WO2018169286A1 - Ｐ2ｘ1 및 ｐ2ｘ3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물 - Google Patents

Ｐ2ｘ1 및 ｐ2ｘ3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물 Download PDF

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정영환
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    • C07D491/048—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being five-membered

Definitions

  • the present invention is made by the task number 2014R1A2A1A11052300 under the support of the Ministry of Science, ICT and Future Planning, the research management specialized institution of the project is the Korea Research Foundation, the research project name "core personal research (performance spread)", the research project title "neuropathic pain A Study on Multi-Target Controller Transmission and Drug Design of Signal Transduction ", Organizer is Korea Advanced Institute of Science and Technology, Period of Research is 2014.11.01-2016.10.31. to be.
  • the present invention relates to novel 5-hydroxy pyridine-based compounds used as P2x1 and P2x3 receptor antagonists and pharmaceutical compositions comprising the same.
  • P2X receptors are ligand-gated cation channels that are activated in response to the binding of extracellular adenosine 5'-triphosphate (ATP). Opens (transmembrane pore) membrane through hole of the P2X receptors, it is well known that a cation, such as Ca 2 +, Na + and K + is introduced into the cytoplasm and cell membrane depolarization induced excitement.
  • a cation such as Ca 2 +, Na + and K + is introduced into the cytoplasm and cell membrane depolarization induced excitement.
  • seven P2X receptor subtypes are widely expressed in vascular smooth muscle, platelets, peripheral and central nervous system and immune cells, synaptic transmission, presynaptic regulation, smooth muscle contraction, cell proliferation and cell death, visceral motility, platelet aggregation, taste, and pain Mediate various physiological processes, including inflammation, and inflammation.
  • the P2X3 receptor (P2X3R) is present as homomeric P2X3 and heteromeric P2X2 / 3 receptors in small and medium diameter C- and A ⁇ -fiber primary afferent neurons, which are pain-sensing systems Provides a high degree of specificity.
  • AstraZeneca provides a structure-activity relationship (SAR, structure-) to pyrrolo-pyrimidinone derivatives (compound 4 in FIG. 1D) to improve the efficacy and physicochemical properties of P2X3 receptor antagonists. activity relationship).
  • Afferent Pharmaceutical's clinical drug candidate, AF-219, a potent and orally biocompatible selective P2X3-P2X2 / 3 receptor antagonist has several concepts in Phase II clinical trials involving interstitial cystitis / bladder pain syndrome and chronic cough. Substantial studies have shown significant pharmacological effects.
  • 5-hydroxy pyridine derivatives Compound 7a-c in FIG.
  • the present inventors introduced various substituents for carbon at various positions in order to optimize the drug properties of the 5-hydroxypyridine derivative (compounds 7a-c of FIG. 1g), and thus, have higher biological stability and excellent antagonism.
  • One hP2X3 receptor antagonist has been developed.
  • the present inventors have made intensive studies to develop novel antagonists for P2X1 and P2X3 receptors that play an important role in pain and inflammatory signaling.
  • the present inventors synthesized a novel compound having various substituents on the carbon at various positions of the 5-hydroxypyridine derivative (compound 7a-c of FIG. 1g) and tested its pharmacokinetics and efficacy, and showed higher biological stability.
  • the present invention was completed by identifying that the antagonist is an excellent hP2X3 receptor antagonist.
  • Another object of the present invention is related to chronic inflammatory disease, neuropathic pain or platelet aggregation, comprising administering to a subject a pharmaceutical composition comprising a novel 5-hydroxy pyridine-based compound used as the P2X1 and P2X3 receptor antagonist. It is to provide a method for treating a disease.
  • the present invention provides a compound represented by the following general formula (1), an isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • A is any one of substituents represented by the following formula (1) or (2),
  • n and m are each independently an integer from 0 to 5;
  • R 1 is a hydrogen atom, straight or branched C 1 -C 6 alkyl substituted or unsubstituted or substituted with carboxyl, sulfonyl, thioether (eg -CH 2 CH 2 SCH 3 ), benzyl, phenethyl;
  • R 2 is hydrogen, unsubstituted or carboxyl, sulfonyl, cyano, amide, tetrazolyl or Linear or branched C 1 -C 6 alkyl substituted with R 3 and together with R 3 form a hetero 5-6 membered ring containing at least one atom selected from the group consisting of N, O, S;
  • R 3 is a hydrogen atom, unsubstituted or substituted with carboxyl straight or branched C 1 -C 6 alkyl, or together with R 2 form the hetero 5-6 membered ring;
  • R 4 is a hydrogen atom or straight or branched C 1 -C 6 alkyl
  • R 5 is straight or branched, unsubstituted or substituted with phenyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, tetrahydrofuranyl, or 1,3-dioxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl Chained C 1 -C 8 alkyl, C 5 -C 6 cycloalkyl, or to be.
  • R 5 is , , , , , , , , or Can be.
  • n is an integer from 0 to 5;
  • R 1 is hydrogen, unsubstituted or straight or branched C 1 -C 4 alkyl substituted with carboxyl, sulfonyl, thioether (eg -CH 2 CH 2 SCH 3 ), benzyl, phenethyl;
  • R 2 is hydrogen, unsubstituted or carboxyl, sulfonyl, cyano, amide, tetrazolyl or Linear or branched C 1 -C 3 alkyl substituted with R 3 or together with R 3 to form a hetero 5-6 membered ring containing at least one atom selected from the group consisting of N, O, S;
  • R 3 is a hydrogen atom, unsubstituted or substituted with carboxyl straight or branched C 1 -C 3 alkyl, or together with R 2 form the hetero 5-6 membered ring;
  • R 4 includes a group of compounds characterized in that they are
  • R 1 is a hydrogen atom or straight or branched C 1 -C 3 alkyl
  • R 2 is hydrogen, unsubstituted or carboxyl, —CH 2 NH 2 , —CH 2 NH—S ( ⁇ O) 2 —CH 3 , cyano, or Straight or branched C 1 -C 3 alkyl substituted with
  • R 3 is a hydrogen atom, unsubstituted or substituted with carboxyl straight or branched C 1 -C 3 alkyl
  • R 5 is , , , , , , , , , , or It includes a compound group characterized in that.
  • the present invention provides a 5-hydroxy pyridine compound, an isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by the following general formula Ia:
  • R 3 is a hydrogen atom, C 1 -C 3 alkyl, or carboxyl, or together with R 2 forms the hetero 5-6 membered ring;
  • R 4 is a hydrogen atom or C 1
  • the present invention provides a 5-hydroxy pyridine compound, an isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by the following general formula Ib:
  • R 1 is a hydrogen atom or straight or branched C 1 -C 3 alkyl
  • R 3 is hydrogen, straight or branched C 1 -C 3 alkyl, or carboxyl (—COOH);
  • R 5 is , , , , , , , , , , , or to be.
  • the present invention provides a 5-hydroxy pyridine-based compound, an isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which is represented by the following general formula Ib ':
  • R 1 is a hydrogen atom or straight or branched C 1 -C 3 alkyl
  • R 3 is a hydrogen atom or straight or branched C 1 -C 3 alkyl
  • R 5 is , , , , , , , , or to be.
  • the compounds of the present invention represented by the general formula (I) may be prepared with pharmaceutically acceptable salts and solvates according to methods conventional in the art.
  • salts are acid addition salts formed with pharmaceutically acceptable free acids.
  • Acid addition salts are prepared by conventional methods, for example by dissolving a compound in an excess of aqueous acid solution and precipitating the salt using a water miscible organic solvent, such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. Equivalent molar amounts of the compound and acid or alcohol (eg, glycol monomethylether) in water can be heated and the mixture can then be evaporated to dryness or the precipitated salts can be suction filtered.
  • a water miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile.
  • Equivalent molar amounts of the compound and acid or alcohol (eg, glycol monomethylether) in water can be heated and the mixture can then be evaporated to dryness or the precipitated salts can be suction filtered.
  • organic acids and inorganic acids may be used as the free acid, hydrochloric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, nitric acid, tartaric acid, etc. may be used as the inorganic acid, and methanesulfonic acid, p -toluenesulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, Citric acid, maleic acid, succinic acid, oxalic acid, benzoic acid, tartaric acid, fumaric acid, manderic acid, propionic acid, citric acid, lactic acid, glycolic acid, gluconic acid ( gluconic acid), galacturonic acid, glutamic acid, glutaric acid, glucuronic acid, glucuronic acid, aspartic acid, ascorbic acid, carbonic acid, vanic acid, hydroiodic acid, and the like.
  • Bases can also be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • An alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained by, for example, dissolving a compound in an excess alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and then evaporating and drying the filtrate.
  • the metal salt it is particularly suitable to prepare sodium, potassium or calcium salts, and the corresponding silver salt is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable silver salt (for example, silver nitrate).
  • pharmaceutically acceptable salts include sodium, calcium and potassium salts of the hydroxy group
  • other pharmaceutically acceptable salts of the amino group include hydrobromide, sulfate, hydrogen sulphate, phosphate, hydrogen phosphate, dihydrogen Phosphate, acetate, succinate, citrate, tartrate, lactate, mandelate, methanesulfonate (mesylate) and p -toluenesulfonate (tosylate) salts, and methods or processes for preparing salts known in the art It can be prepared through.
  • the 5-hydroxypyridine-based compound having the structure of Formula (I) since the 5-hydroxypyridine-based compound having the structure of Formula (I) has an asymmetric center, it may exist in different enantiomeric forms, and 5-hydroxypyridine-based compound having the structure of Formula (I) All optical isomers of the compounds and R or S type stereoisomers and mixtures thereof are also included within the scope of the present invention.
  • the present invention encompasses the use of racemates, one or more enantiomeric forms, one or more diastereomeric forms, or mixtures thereof, and includes methods or processes for the separation of isomers known in the art.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preparing the compound of formula (I), which may be chemically synthesized by the method shown in the following schemes, but is not limited thereto.
  • reaction schemes represent the preparation steps of the representative compounds of the present invention.
  • the various compounds of the present invention may be prepared by small changes such as changing the reagents, solvents, and reaction sequences used in the synthesis of Schemes 1 to 8. have.
  • Compounds represented by the general formula I of the present invention exhibit potent antagonism of the P2X1 and P2X3 receptors, and thus diseases caused by P2X1 and P2X3 receptor activity, such as degenerative arthritis, rheumatoid arthritis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease, Chronic inflammatory diseases such as cystitis; Neuropathic pain, allodynia, diabetic neuropathy, spontaneous pain, irritable pain, ring pain, complex site pain syndrome, neurological pain or arteriosclerosis, stroke, thrombosis, embolism, myocardial infarction, atherosclerosis, peripheral blood circulation disorder It can be usefully used as an agent which can prevent or treat platelet aggregation related diseases, such as these.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating a chronic inflammatory disease, neurological pain disease or platelet aggregation related disease due to P2X1 and P2X3 receptor activity, containing the compound of Formula I as an active ingredient. .
  • Chronic inflammatory diseases due to P2X1 and P2X3 receptor activity as defined herein include, for example, degenerative arthritis, rheumatoid arthritis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease, cystitis, and neurological pain diseases due to P2X1 and P2X3 receptor activity
  • neuropathic pain, allodynia, diabetic neuropathy, spontaneous pain, irritable pain, ring pain, complex site pain syndrome, and the like and platelet aggregation related diseases due to P2X1 and P2X3 receptor activity are for example.
  • the present invention provides an antagonist for P2X1 and P2X3 receptors comprising a pyridine carboxylic acid compound having a structure of Formula I as an active ingredient.
  • the inventors have novel 5-hydroxy-pyridine-based compounds are P2X1 and expressed as a strong antagonist activity of the clones indicated the mouse P2X1 and human P2X3 receptor with respect to the P2X3 receptors frog oocytes (Xenopus oocytes) were identified using a two-electrode voltage clamp assay (TEVC), and by analyzing the accumulation of ethidium bromide on human HEK293 cells expressed by the human P2X7 receptor, the compounds of the present invention result in P2X1 and P2X3 receptor activity.
  • the present invention has been confirmed to be highly developed as a therapeutic and prophylactic agent for treating chronic inflammation, neurological pain, or platelet aggregation-related diseases.
  • the present invention provides a method of treating a disease using a pyridine carboxylic acid compound and a pharmaceutical composition for preventing and treating a disease caused by P2X1 and P2X3 receptor activity, comprising a pyridine carboxylic acid compound. It is about.
  • prevention refers to any action that inhibits or delays the onset of all diseases associated with P2X1 and P2X3 receptor receptor activity by administration of a composition comprising a 5-hydroxypyridine-based compound, and "treatment” By any of the above pharmaceutical compositions is meant any action that ameliorates or beneficially alters all diseases associated with P2X1, P2X3 and P2X7 receptor receptor activity.
  • compositions and methods of treatment comprising the 5-hydroxypyridine-based compounds of the present invention are suitable for use in cattle, horses, sheep, pigs, goats, camels, antelopes, which can develop not only humans but also all diseases associated with P2X1 and P2X3 receptor receptor activity. It can also be used in mammals such as dogs and cats.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment and prevention of all diseases associated with P2X1 and P2X3 receptor activity, including 5-hydroxypyridine-based compound having the structure of general formula (I) as an active ingredient.
  • compositions comprising a compound of the present invention may further comprise a suitable carrier, excipient or diluent according to conventional methods.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the compositions of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • compositions comprising the compounds of the present invention are each formulated in the form of oral dosage forms, external preparations, suppositories, or sterile injectable solutions, such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., in accordance with conventional methods. Can be used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, or the like. ), Lactose, gelatin and the like can be mixed.
  • lubricants such as magnesium stearate, talc can also be used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and include various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations and suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • As the base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • Preferred dosages of the compounds of the present invention depend on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, but may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the compound of the present invention may be administered in an amount of 0.0001 to 100 mg / kg, preferably in an amount of 0.001 to 100 mg / kg once to several times daily.
  • the compound of the present invention in the composition should be present in an amount of 0.0001 to 10% by weight, preferably 0.001 to 1% by weight relative to the total weight of the total composition.
  • the pharmaceutical dosage forms of the compounds of the present invention may be used in the form of their pharmaceutically acceptable salts, and may be used alone or in combination with other pharmaceutically active compounds as well as in a suitable collection.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as mice, mice, livestock, humans, etc. by various routes. All modes of administration can be expected, for example by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.
  • the present invention provides a novel 5-hydroxy pyridine-based compound useful as a P2X1 and P2X3 receptor antagonist and a pharmaceutical composition comprising the same. Since the compound according to the present invention strongly antagonizes the P2X1 and P2X3 receptors, P2X1 and P2X3 It can be usefully used as a medicament for the treatment and prevention of chronic inflammatory diseases or neuropathic pain diseases due to receptor activity.
  • Figures 1a to 1f is a view showing the antagonist for the previously developed P2X receptor and the P2X receptor antagonist reported by the present inventors.
  • Figures 2a to 2c is a diagram showing the antagonistic activity of the compounds of the present invention 29 P2X3 and P2X2 / 3 (2a: hP2X3R, 2b: rP2X3 / 3).
  • 3A and 3B show antiallodynic effects of SNL rats by intradural administration of pregabalin, AF353, and compound 29.
  • the percentage of withdrawal threshold or maximum possible effect represents the mean ⁇ SEM of 5-6 rats for each experimental group. Vs. vehicle (control), * P ⁇ 0.05.
  • 4A and 4B show the antiallodynic effect of SNL rats by intravenous administration of compound 28. Regression threshold or percentage of maximal effect represents the mean ⁇ SEM of 5-6 rats for each experimental group. ** P ⁇ 0.01, *** P ⁇ 0.001 compared to vehicle (control).
  • Figures 5a and 5b is a diagram showing the antiallodynic effect of CIPN rats by intravenous administration of compound 28. Regression threshold or percentage of maximal effect represents the mean ⁇ SEM of 5-6 rats for each experimental group. Vs. vehicle (control), * P ⁇ 0.001.
  • BBB blood brain barrier
  • CIPN chemotherapy-induced peripheral neuropathy
  • FBS fetal bovine serum
  • NeP neuropathic pain
  • PBS phosphate buffered saline
  • PEG polyethylene glycol
  • P2XR P2X receptor
  • Mass spectroscopy was performed on MALDI-TOF and ESI (Electrospray ionization) instruments.
  • high resolution mass spectrometry (m / z) of the selected compounds was analyzed by ESR (Electrospray ionization) at the Korea Foundation.
  • Triethylamine (1.0 equiv) was added dropwise to anhydrous dichloromethane mixture of 3- (4-methoxyphenyl) propanoic acid 8 (1.0 equiv), various primary amine compounds 9a-k (1.0 equiv) and EDC (2.0 equiv) It was.
  • the reaction mixture was stirred at rt for 2 h and then diluted with saturated aqueous sodium bicarbonate aqueous solution. The organic layer was separated and the aqueous layer was further extracted with dichloromethane.
  • the compound (10a-o) 8 (2.5 g, 14 mmol) the compound according to the general procedure for the synthesis of, and DL- methionine ethyl ester (DL -methionine ethyl ester) was prepared from (3.0 g, 14 mmol).
  • Compound 22a was synthesized from 21b (65 mg, 0.21 mmol) and 20% aqueous KOH solution (3.0 mL).
  • the compound was synthesized from 21c (0.12 g, 0.35 mmol) and 20% aqueous KOH solution (3.0 mL) according to the synthesis of Compound 22a.
  • Compound 43 was synthesized from compound 42 (21 mg, 0.040 mmol) and 10% Pd / C (5.0 mg) following the synthesis procedure of compound 32.
  • Compound 45f was obtained by reacting compound 44 (30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 equiv) with 19.2 ⁇ l (0.192 mmol) of 2-iodopropane according to the general procedure for the synthesis of compounds (45a-j) described above.
  • 46 g of compound were obtained from 45 g (9.7 mg, 0.018 mmol) according to the general procedure for the synthesis of compound (46a-j) described above.
  • African frog eggs (Xenopus oocytes) were isolated and incubated with 270 U / mg collagenase at 23-24 ° C. for 1.5 hours. The defoliculated eggs were kept at 18 ° C. in the Barth solution. After 1 day, each of the follicles from which the follicles were removed was injected with cytoplasm of mP2X1 and hP2X3 receptor cRNA (40 nL, 1 ⁇ g / mL) and incubated in Barth solution at 18 ° C. for 24 hours. Oocytes injected with cRNA were stored at 4 ° C. for 12 days.
  • Voltage-writing (1-2 M ⁇ tip resistance) and current-writing microelectrodes (5 M ⁇ tip resistance) contained 3.0 M KCl.
  • the egg was adjusted to pH 7.5 and electrophysiologically continuously superfused with Ringer's solution (5 mL / min at 18 ° C.) containing 110 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 5 mM HEPES and 1.8 mM BaCl 2 . Put into chamber. To induce induced currents, 2 ⁇ M ATP was overinfused for 60-120 seconds and washed for 20 minutes.
  • ATP-induced currents were normalized at pH 7.5.
  • the compound was applied to immobilized eggs in an electrophysiological chamber 20 minutes before ATP exposure.
  • IC 50 values concentration of compounds that inhibit ATP response 50%
  • Hill plot designed using the formula log (I / Imax-1), where I is ATP-induced in the presence of antagonist Current. Data was expressed as mean ⁇ SEM (n ⁇ 3) from batches of different eggs.
  • the cells were reproduced at 2.5 x 10 6 cells / mL in assay buffer consisting of 10 mM HEPES, 5 mM N-methyl-D-glucamine, 5.6 mM KCl, 10 mM D-glucose and 0.5 mM CaCl 2 (pH 7.4). It was suspended and supplemented with 280 mM sucrose or 140 mM NaCl.
  • hP2X7R antagonistic activity was assessed using an ethidium ion accumulation assay in human HEK293 cells stably expressing recombinant human P2X7R.
  • Compound 1, NF-449 and AZD9056 were tested together as positive control antagonists for mP2X1, hP2X3 and hP2X7R, respectively.
  • the percent inhibitory effect of the compounds in the table above was measured at 1 ⁇ M b , 10 ⁇ M or IC 50 values for the mP2X1 receptor and the hP2X3 receptor and the ionic current response induced by 2 ⁇ M ATP in recombinant P2X receptors expressed in Xenopus eggs (mean ⁇ SEM, n ⁇ 3).
  • e Ethidium bromide accumulation was measured in HP2X7-expressing HEK293 cells and the percent inhibition of accumulation by the compounds of this table at 10 ⁇ M was assessed (mean ⁇ SEM, n ⁇ 3).
  • the present inventors introduced a nitrile group (Compound 16) and a methanesulfonyl group (Compound 20) as a hydrogen bond acceptor, the bioisostere of 4-carboxylic acid group (bioisostere)
  • the introduction of tetrazole (compound 17) as) resulted in a significant decrease in antagonism of P2X1R and P2X3R.
  • Derivatives with fused heterocyclic groups such as maleic anhydride (compound 18) and pyridazine (compound 19), which are likely to interact with lysine residues at the ATP binding site of P2X3R, are also antagonistic Significant loss of activity was shown.
  • a Xenopus was from recombinant P2X receptor expression in oocytes in the ion current response and mP2X1 receptor and 1 ⁇ M b, 10 ⁇ M or IC 50 values for hP2X3 receptors caused by 2 ⁇ M ATP measuring the% inhibition effect of the compound (mean ⁇ SEM, n ⁇ 3).
  • e hP2X7- expressing ethidium bromide accumulation in HEK293 cells was measured and evaluated for its% inhibition of accumulation by the compounds of Table 10 ⁇ M (mean ⁇ SEM, n ⁇ 3).
  • compound 29 also showed an antagonistic effect on heterogenous rP2X2 / 3 receptors, a more physiologically relevant receptor (FIG. 2).
  • compound 29 was selected to further evaluate functional activity in an in vivo neuropathic (NeP) animal model.
  • NeP in vivo neuropathic
  • Compound 13d which appeared to be a stronger antagonist, was excluded due to its weak in vivo efficacy in early animal experiments, presumably due to its high polar physicochemical properties.
  • Rats Male SD rats (weight 250-290 g), 7-8 weeks old, were purchased from SAMTACO (Osan, Gyeongsan, Korea), and commercial rat feed (SAMTACO, Osan, Kyungki-Do, Korea) and water were free. Rats were housed 3 per cage at a temperature of 23 ⁇ 2 ° C. and a relative humidity of 50-60% under a 12 ⁇ 12 hour contrast cycle. Experiments started after acclimation under these conditions for at least 1 week. Rats were fasted 12 hours before the experiment and the tap water was free. Compound 28 was administered to the tail vein at a 5 mg / kg dose. At 0.5, 2, 4 and 8 hours after intravenous administration, each animal was sacrificed by cervical dislocation.
  • the HPLC system consists of an Agilent 1290 series rapid resolution LC system that includes a column of binary pumps (model G4220A), automatic sampler (model G4226A) and oven (model G1316C).
  • Mass spectrometer analysis was performed using a Sciex 4000 Q-trap ® mass spectrometer (Applied Biosystems Sciex, Toronto, Ontario, Canada) equipped with an electrospray ionization source. Data collection and quantification was performed using AB SCIEX's Analyst software version 1.6. Chromatographic separations were performed using Gemini NX C18 (2.0 ⁇ 100 mm, 3 ⁇ m, Phenomenex, USA). The mobile phase consisted of ACN (0.1% formic acid) and water (0.1% formic acid) (50:50, v / v). The flow rate was 0.25 mL / min and the injection volume was set at 5 ⁇ L.
  • Mass spectrometry was optimized and performed using multiple reaction monitoring (MRM) scans in cation mode.
  • the m / z transition was set at 392.1 ⁇ 360.2 for compound 28 and 378.2 ⁇ 360.2 for compound 29.
  • Preparation of plasma and brain homogenous samples includes protein precipitation with acetonitrile.
  • 5 ⁇ L of IS cimetidine, 10 ⁇ g / ml
  • 150 ⁇ l of acetonitrile (extraction solvent) was then added to the tube. After vortexing for 30 seconds, the mixture was centrifuged for 5 minutes at 12,000 rpm. 10 ⁇ l of supernatant was injected directly into the HPLC column.
  • rat Liver Microsomes (RLM).
  • Microsomes 0.5 mg / ml
  • test compound (1 ⁇ M) in 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7.4) were preincubated by shaking at 100 ° C. for 5 min (100 rpm).
  • Metabolic reactions were carried out in the NADPH production system (60 mM potassium phosphate buffer pH 7.4, 1.3 mM NADP, 3.3 mM glucose-6-phosphate, 0.3 ⁇ L glucose-6-phosphate dehydrogenase (0.4 U / mL), and 3.3 mM magnesium chloride).
  • NADPH NADPH production system
  • Plasma protein binding was measured by rapid equilibrium dialysis (RED).
  • DMSO stock solution of the compound was prepared at a concentration of 10 mM and diluted to a concentration of 5 ⁇ M in 50% plasma in phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4).
  • Plasma samples 100 ⁇ L and PBS (300 ⁇ L) were added to the sample chamber and the buffer chamber, respectively, and then incubated in a shake incubator at 37 ° C. for 4 hours by operating the RED apparatus. After dialysis, 50 ⁇ l aliquots were collected from each side of the chamber. 50 ⁇ l of blank plasma was added to the buffer sample and 50 ⁇ l of PBS was also added to the plasma sample. 200 ⁇ L of acetonitrile containing the internal standard was added to each sample. The samples were centrifuged at 3200g for 20 minutes at 4 ° C. Supernatants were obtained and analyzed by LC-MS / MS system.
  • Plasma protein binding rate was calculated as follows:
  • Free form,% (buffer chamber / plasma chamber) ⁇ 100
  • Test compounds were dissolved in DMSO to a concentration of 10 mg / mL. This compound stock solution was diluted 100-fold with PBS buffer and mixed to prepare a secondary stock solution at a final concentration of 100 ⁇ g / mL. Second stock solution (200 ⁇ L) was added to S7 donor wells (pION Inc, Billerica, Mass., USA). Test compounds were analyzed at pH 7.4. The filter at the bottom of each acceptor well (pION) was wetted by the addition of 5 ⁇ L of GIT-O lipid (pION) and the acceptor well was sink buffer at the same pH as the nonor well (pION). (200 ⁇ L, pION). The acceptor filter plate was carefully placed on the donor plate and incubated for 4 hours in Gut-BOX (pION).
  • CYP450 (1A2, 2C9, 3A4) enzyme assays were performed according to manufacturer's instructions slightly modified using fluorescence with Vivid® CYP450 screening kit (Invitrogen, USA, CA) in 96-well black plates. The assay was performed at room temperature and the final assay volume was 100 ⁇ L. Representative compounds and known CYP450 inhibitors (1A2: ⁇ -naphtoplavone; 2C9: sulfaphenazole; 3A4: ketoconazole) were prepared in DMSO to a final concentration of 10 ⁇ .
  • Master premix (enzyme (0.5 nmol recombinant human CYP450 enzyme) / NADP regeneration solution (pH 8.0, 333 mM glucose-6-phosphate, 30 U / mL glucose-6-phosphate dehydrogenase) dissolved in 100 mM KH 2 PO 4 solution)
  • NADP regeneration solution pH 8.0, 333 mM glucose-6-phosphate, 30 U / mL glucose-6-phosphate dehydrogenase
  • CYP450 reaction buffer 200 mM KH 2 PO 4 , pH 8.0
  • CHO-K1 Tet-On hERG cells expressing hERG channels via an inducible Tet-On gene expression system
  • CHO-K1 Tet-On hERG cells were purchased from IonGate Biosciences GmbH (Frankfurt, Germany).
  • CHO-K1 Tet-On hERG cells were selected for selection antibiotics, geneticin G418 (200 ⁇ g / mL), hygromycin (200 ⁇ g / mL) and puromycin (2 ⁇ g / mL), as well as 10% (v / v) bovine 5% CO at 37 ° C.
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium
  • penicillin 100 U / mL
  • streptomycin 100 ⁇ g / mL
  • fungizone 2.5 ⁇ g / mL
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium
  • Cells were passaged by trypsin-EDTA every three days.
  • 5 ⁇ g / mL of doxycycline (Sigma, St. Louis, MO, USA) was added to the growth medium for hERG channel expression to induce Tet-On gene expression.
  • CHO-K1 Tet-On hERG cells were incubated in 100-mm petri dishes for automatic patch clamp recording.
  • Cells of 50-80% confluency were harvested by treatment with trypsin-EDTA, washed twice and then resuspended in extracellular solution at a final cell density of 1.5 ⁇ 10 6 cells / mL. Cells were used for total cell recording for about 20-32 hours after doxycycline addition.
  • NPC-16 Patchliner (Nanion Technologies, Munchen, Germany) was used for whole cell recording. Total cell currents were recorded with intracellular solutions containing 50 KCl, 60 KF, 10 NaCl, 2 MgCl 2 , 20 EGTA and 10 HEPES (pH 7.2) and intracellular solution: 140 NaCl, 4 KCl Total cell current was recorded in an extracellular solution containing 2 CaCl 2 , 1 MgCl 2 , 5 glucose and 10 HEPES (pH 7.4).
  • a seal enhancer comprising 80 NaCl, 3 KCl, 35 CaCl 2 , 10 MgCl 2 and 10 HEPES (pH 7.4) was used only in the seal formation step to aid in stable seal formation. Prior to total cell recording, the external seal enhancer solution was exchanged with the extracellular solution described above.
  • HERG channel currents were recorded using a parallel EPC-10 patch clamp amplifier (HEKA Elektronik, Lambrecht / Pfalz, Germany) and low-pass (10 kHz) low-pass filtering was performed with a 4-pole Bessel filter. .
  • Cell suspensions and patch solutions were automatically added to four recording wells in a microfabricated disposable chip (NPC-16 Chip, Nanion Technologies, Munchen, Germany).
  • the hERG tail currents were repolarized up to 50 mV for 500 ms, followed by a depolarization potential of +20 mV for 500 ms at a retention potential of -80 mV at a sweep interval of 20 seconds. Triggered. The full cell current was collected and digitized at 5 kHz using Patchmaster (HEKA Elektronik, Lambrecht / Pfalz, Germany).
  • intraperitoneal and intravenous administration of Compound 29 had no antiallodynic effect in neuralgia animal models, so it was decided to evaluate the in vivo efficacy of Compound 28.
  • Rats were used to evaluate the antiallodynic effect (mechanical allodynia) according to a previously reported protocol.
  • rats naive, SNL and CIPN
  • rats were placed on the plastic mesh bottom of individual plastic cages. Rats were acclimated to the environment for 30 minutes and examined after intrathecal or intravenous tail vein administration.
  • the antiallodynic efficacy of Compound 29 was assessed using the von Frey method after intrathecal administration in spinal nerve ligation (SNL).
  • SNL spinal nerve ligation
  • the results of compound 29 showed an increase in paw withdrawal threshold as an indicator of antiallodynic effect in SNL rats (FIG. 4A).
  • the NeP animal model showed no pharmacological activity upon intraperitoneal and intravenous administration.
  • Compound 29 showed potent antiallodynic effects in NeP rats, but intravenous injection of Compound 29 did not provide antiallodynic effects.
  • AbbVie, Inc. reported that P2X3 receptor antagonists must be able to penetrate the blood brain barrier (BBB) in order to be effective in anti-nociceptive responses in neuropathic pain, although it is not necessary in inflammatory pain animal models. have.
  • BBB blood brain barrier
  • compound 29 may be too polar to pass anti-allodynia effect through BBB in NeP animal models by intravenous injection.
  • a prodrug strategy was studied using a methyl ester derivative of compound 29 (compound 28), which can be converted to compound 29 in the CNS to exhibit an antiallodynic effect.
  • Compounds 46a-i, 47, and 48 which are prodrugs of compound 29, incorporating various ester groups, were developed in consideration of the permeability of the blood brain barrier and the possibility of conversion to compound 29 in the CNS.
  • the drugs were subjected to pharmacological investigations after intravenous injection in SNL and CIPN rats, a neuropathic pain animal model.
  • Table 7 compounds of the 46a-i, 47, 48 is the anti-allodynia efficacy with a ED 50 value of 2.31-3.64 mg / kg in the SNL rats were observed, in CIPN rat ED 50 of 2.93-3.94 mg / kg value Allodynia efficacy with was observed.

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Abstract

본 발명은 P2X1 및 P2X3 수용체 길항제로 유용한 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 다른 화합물은 P2X1 및 P2X3 수용체를 강력하게 길항하는 활성이 있으므로, P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 질환인 만성염증 질환 또는 신경성 통증 질환의 치료 및 예방을 위한 약제로 유용하게 사용할 수 있다.

Description

Ｐ2Ｘ1 및 Ｐ2Ｘ3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물
본 발명은 미래창조과학부의 지원 하에서 과제번호 2014R1A2A1A11052300에 의해 이루어진 것으로서, 상기 과제의 연구관리 전문기관은 한국연구재단, 연구사업명은 "핵심개인연구(성과확산)", 연구과제명은 "신경병증성 통증 신호전달의 다중표적 제어기전 및 약물설계에 관한 연구", 주관기관은 한국과학기술원, 연구기간은 2014.11.01-2016.10.31. 이다.
본 특허출원은 2017년 3월 13일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제10-2017-0031413호에 대하여 우선권을 주장하며, 상기 특허출원의 개시 사항은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.
본 발명은 Ｐ2Ｘ1 및 Ｐ2Ｘ3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
P2X 수용체는 세포 외 아데노신 5'- 트리포스페이트 (ATP)의 결합에 반응하여 활성화되는 리간드-게이티드 양이온 채널이다. P2X 수용체의 막통과공(transmembrane pore)이 열리면 Ca2 +, Na+ 및 K+와 같은 양이온이 세포질로 유입되어 막 탈분극과 세포 흥분을 유발한다는 것이 잘 알려져 있다. 포유동물에서 7개의 P2X 수용체 아형이 혈관 평활근, 혈소판, 말초 및 중추 신경계 및 면역 세포에서 광범위하게 발현되며 시냅스 전달, 시냅스 전 조절, 평활근 수축, 세포 증식 및 세포사, 내장 운동성, 혈소판 응집, 미각, 통각, 및 염증을 포함한 다양한 생리학적 과정을 매개한다. 제브라 피시 P2X4 수용체의 X 선 결정 구조에 대한 최근의 연구는 P2X 수용체의 공통적인 위상(topology)을 밝혀냈는데, 여기에는 두 개의 막통과 도메인(TM1과 TM2 ), ATP 결합 부위 및 세포 내 N- 및 C- 말단을 함유하는 큰 글리코실화 및 시스테인-풍부 세포 외 루프를 포함한다. 또한, ATP가 zP2X4 수용체에 결합할 때의 게이팅 메카니즘은 결정 구조의 아포(apo) 상태와 오픈(open) 상태 사이의 입체 구조 변화에 의해 결정된다고 알려져 있다.
P2X 수용체 아형들 중에서 P2X3 수용체 (P2X3R)는 중소 직경의 C- 및 Aδ- 섬유 일차 구심성 뉴런에서 호모머(homomeric) P2X3 및 헤테로머(heteromeric) P2X2/3 수용체로서 존재하며, 이는 통증-감지 시스템에 고도의 특이성을 제공한다. 넉아웃(knock-out) 동물 연구를 포함한 많은 연구에서 P2X3R은 통증 감지와 밀접한 관련이 있음을 보여주었다. 예를 들어, ATP 또는 P2X3R-선택적 작용제(agonist)인 αβ- 메틸렌 ATP를 래트의 뒷발에 투여하면 통각 작용이 유발되었고, 신경병증성 또는 염증성 통증 모델에서 P2X3R의 넉아웃 또는 P2X3R 선택적 안티센스 RNA 또는 siRNA(short interfering RNA)를 이용한 동물에서 통증 관련 행동이 크게 감소하였다. 또한, P2X3 수용체 길항제인 TNP-ATP (2 ', 3'-O-(2,4,6-트리니트로페닐)아데노신-5'-트리포스페이트) 및 PPADS를 사용하여 통증 감각에서의 P2X3R의 중추적 역할에 대해서 조사한 결과, 만성 신경병증성 통증 동물 모델에서 통증 반응이 감소되었다. 따라서, 이들 데이터는 P2X3R의 길항 작용이 만성 통증의 관리를 위한 잠재적인 치료 전략 중 하나 일 수 있음을 제시한다.
지난 10 년 동안 강력하고 선택적인 P2X3 수용체 길항제는 본 발명자들을 포함한 제약산업 및 학술기관에 의해 개발되었다. 애봇 래버러터리즈(Abbott Laboratories)는 만성 및 염증성 통증 동물 모델에서 통증 감소 효과를 나타내는 첫 번째 선택적 비누 뉴클레오티드 이중(dual) P2X3-P2X2/3 길항제인 A-317491 (도 1a의 화합물 1)을 공개했다. 로슈(Roche)는 P2X3-P2X2/3 수용체에 대한 높은 효능과 선택성을 가진 최초의 알로스테릭(allosteric) 길항제로서 디아미노피리딘(diaminopyrimidine)계 유사체인 RO-4 (도 1b의 화합물 2a), RO-51 (도 1b의 화합물 2b) 및 RO-85 (도 1c의 화합물 3)를 보고했다. 아스트라 제네카(AstraZeneca)는 P2X3 수용체 길항제의 효능 및 물리화학적 특성을 개선하기 위해, 피롤로-피리미디 논(pyrrolo-pyrimidinone) 유도체 (도 1d의 화합물 4)에 대한 구조-활성도 관계(SAR, structure-activity relationship) 연구를 발표했다. Afferent Pharmaceutical의 임상 약물 후보 물질로, 강력하고 경구적으로 생체적합성 선택적 P2X3-P2X2/3 수용체 길항제인 AF-219는 간질성 방광염/방광 통증 증후군과 만성적 기침을 포함하는 제2상 임상시험에서 몇가지 개념 입증연구결과, 의미있는 약리 효과를 나타내었다. 본 발명자들은 선택적 및 비경쟁적 펩타이드 길항제인 Spinorphin (도 1e의 화합물 5, IC50 = 8.3 pM) 및 5-히드록시 피리딘 유도체(도 1g의 화합물 7a-c)를 보고하였으며, 이는 비선택적 P2X 길항제인 PPADS (도 1f의 화합물 6a)의 강한 음이온성 인산 설폰산기와 불안정한 아조 결합(-N=N-)을 약한 음이온성 카복실산 및 안정한 탄소-탄소 결합으로 각각 변형시킴으로써 개발된 것이었다.
본 발명자들은 5-히드록시 피리딘 유도체(도 1g의 화합물 7a-c)의 약물 특성을 최적화하기 위하여 여러 위치의 탄소에 대하여 다양한 치환기를 도입한 결과, 보다 생물학적 안정성이 높으면서도 길항작용이 우수한, 신규한 hP2X3 수용체 길항제를 개발하기에 이르렀다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 통증전달 및 염증성 신호전달에서 중요한 역할을 담당하는 P2X1 및 P2X3 수용체에 대한 신규한 길항제를 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 본 발명자들은 5-히드록시 피리딘 유도체(도 1g의 화합물 7a-c)의 여러 위치의 탄소에 대하여 다양한 치환기를 도입한 신규화합물을 합성하고 이의 약동학 및 효능을 시험한 결과, 보다 생물학적 안정성이 높으면서도 길항작용이 우수한 hP2X3 수용체 길항제임을 규명합으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 P2X1 및 P2X3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물 및 이를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 P2X1 및 P2X3 수용체 길항제로 사용되는 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 만성염증 질환, 신경성 통증 질환 또는 혈소판 응집관련 질환의 치료방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 하기 일반식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[일반식 1]
Figure PCTKR2018002947-appb-I000001
상기 일반식 1에서,
A는 다음 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고,
[화학식 1]
Figure PCTKR2018002947-appb-I000002
[화학식 2]
Figure PCTKR2018002947-appb-I000003
n과 m은 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수이고;
R1은 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실, 설포닐, 티오에테르(예컨대 -CH2CH2SCH3), 벤질, 페네틸로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이며;
R2는 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실, 설포닐, 시아노(cyano), 아마이드, 테트라졸릴 또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000004
로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이거나, R3와 함께 N, O, S로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 원자를 포함하는 헤테로 5원-6원 고리를 형성하고;
R3는 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이거나, R2와 함께 상기 헤테로 5원-6원 고리를 형성하며;
R4는 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이고,
R5는 비치환되거나 또는 페닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 또는 1,3-다이옥소-1,3-다이하이드로-2H-이소인돌-2-일로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C8 알킬, C5-C6 시클로알킬, 또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000005
이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 일반식 I의 R2는 수소원자, C1-C6 알킬, -COOH, -CH=CHCOOH, -CH2CH2COOH, 메틸설포닐(-S(=O)2-CH3), 시아노, 아마이드(-CONH2),
Figure PCTKR2018002947-appb-I000006
또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000007
일 수 있고;
여기에서 상기 R5는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000008
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000009
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000010
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000011
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000012
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000013
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000014
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000015
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000016
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000017
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000018
또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000019
일 수 있다.
상기 일반식 I에 속하는 화합물 군은,
상기 일반식 I로 표시되는 화합물의 A가 상기 화학식 1인 경우에,
n은 0 내지 5의 정수이고; R1은 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실, 설포닐, 티오에테르(예컨대 -CH2CH2SCH3), 벤질, 페네틸로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C4 알킬이며; R2는 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실, 설포닐, 시아노(cyano), 아마이드, 테트라졸릴 또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000020
로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이거나, R3와 함께 N, O, S로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 원자를 포함하는 헤테로 5원-6원 고리를 형성하고; R3는 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이거나, R2와 함께 상기 헤테로 5원-6원 고리를 형성하며; R4는 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물군을 포함한다.
또한, 상기 일반식 I에 속하는 화합물 군은,
상기 일반식 I로 표시되는 화합물의 A가 상기 화학식 2인 경우에,
m은 0 내지 5의 정수이고; R1은 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이며; R2는 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실, -CH2NH2, -CH2NH-S(=O)2-CH3, 시아노, 또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000021
로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이고; R3는 수소원자, 비치환되거나 카르복실로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이며; 상기 R5는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000022
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000023
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000024
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000025
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000026
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000027
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000028
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000029
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000030
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000031
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000032
또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000033
인 것을 특징으로 하는 화합물군을 포함한다.
또한, 본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명은 하기 일반식 Ia 로 표시되는 5-히드록시 피리딘계 화합물, 그 이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure PCTKR2018002947-appb-I000034
상기 식에서,
R1은 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C4 알킬, 카르복실(-COOH), 메틸설포닐에틸(-CH2CH2-S(=O)2-CH3), -CH2CH2SCH3, 벤질, 또는 페네틸이고; R2는 수소원자, C1-C3의 알킬, -COOH, -CH=CHCOOH, -CH2CH2COOH, 메틸설포닐(-S(=O)2-CH3), 시아노, 아마이드(-CONH2), 또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000035
이거나, R3와 함께 N, O, S로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 원자를 포함하는 헤테로 5원-6원 고리를 형성하며; R3는 수소원자, C1-C3의 알킬, 또는 카르복실이거나, R2와 함께 상기 헤테로 5원-6원 고리를 형성하고; R4는 수소원자, 또는 C1-C3의 알킬이다.
또한, 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 하기 일반식 Ib 로 표시되는 5-히드록시 피리딘계 화합물, 그 이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure PCTKR2018002947-appb-I000036
상기 식에서 R1은 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이고; R2는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬, -COOH, -CH=CHCOOH, -CH2CH2COOH, -CH2NH2, 설포닐(-CH2NH-S(=O)2-CH3), 시아노, 또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000037
이며; R3는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬, 또는 카르복실(-COOH)이고; R5는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000038
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000039
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000040
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000041
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000042
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000043
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000044
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000045
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000046
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000047
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000048
또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000049
이다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 하기의 일반식 Ib’로 표시되는 것을 특징으로 하는 5-히드록시 피리딘계 화합물, 그 이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure PCTKR2018002947-appb-I000050
상기 식에서 R1은 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이고; R3는 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이며; R5는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000051
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000052
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000053
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000054
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000055
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000056
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000057
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000058
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000059
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000060
,
Figure PCTKR2018002947-appb-I000061
또는
Figure PCTKR2018002947-appb-I000062
이다.
상기 일반식 Ia에 속하는 화합물에는,
5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13a); 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methylpyridine-3,4-dicarboxylic acid (13b); 6-Ethyl-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13c); 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-propylpyridine-3,4-dicarboxylic acid (13d); 6-Butyl-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13e); 5-Hydroxy-6-isopropyl-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13f); 5-Hydroxy-6-isobutyl-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13g); 6-Benzyl-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13h); 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-phenethylpyridine-3,4-dicarboxylic acid (13i); 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)pyridine-2,4,5-tricarboxylic acid (13j); 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-(2-(methylthio)ethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13k); 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-(2-(methylsulfonyl)ethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13l); Ethyl 4-cyano-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methylnicotinate (14); Ethyl 5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methyl-4-(1H-tetrazol-5-yl)nicotinate (15); 4-Cyano-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methylnicotinic acid (16); 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methyl-4-(1H-tetrazol-5-yl)nicotinic acid (17); 7-Hydroxy-4-(4-methoxyphenethyl)-6-methylfuro[3,4-c]pyridine-1,3-dione (18); 8-Hydroxy-5-(4-methoxyphenethyl)-7-methyl-2,3-dihydropyrido[3,4-d]pyridazine-1,4-dione (19); 6-(4-Methoxyphenethyl)-2-methyl-4-(methylsulfonyl)pyridin-3-ol (20); Methyl 3-hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2-methylisonicotinate (21a); Methyl 3-hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2,5-dimethylisonicotinate (21b); Methyl 3-hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-5-methyl-2-propylisonicotinate (21c); 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2-methylisonicotinic acid (22a); 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2,5-dimethylisonicotinic acid (22b); 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-5-methyl-2-propylisonicotinic acid (22c); 및 5-Hydroxy-2-[2-(4-methoxyphenyl)ethyl]-3-methyl-6-propyl-pyridine-4-carboxamide (23)가 포함된다.
상기 일반식 Ib 또는 Ib’에 속하는 화합물에는,
*Dimethyl 5-hydroxy-2-(3-phenoxybenzyl)-6-propylpyridine-3,4-dicarboxylate (26); 5-Hydroxy-2-(3-phenoxybenzyl)-6-propylpyridine-3,4-dicarboxylic acid (27); Methyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (28); 3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinic acid (29); Methyl 3-(benzyloxy)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (30); (3-(Benzyloxy)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4-yl)methanol (31); 4-(Hydroxymethyl)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-3-ol (32); 3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinaldehyde (33); Ethyl (E)-3-(3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4-yl)acrylate (34);
(E)-3-(3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4-yl)acrylic acid (35); Ethyl 3-(3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4-yl)propanoate (36); 3-(3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4-yl)propanoic acid (37)3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinonitrile (38); 3-(Benzyloxy)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinonitrile (39); (3-(Cyclohexa-2,4-dien-1-ylmethoxy)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4-yl) methanamine (40); 4-(Aminomethyl)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-3-ol (41);
N-((3-(Benzyloxy)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4- yl)methyl) methanesulfonamide(42); N-((3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-4-yl)methyl)methanesulfonamide (43); Phenethyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46a); Octyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46b); 2-phthalimidoethyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46c); 4-phthalimidobutyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46d); 2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46e); Isopropyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46f); Pentan-3-yl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46g); Cyclopentyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46h); Tetrahydrofuran-3-yl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46i); 1-(Tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46j); Piperidin-4-yl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (47); 및 Ethyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (48)가 포함된다.
상기 일반식 (I)로 표시되는 본 발명의 화합물들은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.
염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올 (예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
상기의 일반식 (I)의 구조를 갖는 5-히드록시피리딘계 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 일반식 (I)의 구조를 갖는 5-히드록시피리딘계 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.
또한, 상기의 일반식 (I)의 구조를 갖는 5-히드록시피리딘계 화합물은 비대칭 중심을 가지므로 상이한 거울상 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 일반식 (I)의 구조를 갖는 5-히드록시피리딘계 화합물의 모든 광학 이성질체 및 R 또는 S형 입체 이성질체 및 이들의 혼합물도 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 한다. 본 발명은 라세미체, 하나 이상의 거울상 이성질체 형태, 하나 이상의 부분 입체 이성질체 형태 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함하며, 당업계에서 알려진 이성질체의 분리 방법이나 제조과정을 포함한다.
본 발명의 다른 목적은 상기 일반식 (I) 화합물의 제조방법을 제공하는 것으로, 하기의 반응식들에 도시된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있지만, 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.
하기의 반응식들은 본 발명의 대표적인 화합물들의 제조방법을 제조 단계별로 나타내는 것으로 본 발명의 여러 화합물들은 반응식 1 내지 8의 합성과정에서 사용되는 시약, 용매 및 반응 순서를 바꾸는 등의 작은 변경으로 제조될 수 있다.
본 발명의 몇몇 화합물들은 반응식들의 범주에 포함되지 않는 과정에 따라 합성되었으며, 이러한 화합물들에 대한 상세한 합성 과정은 이들 각각의 실시예에 설명되어 있다.
(반응식 1) 3,4-디카르복시피리딘 유도체(3,4-dicarboxypyridine derivatives)의 제조
Figure PCTKR2018002947-appb-I000063
상기 반응식 1에서의 시약 및 조건: (a) EDC, TEA, DCM, RT, 2 h, 55-99%; (b) P2O5, CHCl3, reflux, 5h, 58-99%; (b’) triphenylphosphine, iodine, TEA, DCM, RT, 12h, 50-63%; (c)dimethylmaleate, neat, reflux, 5h, 21-52%; (d) Oxone®, MeOH/THF = 3:1, RT, 4 h, 63-88%; (e) 20% KOH (aq), RT, 6 h, 35-90% .
(반응식 2) 5-히드록시피리딘 유도체(5-hydroxypyridine derivatives)의 제조(화합물 16-19)
<반응식 2-1>
Figure PCTKR2018002947-appb-I000064
<반응식 2-2>
Figure PCTKR2018002947-appb-I000065
<반응식 2-3>
Figure PCTKR2018002947-appb-I000066
상기 반응식 2(2-1 내지 2-3)에서의 시약 및 조건: (a) cis-betacyanoacrylate, neat, reflux, 5 h, 27-55%; (b) sodium azide, ammonium chloride, DMF, 90 °C, 12 h, 48-62%; (c) 20% KOH (aq), RT, 6 h, 30-52%; (d) maleic anhydride, benzene, 60 °C, 2 h, 43-54%; (e) hydrazine hydrate (aq), sodium acetate anhydrous, acetic acid, reflux, 2 h, 35-46%; (f) methyl vinyl sulfone, neat, reflux, 5 h, 49-55%.
(반응식 3) 5-히드록시피리딘 유도체(5-hydroxypyridine derivatives)의 제조(화합물 21-23)
Figure PCTKR2018002947-appb-I000067
상기 반응식 3에서의 시약 및 조건: (a) methyl acrylate, neat, 5 h, 37-46%; (a’) methyl crotonate, neat, 5 h, 32-52%; (b) 20% KOH (aq), RT, 6 h, 40-57%; (c) 30% ammonia (aq), RT, 12 h, 32-45%.
(반응식 4) 5- 히드록시피리딘 유도체(5- hydroxypyridine derivatives)의 제조(화합물 26-29, 33-37)
<반응식 4-1>
Figure PCTKR2018002947-appb-I000068
<반응식 4-2>
Figure PCTKR2018002947-appb-I000069
상기 반응식 4에서의 시약 및 조건: (a) P2O5, CHCl3, reflux, 5h, 85-99%; (b) methylcrotonate, neat, reflux, 5 h, 22-52%; (c) benzyl bromide, K2CO3, acetone, reflux, 2h, 73-96%; (d) LAH, ether, 0°C, 1h, 67-88%; (e) Pd/C, H2, RT, 0.5h, 54-91%; (f) MnO2, DCM, RT, 2h, 66-85%; (g) NaH, triethylphosphonoacetate, THF, RT, 1h, 63-78%; (h) 20% KOH(aq), RT, 6h, 37-94%; (i) dimethylmaleate, neat, reflux, 5 h, 32-54%.
(반응식 5) 5-히드록시피리딘 유도체(5-hydroxypyridine derivatives)의 제조(화합물 38-43)
Figure PCTKR2018002947-appb-I000070
상기 반응식 5에서의 시약 및 조건: (a) methylcrotononitrile, neat, reflux, 5 h, 52-74%; (b) benzyl bromide, K2CO3, acetone, reflux, 2 h, 62-86%; (c) LAH, ether, 0 °C, 1 h, 52-74%; (d) methanesulfonyl chloride, TEA, DCM, RT, 1 h, 61-77%; (e) Pd/C, H2, RT, 0.5 h, 60-91%.
(반응식 6) 화합물 46a-j의 제조
Figure PCTKR2018002947-appb-I000071
상기 반응식 6에서의 시약 및 조건: (a) 20% KOH, methanol, 1,4-dioxane, 50℃, 2d, 63%; (b) alkyl bromide, NaHCO3, DMF, 60℃, 5h, 35-89%; (c) Pd/C, H2 (1atm), DCM, methanol, RT, 30min, 22-89%.
상기 화합물 45a-j 및 화합물 46a-j의 치환기 R은 다음의 표 1과 같다:
Figure PCTKR2018002947-appb-T000001
(반응식 7) 5-히드록시피리딘 유도체(5-hydroxypyridine derivatives)의 제조(화합물 47)
Figure PCTKR2018002947-appb-I000072
상기 반응식 7의 boc-탈보호의 시약 및 조건: 20% TFA, DCM, RT, 1h, 67%.
(반응식 8) 5-히드록시피리딘 유도체(5-hydroxypyridine derivatives)의 제조(화합물 48)
Figure PCTKR2018002947-appb-I000073
상기 반응식 8의 디엘스-알더(diels-Alder) 반응의 시약 및 조건: ethyl crotonate, neat, 5 h, 42%
본 발명의 일반식 I로 표시되는 화합물들은 P2X1 및 P2X3 수용체에 대한 강력한 길항작용을 나타내므로 P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염, 류마티스 관절염, 천식, 만성폐쇄성폐질환, 방광염 등의 만성염증 질환; 신경병증성통증, 이질통, 당뇨성 신경장애증, 자발성통증, 과민성통증, 환지통, 복합부위통증증후군 등의 신경성 통증 질환 또는 동맥경화, 뇌졸중, 혈전증, 색전증, 심근경색, 죽상경화증, 말초혈액순환장애 등의 혈소판 응집관련 질환 등을 예방 또는 치료할 수 있는 제제로서 유용하게 사용할 수 있다.
따라서, 본 발명은 상기 일반식 I의 화합물을 유효성분으로 함유한, P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 만성염증 질환, 신경성 통증 질환 또는 혈소판 응집관련 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물을 제공한다.
본원에서 정의되는 P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 만성염증 질환은 예를 들어, 퇴행성 관절염, 류마티스 관절염, 천식, 만성폐쇄성폐질환, 방광염을 포함하며, P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 신경성 통증 질환은 예를 들어, 신경병증성통증, 이질통, 당뇨성 신경장애증, 자발성통증, 과민성통증, 환지통, 복합부위통증증후군 등을 포함하며, P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 혈소판 응집관련 질환 은 예를 들어, 동맥경화, 뇌졸중, 혈전증, 색전증, 심근경색, 죽상경화증, 말초혈액순환장애 등을 포함한다.
따라서, 본 발명은 일반식 I의 구조를 갖는 피리딘 카르복실산계 화합물을 유효성분으로 포함하는 P2X1 및 P2X3 수용체에 대한 길항제를 제공한다.
본 발명자는 신규한 5-히드록시피리딘계 화합물들이 P2X1 및 P2X3 수용체에 대하여 강력한 길항 활성을 나타냄을 클론된 마우스 P2X1 및 인간 P2X3 수용체로 발현된 개구리 난자(Xenopus oocyte)에서 2-전극 전압 클램프 어세이법(TEVC)을 이용하여 확인하였고, 인간 P2X7 수용체로 발현된 인간 HEK293세포에 대한 에티디움 브로마이드의 축적을 분석함으로써, 본 발명의 화합물들이 P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 질환인 만성염증 질환, 신경성 통증 질환 또는 혈소판 응집 관련 질환의 치료 및 예방 약제로서 개발가능성이 높음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 피리딘 카르복실산계 화합물을 포함하는, P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 질환을 예방, 치료하기 위한 약제학적 조성물과 피리딘 카르복실산계 화합물을 사용하여 상기 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 용어 "예방"이란 5-히드록시피리딘계 화합물을 포함하는 조성물의 투여로 P2X1 및 P2X3 수용체 수용체 활성과 관련된 모든 질병의 발병을 억제시키거나 발병을 지연하는 모든 행위를 말하며, "치료"란 상기 약제학적 조성물의 투여로 P2X1, P2X3 및 P2X7 수용체 수용체 활성과 관련된 모든 질병을 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 5-히드록시피리딘계 화합물을 포함하는 조성물 및 치료방법은 인간뿐만 아니라 P2X1 및 P2X3 수용체 수용체 활성과 관련된 모든 질병이 발병할 수 있는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물에게도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 일반식 (I)의 구조를 갖는 5-히드록시피리딘계 화합물을 유효성분으로 포함하는 P2X1 및 P2X3 수용체 활성과 관련된 모든 질병의 치료 및 예방을 위한 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 0.0001 ~ 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 ~ 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 조성물에서 본 발명의 화합물은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 10 중량%, 바람직하게는 0.001 ~ 1 중량%의 양으로 존재하여야 한다.
또한, 본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명은 P2X1 및 P2X3 수용체 길항제로 유용한 신규한 5-히드록시 피리딘계 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것으로, 본 발명에 따른 화합물은 P2X1 및 P2X3 수용체를 강력하게 길항하므로, P2X1 및 P2X3 수용체 활성에 기인한 질환인 만성염증 질환 또는 신경성 통증 질환의 치료 및 예방을 위한 약제로 유용하게 사용할 수 있다.
도 1a 내지 도 1f는 기존에 개발된 P2X 수용체에 대한 길항제와 본 발명자들이 보고한 P2X 수용체 길항제를 나타낸 도이다.
도 2a 내지 도 2c는 본 발명의 화합물 29의 P2X3 및 P2X2/3 수용체에 대한 길항 활성도를 나타낸 도이다(2a: hP2X3R, 2b: rP2X3/3).
도 3a 및 도 3b는 프리가발린, AF353 및 화합물 29의 경막 내 투여에 의한 SNL 랫트의 항이질통 효과를 나타낸 도이다. 후퇴 역치(withdrawal threshold) 또는 최대 가능 효과(maximum possible effect)의 백분율(1㎍에서의 % MPE)은 각 실험 그룹에 대해 5-6 마리의 랫트의 평균±SEM을 나타낸다. 비히클(대조군) 대비, *P <0.05.
도 4a 및 도 4b는 화합물 28의 정맥 내 투여에 의한 SNL 랫트의 항이질통 효과를 나타낸 도이다. 후퇴 역치 또는 최대가능효과의 백분율은 각 실험 그룹에 대해 5-6 마리의 랫트의 평균±SEM을 나타낸다. 비히클(대조군) 대비, **P <0.01, ***P <0.001.
도 5a 및 도 5b는 화합물 28의 정맥 내 투여에 의한 CIPN 랫트의 항이질통 효과를 나타낸 도이다. 후퇴 역치 또는 최대가능효과의 백분율은 각 실험 그룹에 대해 5-6 마리의 랫트의 평균±SEM을 나타낸다. 비히클(대조군) 대비, *P <0.001.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
참고예 1. 실험준비 등
축약어
본 실험에서 사용한 약어의 정의는 아래와 같다.
ACN, acetonitrile;
ANOVA, analysis of variance;
ATP, adenosine 5'-triphosphate;
BBB, blood brain barrier;
BzATP, 2’(3’)-O-(4-benzoylbenzoyl)-ATP;
CIPN, chemotherapy-induced peripheral neuropathy;
CYP, cytochrome P450;
DMSO, dimethyl sulfoxide;
FBS, fetal bovine serum;
i.p., intraperitoneal administration;
i.v., intravenous administration;
MPE, maximal possible effect;
NeP, neuropathic pain;
PBS, phosphate buffered saline;
PEG, polyethylene glycol;
P2XR, P2X receptor;
SAR, structure-activity relationship;
SNL, spinal nerve ligation;
TEVC, two-electrode voltage clamp;
TM, transmembrane
화학분석
1H 및 13C NMR 스펙트럼은 300 MHz의 JEOL JNM-LA 300WB 분광기 또는 400 MHz의 JEOL JNM-ECX 400P 분광기에서 얻었으며, 스펙트럼은 CDCl3, DMSO-d6 또는 CD3OD에서 얻었다. 화학적 이동은 내부 표준인 테트라메틸실란과 비교하여 δ 단위 및 ppm 단위로 주어진다. 데이터는 다음과 같이 보고되었다: 화학적 이동(chemical shift), 통합(integration), 다중도(multiplicity) (s, singlet; d, doublet; t, trpilet; m, multiplet; br, broad). 커플링 상수 (J)는 Hz 단위로 보고되었다. 질량 분광법은 MALDI-TOF 및 ESI(Electrospray ionization) 기기에서 수행되었다. 추가적으로, 선택된 화합물의 고해상도 질량 분석 (m/z)은 한약진흥재단(장흥군)에서 ESI(Electrospray ionization)로 분석되었다.
모든 최종 화합물의 순도는 HPLC에 의해 결정되었다(별도 언급이 없는 한, 적어도 95%의 순도). 순도의 결정은 Shimadzu Shim-pack C18 분석 컬럼 (250 mm × 4.6mm, 5㎛, 100 A)을 사용하여 Shimadzu SCL-10A VP HPLC 시스템에서 2개의 용매 시스템으로 수행하였다. 용매 시스템은 0.1% 포름산 수용액(H2O):CH3CN = 90:10 내지 0:100의 비율로 1 mL/min의 유속으로 30분에 걸쳐 흘려주는 것이었다. 피크(peak)는 다이오드 어레이 검출기를 사용하여 UV 흡수에 의해 검출되었다.
실시예 1. 화합물 10a-k의 제조를 위한 일반적인 절차
3-(4-메톡시페닐)프로판산 8 (1.0 당량), 다양한 1차 아민 화합물 9a-k (1.0 당량) 및 EDC (2.0 당량)의 무수 디클로로메탄 혼합물에 트리에틸아민 (1.0 당량)을 적가 하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 포화 수성 중탄산나트륨 수용액으로 희석시켰다. 유기층을 분리하고, 수성층을 디클로로메탄으로 더 추출 하였다. 합쳐진 유기 추출물을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시킨 다음, n-헥산/에틸아세테이트 = 3:1로 실리카 겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 10a-k를 점성 오일로서 수득하였다.
화합물 10a-k의 구체적인 제법 및 물성은 다음과 같다.
1-1. Ethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]acetate (10a) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (1.0 g, 5.5 mmol) 및 글리신에틸에스테르(glycine ethyl ester) (0.77 g, 5.5 mmol)로부터 제조하였다.
Yield 1.4 g (97%); 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ ppm 1.28 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.48-2.95 (2H, m, 2xCH2), 3.78 (3H , s, CH3O), 4.00 (2H, d, J = 5.1 Hz, CH2), 4.20 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.00-6.08 (1H, m, NH), 6.79-6.85 (2H, m, phenyl), 7.12 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 266.3 [M + H].
1-2. Ethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]propanoate (10b) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (5.9 g, 32 mmol) 및 L-알라닌 에틸 에스테르(L-alanine ethyl ester) (5.0 g, 32 mmol) 로부터 제조하였다.
Yield 7.3 g (82%); 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 1.22 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.35 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3), 2.53 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 2.88 (2H, t, J = 6.9 Hz, CH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 4.15 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.52-4.59 (1H, m, CH), 5.96 (1H, d, J = 5.4 Hz, NH), 6.82-7.19 (4H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 280.2 [M + H].
1-3. Methyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]butanoate (10c) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (0.96 g, 5.3 mmol) 및 DL-2-아미노부틸산 메틸에스테르(DL-2-aminobutyric acid methyl ester) (0.81 g, 5.3 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 1.4 g (92%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.79 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.47-1.69 (2H, m, CH2), 2.31-2.40 (2H, m, CH2), 2.66-2.74 (2H, m, CH2), 3.57 (3H, s, CH3O), 3.67 (3H, s, CH3O), 4.07-4.15 (1H, m, CH), 6.76-6.81 (2H, m, phenyl) , 7.04-7.10 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 280.2 [M + H].
1-4. Ethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]pentanoate (10d) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (2.9, 17 mmol) 및 L-노르발린 에틸 에스테르(L-norvaline ethyl ester) (3.0 g, 17 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 5.2 g (99%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.88 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.11-1.23 (2H, m, CH2), 1.27 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.53-1.57 (2H, m, CH2), 1.69-1.77 (2H, m, CH2), 2.44-2.56 (2H, m, CH2), 2.88-2.95 (2H, m, CH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 4.17 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.55-4.60 (1H, m, CH), 5.84-5.86 (1H, m, NH), 6.81 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.11 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 308.3 [M + H].
1-5. Methyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]hexanoate (10e) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (0.50 g, 2.8 mmol) 및 DL-노르류신 메틸 에스테르(DL-norleucine methyl ester) (0.50 g, 2.8 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 0.79 (89%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.85 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.12-1.16 (2H, m, CH2), 1.21-1.28 (2H, m, CH2), 1.54-1.58 (1H, m, CH), 1.71-1.75 (1H, m, CH), 2.43-2.51 (2H, m, CH2), 2.87-2.92 (2H, m, CH2), 3.71 (3H, s, CH3O), 3.76 (3H, s, CH3O), 4.55-4.60 (1H, m, CH), 5.81-5.83 (1H, m, NH), 6.79-6.82 (2H, m, phenyl), 7.10-7.12 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 308.1 [M + H].
1-6. Ethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]-3-methyl-butanoate (10f) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (2.9 g, 17 mmol) 및 L-발린 에틸 에스테르(L-valine ethyl ester) (3.0 g, 17 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 5.00 g (99%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.82-0.86 (6H, m, 2xCH3) 1.29 (3H, t, J = 6.8 Hz, CH3), 2.07-2.12 (1H, m, CH), 2.48-2.59 (2H, m, CH2), 2.90-2.94 (2H, m, CH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 4.16-4.22 (2H, m, CH2), 4.52-4.55 (1H, m, CH), 5.84-5.86 (1H, m, NH), 6.85 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.16 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 308.7 [M + H].
1-7. Ethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]-4-methyl-pentanoate (10g) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (2.7 g, 15 mmol) 및 L-발린 에틸 에스테르(L-leucine ethyl ester) (3.0 g, 15 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 4.9 g (99%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.92 (6H, t, J = 6.4 Hz, 2xCH3) 1.25 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.42-1.48 (2H, m, CH2), 1.53-1.57 (1H, m, CH), 2.43-2.53 (2H, m, CH2), 2.87-2.94 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 4.13 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.57 (1H,m, CH), 5.71-5.73 (1H, m, NH), 6.80 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.10 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 322.7 [M + H].
1-8. Ethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]-3-phenyl-propanoate (10h) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (2.3 g, 13 mmol) 및 L-페닐알라닌 에틸 에스테르(L-phenylalanine ethyl ester) (3.0 g, 13 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 4.60 g (99%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 1.22 (3H, t, J = 6.8 Hz, CH3) 2.42-2.50 (2H, m, CH2), 2.86-2.91 (2H, m, CH2), 3.06-3.07 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 4.13-4.19 (2H, m, CH2), 4.86-4.88 (1H, m, CH), 5.84-5.86 (1H, m, NH), 6.81-6.85 (2H, m, phenyl), 6.95-6.98 (2H, m, phenyl), 7.09-7.13 (2H, m, phenyl), 7.22-7.25 (3H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 356.3 [M + H].
1-9. Ethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]-4-phenyl-butanoate (10i) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (2.2 g, 12 mmol) 및 D-호모페닐알라닌 에틸 에스테르(D-homophenylalanine ethyl ester) (3.0 g, 12 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 2.40 g (55%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 1.27 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3) 1.87-2.16 (2H, m, CH2), 2.41-2.56 (4H, m, 2xCH2), 2.86-2.93 (2H, m, CH2), 3.73 (3H, s, CH3O), 4.14 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.62-4.68 (1H, m, CH), 5.90 (1H, m, NH), 6.81 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.11-7.15 (4H, m, phenyl), 7.18-7.21 (1H, m, phenyl), 7.26-7.30 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 370.3 [M + H].
1-10. Diethyl 2-[3-(4-methoxyphenyl)propanoylamino]propanedioate (10j) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (2.5 g, 14 mmol) 및 디에틸 아미노말론산(diethyl aminomalonate) (3.0 g, 14 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 4.40 g (92%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.27 (6H, t, J = 7.2 Hz, 2xCH3), 2.53-2.57 (2H, m, CH2), 2.88-2.92 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, m, CH3), 4.21-4.28 (4H, m, 2xCH2), 5.12-5.13 (1H, m, CH), 6.80-6.82 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.10-7.12 (2H, d, J = 6.8 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 338.1 [M + H].
1-11. Ethyl 2-[3-(4- methoxyphenyl ) propanoylamino ]-4- methylsulfanyl - butanoate (10k) 중간체의 제조
상기한 화합물 (10a-o)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 8 (2.5 g, 14 mmol) 및 DL-메티오닌 에틸 에스테르(DL-methionine ethyl ester) (3.0 g, 14 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 4.7 g (99%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 1.31 (3H, t, J = 6.8 Hz, CH3), 2.08 (3H, s, CH3S), 2.10-2.15 (2H, m, CH2), 2.31-2.61 (4H, m, 2xCH2), 2.91-2.99 (2H, m, CH2), 3.82 (3H, s, CH3O), 4.22-4.26 (2H, q, J = 6.8 Hz, CH2), 4.69-4.73 (1H, m, CH), 6.06-6.08 (1H, m, NH), 6.85-6.88 (2H, m, phenyl), 7.15-7.17 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 340.2 [M + H].
실시예 2. 화합물 11a-k의 제조를 위한 일반적인 절차
건조된 디클로로메탄 중의 화합물 10a-k (1.0 당량)의 용액에 오산화인(phosphorous pentoxide) (2.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시킨 다음, 20% KOH 수용액을 처리하고 30 분 동안 격렬하게 교반하였다. 혼합물을 분별 깔때기로 옮긴 다음, 디클로로메탄으로 3 회 추출하였다. 합쳐진 유기 추출물을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시킨 후, n-헥산/에틸 아세테이트 = 3:1 로 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 11a-k를 점성 오일로서 수득하였다.
2-1. 5-Ethoxy-2-(4-methoxyphenethyl)oxazole (11a)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10a(1.3 g, 4.9 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (2.8 g, 9.8 mmol) 으로부터 제조되었다.
Yield 1.3 g (99%); 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 1.29 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.01 (3H, s, CH3), 3.94 (2H, s, CH2), 4.05 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 7.23-34 (5H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 248.3 [M + H].
2-2. 5-Ethoxy-2-(4-methoxyphenethyl)-4-methyloxazole (11b)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10b(6.4 g, 22 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (13 g, 44 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 5.3 g (91%); 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 1.31 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.01 (3H, s, CH3), 2.83 (2H, t, J = 6.0 Hz, CH2), 2.90 (2H, t, J = 6.0 Hz, CH2), 4.05(3H, s, OCH3), 4.32 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.81 (2H, d, J = 8.7 Hz, phenyl), 7.10 (2H, d, J = 8.7 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 262.4 [M + H].
2-3. 4-Ethyl-5-methoxy-2-(4-methoxyphenethyl)oxazole (11c)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10c(1.4 g, 4.9 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (2.8 g, 9.8 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 1.1 g (88%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.16 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.38 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 2.83-3.00 (4H, m, 2xCH2), 3.77 (3H, s, OCH3), 3.84 (3H, s, OCH3), 6.79-6.85 (2H, m, phenyl), 7.06-7.13 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 262.4 [M + H].
2-4. 5-Ethoxy-2-(4-methoxyphenethyl)-4-propyloxazole (11d)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10d(1.0 g, 3.3 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (1.9 g, 6.5 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.55 g (58%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.83-0.96 (3H, m, CH3), 1.25-1.37 (3H, m, CH3), 1.52-1.64 (2H, m, CH2), 2.25-2.36 (2H, m, CH2), 2.80-3.00 (4H, m, 2xCH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 4.01-4.12 (2H, m, CH2), 6.75-6.84 (2H, m, phenyl), 7.03-7.13 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 290.0 [M + H].
2-5. 4-Butyl-5-methoxy-2-(4-methoxyphenethyl)oxazole (11e)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10e(0.78 g, 2.4 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (1.4 g, 4.9 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.67 g (91%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.88 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.29-1.34 (2H, m, CH2), 1.52-1.58 (2H, m, CH2), 2.84-2.89 (2H, m, CH2), 2.93-2.98 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 3.84 (3H, s, CH3O), 6.80-6.82 (2H, m, phenyl), 7.08-7.10 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 290.2 [M + H].
2-6. 5-Ethoxy-4-isopropyl-2-(4-methoxyphenethyl)oxazole (11f)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10f(3.0 g, 9.8 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (5.5 g, 20 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 2.4 g (84%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 1.18-1.20 (6H, m, 2xCH3), 1.33 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.74-2.81 (1H, m, CH), 2.84-2.89 (2H, m, CH2), 2.93-2.98 (2H, m, CH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 4.11 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.81 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.09 (2H, d, J = 8.8Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 290.7 [M + H].
2-7. 5-Ethoxy-4-isobutyl-2-(4-methoxyphenethyl)oxazole (11g)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10g(3.0 g, 9.3 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (5.3 g, 19 mmol)으로부터 제조되었다.
*Yield 2.7 g (94%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.89 (6H, d, J = 6.8 Hz, 2xCH3), 1.24 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.40-1.53 (2H, m, CH2), 1.53-1.58 (1H, m, CH), 2.44-2.57 (2H, m, CH2), 2.89-2.96 (2H, m, CH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 4.15 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 5.72-5.74 (1H, m, NH), 6.82 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.12 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 303.8 [M + H].
2-8. 4-Benzyl-5-ethoxy-2-(4-methoxyphenethyl)oxazole (11h)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10h(5.1 g, 14 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (8.2 g, 28 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 4.0 g (82%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 1.29 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.86-2.98 (2H, m, 2xCH2), 3.73 (2H, s, CH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 4.05 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.81 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.19-7.31 (5H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 338.4 [M + H].
2-9. 5-Ethoxy-2-(4-methoxyphenethyl)-4-phenethyloxazole (11i)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10i(2.5 g, 6.7 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (3.8 g, 13 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 2.3 g (98%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 1.20 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3) 2.65 (2H, m, CH2), 2.88-3.01 (4H, m, 2xCH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 3.82 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH3), 6.85 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.13 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.15-7.19 (3H, m, phenyl), 7.24-7.28 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 352.4 [M + H].
2-10. Ethyl 5-ethoxy-2-(4-methoxyphenethyl)oxazole-4-carboxylate (11j)의 제조
트리페닐포스핀 (4.1 g, 15 mmol)을 포함하는 무수 디클로로메탄 용액에 요오드 (3.9 g, 15 mmol), 트리에틸아민 (4.3 mL, 31 mmol)과, 화합물 10j (2.6 g, 8.0 mmol)를 포함하는 무수 디클로로메탄 용액을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반한 후, 물로 세척 하였다. 유기층은 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시킨 다음, n-헥산/에틸 아세테이트 = 3:1 로 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 11j를 점성 오일로 수득하였다.
Yield 1.6 g (63%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.33 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.40 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.93-2.96 (4H, m, 2xCH2), 3.77 (3H, s, CH3), 4.31 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.38 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.81 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.08 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 320.2 [M + H].
2-11. 5-Ethoxy-2-(4-methoxyphenethyl)-4-(2-(methylthio)ethyl)oxazole (11k)의 제조
상기한 화합물 (11a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 10k(4.7 g, 13 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (7.9 g, 28 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 2.7 g (61%); 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 1.32 (3H, t, J = 6.0 Hz, CH3), 2.01 (3H, s, CH3), 2.91 (2H, t, J = 5.4 Hz, CH2), 3.04 (2H, t, J = 5.4 Hz, CH2), 3.91 (3H, s, COOCH3), 4.06 (2H, q, J = 6.0 Hz, CH2), 7.27 (2H, d, J = 8.1 Hz, phenyl), 7.95 (2H, d, J = 8.1 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 322.5 [M + H].
실시예 3. 화합물 12a-k의 제조를 위한 일반적인 절차
디메틸말리에이트(dimethyl maleate) (2.0 당량)를 순수한 11a-k (1.0 당량)에 첨가 하였다. 혼합물을 5 시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 포화 수성 중탄산 나트륨으로 희석시킨 다음, 디클로로메탄으로 3회 추출 하였다. 혼합한 유기 추출물을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시킨 다음, n-헥산/에틸 아세테이트 = 7:1 로 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 12a-k를 점성 오일로서 수득 하였다.
3-1. Dimethyl 5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylate (12a)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11a(0.84 g, 3.4 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (0.85 g, 6.8 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 0.35 g (30%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 2.92 (4H, s, 2xCH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 3.89 (3H, s, CH3O), 3.96 (3H, s, CH3O), 6.81-6.83 (2H, m, phenyl), 7.09-7.11 (2H, m, phenyl), 8.53 (1H, s, CH); MS (ESI): m/z = 346.3 [M + H].
3-2. Dimethyl 5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6- methylpyridine -3,4- dicarboxylate (12b)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11b(1.5 g, 4.2 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (1.0 g, 8.4 mmol)로부터 제조되었다.
Yield 0.56 g (37%); 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 3.02 (3H, s, CH3), 3.04 (2H, t, J = 4.8 Hz, CH2), 3.32 (2H, t, J = 4.8 Hz, CH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 4.00 (3H, s, CH3O), 4.08 (3H, s, CH3O), 6.83 (2H, d, J = 5.4 Hz, phenyl), 7.27 (1H, d, J = 5.4 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 360.4 [M + H].
3-3. Dimethyl 6-ethyl-5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )pyridine-3,4- dicarboxylate (12c)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11c (1.3 g, 4.3 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (1.1 g, 8.6 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.83 g (52%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.27 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.86-2.97 (6H, m, 3xCH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 3.86 (3H, s, CH3O), 3.93 (3H, s, CH3O), 6.78-6.84 (2H, m, phenyl), 7.07-7.14 (2H, m, phenyl), 10.53 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 373.5 [M + H].
3-4. Dimethyl 5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6- propylpyridine -3,4- dicarboxylate (12d)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11d(0.55 g, 1.9 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (0.48 g, 3.8 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.23 g (30%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 0.98 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.69-1.78 (2H, m, CH2), 2.25-2.36 (2H, m, CH2), 2.85-2.93 (6H, m, 3xCH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 3.85 (3H, s, CH3O), 3.93 (3H, s, CH3O), 6.77-6.84 (2H, m, phenyl), 7.06-7.14 (2H, m, phenyl), 10.52 (1H, s, CH); MS (ESI): m/z = 388.2 [M + H].
3-5. Dimethyl 6-butyl-5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )pyridine-3,4- dicarboxylate (12e)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11e(0.67 g, 2.2 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (0.55 g, 4.4 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.24 g (27%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 0.92 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.36-1.44 (2H, m, CH2), 1.64-1.71 (2H, m, CH2), 2.86-2.93 (6H, m, 3xCH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 3.85 (3H, s, CH3O), 3.92 (3H, s, CH3O), 6.78-6.81 (2H, m, phenyl), 7.08-7.11 (2H, m, phenyl), 10.51 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 402.1 [M + H].
3-6. Dimethyl 5- hydroxy -6-isopropyl-2-(4- methoxyphenethyl )pyridine-3,4- dicarboxylate (12f)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11f(2.0 g, 6.9 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (1.7 g, 14 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.56 g (21%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 1.23-1.33 (6H, m, 2xCH3), 2.89-2.96 (4H, m, CH2), 3.51-3.56 (1H, m, CH), 3.77 (3H, s, CH3O), 3.85 (3H, s, CH3O), 3.92 (3H, s, CH3O), 6.79 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.08 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 10.55 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 387.7 [M + H].
3-7. Dimethyl 5- hydroxy -6- isobutyl -2-(4- methoxyphenethyl )pyridine-3,4- dicarboxylate (12g)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11g (2.0 g, 6.6 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (2.2 g, 13 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.86 g (34%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.97 (6H, d, J = 6.8 Hz, 2xCH3), 2.15-2.22 (1H, m, CH), 2.77 (2H, d, J = 7.2 Hz, CH2), 2.92 (4H, s, CH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 3.85 (3H, s, CH3O), 3.93 (3H, s, CH3O), 6.80 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl) 7.10 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 10.50 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 401.7 [M + H].
3-8. Dimethyl 6-benzyl-5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )pyridine-3,4- dicarboxylate (12h)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11h (3.9 g, 12 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (3.0 g, 24 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 1.4 g (27%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 2.90-2.96 (4H, m, 2xCH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 3.85 (3H, s, CH3O), 3.91 (3H, s, CH3O), 4.24 (2H, s, CH2), 6.80 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.18-7.34 (4H, m, CH), 10.51 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 436.3 [M + H].
*3-9. Dimethyl 5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6- phenethylpyridine -3,4- dicarboxylate (12i)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11i (1.0 g, 2.9 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (0.71 g, 5.8 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.36 g (28%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 2.91 (4H, s, 2xCH2), 3.03-3.07 (2H, m, CH2), 3.21-3.25 (2H, m, CH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 3.87 (3H, s, CH3O), 3.95 (3H, s, CH3O), 6.84 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.12 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.27-7.30 (5H, m, CH), 10.56 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 450.2 [M + H].
3-10. 2-Ethyl 4,5- dimethyl 3- hydroxy -6-(4- methoxyphenethyl )pyridine-2,4,5- tricarboxylate (12j)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11j (1.0 g, 3.1 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (0.78 g, 6.2 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.32 g (24%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.26 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.50-2.59 (2H, m, CH2), 3.16-3.23 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 3.78 (3H, s, CH3O), 3.81 (3H, s, CH3O), 4.20-4.29 (2H, m, CH2), 6.80-6.84 (2H, m, phenyl), 7.06-7.12 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 416.0[M - H].
3-11. Dimethyl - hydroxy -2-[2-(4- methoxyphenyl )ethyl]-6-(2- methylsulfanylethyl )pyridine-3,4-dicarboxylate (12k)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11k (1.0 g, 3.1 mmol) 및 디메틸 말리에이트(dimethyl maleate) (0.78 g, 6.2 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.47 g (36%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 2.18 (3H, s, CH3S), 2.89- 2.97 (6H, m, 3xCH2), 3.19-3.23 (2H, m, CH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 3.87 (3H, s, CH3O), 3.95 (3H, s, CH3O), 6.82 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.10 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 10.57 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 420.3 [M + H].
3-11. Dimethyl 5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6-(2-( methylsulfonyl )ethyl)pyridine-3,4-dicarboxylate (12l)의 제조
화합물 12k (50 mg, 0.12 mmol)를 녹인 메탄올:테트라 히드로푸란 (3:1, 0.5 mL) 용액에 옥손(Oxone®) (221 mg, 0.36 mmol)을 녹인 물 (0.5 mL)을 0 ℃에서 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 중탄산 나트륨에 붓고 클로로포름으로 추출하였다.
합쳐진 유기 추출물을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공에서 농축시킨 다음, n-헥산/에틸 아세테이트 = 1:1 로 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 12l을 점성 오일로서 수득 하였다.
Yield 48 mg (88%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 2.80-2.82 (2H, m, CH2), 2.89-2.91 (2H, m, CH2), 2.99 (3H, s, CH3S) 3.17-3.20 (2H, m, CH2), 3.44-3.48 (2H, m, CH2), 3.66 (3H, s, CH3O), 3.72 (3H, s, CH3O), 3.77 (3H, s, CH3O), 6.85-6.88 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.02-7.04 88 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 452.0 [M + H].
실시예 4. 화합물 13a-l의 제조를 위한 일반적인 절차
화합물 12a-1를 20% KOH 수용액에 녹인 용액을 6시간 동안 격렬하게 교반하였다. 산성화를 위해 농축 HCl 용액을 혼합물에 첨가하였다. 침전된 생성물을 과량의 물 및 클로로포름으로 여과하였다. 그 후, 생성물을 건조시켜 화합물 13a-1을 백색 고체로서 수득하였다.
4-1. 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13a)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12a (0.20 g, 0.63 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.11 g (52%); 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ ppm 2.79-3.00 (4H, m, 2xCH2), 3.71 (3H, s, CH3O), 6.82-6.85 (2H, m, phenyl), 7.09-7.12 (2H, m, phenyl), 8.30 (1H, s, CH); MS (ESI): m/z = 318.2 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C16H15NO6): calcd. 318.0972, found. 318.0957; Purity 98.1%.
4-2. 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methylpyridine-3,4-dicarboxylic acid (13b)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12b (0.20 g, 0.55 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.12 g (65%); 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 2.25 (3H, s, CH3), 2.80-2.95 (4H, m, 2xCH2), 3.80 (3H, s, CH3O), 6.91 (2H, d, J = 8.7 Hz, phenyl), 7.21 (2H, d, J =8.7 Hz, phenyl); 13C-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 19.07, 35.48, 37.68, 55.43, 114.12, 120.40, 128.32, 129.68, 135.06, 142.99, 144.39, 157.83, 166.88, 171.98, 175.15; MS (ESI): m/z = 332.3 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C17H17NO6): calcd. 332.1129, found. 332.1115; Purity 98.1%.
4-3. 6-Ethyl-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13c)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12c (0.30 g, 0.80 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 97 mg (35%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1.14 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.43-2.92 (6H, m, 3xCH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.79-6.85 (2H, m, phenyl), 7.02-7.08 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 345.7 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C18H19NO6): calcd. 346.1285, found. 346.1266; Purity 97.1%.
4-4. 5-Hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-propylpyridine-3,4-dicarboxylic acid (13d)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12d (0.20 g, 0.52 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.10 g (51%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.90 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.54-1.64 (2H, m, CH2), 2.73-2.80 (4H, m, 2xCH2), 2.85-2.89 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.78-6.85 (2H, m, phenyl), 7.02-7.08 (2H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.8, 21.1, 31.3, 34.4, 34.7, 55.2, 113.9, 114.0, 123.8, 129.3, 129.4, 132.4, 149.9, 157.9, 167.3, 167.8; MS (ESI): m/z = 359.8 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C19H21NO6): calcd. 360.1442, found. 360.1421; Purity 97.3%.
4-5. 6-Butyl-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13e)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12e (0.24 g, 0.59 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.12 g (57%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.84 (3H, t, J
= 7.2 Hz, CH2), 1.24-1.30 (2H, m, CH2), 1.51-1.55 (2H, m, CH2), 2.45-2.47 (2H, m, CH2), 2.76-2.82 (2H, m, CH2), 2.85-2.90 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.80-6.82 (2H, m, phenyl), 7.03-7.05 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 374.1 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C20H23NO6): calcd. 374.1598, found.
374.1575; Purity 97.4%.
4-6. 5- Hydroxy -6-isopropyl-2-(4- methoxyphenethyl )pyridine-3,4- dicarboxylic acid (13f)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12f (0.30 g, 0.77 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.14 g (52%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 1.16-1.18 (6H, m, 2xCH3), 2.81-2.90 (4H, m, CH2), 3.37-3.43 (1H, m, CH), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.79 (2H, d, J = 8 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 22.3, 27.8, 34.1, 34.6, 37.8, 55.1, 114.0, 124.0, 129.4, 132.2, 149.1, 157.9, 167.2, 167.7; MS (ESI): m/z = 359.5 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C19H21NO6): calcd. 360.1442, found. 360.1423; Purity 96.1%.
4-7. 5-Hydroxy-6-isobutyl-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13g)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12g (0.86 g, 2.2 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.35 g (43%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 0.82 (6H, d, J = 6.8 Hz, 2xCH3), 1.99-2.02 (1H, m, CH), 2.68 (2H, m, CH2), 2.78-2.92 (4H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.82 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 374.5 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C20H23NO6): calcd. 374.1598, found. 374.1572; Purity 98.0%.
4-8. 6-Benzyl-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)pyridine-3,4-dicarboxylic acid (13h)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12h (0.45 g, 1.0 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.39 g (90%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 2.80-2.92 (4H, m, 2xCH2), 3.68 (3H, s, CH3O), 4.13 (2H, s, CH2), 6.78 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.15-7.26 (5H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 34.7, 35.5, 36.7, 55.4, 114.3, 126.9, 128.9, 129.1, 129.7, 133.0, 138.1, 149.4, 158.1, 168.1, 168.4; MS (ESI): m/z = 408.2 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C23H21NO6): calcd. 408.1442, found. 408.1442; Purity 98.6%.
4-9. 5- Hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6- phenethylpyridine -3,4- dicarboxylic acid (13i)의 제조
*상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12i (0.15 g, 0.33 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 88 mg (63%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 2.72-2.76 (2H, m, CH2), 2.84-2.92 (4H, m, 2xCH2), 3.06-3.10 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.81 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.04 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.16-7.20 (3H, m, phenyl), 7.25-7.28 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 421.0 [M - H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C24H23NO6): calcd. 422.1598, found. 422.1572; Purity 95.0%.
4-10. 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)pyridine-2,4,5-tricarboxylic acid (13j)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12j (0.20 g, 0.48 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.10 g (55%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2.66-2.70 (2H, m, CH2), 3.05-3.09 (2H, m, CH2), 3.65 (3H, s, CH3), 6.78 (2H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.06 (2H, d, J = 8.0 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 362.1 [M + H].
4-11. 5- Hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6-(2-( methylthio )ethyl)pyridine-3,4- dicarboxylic acid (13k)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12k (0.47 g, 1.1 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 0.22 g (52%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 2.06 (3H, s, CH3S), 2.76- 2.90 (6H, m, 3xCH2), 3.04-3.08 (2H, m, CH2), 3.68 (3H, s, CH3O), 6.81 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl), 7.05 (2H, d, J = 8.4 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 392.4 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C19H21NO6S): calcd. 392.1162, found. 392.1142; Purity 95.4%.
4-12. 5- Hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6-(2-( methylsulfonyl )ethyl)pyridine-3,4- dicarboxylic acid (13l)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 12l (70 mg, 0.16 mmol) 및 20% KOH 수용액(5.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 32 mg (47%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 2.80-2.83 (2H, m, CH2), 2.85-2.87 (2H, m, CH2), 3.00 (3H, s, CH3S), 3.16-3.20 (2H, m, CH2), 3.43-3.47 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.80-6.82 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl), 7.06-7.08 (2H, d, J = 8.8 Hz, phenyl);13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 24.0, 34.5, 36.2, 40.4, 51.1, 55.1, 113.9, 122.0, 128.3, 129.3, 129.4,
133.3, 147.3, 157.7, 168.3, 168.6; MS (ESI): m/z = 423.8 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C19H21NO8S): calcd. 424.1061, found. 424.1038; Purity 96.8%.
실시예 5. Ethyl 4-cyano-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methylnicotinate (14)의 제조
상기한 화합물 (12a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11b (0.49 g, 1.9 mmol) 및 에틸-cis-베타-시아노아크릴레이트(ethyl cis-beta-cyanoacrylate) (0.23 mL, 1.9 mmol)으로부터 제조되었다.
Yield 0.18 g (27%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.38 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.58 (3H, s, CH3), 2.88-2.95 (2H, m, CH2), 3.17-3.21 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH3), 4.38-4.34 (2H, m, CH2), 6.79-6.81 (2H, m, phenyl), 7.08-7.11 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 341.5 [M + H].
실시예 6. Ethyl 5- hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6-methyl-4-(1H- tetrazol -5- yl ) nicotinate (15)의 제조
화합물 14 (0.18 g, 0.52 mmol), 소듐 아자이드 (33 mg, 0.52 mmol) 및 염화 암모늄 (28 mg, 0.52 mmol)을 DMF (10 mL)에 녹인 혼합물을 둥근 바닥 플라스크에 넣고 90℃에서 하룻밤 교반하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 냉각시켰다. 1N HCl 수용액(17 mL)을 첨가하여 침전물의 형성을 유도하였다. 침전된 생성물을 여과하여 수득하였다. 수득된 침전물을 과량의 물 및 클로로포름으로 세척하였다. 그 후, 생성물을 건조시켜 화합물 15를 백색 고체로서 수득하였다.
Yield 95 mg (48%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 0.96 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 2.52 (3H, s, CH3), 2.80-2.85 (2H, m, CH2), 2.88-2.96 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3), 4.05-4.12 (2H, m, CH2), 6.80-6.82 (2H, m, phenyl), 7.05-7.08 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 384.3 [M + H].
실시예 7. 4-Cyano-5-hydroxy-2-(4-methoxyphenethyl)-6-methylnicotinic acid (16)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 14 (0.10 g, 0.30 mmol) 및 20% KOH 수용액(3.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 30 mg (30 %); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2.44 (3H, s, CH3), 2.83-2.87 (2H, m, CH2), 3.03-3.07 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3), 6.78-6.82 (2H, m, phenyl), 7.04-7.10 (2H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 17.4, 35.1, 37.8, 55.2, 113.8, 113.9, 114.0, 122.6, 129.3, 129.4, 133.3, 146.9, 157.7, 169.1; MS (ESI): m/z = 311.3 [M - H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C17H16N2O4): calcd. 313.1183, found. 313.1167; Purity 97.6%.
실시예 8. 5- Hydroxy -2-(4- methoxyphenethyl )-6-methyl-4-(1H- tetrazol -5- yl )nicotinic acid ( 17)의 제조
상기한 화합물 (13a-l)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 15 (0.10 g, 0.30 mmol) 및 20% KOH 수용액(3.0 mL)으로부터 제조되었다.
Yield 31 mg (30%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2.51 (3H, s, CH3), 2.81-2.86 (2H, m, CH2), 2.92-2.97 (2H, m, CH2), 3.68 (3H, s, CH3), 6.80-6.84 (2H, m, phenyl), 7.08-7.11 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 354.4 [M - H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C17H17N5O4): calcd. 356.1353, found. 356.1335; Purity 98.7%.
실시예 9. 7- Hydroxy -4-(4- methoxyphenethyl )-6- methylfuro[3,4-c]pyridine -1,3- dione ( 18)의 제조
화합물 11b (0.50 g, 1.9 mmol) 및 말레산 무수물 (0.19 g, 1.9 mmol)을 벤젠(6 mL)에 녹인 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 냉각시켰다. 침전된 생성물을 여과하여 수득하였다. 수득된 침전물을 과량의 디에틸에테르로 세척하였다. 그 후, 생성물을 건조시켜 화합물 18을 얻었다.
Yield 0.32 g (54%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2.52 (3H, s, CH3), 2.82-2.86 (2H, m, CH2), 3.16-3.20 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3), 6.79-6.81 (2H, m, phenyl), 7.09-7.11 (2H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 16.6, 34.8, 35.3, 55.5, 114.2, 114.4, 123.9, 129.6, 132.9, 147.3, 158.2, 167.5, 168.1; MS (ESI): m/z = 314.3 [M + H].
실시예 10. 8- Hydroxy -5-(4- methoxyphenethyl )-7-methyl-2,3- dihydropyrido[3,4-d]pyridazine -1,4-dione (19)의 제조
히드라진 수화물 (36 μL, 1.2 mmol)을 물(400 μL)에 녹인 용액에 화합물 18 (0.29 g, 0.92 mmol)을 녹인 아세트산 (300 μL)을 적가 하였다. 아세트산 나트륨 무수물 (0.098 g, 1.2 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2 시간 동안 가열 환류 하였다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시킨 다음, 클로로포름/메탄올 = 10:1의 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 19를 수득 하였다.
Yield 0.14 g (46%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 2.47 (3H, s, CH3), 2.79-2.83 (2H, m, CH2), 3.51-3.55 (2H, m, CH2), 3.73 (3H, s, CH3), 6.77-6.79 (2H, m, phenyl), 7.18-7.20 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 328.1 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C17H17N3O4): calcd. 328.1292, found. 328.1277; Purity 95.1%.
실시예 11. 6-(4-Methoxyphenethyl)-2-methyl-4-(methylsulfonyl)pyridin-3-ol (20)의 제조
12a-k의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11b (0.50 g, 1.9 mmol) 및 메틸 비닐 술폰 (0.41 mL, 3.8 mmol)으로부터 합성하였다.
Yield 0.30 g (49%); 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 2.49 (3H, s, CH3), 2.88 (2H, m, CH2), 2.98 (2H, m, CH2), 3.22 (3H, s, SCH3), 3.72 (3H, s, OCH3), 6.76-6.81 (2H, m, phenyl), 7.02-7.06 (2H, m, phenyl), 7.31 (1H, s, phenyl); MS (ESI): m/z = 322.2 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C16H19NO4S): calcd. 322.1108, found. 322.1100; Purity 96.8%.
실시예 12. Methyl 3-hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2-methylisonicotinate (21a)의 제조
12a-k의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11b (1.0 g, 3.8 mmol) 및 메틸 아크릴 레이트 (0.68 mL, 7.6 mmol)로부터 합성하였다.
Yield 0.43 g (37%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 2.54 (3H, s, CH3), 2.91-3.01 (4H, m, 2xCH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 3.95 (3H, s, CH3O), 6.79-6.84 (2H, m, phenyl), 7.09-7.14 (2H, m, phenyl), 7.24 (1H, s, phenyl), 10.43 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 302.1 [M + H].
실시예 13. Methyl 3-hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2,5-dimethylisonicotinate (21b)의 제조
12a-k의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11b (1.2 g, 4.4 mmol) 및 메틸 크로토네이트 (0.93 mL, 8.8 mmol)로부터 합성하였다.
Yield 0.49 g (35%); 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 2.36 (3H, s, CH3), 2.51 (3H, s, CH3), 2.84-2.92 (2H, m, CH2), 3.00-3.08 (2H, m, CH2), 3.79 (3H, s, CH3O), 3.99 (3H, s, CH3O), 6.80-6.85 (2H, m, phenyl), 7.10-7.16 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 316.2 [M + H].
실시예 14. Methyl 3- hydroxy -6-(4- methoxyphenethyl )-5-methyl-2- propylisonicotinate (21c)의 제조
12a-k의 합성을위한 일반적인 절차에 따라 화합물 11d (1.6 g, 5.5 mmol) 및 메틸크로토네이트 (1.2 mL, 11 mmol)로부터 합성하였다.
Yield 0.64 g (34%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 0.98 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.68-1.76 (2H, m, CH2), 2.33 (3H, s, CH3), 2.78-2.85 (2H, m, CH2), 2.85-2.93 (2H, m, CH2), 3.00-3.07 (2H, m, CH2), 3.77 (3H, s, CH3O), 3.97 (3H, s, CH3O), 6.79-6.82 (2H, m, phenyl), 7.08-7.12 (2H, m, phenyl), 10.21 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 344.0 [M + H].
실시예 15. 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2-methylisonicotinic acid (22a)의 제조
20% KOH 수용액(3.0 mL)에 화합물 21a (0.19 mg, 0.63 mmol)를 녹인 용액을 6시간 동안 격렬하게 교반하였다. 산성화를 위해 혼합물에 진한 HCl 용액을 첨가하고 혼합물을 진공 농축시켰다. KCl 염을 여과하여 제거하였다. 그 후, 여액을 진공 농축시키고, 잔류물을 클로로포름/메탄올 = 20:1로 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 22a를 수득 하였다.
Yield 87 mg (48%;) 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) 2.51 (3H, s, CH3), 2.74-2.82 (2H, m, CH2), 3.15-3.20 (2H, m, CH2), 3.71 (3H, s, CH3O), 6.80-6.86 (2H, m, phenyl), 7.11-7.16 (2H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 14.9, 34.4, 55.1, 114.0, 122.9, 129.5, 132.2, 144.6, 157.8, 167.9; MS (ESI): m/z = 288.2 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C16H17NO4): calcd. 288.1230, found. 288.1213; Purity 97.3%.
실시예 16. 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-2,5-dimethylisonicotinic acid (22b)의 제조
화합물 22a의 합성 과정에 따라 21b (65 mg, 0.21 mmol) 및 20% KOH 수용액(3.0 mL)으로부터 합성 하였다.
Yield 27 mg (43%;) 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2.41 (3H, s, CH3), 2.43 (3H, s, CH3), 2.71-2.78 (2H, m, CH2), 2.93-3.01 (2H, m, CH2), 3.68 (3H, s, CH3O), 6.80-6.85 (2H, m, phenyl), 7.06-7.12 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 302.1 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C17H19NO4): calcd. 302.1387, found. 302.1370; Purity 95.2%.
실시예 17. 3-Hydroxy-6-(4-methoxyphenethyl)-5-methyl-2-propylisonicotinic acid (22c)의 제조
화합물 22a의 합성 과정에 따라 21c (0.12 g, 0.35 mmol) 및 20% KOH 수용액(3.0 mL)으로부터 합성하였다.
Yield 54 mg (47%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.85 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.51-1.61 (2H, m, CH2), 2.46 (3H, s, CH3), 2.62-2.70 (2H, m, CH2), 2.72-2.79 (2H, m, CH2), 2.87-2.97 (2H, m, CH2), 3.00-3.07 (2H, m, CH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.76-6.81 (2H, m, phenyl), 7.03-7.08 (2H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 14.1, 15.8, 21.3, 33.0, 34.2, 36.2 55.1, 113.8, 125.9, 129.5, 129.6, 133.8, 145.0, 146.0, 157.6, 172.4; MS (ESI): m/z = 329.9 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C19H23NO4): calcd. 330.1700, found. 330.1681; Purity 96.9%.
실시예 18. 5- Hydroxy -2-[2-(4- methoxyphenyl )ethyl]-3-methyl-6- propyl -pyridine-4- carboxamide (23)의 제조
화합물 21c (50 mg, 0.15 mmol)를 30% 암모니아수 (3.0 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 12 시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시킨 다음, 클로로포름/메탄올 = 20:1 로 실리카 겔상에서 크로마토 그래피하여 화합물 23을 수득 하였다.
Yield 16 mg (32%); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.88 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.54-1.63 (2H, m, CH2), 2.07 (3H, s, CH3), 2.60-266 (2H, m, CH2), 2.77-2.82 (4H, m, 2xCH2), 3.67 (3H, s, CH3O), 6.77-6.82 (2H, m, phenyl), 7.09-7.13 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 328.9 [M + H].
실시예 19. Ethyl 2-(2-(3-phenoxyphenyl)acetamido)pentanoate (24)의 제조
화합물 (10a-k)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 3-페녹시페닐아세트산 (3.8g, 17mmol) 및 L-노르발린 에틸 에스테르 (3.1 g, 17 mmol)로부터 제조하였다.
Yield 5.2 g (86 %); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.87 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.16-1.28 (2H, m, CH2), 1.24 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.52-1.62 (2H, m, CH2), 1.71-1.82 (2H, m, CH2), 3.54 (3H, t, CH3), 4.11-4.20 (2H, m, CH2), 4.52-4.60 (2H, m, CH2), 5.88-5.95 (1H, m, NH), 6.89-6.95 (2H, m, phenyl), 6.98-7.03 (3H, m, phenyl), 7.07-7.13 (1H, m, phenyl), 7.28-7.36 (3H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 355.9 [M + H].
실시예 20. 5-Ethoxy-2-(3-phenoxybenzyl)-4-propyloxazole (25)의 제조
화합물 11a-k의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 24 (4.7 g, 13 mmol) 및 오산화인(phosphorous pentoxide) (7.5 g, 26 mmol)으로부터 합성하였다.
Yield 4.8 g (97%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.91 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.24 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.55-1.63 (2H, m, CH2), 2.31-2.35 (2H, m, CH2), 3.91 (2H, s, CH2), 4.01-4.10 (2H, m, CH2), 6.90-6.94 (1H, m, phenyl), 6.90-6.94 (1H, m, phenyl), 6.96-7.02 (3H, m, phenyl), 7.06-7.13 (1H, m, phenyl), 7.22-7.29 (1H, m, phenyl), 7.29-7.35 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 337.9 [M + H].
실시예 21. Dimethyl 5- hydroxy -2-(3- phenoxybenzyl )-6- propylpyridine -3,4- dicarboxylate ( 26)의 제조
화합물 12a-k의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 25 (2.1 g, 6.2 mmol) 및 디메틸 말리에이트 (2.3 mL, 18 mmol)로부터 합성하였다.
Yield 1.0 g (37 %); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.94 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.64-1.75 (2H, m, CH2), 2.81-2.87 (2H, m, CH2), 3.78 (3H, s, CH3O), 3.92 (3H, s, CH3O), 4.02 (2H, s, CH2), 6.78-6.83 (2H, m, phenyl), 6.88-6.91 (1H, m, phenyl), 6.94-6.99 (2H, m, phenyl), 7.05-7.10 (1H, m, phenyl), 7.17-7.22 (1H, m, phenyl), 7.27-7.33 (2H, m, phenyl), 10.33 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 436.8 [M + H].
실시예 22. 5-Hydroxy-2-(3-phenoxybenzyl)-6-propylpyridine-3,4-dicarboxylic acid (27)의 제조
화합물 (13a-1)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 26 (93 mg, 0.21 mmol) 및 20% KOH 수용액(20 mL)으로부터 합성하였다.
Yield 33 mg (38 %); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 0.86 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.55-1.65 (2H, m, CH2), 2.71-2.78 (2H, m, CH2), 4.03 (2H, s, CH2), 6.78-6.82 (1H, m, phenyl), 6.87-6.89 (1H, m, phenyl), 6.94-6.98 (3H, m, phenyl), 7.10-7.15 (1H, m, phenyl), 7.23-7.29 (1H, m, phenyl), 7.33-7.39 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 407.8 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C23H21NO6): calcd. 408.1442, found. 408.1423; Purity 99.0%.
실시예 23. Methyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (28)의 제조
화합물 12a-k의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 25 (3.6 g, 11 mmol) 및 메틸 크로토네이트 (2.2 mL, 22 mmol)로부터 합성하였다.
Yield 0.92 g (22 %); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.96 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.64-1.75 (2H, m, CH2), 2.32 (3H, s, CH3), 2.77-2.84 (2H, m, CH2), 3.95 (3H, s, CH3O), 4.16 (2H, s, CH2), 6.76-6.80 (2H, m, phenyl), 6.84-6.87 (1H, m, phenyl), 6.93-6.97 (2H, m, phenyl), 7.04-7.09 (1H, m, phenyl), 7.15-7.20 (1H, m, phenyl), 7.26-7.32 (2H, m, phenyl), 10.32 (1H,
s, OH); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 14.2, 15.5, 21.6, 33.6, 52.8, 116.6, 118.7, 119.1, 123.9, 125.9, 130.4, 131.3, 142.1, 145.8, 148.0, 148.8, 156.9, 157.2, 167.6; MS (ESI): m/z = 392.0 [M + H].
실시예 24. 3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinic acid (29)의 제조
화합물 22a의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 28 (0.67 g, 1.7 mmol) 및 20% KOH 수용액(10 mL)으로부터 합성하였다.
Yield 0.31 g (48 %); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm 0.84 (3H,
t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.50-1.65 (2H, m, CH2), 2.29 (3H, s, CH3), 2.68-2.82 (2H, m, CH2), 4.12 (2H, s, CH2), 6.77-6.82 (2H, m, phenyl), 6.84-6.87 (1H, m, phenyl), 6.91-6.96 (2H, m, phenyl), 7.06-7.12 (1H, m, phenyl), 7.23-7.28 (1H, m, phenyl), 7.30-7.36 (2H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 14.1,
16.0, 21.5, 31.4, 117.0, 118.5, 119.2, 123.6, 124.1, 130.4, 130.5, 130.7, 156.8, 157.4, 168.7; MS (ESI): m/z = 377.9 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C23H23NO4): calcd. 378.1700, found. 378.1674; Purity 95.6%.
실시예 25. Methyl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate ( 30)의 제조
K2CO3 (2.1 g, 15.3 mmol)의 존재 하에, 화합물 28 (2.0 g, 5.1 mmol)을 건조 아세톤 (15 mL)에 녹인 용액에 벤질 브로마이드 (0.73 mL, 6.1 mmol)를 첨가 하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 반응 완료 후, 반응 혼합물을 냉각시키고 NH4Cl로 중성화시킨 다음, 디클로로 메탄으로 2회 추출 하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시킨 다음, n-헥산/에틸 아세테이트 = 5:1로 실리카겔상에서 크로마토 그래피하여 화합물 30을 수득하였다.
Yield 1.8 g (73%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.93 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.65-1.77 (2H, m, CH2), 2.12 (3H, s, CH3), 2.73-2.80 (2H, m, CH2), 3.82 (3H, s, CH3), 4.13 (2H, s, CH2), 4.89 (2H, s, CH2), 6.78-6.86 (2H, m, phenyl), 6.89-6.93 (1H, m, phenyl), 6.94-7.00 (2H, m, phenyl), 7.05-7.10 (1H, m, phenyl), 7.17-7.24 (1H, m, phenyl), 7.27-7.38 (3H, m, phenyl) ), 7.38-7.39 (2H, m, phenyl) ), 7.39-7.41 (2H, m, phenyl) ; MS (ESI): m/z = 482.2 [M + H].
실시예 26. (3-( Benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4- yl )methanol ( 31)의 제조
0 ℃에서 화합물 30 (0.50 g, 1.0 mmol)을 디에틸 에테르에 녹인 용액에, LiAlH4 (0.23 g, 6.2 mmol)를 건조 디에틸 에테르 (5 mL)에 녹인 현탁액을 0.5 시간에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응 혼합물을 0 ℃에서 N2 대기 하에 1시간 동안 교반하였다. 미 반응 LiAlH4를 포화 NH4Cl 수용액으로 켄칭(quenching)시키고, 반응 혼합물을 디클로로 메탄으로 3회 추출하였다. 합쳐진 유기 추출물을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 혼합물을 셀라이트(celite) 패드를 통해 여과시켰다. 여과된 혼합물을 진공 농축시키고 n-헥산/에틸 아세테이트 = 2:1로 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 31을 수득하였다.
Yield 0.35 g (75%); 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ ppm 0.88 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.54-1.65 (2H, m, CH2), 2.12 (3H, s, CH3), 2.67-2.75 (2H, m, CH2), 4.15 (2H, s, CH2), 4.68 (2H, s, CH2), 4.90 (2H, s, CH2), 6.67-6.70 (1H, m, phenyl), 6.75-6.78 (1H, m, phenyl), 6.87-6.92 (3H, m, phenyl), 7.02-7.08 (1H, m, phenyl), 7.19-7.24 (1H, m, phenyl), 7.26-7.41 (5H, m, phenyl), 7.43-7.47 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 454.9 [M + H].
실시예 27. 4-(Hydroxymethyl)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-3-ol (32)의 제조
화합물 31 (0.10 g, 0.22 mmol)을 메탄올에 녹인 용액에 10% Pd/C (15 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 대기 하에 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 진공 농축시키고, 클로로포름/메탄올 = 20:1 로 실리카겔 상에서 크로마토 그래피하여 화합물 32를 수득하였다.
Yield 50 mg (62%); 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ ppm 0.91 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.52-1.66 (2H, m, CH2), 2.05 (3H, s, CH3), 2.62-2.76 (2H, m, CH2), 3.20-3.25 (2H, m, CH2), 4.08 (2H, s, CH2), 4.81 (3H, s, CH3), 6.62-6.66 (1H, m, phenyl), 6.73-6.77 (1H, m, phenyl), 6.81-6.91 (3H, m, phenyl), 7.02-7.08 (1H, m, phenyl), 7.16-7.22 (1H, m, phenyl), 7.25-7.32 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 364.1 [M + H].
실시예 28. 3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinaldehyde (33)의 제조
화합물 32 (50 mg, 0.14 mmol)를 건조 디클로로 메탄에 용해시키고 활성화 된 이산화망간 (85 mg, 0.98 mmol)을 용액에 첨가 하였다. 반응 혼합물을 N2 대기 하에 실온에서 2시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응 완료 후, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 진공 농축시키고 n-헥산/에틸 아세테이트 = 3:1로 실리카겔 상에서 크로마토그래피 하였다.
Yield 43 mg (85%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.96 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.64-1.75 (2H, m, CH2), 2.45 (3H, s, CH3), 2.77-2.86 (2H, m, CH2), 4.16 (2H, s, CH2), 6.77-6.82 (2H, m, phenyl), 6.85-6.91 (1H, m, phenyl), 6.92-6.95 (1H, m, phenyl), 6.95-6.98 (1H, m, phenyl), 7.04-7.10 (1H, m, phenyl), 7.15-7.23 (1H, m, phenyl), 7.26-7.34 (2H, m, phenyl), 10.42 (1H, s, CHO); MS (ESI): m/z = 361.7 [M + H].
실시예 29. Ethyl (E)-3-(3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4- yl ) acrylate (34)의 제조
NaH (60 % 오일 현탁액 5.0 mg, 0.48 mmol)를 무수 THF에 녹인 현탁액에 트리에틸 포스포노아세테이트(triethyl phosphonoacetate) (24 μL, 0.12 mmol)를 적가 하였다. 5분 동안 교반한 후, 화합물 33 (40 mg, 0.11 mmol)을 녹인 무수 THF 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 생성된 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 농축시키고, n-헥산/에틸 아세테이트 = 3:1 로 실리카겔 상에서 크로마토그래피 하였다.
Yield 33 mg (70%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.93 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.30 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.69 (2H, q, J = 7.6 Hz, CH2), 2.13 (3H, s, CH3), 2.71-2.79 (2H, m, CH2), 4.11 (2H, s, CH2), 4.27 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.38 (1H, d, J = 16.4 Hz, =CH), 6.75-6.80 (2H, m, phenyl), 6.80-6.82 (1H, m, phenyl), 6.92-6.98 (2H, m, phenyl), 7.02-7.09 (1H, m, phenyl), 7.14-7.21 (1H, m, phenyl), 7.26-7.33 (2H, m, phenyl), 7.64 (1H, d, J = 16.4 Hz, =CH); MS (ESI): m/z = 432.0 [M + H].
실시예 30. (E)-3-(3- Hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4- yl )acrylic acid (35)의 제조
화합물 22a의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 34 (35 mg, 0.081 mmol) 및 20% KOH 수용액(7 mL)으로부터 합성하였다.
Yield 12 mg (37%); 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ ppm 0.90 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.56 (2H, q, J = 7.6 Hz, CH2), 2.11 (3H, s, CH3), 2.70-2.77 (2H, m, CH2), 4.09 (2H, s, CH2), 6.61-6.78 (3H, m, phenyl & =CH), 6.86-6.92 (3H, m, phenyl), 7.04-7.08 (1H, m, phenyl), 7.14-7.24 (1H, m, phenyl), 7.26-7.31 (2H, m, phenyl), 7.56 (1H, d, J = 16.4 Hz, =CH); MS (ESI): m/z = 403.6 [M + H].
실시예 31. Ethyl 3-(3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4- yl ) propanoate (36)의 제조
화합물 32의 합성 과정에 따라 화합물 34 (0.10 g, 0.23 mmol) 및 10% Pd/C (15 mg)로부터 합성하였다.
Yield 59 mg (59%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.96 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.23 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.61-1.72 (2H, m, CH2), 2.06 (3H, s, CH3), 2.62-2.70 (2H, m, CH2), 2.73-2.82 (2H, m, CH2), 2.86-2.92 (2H, m, CH2), 4.09 (2H, s, CH2), 4.14 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 6.74-6.84 (2H, m, phenyl), 6.92-6.97 (2H, m, phenyl), 7.03-7.09 (1H, m, phenyl), 7.14-7.20 (1H, m, phenyl), 7.26-7.28 (1H, m, phenyl), 7.28-7.32 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 434.0 [M + H].
실시예 32. 3-(3- Hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4- yl ) propanoic acid (37)의 제조
화합물 22a의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 36 (59 mg, 0.14 mmol) 및 20% KOH 수용액(7 mL)으로부터 합성하였다.
Yield 52 mg (94%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.93 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.59-1.70 (2H, m, CH2), 2.17 (3H, s, CH3), 2.51-2.59 (2H, m, CH2), 2.80-2.90 (2H, m, CH2), 2.96-3.06 (2H, m, CH2), 4.21 (2H, s, CH2), 6.55-6.60 (1H, m, phenyl), 6.79-6.84 (2H, m, phenyl), 6.88-6.93 (2H, m, phenyl), 7.06-7.12 (1H, m, phenyl), 7.23-7.34 (3H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 14.3, 14.5, 21.9, 22.2, 33.0, 33.7, 116.5, 118.7, 119.1, 123.9, 130.3, 130.5, 142.6, 146.1, 156.9, 157.1, 174.7; MS (ESI): m/z = 406.1 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C25H27NO4): calcd. 406.2013, found. 406.1990; Purity 97.8%.
실시예 33. 3-Hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinonitrile (38)의 제조
화합물 12a-k의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 25 (0.50 g, 1.5 mmol) 및 메틸 크로토니트릴 (0.24 mL, 3.0 mmol)로부터 합성되었다.
Yield 0.36 g (67%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.91 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.64-1.74 (2H, m, CH2), 2.34 (3H, s, CH3), 2.74-2.81 (2H, m, CH2), 4.09 (2H, m, CH2), 6.78-6.82 (2H, m, phenyl), 6.85-6.88 (1H, m, phenyl), 6.93-6.98 (2H, m, phenyl), 7.06-7.12 (1H, m, phenyl), 7.17-7.22 (1H, m, phenyl), 7.27-7.33 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 359.1 [M + H];
실시예 34. 3-( Benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinonitrile ( 39)의 제조
화합물 30의 합성 과정에 따라 화합물 38 (0.20 g, 0.56 mmol) 및 벤질 브로마이드 (80 μL, 0.67 mmol)로부터 합성하였다.
Yield .025 g (99%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.90 (3H, t, J
= 7.6 Hz, CH3), 1.60-1.70 (2H, m, CH2), 2.39 (3H, s, CH3), 2.69-2.77 (2H, m, CH2), 4.14 (2H, s, CH2), 5.08 (2H, s, CH2), 6.79-6.85 (2H, m, phenyl), 6.89-6.90 (1H, m, phenyl), 6.94-6.99 (2H, m, phenyl), 7.06-7.11 (1H, m, phenyl), 7.18-7.24 (1H, m, phenyl), 7.28-7.34 (2H, m, phenyl), 7.36-7.44 (3H, m, phenyl), 7.46-7.51 (2H, m, phenyl) ; MS (ESI): m/z = 449.1 [M + H].
실시예 35. (3-( Cyclohexa -2,4- dien -1- ylmethoxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4-yl) methanamine (40)의 제조
화합물 31의 합성 절차에 따라 화합물 39 (51 mg, 0.11 mmol) 및 LiAlH4 (0.23 g, 6.2 mmol)로부터 합성하였다.
Yield 33 mg (66%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.94 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.68-1.79 (2H, m, CH2), 2.19 (3H, s, CH3), 2.74-2.82 (2H, m, CH2), 3.83 (2H, s, CH2), 4.14 (2H, s, CH2), 4.86 (2H, s, CH2), 6.78-6.84 (2H, m, phenyl), 6.90-6.98 (3H, m, phenyl), 7.04-7.09 (1H, m, phenyl), 7.16-7.22 (1H, m, phenyl), 7.26-7.33 (2H, m, phenyl), 7.35-7.47 (5H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 455.2 [M + H].
실시예 36. 4-(Aminomethyl)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylpyridin-3-ol (41)의 제조
화합물 32의 합성 과정에 따라 화합물 40 (0.12 g, 0.26 mmol) 및 10% Pd/C (15 mg)로부터 합성하였다.
Yield 67 mg (71%); 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ ppm 0.91 (3H, t, J = 7.2 Hz, CH3), 1.54-1.65 (2H, m, CH2), 2.03 (3H, s, CH3), 2.64-2.75 (2H, m, CH2), 4.03-4.09 (4H, m, 2xCH2), 6.62-6.66 (2H, m, phenyl), 6.74-6.77 (1H, m, phenyl), 6.82-6.90 (2H, m, phenyl), 7.04-7.08 (1H, m, phenyl), 7.16-7.21 (1H, m, phenyl), 7.30-7.36 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 363.06 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C23H26N2O2): calcd. 363.2067, found. 363.2043; Purity 96.6%.
실시예 37. N-((3-( Benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4- yl )methyl) methanesulfonamide(42)의 제조
화합물 40 (33 mg, 0.073 mmol) 및 트리에틸아민 (12 μL, 0.087 mmol)을 포함하는 무수 디클로로 메탄(3 mL) 용액을 0 ℃로 냉각시키고, 메탄 설포닐 클로라이드 (7 μL, 0.087 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 염수로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4상에서 건조시키고, 진공 농축시킨 다음, 클로로포름/메탄올 = 20:1로 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 화합물 42를 수득하였다.
Yield 26 mg (67%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.95 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3), 1.70-1.80 (2H, m, CH2), 2.19 (3H, s, CH3), 2.62 (3H, s, CH3), 2.79-2.85 (2H, m, CH2), 4.13-4.17 (4H, m, 2xCH2), 4.86-4.90 (2H, m, CH2), 6.75-6.83 (2H, m, phenyl), 6.88-6.92 (1H, m, phenyl), 6.93-6.98 (2H, m, phenyl), 7.05-7.10 (1H, m, phenyl), 7.17-7.23 (1H, m, phenyl), 7.27-7.33 (2H, m, phenyl) , 7.37-7.44 (3H, m, phenyl) , 7.37-7.44 (2H, m, phenyl); MS (ESI): m/z = 531.1 [M + H].
실시예 38. N-((3- Hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylpyridin -4-yl)methyl)methanesulfonamide (43)의 제조
화합물 32의 합성 과정에 따라 화합물 42 (21 mg, 0.040 mmol) 및 10% Pd/C (5.0 mg)로부터 화합물 43을 합성하였다.
Yield 11 mg (62%); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ ppm 0.96 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.63-1.74 (2H, m, CH2), 2.19 (3H, s, CH3), 2.72-2.77 (2H, m, CH2), 2.82 (3H, s, CH3), 4.12 (2H, s, CH2), 4.33 (2H, s, CH2), 6.74-6.81 (2H, m, phenyl), 6.85-6.88 (1H, m, phenyl), 6.92-6.96 (2H, m, phenyl), 7.04-7.10 (1H, m, phenyl), 7.16-7.21 (1H, m, phenyl), 7.26-7.32 (2H, m, phenyl); 13C NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 14.4, 14.6, 21.8, 34.2, 38.3, 41.4, 116.4, 118.9, 119.1, 123.9, 124.0, 129.2, 130.2, 130.5, 131.7, 142.9, 147.0, 148.0, 157.0, 157.1; MS (ESI): m/z = 441.0 [M + H]; HRMS (ESI) [M+H]+ (C24H28N2O4S): calcd. 441.1843, found. 441.1818; Purity 98.3%.
실시예 39. 3-( Benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxylbenzyl )-2- propylisonicotinic acid ( 44)의 제조
1,4-다이옥산 (1 ml) 및 메탄올 (1 ml)에 화합물 30 (120.8 mg, 0.25 mmol)을 녹인 용액에 20% KOH 수용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 이틀간 격렬히 교반하였다. 실온으로 냉각한 뒤, 반응 혼함물을 염수로 희석하고, EA로 3회 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 혼합물을 여과한 다음 진공 농축시킨 후, 클로로포름:메탄올=10:1 용리액으로 실리카겔 상에서 크로마토 그래피하여 화합물 44 (74.4 mg)를 수득하였다.
Yield 63%; 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 0.82 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3), 1.50-1.59 (2H,m,J = 7.0 Hz, 7.3 Hz, 7.9 Hz, CH2), 2.07(3H,s,CH3), 2.57(2H,t,-J = 7.3 Hz, 7.9 Hz, CH2), 4.00 (2H,s,CH2), 4.99 (2H,s,CH2), 6.80 (2H,d,J = 7.9 Hz, phenyl), 6.85 (1H, s, phenyl), 6.98 (2H, d, J = 7.9 Hz, phenyl), 7.12 (1H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 7.25-7.33 (2H, m, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.37 (4H, t, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.44 (2H, d, J = 7.6 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 468.1 [M+H].
실시예 40. 화합물 45a-j의 제조를 위한 일반적인 절차
화합물 44(1.0 당량)를 20% DMF에 녹인 용액에 NaHCO3 (3.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반 하였다. 다양한 알킬 할라이드 (3.0 당량)를 반응 혼합물에 첨가하고 50 ℃에서 밤새 교반 하였다. 상온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 염수로 희석하고 DCM으로 3회 추출 하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 혼합물을 진공에서 농축시키고, n-헥산 : EA = 5 : 1 용리액으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 45a-j를 수득하였다.
40-1. Phenethyl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (45a)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(20.3 mg, 0.043 mmol, 1.0 당량) 및 (2-브로모에틸)벤젠 (24.1 mg, 0.130 mmol, 3.0 당량) 사이의 반응에 의해 화합물 45a (19.1 mg)를 수득하였다.
Yield 77%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.94 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3),1.69-1.75(2H,m,J = 7.6 Hz, CH2),2.00(3H,s,CH3),2.77(2H,t,-J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),2.94(2H,t,-J = 7.0 Hz, 7.3 Hz, CH2),4.12(2H,s,CH2),4.64(2H,t,-J = 7.0 Hz, 7.3 Hz, CH2),4.88(2H,s,CH2),6.83(1H,d,J = 7.9 Hz, phenyl), 6.86 (1H, s, phenyl), 6.91 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.98 (2H, d, J = 7.9 Hz, phenyl), 7.08 (1H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 7.16-7.25 (5H, br, phenyl), 7.27-7.41 (8H, br, phenyl); MS (MALDI-TOF): m/z = 571.5 [M+H].
40-2. Octyl 3-(benzyloxy)-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (45b)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량) 및 1-브로모옥탄 (37.2 mg, 0.192 mmol, 3.0 당량) 사이의 반응에 의해 화합물 45b (32.7 mg)를 수득하였다.
Yield 88%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.85 (3H, t, J = 7.0 Hz, CH3),0.93(3H,t,J = 7.6 Hz, CH3),1.21-1.31(10H,br,CH2),1.59-1.73(4H,m,J = 6.7 Hz, 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),2.12(3H,s,CH3),2.76(2H,t,J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),4.13(2H,s,CH2),4.24(2H,t,-J = 6.7 Hz, CH2),4.90(2H,s,CH2),6.81(1H,d,J = 8.0 Hz, phenyl), 6.86 (1H, s, phenyl), 6.91 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.97 (2H, d, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 7.07 (1H, t, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.20 (1H, d, J = 7.9 Hz, phenyl), 7.28-7.42 (7H, br, phenyl); MS (MALDI-TOF): m/z = 579.5 [M+H].
40-3. 2- phthalimidoethyl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (45c)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량) 및 N-(2-브로모에틸)프탈리미드 (48.8 mg, 0.192 mmol, 3.0 당량) 사이의 반응에 의해 화합물 45c (26.0 mg)를 수득하였다.
Yield = 63%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.91 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3),1.65-1.71(2H,m,J = 7.6 Hz, CH2),2.09(3H,s,CH3),2.72(2H,t,J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),4.00(2H,t,J = 5.5 Hz, CH2),4.11(2H,s,CH2),4.49(2H,t,-J = 5.5 Hz, 5.8 Hz, CH2),4.85(2H,s,CH2),6.82(1H,d,J = 8.2 Hz, phenyl), 6.85 (1H, s, phenyl), 6.89 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.98 (2H, d, J = 8.0 Hz, phenyl), 7.08 (1H, t, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.21 (1H, d, J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, phenyl), 7.30-7.38 (7H, br, phenyl), 7.67-7.71 (2H, m, J = 2.4 Hz, 3.0 Hz, phthalimidyl), 7.76-7.80 (2H, m, J = 2.4 Hz, 3.0 Hz, phthalimidyl); MS (ESI): m/z = 640.9 [M+H].
40-4. 4- phthalimidobutyl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (45d)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량) 및 N-(4-브로모부틸)프탈리미드 (4.2 mg, 0.192 mmol, 3.0 당량) 사이의 반응에 의해 화합물 45d (38.6 mg)를 수득하였다.
Yield = 89%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.94 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3),1.67-1.74(6H,br,J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),2.12(3H,s,CH3),2.76(2H,t,J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),3.63(2H,t,J = 6.4 Hz, CH2),4.13(2H,s,CH2),4.27(2H,t,-J = 5.8 Hz, CH2),4.90(2H,s,CH2),6.82(1H,d,J = 8.2 Hz, phenyl), 6.87 (1H, s, phenyl), 6.92 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.98 (2H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.08 (1H, t, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.21 (1H, d, J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, phenyl), 7.30-7.41 (7H, br, phenyl), 7.70-7.73 (2H, m, J = 2.1 Hz, 3.1 Hz, 3.4 Hz, phthalimidyl), 7.81-7.84 (2H, m, J = 3.1 Hz, phthalimidyl); MS (ESI): m/z = 669.0 [M+H].
40-5. 2-( pyrrolidin -1- yl )ethyl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2-propylisonicotinate (45e)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량) 및 N-(2-클로로에틸)피롤리딘 하이드로클로라이드 (32.7 mg, 0.192 mmol, 3.0 당량) 사이의 반응에 의해 화합물 45e (26.7 mg)를 수득하였다.
Yield = 74%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.94 (3H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, CH3),1.65-1.74(6H,br,CH2),2.15(3H,s,CH3),2.48(3H,s,CH3),2.71-2.78(4H,br,CH2),4.13(2H,s,CH2),4.39(2H,t,-J = 6.1 Hz, CH2),4.92(2H,s,CH2),6.82(1H,d,J = 8.2 Hz, phenyl), 6.87 (1H, s, phenyl), 6.92 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.98 (2H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.09 (1H, t, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.22 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.30-7.43 (7H, br, phenyl); MS (ESI): m/z = 565.0 [M+H].
40-6. Isopropyl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (45f)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량)을 19.2 ㎕ (0.192 mmol)의 2-아이오도프로판과 반응시켜 화합물 45f를 수득하였다.
Yield 22.8 mg (70%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm7.41-7.43(2H,m,phenyl),7.35-7.39(2H,m,phenyl),7.29-7.34(3H,m,phenyl),7.21(1H,t,J = 7.8 Hz, phenyl), 7.06-7.10 (1H, m, phenyl), 6.97-6.99 (2H, m, phenyl), 6.93 (1H, d, J = 6.9 Hz, phenyl), 6.81-6.83 (1H, m, phenyl), 5.24-4.27 (1H, m, J = 6.4 Hz, CH), 4.93 (2H, s, CH2),4.14(2H,s,CH2),2.73-2.77(2H,m,CH2),2.14(3H,s,CH3),1.28(6H,d,J = 6 Hz, CH3),0.93(3H,m,CH3);MS (ESI): m/z = 509.5 [M + H].
40-7. Pentan -3- yl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (45g)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량)을 24.0 ㎕ (0.192 mmol)의 3-브로모펜탄과 반응시켜 화합물 45g를 수득하였다.
Yield 12.2 mg (35%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm7.39-7.42(3H,m,phenyl),7.36-7.38(1H,m,phenyl),7.33-7.36(1H,m,phenyl),7.29-7.31(2H,m,phenyl),7.22(1H,t,J = 7.9 Hz, phenyl), 7.06-7.10 (1H, m, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.97-6.99 (2H, m, phenyl), 6.93-6.94 (1H, m, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.88 (1H, t, J = 2.0 Hz, pheynl), 6.81-6.84 (1H, m, phenyl), 4.96-5.02 (1H, m, J = 6.4 Hz, CH), 4.92 (2H, s, CH2),4.14(2H,s,CH2),2.73-2.77(2H,m,CH2),2.16(3H,s,CH3),1.69-1.74(2H,m,J = 8.0 Hz, CH2),1.58-1.65(4H,m,J = 6.4 Hz, CH2),0.93(3H,t,J = 7.6 Hz, CH3),0.87(6H,t,J = 7.2 Hz, CH3);MS (ESI): m/z = 537.2 [M + H].
40-8. Cyclopentyl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (45h)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량)을 41.1 ㎕ (0.384 mmol, 6.0 당량)의 브로모시클로펜탄과 반응시켜 화합물 45h를 수득하였다.
Yield 20.2 mg (59%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm7.39-7.43(3H,m,phenyl),7.33-7.37(2H,m,phenyl),7.30-7.33(2H,m,phenyl),7.22(1H,t,J = 8 Hz, phenyl), 7.07-7.10 (1H, m, J = 7.2 Hz, phenyl), 6.97-7.00 (2H, m, phenyl), 6.92-6.94 (1H, m, phenyl), 6.88 (1H, t, J = 1.6 Hz, phenyl), 6.81-6.84 (1H, m, phenyl), 5.36-5.41 (1H, m, J = 3.2 Hz, CH), 4.92 (2H, s, CH2),4.13(2H,s,CH2),2.74-2.77(2H,m,J = 8 Hz, CH2),2.14(3H,s,CH3),1.85-1.92(4H,m,CH2),1.65-1.76(4H,m,CH2),1.25(2H,s,CH2),0.94(3H,t, J = 7.2 Hz, CH3); MS (ESI): m/z = 535.1 [M + H].
40-9. Tetrahydrofuran -3- yl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (45i)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량)을 36.2 ㎕ (0.384 mmol, 6.0 당량)의 3-브로모하이드로퓨란과 반응시켜 화합물 45i를 수득하였다.
Yield 11.7 mg (89%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm7.39-7.41(3H,m,phenyl),7.36(1H,t,J = 2 Hz, phenyl), 7.33-7.35 (1H, m, phenyl), 7.31-7.32 (1H, m, phenyl), 7.30 (1H, t, J = 2 Hz, phenyl), 7.22 (1H, t, J = 8 Hz, phenyl), 7.07-7.11 (1H, m, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.97-7.00 (2H, m, phenyl), 6.91-6.94 (1H, m, phenyl), 6.87 (1H, t, J = 2Hz, phenyl), 6.81-6.84 (1H, m, phenyl), 5.44-5.48 (1H, m, J = 4.4 Hz, CH), 4.92 (2H, s, CH2),4.14(2H,s,CH2),3.84-3.92(2H,m,CH2),3.77-3.82(2H,m,CH2),2.75-2.79(2H,m,J = 7.6 Hz, 2 Hz, CH2),2.14(3H,s,CH3),1.96-2.03(2H,br,CH2),1.68-1.78(2H,m,J = 1.6 Hz, 8 Hz, CH2),0.943(3H,t,J = 7.2 Hz, CH3);MS (ESI): m/z = 537.6 [M + H].
40-10. 1-( Tert - butoxycarbonyl ) piperidin -4- yl 3-( benzyloxy )-5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2-propylisonicotinate (45j)의 제조
상기한 화합물 (45a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 44(30.0 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량)을 101.4 mg (0.384 mmol, 6.0 당량)의 브로모시클로펜탄과 반응시켜 화합물 45j를 수득하였다.
Yield 27.8 mg (67%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm7.39-7.41(4H,m,phenyl),7.35-7.37(1H,m,phenyl),7.30-7.34(2H,m,phenyl),7.22(1H,t,J = 8 Hz, phenyl), 7.07-7.11 (1H, m, J = 1.2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 6.97-6.99 (2H, m, J = 1.2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 6.92-6.95 (1H, m, J = 1.2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 6.87-6.88 (1H, m, J = 1.6 Hz, phenyl), 6.81-6.84 (1H, m, J = 0.8 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 5.11-5.16 (1H, m, J = 3.6 Hz, CH), 4.91 (2H, s, CH2),4.14(2H,s,CH2),3.60-3.70(2H,br,CH2),3.13-3.20(2H,m,J = 3.6 Hz, 9.2 Hz, CH2),2.75-2.79(2H,m,J = 2 Hz, 8 Hz, CH2),2.14(3H,s,CH3),1.79-1.88(2H,br,CH2),1.72-1.76(2H,m,J = 1.6 Hz, 7.6 Hz, CH2),1.57-1.58(2H,d,J = 5.2 Hz, CH2),1.44-1.46(9H,m,CH3),0.95(3H,t,J = 7.2 Hz, CH3); MS (ESI): m/z = 649.5 [M + H].
실시예 41. 화합물 46a-j의 제조를 위한 일반적인 절차
화합물 45a-j (1.0 당량)를 DCM/메탄올(1:3) 혼합용액에 녹인 용액에 Pd/C를 첨가하고, H2 (1 atm) 대기 하에서 30 분 동안 실온에서 교반하였다. 셀라이트 필터(celite filter)로 여과 한 후, 진공에서 농축시키고, n-헥산:EA = 3:1 용리액을 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 46a-j를 수득 하였다.
41-1. Phenethyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46a)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45a (16.1 mg, 0.028 mmol)를 반응시켜 화합물 46a (3.0 mg)를 수득하였다.
Yield 22%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.96 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3),1.56(3H,s,CH3),1.69-1.75(2H,m,J = 7.6 Hz, CH2),2.21(3H,s,CH3 ) ,2.80( 2H,t,-J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),3.08(2H,t,-J = 7.0 Hz, CH2) ,4.14( 2H,s,CH2 ),4.62( 2H,t,-J = 7.0 Hz, CH2),6.79(2H,s,phenyl) ,6.85( 1H,d,J = 7.6 Hz, phenyl), 6.96 (2H, d, J = 8.5 Hz, phenyl), 7.08 (1H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 7.16-7.25 (5H, br, phenyl), 7.27-7.41 (8H, br, phenyl); MS (ESI): m/z = 481.9 [M+H].
*41-2. Octyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46b)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45b (32.7 mg, 0.056 mmol)를 반응시켜 화합물 46b(15.4 mg)를 수득하였다.
Yield 56%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.87 (3H, t, J = 6.7 Hz, 7.0 Hz, CH3),0.96(3H,t,J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, CH3),1.23-1.42(10H,br,CH2),1.66-1.77(4H,m,J = 7.0 Hz, 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2 ),2.35(3H,s,CH3) ,2.81( 2H,t,J = 6.7 Hz, 7.0 Hz, CH2),4.16(2H,s,CH2),4.36(2H,t,-J = 6.7 Hz, CH2),4.90(2H,s,CH2) ,6.79( 2H,d,J = 8.0 Hz, phenyl), 6.95 (2H, d, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.06 (1H, t, J = 7.3 Hz, phenyl) , 7.18 (1H, t, J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, phenyl), 7.29 (1H, t, J = 7.3 Hz, phenyl); MS (MALDI-TOF): m/z = 489.4 [M+H].
41-3. 2- phthalimidoethyl 3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (46c)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45c (21.0 mg, 0.033 mmol)를 반응시켜 화합물 46c(17.6 mg)를 수득하였다.
Yield = 98%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.95 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3),1.65-1.71(2H,m,J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),2.25(3H,s,CH3),2.80(2H,t,J = 7.6 Hz, CH2),4.13(4H,br,CH2),4.64(2H,t,-J = 4.8 Hz, 5.8 Hz, CH2),6.78(2H,s,phenyl),6.84(1H,d,J = 7.6 Hz, phenyl), 6.96 (2H, d, J = 8.5 Hz, phenyl), 7.08 (1H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 7.17 (1H, t, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.30 (2H, t, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.71-7.74 (2H, m, J = 2.4 Hz, 3.0 Hz, phthalimidyl), 7.82-7.86 (2H, m, J = 2.4 Hz, 3.0 Hz, phthalimidyl); MS (ESI): m/z = 550.9 [M+H].
41-4. 4- phthalimidobutyl 3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (46d)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45d (33.1 mg, 0.049 mmol)로 화합물 46d (22.7 mg)를 수득하였다.
Yield = 79%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.96 (3H, t, J = 7.3 Hz, CH3),1.67-1.73(2H,m,J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),1.82-1.84(4H,br,CH2),2.33(3H,s,CH3),2.81(2H,t,J = 7.6 Hz, CH2),3.75(2H,t,J = 6.4 Hz, CH2),4.16(2H,s,CH2),4.27(2H,t,-J = 5.8 Hz, CH2),6.78(2H,d,J = 8.5 Hz, phenyl), 6.86 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.96 (2H, d, J = 8.5 Hz, phenyl), 7.07 (1H, t, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.19 (1H, d, J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, phenyl), 7.30 (2H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 7.69-7.73 (2H, m, J = 2.1 Hz, 3.1 Hz, 3.4 Hz, phthalimidyl), 7.81-7.84 (2H, m, J = 3.1 Hz, phthalimidyl), 10.41 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 578.9 [M+H].
41-5. 2-( pyrrolidin -1- yl )ethyl 3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (46e)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45e (23.7 mg, 0.042 mmol)로 화합물 46e (7.4 mg)를 수득하였다.
Yield = 37%; 1HNMR(CDCl3,400MHz)δ 0.95 (3H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, CH3),1.64-1.71(2H,m,J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, CH2),1.85-1.89(4H,br,CH2),2.18(3H,s,CH3),2.62-2.71(4H,br,CH2),2.78(2H,t,J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, CH2),2.84(2H,t,J = 5.2 Hz, 5.8 Hz, CH2),4.10(2H,s,CH2),4.56(2H,t,-J = 5.2 Hz, 6.1 Hz, CH2),6.78(1H,d,J = 7.9 Hz, phenyl), 6.84 (1H, s, phenyl), 6.88 (1H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.96 (2H, d, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.07 (1H, t, J = 7.3 Hz, phenyl), 7.18 (1H, t, J = 7.6 Hz, 7.9 Hz, phenyl), 7.30 (2H, t, J = 7.3 Hz, 7.6 Hz, phenyl); MS (ESI): m/z = 475.0 [M+H].
41-6. Isopropyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46f)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45f (20.2 mg, 0.040 mmol)로부터 화합물 46f를 수득하였다.
Yield 13.0 mg (78%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm10.43(1H,s,OH),7.28-7.32(2H,m,phenyl),7.20(1H,t,J = 7.8 Hz, phenyl), 7.05-7.09 (1H, m, phenyl), 6.95-6.98 (2H, m, phenyl), 6.88 (1H, d, J = 7.3 Hz, phenyl), 6.78-6.82 (2H, m, phenyl), 5.30-5.35 (1H, m, CH), 4.17 (2H, s, CH2),2.81(2H,dd,J = 6.9 Hz, 8.7 Hz, CH2),2.35(3H,s,CH3),1.66-1.75(2H,m,CH2),1.39(6H,d,J = 6.4Hz, CH3),0.97(3H,t,J = 7.6, CH3);MS (ESI): m/z = 419.6 [M + H].
41-7. Pentan-3-yl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46g)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45g (9.7 mg, 0.018 mmol)로부터 화합물 46g를 수득하였다.
Yield 5.6 mg (70%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm10.56(1H,s,OH),7.28-7.32(2H,m,phenyl),7.20(1H,t,J=8Hz,phenyl),7.05-7.10(1H,m,J = 7.2 Hz, phenyl), 6.95-6.98 (2H, m, phenyl), 6.88-6.90 (1H, m, phenyl), 6.82 (1H, t, J = 1.6 Hz, phenyl), 6.79-6.81 (1H, m, phenyl), 5.12-5.15 (1H, m, J = 6.4 Hz, CH), 4.17 (2H, s, CH2),2.80-2.84(2H,m,J = 7.6 Hz, CH2),2.37(3H,s,CH3),1.67-1.76(4H,m,J = 7.6 Hz, CH2),1.69-1.73(2H,m,CH2),0.97(3H,t,J = 7.6 Hz, CH3),0.95(6H,t,J = 7.6 Hz, CH3);MS (ESI): m/z = 447.7 [M + H].
41-8. Cyclopentyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (46h)
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45h (15.8 mg, 0.029 mmol)로부터 화합물 46h를 수득하였다.
Yield 11.7 mg (89%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm10.57(1H,s,OH),7.28-7.32(2H,m,J = 7.6 Hz, phenyl), 7.20 (1H, t, J = 8 Hz, phenyl), 7.06-7.10 (1H, m, J = 7.2 Hz, phenyl), 6.95-6.98 (2H, m, phenyl), 6.87-6.89 (1H, m, phenyl), 6.80-6.82 (1H, m, phenyl), 6.78-6.79 (1H, m, phenyl), 5.48-5.52 (1H, m, J = 2.8 Hz, CH), 4.17 (2H, s, CH2),2.80-2.84(2H,m,J = 7.6 Hz, CH2),2.34(3H,s,CH3),1.94-1.97(2H,m,CH2),1.83-1.88(4H,m,CH2),1.68-1.73(4H,m,CH2),0.97(3H,t,J = 7.2Hz, CH3); MS (ESI): m/z = 445.7 [M + H].
41-9. Tetrahydrofuran -3- yl 3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate (46i)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45i (22.7 mg, 0.035 mmol)로부터 화합물 46i를 수득하였다.
Yield 7.6 mg (56%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm10.33(1H,s,OH),7.29-2.33(2H,m,J = 2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 7.17-7.22 (1H, m, J = 1.2 Hz, 8 Hz, phenyl), 7.06-7.10 (1H, m, J = 1.2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 6.95-6.97 (2H, J = 1.2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 6.87-6.89 (1H, m, J = 7.6 Hz, phenyl), 6.80-6.82 (1H, m, phenyl), 6.78 (1H, m, phenyl) 5.58-5.62 (1H, m, J = 2 Hz, CH), 4.17 (2H, s, CH2),3.97-4.00(2H,m,CH2),3.93-3.96(2H,m,J = 4.4 Hz, CH2),2.80-2.84(2H,m,J = 2 Hz, 7.6 Hz, CH2),2.36(3H,s,CH3),2.25-2.35(1H,m,J = 2.4 Hz, 6 Hz, CH2),2.17(1H,s,CH2),1.67-1.75(2H,m,J = 1.6 Hz, 7.6 Hz, CH2),0.969(3H,t,J = 7.2 Hz, CH3); MS (ESI): m/z = 447.6 [M + H].
41-10. 1-( Tert - butoxycarbonyl ) piperidin -4- yl 3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2-propylisonicotinate (46j)의 제조
상기한 화합물 (46a-j)의 합성을 위한 일반적인 절차에 따라 화합물 45j (10.8 mg, 0.019 mmol)로부터 화합물 46j를 수득하였다.
Yield 13.1 mg (67%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm10.44(1H,s,OH),7.28-7.33(2H,m,J = 2.4 Hz, 7.2 Hz, phenyl), 7.18-7.22 (1H, m, J = 7.6 Hz, phenyl), 7.06-7.10 (1H, m, J = 1.2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 6.95-7.00 (2H, m, J = 1.2 Hz, 7.6 Hz, phenyl), 6.88 (1H, d, J = 8 Hz, phenyl), 6.79-6.83 (2H, m, phenyl), 5.27-5.34 (1H, br, CH), 4.17 (2H, s, CH2),3.66-3.76(2H,br,CH2),3.31-3.40(2H,br,CH2),2.80-2.84(2H,m,J = 8 Hz, CH2),2.37(3H,s,CH3),1.95-2.04(2H,br,CH2),1.73-1.82(2H,br,CH2),1.68-1.72(2H,m,J = 1.2 Hz, 8 Hz, CH2),1.47(9H,s,CH3),0.97(3H,t,J = 7.2 Hz, CH3);MS (ESI): m/z = 560.1 [M H].
실시예 42. Piperidin -4- yl 3- hydroxy -5-methyl-6-(3- phenoxybenzyl )-2- propylisonicotinate ( 47)의 제조
화합물 46j (1.0 당량)를 DCM으로 희석된 20 % TFA 중에 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 디클로로메탄을 사용하여 추출 하였다. 유기상을 수집하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔여물을 n-헥산:EA = 5:1을 용리제로하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피로 정제하였다.
Yield 5.9 mg (67%); 1HNMR(CDCl3,400MHz)δppm7.28-7.33(2H,m,J = 7.6 Hz, phenyl), 7.20 (1H, t, J = 8 Hz, phenyl), 7.06-7.10 (1H, m, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, phenyl), 6.95-6.98 (2H, m, J = 1.2 Hz, 7.2 Hz, phenyl), 6.88-6.90 (1H, m, J = 7.2 Hz, 6.78-6.84 (2H, m, phenyl), 5.22-5.29 (1H, br, CH), 4.17 (2H, s, CH2),3.10-3.18(2H,br,CH2),2.86-2.92(2H,br,CH2),2.80-2.84(2H,m,J = 2 Hz, 7.6 Hz, CH2),2.38(3H,s,CH3),2.04(2H,s,CH2),1.70-1.74(4H,m,J = 2 Hz, 7.6 Hz, CH2),0.97(3H,t,J = 7.2 Hz, CH3); MS (ESI): m/z = 461.1 [M + H].
실시예 43. Ethyl 3-hydroxy-5-methyl-6-(3-phenoxybenzyl)-2-propylisonicotinate (48)의 제조
상기 화합물 12a-k의 합성을 위한 다음의 일반적인 절차에 따라 화합물 25 (1.2 g, 3.6 mmol) 및 에틸 크로토네이트 (0.90 μL, 7.2 mmol)로부터 합성되었다.
Yield 0.62 g (42 %); 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δppm 0.95 (3H, t, J = 7.6 Hz, CH3), 1.30 (3H, m, CH3), 1.64-1.73 (2H, m, CH2), 2.39 (3H, s, CH3), 2.77-2.84 (2H, m, CH2), 4.16(2H, s, CH2), 4.21-4.29 (2H, m, CH2), 6.73-6.79 (2H, m, phenyl), 6.83-6.86 (1H, m, phenyl), 6.92-6.96 (2H, m, phenyl), 7.02-7.08 (1H, m, phenyl), 7.13-7.18 (1H, m, phenyl), 7.25-7.31 (2H, m, phenyl), 10.31 (1H, s, OH); MS (ESI): m/z = 406.3 [M + H].
실험예 1. 수용체 길항작용 시험
상기 실시예에서 준비된 화합물들의 (1) 재조합 마우스 P2X1 및 인간 P2X3 수용체에 대한 길항활성 및 (2) 인간 P2X7 수용체에서의 에티디움 브로마이드 축적에 미치는 영향을 시험하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
1-1. 재조합 mP2X1 및 hP2X3 수용체에 대한 수용체 2-전극 전압-클램프 어세이
아프리카 개구리 난자(Xenopus oocytes)를 분리하고 270 U/mg 콜라게나아제와 함께 23-24 ℃에서 1.5 시간 동안 배양하였다. 여포를 제거한(defoliculated) 난자는 Barth 용액에서 18 ℃로 유지되었다. 1 일 후 각각의 여포를 제거한 난자에 mP2X1과 hP2X3 수용체 cRNA (40 nL, 1 ㎍/mL)를 세포질로 미세주입하고 Barth 용액에서 18℃에서 24 시간 동안 배양하였다. cRNA가 주입된 난자를 4 ℃에서 12 일 동안 보관하였다. 2-전극 전압-클램프 기술(Axoclamp 2B amplifier)은 cRNA 주입 난자를 이용하여 ATP-활성화 막 전류 (Vh = 70 mV)를 기록하였다. 전압-기록 (1-2 MΩ 팁 저항) 및 전류-기록 미세 전극 (5 MΩ 팁 저항)은 3.0 M KCl을 함유하였다. 난자는 pH 7.5로 조정되고, 110 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 5 mM HEPES 및 1.8 mM BaCl2를 함유한 링거 용액 (18 ℃에서 5 mL/분)을 연속적으로 과주입(superfused)하는 전기 생리학적 챔버에 넣었다. 유발된 전류를 유도하기 위하여, 2 μM ATP를 60-120 초 동안 과주입하고 20분 동안 세척하였다. 데이터 분석을 위해, ATP-유발 전류를 pH 7.5에서 표준화했다. 상기 화합물을 ATP 노출 20 분 전에 전기생리학적 챔버에서 고정된 난자에 적용하였다. IC50 값 (ATP 반응을 50 % 저해하는 화합물의 농도)은 화학식 log (I / Imax-1)를 사용하여 설계된 힐 플롯(Hill plot)에 의해 결정되며, 여기서 I는 길항제의 존재 하에 ATP-유발 전류이다. 데이터는 서로다른 난자의 집단(batch)들로부터 평균 ± SEM (n≥3)으로 표현되었다.
1-2. hP2X7 발현 HEK293 세포에서 에티디움 브로마이드 축적 시험
인간 P2X7 수용체(hP2X7R)로 안정적으로 형질전환된 HEK293 세포를 10% (v/v) FBS, 2 mM L-글루타민 및 항생제 (50 U/mL 페니실린 및 50 ㎍/㎖ 스트렙토마이신)으로 보충된 DMEM으로 37℃에서 5% CO2 의 가습대기 조건 하에 유지시켰다. BzATP-유도 기공 형성은 hP2X7-발현 HEK293 세포에서 에티디움의 세포 흡수를 측정함으로써 형광 플레이트 리더기를 사용하여 측정하였다. hP2X7 발현 HEK293 세포를 적절한 분석 완충액으로 1 회 씻었으며, 이것 역시 이후의 분석을 수행하기 전에 제거하였다. 모든 연구는 실온에서 수행되었으며 최종 분석 부피는 100 μL였다. 상기 세포를 10 mM HEPES, 5 mM N-메틸-D-글루카민, 5.6 mM KCl, 10 mM D-글루코스 및 0.5 mM CaCl2 (pH 7.4)로 이루어진 분석 완충액으로 2.5 x 106 세포/mL로 재현 탁시키고 280 mM 수크로스 또는 140 mM NaCl으로 보충하였다.
본 발명의 5-하이드록실-피리딘 유도체 및 기준 화합물(AZD9056)의 길항 활성을 결정하기 위하여, 이들 화합물을 10 μM으로 BzATP와 함께 세포에 가하였고, 예비 배양은 하지 않았다. 가습된 5% CO2 대기에서 2 시간 동안 배양한 후, Bio-Tek Instrument FL600 형광 플레이트 리더기(530 nm의 여기 파장 및 590 nm의 방출 파장)로 형광을 측정함으로써 에티디움 염료의 흡수를 관찰하였다. 결과는 BzATP만으로 자극했을 때의 에티디움 브로마이드의 최대 누적량에 대한 상대적인 백분율로 표시하였다.
1-3. 인비트로 P2X 수용체 길항성에 관한 화학구조-활성도 관계
본 발명에서 합성된 화합물의 구조-활성도 관계 (SAR, Structure-Activity Relationship)를 조사하기 위해, 재조합 mP2X1 또는 hP2X3를 각각 발현하는 Xenopus 난자에서 2-전극 전압 클램프 (TEVC) 검정으로 길항 활성을 평가하였다. hP2X7R 길항 활성은 재조합 인간 P2X7R을 안정적으로 발현하는 인간 HEK293 세포에서 에티디움 이온 축적 어세이를 사용하여 평가하였다. 화합물 1, NF-449 및 AZD9056을 mP2X1, hP2X3 및 hP2X7R 각각에 대한 양성 대조 길항제로서 함께 시험 하였다.
본 발명자들은 저해성 통증 신호 활성에 있어서, hP2X3R에 대한 IC50 값이 60 nM 인 강력한 길항제 화합물 7c를 보고한 바 있지만, 화합물 7c의 인비트로 대사 안정성은 극히 낮았는데(% S9 마이크로솜 분획과 함께 30분 배양한 뒤의 잔존 %), 아마도 4-알데히드기 때문일 것으로 추정되었다. 따라서 본 발명자들은 4-알데히드기의 변형을 포함하여 5-히드록시 피리딘 골격의 3, 4 및 6 위치에서 잔기(moiety)의 조합을 최적화하고자 노력하였다.
결과는 표 2에 나타내었다.
Figure PCTKR2018002947-appb-I000074
Figure PCTKR2018002947-appb-T000002
(R1의 변화에 따른 3,4-디카르복시피리딘(3,4-dicarboxypyridine) 유도체의 mP2X1, hP2X3 및 hP2X7 수용체에 대한 길항효과)
aXenopus 난자에서 발현된 재조합 P2X 수용체에서 2μM ATP에 의해 유발된 이온 전류 반응 및 mP2X1 수용체 및 hP2X3 수용체에 대해 1μMb, 10μMc 또는 IC50 값d에서 상기 표의 화합물의 %억제 효과를 측정 하였다(평균±SEM, n≥3). hP2X7-발현 HEK293 세포에서 에티디움 브로마이드e 축적을 측정하고, 10 μM의 상기 표의 화합물에 의한 축적 저해%를 평가하였다 (평균±SEM, n≥3). f본 발명자들은 이전 연구에서 IC50 값을 보고했다. g1 (A-317491, hP2X3 수용체에 대한 IC50 값 = 97 nM) hNF-449 (rP2X1 수용체에 대한 IC50 값 = 280 pM), iAZD9056 (hP2X1 수용체에 대한 IC50 값 = 13 nM)이 보고되었다.
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 3,4-디카르복시 피리딘 유도체의 6번 탄소 위치에서 치환체의 P2XR 길항 효과를 다양한 알킬기, 방향족 및 음전하 원자 함유기에 대하여 조사하였다. 직선 탄소 사슬의 길이에 따른 유도체의 SAR 분석에서, hP2X3R 길항 활성은 탄소 사슬이 0에서 4까지 증가함에 따라 증가하였다. 특히, 탄소 사슬 길이가 3 및 4 인 화합물 13d 및 13e는 화합물 13a 내지 13c와 비교하여 4-5 배 증가되어, 대단히 증가된 IC50 값을 나타내었다(각각 93 및 95 nM). 흥미롭게도, mP2X1R 길항 작용의 순서는 hP2X3R과 비교하여 역방향이었으며, mP2X1R에서의 효능이 6번 탄소 위치에서의 탄소 사슬의 길이 및 부피를 증가시킬수록 순차적으로 현저하게 감소됨을 나타내었다. 따라서, hP2X3R 대 mP2X1R에 대한 약 100 배의 선택성(화합물 13d 및 13e)이 비선택적 화합물인 화합물 13a 및 화합물 13b로부터 탄소 사슬의 길이를 0 내지 4 사이에서 최적화함으로써 달성되었다.
6번 탄소 위치에서 이소프로필 (화합물 13f) 또는 이소부틸 (화합물 13g)와 같은, 부피가 큰 탄소 사슬로 치환하는 경우, 화합물 13f의 hP2X3R에서의 활성 (IC50 = 466 nM)은 화합물 13b (6-메틸 유사체)의 활성과 유사하였으며, 반면에 화합물 13g는 길항 작용이 현저하게 감소(32% 억제, 1μM)하여 일정한 거리를 갖는 좁은 결합 주머니(narrow binding pocket)가 있음을 시사하였다. 따라서, 6번 탄소 위치에서 상이한 탄소 사슬을 갖는 비극성 페닐기를 갖는 화합물 13h 및 화합물 13i는 700 nM 범위의 IC50 값을 갖는 hP2X3R에 대해 더 약한 길항 효과를 나타내었다. 카르복실산 (13j), 설파이드 (13k) 및 설폰 (13l)과 같은 6번 탄소 위치에서 서로 상이한 정전기적 전위를 갖는 유도체들은, 화합물 13d와 비교하여 hP2X3R 길항 활성에 대해 유리한 영향을 제공하지 않았고, 수용체 내의 대응하는 결합 포켓이 길항 효과에 있어서 6번 탄소자리의 치환체의 입체 지배(steric management)에 기초하여 주로 접근될 수 있음을 시사하였다.
본 발명자들은 다음으로 3,4 위치에서 카르복실산 잔기의 위치 특혜 및 생체 동위 원소 치환을 조사하였다. 또한, 다양한 전자 효과를 위하여 화합물 18-23 (표 3)과 같이, 추가적 변형을 시도하였다.
결과는 표 3에 나타내었다.
Figure PCTKR2018002947-appb-I000075
Figure PCTKR2018002947-appb-T000003
피리딘의 다양한 변화에 따른 5-히드록시 피리딘 유도체의 mP2X1 , hP2X3 및 hP2X7 수용체에 대한 길항효과
Xenopus 난자에서 발현된 재조합 P2X 수용체에서 2μM ATP에 의해 유발된 이온 전류 반응 및 mP2X1 수용체 및 hP2X3 수용체에 대해 1μMb, 10μM 또는 IC50 값에서 상기 표의 화합물의 %억제 효과를 측정하였다(평균±SEM, n≥3). eHP2X7-발현 HEK293 세포에서 에티디움 브로마이드 축적을 측정하고, 10 μM의 상기 표의 화합물에 의한 축적 저해%를 평가하였다 (평균±SEM, n≥3).
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들은 수소 결합 수용체(hydrogen bond acceptor)로서 니트릴기(화합물 16)와 메탄설포닐기(화합물 20)를 도입하였고, 4-카르복실산기의 바이오 등배전자체(bioisostere)로서 테트라졸 (화합물 17)을 도입한 결과, P2X1R과 P2X3R에 대한 길항 작용이 현저히 감소되었다. P2X3R의 ATP 결합 부위에서 라이신 잔기와 상호 작용할 가능성이 있는, 말레산 무수물(maleic anhydride) (화합물 18) 및 피리다진(pyridazine) (화합물 19)과 같은 융합된 헤테로 사이클릭기를 갖는 유도체는 또한 길항적 활성의 유의적인 손실을 나타내었다.
이러한 결과는 4번 탄소 위치에서 적절한 정도의 산성 작용기가 수용체에서의 결합에 필수적일 수 있음을 시사하는 것이다. 따라서, 화합물 13의 디카르복실산기의 극성 음성 특성(polar negative property)을 감소시키는 것을 목적으로, 3번 탄소 위치에서 -H 또는 CH3로 카르복실산의 변형이 이루어졌다.
피리딘의 4번 탄소위치에서 모노-카르복실산 유사체인 화합물 22a는 3,4-디카르복실산 유사체인 13b(IC50 = 460 nM)와 비교하여 hP2X3R에 대한 길항 활성이 거의 2배 감소한 것으로 나타난 반면, 3-메틸피리딘-4-카르복실산 유도체인 화합물 22b(IC50 = 384 nM)는 hP2X3R 길항 활성을 유지하였다. 화합물 22b의 6-메틸기를 6-n-프로필기(화합물 22c, IC50 = 303 nM)로 대체하여 hP2X3R에 대한 효력(potency)을 증가시키려는 시도는 길항 활성에서 약간의 증가만을 가져왔다. 산성은 더 적지만 유사한 H-결합 공여체 특성을 갖는 4-카르복스아미드(4-carboxamide) 유도체인 화합물 23 (IC50 = 709 nM)의 경우, hP2X3R에서 길항 활성이 2배 감소되었다. 이러한 결과는 hP2X3R에서 길항 활성에 있어서 H-결합 상호 작용보다, 4번 탄소 위치에서의 pharmacophore 와의 가능한 이온 상호작용(possible ion interaction)이 더 중요할 수 있음을 시사한다.
다음으로, 본 발명자들은 개선된 선택성 프로파일을 갖는 p-메톡시펜에틸기(p-methoxyphenethyl group)에 대한 대안적인 pharmacophore로서 이전에 보고된, 피리딘 잔기의 2번 탄소 위치에 m-페녹시페닐기(m-pheonoxyphenyl group)를 도입 하였다 (표 4). 결과는 표 4에 나타내었다.
Figure PCTKR2018002947-appb-I000076
Figure PCTKR2018002947-appb-T000004
피리딘의 2번 탄소에서 m- 페녹시페닐기 변화에 따른 5-히드록시 피리딘 유도체의 mP2X1 , hP2X3 및 hP2X7 수용체에 대한 길항효과
aXenopus 난자에서 발현된 재조합 P2X 수용체에서 2μM ATP에 의해 유발된 이온 전류 반응 및 mP2X1 수용체 및 hP2X3 수용체에 대해 1μMb, 10μM 또는 IC50 값에서 화합물의 %억제 효과를 측정 하였다 (평균±SEM, n≥3). ehP2X7-발현 HEK293 세포에서 에티디움 브로마이드 축적을 측정하고, 10 μM의 상기 표의 화합물에 의한 축적 저해 %를 평가하였다(평균±SEM, n≥3).
그러나, 화합물 27(IC50 = 301 nM)과 같은 3,4-디카르복시-2-m-페녹시페닐 유도체는 상응하는 2-p-메톡시펜에틸 유사체, 화합물 13d와 비교하여 hP2X3R 길항 효과 또는 mP2X1R에 대한 선택성을 향상시키지 않았다.
또한 본 발명자들은 극성을 감소시키기 위해, 화합물 27의 3-카르복실산 대신 CH3 (화합물 29)를 도입하였다. 화합물 22c 및 화합물 13d의 경우와 달리, 4-카복시-3-메틸-2-m-페녹시페닐 유도체(화합물 29, IC50 = 245 nM)는 화합물 27의 hP2X3R 길항 효능을 유지하였다.
나아가, 화합물 29는 또한 보다 생리학적으로 관련성 있는 수용체인, 이종(heterogenous) rP2X2/3 수용체들에 대한 길항 효과를 나타내었다(도 2).
4-프로펜산(4-propenoic acid) (화합물 35)이나 4-프로피온산(4-propionic acid) (화합물 37), 4-니트릴 (화합물 38), 4-메틸아민(화합물 41) 및 4-메틴설폰아미드 (화합물 43)과 같은 탄소사슬-연장 카르복실산을 포함하여, 화합물 29의 4번 탄소 위치에서 다른 치환체의 효과에 대한 더 많은 탐구가 수행되었다. 그러나, 모든 화합물은 hP2X3R에 대하여 1 μM 농도에서 50% 미만의 억제를 나타내었다. 따라서, 피리딘 고리의 4번 탄소 위치에서 pharmacophore에 대한 결합 파트너는, 좁은 결합 포켓과의 이온 상호작용의 성질을 갖는 아미노산으로 구성될 수 있을 것으로 추측된다. 5-히드록시 피리딘 유도체를 mP2X1 수용체 및 hP2X7 수용체에 대한 아형 선택성에 대해 평가하였다. 그 결과, 표 3 및 표 4의 10 μM 농도의 모든 화합물은 mP2X1R에 대해 0-43%의 억제 활성만을 나타내었고, hP2X7R에 대한 비활성(inactiveness)을 나타내었다.
신규한 hP2X3 수용체 길항제 중에서, 인 비보 신경통증(NeP) 동물 모델에서 기능적 활성을 추가적으로 평가하기 위해 화합물 29를 선택하였다. 보다 강력한 길항제로 나타난 화합물 13d는 초기의 동물 실험에서 인 비보 효능이 약하게 나타나 제외하였으며, 이는 아마도 높은 극성의 물리화학적 성질 때문일 것으로 생각된다.
실험예 2. 약동학(PK) 및 hERG 채널 시험
2-1. 약동학 시험방법
실험동물
7-8 주령의 수컷 SD 랫트 (체중 250-290g)를 SAMTACO(경산도 오산)에서 구입하고, 상업용 랫트 사료(SAMTACO, Osan, Kyungki-Do, 한국)와 물은 자유급이하였다. 랫트는 12±12 시간의 명암주기 하에, 23±2 ℃의 온도 및 50 내지 60 %의 상대 습도에서 케이지 당 3 마리씩 수용하였다. 실험은 적어도 1주 동안 상기 조건 하에서 순응시킨 후에 시작하였다. 랫트를 실험 시작 12 시간 전에 금식시키고 수돗물은 자유급이 하였다. 화합물 28을 5 mg/kg 용량으로 꼬리 정맥에 투여 하였다. 정맥 내 투여 0.5, 2, 4 및 8 시간 후, 각 동물을 경추 탈구로 희생시켰다. 혈액 샘플을 12,000 rpm에서 5 분간 원심분리하고 분석할 때까지 즉시 70℃에서 보관하였다. 혈액 샘플 수집 후, 뇌를 수집하였다. 뇌 조직을 정확히 칭량하고 4 배 부피의 증류수를 넣고 균질화시켰다 (IKA T10 basic homogenizer, IKA, Staufen, Germany). 균질화 된 뇌 샘플을 12,000 rpm으로 10 분 동안 원심 분리하고 500 ㎕ 분취액을 분석할 때까지 -20 ℃에서 보관 하였다. 샘플의 정량화는 LC-MS/MS 시스템을 사용하여 수행하였다. HPLC 시스템은 바이너리 펌프(모델 G4220A), 자동 샘플러 (모델 G4226A) 및 오븐 (모델 G1316C)의 컬럼을 포함하는 Agilent 1290 series rapid resolution LC 시스템으로 구성된다. 질량 분광계 분석은 electrospray ionization source가 장착된 Sciex 4000 Q-trap ⓡ 질량 분석기(Applied Biosystems Sciex, Toronto, Ontario, Canada)를 사용하여 수행되었다. 데이터 수집 및 정량화는 AB SCIEX의 Analyst 소프트웨어 버전 1.6을 사용하여 수행되었다. 크로마토그래피 분리는 Gemini NX C18 (2.0 x 100 mm, 3 ㎛, Phenomenex, USA)을 사용하여 이루어졌다. 이동상은 ACN (0.1 % 포름산) 및 물 (0.1 % 포름산) (50:50, v/v)로 구성되었다. 유속은 0.25 mL/분으로 하고 주입 부피는 5 μL로 설정하였다. 질량 분석은 양이온 모드에서 다중 반응 모니터링 (MRM) 스캔을 사용하여 최적화되고 수행되었다. m/z 전이는 화합물 28의 경우 392.1 → 360.2로, 화합물 29의 경우 378.2 → 360.2로 설정하였다. 혈장 및 뇌 균질 시료의 준비는 아세토니트릴을 이용한 단백질 침전을 포함한다. 1.5 mL 폴리에틸렌 마이크로튜브에서, 50 μL의 혈장 또는 조직 균질액에 5 μL의 IS (cimetidine, 10 ㎍/ml)를 첨가하였다. 이어서, 150 ㎕의 아세토니트릴 (추출 용매)을 튜브에 첨가하였다. 30 초 동안 볼텍싱 한 후, 혼합물을 12,000 rpm에서 5 분간 원심분리 하였다. 10 ㎕의 상등액을 HPLC 칼럼에 직접 주입하였다.
마이크로솜 안정성(microsomal stability)
화합물의 대사 안정성을 랫트의 간 마이크로솜(RLM, Rat Liver Microsome)에서 평가 하였다. 100 mM 인산 칼륨 완충액 (pH 7.4)에 마이크로솜 (0.5 mg/ml)와 시험 화합물 (1 μM)을 37 ℃에서 5 분간 쉐이킹하여(100 rpm) 예비 배양 하였다. 대사 반응은 NADPH 생성 시스템 (60 mM 인산칼륨 완충액 pH 7.4, 1.3 mM NADP, 3.3 mM glucose-6-phosphate, 0.3 μL glucose-6-phosphate dehydrogenase (0.4 U/mL), 및 3.3 mM의 염화 마그네슘)에 처리하고 37 ℃에서 배양하였다. 100 μL의 분취액을 0, 10, 20, 30 및 60 분에 회수하고, 2배 부피의 얼음-콜드 아세토니트릴 (ACN)을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 볼텍싱 및 4 ℃에서 15 분 동안 원심 분리(14000 rpm)하여 혼합 한 후, 상층액을 액체 크로마토그래피 바이알에 옮기고 LC-MS/MS 시스템으로 분석하였다.
혈장 단백질 결합(plasma protein binding)
혈장 단백질 결합은 빠른 평형 투석 (RED, rapid equilibrium dialysis) 방법으로 측정하였다. 화합물의 DMSO 스톡 용액을 10 mM 농도로 제조하고 인산완충 식염수(PBS, pH 7.4)를 넣은 50 % 혈장으로 5 μM의 농도로 희석하였다. 혈장 시료(100 μL)와 PBS(300 μL)를 각각 시료 챔버와 완충 챔버에 가한 후 RED 장치를 작동시켜 37 ℃에서 4 시간 동안 진탕 배양기에서 배양했다. 투석 후, 챔버의 각면으로부터 50 ㎕ 분취 량을 수집 하였다. 50 ㎕의 빈 혈장(blank plasma)를 완충액 시료에 첨가하고, 50 ㎕의 PBS를 또한 혈장 시료에 첨가하였다. 내부 표준을 함유하는 아세토니트릴 200 μL를 각 시료에 첨가하였다. 상기 시료를 3200g에서 20 분 동안 4 ℃에서 원심 분리 하였다. 상등액을 수득하고 LC-MS/MS 시스템으로 분석하였다.
혈장 단백질 결합률은 다음과 같이 계산되었다:
자유 형태 (Free form, %) = (완충 챔버 / 혈장 챔버) × 100
결합 형태 (Bound form, %) = 100 - 자유 형태 (%).
PAMPA(parallel artificial membrane permeability assay) 분석
시험 화합물을 DMSO에 용해시켜 10 mg/mL의 농도가 되도록 하였다. 이 화합물 스톡 용액을 PBS 완충액으로 100 배로 희석하고 혼합하여 최종 농도 100 μg/mL로 2차 스톡 용액을 제조하였다. 2차 스톡 용액(200 μL)을 S7 도너 웰 (pION Inc, Billerica, MA, USA)에 첨가하였다. 시험 화합물을 pH 7.4에서 분석 하였다. 각각의 어셉터 웰(acceptor well, pION)의 바닥에 있는 필터는 5 μL의 GIT-O 지질 (pION)을 첨가함으로써 적셔졌고 어셉터 웰은 도너 웰(nonor well, pION)과 동일한 pH에서 싱크 버퍼 (200 μL, pION)로 채워졌다. 어셉터 필터 플레이트를 조심스럽게 도너 플레이트 위에 놓고 Gut-BOX (pION)에서 4 시간 동안 배양했다.
침투 시간(permeation time) 후, UV 플레이트 판독기 (Infinite 200 PRO; TECAN, Mannedorf, CHE)를 사용하여 정량화하여 기준 웰 뿐만 아니라 어셉터 및 도너 웰의 화합물 농도를 결정 하였다. 유효투수계수 (Pe, effective permeability coefficient)는 PAMPA 익스플로러 소프트웨어 (버전 3.6.0.7, pION)에 의해 계산되었다. 화합물은 3 번씩 반복 분석되었다. 베라파밀 (verapamil)은 고 투수율 기준으로 사용되었다.
CYP 억제분석(CYP inhibition assay)
CYP450 (1A2, 2C9, 3A4) 효소 분석은 96-웰 블랙 플레이트에서 Vivid® CYP450 스크리닝 키트 (Invitrogen, USA, CA)로 형광분석을 사용하여 약간 수정된 제조사의 지침에 따라 수행되었다. 분석은 실온에서 수행되었으며 최종 분석 용량은 100 μL였다. 대표적인 화합물 및 알려진 CYP450 억제제(1A2 : α-naphtoplavone; 2C9 : sulfaphenazole; 3A4 : ketoconazole)를 DMSO에서 최종 농도가 10 μM이 되도록 준비하였다.
마스터 예비 혼합물 (효소 (0.5 nmol 재조합 인간 CYP450 효소)/NADP 재생 용액 (pH 8.0, 100 mM KH2PO4 용액에 녹인 333 mM glucose-6-phosphate, 30 U/mL glucose-6-phosphate dehydrogenase)을 CYP450 반응 완충액(200 mM KH2PO4, pH 8.0)으로 준비하였다. 상기 마스터 예비 혼합물(master pre-mixture)을 96 웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 비히클 DMSO (대조군) 및 시험 화합물을 첨가한 다음, 백그라운드 리딩을 위해 플레이트에서 10분 동안 예비 배양하였다. 다음으로, CYP450 기질/NADP+혼합물의 첨가를 통해 효소반응을 즉시 개시하였다. 40분 동안 배양한 후, CHAMELEONTM 멀티-테크놀로지 플레이트 리더기로 생산물(product)의 형광을 측정하였다(2C9, 3A4 : 530 nm의 여기 파장 및 590 nm의 방출 파장, 1A2 : 415 nm의 여기 파장 및 460 nm의 방출 파장). 시험 화합물이 CYP450 (1A2, 2C9, 3A4)에 미치는 영향을 효소 활성의 백분율로 나타내었다.
2-2. hERF 채널 시험방법
hERG K+ 채널의 컨벤셔널 패치-클램프 분석(hERG K+ channel conventional patch-clamp assay)
유도성 Tet-On 유전자 발현 시스템 (CHO-K1 Tet-On hERG 세포)을 통해 hERG 채널을 발현하는 CHO-K1 세포를 IonGate Biosciences GmbH (프랑크푸르트, 독일)로부터 구입하였다. CHO-K1 Tet-On hERG 세포를 선택 항생제, geneticin G418 (200 ㎍/mL), 하이그로마이신(200 ㎍/mL) 및 퓨로마이신(2 ㎍/mL) 뿐만 아니라, 10% (v/v) 소태아혈청, 페니실린(100 U/mL), 스트렙토마이신(100 ㎍/mL), 펑자이존(fungizone) (2.5 ㎍/mL)를 포함하는 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium) 배지에서 37 ℃에서 5% CO2의 가습 조건에서 배양하였다. 세포는 3일 마다 트립신-EDTA 처리로 계대하였다. hERG 채널 발현을 위해 5 ㎍/mL의 독시사이클린(Sigma, St. Louis, MO, USA)을 성장 배지에 첨가하여 Tet-On 유전자 발현을 유도하였다. 자동 패치 클램프 기록을 위해 CHO-K1 Tet-On hERG 세포를 100-mm 배양 접시에 배양하였다. 50-80% 컨플루언시의 세포를 트립신-EDTA로 처리하여 수확하고, 2회 세척한 후, 1.5×106 세포/mL의 최종 세포 밀도로 세포외 용액에 재현탁시켰다. 세포는 독시사이클린 첨가 후 약 20-32 시간 동안 전체 세포 기록에 사용하였다.
자동화 된 패치-클램프 장치인 NPC-16 Patchliner (Nanion Technologies, Munchen, Germany)를 전체 세포 기록에 사용하였다. 50 KCl, 60 KF, 10 NaCl, 2 MgCl2, 20 EGTA 및 10 HEPES (pH 7.2)을 포함(mM 단위)하는 세포 내 용액과, 세포 내 용액으로 전체 세포 전류를 기록하였다: 140 NaCl, 4 KCl, 2 CaCl2, 1 MgCl2, 5 포도당 및 10 HEPES (pH 7.4)를 포함(mM 단위)하는 세포 외 용액으로 전체 세포 전류를 기록하였다. 안정한 씰(seal) 형성을 돕기 위해 씰 형성 단계에서만 80 NaCl, 3 KCl, 35 CaCl2, 10 MgCl2 및 10 HEPES (pH 7.4)를 포함하는 씰 인핸서(seal enhancer)를 사용하였다. 전체 세포 기록에 앞서, 외부 씰 강화 용액(external seal enhancer solution)을 상기한 세포 외 용액으로 교환하였다.
병렬 EPC-10 패치 클램프 증폭기(HEKA Elektronik, Lambrecht/Pfalz, Germany)를 사용하여 hERG 채널 전류를 기록하고 4-극 베젤(Bessel) 필터로 저역 통과 (10kHz) 필터링(Low-pass filter)을 수행하였다. 세포 현탁액과 패치 용액은 미세제작된(microfabricated) 일회용 칩 (NPC-16 Chip, Nanion Technologies, Munchen, Germany)에 있는 네 개의 기록용 웰에 자동적으로 추가되었다.
억제 상수(inhibitory)를 얻기 위해, hERG 꼬리 전류는 20 초의 스윕 간격으로 -80 mV의 유지 포텐셜에서 +20 mV의 탈분극 전위가 500 ms 동안 선행된, 500 ms 동안의 50 mV 까지의 재분극 단계에 의해 유발되었다. Patchmaster (HEKA Elektronik, Lambrecht / Pfalz, Germany)를 사용하여 전체 셀 전류를 수집하고 5 kHz에서 디지털화하였다. 4 ㎕/s의 속도로 4 배 용량의 용액(40 ㎕)을 이용하는 NPC-16 Patchliner의 4 개의 피펫 팁을 통해, 각 차단제를 함유하는 세포 외 용액으로 세포 외 용액을 교환하고, hERG 꼬리 전류를 모니터링함으로써 차단제 결합이 평형에 도달 할 때까지 100-200 초 동안 교환된 차단제 용액을 패치 클램핑 세포에 첨가 하였다. 전체 세포 기록은 Patchmaster/Fitmaster (HEKA Elektronik, Lambrecht/Pfalz, Germany), IGOR Pro (WaveMetrics Inc., Portland, OR, USA), GraphPad Prism 4 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA)를 이용하여 분석하였다.
2-3. 본 발명의 화합물 29의 인 비트로 약동학 및 hERG 채널 시험결과
CYP 효소 (3A4, 2C9 및 1A2)대한 인 비트로 억제 활성 평가에서, 화합물 29는 약한 억제 효과를 나타내었고, hERG 채널에 대한 인 비트로 억제 활성 평가에서 화합물 29는 억제활성을 나타내지 않았다. 이것은 화합물 29가 약제-약제간 상호작용 및 심장 독성에 관하여 합리적인 프로파일을 가진다는 것을 의미한다(표 5).
Figure PCTKR2018002947-appb-T000005
인비트로 약동학(PK) 및 hERG 채널 연구
그러나, 화합물 29는 강한 혈장 단백질 결합 (> 99 %), 낮은 대사 안정성 (30 분 후 <5 %), 낮은 세포 투과성 (log Pe = -7.04)을 보였다. 따라서, 생체 내에서 화합물 29로 전환 될 수 있는 상응하는 메틸 에스테르 유사체 (화합물 28)는 개선된 대사 안정성 (30 분 후에 33 % 잔류 함) 및 혈장 단백질 결합성을 가지며, 중간의 세포 투과성 (log Pe = -4.8)가지는 것으로 나타났다. 뿐만 아니라, 화합물 29의 복강내, 정맥내 투여로도 신경통증 동물모델에서 항이질통 효과가 없었으므로, 화합물 28의 인 비보 효능을 평가하기로 결정하였다.
실험예 3. 본 발명의 화합물의 인비보 효능 시험 방법
3-1. 인 비보 효능 평가 방법
이전에 보고된 프로토콜에 따라 랫트를 사용하여 항 이질통 효과(기계적 이질통, mechanical allodynia)를 평가하였다. 후퇴역치(withdrawal threshold)를 평가하기 위하여, 랫트(naive, SNL 및 CIPN)를 개별 플라스틱 케이지의 플라스틱 메쉬 바닥에 위치시켰다. 랫트를 30 분 동안 환경에 적응시키고, 척수강 내(intrathecal) 또는 정맥 내 꼬리 정맥 투여 후 검사를 하였다. 대조군은 실험군과 같은 양의 비히클(식염수 또는 DMSO의 척수강 내 투여, DMSO:PEG:PBS = 1:6:3의 정맥 투여 v/v %)을 투여받았다. 기계적 후퇴 역치의 평가는 ‘up and down 방법’을 사용하여, 케이지 아래의 메쉬 바닥에 있는 구멍을 통해 랫트의 뒷발에 수정된(calibrated) 폰 프라이 필라멘트(Stoelting, Wood Dale, IL, USA)의 적용에 대한 반응으로 측정하였다. 연속된 8 개의 폰 프레이 필라멘트 (0.4, 0.7, 1.2, 2.0, 3.6, 5.5, 8.5, 및 15 g) 를 머리가 구부러진 상태에서 뒷발의 발바닥 밑면에 수직으로 5 초 동안 적용 하였다. 활발한 후퇴 또는 발을 움찔거리는 것은 양성 반응으로 간주하였다. 15 g 폰 프레이 필라멘트의 압력을 가할 시에 랫트에서 반응이 없으면 컷오프 값으로 사용되었다. 명확한 이질통을 갖는 랫트 (즉, 기계적 후퇴 역치 : SNL 후 4g 미만 또는 CIPN 후 5g 미만)만을 대상으로 시험하였다. 실험이 종료된 랫트는 세보플루란(sevoflurane)의 과량 투여를 통해 안락사 시켰다. 폰 프레이 필라멘트 테스트의 후퇴 역치 값 데이터는 % MPE = [(post-drug threshold - post-injured baseline threshold) / (cutoff threshold - post-injured baseline threshold)X 100] 공식에 따라 최대 가능 효과 (% MPE, maximum possible effect) ]로 환산하였다. 용량-반응(dose-response) 데이터는 Scheffe 's post hoc test와 일원 분산 분석(ANOVA, one-way analysis of variance)을 사용하여 분석하였다.
3-2. 화합물 29의 신경통증 동물모델에서의 인비보 효능 평가
화합물 29의 항이질통 효능은 척수 신경 연결 (SNL, spinal nerve ligation)에서 척수강 내 투여 후 폰 프레이(von Frey) 방법을 사용하여 평가되었다. 화합물 29의 결과는 SNL 랫트에서 항이질통 효과의 지표로서 발 후퇴역치(paw withdrawal threshold)의 증가를 나타내었다(도 4a).
화합물 29의 항이질통 효능(1 ㎍ (0.0026 ㎛ol)에서 MPE % = 58±19)은 P2X3 수용체 길항제인 AF353의 항이질통 효능(1 ㎍ (0.0023 ㎛ol)에서 MPE % = 32±11)보다 강력한 것으로 나타났으며, SNL 랫트에서 칼슘 채널 조절제인 프리가발린(pregabalin) (1 ㎍ (0.0063 ㎛ol)에서 MPE % = 65±9)과 비교하여 동등한 항이질통 효능을 나타내었다(도 4b). 그러나, NeP 동물 모델에 복강내 투여 및 정맥내 투여시의 약리학적 활성은 나타나지 않았다.
3-3. 화합물 28의 신경통증 동물모델에서의 인비보 효능 평가
화합물 29의 뇌척수강 내 투여가 NeP 랫트에서 강력한 항이질통 효과를 나타냈지만, 화합물 29의 정맥 내 주사는 항이질통 효과를 제공하지 못하였다. 최근 AbbVie, Inc.는 염증성 통증 동물 모델에서 반드시 필요한 것은 아니지만, P2X3 수용체 길항제가 신경 병증 통증에서 anti-nociceptive response에 효과적이려면 혈뇌장벽 (BBB, blood brain barrier)에 침투할 수 있어야 한다고 보고한 바 있다. 따라서 화합물 29는 정맥 주사에 의한 NeP 동물 모델에서 BBB를 통과하여 항이질통 효과를 내기에는 지나치게 극성(polar)이었을 수 있다. 화합물 29의 BBB 침투를 위한 물리화학적 성질을 개선시키기 위하여, CNS에서 화합물 29로 전환되어 항이질통 효과를 나타낼 수 있는, 화합물 29의 메틸 에스테르 유도체(화합물 28)를 사용하여 프로드럭 전략을 연구하였다.
결과는 표 6에 나타내었다.
Figure PCTKR2018002947-appb-T000006
래트에서 화합물 28 (5mg / kg)의 정맥 투여 후, 화합물 28( prodrug ) 및 화합물 29 (활성형)의 농도 (평균±표준편차) 및 비율(brain to plasma, 평균±표준편차).
상기 표 6에 나타낸 바와 같이, 화합물 28의 정맥 투여 0.5 시간 후 뇌조직에서의 농도(1.11 μL/g 조직, 표 6)는 화합물 29의 농도(0.022 μL/g 조직, 표 6) 보다 50배 더 높았고, 화합물 28의 뇌 대 혈장(brain to plasma) 비율(1.13-1.79, 표 6)은 화합물 29 (0.25 미만, 표 6)보다 4.5-7 배 더 높았다. 따라서, 본 발명자들은 SNL 랫트 및 화학요법으로 유발된 말초신경병증(CIPN, chemotherapy-induced peripheral neuropathy) 랫트를 포함하는, NeP 동물 모델에서 화합물 28의 복강 내 투여의 인 비보 약리학적 효과를 조사하였다. 그 결과, SNL 랫트에서 2.62 mg/kg (도 4a) 및 CIPN 랫트에서 2.93 mg/kg (도 5a)의 ED50 값을 갖는 강력한 항이질통 효과를 관찰하였다. 상기 결과는 화합물 28의 BBB 침투, 대사 안정성 및 혈장 단백질 결합 특성에 대한 물리 화학적 특성의 전반적인 개선이 정맥 내 주사에 의한 NeP 동물 모델에서의 강력한 항이질통 효능을 가능하게 한다는 것을 나타내었다. 화합물 28의 인 비보 효능은 현재 NeP에 대한 임상 약물인 프리가발린 (ED50 = 4.21 mg/kg) 및 트라마돌 (ED50 = 4.67 mg/kg)의 보고된 효능보다도 더 높았다.
3-4. 화합물 46a-i, 47 및 48의 인 비보 효능 평가
혈뇌장벽의 투과율, CNS에서 화합물 29로의 전환 가능성등을 고려하여 다양한 에스테르 (ester) 그룹을 도입한 화합물 29의 프로드럭(Prodrug)인 화합물 46a-i, 47, 48을 개발하였다. 해당 약물들은 신경병증성 통증 동물 모델인 SNL 및 CIPN 랫트에서 정맥내 주사 후 약리학적 조사를 진행하였다. 그 결과, 표 7의 화합물 46a-i, 47, 48은 SNL 랫트에서 2.31-3.64 mg/kg 의 ED50 값을 갖는 항이질통 효능이 관찰 되었고, CIPN 랫트에서 2.93-3.94 mg/kg 의 ED50 값을 갖는 항이질통 효능이 관찰되었다.
Figure PCTKR2018002947-appb-T000007
실험예 4. 본 발명의 화합물의 행동학적 효능 시험
4-1. 행동학적 효능 시험 방법
추가적인 랫트들은 척수강 내 또는 정맥 내 꼬리 정맥 투여 후 5, 10, 20, 30, 40, 50 및 60 분에 행동 변화를 평가하기 위하여 사용된 약물의 최고 용량을 투여받았다. 운동기능은 정위 및 배치-스텝 반사(righting and placing-stepping reflexe)를 사용하여 검사하였다. 정위 반사는 쥐의 등을 테이블 쪽으로 수평하게 위치시켜, 즉각적인 협응에 의해 몸을 비틀어 정위로 바로 서는지 여부로 평가하였다. 배치-스텝 반사는 테이블의 가장자리를 따라 뒷발을 등 쪽을 당김으로써 유도하였다. 랫트는 정상적으로 걷기 위한 자세로 앞발을 앞으로 놓으려고 한다. 귀 끝(Pinna) 및 각막 반사 또한 평가하여, 존재 또는 부존재로 판정하였다. 사행 운동이나 떨림과 같은 다른 비정상적인 행동도 평가하였다.
4-2. 행동학적 효능 평가 결과
척수강 내 또는 정맥 내 투여 후 화합물 28 및 화합물 29의 행동 반응을 분석 한 결과, 이 연구에서 사용된 최대 투여량에서 정위 및 위치-스텝 반사가 정상이었고, 귀끝(pinna) 및 각막 반사가 존재함이 나타났다. 또한 명백한 이상 행동 변화는 관찰되지 않았다.

Claims (12)

  1. 하기 일반식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염:
    [일반식 1]
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000077
    상기 일반식 1에서,
    A는 다음 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 치환기 중 어느 하나이고,
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000078
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000079
    n과 m은 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수이고;
    R1은 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실, 설포닐, 티오에테르, 벤질, 페네틸로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이며;
    R2는 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실, 설포닐, 시아노(cyano), 아마이드, 테트라졸릴 또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000080
    로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이거나, R3와 함께 N, O, S로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 원자를 포함하는 헤테로 5원-6원 고리를 형성하고;
    R3는 수소원자, 비치환되거나 또는 카르복실로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이거나, R2와 함께 상기 헤테로 5원-6원 고리를 형성하며;
    R4는 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C6 알킬이고,
    R5는 비치환되거나 또는 페닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 또는 1,3-다이옥소-1,3-다이하이드로-2H-이소인돌-2-일로 치환된 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C8 알킬, C5-C6 시클로알킬, 또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000081
    이다.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 일반식 I로 표시되는 화합물의 A가 상기 화학식 1인 경우에,
    n은 0 내지 5의 정수이고, R1은 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C4 알킬, 카르복실(-COOH), 메틸설포닐에틸(-CH2CH2-S(=O)2-CH3), -CH2CH2SCH3, 벤질, 또는 페네틸이며; R2는 수소원자, C1-C3의 알킬, -COOH, -CH=CHCOOH, -CH2CH2COOH, 메틸설포닐(-S(=O)2-CH3), 시아노, 아마이드(-CONH2), 또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000082
    이거나, R3와 함께 N, O, S로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 원자를 포함하는 헤테로 5원-6원 고리를 형성하고; R3는 수소원자, C1-C3의 알킬, 또는 카르복실이거나, R2와 함께 상기 헤테로 5원-6원 고리를 형성하며; R4는 수소원자, 또는 C1-C3의 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 일반식 I로 표시되는 화합물의 A가 상기 화학식 2인 경우에,
    m은 0 내지 5의 정수이고, R1은 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이며;
    R2는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬, -COOH, -CH=CHCOOH, -CH2CH2COOH, -CH2NH2, -CH2NH-S(=O)2-CH3, 시아노, 또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000083
    이고;
    R3는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬, 또는 카르복실(-COOH)이며;
    R5는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000084
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000085
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000086
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000087
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000088
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000089
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000090
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000091
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000092
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000093
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000094
    또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000095
    인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 하기 일반식 Ia 로 표시되는 5-히드록시 피리딘계 화합물, 그 이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000096
    상기 식에서 R1은 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C4 알킬, 카르복실(-COOH), 메틸설포닐에틸(-CH2CH2-S(=O)2-CH3), -CH2CH2SCH3, 벤질, 또는 페네틸이고;
    R2는 수소원자, C1-C3의 알킬, -COOH, -CH=CHCOOH, -CH2CH2COOH, 메틸설포닐(-S(=O)2-CH3), 시아노, 아마이드(-CONH2), 또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000097
    이거나, R3와 함께 N, O, S로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 원자를 포함하는 헤테로 5원-6원 고리를 형성하며;
    R3는 수소원자, C1-C3의 알킬, 또는 카르복실이거나, R2와 함께 상기 헤테로 5원-6원 고리를 형성하고;
    R4는 수소원자, 또는 C1-C3의 알킬이다.
  5. 하기 일반식 Ib 로 표시되는 5-히드록시 피리딘계 화합물, 그 이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000098
    상기 식에서 R1은 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이고;
    R2는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬, -COOH, -CH=CHCOOH, -CH2CH2COOH, -CH2NH2, -CH2NH-S(=O)2-CH3, 시아노, 또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000099
    이며;
    R3는 수소원자, 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬, 또는 카르복실(-COOH)이고;
    R5는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000100
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000101
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000102
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000103
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000104
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000105
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000106
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000107
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000108
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000109
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000110
    또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000111
    이다.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 화합물은 하기의 일반식 Ib’로 표시되는 것을 특징으로 하는 5-히드록시 피리딘계 화합물, 그 이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000112
    상기 식에서 R1은 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이고;
    R3는 수소원자, 또는 직쇄 또는 분지쇄형의 C1-C3 알킬이며;
    R5는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000113
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000114
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000115
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000116
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000117
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000118
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000119
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000120
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000121
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000122
    ,
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000123
    또는
    Figure PCTKR2018002947-appb-I000124
    이다.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 일반식 I로 표시되는 화합물은 하기 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13a); 5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-메틸피리딘-3,4-다이카르복실산 (13b); 6-에틸-5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13c); 5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-프로필피리딘-3,4-다이카르복실산 (13d); 6-부틸-5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13e); 5-히드록시-6-이소프로필-2-(4-메톡시페네틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13f); 5-히드록시-6-iso부틸-2-(4-메톡시페네틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13g); 6-벤질-5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13h); 5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-페네틸피리딘-3,4-다이카르복실산 (13i); 3-히드록시-6-(4-메톡시페네틸)피리딘-2,4,5-트리카르복실산 (13j); 5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-(2-(메틸티오)에틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13k); 5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-(2-(메틸설포닐)에틸)피리딘-3,4-다이카르복실산 (13l); 에틸 4-시아노-5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-메틸니코티네이트 (14); 에틸 5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-메틸-4-(1H-테트라졸-5-일)니코티네이트 (15); 4-시아노-5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-메틸니코틴산 (16); 5-히드록시-2-(4-메톡시페네틸)-6-메틸-4-(1H-테트라졸-5-일)니코틴산 (17); 7-히드록시-4-(4-메톡시페네틸)-6-메틸퓨로[3,4-c]피리딘-1,3-다이온 (18); 8-히드록시-5-(4-메톡시페네틸)-7-메틸-2,3-다이히드로피리도[3,4-d]피리다진-1,4-다이온 (19); 6-(4-메톡시페네틸)-2-메틸-4-(메틸설포닐)피리딘-3-올 (20); 메틸 3-히드록시-6-(4-메톡시페네틸)-2-메틸이소니코티네이트 (21a); 메틸 3-히드록시-6-(4-메톡시페네틸)-2,5-다이메틸이소니코티네이트 (21b); 메틸 3-히드록시-6-(4-메톡시페네틸)-5-메틸-2-프로필이소니코티네이트 (21c); 3-히드록시-6-(4-메톡시페네틸)-2-메틸이소니코틴산 (22a); 3-히드록시-6-(4-메톡시페네틸)-2,5-다이메틸이소니코틴산 (22b); 3-히드록시-6-(4-메톡시페네틸)-5-메틸-2-프로필이소니코틴산 (22c); 5-히드록시-2-[2-(4-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-6-프로필-피리딘-4-카르복사마이드 (23);
    다이메틸 5-히드록시-2-(3-페녹시벤질)-6-프로필피리딘-3,4-다이카르복실레이트 (26); 5-히드록시-2-(3-페녹시벤질)-6-프로필피리딘-3,4-다이카르복실산 (27); 메틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (28); 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코틴산 (29); 메틸 3-(벤질옥시)-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (30); (3-(벤질옥시)-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4-일)메탄올 (31); 4-(히드록시메틸)-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-3-올 (32); 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코틴알데하이드 (33); 에틸 (E)-3-(3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4-일)아크릴레이트 (34);
    (E)-3-(3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4-일)아크릴산 (35); 에틸 3-(3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4-일)프로파노에이트 (36); 3-(3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4-일)프로파논산 (37); 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티노니트릴 (38); 3-(벤질옥시)-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티노니트릴 (39); (3-(시클로헥사-2,4-다이엔-1-일메톡시)-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4-일) 메탄아마이드 (40); 4-(아미노메틸)-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-3-올 (41);
    N-((3-(벤질옥시)-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4- 일)메틸) 메탄설폰아마이드(42); N-((3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필피리딘-4-일)메틸)메탄설폰아마이드 (43); 페네틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46a); 옥틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46b); 2-프탈이미도에틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46c); 4-프탈이미도부틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46d); 2-(피롤리딘-1-일)에틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46e); 이소프로필 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46f); 펜탄-3-일 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46g); 시클로펜틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46h); 테트라히드로퓨란-3-일 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46i); 1-(Tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (46j); 피페리딘-4-일 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (47); 및 에틸 3-히드록시-5-메틸-6-(3-페녹시벤질)-2-프로필이소니코티네이트 (48).
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 만성염증 질환, 신경성 통증 질환 또는 혈소판 응집관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 만성염증 질환은 퇴행성 관절염, 류마티스 관절염, 천식, 만성폐쇄성폐질환, 또는 방광염인 약학적 조성물.
  10. 제 8항에 있어서,
    상기 신경성 통증 질환은 신경병증성통증, 이질통, 당뇨성 신경장애증, 자발성통증, 과민성통증, 환지통, 또는 복합부위 통증증후군인 약학적 조성물.
  11. 제 8 항에 있어서,
    상기 혈소판 응집관련 질환은 동맥경화, 뇌졸중, 혈전증, 색전증, 심근경색, 죽상경화증, 또는 말초혈액순환장애인 약학적 조성물.
  12. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 화합물, 이의 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 P2X 수용체의 길항제.
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