WO2018026211A1 - 스쿠알렌을 함유하는 근기능 향상 및 근육 손상 예방용 조성물 - Google Patents

스쿠알렌을 함유하는 근기능 향상 및 근육 손상 예방용 조성물 Download PDF

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muscle
squalene
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damage
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황재관
이세인
김미보
김창희
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(주)앗코스텍
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing, treating or improving muscle diseases and muscle wounds containing squalene, and more particularly, to a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage containing squalene, improving muscle function and muscle damage. It relates to a food composition for preventing, improving muscle damage or regenerating muscles, cosmetic composition for improving muscle function or regenerating muscles.
  • Muscle is a tissue produced by the development of mesenchymal stem cells and consists of a bundle of myofiber composed of fusion of myoblasts. Muscles account for 40-50% of body weight, supporting and protecting bones and internal organs, as well as motility in other tissues, such as the heartbeat (Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 61: 188-194, 2015). . In addition to organ protection, muscles are also closely linked to the development of metabolic diseases such as type 2 diabetes, obesity, and cardiovascular disease because muscles have a significant effect on metabolism as well as physical activities, including exercise.
  • Muscle atrophy is caused by a gradual decrease in muscle mass and refers to muscle weakness and degeneration (Cell, 119 (7): 907-910, 2004). Muscular atrophy is promoted by inactivity, oxidative stress and chronic inflammation, weakening muscle function and motor capacity (Clinical Nutrition, 26 (5): 524-534, 2007). The most important factor in determining muscle function is muscle mass, which is maintained by the balance of protein synthesis and degradation. Muscular atrophy occurs when proteolysis occurs more than synthesis (The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37 (10): 1985-1996, 2005).
  • Muscle size is regulated by intracellular signaling pathways that induce anabolism or catabolism in muscles, and when there are more signaling reactions that induce synthesis than muscle protein degradation Muscle protein synthesis is increased, which results in increased muscle size (hypertrophy) or muscle fiber number (hyperplasia) (The Korea Journal of Sports Science, 20 (3): 1551-1561, 2011).
  • PI3K phosphatidylinositol-3 kinase
  • mTOR mammalian target of rapamycin
  • mTOR induces muscle protein synthesis by activating two factors that initiate mRNA translation, 4E-binding protein (4EBP1) and phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase (p70S6K) (The Korea Journal of Sports Science, 20 (3): 1551-1561, 2011; The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 43 (9): 1267-1276, 2011).
  • 4EBP1 4E-binding protein
  • p70S6K phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase
  • the transcription factor forhead box FaxO
  • Increased expression of these proteins promotes protein breakdown in muscles, thereby reducing muscle mass. Therefore, promoting mTOR activity and inhibiting atrogin-1 and Mu
  • muscle satellite cells When muscles are injured or damaged, muscle satellite cells as precursors to muscle cells play an important role in muscle regeneration. Normally, muscle satellite cells located at the edges of muscle fibers remain quiescent, but when muscles are physically or chemically damaged from the outside, they secrete a variety of transcription factors to regenerate them. enter the regeneration phase.
  • the transcription factors expressed by muscle wounds cause the satellite cells to self-renewal to form a stem cell pool for muscle regeneration.
  • the expression of pax7 is increased to maintain a constant cell number.
  • Increased expression of pax7 is a transcription factor, when methylated by carm1 protein, forms a pax7-carm1 complex and promotes the expression of myf5.
  • Myf5 factor When the resting muscle satellite cells are activated due to increased expression of Myf5 factor, the activated muscle satellite cells migrate to the wound and damaged muscle area to form a bundle of muscle fibers and generate new muscle (Stem Cells Translational. Medicine, 5: 282-290, 2016).
  • Squalene is an unsaturated hydrocarbon in which 30 carbons and 50 hydrogens are connected by six double bonds, which are widely distributed in humans, animals and plants, and are especially found in deep sea sharks.
  • the physiological chemistry of squalene improves hypertriglyceridemia through lipid metabolism (European Journal of Lipid Science and Technology, 118: 1-7, 2016), The Lancet Oncology, 1: 107-112, 2000 ), Breast cancer (Food and Chemical Toxicology, 48: 1092-1100, 2010), atherosclerosis, hyperlipidemia, hepatic steatosis (Biotechnology Letters, 38: 1065-1071, 2016).
  • squalene is used as a lubricant for cosmetics and computer diskettes. However, nothing is known about the prevention and treatment of muscle diseases of squalene, or the improvement of muscle function.
  • the present inventors have searched for natural substances that can be safely applied while having excellent muscle function regulating activity, and squalene increases the expression of proteins related to muscle protein synthesis and muscle mass in muscle cells and is involved in muscle protein degradation.
  • squalene increases the expression of proteins related to muscle protein synthesis and muscle mass in muscle cells and is involved in muscle protein degradation.
  • the present inventors have searched for natural substances having excellent muscle function control activity and can be safely applied, and confirmed that squalene can increase muscle mass to improve muscle function, and can show improvement and prevention of muscle damage. Was completed.
  • Still another object of the present invention is to provide a food composition for improving muscle function, preventing muscle damage, improving muscle damage, or muscle regeneration.
  • Still another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for muscle function improvement or muscle regeneration.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases or muscle damage, including squalene as an active ingredient.
  • the present invention provides a food composition for improving muscle function, preventing muscle damage, improving muscle damage, or muscle regeneration, comprising squalene as an active ingredient.
  • the present invention also provides a cosmetic composition for muscle function improvement or muscle regeneration comprising squalene as an active ingredient.
  • the present invention provides a composition for preventing, treating, or improving muscle diseases and muscle damage, including squalene as an active ingredient.
  • Squalene of the present invention can increase the expression of proteins associated with muscle protein synthesis and muscle mass increase in muscle cells, inhibit the expression of enzymes involved in muscle protein degradation at the mRNA level, and can quickly restore damaged muscle. Therefore, the squalene of the present invention can increase muscle mass, improve muscle function, and exhibit muscle damage improvement and prevention effects, and thus is effective as an active ingredient of a composition for preventing, treating, or improving muscle diseases and muscle damage.
  • 1 shows protein expression levels of p-mTOR following squalene treatment in C2C12 muscle cells.
  • Figure 2 shows the protein expression of p-p70S6K following squalene treatment in C2C12 muscle cells.
  • Figure 3 shows the mRNA expression levels of atrogin-1 and MuRF1 according to squalene treatment in C2C12 muscle cells.
  • Figure 4 shows the muscle strength of the experimental animal according to the squalene treatment.
  • Figure 5 shows the increase in the weight of the right forearm muscle of the experimental animal according to the squalene treatment.
  • Figure 6 shows the muscle fiber cross-sectional area of the right forearm muscle according to the squalene treatment.
  • Figure 7 shows the increase in the weight of the right calf muscles of the experimental animals following squalene treatment.
  • Squalene of the present invention increases the expression of proteins associated with muscle protein synthesis and muscle mass in muscle cells, inhibits the expression of enzymes involved in muscle protein degradation at the mRNA level, and can quickly restore damaged muscle, muscle disease And it is effective as an active ingredient of a composition for preventing, treating, or improving muscle damage.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases or muscle damage, comprising squalene as an active ingredient, represented by the structure of [Formula 1]:
  • the present invention also provides a food composition for improving muscle function, preventing muscle damage, improving muscle damage, or muscle regeneration, comprising the squalene as an active ingredient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for muscle function improvement or muscle regeneration comprising the squalene as an active ingredient.
  • Squalene may be represented as 111-02-04 as a chemical substance unique number (CAS No.), and the structure name is (6E, 10E, 14E, 18E) -2,6,10,15,19,23 Hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene ((6E, 10E, 14E, 18E) -2,6,10,15,19,23-Hexamethyltetracosa-2,6,10 , 14,18,22-hexaene).
  • Squalene of the present invention may be used any of those isolated from the extract, synthesized or commercially available products.
  • Muscle disease of the present invention is preferably a disease reported in the art as a muscle disease caused by muscle function decline, muscle wasting or muscle degeneration, and specifically, sarcopenia, muscle atrophy, muscular dystrophy ), Muscle degeneration, and cachexia is more preferably one or more selected from the group consisting of, but is not limited thereto.
  • muscle wasting or degeneration is caused by a total factor, acquired factors, aging, etc., muscle wasting is characterized by a gradual loss of muscle mass, muscle weakness, especially skeletal muscle or veterinary muscle and heart muscle.
  • the "muscle damage” of the present invention is a damage caused by physical or chemical destruction due to injury, muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, sprain It is more preferably one or more selected from the group consisting of distortion, roator cuff syndrome, and myositis, but is not limited thereto.
  • the physical destruction is caused by trauma, excessive temperature, myxins, ischemia, inflammation, exercise, and the like, and is characterized by damage to skeletal muscle or veterinary muscle and heart muscle.
  • muscle regeneration refers to the rapid recovery when the muscle is physically or chemically damaged, and refers to the process and duration until the damaged muscle can function normally.
  • muscle refers to tendons, muscles, and tendons in general
  • muscle function or “muscle function” means the ability to exert strength by contraction of muscles, the muscles withstand resistance Muscle strength that can exert maximum contractile force to Muscle endurance, the ability to indicate how long or how many times a muscle can repeat contraction and relaxation at a given weight; And quickness, which is the ability to exert a strong force in a short time.
  • the muscle function is dominated by the liver and is proportional to muscle mass.
  • the term “improving muscle function” means improving muscle function in a more positive direction.
  • the "improvement of muscle function” is that by administering squalene synthesized muscle protein can increase the muscle mass to induce muscle regeneration effect, can be expected to prevent or improve muscle damage, thereby improving muscle function Can be effective.
  • the inventors have found that squalene increased the expression of proteins associated with muscle protein synthesis and muscle mass increase in muscle cells (FIGS. 1 and 2).
  • the inventors confirmed that squalene reduced the expression of the enzymes MuRF1 and atrogin-1, which are involved in muscle proteolysis, at the mRNA level in muscle cells (FIG. 3).
  • the inventors confirmed that squalene increases the reduced muscle strength, muscle weight, and cross-sectional area of muscle fibers in the immobilized experimental animals (FIGS. 4, 5, and 6).
  • the inventors confirmed that squalene rapidly repairs damaged muscle in the immobilized experimental animals (FIG. 7).
  • the squalene of the present invention increases the expression of proteins associated with muscle protein synthesis and muscle mass in muscle cells, inhibits the expression of enzymes involved in muscle protein degradation at the mRNA level, and can quickly restore damaged muscle, It can be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage.
  • composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage of the present invention may contain squalene alone or may contain one or more active ingredients exhibiting a similar function to squalene. Inclusion of additional components may further enhance the muscle function improving effect of the composition of the present invention. When the ingredient is added, skin safety, ease of formulation, and stability of the active ingredients may be considered.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may comprise a pharmaceutically acceptable salt of squalene.
  • pharmaceutically acceptable refers to a physiologically acceptable and typically does not cause an allergic or similar reaction when administered to a human, wherein the salt is a pharmaceutically acceptable free acid. Acid addition salts formed by acid) are preferred.
  • the pharmaceutically acceptable salt of squalene may be an acid addition salt formed using an organic acid or an inorganic acid, and the organic acid may be, for example, formic acid, acetic acid, propionic acid, lactic acid, butyric acid, isobutyric acid, trifluoroacetic acid, malic acid, maleic acid.
  • Acids malonic acid, fumaric acid, succinic acid, succinic acid monoamide, glutamic acid, tartaric acid, oxalic acid, citric acid, glycolic acid, glucuronic acid, ascorbic acid, benzoic acid, phthalic acid, salicylic acid, anthranilic acid, dichloroacetic acid, aminooxy acetic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid or methanesulfonic acid.
  • Inorganic acids include, for example, hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, carbonic acid or boric acid.
  • the acid addition salt may preferably be in the form of hydrochloride or acetate, more preferably in the form of hydrochloride.
  • the acid addition salts mentioned above can be either a) direct mixing of squalene and acid, or b) dissolving and mixing it in a solvent or hydrous solvent, or c) placing the squalene in an acid in a solvent or submerged solvent and mixing them. It is manufactured by the manufacturing method.
  • salts that can be additionally salted are gabar salt, gabapentin salt, pregabalin salt, nicotinate, adipate salt, hemimalonate, cysteine salt, acetylcysteine salt, methionine salt, arginine salt, lysine salt, ornithine salt Aspartate.
  • composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage of the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may further include, for example, carriers for oral administration or carriers for parenteral administration.
  • Carriers for oral administration may include lactose, starch, cellulose derivatives, magnesium stearate, stearic acid and the like.
  • Carriers for parenteral administration may also include water, suitable oils, saline, aqueous glucose, glycols, and the like.
  • stabilizers and preservatives may be further included. Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium hydrogen sulfite, sodium sulfite or ascorbic acid.
  • Suitable preservatives include benzalkonium chloride, methyl- or propyl-paraben and chlorobutanol.
  • Other pharmaceutically acceptable carriers may be referred to those described in the following documents (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
  • composition of the present invention can be administered to any mammal, including humans.
  • parenteral administration methods include, but are not limited to, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intradural, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal , Intranasal, intestinal, topical, sublingual or rectal administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into a preparation for oral or parenteral administration according to the route of administration as described above.
  • one or more buffers e.g. saline or PBS
  • antioxidants e.g. saline or PBS
  • bacteriostatic agents e.g. EDTA or glutathione
  • fillers e.g., extenders, binders, adjuvants (e.g. aluminum hydroxide) Side)
  • suspending agents e.g. aluminum hydroxide
  • Solid form preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, solutions, gels, syrups, slurries, suspensions or capsules, and the like, and the solid form may include at least one excipient in the pharmaceutical composition of the present invention, for example , Starch (including corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, etc.), calcium carbonate, sucrose, lactose, dextrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol maltitol, cellulose , Methyl cellulose, sodium carboxymethylcellulose and hydroxypropylmethyl-cellulose or gelatin may be prepared by mixing.
  • tablets or sugar tablets can be obtained by combining the active ingredient with a solid excipient and then grinding it, adding suitable auxiliaries and then processing the granule mixture.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, solutions, emulsions, or syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, or preservatives, in addition to water or liquid paraffin, which are commonly used simple diluents.
  • crosslinked polyvinylpyrrolidone, agar, alginic acid or sodium alginate may be added as a disintegrant, and may further include an anticoagulant, a lubricant, a humectant, a perfume, an emulsifier, a preservative, and the like.
  • compositions of the present invention may be formulated according to methods known in the art in the form of injections, transdermal and nasal inhalants with suitable parenteral carriers.
  • suitable parenteral carriers include, but are not limited to, solvents or dispersion media comprising water, ethanol, polyols (e.g., glycerol, propylene glycol and liquid polyethylene glycols, etc.), mixtures thereof and / or vegetable oils Can be.
  • suitable carriers include Hanks' solution, Ringer's solution, phosphate buffered saline (PBS) containing triethanol amine or sterile water for injection, 10% ethanol, 40% propylene glycol and 5% dextrose Etc. can be used.
  • PBS phosphate buffered saline
  • various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like may be further included.
  • the injection may in most cases further comprise an isotonic agent such as sugar or sodium chloride.
  • transdermal administration means that the pharmaceutical composition is locally administered to the skin so that an effective amount of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition is delivered into the skin.
  • the compounds used according to the invention may be pressurized packs or by means of suitable propellants, for example dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide or other suitable gas. It can be delivered conveniently from the nebulizer in the form of an aerosol spray. In the case of a pressurized aerosol, the dosage unit can be determined by providing a valve to deliver a metered amount.
  • gelatin capsules and cartridges for use in inhalers or blowers can be formulated to contain a mixture of the compound and a suitable powder base such as lactose or starch. Formulations for parenteral administration are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour, a prescription generally known in all pharmaceutical chemistries.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage of the present invention may provide a desirable muscle disease and muscle damage prevention or treatment effect when it contains an effective amount of squalene.
  • the 'effective amount' refers to an amount that exhibits a higher response than the negative control, and preferably refers to an amount sufficient to improve muscle function.
  • Squalene may be included in the pharmaceutical composition of the present invention 0.01 to 99.99%, the remaining amount may be occupied by a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the effective amount of squalene included in the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the form in which the composition is commercialized and the like.
  • the total effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention may be administered to a patient in a single dose, and may be administered by a fractionated treatment protocol that is administered in multiple doses for a long time. It is important to administer all of the above factors in such a way that the maximum effect can be obtained in a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may vary the content of the active ingredient depending on the extent of the disease.
  • Parenteral administration is preferably to be administered in an amount of preferably 0.01 to 50 mg, more preferably 0.1 to 30 mg per kg of body weight per day based on the squalene, and oral administration 1 weight per day based on squalene It may be administered in one to several times to be administered in an amount of preferably 0.01 to 100 mg, more preferably 0.01 to 10 mg per kg.
  • the effective dosage is determined for the patient.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention is not particularly limited to its formulation, route of administration and method of administration as long as the effect of the present invention is shown.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy or biological response modifiers.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage of the present invention can also be provided in the formulation of an external preparation containing squalene as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damages of the present invention is used as an external preparation for skin, it is further used for fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents.
  • fragrance agents perfumes
  • surfactants water
  • ionic emulsifiers nonionic emulsifiers
  • fillers metal ion sequestrants
  • chelating agents preservatives
  • vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic active agents It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology such as lipophilic actives or any other ingredients commonly used in external preparations for skin such as lipid vesicles.
  • the ingredients may also be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle diseases and muscle damage of the present invention may be a formulation such as, but not limited to, ointment, patch, gel, cream or spray.
  • the present invention can be used as an active ingredient of a food composition for preventing or improving muscle diseases or muscle damage, including squalene as an active ingredient.
  • the food composition of the present invention includes all forms such as functional food, nutritional supplement, health food, food additives and feed, and includes animals such as humans or livestock. It is for eating. Food compositions of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
  • the food composition according to the present invention can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
  • General foods include, but are not limited to, beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.), fish, meat and processed foods (e.g. hams, sausages) Cornbread, etc.), breads and noodles (e.g. udon, soba noodles, ramen, spagate, macaroni, etc.), fruit juices, various drinks, cookies, malts, dairy products (e.g.
  • butter, cheese edible vegetable oils
  • margarine It can be prepared by adding squalene of the present invention to vegetable protein, retort food, frozen food, various seasonings (eg, miso, soy sauce, sauce, etc.).
  • the nutritional supplement may be prepared by adding the squalene of the present invention to a capsule, a tablet, a pill, etc., although not limited thereto.
  • the squalene itself of the present invention can be ingested by liquefying, granulating, encapsulating and powdering to be prepared in the form of tea, juice and drink for drinking (healthy beverage).
  • the squalene of the present invention in the form of a food additive, it may be prepared and used in the form of a powder or a concentrate. In addition, it can be prepared in the form of a composition by mixing with the squalene of the present invention and known active ingredients known to be effective in preventing or improving muscle diseases and muscle damage.
  • the health beverage composition may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional components, as in general beverages.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose; Disaccharides such as maltose and sucrose; Polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin; Sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • Sweeteners include natural sweeteners such as taumartin, stevia extract; Synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame;
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally from about 0.01 to 0.04 g, preferably from about 0.02 to 0.03 g per 100 mL of the composition of the present invention.
  • the squalene of the present invention may be contained as an active ingredient of the food composition for preventing or improving muscle diseases and muscle damage, the amount is not particularly limited to an amount effective to achieve the action for preventing muscle diseases and improving muscle function. It is preferable that it is 0.01 to 100 weight% with respect to the total weight of the whole composition.
  • the food composition of the present invention may be prepared by mixing with squalene together with other active ingredients known to be effective in the composition for preventing or improving muscle diseases and muscle damage.
  • the health food of the present invention is various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, pectic acid, salts of pectic acid, alginic acid, salts of alginic acid, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, Glycerin, alcohol or carbonation agent, and the like.
  • the health food of the present invention may contain a flesh for preparing natural fruit juice, fruit juice beverage, or vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • the present invention provides a cosmetic composition for improving muscle function or promoting muscle regeneration, comprising squalene as an active ingredient.
  • the cosmetic composition is not particularly limited, but may be used externally or ingested orally.
  • the cosmetic composition of the present invention contains a squalene as an active ingredient and, together with a dermatologically acceptable excipient, a basic cosmetic composition (washing agents such as cosmetics, creams, essences, cleansing foams and cleansing water, packs, body oils), color cosmetic compositions ( Foundations, lipsticks, mascara, makeup bases), hair product compositions (shampoos, rinses, hair conditioners, hair gels) and soaps.
  • a basic cosmetic composition washing agents such as cosmetics, creams, essences, cleansing foams and cleansing water, packs, body oils
  • color cosmetic compositions Foundations, lipsticks, mascara, makeup bases
  • hair product compositions shampoos, rinses, hair conditioners, hair gels
  • soaps soaps.
  • the excipients include, but are not limited to, emollients, skin penetration enhancers, colorants, fragrances, emulsifiers, thickeners and solvents.
  • fragrances, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives and moisturizing agents may be further included, and may include thickeners, inorganic salts, synthetic polymer materials and the like for the purpose of improving the properties.
  • the above-mentioned squalene can be added to the usual face wash and the soap base to easily prepare.
  • the cream When the cream is prepared, it can be prepared by adding squalene or a salt thereof to a cream base of a general oil-in-water type (O / W).
  • synthetic or natural materials such as proteins, minerals, vitamins, etc., for the purpose of improving physical properties, such as flavors, chelating agents, pigments, antioxidants, and preservatives, may be added.
  • the content of squalene contained in the cosmetic composition of the present invention is not limited thereto, it is preferably 0.001 to 10% by weight, more preferably 0.01 to 5% by weight based on the total weight of the composition. If the content is less than 0.001% by weight, the desired anti-aging or anti-wrinkle effect may not be expected, and when the content is more than 10% by weight, there may be difficulty in preparing a safety or formulation.
  • the major protein expression level expressed at the time of 1 differentiation in muscle protein synthesis and muscle mass increase in PI3K / Akt signaling pathway in muscle cells was confirmed.
  • the obtained cells were lysed with NP-40 buffer solution (ELPIS-Biotech, Daejeon, Korea) containing a protease inhibitor cocktail (Sigma-Aldrich), and centrifuged at 13,000 rpm for 10 minutes for cell lysate of the supernatant. Obtained. Protein concentration in the supernatant was quantified by Bradford, and then a constant concentration of protein was heated for 5 minutes and separated by SDS-PAGE electrophoresis. The isolated protein was transferred to nitrocellulose membrane.
  • p-mTOR primary antibody Cell signaling technology, Beverly, MA, USA
  • BSA bovine serum albumin
  • the delivered protein was reacted at room temperature for 20 hours.
  • the nitrocellulose membrane was washed three times for 10 minutes using Tris-buffer Saline Tween 20 (TBST).
  • anti-rabbit secondary antibody Bethyl Laboratories, Inc., Montgomery, TA, USA conjugated with horseradish peroxidase that recognizes the primary antibody was 1: 5000 in 2.5% BSA (Bioworld).
  • the mixture was diluted to react with nitrocellulose membrane at room temperature for 2 hours, and washed three times for 10 minutes using TBST.
  • Protein bands detected through antibody binding were developed using ECL western blot detection reagents (Amersham, Tokyo, Japan), and identified protein bands were identified using G; BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK). .
  • the expression level of phosphorylated mTOR was increased in C2C12 muscle cells as treated with squalene. This means that squalene has an excellent effect of increasing muscle production in muscle cells.
  • Example 1> the same method as in ⁇ Example 1> was carried out while incubating with squalene while inducing differentiation of C2C12 muscle cells, cells were obtained, and Western blotting was performed.
  • primary antibody for Western blot p-p70S6K antibody (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) was used.
  • squalene Since squalene has been shown to have an effect of increasing muscle production in muscle cells, mRNA transcription of the muscle degradation proteins atrogin-1 and MuRF1 has been investigated to determine whether the generated muscle protein can also be protected by the inhibitory activity of degradation by squalene. Expression levels were checked.
  • mice Seven weeks old male rats (C57BL / 6J; Daehan Biolink) were purchased as experimental animals. All animals were raised at Yonsei Laboratory Animal Reaserch Center (YLARC, Seoul, Korea), and the environment was maintained at 23 ⁇ 2 °C and 55 ⁇ 10% relative humidity. Before starting the experiment, a total of 28 rats were randomized to be 7 per group, such as the normal group, the immobilized group, the squalene 100 mg / kg / day group (the squalene 100 group), and the squalene 200 mg / kg / day group ( Squalene 200 administration group).
  • the muscle strength of the rat was measured using a muscle strength analyzer (Columbus Instrument, Columbus, OH, USA). Both the forelimbs and hind limbs of the rat were hung on the grid, and the rats were held by the tail and pulled with the same force, and the maximum value was selected by five consecutive measurements.
  • Example 4-3 A part of the foreskin muscle tissue extracted in Example 4-3 was removed and fixed with 10% formalin to prepare a paraffin block. After fixation, hematoxylin & eosin staining was performed to measure muscle recovery in histological aspects.
  • the stained tissues were equipped with an optical chemical microscope (CK40; Olymupus, Tokyo, Korea) equipped with an eXcope T500 camera (DIXI Science, Daejeon, Korea). Japan). Muscle fibers were also taken and the cross-sectional area was measured by the Image J program (National Institutes of Health, Bethesda, ML, USA).
  • the muscle fiber cross-sectional area of the proximal muscle muscle was significantly reduced ( # # P ⁇ 0.01) in the passivation treatment group, and treated with squalene concentration-dependent muscle fibers It was confirmed that the cross-sectional area was increased ( ** P ⁇ 0.01). This means that the squalene of the present invention has an excellent effect of increasing the size of the muscle.
  • Example 4-3 the calf muscles of the right hind limb, which were physically directly damaged by a stapler, were extracted from the rats from which the forearm tibialis of the right hind limb were extracted and weighed.
  • the weight of the calf muscle was significantly reduced ( ## P ⁇ 0.01) in the immobilized group compared to the normal group, and the concentration of muscle weight was dependent on the treatment with squalene.
  • the concentration of muscle weight was dependent on the treatment with squalene.
  • ** P ⁇ 0.01 This means that the squalene of the present invention has an excellent effect of promoting regeneration of damaged muscle.
  • the medicine, food or cosmetic composition of Preparation Examples 1 to 3 was prepared according to a conventional method with squalene having an excellent effect of preventing, treating, improving or damaging muscle diseases and having the following components and composition ratios.
  • the above ingredients were mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
  • a tablet was prepared by a direct tableting method.
  • the powder was prepared by mixing the above components, the powder was filled in a hard capsule according to the conventional method for preparing a capsule to prepare a capsule.
  • the amount of the above ingredient was prepared per ampoule (2 ml).
  • squalene of the present invention 0.5 to 5.0 parts by weight was added to the flour, and bread, cake, keys, crackers and noodles were prepared using the mixture.
  • squalene of the present invention was added to soups and gravy to prepare meat products for health promotion, soups of noodles and gravy.
  • squalene of the present invention 5 to 10 parts by weight was added to milk, and the milk was used to prepare various dairy products such as butter and ice cream.
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixtures is mixed with a composition suitable for a health food in a preferred embodiment, but the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method.
  • the granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.
  • composition ratio is a composition suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment
  • the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, use purpose.
  • Softening water (milk lotion) containing squalene of the present invention can be prepared according to the production method in the general cosmetic field by blending as described in the following [Table 2].
  • Softening water (skin lotion) containing squalene of the present invention can be prepared according to the production method in the general cosmetic field by blending as described in the following [Table 3].
  • the nourishing cream containing squalene of this invention can be mix
  • Massage cream containing squalene of the present invention can be prepared according to the production method in the general cosmetic field by blending as shown in the following [Table 5].
  • the pack containing squalene of the present invention can be formulated according to the manufacturing method in the conventional cosmetic field by combining as shown in Table 6 below.
  • the gel containing the squalene of the present invention can be blended as described in the following [Table 7] and prepared according to the manufacturing method in the conventional cosmetic field.
  • the present invention is not limited to the above-described embodiments and preparation examples, and can be variously modified and changed by those skilled in the art, and can be applied to cosmetics of various uses including other color cosmetics. It can be used in the manufacture of a medicament, that is, an ointment that can be applied thinly to the human body depending on its efficacy, which is included in the spirit and scope of the present invention as defined in the appended claims.
  • the present invention provides a composition for preventing, treating, or improving muscle diseases and muscle damage, including squalene as an active ingredient. More specifically, the squalene of the present invention can increase the expression of proteins related to muscle protein synthesis and muscle mass in muscle cells, inhibit the expression of enzymes involved in muscle protein degradation at the mRNA level, and quickly restore damaged muscle. Therefore, it shows an excellent effect on preventing, treating, or improving muscle diseases and muscle damage. Therefore, the squalene of the present invention can be safely used without side effects, and can provide a composition that exhibits an excellent effect on preventing, treating, or improving muscle diseases and muscle damage, and thus has high industrial applicability.

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Abstract

본 발명은 스쿠알렌을 함유하는 근육 질환 예방, 치료, 개선 또는 손상 근육 재생용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명의 스쿠알렌은 근육 세포에서 근단백질 합성 및 근육량 증가와 관련된 단백질의 발현을 증가시키며, 근 단백질 분해에 관여하는 효소의 발현을 mRNA 수준에서 억제하고, 손상 근육의 회복을 빠르게 회복시키는 효과가 있다. 또한, 본 발명은 천연물이므로 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있어, 의약품, 식품 또는 화장품으로 사용될 수 있다.

Description

스쿠알렌을 함유하는 근기능 향상 및 근육 손상 예방용 조성물
본 출원은 2016년 08월 03일 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2016-0098921호 및 2017년 08월 03일 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2017-0098409 호를 우선권으로 주장하고, 상기 명세서 전체는 본 출원의 참고문헌이다.
본 발명은 스쿠알렌을 함유하는 근육 질환 및 근육 상처 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 스쿠알렌을 함유하는 근육 질환 및 근육 손상 예방, 또는 치료용 약학 조성물, 근기능 향상, 근손상 예방, 근손상 개선 또는 근육 재생용 식품 조성물, 근기능 개선 또는 근육 재생용 화장료 조성물에 관한 것이다.
근육(Muscle)이란 중배엽의 줄기세포가 발달되어 생성된 조직으로써 근육세포(myoblast)들의 결합(fusion)으로 이루어진 근섬유(myofiber) 다발로 구성되어 있다. 근육은 체중의 40-50%를 차지하고 있어 뼈, 내장 기관을 지탱 및 보호하는 동시에 심장의 박동과 같은 근육 외의 다른 조직의 운동성을 갖도록 한다(Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 61: 188-194, 2015). 또한 기관의 보호 외에도 근육은 운동을 포함한 신체활동뿐만 아니라 영양소 대사(metabolism)에도 큰 영향을 주기 때문에 제 2형 당뇨, 비만, 심혈관 질환 등과 같은 대사성 질환의 발병과도 밀접하게 연관되어 있다.
근 위축(Muscle atrophy)이란 근육량의 점진적 감소에 의하여 발생하는 것으로, 근육의 약화 및 퇴행을 일컫는다(Cell, 119(7): 907-910, 2004). 근 위축은 비활동, 산화적 스트레스, 만성 염증에 의해 촉진되며 근육 기능과 운동 능력을 약화시킨다(Clinical Nutrition, 26(5): 524-534, 2007). 근 기능을 결정짓는 가장 중요한 요소는 근육량이며, 이는 단백질 합성과 분해의 균형에 의해 유지된다. 근 위축증은 단백질 분해가 합성보다 더 일어날 때 발생한다(The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37(10): 1985-1996, 2005).
근육 크기는 근육 내에서 일어나는 동화작용(anabolism)이나 이화작용(catabolism)을 유도하는 세포 내 신호전달 과정(signaling pathways)에 의해 조절되며 근 단백질의 분해보다 합성을 유도하는 신호전달 반응이 많이 일어날 경우 근 단백질 합성이 증가되는데, 이는 근 단백질 증가에 따른 근육 크기 증가(hypertrophy, 근비대)나 근섬유 수 증가(hyperplasia)로 나타난다(The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011).
근 단백질 합성에 관여하는 인자들은 근 세포 내에서 phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K)/Akt pathway의 자극을 기점으로 다운스트림 단백질(downstream proteins)을 인산화시킴으로써 단백질 합성을 유도한다. PI3K/Akt 신호전달에 의한 mammalian target of rapamycin (mTOR)의 활성은 세포 내에서 다양한 성장 신호를 통합하는 중심 성장 신호전달 인자로 인정되고 있다. mTOR는 mRNA translation을 개시하는 두 인자, 4E-binding protein (4EBP1)과 phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase (p70S6K)를 활성화시킴으로써 근 단백질 합성을 유도하여 근육량 증가에 기여한다(The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011; The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 43(9): 1267-1276, 2011). 반대로 전사 인자(transcription factor)인 forhead box (FoxO)가 세포질에서 핵 내로 이동하면 단백질 분해에 관여하는 E3 ubiquitin ligase인자 atrogin-1과 MuRF1의 발현을 증가시킨다(Disease Models and Mechanisms, 6: 25-39, 2013). 이들의 발현량이 증가하면 근육 내의 단백질 분해가 촉진되어 근육량이 줄어들게 된다. 따라서 mTOR의 활성 촉진과 atrogin-1과 MuRF1 발현 억제는 근육 단백질의 양을 증가시켜 근육량을 증가시키게 된다.
근육에 상처나 손상이 있을 때, 근육 세포로의 전구체(precursor)로써 근육위성세포(muscle satellite cell)는 근육 재생에 있어서 중요한 역할을 한다. 정상일 경우, 근섬유의 가장자리에 위치한 근육위성세포는 휴지(quiescent)상태로 유지되지만, 근육이 물리적 또는 화학적으로 외부로부터 손상을 입게 되면 이를 재생하기 위해 다양한 전사 인자(transcription factor)들을 분비하게 되어 근육 재생(regeneration) 단계에 돌입하게 된다.
근육의 상처로 인해 발현된 전사 인자들에 의해 위성세포는 자가 증식(self-renewal)을 하게 되어 근육 재생에 쓰일 위성세포풀(stem cell pool)을 형성하게 되는데, 이 때, 근 재생에 필요한 위성세포 수를 일정 유지하기 위해 pax7의 발현이 증가하게 된다. 발현이 증가된 pax7은 전사 인자로써 carm1 단백질에 의해 메틸화(methylation) 되면 pax7-carm1 복합체(complex)를 형성하여 myf5의 발현을 촉진시킨다. Myf5 인자의 발현량 증가로 휴지기 상태의 근육위성세포가 활성화되면 활성화된 근육위성세포가 상처 및 손상된 근육 부위로 이동(migration)하여 근섬유 다발을 형성하고 새로운 근육을 생성한다(Stem Cells Translational. Medicine, 5: 282-290, 2016).
스쿠알렌(Squalene)은 탄소30개, 수소50개가 여섯개의 이중결합체로 연결된 불포화 탄화수소로 인체와 동,식물계에 소량이나마 널리 분포 되어있으며, 특히 심해상어에 많이 함유하고 있다. 스쿠알렌의 생리 화학적작용은 지질 대사작용을 통한 고중성지방혈증 개선(European Journal of Lipid Science and Technology, 118: 1-7, 2016), 항산화 및 항종양(The Lancet Oncology, 1: 107-112, 2000), 유방암(Food and Chemical Toxicology, 48: 1092-1100 , 2010), 죽상동맥경화증, 고지혈증, 간지방증(Biotechnology Letters, 38: 1065-1071, 2016)등의 활성이 보고되어 있다. 이외에도, 스쿠알렌은 화장품과 컴퓨터 디스켓의 매활제로 사용되고 있다. 그러나, 스쿠알렌의 근육 질환의 예방 및 치료, 또는 근 기능 개선에 관해서는 알려진 바 없었다.
이에, 본 발명자들은 우수한 근 기능 조절 활성을 가지면서 안전하게 적용할 수 있는 천연물질을 탐색한 결과, 스쿠알렌이 근육 세포에서 근단백질 합성 및 근육량 증가와 관련된 단백질의 발현을 증가시키고, 근 단백질 분해에 관여하는 효소의 발현을 mRNA 수준에서 억제하며, 손상 근육을 빠르게 회복시킬 수 있으므로, 본 발명의 스쿠알렌은 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선용 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
이에 본 발명자들은 우수한 근 기능 조절 활성을 가지며 안전하게 적용될 수 있는 천연물질을 탐색한 결과, 스쿠알렌이 근육량을 증가시켜 근기능을 향상시킬 수 있고, 근손상 개선 및 예방 효과를 나타낼 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 근기능 향상, 근손상 예방, 근손상 개선 또는 근육 재생용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 근기능 개선 또는 근육 재생용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근기능 향상, 근손상 예방, 근손상 개선 또는 근육 재생용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근기능 개선용 또는 근육 재생용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
따라서 본 발명은 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명의 스쿠알렌은 근육 세포에서 근단백질 합성 및 근육량 증가와 관련된 단백질의 발현을 증가시키고, 근 단백질 분해에 관여하는 효소의 발현을 mRNA 수준에서 억제하며, 손상 근육을 빠르게 회복시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 스쿠알렌은 근육량을 증가시켜 근기능을 향상시킬 수 있고, 근손상 개선 및 예방 효과를 나타낼 수 있으므로, 근육 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선용 조성물의 유효성분으로 효과적이다.
도 1은 C2C12 근육세포에서 스쿠알렌 처리에 따른 p-mTOR의 단백질 발현량을 나타내는 것이다.
도 2는 C2C12 근육세포에서 스쿠알렌 처리에 따른 p-p70S6K의 단백질 발현량을 나타내는 것이다.
도 3은 C2C12 근육세포에서 스쿠알렌 처리에 따른 atrogin-1 및 MuRF1의 mRNA 발현량을 나타내는 것이다.
도 4는 스쿠알렌 처리에 따른 실험동물의 근력을 나타내는 것이다.
도 5는 스쿠알렌 처리에 따른 실험동물의 오른쪽 전경골근 무게 증가를 나타내는 것이다.
도 6은 스쿠알렌 처리에 따른 오른쪽 전경골근의 근섬유 단면적을 나타내는 것이다.
도 7은 스쿠알렌 처리에 따른 실험동물의 오른쪽 장딴지근 무게 증가를 나타내는 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
상술한 바와 같이, 우수한 근 기능 조절 활성을 가지며 안전하게 적용될 수 있는 물질의 탐색이 계속 요구되고 있으나, 스쿠알렌의 근육 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선에 대한 효과에 관한 연구는 아직까지 보고된 바 없다.
본 발명의 스쿠알렌은 근육 세포에서 근단백질 합성 및 근육량 증가와 관련된 단백질의 발현을 증가시키고, 근 단백질 분해에 관여하는 효소의 발현을 mRNA 수준에서 억제하며, 손상 근육을 빠르게 회복시킬 수 있어, 근육 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선용 조성물의 유효성분으로 효과적이다.
따라서, 본 발명은 하기 [화학식 1]의 구조로 표시되는, 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2017008397-appb-I000001
.
또한, 본 발명은 상기 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근기능 향상, 근손상 예방, 근손상 개선 또는 근육 재생용 식품 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근기능 개선 또는 근육 재생용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 스쿠알렌(squalene)은 화학물질고유번호(CAS No.)로 111-02-04로서 표시될 수 있으며, 구조명은 (6E, 10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-헥사메틸테트라코사-2,6,10,14,18,22-헥사엔( (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-Hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene)이다. 본 발명의 스쿠알렌은 추출물에서 분리된 것, 합성된 것 또는 시판되는 제품 중 어느 것을 사용하여도 무방하다.
본 발명의 “근육 질환”은 근기능 저하, 근육 소모 또는 근육 퇴화로 인한 근육 질환으로 당업계에 보고된 질병인 것이 바람직하며, 구체적으로 근육감소증(sarcopenia), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 및 악액질(cachexia)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 근육 소모 또는 퇴화는 전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생하며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 “근육 손상”은 상해에 따른 물리적 또는 화학적인 파괴에 의한 손상으로, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion), 회전근개 증후근(roator cuff syndrome), 및 근육염(myositis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 물리적 파괴는 외상, 과도한 온도, 근독소, 국소빈혈, 염증, 운동 등을 원인으로 발생하며, 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 손상을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 상기“근육 재생”은 근육이 물리적으로 또는 화학적으로 손상을 입었을 때 빠르게 회복시키는 것을 의미하여, 손상된 근육이 정상인 기능을 할 수 있을 때까지의 과정과 기간을 포괄적으로 지칭한다.
보다 구체적으로, 상기 “근육”은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하고, “근 기능” 또는 “근육 기능”은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘할 수 있는 능력을 의미하며, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한의 수축력을 발휘할 수 있는 근력; 근육이 주어진 중량에 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지 나타내는 능력인 근 지구력; 및 단시간 내에 강한 힘을 발휘하는 능력인 순발력을 포함한다. 상기 근 기능은 간이 주관하며, 근육량에 비례한다.
용어 “근 기능 개선”은 근 기능을 보다 긍정적인 방향으로 향상시키는 것을 의미한다. 구체적으로, 상기 “근기능 개선”은 스쿠알렌을 투여함에 따라 근단백질을 합성하여 근육량이 증가되어 근육 재생 효과를 유도할 수 있고, 근손상이 예방 또는 개선되는 것을 기대할 수 있으며, 이에 따라 근기능이 향상되는 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 근육 세포 내에서 스쿠알렌이 근단백질 합성 및 근육량 증가와 관련된 단백질의 발현을 증가시켰음을 확인하였다(도 1 및 도 2).
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 근육 세포 내에서 스쿠알렌이 근 단백질 분해에 관여하는 효소 MuRF1과 atrogin-1의 발현을 mRNA 수준에서 감소시켰음을 확인하였다(도 3).
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 부동화가 처리된 실험동물에서 스쿠알렌이 감소한 근력, 근육 무게, 근섬유의 단면적을 증가시킴을 확인하였다(도 4, 5, 및 6).
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 스쿠알렌이 부동화가 처리된 실험동물에서 손상된 근육을 빠르게 회복시킴을 확인하였다(도 7).
따라서, 본 발명의 스쿠알렌은 근육 세포에서 근단백질 합성 및 근육량 증가와 관련된 단백질의 발현을 증가시키고, 근 단백질 분해에 관여하는 효소의 발현을 mRNA 수준에서 억제하며, 손상 근육을 빠르게 회복시킬 수 있어, 근육 질환 및 근육 손상 예방, 또는 치료용 약학 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료용 조성물은 스쿠알렌을 단독으로 함유하거나 또는 스쿠알렌과 그의 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 추가적인 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 근 기능 개선 효과가 더욱 증진될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 스쿠알렌을 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 용어“약학적으로 허용 가능한”이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약제학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다.
상기 스쿠알렌의 약제학적으로 허용 가능한 염은 유기산 또는 무기산을 이용하여 형성된 산 부가염일 수 있으며, 상기 유기산은 예를 들면 포름산, 아세트산, 프로피온산, 락트산, 부티르산, 이소부티르산, 트리플루오로아세트산, 말산, 말레산, 말론산, 푸마르산, 숙신산, 숙신산 모노아미드, 글루탐산, 타르타르산, 옥살산, 시트르산, 글리콜산, 글루쿠론산, 아스코르브산, 벤조산, 프탈산, 살리실산, 안트라닐산, 디클로로아세트산, 아미노옥시 아세트산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 또는 메탄술폰산을 포함한다. 무기산은 예를 들면 염산, 브롬산, 황산, 인산, 질산, 탄산 또는 붕산을 포함한다. 산 부가염은 바람직하게는 염산염 또는 아세트산염 형태일 수 있으며, 보다 바람직하게는 염산염 형태일 수 있다.
상기 언급된 산 부가염은 a) 스쿠알렌 및 산을 직접 혼합하거나, b) 이를 용매 또는 함수 용매 중에 용해시키고 혼합시키거나, 또는 c) 스쿠알렌을 용매 또는 수하 용매 중의 산에 위치시키고 이들을 혼합하는 일반적인 염 제조방법으로 제조된다. 위와는 별도로 추가적으로 염이 가능한 형태는 가바염, 가바펜틴염, 프레가발린염, 니코틴산염, 아디페이트염, 헤미말론산염, 시스테인염, 아세틸시스테인염, 메티오닌염, 아르기닌염, 라이신염, 오르니틴염 또는 아스파르트산염 등이 있다.
또한, 본 발명의 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있다. 또한, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 약학 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들어, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구적인 투여방법으로는 이에 제한되는 것은 아니나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다. 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 또는 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 예컨대, 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의 정제를 수득할 수 있다.
단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다
또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 주사제, 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 phosphate buffered saline (PBS) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.
경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 ‘경피 투여’는 약학 조성물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.
흡입 투여제의 경우, 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달 할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다. 비경구 투여용 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명의 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물은 스쿠알렌을 유효량으로 포함 할 때 바람직한 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료 효과를 제공할 수 있다. 본 명세서에서, '유효량'이라 함은 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 근 기능을 향상시키기에 충분한 양을 말한다. 본 발명의 약학 조성물에 스쿠알렌이 0.01 내지 99.99% 포함될 수 있으며, 잔량은 약학적으로 허용 가능한 담체가 차지할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 스쿠알렌의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 약학 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상술한 요소들은 모두 교려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 비경구 투여시는 상기 스쿠알렌을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 50 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 30 mg의 양으로 투여되도록, 그리고 경구 투여시는 스쿠알렌을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 그러나 상기 스쿠알렌의 용량은 약학 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 스쿠알렌을 근육 질환 예방 및 치료를 위한 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
본 발명의 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물은 또한 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다.
본 발명의 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명의 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.
또한, 본 발명은, 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환 또는 근육 손상 예방 또는 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food), 식품 첨가제(food additives) 및 사료 등의 모든 형태를 포함하며, 인간 또는 가축을 비롯한 동물을 취식대상으로 한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 스쿠알렌을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 본 발명의 스쿠알렌을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의 스쿠알렌 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 스쿠알렌을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 스쿠알렌과 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 개선에 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
본 발명의 스쿠알렌을 건강음료로 이용하는 경우, 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ～ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ～ 0.03 g 이다.
또한, 본 발명의 스쿠알렌은 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양은 근육 질환 예방 및 근 기능 개선용 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다. 본 발명의 식품 조성물은 스쿠알렌과 함께 근육 질환 및 근육 손상 예방 또는 개선용 조성물에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은, 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는, 근기능 개선 또는 근육 재생 촉진용 화장료 조성물을 제공한다
상기 화장료 조성물은 특히 제한되는 것은 아니나, 피부 외용으로 사용하거나, 경구 섭취할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 스쿠알렌을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.
상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 상기 스쿠알렌을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 스쿠알렌 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 스쿠알렌의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 항노화 또는 주름개선 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.
이하, 실시예 및 제조예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예 및 제조예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 제조예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
[실시예 1]
스쿠알렌의 근육 세포 내 mTOR 단백질 인산화 수준 증가 효과
mTOR 단백질은 인산화되어 활성화되었을 때, 근 세포 내의 PI3K/Akt 신호전달경로에서 근단백질 합성 및 근육량 증가에 1 분화 시 발현되는 주요 단백질 발현 수준을 확인하였다. 상기 수득한 세포를 단백질 가수분해효소 억제제 칵테일(Sigma-Aldrich)이 포함된 NP-40 완충용액(ELPIS-Biotech, Daejeon, Korea)으로 용해하고, 13,000 rpm으로 10 분간 원심분리하여 상등액의 세포 용해물을 수득하였다. 상등액 내 단백질 농도를 브래드포드로 정량한 다음, 일정 농도의 단백질을 5 분간 가열하고 SDS-PAGE 전기영동하여 분리하였다. 분리된 단백질은 니트로셀룰로스 막으로 전달하였다. 그런 다음, p-mTOR 1차 항체(Cell signaling technology, Beverly, MA, USA)를 2.5% 소혈청 알부민(BSA; Bioworld, Dubin, OH, USA)에 1:1000의 비율로 희석하여 니트로셀룰로스 막에 전달된 단백질과 20시간 동안 상온에서 반응시켰다. 1차 항체를 반응시킨 다음 Tris-buffer Saline Tween 20 (TBST)을 이용하여 니트로셀룰로스 막을 10분간 3회 세척하였다. 세척 후, 1차 항체를 인지하는 겨자무 과산화효소(horseradish peroxidase)가 접합된 anti-rabbit 2차 항체(Bethyl Laboratories, Inc., Montgomery, TA, USA)를 2.5% BSA (Bioworld)에 1:5000이 되도록 희석하여 니트로셀룰로스 막과 2시간 동안 상온에서 반응시켰으며, TBST를 이용하여 10분씩 3회에 걸쳐 세척하였다. 항체 결합을 통해 검출된 단백질 밴드는 ECL 웨스턴블럿 검출 시약(Amersham, Tokyo, Japan)을 사용하여 발색하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK)을 이용하여 발색된 단백질 밴드를 확인하였다.
그 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이 스쿠알렌을 처리함에 따라 C2C12 근육세포에서 인산화된 mTOR (p-mTOR)의 발현 수준이 증가한 것을 확인하였다. 이는 스쿠알렌이 근육세포 내에서 근육 생성 증가 효과가 우수함을 의미한다.
[실시예 2]
스쿠알렌의 근육 세포 내 mRNA 번역(translation) 활성 촉진 효과
스쿠알렌이 근육세포 내에서 근육 생성 증가 효과를 나타냄을 확인하였으므로, 이를 보다 구체적으로 확인하기 위해서 p-mTOR 발현 수준 대신, 근육세포 내에서 mRNA 번역 과정에 관여하는 것으로 알려진 p70S6K 단백질의 인산화를 통한 활성 수준을 확인하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>과 동일한 방법을 수행하여 C2C12 근육 세포의 분화를 유도하면서 스쿠알렌을 처리하여 배양하고, 세포를 수득하여 웨스턴블럿을 수행하였다. 웨스턴블럿을 위한 1차 항체로서, p-p70S6K 항체(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)를 사용하였다.
그 결과, 도 2에서 나타난 바와 같이, 스쿠알렌을 처리함에 따라 C2C12 근육세포에서 p-p70S6K의 단백질 발현양이 증가한 것을 확인하였다. 이는 스쿠알렌이 근육세포 내에서 근육 생성을 위한 mRNA 번역 과정을 촉진하는 능력이 우수함을 의미한다.
[실시예 3]
스쿠알렌의 근육 세포 내 근 단백질 분해 억제 활성 효과
스쿠알렌이 근육세포 내에서 근육 생성 증가 효과를 나타냄을 확인하였으므로, 생성된 근 단백질이 또한 스쿠알렌에 의해 분해 억제 활성을 통해 보호될 수 있는지 여부를 확인하고자 근 분해 단백질인 atrogin-1 및 MuRF1의 mRNA 전사 발현 수준을 확인 하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>과 동일한 방법을 수행하여 C2C12 근육 세포의 분화를 유도하면서 스쿠알렌을 처리하여 12 시간 동안 배양하고 세포를 수득하였다. 수득한 세포로부터 TRIzol시약(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 총 RNA를 분리하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍(NanoDrop 1000; Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA)을 이용하여 정량하였다. 정량된 16 μL의 RNA를 Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech)와 PCR 기계(Gene Amp PCR System 2700; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)를 이용하여 42℃ 55분, 70℃ 15분의 조건에서 cDNA로 합성하였다. 합성된 cDNA 중 3 μL의 cDNA, 하기 [표 1]의 특정 프라이머(Bioneer, Daejeon, Korea) 및 PCR premix (ELPIS-Biotech)을 혼합하여, 95℃에서 30초, 60℃에서 1분, 72℃에서 1분을 30번 반복하여 PCR을 수행하였다. PCR 증폭 후, cDNA를 1.5% agarose gel로 전기영동하여 분리하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene)을 이용하여 cDNA 밴드를 확인하였다.
프라이머 명 방향 서열 서열번호
Atrogin-1_F 정방향 5'-CAGTGATCCATTCTGTTCATCCTTG-3' 서열번호 1
Atrogin-1_R 역방향 5'-TTATTTCCAGCCAAATGGAGAGAGA-3' 서열번호 2
MuRF1_F 정방향 5'-TCTGCACTTAGAACACATAGCAGAG-3' 서열번호 3
MuRF1_R 역방향 5'-TCTCCTTCTTCATTGGTGTTCTTCT-3' 서열번호 4
β-Actin_F 정방향 5'-CAGCTCAGTAACAGTCCGCC-3' 서열번호 5
β-Actin_R 역방향 5'-TCACTATTGGCAACGAGCGG-3' 서열번호 6
그 결과, 도 3에서 나타난 바와 같이, 스쿠알렌을 처리함에 따라 C2C12 근육세포에서 근육 파괴 단백질인 atrogin-1 및 MuRF1의 mRNA 발현량이 감소한 것을 확인하였다. 이는 본 발명의 스쿠알렌이 근육세포 내에서 근 단백질의 분해를 억제하는 능력이 우수함을 의미한다.
[실시예 4]
스쿠알렌의 근력 향상 및 손상 근육 재생 효과
<4-1> 부동화 처리를 통한 근육 위축 및 근육 손상 유도
실험동물로 생후 7주된 수컷쥐(C57BL/6J; Daehan Biolink)를 구입하여 실험을 진행하였다. 모든 동물의 사육은 연세실험동물연구센터(Yonsei Laboratory Animal Reaserch Center; YLARC, Seoul, Korea)에서 진행되었으며, 사육실 환경은 온도 23 ± 2℃, 상대습도 55 ± 10%로 유지시켰다. 실험 시작 전, 총 28마리의 쥐를 무작위로 1군당 7마리가 되도록 하여, 정상군, 부동화 처리군, 스쿠알렌 100 mg/kg/day 투여군 (스쿠알렌 100 투여군), 스쿠알렌 200 mg/kg/day 투여군(스쿠알렌 200 투여군)으로 나누었다. 1주일간 적응시킨 후, 325 mg/kg의 tribromoethanol (Sigma-aldrich)을 복강 주사하여 마취를 유도하였다. 마취 후, 부동화 처리군과 t스쿠알렌 100 투여군, 스쿠알렌 200 투여군에 속한 쥐들의 오른쪽 뒷다리(hindlimb)의 장딴지근(gastrocnemius muscle)과 오른쪽 발바닥을 skin stapler (Unidus, Chungcheongbuk-do, Korea)를 사용하여 스테이플러 심으로 오른쪽 뒷다리가 움직이지 못하게 고정하였으며, 이 상태를 일주일 간 유지시켰다. 일주일 후, 장딴지근과 발바닥에 고정되어 있던 스테이플러 심을 제거하고 일주일간 스쿠알렌을 100 mg/kg과 200 mg/kg의 농도로 매일 경구투여하였다. 정상군과 부동화 처리군은 스쿠알렌 대신에 식염수로 경구투여를 실시하였다.
<4-2> 스쿠알렌의 근력 향상 효과
상기 <실시예 4-1>에서 경구투여 기간이 끝난 후, 근력측정기 (Columbus Instrument, Columbus, OH, USA)를 이용하여 쥐의 근력을 측정하였다. 쥐의 앞다리와 뒷다리 모두가 grid에 걸치게 한 뒤, 쥐의 꼬리를 잡고 동일한 힘으로 당겼으며 연속적 5번 측정하여 최대값을 선택하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 정상군과 비교하여 부동화 처리군에서 근력이 유의적으로 감소(## P < 0.01)함을 확인하였으며, 스쿠알렌을 처리함에 따라 농도 의존적으로 근력이 회복됨을 확인하였다(** P < 0.01). 이는 본 발명의 스쿠알렌은 근력을 증가시키는 능력이 우수함을 의미한다.
<4-3> 스쿠알렌의 근육 무게 증가 효과
상기 <실시예 4-2>에서 근력 측정이 끝난 뒤에 실험동물의 복강에 325 mg/kg의 tribromoethanol (Sigma-aldrich)을 주사하여 마취 후 심채혈을 통해 희생을 하였다. 심장박동이 멈춘 것을 확인한 뒤, stapler에 의해 손상되지 않으나 사용할 수 없었던 오른쪽 뒷다리의 전경골근을 적출하여 무게를 측정하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 정상군과 비교하여 부동화 처리군에서 전경골근의 무게가 유의적으로 감소(# P < 0.05)함을 확인하였으며, 스쿠알렌을 처리함에 따라 농도 의존적으로 근육 무게가 증가함을 확인하였다(* P < 0.05). 이는 본 발명의 스쿠알렌은 근육 무게를 증가시키는 효과가 우수함을 의미한다.
<4-4> 스쿠알렌의 근섬유 단면적 증가 효과
상기 <실시예 4-3>에서 적출한 전경골근 조직의 일부를 떼어 10% 포르말린(formalin)으로 고정시켜 파라핀 블록을 만들었다. 고정시킨 후, 조직학적인 측면에서 근육의 회복을 측정하기 위해 hematoxylin & eosin 염색을 실시하였으며, 염색된 조직은 eXcope T500 카메라(DIXI Science, Daejeon, Korea)가 장착된 광화학현미경(CK40; Olymupus, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다. 또한, 근섬유를 촬영하여 Image J 프로그램(National Institutes of Health, Bethesda, ML, USA)으로 단면적을 측정하였다.
그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 정상군과 비교하여 부동화 처리군에서 전경골근의 근섬유 단면적이 유의적으로 감소(## P < 0.01)함을 확인하였으며, 스쿠알렌을 처리함에 따라 농도 의존적으로 근섬유 단면적이 증가함을 확인하였다(** P < 0.01). 이는 본 발명의 스쿠알렌은 근육의 크기를 증가시키는 효과가 우수함을 의미한다.
<4-5> 스쿠알렌의 손상 근육 재생 촉진 효과
상기 <실시예 4-3>에서 오른쪽 뒷다리의 전경골근을 적출한 쥐에서 스테이플러에 의해 물리적으로 직접 손상된 오른쪽 뒷다리의 장딴지근을 적출하여 무게를 측정하였다.
그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 정상군과 비교하여 부동화 처리군에서 장딴지근의 무게가 유의적으로 감소(## P < 0.01)함을 확인하였으며, 스쿠알렌을 처리함에 따라 농도 의존적으로 근육 무게가 증가함을 확인하였다(** P < 0.01). 이는 본 발명의 스쿠알렌이 손상된 근육의 재생을 촉진시키는 효과가 우수함을 의미한다.
이하, 본 발명에 따른 스쿠알렌을 유효성분으로 함유하는 의약품, 식품 또는 화장품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다. 상기 근육 질환 예방, 치료, 개선 또는 손상 근육 재생 효과가 우수한 스쿠알렌을 가지고 하기와 같은 조성성분 및 조성비에 따라 제조예 1 내지 3의 의약품, 식품 또는 화장료 조성물을 통상적인 방법에 따라서 제조하였다.
<제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 스쿠알렌 0.1 g
유당 1.5 g
탈크 0.5 g
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 스쿠알렌 0.1 g
락토오스 7.9 g
결정성 셀룰로오스 1.5 g
마그네슘 스테아레이트 0.5 g
상기의 성분들을 혼합한 후 직타법(direct tableting method)으로 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 스쿠알렌 0.1 g
옥수수전분 15 g
카르복시 셀룰로오스 4.9 g
상기의 성분들을 혼합하여 분말을 제조한 후, 상기 분말을 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라 경질 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 주사제의 제조
본 발명의 스쿠알렌 0.1 g
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
<1-5> 액제의 제조
본 발명의 스쿠알렌 0.1 g
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합하였다. 그 다음 정제수를 가하여 전체 100 로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
<제조예 2> 식품의 제조
<2-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 스쿠알렌 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이를 혼합한 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 스쿠알렌 0.1 ~ 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 스쿠알렌 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<2-4> 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 스쿠알렌 5 ~ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-5> 건강보조식품의 제조
본 발명의 스쿠알렌 100 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
<2-6> 건강 음료의 제조
본 발명의 스쿠알렌 100 ㎎
구연산 100 ㎎
올리고당 100 ㎎
매실농축액 2 ㎎
타우린 100 ㎎
정제수를 가하여 전체 500 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
<제조예 3> 화장료 조성물의 제조
<3-1> 영양화장수(밀크로션)
본 발명의 스쿠알렌을 포함하는 유연화장수(밀크로션)는 하기 [표 2]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
배합성분 제조예3-1 (중량%)
본 발명의 스쿠알렌 2.0
스쿠알란 5.0
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-2> 유연화장수(스킨로션)
본 발명의 스쿠알렌을 포함하는 유연화장수(스킨로션)는 하기 [표 3]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
배합성분 제조예3-2 (중량%)
본 발명의 스쿠알렌 2.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 2.0
프로필렌글리콜 2.0
카르복시비닐폴리머 0.1
PEG 12 노닐페닐에테르 0.2
폴리솔베이트 80 0.4
에탄올 10.0
트리에탄올아민 0.1
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-3> 영양크림
본 발명의 스쿠알렌을 포함하는 영양크림은 하기 [표 4]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
배합성분 제조예3-3 (중량%)
본 발명의 스쿠알렌 2.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
PEG60 경화피마자유 2.0
유동파라핀 10
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제 적량
색소 적량
향료 적량
정제수 to 100
<3-4> 마사지크림
본 발명의 스쿠알렌을 포함하는 마사지크림은 하기 [표 5]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
배합성분 제조예3-4 (중량%)
본 발명의 스쿠알렌 1.0
밀납 10.0
폴리솔베이트 60 1.5
PEG 60 경화피마자유 2.0
솔비탄세스퀴올레이트 0.8
유동파라핀 40.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-5> 팩
본 발명의 스쿠알렌을 포함하는 팩은 하기 [표 6]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
배합성분 제조예3-5 (중량%)
본 발명의 스쿠알렌 1.0
폴리비닐알콜 13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2
글리세린 5.0
알란토인 0.1
에탄올 6.0
PEG 12 노닐페닐에테르 0.3
폴리솔베이트 60 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
<3-6> 젤
본 발명의 스쿠알렌을 포함하는 젤은 하기 [표 7]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
배합성분 제조예3-6 (중량%)
본 발명의 스쿠알렌 0.5
에틸렌디아민초산나트륨 0.05
글리세린 5.0
카르복시비닐폴리머 0.3
에탄올 5.0
PEG 60 경화피마자유 0.5
트리에탄올아민 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100
이상의 본 발명은 상기에 기술된 실시예 및 제조예들에 의해 한정되지 않고, 통상의 기술자들에 의해 다양한 변형 및 변경을 가져올 수 있으며, 그외의 색채 화장품을 포함하는 다양한 용도의 화장품에 적용될 수 있는 것이고, 그 효능에 따라 인체에 얇게 도포하여 바를 수 있는 약제 즉, 연고로 제조에 이용될 수 있고, 이는 첨부된 청구항에서 정의되는 본 발명의 취지와 범위에 포함된다.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명은 스쿠알렌을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선용 조성물을 제공한다. 보다 상세하게는 본 발명의 스쿠알렌은 근육 세포에서 근단백질 합성 및 근육량 증가와 관련된 단백질의 발현을 증가시키고, 근 단백질 분해에 관여하는 효소의 발현을 mRNA 수준에서 억제하며, 손상 근육을 빠르게 회복시킬 수 있으므로, 근육 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선에 우수한 효과를 보인다. 따라서 본 발명의 스쿠알렌은 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있으며, 근육 질환 및 근육 손상 예방, 치료, 또는 개선에 탁월한 효과를 보이는 조성물을 제공할 수 있으므로 산업상 이용가능성이 높다.

Claims (13)

  1. 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)을 유효성분으로 포함하는, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000002
    .
  2. 제 1항에 있어서, 상기 근육 질환은 근기능 저하, 근육 소모 또는 근육 퇴화로 인한 근육 질환인 것을 특징으로 하는, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 근육 질환은 근육감소증(sarcopenia), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 근육 퇴화, 및 악액질(cachexia)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 근육 손상은 운동-유발성 근육 손상인 것을 특징으로 하는, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 근육 손상은 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion), 회전근개 증후근(roator cuff syndrome), 및 근육염(myositis)으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠 알렌(squalene)을 유효성분으로 포함하는, 근기능 향상, 근손상 예방, 근손상 개선 또는 근육 재생용 식품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000003
    .
  7. 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)을 유효성분으로 포함하는, 근기능 개선 또는 근육 재생용 화장료 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000004
    .
  8. 약학적으로 유효한 양의 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)을, 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 근육 질환 또는 근육 손상 예방 방법:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000005
    .
  9. 약학적으로 유효한 양의 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)을, 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 근육 질환 또는 근육 손상 치료 방법:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000006
    .
  10. 약학적으로 유효한 양의 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)을, 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 근기능 개선 또는 근육 재생 방법:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000007
    .
  11. 근육 질환 또는 근육 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 유효성분으로 사용하기 위한, 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)의 용도:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000008
    .
  12. 근기능 향상, 근손상 예방, 근손상 개선 또는 근육 재생용 식품 조성물의 유효성분으로 사용하기 위한, 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)의 용도:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000009
    .
  13. 근기능 개선 또는 근육 재생용 화장료 조성물의 유효성분으로 사용하기 위한, 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물인 스쿠알렌(squalene)의 용도:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017008397-appb-I000010
    .
PCT/KR2017/008397 2016-08-03 2017-08-03 스쿠알렌을 함유하는 근기능 향상 및 근육 손상 예방용 조성물 WO2018026211A1 (ko)

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