液(2mol/L)调其至pH为6，反应液蒸干，粗品通过制备HPLC纯化得到化合物2， 1H NMR(400MHz,D 2O)δ:8.52(d,J＝5.02Hz,1H),7.74(s,1H),7.63(br d,J＝5.02Hz,1H),4.32(br t,J＝6.78Hz,2H),4.01(s,2H),3.88(br s,4H),3.36(br t,J＝7.03Hz,2H),2.88(br s,1H),2.83(s,6H),1.82(br s,2H)。MS m/z:337[M+H] +。
实施例3：化合物3
Figure PCTCN2019074144-appb-000032
步骤1：化合物3-2合成
向反应瓶中加入化合物3-1(20g,92.58mmol)，DIEA(35.89g,277.74mmol,48.38mL)和DMF(200mL)，然后加入2-氨基乙酸甲酯盐酸盐(17.44g,138.87mmol)，反应液在25℃搅拌16小时。向反应液中加入1000mL水，然后用乙酸乙酯(200mL×5)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过层析柱分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝50:1至10:1)纯化，得到化合物3-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.98-7.84(m,1H),7.64-7.48(m,2H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),4.03(s,2H),3.65(s,3H),3.39(s,2H)。MS m/z:225[M+H] +。
步骤2：化合物3-3合成
向反应瓶中依次加入化合物3-2(20.7g,92.32mmol)，DCM(300mL)，TEA(28.03g,276.97mmol)，DMAP(563.96mg,4.62mmol)和Boc 2O(30.22g,138.48mmol)，反应液在25℃搅拌16小时。向反应液中加入200mL水，然后用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过柱层析分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至5:1)纯化，得到化合物3-3。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.01(t,J＝8.7Hz,1H),7.69-7.51(m,2H),7.43(q,J＝7.5Hz,1H),4.86(d,J＝19.1Hz,2H),4.04-3.90(m,1H),3.92(s,1H),3.73(s,3H),1.47-1.36(m,9H)。MS m/z:225[M-100+H] +。
步骤3：化合物3-4合成
向反应瓶中加入化合物3-3(21g,64.75mmol)，Pd/C(10g,64.75mmol)和MeOH(100mL)，反应液置换氢气三次，然后在25℃和H 2(15psi)作用下搅拌4小时。反应液用硅藻土过滤，并用甲醇洗涤(300mL×3)，滤液减压浓缩得到化合物3-4。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.11(t,J＝7.2Hz,1H),6.96(d,J＝6.7Hz,1H),6.73-6.60(m,2H),4.46(s,2H),3.80(br s,2H),3.70(s,3H),1.56-1.39(m,9H)。MS m/z:295[M+1] +。
步骤4：化合物3-5合成
向反应瓶中加入3-4(1.5g,5.10mmol)和甲苯(20mL)，然后加入HOBT(550.86mg,4.08mmol)，反应液在110℃搅拌16小时。将反应液降温后加入100mL水中，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗产品通过柱层析分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至10:1)纯化，得到化合物3-5。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.22(br s,1H),7.18(br s,1H),7.19-6.96(m,1H),6.88(d,J＝7.8Hz,1H),4.55-4.16(m,4H),1.43-1.25(m,9H)。MS m/z:207[M-55] +。
步骤5：化合物3-6合成
向反应瓶中加入化合物3-5(1.0g,3.81mmol)和DMF(20mL)，0℃下加入NaH(457.49mg,11.44mmol)反应液搅拌0.5小时后加入2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐(823.72mg,5.72mmol)，最终的反应液在40℃搅拌48小时。将反应液倒入200mL氯化铵水溶液中，乙酸乙酯萃取(30mL×5),合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗产品通过制备薄层层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到黄色油状产品3-6。MS m/z:334[M+1] +。
步骤6：化合物3-7合成
向反应瓶中加入化合物3-6(0.26g,779.79μmol)和EtOAc(10mL)，然后加入HCl/EtOAc(4M,10mL)，反应液在15℃反应0.5小时。反应液减压浓缩得到白色固体粗产品化合物3-7。MS m/z:234[M+1] +。
步骤7：化合物3-8合成
向反应瓶中加入化合物3-7(90.34mg,334.87μmol)和DCM(2mL)，然后加入TEA(56.48mg,558.12μmol)，搅拌0.5小时后，依次加入BB-1(50mg,279.06μmol)，NaBH(OAc) 3(118.29mg,558.12μmol)和HOAc(0.2mL)，反应液在15℃搅拌16小时。向反应液中加入碳酸氢钠饱和水溶液直到pH＝7，静置分层,水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过制备HPLC分离纯化，得到化合物3-8。MS m/z:397[M+1] +。
步骤8：化合物3合成
向反应液中加入化合物3-8(30mg,75.67μmol)和H 2O(1mL)，然后加入LiOH.H 2O(3.81mg,90.80μmol)，反应液在15℃搅拌20分钟。向反应液中加入1M HCl水溶液直到pH＝6。反应液通过制备HPLC分离纯化， 得到化合物3。 1HNMR(400MHz,D 2O)δ＝8.54(d,J＝5.1Hz,1H),7.74(s,1H),7.65(dd,J＝1.4,5.1Hz,1H),7.53-7.42(m,1H),7.39-7.27(m,3H),4.19(br t,J＝7.2Hz,2H),3.93(s,2H),3.60(s,2H),3.23(br t,J＝7.3Hz,2H),3.14(s,2H),2.78(s,6H)。MS m/z:369[M+1] +。
实施例4：化合物4
Figure PCTCN2019074144-appb-000033
步骤1：化合物4-2合成
向反应瓶中加入化合物4-1(10g,58.28mmol)和溶剂CCl 4(110mL)，随后加入试剂AIBN(1.91g,11.66mmol)和NBS(11.41g,64.11mmol)，反应在80℃下反应12小时。将反应液过滤，滤液在水泵上拉干得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)得到化合物4-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:7.87(dd,J＝8.4,7.2Hz,1H),7.71(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.44(t,J＝8.0Hz,1H),4.89(s,2H)。
步骤2：化合物4-3合成
向反应瓶中加入化合物4-2(3.5g,13.97mmol)，甘酸甲酯盐酸盐(2.63g,20.96mmol)和溶剂DMF(35mL)，随后加入试剂DIPEA(5.42g,41.92mmol)，反应在25℃下反应12小时。将反应液用10mL H 2O和10mL EtOAc稀释，水相用EtOAc(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物4-3。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:7.71(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.37(t,J＝8.0Hz,1H),4.14(s,2H),3.73(s,3H),3.49(s,2H)。
步骤3：化合物4-4合成
向反应瓶中加入化合物4-3(3.5g,13.53mmol)和溶剂THF(40mL)，H 2O(10mL)，随后加入试剂(Boc) 2O (4.43g,20.30mmol)和NaHCO 3(2.27g,27.06mmol)，反应在35℃下反应12小时。反应液加20mL H 2O，用EtOAc(20mL×2)萃取，20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物4-4。
步骤4：化合物4-5合成
向反应瓶中加入化合物4-4(4.3g,11.99mmol)和溶剂EtOH(40mL)，H 2O(20mL)，随后加入试剂Fe(2.01g,35.96mmol)和NH 4Cl(641.09mg,11.99mmol)，反应在75℃下反应2小时。反应液过滤，滤液加20mL H 2O和20mL EtOAc，分液，水相用EtOAc(20mL×2)萃取，20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物4-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:6.99(t,J＝8.0Hz,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.0Hz,1H),4.72(s,3H),3.90(s,2H),3.71(s,3H),1.45(s,9H)。
步骤5：化合物4-6合成
向反应瓶中加入化合物4-5(3.5g,10.65mmol)和溶剂甲苯(35mL)，随后加入AlMe 3(2M,6.92mL)，抽真空充氮气三次之后反应在110℃反应12小时。反应液用30mL的KHSO 4和NaHCO 3的混合溶液(pH＝5-6)淬灭，通过硅藻土过滤，滤液用EtOAc(30mL×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到化合物4-6。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:7.18(d,J＝6.4Hz,2H),6.91(br d,J＝6.4Hz,1H),4.77(d,J＝32.4Hz,2H),4.43(br s,1H),4.26(br s,1H),1.41-1.48(m,9H)。
步骤6：化合物4-7合成
向反应瓶中加入化合物4-6(0.5g,1.68mmol)和溶剂DMF(5mL)，随后在0℃下加入NaH(269.59mg,6.74mmol,纯度60％)，反应0.5小时后加入试剂N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸(485.40mg,3.37mmol,HCl)，反应在35℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝30:1)得到化合物4-7。
步骤7：化合物4-8合成
向反应瓶中加入化合物4-7(0.5g,1.36mmol)和溶剂HCl/EtOAc(4M)(10mL)，随后反应在25℃下反应2小时。反应液在水泵上拉干得到化合物4-8。
步骤8：化合物4-9合成
向反应瓶中加入化合物4-8(240.00mg,788.92μmol)和DCM(2mL)，随后加入TEA(79.83mg,788.92μmol)，搅拌0.5小时后依次加入BB-1(117.79mg,657.43μmol)和HOAc(0.1mL)，反应2小时后加入NaBH(OAc) 3(278.67mg,1.31mmol)，反应液在25℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取水相，10mL饱和食盐水洗涤合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过制备HPLC纯化得到化合物4-9。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:10.70(br s,1H),8.83(d,J＝5.2Hz,1H),8.07(s,1H),7.86(d,J＝5.2Hz,1H),7.54-7.59(m,3H),4.38(q,J＝6.8Hz,4H),4.22-4.26(m,3H),3.40(br s,2H),3.31(br s,2H),2.78(d,J＝4.8Hz,6H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H)。
MS m/z:431,433[M+H] +。
步骤9：化合物4合成
向反应瓶中加入化合物4-9(0.03g,69.62μmol)和溶剂H 2O(2mL)，随后加入试剂LiOH·H 2O(5.84mg, 139.23μmol)，反应在25℃下反应0.5小时。将反应液过滤后通过制备HPLC纯化得到化合物4。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ:8.84(d,J＝5.2Hz,1H),8.11(s,1H),8.07(d,J＝1.6Hz,1H),7.45-7.60(m,2H),7.44(d,J＝5.2Hz,1H),4.62(s,2H),4.49(br s,2H),4.29(t,J＝7.2Hz,2H),3.71(s,2H),3.49(br t,J＝6.8Hz,2H),2.94(s,6H)。MS m/z:403,405[M+H] +。
实施例5：化合物5
Figure PCTCN2019074144-appb-000034
步骤1：化合物5-2合成
5-1(20g,116.56mmol)和CCl 4(200mL)，随后加入试剂AIBN(11.48g,69.94mmol)和NBS(31.12g,174.84mmol)，反应液在85℃下反应16小时。反应液降温后通过硅藻土过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤(100mL×3),滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1：0至50:1)，纯化得到产品5-2。
步骤2：化合物5-3合成
向反应瓶中加入5-2(5.6g,22.36mmol)，DIEA(8.67g,67.07mmol,11.68mL)和DMF(50mL)，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(4.21g,33.54mmol)，反应液在25℃搅拌16小时。向反应液中加入500mL水，乙酸乙酯萃取(100mL×5)，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至1:1)，纯化得到产物5-3。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝2.0Hz,1H),7.36-7.39(dd,J＝2.0,8.8Hz,1H),4.10(s,2H),3.73(s,3H),3.45(s,2H),2.10(s,1H)。MS m/z:259[M+H] +。
步骤3：化合物5-4合成
向反应瓶中依次加入5-3(4.0g,15.46mmol)，DCM(40mL)，DIEA(6.00g,46.39mmol,8.08mL)，DMAP(94.46mg,773.22μmol)和Boc 2O(13.50g,61.86mmol,14.21mL)，反应液在40℃搅拌16小时。向反应液中加入200mL水，然后用乙酸乙酯(150mLX3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至5:1)，纯化得到产品5-4。MS m/z:259[M-99] +。
步骤4：化合物5-5合成
向反应瓶中加入5-4(4.0g,11.15mmol)，Fe(1.87g,33.45mmol)，NH 4Cl(2.39g,44.60mmol,1.56mL),EtOH(60mL)和H 2O(20mL)，反应液置换氮气三次，然后在70℃搅拌6小时。反应液用硅藻土过滤，并用甲醇洗涤(200mL×3)，滤液用减压浓缩除去乙醇和甲醇，水相用二氯甲烷萃取(200mL×3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到黄色油状产品5-5。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝6.96-7.07(m,2H),6.60(br d,J＝1.6Hz,1H),4.42(br s,2H),3.82(br s,2H),3.73(br s,3H),1.47(br s,9H)。MS m/z:329[M+H] +。
步骤5：化合物5-6合成
向反应瓶中加入5-5(3.60g,10.95mmol)，THF(30mL)和H 2O(5mL)，然后加入NaOH(656.95mg,16.42mmol)，反应液在15℃搅拌5小时。向反应液中加入1M盐酸直到pH＝5-6，加入乙酸乙酯萃取三次(100mL×3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到产品5-6。MS m/z:315[M+H] +。
步骤6：化合物5-7合成
向反应瓶中加入5-6(2.0g,6.35mmol)和EtOAc(20mL)，然后加入DIEA(2.46g,19.06mmol,3.32mL)和T 3P(8.09g,12.71mmol,7.56mL,50％纯度)，反应液在15℃搅拌0.25小时，有大量白色固体生成。向反应液中加入100mL水，静置分液，水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，倾倒出有机相，减压浓缩得到粗品。粗品用乙酸乙酯和石油醚打浆后过滤得到产品5-7。MS m/z:241[M-55] +。步骤7：化合物5-8合成
向反应瓶中加入5-7(1.8g,3.40mmol)和DMF(20mL)，0℃下加入NaH(543.49mg,13.59mmol,60％纯度)，反应液在15℃搅拌1小时，然后向反应瓶中加入N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(978.57mg,6.79mmol)，最终的反应液在氮气保护下于40℃搅拌16小时。反应降温后将反应液倒入饱和的氯化铵水溶液中(200mL)，乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，倾倒出有机相减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：二氯甲烷：甲醇＝1:0至10:1)，纯化得到产品5-8。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.01(s,1H),7.41-7.31(m,2H),7.25(s,1H),4.50(br s,2H),3.98(br t,J＝6.0Hz,2H),3.92(br s,2H),2.36-2.39(br t,J＝6.4Hz,2H),2.13(s,6H),1.47(br s,9H)。MS m/z:368[M+H] +。
步骤8：化合物5-9合成
向反应瓶中加入5-8(1.6g,4.35mmol)和EtOAc(20mL)，然后向反应瓶中加入HCl/EtOAc(4M,16.98mL)，最终的反应液在25℃搅拌0.5小时，有大量白色固体生成。反应液减压浓缩得到产品5-9。
步骤9：化合物5-10合成
向反应瓶中加入5-9(305.62mg,1.00mmol)和DCM(3mL)，然后加入TEA(169.43mg,1.67mmol,233.05μL)，搅拌1小时后，依次加入BB-1(150mg,837.18μmol)和HOAc(0.1mL)，反应液继续搅拌2小时后加入醋酸硼氢化钠(354.87mg,1.67mmol)，反应液在15℃搅拌16小时。向反应液中加入碳酸氢钠饱和水溶液直到pH＝7，静置分液水相用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得 到粗产品，粗产品通过HPLC分离()，纯化得到产品5-10。MS m/z:431[M+H] +。
步骤10：化合物5合成
向反应液中加入5-10(80mg,185.65μmol)和H 2O(2mL)，然后加入LiOH·H 2O(9.35mg,222.78μmol)，反应液在15℃搅拌20分钟。向反应液中加入1M HCl直到pH＝6。反应液通过HPLC分离(柱子:Waters Xbridge 150×25mm 5um；流动相:[水(10mM NH 4HCO 3)-ACN]；B％:5％-30％,12min)，纯化得到产品5。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.57(d,J＝5.2Hz,1H),7.76(s,1H),7.68(br d,J＝5.2Hz,1H),7.48(br d,J＝8.8Hz,1H),7.33-7.35(dd,J＝3.2,5.2Hz,2H),4.18-4.21(br t,J＝6.8Hz,2H),3.94(s,2H),3.62(s,2H),3.28-3.32(br t,J＝7.2Hz,2H),3.19(s,2H),2.85(s,6H)。MS m/z:403[M+H] +。
实施例6：化合物6
Figure PCTCN2019074144-appb-000035
步骤1：化合物6-2合成
向反应瓶中加入化合物6-1(10g,58.28mmol)和溶剂CCl 4(110mL)，随后加入试剂AIBN(1.91g,11.66mmol)和NBS(11.41g,64.11mmol)，反应液在80℃下反应12小时。将反应液过滤，滤液在水泵上拉干得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)得到化合物6-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:8.05(d,J＝2.0Hz,1H),7.58-7.62(m,1H),7.57(d,J＝14.8Hz,1H),4.80(s,2H)。
步骤2：化合物6-3合成
向反应瓶中加入化合物6-2(4.2g,16.77mmol)，甘酸甲酯盐酸盐(3.16g,25.15mmol)和溶剂DMF(40mL)，随后加入试剂DIPEA(6.50g,50.30mmol)，反应在25℃下反应12小时。将反应液用10mL H 2O和10mL EtOAc稀释，水相用EtOAc(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓 缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物6-3。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:7.96(d,J＝2.0Hz,1H),7.57-7.63(m,1H),7.55(d,J＝2.0Hz,1H),4.08(s,2H),3.73(s,3H),3.44(s,2H)。
步骤3：化合物6-4合成
向反应瓶中加入化合物6-3(4.30g,16.62mmol)、溶剂THF(40mL)和H 2O(10mL)，随后加入试剂(Boc) 2O(5.44g,24.94mmol)和NaHCO 3(2.79g,33.25mmol)，反应液在35℃下反应12小时。反应液加10mL H 2O，用EtOAc(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物6-4。
步骤4：化合物6-5合成
向反应瓶中加入化合物6-4(4.8g,13.38mmol)、溶剂EtOH(50mL)和H 2O(25mL)，随后加入试剂Fe(2.24g,40.14mmol)和NH 4Cl(858.77mg,16.05mmol)，反应在78℃下反应2小时。反应液过滤，滤液加20mL H 2O和20ml EtOAc，分液，水相用EtOAc(20mL×2)萃取，20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物6-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:6.86(d,J＝8.0Hz,1H),6.61-6.64(m,2H),4.40(s,2H),3.78(s,2H),3.70(s,3H),1.45(br s,9H)。
步骤5：化合物6-6合成
向反应瓶中加入化合物6-5(3.5g,10.65mmol)和溶剂甲苯(35mL)，随后加入AlMe 3(2M,6.92mL)，抽真空充氮气三次之后反应液在110℃反应12小时。反应液用30mL的KHSO 4和NaHCO 3的混合溶液(pH＝5-6)淬灭，通过硅藻土过滤，滤液用EtOAc(30mL×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到化合物6-6。
步骤6：化合物6-7合成
向反应瓶中加入化合物6-6(0.5g,1.68mmol)和溶剂DMF(5mL)，随后在0℃下加入NaH(269.59mg,6.74mmol,纯度60％)，反应0.5小时后加入试剂,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(485.40mg,3.37mmol,HCl)，反应在35℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝30:1)得到化合物6-7。
步骤7：化合物6-8合成
向反应瓶中加入化合物6-7(0.4g,1.09mmol)和溶剂HCl/EtOAc(4M,10mL)，随后反应在25℃下反应2小时。反应液在水泵上拉干得到化合物6-8。
步骤8：化合物6-9合成
向反应瓶中加入化合物6-8(240.00mg,788.92μmol)和DCM(2mL)，随后加入TEA(79.83mg,788.92μmol)，搅拌0.5小时后依次加入BB-1(117.79mg,657.43μmol)、HOAc(0.1mL)，反应2小时后加入NaBH(OAc) 3(278.67mg,1.31mmol)，反应液在25℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取水相，10mL饱和食盐水洗涤合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过制备HPLC纯化得到化合物6-9。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:10.80(br s,1H),8.88(d,J＝5.2Hz,1H),8.13(s,1H),7.91(d,J＝1.6Hz,1H),7.75(d,J＝1.6Hz,1H),7.53-7.57(m,1H),7.47-7.50(m,1 H),4.55(br s,3H)4.39(q,J＝7.2Hz,2H),4.34-4.43(m,1H),4.21-4.32(m,4H),3.58(br s,2H),3.33(br s,2H),2.79(d,J＝4.8Hz,6H),1.35(t,J＝7.2Hz,3H)。MS m/z:431,433[M+H] +。
步骤9：化合物6合成
向反应瓶中加入化合物6-9(0.03g,69.62μmol)和溶剂H 2O(2mL)，随后加入试剂LiOH·H2O(5.84mg,139.23μmol)，反应液在25℃下反应0.5小时。将反应液过滤后通过制备HPLC纯化得到化合物6。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ:8.82(d,J＝5.6Hz,1H),8.08(s,1H),8.03(d,J＝5.2Hz,1H),7.59(s,1H),7.50(s,2H),4.62(s,2H),4.26-4.36(m,4H),3.77(s,2H),3.49(br t,J＝7.2Hz,2H),2.95(s,6H)。
MS m/z:403,405[M+H] +。
实施例7：化合物7
Figure PCTCN2019074144-appb-000036
步骤1：化合物7-2合成
将化合物7-1(5g,29.1mmol)溶于CCl 4(50mL)，氮气鼓泡后将NBS(10.4g,58.28mmol)和AIBN(2.87g,17.48mmol)加入到反应液中，80℃下反应16h。反应液降温至15℃并减压浓缩得到粗品。粗产品通过柱层析分离，极性范围是：石油醚:乙酸乙酯＝1:1至0:1。馏分减压浓缩得到化合物7-2。
步骤2：化合物7-3合成
将化合物7-2(11.5g,45.91mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(8.65g,68.87mmol)溶于DMF(15mL)中，40℃下搅拌16h。反应液用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗产品通过柱层析分离，极性范围：石油醚：乙酸乙酯＝10：1-5:1-1:1-0:1。馏分减压浓缩得到化合物7-3。1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.38-7.52(m,3H)3.85(s,2H)3.75(s,3H)3.49(s,1H)3.39(s,2H)。
步骤3：化合物7-4合成
将化合物7-3(4.5g,17.40mmol)溶于DCM(50mL)中，向反应液中依次加入Boc 2O(7.59g,34.79mmol)，DMAP(106.27mg,869.87μmol)和DIEA(4.50g,34.79mmol)，40℃下搅拌16h。反应液降至室温并用水(20mL)稀释，二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物7-4。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.28-7.44(m,3H)4.44(d,J＝12Hz,2H)3.89(s,1H),3.76(s,1H),3.66(s,3H)1.36(d,J＝16Hz,9H)。
步骤4：化合物7-5合成
把化合物7-4(3g,8.36mmol)和NH 4Cl(536.74mg,10.03mmol)溶于EtOH(30mL)和H 2O(15mL)的混合溶剂中，70℃搅拌2h。反应液用水稀释(100mL)并用乙酸乙酯萃取(30mL)×3，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物7-5。 1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.20(dd,J＝8,1.19Hz,1H)6.99(d,J＝4Hz,1H)6.61(m,1H)4.47(s,2H)3.86(s,2H)3.68(s,3H)1.48(s,9H)。MS m/z:329[M+H] +。
步骤5：化合物7-6合成
把化合物7-5(2.7g,8.21mmol)和LiOH·H 2O(1.03g,24.64mmol)溶于THF(60mL)和H 2O(12mL)的混合溶剂中，15℃下搅拌5h。反应液50℃下减压浓缩。粗品用甲醇(20mL)×2带走残余水分得到化合物7-6。 1H NMR(400MHz,MeOD)δppm 7.06(dd,J＝8.0,1.38Hz,1H)6.82(d,J＝8Hz,1H)6.49(m,1H)4.79(s,2H)4.36(s,2H)1.38(s,9H)。MS m/z:315[M+H] +
步骤6：化合物7-7合成
将化合物7-6(2.4g,7.62mmol)，T 3P(7.28g,11.44mmol,6.80mL,50％纯度)依次溶于EA(60mL)和DMF(60mL)的混合溶剂中，15℃下搅拌12h。反应液用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)×3萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物7-7。MS m/z:241[M-56+H] +
步骤7：化合物7-8合成
将化合物7-7(2.1g,7.08mmol)溶于DMF(50mL)，0℃下向体系中加入NaH(1.13g,28.31mmol,60％纯度))。反应液在15℃下搅拌0.5h，将二甲氨基氯乙烷盐酸盐(2.04g,14.15mmol)分批到反应液中，40℃下反应12h。反应用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(30mL)×3萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗产品通过柱层析分离，极性范围：石油醚：乙酸乙酯＝10:1至0:1，馏分减压浓缩得到化合物7-8。
步骤8：化合物7-9合成
化合物7-8(0.75g,2.04mmol)溶于EA(2mL)中，体系中加入HCl/EtOAc(4M,10mL)溶液，20℃搅拌1h。反应液直接倒入饱和的碳酸氢钠溶液(20mL)中并用乙酸乙酯(10mL)×3萃取，合并有机相并用 无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩得到化合物7-9。MS m/z:268[M+H] +。
步骤9：化合物7-10合成
将化合物7-9(0.37g,1.38mmol)溶于DCM(5mL)中，TEA(218.10mg,2.16mmol,0.3mL)调节PH＝8，反应体系中加入化合物BB-1(247.59mg,1.38mmol)，用冰乙酸调节PH＝6，15℃下搅拌0.5h。再将NaBH(OAc) 3(585.75mg,2.76mmol)加入到反应体系中。15℃继续搅16h。反应用饱和碳酸氢钠溶液淬灭(20mL)，乙酸乙酯(10mL)×3萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物7-10。MS m/z:431[M+H] +。
步骤10：化合物7合成
把化合物7-10(0.05g,116.03μmol)和LiOH·H 2O(9.74mg,232.06μmol)溶于MeOH(1mL)中，20℃下搅拌0.2h。反应液直接过滤，经制备HPLC分离。后处理得到化合物7。1H NMR(400MHz,DMSO)δppm 8.47(d,J＝4.0Hz,1H)7.66(s,1H)7.58(d,J＝4.0Hz,1H)7.49(d,J＝8.00Hz,1H)7.28(t,J＝8.00Hz,1H)7.18-7.23(m,1H)4.05-4.13(m,1H)3.95-4.02(m,1H)3.86-3.89(d,J＝12.00Hz,1H)3.76-3.79(d,J＝12.00Hz,1H)3.67-3.70(d,J＝12.00Hz,1H)3.47-3.50(m,2H)3.34(m,1H)3.06(s,2H)2.82(s,6H)。
实施例8：化合物8
Figure PCTCN2019074144-appb-000037
步骤1：化合物8-2合成
向反应瓶中加入8-1(20g,85.46mmol)，DIEA(33.14g,256.39mmol,44.66mL)和DMF(200mL)，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(16.10g,128.19mmol,)，反应液在25℃搅拌16小时。向反应液中加入100mL水，然后用乙酸乙酯(50mL×5)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝50:1至1:1)，纯化得到黄色油状产品8-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.71-7.73(m,1H),7.40-7.42(m,1H),7.32-7.38(m,1H),4.06(d,J＝1.6Hz,2H),3.68(s,3H),3.45(s,2H),2.19-2.31(m,1H)。MS m/z:243[M+H] +。
步骤2：化合物8-3合成
向反应瓶中依次加入8-2(20.7,85.47mmol)，DCM(200mL)，DIEA(33.14g,256.40mmol,44.66mL)，DMAP(522.07mg,4.27mmol)和Boc 2O(37.31g,170.93mmol,39.27mL)，反应液升温到40℃搅拌16小时后向反应液中补加Boc 2O(18.65g,85.47mmol,19.63mL)，反应液在40℃继续搅拌16小时。向反应液中加入200mL水，然后用乙酸乙酯(150mLX3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至5:1)，纯化得到黄色油状产品8-3。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.62(br t,J＝7.6Hz,1H),7.43(br t,J＝5.6Hz,1H),7.30-7.35(m,1H),4.80(s,2H),3.90-3.99(m,2H),3.71(s,3H),1.38(br s,9H)。MS m/z:243[M-99] +。
步骤3：化合物8-4合成
向反应瓶中加入8-3(17.6g,51.41mmol)，Pd/C(5g,51.41mmol,5％purity)和EA(300mL)，反应液置换氢气三次，然后在25℃和H2(15psi)作用下搅拌11小时。反应液用硅藻土过滤，并用甲醇洗涤(300mLX3)，滤液减压浓缩得到黄色油状产品8-4。MS m/z:313[M+H] +。
步骤4：化合物8-5合成
向反应瓶中加入8-4(5g,16.01mmol)和甲苯(50mL)，然后加入AlMe 3(2M,12.01mL)，反应液在110℃搅拌16小时。将反应液降温后倒入0.5M的硫酸氢钾(100mL)水溶液中，二氯甲烷萃取(200mLX5)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到产品8-5。MS m/z:225[M-55] +。
步骤5：化合物8-6合成
向反应瓶中加入8-5(2.5g,7.14mmol)和DMF(20mL)，0℃下加入NaH(1.14g,28.54mmol,60％纯度)反应液在15℃搅拌1小时，然后向反应瓶中加入N,N二甲氨基氯乙烷盐酸盐(2.06g,14.27mmol)，最终的反应液在氮气保护下于40℃搅拌16小时。反应降温后将反应液倒入饱和的氯化铵水溶液中(150mL)，乙酸乙酯萃取(40mL×5),合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：二氯甲烷：甲醇＝1:0至10:1)纯化得到黄色油状产品8-6。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.33-7.37(dt,J＝1.6,7.2Hz,1H),7.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.00-7.04(t,J＝8.4Hz,1H),4.65(br s,2H),4.13(t,J＝1.2Hz,2H)，3.99-4.03(t,J＝6.4Hz,2H),3.90(s,2H),2.31-2.41(t,J＝6.4Hz,2H),2.14(s,6H),1.49(s,9H)。MS m/z:352[M+H] +。
步骤6：化合物8-7合成
向反应瓶中加入8-6(1.7g,4.84mmol)和EtOAc(10mL)，然后向反应瓶中加入HCl/EtOAc(4M,18.89mL)，最终的反应液在25℃搅拌4小时。反应液减压浓缩得到产品8-7。MS m/z:252[M+H] +。
步骤7：化合物8-8合成
向反应瓶中加入8-7(250.54mg,870.67μmol)和DCM(1mL)，然后加入TEA(146.84mg,1.45mmol,201.98μL)，搅拌0.5小时后，依次加入BB-1(130mg,725.56μmol,1eq)，醋酸硼氢化钠(307.55mg,1.45mmol,2eq)和HOAc(0.1mL)，反应液在15℃搅拌16小时。向反应液中加入碳酸氢钠饱和水溶液直到pH＝7，静置分液水相用二氯甲烷(10mLX3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，粗产品通过HPLC分离，纯化得到产品8-8。 1HNMR(400MHz,DMSP-d6)δ＝11.24(m,1H),8.88(d,J＝4.8Hz,1H),8.15(s,1H),7.90-7.92(dd,J＝1.6,5.2Hz,1H),7.64-7.65(m,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.28-7.33(m,1H),4.65(br s,2H),4.36-4.42(q,J＝7.2Hz,4H),4.28(br t,J＝7.2Hz,2H),3.62(s,2H),3.29-3.34(m,2H),2.77-2.79(m, 6H),1.35(t,J＝6.8Hz,3H)。MS m/z:415[M+H] +。
步骤8：化合物8合成
向反应液中加入8-8(100mg,241.27μmol)和H 2O(4mL)，然后加入LiOH.H2O(12.15mg,289.52μmol)，反应液在15℃搅拌20分钟。向反应液中加入1MHCl直到pH＝6。反应液通过HPLC分离，纯化得到产品8。 1HNMR(400MHz,DMSP-d6)δ＝8.62(d,J＝5.2Hz,1H),7.90(s,1H),7.67-7.68(dd,J＝1.6,5.2Hz,1H),7.45-7.47(m,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.17(t,J＝8.8Hz,1H),3.99(br t,J＝6.0Hz,2H),3.82(s,2H),3.77(s,2H),2.99(s,2H),2.36(t,J＝6.4Hz,2H),2.12(s,6H)。MS m/z:387[M+H] +。
实施例9：化合物9
Figure PCTCN2019074144-appb-000038
步骤1：化合物9-2合成
向反应瓶中加入化合物9-1(5g,32.23mmol)和溶剂CCl 4(100mL)，随后加入试剂AIBN(2.12g,12.89mmol)和NBS(7.46g,41.90mmol)，反应在80℃下反应12小时。将反应液过滤，滤液在水泵上拉干得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)得到化合物9-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:8.12(dd,J＝8.8,5.2Hz,1H),7.30(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.12-7.19(m,1H),4.81(s,2H)。
步骤2：化合物9-3合成
向反应瓶中加入化合物9-2(4.2g,17.95mmol)，甘氨酸甲酯盐酸盐(3.38g,26.92mmol)和溶剂DMF(35mL)，随后加入试剂DIPEA(6.96g,53.84mmol)，反应在25℃下反应12小时。将反应液用20mL H 2O和20mL EtOAc稀释，水相用EtOAc(20mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物9-3。
步骤3：化合物9-4合成
向反应瓶中加入化合物9-3(4.2g,17.34mmol)和溶剂THF(45mL)，H 2O(15mL)，随后加入试剂(Boc) 2O(5.68g,26.01mmol)和NaHCO 3(2.91g,34.68mmol)，反应在35℃下反应12小时。反应液加20ml H 2O，用EtOAc(30mL×2)萃取，20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物9-4。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:8.13-8.16(m,1H),7.30-7.38(m,1H),7.07-7.16(m,1H),4.91(s,1H),4.85(s,1H),4.05(s,1H),3.96(s,1H),3.76(d,J＝2.0Hz,3H),1.36-1.50(m,9H)。
步骤4：化合物9-5合成
向反应瓶中加入化合物9-4(4.4g,12.85mmol)和溶剂EtOH(40mL)，H 2O(20mL)，随后加入试剂Fe(2.15g,38.56mmol)和NH 4Cl(825.04mg,15.42mmol)，反应在78℃下反应2小时。反应液过滤，滤液加30mL H 2O和50ml EtOAc,分液，水相用EtOAc(30mL×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物9-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:6.81-6.85(m,,1H),6.73(d,J＝5.2Hz,1H),6.71(dd,J＝2.8Hz,1H),4.43(s,2H),3.81(br s,2H),3.71(s,3H),1.46(br s,9H)。
步骤5：化合物9-6合成
向反应瓶中加入化合物9-5(3.3g,10.57mmol)和溶剂甲苯(30mL)，随后加入AlMe 3(2M,6.87mL)，抽真空充氮气三次之后反应在110℃反应12小时。反应液用30mL的KHSO 4和NaHCO 3的混合溶液(pH＝5-6)淬灭，通过硅藻土过滤，滤液用EtOAc(30mL×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到化合物9-6。
步骤6：化合物9-7合成
向反应瓶中加入化合物9-6(0.5g,1.78mmol)和溶剂DMF(5mL)，随后在0℃下加入NaH(285.41mg,7.14mmol,纯度60％)，反应0.5小时后加入试剂N,N二甲氨基氯乙烷盐酸盐(513.90mg,3.57mmol,HCl)，反应在35℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝30:1)得到化合物9-7。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:7.30(br dd,J＝8.4,4.8Hz,1H),7.08-7.13(m,2H),4.52(br s,2H),3.95-4.04(m,1H),3.84-4.05(m,3H),2.62(s,1H),2.39(t,J＝6.4Hz,2H),2.15(s,6H),1.48(br s,9H)。
步骤7：化合物9-8合成
向反应瓶中加入化合物9-7(0.45g,1.28mmol)和溶剂HCl/EtOAc(4M)(5mL)，随后反应在25℃下反应2小时。反应液在水泵上拉干得到化合物9-8。
步骤8：化合物9-9合成
向反应瓶中加入化合物9-8(0.22g,764.53μmol)和DCM(2mL)，随后加入TEA(77.36mg,764.53μmol)，搅拌0.5小时后依次加入BB-1(105.37mg,588.10μmol),HOAc(0.1mL)，反应2小时后加入NaBH(OAc) 3(249.28mg,1.18mmol)，反应在25℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取水相，10mL饱和食盐水洗涤合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过制备HPLC纯化得到化合物9-9。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:11.07(br s,1H),8.88(d,J＝5.2Hz,1H),8.16(s,1H),7.91(d,J＝5.2Hz,1H),7.67-7.90(m,,1H),7.42-7.48(m,2H),4.59(br s,2H),4.39(q,J＝6.8Hz,2H),4.33(br s,2H),4.24(br t,J＝7.6Hz,2H),3.59(br s,2H),3.32(br s,2H),2.79(d,J＝4.4Hz,6H),1.35(t, J＝6.8Hz,3H)。
步骤9：化合物9合成
向反应瓶中加入化合物9-9(0.05g,110.88μmol)和溶剂H 2O(2mL)，随后加入试剂LiOH.H 2O(9.31mg,221.76μmol)，反应在25℃下反应0.5小时。将反应液过滤后通过制备HPLC纯化得到化合物9。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ:8.84(d,J＝5.2Hz,1H),8.11(s,1H),8.07(d,J＝5.2Hz,1H),7.54(dd,J＝8.8,4.8Hz,1H),7.40-7.46(m,1H),7.34(d,J＝3.2Hz,1H),4.60(s,2H),4.27-4.33(m,4H),3.72(s,2H),3.49(t,J＝7.6Hz,2H),2.96(s,6H)。MS m/z:387[M+H] +。
实施例10：化合物10
Figure PCTCN2019074144-appb-000039
步骤1：化合物10-2合成
向反应瓶中加入10-1(25g,106.83mmol)，DIEA(41.42g,320.48mmol,55.82mLq)和DMF(100mL)，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(20.12g,160.24mmol)，反应液在25℃搅拌16小时。向反应液中加入500mL水，乙酸乙酯萃取(100mL×5),合并有机相，并用无水硫酸钠干燥。减压浓缩得粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至1:1)，纯化得到产物纯品。得到黄色油状产品10-2。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.61-7.66(m,2H),7.28(dt,J＝2.7,8.0Hz,1H),4.03(s,2H),3.68(s,3H),3.40(s,2H),2.08(s,1H)。MS m/z:243[M+H] +。
步骤2：化合物10-3合成
向反应瓶中依次加入10-2(24g,99.09mmol)，DCM(250mL)，DIEA(38.42g,297.27mmol,51.78mL)，DMAP(605.29mg,4.95mmol)和Boc2O(64.88g,297.27mmol,68.29mL)，反应液在25℃搅拌16小时。反应液升温到40℃继续搅拌16小时。薄层层析检测(PLATE 1，石油醚：乙酸乙酯＝3:1，新点Rf＝0.6)显示：原料消失并生成新产物。向反应液中加入200mL水，然后用乙酸乙酯(150mLX3)萃取，合并有机 相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至5:1)，纯化得到10-3。
1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.71-7.76(m,1H),7.64-7.66(m,1H),7.36(q,J＝6.8Hz,1H),4.81(d,J＝15.3Hz,2H),4.11–4.16(m,2H),3.74(s,3H),1.46(s,5H),1.38(s,4H)。MS m/z:243[M-99] +。
步骤3：化合物10-4合成
向反应瓶中加入10-3(31g,90.56mmol)，Pd/C(5g,90.56mmol,5％纯度)和MeOH(400mL)，反应液置换氢气三次，然后在25℃和H2(15psi)作用下搅拌16小时反应液用硅藻土过滤，并用甲醇洗涤(300mLX3)，滤液减压浓缩得到产品10-4。
步骤4：化合物10-5合成
向反应瓶中加入10-4(5g,16.01mmol)和toluene(50mL)，然后加入AlMe 3(2M,12.01mL)，反应液在110℃搅拌16小时。将反应液降温后加入0.5M硫酸氢钾的水溶液中(50mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×5)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至10:1)，纯化得到产品10-5。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.44-8.64(m,1H),7.07(br s,1H),6.61-6.73(m,2H),4.25-4.43(m,4H),1.31-1.37(m,9H)。MS m/z:225[M-55] +。
步骤5：化合物10-6合成
向反应瓶中加入10-5(2.3g,4.60mmol)和DMF(20mL)，0℃下加入NaH(735.23mg,18.38mmol,60％纯度)反应液在15℃搅拌1小时，然后向反应瓶中加入N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(1.32g,9.19mmol)，最终的反应液在氮气保护下于40℃搅拌16小时。反应降温后将反应液倒入饱和的氯化铵水溶液中(150mL),乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：二氯甲烷：甲醇＝1:0至10:1)，纯化得到10-6。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ＝7.31(br d,J＝3.2Hz,1H),7.08-7.11(dd,J＝2.0,9.6Hz,1H),6.96-6.99(dt,J＝2.8,4.8Hz,1H),4.50(br s,2H),3.95-3.99(t,J＝6.4Hz,2H),3.90(s,2H),2.42(t,J＝6.4Hz,2H),2.16(s,6H),1.39-1.48(m,9H)。MS m/z:352[M+H] +。
步骤6：化合物10-7合成
向反应瓶中加入10-6(640mg,1.82mmol)和EtOAc(2mL)，然后向反应瓶中加入HCl/EtOAc(4M,20mL)，最终的反应液在25℃搅拌1小时。薄层层析检测(PLATE 1，二氯甲烷：甲醇＝10:1，Rf＝0)显示：原料消失并生成新产物。反应液减压浓缩得到10-7。MS m/z:252[M+H] +。
步骤7：化合物10-8合成
向反应瓶中加入10-7(250.54mg,870.67μmol)和DCM(1mL)，然后加入TEA(146.84mg,1.45mmol,201.98μL)，搅拌1小时后，依次加入BB-1(130mg,725.56μmol)和HOAc(0.1mL)，反应液继续搅拌2小时后加入醋酸硼氢化钠(307.55mg,1.45mmol)，反应液在15℃搅拌16小时。向反应液中加入碳酸氢钠饱和水溶液直到pH＝7，静置分液水相用二氯甲烷(10mLX3)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，粗产品通过HPLC分离，纯化得到产物纯品。冻干后所得产品又通过HPLC分离，纯化得到产品10-8。 1HNMR(400MHz,DMSO-d)δ＝11.09-11.12(m,1H),8.89(d,J＝5.2Hz,1H),8.18(s,1H),7.92(d,J＝5.2Hz,1H),7.57-7.62(m,2H),7.28-7.31(dt,J＝2.4,8.4Hz,1H),4.62(br s,2H),4.37-4.42(m,4H),4.27(br t,J＝7.2Hz,2H),3.65(s,2H),3.31-3.33(m,2H),2.79(d,J＝4.8Hz,6H),1.35(t,J＝6.8Hz,3H)。MS m/z:415[M+H] +。
步骤8：化合物10合成
向反应液中加入10-8(100mg,241.27μmol)和H2O(4mL)，然后加入LiOH.H 2O(12.15mg,289.52μmol)，反应液在15℃搅拌20分钟。向反应液中加入1MHCl直到pH＝6。反应液通过HPLC分离，纯化得到产品10。 1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.62(d,J＝5.2Hz,1H),7.87(s,1H),7.67-7.68(m,1H),7.36-7.46(m,2H),7.10(dt,J＝2.4,1H),3.97(br t,J＝6.4Hz,2H),3.82(s,2H),3.66(s,2H),2.98(s,2H),2.35(t,J＝6.4Hz,2H),2.12(s,6H)。MS m/z:387[M+H] +。
实施例11：化合物11
Figure PCTCN2019074144-appb-000040
步骤1：化合物11-2合成
向反应瓶中加入化合物11-1(15g,96.70mmol)和溶剂CCl 4(150mL)，随后加入试剂AIBN(11.11g,67.69mmol)和NBS(30.98g,174.05mmol)，反应在80℃下反应24小时。将反应液过滤，滤液在水泵上拉干得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)得到化合物11-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:7.41-7.44(m,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.14-7.20(m,1H),4.48(s,2H)。
步骤2：化合物11-3合成
向反应瓶中加入化合物11-2(4.7g,20.08mmol)，甘氨酸甲酯盐酸盐(3.78g,30.13mmol)和溶剂DMF(50mL)，随后加入试剂DIPEA(7.79g,60.25mmol)，反应在25℃下反应12小时。将反应液用30mL H 2O和30mL EtOAc稀释，水相用EtOAc(30mL×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物11-3。
步骤3：化合物11-4合成
向反应瓶中加入化合物11-3(5.2g,21.47mmol)和溶剂THF(50mL)，H 2O(17mL)，随后加入试剂(Boc) 2O(7.03g,32.20mmol)和NaHCO 3(3.61g,42.94mmol)，反应在35℃下反应12小时。反应液加20mL H 2O，用EtOAc(20mL×2)萃取，20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到化合物11-4。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:7.46-7.54(m,1H),7.36(br d,J＝8.0Hz,1H),7.19-7.27(m,1H),4.59(d,J＝13.2Hz,2H),3.99(s,1H),3.87(s,1H),3.73-3.77(m,3H),1.40-1.46(m,9H)。
步骤4：化合物11-5合成
向反应瓶中加入化合物11-4(7g,20.45mmol)、溶剂EtOH(70mL)和H 2O(35mL)，随后加入试剂Fe(3.43g,61.35mmol)和NH 4Cl(1.31g,24.54mmol)，反应在78℃下反应2小时。反应液过滤，滤液加30mL H 2O和50ml EtOAc，分液，水相用EtOAc(50mL×2)萃取，50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物11-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:6.93-6.97(m,1H),6.76(d,J＝7.6Hz,1H),6.56(br s,1H),4.56(br s,1H),4.48(s,2H),3.80(s,2H),3.70(s,3H),1.46(s,9H)。
步骤5：化合物11-6合成
向反应瓶中加入化合物11-5(6.2g,19.85mmol)和溶剂甲苯(60mL)，随后加入AlMe 3(2M,12.90mL)，抽真空充氮气三次之后反应在110℃反应12小时。反应液用30mL的KHSO 4和NaHCO 3的混合溶液(pH＝5-6)淬灭，通过硅藻土过滤，滤液用EtOAc(30mL×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到化合物11-6。
步骤6：化合物11-7合成
向反应瓶中加入化合物11-6(0.5g,1.78mmol)和溶剂DMF(5mL)，随后在0℃下加入NaH(285.41mg,7.14mmol,纯度60％)，反应0.5小时后加入试剂N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(513.90mg,3.57mmol,HCl)，反应在35℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝30:1)得到化合物11-7。
步骤7：化合物11-8合成
向反应瓶中加入化合物11-7(0.5g,1.42mmol,)和溶剂HCl/EtOAc(4M,5mL)，随后反应在25℃下反应2小时。反应液在水泵上拉干得到化合物11-8。
步骤8：化合物11-9合成
向反应瓶中加入化合物11-8(0.5g,1.74mmol)和DCM(2mL)，随后加入TEA(175.82mg,1.74mmol)，搅拌0.5小时后依次加入BB-1(207.55mg,1.16mmol)和HOAc(0.1mL)，反应2小时后加入NaBH(OAc) 3(491.01mg,2.32mmol)，反应在25℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭，用EtOAc(10mL×2)萃取水相，10mL饱和食盐水洗涤合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过制备HPLC纯化得到化合物11-9。
步骤9：化合物11合成
向反应瓶中加入化合物11-9(0.05g,120.64μmol)和溶剂H 2O(2mL)，随后加入试剂LiOH·H 2O(10.12mg,241.27μmol)，反应在25℃下反应0.5小时。将反应液过滤后通过制备HPLC纯化得到化合物11。 1H NMR (400MHz,D 2O)δ:8.85(d,J＝5.2Hz,1H),8.11(s,1H),8.02(d,J＝1.6Hz,1H),7.41-7.52(m,2H),7.38(d,J＝7.2Hz,1H),4.65(q,J＝35.6Hz,2H),4.32-4.41(m,3H),3.81-3.84(m,1H),3.74-3.81(m,1H),3.71-3.73(m,1H),3.59-3.62(m,2H),2.93(d,J 11.6Hz,6H)。MS m/z:387[M+H] +。
实施例12：化合物12
Figure PCTCN2019074144-appb-000041
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000042
步骤1：12-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料12-1(0.15g,1.09mmol)和溶剂二氧六环(4mL)，向体系中加入二氧化硒(132.55mg,1.19mmol)，在100℃下反应12h，向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析纯化(洗脱剂石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得到12-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:10.27(s,1H),8.98(d,J＝4.40Hz,1H),8.25(d,J＝8.00Hz,1H),7.70(dd,J＝8.40,4.80Hz,1H)。MS m/z:153[M+H] +。
步骤2：12-3合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料12-2(1g,6.57mmol)和无水二氯甲烷(10mL)，随后向体系中加入BB-3(1.57g,6.57mmol)，HOAc(39.48mg,657.43μmol,37.60μL)，在25℃下，搅拌0.5h，随后加入NaBH(OAc) 3(2.79g,13.15mmol)，在25℃下，搅拌0.5h，向体系中加入10mL水，二氯甲烷萃取(50mL×3)， 合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到12-3。MS m/z:376[M+H] +。
步骤3：12-4合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料12-3(1.8g,4.80mmol)和20mL乙酸乙酯，向体系中加入Pd/C(2g,5％纯度)，H 2(15psi)环境下，在25℃下，反应0.5h，将催化剂过滤，滤液减压浓缩，得到12-4。MS m/z:346[M+H] +。
步骤4：12-5合成
在预先干燥过的单口瓶中加入12-4(0.2g,579.05μmol)和5mL无水甲苯向体系中加入三甲基铝(2M,579.05μL)，在110℃下反应12h，向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品,通过快速柱层析(洗脱剂二氯甲烷:甲醇＝20:1-10:1)纯化得到12-5。 1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ:9.01(s,1H),8.23(dd,J＝4.40,0.80Hz,1H),7.27(dd,J＝8.00,0.80Hz,1H),7.12(dd,J＝8.00,4.80Hz,1H),7.04-7.06(m,1H),6.36(dq,J＝6.00,2.80Hz,2H),4.19(s,2H),3.72(s,5H),3.67-3.68(m,5H)。MS m/z:314[M+H] +。
步骤5：12-6合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料12-5(1000.00mg,3.19mmol)和20mL DMF，在0℃下，向体系中加入NaH(382.96mg,9.57mmol,60％纯度)，在0℃下，反应0.5h，随后加入2-氯-N,N-二甲基-乙胺盐酸盐(689.53mg,4.79mmol,HCl)，在40℃下，反应12h，向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(洗脱剂二氯甲烷:甲醇＝10:1-5:1)纯化得到12-6。MS m/z:385[M+H] +。
步骤6：12-7合成
在预先干燥过的单口瓶中加入12-6(0.1g,260.10μmol,1eq)和溶剂TFA(1mL)，在40℃下，反应1h，将体系减压浓缩，用饱和碳酸氢钠水溶液调节体系pH为7，乙酸乙酯萃取(3×10mL)，将水相减压浓缩，并用乙酸乙酯浸泡，得浸泡液减压浓缩得到12-7。MS m/z:235[M+H] +。
步骤7：12-8合成
在预先干燥过的单口瓶中加入12-7(0.04g,223.25μmol)和3mL无水甲醇，向体系中加入BB-1，HOAc(1.34mg,22.32μmol,1.28μL)，在25℃下，搅拌0.5h，随后加入NaBH 3CN(28.06mg,446.50μmol)，在25℃下，搅拌12h，向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到12-8。MS m/z:398[M+H] +。
步骤8：12合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料12-8和1mL H 2O，在25℃下，向体系中加入LiOH·H 2O(966.97ug,23.05μmol)，在25℃下反应5min，向反应液中加入1M HCl水溶液直到pH＝6。反应液通过制备HPLC分离纯化，得到化合物12。 1H NMR(400MHz,D 2O)δ：8.44(br d,J＝4.80Hz,1H),8.30(br d,J＝4.40Hz,1H),7.73(br d,J＝8.40Hz,1H),7.64(s,1H),7.54(br d,J＝4.40Hz,1H),7.41-7.46(m,1H),4.07(br t,J＝6.80Hz,2H),3.85(s,2H),3.73(s,2H),3.07-3.14(m,4H),2.66(s,6H)。MS m/z:370[M+H] +。
实施例13：化合物13
Figure PCTCN2019074144-appb-000043
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000044
步骤1：13-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料13-1(3.00g,24.17mmol)和20mL SOCl 2，在80℃下反应2h，体系直接减压浓缩，得到13-2。MS m/z:143[M+H] +。
步骤2：13-3合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料13-2和溶剂DMF(10mL)，随后向体系中加入N,N-二异丙基乙胺(1.80g,13.92mmol,2.42mL)，BB-3(1.44g,6.03mmol)，在25℃下，搅拌12h，向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(洗脱剂二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到13-3。MS m/z:346[M+H] +。
步骤3：13-4合成
在预先干燥过的单口瓶中加入13-3(0.15g,434.29μmol)和无水甲苯(3mL)，向体系中加入三甲基铝(2M,434.29μL)，在110℃下反应12h，向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1-10:1)纯化得到13-4。MS m/z:314[M+H] +。
步骤4：13-5合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料13-4(0.1g,319.13μmol)和溶剂DMF(2mL)，在0℃下，向体系中加入NaH(38.30mg,957.39μmol,60％)，在0℃下反应0.5h，随后加入2-氯-N,N-二甲基-乙胺盐酸盐(68.95mg,478.70μmol,HCl)，在40℃下反应24h,向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1-5:1)纯化得到13-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ:8.50(d,J＝5.60Hz,1H),8.43(s,1H),7.26(d,J＝7.60Hz,1H),7.12(d,J＝5.20Hz,1H),6.41-6.44(m,2H),3.94(t,J＝6.40Hz,2H),3.76(d,J＝7.60Hz,6H),3.67(s,2H),3.61(s,2H),3.14(s,2H),2.40(t,J＝6.80Hz,2H),2.12(s,6H)。
MS m/z:385[M+H] +。
步骤5：13-6合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料13-5(0.1g,260.10μmol)和溶剂TFA(1mL)在40℃下，搅拌1h，将体系浓缩，用饱和碳酸氢钠水溶液调节体系pH为7，乙酸乙酯萃取(20mL×1),水相直接减压浓缩，用乙酸乙酯浸泡，得浸泡液，减压浓缩得到13-6。MS m/z:235[M+H] +。
步骤6：13-7合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-1(0.04g,223.25μmol)和溶剂MeOH(3mL)，随后加入13-6(52.31mg,223.25μmol)，HOAc(1.34mg,22.32μmol,1.28μL)，在25℃下，搅拌0.25h，随后加入NaBH 3CN(28.06mg,446.50μmol)，在25℃下，搅拌0.25h，向体系中加入5mL水，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到13-7。MS m/z:398[M+H] +。
步骤7：13合成
预先干燥过的单口瓶中加入13-7(0.01g,23.05μmol,HCl)和溶剂H 2O(1mL)，在25℃下，向体系中加入LiOH·H 2O(966.97ug,23.05μmol)，在25℃下，搅拌5min，反应液用盐酸水溶液(2mol/L)调其至pH为6，反应液蒸干，粗品通过制备HPLC纯化得到13。 1HNMR(400MHz,D 2O)δ:8.52(t,J＝5.60Hz,2H),8.38(s,1H),7.72(s,1H),7.63(d,J＝5.20Hz,1H),7.35(d,J＝5.60Hz,1H),4.21(t,J＝6.40Hz,2H),3.96(s,2H),3.67(s,2H),3.31(t,J＝7.20Hz,2H),3.21(s,2H),2.84(s,6H)。MS m/z:370[M+H] +。
实施例14：化合物14
Figure PCTCN2019074144-appb-000045
Figure PCTCN2019074144-appb-000046
步骤1：化合物14-2合成
向反应瓶中加入化合物14-1(10g,72.40mmol)和溶剂二甲苯(50mL)，加热到140℃后在回流状态下分批加入试剂二氧化硒(12.05g,108.60mmol)，反应在140℃下反应12小时。反应液过滤，滤液在水泵上浓缩得到粗品。通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物14-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 10.56(s,1H),9.45(s,1H),9.09(d,J＝4.8Hz,1H),7.77(d,J＝4.8Hz,1H)。
步骤2：化合物14-3合成
向反应瓶中加入化合物14-2(1.9g,12.49mmol)和化合物BB-3(1.69g,14.99mmol)和溶剂二氯甲烷(20mL)和甲醇(10mL)，加入几滴醋酸调节溶液pH＝5-6,反应0.5小时后加入试剂NaBH(OAc) 3(5.29g,24.98mmol)，反应在25℃下反应2小时。反应液用20mL H 2O淬灭，用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，20ml饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品，通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1-3:1)纯化得到化合物14-3。
步骤3：化合物14-4合成
向反应瓶中加入化合物14-3(1.8g,4.80mmol)和溶剂乙醇(20mL)和水(10mL)，随后加入试剂Fe(803.44mg,14.39mmol)和NH 4Cl(307.79mg,5.75mmol)，反应在78℃下反应2小时。反应液过滤，滤液在水泵上浓缩掉大部分溶剂。加30mL H2O和30ml乙酸乙酯,分液，水相用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到化合物14-4。MS m/z:346[M+H] +。
步骤4：化合物14-5合成
向反应瓶中加入化合物14-4(1.2g,3.47mmol)和溶剂甲苯(12mL)，随后加入三甲基铝(2M,2.26mL)，抽真空充氮气三次之后反应在110℃反应12小时。将反应液用20mL饱和KHSO 4溶液淬灭，用10mL饱和NaHCO3溶液调节溶液pH＝7-8,过滤掉不溶物后水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，20mL饱和食盐水洗涤合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩有机相得到化合物14-5。MS m/z:314[M+H] +。
步骤5：化合物14-6合成
向反应瓶中加入化合物14-5(0.9g,4.79mmol)和DMF(10mL)，随后在0℃下加入NaH(765.91mg,19.15mmol,60％纯度)，反应0.5小时后加入试剂N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(1.38g,9.57mmol)，反应在25℃下反应12小时。加入10ml H 2O，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得到化合物14-6。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.61(s,1H),8.44(d,J＝4.8Hz,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(d,J＝ 4.8Hz,1H),6.46-6.53(m,2H),4.05(t,J＝6.4Hz,2H),3.83(d,J＝4.4Hz,6H),3.72(d,J＝3.6Hz,4H),3.19(s,2H),2.50(t,J＝6.8Hz,2H),2.19(s,6H)。MS m/z:385[M+H] +。
步骤6：化合物14-7合成
向反应瓶中加入化合物14-6(0.34g,1.30mmol)和溶剂三氟乙酸(3mL)，随后在40℃下反应2小时。反应液在水泵上浓缩得到粗品。用10ml饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝7-8，在水泵上浓缩得到粗品。用二氯甲烷：甲醇＝3:1的混合溶液20mL浸泡粗品，过滤，滤液在水泵上浓缩得到化合物14-7。MS m/z:235[M+H] +。
步骤7：化合物14-8合成
向反应瓶中加入化合物14-7(706.14mg,3.01mmol)和化合物BB-1(0.3g,1.67mmol)和甲醇(10mL)，用醋酸调节pH＝5-6，反应2小时后加入试剂NaBH 3CN(210.43mg,3.35mmol)，反应在25℃下反应1.5小时。反应液用10mL H 2O淬灭，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取水相，10mL饱和食盐水洗涤合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品，通过制备HPLC纯化得到化合物14-8。MS m/z:398[M+H] +。
步骤8：化合物14合成
向反应瓶中加入化合物14-8(0.05g,125.80μmol)和溶剂H 2O(2mL)，随后加入试剂一水合氢氧化锂(10.56mg,251.59μmol)，反应在25℃下反应0.5小时。反应液通过制备HPLC纯化得到化合物14。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.54-8.58(m,2H),8.42(d,J＝5.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.66(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(d,J＝5.2Hz,1H),4.24(t,J＝7.2Hz,2H),3.97(s,2H),3.71(s,2H),3.37(t,J＝7.2Hz,2H),3.22(s,2H),2.88(s,6H)。MS m/z:370[M+H] +。
实施例15：化合物15
Figure PCTCN2019074144-appb-000047
步骤1：化合物15-2合成
向反应瓶中加入化合物氯化亚砜(5.75g,48.33mmol)和溶剂四氢呋喃(150mL)，反应降温至0℃后缓慢滴加化合物15-1(5g,40.28mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液，随后缓慢升至25℃，反应3小时。过滤，滤饼在水泵上浓缩得到化合物15-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.26(br s,2H),8.10(dd,J＝7.4,1.2Hz,1H),8.04(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),6.91(t,J＝6.8Hz,1H),4.85(s,2H)。MS m/z:143,145[M+H] +。
步骤2：化合物15-3合成
向反应瓶中加入化合物15-2(3.8g,26.65mmol)和化合物BB-3(3.64g,31.98mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(40mL)，随后加入试剂N,N-二异丙基乙胺(10.33g,79.95mmol)，反应在25℃下反应12小时。加入25mL H 2O和30mL乙酸乙酯,分液，水相用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，25mL饱和食盐水洗涤合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品，通过快速柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝30:1)得到化合物15-3。
步骤3：化合物15-4合成
向反应瓶中加入化合物15-3(3.5g,10.13mmol)和溶剂甲苯(40ml)，随后加入三甲基铝(2M,6.59mL)，抽真空充氮气三次之后反应在110℃反应12小时。反应液用10mL的KHSO 4和NaHCO 3的混合溶液(pH＝5-6)淬灭，通过硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯(20ml×2)萃取，20mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到化合物15-4。
步骤4：化合物15-5合成
向反应瓶中加入化合物15-4(1g,5.23mmol)和溶剂N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，随后在0℃下加入NaH(837.54mg,20.94mmol,60％纯度)，反应0.5小时后加入N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(1.51g,10.47mmol)，反应在25℃下反应12小时。加入10ml H 2O，水相用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩有机相得到粗品。通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得到化合物15-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.41(dd,J＝6.4,1.6Hz,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(dd,J＝7.6,4.8Hz,1H),6.46-6.52(m,2H),4.26(t,J＝6.6Hz,2H),3.83(d,J＝6.0Hz,7H),3.77(s,2H),3.64(s,2H),3.24(s,2H),2.57(br t,J＝6.8Hz,2H),2.20(s,6H)。MS m/z:385[M+H] +。
步骤5：化合物15-6合成
向反应瓶中加入化合物15-5(0.3g,1.14mmol)和三氟乙酸(3mL)，随后在40℃下反应2小时。反应液在水泵上浓缩得到粗品。用10ml饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝7-8，在水泵上浓缩得到粗品。用二氯甲烷：甲醇＝3:1的混合溶液20mL浸泡粗品，过滤，滤液在水泵上浓缩得到化合物15-6。MS m/z:235[M+H] +。
步骤6：化合物15-7合成
向反应瓶中加入化合物15-6(0.25g,1.07mmol)，BB-1(159.32mg,889.19μmol)和甲醇(3mL)，用醋酸调节pH＝5-6，反应2小时后加入氰基硼氢化钠(111.75mg,1.78mmol)，反应在25℃下反应1.5小时。反应液用10mL H 2O淬灭，用乙酸乙酯(10ml×2)萃取水相，10mL饱和食盐水洗涤合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品。通过制备HPLC纯化得到化合物15-7。MS m/z:398[M+H] +。
步骤7：化合物15合成
向反应瓶中加入化合物15-7(0.03g,75.48μmol)和溶剂水(2mL)，随后加入试剂一水合氢氧化锂(6.33mg,150.95μmol)，反应在25℃下反应10分钟。反应液浓缩后通过制备HPLC纯化得到化合物15。 1H  NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.56(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(dd,J＝5.2,1.6Hz,1H),7.81(d,J＝7.6Hz,1H),7.75(s,1H),7.66(d,J＝5.2Hz,1H),7.34(dd,J＝7.6,5.2Hz,1H),4.22(t,J＝5.2Hz,2H),4.00(s,2H),3.69(s,2H),3.44(br t,J＝5.6Hz,2H),3.28(s,2H),2.96(s,6H)。MS m/z:370[M+H] +。
实施例16：化合物16
Figure PCTCN2019074144-appb-000048
步骤1：化合物16-2合成
向反应瓶中加入化合物16-1(2.45g,28.12mmol)和溶剂四氢呋喃(30mL)和水(10mL)，随后加入试剂碳酸氢钠(9.45g,112.49mmol)，(Boc) 2O(9.21g,42.18mmol)，反应在25℃下反应12小时。加入10mL H 2O，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，10ml无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品，用10ml石油醚打浆，过滤，浓缩滤液得到化合物16-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 5.06(br s,1H),3.60(d,J＝5.2Hz,2H),1.45(s,10H),0.84(m,4H)。
步骤2：化合物16-3合成
向反应瓶中加入化合物16-2(3.5g,18.69mmol)和溶剂二氯甲烷(40mL)，随后加入试剂三苯基膦(6.62g,25.24mmol)和四溴化碳(8.37g,25.24mmol)，反应在25℃下反应12小时。将反应液在水泵上浓缩得到粗品，通过快速柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得到化合物16-3。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm5.14(br s,1H),3.59(br s,2H),1.46(s,9H),1.05-1.10(m,2H),0.89-0.94(m,2H)。
步骤3：化合物16-4合成
向反应瓶中加入化合物16-3(1.4g,5.60mmol)和溶剂二甲基亚砜(15ml)，随后加入试剂KI(92.91mg,559.70μmol)和NaCN(1.37g,27.99mmol)，反应在25℃下反应12小时。反应液加入10mL H 2O稀释，用乙酸乙酯(10ml×2)萃取，10ml饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品，通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)纯化得到化合物16-4。
步骤4：化合物16-5合成
向反应瓶中加入化合物16-4(0.8g,4.08mmol)和溶剂乙醇(30mL)和氨水(10mL)，随后在氩气保护下加入雷尼镍(1g)，在氢气氛围下30psi,30℃反应6小时。将反应液通过硅藻土过滤，滤液在水泵上浓缩得到化合物16-5。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 4.93(s,1H),2.82-2.86(t,J＝7.2Hz,2H),1.62-1.64(t,J＝7.2Hz),1.43(s,9H),0.77(s,2H),0.64(s,2H)。
步骤5：化合物16-6合成
向反应瓶中加入化合物16-5(0.4g,2.00mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(10mL)，随后加入N,N-二异丙基乙胺(180.69mg,1.40mmol)，缓慢加入溴乙酸乙酯(266.83mg,1.60mmol)的N,N-二异丙基乙胺溶液(2mL)，加完后在25℃下反应10分钟。加入10mL H 2O,用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，10mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相得到粗品，通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)纯化得到化合物16-6。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 4.20(q,J＝7.2Hz,2H),3.39(s,2H),2.74(t,J＝7.2Hz,2H),1.83(s,2H),1.71(br t,J＝6.6Hz,1H),1.64-1.76(m,1H),1.43(br s,9H),1.26-1.31(m,3H),0.78(br s,2H),0.61-0.67(m,2H)。
步骤6：化合物16-7合成
向反应瓶中加入化合物16-6(0.16g,558.73μmol)和溶剂HCl/乙酸乙酯(4M,2mL)，反应在25℃下反应2小时。反应液在水泵上浓缩得到化合物16-7。MS m/z:187[M+H] +。
步骤7：化合物16-8合成
向反应瓶中加入化合物16-7(0.1g,536.91μmol)和溶剂甲醇(20mL)，随后加入试剂甲醇钠(174.02mg,3.22mmol)，反应在75℃下反应12小时。反应液用5mL H 2O淬灭后直接浓缩得到化合物16-8。MS m/z:141[M+H] +。
步骤8：化合物16-9合成
向反应瓶中加入化合物16-8(0.07g,499.35μmol)和溶剂甲醇(10mL)，加入化合物BB-1(89.47mg,499.35μmol)，用醋酸调节pH＝5-6，反应0.5小时后加入氰基硼氢化钠(62.76mg,998.70μmol)，反应在25℃下反应2小时。反应液用5mL H 2O淬灭后在水泵上浓缩得到粗品，通过制备HPLC纯化得到化合物16-9。MS m/z:304[M+H] +。
步骤9：化合物16合成
向反应瓶中加入化合物16-8(0.05g,164.82μmol)和溶剂N，N-二甲基甲酰胺(2mL)，随后加入NaH(19.78mg,494.46μmol,60％纯度)，反应在0℃下反应0.5小时后加入N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(28.68mg,247.23μmol)，反应在25℃下反应12小时。加入3ml H 2O淬灭反应，随后在水泵上直接浓缩得到粗品，通过制备HPLC纯化得到化合物16。 1H NMR(400MHz,D2O)δ:8.79(d,J＝5.2Hz,1H),8.02(s,1H),7.98(d,J＝4.8Hz,1H),4.61(s,2H),4.25(br s,2H),3.81(t,J＝6.8Hz,2H),3.54(br t,J＝5.4Hz,2H),3.21-3.29(m,2H),2.03(br s,2H),1.22(br s,2H),1.11(br s,2H)。MS m/z:347[M+H] +。
实施例17：化合物17
Figure PCTCN2019074144-appb-000049
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000050
步骤1：17-2合成
在预先干燥过的闷罐中加入原料17-1(5g,31.62mmol,4.35mL)和试剂NH 3/MeOH(7M,50mL)，在50℃下，搅拌24h，体系直接减压浓缩，得到17-2，MS m/z:129[M+H] +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.80(br s,2H)，7.19(br s,2H),1.27(s,4H)。
步骤2：17-3合成
在预先干燥过的单口瓶中加入试剂四氢化铝锂(4.44g,117.07mmol)和无水四氢呋喃(100mL)，在0℃下，随后加入原料17-2(5g,39.02mmol)，氮气保护，60℃搅拌12h，向体系中加入4.5mL水，随后加入4.5mL15％的氢氧化钠水溶液，随后加入13.5mL水，析出大量白色固体，直接过滤，留取滤液，得17-3直接进行下一步，MS m/z:101[M+H] +。
步骤3：17-4合成
在预先干燥过的烧瓶中加入上步反应所得17-3的处理液(3.91g,39.04mmol)和试剂(Boc) 2O(5.11g,23.42mmol,5.38mL)，在25℃下，搅拌4h，向体系中加入100mL乙酸乙酯，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1-1:1)得到17-4，MS m/z:201[M+H] +， 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 4.86(br s,1H),2.74(d,J＝6.0Hz,2H),2.22(s,2H),1.53(br s,2H),1.08(s,9H),0.34(m,4H)。
步骤4：17-5合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料17-4(575mg,2.87mmol)和溶剂DMF(10mL)，向体系中加入N,N-二异丙基乙胺(742.12mg,5.74mmol,1.00mL)，溴乙酸甲酯(439.19mg,2.87mmol,271.11uL)，在25℃下反应12h，向体系中加入100mL乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤(30ml×3),有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到17-5，MS m/z:273[M+H] +。
步骤5：17-6合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料17-5(0.5g,1.84mmol)和无水二氯甲烷(5mL)，向体系中加入N,N-二异丙基乙胺(237.28mg,1.84mmol,319.79uL)，氯甲酸苄酯(375.84mg,2.20mmol,313.20uL),在25℃下反应 0.5h,向体系中加入50mL的二氯甲烷，用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得17-6，307[M+H] +。
步骤6：17-7合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料17-6(0.4g,984.08μmol)和二氯甲烷(4mL)，随后加入三氟乙酸(1mL)，在25℃下反应3h,向系统中加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取(50mL×3),合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到17-7，307[M+H] +。
步骤7：17-8合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料17-7(0.3g,979.25μmol)和无水甲苯(10mL)，向体系中加入三甲基铝(1M,1.96mL)，在100℃下反应2h，向体系中加入5mL的1N的硫酸氢钾溶液，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品,通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝40:1-20:1)纯化,得到17-8，275[M+H] +。
步骤8：17-9合成
在预先干燥过的烧瓶中加入原料17-8(0.12g,437.45μmol)和溶剂乙酸乙酯(5mL)，随后加入试剂Pd/C(0.1g,5％purity)，在H 2(15psi)环境下，在25℃下，搅拌1h，将催化剂过滤，滤液浓缩得到17-9，141[M+H] +。
步骤9：17-10合成
在预先干燥过的烧瓶中加入原料17-9(0.05g,279.06μmol)和无水甲醇(3mL)，和原料BB-1(39.12mg,279.06μmol)，试剂冰乙酸(1.68mg,27.91μmol,1.60uL)，在25℃下，搅拌1h，随后加入氰基硼氢化钠(35.07mg,558.12μmol)，在25℃下，搅拌0.25h，向体系中加入1mL水，直接减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到17-10，304[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.70(d,J＝5.20Hz,1H),7.97(s,1H),7.72(dd,J＝5.20,1.60Hz,1H),5.93(s,1H),4.42(q,J＝7.20Hz,2H),4.07(s,2H),3.67(s,2H),3.10(br s,2H),2.81(s,2H),1.42(t,J＝6.80Hz,3H),0.486(m,4H)
步骤10：17合成
在预先干燥过的烧瓶中加入原料17-10(0.02g,65.93μmol)和溶剂DMF(1mL),在0℃下，向体系中加入NaH(7.91mg,197.79μmol,60％纯度)，在0℃下搅拌0.5h，随后加入2-氯-N,N-二甲基-乙胺盐酸盐(14.24mg,98.89μmol)，在25℃下，搅拌12h。向体系中加入1mL饱和氯化铵水溶液，减压浓缩得到粗品,粗品通过制备HPLC纯化得到化合物17，347[M+H] +。 1H NMR(399MHz,D 2O)δppm 8.46(d,J＝5.20Hz,1H),7.63(s,1H)，7.57(dd,J＝5.20,1.60Hz,1H),3.86(s,2H),3.70(br s,2H),3.56(br s,2H),3.21(m,2H),3.09(s,1H),2.83(s,6H),2.34(s,1H),0.52(s,2H),0.42(s,2H)
实施例18：化合物18
Figure PCTCN2019074144-appb-000051
Figure PCTCN2019074144-appb-000052
步骤1：化合物18-2合成
向反应瓶中加入18-1(15g,125.43mmol)和dioxane(200mL)，然后加入NaOH(1M,250.85mL)和Boc 2O(54.75g,250.85mmol)，反应液在25℃搅拌3小时。反应结束后向反应瓶中加入饱和氯化铵水溶液，直到pH＝7,减压浓缩除去二氧六环，用石油醚萃取(50mLx3),合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩的到粗产品。粗产品通过未经纯化直接用于下一步。得到化合物18-2。
步骤2：化合物18-3合成
向反应瓶中加入18-2(15g,81.86mmol),乙酸乙酯(300mL)和H 2O(300mL)，然后加入NaIO 4(70.03g,327.43mmol)和RuCl 3(509.39mg,2.46mmol)，反应在25℃搅拌2小时。向反应液中加入异丙醇(300mL)，搅拌0.5小时后有大量棕绿色固体生成，通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤后，减压浓缩后的水相用乙酸乙酯萃取(200mLx3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，倾倒出有机相后减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(梯度淋洗：石油醚：乙酸乙酯＝1:0至1:1)，纯化得到产物纯品。得到化合物18-3。1H NMR(400Hz,CDCl3)δ＝7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝2.0Hz,1H),7.36-7.39(dd,J＝6.0Hz,2.0Hz,2H),4.10(s,2H),3.73(s,3H),3.45(s,2H),2.10(s,1H)。MS m/z:142[M-55] +。
步骤3：化合物18-4合成
向反应瓶中加入18-3(20g,101.40mmol)，THF(200mL)和H 2O(100mL)，然后在0℃加入LiOH.H 2O(1M,101.40mL)，反应在25℃搅拌16小时。向反应液中加入5％的柠檬酸直到pH＝3，然后乙酸乙酯萃取(200mLx3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，倾倒出有机相并用无水硫酸钠干燥。未经纯化直接用于下一步。得到化合物18-4。
步骤4：化合物18-5合成
向反应瓶中加入18-4(15g,69.69mmol)和Toluene(150mL)，然后加入TEA(17.63g,174.22mmol)和DPPA(28.77g,104.53mmol)，反应于氮气保护下在110℃搅拌1小时，然后加入BnOH(15.07g,139.38mmol)，反应在110℃和氮气保护下继续搅拌1小时。反应降温到室温后向反应液中加入水(300mL)，然后用乙酸 乙酯萃取(150mLx3),合并有机相并用无水硫酸钠干燥，倾倒出有机相减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离纯化得到产物纯品。得到化合物18-5。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝6.99-7.08(m,5H),5.60(br,1H),4.80-5.02(m,3H),3.35(br,1H),2.35-2.39(m,2H),1.18(br s,10H),0.96-0.99(m,1H),0.65-0.67(m,1H),0.02-0.04(m,1H)。MS m/z:221[Ms-100+1] +
步骤5：化合物18-6合成
向反应瓶中加入18-5(9.3g,29.03mmol)和乙酸乙酯(60mL)，然后加入HCl/乙酸乙酯(4M,160mL)，反应在25℃搅拌2小时。反应减压浓缩得到粗产品。粗产品未经纯化直接用于下一步。得到化合物18-6。1H NMR(400MHz,MeOD)δ＝7.30-7.36(m,5H),5.09-5.16(m,2H),3.03(br s,1H),2.74-2.84(m,2H),1.13-1.28(m,1H),1.07-1.11(m,1H),0.57-0.59(m,1H)。MS m/z:221Ms+H] +
步骤6：化合物18-7合成
向反应瓶中加入18-6(3g,11.69mmol),TEA(2.36g,23.37mmol)和二氯甲烷(30mL)，在25℃加入乙醛酸乙酯(2.39g,11.69mmol)和HOAc(0.5mL)，反应在25℃搅拌2小时后加入NaBH(OAc) 3(4.95g,23.37mmol,2eq)，最终的反应在25℃搅拌16小时。向反应中加入水(100ml)，乙酸乙酯萃取(100mL×3),合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。未经纯化直接用于下一步。得到化合物18-7。MS m/z:307[Ms+H] +。
步骤7：化合物18-8合成
向反应瓶中加入18-7(3.58g,11.69mmol)，DIEA(3.02g,23.37mmol)和二氯甲烷(40mL)，然后加入Boc 2O(3.83g,17.53mmol)，反应在25℃搅拌16小时。反应液减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离纯化得到产物纯品。得到化合物18-8。1H NMR(400MHz,CDC3)δ＝7.19-7.32(m,5H),6.66(br s,1H),4.99-5.11(m,2H),4.04-4.15(m,2H),3.86(s,2H),3.25-3.40(m,2H),2.60(br s,1H),1.43(s,9H),1.17-1.19(m,3H),1.08(br s,1H),0.94(br s,1H),0.29(br s,1H)。
步骤8：化合物18-9合成
向反应瓶中加入18-8(0.5g,1.23mmol)，Pd/C(0.3g,1.23mmol)和THF(50mL)，然后氢气置换三次后，在H2和25℃搅拌0.25小时。反应液通过硅藻土过滤，并用甲醇洗涤(50mLx3)，滤液减压浓缩得到粗产品，未经纯化直接用于下一步。得到化合物18-9。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝4.43-4.48(m,1H),4.17-4.20(m,3H),4.02-4.05(m,2H),3.34-3.35(m,2H),1.48(s,9H),1.26-1.29(m,4H),1.00-1.02(m,1H),0.73-0.99(m,1H),0.51-0.52(m,1H)。MS m/z:273[Ms+H] +。
步骤9：化合物18-10合成
向反应瓶中加入18-9(0.33g,1.21mmol)，CH 3ONa(392.74mg,7.27mmol)和MeOH(20mL)，反应在70℃搅拌16小时。反应液过滤后减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离纯化得到产物纯品。得到化合物18-10。MS m/z:171[Ms-55] +。
步骤10：化合物18-11合成
向反应瓶中加入18-10(110mg,486.14μmol)和DMF(2mL)，0℃加入NaH(77.78mg,1.94mmol)，搅拌0.5小时后加入N,N-二甲胺氯乙烷盐酸盐(140.05mg,972.28μmol)，反应在40℃搅拌3小时。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(20mL)，乙酸乙酯萃取(5mLx3)，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品。粗产品通过自动过柱机COMBI-FLASH分离(纯化得到产物纯品。得到化合物18-11。
步骤11：化合物18-12合成
向反应瓶中加入18-11(60mg,201.75μmol)和乙酸乙酯(5mL)然后加入HCl/乙酸乙酯(4M,5mL)，反应在25℃搅拌1小时。反应液减压浓缩得到粗产品。粗产品未经纯化直接用于下一步。得到化合物18-12。MS m/z:198[Ms+H] +。
步骤12：化合物18-13合成
向反应瓶中加入18-12(48mg,205.36μmol)，TEA(20.78mg,205.36μmol)和二氯甲烷(2mL)，然后加入BB-1(36.79mg,205.36μmol)和AcOH(0.05)，反应在25℃搅拌1小时后加入NaBH(OAc) 3(65.29mg,308.04μmol)，最终的反应在25℃搅拌0.5小时。向反应中加入饱和碳酸氢钠水溶液直到pH＝7，减压浓缩除去二氯甲烷，向水相中加入0.5mL乙醇。残余物通过制备HPLC纯化得到化合物18-13。1H NMR(400MHz,DMSO-d)δ＝8.85(dd,J＝8.0Hz,5.2Hz 1H),8.05(s,1H),8.02(dd,J＝5.2,1.6Hz,1H),4.79-4.83(m,1H),4.65–4.66(m,2H),4.43-4.47(m,1H),4.33-4.42(m,1H),3.72(d,J＝12.8Hz,1H),3.41-3.44(m,2H),3.33-3.40(m,1H),2.93-2.96(m,7H),1.83-1.84(m,1H),1.32-1.41(m,4H),0.94(dt,J＝4.2,6.0Hz,1H)。MS m/z:361[Ms+1] +。
步骤13：化合物18合成
向反应瓶中加入18-13(25mg,69.36μmol)和H 2O(1mL)，然后加入LiOH.H 2O(5.82mg,138.72μmol)，反应在25℃搅拌0.5小时。向反应中加入1M盐酸水溶液直到pH＝6。粗产品通过制备HPLC纯化得到化合物18。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.55(d,J＝5.2Hz,1H),7.87(s,1H),7.61-7.62(m,1H),4.13(d,J＝12.8Hz,1H),4.03(br s,1H),3.84(d,J＝14.0Hz,1H),3.63(d,J＝14.0Hz,1H),3.37(br d,J＝4.8Hz,1H),3.34(br d,J＝4.2Hz,1H),3.06(br s,1H),2.91-2.95(m,1H),2.84(br d,J＝13.2Hz,1H),2.67(br s,1H),2.40(br s,6H),1.84(t,J＝12.0Hz,1H),1.40(br dd,J＝5.2,5.6Hz,1H),0.86(br dd,J＝1.6,6.4Hz,1H),0.53(br d,J＝4.0Hz,1H)。MS m/z:333[Ms+H] +。
实施例19：化合物19的制备
Figure PCTCN2019074144-appb-000053
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000054
步骤1：化合物19-1合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-2-1(0.4g,1.87mmol)和溶剂N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下，向体系中加入NaH(298.70mg,7.47mmol,60％纯度)，在0℃下反应0.5小时，随后加入N,N-二乙氨基氯乙烷盐酸盐(481.92mg,2.80mmol)，在40℃下，搅拌12h，向体系中加入10mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)， 合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1-3:1)纯化得到19-1。MS m/z:314[M+H] +。
步骤2：化合物19-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料19-1(0.1g,319.05μmol)和试剂HCl/MeOH(4M,5mL)，在25℃下，搅拌1小时，体系直接减压浓缩得到19-2。MS m/z:214[M+H] +。
步骤3：化合物19-3合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料19-2(0.1g,400.35μmol,HCl)，BB-1(68.32mg,381.29μmol)和无水二氯甲烷(4mL)，随后加入试剂N,N-二异丙基乙胺(59.13mg,457.55μmol,79.69μL)，冰乙酸(1.14mg,19.06μmol,1.09μL)，调节体系pH为6，在25℃下，搅拌0.5小时，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(161.62mg,762.58μmol)，在25℃下，搅拌0.5小时，加入5mL水，体系用二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有机相，用5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩有机相得到粗品，粗品通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1-5:1)纯化得到19-3。MS m/z:375[M+H] +。
步骤4：化合物19合成
在预先干燥过的单口瓶中加入19-3(0.05g,132.81μmol)和水(2mL)，在25℃下，体系中加入LiOH.H 2O(27.86mg,664.03μmol)，在25℃下，搅拌10分钟，用1M的盐酸水溶液调节体系pH为7，直接减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到19。 1H NMR(400MHz,D 2O)δppm 8.43(d,J＝4.80Hz,1H),7.60(s,1H),7.54(dd,J＝5.20,1.60Hz,1H),3.74(s,2H),3.66(br t,J＝6.40Hz,2H),3.40-3.54(m,4H),3.07-3.22(m,6H),2.81(br s,2H),1.73(br s,2H),1.09-1.21(t,6H)。MS m/z:349[M+H] +。
实施例20：化合物20
Figure PCTCN2019074144-appb-000055
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000056
步骤1：化合物20-1合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-2-1(0.4g,1.87mmol)和溶剂N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下，向体系中加入NaH(298.70mg,7.47mmol,60％纯度)，在0℃下反应0.5小时，随后加入1-(2-氯乙基)吡咯烷盐酸盐(476.28mg,2.80mmol)，在40℃下，搅拌12小时，向体系中加入10mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(二氯 甲烷：甲醇＝10:1-3:1)纯化得到20-1。MS m/z:312[M+H] +。
步骤2：化合物20-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料20-1(0.1g,321.11μmol)和试剂HCl/MeOH(4M,5mL)，在25℃下反应1小时，体系直接减压浓缩得到20-2。MS m/z:212[M+H] +。
步骤3：化合物20-3合成
在预先干燥过单口瓶中加入原料20-2(0.1g,403.61μmol)，BB-1(68.87mg,384.39μmol)和无水二氯甲烷(4mL)，随后加入试剂N,N-二异丙基乙胺(59.61mg,461.27μmol,80.34μL)，冰乙酸(1.15mg,19.22μmol,1.10μL)，调节体系pH为6，在25℃下，搅拌0.5小时，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(162.94mg,768.78μmol)，在25℃下反应0.5小时。加入5mL水，体系用二氯甲烷(3×50mL)萃取，合并有机相，用5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩有机相得到粗品，粗品通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1-5:1)纯化得到20-3。MS m/z:375[M+H] +。
步骤4：化合物20合成
在预先干燥过的单口瓶中加入20-3(0.05g,133.52μmol)和水(2mL)，在25℃下，向体系中加入LiOH.H 2O(28.01mg,667.60μmol)，在25℃下，搅拌10分钟，用1M的盐酸水溶液调节体系pH为7，直接减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到20。 1H NMR(400MHz,D 2O)δppm 8.44(d,J＝5.20Hz,1H),7.60(s,1H),7.55(dd,J＝5.20,1.20Hz,1H),3.75(s,2H),3.66(t,J＝6.00Hz,2H),3.40-3.53(m,4H),3.26(br t,J＝6.00Hz,6H),2.81(br s,2H),1.91(br s,4H),1.73(br s,2H)。MS m/z:347[M+H] +。
实施例21：化合物21
Figure PCTCN2019074144-appb-000057
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000058
步骤1：化合物21-1合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料BB-2-1(0.4g,1.87mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，在0℃下，向体系中加入NaH(298.70mg,7.47mmol,60％纯度)，在0℃下反应0.5小时，随后加入2-氯乙基甲基醚(264.74mg,2.80mmol,254.56μL)，在40℃下，搅拌12小时，向体系中加入10mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到21-1。MS m/z:217[M+H] +。
步骤2：化合物21-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料21-1(0.2g,734.38μmol)和试剂HCl/MeOH(4M,5mL)，在25℃下，反应0.5小时，体系直接减压浓缩得到21-2。MS m/z:173[M+H] +。
步骤3：化合物21-3合成
在预先干燥过单口瓶中加入21-2(0.15g,718.79μmol,HCl)，BB-1(122.65mg,684.56μmol)和无水二氯甲烷(4mL)，随后加入试剂N,N-二异丙基乙胺(106.17mg,821.47μmol,143.08μL)，冰乙酸(2.06mg,34.23μmol,1.96μL)，调节体系pH为6，在25℃下，搅拌0.5小时，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(290.17mg,1.37mmol)，在25℃下，反应0.5小时，加入5mL水，体系用二氯甲烷(3×50mL)萃取，合并有机相，用5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩有机相得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到21-3。MS m/z:336[M+H] +。
步骤4：化合物21合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料21-3(0.05g,134.46μmol)和水(1mL)，在25℃下，向体系中加入LiOH.H 2O(28.21mg,672.30μmol)，在25℃下，反应5分钟，用1M的盐酸水溶液调节体系pH为7，直接减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到21。 1H NMR(400MHz,D 2O)δppm 8.39(d,J＝5.20Hz,1H),7.55(s,1H),7.49(d,J＝5.20Hz,1H),3.71(s,2H),3.37-3.50(m,8H),3.21(s,3H),2.76(br s,2H),1.68(br s,2H)。MS m/z:308[M+H] +。
实施例22：化合物22的制备
Figure PCTCN2019074144-appb-000059
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000060
步骤1：22-1合成
在预先干燥过单口瓶中加入原料BB-5(0.3g,1.17mmol)，4,4-二氟哌啶盐酸盐(221.35mg,1.40mmol)和无水二氯甲烷(10mL)，随后加入试剂冰乙酸(3.51mg,58.53μmol,3.35μL)，调节体系pH＝6，在25℃下，搅拌0.5小时，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(496.16mg,2.34mmol)，在25℃下，反应0.5小时，向体系中加入5mL水，体系用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，用5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1-5:1)纯化得到22-1。MS m/z:362[M+H] +。
步骤2：22-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料22-1(0.2g,553.36μmol)和试剂HCl/MeOH(4M,10.00mL)，在25℃下，反应1小时，体系直接减压浓缩得到22-2。MS m/z:262[M+H] +。
步骤3：22-3合成
在预先干燥过单口瓶中加入原料22-2(0.16g,537.32umol,HCl)和无水二氯甲烷，随后加入N,N-二异丙基乙胺(79.36mg,614.09μmol,106.96μL)，BB-1(91.69mg,511.74μmol)，冰乙酸(1.54mg,25.59μmol,1.46μL)，调节体系pH＝6，在25℃下，搅拌0.5小时，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(216.92mg,1.02mmol)，在25℃下，搅拌0.5小时，加入5mL水，体系用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相用5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩有机相得到粗品，粗品通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1-5:1)纯化得到22-3。MS m/z:425[M+H] +。
步骤4：22合成
在预先干燥过单口瓶中加入原料22-3(0.05g,117.79μmol)和水(1mL)，随后加入试剂LiOH.H 2O(28.21mg,1.18mmol)，在25℃下，搅拌5分钟，用1M的盐酸水溶液调节体系pH为7，直接减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到22。 1H NMR(400MHz,D 2O)δppm 8.44(d,J＝4.80Hz,1H),7.60(s,1H),7.54(dd,J＝5.20,1.60Hz,1H),3.76(s,2H),3.51(t,J＝6.80Hz,2H),3.45(s,4H),2.79(br s,6H),2.71(br d,J＝6.40Hz,2H),1.89-2.11(m,4H),1.73(br s,2H)。FNMR(400MHz,D 2O)δppm 122.211。MS m/z:425[M+H] +。
实施例23：化合物23的制备
Figure PCTCN2019074144-appb-000061
合成路线：
Figure PCTCN2019074144-appb-000062
步骤1：23-1合成
在预先干燥过单口瓶中加入原料BB-5(0.5g,1.95mmol),氮杂环丁烷盐酸盐(167.07mg,2.93mmol,197.49μL)和无水二氯甲烷(4mL)，随后加入试剂冰乙酸(5.86mg,97.54μmol,5.58μL)，调节体系pH＝6，在25℃ 下，搅拌0.5小时，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(826.93mg,3.90mmol)，在25℃下，反应0.5小时，加入10mL水，体系用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，用5mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品，粗品通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1-5:1)纯化得到23-1。MS m/z:298[M+H] +。
步骤2：23-2合成
在预先干燥过的单口瓶中加入原料23-1(0.1g,336.26μmol)和试剂HCl/MeOH(4M,10mL)，在25℃下，反应0.5小时，体系直接减压浓缩得到23-2。MS m/z:198[M+H] +。
步骤3：22-3合成
在预先干燥过单口瓶中加入原料23-2(0.1g,427.83μmol)，BB-1(73.01mg,407.46μmol)和无水二氯甲烷(4mL)，随后加入试剂N,N-二异丙基乙胺(63.19mg,488.95μmol,85.16μL)，冰乙酸(1.22mg,20.37μmol,1.17μL)，调节体系pH＝6，在25℃下，搅拌0.5小时，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(172.71mg,814.91μmol)，在25℃下，反应0.5小时，直接减压浓缩得到粗品，粗品通过快速柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1-1:1)纯化得到22-3。MS m/z:361[M+H] +。
步骤4：23合成
在预先干燥过单口瓶中加入原料23-3(50.00mg,138.72μmol)和溶剂水(1mL)，随后加入试剂LiOH.H 2O(16.61mg,693.58μmol)，在25℃下，搅拌5分钟，用1M的盐酸水溶液调节体系pH为7，直接减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC纯化得到23。 1H NMR(400MHz,D 2O)δppm 8.45(d,J＝5.20Hz,1H),7.61(s,1H),7.55(dd,J＝4.80,1.20Hz,1H),4.00(br t,J＝8.40Hz,4H),3.75(s,2H),3.52(t,J＝5.20Hz,2H),3.42(s,4H),3.26(t,J＝5.20Hz,2H),2.81(br s,2H),2.26-2.42(m,2H),1.72(br s,2H)
实施例24：化合物24的制备
Figure PCTCN2019074144-appb-000063
步骤1：化合物24-2合成
将化合物24-1(2g,19.39mmol)溶到水(5mL)和四氢呋喃(30mL)中，加入碳酸氢钠(2.44g，29.08mmol)，最后加入BB-6(5.80g，23.26mmol)，22℃搅拌14h。取锥形瓶，加入50mL水，倒入反应液，加入50mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物。馏分减压浓缩。通过快速柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1-1:1)纯化得到化合物24-2。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.29-7.38(m,5H),5.37(br s,1H),5.01(s,2H),3.71-3.77(m,2H),2.77(s,1H),1.84(t,J＝6.4Hz,2H),1.33(s,6H)。
MS m/z:238[M+H] +。
步骤2：化合物24-3合成
将化合物24-2(10g，42.14mmol)溶到二氯甲烷(50mL)中，0℃下加入戴斯马丁氧化剂(19.66g,46.36mmol)，然后升温到15℃，反应12h。取锥形瓶，加入40mL水，倒入反应液，加入40mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物24-3。MS m/z:236[M+H] +。
步骤3：化合物24-4合成
在预先干燥的圆底单口瓶，加入化合物24-3(6.53g,73.32mmol)，用(100mL)二氯甲烷溶解，再加入三乙胺(7.42g,73.32mmol)，滴加冰乙酸(293.51mg,4.89mmol)，调至PH＝7，搅拌0.5h，再加入醋酸硼氢化钠(20.72g，97.76mmol)。15℃搅拌2h。取锥形瓶，加入60mL水，倒入反应液，加入60mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物。粗品经过硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙脂＝10:1,5:1,3:1,1:1)，馏分减压浓缩，得到化合物24-4。MS m/z:309[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 8.05-7.75(m,3H),7.35-7.32(m,2H),5.01(s,2H),3.72(s,3H),2.89-2.83(m,1H),2.04–1.93(m,3H),1.43–1.25(m,6H)。
步骤4：化合物24-5合成
将化合物24-4(5.3g,17.19mmol)溶到四氢呋喃(60mL)和水(15mL)中，加入碳氢酸钠(5.78g,68.75mmol)和Boc 2O(4.50g,20.62mmol)，15℃搅拌5h。反应液直接减压浓缩得到化合物24-5。MS m/z:409[M+H] +。
步骤5：化合物24-6合成
将化合物24-5(0.5g,1.22mmol)溶到EtOAc(5mL)中，加入Pd/C(0.5g,5％纯度)，15℃反应2h。取圆底烧瓶，硅藻土过滤，馏分直接减压浓缩得到残余物，粗品经过硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙脂＝10:1,5:1,3:1,1:1)，馏分减压浓缩，得到化合物24-6。MS m/z:275[M+H] +。
步骤6：化合物24-7合成
将化合物24-6(1.4g,5.10mmol)溶到无水甲苯(30mL)中，加入AlMe 3(735.73mg,10.21mmol)，15℃反应2h。在反应液中加1mL水，直接旋干，然后用20mL二氯甲烷：甲醇＝20:1直接泡产品，然后用硅藻土过滤，馏分减压浓缩得到残余物。粗品经过硅胶柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，馏分减压浓缩。得到化合物24-7。MS m/z:243[M+H] +。
步骤7：化合物24-8合成
把化合物24-7(237.78mg,1.65mmol)溶于DMF(5mL)中，0℃下将氢化钠(198.07mg,3.30mmol)加入到 反应液中，0.5h后将N,N-二甲基氯乙胺盐酸盐(237.78mg,1.65mmol)加入到反应液中，40℃搅拌12h。取锥形瓶，加入20mL饱和氯化铵溶液，倒入反应液，加入20mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物。粗品经过硅胶柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，馏分减压浓缩，得到化合物24-8。MS m/z:314[M+H] +。
步骤8：化合物24-9合成
把化合物24-8(0.2g,638.09μmo)溶到HCl/MeOH(4M,5mL)，15℃搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到化合物24-9。MS m/z:214[M+H] +。
步骤9：化合物24-10合成
把化合物24-9(0.2g,800.70μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入BB-1(143.46mg,800.70μmol)，三乙胺(81.02mg,800.70μmol)加入到反应液中，用冰乙酸(9.62mg,160.14μmol)调pH＝7，25℃搅拌0.5h，后将醋酸硼氢化钠(339.40mg,1.60mmol)加入到反应液中，15℃搅拌2h。取锥形瓶，加入20mL水，倒入反应液，加入20mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物24-10。MS m/z:377[M+H] +。
步骤10：化合物24合成
把化合物24-10(0.1g,265.61μmol)溶于水(2mL)中，将氢氧化锂(11.15mg,265.61μmol)加入到反应液中，15℃搅拌0.5h。反应液直接减压浓缩得到残余物。通过制备HPLC得到化合物24。MS m/z:349[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CD 3OD)δppm 8.52(d,J＝4.8Hz,1H),8.06(s,1H),7.71(d,J＝4.8Hz,1H),3.81(s,2H),3.73-3.79(m,2H),3.53(s,2H),3.15-3.21(m,2H),2.81(s,6H),2.53-2.60(m,2H),1.91(m,2H),1.32(s,6H)。
实施例25：化合物25的制备
Figure PCTCN2019074144-appb-000064
步骤1：化合物25-2合成
把化合物25-1(10.00g,97.87mmol)和HCl(12M,8.16mL)溶于MeOH(400mL)，将(Boc) 2O(21.36g,97.87 mmol)溶于MeOH(400mL)中并缓慢滴加至反应液里。反应液在10℃下搅拌12h。反应直接用碳酸氢钠饱和溶液(500mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(300mL)×3，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到产品25-2，直接用于下一步无需纯化。
步骤2：化合物25-3合成
将化合物25-2(5.00g,24.72mmol)和二异丙基乙胺(6.39g,49.43mmol)溶于DMF(100mL)中，0℃下将溴乙酸乙酯(1.65g,9.89mmol)加入到反应体系中，并在10℃搅拌12h。反应液用水(50mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(60mL)×3，合并有机相并用饱和食盐水洗(100mL)×3，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品直接浓缩得到产品25-3无色油状物。无需纯化，直接用于下一步，MS m/z:289[M+H] +。
步骤3：化合物25-4合成
将化合物25-3(10.00g,34.68mmol)和NaHCO 3(2.91g,34.68mmol)溶于THF(120mL)和水(30mL)中，0℃下将化合物BB-6(7.35g,29.48mmol)加入到反应体系中并将反应在15℃下搅拌12h。反应用水(200mL)淬灭并用乙酸乙酯萃取(80mL)×3，有机相用无水硫酸钠干燥浓缩。粗品通过快速柱层析得到产品25-4黄色油状物，MS m/z:423[M+H] +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δppm 7.21-7.42(m,5H),5.128(s,2H),4.09(d,J＝8Hz,2H),3.15(s,2H),2.83-2.99(m,4H),1.45(s,9H),1.17(t,J＝7.2Hz,3H),0.897(s,6H)。
步骤4：化合物25-5合成
将化合物25-4(5.00g,11.83mmol)溶于乙酸乙酯(25mL)中，15℃下加入HCl/EtOAc(4M,16.67mL)，并搅拌0.5h。反应液直接减压浓缩得到粗品产化合物25-5，MS m/z:322[M+H] +。
步骤5：化合物25-6合成
将化合物25-5(3.00g,8.36mmol，HCl)溶于EtOH(50mL)中，0℃下将EtONa(1.14g,16.72mmol)加入到反应体系中，反应在15℃下搅拌12h。反应液直接减压浓缩，粗品用乙酸乙酯(50mL)溶解，水(100mL)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到产品25-6，MS m/z:277[M+H] +。
步骤6：化合物25-7合成
将化合物25-6(0.3g,1.09mmol)溶于DMF(10mL)中，0℃下将NaH(173.69mg,4.34mmol，纯度:60％)加入到反应体系中，并将反应在0℃搅拌0.5h，然后将N,N-二甲氨基氯乙烷盐酸盐(116.80mg,1.09mmol)加入到反应体系中并将反应在40℃搅拌12h。反应液用饱和氯化铵(50mL)淬灭，乙酸乙酯萃取(15mL)×3，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品通过快速柱层析(乙酸乙酯)纯化得到化合物25-7黄色油状物，MS m/z:348[M+H] +。
步骤7：化合物25-8合成
将化合物25-7(0.2g,575.62μmol)和Pd/C(0.2g,5％纯度)溶于乙酸乙酯(5mL)中并在H 2(15Psi)环境下搅拌0.5h.反应液直接用硅藻土过滤，乙酸乙酯(50mL)洗涤滤饼，滤液减压浓缩得到化合物25-8黄色油状物，MS m/z:214[M+H] +。
步骤8：化合物25-9合成
把化合物BB-1(16.80mg,93.76μmol)和化合物25-8(0.02g,93.76μmol，HCl)溶于DCM(1mL)中，将三 乙胺(9.49mg,93.76μmol)加入到反应体系中至PH呈碱性，然后用冰乙酸调节pH到6-7之间，反应在15℃，搅拌1h，然后将NaBH(OAc) 3(39.74mg,187.51μmol)加入到反应体系中并继续搅拌3h。反应液中加入几滴水并直接减压浓缩。粗品通过制备HPLC得到产化合物25-9黄色油状物，MS m/z:377[M+H] +。
步骤9：化合物25合成
把化合物25-9(0.07g,185.93μmol)溶于水(1mL)中，然后将LiOH.H 2O(15.60mg,371.85μmol)加入到反应体系，反应在15℃搅拌0.1h。反应液直接过滤，通过制备HPLC得到化合物25，MS m/z:349[M+H] +。 1HNMR(400MHz,CD 3OD)δppm 8.47-8.52(m,1H),8.02(s,1H),7.73(dd,J＝5.2,1.6Hz,1H),3.89(s,2H),3.43(s,2H),3.33(dt,J＝3.2,1.6Hz,4H),2.64(t,J＝6.8Hz,2H),2.51(br s,2H),2.42(s,6H),0.96(s,6H)。
测试例1：评价:化合物对KDM5A的抑制作用：
1实验材料:
1.1试剂：
KDM5A(Active Motif-63RMT000C31831)
Histone H3(1-21)lysine 4tri-methylated biotinylated peptide(GL Biochem-561488)
2OG(Sigma-75892)
L-抗坏血酸(Sigma-795437)
Ammonium iron sulfate hexahydrate(Sigma-203505)
Mab Anti histone H3K4 Me2-Eu(K)(Cisbio-61KA2KAD)
Streptavidin-XL665(Cisbio-610SAXLB)
1.3耗材与仪器：
384孔板(Greiner-784075)
96尖底板(海门-FPT019)
384-LDV板(LABCYTE-LP-0200)
Liquid handler:Echo(LABCYTE-Echo550)
Small tube metal tip dispensing cassette(Thermo-24073290)
Multidrop Combi(Thermo)
离心机(Thermo Centrifuge ST 40R)
酶标仪(TECAN-SPARK 10M)
Incubator(Grant-bio Thermo-shaker PHMP)
2实验步骤和方法：
2.1实验当天，配制新鲜的试剂溶液，分别是L-抗坏血酸，2OG和六水合硫酸亚铁Ammonium iron sulfate hexahydrate，然后配制反应缓冲液。
2.2先用DMSO配制四个化合物浓度，分别是4000μM，148.15μM，5.49μM和0.2μM，把这四个浓度的化合物转移8μL到384LDV板。然后再用Echo550转移至384分析板，得到10个浓度点，3倍稀释，两复孔。
2.3配制KDM5A酶溶液，每孔加5μL到384分子板，对于个孔，加反应缓冲液替代酶。1000rpm离心1min。放在25度恒温箱里面孵育20min。
2.4配制H3K4Me3(biotin)(组蛋白第三亚基四号赖氨酸的三甲基化多肽)(生物素标记)，用自动分液器加5μL每孔至分析板包括(阴性对照孔，或者没有加酶)的孔。1000rpm离心1min。放在25度恒温箱里面孵育60min。
2.5配制H3K4 me2-Eu(K)Ab铕标记的组蛋白第三亚基四号赖氨酸的双甲基化多肽抗体和streptavidin XL665链霉亲和素XL665的检测液，确保streptavidin Xl665与peptide-biotin的比例是1：4。酶反应60min后，加入10μL每孔上述检测液。1000rpm离心1min。放在4度冰箱里面孵育过夜。
2.6第二天，用TECAN Spark 10M酶标仪读HTRF 340nm激发光，665nm和612nm发射光，665nm/612nm作为计算IC 50的原始信号值。
3数据分析：
3.1计算抑制百分比：％抑制率＝100-100×(信号值-min的平均信号值)/(max的平均信号值-min的平均信号值)。
3.2计算IC 50：使用XLfit软件计算化合物对KDM5A的50％抑制浓度(IC 50)值。
4实验结果：
表1 TR-FRET format实验检测KDM5的IC 50测试结果
Figure PCTCN2019074144-appb-000065
结论：本发明化合物对KDM5A的抑制作用显著。
测试例2：化合物药代动力学评价
实验目的：测试化合物在Male CD-1小鼠体内药代动力学
实验材料：
雄性CD-1小鼠，25-30g，7-10周龄，上海西普尔－必凯实验动物有限公司
实验操作：
以标准方案测试化合物静脉注射以0.2mg/ml in saline及口服以2mg/ml in saline给药后的啮齿类动物药代特征，实验中候选化合物配成澄清溶液，给予小鼠单次静脉注射及口服给药。静注及口服溶媒为一定比例的生理盐水溶液。收集24小时内的全血样品，3000g离心15分钟，分离上清得血浆样品，加入4倍体积含内标的乙腈溶液沉淀蛋白，离心取上清液加入等倍体积的水再离心取上清进样，以LC-MS/MS分析方法定量分析血药浓度，并计算药代参数，如达峰浓度，达峰时间，清除率，半衰期，药时曲线下面积，生物利用度等。
实验结果如表2所示：
表2 药代动力学测试结果
Figure PCTCN2019074144-appb-000066
结论：本发明化合物可以显著提高小鼠药代动力学单项或部分指标。
测试例3：人肝微粒体CYP抑制实验
研究项目的目的是采用CYP同工酶的5合1探针底物来评价供试品对人肝微粒体细胞色素P450同工酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)的抑制性。
混合人肝微粒体(HLM)购自Corning Inc.(Steuben,New York,USA)或者XenoTech,LLC.(Lenexa,KS,USA)或者其他的供应商，使用前都储存在低于-70℃条件下。
将稀释好的系列浓度10mM,5mM,1.5mM,0.5mM,0.15mM,0.05mM,0.015mM供试品工作液加入到含有人肝微粒体、探针底物和循环体系的辅助因子的孵育体系中，不含供试品而含有溶剂的对照作为酶活性对照(100％)。探针底物生成的代谢产物在样品中的浓度采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法进行测定。使用SigmaPlot(V.11)对供试品平均百分比活性对浓度作非线性回归分析。通过三参数或四参数反曲对数方程来计算IC 50值(μM)。测试结果如表3：
表3
测试化合物 CYP1A2 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP3A4
实施例1 >50 >50 >50 >50 >50
结论：化合物1对五个CYP同工酶抑制程度均较弱。
测试例4：hERG钾离子通道的抑制试验
1.实验目的：
用全自动膜片钳的方法检测待测实施例1对hERG钾离子通道的影响。
2.实验方法
2.1.细胞培养
实验所用的稳定表达hERG钾离子通道的细胞来自于Aviva Biosciences的CHO-hERE，CHO-hERG培养于5％CO 2，37℃的环境下。CHO hERG培养液见表4。
表4 CHO hERG培养液
Reagent Supplier Catalog Number Volume(mL)
F12Hams Invitrogen 31765-092 500
FBS Invitrogen 10099-141 50
G418/Geneticin Invitrogen 10131-027 1
Hygromycin B Invitrogen 10687-010 1
2.2.细胞的前期准备
准备用于实验的CHO-hERG细胞至少培养两天以上，且细胞密度达到75％以上。实验开始之前，用TrypLE消化细胞，然后用细胞外液重悬收集细胞。
2.3.细胞内外液的配制
细胞外液需每个月配制一次。细胞内液须分装冻存在-20℃。细胞内外液成分见表5。
表5 细胞内外液成分
组成成分 细胞外液(mM) 细胞内液(mM)
NaCl 145 -
KCl 4 120
KOH - 31.25
CaCl 2 2 5.374
MgCl 2 1 1.75
葡萄糖 10 -
Na 2ATP - 4
两性离子缓冲液 10 10
螯合剂 - 10
pH 7.4(NaOH调节) 7.2(KOH调节)
渗透压 295mOsm 285mOsm
2.4.化合物的配制
将待测化合物用DMSO溶解成一定浓度的储备液，然后按照不同的梯度稀释，最后按一定的比例加入细胞外液中，稀释成待测浓度。在实验开始前用肉眼检查看有无沉淀。最后，待测溶液和阳性对照Amitriptyline中，DMSO的浓度最高不能超过0.3％。
2.5.电压刺激方案
保持钳制电位在-80mv，首先是给予-50mv的电压刺激，持续80ms以记录细胞漏电流值，随后去极化至+20mv，维持4800ms，打开hERG的通道，然后复极化至-50mv维持5000ms，引出hERG尾电流并记录，最后，电压恢复至钳制电位-80mv，维持3100ms。以上电压刺激，每15000ms重复一次。
2.6.QPatch HTX全细胞膜片钳记录
hERG QPatch HTX实验是在室温下进行的。在QPatch Assay Software 5.2(Sophion Bioscience)的软件上建立全细胞方案，电压刺激方案和化合物检测方案。
首先进行30次重复设定电压刺激，该区段为后续分析的基线区域，随后加入5μl细胞外液，重复三次。依次加入各个化合物的作用浓度，仍旧以5μl加入体积重复三次。每一测试浓度孵育细胞至少不低于5mins。 整个记录过程中，各项指标需达到数据分析接收标准，若未达到该标准，则该细胞不计入分析范围，化合物将重新进行测试，以上记录过程由均由Qpatch分析软件自动化操作。每一化合物测试浓度依次为0.24μM、1.20μM、6.00μM、30.00μM，每一浓度至少重复两个细胞。
2.7.数据分析
在每一个完整电流记录中，基于峰值电流在阴性对照中所占的百分比，可以计算出每一化合物作用浓度的抑制百分比。利用标准希式方程拟合得到量效关系曲线，具体方程如下：
I (C)＝I b+(I fr-I b)×c n/(IC 50 n+c n)
C为化合物测试浓度，n为斜率
曲线拟合和抑制率计算均由Qpatch分析软件分析完成，若最低浓度下抑制率超过半数抑制或最高浓度下抑制率未达到半数抑制，则该化合物相应的IC 50低于最低浓度或IC 50值大于最高浓度。
2.8.测试结果
实施例化合物hERG IC 50值结果见表6。
表6 实施例化合物hERG IC 50值结果
供试样品 hERG IC 50(nM) 测试次数
实施例1 >30 N＝2
结论：该化合物没有心脏毒性。

Claims (21)

  1. 式(Ⅲ)所示化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2019074144-appb-100001
    其中，
    Y选自O和S；
    R 1选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R a取代；
    R a分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
    R 2选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R b取代；
    R b分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
    或者，R 1与R 2连接在一起，形成苯环、5～6元杂芳环或C 3-6环烷基，其中所述苯环和5～6元杂芳环任选被1、2或3个R 3取代；
    R 3分别独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
    R 4选自OH和C 1-3烷氧基；
    R 5选自H和C 1-3烷基；
    R 6选自H和C 1-3烷基；
    或者，R 1与R 5连接在一起，形成一个C 3-6环烷基；
    或者，R 2与R 6连接在一起，形成一个C 3-6环烷基；
    且，当R 1与R 2连接在一起，形成一个苯环或5～6元杂芳环时R 5与R 6为空；
    R 7选自H和C 1-5烷基，其中所述C 1-5烷基任选被1、2或3个R c取代；
    R 8选自H和C 1-5烷基，其中所述C 1-5烷基任选被1、2或3个R c取代；
    或者，R 7、R 8及其所连接的N原子连接在一起形成
    Figure PCTCN2019074144-appb-100002
    所述
    Figure PCTCN2019074144-appb-100003
    Figure PCTCN2019074144-appb-100004
    任选被1、2或3个R c取代；
    R c分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
    所述5～6元杂芳环包含1、2或3个独立选自-O-、-S-、-NH-和N的杂原子和杂原子团。
  2. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其选自，
    Figure PCTCN2019074144-appb-100005
    其中，
    Y选自O和S；
    R 1选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R a取代；
    R a分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
    R 2选自H和C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选被1、2或3个R b取代；
    R b分别独立的选自F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
    或者，R 1与R 2连接在一起，形成苯环、5～6元杂芳环或C 3-6环烷基，其中所述苯环和5～6元杂芳环任选被1、2或3个R 3取代；
    R 3分别独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH 2和CF 3；
    R 4选自OH和C 1-3烷氧基；
    R 5选自H和C 1-3烷基；
    R 6选自H和C 1-3烷基；
    或者，R 1与R 5连接在一起，形成C 3-6环烷基；
    或者，R 2与R 6连接在一起，形成C 3-6环烷基；
    且，当R 1与R 2连接在一起，形成苯环或5～6元杂芳环时R 5与R 6为空；
    所述5～6元杂芳环包含1、2或3个独立选自-O-、-S-、-NH-和N的杂原子和杂原子团。
  3. 根据权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R a取代。
  4. 根据权利要求3所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1选自H、Me和Et。
  5. 根据权利要求1～2任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R b取代。
  6. 根据权利要求5所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2选自H、Me和Et。
  7. 根据权利要求1～2任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1与R 2连接在一起，形成苯环、环丙基或吡啶环，其中所述苯环和吡啶环任选被1、2或3个R 3取代。
  8. 根据权利要求1～2任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2019074144-appb-100006
    选自
    Figure PCTCN2019074144-appb-100007
  9. 根据权利要求1～2任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 4选自OH、
    Figure PCTCN2019074144-appb-100008
  10. 根据权利要求1～2任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 1与R 5连接在一起，形成环丙基。
  11. 根据权利要求1～2任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 2与R 6连接在一起，形成环丙基。
  12. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 7选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R c取代。
  13. 根据权利要求12所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 7选自H、Me、CH 2F、CHF 2、CF 3、CH 2CF 3、CHFCH 2F和Et。
  14. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 8选自H和C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个R c取代。
  15. 根据权利要求14所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，R 7选自H、Me、CH 2F、CHF 2、CF 3、CH 2CF 3、CHFCH 2F和Et。
  16. 根据权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
    Figure PCTCN2019074144-appb-100009
    选自
    Figure PCTCN2019074144-appb-100010
    Figure PCTCN2019074144-appb-100011
  17. 根据权利要求1～16任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，其选自
    Figure PCTCN2019074144-appb-100012
    Figure PCTCN2019074144-appb-100013
    其中，
    R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6和Y如权利要求1～11任意一项所定义；
    R 7、R 8如权利要求1、2、12～16任意一项所定义。
  18. 下式所示化合物或其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2019074144-appb-100014
    Figure PCTCN2019074144-appb-100015
  19. 根据权利要求1～18任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备与KDM5通路相关疾病治疗药物中的应用。
  20. 根据权利要求19所述的应用，所述与KDM5通路相关疾病是肿瘤和乙肝。
  21. 根据权利要求20所述的应用，所述肿瘤是乳腺癌，胃癌，结直肠癌，肺癌和肝癌。
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