WO2019057620A1 - Tragbarer behälter für tuberkulose-präanalytik - Google Patents

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WO2019057620A1
WO2019057620A1 PCT/EP2018/074852 EP2018074852W WO2019057620A1 WO 2019057620 A1 WO2019057620 A1 WO 2019057620A1 EP 2018074852 W EP2018074852 W EP 2018074852W WO 2019057620 A1 WO2019057620 A1 WO 2019057620A1
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Gerhard Hartwich
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Friz Biochem Gesellschaft Für Bioanalytik Mbh
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    • B01L3/5082—Test tubes per se
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    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0681—Filter

Definitions

  • the invention relates to a portable container, in particular for tuberculosis preanalytics, and to a method for pretreating a sample material to be analyzed with such a portable container.
  • Tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis and more rarely Mycobacterium bovis or other close relatives of the so-called Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) such as the less pathogenic strains M. africanum, M. microti and M. canetti is triggered.
  • MTC Mycobacterium tuberculosis complex
  • Tuberculosis leads the world in the statistics of deadly infectious diseases.
  • the incidence of the infectious disease is very unevenly distributed worldwide: in 2015, 60% of cases occurred in only six countries: India, Indonesia, China, Nigeria, Pakistan and South Africa.
  • the treatment of tuberculosis is carried out with a multiple combination of antibiotics, called tuberculostatic drugs, over several months.
  • the tuberculosis therapy is flanked by the co-treatment of possibly accompanying comorbidities, which cause an immunodeficiency. To clarify suspected TB, reliable diagnostic procedures are needed.
  • the result must also be available as soon as possible, so that appropriate treatment can be started as early as possible. If pulmonary tuberculosis is suspected, a microscopic examination for acid-fast rods (Ziehl-Neelsen staining) should always be performed to clarify the infectivity. However, about 10 4 germs / ml must be present in order to obtain a positive result, so that up to 50% false-negative results must be expected. In HIV-positive individuals, the false-negative proportion may be even higher.
  • the gold standard in the TB diagnosis is the culture:
  • the test material is first decontaminated with N-acetyl-L-cysteine-NaOH, then the material is centrifuged and the sediment is placed on nutrient media.
  • a typical nutrient medium is e.g.
  • mycobacteria convert an admixed fumeless terazolium salt into water-insoluble pink to violet formazan via the redox system; Flask of liquid culture indicates mycobacteria, as other germs are suppressed by the nutrient medium and the antibiotic mixture PACT (polymyxin B, amphotericin B, carberdcillin, trimethoprim).
  • tuberculosis bacteria (16 to 20 h) on solid media requires a very long growing time of 6 to 12 weeks, it can be shortened to about two weeks by using a liquid medium. Sensitivity is high for liquid media (about 10 bacteria / ml) and slightly better than for solid media (about 100 bacteria / ml). However, liquid media do not permit visual assessment of the colonies and thus no species diagnosis / subtyping of the mycobacteria. In the case of liquid media, this must be done independently by probe hybridization / genotyping in order to ensure specific detection of mycobacteria of M. tuberculosis. culott complex and possible differentiation of the M. tuberculosis complex in M. tuberculosis, M.
  • the therapy takes place as antibiotic combination therapy;
  • First-line antibiotics are isoniazid (INH), rifampicin (RIF), pyrazinamide (PZA) and ethambutol (EMB) or streptomycin (second-line drugs are prothionamide and capreomycin).
  • IH isoniazid
  • RAF rifampicin
  • PZA pyrazinamide
  • EMB ethambutol
  • streptomycin second-line drugs are prothionamide and capreomycin.
  • the combination therapy recommended by the WHO may also fail: the increased incidence of bacterial resistance has made the treatment of tuberculosis much more difficult in recent years.
  • the trigger is the incorrect or uncontrolled use of the available tuberculostatics.
  • tuberculosis special forms of tuberculosis. These include multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB), which is resistant to at least one of the first-line drugs INH or RIF, and extremely drug-resistant tuberculosis (XDR-TB), which is resistant to at least one of the first-line Drugs INH or RIF, second line drugs based on fluoroquinoline and at least one of the injectable secondary line drugs capreomycin, kanamycin or amikacin.
  • MDR-TB multidrug-resistant tuberculosis
  • XDR-TB extremely drug-resistant tuberculosis
  • Treatment of MDR-TB and XDR-TB disorders is costly and may take more than 24 months. In some cases of XDR-TB, even no drug option is available.
  • the complexity and duration of culture-based MTB diagnostics and the modern laboratory infrastructural requirements of PCR techniques represent a previously unresolved problem, especially in countries where TB is most prevalent Targeted immediate treatment of infection and the suppression of further spread of MDR and XDR TB are urgently needed, even in countries / regions with state-of-the-art infrastructure, which are time-consuming and cost-intensive. Cost-effective, fast, but also easy-to-perform test systems are therefore urgently needed.
  • the PCR based test system Xpert MTB / RIF introduces a first, easy-to-use and (expensive) automated device with a dedicated test system that can detect TB diagnosis and associated resistance in a relatively short time.
  • a cartridge for carrying out a chemical reaction comprising a body with at least a first and a second channel formed therein, wherein the cartridge further comprises a reaction vessel extending from the body with a reaction chamber; an inlet port connected to the reaction chamber via an inlet port; and an outlet port connected to the reaction chamber via an outlet channel, the inlet port of the vessel being connected to the first channel in the body and the outlet port of the vessel being connected to the second channel in the body.
  • the invention provides a portable container, in particular for tuberculosis preanalytics, having a cup-shaped main body with a bottom, side walls and an upper opening, wherein a receiving area for the sample material to be analyzed, in particular sputum, is provided in the bottom area of the main body, a lid for closing the upper opening of the main body, with an in the closed position facing the container interior underside and an outwardly facing top, and a lid from the top to the bottom and penetrating the receiving area leading fluid channel, the
  • the lid top having an external connection port for an external supply device for supplying a pretreatment solution for the pretreatment of the sample material in the receiving area, and a collection filter for collecting components of the sample material pretreated in the container.
  • the fluid idkanal on the bottom cover has an inner connection port for later connection to an external analysis device for analyzing the collected in the collection filter components of the sample material, and that the collection filter in the fluid channel between the outer and the inner connection terminal.
  • the fluid channel preferably has adjacent to the inner connection port a predetermined breaking point for the separation of a (relative to the connection point with the lid) distal fluid channel section.
  • the outer and / or inner connection connection is preferably a Luer connection.
  • a mechanical solubilization aid to be provided in the receiving area of the main body in an original area.
  • chemicals for a pretreatment step of the sample material may also be initially introduced into the template region and may advantageously be immobilized there.
  • the template area is completed with advantage by a destructible when closing the main body cover layer.
  • the fluid channel is formed in an advantageous embodiment by a Fluidrschreib- Chen, which is detachably mounted in the lid.
  • the invention also includes a method for pretreating a sample material to be analyzed, in particular sputum, with a portable container of the type described, in which a) the cup-shaped main body is closed after introduction of sample material to be analyzed with the lid, so that the lid underside ins B) a supply device, in particular a syringe, connected to the outer connection port of the fluid channel of the lid and a pretreatment solution is supplied via the fluid channel to the receiving region, and c) the pretreated sample material via the fluid channel again in the external delivery device is aspirated, whereby components of the pretreated sample material are collected in the collection filter.
  • the sample material is decomposed according to current understanding in different sized components, the TB exciters are indeed inactivated due to their high stability, but their mechanical structure remains largely intact, while the other cell material is dissolved.
  • the mycobacteria can therefore be separated from the cell components of the other lysed bacteria and organisms with a suitable collection filter 44.
  • the pretreatment solution serves in particular for the decontamination of the sample material, in which fast-growing organisms / bacteria are killed and Mycobacterium tuberculosis bacilli are selected.
  • the selection is based on killing / lysing the other (human) cell material with chemicals that leave the cells of the mycobacteria untouched due to the high stability / impermeability of the mycobacterial cell wall.
  • mycobacteria show an increased tolerance to alkalis, acids, detergents such as SDS or Triton X-100 or Tween20 and to enzymatic lysis methods such as the use of lysozyme.
  • different protocols have been developed, which can be used in particular in the pretreatment solutions mentioned in this application.
  • N-acetyl-L-cysteine (NALC) -NaOH method is used most universally: By alkaline lysis with NaOH we kill a variety of bacteria and organisms, the mycobacteria but hardly attacked. At the same time, the mucolytic N-acetyl-L-cysteine ensures solubilization of the sputum. As a result, optionally inactivated, but otherwise intact mycobacterial cells can be separated, for example via sterile filtration, from the remaining cell constituents of the remaining lysed bacteria and organisms.
  • the sputum is incubated with a decontamination solution of 2% NaOH (0.5N NaOH) and 0.25% NALC for 15 min at RT.
  • the mycobacterial material can also be disinfected and inactivated because the mycobacteria must be killed as a biological safety measure for molecular diagnostics. This can be done by heat inactivation at T ⁇ 80 ° C for t ⁇ 20 min, or also by means of a pretreatment solution by an approximately 3 minute alcoholic disinfection with 70% isopropanol / n-propanol or 80% ethanol.
  • the beaker is connected via the external connection connection to an analysis device for analyzing the components of the sample material collected in the collection filter.
  • the fluid channel is connected to the internal connection port with an analysis device for analyzing the components of the sample material collected in the collection filter.
  • an analysis device for analyzing the components of the sample material collected in the collection filter.
  • a distal fluid channel section at the predetermined breaking point is preferably separated from the fluid channel in order to make the inner connection port accessible, and the remaining fluid channel is connected to the analysis device with the inner connection port.
  • the further purification, amplification and detection of any mycobacteria collected in the collection filter takes place in the analysis device as a back-end module and is not the subject of the present invention.
  • the proposed portable container provides a front-end tool for tuberculosis preanalytics from sample collection to isolation Essentials of whole but inactive / non-infectious / non-proliferative mycobacterial cells. In particular, it enables the following steps for improved molecular diagnosis of TB:
  • FIG. 1 schematically shows a pre-analytic cup with lid after a
  • FIG. 1 shows a preanalytical cup 10 with lid 30, which, for illustration, is shown slightly offset from the cup-shaped main body 12 of the cup 10 in a position shortly before the cup is completely closed.
  • the cup-shaped main body 12 has a bottom 14, side walls 16 and an upper opening 18, which can be closed with the lid 30.
  • a mechanical solubilization aid 24, for example in the form of small stones, as well as immobilized chemicals 26 for a pretreatment step of the sample material P are presented in a presentation area 22.
  • the original region 22 is closed by a cover layer 28, which can be destroyed when the main body 12 is closed, in the form of a thin plastic film.
  • the cover 30 has an upper side 32 and a lower side 34, wherein the lower side 34 points in the closed position indicated in FIG. 1 into the interior of the cup 10.
  • a fluid channel 36 penetrates the lid 30 from the top 32 to the bottom 34 and extends in the closed position into the receiving area 20 of the cup 10.
  • the fluid channel 36 is formed by a releasably fixed in a central opening of the lid 30 tube whose length is dimensioned so that in the closed position of the lid 30 with a lower tube portion 38, the cover layer 28 pierces and thus exposes the mechanical solubilization aid 24 and the chemicals 26.
  • the fluid channel 36 includes two Luer connection ports pointing in opposite directions, namely an outer Luer connection 40 on the cover top 32 and an inner Luer connection 42 on the cover bottom 34.
  • the inner Luer connection 42 is initially still inaccessible in the interior of the fluid channel 36th as shown in Fig. 1.
  • a collection filter 44 is arranged in the fluid passage 36 for collecting components of the sample material P pretreated in the container.
  • the external luer connection 40 serves to connect an external supply device 100 for supplying a pretreatment solution 102 for the pretreatment of the sample material P, as explained in greater detail below.
  • the inner luer fitting 40 is provided for later connection to an external analysis device 200 (FIG. 2) for analyzing the components of the sample material P collected in the collection filter 44. Since it is initially inaccessible in the interior of the fluid channel 36, a predetermined breaking point 46 in the tube is provided directly adjacent to separate the lower fluid channel section 38.
  • a workstation for the laboratory-independent preanalytics with the cup 10 of FIG. 1 can, for example, proceed as follows:
  • a sputum obtained as a sample material P from a patient suspected of having pulmonary tuberculosis is placed in the receiving area 20 of the cup 10, and the cup-shaped main body 12 is closed with the lid 30.
  • These steps can be performed by the patient himself and therefore do not pose an infection risk for the examiner.
  • the tube 36 pierces the cover layer 28 with its lower portion 38 and thus exposes the chemicals 26 and the solubilization aid 24.
  • a syringe 100 or other delivery device is connected to the outer luer fitting 40 of the fluid channel 36 and a suitable pretreatment solution 102 is introduced via the fluid channel 36 into the
  • the sample material P is solubilized and decontaminated and optionally also inactivated.
  • This step may be performed by the patient or an examiner, and in addition to supplying the pretreatment solution 102 requires only mechanical shaking of the mixture in the sealed cup.
  • the pretreated, namely solubilized, decontaminated and optionally also inactivated sample material is sucked out of the receiving region 20 via the fluid channel 36 through the collecting filter 44 back into the syringe 100.
  • the other cell material is lysed, so that essentially only the stable cells of the mycobacteria 50 (FIG. 2) are collected in the collection filter 44.
  • These have a special cell wall structure with high lipid and wax content, which is responsible for the high resistance and stability of the bacilli.
  • the tube 36 can now be detached from the cover 30 by an examiner by separating the lower section 38 of the fluid channel 36 at the predetermined breaking point 46, so that the inner tube connection 42 becomes accessible.
  • the cells of the mycobacteria 50 collected in the case of infection are present on the side of the collection filter 44 facing the inner Luer connection 42. Now, if necessary after prior cleaning of the collected material in the collection filter 44, the remaining stump 52 is connected via the inner Luer connection 42 with an analysis device 200 for analyzing the collected in the collection filter 44 components of the sample material.
  • the following methods for the purification, amplification and detection of the mycobacteria 50 in the analysis device 200 are not the subject of the present invention.
  • some of the elements described in connection with FIG. 1 may also be dispensed with.
  • the chemicals 26 and optionally also the solubilization aid 24 may be dispensed with.
  • Their func- For example, it may be partially or completely taken over by the pretreatment solution (s) supplied via the external connection port 40.
  • the pretreatment solution supplied via the external connection port 40.
  • the syringe 100 there may be a layered pretreatment solution which successively enables decontamination and inactivation of the sample material.
  • the inner connection port 42 of the fluid channel 36 is dispensed with.
  • the fluid channel 36 is connected with its external connection port 40 to an analyzer device 200.
  • the lid 30 does not have to be removed from the main body 12, so that, for example, a rinsing solution for cleaning the collected in the collection filter 44 material from the cup 10 can be added.
  • care must be taken to ensure that, on the one hand, the bacilli collected on the filter are not flushed back into the beaker and, on the other hand, that the TB-DNA does not or only slightly diffuse into these flushing fluids in the fluid channel after disruption of the TB cells can be more introduced into the analysis device 200.

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Abstract

Die Erfindung betrifft einen tragbaren Behälter (10) insbesondere für die Tuberkulose-Präanalytik mit - einem becherförmigen Hauptkörper (12) mit einem Boden (14), Seitenwänden (16) und einer oberen Öffnung (18), wobei im Bodenbereich des Hauptkörpers (12) ein Aufnahmebereich (20) für das zu analysierende Probenmaterial (P), insbesondere Sputum, vorgesehen ist, - einem Deckel (30) zum Verschließen der oberen Öffnung (18) des Hauptkörpers (12), mit einer in Verschlussstellung ins Behälterinnere weisenden Unterseite (34) und einer nach außen weisenden Oberseite (32), und - einem den Deckel (30) von der Oberseite (32) zur Unterseite (34) durchdringenden und zum Aufnahmebereich führenden Fluidkanal (36), der - auf der Deckel-Oberseite (32) einen äußeren Verbindungsanschluss (40) für eine externe Zuführvorrichtung (100) zur Zuführung einer Vorbehandlungslösung (102) für die Vorbehandlung des Probenmaterials (P) in dem Aufnahmebereich (20) aufweist, und - einen Sammelfilter (44) zum Sammeln von Bestandteilen des im Behälter vorbehandelten Probenmaterials (P) aufweist.

Description

Tragbarer Behälter für die Tuberkulose-Präanalytik
Die Erfindung betrifft einen tragbaren Behälter insbesondere für die Tuber- kulose-Präanalytik, sowie ein Verfahren zur Vorbehandlung eines zu analysierenden Probenmaterials mit einem solchen tragbaren Behälter.
Tuberkulose (TB) ist eine Infektionskrankheit, die durch Mycobacterium tu- berculosis und seltener Mycobacterium bovis oder anderer naher Verwand- ter aus dem sogenannten Mycobacterium-tuberculosis-Komplex (MTC) wie den weniger pathogenen Stämme M. africanum, M. microti sowie M. canetti ausgelöst wird.
Die Tuberkulose führt weltweit die Statistik der tödlichen Infektionskrank- heiten an. Im Jahr 2015 erkrankten nach den Schätzungen der WHO 10,4 Millionen Menschen an TB. Nur rund 20 Prozent von ihnen hatten eine Chance auf eine Heilbehandlung mit Antibiotika. Etwa 1,4 Millionen Menschen starben deshalb 2015 durch TB. Das Vorkommen der Infektionskrankheit ist weltweit sehr ungleich verteilt: im Jahr 2015 traten 60% der Fälle in nur sechs Staaten auf: Indien, Indonesien, China, Nigeria, Pakistan und Südafrika. Die Behandlung der Tuberkulose erfolgt mit einer Mehrfachkombination von Antibiotika, sogenannten Tuberkulostatika, über mehrere Monate. Flankiert wird die Tuberkulosetherapie durch Mitbehandlung eventuell vorliegender Begleiterkrankungen, die eine Immundefizienz bewirken. Zur Abklärung eines Verdachtes auf TB werden zuverlässige diagnostische Verfahren benötigt. Darüber hinaus muss das Ergebnis auch so schnell wie möglich vorliegen, damit eine entsprechende Behandlung möglichst frühzeitig begonnen werden kann. Bei Verdacht auf Lungen-Tuberkulose sollte zur raschen Abklärung der Infektiosität immer eine mikroskopische Untersuchung auf säurefeste Stäbchen (Ziehl-Neelsen-Färbung) erfolgen. Dabei müssen allerdings etwa 104 Keime/ ml vorhanden sein, um ein positives Ergebnis zu erhalten, so dass mit bis zu 50% falsch-negativen Ergebnissen gerechnet werden muss. Bei HIV- positiven Personen kann der falsch-negative Anteil sogar noch höher liegen.
Goldstandard in der TB-Diagnose ist die Kultur: Zur Vorbehandlung erfolgt zunächst eine Dekontamination des Untersuchungsmaterials mit N-Acetyl- L-Cystein-NaOH, dann wir das Material zentrifugiert und das Sediment auf Nährmedien eingebracht. Ein typisches Nährmedium ist z.B. das Flüssigmedium„MB Redox" der Fa. Biotest. In diesem modifizierten Kirchner- Medium mit Vitaminkomplex zum beschleunigten Wachstum vermehrte Mykobakterien wandeln über ihr das Redox-System ein beigemischtes f arb- loses Terazoliumsalz in wasserunlösliches rosa bis violettes Formazan um; der Farbumschlag in dem Fläschchen der Flüssigkultur weist auf Mykobakterien hin, da andere Keime durch das Nährmedium und das Antibiotikagemisch PACT (Polymyxin B, Amphotericin B, Carberdcillin, Trimethoprim) supprimiert werden.
Während die lange Generationszeit von Tuberkulosebakterien (16 bis 20 h) auf Festmedien eine sehr lange Anzuchtzeit von 6 bis 12 Wochen benötigt, kann diese durch den Einsatz eines Flüssigmediums auf etwa zwei Wochen verkürzt werden. Die Sensitivität ist bei Flüssigmedien hoch (ca. 10 Bakte- rien/ ml) und etwas besser als bei Festmedien (ca.100 Bakterien/ ml). Allerdings erlauben Flüssigmedien keine optische Beurteilung der Kolonien und somit keine Artdiagnose/ Subtypisierung der Mykobakterien. Diese muss bei Flüssigmedien unabhängig durch Sondenhybridsierung/ Genotypisierung erfolgen, um einen spezifische Nachweis von Mykobakterien des M. tuber- culosis-Komplexes sowie eine mögliche Differenzierung des M. tuberculosis- Komplexes in M. tuberculosis, M. africanum, M. microti, M. bovis ssp., M. bovis ssp caprae und BCG durchzuführen. Bei einem positiven Nachweis von M. tuberculosis-Komplex Isolate wird üblicherweise eine Resistenztes- tung durchgeführt, die etwa weitere 2 Wochen dauert.
Die Therapie erfolgt als Antibiotika-Kombinationstherapie; Antibiotika der ersten Wahl sind Isoniazid (INH), Rifampicin (RIF), Pyrazinamid (PZA) und Ethambutol (EMB) oder Streptomycin (Mittel der zweiten Wahl sind Pro- thionamid und Capreomycin). Allerdings kann die von der WHO empfohlene Kombinationstherapie aufgrund der Ausbreitung von Antibiotika- Resistenzen auch fehlschlagen: Das vermehrte Auftreten von bakteriellen Resistenzen hat die Behandlung der Tuberkulose in den letzten Jahren deutlich erschwert. Auslöser ist der falsche oder unkontrollierte Einsatz der ver- fügbaren Tuberkulostatika.
Auf dieser Basis hat man Sonderformen der Tuberkulose definiert. Dazu zählen multiresistente Tuberkulose (MDR-TB), bei der eine Resistenz gegen zumindest eine der First-Line Drugs INH oder RIF besteht sowie die extrem arzneimittelresistente Tuberkulose (XDR-TB), bei der eine Resistenz gegen zumindest eine der beiden First-Line-Drugs INH oder RIF, gegen Flourochi- nolin basierte Second-Line-Drugs und zumindest eine der injezierbaren Se- cond-Line-Drugs Capreomycin, Kanamycin oder Amikacin besteht. Die Behandlung von MDR-TB und XDR-TB Erkrankungen ist kostspielig und kann länger als 24 Monate dauern. In einigen Fällen der XDR-TB ist sogar keine medikamentöse Option verfügbar.
Von den 500.000 Patienten, die weltweit jährlich neu an TB mit multiresistenten Mykobakterien erkranken, und von den 1,4 Mio., die jährlich eine Koin- fektion von HIV und Tbc erwerben, hat nur ein kleiner Teil Zugang zu der oben beschriebenen adäquaten laborbasierten Diagnostik und Resistenztes- tung. Insbesondere bei HIV-positiven Patienten, bei denen die Sputum- Ausstriche zum Nachweis der Mykobakterien häufig negativ sind, wird die Diagnose erst sehr spät gestellt. Dies verzögert oder verhindert die Therapie, erhöht die Letalität, fördert die Bildung sekundärer Resistenzen und begünstigt die weitere Ausbreitung der TB.
Seit mehreren Jahren ist der schnelle Nachweis von genetischem Material eines Bakteriums mittels Genamplifikationsverfahren beispielsweise über
PCR (Polymerase Chain Reaction) möglich. Mittlerweile haben sich derartige Verfahren einen festen Platz in der Diagnostik gesichert. Sie sind in der Regel hochempfindlich, aber auch teuer und bedürfen bislang einer modernen Laborinfrastruktur und eines entsprechend geschulten Personals. Insgesamt ist jedoch die Sensitivität molekulargenetischer Verfahren im Bereich der schwierigen TB-Diagnostik niedriger als diejenige kultureller Nachweisverfahren (1000 Bakterien/ ml vs. 10-100 Bakterien/ ml). Die Sensitivität wird für alle Testverfahren durch eine teilweise sehr schwierige Präanalytik der gängigsten TB-Probenmatrix, dem Sputum, nochmals herabgesetzt.
Die Komplexität und Zeitdauer der kultur-basierten MTB Diagnostik und die modernen Labor-infrastrukturellen Anforderungen bei PCR-Techniken stellen vor allem in Ländern, in denen TB am häufigsten ist, ein bisher nicht gelöstes Problem dar. Zudem ist die Erfassung der Resistenzen, die für eine gezielte unmittelbare Behandlung einer Infektion und die Unterdrückung einer weiteren Ausbreitung von MDR- und XDR-TB dringend erforderlich ist, selbst in Ländern/ Regionen mit modernster Infrastruktur sehr zeitaufwendig und kostenintensiv. Kostengünstige, schnelle, aber auch einfach durchzuführende Testsysteme sind daher dringend erforderlich. Das PCR- basierte Testsystem Xpert MTB/RIF stellt ein erstes, einfach zu bedienendes und (teü-)automatisiertes Gerät mit einem speziellen Testsystem vor, mit eine TB-Diagnose und eine einhergehende Resistenz in relativ kurzer Zeit nachgewiesen werden kann. Xpert MTB/RIF kann im regulierten Bereich der Meldeverfahren und des Therapie Monitorings jedoch nicht offiziell anerkannt zwischen positiv und negativ unterscheiden; zudem werden in der Resistenzabklärung nur Rifampicin-Resistenzen und diese auch nur in einer begrenzten Zahl von Mutationen erfasst. Aus der Druckschrift EP 1 179585 Bl ist in diesem Zusammenhang eine Kartusche zum Durchführen einer chemischen Reaktion bekannt, umfassend einen Körper mit zumindest einem ersten und einem zweiten darin ausgebildeten Kanal, wobei die Kartusche zudem ein sich vom Körper aus erstreckendes Reaktionsgefäß umfasst mit einer Reaktionskammer; einer Einlass- Öffnung, die über einen Einlasskanal mit der Reaktionskammer verbunden ist; und einer Auslassöffnung, die über einen Auslasskanal mit der Reaktionskammer verbunden ist, wobei die Einlassöffnung des Gefäßes mit dem ersten Kanal im Körper verbunden ist und wobei die Auslassöffnung des Gefäßes mit dem zweiten Kanal im Körper verbunden ist.
Trotz der erreichten Verbesserung durch den Einsatz erster PCR-basierter (teil-) automatisierter Schnelltests, bleibt die Problematik bei der komplexen Tuberkulose-Diagnostik
(i) die schwierige Präanalytik und die damit einhergehenden Schwä- chen in der Sensitivität,
(ii) die schnelle und zuverlässige Diagnose von TB und
(in) ein möglichst schneller und umfassenderer Nachweis möglicher Resistenzen, die durch das vermehrte Auftreten von Resistenzen vor allem in Regionen mit fehlender Laborinfrastruktur zusätzlich verschärft wird.
Hier setzt die Erfindung an und stellt sich die Aufgabe, ein Hilfsmittel für eine verbesserte Tuberkulose-Präanalytik und ein zugehöriges Verfahren zur Vorbehandlung eines zu analysierenden Probenmaterials bereitzustellen.
Diese Aufgabe wird durch die Merkmale der unabhängigen Ansprüche gelöst. Weiterbildungen der Erfindung sind Gegenstand der abhängigen An- sprüche.
Die Erfindung stellt einen tragbaren Behälter, insbesondere für die Tuberkulose-Präanalytik, bereit mit - einem becherförmigen Hauptkörper mit einem Boden, Seitenwänden und einer oberen Öffnung, wobei im Bodenbereich des Hauptkörpers ein Aufnahmebereich für das zu analysierende Probenmaterial, insbesondere Sputum, vorgesehen ist, - einem Deckel zum Verschließen der oberen Öffnung des Hauptkörpers, mit einer in Verschlussstellung ins Behälterinnere weisenden Unterseite und einer nach außen weisenden Oberseite, und einem den Deckel von der Oberseite zur Unterseite durchdringenden und zum Aufnahmebereich führenden Fluidkanal, der
auf der Deckel- Oberseite einen äußeren Verbindungsanschluss für eine externe Zuführvorrichtung zur Zuführung einer Vorbehandlungslösung für die Vorbehandlung des Probenmaterials in dem Aufnahmebereich aufweist, und einen Sammelfilter zum Sammeln von Bestandteilen des im Behälter vorbehandelten Probenmaterials aufweist.
In einer besonders vorteilhaften Ausgestaltung ist vorgesehen, dass der Flu- idkanal auf der Deckel-Unterseite einen inneren Verbindungsanschluss für den späteren Anschluss an eine externe Analysevorrichtung zur Analyse der im Sammelfilter gesammelten Bestandteile des Probenmaterials aufweist, und dass der Sammelfilter in dem Fluidkanal zwischen dem äußeren und dem inneren Verbindungsanschluss angeordnet ist.
Der Fluidkanal weist vorzugsweise angrenzend an den inneren Verbindungsanschluss eine Sollbruchstelle zur Abtrennung eines (bezogen auf die Verbindungsstelle mit dem Deckel) distalen Fluidkanalabschnitts auf. Bei dem äußeren und/ oder inneren Verbindungsanschluss handelt sich sich vorzugsweise um einen Luer-Anschluss.
In einer Weiterbildung der Erfindung ist vorgesehen, dass im Aufnahmebe- reich des Hauptkörpers in einem Vorlagebereich eine mechanische Solubili- sierungshilfe vorgelegt ist. Alternativ oder zusätzlich können in dem Vorlagebereich auch Chemikalien für einen Vorbehandlungsschritt des Probenmaterials vorgelegt und vorteilhaft dort immobilisiert sein. Der Vorlagebereich ist mit Vorteil durch eine beim Verschließen des Hauptkörpers zerstörbare Deckschicht abgeschlossen.
Der Fluidkanal ist in einer vorteilhaften Ausgestaltung durch ein Fluidröhr- chen gebildet, das lösbar in dem Deckel angebracht ist. Die Erfindung enthält auch ein Verfahren zur Vorbehandlung eines zu analysierenden Probenmaterials, insbesondere Sputum, mit einem tragbaren Behälter der beschriebenen Art, bei dem a) der becherförmige Hauptkörper nach Einbringen von zu analysierendem Probenmaterial mit dem Deckel verschlossen wird, so dass die Deckel-Unterseite ins Behälterinnere und die Deckeloberseite nach außen weist, b) eine Zuführvorrichtung, insbesondere eine Spritze, mit dem äußeren Verbindungsanschluss des Fluidkanals des Deckels verbunden und eine Vorbehandlungslösung über den Fluidkanal dem Aufnahmebe- reich zugeführt wird, und c) das vorbehandelte Probenmaterial über den Fluidkanal wieder in die externe Zuführvorrichtung abgesaugt wird, wobei Bestandteile des vorbehandelten Probenmaterials in dem Sammelfilter gesammelt werden. Durch eine geeignete Vorbehandlung wird das Probenmaterial nach gegenwärtigem Verständnis in unterschiedlich große Bestandteile zerlegt, wobei die TB-Erreger aufgrund ihrer hohen Stabilität zwar inaktiviert werden, ihre mechanische Struktur aber weitgehend intakt bleibt, während das sonstige Zellmaterial aufgelöst wird. Die Mykobakterien können daher mit einem geeigneten Sammelfilter 44 von den Zellbestandteilen der übrigen lysierten Bakterien und Organismen getrennt werden. Es ist auch möglich, mehrere Vorbehandlungslösungen zuzuführen, beispielsweise wenn mehrere Vorbehandlungsschritte, wie etwa Dekontamination und Inaktivierung, vorgenommen werden sollen. Die Vorbehandlungslösung dient insbesondere der Dekontamination des Probenmaterials, bei der schnellwachsende Organismen/ Bakterien abgetötet und Mycobacterium tuberculosis Bazillen selektioniert werden. Die Selektion beruht auf einer Abtötung/Lyse des sonstigen (humanen) Zellmaterials mit Chemikalien, die die Zellen der Mykobakterien aufgrund der hohen Stabili- tät/Impermeabelität der Mykobakterien-Zellwand unangetastet lassen. Mykobakterien zeigen beispielsweise eine erhöhte Toleranz gegenüber Laugen, Säuren, Detergentien wie SDS oder Triton X-100 bzw. Tween20 und gegenüber enzymatischen Lyse-Methoden wie den Einsatz von Lysozym. Für die Dekontamination von Sputum sind unterschiedliche Protokolle entwickelt worden, die insbesondere auch bei den in dieser Anmeldung genannten Vorbehandlungslösungen eingesetzt werden können. Für die Dekontamination wird die N-Acetyl-L-Cystein (NALC)-NaOH-Methode am universellsten eingesetzt: Über alkalische Lyse mit NaOH wir eine Vielzahl von Bakterien und Organismen abgetötet, die Mykobakterien aber kaum angegriffen. Gleichzeitig sorgt das mucolytisch wirkende N-Acetyl-L- Cystein für die Solubilisierung des Sputums. Dadurch können gegebenenfalls inaktivierte, aber ansonsten intakte Mykobakterien-Zellen beispielsweise über Sterilfiltration von den verbleibenden Zellbestandteilen der übrigen lysierten Bakterien und Organismen abgetrennt werden. In der Standardprozedur wird das Sputum mit einer Dekontaminationslösung aus 2% NaOH (0.5N NaOH) und 0.25% NALC für 15min bei RT inkubiert. Das Mykobakterien-Material kann auch desinfiziert und inaktiviert werden, da die Mykobakterien als biologische Sicherheitsmaßnahme für die molekulare Diagnostik abgetötet werden müssen. Dies kann durch Hitzeinaktivie- rung bei T≥ 80°C für t≥ 20 min erfolgen, oder auch mit Hilfe einer Vorbe- handlungslösung durch eine etwa 3 minütige alkoholische Desinfektion mit 70% Isopropanol/n-Propanol oder 80% Ethanol.
In einer vorteilhaften Ausgestaltung wird nach Schritt c) in einem Schritt dl) der Becher über den äußeren Verbindungsanschluss mit einer Analysevor- richtung zur Analyse der im Sammelfilter gesammelten Bestandteile des Probenmaterials verbunden.
Alternativ und derzeit besonders bevorzugt wird nach Schritt c) in einem Schritt d2) der Fluidkanal, gegebenenfalls nach seiner Herauslösung aus dem Deckel, mit dem inneren Verbindungsanschluss mit einer Analysevorrichtung zur Analyse der im Sammelfilter gesammelten Bestandteile des Probenmaterials verbunden. Vorzugsweise wird dabei ein distaler Fluidka- nalabschnitt an der Sollbruchstelle von dem Fluidkanal abgetrennt um den inneren Verbindungsanschluss zugänglich zu machen, und der verbleibende Fluidkanals tumpf wird mit dem inneren Verbindungsanschluss mit der Analysevorrichtung verbunden.
Die weitere Reinigung, Amplifikation und Detektion der gegebenenfalls im Sammelfilter gesammelten Mykobakterien findet in der Analysevorrichtung als Back-End-Modul statt und ist nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Der vorgeschlagene tragbare Behälter stellt ein Hilfsmittel (Front-End) für die Tuberkulose-Präanalytik von der Probennahme bis zur Isolierung im Wesentüchen ganzer, aber inaktiver /nicht infektiöser / nicht vermehrungsfähiger Mykobakterienzellen dar. Er ermöglicht insbesondere folgende Schritte für eine verbesserte molekulare Diagnose von TB:
Inaktivierung von Mykobakterien als biologische Sicherheitsmaß- nähme, idealerweise in Kombination mit einer optimierten Verflüssigung des Sputums,
selektive alkalische und/ oder enzymatische Vorbehandlung zur Lyse von kontaminierendem Zellmaterial,
Isolierung des inaktivierten TB-Zellmaterials bei gleichzeitiger Ab- trennung der freigesetzten Zellbestandteile/ Nukleinsäuren des kontaminierenden Zellmaterials,
Pufferwechsel / Neutralisation / Waschen des TB-Zellmaterials mit für die Nukleinsäure-Diagnostik kompatiblen Puffern,
Lyse des TB-Zellmaterials durch physikalische und oder chemische Methoden, und
Weiterleiten des lysierten amplifikationskompatiblen Materials in die Mikrofluidik für die nachfolgende Nukleinsäure-Diagnostik
Vorteile der Erfindung sowie ein Ausführungsbeispiel werden nachfolgend anhand der Figuren erläutert, bei deren Darstellung auf eine maßstabs- und proportionsgetreue Wiedergabe verzichtet wurde, um die Anschaulichkeit zu erhöhen.
Es zeigen:
Fig. 1 schematisch einen Präanalytik-Becher mit Deckel nach einem
Ausführungsbeispiel der Erfindung, und Fig. 2 den aus dem Deckel herausgelösten und gekürzten Fluidka- nalstumpf mit im Sammelfilter gesammelten Bestandteilen des Probenmaterials zum Anschluss an eine Analysevorrichtung. Die Erfindung wird nun am Beispiel eines tragbaren Behälters für die Tuberkulose-Präanalytik näher erläutert. Figur 1 zeigt hierzu einen Präanalytik- Becher 10 mit Deckel 30, der zur Illustration etwas abgesetzt vom becherförmigen Hauptkörper 12 des Bechers 10 in einer Position kurz vor dem vollständigen Verschließen des Bechers gezeigt ist.
Der becherförmige Hauptkörper 12 weist einen Boden 14, Seitenwände 16 und eine obere Öffnung 18 auf, welche mit dem Deckel 30 verschlossen werden kann. Im Bodenbereich des Hauptkörpers 12 ist ein Aufnahmebereich 20 für das zu analysierende Probenmaterial P, insbesondere Sputum, vorgese- hen.
Im unteren Teil des Aufnahmebereichs 20 sind in einem Vorlagebereich 22 eine mechanische Solubilisierungshilfe 24, beispielsweise in Form kleiner Steinchen, sowie immobilisierte Chemikalien 26 für einen Vorbehandlungs- schritt des Probenmaterials P vorgelegt. Zum Schutz der Chemikalien 26 ist der Vorlagebereich 22 durch eine beim Verschließen des Hauptkörpers 12 zerstörbare Deckschicht 28 in Form einer dünnen Kunststofffolie abgeschlossen. Der Deckel 30 weist eine Oberseite 32 und eine Unterseite 34 auf, wobei die Unterseite 34 in der in Fig. 1 angedeuteten Verschlussstellung ins Innere des Bechers 10 weist. Ein Fluidkanal 36 durchdringt den Deckel 30 von der Oberseite 32 zur Unterseite 34 und reicht in der Verschlussstellung bis in den Aufnahmebereich 20 des Bechers 10. Im Ausführungsbeispiel ist der Fluidkanal 36 durch ein lösbar in einer mittigen Öffnung des Deckels 30 fixiertes Röhrchen gebildet, dessen Länge so bemessen ist, dass es in der Verschlussstellung des Deckels 30 mit einem unteren Röhrchenabschnitt 38 die Deckschicht 28 durchstößt und damit die mechanische Solubilisierungshilfe 24 und die Chemikalien 26 freilegt. Der Fluidkanal 36 enthält zwei, in entgegengesetzte Richtungen weisende Luer- Verbindungsanschlüsse, nämlich einen äußeren Lueranschluss 40 auf der Deckel- Oberseite 32 und einen inneren Lueranschluss 42 an der Deckel- Unterseite 34. Der innere Lueranschluss 42 liegt zunächst noch unzugänglich im Inneren des Fluidkanals 36, wie in Fig. 1 dargestellt. Zwischen den beiden Lueranschlüssen 40, 42 ist im Fluidkanal 36 ein Sammelfilter 44 zum Sammeln von Bestandteilen des im Behälter vorbehandelten Probenmaterials P angeordnet.
Der äußere Lueranschluss 40 dient dem Anschluss einer externen Zuführ- Vorrichtung 100 zur Zuführung einer Vorbehandlungslösung 102 für die Vorbehandlung des Probenmaterials P, wie weiter unten genauer erläutert. Der innere Lueranschluss 40 ist für den späteren Anschluss an eine externe Analysevorrichtung 200 (Fig. 2) zur Analyse der im Sammelfilter 44 gesammelten Bestandteile des Probenmaterials P vorgesehen. Da er zunächst un- zugänglich im Inneren des Fluidkanals 36 liegt, ist unmittelbar angrenzend eine Sollbruchstelle 46 im Röhrchen zur Abtrennung des unteren Fluidka- nalabschnitts 38 vorgesehen. Ein Arbeitsauflauf für die laborunabhängige Präanalytik mit dem Becher 10 der Fig. 1 kann dabei beispielsweise wie folgt verlaufen:
Zunächst wird ein von einem Patienten mit Verdacht auf Lungentuberkulose gewonnenes Sputum als Probenmaterial P in den Aufnahmebereich 20 des Bechers 10 gebracht und der becherförmige Hauptkörper 12 mit dem Deckel 30 verschlossen. Diese Schritte können vom Patienten selbst durchgeführt werden und bergen daher kein Infektionsrisiko für den Untersucher. Beim Schließen des Deckels 30 durchstößt das Röhrchen 36 mit seinem unteren Abschnitt 38 die Deckschicht 28 und legt damit die Chemikalien 26 und die Solubilisierungshilfe 24 frei.
Dann wird zur Aufbereitung des biologischen Materials im Sputum P für die TB-Diagnostik eine Dekontamination und Solubilisierung des Sputums P durchgeführt, wie weiter oben bereits erläutert.
Zur Aufbereitung wird eine Spritze 100 oder andere Zuführvorrichtung mit dem äußeren Lueranschluss 40 des Fluidkanals 36 verbunden und es wird eine geeignete Vorbehandlungslösung 102 über den Fluidkanal 36 in den
Aufnahmebereich 20 gebracht. Durch die Vorbehandlungslösung 102, die im Vorlagebereich 22 vorgelegten Chemikalien 26 und die mechanische Solubi- Üsierungshilfe 24 wird das Probenmaterials P solubisiert und dekontaminiert und gegebenenfalls auch inaktiviert. Dieser Schritt kann durch den Patienten selbst oder einen Untersucher erfolgen und erfordert neben dem Zuführen der Vorbehandlungslösung 102 lediglich ein mechanisches Schütteln der Mischung im verschlossenen Becher. Anschließend wird das vorbehandelte, nämlich solubisierte, dekontamierte und gegebenenfalls auch inaktivierte Probenmaterial aus dem Aufnahmebe- reich 20 über den Fluidkanal 36 durch den Sammelfilter 44 hindurch wieder in die Spritze 100 abgesaugt. Durch die Vorbehandlung des Probenmaterials ist das sonstige Zellmaterial lysiert, so dass im Wesentlichen nur die stabilen Zellen der Mykobakterien 50 (Fig. 2) im Sammelfilter 44 aufgefangen werden. Diese weisen nämlich einen besonderen Zellwandaufbau mit hohem Lipid- und Wachsanteil auf, der für die hohe Resistenz und Stabilität der Bazillen verantwortlich ist.
Mit Bezug auf Fig. 2 kann nun durch einen Untersucher das Röhrchen 36 aus dem Deckel 30 herausgelöst werden, indem der untere Abschnitt 38 des Flu- idkanals 36 an der Sollbruchstelle 46 abgetrennt wird, so dass der innere Lu- eranschluss 42 zugänglich wird.
Die in Infektionsfall gesammelten Zellen der Mykobakterien 50 liegen auf der dem inneren Lueranschluss 42 zugewandten Seite des Sammelfilters 44 vor. Nun wird, gegebenenfalls nach vorheriger Reinigung des im Sammelfilter 44 gesammelten Materials, der noch verbleibende Röhrchenstumpf 52 über den inneren Lueranschluss 42 mit einer Analysevorrichtung 200 zur Analyse der im Sammelfilter 44 gesammelten Bestandteile des Probenmaterials verbunden. Die nachfolgenden Verfahren zur Reinigung, Amplifikation und Detektion der Mykobakterien 50 in der Analysevorrichtung 200 sind nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
In manchen Ausgestaltungen kann auch auf einige der im Zusammenhang mit Fig. 1 beschriebenen Elemente verzichtet werden. Beispielsweise kann je nach gewünschter Vorbehandlung auf die Chemikalien 26 und gegebenenfalls auch auf die Solubilsierungshilfe 24 verzichtet werden. Deren Funktio- nalität kann beispielsweise teilweise oder vollständig von der oder den über den äußeren Verbindungsanschluss 40 zugeführten Vorbehandlungslö- sung(en) übernommen werden. Beispielsweise kann in der Spritze 100 eine geschichtete Vorbehandlungslösung vorliegen, die nacheinander eine De- kontaminierung und Inaktivierung des Probenmaterials ermöglicht.
In einer besonders einfachen Ausgestaltung wird auf den inneren Verbindungsanschluss 42 des Fluidkanals 36 verzichtet. Der Fluidkanal 36 wird in diesem Fall mit seinem äußeren Verbindungsanschluss 40 mit einer Analy- sevorrichtung 200 verbunden. Der Deckel 30 muss dabei nicht von dem Hauptkörper 12 abgenommen werden, so dass beispielsweise eine Spüllösung zur Reinigung des im Sammelfilter 44 gesammelten Materials vom Becher 10 aufgenommen werden kann. Dabei muss allerdings darauf geachtet werden, dass zum einen die auf dem Filter gesammelten Bazillen nicht in den Becher zurückgespült werden und dass zum anderen die TB-DNA nach einem Aufschluss der TB-Zellen nicht oder nur geringfügig in diese im Fluidkanal befindliche Spülflüssigkeit diffundieren und nicht mehr in die Analysevorrichtung 200 eingebracht werden können.

Claims

Patentansprüche 1. Tragbarer Behälter insbesondere für die Tuberkulose-Präanalytik mit einem becherförmigen Hauptkörper mit einem Boden, Seitenwänden und ei beren Öffnung, wobei im Bodenbereich des Hauptkörpers ein Au mebereich für das zu analysierende Probenmaterial, insbesondere Sputum, vorgesehen ist, einem Deckel zum Verschließen der oberen Öffnung des Hauptkörpers, mit einer in Verschlussstellung ins Behälterinnere weisenden Unterseite und einer nach außen weisenden Oberseite, und einem den Deckel von der Oberseite zur Unterseite durchdringenden und zum Aufnahmebereich führenden Fluidkanal, der
auf der Deckel- Oberseite einen äußeren Verbindungsanschluss für eine externe Zuführvorrichtung zur Zuführung einer Vorbehandlungslösung für die Vorbehandlung des Probenmaterials in dem Aufnahmebereich aufweist, und
einen Sammelfilter zum Sammeln von Bestandteilen des im Behälter vorbehandelten Probenmaterials aufweist.
2. Behälter nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Fluidkanal auf der Deckel- Unterseite einen inneren Verbindungsanschluss für den späteren Anschluss an eine externe Analysevorrichtung zur Analyse der im Sammelfilter gesammelten Bestandteile des Probenmaterials aufweist, und dass der Sammelfilter in dem Fluidkanal zwischen dem äußeren und dem inneren Verbindungsanschluss angeordnet ist.
3. Behälter nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Fluid- kanal angrenzend an den inneren Verbindungsanschluss eine Sollbruchstelle zur Abtrennung eines distalen Fluidkanalabschnitts aufweist.
4. Behälter nach wenigstens einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass der äußere und/ oder innere Verbindungsanschluss ein Luer-Anschluss ist.
5. Behälter nach wenigstens einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch ge- kennzeichnet, dass im Aufnahmebereich des Hauptkörpers in einem Vorlagebereich eine mechanische Solubüisierungshilfe vorgelegt ist.
6. Behälter nach wenigstens einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass im Aufnahmebereich des Hauptkörpers in einem Vorla- gebereich Chemikalien für einen Vorbehandlungsschritt des Probenmaterials vorgelegt sind.
7. Behälter nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Vorlagebereich durch eine beim Verschließen des Hauptkörpers zerstörbare Deckschicht abgeschlossen ist.
8. Behälter nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Fluidkanal durch ein Fluidröhrchen gebildet ist, das lösbar in dem Deckel angebracht ist.
9. Verfahren zur Vorbehandlung eines zu analysierenden Probenmaterials, insbesondere Sputum mit einem tragbaren Behälter nach einem der Ansprüche 1 bis 8, bei dem a) der becherförmige Hauptkörper nach Einbringen von zu analysierendem Probenmaterial mit dem Deckel verschlossen wird, so dass die Deckel-Unterseite ins Behälterinnere und die Deckeloberseite nach außen weist, b) eine Zuführvorrichtung, insbesondere eine Spritze, mit dem äußeren Verbindungsanschluss des Fluidkanals des Deckels verbunden und eine Vorbehandlungslösung über den Fluidkanal dem Auf nahmebereich zugeführt wird, und c) das vorbehandelte Probenmaterial über den Fluidkanal wieder in die externe Zuführvorrichtung abgesaugt wird, wobei Bestandteile des vorbehandelten Probenmaterials in dem Sammelfilter gesammelt werden.
10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass nach Schritt c) entweder
d1) der Becher über den äußeren Verbindungsanschluss mit einer Analysevorrichtung zur Analyse der im Sammelfilter gesammelten Bestandteile des Probenmaterials verbunden wird, oder
d2) der Fluidkanal, gegebenenfalls nach Trennung vom Deckel, über den inneren Verbindungsanschluss mit einer Analysevorrichtung zur Analyse der im Sammelfilter gesammelten Bestandteile des Probenmaterials verbunden wird, wobei vorzugsweise ein distaler Fluidka- nalabschnitt an der Sollbruchstelle von dem Fluidkanal abgetrennt wird um den inneren Verbindungsanschluss zugänglich zu machen, und der verbleibende Fluidkanalstumpf mit dem inneren Verbindungsanschluss mit der Analysevorrichtung verbunden wird.
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