WO2019020820A2 - Compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable comprenant au moins l'insuline humaine a21g et un suppresseur de glucagon a action prandiale - Google Patents

Compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable comprenant au moins l'insuline humaine a21g et un suppresseur de glucagon a action prandiale Download PDF

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Definitions

  • the invention relates to injection therapy composition comprising at least human insulin A21G, prandial action, and a glucagon suppressor, particularly prandial action to treat diabetes and to improve control postprandial hyperglycaemia.
  • Type 1 diabetes is an autoimmune disease leading to the destruction of beta cells of the pancreas. These cells are known to produce insulin, whose main role is to regulate glucose utilization in peripheral tissues (Gerich 1993 Control of glycaemia). As a result, patients with type 1 diabetes have chronic hyperglycaemia and must use exogenous insulin to reduce this hyperglycemia. Insulin therapy has drastically changed the life expectancy of these patients.
  • type 1 diabetic patients use two types of insulin, short-acting prandial insulins to control their glycemia at mealtime, and long-acting basal insulins to control their blood sugar throughout the entire period. day and night.
  • Several types of short-acting insulin exist characterized by their time of action.
  • the so-called regular human insulin has a delayed action compared to so-called rapid insulin analogues, such as insulin lispro (Humalog®, ELI LILLY) or insulin aspart (Novorapid®, NOVO NORDISK).
  • rapid insulin analogues such as insulin lispro (Humalog®, ELI LILLY) or insulin aspart (Novorapid®, NOVO NORDISK).
  • human insulin should be administered on average 30 minutes before the meal while insulin analogues can be given 15 minutes before the meal or at the time of the meal.
  • insulin analogues lead to better control of postprandial glucose than human insulin, which explains why the vast majority of patients in Europe
  • glucagon suppressors in particular peptides and / or hormones, are capable of inhibiting the production of glucagon after taking a meal, which leads to a significant improvement in the control of blood glucose levels. postprandial.
  • amylin a hormone produced by pancreatic beta cells, whose production is also deficient in type 1 diabetic patients, plays a key role in the regulation of postprandial glucose.
  • Amylin also known as "islet amyloid polypeptide" or IAPP, is a 37 amino acid peptide that is co-stored and co-secreted with insulin (Schmitz 2004 Amylin Agonists).
  • This peptide is described as blocking the production of glucagon by alpha cells of the pancreas.
  • insulin and amyli have complementary and synergistic roles, since insulin can reduce the concentration of glucose in the blood while amylin can reduce endogenous glucose entry into the blood by inhibiting production, or secretion, of endogenous glucagon.
  • human amylin has properties that are not compatible with pharmaceutical requirements in terms of solubility and stability (Goldsbury CS, Cooper GJ, Goldie KN, Muller SA, Saafi EL, Gruijters WT, Misur MP, Engel A, Aebi U, Kistler J: Polymorphic Fibrillar Assembly of Human Amylin J Struct Biol 119: 17-27, 1997).
  • Amylin is known to form amyloid fibers which lead to the formation of plaques that are insoluble in water. Therefore, it was necessary to develop an analogue in order to solve these solubility problems.
  • the Amylin company has developed an analog of amylin, pramlintide, to overcome the lack of physical stability of human amylin.
  • This product marketed as Symlin®, was approved in 2005 by the FDA for the treatment of type 1 and type 2 diabetics, in addition to insulin therapy. It should be administered subcutaneously three times per day in the hour before the meal to improve control of postprandial glucose, given its relatively short half-life of a few hours.
  • This peptide is formulated at H 4.0 and is described to fibrillate when the pH of the solution is greater than 5.5. Analog variants are described in US Pat. No. 5,686,411.
  • These amylin derivatives for controlling blood glucose at the time of the meal may have a half-life of less than 8 hours. This half-life is the apparent elimination half-life after subcutaneous injection in humans.
  • the half life of these amylin analogs or amylin receptor agonists can be less than 5 hours, especially less than 4 hours, or even less than 3 hours.
  • compositions comprising a myline or an amylin analogue, and in particular pramlintide, may cause certain undesirable effects in patients.
  • these compositions may cause nausea in patients.
  • GLP-1 another physiological peptide, is also described to play a role similar to that of amylin in terms of suppressing the secretion of glucagon following the taking of a meal.
  • GLP-1 is also known for its role of insulin secretagogue and is therefore particularly effective in addition to insulin, especially in patients with type 2 diabetes. These actions are glucodependent, which minimizes the risk of hypoglycemia.
  • GLP-1 RA to date, are approved only for type 2 diabetic patients. Similarly, human GLP-1 can not be used as a therapeutic treatment because of an extremely high half-life. short.
  • GLP-1 derivatives reproduce the effects of GLP-1 while having a longer half-life.
  • GLP-1 derivatives can be divided into three groups according to their respective half-lives: those with short-acting action, or prandial, to control blood glucose at the time of the meal (half-life less than 8 hours), those with daily action to cover the needs during the day (half-life greater than 8 or 10h) and those with weekly action to cover the needs during the week (half-life greater than 48 hours).
  • GLP-1 RA At the level of GLP-1 RA with a prandial action, the two peptides approved so far are exenatide (Byetta®, ASTRA-ZENECA, two administrations per day) and lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI, one administration per day). These two GLP-1 RAs are formulated at a pH close to 4 and are to be administered within the hour preceding the meal, such as pramlintide.
  • One of the main difficulties for insulin dependent patients to use these different short-acting glucagon suppressor compounds is related to the number of additional injections, ranging from 1 to 3 injections per day beyond the 2 to 4 injections of insulin.
  • prandial insulins and these peptides of interest are not compatible in aqueous solution.
  • prandial insuli have optimum chemical stability at a pH close to 7, whereas the derivatives of amylin or GLP-1 are not physically and chemically stable at a pH close to physiological pH.
  • Patent application EP2060268 of NOVO NORDISK discloses insulin and pramlintide formulations in the form of an atomized powder for nasal application.
  • the preferred route of administration and the most used to date is the subcutaneous route for which obtaining aqueous solutions ready for use is necessary.
  • the application WO2007104786 also has rapid insulin compositions, especially B28D (insulin aspart) at neutral pH and in the presence of surfactant, and in particular derivative of glycerophosphate, more particularly dimyristoyl glycerophosphoglycerol (DMPG), lead to stabilities measured by ThT well above those of fast analogous insulin compositions A21G, B28D desB30 and A21G, B28E desB30 at acidic pH.
  • B28D insulin aspart
  • DMPG dimyristoyl glycerophosphoglycerol
  • compositions of the prior art comprising in combination a prandial insulin and pramlintide describe, most of the time the different types of prandial insulins, however their examples are directed to compositions comprising so-called fast prandial analog insulins, the latter being considered more efficient than human insulin.
  • a composition containing the human insulin A21G called “regular”
  • regular that is to say insulin differing insulin hu maine only by the replacement of the asparagine residue at position 21 on the A chain by a glycine residue, which is less rapid than so-called “fast” insulin analogues, in association with a prandial glucagon suppressor at a pH ranging from 3.5 to 4.4 in aqueous solution provided better control of postprandial glucose than with a so-called fast meal insulin analogue.
  • composition containing human insulin A21G, in combination with a suppressor of prandial glucagon at a pH ranging from 3.5 to 4.4 in aqueous solution had a physical and chemical stability compatible with pharmaceutical requirements and superior to the solutions proposed in the prior art.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least the so-called regular human insulin A21G and at least one glucagon suppressor. prandial action.
  • the prandial glucagon suppressor is an amylin analogue or an amylin receptor agonist, a GLP-1 analogue, or a GLP-1 receptor agonist. called GLP-1 RA.
  • the formulation according to the invention at a pH of 3.5 to 4.4 has pharmacokinetic properties compatible with use at mealtimes and allows better control of postprandial glucose.
  • the invention also relates to the use of a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least human insulin A21G and a glucagon suppressor. , especially at mealtime, to improve postprandial glucose control.
  • a composition according to the invention for use in a method of treating diabetes characterized in that it is administered as a bolus before meals.
  • the invention also relates to a composition according to the invention for use in a method of treating diabetes characterized in that it is administered to improve the control of postprandial blood glucose.
  • the invention also relates to a composition according to the invention for use in a diabetes treatment method characterized in that it is administered to improve the control of postprandial glucose and to reduce the adverse effects of pramlintide .
  • the invention also relates to a composition according to the invention intended to be used in a method of treating diabetes, characterized in that it makes it possible to reduce insulin-induced food intake.
  • the decrease in food intake relates to the period from the injection to 4 hours after injection.
  • the decrease in food intake concerns the period from the injection to 3 hours after injection.
  • the decrease in food intake concerns the period from the injection to 2 hours after injection.
  • the decrease in food intake concerns the period from the injection to 1 hours after injection.
  • the invention also relates to stable pharmaceutical formulations comprising such compositions.
  • an aqueous liquid formulation physically and chemically stable for at least two weeks, or even one month at 30 ° C (multiple uses) and at least one year, or even 2 years at 5 ° C,
  • formulations of human insulin A21G with a GLP-1 analogue or a GLP-1 receptor agonist, also called GLP-1 RA, for example exenatide or lixisenatide, pH ranging from 3.5 to 4.4 have a physical and chemical stability allowing the development of a stable liquid formulation at least two weeks, or even a month at 30 ° C and at least one year, or even 2 years, at 5 ° C
  • the conventional method for measuring the stability of proteins or peptides is to measure the formation of fibrils using Thioflavin T, also called ThT. This method makes it possible to measure, under temperature and stirring conditions allowing an acceleration of the phenomenon, the latency time before the formation of fibrils by measuring the increase in fluorescence.
  • the compositions according to the invention have a lag time before the formation of fibrils much higher than those described in the literature.
  • the compositions according to the invention have a physical and chemical stability, much greater than those described in the prior art using commercial prandial insulins.
  • the formulations according to the invention have a latency time measured by ThT at least equal to 8 hours.
  • the formulations according to the invention have a latency measured by ThT at least equal to 10 hours.
  • the formulations according to the invention have a latency time measured by ThT at least equal to 15 hours.
  • the formulations according to the invention have a latency measured by ThT at least equal to 20 hours.
  • the formulations according to the invention have a latency measured by ThT at least equal to 25 hours.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least human insulin A21G and an agonist at amylin receptor or an amylin analogue. According to one embodiment, it is pramlintide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and an agonist at amylin receptor or an amylin analogue. According to one embodiment, it is pramlintide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, whose pH is between 3.8 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and an agonist. at the amylin receptor or an amylin analogue. According to one embodiment, it is pramlintide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is 4.0, comprising at least the human insulin A21G and an amylin receptor agonist or an amyloid analogue. According to one embodiment, it is pramlintide. In one embodiment, the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least human insulin A21G and an agonist at GLP-1 receptor or an analogue of GLP-1. According to one embodiment, said GLP-1 receptor agonist is exenatide. According to another embodiment, said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and an agonist at GLP-1 receptor or GLP-1 analogue.
  • said GLP-1 receptor agonist is exenatide.
  • said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.8 and 4.2, comprising at least human insulin A21G and a calcium agonist.
  • GLP-1 receptor or a GLP-1 analogue comprising at least human insulin A21G and a calcium agonist.
  • said GLP-1 receptor agonist is exenatide.
  • said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is 4.0, comprising at least human insulin A21G and a GLP-1 receptor agonist or An analog of GLP-1.
  • said receptor agonist of GLP-1 is exenatide.
  • said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.5 and 4.4, comprising at least human insulin A21G, an agonist. at the amylin receptor or an amylin analogue, and a GLP-1 receptor agonist or GLP-1 analog.
  • said GLP-1 receptor agonist is exenatide.
  • said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • said amylin receptor agonist or amylin analogue is pramlintide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, whose pH is between 3.5 and 4.2, comprising at least human insulin A21G, at least one an amylin receptor agonist or an amylin analogue, and at least one GLP-1 receptor agonist or a GLP-1 analogue.
  • said GLP-1 receptor agonist is exenatide.
  • said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • said amylin receptor agonist or amylin analogue is pramlintide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is between 3.8 and 4.2, comprising at least human insulin A21G, at least an amylin receptor agonist or an amylin analogue, and at least one GLP-1 receptor agonist or a GLP-1 analogue.
  • said GLP-1 receptor agonist is exenatide.
  • said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • said amylin receptor agonist or amylin analogue is pramlintide.
  • the invention relates to a composition in the form of an injectable aqueous solution, the pH of which is 4.0, comprising at least human insulin A21G, at least one agonist at the receptor of the invention.
  • amylin or an amylin analogue and at least one GLP-1 receptor agonist or a GLP-1 analog.
  • said GLP-1 receptor agonist is exenatide.
  • said GLP-1 receptor agonist is lixisenatide.
  • said amylin receptor agonist or amylin analogue is pramlintide.
  • compositions in the form of an aqueous solution for injection according to the invention are clear solutions.
  • the term "clear solution” means compositions which satisfy the criteria described in the US and European pharmacopoeias concerning injectable solutions.
  • the solutions are defined in the ⁇ 1151> part referring to the injection ( ⁇ 1>) (referring to ⁇ 788> according to USP 35 and specified in ⁇ 788> according to USP 35 and in ⁇ 787> , ⁇ 788> and ⁇ 790> USP 38 (from 1 August 2014), according to USP 38).
  • injectable solutions must meet the criteria given in sections 2.9.19 and 2.9.20.
  • amylin refers to the compounds described in US Pat. Nos. 5,124,314 and 5,234,906.
  • analogue is meant, when used with reference to a peptide or protein, wherein one or more constituent amino acid residues of the primary sequence have been substituted by other amino acid residues and or wherein one or more constituent amino acid residues have been deleted and / or wherein one or more constituent amino acid residues have been added.
  • the percentage of homology allowed for the present definition of an analogue is 50%.
  • an analogue may for example be derived from the primary amino acid sequence of amylin by substituting one or more natural or non-natural amino acids or peptidomimetics.
  • the exenatide and lixisenatide respectively described in US2004 / 0023871 and WO0104156 are generally considered to be GLP-1 receptor agonists.
  • the prandial-acting glucagon suppressor is pramlintide (Symlin ®) marketed by ASTRAZENECA AB.
  • GLP-1, GLP-1 analogs, or GLP-1 RA are said to be “short-acting” or “prandial”.
  • short-acting or “prandial” is understood to mean GLP-1, GLP-1 analogues, or GLP-1 RA, whose apparent half-life of elimination after subcutaneous injection in humans is less 8 hours, in particular less than 5 hours, preferably less than 4 hours or even less than 3 hours, such as, for example, exenatide and lixisenatide.
  • the GLP-1, the GLP-1 analogs, or the GLP-1 RAs are chosen from the group consisting of exenatide (Byetta®, ASTRAZENECA), lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI), their analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts.
  • the GLP-1, GLP-1 analog, or GLP-1 RA is exenatide or Byetta * ', its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts.
  • GLP-1, GLP-1 analog, or GLP-1 RA is lixisenatide or Lyxumia®, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts.
  • the concentration of human insulin A21G is from 240 to 3000 ⁇ or from 40 to 500 U / ml. In one embodiment, the concentration of human insulin A21G is 600 ⁇ or 100 U / ml.
  • the concentration of human insulin A21G is 1200 ⁇ or 200 U / ml.
  • the concentration of human insulin A21G is 1800 ⁇ or 300 U / ml.
  • the concentration of human insulin A21G is 2400 ⁇ or 400 U / ml.
  • the concentration of human insulin A21G is 3000 ⁇ or 500 U / ml.
  • the concentration of pramiintide is 0.32 to 5 mg / m L.
  • the concentration of pramiintide is 0.4 to 3 mg / ml.
  • the concentration of pramiintide is from 0.5 to 2 mg / ml.
  • the concentration of pramiintide is 0.5 to 1.5 mg / mL.
  • the concentration of pramiintide is from 0.6 to 1 mg / mL.
  • the concentration of pramiintide is 1.0 mg / ml.
  • the concentration of pramiintide is 0.6 mg / ml.
  • the concentration of exenatide is from 10 to 1000 ⁇ g / ml.
  • the concentration of exenatide is from 10 to 500 mg / ml.
  • the concentration of exenatide is from 20 to 400 ⁇ g / ml.
  • the concentration of exenatide is from 20 to 300 ⁇ g / ml. In one embodiment, the concentration of exenatide is from 30 to 300 ⁇ g / ml. In one embodiment, the concentration of exenatide is from 30 to 150 ⁇ g / ml.
  • the concentration of exenatide is from 40 to 150 ⁇ g / ml.
  • the concentration of exenatide is from 40 to 80 ⁇ / ⁇ .
  • the concentration of exenatide is 50 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is from 20 to 1000 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is from 20 to 800 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is from 40 to 600 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is from 60 to 600 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is from 60 to 300 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is from 80 to 300 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is from 80 to 160 ⁇ g / ml.
  • the concentration of lixisenatide is 100 ⁇ g / ml.
  • the concentration of exenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is in a range of 0.01 to 1.0 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of exenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.01 to 0.5 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of exenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.02 to 0.4 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of exenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.03 to 0.3 mg per 100 U of insulin. In one embodiment, the concentration of exenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.03 to 0.2 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of exenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is from 0.03 to 0.15 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of exenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.05 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is in a range of 0.01 to 1 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of lixisenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is from 0.01 to 0.5 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of lixisenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.02 to 0.4 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of lixisenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.03 to 0.3 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of lixisenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.04 to 0.2 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of lixisenatide, its analogs or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is from 0.04 to 0.15 mg per 100 U of insulin.
  • the concentration of lixisenatide, its analogues or derivatives and their pharmaceutically acceptable salts is 0.1 mg per 100 U of insulin.
  • compositions according to the invention are produced by mixing solutions, amylin analogs or agonists with the amylin receptor, and solutions of GLP-1, of analogous of GLP-1 or GLP-1 RA receptor agonist in volume ratios in the range of 10/90 to 90/10.
  • the compositions according to the invention also comprise zinc salts at a concentration of from 0 to 800 ⁇ l per 100 U of insulin.
  • compositions according to the invention also comprise zinc salts at a concentration of from 0 to 500 ⁇ per 100 U of insulin.
  • compositions according to the invention also comprise zinc salts at a concentration of 100 to 500 ⁇ per 100 U of insulin.
  • compositions according to the invention also comprise zinc salts at a concentration of between 200 and 400 ⁇ per 100 U of insulin.
  • compositions according to the invention also comprise zinc salts at a concentration of 300 ⁇ per 100 U of insulin.
  • compositions according to the invention also comprise buffers.
  • compositions according to the invention comprise a buffer selected from the group consisting of a sodium acetate buffer and Tris.
  • compositions according to the invention further comprise preservatives.
  • the preservatives are selected from the group consisting of m-cresol and phenol, alone or in admixture.
  • the concentration of the preservatives is from 10 to 50 mM.
  • the concentration of the preservatives is from 10 to 40 mM.
  • compositions according to the invention further comprise a surfactant.
  • the surfactant is selected from the group consisting of Poloxamer 188, T een® 20, also called Polysorbate 20, and Tween® 80, also called Polysorbate 80.
  • the Tween® 20 concentration ranges from 5 to 50 ⁇ g / ml. In one embodiment, the T een® concentration ranges from 5 to 25 ⁇ g / ml.
  • compositions according to the invention may further comprise additives such as tonicity agents.
  • the tonicity agents are selected from the group consisting of glycerine, sodium chloride, mannitol and glycine.
  • the compositions according to the invention further comprise an antioxidant.
  • the antioxidant is methionine.
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one absorption promoter chosen from absorption promoters, diffusion promoters or vasodilator agents, alone or as a mixture.
  • Absorption promoters include, but are not limited to, surfactants, for example, bile salts, acid salts, or phospholipids; nicotinic agents, such as nicotinamides, nicotinic acids, niacin, niacinamide, vitamin B3 and their salts; inhibitors of pancreatic trypsin; magnesium salts; polyunsaturated fatty acids; phosphatidylcholine didecanoyl; aminopolycarboxylates; tolmetin; the sodium spleen cap; salicylic acid; oleic acid; linoleic acid; eicosapentaenoic acid (EPA); docosahexaenoic acid (DHA); benzyl acid; Nitric oxide donors, for example, 3- (2-Hydroxy-1- (1-methylethyl) -2-nitrosohydrazino) -1-propanamine, N-ethyl-2
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one diffusion promoter.
  • diffusion promoters include, but are not limited to, glycosaminoglycanases, e.g., hyaluronidase.
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one vasodilating agent. In one embodiment, the pharmaceutical composition further comprises at least one vasodilator causing hyperpolarization by blocking the ion channels of calcium.
  • the vasodilator causing hyperpolarization by blocking calcium ion channels is adenosine, a hyperpolarizing agent derived from the endothelium, a phosphodiesterase type 5 (PDE5) inhibitor, a agent for opening potassium channels or any combination of these agents.
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one cAMP-mediated vasodilator.
  • the pharmaceutical composition further comprises at least one cGMP mediated vasodilator agent. In one embodiment, the pharmaceutical composition further comprises at least one vasodilating agent selected from the group consisting of vasodilator agents that act by causing hyperpolarization by blocking calcium ion channels, cAMP mediated vasodilator agents, and cGMP-mediated vasodilator agents.
  • the at least one vasodilator is selected from the group consisting of nitrogen monoxide donors, for example, nitroglycerin, isosorbide dinitrate, isosorbide mononitrate, amyl nitrate, and the like. erythritol, tetranitrate, and nitroprusside); prostacyclin and its analogues, for example, epoprostenol sodium, iloprost, epoprostenol, treprostinil or selexipag; histamine, 2-methylhistamine, 4-methylhistami ne; 2- (2-pyridyl) ethylamine, 2- (2-thiazolyl) ethylamine; papaverine, papaverine hydrochloride; minoxidil; dipyridamole; hydralazine; adenosine, adenosine triphosphate; uridine trisphosphate; the GPLC; L-carnitine;
  • the composition according to the invention contains from 3.5 mg / ml to 10.5 mg / ml of human insulin A21G, 0.6 mg / ml to 3 mg / ml of pramiintide, 25 mM m-cresol, 184 mM glycerine at a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 300 to 900 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular from 8 to 10 ⁇ , and especially from 8 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 3.5 mg / ml of human insulin A21G, 0.6 to 1 mg / ml of pramiintide, 25 to 30 mM of m-cresol, 150 to 200 mM glycerin, at a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 300 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular from 8 to 10 ⁇ , and especially from 8 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 3.5 mg / ml of human insulin A21G, 0.6 mg / ml of pramiintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerine, a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 300 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 10 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 3.5 mg / ml of human insulin A21G, 0.6 mg / ml of pramiintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 300 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 8 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 3.5 mg / ml of human insulin A21G, 1.0 mg / ml of pramiintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerine, a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 300 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 8 ⁇ l.
  • the composition according to the invention contains 7.0 mg / ml of human insulin A21G, from 1.2 to 2.0 mg / ml of pramiintide, 25 mM of cresol, 150 to 200 mM glycerin, at a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 600 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular from 8 to 10 ⁇ , and especially from 8 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 7.0 mg / ml of human insulin A21G, 1.2 mg / ml of pramlintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, at a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 600 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 10 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 7.0 mg / ml of human insulin A21G, 1.2 mg / ml of pramlintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerine, a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 600 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 8 ⁇ l.
  • the composition according to the invention contains 7.0 mg / ml of human insulin A21G, 2.0 mg / ml of pramlintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, at a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 600 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 8 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 10.5 mg / ml of human insulin A21G, 1.8 to 3 mg / m L pramlintide, 25 mM m-cresol, 150 to 200 mM glycerin, at a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 900 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular from 8 to 10 ⁇ , and especially from 8 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 10.5 mg / ml of human insulin A21G, 1.8 mg / ml of pramlintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 900 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 10 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 10.5 mg / ml of human insulin A21G, 1.8 mg / ml of pramlintide, 25 mM of m-cresol, 184 mM of glycerin, at a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 900 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 8 ⁇ .
  • the composition according to the invention contains 10.5 mg / ml of human insulin A21G, 3 mg / m L of pramlintide, 25 mM of m -cresol, 184 mM of glycerine, a pH of 4.0.
  • This composition may also contain 900 ⁇ l of zinc.
  • This composition may further comprise polysorbate 20, in particular 8 ⁇ .
  • the compositions according to the invention may furthermore comprise all the excipients according to the Pharmacopoeia, in particular EP and / or US, and compatible with the insulins used at the concentrations of use.
  • the composition may be in solid or freeze-dried form. This composition can then be used to reconstitute a solution or formulation.
  • the modes of administration envisaged are intravenous, subcutaneous, intradermal or intramuscular.
  • the mode of administration is the subcutaneous route.
  • transdermal, oral, nasal, vaginal, ocular, oral, and pulmonary routes of administration are also contemplated.
  • the invention also relates to a pump, implantable or transportable, comprising a composition according to the invention.
  • the invention also relates to the use of a composition according to the invention intended to be placed in a pump, implantable or transportable.
  • the invention also relates to single-dose formulations.
  • the formulations are in the form of an injectable solution.
  • composition according to the invention has the advantage of being possible by simple mixing of an aqueous solution, an amylin analogue or an agonist with the amylin receptor, and of human insulin A21G, in aqueous solution or in freeze-dried form. If necessary, the composition of the mixture is adjusted to excipients such as glycerine, m-cresol, zinc chloride, and polysorbate 20 (Tween® 20). This addition can be carried out by adding concentrated solutions of said excipients.
  • excipients such as glycerine, m-cresol, zinc chloride, and polysorbate 20 (Tween® 20). This addition can be carried out by adding concentrated solutions of said excipients.
  • compositions are characterized in that said compositions have a solubility at a pH of 4.0 and a physical stability measured by ThT greater than that of a reference composition comprising an analog of amylin or an amylin receptor agonist and commercial prandial insulin.
  • ThT is measured according to the protocol described in the examples.
  • compositions are characterized in that said compositions have a solubility at a pH of 4.0 and a physical stability measured by ThT greater than that of a reference composition comprising a GLP-1, a GLP-1 analogue or a GLP-1 receptor agonist and a commercial prandial insulin.
  • Insulin and similar insulins can be obtained by recombinant DNA technology methods in bacteria such as Escherichia coli or in yeasts such as Saccharomyces cerevisiae (see for example G. Walsh Appl Microbiol. Biotechnol 2005, 67, 151-159). Generally, proinsulin is produced which is then digested with enzymes such as trypsin and carboxypeptidase B to obtain the desired sequence.
  • proinsulin is coded for glycine at A21 and after digestion with trypsin and carboxypetidase B, the desired insulin is obtained.
  • trypsin and carboxypetidase B One procedure is described by Kohn et al., In Peptides 2007, 28, 935-948.
  • the invention also relates to the process for obtaining the human insulin A21G comprising at least one step consisting in reacting the human insulin A21G, B31 R, B32R (insulin glargine) with the rat carboxypeptidase B to a insulin / carboxypeptidase ratio between 500 and 2000, at a pH of 7.5 to 8.5 and at a temperature of 20 to 30 ° C for 10 to 20 hours.
  • the product can then be purified. This purification can be carried out by liquid chromatography.
  • the human insulin A21G can thus be obtained by removing the two arginines from the insulin glargi ne by digestion with a carboxypeptidase B. After enzymatic digestion, the human insulin A21G is purified by chromatography and then isolated by lyophilization or by crystallization by conventional methods.
  • Figure 1 Graphical determination of the fibrillation latency time.
  • FIG. 1 is shown the graphical determination of the fibrillation latency time on a virtual example.
  • the abscissa is the time in minutes
  • the ordinate is the fluorescence ThT in arbitrary unit (u .a.)
  • LT is the lag time, or "lag time”.
  • Figure 2 Pramlintide and plasma insulin concentrations after administration of A21-8 formulation (mean ⁇ standard error)
  • the squares represent the concentration of insulin and the triangles the concentration of pramlintide.
  • Figure 3 Glycemia after administration of formulation A21-8 (mean ⁇ standard error).
  • Figure 4 Pramlintide concentrations after administration of formulation A21-9 (curve plotted with squares) and PRA (curve plotted with triangles) (mean ⁇ standard error).
  • insulin glargine (Gan & Lee Pharmaceuticals) were mixed with the carboxypeptidase B enzyme (Reference 08039852001, Sigma-Aldrich) at pH 8.0 (pH adjusted by addition of Tris buffer) and left to 25 ° C for 17 hours, the concentration of insulin glargine being about 4 mg / ml.
  • the enzyme / glargine ratio is 1/500.
  • the mixture is then purified by liquid chromatography, dialyzed against 0.01N hydrochloric acid and then lyophilized.
  • the human insulin A21G is obtained with a purity of 98% and a yield of approximately 90%.
  • the molar mass of insulin measured by mass spectrometry (Maldi-Tof) is 5752 Da.
  • A21G human insulin can also be obtained from recombinant technology as described by Kohn et al. (Peptides 2007, 28, 935-948).
  • Example 2 Compositions of prandial insulin and pramiintide, exenatide or lixisenatide at acidic pH.
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerol) is added to a concentrated solution of human insulin A21G (300 U / mL at pH 3.5).
  • a solution of concentrated pramiintide (Ambiopharm) (10 mg / mL at pH 4) and a solution of zinc chloride concentrate are added to this concentrated solution of human insulin A21G and excipients so as to obtain the final composition targeted.
  • the final pH, 3.5 or 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 ⁇ and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerine) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (800 U / mL at pH 3.5).
  • a concentrated solution of pramiintide (10 mg / mL at pH 4) is added to this concentrated solution of human insulin and excipients so as to obtain the final composition targeted.
  • the final pH, 4.0, is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 ⁇ and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (300 U / mL at pH 3.5).
  • Concentrated pramiintide solution (10 mg / mL at pH 4) and a concentrated tvveen solution are added to this concentrated solution of human insulin A21G and excipients so as to obtain the final composition targeted.
  • the final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 pm and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerine) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (300 U / mL at pH 3.5).
  • a solution of concentrated pramlintide (10 mg / mL at pH 4), a concentrated zinc chloride solution and a concentrated tween solution are added to this concentrated solution of human insulin A21G and excipients to obtain the desired final composition
  • the final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 ⁇ m and stored in glass cartridges (1 ml of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerin) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (300 U / mL at pH 3.5).
  • a concentrated solution of exenatide (Bachem) (10.5 mg / mL at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of human insulin A21G and excipients to obtain the final composition referred.
  • the final pH 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 pm and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerine) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (230 U / mL at pH 3.5).
  • a solution of concentrated lixisenatide (Ambiopharm) (10.5 mg / mL at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of human insulin A21G and excipients to obtain the final composition.
  • PH Final 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl. The solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 ⁇ and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerine) is added to a solution of concentrated human insulin A21G (300 U / mL at pH 3.5).
  • a solution of concentrated pramlintide (Ambiopharm) (10 mg / mL at pH 4), concentrated exenatide (Bachem) solution (10.5 mg / mL at pH 4) and concentrated tween 20 solution are added to this solution.
  • concentrated human insulin A21G and excipients to obtain the final composition aimed.
  • the final pH 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 ⁇ and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerine) is added to a concentrated solution of human insulin (Amphastar Pharmaceuticals) (800 U / mL at pH 3.5).
  • a solution of concentrated pramlintide (10 mg / mL at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of human insulin and excipients so as to obtain the final composition targeted.
  • the final pH, 3.5 or 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered through 0.22 ⁇ m and stored in glass cartridges (1 ml of solution per layer).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerol) is added to a concentrated solution of insulin aspart (HEC Pharmaceuticals) (500 U / mL at pH 3).
  • a solution of concentrated pramlintide (10 mg / mL at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of insulin aspart and excipients to obtain the final composition targeted.
  • the final pH, 3.5 or 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution adjusted to pH 4.0 is turbid as soon as the pH adjustment.
  • the solution adjusted to pH 3.5 is clear. This is filtered through 0.22 ⁇ m and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • a concentrated solution of excipients (m-cresol, glycerine) is added to a solution of insulin lispro (Gan and Lee Pharmaceuticals) concentrated (650 U / mL at pH 3).
  • a concentrated solution of pramiintide (10 mg / mL at pH 4) and a concentrated solution of zinc chloride are added to this concentrated solution of insulin lispro and excipients so as to obtain the final composition targeted.
  • the final pH, 3.5 or 4.0 is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, it is filtered on 0.22 pm and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge).
  • the pH of the commercial solution of insulin glulisine, Apidra® is adjusted to pH 2.5 by addition of an aqueous solution of HCl.
  • This solution is added to pramiintide in the form of powder so as to obtain a solution containing 100 U / ml of insulin and 1 mg / ml of pramiintide.
  • the final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • Solutions adjusted to pH 3.5 and 4.0 are turbid as of pH adjustment.
  • the solution adjusted to pH 3.0 is clear. This is filtered through 0.22 ⁇ m and stored in glass cartridges (1 mL of solution per cartridge). After a few hours of storage the solution is turbid and heterogeneous.
  • a concentrated solution of pramiintide at 10 mg / mL is prepared by dissolving pramiintide in powder form purchased from Ambiopharm. This solution is added to a concentrated solution of excipients (m-cresol, mannitol, acetic acid buffer / sodium acetate) so as to obtain the final composition targeted. The final pH is adjusted to 4.0 ⁇ 0.2 by addition of NaOH / HCl.
  • Concentrated solutions of glycerine and m-cresol are added to a solution of human insulin A21G concentrated in acetic acid / sodium acetate buffer at pH 4 (300 U / mL at pH 4).
  • a solution of concentrated pramlintide (Ambiopharm) (10 mg / ml at pH 4) and a concentrated solution of Tween 20 are finally added to this concentrated solution of human insulin A21G and excipients so as to obtain the final composition targeted.
  • the final pH is adjusted to the desired value by adding an aqueous solution of NaOH or HCl.
  • the solution obtained is clear and homogeneous, this is filtered through 0.22 ⁇ m.
  • compositions prepared above are presented in Table 1 below.
  • Table 2 shows the visual appearance of insulin and pramlintide solutions described above.
  • amyloid fibrils defined as ordered macromolecular structures. These may eventually lead to gel formation within the sample.
  • Thioflavin T is a small probe molecule with a characteristic fluorescence signature when it binds to amyloid-type fibrils (Naiki et al (1989) Anal BioChem 177, 244-249, LeVine (1999) Methods, Enzymol 309, 274-284).
  • This plate was then placed in the enclosure of a plate reader (EnVision 2104 Multilabel, Perkin Elmer). The temperature is set at 37 ° C, and side shaking of 960 rpm with 1 mm amplitude is imposed.
  • a reading of the fluorescence intensity in each well is made with an excitation wavelength of 442 nm, and an emission wavelength of 482 nm over time.
  • the fibrillation process is manifested by a sharp increase in fluorescence after a delay called latency.
  • this delay was determined graphically as the intersection between the baseline of the fluorescence signal and the slope of the fluorescence curve as a function of time determined during the sharp initial increase in fluorescence, as shown.
  • Figure 1 The reported latency value is the average latency of the 3 wells.
  • Table 3 Latency of insulin and pramlintide solutions.
  • the formulations containing the human insulin A21G have much higher fibrillation latency times than commercial insulins tested at pH 3.5 or pH 4.0, in particular fast analog insulins, lispro and aspart.
  • Table 4 shows the lag times of solutions of human insulin A21G and pramlintide at pH 4 in the presence of Tween 20.
  • Table 4 Latency of A21G human insulin and pramlintide solutions in the presence of Tween 20.
  • Table 5 Physical stability of insulin and Pramlintide solutions at 30 ° C under static conditions.
  • Insulin aspart formulated with pramlintide at pH 3.5 is less stable than human insulin A21G formulated with pramlintide at pH 3.5 or 4.0.
  • Example 7 Physical stability study of human insulin A21G with exenatide and lixisenatide.
  • Formulations A21-6 and A21-7 are put in cartridges and then placed at 30 ° C for 4 weeks. Fibrillation latency times are measured for freshly prepared formulations and are shown in Table 6.
  • Table 6 Latency and physical stability at 30 ° C under static conditions of human insulin solutions A21G and exenatide or lixisenatide.
  • Example 8 Chemical stability of a formulation of human insulin A21G and pramiintide
  • All formulations are at pH 4.0 or pH 3.5 and contain 100 U / mL human insulin A21G, 1 mg / mL pramiintide, 25 mM m-cresol and 184 mM glycerine.
  • the formulations are stored in glass cartridges and placed at 30 ° C under static conditions. Human insulin A21G and pramiintide are assayed by reverse phase liquid chromatography (HPLC). The measurements are presented in Table 7.
  • Table 7 Evolution of insulin concentrations (a) in U / mL and pramiintide (b) in mg / mL
  • the formulations containing human insulin A21G and pramiintide exhibit good chemical stability after 4 weeks at 30 ° C.
  • the pharmacokinetic parameters of the A21 -8 formulation are estimated from baseline-adjusted insulin and pramlintide plasma concentrations. Standard non-compartmental analysis is performed using Phoenix WinNonlin software (version 7, Certara). The values of the parameters (mean ⁇ standard deviation) are reported in Tables 8 and 9 below:
  • Table 9 Parameters of pramlintide PK [000213] The mean pharmacokinetic (PK) profiles of total insulin (squares) and pramlintide (triangles) in plasma are shown in Figure 2.
  • the pharmacokinetic results of pramiintide obtained with formulations A21 -9 and PRAM are shown in FIG. 4.
  • the analysis of these profiles and of the parameters indicates that the combination of human insulin A21G and pramiintide (formulation A21 -9, curve drawn with the squares) leads to a slowdown significant absorption of pramiintide compared to pramiintide alone (PRAM formulation, curve drawn with the triangles).
  • the A21-9 formulation leads to a significantly delayed plasma peak (tmax) (approximately 18 min, p ⁇ 0.05) and early pramiintide plasma exposure (AUC iomm) significantly decreased (approximately 43%, p ⁇ 0.05). ) compared to the PRAM formulation.
  • plasma exposure to total pramiintide (AUCo-t) appears similar between the two formulations suggesting comparable bioavailability.
  • This study was performed on a population of 40 male Sprague Dawley rats of at least 6 weeks of age.
  • the rats had free access to food and water, except for a 6-hour fasting period preceding the subcutaneous injection of the compositions described in the table below.
  • compositions injected into rats and number of treated rats [000224]
  • the control composition is a saline solution, that is to say an aqueous solution comprising 150 mM NaCl.
  • the Humulin® R composition is a commercial solution of human insulin marketed by ELI LILLY. This product is a human insulin at 100 U / ml. Humulin® R excipients are glycerol, meta-cresol, sodium hydroxide and hydrochloric acid for pH adjustment (pH 7.0-7.8) and water. At t0, immediately after the injection, the food is distributed (approximately 100 g per rat). The food intake (cumulative average) is measured one, two, and three hours after t0, ie t + lh, t + 2h and t + 3h.
  • Table 12 food intake 1, 2 and 3 hours after injection
  • composition A21-9 combining insulin A21G and pramiintide not only reduces the food intake induced by insulin injection, but it also allows to limit food intake to a level less than or equal to that of the control group having undergone an injection of control composition (saline solution).

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Abstract

L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4 comprenant au moins l'insuline humaine A21G et au moins un suppresseur de glucagon à action prandiale. Dans un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est choisi dans le groupe constitué d'un analogue de l'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline ou un analogue du GLP-1 ou un agoniste du récepteur au GLP-1 (GLP-1 RA). Dans un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est analogue de l 'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline. Dans un mode de réalisation, le peptide suppresseur de glucagon à action prandiale est le pramlintide. Elle concerne également un procédé d'obtention de l'insuline humaine A21G comprenant au moins une étape consistant à faire réagir l'insuline humaine A21G, B31R, B32R (insuline glargine) avec la carboxypeptidase B de rat à un ratio insuline/carboxypeptidase compris entre 500 et 2000, à un pH compris de 7,5 à 8,5 et à une température comprise de 20 à 30°C pendant 10 à 20 heures.

Description

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COMPOSITIONS SOUS FORME D'UNE SOLUTION AQUEUSE
INJECTABLE COMPRENANT AU MOINS L'INSULINE HUMAINE A21G ET UN SUPPRESSEUR DE GLUCAGON A ACTION PRANDIALE
[0001] L'invention concerne les thérapies par injection de composition comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, à action prandiale, et un suppresseur de glucagon, en particulier à action prandiale, pour traiter le diabète et permettre d'améliorer le contrôle des hyperglycémies post-prandiales.
[0002] Le diabète de type 1 est une maladie autoimmune conduisant à la destruction des cellules béta du pancréas. Ces cellules sont connues pour produire l'insuline, dont le rôle principal est de réguler l'utilisation du glucose dans les tissus périphériques (Gerich 1993 Control of glycaemia) . Par conséquent, les patients atteints de diabète de type 1 souffrent d'hyperglycémie chronique et doivent s'administrer de l'insuline exogène afin de limiter cette hyperglycémie. L'insulinothérapie a permis de changer drastiquement l'espérance de vie de ces patients.
[0003] A ce jour, les patients diabétiques de type 1 utilisent deux types d'insuline, les insulines prandiales à action courte pour contrôler leur glycémie au moment du repas et les insulines basales à action longue pour contrôler leur glycémie tout au long de la journée et de la nuit. Plusieurs types d'insuline à action courte existent caractérisées par leur délai d'action . Par exemple, l 'insuline humaine, dite regular, a une action retardée par rapport aux insulines analogues, dites rapides, telles que l'insuline lispro (Humalog®, ELI LILLY) ou l'insuline aspart (Novorapid®, NOVO NORDISK) . Ainsi, l'insuline humaine doit être administrée en moyenne 30 minutes avant le repas alors que les insulines analogues peuvent être administrées 15 minutes avant le repas ou au moment du repas. De plus, il est admis que les insulines analogues conduisent à un meilleur contrôle de la glycémie post-prandiale que l'insuline humaine, ce qui explique que la très grande majorité des patients en Europe et aux Etats-Unis utilisent aujourd'hui des insulines analogues rapides dont l'action est plus courte que celle de l'insuline humaine.
[0004] Cependant, le contrôle de la glycémie après la prise d'un repas assuré par ces insulines prandiales exogènes n'est pas optimal, même dans le cas des insulines analogues rapides. Ceci est lié, en partie, au fait que ces patients, contrairement aux personnes saines, produisent du gl ucagon après la prise d'un repas, ce qui conduit au déstockage d'une partie du glucose stocké dans le foie. Cette production de glucose médiée par le glucagon aggrave le problème d'hyperglycémie post-prandiale de ces patients et conduit à une utilisation excessive de l'insuline.
[0005] Cette problématique de régulation de la glycémie post-prandiale est assez similaire pour les patients atteints de diabète de type 2 traités par l'insuline dans les cas où leur maladie a conduit à une perte très significative de leur capacité de production d'insuline et d'amyline.
[0006] Il a été démontré que des suppresseurs de glucagon, en particulier des peptides et/ou hormones, sont susceptibles d'inhiber la production de glucagon après la prise d'un repas, ce qui conduit à améliorer significativement le contrôle de la glycémie post-prandiale. Par exemple l'amyline, une hormone produite par les cellules béta du pancréas, et dont la production est également déficiente chez les patients diabétiques de type 1, joue un rôle clé dans la régulation de la glycémie post-prandiale. L'amyline, également connue sous le nom de « islet amyloid polypeptide » ou IAPP, est un peptide de 37 amino-acides qui est co-stocké et co-sécrété avec l'insuline (Schmitz 2004 Amylin Agonists) . Ce peptide est décrit comme bloquant la production du glucagon par les cellules alpha du pancréas. Ainsi, l'insuline et l'amyli ne ont des rôles complémentaires et synergiques, puisque l'insuline permet de réduire la concentration de glucose dans le sang alors que l'amyline permet de réduire l'entrée de glucose endogène dans le sang en inhibant la production, ou sécrétion, du glucagon endogène.
[0007] Cependant, l'amyline humaine a des propriétés qui ne sont pas compatibles avec les exigences pharmaceutiques en termes de solubilité et de stabilité (Goldsbury CS, Cooper GJ, Goldie KN, Muller SA, Saafi EL, Gruijters WT, Misur MP, Engel A, Aebi U, Kistler J : Polymorphic fibrillar assembly of human amylin. J Struct Biol 119 : 17-27, 1997). L'amyline est con nue pour former des fibres amyloides qui conduisent à la formation de plaques qui sont insolubles dans l'eau . Par conséquent, il a été nécessaire de développer un analogue afin de résoudre ces problèmes de solubilité. [0008] La société Amylin a développé un analogue de l'amyline, le pramlintide, pour pallier le manque de stabilité physique de l'amyline humaine. Ce produit commercialisé sous le nom de Symlin® a été approuvé en 2005 par la FDA pour le traitement des diabétiques de type 1 et de type 2, en complément d'une insulinothérapie. Il doit être administré par voie sous cutanée trois fois par jou r, dans l'heure précédant le repas afin d'améliorer le contrôle de la glycémie post-prandiale, compte tenu de sa demi-vie relativement courte de quelques heures. Ce peptide est formulé à H 4,0 et est décrit pour fibriller lorsque le pH de la solution est supérieur à 5,5. Des variantes d'analogues sont décrites dans le brevet US5,686,411.
[0009] Les analogues d'amyline ou les agonistes au récepteur d'amyline dites « prandiales » ou « à action courte » reproduisent les effets de l'amyline tout en présentant une demi-vie plus importante. Ces dérivés de l'amyline permettant de contrôler la glycémie au moment du repas peuvent présenter une demi-vie inférieure à 8h . Cette demi-vie est la demi-vie apparente d'élimination après injection sous-cutanée chez l'homme. La demi vie de ces analogues d 'amyline ou les agonistes au récepteur d'amyline peut être inférieure à 5 heures, notamment inférieure à 4 heures, voire inférieure à 3 heures.
[00010] Cependant, les compositions comprenant de l'a myline ou un analogue de l'amyline, et en particulier le pramlintide peuvent provoquer certains effets indési rables chez les patients. En particulier ces compositions peuvent provoquer des nausées chez des patients.
[00011] Le GLP- 1, un autre peptide physiologique, est également décrit pour jouer un rôle similaire à celui de l'amyline en termes de suppression de la sécrétion du glucagon à la suite de la prise d'un repas. Le GLP- 1 est aussi connu pour son rôle d'insuline sécrétagogue et est donc particulièrement efficace en complément de l'Insuline, en particulier chez les patients diabétiques de type 2. Ces actions sont glucodépendantes, ce qui minimise le risque hypoglycémique. Les GLP- 1 RA, ne sont approuvés, à ce jour, que pour les patients diabétiques de type 2. [00012] De même, le GLP-1 humain ne peut être utilisé comme traitement thérapeutique du fait d'une demi -vie extrêmement courte. Différents dérivés du GLP- 1 , agonistes du récepteur du GLP- 1, dits GLP-1 RA, ou analogues du GLP- 1, reproduisent les effets du GLP- 1 tout en présentant une demi-vie plus importante. Ces dérivés du GLP-1 peuvent être répartis en trois groupes selon leur demi-vie respective : ceux à action courte, ou prandiale, pour contrôler la glycémie au moment du repas (demi -vie inférieure à 8h ), ceux à action quotidienne pour couvrir les besoins au cours de la journée (demi-vie supérieure à 8 , voire lOh) et ceux à action hebdomadaire pour couvrir les besoins au cours de la semaine (demi -vie supérieure à 48h) . Au niveau des GLP-1 RA à action prandiale, les deux peptides approuvés à ce jour sont l'exenatide (Byetta®, ASTRA-ZENECA, deux administrations par jour) et le lixisenatide (Lyxumia®, SANOFI, une administration par jour). Ces deux GLP- 1 RA sont formulés à un pH proche de 4 et sont à administrer dans l'heure précédent le repas, comme le pramlintide. [00013] Une des principales difficultés pour les patients insulinodépendants à utiliser ces différents composés à action courte suppresseurs de glucagon est liée au nombre d'injections supplémentaires, pouvant aller de 1 à 3 injections par jour au-delà des 2 à 4 injections d'insuline. Il est donc primordial de pouvoir combiner en solution une insuline prandiale avec un suppresseur de glucagon à action prandiale afin de permettre l 'utilisation de ces composés complémentaires à l'insuline sans alourdir le poids du traitement pour les patients. De plus cela permettrait de mimer plus finement la physiologie puisque ces hormones sont toutes les deux sécrétées en réponse à un repas, afin d'améliorer le contrôle de la glycémie post-prandiale, en particulier un meilleur contrôle des hyperglycémies post-prandiales, et donc de mieux traiter le diabète.
[00014] Or, les insulines prandiales et ces peptides d'intérêt ne sont pas compatibles en solution aqueuse. En effet, les insuli nes prandiales ont une stabilité chimique optimale à un pH proche de 7 alors que les dérivés de l 'amyline ou du GLP- 1 ne sont pas stables physiquement et chimiquement à un pH proche du pH physiologique.
[00015] Cette difficulté a conduit à la conception de pompe contenant deux réservoirs permettant de maintenir séparés l 'insuline prandiale du dérivé de l'amyline. La demande de brevet US2016/001002 de la société ROCHE décrit une telle pompe afin de rendre possible la co-administration de l'amyline et d'une insuline prandiale avec un seul dispositif médical . Cependant, il serait préférable de pouvoir mélanger en solution aqueuse ces hormones afin d'employer des dispositifs médicaux existants, plus simples et/ ou présentant un risque moindre de dysfonctionnement.
[00016] Une autre solution apportée au problème du mélange en solution aqueuse de ces hormones consiste à substituer l'eau par un solvant organique. La demande de brevet WO2013067022 de la société XERIS décrit des compositions qui comprennent de l'amyline et de l'insuline en solution dans un solvant organique. Cependant, l'utilisation d'un solvant organique tel que le DMSO soulève des questions de sécurité pour le patient pour le traitement de maladie chron ique telle que le diabète. En outre les solvants organiques peuvent être problématiques par rapport aux dispositifs d'injections, notamment en solubilisant certains composants de ceux-ci . Il est donc souhaitable de développer ces combinaisons sous forme de solution aqueuse. [00017] Le problème de stabilité en solution aqueuse a également été contourné en préparant des mélanges à l'état sol ide. La demande de brevet EP2060268 de NOVO NORDISK décrit des formulations d'insuline et de pramlintide sous forme de poud re atomisée pour l'application nasale. Cependant, la voie d'administration préférable et la plus utilisée à ce jour est la voie sous-cutanée pour laquelle l'obtention de solutions aqueuses prêtes à l'emploi est nécessaire.
[00018] Une autre approche a consisté à combiner une insuline prandiale à un dérivé de l'amyline au pH auquel ce dérivé de l'amyline est stable physiquement. La demande de brevet US20090192075 de la société Biodel décrit une composition liquide comprenant l'insuline humaine, le pramlintide et un chélateur de zi nc à pH 4,0. Cette demande décrit une action rapide de l'insuline humaine par la présence d'un chélatant de zinc. Cependant, l'insuline humaine étant connue pour ne pas être chimiquement stable à pH acide, cette technique ne devrait pas permettre de satisfaire les critères de la Pharmacopée EP et/ ou US.
[00019] Une approche alternative consiste à modifier la structure des insulines prandiales pou r améliorer leur stabi lité à des pH acides. La demande WO2007104786 exemplifie des compositions comprenant les i nsulines analogues rapides A21G, B28D desB30 et A21G, B28E desB30 qui sont solubles à pH acide.
[00020] La demande WO2007104786 présente également des compositions d'insuline rapides, notamment B28D (insuline aspart) à pH neutre et en présence de tensioactif, et en particulier de dérivé du glycérophosphate, plus particulièrement le dimyristoyl glycérophosphoglycérol (DMPG), conduisent à des stabilités mesurées par ThT bien supérieures à celles des compositions d'insulines analogues rapides A21G, B28D desB30 et A21G, B28E desB30 à pH acide.
[00021] Les compositions de l'art antérieu r comprenant en association une insuline prandiale et le pramlintide décrivent, la plupart du temps les différents types d'insulines prandiales, cependant leurs exemples sont dirigés vers des compositions comprenant des insulines analogues prandiales dites rapides, ces dernières étant considérées comme plus performantes que l'insuline humaine.
[00022] De façon surprenante, la demanderesse a démontré qu'une composition contenant l'insuline humaine A21G, dite « regular », c'est-à-dire une insuline différant de l'insuline hu maine uniquement par le remplacement du résidu asparagine en position 21 sur la chaîne A par un résidu glycine, moins rapide que les analogues d'insuline dits « rapides », en association avec un suppresseur de glucagon à action prandiale à un pH allant de 3,5 à 4,4 en solution aqueuse permettait d'obtenir un meilleur contrôle de la glycémie post- prandiale qu'avec un analogue d'insuline prandiale dit rapide.
[00023] De plus, La demanderesse a démontré, de manière surprenante, que ladite composition contenant l'insuline humaine A21G, en association avec un suppresseur de glucagon à action prandiale à un pH allant de 3,5 à 4,4 en solution aqueuse présentait une stabilité physique et chimique compatible avec les exigences pharmaceutiques et supérieure aux solutions proposées dans l'art antérieur. [00024] L'obtention d'une composition sous forme de solution aqueuse injectable présentant un meilleur contrôle des hyperglycémies post-prandiales et des propriétés de stabilités physique et chimique améliorées par rapport à celles décrites dans l'art antérieur, est remarquable car il est bien connu de l'homme de l'art que dans le cas de combinaisons les pharmacocinétiques des produits en associations et les propriétés de stabilité physique et chimique sont très difficiles à prédire .
[00025] Par ailleurs, il est également recherché une composition qui permette de diminuer, voire de supprimer, tout ou partie des effets indésirables qui peuvent être générés par les principes actifs. [00026] L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins l'insuline humaine A21G dite regular et au moins un suppresseur de glucagon à action prandiale.
[00027] Selon un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est un analogue de l'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline, un analogue du GLP-1 ou un agoniste du récepteur au GLP- 1, encore appelé GLP-1 RA.
[00028] La demanderesse a observé que la formulation selon l'invention à pH compris de 3,5 à 4,4 possède des propriétés pharmacocinétiques compatibles avec une utilisation au moment des repas et permet un meilleur contrôle de la glycémie postprandiale.
[00029] En outre, la demanderesse a mis en évidence que ces formulations conduisaient à un ralentissement de l'absorption du pramiintide. Cela est notamment caractérisé par un pic plasmatique (tmax) de pramiintide significativement retardé et/ou par une exposition plasmatique au pramiintide précoce (AUCo-3omin) significativement diminuée par rapport à l 'administration de pramiintide seul .
[00030] Ce ralentissement permet de diminuer voire de supprimer les effets indésirables du pramiintide, en particulier en ce qui concerne les nausées.
[00031] L'invention concerne également l'utilisation d'une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4 comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un suppresseur de glucagon, en particulier à action prandiale, pour améliorer le contrôle de la glycémie postprandiale. [00032] L'invention concerne une également une composition selon l'invention destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle est administrée en bolus avant les repas.
[00033] L'invention concerne une également une composition selon l'invention destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle est administrée pour améliorer le contrôle de la glycémie postprandiale.
[00034] L'invention concerne une également une composition selon l'invention destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle est administrée pour améliorer le contrôle de la glycémie postprandiale et pour diminuer les effets indésirables du pramlintide.
[00035] L'invention concerne une également une composition selon l'invention destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle permet de diminuer la prise alimentaire induite par l'insuline.
[00036] Selon un mode de réalisation, la diminution de la prise alimentaire concerne la période allant de l'injection à 4 heures après l'injection.
[00037] Selon un mode de réalisation, la diminution de la prise alimentaire concerne la période allant de l'injection à 3 heure après l'injection.
[00038] Selon un mode de réalisation, la diminution de la prise alimentaire concerne la période allant de l'injection à 2 heures après l'injection.
[00039] Selon un mode de réalisation, la diminution de la prise alimentaire concerne la période allant de l'injection à 1 heures après l'injection.
[00040] L'invention concerne également des formulations pharmaceutiques stables comprenant de telles compositions.
[00041] Les exigences permettant d'obtenir une formulation pharmaceutique injectable pour le traitement du diabète sont notamment :
une formulation liquide aqueuse stable physiquement et chimiquement au moins deux semaines, voire un mois à 30°C (usages multiples) et au moins un an, voire 2 ans à 5°C,
une compatibilité avec les conservateurs anti-microbiens.
[00042] De la même façon, les formulations d'insuline humaine A21G avec un analogue du GLP- 1 ou un agoniste du récepteur au GLP- 1, encore appelé GLP- 1 RA, par exemple de l'exenatide ou du lixisenatide, à pH compris de 3,5 à 4,4 ont une stabilité physique et chimique permettant le développement d'une formulation liquide stable au moins deux semaines, voire un mois à 30°C et au moins un an, voire 2 ans, à 5°C [00043] S'agissant de la stabilité, la méthode classique pour mesurer les stabilités des protéines ou peptides consiste à mesurer la formation de fibrilles à l'aide de Thioflavine T, encore appelée ThT. Cette méthode permet de mesurer dans des conditions de température et d'agitation permettant une accélération du phénomène, le temps de latence avant la formation de fibrilles par mesure de l'augmentation de la fluorescence. Les compositions selon l'invention ont un temps de latence avant la formation de fibrilles nettement supérieur à ceux décrits dans la littérature. Les compositions selon l'invention présentent une stabilité physique et chimique, bien supérieure à celles décrites dans l'art antérieur en utilisant des insulines prandiales commerciales.
[00044] Dans un mode de réalisation, les formulations selon l 'invention présentent un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 8 heures.
[00045] Dans un mode de réalisation, les formulations selon l'invention présentent un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 10 heures.
[00046] Dans un mode de réalisation, les formulations selon l 'invention présentent un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 15 heures.
[00047] Dans un mode de réalisation, les formulations selon l'invention présentent un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 20 heures.
[00048] Dans un mode de réalisation, les formulations selon l'invention présentent un temps de latence mesuré par ThT au moins égal à 25 heures.
[00049] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide.
[00050] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,2, comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l 'amyline ou un analogue d'amyl ine. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide.
[00051] Dans un mode de réalisation, l 'invention concerne une composition sous forme d'une sol ution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,8 à 4,2, comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l 'amyline ou un analogue d'amyline. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide.
[00052] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est 4,0, comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyli ne. Selon un mode de réalisation il s'agit du pramlintide. [00053] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP-1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est le lixisénatide.
[00054] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,2, comprenant au moins l 'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur du GLP- 1 ou un analogue du GLP- 1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est le lixisénatide.
[00055] Dans un mode de réalisation, l 'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,8 à 4,2, comprenant au moins l 'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur d u GLP-1 ou un analogue du GLP- 1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est le lixisénatide.
[00056] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est 4,0, comprenant au moins l'insuline humaine A21G et un agoniste au récepteur du GLP- 1 ou un analogue du GLP- 1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteu r du GLP-1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est le lixisénatide.
[00057] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, et un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP- 1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide. [00058] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,2, comprenant au moins l'insuline humaine A21G, au moins un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, et au moins un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP- 1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est le lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.
[00059] Dans un mode de réalisation, l 'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,8 à 4,2, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, au moins un agoniste au récepteur de l 'amyline ou un analogue d'amyline, et au moins un agoniste au récepteur du GLP- 1 ou un analogue du GLP- 1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP- 1 est de l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est du lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.
[00060] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est 4,0, comprenant au moins de l'insuline humaine A21G, au moins un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline, et au moins un agoniste au récepteur du GLP-1 ou un analogue du GLP- 1. Selon un mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est de l'exénatide. Selon un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur du GLP-1 est du lixisénatide. Selon encore un autre mode de réalisation ledit agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.
[00061] Il est particulièrement intéressant de combiner en solution aqueuse l'insuline humaine A21G avec un analogue de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou le GLP- 1 et avec un analogue du GLP- 1 , ou un agoniste au récepteur du GLP- 1 car cette combinaison dite « triple » permet notamment de potentialiser les effets de chaque hormone et de réduire les doses de chacune d'elles.
[00062] Les compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable selon l'invention sont des solutions limpides. On entend par « solution limpide », des compositions qui satisfont aux critères décrits dans les pharmacopées américaine et européenne concernant les solutions injectables. Dans la pharmacopée US, les solutions sont définies dans la partie < 1151 > faisant référence à l'injection ( < 1 > ) (faisant référence à <788 > selon USP 35 et précisé dans < 788> selon USP 35 et dans < 787> , <788> et <790> USP 38 (à partir du 1er août 2014), selon USP 38). Dans la pharmacopée européenne, les solutions injectables doivent remplir les critères donnés dans les sections 2.9.19 et 2.9.20.
[00063] Dans la présente demande, l'amyline telle que mentionnée fait référence aux composés décrits dans les brevets US 5, 124,314 et US 5,234,906. On entend par « analogue », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs de la séquence primai re ont été substitués par d'autres résidus d'acides aminés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été supprimés et/ ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été ajoutés. Le pourcentage d'homologie admis pour la présente définition d'un analogue est de 50 %. Dans le cas de l'amyline, un analogue peut être par exemple dérivé de la séquence d'acide aminé primaire de l'amyline en substituant un ou plusieurs acides aminés naturels ou non natu rels ou peptidomimétiques.
[00064] L'exenatide et le lixisénatide respectivement décrits dans les demandes US2004/0023871 et WO0104156 sont généralement considérés comme des agonistes au récepteur du GLP- 1. Dans un mode de réalisation, le suppresseur de glucagon à action prandiale est le pramlintide (Symlin®) commercialisé par la société ASTRAZENECA AB.
[00065] Dans un mode de réalisation, les GLP- 1, analogues de GLP-1, ou GLP- 1 RA sont dits « à action cou rte » ou « prandiaux » . On entend par « à action courte » ou « prandiaux », des GLP- 1, analogues de GLP-1, ou GLP-1 RA, dont la demi-vie apparente d'élimination après injection sous-cutanée chez l'homme est inférieure 8 heures, en particulier inférieure à 5 heures, de préférence inférieure à 4 heures ou bien encore inférieure à 3 heures, comme par exemple l'exenatide et le lixisénatide .
[00066] Dans un mode de réalisation, les GLP-1, les analogues de GLP- 1, ou les GLP- 1 RA sont choisis dans le groupe constitué par l'exenatide (Byetta®, ASTRAZENECA), le lixisénatide (Lyxumia®, SANOFI), leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[00067] Dans un mode de réalisation, le GLP- 1, analogue de GLP-1 , ou GLP- 1 RA est l'exenatide ou Byetta*', ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[00068] Dans un mode de réalisation, GLP-1, analogue de GLP- 1, ou GLP- 1 RA est le lixisénatide ou Lyxumia®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[00069] Dans un mode de réalisation, la concentration d'i nsuline humaine A21G est comprise de 240 à 3000 μΜ ou 40 à 500 U/mL. [00070] Dans un mode de réalisation, la concentration d'insuline humaine A21G est 600 μΜ ou 100 U/mL.
[00071] Dans un mode de réalisation, la concentration d'insuline humaine A21G est 1200 μΜ ou 200 U/mL.
[00072] Dans un mode de réalisation, la concentration d'insuline humaine A21G est 1800 μΜ ou 300 U/mL.
[00073] Dans un mode de réalisation, la concentration d'insuline humaine A21G est 2400 μΜ ou 400 U/mL.
[00074] Dans un mode de réalisation, la concentration d'insuline humaine A21G est 3000 μΜ ou 500 U/mL.
[00075] Dans la présente demande 100 U/ml d'insuline humaine A21G correspond à 3,5 mg/ml .
[00076] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramiintide est comprise de 0,32 à 5 mg/m L.
[00077] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramiintide est comprise de 0,4 à 3 mg/mL.
[00078] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramiintide est comprise de 0,5 à 2 mg/mL.
[00079] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramiintide est comprise de 0,5 à 1,5 mg/mL.
[00080] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramiintide est com rise de 0,6 à 1 mg/mL.
[00081] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramiintide est de 1,0 mg/ml .
[00082] Dans un mode de réalisation, la concentration en pramiintide est de 0,6 mg/ml .
[00083] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 10 à 1000 pg/ml .
[00084] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 10 à 500 Mg/ml .
[00085] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 20 à 400 pg/ml .
[00086] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 20 à 300 pg/ml . [00087] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 30 à 300 pg/ml .Dans un mode de réalisation, la concentration en exénatide est comprise de 30 à 150 pg/ml .
[00088] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est comprise de 40 à 150 pg/ml .
[00089] Dans un mode de réalisation, la concentration en exénatide est comprise de 40 à 80 μς/πιΙ .
[00090] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide est de 50 pg/ml .
[00091 ] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 20 à 1000 pg/ml.
[00092] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 20 à 800 pg/ml .
[00093] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 40 à 600 pg/ml .
[00094] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 60 à 600 pg/ml .
[00095] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 60 à 300 pg/ml .
[00096] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 80 à 300 pg/ml .
[00097] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est comprise de 80 à 160 pg/ml .
[00098] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide est de 100 pg/ml.
[00099] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1,0 mg pour 100 U d'insuline.
[000100] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.
[000101] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.
[000102] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour 100 U d'insuline. [000103] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,2 mg pour 100 U d'insuline.
[000104] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0, 15 mg pour 100 U d'insuline.
[000105] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,05 mg pour 100 U d'insuline.
[000106] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1 mg pour 100 U d'insuline.
[000107] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.
[000108] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.
[000109] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour 100 U d'insuline.
[000110] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,2 mg pour 100 U d'insuline.
[000111] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0, 15 mg pour 100 U d'insuline.
[000112] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,1 mg pour 100 U d'insuline.
[000113] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention sont réalisées par mélange de solutions, d'analogues d'amyline ou d'agonistes au récepteur de l'amyline, et de solutions de GLP- 1, d'analogue de GLP-1 ou de d'agoniste au récepteur du GLP-1 RA en ratios volumiques compris dans un intervalle de 10/90 à 90/10. [000114] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 0 à 800 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000115] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 0 à 500 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000116] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'i nvention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 100 à 500 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000117] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise de 200 à 400 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000118] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration de 300 μΜ pour 100 U d'insuline.
[0001 19] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l 'invention comprennent en outre des tampons.
[000120] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent un tampon choisi dans le groupe constitué par un tampon acétate de sodium et le Tris.
[000121] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des conservateurs.
[000122] Dans un mode de réalisation, les conservateurs sont choisis dans le groupe constitué par le m-crésol et le phénol, seuls ou en mélange.
[000123] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateu rs est comprise de 10 à 50 mM.
[000124] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise de 10 à 40 mM.
[000125] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre un tensioactif.
[000126] Dans un mode de réalisation, le tensioactif est choisi dans le groupe constitué par le Poloxamer 188, le T een® 20, encore appelé Polysorbate 20, et le Tween® 80, encore appelé Polysorbate 80.
[000127] Dans un mode de réalisation la concentration Tween® 20 varie de 5 à 50 pg/ml. [000128] Dans un mode de réalisation la concentration T een® 20 varie de 5 à 25 pg/ml .
[000129] Dans un mode de réalisation la concentration Tween® 20 est de 10 μΜ . [000130] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des additifs tels que des agents de tonicité.
[000131 ] Dans un mode de réalisation, les agents de tonicité sont choisis dans le groupe constitué par la glycérine, le chlorure de sodium, le mannitol et la glycine. [000132] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre un anti-oxydant.
[000133] Dans un mode de réalisation, l'anti-oxydant est la méthionine.
[000134] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un promoteur d'absorption choisi parmi les promoteurs d'absorption, les promoteurs de diffusion ou les agents vasodilatateurs, seuls ou en mélange.
[000135] Les promoteurs d'absorption incluent, sans se limiter, les surfactants, par exemple, les sels biliaires, les sels d'acides g ras ou les phospholipides ; les agents nicotiniques, comme les nicotinamides, les acides nicotiniques, la niacine, la niacinamide, la vitamine B3 et leurs sels ; les inhibiteurs de la trypsine pancréatique ; les sels de magnésium ; les acides gras polyinsaturés ; le phosphatidylcholine didécanoyl ; les aminopolycarboxylates ; la tolmétine ; le cap rate de sodium ; l'acide salicylique ; l'acide oléique ; l'acide linoléique ; l'acide eicosapentaénoïque (EPA) ; l'acide docosahexaénoïque (DHA) ; l'acide benzylique ; les donneurs de monoxyde d'azote, par exemple, la 3-(2-Hydroxy- l-( l-méthyléthyl)-2-nitrosohydrazino)-l- propanamine, la A/-éthyl-2-( l-éthyl-hydroxy-2- l-nitrosohydrazino)-éthanamine, ou la S-nitroso-/V-acétylpenicillamine ; les acides biliaires, la glycine sous sa forme conjuguée à un acide biliaire ; l'ascorbate de sodium, l'ascorbate de potassium ; le salicylate de sodium, le salicylate de potassium, l'acide acétyl-salicylique, l'acide salicylosalicylique, l'acétylsalicylate d'aluminum, le salicylate de choline, le salicylamide, l'acétylsalicylate de lysine ; l'exalamide ; le diflunisal ; l'éthenzamide ; l'EDTA ; seul ou en mélange.
[000136] Dans un mode de réalisation , la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un promoteur de diffusion. Des exemples de promoteur de diffusion incluent, sans se limiter, les glycosaminoglycanases, par exemple la hyaluronidase.
[000137] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur. [000138] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur provoquant une hyperpolarisation en bloquant les canaux ioniques de calcium .
[000139] Dans un mode de réalisation, l 'agent vasodilatateur provoquant une hyperpolarisation en bloquant les canaux ioniques de calcium est l'adénosine, un agent hyperpolarisant dérivé de l'endothélium, un inhibiteur de la phosphodiestérase de type 5 (PDE5), un agent d'ouverture des canaux potassiques ou toute combinaison de ces agents. [000140] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur à médiation par AMPc.
[000141] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur à médiation par GMPc. [000142] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un agent vasodilatateur choisi dans le groupe comprenant les agents vasodilatateurs qui agissent en provoquant une hyperpolarisation en bloquant les canaux ioniques de calcium, les agents vasodilatateurs à médiation par AMPc, et les agents vasodilatateurs à médiation par GMPc.
[000143] Le au moins un agent vasodilatateur est choisi dans le groupe comprenant, les donneurs de monoxyde d'azote, par exemple, la nitroglycérine, le dinitrate d'isosorbide, le mononitrate d'isosorbide, le nitrate d'amyl, l'érythrit le, le tétranitrate, et le nitroprussiate) ; la prostacycline et ses analogues, par exemple l 'époprosténol sodique, l'iloprost, l'époprosténol, le tréprostinil ou le selexipag ; l'histamine, la 2- méthylhistamine, la 4-méthylhistami ne; la 2-( 2- pyridyl)éthy lamine, la 2-(2- thiazolyl)éthylamine ; la papavérine, le chlorhydrate de papavérine ; le minoxidil ; la dipyridamole ; l'hydralazine ; l'adénosine, l'adénosine triphosphate; l'uridine trisphosphate ; le GPLC ; la L-carnitine ; l'arginine ; la prostaglandine D2 ; les sels de potassium ; et dans certains cas, les antagonistes des récepteurs al et a2 , par exemple, le prazosine, la phénoxybenzamine, la phentolamine, la dibénamine, le chlorhydrate de moxisylyte et la tolazoline), le bétazole, le dimaprit ; les agonistes des récepteurs β2, par exemple, l'isoprotérénol, la dobutamine, l'albutérol, la terbutaline, l'aminophylline, la théophylline, la caféine ; l'alprostadil, l'ambrisentan ; la cabergoline ; la diazoxide ; le mesilate de dihydralazine ; le chlorhydrate de diltiazem ; l'énoximone ; le chlorhydrate de flunarizine ; l'extrait de Ginkgo biloba ; le lévosimendan ; la molsidomine ; l'oxalate acide de naftidrofuryl ; le nicorandil ; la pentoxifylline ; le chlorure de phénoxybenzamine ; le piribédil base ; le mesilate de piribédil ; le regadenoson monohydrate ; le riociguat ; le sildenafil citrate, le tadalafll, le chlorhydrate trihydraté de vardenafil ; le chlorhydrate de trimetazidine ; la trinitrine ; le chlorhydrate de vérapamil ; les antagonistes des récepteur à l'endothéline, par exemple l'avanafil et le bosentran monohydrate ; et les inhibiteurs des canaux calciques, par exemple, l'amlodipine, l'aranidipine, l 'azelnidipine, la barnidipi ne, la benidipine, la cilnidipine, la clévidipine, l'isradipine, l'efonidipine, la felodipine, la lacidipine, la lercanidipine, la manidipine, la nicardipine, la nifedipine, la nilvadipine, la nimodipine, la nisoldipine, la nitrendipine, la prandipine ; seul ou en mélange. [000144] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient de 3,5 mg/mL à 10,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 0,6 mg/mL à 3 mg/mL de pramiintide, 25 mM de m-crésol , 184 mM de glycérine à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre de 300 à 900 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier de 8 à 10 μΜ, et tout particulièrement de 8 μΜ .
[000145] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 3,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 0,6 à 1 mg/mL de pramiintide, 25 à 30 mM de m- crésol, 150 à 200 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 300 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier de 8 à 10 μΜ, et tout particulièrement de 8 μΜ .
[000146] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 3,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 0,6 mg/mL de pramiintide, 25 mM de m- crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 300 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 10 μΜ .
[000147] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 3,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 0,6 mg/mL de pramiintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 300 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 8 μΜ .
[000148] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 3,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 1,0 mg/mL de pramiintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 300 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particu lier 8 μΜ .
[000149] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 7,0 mg/mL d'insuline humaine A21G, de 1 ,2 à 2,0 mg/mL de pramiintide, 25 mM de m- crésol, 150 à 200 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 600 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier de 8 à 10 μΜ, et tout particulièrement de 8 μΜ .
[000150] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 7,0 mg/mL d'i nsuline humaine A21G, 1,2 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 600 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 10 μΜ.
[000151] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 7,0 mg/mL d'insuline humaine A21G, 1,2 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m -crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 600 μΜ de zinc. Cette com position peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 8 μΜ.
[000152] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 7,0 mg/mL d'i nsuline humaine A21G, 2,0 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 600 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 8 μΜ . [000153] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 10,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 1,8 à 3 mg/m L de pramlintide, 25 mM de m -crésol, 150 à 200 m M de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 900 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier de 8 à 10 μΜ , et tout particulièrement de 8 μΜ .
[000154] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 10,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 1 ,8 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 900 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 10 μΜ .
[000155] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 10,5 mg/mL d'i nsuline humaine A21G, 1,8 mg/mL de pramlintide, 25 mM de m-crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 900 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 8 μΜ .
[000156] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention contient 10,5 mg/mL d'insuline humaine A21G, 3 mg/m L de pramlintide, 25 m M de m -crésol, 184 mM de glycérine, à un pH de 4,0. Cette composition peut contenir en outre 900 μΜ de zinc. Cette composition peut en outre comprendre du polysorbate 20, en particulier 8 μΜ . [000157] Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre tous les excipients conformes aux Pharmacopées, notamment EP et/ou US, et compatibles avec les insulines utilisées aux concentrations d'usage.
[000158] Selon un mode de réalisation, la composition peut être sous forme solide ou lyophilisée. Cette composition peut alors servir à reconstituer une solution ou une formulation .
[000159] Les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous- cutanée, intradermique ou intramusculaire.
[000160] Selon un mode de réalisation particulier le mode d'administration est la voie sous-cutanée.
[000161] Les voies d'administration transdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées.
[000162] L'invention concerne également une pompe, implantable ou transportable, comprenant une composition selon l'invention.
[000163] L'invention concerne encore l'utilisation d'une composition selon l'invention destinée à être placée dans une pompe, implantable ou transportable.
[000164] L'invention concerne également des formulations unidoses.
[000165] Dans un mode de réalisation, les formulations sont sous forme d'une solution injectable.
[000166] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse, d'un analogue d'amyline ou d'un agoniste au récepteur de l'amyline, et d'insuline humaine A21G, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. [000167] Si nécessaire, la composition du mélange est ajustée en excipients tels que glycérine, m-crésol, chlorure de zinc, et polysorbate 20 (Tween® 20). Cette addition peut être effectuée par ajout de solutions concentrées desdits excipients.
[000168] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une solubilité à un pH de 4,0 et une stabilité physique mesurée par ThT supérieure à celle d'u ne composition de référence comprenant un analogue d'amyline ou un agoniste au récepteur de l'amyline et une insuline prandiale commerciale. [000169] La ThT est mesuré selon le protocole décrit dans les exemples.
[000170] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une solubilité à un pH de 4,0 et une stabilité physique mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant un GLP- 1 , un analogue de GLP- 1 ou un agoniste de récepteur de GLP- 1 et une insuline prandiale commerciale.
[000171 ] L'insuline et les insulines analogues peuvent être obtenues par des méthodes de technologies de l'ADN recombinante en bactéries telle que l'Escherichia Coli ou en levures telle que le Saccharomyces Cerevisiae (voir par exemple G. Walsh Appl . Microbiol . Biotechnol . 2005, 67, 151 -159) . Généralement, on produit u ne proinsuline qui est ensuite digérée par des enzymes telles que la trypsine et la ca rboxypeptidase B pour obtenir la séquence souhaitée.
[000172] Pour la fabrication d'insuline humaine A21G, on code la proinsuline pour avoi r la glycine en A21 et après digestion par la trypsine et la carboxypetidase B, on obtient l'insuline souhaitée. Un mode opératoire est décrit par Kohn et al ., dans Peptides 2007, 28, 935-948.
[000173] L'invention concerne également le procédé d'obtention de l 'insuline humaine A21G comprenant au moins une étape consistant à faire réagir l'insuline humaine A21G, B31 R, B32R (insuline glargine) avec la carboxypeptidase B de rat à un ratio insuline/carboxypeptidase compris entre 500 et 2000, à un pH compris de 7,5 à 8,5 et à une température comprise de 20 à 30°C pendant 10 à 20 heures. Le produit peut ensuite être purifié. Cette purification peut être effectuée par par chromatog raphie liquide.
[000174] L'insuline humaine A21G peut donc être obtenue en enlevant les deux arginines de l'insuline glargi ne par digestion avec une carboxypeptidase B. Après digestion enzymatique, l'insuline humaine A21G est purifiée par chromatographie puis isolée par lyophilisation ou par cristallisation par des méthodes classiques.
Description des figures :
Figure 1: Détermination graphique du temps de latence de fibrillation .
[000175] A la figu re 1 est représentée la détermination graphique du temps de latence de fibrillation sur un exemple virtuel . En abscisse figure le temps en minutes, en ordonnée figure la fluorescence ThT en unité arbitraire (u .a . ) et LT figure le temps de latence, ou « lag time » . Figure 2 : Concentrations en pramlintide et insuline plasmatique après administration de la formulation A21-8 (moyenne ± erreur standard)
[000176] Les carrés représentent la concentration en insuline et les triangles la concentration en pramlintide.
[000177] En abscisse figure le temps en minutes après injection, en ordonnée à gauche la concentration en insuline en pmol/l et en ordonnée la concentration en pramlintide en pmol/l corrigées de la ligne de base, ou « baseline » .
Figure 3 : Glycémie après administration de la formulation A21-8 (moyenne ± erreur standard) .
[000178] En abscisse le temps en minutes après injection, et en ordonnée la glycémie en % du niveau basai .
Figure 4 : Concentrations en pramlintide après administration des formulation A21-9 (courbe tracée avec les carrés) et PRA (courbe tracée avec les triangles) (moyenne ± erreur standard) .
[000179] En abscisse le temps en minutes après injection, et en ordonnée les concentrations en pramlintide corrigées de la ligne de base, ou « baseline » (concentrations pré-doses retranchées individuellement), en pmol/L.
Exemples
Exemple 1. Préparation de l'insuline humaine A21G
[000180] On mélange 5 g d'insuline glargine (Gan & Lee Pharmaceuticals) à de l'enzyme carboxypeptidase B (Référence 08039852001 ; Sigma-AIdrich) à pH 8,0 (pH ajusté par ajout de tampon Tris) et on laisse à 25°C pendant 17 heures, la concentration en insuline glargine étant d'environ 4 mg/mL. Le ratio enzyme/glargine est de 1/500. Le mélange est ensuite purifié par chromatographie liquide, dialysé contre de l'acide chlorhydrique 0,01N puis lyophilisé. On obtient l'insuline humaine A21G avec une pureté de 98% et un rendement d'environ 90%. La masse molaire de l'insuline mesurée par spectrométrie de masse (Maldi-Tof) est de 5752 Da. L'insuline humaine A21G peut aussi être obtenue à partir de la technologie recombinante comme décrit par Kohn et al . (Peptides 2007, 28, 935-948). Exemple 2. Compositions d'insulines prandiales et de pramiintide, d'exénatide ou de lixisénatide à pH acide.
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/mL (3,5 mg/ml) et de pramiintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.
[000181] Une solution concentrée d'excipients (m -crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 U/mL à pH 3,5) . Une solution de pramiintide (Ambiopharm) concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) et une solution de concentrée de chlorure de zinc sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI . La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μηι et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par cartouche).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/mL et de pramiintide 0,6 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine ( 184 mM ) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 4,0.
[000182] Cette solution est préparée de la même manière que la solution présentée ci-dessus.
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/ mL et de pramiintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM) et de la glycérine ( 184 mM) à pH acide de 4,0.
[000183] Une solution concentrée d'excipients (m -crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (800 U/mL à pH 3,5). Une solution de pramiintide concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) est ajoutée à cette solution concentrée d'insuline humaine et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI . La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μηπ et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche) .
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/mL et de pramiintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine ( 184 mM ) et du Tween 20 (10 pg/ml) à pH 4.
[000184] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 U/mL à pH 3,5). Une solution de pramiintide concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) et une solution de tvveen 20 concentrée sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI . La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 pm et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par cartouche).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G ÎOO U/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine ( 184 mM ), du chlorure de zinc (300 μΜ) et du Tween 20 ( 10 pg/ml) à pH 4.
[000185] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 U/mL à pH 3,5). Une solution de pramlintide concentrée ( 10 mg/mL à pH 4), une solution de chlorure de zinc concentrée et une solution de tween 20 concentrée sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 pm et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/ mL et d'exénatide 50 pg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 pM) à pH acide.
[000186] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine)) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 U/mL à pH 3,5) . Une solution d'exénatide (Bachem) concentrée ( 10,5 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zinc sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final 4,0 est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI . La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 pm et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par cartouche).
Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/mL et de lixisénatide 100 pg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM ) et du chlorure de zinc (300 pM) à pH acide.
[000187] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (230 U/mL à pH 3,5). Une solution de de lixisénatide (Ambiopharm ) concentrée ( 10,5 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zinc sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d 'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final 4,0 est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI . La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 μιη et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par cartouche) . Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/mL, d'exénatide 50 pg/mL et de pramlintide 0,6 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM ), de la glycérine ( 184 mM) et du Tween 20 ( 10 pg/ml) à pH acide de 4,0.
Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine A21G concentrée (300 U/mL à pH 3,5) . Une solution de pramlintide (Ambiopharm ) concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) , une solution d'exénatide (Bachem) concentrée ( 10,5 mg/mL à pH 4) et une solution de tween 20 concentrée sont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle- ci est filtrée sur 0,22 μιτη et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par cartouche) .
Préparation d'une solution d'insuline humaine 100 U/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.
[000188] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline humaine (Amphastar Pharmaceuticals) concentrée (800 U/mL à pH 3,5) . Une solution de pramlintide concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zincsont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 pm et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par ca rtouche) . Préparation d'une solution d'insuline aspart 100 U/mL et de pramlintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine ( 184 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.
[000189] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline aspart (HEC Pharmaceuticals) concentrée (500 U/mL à pH 3) . Une solution de pramlintide concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zincsont ajoutées à cette solution concentrée d'insuline aspart et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI . La solution ajustée à pH 4,0 est turbide dès l'ajustement de pH . La solution ajustée à pH 3,5 est limpide. Celle-ci est filtrée sur 0,22 pm et stockée dans des cartouches en verre (1 mL de solution par cartouche). Préparation d'une solution d'insuline Eispro 100 U/mL et de pramiintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine ( 184 mM ) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH acide de 3,5 ou 4,0.
[000190] Une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) est ajoutée à une solution d'insuline lispro (Gan et Lee Pharmaceuticals) concentrée (650 U/mL à pH 3). Une solution de pramiintide concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de chlorure de zinc sont ajoutéesà cette solution concentrée d'insuline lispro et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final, soit 3,5 ou 4,0, est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI . La solution obtenue est limpide et homogène, celle-ci est filtrée sur 0,22 pm et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par cartouche).
Préparation d'une solution d'insuline glulisine 100 U/mL et de pramiintide 1 mg/mL contenant les excipients du produit commercial Apidra® (29 mM m- crésol, 50 mM de Tris, 86 mM de chlorure de zinc et 8,15 μΜ de Tween 20 à pH acide de 3,0, 3,5 ou 4,0.
[000191] Le pH de la solution commerciale d'insuline glulisine, Apidra®, est ajusté à pH 2,5 par ajout d'une solution aqueuse d'HCI . Cette solution est ajoutée à pramiintide sous la forme de poudre de manière à obtenir une solution contenant 100 U/mL d'insuline et 1 mg/mL de pramiintide. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. Les solutions ajustées à pH 3,5 et 4,0 sont turbides dès l'ajustement de pH . La solution ajustée à pH 3,0 est limpide. Celle-ci est filtrée sur 0,22 pm et stockée dans des cartouches en verre ( 1 mL de solution par cartouche) . Après quelques heures de stockage la solution est turbide et hétérogène. Préparation d'une solution de pramiintide 1 mg/mL contenant du m-crésol (20 mM), du mannitol (236 mM) et du tampon acide acétique/acétate de sodium (30 mM) à pH 4,0.
[000192] Une solution de pramiintide concentrée à 10 mg/mL est préparée par dissolution de pramiintide sous forme de poudre achetée chez Ambiopharm . Cette solution est ajoutée à une solution concentrée d'excipients ( m-crésol, mannitol, tampon acide acétique/acétate de sodium ) de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 4,0 ± 0,2 par ajout de NaOH/HCI . Préparation d'une solution d'insuline humaine A21G 100 U/mL et de pramlintide 0.6 mg/mL contenant du m-crésol (25 mM), de la glycérine (184 mM ), du tampon acide acétique/acétate de sodium ( 18 mM) et du Tween 20 (8 μΜ) à pH 4.
Des solutions concentrées de glycérine et m-crésol sont ajoutées à une solution d'insuline humaine A21G concentrée dans un tampon acide acétique/acétate de sodium à pH 4 (300 U/mL à pH 4). Une solution de pramlintide (Ambiopharm) concentrée ( 10 mg/mL à pH 4) et une solution concentrée de Tween 20 sont enfin ajoutées à cette solution concentrée d'insuline humaine A21G et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à la valeur désirée par ajout d'une solution aqueuse de NaOH ou d'HCI. La solution obtenue est limpide et homogène, celle- ci est filtrée sur 0,22 pm.
Les compositions préparées ci -dessus sont présentées dans le tableau 1 ci -dessous
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
Tableau 1 : compositions d'insuline et/ou de suppresseurs de glucagon Exemple 3. Etude de compati bilité des insulines prandiales avec le pramlintide à pH acide.
Aspect visuel des solutions d'insuline et de pramlintide à pH acide.
L'observation est réalisée à température ambiante après 2 à 3 heures de stabilisation de la solution stockée en cartouches. Le Tableau 2 présente l'aspect visuel de solutions d'insuli ne et de pramlintide décrites précédemment.
Figure imgf000030_0001
Tableau 2 : Aspect visuel des solutions d'insuline et de pramlintide.
[000193] Parmi les insulines évaluées, seules l 'insuline humaine, l'insuline lispro et l'insuline humaine A21G permettent d'obtenir une formulation homogène et limpide avec le pramlintide à pH 4, attestant de la solubilité des espèces. Les insulines aspart et glulisine ne conviennent pas pour obtenir une formulation limpide avec le pramlintide à pH 4,0. Exemple 4. Etude du temps de latence de fibrillation.
Principe
[000194] La mauvaise stabilité d'un peptide peut conduire à la formation de fibrilles amyloïdes, définies comme des structures macromoléculaires ordonnées. Celles-ci peuvent éventuellement conduire à la formation de gel au sein de l'échantillon.
[000195] L'essai de suivi de la fluorescence de la thioflavine T (ThT) est utilisé pour analyser la stabilité physique des formulations. La thioflavine T est une petite molécule sonde ayant une signature de fluorescence caractéristique lorsqu'elle se lie à des fibrilles de type amyloïdes (Naiki et al . ( 1989) Anal . BioChem . 177, 244-249 ; LeVine ( 1999) Methods. Enzymol . 309, 274-284).
[000196] Cette méthode permet de suivre la formation de fibrilles pour de faibles concentrations de ThT au sein de formulations non diluées. Ce suivi est réalisé dans des conditions de stabilité accélérées : sous agitation et à 37°C. Conditions expérimentales
[000197] Les échantillons ont été préparés juste avant le début de la mesure. La préparation de chaque composition est décrite dans l'exemple associé. La thioflavine T a été ajoutée dans la composition à partir d'une solution mère concentrée de manière à induire une dilution négligeable de la composition. La concentration de thioflavine T dans la composition est 40 μ . Un volume de 150 pL de la composition a été introduit au sein d'un puit d'une plaque 96 puits. Chaque composition a été analysée en triplicat au sein d'une même plaque. La plaque a été scellée par du film transparent afin d'éviter l'évaporation de la composition .
[000198] Cette plaque a ensuite été placée dans l'enceinte d'un lecteur de plaques (EnVision 2104 Multilabel, Perkin Elmer) . La température est réglée à 37°C, et une agitation latérale de 960 rpm avec 1 mm d'amplitude est imposée.
[000199] Une lecture de l'intensité de fluorescence dans chaque puit est réalisée avec une longueur d'onde d'excitation de 442 nm, et une longueur d'onde d'émission de 482 nm au cours du temps.
[000200] Le processus de fibrillation se manifeste par une forte augmentation de la fluorescence après un délai appelé temps de latence.
[000201] Pour chaque puit, ce délai a été déterminé graphiquement comme l'intersection entre la ligne de base du signal de fluorescence et la pente de la courbe de fluorescence en fonction du temps déterminée pendant la forte augmentation initiale de fluorescence, tel que montré en Figure 1. La valeur de temps de latence reportée correspond à la moyenne des temps de latence des 3 puits.
[000202] Les solutions de pramlintide et d 'insuline limpides à pH 3,5 et 4,0 de l'exemple précédent sont ensuite soumises au test de fibrillation en présence de ThT.
[000203] Le temps de latence renseigné dans le Tableau 3 correspond à la moyenne des 3 mesures, l'intervalle d'incertitude correspond à l'écart moyen entre ces 3 résultats.
Figure imgf000032_0001
Tableau 3 : Temps de latence des solutions d'insuline et de pramlintide.
[000204] De façon inattendue, les formulations contenant l'insuline humaine A21G ont des temps de latence de fibrillation bien supérieurs à ceux des insulines commerciales testées à pH 3,5 ou à pH 4,0, en particulier aux insulines analogues rapides, lispro et aspart.
Exemple 5. Etude du temps de latence de fibrillation en présence de Tween 20
Dans le Tableau 4 sont présentés les temps de latence de solutions d'insuline humaine A21G et de pramlintide à pH 4 en présence de Tween 20.
Figure imgf000032_0002
Tableau 4 : Temps de latence des so utions d'insuline humaine A21G et de pramlintide en présence de Tween 20.
[000205] La stabilité physique est donc améliorée en présence de Tween 20 à 10 Mg/mL Exemple 6. Stabilité physique des formulations à 30°C en condition statique
[000206] Des cartouches en verre remplies avec 1 mL de composition sont placées dans une étuve maintenue à 30°C. Ces cartouches sont inspectées visuellement afin de détecter l'apparition de particules visibles ou d'une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 2.9.20) : les cartouches sont soumises à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observées face à un fond blanc et un fond noir. Ces résultats sont en accord avec la pharmacopée US (USP < 790>) .
Figure imgf000033_0001
Tableau 5 : Stabilité physique des solutions d'insuline et de Pramlintide à 30°C en condition statique.
[000207] L'insuline aspart formulée avec le pramlintide à pH 3,5 est moins stable que l'insuline humaine A21G formulée avec pramlintide à pH 3,5 ou 4,0. Exemple 7. Etude de stabilité physique de l'insuline humaine A21G avec l'exénatide et le lixisénatide.
Les formulations A21-6 et A21-7 sont mises en cartouches puis placées à 30°C pendant 4 semaines. Les temps de latence de fibrillation sont mesurés pour des formulations fraîchement préparées et sont présentées dans le tableau 6.
Figure imgf000033_0002
Tableau 6 : Temps de latence et stabilité physique à 30°C en condition statique des solutions d'insuline humaine A21G et d'exénatide ou de lixisénatide. Exemple 8. Stabilité chimique d'une formulation d'insuline humaine A21G et de pramiintide
[000208] Toutes les formulations sont à pH 4,0 ou à pH 3,5 et contiennent 100 U/mL d'insuline humaine A21G, 1 mg/mL de pramiintide, 25 mM de m -crésol et 184 mM de glycéri ne. Les formulations sont stockées dans des cartouches en verre et placées à 30°C en condition statique. L'insuline humaine A21G et le pramiintide sont dosés par chromatographie liquide (HPLC) en phase inverse. Les mesures sont présentées dans le tableau 7.
Figure imgf000034_0001
Tableau 7 : Evolution des concentrations d'insuline (a) en U/mL et de pramiintide (b) en mg/mL
[000209] Les formulations contenant l'insuline humaine A21G et le pramiintide présentent une bonne stabilité chimique après 4 semaines à 30°C. Les formulations de pramiintide avec les insulines commerciales se dégradent rapidement à pH 4,0, et encore plus vite à pH 3,5.
Exemple 9. Etudes de pharmacocinétique et pharmacodynamie chez le chien
[000210] Etude de pharmacocinétique et pharmacodynamie chez le chien de la composition insuline humaine A21G ( 100 U/mL, c'est-à-dire 3,5 mg/ml ) et pramiintide (0,6 mg/mL). La formulation testée est à pH 4,0 et contient 25 mM de m-crésol et 184 mM de glycérine (Formulation A21 -8) .
[000211] Quatre animaux mis à jeun depuis 18 heures environ ont été injectés par voie sous-cutanée dans le cou à la dose de 0,2 U/kg d'i nsuline et 0, 12 pg/kg de pramiintide. Dans l'heure précédant l'injection, un ou plusieurs prélèvements sanguins sont réalisés afin de déterminer le niveau basai de glucose, d'insuline et de pramiintide. Des prélèvements sanguins sont ensuite réalisés pendant 5 heures après administration de la formulation . La glycémie est déterminée au moyen d'un glucomètre. Les niveaux d'insuline et de pramlintide dans le plasma sont déterminés par un test ELISA.
[000212] Les paramètres pharmacocinétiques de la formulation A21 -8 sont estimés à partir des concentrations plasmatiques d'insuline et de pramlintide corrigées des valeurs basales. Une analyse non compartimentale standard est réalisée à l'aide du logiciel Phoenix WinNonlin (version 7, Certara). Les valeurs des paramètres (moyenne ± écart-type) sont reportées dans les tableaux 8 et 9 ci-dessous :
Figure imgf000035_0001
Tableau 8 : paramètres de PK de l'analogue de l'insuline totale
Figure imgf000035_0002
Tableau 9 : paramètres de PK du pramlintide [000213] Les profils pharmacocinétiques (PK) moyens de l'insuline totale (carrés) et du pramlintide (triangles) dans le plasma sont présentés dans la Figure 2.
Les profils de glycémies moyennes exprimées en pourcentages du niveau basai sont représentés dans la Figure 3. [000214] Il est constaté que le pramlintide et l'insuline humaine A21G ont tous les deux des cinétiques d'absorption prandiales donnant lieu à une activité hypoglycémiante précoce suivie d'un retour à un niveau proche de la glycémie basale après 5 heures post-administration . Ces résultats de pharmacocinétique et de pharmacodynamie indiquent clairement que la Formulation A21-8 est compatible avec une utilisation lors des repas.
Exemple 10 : Etudes de pharmacocinétique du pramlintide chez le cochon
[000215] Etude de pharmacocinétique chez le cochon de la composition insuline humaine A21G (3,5 mg/mL équivalent à 100 U/mL d'insuline) et pramlintide (0,6 mg/mL).
[000216] Des cochons domestiques d'environ 50 kg, préalablement cathétérisés au niveau de la jugulaire, sont mis à jeun 2,5 heures avant le début de l'expérience. Dans l'heure précédant l'injection d'insuline, 3 prélèvements sanguins sont réalisés afin de déterminer le niveau basai de glucose et d'insuline. [000217] L'injection des formulations d'insuline humaine A21G combinée à du pramiintide (A21 -9) ou de pramiintide (PRAM) à la dose de 0,2 U d'insuline/kg et 1 ,2 pg de pramlintide/kg est réalisée en sous-cutané au niveau du flanc de l'animal à l'aide d'un stylo à insuline (Novo, Sanofi ou Eli Lilly) équipé d'une aiguille 31 G.
[000218] Afin de déterminer les concentrations plasmatiques en pramiintide, des prélèvements sanguins sont réalisés aux temps suivants : 4, 8, 12, 16, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 100, 120, 150 et 180 minutes. Après chaque prélèvement, le cathéter est rincé avec une solution diluée d'héparine.
Résultats de pharmacocinétique de la solution d'insuline humaine A21G et de pramiintide A21-9 et de la solution de pramiintide PRAM chez le cochon
[000219] Les résultats de 3 études réalisées sur une même cohorte de cochons ont été mis en commun pour comparer les pharmacocinétiques du pramiintide entre la formulation A21-9 et la formulation PRAM . Les pa ramètres pharmacocinétiques des formulations A21 -9 et PRAM sont estimés à partir des concentrations plasmatiques de pramiintide corrigées des valeurs basales. Une analyse non compartimentale standard est réalisée à l'aide du logiciel Phoenix WinNonlin (version 7, Certara). Les valeurs des aramètres mo enne ± écart-t e sont re ortées dans le tableau ci-a rès.
Figure imgf000036_0002
Tableau 10 : paramètres de PK du pramiintide des compositions A21-9 et PRAM
[000220] Avec tmax= temps nécessaire pour observer la concentration plasmatique maximale ;
Figure imgf000036_0001
aire sous la courbe des concentrations plasmatiques en fonction du temps entre 0 et 30 min après injection ; AUCo t= aire sous la courbe des concentrations plasmatique en fonction du temps entre 0 et la dernière concentration quantifiable après injection
[000221] Les résultats de pharmacocinétique du pramiintide obtenus avec les formulations A21 -9 et PRAM sont présentés sur la Figure 4. L'analyse de ces profils et des paramètres indique que la combinaison de l'insuline humaine A21G et du pramiintide (formulation A21-9, courbe tracée avec les carrés) conduit à un ralentissement significatif de l'absorption du pramiintide par rapport au pramiintide seul (formulation PRAM, courbe tracée avec les triangles) . La formulation A21-9 conduit à un pic plasmatique (tmax) significativement retardé (environ 18 min, p< 0,05) et à une exposition plasmatique au pramiintide précoce (AUC iomm) significativement diminuée (environ 43%, p<0,05) par rapport à la formulation PRAM . D'autre part, l'exposition plasmatique au pramiintide totale (AUCo-t) apparaît similaire entre les deux formulations suggérant des biodisponibilités comparables.
Exemple 11. Etude de la consommation alimentaire chez le rat après injection de compositions contrôle et de compositions comprenant de l'insuline humaine A21G et/ou du pramiintide
[000222] Cette étude a été effectuée sur une population de 40 rats mâles Sprague Dawley d'au moins 6 semaines.
[000223] Les rats ont eu un accès libre à la nourriture et à l'eau, hormis une période de 6 heures de jeûne précédant l 'injection sous-cutanée des compositions décrites dans le tableau ci-dessous.
Figure imgf000037_0001
Tableau 11 : compositions injectées aux rats et nombre de rats traités [000224] La composition contrôle est une solution saline, c'est-à-dire une solution aqueuse comprenant 150 mM de NaCI .
[000225] La composition Humulin® R est une solution commerciale d'insuline humaine commercialisée par ELI LILLY. Ce produit est une insuline humaine à 100 U/ml. Les excipients d'Humulin® R sont le glycérol, le méta-crésol , l'hydroxyde de sodium et l'acide chlorhydrique pour l'ajustement du pH (pH 7,0-7,8) et de l'eau. [000226] A t0, immédiatement après l'injection, la nourriture est distribuée (environ 100 g par rat) . La prise alimentaire (moyenne cumulée) est mesurée une, deux, et trois heures après tO, soit t+ lh, t+2h et t+3h.
[000227] Les résultats sont présentés dans le tableau suivant :
Figure imgf000038_0001
Tableau 12 : prise alimentaire 1, 2 et 3 heures après injection
[000228] Ces résultats montrent que la composition A21-9, combinant l'insuline A21G et le pramiintide permet non seulement de diminuer la prise alimentaire induite par l'injection d'insuline, mais elle permet également de limiter la prise alimentaire à un niveau inférieur ou égal à celui du groupe témoin ayant subit une injection de composition Contrôle (solution saline).

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris de 3,5 à 4,4 comprenant au moins l'insuline humaine A21G dite regular et au moins un suppresseur de glucagon à action prandiale.
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le suppresseur de glucagon à action prandiale est choisi dans le groupe constitué d 'un analogue de l'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline ou un analogue du GLP- 1 ou un agoniste du récepteur au GLP- 1 (GLP-1 RA).
3. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le suppresseur de glucagon à action prandiale est analogue de l'amyline ou un agoniste du récepteur de l'amyline.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le peptide suppresseur de glucagon à action prandiale est le pramlintide.
5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le peptide suppresseur de glucagon à action prandiale est l'exenatide.
6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le peptide suppresseur de glucagon à action prandiale est le lisixenatide.
7. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que la concentration en insuline humaine A21G est comprise de 2 à 20 mg/mL.
8. Composition selon la revendication 1 , caractérisée en ce que la concentration en insuline humaine A21G est de 3,5 mg/mL.
9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en peptide suppresseur de glucagon à action prandiale est comprise de 0,01 à 10 mg/mL.
10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le pH de la solution est comprise de 3,8 à 4,2.
11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le pH de la solution est de 4,0.
12. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un sel de zinc.
13. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre le m-crésol .
14. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un excipient polysorbate (Tween® 20)
15. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un excipient Poloxamer 188.
16. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre la méthionine.
17. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle est administrée en bolus avant les repas.
18. Composition selon i'une quelconque des revendications 1 à 17, destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle est administrée pour améliorer le contrôle de la glycémie postprandiale.
19. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle est administrée pour améliorer le contrôle de la glycémie postprandiale et pour diminuer les effets indésirables du pramlintide.
20. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, destinée à être utilisée dans une méthode de traitement du diabète caractérisée en ce qu'elle permet de diminuer la prise alimentaire induite par l'insuline.
21. Procédé d'obtention de l'insuline humaine A21G comprenant au moins une étape consistant à faire réagir l'insuline humaine A21G, B31R, B32R (insuline glargine) avec la carboxypeptidase B de rat à un ratio insuline/carboxypeptidase compris entre 500 et 2000, à un pH compris de 7,5 à 8,5 et à une température comprise de 20 à 30°C pendant 10 à 20 heures.
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