WO2018216962A1 - 지방줄기세포 추출용 용기 및 이를 이용한 지방줄기세포 추출방법 - Google Patents

지방줄기세포 추출용 용기 및 이를 이용한 지방줄기세포 추출방법 Download PDF

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WO2018216962A1
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WO
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main body
stem cells
svf
fat
container
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PCT/KR2018/005697
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Inventor
황의재
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(주) 굿모닝 바이오
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B10/00—Other methods or instruments for diagnosis, e.g. instruments for taking a cell sample, for biopsy, for vaccination diagnosis; Sex determination; Ovulation-period determination; Throat striking implements
    • A61B10/02—Instruments for taking cell samples or for biopsy
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B04—CENTRIFUGAL APPARATUS OR MACHINES FOR CARRYING-OUT PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES
    • B04B—CENTRIFUGES
    • B04B5/00—Other centrifuges
    • B04B5/10—Centrifuges combined with other apparatus, e.g. electrostatic separators; Sets or systems of several centrifuges

Definitions

  • the present invention relates to a container for extracting adipose stem cells and a method for extracting adipose stem cells using the same, in detail, by separating the centrifuged fat stem cells (Stromal Vascular Fraction, SVF) from the fat simply
  • the present invention relates to a container for extracting fat stem cells and a method for extracting fat stem cells using the same.
  • this signal substance decreases in vivo with increasing age, and it is revealed that this growth factor is closely related to our aging (Sporn M and Roberts A, Handbook of Experimental Pharmacology). , Vol. 1, Vol. 95/1, 1990, Springer-Verlag, DE, Berlin., Pp. 667-698).
  • adipose derived adult stem cells secrete growth factors in the process of obtaining active human growth factors at low prices while maintaining activity in the human body (Rehman, J. et al. , Circulation, 109: 1292-1298 (2004). Accordingly, researches on obtaining stem cells from adipose tissue have been conducted. Among them, representative methods include adipose tissue extraction through a process of fat extraction, enzyme treatment, adipose stem cell washing and separation, and adipose stem cell filtration. Stem cell extraction methods are widely used.
  • a method for extracting adipose stem cells may include a step of extracting fat from adipose tissue, an enzyme treatment step using collagenase, and the like, a step of separating and washing adipose stem cells using centrifugation, and agglomerated fat stem cells. A filtration step for removing the back and the like.
  • the step of separating and washing the fat stem cells using centrifugation is a multi-step process, using centrifugation to extract the fat stem cells from the fat extracted with a Luerac syringe or to wash the extracted fat stem cells with a washing solution. .
  • An object of the present invention is to provide a container for extracting fat stem cells and a method for extracting fat stem cells using the same, which can improve the amount of extraction.
  • Fat stem cell extracting container for achieving the above object is provided with a receiving space in the body; A lower stopper inserted into the lower inside of the main body to seal the lower part of the main body; And an upper cap sealing an upper portion of the injection hole provided in the main body, wherein the lower cap is provided with a receiving groove in an upper center portion, and an outer surface of the packing is inserted into the lower inner portion of the main body to be tightly coupled. And a filtration net fused to an upper end of the packing to cover the receiving groove.
  • the packing is made of an elastic material coupling portion in close contact with the inside of the main body; And a support part made of a material having a stronger strength than the coupling part to improve the strength of the coupling part, the support part being coupled to the upper part of the coupling part and the filter net fused to the outer side of the coupling part in close contact with the inner side of the main body.
  • An adhesion protrusion protrudes to be in close contact with each other, and a mounting jaw recessed in a downward direction may be formed at an upper end of the support to allow the filter net to be seated.
  • the main body has an injection hole protruding upward, and the receiving space may be divided into an upper liquid chamber and a lower liquid chamber by the injection hole.
  • step (f) it may further comprise the step of activating by repeatedly relaxing the fat stem cells (SVF) extracted from the second extraction container using an activator.
  • the first and the second extraction container is a main body provided with a receiving space therein, respectively; A lower stopper inserted into the lower inside of the main body to seal the lower part of the main body; And an upper cap sealing an upper portion of the injection hole provided in the main body, wherein the lower cap is provided with a receiving groove in an upper center portion, and an outer surface of the packing is inserted into the lower inner portion of the main body to be tightly coupled. And a filter net fused to an upper end of the packing to cover the receiving groove.
  • step (f) only the fat stem cells (SVF) filled in the receiving groove of the second extraction container may be extracted using a syringe.
  • the present invention provides an extraction container including a main body and a lower stopper in which the filter net is fused to the upper part of the main body to seal the lower part of the main body and cover the receiving groove formed in the upper center part.
  • Adipose stem cells (SVF) are moved to the receiving groove of the lower stopper by centrifugal force and separated and filtered naturally, thereby simplifying the extraction process of fat stem cells (SVF) from fat, thereby reducing extraction time and cost.
  • FIG. 1 is a perspective view illustrating a container for fat stem cell extraction according to an embodiment of the present invention.
  • Figure 2 is a cross-sectional view showing a container for fat stem cell extraction shown in FIG.
  • Figure 3 is a perspective view for explaining the lower plug shown in FIG.
  • FIG. 4 is a cross-sectional view seen from the front in a state in which the lower plug shown in FIG. 3 is cut in the vertical direction.
  • Figure 5 is a perspective view for explaining the stem cell extraction container according to another embodiment of the present invention.
  • FIG. 6 is a cross-sectional view showing a container for fat stem cell extraction shown in FIG.
  • FIG. 7 is a flowchart illustrating a method for extracting adipose stem cells according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 1 is a perspective view illustrating the container for extracting fat stem cells according to an embodiment of the present invention
  • Figure 2 is a cross-sectional view showing the container for extracting fat stem cells shown in FIG.
  • the container for extracting fat stem cells 10 is centrifugal for centrifugation through a centrifuge in a state in which fat extracted from adipose tissue is decomposed through ultrasonic decomposition.
  • a separation vessel for example, it is produced at a capacity of 60 cc.
  • the fat stem cell extracting container 10 is, as shown in Figure 2, the main body 11 is provided with a receiving space therein, a lower stopper is inserted into the lower inner side of the main body 11 to seal the lower portion of the main body 11 ( 12) and an upper cap 13 for sealing an upper portion of the injection hole 111 provided in the main body 11.
  • the upper and lower lids 14 and 15 covering the upper and lower portions of the main body 11 may be further included.
  • the main body 11 has a cylindrical structure, as shown in FIG. 2, and has a structure in which an upper portion and a lower portion are opened.
  • the main body 11 may be made of a transparent material or a translucent material through which the internal space is projected.
  • it may be made of polyethylene (PE) or the like.
  • the main body 11 is provided with an injection port 111 for injecting the ultrasonically decomposed fat into the inside of the main body 11.
  • the injection hole 111 may be made of a narrower structure toward the top, it is sealed by the upper stopper 13 of the silicon material or rubber material.
  • the lower end cap 12 of silicone or rubber material is fitted inside the lower end of the main body 11 to be sealed.
  • FIG. 3 is a perspective view illustrating the lower plug shown in FIG. 2
  • FIG. 4 is a cross-sectional view of the lower plug shown in FIG.
  • the lower plug 12 is inserted into the lower inner side of the main body 11 to seal the opening provided in the lower part of the main body 11.
  • the lower stopper 12 is provided with a receiving groove 121a in the upper center portion, and the outer side is inserted into the lower end of the main body 11 into the packing 121 and the filter net fused to the upper end of the packing 121 (122).
  • the packing 121 is inserted into the lower inner side of the main body 11 and then tightly adhered to the inner side of the main body 11 by elasticity, and at the same time, stably supports the filtering net 122 in which the filtering net 122 is fused. It may be made of a laminated structure of different materials so as to have a different strength.
  • the packing 121 is made of an elastic material, as shown in Figure 2, the coupling portion (a) in close contact with the inner side of the main body 11, and the coupling portion (a) to improve the strength of the coupling portion It consists of a material of high strength is coupled to the upper portion of the coupling portion (a) and includes a support portion (b) to which the filter net 122 is fused.
  • the coupling part (a) may be made of, for example, a silicon material or a rubber material
  • the support part (b) may be a synthetic resin material having a stronger strength than the coupling part, for example, PE (PolyEthylene) and PP (PolyproPylen). Or the like.
  • the receiving groove 121a is provided to receive the fat stem cells (SVF) separated from fat to the lower side of the filter net 122.
  • the volume of the receiving groove (121a) is determined according to the amount of fat stem cells (SVF) that can be extracted from fat extracted from adipose tissue. For example, it is formed to have a size of about 5cc.
  • the outer surface of the packing 121 that is, the outer surface of the engaging portion of the packing 121 in close contact with the inner surface of the main body 11, a plurality of contact protrusions 121c protruding to the outside formed in the main body While easily insertable into the inner side of 11, the coupling force between the inner side surfaces of the main body 11 can be improved.
  • the upper end of the packing 121 that is, the upper end of the support of the packing 121, is provided with a seating jaw 121b recessed in a downward direction so that the filtering net 122 is seated.
  • the filter net 122 is fused to the seating jaw 121b of the packing 121, as shown in FIGS. 2 and 4.
  • the filter network 122 is made of a synthetic resin material, for example, PE (PolyEthylene), PP (PolyproPylen), etc., and 200 mesh so as to filter the fatty stem cells (SVF) located at the lower part of the main body 11 after centrifugation. (200 throat) or 150 mesh (150 throat).
  • PE PolyEthylene
  • PP PolyproPylen
  • the main body 11 may further include an auxiliary injection hole 112 formed at one side of the upper end as shown in FIG. 2.
  • the auxiliary injection hole 112 may further include an auxiliary stopper 113 for sealing.
  • the upper lid 14 may be coupled to cover the upper portion of the main body 11 in the interference fit method, as shown in Figure 3, the lower lid 15 may be coupled to the lower portion of the main body 11 by a screw coupling method. .
  • FIG. 5 is a perspective view illustrating the container for extracting fat stem cells according to another embodiment of the present invention
  • Figure 6 is a cross-sectional view showing the container for extracting fat stem cells shown in FIG.
  • the fat stem cell extracting container 20 is first separated through the fat stem cell extracting container 10 shown in FIGS. 1 and 2.
  • a container for separating fat stem cells (SVF) from the supernatant by secondary centrifugation of fat stem cells (SVF) the body 21, the lower stopper 22, the upper stopper, similar to the container for extracting fat stem cells 10 It includes (23), and further comprises an upper lid 24 and the lower lid (25).
  • Fat stem cell extraction container 20 is formed so that the inlet 211 of the body 21 penetrates the upper lid 24 to the outside. In addition, the exposed injection hole 211 is closed by the upper cap 23.
  • the inner receiving space is divided into the upper liquid chamber 21a and the lower liquid chamber 21b, and the capacity of the lower liquid chamber 21b in which the supernatant and the fat stem cells SVF are accommodated is shown in FIG.
  • the capacity of the lower liquid chamber of the adipose stem cell extraction container 10 it is formed to have a small amount of 1/2 level, for example, 30cc.
  • the lower stopper 22 is made of the same structure as the lower stopper 12 of the container for extracting fat stem cells 10, the upper lid 24 and the lower lid 25 may also be made of a similar structure.
  • the upper liquid chamber 21a of the main body 21 is sealed by the auxiliary stopper 26.
  • FIG. 7 is a flowchart illustrating a method for extracting adipose stem cells according to an embodiment of the present invention
  • Figures 8 to 18 are diagrams for explaining each process shown in FIG.
  • kit for extracting adipose stem cells (SVF) from fat extracted from adipose tissue.
  • SVF adipose stem cells
  • Extraction Container 60cc
  • Extraction Container 30cc
  • Container 200cc
  • Activator syringe Quantity EA 2 One One One 5
  • the 60cc extraction container uses the extraction container 10 shown in FIGS. 1 and 2
  • the 30cc extraction container uses the extraction container 20 shown in FIGS. 5 and 6. use.
  • the activator uses patent No. 10-1429253 (registered date: Aug. 05, 2014) registered by the applicant.
  • the syringe uses a commonly used medical syringe.
  • 100cc of fat (1) is extracted from the adipose tissue (ST1).
  • the ultrasonically decomposed fat 2 is inhaled using the syringe 60 and then uniformly injected into each of the 60 cc extraction containers 10 each 50 cc (ST3). .
  • the fat 2 injected into the extraction container 10 is first centrifuged using the centrifuge 70 (ST4). At this time, the first centrifugation is performed for 5 minutes at 3,200rpm.
  • the primary centrifuged fat 2 is separated and stacked sequentially from the lower part of the extraction container 10 into fatty stem cells (SVF) 2c / supernatant 2b / pure fat 2a as shown in FIG. .
  • the fat stem cells (SVF) (2c) located at the bottom of the extraction container 10 is the receiving groove of the lower stopper 12 through the filter net 122 of the lower stopper 12 during the first centrifugation process Filled in (121a), in this process the fat stem cells (SVF) (2c) is first filtered by the filter network (122).
  • the fat stem cells in the pure fat (2a), supernatant (2b) and fat stem cells (SVF) (2c) separated from the fat (2) by the first centrifugation (SVF) (2c) and the supernatant (2b) (the liquid containing a part of the fat stem cells (SVF)) is extracted from the extraction container 10 using the syringe 80, and then to the 30cc extraction container 20 Inject (ST5).
  • FIG. 13 is a view illustrating a process of extracting adipose stem cells and a supernatant from an extraction container using the syringe shown in FIG. 12, and FIG. 14 is a 30cc extract of adipose stem cells and a supernatant extracted by a syringe from FIG. 13.
  • the syringe 80 is preferably used by plugging the lower stopper 12 so that the needle does not penetrate the filter net 122, respectively, from the two 60cc extraction container 10 and the fat stem cells (SVF) (2c) and 15 cc of the supernatant (2b) stacked on top of each other is extracted.
  • the syringe 80 is introduced into the injection port of the 30cc extraction container 20 is injected into the extracted fat stem cells (SVF) (2c) and the supernatant (2b) into the 30cc extraction container 20 do.
  • SVF extracted fat stem cells
  • the fat stem cells (SVF) (2c) and the supernatant (2b) is injected into the 30cc extraction container 20 from the syringe 80, as shown in Figs. 7 and 15, 30cc using a centrifuge 70 Adipose stem cells (SVF) (2c) and supernatant (2b) injected into the extraction container 20 is second-centrifuged (ST6).
  • the left container is a container containing clear saline, and is illustrated to compare colors of the extraction stem 20 filled with fat stem cells (SVF) 2c and the supernatant 2b.
  • the fat stem cells (SVF) contained in the supernatant (2b) are separated from the supernatant (2b) to receive the lower stopper (22) through a filter network of the lower stopper (22) of the extraction container (20). Filled in the groove (121a), in this process fat stem cells (SVF) (2c) is secondary filtered by the filter network 122.
  • FIG. 17 is a view illustrating a process of extracting fat stem cells from the extraction container using the syringe shown in FIG. 16. As shown in FIG. 17, the needle of the syringe 90 is inserted into the lower stopper 22 and then lowered. 5cc of fat stem cells (SVF) 2c filled in the receiving groove of the stopper 22 are extracted.
  • SVF fat stem cells
  • the adipose stem cells (SVF) 2c extracted with the syringe 90 are relaxed 20 times using the activator 40 to activate the adipose stem cells (SVF) 2c.
  • ST8 Refer to Patent No. 10-1429253 for the structure and the effect of the activator 40.
  • injection hole 112 auxiliary injection hole
  • contact portion 122 filter network

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Abstract

본 발명은 지방줄기세포를 추출하기 위한 용기 및 이를 이용한 지방줄기세포 추출방법에 관한 것으로, 상세하게, 본 발명은 본체와, 상기 본체의 하부를 밀폐하되 상부 중앙부에 형성된 수용홈을 덮도록 그 상부에 여과망이 융착된 하부마개를 포함하는 추출용 용기를 제공하여 원심분리 과정에서 지방줄기세포(SVF)가 원심력에 의해 상기 하부마개의 수용홈으로 이동하여 자연적으로 분리 및 여과됨으로써 지방으로부터 지방줄기세포(SVF)를 추출하는 과정을 기존에 비해 간소화하여 추출 시간과 비용을 감소시키는 한편, 지방줄기세포(SVF)의 여과율과 추출량을 향상시킬 수 있다.

Description

지방줄기세포 추출용 용기 및 이를 이용한 지방줄기세포 추출방법
본 발명은 지방줄기세포를 추출하기 위한 용기 및 이를 이용한 지방줄기세포 추출방법에 관한 것으로, 상세하게는, 원심분리기를 통해 원심 분리된 지방줄기세포(Stromal Vascular Fraction, SVF)를 지방으로부터 간편하게 분리하여 추출할 수 있는 지방줄기세포 추출용 용기 및 이를 이용한 지방줄기세포 추출방법에 관한 것이다.
근래에 들어, 지방조직의 이용에 대해 많은 연구가 진행되고 있다. 최근에는 지방조직 내에 성체줄기세포가 존재한다는 것이 확인되면서(Zuk PA, et al., Molecular Biology of Cell, Vol 13: 4279-4295(2002): Rodriguez AM, et al., Biochimie, 87: 125-128(2005)) 지방 유래 줄기세포의 활용에 대한 여러 가지 연구들이 진행되기 시작되었다. 또한 생화학 및 분자생물학의 발전을 기반으로 우리 생체 내에 존재하는 소량의 신호물질(성장인자)들을 발견하게 되었으며, 이를 기반으로 한 생체 노화이론이 재정립되고 있는 중이다(Stanley Cohen, Nobel Lecture 1986, Dec, 8). 또한 이 신호물질(성장인자)은 나이가 증가함에 따라 생체 내에서 감소하게 되는데 바로 이 성장인자의 감소가 우리의 노화와 밀접한 관계가 있다는 것이 밝혀지고 있다(Sporn M and Roberts A, Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 1, Vol. 95/1, 1990, Springer-Verlag, DE, Berlin., pp. 667-698).
이와 같이, 상기 신호물질(성장인자)의 구조에 대한 연구가 진행되었지만 대부분의 성장인자는 단백질 구조를 가지고 있기 때문에 그 구조가 3차원적으로 복잡하여 화학적으로 합성하는데 여러 가지 문제점이 도출되고 있고, 또한 그러한 합성에 들어가는 비용 또한 매우 고가인 것이 현실이다. 이에 인체 내에서 활성을 유지하면서 낮은 가격에 활성형의 인간 성장인자를 획득하는 방법에 대한 연구를 진행하는 과정에서 지방유래 성체줄기세포가 성장인자를 분비한다는 사실이 알려졌다(Rehman, J. et al., Circulation, 109:1292-1298(2004)). 이에 따라, 지방조직으로부터 줄기세포를 획득하는 방법에 대한 연구가 진행되고 있으며, 그중 대표적인 방법이 지방조직으로부터 지방 추출, 효소 처리, 지방줄기세포 세척 및 분리 및 지방줄기세포 여과 등의 과정을 통해 지방줄기세포를 추출하는 방법이 널리 이용되고 있다.
지방줄기세포를 추출하는 방법은 전술한 바와 같이, 지방조직으로부터 지방 추출단계, 콜라게네이즈 등을 이용한 효소 처리단계, 원심분리를 이용한 지방줄기 세포분리 및 세척 단계, 및 뭉친(덩어리) 지방줄기세포 등을 제거하기 위한 여과단계 등을 포함한다. 그리고, 원심분리를 이용한 지방줄기세포 분리 및 세척 단계는 복수 회로 실시하는 과정으로, 루어락 주사기로 추출된 지방에서 지방줄기세포를 추출하거나 추출된 지방줄기세포를 세척액으로 세척하기 위해 원심분리를 이용한다.
그러나, 종래기술에 따른 지방줄기세포의 추출방법에서는 지방조직에서 추출된 지방으로부터 지방줄기세포(SVF)를 분리하는 과정에서 분리용기와 여과용기를 각각 개별적으로 사용하여 지방줄기세포(SVF)를 분리 및 여과해야 함에 따라 분리 및 여과 과정이 번잡하여 추출 시간이 많이 소요되었고, 많은 용기의 사용으로 인해 추출 비용이 낭비될 뿐만 아니라 지방줄기세포의 추출량 또한 감소하는 문제가 있었다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
KR 10-0660117 B1, 2006. 12. 14.
KR 10-1019085 B1, 2011. 02. 24.
따라서, 본 발명은 종래기술의 문제점을 해결하기 위해 제안된 것으로서, 지방으로부터 지방줄기세포(SVF)를 추출하는 과정을 간소화하여 추출 시간과 비용을 감소시키는 한편, 지방줄기세포(SVF)의 여과율과 추출량을 향상시킬 수 있는 지방줄기세포 추출용 용기 및 이를 이용한 지방줄기세포 추출방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 지방줄기세포 추출용 용기는 은 내부에 수용공간이 마련된 본체; 상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 상기 본체의 하부를 밀폐하는 하부마개; 및 상기 본체에 마련된 주입구의 상부를 밀폐하는 상부마개를 포함하고, 상기 하부마개는 상부 중앙부에 수용홈이 마련되고, 외측면이 상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 밀착 결합되는 패킹; 및 상기 수용홈을 덮도록 상기 패킹의 상단부에 융착된 여과망을 포함한다.
또한, 상기 패킹은 탄성 재질로 이루어져 상기 본체의 내측에 긴밀에 밀착되는 결합부; 및 상기 결합부의 강도를 향상시키기 위해 상기 결합부보다 강도가 강한 재질로 이루어져 상기 결합부의 상부에 결합되고 상기 여과망이 융착되는 지지부를 포함하고, 상기 결합부의 외측면에는 상기 본체의 내측면에 긴밀하게 밀착되도록 밀착돌부가 돌출 형성되고, 상기 지지부의 상단부에는 상기 여과망이 안착되도록 하부방향으로 함몰된 안착턱이 형성될 수 있다.
또한, 상기 본체는 상부로 돌출된 주입구를 구비하고, 상기 수용공간은 상기 주입구에 의해 상부액실과 하부액실로 구획될 수 있다.
또한, 상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 지방줄기세포 추출방법은 (a) 지방조직으로부터 지방을 추출하는 단계; (b) 추출된 지방을 초음파 장치를 이용하여 초음파 분해하는 단계; (c) 초음파 분해된 지방을 제1 추출용 용기에 주입하여 1차 원심분리하는 단계; (d) 1차 원심분리에 의해 분리된 지방줄기세포(SVF), 상등액 및 순수 지방 중 지방줄기세포(SVF)와 상등액만을 상기 제1 추출용 용기로부터 추출하는 단계; 및 (e) 상기 제1 추출용 용기로부터 추출된 상기 지방줄기세포(SVF)와 상기 상등액을 제2 추출용 용기에 주입하여 2차 원심분리하는 단계; 및 (f) 2차 원심분리에 의해 분리된 지방줄기세포(SVF)와 상등액 중 상기 제2 추출용 용기로부터 지방줄기세포(SVF)만을 추출하는 단계를 포함한다.
또한, 상기 (f) 단계 후, 상기 제2 추출용 용기로부터 추출된 지방줄기세포(SVF)를 액티베이터를 이용하여 반복 이완시켜 활성화하는 단계를 더 포함할 수 있다.
또한, 상기 제1 및 제2 추출용 용기는 각각 내부에 수용공간이 마련된 본체; 상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 상기 본체의 하부를 밀폐하는 하부마개; 및 상기 본체에 마련된 주입구의 상부를 밀폐하는 상부마개를 포함하고, 상기 하부마개는 상부 중앙부에 수용홈이 마련되고, 외측면이 상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 밀착 결합되는 패킹; 및 상기 수용홈을 덮도록 상기 패킹의 상단부에 융착된 여과망을 포함할 수 있다.
또한, 상기 (f) 단계는 상기 제2 추출용 용기의 수용홈에 채워진 지방줄기세포(SVF)만을 주사기를 이용하여 추출할 수 있다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 본체와, 상기 본체의 하부를 밀폐하되 상부 중앙부에 형성된 수용홈을 덮도록 그 상부에 여과망이 융착된 하부마개를 포함하는 추출용 용기를 제공하여 원심분리 과정에서 지방줄기세포(SVF)가 원심력에 의해 상기 하부마개의 수용홈으로 이동하여 자연적으로 분리 및 여과됨으로써 지방으로부터 지방줄기세포(SVF)를 추출하는 과정을 기존에 비해 간소화하여 추출 시간과 비용을 감소시키는 한편, 지방줄기세포(SVF)의 여과율과 추출량을 향상시킬 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 지방줄기세포 추출용 용기를 설명하기 위해 도시한 사시도.
도 2는 도 1에 도시된 지방줄기세포 추출용 용기를 도시한 단면도.
도 3은 도 2에 도시된 하부마개를 설명하기 위해 도시한 사시도.
도 4는 도 3에 도시된 하부마개를 상하방향으로 절단한 상태에서 정면에서 바라본 단면도.
도 5는 본 발명의 다른 실시예에 따른 지방줄기세포 추출용 용기를 설명하기 위해 도시한 사시도.
도 6은 도 5에 도시된 지방줄기세포 추출용 용기를 도시한 단면도.
도 7은 본 발명의 실시예에 따른 지방줄기세포 추출방법을 설명하기 위해 도시한 흐름도.
도 8 내지 도 18은 도 7에 도시된 각 과정을 설명하기 위해 도시한 도면.
이하, 첨부된 도면들을 참조하여 본 발명의 기술적 특징을 구체적으로 설명하기로 한다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 지방줄기세포 추출용 용기를 설명하기 위해 도시한 사시도이고, 도 2는 도 1에 도시된 지방줄기세포 추출용 용기를 도시한 단면도이다.
도 1 및 도 2를 참조하면, 본 발명의 실시예에 따른 지방줄기세포 추출용 용기(10)는 지방조직으로부터 추출된 지방을 초음파 분해를 통해 분해한 상태에서 원심분리기를 통해 원심분리하기 위한 원심분리용 용기로서, 일례로 60cc의 용량으로 제조된다.
이러한 지방줄기세포 추출용 용기(10)는 도 2와 같이, 내부에 수용공간이 마련된 본체(11)와, 본체(11)의 하부 내측으로 삽입되어 본체(11)의 하부를 밀폐하는 하부마개(12)와, 본체(11)에 마련된 주입구(111)의 상부를 밀폐하는 상부마개(13)를 포함한다. 또한, 본체(11)의 상부와 하부를 덮는 상·하부뚜껑(14, 15)을 더 포함할 수 있다.
본체(11)는 도 2와 같이, 원통형 구조로 이루어지고, 상부와 하부가 각각 개구된 구조로 이루어진다. 이러한 본체(11)는 내부공간이 투시되는 투명 소재 또는 반투명 소재로 이루어질 수 있다. 예를 들면, PE(Polyethylene) 등으로 이루어질 수 있다.
본체(11)는 상부에 초음파 분해된 지방을 본체(11)의 내부로 주입시키기 위한 주입구(111)가 마련되어 있다. 이때, 주입구(111)는 상부로 갈수록 좁아지는 구조로 이루어질 수 있으며, 실리콘 재질 또는 고무재질의 상부마개(13)에 의해 밀폐된다.
본체(11)의 하단부 내측에는 실리콘 또는 고무재질의 하부마개(12)가 끼워져 밀폐된다.
도 3은 도 2에 도시된 하부마개를 설명하기 위해 도시한 사시도이고, 도 4는 도 3에 도시된 하부마개를 상하방향으로 절단한 상태에서 정면에서 바라본 단면도이다.
도 2 내지 도 4를 참조하면, 하부마개(12)는 본체(11)의 하부 내측으로 삽입되어 본체(11)의 하부에 마련된 개구부를 밀폐한다. 이러한 하부마개(12)는 상부 중앙부에 수용홈(121a)이 마련되고 외측면이 본체(11)의 하단부 내측으로 삽입되어 밀착 결합되는 패킹(121)과, 패킹(121)의 상단부에 융착된 여과망(122)을 포함한다.
패킹(121)은 본체(11)의 하부 내측으로 삽입된 후 탄성에 의해 본체(11)의 내측면에 긴밀하게 밀착되는 동시에 그 상부에 여과망(122)이 융착되는 여과망(122)을 안정적으로 지지하도록 강도가 다른 이종의 재질로 적층된 구조로 이루어질 수 있다.
예를 들어, 패킹(121)은 도 2와 같이, 탄성 재질로 이루어져 본체(11)의 내측에 긴밀에 밀착되는 결합부(a)와, 상기 결합부의 강도를 향상시키기 위해 결합부(a)보다 강도가 강한 재질로 이루어져 결합부(a)의 상부에 결합되고 여과망(122)이 융착되는 지지부(b)를 포함한다. 이때, 결합부(a)는 예를 들면, 실리콘 재질 또는 고무 재질로 이루어질 수 있고, 지지부(b)는 상기 결합부보다 강도가 강한 합성수지재질, 예를 들면, PE(PolyEthylene), PP(PolyproPylen) 등으로 이루어질 수 있다.
패킹(121)의 중앙부에는 도 4와 같이, 여과망(122) 하부측으로 지방으로부터 분리된 지방줄기세포(SVF)가 수용되는 수용홈(121a)이 마련된다. 이때, 수용홈(121a)의 체적은 지방조직으로부터 추출된 지방으로부터 추출할 수 있는 지방줄기세포(SVF)의 양에 따라 결정된다. 예를 들면, 대략 5cc 정도의 크기를 갖도록 형성한다.
또한, 도 4와 같이, 패킹(121)의 외측면, 즉 본체(11)의 내측면과 밀착되는 패킹(121)의 결합부의 외측면에는 복수 개의 밀착돌부(121c)가 외측으로 돌출 형성되어 본체(11)의 내측으로 용이하게 삽입가능하면서 본체(11)의 내측면 간의 결합력을 향상시킬 수 있다. 그리고, 패킹(121)의 상단부, 즉 패킹(121)의 지지부의 상단부에는 여과망(122)이 안착되도록 하부방향으로 함몰된 안착턱(121b)이 형성되어 있다.
여과망(122)은 도 2 및 도 4와 같이, 패킹(121)의 안착턱(121b)에 융착된다. 이러한 여과망(122)은 합성수지재질, 예를 들면, PE(PolyEthylene), PP(PolyproPylen) 등으로 이루어지고, 원심분리 후 본체(11)의 하부에 위치되는 지방줄기세포(SVF)가 여과되도록 200메쉬(200목) 또는 150메쉬(150목)로 형성할 수 있다.
본체(11)는 도 2와 같이, 상단부 일측에 형성된 보조 주입구(112)를 더 포함할 수 있다. 또한, 보조 주입구(112)를 밀폐하기 위한 보조마개(113)를 더 포함할 수 있다.
상부뚜껑(14)은 도 3과 같이, 억지끼움방식으로 본체(11)의 상부를 덮도록 결합될 수 있고, 하부뚜껑(15)은 본체(11)의 하부에 나사 결합방식으로 결합될 수 있다.
도 5는 본 발명의 다른 실시예에 따른 지방줄기세포 추출용 용기를 설명하기 위해 도시한 사시도이고, 도 6은 도 5에 도시된 지방줄기세포 추출용 용기를 도시한 단면도이다.
도 5 및 도 6을 참조하면, 본 발명의 다른 실시예에 따른 지방줄기세포 추출용 용기(20)는 도 1 및 도 2에 도시된 지방줄기세포 추출용 용기(10)를 통해 1차 분리된 지방줄기세포(SVF)를 2차 원심분리하여 상등액으로부터 지방줄기세포(SVF)를 분리하는 용기로서, 지방줄기세포 추출용 용기(10)와 마찬가지로 본체(21), 하부마개(22), 상부마개(23)를 포함하고, 상부뚜껑(24) 및 하부뚜껑(25)을 더 포함한다.
다른 예에 따른 지방줄기세포 추출용 용기(20)는 본체(21)의 주입구(211)가 상부뚜껑(24)을 관통하여 외측으로 노출되도록 형성된다. 그리고, 노출된 주입구(211)는 상부마개(23)에 의해 밀폐된다. 그리고, 본체(21)는 내부 수용공간은 상부액실(21a)과 하부액실(21b)로 구획되고, 상등액과 지방줄기세포(SVF)가 수용되는 하부액실(21b)의 용량은 도 2에 도시된 지방줄기세포 추출용 용기(10)의 하부액실의 용량에 대비하여 1/2 수준의 작은 용량, 예를 들면 30cc의 용량이 되도록 형성한다.
이외에, 하부마개(22)는 지방줄기세포 추출용 용기(10)의 하부마개(12)와 동일한 구조로 이루어지고, 상부뚜껑(24) 및 하부뚜껑(25) 또한 유사한 구조로 이루어질 수 있다. 그리고, 본체(21)의 상부액실(21a)은 보조 마개(26)에 의해 밀폐된다.
도 7은 본 발명의 실시예에 따른 지방줄기세포 추출방법을 설명하기 위해 도시한 흐름도이고, 도 8 내지 도 18은 도 7에 도시된 각 과정을 설명하기 위해 도시한 도면이다.
먼저, 도 8에 도시된 바와 같이, 지방조직으로부터 추출된 지방으로부터 지방줄기세포(SVF)를 추출하기 위한 키트(kit)를 준비한다. 이때, 키트는 하기 표 1과 같다.
품목 추출용 용기(60cc) 추출용 용기(30cc) 용기(200cc) 액티베이터 주사기
수량(EA) 2 1 1 1 5
상기 [표 1]에서, 60cc 추출용 용기는 도 1 및 도 2에 도시된 추출용 용기(10)를 사용하고, 30cc 추출용 용기는 도 5 및 도 6에 도시된 추출용 용기(20)를 사용한다. 액티베이터는 본 출원인에 의해 등록된 특허 제10-1429253호(등록일: 2014.08.05.)를 사용한다. 주사기는 일반적으로 사용되는 의료용 주사기를 사용한다. 이후, 도 7 및 도 9와 같이, 지방조직으로부터 지방(1) 100cc를 추출한다(ST1).
이후, 추출된 지방(1) 100cc를 200cc 용량의 용기(30)에 담은 후 식염수 20cc를 투입한다. 그리고, 초음파 장치(50)를 이용하여 지방(1)을 초음파 분해한다(ST2).
이후, 도 7 및 도 10과 같이, 초음파 분해된 지방(2)을 주사기(60)를 이용하여 흡입한 후 60cc 용량의 추출용 용기(10) 2개에 각각 50cc씩 균일하게 주입한다(ST3).
이후, 도 7 및 도 11과 같이, 원심분리기(70)을 이용하여 추출용 용기(10)에 주입된 지방(2)을 1차 원심분리한다(ST4). 이때, 1차 원심분리는 3,200rpm으로 5분 동안 실시한다.
1차 원심분리된 지방(2)은 도 11과 같이, 추출용 용기(10)의 하부로부터 순차적으로 지방줄기세포(SVF)(2c)/상등액(2b)/순수 지방(2a)으로 분리 적층된다. 이때, 추출용 용기(10)의 최하부에 위치되는 지방줄기세포(SVF)(2c)는 1차 원심분리되는 과정에서 하부마개(12)의 여과망(122)을 통해 하부마개(12)의 수용홈(121a)에 채워지고, 이 과정에서 지방줄기세포(SVF)(2c)는 여과망(122)에 의해 1차 여과된다.
이후, 도 7 및 도 12에 도시된 바와 같이, 1차 원심분리를 통해 지방(2)으로부터 분리된 순수 지방(2a), 상등액(2b) 및 지방줄기세포(SVF)(2c) 중 지방줄기세포(SVF)(2c)와 상등액(2b)(지방줄기세포(SVF)가 일부 함유된 액)만을 주사기(80)를 이용하여 추출용 용기(10)로부터 추출한 후, 30cc 추출용 용기(20)로 주입한다(ST5).
도 13은 도 12에 도시된 주사기를 이용하여 추출용 용기로부터 지방줄기세포와 상등액을 추출하는 과정을 도시한 도면이고, 도 14는 도 13에서 주사기로 추출된 지방줄기세포와 상등액을 30cc 추출용 용기로 주입하는 과정을 도시한 도면이다.
도 13과 같이, 주사기(80)를 이용하여 2개의 60cc 추출용 용기(10) 각각의 하부마개(12)의 수용홈(121a)에 채워진 지방줄기세포(SVF)(2c)와 그 상부에 적층된 상등액(2b)만을 추출한다. 이때, 주사기(80)는 바늘이 여과망(122)을 뚫지 않도록 하부마개(12)에 꽂아 사용하는 것이 바람직하고, 2개의 60cc 추출용 용기(10)로부터 각각 지방줄기세포(SVF)(2c)와 그 상부에 적층된 상등액(2b)을 포함하여 15cc씩 추출한다.
이후, 도 14와 같이, 주사기(80)를 30cc 추출용 용기(20)의 주입구로 인입시켜 추출된 지방줄기세포(SVF)(2c)와 상등액(2b)을 30cc 추출용 용기(20)로 주입한다.
한편, 주사기(80)로부터 30cc 추출용 용기(20)로 지방줄기세포(SVF)(2c)와 상등액(2b)이 주입되면, 도 7 및 도 15와 같이, 원심분리기(70)를 이용하여 30cc 추출용 용기(20)로 주입된 지방줄기세포(SVF)(2c)와 상등액(2b)을 2차 원심분리한다(ST6). 참고로, 도 15에서 좌측 용기는 맑은 식염수가 담겨진 용기로서, 지방줄기세포(SVF)(2c)와 상등액(2b)이 채워진 추출용 용기(20)와의 색상을 비교하기 위해 도시하였다.
2차 원심분리 후, 상등액(2b)에 포함된 지방줄기세포(SVF)는 상등액(2b)으로부터 분리되어 추출용 용기(20)의 하부마개(22)의 여과망을 통해 하부마개(22)의 수용홈(121a)에 채워지고, 이 과정에서 지방줄기세포(SVF)(2c)는 여과망(122)에 의해 2차 여과된다.
이후, 도 7 및 도 16과 같이, 하부마개(22)의 수용홈으로 분리된 지방줄기세포(SVF)(2c)만을 도 13과 동일한 방법으로, 주사기(90)를 이용하여 주출하여 분리한다(ST7).
도 17은 도 16에 도시된 주사기를 이용하여 추출용 용기로부터 지방줄기세포를 추출하는 과정을 도시한 도면으로서, 도 17과 같이, 주사기(90)의 바늘을 하부마개(22)에 꽂은 후 하부마개(22)의 수용홈에 채워진 지방줄기세포(SVF)(2c) 5cc를 추출한다.
이후, 도 7 및 도 18과 같이, 주사기(90)로 추출된 지방줄기세포(SVF)(2c)를 액티베이터(40)를 이용하여 20회 반복 이완시켜 지방줄기세포(SVF)(2c)를 활성화한다(ST8)(액티베이터(40)의 구조 및 작용 효과에 대해서는 등록특허 제10-1429253호 참조).
이상에서와 같이 본 발명의 기술적 사상은 바람직한 실시예에서 구체적으로 기술되었으나, 상기한 바람직한 실시예는 그 설명을 위한 것이며, 그 제한을 위한 것이 아니다. 이처럼 이 기술 분야의 통상의 전문가라면 본 발명의 기술 사상의 범위 내에서 본 발명의 실시예들의 결합을 통해 다양한 실시예들이 가능함을 이해할 수 있을 것이다.
[부호의 설명]
10, 20 : 지방줄기세포 추출용 용기 11, 21 : 본체
12, 22 : 하부마개 13, 23 : 상부마개
14, 24 : 상부뚜껑 15, 25 : 하부뚜껑
21a : 상부액실 21b : 하부액실
111 : 주입구 112 : 보조 주입구
113 : 보조마개 121 : 패킹
121a : 수용홈 121b: 안착턱
121c : 밀착돌부 122 : 여과망

Claims (7)

  1. 내부에 수용공간이 마련된 본체;
    상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 상기 본체의 하부를 밀폐하는 하부마개; 및
    상기 본체에 마련된 주입구의 상부를 밀폐하는 상부마개; 를 포함하고,
    상기 하부마개는,
    상부 중앙부에 수용홈이 마련되고, 외측면이 상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 밀착 결합되는 패킹; 및
    상기 수용홈을 덮도록 상기 패킹의 상단부에 융착된 여과망;
    을 포함하는 것을 특징으로 하는 지방줄기세포 추출용 용기.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 패킹은,
    탄성 재질로 이루어져 상기 본체의 내측에 긴밀에 밀착되는 결합부; 및
    상기 결합부의 강도를 향상시키기 위해 상기 결합부보다 강도가 강한 재질로 이루어져 상기 결합부의 상부에 결합되고 상기 여과망이 융착되는 지지부; 를 포함하고,
    상기 결합부의 외측면에는 상기 본체의 내측면에 긴밀하게 밀착되도록 밀착돌부가 돌출 형성되고, 상기 지지부의 상단부에는 상기 여과망이 안착되도록 하부방향으로 함몰된 안착턱이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 지방줄기세포 추출용 용기.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 본체는 상부로 돌출된 주입구를 구비하고, 상기 수용공간은 상기 주입구에 의해 상부액실과 하부액실로 구획되는 것을 특징으로 하는 지방줄기세포 추출용 용기.
  4. (a) 지방조직으로부터 지방을 추출하는 단계;
    (b) 추출된 지방을 초음파 장치를 이용하여 초음파 분해하는 단계;
    (c) 초음파 분해된 지방을 제1 추출용 용기에 주입하여 1차 원심분리하는 단계;
    (d) 1차 원심분리에 의해 분리된 지방줄기세포(SVF), 상등액 및 순수 지방 중 지방줄기세포(SVF)와 상등액만을 상기 제1 추출용 용기로부터 추출하는 단계; 및
    (e) 상기 제1 추출용 용기로부터 추출된 상기 지방줄기세포(SVF)와 상기 상등액을 제2 추출용 용기에 주입하여 2차 원심분리하는 단계; 및
    (f) 2차 원심분리에 의해 분리된 지방줄기세포(SVF)와 상등액 중 상기 제2 추출용 용기로부터 지방줄기세포(SVF)만을 추출하는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 지방줄기세포 추출방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 (f) 단계 후,
    상기 제2 추출용 용기로부터 추출된 지방줄기세포(SVF)를 액티베이터를 이용하여 반복 이완시켜 활성화하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 지방줄기세포 추출방법.
  6. 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서,
    상기 제1 및 제2 추출용 용기는 각각,
    내부에 수용공간이 마련된 본체;
    상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 상기 본체의 하부를 밀폐하는 하부마개; 및
    상기 본체에 마련된 주입구의 상부를 밀폐하는 상부마개; 를 포함하고,
    상기 하부마개는,
    상부 중앙부에 수용홈이 마련되고, 외측면이 상기 본체의 하부 내측으로 삽입되어 밀착 결합되는 패킹; 및
    상기 수용홈을 덮도록 상기 패킹의 상단부에 융착된 여과망;
    을 포함하는 것을 특징으로 하는 지방줄기세포 추출방법.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 (f) 단계는 상기 제2 추출용 용기의 수용홈에 채워진 지방줄기세포(SVF)만을 주사기를 이용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 지방줄기세포 추출방법.
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