WO2018186770A1

WO2018186770A1 - Специфические пептидные ингибиторы клатрина

Info

Publication number: WO2018186770A1
Application number: PCT/RU2018/000121
Authority: WO
Inventors: Олег Аркадьевич КОТИН; Аркадий Михайлович КОТИН; Максим Олегович ЕМЕЛЬЯНОВ
Original assignee: Олег Аркадьевич КОТИН
Priority date: 2017-04-07
Filing date: 2018-03-01
Publication date: 2018-10-11
Also published as: CN110869043A; JP2020512996A; WO2018186770A8; EP3741382A4; US20220088113A1; EP3741382A1; CA3058388A1; RU2651491C1

Abstract

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Предложено применение синтетических пептидов в качестве специфических ингибиторов клатрина. Предложен также способ профилактики или лечения заболевания или состояния у животного, включающий введение эффективного количества пептидов или пролекарства или физиологически приемлемой соли или сольвата вышеназванных пептидов, или фармацевтической композиции, содержащей вышеназванные пептиды, как специфических ингибиторов клатрина. Пептиды могут найти применение в медицине, ветеринарии и фармакологии для создания новых лекарственных средств, являющихся специфическими ингибиторами клатрина.

Description

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ПЕПТИДНЫЕ ИНГИБИТОРЫ КЛАТРИНА

Настоящее изобретение относится к биохимии, конкретнее, к биологически активным пептидам, которые являются специфическими ингибиторами клатрина и могут найти применение в медицине и фармакологии в качестве препаратов для профилактики или лечения различных заболеваний и физиологических состояний, чувствительных к ингибированию клатрина или для которых ингибирование клатрина необходимо.

Термин «клатрин», который используется в настоящем описании, означает внутриклеточный белок, который является основным компонентом оболочки окаймленных пузырьков, образующихся при рецептор-опосредованном эндоцитозе [McMahon, Boucrot, 2011]. В классическом варианте клатрин состоит из трех тяжелых цепей (—190 kDa), каждая из которых тесно связана с легкой цепью (~25 kDa). Тяжелые цепи кодируются двумя генами: на хромосоме 17 (тяжелая цепь С 17) и на хромосоме 22 (тяжелая цепь С22). Последняя представлена в основном в мышцах, тогда как С17 представлена в клатрине всех клеток. Однако, обе тяжелые цепи имеют высокую степень гомологии (95% совпадения аминокислотной последовательности) и функционально равнозначны [Hood, Royle, 2009]. В результате полимеризации клатрин формирует замкнутую трёхмерную сеть, напоминающую сферу, при размере клатриновых везикул около 100 нм. После образования везикулы и отрыва везикулы от мембраны (под действием ГТФазы динамина) клатриновая оболочка быстро диссоциирует и клатрин может повторно использоваться для эндоцитоза и экзоцитоза. Процесс стимулируется в результате взаимодействия лиганда со специфическим рецептором [McMahon, Boucrot, 2011]. Принципиально важно, что выключение активности тяжелой цепи клатрина влечет за собой потерю активности целого клатринового комплекса [Haar ter, Harrison, Kirchhausen, 2000]. В результате клатринового эндоцитоза в клетку попадают не только рецепторы, но и другие метаболиты: гормоны, нейромедиаторы, всевозможные белки [Most и др., 2003]. Также в результате клатринового эндоцитоза в клетку попадают различные патогенные агенты, такие, как вирусы, токсины и симбиотические микроорганизмы. Например, нейротоксины ботулизма и нейротоксин столбняка являются бактериальными белками, которые вызывают два тяжелых заболевания: столбняк и ботулизм. Их действие зависит от интернализации нейротоксинов через эндоцитоз в нервные окончания [Pellett и др., 2015].

Известны различные препараты, которые являются ингибиторами клатрина. Все они обладают теми или иными недостатками, которые сужают возможности их применения в медицине.

В частности, известны синтетические препараты, имеющие в своей основе соединения, которые могут связываться с терминальным доменом клатрина по меньшей мере с одной или несколькими аминокислотами: lie 52, Ие 62, lie 80, Phe 91 и/или He 93, (WO2013010218A9; Robertson и др., 2014). Существенным недостатком этих соединений является отсутствие специфичности [Willox, Sahraoui, Royle, 2014].

Также известен ингибитор клатрина в виде пептида Thr-Pro-Val-Leu-Glu-Thr-Pro-Lys- Leu-Leu-Leu-Trp (JP2009250552A). Однако в этом случае предложенная 12-членная последовательность является ингибитором не прямого действия, а первоначально ингибирует связывание с клатрином белка GRP78, которому присущи функции, не связанные с клатрином. Поэтому недостатком этого соединения также является отсутствие специфичности. Кроме того, предложенная последовательность состоит исключительно из природных L-аминокислот и, следовательно, чувствительна к эндопептидазам, что ограничивает возможность ее использования in vivo.

С целью устранения отмеченных недостатков экспериментальным путем было установлено, что синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия, защищенные нами ранее патентами РФ 2508295, US 9260482 ( СТ WO/2013/141750, 2013), эффективные при различных способах введения (субокципитальном, внутримышечном, интраназальном и внутривенном) на различных моделях тонической и острой боли, являются специфическими ингибиторами клатрина.

Ранее нами было показано, что разработанные пептидные последовательности не влияют на кальциевый обмен по тесту связывания с тетрациклином, не обладают иммунным действием, не образуют фибриллы в растворе, устойчивы при хранении, и являются дешевыми в изготовлении и использовании (патент РФ 2508295).

Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в расширении ассортимента эффективных средств, являющихся специфическими ингибиторами клатрина, не имеющих побочных эффектов и получаемых простым синтезом.

Поставленная задача решается тем, что

Для достижения поставленного результата предлагается применение синтетического пептида общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1]

XDL - XDL1 - XDL2 - L-Lys - L-Leu - XDL3 - L-Thr - R2 (I) ,

где: XDL - отсутствие аминокислоты или L-Туг,

XDL1 - одна из аминокислот: L-Leu, L-Ala или D-Ala,

XDL2 - одна из аминокислот: L-His, D-His , L-Ala или D-Ala,

XDL3 - одна из аминокислот: L-Gln , L-Ala или D-Ala;

R2 - ОМе или КН₂, или пептида - ретроинверсии формулы (I), имеющего обратную последовательность аминокислот с заменой L-формы аминокислот на D-форму и D-формы аминокислот на L- форму, общей формулы (II) [SEQ ID NO:2]

D-Thr - XDL4- D-Leu - D-Lys - XDL5 - XDL6 - XDL7 - R2 (II),

где: XDL4 - одна из аминокислот: D-Gln, D-Ala или L-Ala;

XDL5 - одна из аминокислот: D-His, L-His, D-Ala или L-Ala,

XDL6 - одна из аминокислот: D-Leu, D-Ala или L-Ala,

XDL7 - отсутствие аминокислоты или D-Tyr,

R2 - ОМе или ИН₂,

в качестве специфического ингибитора клатрина.

Предлагается также способ профилактики или лечения заболевания или состояния у животного, включающий введение эффективного количества синтетических пептидов общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1] или общей формулы (И) [SEQ ID NO:2] или пролекарства или физиологически приемлемой соли или сольвата вышеназванных пептидов, или фармацевтической композиции, содержащей вышеназванные пептиды, как специфических ингибиторов клатрина.

Перечень заболеваний, при которых ингибирование функции клатрина имеет ключевую роль, представлен в нижеследующей таблице 1.

Таблица 1

Английское наименование Русское наименование

заболевания заболевания Ссылка

Abeta-lipoproteinema Абеталипопротеинемия [Aridor, Hannan, 2000]

Aceruloplasminemia Ацерулоплазминемия [Aridor, Hannan, 20021

Acquired-immunodeficiency syndrome

(AIDS) (Human immunodeficiency Синдром приобретенного [Патент WO

virus (HIV)) иммунодефицита 2011088431 Al]

Острый лимфобластный

Acute lymphoblastic leukemia or acute лейкоз или острый

myeloid leukemia миелоидный лейкоз [Aridor, Hannan, 2000]

Acute myeloid leukemia Острый миелоидный лейкоз [Aridor, Hannan, 2000]

[Патент WO

Adeno-associated virus Аденоассоциированный вирус 2011088431 Al]

Аутосомно-доминантная

ADPKD-autosomal dominant polycystic поликистозная болезнь почек

kidney disease (Поликистоз почек) [Aridor, Hannan, 2000]

African swine fever (African swine [Патент WO

fever virus) Африканская чума свиней 2011088431 All

Alpha- 1-antichymotrypsin (ACTH) Дефицит альфа- 1- deficiency антихимотрипсина [Aridor, Hannan, 20001

Alzheimer disease Болезнь Альцгеймера [Aridor, Hannan, 20001

Боковой амиотрофический [Aridor, Hannan, 2000]

Amyotrophic lateral sclerosis склероз Anderson disease Болезнь Андерсона [Aridor, Hannan, 2002]

Anthrax (Anthrax toxin from Bacillus [Патент WO

anthracis) Сибирская язва 2011088431 Al]

Anti-phospholipid syndrome Антифосфолипидный синдром [Aridor, Hannan, 2000]

Argentine hemorrhagic fever (Junin Аргентинская [Патент WO

arenavirus (JUNV)) геморрагическая лихорадка 2011088431 Al]

Aspartylglucosaminuria Аспартилглюкозаминурия [Aridor, Hannan, 2002]

Атаксия телеангиэктазии

Ataxia telangiectasia (синдром Луи-Бара) [Aridor, Hannan, 20001

Autosomal dominant retinitis Аутосомно-доминантный

pigmentosa пигментный ретинит [Aridor, Hannan, 2002]

Autosomal recessive juvenile Аутосомно-рецессивный

parkinsonism ювенильный паркинсонизм [Aridor, Hannan, 2002]

Autosomal recessive primary Аутосомно-рецессивная

hyperoxaluria первичная гипероксалурия [Aridor, Hannan, 2000]

Bare lymphocyte syndrome Синдром голых лимфоцитов [Aridor, Hannan, 2000]

Болезнь Баттена

Batten disease (neuronal ceroid- (нейрональный цероид- lipofuscinosis) липофусциноз) [Aridor, Hannan, 2000]

Bluetongue disease/ catarrhal fever [Патент WO

(Bluetongue virus- 1) Катаральная лихорадка 2011088431 Al]

Botulism Ботулизм [Pellett и др., 2015]

Bovine respiratory disease (eukotoxin Респираторное заболевание [Патент WO (LKT) from Mannheimia haemolytica) крупного рогатого скота 2011088431 Al]

Brugada syndrome Синдром Бругада [Aridor, Hannan, 2002]

[Патент WO

Candidiasis (Candida albicans) Кандидоз 2011088431 Al]

Carcinomas/ haemangio-endotheliomas Карциномы /

of the bladder (Bovine papillomavirus гемангиоэндотелиомы [Патент WO

BP VI) мочевого пузыря 2011088431 Al]

Cardiomyopathy Кардиомиопатия [Aridor, Hannan, 2002]

CDG-la (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа 1а [Aridor, Hannan, 2002]

CDG-lb (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа lb [Aridor, Hannan, 2002]

CDG-lc (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа 1с [Aridor, Hannan, 2002]

CDG-ld (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа Id [Aridor, Hannan, 2002]

CDG-le (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа 1е [Aridor, Hannan, 2002]

CDG- If (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа If [Aridor, Hannan, 2002]

CDG-2a (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа 2а [Aridor, Hannan, 2002]

CDG-2b (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа 2Ь [Aridor, Hannan, 2002]

Врожденный порок

CDG-2c (Congenital Disorder of гликозилирования типа 2с

Glycosylation) (leukocyte adhesion (синдром дефицита

deficiency II syndrome) лейкоцитарной [Aridor, Hannan, 2002] недостаточности II)

CDG-2d (Congenital Disorder of Врожденный порок

Glycosylation) гликозилирования типа 2d [Aridor, Hannan, 2002]

Charcot-Marie-Tooth syndrome Синдром Шарко-Мари-Туза [Aridor, Hannan, 2000]

Chediak-Higashi syndrome Синдром Чедиака-Хигаси [Aridor, Hannan, 2000]

Chikungunya disease (Chikungunya [Патент WO

virus (CHIKV)) Болезнь Чикунгунья 2011088431 Al]

Chlamydia (Chlamydia psittaci and [Патент WO

Chlamydia trachomatis) Хламидиоз 2011088431 Al]

Choroideremia Хориодеграмия [Aridor, Hannan, 2000]

Хронический

Chronic myelomonocytic leukemia миеломоноцитарный лейкоз [Aridor, Hannan, 2002]

Комбинированный

врожденный дефицит

факторов (V и VIII)

Combined factors V and VIII deficienc свертывания [Aridor, Hannan, 2000]

Common cold (Human rhinovirus 2 [Патент WO

(HRV)) Простуда 2011088431 Al]

Congenital hypothyroidism Врожденный гипотиреоз [Aridor, Hannan, 2000]

Врожденный синдром

Congenital Long QT syndrome удлиненного интервала QT [Aridor, Hannan, 2000]

Congenital nephritic syndrome of the Врожденный почечный

finnish type синдром финского типа [Aridor, Hannan, 2002]

Congenital sucrase-isomaltase Врожденная недостаточность

deficiency сукразы-изомальтазы [Aridor, Hannan, 2000]

Crigler-Najjar Синдром Криглера— Найяра [Aridor, Hannan, 2000]

Cushing's disease Болезнь Кушинга [Aridor, Hannan, 2000]

Cystic fibrosis Муковисцидоз [Aridor, Hannan, 2000]

Danon disease Болезнь Данона [Aridor, Hannan, 2000]

Dengue fever (Dengue virus 1 & 2 [Патент WO

(DENV)) Лихорадка денге 2011088431 Al]

Diabetes mellitus Сахарный диабет [Aridor, Hannan, 2000]

Диабет / Синдром Уолкотта-

Diabetes/Wolcott- Rallison syndrome Раллисона [Aridor, Hannan, 2002]

Diptheria (Corynebacterium [Патент WO

diphtheriae) Дифтерия 2011088431 Al]

Dubin- Johnson syndrome Синдром Дабина- Джонсона [Aridor, Hannan, 2002]

Ebola hemorrhagic fever (Zaire Геморрагическая лихорадка [Патент WO

Ebolavirus) Эбола 2011088431 Al]

Echovirus disease (Echo virus (EV1) [Патент WO

from Picornaviridae) Эховирусная инфекция 2011088431 Al]

Ehlers-Danlos syndrome Синдром Элерса-Данлоса [Aridor, Hannan, 2002]

Epilepsia Эпилепсия [Casillas-Espinosa,

Powell, O'Brien, 2012]

Equine infectious anemia (Equine Инфекционная анемия [Патент WO infectious anemia virus (EIAV)) лошадей 2011088431 All

Fabri disease Болезнь Фабри [Aridor, Hannan, 2000]

Faciogenital dysplasia (Aarskog-Scott Фациогенитальная дисплазия

syndrome) (синдром Аарскога-Скотта) [Aridor, Hannan, 20021

Familial chylomicronemia Семейная хиломикронемия [Aridor, Hannan, 2000] Семейная

Familial hypercholesterolemia гиперхолестеринемия [Aridor, Hannan, 2000]

Семейный внутрипеченочный

Familial intrahepatic cholestasis холестаз [Aridor, Hannan, 2000]

Feline infectious peritonitis (Feline Инфекционный перитонит [Патент WO infectious peritonitis virus (FIPV)) кошек 2011088431 All

Frontotemporal dementia with Фронтотемпоральное

Parkinsonism слабоумие с паркинсонизмом [Aridor, Hannan, 2000]

[Патент WO

Gastroenteritis (Rotavirus) Гастроэнтерит 2011088431 Al]

Genital warts/ cervical cancer (Human

papillomavirus 31 (HPV31) and 16 Генитальные наросты / рак [Патент WO

(HPV16)) шейки матки 2011088431 Al]

Golden staph infections [Патент WO (Staphylococcus aureus) Золотистый стафилоккок 2011088431 Al]

Griscelli disease Синдром Гришкелли [Aridor, Hannan, 2000]

Griscelli disease with hemophagic Болезнь Грискелли с

syndrome гемофилическим синдромом [Aridor, Hannan, 2000]

[Патент WO

Hepatitis В (Hepatitis В virus (HBV)) Гепатит В 2011088431 Al]

[Патент WO

Hepatitis С (Hepatitis С virus (HCV)) Гепатит С 2011088431 Al]

Hereditary emphysema Врожденная эмфизема [Aridor, Hannan, 2000]

Наследственная эмфизема с

Hereditary emphysema with liver injury повреждением печени [Aridor, Hannan, 2000]

Периодическая болезнь

Hereditary familial amyloidosis of (наследственный семейный

Finish амилоидоз) [Aridor, Hannan, 2002]

Наследственный

Hereditary hemochromatosis гемохроматоз [Aridor, Hannan, 2000]

Наследственная

Hereditary hyperhomocysteinemia гипергомоцистеинемия [Aridor, Hannan, 2002]

Наследственная

Hereditary hypofibrinogenemia гипофибриногенемия [Aridor, Hannan, 2000]

Hereditary pancreatitis Наследственный панкреатит [Aridor, Hannan, 2000]

Hereditary spherocytosis Наследственный сфероцитоз [Aridor, Hannan, 2002]

Синдром Германски-Пудлак I- го типа

Hermansky-Pudlak syndrome type 1 [Aridor, Hannan, 2000]

Синдром Германски-Пудлак

Hermansky-Pudlak syndrome type 2 П-го типа [Aridor, Hannan, 2000]

[Патент WO

Herpes simplex (Herpes Simplex virus) Простой герпес 2011088431 Al]

Спиноцеребеллярная атаксия

Huntington and spinocerebellar ataxias и болезнь Хантингтона [Aridor, Hannan, 2002]

Huntington's disease Болезнь Хантингтона [Aridor, Hannan, 2000]

I cell disease Ι-клеточная болезнь [Aridor, Hannan, 2000]

Восковидные липофусцинозы

Infantile neuronal ceroid lipofuscinosis нейронов (детская форма) [Aridor, Hannan, 2002]

[Патент WO

Influenza (Influenza virus) Грипп 2011088431 Al] Jaagsiekte/ ovine pulmonary

adenocarcinoma (Jaagsiekte sheep Овечья аденокарцинома [Патент WO

retrovirus (JSRV)) легких 2011088431 А1]

Kaposi's sarcoma (Kaposi's sarcoma- [Патент WO

associated herpes-virus) Саркома Калоши 2011088431 А1]

Korean hemorrhagic fever (Hantaan Корейская геморрагическая [Патент WO

virus) лихорадка 2011088431 А1]

Laron syndrome Синдром Ларона [Aridor, Hannan, 2000]

Мышечная дистрофия

Limb-girdle muscular dystrophy конечностей [Aridor, Hannan, 2002]

Lissencephaly Лизенцефалия [Aridor, Hannan, 2000]

[Патент WO

Listeriosis (Listeria monocytogenes) Листериоз 2011088431 Al]

Низкий уровень

Low plasma lipoprotein a levels липопротеидов плазмы [Aridor, Hannan, 2000]

Болезнь включения

Microvillus inclusion disease микроворсинок [Aridor, Hannan, 2000]

Miller Dieker syndrome Синдром Миллера- Дикера [Aridor, Hannan, 2000]

Mohr Tranebjaerg syndrome (human Синдром Мора Транберга

deafness dystonia syndrome) (синдром глухоты- дистонии) [Aridor, Hannan, 2000]

Боковой амиотрофический

Motor neuron disease склероз [Aridor, Hannan, 2000]

Mucolipidosis IV Муколипидоз ГУ-го типа [Aridor, Hannan, 2000]

Мукополисахаридоз типа IV /

Mucopolysaccharidosis type Синдром Марото— Лами

IV/Maroteaux- Lamy syndrome [Aridor, Hannan, 2002]

Синдром множественных

Multiple exostoses syndrome экзостозов [Aridor, Hannan, 2002]

Murine norovirus disease (Murine [Патент WO

norovirus-1 (MNV-1)) Мышиный нановирус 2011088431 Al]

МиелодиспластическийЬпрз ://t

ranslate.google.eom/#en/ru/Pvhiz

Myelodysplastic syndrome omelic синдром [Aridor, Hannan, 2000]

Myeloid leukemia Миелолейкоз [Aridor, Hannan, 2000]

[Richards, Whittle,

Neuropathic pain Нейропатическая боль Buchbinder, 2012]

Нефрогенный несахарный

Nephrogenic diabetes insipidus диабет [Aridor, Hannan, 2000]

Нейрогипофизарный

Neurohypophyseal diabetes insipidus несахарный диабет [Aridor, Hannan, 2000]

Niemann-Pick disease Болезнь Ниманна— Пика [Aridor, Hannan, 2000]

Синдром Лоу

(окулоцереброренальный

Oculocerebro-renal syndrome of Lowe синдром) [Aridor, Hannan, 2000]

Oculocutaneous albinism Глазокожный альбинизм [Aridor, Hannan, 2000]

Optiz syndrome Синдром Опица [Aridor, Hannan, 2000]

Остеогенез несовершенный

Osteogenesis imperfecta (01) (01) [Aridor, Hannan, 2000]

Системные заболевания

Overlap connective tissue disease соединительной ткани [Aridor, Hannan, 2000]

Parvo (Canine parvovirus) Парвовирус [Патент WO 2011088431 А1]

Болезнь Пелизеуса-

Pelizaeus-Merzbacher disease Мерцбахера [Aridor, Hannan, 2000]

Pendred syndrome Синдром Пендреда [Aridor, Hannan, 2002]

Periodontitis (Porphyromonas [Патент WO

gingivalis) Периодонтит 2011088431 Al]

Стойкая

Persistent hyperinsulinemic гиперинсулинемическая

hypoglycemia of infancy гипогликемия младенцев [Aridor, Hannan, 2002]

[Патент WO

Poliomyelitis (Poliovirus) Полиомиелит 2011088431 Al]

Полиневропатия, пигментный

ретинит, серонегативный

Polyneuropathy, pigmented retinitis, полиартрит,

seronegative polyarthritis, interstitial интерстициальный легочный

pulmonary fibrosis, Raynaud's фиброз, Феномен Рейно,

phenomenon, Wegner's granulomatosis, Гранулематоз Вегенера,

proteinuria протеинурия [Aridor, Hannan, 2002]

Первичная цилиарная

Primary ciliary dyskinesia (Kartagener's дискинезия (Синдром

syndrome) Картагенера) [Aridor, Hannan, 2000]

Primary hypothyroidism Первичный гипотиреоз [Aridor, Hannan, 2000]

Protein С deficiency Дефицит протеина С [Aridor, Hannan, 2000]

Псевдоахондроплазия и

Pseudoachondroplasia and Multiple множественная эпифизарная

epiphyseal дисплазия [Aridor, Hannan, 2002]

Pseudotuberculosis (Yersinia [Патент WO

pseudotuberculosis) Псевдотуберкулез 2011088431 Al]

[Патент WO

Respiratory infection (Adenovirus) Респираторные инфекции 2011088431 Al]

Ризомелическая точечная

Rhizomelic chondrodysplasia punctata хондро дисплазия [Aridor, Hannan, 2000]

Sarcoma Саркома [Aridor, Hannan, 2002]

Scott syndrome Синдром Скотт [Aridor, Hannan, 2000]

Semliki forest virus disease (Semliki Вирусное заболевание леса [Патент WO

forest virus (SFV)) Семлики 2011088431 Al]

Симианский вирус (вирус SV- [Патент WO

Simian virus 40 (SV-40) 40) 2011088431 Al]

Sjogren's syndrome Синдром Шегрена [Aridor, Hannan, 2000]

Sphingolipid activator protein Дефицит белка-активатора

deficiency сфинголипидов [Aridor, Hannan, 2000]

Сфинголипидозы,

Sphingolipidoses, gangliosidosis, ганглиозидоз, болезнь

Sandhoff disease, Fabry disease Сандхоффа, болезнь Фабри [Aridor, Hannan, 2000]

Спинная и бульбарная

Spinal and bulbar muscular atrophy мышечная атрофия [Aridor, Hannan, 2000]

Спондилоэпифизарная

дисплазия врожденного

Spondyloepiphyseal dysplasia congenita происхождения [Aridor, Hannan, 2000]

Штаргардтоподобная

Stargardt-like macular dystrophy макулодистрофия [Aridor, Hannan, 2002] Синдром мышечной

Stif-man syndrome скованности [Aridor, Hannan, 2000]

Shaking Palsy Болезнь Паркинсона [Edvardson и др., 2012]

Swine atrophic rhinitis ( Dermonecrotic [Патент WO

toxin (DNT) from Bordetella) Атрофический ринит свиней 2011088431 А1]

Tangier disease Болезнь Танжера [Aridor, Hannan, 2000]

Tay-Sachs Болезнь Тея— Сакса [Aridor, Hannan, 2000]

Tetanus Столбняк [Pellett и др., 2015]

Тироксинсвязывающая

Thyroxine binding globulin deficiency глобулиновая недостаточность [Aridor, Hannan, 2000]

Torsion dystonia Торсионная дистония [Aridor, Hannan, 2002]

Tuberous sclerosis Туберный склероз [Aridor, Hannan, 2000]

Наследственная

Type I hereditary angioedema ангиодистрофия 1-го типа [Aridor, Hannan, 2000]

Urinary tract infection (Uropathogenic Инфекция мочевых путей [Патент WO

Escherichia coli) 2011088431 Al]

Usher's syndrome Синдром Ушера [Aridor, Hannan, 2000]

Vesicular stomatitis (Vesicular [Патент WO

stomatitis virus (VSV)) Везикулярный стоматит 2011088431 Al]

Viral myocarditis/ CNS infection/ Вирусный миокардит /

respiratory disease (Coxsackievirus B3 инфекция ЦНС / [Патент WO

(CVB3) and A9 (CVA9)) респираторные заболевания 2011088431 Al] von Willebrand disease type IIA Болезнь Виллебранда типа НА [Aridor, Hannan, 2000]

Синдром Вискотта—

Wiskott-Aldrich syndrome Олдрича [Aridor, Hannan, 2000]

Х-сцепленная

X-linked adrenoleukodystrophy адренолейкодистрофия [Aridor, Hannan, 2000]

Х-сцепленная болезнь Шарко-

X-linked Charot-Marie-tooth disease Мари-Тута [Aridor, Hannan, 2002]

Х-сцепленная

X-linked hypophosphatemia гипофосфатемия [Aridor, Hannan, 2002]

Синдром Зельвегера

Zellweger syndrome (cerebro-hepato- (цереброгепаторенальный

renal syndrome) синдром) [Aridor, Hannan, 2000]

Сущность изобретения заключается в том, что экспериментальным путем было установлено, что заявляемые пептиды, имеющие простую структуру (что облегчает их получение химическим путем), являются специфическими ингибиторами клатрина.

Термин «ингибитор клатрина», который используется в настоящем описании, и его вариации, означает соединение, которое взаимодействует с клатрином, и, по меньшей мере, частично ингибирует функциональную активность клатрина в клатрино-опосредованном эндоцитозе (СМЕ), который может быть выражен снижением СМЕ и/или уровнем СМЕ в клетках. Таким образом, ингибирование клатрина в соответствии с изобретением может быть полным или частичным ингибированием функциональной активности клатрина. Клатрин-опосредованный эндоцитоз (СМЕ) важен не только для переноса метаболитов в клетку, но и при передаче сигналов клетками, а ингибирование функции клатрина имеет применение в профилактике или лечении различных заболеваний и состояний. Список болезней, при которых ингибирование функции клатрина имеет ключевую роль, опубликован ранее в работах [Aridor, Hannan, 2002; Aridor, Hannan, 2000], содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки во всей их полноте.

В частности, ингибиторы функции клатрина могут найти применение при многих заболеваниях в центральной нервной системе, включая: болезнь Альцгеймера [Harold и др., 2009], болезнь Паркинсона [Edvardson и др., 2012], эпилепсии [Casillas-Espinosa, Powell, O'Brien, 2012]. Примером нового противоэпилептического средства, действующего по механизму ингибирования процессов, связанных с клатрином, является леветирацетам (Keppra™) [Nowack и др., 2011].

Ингибирование клатрин - опосредуемого эндоцитоза путем блокирования клатрина приводит к сокращению синаптической передачи, уменьшая доступность синаптических везикул, что может применяться для профилактики или лечения боли. Например, противосудорожные препараты, такие как фенитоин и габапентин, очень эффективны при лечении нейропатической боли [Richards, Whittle, Buchbinder, 2012]. Эти лекарственные средства действуют посредством изменения процесса передачи синаптических везикул, то есть ингибирование СМЕ путем блокирования клатрина может остановить или ограничить передачу сигналов боли и тем самым уменьшить или улучшить ощущение боли.

Также вызывают особый интерес данные о том, что одна из мутаций в тяжелой цепи клатрина приводит к редкому заболеванию у людей - потерю болевой и тактильной чувствительности [Nahorski и др., 2015], и то, что интенсивность воспалительных и, как следствие, болевых реакций находится в зависимости от тяжелой цепи клатрина [Escobar и др., 2006; Kim, Sorg, Arrieumerlou, 2011].

В самом деле, профилактика или лечение любого физиологического расстройства, которое может быть осуществлено путем ингибирования СМЕ, как описано здесь, прямо охватывается настоящим изобретением.

Также весьма значимым является возможность подавления ингибиторами клатрина избыточной клеточной пролиферации при раковых заболеваниях. Несколько известных в настоящее время ингибиторов, взаимодействующих с митотическими белками, на данный момент находятся на стадии доклинических или клинических исследованиях в качестве средств для лечения рака. Антимитотические эффекты этих ингибиторов могут быть частично обусловлены косвенным блокированием клатрином митотических функции [Booth и др., 2011]. Следовательно, ингибиторы клатрина являются не только полезными молекулярными инструментами для разгадывания роли клатрина в митотическом цикле, но, по крайней мере, в некоторых вариантах, могут применяться в качестве антимитотических соединений для лечения рака и клеточно-пролиферативных патологий. В этой связи нужно отметить, что многие рецепторы фактора роста (например, EGF-R) также требуют клатрин-опосредованного эндоцитоза (СМЕ) для интернализации и поддержания клеточной активности. Блокирование СМЕ предотвращает пролиферацию клеток в этих случаях и является дополнительным доказательством противораковой и противо-пролиферативной активности ингибиторов клатрина [Smith и др., 2013].

Также ингибирование СМЕ в соответствии с одним или несколькими вариантами осуществления изобретения является важным для разработки средств, предотвращающих проникновение в клетки, в том числе головного мозга, ряда патогенных вирусов, а также всевозможных токсинов, включая пептидные, которые проникают в клетку путем эндоцитоза. К числу таких вирусов и токсинов относятся (но не исчерпывается ими): дифтерия, лейкотоксин (LKT), хламидии, токсин сибирской язвы, золотистый стафилококк, кандидоз, пародонтит, аденовирус, вирус африканской чумы свиней, вирус лихорадки денге, заирский эболавирус (геморрагическая лихорадка Эбола), вирус гепатита В, вирус гепатита С, связанный с саркомой Капоши вирус герпеса, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус гриппа и другие. Например, механизм действия наиболее активных соединений, направленных на предотвращение инфекцирования вирусом Эбола, связан с блокировкой адгезии вирусов на поверхности клетки, или с подавлением их эндоцитоза в клетку [Anantpadma и др., 2016; Aleksandrowicz и др., 2011; Piccini, Castilla, Damonte, 2015].

Таким образом, примеры конкретных заболеваний и состояний, для которых настоящее изобретение находит применение для профилактики или лечения, включают, но не ограничиваются ими, клеточно-пролиферативные заболевания и состояния, мультифокальную лейкоэнцефалопатию, поликистозные заболевания почек, заболевания, связанные с β- амилоидом (такие, как болезнь Альцгеймера), нейродегенеративные расстройства, нейропсихиатрические расстройства, психотические расстройства, психозы, биполярные расстройства, шизофрению, аберрантное нерегулируемое возбуждение нейронов, судороги, нейропатическую боль, мигрень, а также все заболевания и состояния, опосредованные или иным образом связанные с передачей синаптического сигнала с вовлечением процессов СМЕ (например, таких как эпилепсия) или с нарушением рециркуляции клеточных везикул. Также, как указано выше, ингибирование СМЕ в соответствии с одним или несколькими вариантами осуществления изобретения может также быть полезным для предотвращения проникновения ряда патогенных агентов в клетки и, таким образом, быть полезным в профилактике или лечении заболеваний или состояний, связанных с этим.

Все пептиды заявленного семейства обладают ранее показанным анальгетическим действием (см. РСТ WO/2013/141750) и являются специфическими ингибиторами клатрина.

Описание поясняется следующими рисунками:

рис.1 - хроматограмма пептида (шестичленная последовательность);

рис.2 - элюирование белковой фракции;

рис.3 - мажорные белковые соединения;

рис.4 - многоцветный белковый профиль для определения примерных масс при проведении гель-электрофореза (Thermo Fisher Scientific) (взято с официального сайта компании «Thermo Fisher Scientific)) / [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL: https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634, дата обращения: 17.03.2017).

Синтез пептидов осуществляли методами пептидной химии, твердофазным методом с использованием L и D аминокислот.

Пример 1. Синтез пептида L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-L-Gln-L-Thr-NH₂ (Пептид N° 7 SEQ ID ΝΟ:1).

Пептид L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-L-Gln-L-Thr-NH₂ получали методом автоматического твердофазного синтеза по Fmoc-схеме на полимере Ринка (Rink Amide Resin, 0,6 ммоль амино- групп на 1г полимера) с использованием DCC/HOBt (М,К'-дициклогексилкарбодиимид/1- гидроксибензотриазол) метода активации аминокислот. Деблокирование производили путем обработки раствором piperidine/DMF (пиперидин/М -диметилформамид) (1 :4) в течении 7 минут. Защиту групп боковых цепей производили следующими группами: tBu (трет-бутиловый эфир) для тирозина, треонина, Trt (тритил или трифенилметил) для глутамина и для гистидина, Вое (т-бутилоксикарбонил) для лизина. Пептиды отщепляли от полимера и деблокировали смесью TFA/H₂0/EDT (трифторуксусная кислота/вода/1,2-этандитиол) (90:5:5). Очистку пептидов проводили путем обратнофазовой ВЭЖХ (колонка С 18), элюент - ацетонитрил - вода (0,1М дигидрофосфата калия) в соотношении 6:4. Пептиды были охарактеризованы с помощью масс-спектрометра. Чистоту пептида проверяли также ВЭЖХ, колонка Waters DeltaPak CI 8 3,9*150мм 5u 100А; раствор A: 0,1% TFA в 100% воде/MeCN; скорость потока— 1мл/мин; длина волны детектирования— 230 нм (рис.1).

Пример 2. Проверка активности синтезированных пептидов как специфических ингибиторов клатрина.

В основу эксперимента положена методика аффинной хроматографии, где в качестве неподвижной фазы выступает пептидная молекула, закрепленная на специальной матрице. В качестве подвижной фазы выступает экстракт головного мозга крысы. Белковая фракция, специфически связавшаяся с молекулой пептида, в дальнейшем подвергается фракционированию путем электрофореза и непосредственно детектированию отдельных белковых молекул.

Аффинный сорбент готовили следующим образом: матрицей для сорбента являлась бромциан активированная сефароза 4В (Sigma- Aldrich), растворенная в 1мМ соляной кислоте (НС1). Для проведения исследований о возможности связывания клатрина с пептидом, а именно для посадки пептида на носитель (сефарозу) было необходимо ввести спейсер. Задача «спейсера» - пространственно разделить носитель (сефарозу) и собственно пептидную молекулу для создания условий взаимодействия исследуемого пептида и белков экстракта мозга. Такое использование «спейсера» достаточно часто встречается при проведении аффиной сорбции. Природа «спейсеров» весьма разнообразна [Day, Hashim, 1984; Lowe, 1977; Martinez- Ceron и др., 2012]. Использовали «спейсер», состоящий из двух аминокислотных остатков (Asp-Asp). Введение дипептида проходило в фосфатном буфере (рН 7,8— 8,0).

Исследуемый пептид растворяли в бидистиллированной воде и добавляли к аффинному сорбенту при строгом контроле рН, брали 5 мг пептида на 1 мл сорбента. «Сшивку» вели при температуре 4°С в течении 12 часов. По окончании процесса «сшивки» тщательно отмывали не связавшийся продукт многократным промыванием ацетатным буфером с рН 5,0 и бикарбонатным буфером рН 9,0.

Для получения препаратов коры головного мозга крыс брали животных - крыс породы Вистар, самцов, массой около 300 г. Животных декапитировали, на холоду выделяли кору головного мозга. Полученные образцы помещали в жидкий азот, где измельчали до состояния мелкодисперсного порошка. Далее образец переносили в 10 мМ ТРИС-буфер рН 7,6 с 0,3 М сахарозой (Helicon), 1мМ СаС1₂ (Sigma- Aldrich) и ЮмМ MgCl₂ (Sigma- Aldrich). Далее полученный гомогенат на холоду центрифугировали при 15000 об/мин в течении 20 минут.

Аффинную сорбцию проводили в течение 24 часов при 4°С на шейкере с супернатантом, полученным после центрифугирования препаратов коры головного мозга. Далее сорбент переносили на колонку (Bio-Rad) и отмывали от неспецефически связанного белка. Отмывку проводили ТРИС-буфером при рН 7,6 без сахарозы. Вымывание белка контролировали при помощи хроматографа BioRad NGC Discovery. Элюцию смотрели при λ=280 нм. Затем белок отмывали ТРИС-буфером, рН 7,6, содержащим NaCl. Количество соли давалось согласно градиенту от 0,05 М до 0,5 М. Детекция проводилась при длине волны 280 нм, скорость потока 0,1 мл/мин. На рис.2 видно наличие двух пиков с 32 по 34 минуты, которые свидетельствуют о наличии белковой фракции, специфически связавшейся с молекулой пептида.

Белковая фракция, специфически связавшаяся с молекулой пептида, в дальнейшем подвергается фракционированию путем электрофореза и непосредственно детектированию отдельных белковых молекул.

Электрофорез проводили в PAAG-геле. Использовали концентрированную фракцию в количествах: 1, 5 и 10 мкл. Наносили маркер Spectra (Spectra™ Multicolor Broad Range Protein Ladder). На рис.3 отчетливо видны два мажорных белковых соединения, справа нанесен маркер, слева— исследуемая фракция в трех концентрациях. Для идентификации были вырезаны три полоски, соответствующие маркерным массам 260, 50 и 10 кДа. Для определения масс использовали контрольный рисунок из руководства производителя (рис.4).

Идентификацию форезных пятен производили при помощи масс-спектрометрии. Хромато-масс-спектрический анализ проводился на триптических пептидах, выделенных из вырезанных кусучков геля с белком после триптинизации (обработки ферментом трипсином). Затем была проведена хромато-масс-спектрометрия этого раствора пептидов, после чего происходит идентификация пептидных последовательностей по базам данных. После идентификации результаты были валидизированны при помощи процедуры автовадилизации. Пептидные последовательности трипсина служат качественным контролем. Для проверки идентификации интересующих пятен производится поиск по базам данных млекопитающих. Верхнее пятно, соответствующее массе в приделах от 140 кДа до 260 кДа было идентифицировано как тяжелая цепь клатрина по 13 пептидным последовательностям. Поскольку ранее было установлено и доказано обезболивающее действие исследуемых пептидов, а ингибирование СМЕ путем блокирования клатрина может остановить или ограничить передачу сигналов боли, был сделан вывод, что исследуемые пептиды являются специфическими ингибиторами тяжелой цепи клатрина.

Следует отметить, что элюция (отделение) тяжелой цепи клатрина от пептида происходило при высоких значениях градиента, что свидетельствует о существенной аффинности пептида к тяжелой цепи клатрина.

Следовательно, настоящее изобретение может быть использовано также как метод выделения тяжелой цепи клатрина. При этом метод выделения является суущественно более простым, чем общепринятые [Riddelle-Spencer, O'Halloran, 1997]. Поэтому предложенный метод может найти применения для препаративного выделения тяжелой цепи клатрина для молекулярно-биологических исследований и нанотехнологии [Santos dos и др., 2011].

Таким образом, техническим результатом предлагаемого изобретения является простота и дешевизна синтеза предложенных пептидов, являющихся специфическими ингибиторами клатрина, а также отсутствие у них ненужной иммунологической активности и других побочных эффектов, что позволяет рассматривать их в качестве основы для создания безопасных лекарственных средств, являющихся специфическими ингибиторами клатрина и получаемых простым синтезом. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. McMahon Н.Т., Boucrot E. Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediated endocytosis // Nat Rev Mol Cell Biol. 2011. T. 12. jNb 8. C. 517-533.

2. Hood F.E., Royle S.J. Functional equivalence of the clathrin heavy chains CHC17 and CHC22 in endocytosis and mitosis // J. Cell Sci. 2009. T. 122. jNb 13. C. 2185- 2190.

3. McMahon H.T., Boucrot E. Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediated endocytosis // Nat Rev Mol Cell Biol. 2011. T. 12. jN° 8. C. 517-533.

4. Haar E. ter, Harrison S.C., Kirchhausen T. Peptide-in-groove interactions link target proteins to the beta-propeller of clathrin. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2000. T. 97. J4° 3. C. 1096-100.).

5. Most P. и др. Extracellular S100A1 Protein Inhibits Apoptosis in Ventricular Cardiomyocytes via Activation of the Extracellular Signal-regulated Protein Kinase 1/2 (ERK1/2) // J. Biol. Chem. 2003. T. 278. JN 48. C. 48404-48412.

6. Pellett S. и др. Botulinum neurotoxins can enter cultured neurons independent of synaptic vesicle recycling // PLoS One. 2015. T. 10. N° 7. C. 1-17.

7. Патент WO2013010218A9. Inhibition of clathrin / Volker H., Robinson P., Mccluskey А. Опубл. 24.01.2013.

8. Robertson M.J. и др. Synthesis of the Pitstop family of clathrin inhibitors. // Nat. Protoc. 2014. T. 9. C. 1592-606.).

9. Willox A.K., Sahraoui Y.M.E., Royle S.J. Non-specificity of Pitstop 2 in clathrin-mediated endocytosis. // Biol. Open. 2014. T. 3. N° 5. С. 326-31.

10. Патент JP201 1093852A. Clathrin-bonding peptide derivative / Kitahara H. и др. Опубл. 12.05.2011.

11. PCT WO/2013/141750 "Synthetic peptides with a non-narcotic type of analgesic effect", 2013

12. Патент РФ 2508295 Синтетические пептиды с ненаркотическим типом анальгетического действия / Власов Г.П., Котин A.M. / Бюл. - 2013 - Ν° 27.

13. Aridor М., Hannan L. a. Traffic jams II: an update of diseases of intracellular transport. // Traffic. 2002. T. 3. JV° 11. C. 781-790.

14. Aridor M., Hannan L.A. Traffic Jam: A Compendium of Human Diseases that Affect Intracellular Transport Processes // Traffic. 2000. T. 1. Jis 11. C. 836-851. 15. Harold D. и др. Genome- Wide Association Study Identifies Variants at CLU and PICALM Associated with Alzheimer's Disease, and Shows Evidence for Additional Susceptibility Genes // Nat. Genet. 2009. T. 41. J 10. C. 1088-1093.

16. Edvardson S. и др. A deleterious mutation in DNAJC6 encoding the neuronal- specific clathrin-uncoating Co-chaperone auxilin, is associated with juvenile parkinsonism // PLoS One. 2012. T. 7. Jfs 5. C. 4-8.

17. Casillas-Espinosa P.M., Powell K.L., O'Brien T.J. Regulators of synaptic transmission: roles in the pathogenesis and treatment of epilepsy. // Epilepsia. 2012. T. 53 Suppl 9. C. 41-58.

18. Nowack А. и др. Levetiracetam reverses synaptic deficits produced by overexpression of sV2A // PLoS One. 201 1. T. 6. JV° 12. C. 1-8.

19. Richards B.L., Whittle S.L., Buchbinder R. Neuromodulators for pain management in rheumatoid arthritis. // Cochrane database Syst. Rev. 2012. T. 1. Na 1. C. CD008921.

20. Nahorski M.S. и др. A novel disorder reveals clathrin heavy chain-22 is essential for human pain and touch development // Brain. 2015. T. 138. N° 8. C. 2147-2160.

21. Escobar G.A. и др. Clathrin heavy chain is required for TNF-induced inflammatory signaling // Surgery. 2006. T. 140. Ks 2. C. 268-272.) (Kim M.L., Sorg I., Arrieumerlou C. Endocytosis-independent function of clathrin heavy chain in the control of basal NF-κΒ activation // PLoS One. 2011. T. 6. jV° 2.

22. Booth D.G. и др. A TACC3/ch-TOG/clathrin complex stabilises kinetochore fibres by inter-microtubule bridging. // EMBO J. 201 1. T. 30. JN° 5. C. 906-19.

23. Smith СМ. и др. Inhibition of clathrin by pitstop 2 activates the spindle assembly checkpoint and induces cell death in dividing HeLa cancer cells. // Mol. Cancer. 2013. T. 12. C. 4.

24. Anantpadma M. и др. Large-Scale Screening and Identification of Novel Ebola Virus and Marburg Virus Entry Inhibitors // 2016. T. 60. J ° 8. C. 4471^1481.

25. Aleksandrowicz P. и др. Ebola virus enters host cells by macropinocytosis and clathrin-mediated endocytosis // J. Infect. Dis. 201 1. T. 204. jV° SUPPL. 3. C. 957-967.

26. Piccini L.E., Castilla V., Damonte E.B. Dengue-3 virus entry into vero cells: Role of clathrin-mediated endocytosis in the outcome of infection // PLoS One. 2015. T. 10. JN° 10. C. 1-17.

27. Day E.D., Hashim G.A. Affinity purification of two populations of antibodies against format determinants of synthetic myelin basic protein peptide S82 from S82-AH- and S82-CH-Sepharose 4B columns. // Neurochem. Res. 1984. T. 9. J4° 10. C. 1453-65. 28. Lowe C.R. Immobilised lipoamide dehydrogenase. 2. Properties of the enzyme immobilised to agarose through spacer molecules of various lengths. // Eur. J. Biochem. 1977. T. 76. J ° 2. C. 401-9.

29. Martinez-Ceron M.C. и др. Recombinant protein purification using complementary peptides as affinity tags // N. Biotechnol. 2012. T. 29. Ν° 2. C. 206-210.

30. Официальный сайт компании «Thermo Fisher Scientific)) / [Электронный ресурс]. - Режим доступа: URL: https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634 (дата обращения: 17.03.2017).

31. Riddelle-Spencer K.S., O'Halloran T.J. Purification of clathrin heavy and light chain from Dictyostelium discoideum. // Protein Expr. Purif. 1997. T. 11. N° 3. С. 250-6.

32. Santos Т. dos и др. Effects of transport inhibitors on the cellular uptake of carboxylated polystyrene nanoparticles in different cell lines. // PLoS One. 2011. T. 6. N° 9. C. e24438.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение синтетического пептида общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1]

XDL - XDL1 - XDL2 - L-Lys - L-Leu - XDL3 - L-Thr - R2 (I) , где:

XDL - отсутствие аминокислоты или L-Tyr,

XDL1 - одна из аминокислот: L-Leu, L-Ala или D-Ala,

XDL2 - одна из аминокислот: L-His, D-His , L-Ala или D-Ala,

XDL3 - одна из аминокислот: L-Gln , L-Ala или D-Ala;

R2 - ОМе или М1₂,

или пептида - ретроинверсии формулы (I), имеющего обратную последовательность аминокислот с заменой L-формы аминокислот на D-форму и D-формы аминокислот на L- форму, общей формулы (II) [SEQ ID NO:2]

D-Thr - XDL4- D-Leu - D-Lys - XDL5 - XDL6 - XDL7 - R2 (И), где:

XDL4 - одна из аминокислот: D-Gln, D-Ala или L-Ala;

XDL5 - одна из аминокислот: D-His, L-His, D-Ala или L-Ala,

XDL6 - одна из аминокислот: D-Leu, D-Ala или L-Ala,

XDL7 - отсутствие аминокислоты или D-Tyr,

R2 - OMe mra NH₂,

2. Способ профилактики или лечения заболевания или состояния у животного, включающий введение эффективного количества синтетических пептидов общей формулы (I) [SEQ ID ΝΟ:1] или общей формулы (II) [SEQ ID NO:2] или пролекарства или физиологически приемлемой соли или сольвата вышеназванных пептидов, или фармацевтической композиции, содержащей вышеназванные пептиды, как специфических ингибиторов клатрина.