CN110869043A - 特异性肽网格蛋白抑制剂 - Google Patents

特异性肽网格蛋白抑制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN110869043A
CN110869043A CN201880023947.0A CN201880023947A CN110869043A CN 110869043 A CN110869043 A CN 110869043A CN 201880023947 A CN201880023947 A CN 201880023947A CN 110869043 A CN110869043 A CN 110869043A
Authority
CN
China
Prior art keywords
clathrin
ala
peptide
xdl
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880023947.0A
Other languages
English (en)
Inventor
奥列格·阿尔卡季耶维奇·科京
阿尔卡季·米哈伊洛维奇·科京
马克西姆·奥列戈维奇·叶梅利亚诺夫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ao LiegeAerkajiyeweiqiKejing
Original Assignee
Ao LiegeAerkajiyeweiqiKejing
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ao LiegeAerkajiyeweiqiKejing filed Critical Ao LiegeAerkajiyeweiqiKejing
Publication of CN110869043A publication Critical patent/CN110869043A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明涉及化学和制药工业。提出了使用合成肽作为特异性的网格蛋白抑制剂。还提出了一种预防或治疗动物疾病或病症的方法，包括给予有效量的肽或前药或上述肽的生理上可接受的盐或溶剂化物，或包含上述肽作为特异性的网格蛋白抑制剂的药物组合物。该肽可用于医学、兽医学和药理学，以创造新的作为特定的网格蛋白抑制剂的药物。

Description

特异性肽网格蛋白抑制剂
本发明涉及生物化学，更具体地，涉及作为网格蛋白的特异性抑制剂的生物活性肽，并且发现可以在医学和药理学中作为预防或治疗对网格蛋白的抑制有反应或需要抑制网格蛋白的疾病和生理状况的药物而应用。
如本文所用，术语“网格蛋白”是指细胞内蛋白，其是在受体介导的胞吞作用期间形成的壳缘气泡的主要成分[McMahon，Boucrot，2011]。在经典的实施方式中，它由三个网格蛋白重链(-190kDa)组成，每个重链都与轻链(～25kDa)紧密相连。重链由两个基因编码：在第17号染色体(重链C17)上和在第22号染色体(重链C22)上。后者主要存在在肌肉中，而C17存在于网格蛋白的所有细胞中。但是，两条重链具有高度的同源性(95％氨基酸序列重叠)和功能上的相同[Hood，Royle，2009]。聚合网格蛋白形成封闭的三维网络，类似于球面，网格蛋白包被的囊泡大小约为100nm。囊泡形成并被膜囊泡分离后(在GTP酶发动蛋白的影响下)，网格蛋白包被的壳迅速解离网格蛋白，可再用于胞吞和胞吐。与特定受体配体的相互作用刺激了该过程[McMahon，Bocrot，2011]。至关重要的是，网格蛋白活性重链的关闭导致网格蛋白包被的复合物失去活性[Haarter，Harrison，Kirchhausen，2000]。结果，网格蛋白包被的胞吞细胞受体不仅下降，而且其他代谢产物：激素、神经递质、各种蛋白质也下降[Most等人，2003]。由于网格蛋白包被的细胞的胞吞作用的结果，还降低了不同的病原体如病毒、毒素和共生微生物。例如，肉毒杆菌神经毒素和破伤风神经毒素是引起两种严重疾病：破伤风和肉毒中毒的细菌蛋白。它们的作用取决于神经毒素通过胞吞作用进入神经末梢的神经毒素的内在作用[Pellett等人，2015]。
有多种药物是网格蛋白的抑制剂。它们都有一个或其他缺陷，限制了它们在医学中使用的可能性。
特别地，已知的合成制剂在其核心处具有可以结合具有至少一个或多个氨基酸(Ile52Ile62，Ile80，Phe91和/或Ile93)的末端结构域网格蛋白的化合物(WO2013010218A9；Robertson等人，2014)。这些化合物的主要缺点是缺乏特异性[Willox，Sahraoui，Royle，2014]。
还已知网格蛋白肽的抑制剂Thr-Pro-Val-Leu-Glu-Thr-Pro-Lys-Leu-Leu-Leu-Trp(JP2009250552A)。但是，在这种情况下，提出的12元抑制剂序列不是直接的，因为其最初抑制结合蛋白网格蛋白GRP78，其特征与网格蛋白无关。因此，该化合物的缺点也是缺乏特异性。此外，提出的序列仅由天然L-氨基酸组成，因此易受内肽酶的作用，这限制了其在体内使用的可能性。
为了通过实验克服这些缺点，确定了具有非麻醉型镇痛作用的合成肽是网格蛋白的特异性抑制剂，其较早地得到专利RU2508295，US9260482(PCTWO/2013/141750，2013)的保护，对不同的给药方法(枕骨下、肌内、鼻内以及(iv)在急性和强直性疼痛的不同模型中是有效的。
先前我们已经证明，设计为通过与四环素测试结合而不会影响钙代谢的肽序列没有免疫作用，不会在溶液中形成原纤维，在存储中稳定并且制造和使用便宜(专利RU2508295)。
本发明要解决的问题是扩大有效手段的范围，是没有副作用并通过简单合成获得的网格蛋白的特异性抑制剂。
通过以下事实解决了该问题：
为了获得该结果，提出了使用通式(I)[SEQ ID NO:1]的合成肽
XDL-XDL1-XDL2-L-Lys-L-Leu-XDL3-L-Thr-R2(I)，其中：
XDL-不存在氨基酸或为L-Tyr，
XDL1-以下氨基酸之一：L-Leu，L-Ala或D-Ala，
XDL2-以下氨基酸之一：L-His，D-His，L-Ala或D-Ala，
XDL3-以下氨基酸之一：L-Gln，L-Ala或D-Ala；
R2-OMe或NH2，
或肽-通式(I)的逆转，具有反向的氨基酸序列，其中L-型氨基酸被替换为D-型氨基酸，D-型氨基酸被替换为L-型氨基酸，即通式(II)[SEQIDNO:2]
D-Thr-XDL4-D-Leu-D-Lys-XDL5-XDL6-XDL7-R2 (II)，其中：
XDL4-以下氨基酸之一：D-Gln，D-Ala或L-Ala；
XDL5-以下氨基酸之一：D-His，L-His，D-Ala或L-Ala，
XDL6-以下氨基酸之一：D-Leu，D-Ala或L-Ala，
XDL7-不存在氨基酸或为D-Tyr，
R2-OMe或NH2，
作为网格蛋白的特异性抑制剂。
还提供了预防或治疗动物疾病或病症的方法，该方法包括给予有效量的通式(I)[SEQ ID NO:1]或通式(II)[SEQ ID NO:2]的合成肽或其前药，或前述肽的生理上可接受的盐或溶剂化物，或含有上述肽作为网格蛋白的特异性抑制剂的药物组合物。
在下表1中给出了抑制网格蛋白功能起关键作用的疾病清单。
表1.
Figure GDA0002366700640000031
Figure GDA0002366700640000041
Figure GDA0002366700640000051
Figure GDA0002366700640000061
Figure GDA0002366700640000071
Figure GDA0002366700640000081
Figure GDA0002366700640000091
Figure GDA0002366700640000101
本发明在于以下事实：通过实验发现，所要求保护的具有简单结构的肽(有助于通过化学方法制备的肽)是网格蛋白的特异性抑制剂。
如本文所用的术语“网格蛋白抑制剂”及其变体是指与网格蛋白相互作用并至少部分抑制网格蛋白介导的胞吞作用(CME)中网格蛋白活性功能的化合物，其可以通过降低CME和/或CME中的细胞水平来表达。因此，根据本发明的抑制网格蛋白可以完全或部分抑制网格蛋白的功能活性。
网格蛋白介导的胞吞作用(CME)不仅对于细胞中代谢物的转移很重要，而且对于细胞的传递信号也很重要，抑制网格蛋白的功能已应用于预防或治疗各种疾病和病症。抑制网格蛋白功能起关键作用的疾病清单较早公开于[Aridor，Hannan，2002；Aridor，Hannan，2000]，其内容通过引用整体并入本发明。
特别是网格蛋白特异性抑制剂发现可以在中枢神经系统的许多疾病中得到应用，包括：阿尔茨海默氏病[Harold等，2009]，帕金森氏病[Edvardson等人，2012]，癫痫病[Casillas-Espinosa，Powell，O'Brien，2012]。作用于抑制网格蛋白相关过程机理的新抗癫痫药的实例是左乙拉西坦(KeppraTM)[Nowack等人，2011]。
通过网格蛋白阻滞抑制网格蛋白介导的胞吞作用减少了突触传递，减少了可用于预防或治疗疼痛的突触小泡的可用性。例如，苯妥英钠和加巴喷丁等抗惊厥药在治疗神经性疼痛方面非常有效[Richards，Whittle，Buchbinder，2012]。这些药物通过改变突触小泡的传递过程起作用，即通过阻断CME网格蛋白的抑制作用可以终止或限制疼痛信号的传递，从而改善或减轻疼痛感。
同样特别令人感兴趣的证据是，网格蛋白重链中的一种突变导致人类罕见疾病-疼痛和触觉敏感性的丧失[Nahorski等人，2015]，以及炎症的强度。因此，疼痛反应取决于网格蛋白重链[Escobar等人，2006；Kim，Sorg，Arrieumerlou，2011]。
实际上，如本发明所述，预防或治疗可通过抑制CME而实现的任何生理性疾病均被本发明直接涵盖。
网格蛋白抑制剂在癌症中抑制过度细胞增殖的能力也非常重要。与有丝分裂蛋白相互作用的几种目前已知的抑制剂目前正在临床前或临床试验中作为治疗癌症的药物。这些抑制剂的抗有丝分裂作用可能部分归因于间接阻断网格蛋白的有丝分裂功能[Booth等人，2011]。因此，网格蛋白抑制剂不仅是解决网格蛋白在有丝分裂周期中作用的有用分子工具，而且至少在一些实施方式中，可以用作治疗癌症和细胞增殖性疾病的抗有丝分裂化合物。在这方面，应注意许多生长因子受体(例如EGF-R)也需要网格蛋白介导的胞吞作用(CME)以内化并维持细胞活性。在这些情况下，阻断CME可以防止细胞增殖，并且是网格蛋白抑制剂的抗癌和抗增殖活性的进一步证据[Smith等人，2013]。
同样，根据本发明的一种或多种实施方式的CME的抑制对于开发防止细胞渗透到包括大脑在内的多种病原性病毒以及通过胞吞作用渗透到细胞中的包括肽在内的各种毒素的手段也很重要。在这些病毒中，毒素包括(但不限于)：白喉，白细胞毒素(LKT)，衣原体，炭疽毒素，金黄色葡萄球菌，念珠菌，牙周炎，腺病毒，非洲猪瘟病毒，猪瘟病毒，登革热，扎伊尔埃博拉病毒(埃博拉出血热)，乙型肝炎病毒，与卡波西氏肉瘤疱疹病毒相关的丙型肝炎病毒，人类免疫缺陷病毒(HIV)，流感病毒等。例如，最具活性的化合物预防感染埃博拉病毒的作用机理与阻断病毒在细胞表面的粘附或抑制其向细胞胞吞的作用有关[Anantpadma等人，2016；Aleksandrowicz等人，2011；Piccini，Castilla，Damonte，2015年]。
因此，本发明可应用于预防或治疗的特定疾病和病症的实例包括但不限于细胞增生性疾病和病症，多灶性白质脑病，多囊肾病，与淀粉样β-有关的疾病(例如阿尔茨海默氏病)，神经退行性疾病，神经精神疾病，精神性疾病，精神病，双相情感障碍，精神分裂症，神经元异常不受控制的兴奋，癫痫发作，神经性疼痛，偏头痛，以及由涉及CME(例如癫痫)的突触信号传导过程或受损的细胞囊泡回收介导或与之相关的所有疾病和病症。同样，如上所述，根据本发明的一种或多种实施方式的CME的抑制也可用于预防病原体在许多细胞中的渗透，因此可用于预防或治疗与其相关的疾病或病症。
所要求保护的所有肽家族先前均已显示出镇痛作用(参见PCTWO/2013/141750)，并且是网格蛋白的特异性抑制剂。
通过下图进行详细说明：
图1-肽的色谱图(六个氨基酸的序列)；
图2-洗脱蛋白部分；
图3-不可抗的蛋白质化合物；
图4-用于确定凝胶电泳过程中近似质量的彩色蛋白质图谱(赛默飞世尔科技)(摘自赛默飞世尔科技公司的官方网站)/[电子资源]。-访问：URL：https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634，处理日期：17.03.2017)。
使用L氨基酸和D氨基酸通过固相法通过肽化学方法进行肽的合成。
实施例1.肽L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-Lln-Lln-Thr-NH2(肽编号7，SEQID NO：1)的合成
通过使用DCC/HOBt(N，N'-二环己基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑)方法在聚合物(Rink Amide树脂，每1克树脂中含0.6mmol氨基)上采用自动固相合成Fmoc-Rink方案制备肽L-Leu-D-His-L-Lys-L-Leu-L-Gln-L-Thr-NH2并进行氨基酸活化。通过用哌啶/DMF溶液(哌啶/N，N-二甲基甲酰胺)(1:4)处理7分钟进行脱保护。侧链的保护基产生以下基团：用于酪氨酸、苏氨酸的tBu(叔丁基醚)，用于谷氨酰胺和组氨酸的Trt(三苯甲基或三苯甲基)，Boc(叔丁氧羰基)赖氨酸。从树脂上裂解肽，并用TFA/H2O/EDT(三氟乙酸/水/1,2-乙二硫醇)(90:5:5)的混合物脱保护。通过反相HPLC(C18柱)，洗脱剂-乙腈-水(含有0.1M磷酸二氢钾)以6:4的比例进行肽的纯化。使用质谱仪表征肽。通过HPLC检查肽纯度，色谱柱WatersDeltaPakC18，3.9*150mm 5μm
Figure GDA0002366700640000131
溶液A：0.1％TFA的100％水/MeCN溶液；流速-1mL/min；检测波长-230nm(图1)。
实施例2.测试合成的肽作为网格蛋白特异性抑制剂的活性
基于亲和色谱法过程的实验基础，其中固定相充当与特殊基质连接的肽分子。流动相起大鼠脑提取物的作用。特异性结合肽分子的蛋白质馏分随后通过电泳进行分馏分离并直接检测单个蛋白质分子。
亲和吸附剂的制备如下：吸附剂的基质是溴化氰活化的琼脂糖4B(Sigma-Aldrich)，溶于1mM盐酸(HCl)中。为了研究网格蛋白结合肽的可能性，也就是说，用于引入载体的肽(琼脂糖)必须引入间隔区。任务“间隔区”-在空间上分开的载体(琼脂糖)和实际的肽分子，以创造测试肽和蛋白质脑提取物相互作用的条件。在仿射吸附期间，“间隔区”的这种使用非常普遍。天然的“间隔区”非常多样化[Day，Hashim，1984；Lowe，1977；Martinez-Ceron等人，2012]。我们使用了由两个氨基酸残基组成的“间隔区”(Asp-Asp)。在磷酸盐缓冲液(pH7.8-8.0)中引入二肽。
在双蒸水中溶解测试肽，并在严格的pH控制下将其加入亲和树脂中，每1ml吸附剂吸收5mg肽。“交联”在4℃的温度下进行12小时。在“交联”过程结束时，不用通过用pH 5.0的乙酸盐缓冲液和pH 9.0的碳酸氢盐缓冲液重复洗涤结合的产物来仔细洗涤。
对于大鼠的大脑皮质制备物，取动物-Wistar大鼠，雄性，称重约300g。将动物断头，冷隔离大脑皮质。将所得样品置于液氮中，研磨至细粉的状态。然后将样品转移到含0.3M蔗糖(Helicon)，1mM CaCl2(Sigma-Aldrich)和10mM MgCl2(Sigma-Aldrich)的pH 7.6的10mM TRIS缓冲液中。接下来，将所得的匀浆物在冷条件下以15，000转/分钟的速度离心20分钟。
在振荡器上于4℃进行亲和吸附24小时，离心制备物皮质后获得上清液。此外，将吸附剂转移到柱(Bio-Rad)上，并用非特异性结合的蛋白质洗涤。用不含蔗糖的pH 7.6的Tris缓冲液进行洗涤。通过GC BioRad NGC Discovery监测蛋白质的洗脱。洗脱观察到λ＝280nm。然后用含有NaCl的pH 7.6的TRIS缓冲液洗涤蛋白质。根据给定的梯度从0.05M到0.5M的盐量，在280nm处进行检测，流速为0.1ml/min。图2显示了32至34分钟存在两个峰，这表明存在特异性结合肽分子的蛋白质馏分。
特异性结合肽分子的蛋白质馏分随后通过电泳进行分馏并直接检测单个蛋白质分子。
在PAAG凝胶中进行电泳。浓缩馏分的使用量为1、5和10微升。光谱应用标记物(SpectraTM多色广谱蛋白质梯)。图3清楚地显示了两种主要蛋白质化合物以三种浓度应用于研究的右标记物左馏分。为了识别已切割的三个条带，分别标记260、50和10kDa的质量。为了确定测试图案的质量，使用生产商指南(图4)。
通过质谱法鉴定电泳产生的斑点。在用胰蛋白酶进行酶处理后，对从切下的具有蛋白质的凝胶碎片中分离的胰蛋白酶肽进行了色谱质谱分析。然后，对该肽溶液进行色谱质谱分析并通过数据库鉴定肽序列。在确定结果之后，使用自动验证程序对结果进行验证。胰蛋白酶的肽序列是质量控制。为了验证斑点的识别，在哺乳动物数据库进行了搜索。对应于从140kDa到260kDa的过道重量的最高点被确定为13个肽序列的网格蛋白重链。如先前所建立和证明的测试肽的镇痛作用和通过阻断网格蛋白的CME抑制作用可能会终止或限制疼痛信号的传递，因此得出结论，所研究的肽是网格蛋白重链的特异性抑制剂。
应当指出，网格蛋白重链肽的洗脱(分离)以高梯度值发生，表明对肽网格蛋白重链具有实质亲和力。
因此，本发明也可以用作网格蛋白重链的分配方法。这种分配方法比常规方法要简单得多[Riddelle-Spencer，O'Halloran，1997]。因此，所提出的方法可用于分子生物学和纳米技术研究中网格蛋白重链的制备分离[Santosdos等人，2011]。
因此，本发明的技术结果是：简单且低成本合成的所提出的肽是网格蛋白的特异性抑制剂，它们缺乏不需要的免疫活性和其他副作用，因此可以将它们视为创建安全药物的基础，这些药物是网格蛋白的特异性抑制剂，并且衍生自简单的合成方法。
参考文献
1.McMahon NT,Boucrot E.网格蛋白介导的胞吞作用的分子机制和生理功能(Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediatedendocytosis)//Nat Rev Mol Cell Biol.2011.V.12.№8.pp.517-533.
2.Hood FE,Royle SJ网格蛋白重链CHC17和CHC22在胞吞和有丝分裂中的功能对等(Functional equivalence of the clathrin heavy chains CHC17 and CHC22 inendocytosis and mitosis)//J.Cell Sci.2009.V.122.№13.pp.2185-2190.
3.McMahon HT,Boucrot E.网格蛋白介导的胞吞作用的分子机制和生理功能(Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediatedendocytosis)//Nat Rev Mol Cell Biol.2011.V.12.№8.pp.517-533.
4.Haar E.ter,Harrison SC,Kirchhausen T.肽-沟相互作用将靶蛋白连接到网格蛋白的β螺旋上(T.Peptide-in-groove interactions link target proteins to thebeta-propeller of clathrin.)//Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2000.V.97.№3.pp.1096-1100.
5.Most P.等人，胞外蛋白S100A1通过激活细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)抑制心室心肌细胞凋亡(Extracellular S100A1 Protein Inhibits Apoptosis inVentricular Cardiomyocytes via Activation of the Extracellular Signal-regulated Protein Kinase 1/2(ERK1/2))//J.Biol.Chem.2003.V.278.№48.pp.48404-48412.
6.Pellett S.等人，肉毒杆菌神经毒素可独立于突触小泡循环进入培养的神经元(Botulinum neurotoxins can enter cultured neurons independent of synapticvesicle recycling)//PLoS One.2015.V.10.№7.pp.1-17.
7.No.WO2013010218A9.网格蛋白的抑制(Inhibition of clathrin)/Volker H.,Robinson P.,Mccluskey A.Publ.24.01.2013.
8.Robertson MJ等人Pitstop系列网格蛋白抑制剂的合成(Synthesis of thePitstop family of clathrin inhibitors.)//Nat.Protoc.2014.V9.pp.1592.
9.Willox AK,Sahraoui YME,Royle SJ Pitstop 2在网格蛋白介导的胞吞作用中的非特异性作用(Non-specificity of Pitstop 2in clathrin-mediatedendocytosis.)//Biol.Open.2014.V.3.№5.pp.326-31.
10.专利JP201 1093852A.网格蛋白键合肽衍生物(Clathrin-bonding peptidederivative)/Kitahara H.等人，Publ.12.05.2011.
11.PCT WO/2013/141750"具有非麻醉型镇痛作用的合成肽"("Syntheticpeptides with a non-narcotic type of analgesic effect"),2013
12.RF Patent 2508295具有非麻醉型镇痛作用的合成肽(synthetic peptideswith non-narcotic type analgesic action)/Vlasov GP,Kotin AM/Bull.-2013-№27.
13.Aridor M.,Hannan L.a.Traffic jams II:细胞内运输疾病的更新(Trafficjams II:an update of diseases of intracellular transport.)//Traffic.2002.V.3.№11.pp.781-790.
14.Aridor M.,Hannan LA Traffic Jam:影响细胞内运输过程的人类疾病纲要(ACompendium of Human Diseases that Affect Intracellular Transport Processes)//Traffic.2000.V.1.№11.pp.836-851.
15.Harold D.等人，全基因组关联研究确定了与阿尔茨海默氏病相关的CLU和PICALM的变异，并显示了其他易感基因的证据(Genome-Wide Association StudyIdentifies Variants at CLU and PICALM Associated with Alzheimer's Disease,andShows Evidence for Additional Susceptibility Genes)//Nat.Genet.2009.V.41.№10.pp.1088-1093.
16.Edvardson S.等人，编码特定于神经元的网格蛋白-脱膜辅伴蛋白生长素的DNAJC6中的有害突变与青少年帕金森病有关(A deleterious mutation in DNAJC6encoding the neuronal-specific clathrin-uncoating Co-chaperone auxilin,isassociated with juvenile parkinsonism)//PLoS One.2012.V.7.№5.pp.4-8.
17.Casillas-Espinosa PM,Powell KL,O'Brien TJ突触传递的调节剂：在癫痫的发病机理和治疗中的作用(Regulators of synaptic transmission:roles in thepathogenesis and treatment of epilepsy)//Epilepsia.2012.V.53Suppl 9.pp.41-58.
18.Nowack A.等人，左乙拉西坦逆转由sV2A过表达产生的突触缺陷(Levetiracetam reverses synaptic deficits produced by overexpression ofsV2A)//PLoS One.2011.V.6.№12.pp.1-8.
19.Richards BL,Whittle SL,Buchbinder R.类风湿关节炎疼痛的神经调节剂(Neuromodulators for pain management in rheumatoid arthritis.)//Cochranedatabase Syst.Rev.V.1.№1.pp.CD008921.
20.Nahorski MS等人，新型疾病揭示网格蛋白重链22对人类疼痛和触觉发育至关重要(A novel disorder reveals clathrin heavy chain-22is essential for humanpain and touch development)//Brain.2015.138.V.138.№8.pp.2147-2160.
21.Escobar GA等人，网格素重链是TNF诱导的炎症信号传导所必需的(Clathrinheavy chain is required for TNF-induced inflammatory signaling)//Surgery.2006.V.140.№2.pp.268-272.)(Kim ML,Sorg I.,Arrieumerlou C.基础NF-κB活化控制中网格蛋白重链的功能不依赖于胞吞作用(Endocytosis-independent functionof clathrin heavy chain in the control of basal NF-κΒactivation)//PLoSOne.2011.V.6.№2.
22.Booth DG等人，A TACC3/ch-TOG/网格蛋白复合物通过微管间桥连来稳定线粒体纤维(A TACC3/ch-TOG/clathrin complex stabilises kinetochore fibres byinter-microtubule bridging.)//EMBO J.2011.V.30.№5.pp.906-19.
23.Smith SM.等人，pitstop 2对网格蛋白的抑制作用激活纺锤体装配检查点并诱导HeLa癌细胞分裂中的细胞死亡(Inhibition of clathrin by pitstop 2 activatesthe spindle assembly checkpoint and induces cell death in dividing HeLacancer cells.)//Mol.Cancer.2013.V.12.pp.4.
24.Anantpadma M.等人，新型埃博拉病毒和马尔堡病毒进入抑制剂的大规模筛选和鉴定(Large-Scale Screening and Identification of Novel Ebola Virus andMarburg Virus Entry Inhibitors)//2016.V.60.№8.pp.4471-4481.
25.Aleksandrowicz P.等人，埃博拉病毒通过巨胞吞作用和网格蛋白介导的胞吞作用进入宿主细胞(Ebola virus enters host cells by macropinocytosis andclathrin-mediated endocytosis)//J.Infect.Dis.2011.V.204.№SUPPL.3.pp.957-967.
26.Piccini LE,Castilla V.,Damonte EB登革热3病毒进入Vero细胞：网格蛋白介导对感染的结果的胞吞作用(Damonte EB Dengue-3 virus entry into vero cells:Role of clathrin-mediated endocytosis in the outcome of infection)//PLoSOne.2015.V.10.№10.pp.1-17.
27.Day ED,Hashim GA从S82-AH-和S82-CH-Sepharose 4B色谱柱亲和纯化两个针对合成髓鞘碱性蛋白肽S82的格式决定子的抗体(Affinity purification of twopopulations of antibodies against format determinants of synthetic myelinbasic protein peptide S82 from S82-AH-and S82-CH-Sepharose 4B columns.)//Neurochem.Res.1984.V.9.№10.pp.1453-65.
28.Lowe CR固定化的脂酰胺脱氢酶.2.通过各种长度的间隔分子固定在琼脂糖上的酶的性质(Immobilised lipoamide dehydrogenase.2.Properties of the enzymeimmobilised to agarose through spacer molecules of various lengths)//Eur.J.Biochem.1977.V.76.№2.pp.401-9.
29.Martinez-Ceron MC等人，使用互补肽作为亲和标签的重组蛋白纯化(Recombinant protein purification using complementary peptides as affinitytags)//N.Biotechnol.2012.V.29.№2.pp.206-210.
30.公司的官方网站《赛默飞世尔科技》/[电子资源]。-Access:URL:https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/26634(参考日期:03.17.2017).
31.Riddelle-Spencer KS,O'Halloran TJ从盘基网柄菌中纯化网格蛋白的重链和轻链(Purification of clathrin heavy and light chain from Dictyosteliumdiscoideum)//Protein Expr.Purif.1997.V.11.№3.pp.250-6.
32.Santos T.dos等人，转运抑制剂对不同细胞系中羧化聚苯乙烯纳米颗粒细胞摄取的影响(Effects of transport inhibitors on the cellular uptake ofcarboxylated polystyrene nanoparticles in different cell lines)//PLoSOne.2011.V.6.№9.pp.e24438.
Figure IPA0000276771130000011
Figure IPA0000276771130000021
Figure IPA0000276771130000031
Figure IPA0000276771130000041
Figure IPA0000276771130000051
Figure IPA0000276771130000061

Claims (2)

1.通式(I)[SEQ ID NO：1]的合成肽的应用
XDL-XDL1-XDL2-L-Lys-L-Leu-XDL3-L-Thr-R2 (I)，其中：
XDL-不存在氨基酸或为L-Tyr，
XDL1-以下氨基酸之一：L-Leu，L-Ala或D-Ala，
XDL2-以下氨基酸之一：L-His，D-His，L-Ala或D-Ala，
XDL3-以下氨基酸之一：L-Gln，L-Ala或D-Ala；
R2-OMe或NH2，
或肽-通式(I)的逆转，具有反向的氨基酸序列，其中L-型氨基酸被替换为D-型氨基酸，D-型氨基酸被替换为L-型氨基酸，即通式(II)[SEQ ID NO：2]
D-Thr-XDL4-D-Leu-D-Lys-XDL5-XDL6-XDL7-R2 (II)其中：
XDL4-以下氨基酸之一：D-Gln，D-Ala或L-Ala；
XDL5-以下氨基酸之一：D-His，L-His，D-Ala或L-Ala，
XDL6-以下氨基酸之一：D-Leu，D-Ala或L-Ala，
XDL7-不存在氨基酸或为D-Tyr，
R2-OMe或NH2，
作为网格蛋白的特异性抑制剂。
2.预防或治疗动物疾病或病症的方法，包括给予有效量的通式(I)[SEQ ID NO：1]或通式(II)[SEQ ID NO：2]的或合成肽或其前药，或上述肽的生理上可接受的盐或溶剂化物，或含有上述肽作为网格蛋白的特异性抑制剂的药物组合物。
CN201880023947.0A 2017-04-07 2018-03-01 特异性肽网格蛋白抑制剂 Pending CN110869043A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017111896A RU2651491C1 (ru) 2017-04-07 2017-04-07 Специфические пептидные ингибиторы клатрина
RU2017111896 2017-04-07
PCT/RU2018/000121 WO2018186770A1 (ru) 2017-04-07 2018-03-01 Специфические пептидные ингибиторы клатрина

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110869043A true CN110869043A (zh) 2020-03-06

Family

ID=61976775

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880023947.0A Pending CN110869043A (zh) 2017-04-07 2018-03-01 特异性肽网格蛋白抑制剂

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20220088113A1 (zh)
EP (1) EP3741382A4 (zh)
JP (1) JP2020512996A (zh)
CN (1) CN110869043A (zh)
CA (1) CA3058388A1 (zh)
RU (1) RU2651491C1 (zh)
WO (1) WO2018186770A1 (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1306976A (zh) * 2000-01-26 2001-08-08 上海博道基因技术有限公司 一种新的多肽——网格蛋白76和编码这种多肽的多核苷酸
US9260482B2 (en) * 2012-03-22 2016-02-16 Oleg Arkadyevich KOTIN Synthetic peptides with a non-narcotic type of analgesic effect

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009250552A (ja) 2008-04-08 2009-10-29 Kyoritsu Air Tech Inc 換気グリル
JP5493714B2 (ja) 2009-10-30 2014-05-14 国立大学法人信州大学 クラスリン結合性ペプチド誘導体
WO2011088431A1 (en) * 2010-01-18 2011-07-21 Vela Eric M Prophylactic and treatment for virus-induced disease
WO2013010218A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-24 Freie Universität Berlin Inhibition of clathrin

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1306976A (zh) * 2000-01-26 2001-08-08 上海博道基因技术有限公司 一种新的多肽——网格蛋白76和编码这种多肽的多核苷酸
US9260482B2 (en) * 2012-03-22 2016-02-16 Oleg Arkadyevich KOTIN Synthetic peptides with a non-narcotic type of analgesic effect

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
I. V. ROGACHEVSKII等: "Synthesis and Steric Structure of H-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-NH2 and H-Ala-D-Ala-Lys-Leu-Ala-Thr-NH2 Peptides", 《RUSSIAN JOURNAL OF GENERAL CHEMISTRY》 *
I. V. ROGACHEVSKII等: "Synthesis and Steric Structure of H-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-NH2 and H-Ala-D-Ala-Lys-Leu-Ala-Thr-NH2 Peptides", 《RUSSIAN JOURNAL OF GENERAL CHEMISTRY》, vol. 75, no. 5, 31 December 2005 (2005-12-31), pages 815 - 824 *
PIERANGELO GEPPETTI等: "G Protein-Coupled Receptors: Dynamic Machines for Signaling Pain and Itch", NEURON, vol. 88, no. 4, pages 1 *

Also Published As

Publication number Publication date
CA3058388A1 (en) 2018-10-11
WO2018186770A8 (ru) 2019-10-24
EP3741382A4 (en) 2021-04-28
JP2020512996A (ja) 2020-04-30
US20220088113A1 (en) 2022-03-24
EP3741382A1 (en) 2020-11-25
RU2651491C1 (ru) 2018-04-19
WO2018186770A1 (ru) 2018-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11679164B2 (en) Preparation of therapeutic exosomes using membrane proteins
Burai et al. Elucidating the role of site-specific nitration of α-synuclein in the pathogenesis of Parkinson’s disease via protein semisynthesis and mutagenesis
Walsh et al. A facile method for expression and purification of the Alzheimer’s disease‐associated amyloid β‐peptide
Adem et al. Toxins from the venom of the green mamba Dendroaspis angusticeps that inhibit the binding of quinuclidinyl benzilate to muscarinic acetylcholine receptors
Sternburg et al. Post-translational modifications on RNA-binding proteins: accelerators, brakes, or passengers in neurodegeneration?
Kumar et al. Structure-based peptide design to modulate amyloid beta aggregation and reduce cytotoxicity
BRPI0610252A2 (pt) carreador dirigido a células nervosas
Melki et al. Interaction of microtubule-associated proteins with microtubules: yeast lysyl-and valyl-tRNA synthetases and. tau. 218-235 synthetic peptide as model systems
TW201144325A (en) Selective enrichment of antibodies
Capito et al. Feasibility study of semi‐selective protein precipitation with salt‐tolerant copolymers for industrial purification of therapeutic antibodies
Li et al. Selective capture and recovery of monoclonal antibodies by self-assembling supramolecular polymers of high affinity for protein binding
Zhang et al. A parallel demonstration of different resins' antibody aggregate removing capability by a case study
Gomes et al. Studies on the adsorption of cell impurities from plasmid-containing lysates to phenyl boronic acid chromatographic beads
Vieira et al. Biochemical, functional, structural and phylogenetic studies on Intercro, a new isoform phospholipase A2 from Crotalus durissus terrificus snake venom
Tuameh et al. Methods for addressing host cell protein impurities in biopharmaceutical product development
Pereira et al. Pharmaceutical-grade pre-miR-29 purification using an agmatine monolithic support
Winkelmann et al. Evidence from complementation assays in vitro that U5 snRNP is required for both steps of mRNA splicing.
CN110869043A (zh) 特异性肽网格蛋白抑制剂
Sousa et al. Histidine affinity chromatography of homo‐oligonucleotides. Role of multiple interactions on retention
Wang et al. Sites of Nucleic Acid Binding in Type I− IV Intermediate Filament Subunit Proteins
US20060233807A1 (en) Novel therapies and methods of screening for therapeutic compounds
Gallego-Villarejo et al. Big dynorphin is a neuroprotector scaffold against amyloid β-peptide aggregation and cell toxicity
Werkmeister et al. Sequence requirements for the activity of membrane‐active peptides
Sieberz et al. Identification of parameter interactions influencing the precipitation of a monoclonal antibody with anionic polyelectrolytes
AU2014310255B2 (en) Purification process for PTH

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination